JP2022550248A - 分子に連結された細胞外小胞及びその使用 - Google Patents

分子に連結された細胞外小胞及びその使用 Download PDF

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Abstract

本開示は、細胞外小胞にアンカリング部分を介して共有結合的に連結された生物学的に活性な分子を含む、細胞外小胞（例えば、エクソソーム）に関し、これは、がんまたは他の疾患の予防法または治療のための薬剤として有用であり得る。また、当該細胞外小胞を産生するための方法、及び当該細胞外小胞を使用して疾患または障害を治療するための方法も提供される。本開示は、細胞外小胞、例えば、エクソソームに、アンカリング部分を介して、共有結合的に連結された少なくとも１つの生物学的に活性な分子を含む、細胞外小胞（ＥＶ）、例えば、エクソソームを提供し、これは、がん及び他の疾患の予防法または治療のための薬剤として有用であり得る。

Description

関連出願の相互参照
本ＰＣＴ出願は、２０１９年８月１４日に出願された米国特許仮出願第６２／８８６，９４１号、及び２０１９年９月３日に出願された同第６２／８９５，３９８号の優先権の利益を主張するものであり、そのそれぞれの全体が参照により本明細書に援用される。
ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表への参照
本出願で提出された、電子的に提出された配列表（名称：４０００．０５７ＰＣ０２＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：７６５，３９４バイト；及び作成日：２０２０年８月１４日）の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。
本開示は、細胞外小胞、例えば、エクソソームに、アンカリング部分を介して、共有結合的に連結された少なくとも１つの生物学的に活性な分子を含む、細胞外小胞（ＥＶ）、例えば、エクソソームを提供し、これは、がん及び他の疾患の予防法または治療のための薬剤として有用であり得る。
多くの生物活性化合物は、治療上興味深い強力な生物学的活性を有している。しかしながら、これらの化合物は、標的以外の器官において毒性を呈することがしばしばある。非標的組織の曝露を制限する１つの方法は、抗体などの親和性ベースの試薬に小分子を化学的にコンジュゲートさせることであり、これにより、治療化合物を特定の細胞型に誘導することができる（Ｄｏｓｉｏ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｏｘｉｎｓ（Ｂａｓｅｌ）３（７）：８４８－８８３（２０１１））。しかし、このアプローチは、抗体に結合することができる目的の化合物の分子数（典型的に、１抗体につき２～６分子）による制限を受け、また、非標的細胞に結合することなく、標的とする関連疾患／エフェクター細胞に特異的に結合する抗体の利用可能性／存在による制限もある。これらの２つの問題は、それぞれ、効力の低下及び全身毒性の増大により、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の使用を制限している。したがって、特定の組織または器官を選択的に標的とすることができるのと同時に、治療用化合物の全身への曝露を限定する、ＡＤＣよりも高いペイロードを持つ送達系が必要とされている。
ＥＶ、例えば、エクソソームは、細胞間コミュニケーションの重要なメディエーターである。また、がんなどの多くの疾患の診断及び予後における重要なバイオマーカーでもある。ＥＶ、例えば、エクソソームは、薬物送達媒体として、従来の薬物送達法（例えば、ペプチド免疫法、ＤＮＡワクチン）に比べて、多くの治療分野における新しい治療方法として多くの利点を提供する。しかしながら、その利点にもかかわらず、多くのＥＶ、例えば、エクソソームは、臨床効果が限られている。例えば、樹状細胞由来エクソソーム（ＤＥＸ）は、手術不能の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者における一次化学療法後の維持免疫療法として、第ＩＩ相臨床試験で調査がなされた。しかしながら、主要評価項目（化学療法中断後４ヶ月で無増悪生存期間（ＰＦＳ）の患者が少なくとも５０％）に達しなかったため、治験は中止された。Ｂｅｓｓｅ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（４）：ｅ１０７１００８（２０１５）。
したがって、ＥＶをベースにした技術の治療的使用及び他の応用をよりよく行えるようにするには、新規かつより効果的に操作されたＥＶ、例えば、エクソソームが必要である。
Ｄｏｓｉｏ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｏｘｉｎｓ（Ｂａｓｅｌ）３（７）：８４８－８８３（２０１１） Ｂｅｓｓｅ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（４）：ｅ１０７１００８（２０１５）
本開示は、細胞外小胞（ＥＶ）に、アンカリング部分（ＡＭ）を介して共有結合的に連結された生物学的に活性な分子（ＢＡＭ）を含む、ＥＶであって、ここで、アンカリング部分は、
［ＡＭ］－［リンカー］ｎ－［ＢＡＭ］ 式（Ｉ）
（式中、ｎは、任意の数である）を含む、ＥＶに関する。いくつかの態様において、ｎは、０～１０の間の任意の数である。
他の態様において、アンカリング部分は、ステロール、ＧＭ１、脂質（例えば、リン脂質または脂肪酸）、ビタミン、小分子、ペプチド、またはこれらの組み合わせを含む。例えば、アンカリング部分は、少なくとも６個の炭素原子、少なくとも７個の炭素原子、少なくとも８個の炭素原子、少なくとも９個の炭素原子、少なくとも１０個の炭素原子、少なくとも１１個の炭素原子、少なくとも１２個の炭素原子、少なくとも１３個の炭素原子、少なくとも１４個の炭素原子、少なくとも１５個の炭素原子、少なくとも１６個の炭素原子、少なくとも１７個の炭素原子、少なくとも１８個の炭素原子、少なくとも１９個の炭素原子、少なくとも２０個の炭素原子、少なくとも２５個の炭素原子、少なくとも３０個の炭素原子、少なくとも３５個の炭素原子、少なくとも４０個の炭素原子、少なくとも４５個の炭素原子、少なくとも５０個の炭素原子、少なくとも５５個の炭素原子、少なくとも６０個の炭素原子、少なくとも６５個の炭素原子、少なくとも７０個の炭素原子、少なくとも７５個の炭素原子、少なくとも８０個の炭素原子、少なくとも８５個の炭素原子、または少なくとも９０個の炭素原子を含む。
他の態様において、アンカリング部分は、ステロール、ステロイド、ホパノイド、ヒドロキシステロイド、セコステロイド、これらの類似体、またはこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの他の態様において、アンカリング部分は、エルゴステロール、７－デヒドロコレステロール、コレステロール、２４Ｓ－ヒドロキシコレステロール、ラノステロール、シクロアルテノール、フコステロール、サリンゴステロール、カンペステロール、β－シトステロール、シトスタノール、コプロスタノール、アベナステロール、スチグマステロール、またはこれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、以下の構造を有するコレステロールである。
Figure 2022550248000001
いくつかの態様において、アンカリング部分は、
Figure 2022550248000002
 の構造を有する。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、ジヒドロテストステロン、ウバオール、ヘチゲニン、ジオスゲニン、プロゲステロン、コルチゾール、またはこれらの任意の組み合わせである、ステロイドを含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、脂質を含む。他の態様において、アンカリング部分は、Ｃ２－Ｃ６０鎖を含む。いくつかの態様において、アンカリング部分は、Ｃ４－Ｃ４０、Ｃ２－Ｃ３８、Ｃ２－Ｃ３６、Ｃ２－Ｃ３４、Ｃ２－Ｃ３２、Ｃ２－Ｃ３０、Ｃ４－Ｃ３０、Ｃ２－Ｃ２８、Ｃ４－Ｃ２８、Ｃ２－Ｃ２６、Ｃ４－Ｃ２６、Ｃ２－Ｃ２４、Ｃ４－Ｃ２４、Ｃ６－Ｃ２４、Ｃ８－Ｃ２４、Ｃ１０－Ｃ２４、Ｃ２－Ｃ２２、Ｃ４－Ｃ２２、Ｃ６－Ｃ２２、Ｃ８－Ｃ２２、Ｃ１０－Ｃ２２、Ｃ２－Ｃ２０、Ｃ４－Ｃ２０、Ｃ６－Ｃ２０、Ｃ８－Ｃ２０、Ｃ１０－Ｃ２０、Ｃ２－Ｃ１８、Ｃ４－Ｃ１８、Ｃ６－Ｃ１８、Ｃ８－Ｃ１８、Ｃ１０－Ｃ１８、Ｃ１２－Ｃ１８、Ｃ１４－Ｃ１８、Ｃ１６－Ｃ１８、Ｃ２－Ｃ１６、Ｃ４－Ｃ１６、Ｃ６－Ｃ１６、Ｃ８－Ｃ１６、Ｃ１０－Ｃ１６、Ｃ１２－Ｃ１６、Ｃ１４－Ｃ１６、Ｃ２－Ｃ１５、Ｃ４－Ｃ１５、Ｃ６－Ｃ１５、Ｃ８－Ｃ１５、Ｃ９－Ｃ１５、Ｃ１０－Ｃ１５、Ｃ１１－Ｃ１５、Ｃ１２－Ｃ１５、Ｃ１３－Ｃ１５、Ｃ２－Ｃ１４、Ｃ４－Ｃ１４、Ｃ６－Ｃ１４、Ｃ８－Ｃ１４、Ｃ９－Ｃ１４、Ｃ１０－Ｃ１４、Ｃ１１－Ｃ１４、Ｃ１２－Ｃ１４、Ｃ２－Ｃ１３、Ｃ４－Ｃ１３、Ｃ６－Ｃ１３、Ｃ７－Ｃ１３、Ｃ８－Ｃ１３、Ｃ９－Ｃ１３、Ｃ１０－Ｃ１３、Ｃ１０－Ｃ１３、Ｃ１１－Ｃ１３、Ｃ２－Ｃ１２、Ｃ４－Ｃ１２、Ｃ６－Ｃ１２、Ｃ７－Ｃ１２、Ｃ８－Ｃ１２、Ｃ９－Ｃ１２、Ｃ１０－Ｃ１２、Ｃ２－Ｃ１１、Ｃ４－Ｃ１１、Ｃ６－Ｃ１１、Ｃ７－Ｃ１１、Ｃ８－Ｃ１１、Ｃ９－Ｃ１１、Ｃ２－Ｃ１０、Ｃ４－Ｃ１０、Ｃ２－Ｃ９、Ｃ４－Ｃ９、Ｃ２－Ｃ８、Ｃ２－Ｃ７、Ｃ４－Ｃ７、Ｃ２－Ｃ６、またはＣ４－Ｃ６の鎖を含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、直鎖脂肪酸、分枝脂肪酸、不飽和脂肪酸、一価不飽和脂肪酸、多価不飽和脂肪酸、ヒドロキシル脂肪酸、ポリカルボン酸、またはこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、アンカリング部分は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、ヘキサコサン酸、オクタコサン酸、トリアコンタン酸及びｎ－ドトリアコンタン酸、ならびにプロピオン酸、ｎ－吉草酸、エナント酸、ペラルゴン酸、ヘンデカン酸、トリデカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカン酸、ヘンエイコサン酸、トリコサン酸、ペンタコサン酸、ヘプタコサン酸などの奇数の炭素原子を有するもの、またはこれらの任意の組み合わせである、直鎖脂肪酸を含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、イソ酪酸、イソカプロン酸、イソカプリル酸、イソカプリン酸、イソラウリン酸、１１－メチルドデカン酸、イソミリスチン酸、１３－メチル－テトラデカン酸、イソパルミチン酸、１５－メチル－ヘキサデカン酸、イソステアリン酸、１７－メチルオクタデカン酸、イソアラキン酸、１９－メチル－エイコサン酸、α－エチル－ヘキサン酸、α－ヘキシルデカン酸、α－ヘプチルウンデカン酸、２－デシルテトラデカン酸、２－ウンデシルテトラデカン酸、２－デシルペンタデカン酸、２－ウンデシルペンタデカン酸、ファインオキソコール１８００酸（Ｎｉｓｓａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．の製品）、終端にイソブチル基を持つアンテイソ脂肪酸、例えば、６－メチル－オクタン酸、８－メチル－デカン酸、１０－メチル－ドデカン酸、１２－メチル－テトラデカン酸、１４－メチル－ヘキサデカン酸、１６－メチル－オクタデカン酸、１８－メチル－エイコサン酸、２０－メチル－ドコサン酸、２２－メチル－テトラコサン酸、２４－メチル－ヘキサコサン酸、及び２６－メチルオクタコサン酸、またはこれらの任意の組み合わせである、分枝脂肪酸を含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、４－デセン酸、カプロレイン酸、４－ドデセン酸、５－ドデセン酸、ラウロレイン酸、４－テトラデセン酸、５－テトラデセン酸、９－テトラデセン酸、パルミトレイン酸、６－オクタデセン酸、オレイン酸、９－オクタデセン酸、１１－オクタデセン酸、９－エイコセン酸、ｃｉｓ－１１－エイコセン酸、セトレイン酸、１３－ドコセン酸、１５－テトラコセン酸、１７－ヘキサコセン酸、６，９，１２，１５－ヘキサデカテトラエン酸、リノール酸、リノレン酸、α－エレオステアリン酸、β－エレオステアリン酸、プニカ酸、６，９，１２，１５－オクタデカテトラエン酸、パリナリン酸、５，８，１１，１４－エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７－エイコサペンタエン酸、７，１０，１３，１６，１９－ドコサペンタエン酸、４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエン酸、またはこれらの任意の組み合わせである、不飽和脂肪酸を含む。いくつかの態様において、アンカリング部分は、α－ヒドロキシラウリン酸、α－ヒドロキシミリスチン酸、α－ヒドロキシパルミチン酸、α－ヒドロキシステアリン酸、ω－ヒドロキシラウリン酸、α－ヒドロキシアラキン酸、９－ヒドロキシ－１２－オクタデセン酸、リシノール酸、α－ヒドロキシベヘン酸、９－ヒドロキシ－ｔｒａｎｓ－１０，１２－オクタデカジエン酸、カモレン酸、イプロリン酸、９，１０－ジヒドロキシステアリン酸、１２－ヒドロキシステアリン酸、またはこれらの任意の組み合わせである、ヒドロキシ脂肪酸を含む。いくつかの態様において、アンカリング部分は、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、Ｄ，Ｌ－リンゴ酸、またはこれらの任意の組み合わせである、ポリカルボン酸を含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、リン脂質を含む。いくつかの態様において、リン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２リゾホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、またはこれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様において、リン脂質は、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、１－パルミトイル－２－オレイルホスファチジルエタノールアミン、１－オレイル－２－パルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジエルコイルホスファチジルエタノールアミン、またはこれらの任意の組み合わせである、ホスファチジルエタノールアミンである。いくつかの態様において、リン脂質は、ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルグリセロール、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジルグリセロール、ジエルコイルホスファチジルグリセロール、またはこれらの任意の組み合わせである、ホスファチジルグリセロールである。いくつかの態様において、リン脂質は、ジラウロイルホスファチジルセリン、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルセリン、ジオレオイルホスファチジルセリン、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルセリン、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジルセリン、ジエルコイルホスファチジルセリン、またはこれらの任意の組み合わせである、ホスファチジルセリンである。いくつかの態様において、リン脂質は、ジラウロイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジステアロイルホスファチジン酸、ジオレオイルホスファチジン酸、１－パルミトイル－２－オレイルホスファチジン酸、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジン酸、ジエルコイルホスファチジン酸、またはこれらの任意の組み合わせである、ホスファチジン酸である。いくつかの態様において、ホスファチジルイノシトールは、ジラウロイルホスファチジルイノシトール、ジミリストイルホスファチジルイノシトール、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール、ジステアロイルホスファチジルイノシトール、ジオレオイルホスファチジルイノシトール、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルイノシトール、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジルイノシトール、ジエルコイルホスファチジルイノシトール、またはこれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様において、リン脂質は、１，２ ジプロピオニル ｓｎ－グリセロ ３ ホスホコリン（０３：０ ＰＣ）；１，２ ジブチリル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０４：０ ＰＣ）；１，２ ジペンタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０５：０ ＰＣ）；１，２ ジヘキサノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０６：０ ＰＣ）、１，２ ジヘプタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０７：０ ＰＣ）；１，２ ジオクタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０８：０ ＰＣ）；１，２ ジノナノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０９：０ ＰＣ）；１，２ ジデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１０：０ ＰＣ）；１，２ ジウンデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１１：０ ＰＣ、ＤＵＰＣ）；１，２ ジラウロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１２：０ ＰＣ）；１，２ ジトリデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１３：０ ＰＣ）；１，２ ジミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０ ＰＣ、ＤＭＰＣ）；１，２ ジペンタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１５：０ ＰＣ）；１，２ ジパルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０ ＰＣ、ＤＰＰＣ）；１，２ ジフィタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（４ＭＥ １６：０ ＰＣ）；１，２ ジヘプタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１７：０ ＰＣ）；１，２ ジステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０ ＰＣ、ＤＳＰＣ）；１，２ ジノナデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１９：０ ＰＣ）；１，２ ジアラキドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：０ ＰＣ）；１，２ ジヘナラキドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２１：０ ＰＣ）；１，２ ジベヘノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：０ ＰＣ）；１，２ ジトリコサノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２３：０ ＰＣ）；１，２ ジリグノセロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２４：０ ＰＣ）；１，２ ジミリストレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジミリステライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）；１，２ ジパルミトレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジパルミテライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）；１，２ ジペトロセレノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１（Δ６－Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジオレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＯＰＣ）；１，２ ジエライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）；１，２ ジリノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：２（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＬＰＣ）；１，２ ジリノレノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：３（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＬｎＰＣ）；１，２ ジエイコセノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジアラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：４（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＡＰＣ）；１，２ ジエルコイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：６（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＨＡＰＣ）；１，２ ジネルボノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２４：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジヘキサノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（０６：０ ＰＥ）；１，２ ジオクタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（０８：０ ＰＥ）；１，２ ジデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１０：０ ＰＥ）；１，２ ジラウロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１２：０ ＰＥ）、１，２ ジミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１４：０ ＰＥ）；１，２ ジペンタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１５：０ ＰＥ）；１，２ ジパルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０ ＰＥ）；１，２ ジフィタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（４ＭＥ １６：０ ＰＥ）；１，２ ジヘプタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１７：０ ＰＥ）；１，２ ジステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０ ＰＥ、ＤＳＰＥ）；１，２ ジパルミトレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：１ ＰＥ）；１，２ ジオレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＥ、ＤＯＰＥ）；１，２ ジエライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＥ）；１，２ ジリノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：２ ＰＥ、ＤＬＰＥ）；１，２ ジリノレノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：３ ＰＥ、ＤＬｎＰＥ）；１，２ ジアラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（２０：４ ＰＥ、ＤＡＰＥ）；１，２ ジドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（２２：６ ＰＥ、ＤＨＡＰＥ）；１，２ ジ Ｏ オクタデセニル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０ ジエーテル ＰＣ）；１，２ ジオレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホ ｒａｃ（１ グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、またはこれらの任意の組み合わせである、対称リン脂質である。
いくつかの態様において、リン脂質は、１ ミリストイル ２ パルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０－１６：０ ＰＣ、ＭＰＰＣ）；１ ミリストイル ２ ステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０－１８：０ ＰＣ、ＭＳＰＣ）；１ パルミトイル ２ アセチル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－０２：０ ＰＣ）；１ パルミトイル ２ ミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１４：０ ＰＣ、ＰＭＰＣ）；１ パルミトイル ２ ステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１８：０ ＰＣ、ＰＳＰＣ）；１ パルミトイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１８：１ ＰＣ、ＰＯＰＣ）；１ パルミトイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１８：２ ＰＣ、ＰＬＰＣ）；１ パルミトイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－２０：４ ＰＣ）；１ パルミトイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０－２２：６ ＰＣ）；１ ステアロイル ２ ミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１４：０ ＰＣ、ＳＭＰＣ）；１ ステアロイル ２ パルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１６：０ ＰＣ、ＳＰＰＣ）；１ ステアロイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１８：１ ＰＣ、ＳＯＰＣ）；１ ステアロイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１８：２ ＰＣ）；１ ステアロイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－２０：４ ＰＣ）；１ ステアロイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－２２：６ ＰＣ）；１ オレオイル ２ ミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１－１４：０ ＰＣ、ＯＭＰＣ）；１ オレオイル ２ パルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１－１６：０ ＰＣ、ＯＰＰＣ）；１ オレオイル ２ ステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１－１８：０ ＰＣ、ＯＳＰＣ）；１ パルミトイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－１８：１ ＰＥ、ＰＯＰＥ）；１ パルミトイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－１８：２ ＰＥ）；１ パルミトイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－２０：４ ＰＥ）；１ パルミトイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－２２：６ ＰＥ）；１ ステアロイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－１８：１ ＰＥ）；１ ステアロイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－１８：２ ＰＥ）；１ ステアロイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－２０：４ ＰＥ）；１ ステアロイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－２２：６ ＰＥ）；１ オレオイル ２ コレステリルヘミサクシニル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、またはこれらの任意の組み合わせである、非対称リン脂質である。
いくつかの態様において、リン脂質は、リゾ脂質である。いくつかの態様において、リン脂質は、リゾグリセロリン脂質、リゾグリコスフィンゴリオピド、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルセリン、またはこれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様において、リン脂質は、１ ヘキサノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ヘプタノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０７：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ オクタノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０８：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ノナノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０９：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ デカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１０：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ウンデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１１：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ラウロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１２：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ トリデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１３：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ミリストイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ペンタデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１５：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ パルミトイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ヘプタデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１７：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ステアロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ オレオイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ノナデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１９：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ アラキドイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ベヘノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ リグノセロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２４：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ヘキサコサノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ミリストイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１４：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）；１ パルミトイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）；１ ステアロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）；１ オレオイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：１ Ｌｙｓｏ ＰＥ）；１ ヘキサデシル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；またはこれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、ビタミンを含む。いくつかの態様において、アンカリング部分は、ビタミンＤ、ビタミンＫ、ビタミンＥ、またはこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、アンカリング部分は、生物学的に活性な分子とアンカリング部分との間にリンカーを更に含む。
いくつかの態様において、リンカーは、切断不可能なリンカーを含む。いくつかの態様において、切断不可能なリンカーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、グリセロール、アルキル、スクシンイミド、マレイミド、またはこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、切断不可能なリンカーは、式Ｒ３－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－またはＲ３－（０－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－Ｏ－（式中、Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルであり、ｎは、２～２００の間の整数である）を特徴とするポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。いくつかの態様において、切断不可能なリンカーは、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）、ペンタエチレングリコール、またはこれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、リンカーは、式（（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＨ－ＣＨ２Ｏ）ｎ－）（式中、Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルであり、ｎは、３～２００の間の整数である）を有するポリグリセロール（ＰＧ）を含む。いくつかの態様において、リンカーは、ジグリセロール、トリグリセロール、テトラグリセロール（ＴＧ）、ペンタグリセロール、ヘキサグリセロール（ＨＧ）、またはこれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、ｅリンカーは、アルキルを含む。いくつかの態様において、リンカーは、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルアリールアルキル、アルキルアリールアルケニル、アルキルアリールアルキニル、アルケニルアリールアルキル、アルケニルレイルアルケニル、アルケニルアリールアルキニル、アルキニルアリールアルキル、アルキニルアリールアルケニル、アルキニルアリールアルキニル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルケニル、アルキルヘテロアリールアルキニル、アルケニルヘテロアリールアルキル、アルケニルヘテロアリールアルケニル、アルケニルヘテロアリールアルキニル、アルキニルヘテロアリールアルキル、アルキニルヘテロアリールアルケニル、アルキニルヘテロアリールアルキニル、アルキルヘテロシクリルアルキル、アルキルヘテロシクリルアルケニル、アルキルヘテロシクリルアルキニル、アルケニルヘテロシクリルアルキル、アルケニルヘテロシクリルアルケニル、アルケニルヘテロシクリルアルキニル、またはこれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、リンカーは、切断可能なリンカーを含む。いくつかの態様において、切断可能なリンカーは、酸化還元切断可能リンカー、活性酸素切断可能リンカー、ｐＨ依存性切断可能リンカー、酵素切断可能リンカー、プロテアーゼ切断可能リンカー、エステラーゼ切断可能リンカー、ホスファターゼ切断可能リンカー、光活性化切断可能リンカー、自己崩壊性リンカー、またはこれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様において、切断可能なリンカーは、自己崩壊性リンカーである。いくつかの態様において、切断可能なリンカーは、シンナミル基、ナフチル基、ビフェニル基、複素環式環、ホモ芳香族基、クマリン、フラン、チオフェン、チアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピロール、ピラゾール、ピリジン、イミダゾン、トリアゾール、またはこれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様において、リンカーは、次式を有する。
－Ａａ－Ｙｙ－
式中、各－Ａ－は、独立してアミノ酸単位であり、ａは独立して１～１２の整数であり、－Ｙ－はスペーサー単位であり、ｙは０、１、または２である。いくつかの態様において、－Ａａ－は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、またはヘキサペプチドである。いくつかの態様において、ａは２であり、－Ａａ－はバリン－アラニン、バリン－シトルリン、フェニルアラニン－リシン、Ｎ－メチルバリン－シトルリン、シクロヘキシルアラニン－リシン、及びベータ－アラニン－リシンからなる群から選択される。いくつかの態様において、－Ａａ－は、バリン－アラニンまたはバリン－シトルリンである。いくつかの態様において、ｙは、１である。いくつかの態様において、－Ｙ－は、自己崩壊性スペーサーである。いくつかの態様において、－Ｙｙ－は、式（Ｖ）：
Figure 2022550248000003
 を有し、式中、各Ｒ２は、独立して、Ｃ１－８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－８アルキル）、ハロゲン、ニトロ、またはシアノであり、ｍは、０～４の整数である。いくつかの態様において、ｍは、０、１、または２である。いくつかの態様において、ｍは、０である。
いくつかの態様において、切断可能なリンカーは、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメートまたはバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートである。いくつかの態様において、－Ｙ－は、非自己崩壊性スペーサーである。いくつかの態様において、非自己崩壊性スペーサーは、－Ｇｌｙ－または－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－である。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、以下を含む。
Figure 2022550248000004
いくつかの態様において、ＥＶは、配列番号３０１～３２４、４０１～５６７、その断片、またはこれらの組み合わせから選択されるアンカリング部分と、表１及び表２のリンカー組み合わせから選択されるリンカーと、を含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、スカフォールドタンパク質を含む。いくつかの態様において、ＥＶは、スカフォールド部分を更に含む。いくつかの態様において、アンカリング部分及び／またはスカフォールド部分は、スカフォールドＸである。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、プロスタグランジンＦ２受容体の負の調節因子（ＰＴＧＦＲＮタンパク質）；ベイシジン（ＢＳＧタンパク質）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（ＩＧＳＦ２タンパク質）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩＧＳＦ３タンパク質）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩＧＳＦ８タンパク質）；インテグリンベータ－１（ＩＴＧＢ１タンパク質）；インテグリンアルファ－４（ＩＴＧＡ４タンパク質）；４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（ＳＬＣ３Ａ２タンパク質）；ＡＴＰ輸送タンパク質のクラス（ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ１Ａ２、ＡＴＰ１Ａ３、ＡＴＰ１Ａ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＡＴＰ２Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質）；その機能性断片；及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、ＰＴＧＦＲＮタンパク質またはその機能性断片である。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、配列番号３０１～３２４に記載されるアミノ酸配列、その断片、及びこれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分及び／またはスカフォールド部分は、スカフォールドＹである。いくつかの態様において、スカフォールドＹは、生物学的に活性な分子を細胞外小胞の内腔表面上及び／または細胞外小胞の外表面上に係留することが可能なスカフォールドタンパク質である。いくつかの態様において、スカフォールドＹは、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（ＭＡＲＣＫＳタンパク質）、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質）、脳酸可溶性タンパク質１（ＢＡＳＰ１タンパク質）、その機能性断片、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様において、スカフォールドＹは、ＢＡＳＰ１タンパク質またはその機能性断片である。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、配列番号４０１～５６７に記載されるアミノ酸配列、その断片、及びこれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＥＶの外表面上のアンカリング部分及び／またはスカフォールド部分に連結される。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＥＶの内腔表面上のアンカリング部分及び／またはスカフォールド部分に連結される。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ポリペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド（ＤＮＡ及び／またはＲＮＡ）、化合物、またはこれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、化合物である。いくつかの態様において、化合物は、小分子である。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、核酸、またはこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ペプチド、タンパク質、抗体もしくはその抗原結合断片、またはこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、その抗原結合断片は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、及びＦｄ断片、ダイアボディ、抗体関連ポリペプチド、または任意のその断片を含む。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＡＳＯを含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、転写物を標的とし、転写物は、ＳＴＡＴ６転写物、ＣＥＢＰ／β転写物、ＳＴＡＴ３転写物、ＫＲＡＳ転写物、ＮＲＡＳ転写物、ＮＬＰＲ３転写物、ＰＭＰ２２転写物、またはこれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様において、ＳＴＡＴ６転写物は、配列番号１１または配列番号１３を含む。いくつかの態様において、ＳＴＡＴ６ ＡＳＯは、配列番号６０１～配列番号７０３からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＣＥＢＰ／β転写物は、配列番号２１または配列番号２３を含む。いくつかの態様において、ＣＥＢＰ／β ＡＳＯは、配列番号７０４～配列番号８０６からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＳＴＡＴ３転写物は、配列番号４１または配列番号４３を含む。いくつかの態様において、ＳＴＡＴ３ ＡＳＯは、配列番号８８９～配列番号９８８からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＮＲＡＳ転写物は、配列番号５１または配列番号５３を含む。いくつかの態様において、ＮＲＡＳ ＡＳＯは、配列番号９８９～配列番号１０８８からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＮＬＰＲ３転写物は、配列番号１または配列番号３を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１～配列番号２００からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＫＲＡＳ転写物は、ＫＲＡＳ変異体転写物である。いくつかの態様において、ＫＲＡＳ変異体は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄである。いくつかの態様において、ＫＲＡＳ転写物は、配列番号３１または配列番号３３を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０７～配列番号８８８からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＰＭＰ２２転写物は、配列番号５８を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯ、配列番号６２～９５及び２０１～２７０からなる群から選択される配列を含む。
いくつかの態様において、ＥＶは、エクソソームである。
いくつかの態様において、本開示は、細胞外小胞及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物に関する。
いくつかの態様において、本開示は、生物学的に活性な分子をＥＶにコンジュゲートする方法であって、アンカリング部分をＥＶに連結することを含む方法、ＥＶ及び使用説明書を含むキットに関する。
いくつかの態様において、本開示は、疾患または障害を治療または予防することを、それを必要とする対象において行う方法であって、ＥＶを当該対象に投与することを含む、方法に関する。いくつかの態様において、疾患または障害は、がん、炎症性障害、神経変性障害、中枢神経障害、または代謝疾患である。いくつかの態様において、ＥＶは、静脈内、腹腔内、経鼻、経口、筋肉内、皮下、非経口、または腫瘍内投与される。
ＮＬＰＲ３転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を列挙した表を示す。表は、次の情報を含む（左から右へ）：（ｉ）ＡＳＯ配列にのみ対して指定された配列番号、（ｉｉ）ＮＬＰＲ３ゲノム配列（配列番号１）上の標的開始位置及び終了位置、（ｉｉｉ）ＮＬＰＲ３ ｍＲＮＡ配列（配列番号２）上の標的開始位置及び終了位置、（ｉｖ）いかなる特定の設計または化学構造を持たないＡＳＯ配列、ならびに（ｖ）化学構造を含むＡＳＯ配列。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） 本明細書に記載される様々なＳＴＡＴ６ ＡＳＯ配列及びｍＲＮＡ配列におけるそれぞれの相補配列の位置を列挙した表を示す。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） 本明細書に記載される様々なＣＥＢＰ／β ＡＳＯ配列及びｍＲＮＡ配列におけるそれぞれの相補配列の位置を列挙した表を示す。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） 本明細書に記載される様々なＳＴＡＴ３ ＡＳＯ配列及びｍＲＮＡ配列におけるそれぞれの相補配列の位置を列挙した表を示す。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） 本明細書に記載される様々なＮＲａｓ ＡＳＯ配列及びｍＲＮＡ配列におけるそれぞれの相補配列の位置を列挙した表を示す。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） 本明細書に記載される様々なＫＲＡＳ ＡＳＯ配列及びｐｒｅ－ｍＲＮＡ（配列番号３０）またはｍＲＮＡ配列（配列番号３２）におけるそれぞれの相補配列の位置を列挙した表を示す。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） 単球におけるＩＬ－１β産生のグラフ表示である。ＮＬＲＰ３経路は、それぞれの試料タイプで、ＬＰＳで３時間及びＡＴＰで３時間処理することによって活性化された。次いで、試料は、指定されるように漸増濃度のＭＣＣ９５０（ｌｏｇ μＭ）で処理され、ＩＬ－１βレベルが測定された（ｐｇ／ｍＬ）。 Ｍ０マクロファージにおけるＩＬ－１β産生のグラフ表示である。ＮＬＲＰ３経路は、それぞれの試料タイプで、ＬＰＳで３時間及びＡＴＰで３時間処理することによって活性化された。次いで、試料は、指定されるように漸増濃度のＭＣＣ９５０（ｌｏｇ μＭ）で処理され、ＩＬ－１βレベルが測定された（ｐｇ／ｍＬ）。 マウスＢＭＤＭにおけるＩＬ－１β産生のグラフ表示である。ＮＬＲＰ３経路は、それぞれの試料タイプで、ＬＰＳで３時間及びＡＴＰで３時間処理することによって活性化された。次いで、試料は、指定されるように漸増濃度のＭＣＣ９５０（ｌｏｇ μＭ）で処理され、ＩＬ－１βレベルが測定された（ｐｇ／ｍＬ）。 マウスの腹腔内ＬＰＳ抗原刺激のための投与及び試料採取スケジュールを例示するタイムラインである。 漸増量のＭＣＣ９５０を投与した後のマウス血清における血清ＩＬ－１βレベルのグラフ表示である。 Ａ～Ｄは、蛍光（ＭＦＩ）により検出され、ＰＢＳ対照に正規化したＣｙ５レベルのグラフ表示である。Ｃｙ５は、示されるように、血液（図４Ａ）、肝臓（図４Ｂ）、脾臓（図４Ｃ）、及び腫瘍（ＣＴ２６、図４Ｄ）から単離された様々な細胞種におけるＣｙ５ ＡＳＯ（「エクソＡＳＯ」；左）または遊離ＡＳＯ（右）を含むエクソソームの取り込みのマーカーとして使用される。横線は、平均ＭＦＩを示す。 Ｅ～Ｊは、Ｃｙ５－レポーターＡＳＯ（図４Ｅ～４Ｆ）または遊離ＡＳＯ（図４Ｇ～４Ｈ）を含むエクソソームの取り込みをＰＢＳ陰性対照（図４Ｉ～４Ｊ）と比較して示す、２名のドナーからそれぞれ採取された骨髄組織試料の蛍光画像である。 示されるように、ＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理した後の分極化マクロファージにおける、ＳＴＡＴ６の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理した後の分極化マクロファージにおける、ＣＤ１６３の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理した後の分極化マクロファージにおける、ＳＴＡＴ６の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理した後の分極化マクロファージにおける、ＣＤ１６３の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＴＧＦβ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＣＤ１６３の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＳＴＡＴ５ｂの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＳＴＡＴ６の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＣＥＢＰ／βの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＩＬ１２βの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＡＩＦ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＭＹＣの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＨＬＡ ＤＱＡの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＣＤ７４（ＭＩＦ）の発現のグラフ表示である。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。処理前のＣＤ４５発現を示す。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。陰性対照による処理後（スクランブルエクソＡＳＯ）のＣＤ４５発現を示す。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。エクソ－ＡＳＯによる処理後のＣＤ４５発現を示す。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。処理前のＣＤ１１ｂ発現を示す。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。陰性対照による処理後（スクランブルエクソＡＳＯ）のＣＤ１１ｂ発現を示す。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。エクソ－ＡＳＯによる処理後のＣＤ１１ｂ発現を示す。 スクランブルエクソ－ＡＳＯ（図８Ａ～８Ｃ）、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、ＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯ（図８Ｂ）、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ（図８Ｂ～８Ｃ）に曝露した後の非濃縮細胞と比較したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＴ６（図８Ａ）、ＣＥＢＰ／β（図８Ｂ）及びＡＲＧ１（図８Ｃ）の発現のグラフ表示である。 スクランブルエクソ－ＡＳＯ（図８Ａ～８Ｃ）、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、ＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯ（図８Ｂ）、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ（図８Ｂ～８Ｃ）に曝露した後の非濃縮細胞と比較したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＴ６（図８Ａ）、ＣＥＢＰ／β（図８Ｂ）及びＡＲＧ１（図８Ｃ）の発現のグラフ表示である。 スクランブルエクソ－ＡＳＯ（図８Ａ～８Ｃ）、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、ＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯ（図８Ｂ）、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ（図８Ｂ～８Ｃ）に曝露した後の非濃縮細胞と比較したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＴ６（図８Ａ）、ＣＥＢＰ／β（図８Ｂ）及びＡＲＧ１（図８Ｃ）の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＴ６の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＥＢＰ／βの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＴＧＦβ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＴ３の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＩＲＰ－αの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＤ４７の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＮＯＳ２の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＡＲＧ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＤ２０６の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＤ２７４（図９Ｊ）の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＮＬＲＰ３の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＳＦ１Ｒの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＤ３６（図９Ｍ）の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＢ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＩＬ１３の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＰＩ３ＫＧの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＬＹ６Ｃ（図９Ｑ）の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＬＹ６Ｇの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＩＦＮβ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＩＦＮγの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＩＦＮα１（図９Ｕ）の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＩＬ６Ｒαの発現のグラフ表示である。 示されるように、ＩＬ－１３／ＴＧＦβで処理し、続いてＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理して分極させた初代ヒトＭ２マクロファージにおける、ＳＴＡＴ６の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＩＬ－１３／ＴＧＦβで処理し、続いてＣＥＢＰ／β エクソＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理して分極させた初代ヒトＭ２マクロファージにおける、ＣＥＢＰ／βの正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＩＬ－１３／ＴＧＦβで処理し、続いてＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理して分極させた初代ヒトＭ２マクロファージにおける、ＴＧＦβ１の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＩＬ－１３／ＴＧＦβで処理し、続いてＣＥＢＰ／β エクソＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理して分極させた初代ヒトＭ２マクロファージにおける、ＴＧＦβ１の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 ナイーブマウスまたはブレオマイシンで処理して肺線維症を誘発させたマウス（「ｂｌｅｏ」）に陰性対照（－Ｃ）またはエクソ－ＡＳＯ－Ｃｙ５（「ＩＮ」）を鼻腔投与した後の肺ＴＤ２における、Ｃｙ５レベルによって証明されるエクソソーム取り込みのグラフ表示である。 Ａ～Ｈは、正常及び誘発線維性肺組織によるエクソソーム取り込みを検出する蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 正常肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 正常肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 誘発線維性肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 誘発線維性肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 正常肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 正常肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 誘発線維性肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 誘発線維性肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション画像の飽和レベルを示すグラフ表示であり、正常及び線維性組織におけるエクソソームの取り込みのレベルを示している。 Ａ～Ｆは、Ｈｅｐａ１－６マウスの肺組織によるエクソソーム取り込みを検出する蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 Ａ～Ｆは、Ｈｅｐａ１－６マウスの肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ［図１７Ａ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｂ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｃ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｄ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｅ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｆ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ［図１７Ｇ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｈ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｉ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｊ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｋ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｌ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ［図１７Ｍ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｎ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ｍＲＮＡ全体の枯渇を示すＳＴＡＴ３ ＡＳＯ実験の結果を表すグラフを示す。 ｍＲＮＡ全体の枯渇を示すＮＲａｓ ＡＳＯ実験の結果を表すグラフを示す。 ＳＴＡＴ３ エクソ－ＡＳＯ及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯを接種した後の腫瘍体積反応曲線を示す。 ＳＴＡＴ３、エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ、及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ ２Ｘを使用したＳＴＡＴ３遺伝子発現プロファイル反応を示す。 ＰＢＳ、スクランブルエクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ エクソ－ＡＳＯ ＭＯＥ、及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ ＭＯＥに曝露した後の浸潤ＭＤＳＣ／ＣＤ４５（ＣＤ１１ｂＨｉｇｈ Ｆ４０／８０Ｈｉｇｈ／ＣＤ４５）のパーセンテージを示す。 ＰＢＳ、スクランブルエクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ エクソ－ＡＳＯ ＭＯＥ、及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ ＭＯＥに曝露した後の浸潤ＭＤＳＣ／総ＭＤＳＣ（Ｌｙ６ＧＨｉｇｈ ＣＤ１１ｂＨｉｇｈ／ＩＡ／ＩＥＬｏｗ）のパーセンテージを示す。 ＰＢＳ、スクランブルエクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ エクソ－ＡＳＯ、及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯで処理した後の正規化ｍＲＮＡカウントを示す。 操作されたエクソソーム１つあたりにローディングされるＡＳＯ分子量がリンカー構造の影響を受けることを示す表である。使用されたコンストラクトの構造も示されている。 ネイティブエクソソーム１つあたりにローディングされるＡＳＯ分子量がリンカー構造の影響を受けることを示す表である。使用されたコンストラクトの構造も示されている。 エクソ－ＡＳＯの効力がＡＳＯリンカー構造の影響を受けることを示す。コンストラクトＣ１～Ｃ９、Ｔ１～Ｔ９及びＬ１～Ｌ３のコンストラクトの構造は、図２５に記載されるものである。Ａは、コレステロール－Ｃ６脂質アンカーを含むコンストラクトの効力を示す。Ｂは、トコフェロール－Ｃ８（Ｌ１）またはパルミチン酸トコフェロール－Ｃ６（Ｌ２及びＬ３）脂質アンカーを含むコンストラクトの効力を示す。Ｃは、コレステロール－ＴＥＧ脂質アンカーを含むコンストラクトの効力を示す。 Ｐｍｐ２２を標的とするＡＳＯ分子の配列を示す表である。 Ｐｍｐ２２を標的とするＡＳＯ分子の追加の配列を示す表である。
本開示は、細胞外小胞（ＥＶ）、例えば、エクソソームに、アンカリング部分を介して、共有結合的に連結された少なくとも１つの生物学的に活性な分子を含む、ＥＶ、例えば、エクソソーム、及びその使用に関する。様々な態様の非限定的な例が本開示において示される。
本開示をより詳細に記述する前に、本発明は、記載される特定の組成物またはプロセスステップに限定されず、したがって、当然のことながら変わり得ることを理解されたい。当業者には本開示を読めば明らかなように、本明細書に記載及び例示される個々の態様のそれぞれは、本発明の範囲または趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの態様のいずれかの特徴から容易に分離され、または組み合わせることができる別個の要素及び特徴を有する。任意の列挙される方法は、列挙される事象の順序で、または論理的に可能な任意の他の順序で行うことができる。
本明細書で提供される見出しは、本開示の様々な態様を制限するものではなく、明細書全体を参照することによって定義され得る。また、本明細書で使用される用語は、特定の態様を記載することのみを目的にしており、本開示の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定を意図するものではないことも理解されたい。
したがって、直後に定義される用語は、明細書全体を参照することによって、より完全に定義される。
Ｉ．定義
本説明の理解をより容易にするために、最初にいくつかの用語を定義しておく。更なる定義は、詳細な説明全体を通して記載される。
「１つ（ａ）」または「１つ（ａｎ）」の実体という用語は、その実体の１つ以上を指すことに留意されたい。例えば、「ヌクレオチド配列」は、１つ以上のヌクレオチド配列を表すことを理解されたい。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書中で区別なく使用される。更に、特許請求の範囲は、いずれかの任意選択の要素を排除するように作成され得ることにも留意されたい。したがって、本記述は、請求項の要素の列挙に関連する「だけ」、「のみ」などの排他的用語の使用、または否定的な限定の使用の先行詞として働くことが意図される。
更に、本明細書で使用される場合、「及び／または」は、２つの指定された特徴または構成成分のそれぞれが、他方の有無にかかわらず具体的に開示されているとみなされるものとする。したがって、本明細書において「Ａ及び／またはＢ」などの文言中で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの文言中で使用される「及び／または」という用語は、次の態様：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図される。
態様が「～を含む」という言葉を用いて本明細書で記載されている場合はいずれも、「～からなる」及び／または「～から本質的になる」という用語で記載される類似の態様もまた提供されることが理解される。
別途の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関係する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くに関する一般的な辞書を当業者に提供するものである。
単位、接頭辞、及び記号は、国際単位系（ＳＩ）に認められた形態で示される。数値範囲は、その範囲を画定する数を含む。ある値の範囲が列挙される場合、その範囲の列挙された上限値と下限値の間にある各整数値及びその各小数も、これらの値の間にあるそれぞれの部分範囲とともに、具体的に開示されることを理解されたい。任意の範囲の上限値及び下限値は、その範囲から独立して含まれることも除外することもでき、どちらか一方の限界値を含む範囲、両方を含む範囲、いずれも含まない範囲のそれぞれの範囲も本開示の範囲に包含される。このように、本明細書に列挙される範囲は、列挙された端点値を含む、その範囲内の値の全てについての簡略表記であることが理解される。例えば、１～１０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分範囲を含むことが理解される。
ある値が明示的に列挙される場合、列挙された値とほぼ同じ大きさまたは量である値も本開示の範囲内であることを理解されたい。ある組み合わせが開示される場合、その組み合わせの要素のそれぞれの部分的組み合わせも具体的に開示され、本開示の範囲内である。逆に、異なる要素または要素群が個々に開示される場合、その組み合わせも開示される。本開示の任意の要素が複数の代替物を有するものとして開示される場合、各代替物が、単独で、または他の代替物との任意の組み合わせで除外される開示の例もまた本明細書に開示され、開示の２つ以上の要素がこのような除外を有し得、このような除外を有する要素の全ての組み合わせが本明細書に開示される。
ヌクレオチドは、一般に認められている一文字記号で言及される。特に指定のない限り、ヌクレオチド配列は、５’から３’に向けて左から右に記述される。ヌクレオチドは、本明細書において、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨され、一般的に知られている一文字表記で言及される。したがって、Ａはアデニンを表し、Ｃはシトシンを表し、Ｇはグアニンを表し、Ｔはチミンを表し、Ｕはウラシルを表す。
アミノ酸配列は、アミノからカルボキシに向けて左から右に記述される。アミノ酸は、本明細書において、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨され、一般的に知られている三文字表記または一文字表記のいずれかで言及される。
「約」という用語は、本明細書において、およそ、大まか、前後、またはその領域内を意味するために使用される。「約」という用語が数値範囲とともに使用される場合、当該用語は、記載された数値の上下にその境界を拡張することによって、当該範囲を修飾するものである。一般に、「約」という用語は、ある変動率、例えば、１０パーセントの変動率の上下（高低）で、指定された数値の上下に数値を修飾することができる。
「投与」、「投与すること」という用語、及びそれらの文法上の変化形は、薬学的に許容される経路を介して、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）などの組成物を対象に導入することを指す。本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）などの組成物の対象への導入は、腫瘍内、経口、肺内、鼻腔内、非経口（静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下）、経直腸、リンパ管内、髄腔内、眼周囲または局所を含む、任意の好適な経路による。投与は、自己投与及び他者による投与を含む。好適な投与経路は、組成物または薬剤がその意図された機能を果たすことを可能にする。例えば、好適な経路が静脈内である場合、組成物は、組成物または薬剤を対象の静脈中に導入することによって投与される。
本明細書で使用される場合、「アゴニスト」という用語は、受容体に結合し、その受容体を活性化して生物学的応答を生み出す分子を指す。受容体は、内因性アゴニストまたは外因性アゴニストのいずれかによって活性化され得る。内因性アゴニストの非限定的な例としては、ホルモン、神経伝達物質、及び環状ジヌクレオチドが挙げられる。外因性アゴニストの非限定的な例としては、薬物、小分子、及び環状ジヌクレオチドが挙げられる。アゴニストは、完全アゴニスト、部分アゴニスト、または逆アゴニストであり得る。
「アミノ酸置換」という用語は、親または参照配列（例えば、野生型配列）中に存在するアミノ酸残基を、別のアミノ酸残基に置き換えることを指す。アミノ酸は、親または参照配列（例えば、野生型ポリペプチド配列）において、例えば、化学ペプチド合成を介して、または当該技術分野において知られている組み換え法によって、置換することができる。したがって、「位置Ｘの置換」への言及は、位置Ｘに存在するアミノ酸を代替アミノ酸残基で置換することを指す。いくつかの態様において、置換パターンは、式ＡｎＹに従って記述することができ、ここで、Ａは、位置ｎに天然にまたは元来存在するアミノ酸に対応する一文字コードであり、Ｙは、置換アミノ酸残基である。他の態様において、置換パターンは、式Ａｎ（ＹＺ）に従って記述することができ、ここで、Ａは、位置ｎに天然にまたは元来存在するアミノ酸を置換するアミノ酸残基に対応する一文字コードであり、Ｙ及びＺは、Ａを置き換えることができる代替置換アミノ酸残基である。
本明細書で使用される場合、「アンタゴニスト」という用語は、受容体に結合したときに、生物学的応答自体を誘発するのではなく、アゴニスト媒介性応答を遮断または抑制する分子を指す。多くのアンタゴニストは、受容体上の構造的に定義された結合部位で、内因性リガンドまたは基質と競合することによって、その効力を達成する。アンタゴニストの非限定的な例としては、アルファ遮断薬、ベータ遮断薬、及びカルシウムチャネル遮断薬が挙げられる。アンタゴニストは、競合的、非競合的、または不競合的アンタゴニストであり得る。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、天然または部分的もしくは完全に合成的に産生される免疫グロブリン、及びその断片を包含する。この用語はまた、免疫グロブリン結合ドメインと相同である結合ドメインを有する任意のタンパク質も包含する。「抗体」は、抗原に特異的に結合し認識する免疫グロブリン遺伝子またはその断片に由来するフレームワーク領域を含むポリペプチドを更に含む。抗体という用語の使用は、全抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体及び組み換え抗体、その断片を含むことを意味し、一本鎖抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ、マウス－ヒト、マウス－霊長類、霊長類－ヒトモノクローナル抗体、抗イディオタイプ抗体、抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、及びＦｄ断片など、ダイアボディ、ならびに抗体関連ポリペプチドを含むことを意味する。抗体は、所望の生物学的活性または機能を示す限り、二重特異性抗体及び多重特異性抗体を含む。本開示のいくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、抗体またはその抗原結合断片を含む分子である。
「抗体薬物複合体」及び「ＡＤＣ」という用語は、区別なく使用され、治療薬（本明細書において、薬剤、薬物、または有効薬剤成分と称されることもある）または複数の薬剤に連結された、例えば、共有結合された抗体を指す。本開示のいくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、抗体薬物複合体である。
本明細書で使用される場合、１つ以上の対象の値に適用される「およそ」という用語は、指定された参照値と類似する値を指す。ある特定の態様において、「およそ」という用語は、別途の指定がない限りまたは文脈から明らかでない限り、指定される参照値のいずれかの方向（より大きい方向または小さい方向）の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以下の範囲内に含まれる値の範囲を指す（当該数字が取り得る値の１００％を超える場合を除く）。
「アリール」という用語は、炭素環式芳香族基を指す。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。炭素環式芳香族基は、非置換であり得るか、または－Ｃ１－８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－８アルキル）、－アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２－、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＨ、－ハロゲン、－Ｎ３、－ＮＨ２、－ＮＨ（Ｒ’）、－Ｎ（Ｒ’）２及び－ＣＮ（式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、－Ｃ１－８アルキル、またはアリールである）を含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換され得る。
「アリーレン」という用語は、２つの共有結合を有し、以下の構造に示されるようなオルト、メタ、またはパラの構造であり得るアリール基を指し、
Figure 2022550248000005
 ここで、フェニル基は、非置換であり得るか、または－Ｃ１－８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－８アルキル）、－アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２－、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＨ、－ハロゲン、－Ｎ３、－ＮＨ２、－ＮＨ（Ｒ’）、－Ｎ（Ｒ’）２及び－ＣＮ（式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、－Ｃ１－８アルキル、またはアリールである）を含むがこれらに限定されない最大４つの基で置換され得る。
本明細書で使用される「生物学的に活性な分子」という用語は、アンカリング部分を介して、ＥＶ、例えば、エクソソームに結合することができる任意の分子を指し、ここで、当該分子は、それを必要とする対象において治療効果もしくは予防効果を有し得るか、または診断用途に使用することができるものである。したがって、例として、生物学的に活性な分子という用語は、タンパク質（例えば、抗体、タンパク質、ポリペプチド、ならびにその誘導体、断片、及びバリアント）、脂質及びその誘導体、炭水化物（例えば、糖タンパク質のグリカン部分）、または小分子を含む。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、放射性同位体である。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、検出可能な部分、例えば、放射性核種、蛍光分子、または造影剤である。
本明細書で使用される「Ｃ１－８アルキル」という用語は、１～８個の炭素原子を有する直鎖または分枝の飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１－８アルキル」基には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、イソプロピル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソペンチル、及び２－メチルブチルが含まれるが、これらに限定されない。
「Ｃ１－１０アルキレン」という用語は、式－（ＣＨ２）１－１０－の飽和直鎖炭化水素基を指す。Ｃ１－１０アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、及びデカレンが挙げられる。
「Ｃ３－８炭素環」という用語は、３、４、５、６、７または８員の飽和または不飽和非芳香族炭素環式環を指す。代表的なＣ３－８炭素環には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンタジエニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、１，３－シクロヘキサジエニル、１，４－シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、１，３－シクロヘプタジエニル、１，３，５－シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル、及び－シクロオクタジエニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ３－８炭素環基は、非置換であり得るか、または－Ｃ１－８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－８アルキル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２－、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＨ、－ハロゲン、－Ｎ３、－ＮＨ２、－ＮＨ（Ｒ’）、－Ｎ（Ｒ’）２及び－ＣＮ（式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、－Ｃ１－８アルキル、またはアリールである）を含むがこれらに限定されない１つ以上の基で置換され得る。
「Ｃ３－８カルボシクロ」という用語は、上に定義されるＣ３－８炭素環基であって、炭素環の水素原子のうちの１つ以上が結合で置き換えられているものを指す。
「Ｃ３－８複素環」という用語は、環炭素原子のうちの１～４個が、独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮからなる群から選択されるヘテロ原子で置き換えられている芳香族または非芳香族Ｃ３－８炭素環を指す。Ｃ３－８複素環の代表的な例としては、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、及びテトラゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ３－８複素環は、非置換であり得るか、または－Ｃ１－８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－８アルキル）、－アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＨ、－ハロゲン、－Ｎ３、－ＮＨ２、－ＮＨ（Ｒ’）、－Ｎ（Ｒ’）２、及び－ＣＮ（式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、－Ｃ１－８アルキル、またはアリールである）を含むがこれらに限定されない最大７つの基で置換され得る。
「Ｃ３－８ヘテロシクロ」という用語は、上で定義されるＣ３－８複素環基であって、複素環基の水素原子のうちの１つが結合で置き換えられているものを指す。Ｃ３－８ヘテロシクロは、非置換であり得るか、または－Ｃ１－８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－８アルキル）、－アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－ＯＨ、－ハロゲン、－Ｎ３、－ＮＨ２、－ＮＨ（Ｒ’）、－Ｎ（Ｒ’）２及び－ＣＮ（式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、－Ｃ１－８アルキル、またはアリールである）を含むがこれらに限定されない最大６つの基で置換され得る。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられたものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されており、これらには、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝状側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、ポリペプチド中のアミノ酸が同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸で置き換えられている場合、その置換は、保存的であるとみなされる。別の態様において、一続きのアミノ酸は、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／または組成が異なる構造的に類似した一続きのアミノ酸で保存的に置き換えることができる。
本明細書で使用される場合、「保存された」という用語は、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のヌクレオチドまたはアミノ酸残基のそれぞれが、比較される２つ以上の配列の同じ位置で変更がないものを指す。比較的保存されたヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列中の他の箇所に現れるヌクレオチドまたはアミノ酸よりも、多くの関連配列中で保存されているものである。
いくつかの態様において、２つ以上の配列は、それらが互いに１００％同一である場合、「完全に保存された」または「同一である」と言われる。いくつかの態様において、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存された」と言われる。いくつかの態様において、２つ以上の配列は、それらが互いに約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％、約９８％、または約９９％同一である場合、「高度に保存された」と言われる。いくつかの態様において、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「保存された」と言われる。いくつかの態様において、２つ以上の配列は、それらが互いに約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、または約９９％同一である場合、「保存された」と言われる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの全長に適用されてもよいし、その一部、領域または特徴に適用されてもよい。
本明細書で使用される場合、「従来のＥＶタンパク質」という用語は、ＥＶ中に濃縮されることがこれまでに知られているタンパク質を意味する。
本明細書で使用される場合、「従来のエクソソームタンパク質」という用語は、エクソソーム中に濃縮されることがこれまでに知られているタンパク質を意味し、これらには、限定するものではないが、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリンＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂ、その断片、またはこれらに結合するペプチドが含まれる。
本明細書で使用される「誘導体」という用語は、ＥＶ、例えば、エクソソームの構成成分（例えば、スカフォールドＸ及び／またはスカフォールドＹなどのタンパク質、脂質、または炭水化物）または反応性マレイミド基もしくはマレイミド基との反応を受けやすいチオール基のいずれかを導入するために化学的に改変された生物学的に活性な分子（例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、脂質、炭水化物、抗体またはその断片、ＰＲＯＴＡＣなど）を指す。例えば、（ｉ）反応する基、例えば、遊離アミノ基と反応する基と、（ｉｉ）マレイミド基と、を含む二官能性試薬で改変された抗体は、ＥＶ、例えば、エクソソーム上のスカフォールドＸタンパク質中の遊離チオール基と反応し得る反応性マレイミド基を含む、抗体誘導体をもたらし得る。反対に、ＥＶ、例えば、エクソソーム上のスカフォールドＸは、（ｉ）反応する基、例えば、遊離アミノ基と反応する基と、（ｉｉ）マレイミド基と、を含む二官能性試薬で改変され得、これにより、生物学的に活性な分子、例えば、抗体中の遊離チオール基と反応し得る反応性マレイミド基を含む、スカフォールドＸ誘導体が得られる。
「賦形剤」及び「担体」という用語は、区別なく使用され、化合物の投与を更に促進するために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。
本明細書で使用される場合、「細胞外小胞」、「ＥＶ」という用語、及びそれらの文法上の変化形は、区別なく使用され、内部空間を取り囲む膜を含む細胞由来の小胞を指す。細胞外小胞は、その由来となる細胞よりも小さい直径を有する、全ての膜結合小胞（例えば、エクソソーム、ナノ小胞）を含む。いくつかの態様において、細胞外小胞は、直径が２０ｎｍ～１０００ｎｍの範囲であり、様々な巨大分子ペイロードを、内部空間（すなわち、内腔）内に、細胞外小胞の外部表面上に提示して、及び／または膜をまたいでのいずれかで、含むことができる。いくつかの態様において、ペイロードは、核酸、タンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／またはこれらの組み合わせを含み得る。ある特定の態様において、細胞外ビヒクルは、スカフォールド部分を含む。例として、限定するものではないが、細胞外小胞は、アポトーシス小体、細胞の断片、直接的操作または間接的操作による細胞由来の小胞（例えば、連続押出またはアルカリ溶液での処理による）、小胞化オルガネラ、及び生細胞によって産生される小胞（例えば、原形質膜の直接発芽または後期エンドソームと原形質膜の融合による）を含む。細胞外小胞は、生体もしくは死体、外植された組織もしくは器官、原核細胞もしくは真核細胞、及び／または培養細胞に由来し得る。いくつかの態様において、細胞外小胞は、１つ以上の導入遺伝子産物を発現する細胞によって産生される。
本明細書で使用される場合、「エクソソーム」という用語は、直径が２０～３００ｎｍの間（例えば、４０～２００ｎｍの間）の細胞外小胞を指す。エクソソームは、内部空間（すなわち、内腔）を取り囲む膜を含み、いくつかの態様において、直接的な原形質膜の出芽によって、または後期エンドソームと原形質膜との融合によって、細胞（例えば、産生細胞）から生成され得る。ある特定の態様において、エクソソームは、スカフォールド部分を含む。以下に記載されるように、エクソソームは、産生細胞から得ることができ、そのサイズ、密度、生化学的パラメーター、またはこれらの組み合わせに基づいて、産生細胞から単離することができる。いくつかの態様において、本開示のエクソソームは、１つ以上の導入遺伝子産物を発現する細胞によって産生される。
いくつかの態様において、本開示のＥＶ、例えば、エクソソーム、例えば、ナノ小胞は、少なくとも１つの生物学的に活性な分子（例えば、抗体またはＡＤＣなどのタンパク質、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのＲＮＡまたはＤＮＡ、小分子薬物、毒素）を、アンカリング部分を介して、ＥＶ、例えば、エクソソーム、例えば、ナノ小胞に共有結合的に連結することによって操作される。
いくつかの態様において、本開示のＥＶ、例えば、エクソソームまたはナノ小胞は、様々な巨大分子ペイロードを、内部空間（すなわち、内腔）内に、ＥＶの外部（外）表面もしくは内部（内腔）表面に提示して、及び／または膜をまたいでのいずれかで、含むことができる。いくつかの態様において、ペイロードは、例えば、核酸、タンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／またはこれらの組み合わせを含み得る。ある特定の態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームは、スカフォールド部分（例えば、スカフォールドＸ）を含む。ＥＶ、例えば、エクソソームは、生体もしくは死体、外植された組織もしくは器官、原核細胞もしくは真核細胞、及び／または培養細胞に由来し得る。いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームは、１つ以上の導入遺伝子産物を発現する細胞によって産生される。他の態様において、本開示のＥＶは、限定するものではないが、ナノ小胞、ミクロソーム、微小小胞体、細胞外小体、またはアポトーシス小体である。
本明細書で使用される場合、タンパク質の「断片」という用語（例えば、生物学的に活性な分子、例えば、治療用タンパク質、またはスカフォールドＸもしくはスカフォールドＹなどのスカフォールドタンパク質）は、天然に生じる配列よりも短く、天然に生じるタンパク質と比較してＮ末端及び／またはＣ末端が欠失しているか、または任意の部分のタンパク質が欠失している、タンパク質のアミノ酸配列を指す。
本明細書で使用される場合、「機能性断片」という用語は、タンパク質機能を保持するタンパク質断片を指す。したがって、いくつかの態様において、スカフォールドタンパク質、例えば、スカフォールドＸタンパク質の機能性断片は、生物学的に活性な分子を、マレイミド部分を介して、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面上または外部表面上に係留する能力を保持している。同様に、ある特定の態様において、スカフォールドＹタンパク質の機能性断片は、ある部分を、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面上に係留する能力を保持している。
断片が機能性断片であるかどうかは、ウェスタンブロット、ＦＡＣＳ解析、及び断片と、例えば、ＧＦＰのような自家蛍光タンパク質との融合を含む、ＥＶ、例えば、エクソソームのタンパク質含量を決定するための当該技術分野で知られている任意の方法によって評価することができる。ある特定の態様において、スカフォールドＸタンパク質の機能性断片は、例えば、生物学的に活性な分子を、マレイミド部分を介して、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔上または外部表面上に係留する天然型スカフォールドＸタンパク質の能力の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または少なくとも約１００％を保持している。
本明細書で使用される場合、生物学的に活性な分子を、スカフォールドタンパク質を介して、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）の内腔または外部表面上に「アンカリング」することは、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の内腔または外部表面上にそれぞれ位置するスカフォールド分子の部分に生物学的に活性な分子を共有結合させることを指す。
ある特定の態様において、スカフォールドＹタンパク質の機能性断片は、例えば、ある部分を、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面上に係留する天然型スカフォールドＹタンパク質の能力の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または少なくとも約１００％を保持している。
本明細書で使用される場合、「相同性」という用語は、高分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関係性を指す。一般に、「相同性」という用語は、２つの分子の間に進化的な関係があることを意味する。したがって、相同である２つの分子は、共通の進化的祖先を有する。本開示の文脈において、相同性という用語は、同一性及び類似性の両方を包含する。
いくつかの態様において、高分子は、分子中のモノマーの少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％が同一（正確に同一のモノマー）または類似（保存的置換）であれば、互いに「相同」であるとみなされる。「相同」という用語は、必然的に、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較を指す。
本開示の文脈において、置換は（アミノ酸置換と称される場合であっても）、核酸レベルで実施され、すなわち、アミノ酸残基を代替アミノ酸残基で置換することは、第１のアミノ酸をコードするコドンを、第２のアミノ酸をコードするコドンで置換することによって実施される。
本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、高分子間、例えば、ポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間の全体的なモノマー保存を指す。いかなる追加の修飾語も伴わない「同一」という用語は、例えば、タンパク質Ａはタンパク質Ｂと同一であるとは、それらの配列が１００％同一（１００％配列同一性）であることを意味する。２つの配列を、例えば、「７０％同一」と記述することは、例えば、それらが「７０％配列同一性」を有すると記述することと同等である。
２つのポリペプチド配列の同一性パーセントの算出は、例えば、最適な比較を目的とした２つの配列を整列させることによって実施することができる（例えば、最適アライメントを得るために第１と第２のポリペプチド配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較目的のために非同一配列を無視することができる）。ある特定の態様において、比較目的で整列される配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで、対応するアミノ酸位置のアミノ酸が比較される。
第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸で占められている場合、その分子は、その位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適アライメントのために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に入れた、配列が共有する同一である位置の数に応じて決まる。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。
好適なソフトウェアプログラムは、様々なソースから、またタンパク質とヌクレオチド配列の両方のアライメントについて、利用可能である。配列同一性パーセントを決定するための１つの好適なプログラムは、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から利用可能なＢＬＡＳＴプログラム群の一部である、ｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰのいずれかのアルゴリズムを使用して、２つの配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用され、一方、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは、例えば、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳ群の一部であり、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）のｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａからも利用可能である、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒである。
配列アライメントは、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｃｌｕｓｔａｌ ＸまたはＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどの当該技術分野において知られている方法を使用して実施することができる。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの参照配列と整列される単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの標的配列内の異なる領域は、それぞれ個々の配列同一性パーセントを有し得る。配列同一性パーセントの値は、小数第１位に丸められることに留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は８０．１に切り捨てられ、一方、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は８０．２に切り上げられる。また、長さの値も常に整数であることに留意されたい。
ある特定の態様において、第１のアミノ酸配列（または核酸配列）の第２のアミノ酸配列（または核酸配列）に対する同一性パーセンテージ（％ＩＤ）は、％ＩＤ＝１００×（Ｙ／Ｚ）で算出され、ここで、Ｙは、第１及び第２の配列のアライメント（目視確認または特定の配列アライメントプログラムによって整列されたもの）において同一マッチとしてスコアリングされたアミノ酸残基（または核酸塩基）の数であり、Ｚは、第２の配列中の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合、第１の配列の第２の配列に対する同一性パーセントは、第２の配列の第１の配列に対する同一性パーセントよりも高くなる。
当業者であれば、配列同一性パーセントを算出するための配列アライメントの生成は、一次配列データによって排他的に導き出される２つの配列間の比較に限定されないことを理解するであろう。また、配列アライメントは、配列データを、構造的データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能的データ（例えば、変異の位置）、または系統発生学的データなどの起源の異なるデータと統合することによって生成され得ることも理解されよう。起源の異なるデータを統合して多重配列アライメントを生成するのに好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇにおいて利用可能である、あるいは、例えば、ＥＢＩから入手可能である、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅである。また、配列同一性パーセントを算出するために使用される最終アライメントは、自動または手動のいずれかで精選することができることも理解されよう。
本明細書で使用される場合、「免疫調節剤」という用語は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）と接触した標的（例えば、標的細胞）に作用し、免疫系を調節する薬剤を指す。ＥＶ（例えば、エクソソーム）及び／または産生細胞に導入することができる免疫調節剤の非限定的な例としては、チェックポイント阻害剤の調節剤、チェックポイント阻害剤のリガンド、サイトカイン、その誘導体、またはこれらの任意の組み合わせなどの薬剤が挙げられる。免疫調節剤はまた、アゴニスト、アンタゴニスト、抗体、抗原結合断片、ポリヌクレオチド、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｍＲＮＡもしくはＤＮＡ、または小分子も含み得る。本開示のいくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、免疫調節剤である。
「免疫応答」は、本明細書で使用される場合、異物または異常細胞、例えば、がん細胞に対する脊椎動物内の生物学的応答を指し、この応答は、これらの異物及びこれらによって引き起こされる疾患から生物を保護する。免疫応答は、免疫系の１つ以上の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、樹状細胞または好中球）及びこれらの細胞のいずれかまたは肝臓によって産生される可溶性巨大分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）の作用によって媒介され、侵入した病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん細胞もしくは他の異常細胞、または自己免疫もしくは病的炎症の場合には正常なヒト細胞もしくは組織に対して、選択的な標的化、結合、損傷、破壊及び／または脊椎動物の体内からの排除が生じる。免疫反応は、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞、Ｔｈ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、もしくはＴｒｅｇ細胞の活性化もしくは抑制、または免疫系の任意の他の細胞、例えば、ＮＫ細胞の活性化もしくは抑制を含む。したがって、免疫応答は、体液性免疫応答（例えば、Ｂ細胞によって媒介される）、細胞性免疫応答（例えば、Ｔ細胞によって媒介される）、または体液性と細胞性の両方の免疫応答を含み得る。本開示のいくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、免疫応答を惹起することが可能な分子である。
いくつかの態様において、免疫応答は、「抑制性の」免疫応答である。抑制性免疫応答は、刺激物（例えば、抗原）の影響を遮断または減少させる免疫応答である。ある特定の態様において、抑制性免疫応答は、刺激物に対する抑制抗体の産生を含む。いくつかの態様において、免疫応答は、「刺激性の」免疫応答である。刺激性免疫応答は、標的抗原（例えば、腫瘍抗原またはウイルス）を破壊及び除去することができるエフェクター細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球）の生成をもたらす免疫応答である。
本明細書で使用される「イムノコンジュゲート」という用語は、結合分子（例えば、抗体）と、結合分子に化学的にコンジュゲートされた１つ以上の部分、例えば、治療用または診断用部分と、を含む、化合物を指す。一般に、イムノコンジュゲートは、一般式：Ａ－（Ｌ－Ｍ）ｎによって定義され、式中、Ａは、結合分子（例えば、抗体）であり、Ｌは、任意選択のリンカーであり、Ｍは、例えば、治療薬、検出可能な標識などであり得る異種部分であり、ｎは、整数である。いくつかの態様において、複数の異種部分が同じ結合分子（例えば、抗体）中の異なる結合点に化学的にコンジュゲートされ得る。他の態様において、複数の異種部分が鎖状につなげられ、結合分子（例えば、抗体）中の結合点に結合され得る。いくつかの態様において、複数の異種部分（同一または異なる）が結合分子（例えば、抗体）にコンジュゲートされ得る。
イムノコンジュゲートは、逆順での一般式によって定義することもできる。いくつかの態様において、イムノコンジュゲートは、「抗体薬物複合体」（「ＡＤＣ」）である。本開示の文脈において、「イムノコンジュゲート」という用語は、化学的または酵素的にコンジュゲートされた分子に限定されない。本開示で使用される「イムノコンジュゲート」という用語は、遺伝子融合物も含む。本開示のいくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、イムノコンジュゲートである。
本明細書で使用される場合、「単離された」、「精製された」、「抽出された」という用語、及びそれらの文法的変化形は、区別なく使用され、精製の１つ以上のプロセスを経た所望のＥＶ（例えば、既知または未知の量及び／または濃度の複数のＥＶ）の調製物の状態、例えば、所望のＥＶ、例えば、エクソソームの調製物の選択または濃縮を指す。いくつかの態様において、本明細書で使用される単離することまたは精製することは、産生細胞を含有する試料からＥＶ、例えば、エクソソームを取り出す、部分的に取り出す（例えば、画分）プロセスである。いくつかの態様において、単離されたＥＶ、例えば、エクソソームの組成物は、検出可能な望ましくない活性を有さないか、あるいは、望ましくない活性のレベルまたは量は、許容されるレベルまたは量以下である。他の態様において、単離されたＥＶ、例えば、エクソソームの組成物は、許容される量及び／または濃度以上である所望のＥＶ、例えば、エクソソームの量及び／または濃度を有する。他の態様において、単離されたＥＶ、例えば、エクソソームの組成物は、組成物が得られる出発物質（例えば、産生細胞調製物）と比較して、濃縮されている。この濃縮は、出発物質と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、少なくとも約９９．９９％、少なくとも約９９．９９９％、少なくとも約９９．９９９９％、または９９．９９９９％超であり得る。いくつかの態様において、単離されたＥＶ、例えば、エクソソームの調製物は、残余の生物学的製剤を実質的に含まない。いくつかの態様において、単離されたＥＶ、例えば、エクソソームの調製物は、任意の汚染の生物学的物質を１００％、少なくとも約９９％、少なくとも約９８％、少なくとも約９７％、少なくとも約９６％、少なくとも約９５％、少なくとも約９４％、少なくとも約９３％、少なくとも約９２％、少なくとも約９１％、または少なくとも約９０％含まない。残余の生物学的製剤は、非生物学的物質（化学物質を含む）または不要な核酸、タンパク質、脂質、もしくは代謝産物を含み得る。残余の生物学的製剤を実質的に含まないことはまた、ＥＶ、例えば、エクソソームの組成物が検出可能な産生細胞を含有しないこと、及びＥＶ、例えば、エクソソームのみが検出可能であることを意味し得る。
「連結された」、「融合された」という用語、及びそれらの文法的変化形は、区別なく使用され、第２の部分、例えば、第２のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列にそれぞれ共有結合的または非共有結合的に接続された第１の部分、例えば、第１のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を指す。第１の部分が第２の部分に直接接続または並置され得、あるいは、介在部分が第１の部分を第２の部分に共有結合的に接続することができる。「連結された」という用語は、Ｃ末端またはＮ末端における第１の部分の第２の部分への融合を意味するだけでなく、第１の部分（または第２の部分）全体が第２の部分（または第１の部分）中の任意の２つの点、例えば、アミノ酸に（それぞれ）挿入されることも含む。一態様において、第１の部分は、ペプチド結合またはリンカーによって第２の部分に連結される。第１の部分は、ホスホジエステル結合またはリンカーによって第２の部分に連結され得る。リンカーは、ペプチドもしくはポリペプチド（ポリペプチド鎖の場合）またはヌクレオチドもしくはヌクレオチド鎖（ヌクレオチド鎖の場合）または任意の化学部分（ポリペプチドもしくはポリヌクレオチド鎖または任意の化学分子の場合）であり得る。「連結された」という用語はまた、ハイフン（－）で示される。いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソーム上のスカフォールドＸタンパク質は、マレイミド部分を介して、生物学的に活性な分子に連結または融合され得る。
本明細書で使用される場合、「内腔操作されたＥＶ」という用語は、ＥＶ、例えば、エクソソームの膜の内腔表面または内腔がその組成において改変されており、それにより、操作されたＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面または内腔は、改変前のＥＶ、例えば、エクソソームまたは天然に生じるＥＶ、例えば、エクソソームのものとは異なる、ＥＶ、例えば、エクソソームを指す。
操作は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の内腔（すなわち、ＥＶ内の空隙）または膜、特にＥＶの内腔表面に直接行うことができ、それにより、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔及び／または内腔表面は、変更される。例えば、膜は、タンパク質、脂質、小分子、炭水化物など、その組成が改変され、それにより、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面が改変される。同様に、内腔内の内容物も改変され得る。組成は、化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって、または化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって予め改変された細胞から産生されることによって、変更され得る。具体的には、組成は、遺伝子操作によって、または遺伝子操作によって予め改変された細胞から産生されることによって、変更され得る。いくつかの態様において、内腔操作されたＥＶ、例えば、内腔操作されたエクソソームは、外因性タンパク質（すなわち、ＥＶ、例えば、エクソソームが天然に発現しないタンパク質）またはその断片もしくはバリアントを含み、これは、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面もしくは内腔上に露出することができるか、あるいは、ＥＶ、例えば、エクソソームの内層上に露出する部分のアンカリング点（結合）となることができる。他の態様において、内腔操作されたＥＶ、例えば、内腔操作されたエクソソームは、より高い発現の天然ＥＶ、例えば、エクソソームのタンパク質（例えば、スカフォールドＸまたはスカフォールドＹ）またはその断片もしくはバリアントを含み、これは、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔に露出することができるか、あるいは、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面上に露出する部分のアンカリング点（結合）となることができる。
本明細書で使用される場合、「巨大分子」という用語は、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、代謝産物、またはこれらの組み合わせを指す。
本明細書で使用される場合、「巨大分子」という用語は、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、代謝産物、またはこれらの組み合わせを指す。
「改変された」という用語は、本明細書に記載されるＥＶ、例えば、エクソソームの文脈で使用される場合、ＥＶ、例えば、エクソソーム及び／またはその産生細胞の改変または操作を指し、それにより、改変されたＥＶ、例えば、エクソソームは、天然に生じるＥＶ、例えば、エクソソームとは異なる。いくつかの態様において、本明細書に記載される改変されたＥＶ、例えば、エクソソームは、天然に生じるＥＶ、例えば、エクソソームの膜と比較して、タンパク質、脂質、小分子、炭水化物などの組成が異なる膜を含む。例えば、膜は、より高い密度もしくは数の天然のＥＶ、例えば、エクソソームのタンパク質を含み、及び／または膜は、ＥＶ、例えば、エクソソームに天然には存在しないタンパク質を含む。ある特定の態様において、膜に対するそのような改変は、ＥＶ、例えば、エクソソームの外表面を変化させる（例えば、本明細書に記載される表面操作されたＥＶ及びエクソソーム）。ある特定の態様において、膜に対するそのような改変は、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面を変化させる（例えば、内腔操作された本明細書に記載されるＥＶ及びエクソソーム）。
本明細書で使用される場合、「修飾されたタンパク質」または「タンパク質修飾」という用語は、タンパク質の非変異アミノ酸配列に対して、少なくとも１５％の同一性を有するタンパク質を指す。タンパク質の修飾には、タンパク質の断片またはバリアントが含まれる。タンパク質の修飾には、タンパク質の断片またはバリアントに対する化学的または物理的修飾が更に含まれ得る。
本明細書で使用される場合、「調節する」、「変更する」という用語、及びそれらの文法的変化形は、一般に、特定の濃度、レベル、発現、機能または挙動に適用される場合、その特定の濃度、レベル、発現、機能または挙動を、例えば、アンタゴニストまたはアゴニストとして作用するように、増加または減少させること、例えば、直接的または間接的に促進／刺激／上方制御または干渉／阻害／下方制御させることによって、変更させる能力を指す。いくつかの場合において、調節剤は、ある特定の濃度、レベル、活性または機能を、対照と比べて、または通常予測されるであろう活性の平均レベルと比べて、または対照の活性レベルと比べて、増加及び／または減少させることができる。
本明細書で使用される場合、「ナノ小胞」という用語は、直径２０～２５０ｎｍの間（例えば、３０～１５０ｎｍの間）の細胞外小胞を指し、直接的または間接的な操作によって細胞（例えば、産生細胞）から生成されるもので、操作がなければ細胞によってナノ小胞が産生されることはない。ナノ小胞を産生するための細胞の適切な操作は、連続押出、アルカリ溶液での処理、超音波処理、またはこれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。いくつかの態様において、ナノ小胞の産生は、産生細胞の破壊を生じ得る。いくつかの態様において、本明細書に記載されるナノ小胞の集団は、原形質膜からの直接発芽または後期エンドソームと原形質膜との融合による細胞に由来する小胞を実質的に含まない。ある特定の態様において、ナノ小胞は、スカフォールド部分、例えば、スカフォールドＸ及び／またはスカフォールドＹを含む。ナノ小胞は、産生細胞から得られたら、その大きさ、密度、生化学的パラメーター、またはこれらの組み合わせに基づいて産生細胞から単離することができる。
本明細書で使用される場合、「ペイロード」という用語は、ＥＶ、例えば、本開示のエクソソームと接触している標的（例えば、標的細胞）に作用する生物学的に活性な分子（例えば、治療薬）を指す。ＥＶ、例えば、エクソソームに導入することができるペイロードの非限定的な例としては、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含むか、または転写を阻害するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素などのポリペプチドをコードするＤＮＡもしくはｍＲＮＡ分子、またはｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡなどの制御機能を有するＲＮＡ分子）、アミノ酸（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含むか、または翻訳を阻害するアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、及び小分子（例えば、小分子薬物及び毒素）などの治療薬が挙げられる。ある特定の態様において、ペイロードは、抗原を含む。本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、対象に導入された場合、それ自身に対する免疫応答（細胞性または体液性）を惹起する任意の作用物質を指す。いくつかの態様において、ペイロード分子は、ＥＶ、例えば、エクソソームに、マレイミド部分を介して共有結合的に連結される。他の態様において、ペイロードは、アジュバントを含む。
「薬学的に許容される担体」、「薬学的に許容される賦形剤」という用語、及びそれらの文法的変化形は、ヒトを含む動物における使用に関して米国連邦政府の規制当局によって承認されたか、または米国薬局方において列挙されている薬剤のうちのいずれか、ならびに対象への化合物の投与を妨げるほど望ましくない生理学的作用を生じさせず、かつ投与される化合物の生物学的活性及び特性を阻害しない、任意の担体または希釈剤を包含する。賦形剤及び担体には、医薬組成物の調製に有用であり、一般的に安全で非毒性であり、望ましいものが含まれる。
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、薬学的に許容される担体及び賦形剤などの１つ以上の他の化学成分と混合もしくは混ぜ合わされた、または懸濁された、本明細書に記載される化合物のうちの１つ以上、例えば、本開示のＥＶ、例えば、エクソソームなどを指す。医薬組成物の１つの目的は、ＥＶ、例えば、エクソソームの調製物の対象への投与を容易にすることである。
本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、これらの類似体、またはこれらの混合物を含む、任意の長さのヌクレオチドの高分子を指す。この用語は、分子の一次構造を指す。したがって、この用語は、三本鎖、二本鎖及び一本鎖のデオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、ならびに三本鎖、二本鎖及び一本鎖のリボ核酸（「ＲＮＡ」）を含む。また、ポリヌクレオチドの修飾形態、例えば、アルキル化及び／またはキャッピングによる修飾、ならびに非修飾形態も含む。より詳細には、「ポリヌクレオチド」という用語は、ポリデオキシリボヌクレオチド（２－デオキシ－Ｄ－リボース含有）、スプライシングを受けているか受けていないかを問わないｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ及びｍＲＮＡを含む、ポリリボヌクレオチド（Ｄ－リボース含有）、Ｎ－またはＣ－グリコシドのプリン塩基またはピリミジン塩基である任意の他のタイプのポリヌクレオチド、ならびに非ヌクレオチド骨格を含有する他の高分子、例えば、ポリアミド（例えば、ペプチド核酸「ＰＮＡ」）及びポリモルフォリノ高分子、ならびに他の配列特異的な合成核酸高分子（ただし、高分子が、ＤＮＡ及びＲＮＡにみられるような塩基対合及び塩基スタッキングを可能にする立体配置で核酸塩基を含有することを条件とする）を含む。本開示のいくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームに、マレイミド部分を介して結合される生物学的に活性な分子は、ポリヌクレオチド、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。特定の態様において、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡを含む。他の態様において、ｍＲＮＡは、合成ｍＲＮＡである。いくつかの態様において、合成ｍＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。いくつかの態様において、特定の種類の全ての核酸塩基が非天然核酸塩基で置き換えられている（例えば、本明細書で開示されるポリヌクレオチド中の全てのウリジンが非天然核酸塩基、例えば、５－メトキシウリジンで置換され得る）。本開示のいくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ポリヌクレオチドである。
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸の高分子を指すために、本明細書中で区別なく使用される。高分子は、修飾アミノ酸を含み得る。これらの用語は、天然に修飾された、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、もしくは任意の他の操作もしくは修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲートによって修飾されたアミノ酸高分子も包含する。また、例えば、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、Ｄ－アミノ酸、及びクレアチンなどの非天然アミノ酸を含む）、ならびに当該技術分野において知られている他の修飾を含有するポリペプチドも定義内に含まれる。本開示のいくつかの態様において、マレイミド部分を介して、ＥＶ、例えば、エクソソームに結合される生物学的に活性な分子は、ポリペプチド、例えば、抗体もしくはＡＤＣなどのその誘導体、ＰＲＯＴＡＣ、毒素、融合タンパク質、または酵素である。
「ポリペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、任意のサイズ、構造、または機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを指す。ポリペプチドには、遺伝子産物、天然に生じるポリペプチド、合成ポリペプチド、ホモログ、オルソログ、パラログ、断片、ならびに前述の他の等価物、バリアント、及び類似体が含まれる。ポリペプチドは、単一のポリペプチドであってもよいし、二量体、三量体または四量体などの多分子複合体であってもよい。これらはまた、単鎖または多鎖ポリペプチドも含み得る。最も一般的なジスルフィド連結は、多鎖ポリペプチドに見出される。ポリペプチドという用語は、対応する天然アミノ酸の１つ以上のアミノ酸残基が人工化学的な類似体であるアミノ酸高分子にも適用され得る。いくつかの態様において、「ペプチド」は、５０アミノ酸長以下、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長であり得る。
本明細書で使用される「予防する」、「予防すること」という用語、及びその変化形は、疾患、障害及び／または状態の発生を部分的もしくは完全に遅らせること；特定の疾患、障害及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または臨床徴候の発生を部分的もしくは完全に遅らせること；特定の疾患、障害及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または徴候の発生を部分的もしくは完全に遅らせること；特定の疾患、障害及び／または状態の進行を部分的もしくは完全に遅らせること；及び／または疾患、障害及び／または状態に関連する病変の発生リスクを低下させることを指す。いくつかの態様において、結果の予防は、予防的処置により達成される。
本明細書で使用される場合、「産生細胞」という用語は、ＥＶ、例えば、エクソソームを生成するために使用される細胞を指す。産生細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養された細胞、またはｉｎ ｖｉｖｏの細胞であり得る。産生細胞には、ＥＶ、例えば、エクソソームの生成に有効であることが知られている細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ＢＪヒト包皮線維芽細胞、ｆＨＤＦ線維芽細胞、ＡＧＥ．ＨＮ（登録商標）神経前駆細胞、ＣＡＰ（登録商標）羊膜細胞、脂肪間葉系幹細胞、ＲＰＴＥＣ／ＴＥＲＴ１細胞が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の態様において、産生細胞は、抗原提示細胞ではない。いくつかの態様において、産生細胞は、樹状細胞、Ｂ細胞、マスト細胞、マクロファージ、好中球、Ｋｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のいずれかに由来する細胞、またはこれらの任意の組み合わせではない。
本明細書で使用される場合、「予防的」は、疾患もしくは状態の発症を予防する、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防もしくは遅らせるために使用される治療または方法を指す。
本明細書で使用される場合、「予防法」は、健康を維持し、出血エピソードの発症を予防もしくは遅らせる、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防もしくは遅らせるために取られる手段を指す。
「組み換え」ポリペプチドまたはタンパク質は、組み換えＤＮＡ技術を介して生産されたポリペプチドまたはタンパク質を指す。操作された宿主細胞で発現される組み換え生産されたポリペプチド及びタンパク質は、任意の好適な技術によって分離、分画、または部分的もしくは実質的に精製されたネイティブまたは組み換えポリペプチドと同様に、本開示の目的において、単離されているものとみなされる。本明細書で開示されるポリペプチドは、当該技術分野において知られている方法を使用して組み換え的に産生することができる。あるいは、本明細書で開示されるタンパク質及びペプチドは、化学的に合成することができる。本開示のいくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームに存在するスカフォールドＸ及び／またはスカフォールドＹタンパク質は、産生細胞においてスカフォールドタンパク質を過剰発現させることによって組み換え生産され、それにより、得られるＥＶ、例えば、エクソソームのスカフォールドタンパク質のレベルは、かかるスカフォールドタンパク質を過剰発現しない産生細胞のＥＶ、例えば、エクソソームに存在するスカフォールドタンパク質のレベルと比べて、有意に増加する。
本明細書で使用される場合、「スカフォールド部分」という用語は、ペイロード、例えば、生物学的に活性な分子を、ＥＶ、例えば、エクソソームに、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面上または外部表面上のいずれかで係留するために使用することができる分子、例えば、スカフォールドＸまたはスカフォールドＹなどのタンパク質を指す。ある特定の態様において、スカフォールド部分は、合成分子を含む。いくつかの態様において、スカフォールド部分は、非ポリペプチド部分を含む。他の態様において、スカフォールド部分は、例えば、ＥＶ、例えば、エクソソームに天然に存在する脂質、炭水化物、タンパク質、またはこれらの組み合わせ（例えば、糖タンパク質またはプロテオリピド）を含む。いくつかの態様において、スカフォールド部分は、ＥＶ、例えば、エクソソームに天然に存在しない脂質、炭水化物、またはタンパク質を含む。いくつかの態様において、スカフォールド部分は、ＥＶ、例えば、エクソソームに天然に存在するが、基本的／ネイティブ／野生型のレベルと比べて、ＥＶ、例えば、エクソソームにおいて濃縮されている、脂質または炭水化物を含む。いくつかの態様において、スカフォールド部分は、ＥＶ、例えば、エクソソームに天然に存在するが、例えば、産生細胞での組み換え過剰発現によって、基本的／ネイティブ／野生型のレベルと比べて、ＥＶ、例えば、エクソソームにおいて濃縮されている、タンパク質を含む。ある特定の態様において、スカフォールド部分は、スカフォールドＸである。いくつかの態様において、スカフォールド部分は、スカフォールドＹである。更なる態様において、スカフォールド部分は、スカフォールドＸとスカフォールドＹの両方を含む。
本明細書で使用される場合、「スカフォールドＸ」という用語は、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面上で同定されたＥＶ、例えば、エクソソームのタンパク質を指す。例えば、米国特許第１０，１９５，２９０号を参照されたく、その全体は、参照により本明細書に援用される。スカフォールドＸタンパク質の非限定的な例としては、プロスタグランジンＦ２受容体の負の調節因子（「ＰＴＧＦＲＮ」）；ベイシジン（「ＢＳＧ」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（「ＩＧＳＦ２」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（「ＩＧＳＦ３」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（「ＩＧＳＦ８」）；インテグリンベータ－１（「ＩＴＧＢ１」）；インテグリンアルファ－４（「ＩＴＧＡ４」）；４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（「ＳＬＣ３Ａ２」）；及びＡＴＰ輸送タンパク質のクラス（「ＡＴＰ１Ａ１」、「ＡＴＰ１Ａ２」、「ＡＴＰ１Ａ３」、「ＡＴＰ１Ａ４」、「ＡＴＰ１Ｂ３」、「ＡＴＰ２Ｂ１」、「ＡＴＰ２Ｂ２」、「ＡＴＰ２Ｂ３」、「ＡＴＰ２Ｂ」）が挙げられる。いくつかの態様において、スカフォールドＸタンパク質は、全タンパク質またはその断片（例えば、機能性断片、例えば、別の部分を、ＥＶ、例えば、エクソソームの外部表面上または内腔表面上に係留することが可能な最小断片）であり得る。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、生物学的に活性な分子を、ＥＶ、例えば、エクソソームの外部表面または内腔に係留することができる。本開示のいくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、スカフォールドＸに、マレイミド部分を介して共有結合的に結合され得る。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、スカフォールドＸに、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面上のマレイミド部分を介して結合され得る。本開示とともに使用することができる他のスカフォールド部分の非限定的な例としては、アミノペプチダーゼＮ（ＣＤ１３）；ネプリライシン、別名膜メタロエンドペプチダーゼ（ＭＭＥ）；エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー１（ＥＮＰＰ１）；ニューロピリン－１（ＮＲＰ１）；ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「スカフォールドＹ」という用語は、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔内で同定されたＥＶ、例えば、エクソソームのタンパク質を指す。例えば、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０６１６７９号を参照されたく、その全体は、参照により本明細書に援用される。スカフォールドＹタンパク質の非限定的な例としては、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（「ＭＡＲＣＫＳ」）；ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（「ＭＡＲＣＫＳＬ１」）；及び脳酸可溶性タンパク質１（「ＢＡＳＰ１」）が挙げられる。いくつかの態様において、スカフォールドＹタンパク質は、全タンパク質またはその断片（例えば、機能性断片、例えば、ある部分を、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面上に係留することが可能な最小断片）であり得る。いくつかの態様において、スカフォールドＹは、ある部分を、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面に係留することができる。本開示のいくつかの態様において、部分は、スカフォールドＹに共有結合的に結合され得る。いくつかの態様において、部分は、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面上のスカフォールドＹに結合され得る。
本明細書で使用される「自己崩壊性スペーサー」という用語は、第１の部分（例えば、切断可能なリンカー）への結合が切断された場合、第２の部分（例えば、生物学的に活性な分子）から自然発生的に分離する以下に定義されるスペーサーを指す。
本明細書で使用される場合、「類似性」という用語は、高分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関係性を指す。高分子の互いの類似性パーセントの算出は、同一性パーセントの算出と同様の方式で実施することができ、ただし、類似性パーセントの算出は、当該技術分野において理解されているように、保存的置換が考慮される。類似性のパーセンテージは、使用される比較尺度、すなわち、アミノ酸が、例えば、進化的近接性、電荷、体積、柔軟性、極性、疎水性、芳香性、等電点、抗原性、またはこれらの組み合わせに従って比較されるかどうかに依存することを理解されたい。
本明細書で使用される「スペーサー」という用語は、間隔を置いた２つの部分（例えば、切断可能なリンカー及び生物学的に活性な分子）を共有結合的に連結させ、通常安定な異なる分子にすることが可能な二官能性化学部分を指す。
特に指定のない限り、１つ以上の立体中心を有する化合物への言及は、各立体異性体、及びその立体異性体の全ての組み合わせを意図する。
「対象」、「患者」、「個体」、及び「宿主」という用語、ならびにその変化形は、本明細書中で区別なく使用され、限定するものではないが、診断、治療、または療法が所望される、ヒト、家庭用動物（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）、及び実験動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなど）、特にヒトを含む、任意の哺乳動物対象を指す。本明細書に記載される方法は、ヒトの療法及び獣医学的用途の両方に適用可能である。
本明細書で使用される場合、「実質的に含まない」という用語は、ＥＶ、例えば、エクソソームを含む試料が、質量／体積（ｍ／ｖ）パーセンテージ濃度で１０％未満の巨大分子、例えば、夾雑物を含むことを意味する。一部の画分は、０．００１％未満、０．０１％未満、０．０５％未満、０．１％未満、０．２％未満、０．３％未満、０．４％未満、０．５％未満、０．６％未満、０．７％未満、０．８％未満、０．９％未満、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、６％未満、７％未満、８％未満、９％未満、または１０％（ｍ／ｖ）未満の巨大分子を含有し得る。
本明細書で使用される場合、「表面操作されたＥＶ」（例えば、スカフォールドＸが操作されたエクソソーム）という用語は、ＥＶの膜または表面がその組成において改変されており、それにより、操作されたＥＶの表面は、改変前のＥＶまたは天然に生じるＥＶのものとは異なる、ＥＶを指す。
本明細書で使用される場合、「表面操作されたエクソソーム」（例えば、スカフォールドＸが操作されたエクソソーム）という用語は、エクソソームの膜または表面（外部表面または内腔表面）がその組成において改変されており、それにより、操作されたエクソソームの表面は、改変前のエクソソームまたは天然に生じるエクソソームのものとは異なる、エクソソームを指す。
操作することは、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面上、またはＥＶ、例えば、エクソソームの膜になされ得、それにより、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面が変化する。例えば、膜は、その組成において、例えば、タンパク質、脂質、小分子、炭水化物、またはこれらの組み合わせが改変され得る。組成は、化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって、または化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって予めもしくは同時に改変された細胞から産生されることによって、変更され得る。具体的には、組成は、遺伝子操作によって、または遺伝子操作によって予め改変された細胞から産生されることによって、変更することができる。いくつかの態様において、表面操作されたＥＶ、例えば、エクソソームは、外因性タンパク質（すなわち、ＥＶ、例えば、エクソソームが天然に発現しないタンパク質）またはその断片もしくはバリアントを含み、これは、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面に露出することができるか、あるいは、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面上に露出する部分のアンカリング点（結合）となることができる。他の態様において、表面操作されたＥＶ、例えば、エクソソームは、より高い発現（例えば、大きい数）の天然ＥＶ、例えば、エクソソームタンパク質（例えば、スカフォールドＸ）またはその断片もしくはバリアントを含み、これは、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面に露出することができるか、あるいは、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面上に露出する部分のアンカリング点（結合）となることができる。具体的な態様において、表面操作されたＥＶ、例えば、エクソソームは、１つ以上の膜構成成分、例えば、スカフォールドＸなどのタンパク質、脂質、小分子、炭水化物、またはこれらの組み合わせの改変を含み、ここで、構成成分のうちの少なくとも１つは、生物学的に活性な分子に、マレイミド部分を介して共有結合的に結合され得る。
本明細書で使用される場合、「治療上有効な量」という用語は、所望の治療効果、薬理学的及び／または生理学的効果を、それを必要とする対象に対してもたらすのに十分である、試薬または本開示のＥＶもしくはエクソソームを含む医薬化合物の量である。治療上有効な量は、予防法が療法とみなされ得るような「予防上有効な量」であり得る。
「治療する」、「治療」、または「治療すること」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、疾患または状態の重症度の低減；疾患過程の継続期間の短縮；疾患または状態に関連する１つ以上の症状の改善または排除；疾患または状態の治癒を必ずしも伴わない、疾患または状態を有する対象への有益な効果の提供を指す。この用語はまた、疾患もしくは状態またはその症状の予防法または予防も含む。一態様において、「治療すること」または「治療」という用語は、対象において、抗原に対する免疫応答を誘導することを意味する。
本明細書で使用される場合、分子（例えば、機能性分子、抗原、またはスカフォールドＸ及び／またはスカフォールドＹ）の「バリアント」という用語は、当該技術分野において知られている方法によって比較した際に、特定の構造的及び機能的同一性を別の分子と共有する分子を指す。例えば、タンパク質のバリアントは、別のタンパク質における置換、挿入、欠失、フレームシフト、または再構成を含み得る。
いくつかの態様において、スカフォールドＸまたは誘導体のバリアントは、完全長の成熟ＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、もしくはＡＴＰ輸送タンパク質またはＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、もしくはＡＴＰ輸送タンパク質の断片（例えば、機能性断片）に対して、少なくとも約７０％の同一性を有するスカフォールドＸのバリアントを含む。
いくつかの態様において、本明細書で開示されるスカフォールドＸタンパク質のバリアントもしくは断片のバリアント、またはその誘導体は、ＥＶ、例えば、エクソソームへの特異的な標的化能力を保持している。いくつかの態様において、スカフォールドＸまたはスカフォールドＸの誘導体は、１つ以上の変異、例えば、保存的アミノ酸置換を含む。
いくつかの態様において、スカフォールドＹのバリアントまたはその誘導体は、ＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＲＣＫＳＬ１、ＢＡＳＰ１、またはＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＲＣＫＳＬ１、もしくはＢＡＳＰ１の断片に対して、少なくとも７０％の同一性を有するバリアントを含む。
いくつかの態様において、スカフォールドＹタンパク質のバリアントもしくは断片のバリアント、またはその誘導体は、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面への特異的な標的化能力を保持している。いくつかの態様において、スカフォールドＹは、１つ以上の変異、例えば、保存的アミノ酸置換を含む。
天然に生じるバリアントは、「アレルバリアント」と呼ばれ、生物の染色体上の所要の遺伝子座を占める遺伝子のいくつかの代替形態のうちの１つを指す（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ，Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらのアレルバリアントは、ポリヌクレオチドのレベル及び／またはポリペプチドのレベルのいずれかで異なり得、本開示に含まれる。あるいは、非天然バリアントは、変異導入技術によって、または直接合成によって、生産することができる。
タンパク質操作及び組み換えＤＮＡ技術の既知の方法を使用して、バリアントを生成することができ、ポリペプチドの特徴を改善または変えることができる。例えば、生物学的機能の実質的な喪失を伴わずに、分泌されたタンパク質のＮ末端またはＣ末端から１つ以上のアミノ酸を欠失させることができる。Ｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４－２９８８（１９９３）（その全体が参照により本明細書に援用される）は、３、８、または２７のアミノ末端アミノ酸残基を欠失させた後であっても、ヘパリン結合活性を有するバリアントＫＧＦタンパク質について報告している。同様に、インターフェロンガンマは、このタンパク質のカルボキシ末端から８～１０個のアミノ酸残基を欠失させた後、最大１０倍高い活性を示した。（Ｄｏｂｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９－２１６（１９８８）；その全体が参照により本明細書に援用される）。
更に、バリアントは、多くの場合、天然に生じるタンパク質の生物学的活性と類似の生物学的活性を保持することが十分な証拠によって証明されている。例えば、Ｇａｙｌｅ及び共同研究者（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５－２２１１１（１９９３）（その全体が参照により本明細書に援用される）は、ヒトサイトカインＩＬ－１ａについて、広範な変異解析を実施した。研究者らは、ランダム変異導入を使用して、３，５００を超える個々のＩＬ－１ａ変異体を生成し、分子の全長にわたってバリアントあたり平均２．５個のアミノ酸を変化させた。可能な限りのアミノ酸位置毎で複数の変異が調査された。研究者らは、「分子の（大部分）を変えても（結合または生物学的活性の）いずれにもほとんど影響することがない」ことを発見した（要約を参照）。実際、調査された３，５００を超えるヌクレオチド配列のうち、野生型とは活性が有意に異なるタンパク質を生成したのは、２３の固有のアミノ酸配列のみであった。
上述されるように、バリアントまたは誘導体には、例えば、修飾ポリペプチドが含まれる。いくつかの態様において、例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖タンパク質のバリアントまたは誘導体は、化学修飾及び／または内因性修飾の結果である。いくつかの態様において、バリアントまたは誘導体は、ｉｎ ｖｉｖｏ修飾の結果である。いくつかの態様において、バリアントまたは誘導体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ修飾の結果である。更なる他の態様において、バリアントまたは誘導体は、産生細胞の細胞内修飾の結果である。
バリアント及び誘導体に存在する修飾には、例えば、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合性架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ－カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化（Ｍｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１６：２７０－７９（２０１０）、その全体が参照により本明細書に援用される）、タンパク質分解プロセス、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化などのタンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介付加、及びユビキチン化が含まれる。
いくつかの態様において、スカフォールドＸ及び／またはスカフォールドＹは、任意の簡便な位置で改変され得る。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、任意の簡便な位置で改変され得る。本開示の特定の態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームの構成成分（例えば、スカフォールドＸ及び／またはスカフォールドＹなどのタンパク質、脂質、またはグリカン）及び／または生物学的に活性な分子（例えば、抗体またはＡＤＣ、ＰＲＯＴＡＣ、環状ジヌクレオチドなどの小分子、ＭＭＡＥなどの毒素、ＳＴＩＮＧアゴニスト、寛容剤、またはアンチセンスオリゴヌクレオチド）は、少なくとも１つのマレイミド部分を含む誘導体をもたらすために改変され得る。
ＩＩ．本開示のコンジュゲートＥＶ（例えば、エクソソーム）
細胞外小胞（ＥＶ）は、典型的に直径２０ｎｍ～１０００ｎｍを有し、例えば、小さな細胞外小胞であるエクソソームは、典型的に直径１００～２００ｎｍを有する。ＥＶ、例えば、エクソソームは、境界の脂質二重層と、多様なタンパク質及び核酸のセットで構成される（Ｍａａｓ，Ｓ．Ｌ．Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２７（３）：１７２－１８８（２０１７））。ＥＶ、例えば、エクソソームは、個々の細胞型及び組織に優先的に取り込まれ、その指向性は、その表面に、標的細胞の表面上の受容体と相互作用するタンパク質を付加することによって誘導することができる（Ａｌｖａｒｅｚ－Ｅｒｖｉｔｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２９（４）：３４１－３４５（２０１１））。
抗体とは異なり、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）あたり数千から数万という分子の量で、その表面に結合した多数の分子を収容することができる。そのため、ＥＶ（例えば、エクソソーム）薬物複合体は、高濃度の治療用化合物を個々の細胞型に送達するのと同時に、化合物の全身への曝露を制限し、それにより、オフターゲット毒性を低減するプラットフォームとなる。
いくつかの態様において、本開示は、１つ以上のアンカリング部分を、直接的または間接的のいずれかで、例えば、１つ以上のリンカー組み合わせを介して、「生物学的に活性な分子」（ＢＡＭ）、例えば、ＡＳＯに、例えば、共有結合的に結合することによって改変されたＢＡＭ、例えば、ＡＳＯを含む、「改変された生物学的に活性な分子」（ＭＢＡＭ）、例えば、ＡＳＯを提供する。本明細書で開示される改変されたＢＡＭは、以下に概略的に示されるように、「アンカリング部分」（ＡＭ）と、ＡＭをＢＡＭに接続する任意選択の１つ以上のリンカー（「リンカー組み合わせ」）とを含み得る。
［ＡＭ］－［リンカー］ｎ－［ＢＡＭ］
（式中、ｎは、０～１０の間の整数である。）
ＢＡＭは、「反応性基」（ＲＧ；例えば、アミン、チオール、ヒドロキシ、カルボン酸、またはアジド）と「反応性部分」（ＲＭ；例えば、マレイミド、コハク酸、ＮＨＳ）との間の反応を介して、アンカリング部分またはリンカー組み合わせに結合することができる。例えば、可能な合成ルートがいくつか想定される：
［ＡＭ］－／反応性部分／＋／反応性基／－［ＢＡＭ］
［ＡＭ］－［リンカー］ｎ－／反応性部分／＋／反応性基／－［ＢＡＭ］
［ＡＭ］－／反応性部分／＋／反応性基／－［リンカー］ｎ－［ＢＡＭ］
［ＡＭ］－［リンカー］ｎ－／反応性部分／＋／反応性基／－［リンカー］ｎ－［ＢＡＭ］
アンカリング部分は、ＥＶ、例えば、エクソソームの脂質二重層に挿入することができ、これにより、ＢＡＭ、例えば、ＡＳＯをエクソソームにローディングすることが可能となる。現在、極性ＢＡＭ、例えば、ＡＳＯの送達ビヒクルとしてエクソソームを実用化する際の主な障害は、ローディングが極めて非効率であることである。この障害は、ＢＡＭ、例えば、ＡＳＯをエクソソームにローディングする前に、改変することによって克服することができる。このように、本明細書に記載されるように、ＢＡＭ、例えば、ＡＳＯの改変は、エクソソームへのローディングを容易にする。
本明細書に記載される改変されたＢＡＭ、例えば、ＡＳＯをエクソソームにローディングする方法は、例えば、エレクトロポレーションまたはカチオン性脂質トランスフェクションによって、未改変ＢＡＭをエクソソームに導入するのにこれまで報告されたローディング効率と比較して、そのローディング効率を有意に改善する。
いくつかの態様において、改変は、ＢＡＭ、例えば、ＡＳＯの疎水性を、ネイティブ（未改変）ＢＡＭ、例えば、対応する未改変ＡＳＯと比べて、少なくとも約１、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、または少なくとも約１０倍増加させる。いくつかの態様において、改変は、ＢＡＭ、例えば、ＡＳＯの疎水性を、ネイティブ（未改変）ＢＡＭ、例えば、対応する未改変ＡＳＯと比べて、少なくとも約１、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、または少なくとも約１０桁増加させる。
いくつかの態様において、改変は、ＢＡＭ、例えば、ＡＳＯの疎水性を、ネイティブ（未改変）ＢＡＭ、例えば、対応する未改変ＡＳＯと比べて、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１２５％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１７５％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約３００％、少なくとも約３５０％、少なくとも約４００％、少なくとも約４５０％、少なくとも約５００％、少なくとも約６００％、少なくとも約７００％、少なくとも約８００％、少なくとも約９００％、または少なくとも約１０００％増加させる。疎水性の増加は、任意の好適な方法を使用して評価することができる。例えば、疎水性は、水などの水性溶媒中での溶解度と比較して、オクタノールなどの有機溶媒での溶解度のパーセンテージを測定することによって決定することができる。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、ＢＡＭ、例えば、ＡＳＯに化学的にコンジュゲートして、その疎水性の特徴を増大させることができる。例示的な態様において、アンカリング部分は、ステロール（例えば、コレステロール）、ＧＭ１、脂質、ビタミン、小分子、ペプチド、またはこれらの組み合わせである。いくつかの態様において、当該部分は、脂質である。いくつかの態様において、アンカリング部分は、ステロール、例えば、コレステロールである。追加の部分としては、例えば、リン脂質、リゾリン脂質、脂肪酸、またはビタミン（例えば、ビタミンＤまたはビタミンＥ）が挙げられる。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、直接的または１つ以上のリンカーを介してのいずれかで、ＢＡＭ、例えば、ＡＳＯの末端にコンジュゲートされる（すなわち、「末端改変」）。他の態様において、アンカリング部分は、ＢＭ、例えば、ＡＳＯの他の部分にコンジュゲートされる。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、約１０～約３０、例えば、１０～２０、１４～２０、１６～２０、または１５～２５のヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。ある特定の態様において、ＡＳＯは、２０ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、１８ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、１９ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、１７ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、１６ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、１５ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、１４ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、１３ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、１２ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、１１ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、１０ヌクレオチド長である。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、約１０～約５０、例えば、約１０～約４５、約１０～約４０、約１０または約３５、または約１０～約３０のヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。ある特定の態様において、ＡＳＯは、２１ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、２２ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、２３ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、２４ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、２５ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、２６ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、２７ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、２８ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、２９ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、３０ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、３１ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、３２ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、３３ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、３４ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、３５ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、３６ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、３７ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、３８ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、３９ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、４０ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、４１ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、４２ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、４３ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、４４ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、４５ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、４６ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、４７ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、４８ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、４９ヌクレオチド長である。ある特定の態様において、ＡＳＯは、５０ヌクレオチド長である。
いくつかの態様において、改変されたＢＡＭ、例えば、ＡＳＯは、検出可能な標識を含み得る。例示的な標識としては、蛍光標識及び／または放射性標識が挙げられる。いくつかの態様において、改変されたＢＡＭ、例えば、ＡＳＯが蛍光標識される場合、検出可能な標識は、例えば、Ｃｙ３であり得る。改変されたＢＡＭ、例えば、ＡＳＯに検出可能な標識を付加することは、エクソソームを標識化し、それらの生体内分布を追跡する方法として使用することができる。他の態様において、検出可能な標識は、例えば、エクソソーム脂質及び／またはエクソソームペプチドを標識することによって、エクソソームに直接結合することができる。
改変されたＢＡＭの異なる構成成分（すなわち、アンカリング部分、リンカー及びリンカー組み合わせ、ならびにＡＳＯなどのＢＡＭ）は、アミド、エステル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、ホスホロアミデート、ホスホトリエステル、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、ホスホジエステル、またはホスホロチオエート連結、あるいは、任意のまたは他の連結によって、連結することができる。
いくつかの態様において、改変されたＢＡＭの異なる構成成分は、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート、Ｎ－４－マレイミド酪酸、Ｓ－（２－ピリジルジチオ）システアミン、ヨードアセトキシスクシンイミド、Ｎ－（４－マレイミドブチルオキシ）スクシンイミド、Ｎ－［５－（３’－マレイミドプロピルアミド）－１－カルボキシペンチル］イミノジ酢酸、Ｎ－（５－アミノペンチル）－イミノジ酢酸などの二官能性リンカー（すなわち、２つの官能基を含有するリンカー）を使用するリンカーであり得る。
ＩＩ．Ａ．アンカリング部分
ＥＶ、例えば、エクソソームの表面にＢＡＭを係留することが可能な好適なアンカリング部分には、以下に詳述されるように、例えば、ステロール（例えば、コレステロール）、脂質、リゾリン脂質、脂肪酸、または脂溶性ビタミンが含まれる。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、脂質であり得る。脂質アンカリング部分は、当該技術分野において知られている任意の脂質、例えば、パルミチン酸またはグリコシルホスファチジルイノシトールであり得る。いくつかの態様において、脂質は、脂肪酸、ホスファチド、リン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、またはホスファチジルエタノールアミン）、またはその類似体（例えば、ホファチジルコリン、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、ケファリン、またはホスファチジルセリンまたはその類似体もしくは部分、例えば、その部分的に加水分解された部分）である。
一般に、アンカリング部分は、化学的に結合される。しかしながら、アンカリング部分は、ＢＡＭに酵素的に結合することができる。いくつかの態様において、細胞培養条件の改変を介して、アンカリング部分をＢＡＭに結合することが可能である。例えば、ミリスチン酸が制限されている培地を使用することによって、短鎖及び不飽和を含む、いくつかの他の脂肪酸をＮ末端のグリシンに結合することができる。例えば、ＢＫチャネルでは、ミリスチン酸がヒドロキシエステル連結を介して内部のセリン／トレオニンまたはチロシン残基に翻訳後に結合することが報告されている。
アンカリング部分は、任意の化学的に実行可能な位置、例えば、ヌクレオチド配列、例えば、ＡＳＯの５’及び／または３’末端で、直接的またはリンカー組み合わせを介して間接的に、ＢＡＭにコンジュゲートすることができる。一態様において、アンカリング部分は、ＢＡＭの３’末端にのみコンジュゲートされる。一態様において、アンカリング部分は、ヌクレオチド配列、例えば、ＡＳＯの５’末端にのみコンジュゲートされる。一態様において、アンカリング部分は、ヌクレオチド配列、例えば、ＡＳＯの３’末端または５’末端ではない位置にコンジュゲートされる。
本開示の方法の実施に使用することができる膜アンカーのいくつかの種類は、以下の表に表される。
Figure 2022550248000006
いくつかの態様において、本開示のアンカリング部分は、本明細書で開示される２つ以上の種類のアンカリング部分を含むことができる。例えば、いくつかの態様において、アンカリング部分は、２つの脂質、例えば、リン脂質及び脂肪酸、または２つのリン脂質、または２つの脂肪酸、または脂質及びビタミン、またはコレステロール及びビタミンなどを含み得、一緒になって、６～８０個の炭素原子（すなわち、６～８０の等価炭素数（ＥＣＮ））を含み得る。
いくつかの態様において、アンカリング部分の組み合わせ、例えば、脂質（例えば、脂肪酸）の組み合わせは、６～８０、８～８０、１０～８０、１２～８０、１４～８０、１６～８０、１８～８０、２０～８０、２２～８０、２４～８０、２６～８０、２８～８０、３０～８０、４～７６、６～７６、８～７６、１０～７６、１２～７６、１４～７６、１６～７６、１８～７６、２０～７６、２２～７６、２４～７６、２６～７６、２８～７６、３０～７６、６～７２、８～７２、１０～７２、１２～７２、１４～７２、１６～７２、１８～７２、２０～７２、２２～７２、２４～７２、２６～７２、２８～７２、３０～７２、６～６８、８～６８、１０～６８、１２～６８、１４～６８、１６～６８、１８～６８、２０～６８、２２～６８、２４～６８、２６～６８、２８～６８、３０～６８、６～６４、８～６４、１０～６４、１２～６４、１４～６４、１６～６４、１８～６４、２０～６４、２２～６４、２４～６４、２６～６４、２８～６４、３０～６４、６～６０、８～６０、１０～６０、１２～５６、１４～５６、１６～５６、１８～５６、２０～５６、２２～５６、２４～５６、２６～５６、２８～５６、３０～５６、６～５２、８～５２、１０～５２、１２～５２、１４～５２、１６～５２、１８～５２、２０～５２、２２～５２、２４～５２、２６～５２、２８～５２、３０～５２、６～４８、８～４８、１０～４８、１２～４８、１４～４８、１６～４８、１８～４８、２０～４８、２２～４８、２４～４８、２６～４８、２８～４８、３０～４８、６～４４、８～４４、１０～４４、１２～４４、１４～４４、１６～４４、１８～４４、２０～４４、２２～４４、２４～４４、２６～４４、２８～４４、３０～４４、６～４０、８～４０、１０～４０、１２～４０、１４～４０、１６～４０、１８～４０、２０～４０、２２～４０、２４～４０、２６～４０、２８～４０、３０～４０、６～３６、８～３６、１０～３６、１２～３６、１４～３６、１６～３６、１８～３６、２０～３６、２２～３６、２４～３６、２６～３６、２８～３６、３０～３６、６～３２、８～３２、１０～３２、１２～３２、１４～３２、１６～３２、１８～３２、２０～３２、２２～３２、２４～３２、２６～３２、２８～３２、または３０～３２のＥＣＮを有する。
ＩＩ．Ａ．１コレステロール及び他のステロール
いくつかの態様において、アンカリング部分は、親油性を有するステロール、ステロイド、ホパノイド、ヒドロキシステロイド、セコステロイド、またはその類似体を含む。いくつかの態様において、アンカリング部分は、フィトステロール、マイコステロール、または動物ステロールなどのステロールを含む。例示的な動物ステロールとしては、コレステロール及び２４Ｓ－ヒドロキシコレステロールが挙げられ、例示的なフィトステロールとしては、エルゴステロール（マイコステロール）、カンペステロール、シトステロール、及びスチグマステロールが挙げられる。いくつかの態様において、ステロールは、エルゴステロール、７－デヒドロコレステロール、コレステロール、２４Ｓ－ヒドロキシコレステロール、ラノステロール、シクロアルテノール、フコステロール、サリンゴステロール、カンペステロール、β－シトステロール、シトスタノール、コプロスタノール、アベナステロール、またはスチグマステロールから選択される。ステロールは、遊離ステロール、アシル化（ステロールエステル）、アルキル化（ステリルアルキルエーテル）、硫酸化（ステロール硫酸）、またはグリコシド部分への連結（ステリルグリコシド）（これは、それ自体がアシル化されていてもよい（アシル化ステロールグリコシド））のいずれかで見出され得る。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、ステロイドを含む。いくつかの態様において、ステロイドは、ジヒドロテストステロン、ウバオール、ヘチゲニン、ジオスゲニン、プロゲステロン、またはコルチゾールから選択される。
例えば、ステロールは、直接的またはリンカー組み合わせを介して、ステロールの利用可能な－ＯＨ基でＢＡＭにコンジュゲートされ得る。例示的なステロールは、以下に示される一般骨格を有する。
Figure 2022550248000007
更なる例として、エルゴステロールは、以下の構造を有する。
Figure 2022550248000008
コレステロールは、以下の構造を有する。
Figure 2022550248000009
したがって、いくつかの態様において、ステロールまたはステロイドの遊離－ＯＨ基は、ＡＳＯを直接的またはリンカー組み合わせを介してステロール（例えば、コレステロール）またはステロイドにコンジュゲートするために使用される。
ＩＩ．Ａ．２．脂肪酸
いくつかの態様において、アンカリング部分は、脂肪酸である。いくつかの態様において、脂肪酸は、短鎖、中鎖、長鎖脂肪酸である。いくつかの態様において、脂肪酸は、飽和脂肪酸である。いくつかの態様において、脂肪酸は、不飽和脂肪酸である。いくつかの態様において、脂肪酸は、一価不飽和脂肪酸である。いくつかの態様において、脂肪酸は、ω－３（オメガ－３）またはω－６（オメガ－６）脂肪酸などの多価不飽和脂肪酸である。
いくつかの態様において、脂質、例えば、脂肪酸、は、Ｃ２－Ｃ６０鎖を有する。いくつかの態様において、脂質、例えば、脂肪酸、は、Ｃ２－Ｃ２８鎖を有する。いくつかの態様において、脂肪酸は、Ｃ２－Ｃ４０鎖を有する。いくつかの態様において、脂肪酸は、Ｃ２－Ｃ１２またはＣ４－Ｃ１２鎖を有する。いくつかの態様において、脂肪酸は、Ｃ４－Ｃ４０鎖を有する。いくつかの態様において、脂肪酸は、Ｃ４－Ｃ４０、Ｃ２－Ｃ３８、Ｃ２－Ｃ３６、Ｃ２－Ｃ３４、Ｃ２－Ｃ３２、Ｃ２－Ｃ３０、Ｃ４－Ｃ３０、Ｃ２－Ｃ２８、Ｃ４－Ｃ２８、Ｃ２－Ｃ２６、Ｃ４－Ｃ２６、Ｃ２－Ｃ２４、Ｃ４－Ｃ２４、Ｃ６－Ｃ２４、Ｃ８－Ｃ２４、Ｃ１０－Ｃ２４、Ｃ２－Ｃ２２、Ｃ４－Ｃ２２、Ｃ６－Ｃ２２、Ｃ８－Ｃ２２、Ｃ１０－Ｃ２２、Ｃ２－Ｃ２０、Ｃ４－Ｃ２０、Ｃ６－Ｃ２０、Ｃ８－Ｃ２０、Ｃ１０－Ｃ２０、Ｃ２－Ｃ１８、Ｃ４－Ｃ１８、Ｃ６－Ｃ１８、Ｃ８－Ｃ１８、Ｃ１０－Ｃ１８、Ｃ１２－Ｃ１８、Ｃ１４－Ｃ１８、Ｃ１６－Ｃ１８、Ｃ２－Ｃ１６、Ｃ４－Ｃ１６、Ｃ６－Ｃ１６、Ｃ８－Ｃ１６、Ｃ１０－Ｃ１６、Ｃ１２－Ｃ１６、Ｃ１４－Ｃ１６、Ｃ２－Ｃ１５、Ｃ４－Ｃ１５、Ｃ６－Ｃ１５、Ｃ８－Ｃ１５、Ｃ９－Ｃ１５、Ｃ１０－Ｃ１５、Ｃ１１－Ｃ１５、Ｃ１２－Ｃ１５、Ｃ１３－Ｃ１５、Ｃ２－Ｃ１４、Ｃ４－Ｃ１４、Ｃ６－Ｃ１４、Ｃ８－Ｃ１４、Ｃ９－Ｃ１４、Ｃ１０－Ｃ１４、Ｃ１１－Ｃ１４、Ｃ１２－Ｃ１４、Ｃ２－Ｃ１３、Ｃ４－Ｃ１３、Ｃ６－Ｃ１３、Ｃ７－Ｃ１３、Ｃ８－Ｃ１３、Ｃ９－Ｃ１３、Ｃ１０－Ｃ１３、Ｃ１０－Ｃ１３、Ｃ１１－Ｃ１３、Ｃ２－Ｃ１２、Ｃ４－Ｃ１２、Ｃ６－Ｃ１２、Ｃ７－Ｃ１２、Ｃ８－Ｃ１２、Ｃ９－Ｃ１２、Ｃ１０－Ｃ１２、Ｃ２－Ｃ１１、Ｃ４－Ｃ１１、Ｃ６－Ｃ１１、Ｃ７－Ｃ１１、Ｃ８－Ｃ１１、Ｃ９－Ｃ１１、Ｃ２－Ｃ１０、Ｃ４－Ｃ１０、Ｃ２－Ｃ９、Ｃ４－Ｃ９、Ｃ２－Ｃ８、Ｃ２－Ｃ７、Ｃ４－Ｃ７、Ｃ２－Ｃ６、またはＣ４－Ｃ６の鎖を有する。いくつかの態様において、脂肪酸、は、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ２１、Ｃ２２、Ｃ２３、Ｃ２４、Ｃ２５、Ｃ２６、Ｃ２７、Ｃ２８、Ｃ２９、Ｃ３０、Ｃ３１、Ｃ３２、Ｃ３３、Ｃ３４、Ｃ３５、Ｃ３６、Ｃ３７、Ｃ３８、Ｃ３９、Ｃ４０、Ｃ４１、Ｃ４２、Ｃ４３、Ｃ４４、Ｃ４５、Ｃ４６、Ｃ４７、Ｃ４８、Ｃ４９、Ｃ５０、Ｃ５１、Ｃ５２、Ｃ５３、Ｃ５４、Ｃ５５、Ｃ５６、Ｃ５７、Ｃ５８、Ｃ５９、またはＣ６０の鎖を有する。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、２つの脂肪酸を含み、そのそれぞれは、前述の範囲または数の炭素原子のいずれか１つを有する鎖を有する脂肪酸から独立して選択される。いくつかの態様において、脂肪酸の１つは、独立して、Ｃ６－Ｃ２１鎖の脂肪酸であり、１つは、独立して、Ｃ１２－Ｃ３６鎖の脂肪酸である。いくつかの態様において、各脂肪酸は、独立して、１１、１２、１３、１４、１５、１６、または１７個の炭素原子の鎖を有する。
好適な脂肪酸には、飽和直鎖脂肪酸、飽和分枝脂肪酸、不飽和脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸、及びポリカルボン酸が含まれる。いくつかの態様において、そのような脂肪酸は、最大３２個の炭素原子を有する。
有用な飽和直鎖脂肪酸の例としては、偶数の炭素原子を有するもの、例えば、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、ヘキサコサン酸、オクタコサン酸、トリアコンタン酸及びｎ－ドトリアコンタン酸、ならびに奇数の炭素原子を有するもの、例えば、プロピオン酸、ｎ－吉草酸、エナント酸、ペラルゴン酸、ヘンデカン酸、トリデカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカン酸、ヘンエイコサン酸、トリコサン酸、ペンタコサン酸及びヘプタコサン酸が挙げられる。
好適な飽和分枝脂肪酸の例としては、イソ酪酸、イソカプロン酸、イソカプリル酸、イソカプリン酸、イソラウリン酸、１１－メチルドデカン酸、イソミリスチン酸、１３－メチル－テトラデカン酸、イソパルミチン酸、１５－メチル－ヘキサデカン酸、イソステアリン酸、１７－メチルオクタデカン酸、イソアラキン酸、１９－メチル－エイコサン酸、α－エチル－ヘキサン酸、α－ヘキシルデカン酸、α－ヘプチルウンデカン酸、２－デシルテトラデカン酸、２－ウンデシルテトラデカン酸、２－デシルペンタデカン酸、２－ウンデシルペンタデカン酸、及びファインオキソコール１８００酸（Ｎｉｓｓａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｌｔｄ．の製品）が挙げられる。好適な奇数炭素数の飽和分枝脂肪酸には、イソブチル基で終端するアンテイソ脂肪酸、例えば、６－メチル－オクタン酸、８－メチル－デカン酸、１０－メチル－ドデカン酸、１２－メチル－テトラデカン酸、１４－メチル－ヘキサデカン酸、１６－メチル－オクタデカン酸、１８－メチル－エイコサン酸、２０－メチル－ドコサン酸、２２－メチル－テトラコサン酸、２４－メチル－ヘキサコサン酸、及び２６－メチルオクタコサン酸が挙げられる。
好適な不飽和脂肪酸の例としては、４－デセン酸、カプロレイン酸、４－ドデセン酸、５－ドデセン酸、ラウロレイン酸、４－テトラデセン酸、５－テトラデセン酸、９－テトラデセン酸、パルミトレイン酸、６－オクタデセン酸、オレイン酸、９－オクタデセン酸、１１－オクタデセン酸、９－エイコセン酸、ｃｉｓ－１１－エイコセン酸、セトレイン酸、１３－ドコセン酸、１５－テトラコセン酸、１７－ヘキサコセン酸、６，９，１２，１５－ヘキサデカテトラエン酸、リノール酸、リノレン酸、α－エレオステアリン酸、β－エレオステアリン酸、プニカ酸、６，９，１２，１５－オクタデカテトラエン酸、パリナリン酸、５，８，１１，１４－エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７－エイコサペンタエン酸、７，１０，１３，１６，１９－ドコサペンタエン酸、４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。
好適なヒドロキシ脂肪酸の例としては、α－ヒドロキシラウリン酸、α－ヒドロキシミリスチン酸、α－ヒドロキシパルミチン酸、α－ヒドロキシステアリン酸、ω－ヒドロキシラウリン酸、α－ヒドロキシアラキン酸、９－ヒドロキシ－１２－オクタデセン酸、リシノール酸、α－ヒドロキシベヘン酸、９－ヒドロキシ－ｔｒａｎｓ－１０，１２－オクタデカジエン酸、カモレン酸、イプロール酸、９，１０－ジヒドロキシステアリン酸、１２－ヒドロキシステアリン酸などが挙げられる。
好適なポリカルボン酸の例としては、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、Ｄ，Ｌ－リンゴ酸などが挙げられる。
いくつかの態様において、各脂肪酸は、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデシル酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキジン酸、ヘンイコシル酸、ベヘン酸、トリコシル酸、リグノセリン酸、ペンタコシル酸、セロチン酸、ヘプタコシル酸、モンタン酸、ノナコシル酸、メリシン酸、ヘナトリアコンチル酸、ラセロ酸、シリル酸、ゲジ酸、セロプラスチック酸、ヘキサトリアコンチル酸、ヘプタトリアコンタン酸、またはオクタトリアコンタン酸から独立して選択される。
いくつかの態様において、各脂肪酸は、α－リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、リノール酸、ガンマ－リノール酸、ジホモ－ガンマ－リノール酸、アラキドン酸、ドコサテトラエン酸、パルミトレイン酸、バクセン酸、パウリン酸、オレイン酸、エライジン酸、ゴンドイン酸、エルカ酸、ネルボン酸、ミード酸、アドレン酸、ボセオペンタエン酸、オスボンド酸、イワシ酸、ニシン酸、ドコサヘキサエン酸、もしくはテトラコサノールペンタエン酸、または別の一価不飽和脂肪酸もしくは多価不飽和脂肪酸から独立して選択される。
いくつかの態様において、脂肪酸の一方または両方は、必須脂肪酸である。ある特定の必須脂肪酸の有益な健康効果を考慮すると、そのような脂肪酸を治療薬に含めることによって、開示される治療薬をローディングしたエクソソームの治療上の利益が増加し得る。いくつかの態様において、必須脂肪酸は、リノレン酸、ガンマ－リノレン酸、ジホモ－ガンマ－リノレン酸、アラキドン酸、アドレン酸、ドコサペンタエンｎ－６酸、アルファ－リノレン酸、ステアリドン酸、２０：４ｎ－３酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエンｎ－３酸、またはドコサヘキサエン酸からなる群から選択される、ｎ－６またはｎ－３必須脂肪酸である。
いくつかの態様において、各脂肪酸は、ａｌｌ－ｃｉｓ－７，１０，１３－ヘキサデカトリエン酸、α－リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸、またはリポ酸から独立して選択される。他の態様において、脂肪酸は、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、またはリポ酸から選択される。脂肪酸の他の例としては、ａｌｌ－ｃｉｓ－７，１０，１３－ヘキサデカトリエン酸、α－リノレン酸（ＡＬＡまたはａｌｌ－ｃｉｓ－９，１２，１５－オクタデカトリエン酸）、ステアリドン酸（ＳＴＤまたはａｌｌ－ｃｉｓ－６，９，１２，１５－オクタデカテトラエン酸）、エイコサトリエン酸（ＥＴＥまたはａｌｌ－ｃｉｓ－１１，１４，１７－エイコサトリエン酸）、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡまたはａｌｌ－ｃｉｓ－８，１１，１４，１７－エイコサテトラエン酸）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ、クルパノドン酸またはａｌｌ－ｃｉｓ－７，１０，１３，１６，１９－ドコサペンタエン酸）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡまたはａｌｌ－ｃｉｓ－４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエン酸）、テトラコサペンタエン酸（ａｌｌ－ｃｉｓ－９，１２，１５，１８，２１－ドコサヘキサエン酸）、またはテトラコサヘキサエン酸（ニシン酸またはａｌｌ－ｃｉｓ－６，９，１２，１５，１８，２１－テトラコセン酸）が挙げられる。いくつかの態様において、脂肪酸は、リポ酸などの中鎖脂肪酸である。
脂肪酸鎖は、その鎖長が大きく異なり、鎖長に応じて、例えば、短鎖から超長鎖に分類され得る。短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は、炭素数約５以下の鎖を有する脂肪酸（例えば、酪酸）である。いくつかの態様において、脂肪酸は、ＳＣＦＡである。中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）は、炭素数約６～１２の鎖を有する脂肪酸を含み、中鎖トリグリセリドを形成することができる。いくつかの態様において、脂肪酸は、ＭＣＦＡである。長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）は、炭素数１３～２１の鎖を有する脂肪酸を含む。いくつかの態様において、脂肪酸は、ＬＣＦＡである。いくつかの態様において、脂肪酸は、ＬＣＦＡである。超長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）は、炭素数２２以上、例えば、２２～６０、２２～５０、または２２～４０の鎖を有する脂肪酸を含む。いくつかの態様において、脂肪酸は、ＶＬＣＦＡである。
ＩＩ．Ａ．３．リン脂質
いくつかの態様において、アンカリング部分は、リン脂質を含む。リン脂質は、全ての細胞膜の主要な構成成分である脂質の一種である。これらは、両親媒性であるので、脂質二重層を形成することができる。リン脂質分子の構造は、一般に、２つの疎水性脂肪酸の「尾部」と、リン酸基からなる親水性の「頭部」とからなる。例えば、リン脂質は、次式に従う脂質であり得る：
Figure 2022550248000010
 （式中、Ｒｐは、リン脂質部分を表し、Ｒ１及びＲ２は、同じであっても異なっていてもよい、不飽和含有または非含有の脂肪酸部分を表す）。
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。
特定のリン脂質は、脂質二重層、例えば、エクソソーム膜の脂質二重層への融合を容易にし得る。例えば、カチオン性リン脂質は、膜の１つ以上の負電荷を帯びたリン脂質と相互作用し得る。リン脂質の膜への融合は、脂質含有組成物の１つ以上の要素が膜に結合すること、または膜を通過することを可能にし得る。
脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。
本開示のアンカリング部分として使用されるリン脂質は、天然または非天然リン脂質であり得る。分岐、酸化、環化、及びアルキンを含む修飾及び置換を含む天然種を含む非天然リン脂質種もまた企図される。例えば、リン脂質は、１つ以上のアルキン（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合に置き換えられているアルケニル基）で官能化されてもよいし、アルキンに架橋してもよい。アルキン基は、適切な反応条件下でアジドに曝されると、銅触媒による環化付加反応を受け得る。
リン脂質には、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジグリセロール、及びホスファチジン酸などのグリセロリン脂質が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で開示されるアンカリング部分に使用することができるリン脂質の例としては、ホスファチジルエタノールアミン（例えば、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、１－パルミトイル－２－オレイルホスファチジルエタノールアミン、１－オレイル－２－パルミトイルホスファチジルエタノールアミン、及びジエルコイルホスファチジルエタノールアミン）、ホスファチジルグリセロール（例えば、ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルグリセロール、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジルグリセロール、及びジエルコイルホスファチジルグリセロール）；ホスファチジルセリン（例えば、ジラウロイルホスファチジルセリン、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルセリン、ジオレオイルホスファチジルセリン、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルセリン、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジルセリン、及びジエルコイルホスファチジルセリンなど）；ホスファチジン酸（例えば、ジラウロイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジステアロイルホスファチジン酸、ジオレオイルホスファチジン酸、１－パルミトイル－２－オレイルホスファチジン酸、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジン酸、及びジエルコイルホスファチジン酸）；及びホスファチジルイノシトール（例えば、ジラウロイルホスファチジルイノシトール、ジミリストイルホスファチジルイノシトール、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール、ジステアロイルホスファチジルイノシトール、ジオレオイルホスファチジルイノシトール、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルイノシトール、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジルイノシトール、及びジエルコイルホスファチジルイノシトールが挙げられる。
リン脂質は、対称型または非対称型であり得る。本明細書で使用される場合、「対称リン脂質」という用語は、一致する脂肪酸部分を有するグリセロリン脂質、及び可変脂肪酸部分とスフィンゴシン骨格の炭化水素鎖が同数の炭素原子を含むスフィンゴ脂質を含む。本明細書で使用される場合、「非対称リン脂質」という用語は、リゾ脂質、異なる脂肪酸部分（例えば、異なる数の炭素原子及び／または不飽和（例えば、二重結合）を有する脂肪酸部分）を有するグリセロリン脂質、及び可変脂肪酸部分とスフィンゴシン骨格の炭化水素鎖が異なる数の炭素原子を含むスフィンゴ脂質（例えば、可変脂肪酸部分は、炭化水素鎖よりも少なくとも２個を超える炭素原子または炭化水素鎖よりも少なくとも２個より少ない炭素原子を含む）を含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、少なくとも１つの対称リン脂質を含む。対称リン脂質は、１，２ ジプロピオニル ｓｎ－グリセロ ３ ホスホコリン（０３：０ ＰＣ）、１，２ ジブチリル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０４：０ ＰＣ）、１，２ ジペンタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０５：０ ＰＣ）、１，２ ジヘキサノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０６：０ ＰＣ）、１，２ ジヘプタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０７：０ ＰＣ）、１，２ ジオクタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０８：０ ＰＣ）、１，２ ジノナノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０９：０ ＰＣ）、１，２ ジデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１０：０ ＰＣ）、１，２ ジウンデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１１：０ ＰＣ、ＤＵＰＣ）、１，２ ジラウロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１２：０ ＰＣ）、１，２ ジトリデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１３：０ ＰＣ）、１，２ ジミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０ ＰＣ、ＤＭＰＣ）、１，２ ジペンタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１５：０ ＰＣ）、１，２ ジパルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０ ＰＣ、ＤＰＰＣ）、１，２ ジフィタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（４ＭＥ １６：０ ＰＣ）、１，２ ジヘプタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１７：０ ＰＣ）、１，２ ジステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０ ＰＣ、ＤＳＰＣ）、１，２ ジノナデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１９：０ ＰＣ）、１，２ ジアラキドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：０ ＰＣ）、１，２ ジヘナラキドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２１：０ ＰＣ）、１，２ ジベヘノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：０ ＰＣ）、１，２ ジトリコサノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２３：０ ＰＣ）、１，２ ジリグノセロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２４：０ ＰＣ）、１，２ ジミリストレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＣ）、１，２ ジミリステライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）、１，２ ジパルミトレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＣ）、１，２ ジパルミテライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）、１，２ ジペトロセレノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１（Δ６－Ｃｉｓ）ＰＣ）、１，２ ジオレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＯＰＣ）、１，２ ジエライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）、１，２ ジリノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：２（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＬＰＣ）、１，２ ジリノレノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：３（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＬｎＰＣ）、１，２ ジエイコセノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）、１，２ ジアラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：４（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＡＰＣ）、１，２ ジエルコイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）、１，２ ジドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：６（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＨＡＰＣ）、１，２ ジネルボノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２４：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）、１，２ ジヘキサノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（０６：０ ＰＥ）、１，２ ジオクタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（０８：０ ＰＥ）、１，２ ジデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１０：０ ＰＥ）、１，２ ジラウロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１２：０ ＰＥ）、１，２ ジミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１４：０ ＰＥ）、１，２ ジペンタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１５：０ ＰＥ）、１，２ ジパルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０ ＰＥ）、１，２ ジフィタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（４ＭＥ １６：０ ＰＥ）、１，２ ジヘプタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１７：０ ＰＥ）、１，２ ジステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０ ＰＥ、ＤＳＰＥ）、１，２ ジパルミトレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：１ ＰＥ）、１，２ ジオレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＥ、ＤＯＰＥ）、１，２ ジエライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＥ）、１，２ ジリノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：２ ＰＥ、ＤＬＰＥ）、１，２ ジリノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：３ ＰＥ、ＤＬｎＰＥ）、１，２ ジアラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（２０：４ ＰＥ、ＤＡＰＥ）、１，２ ジドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（２２：６ ＰＥ、ＤＨＡＰＥ）、１，２ ジ Ｏ オクタデセニル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０ ジエーテル ＰＣ）、１，２ ジオレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホ ｒａｃ（１ グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びこれらの任意の組み合わせからなる非限定的な群から選択され得る。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＵＰＣ、１８：０ ジエーテル ＰＣ、ＤＬｎＰＣ、ＤＡＰＣ、ＤＨＡＰＣ、ＤＯＰＥ、４ＭＥ １６：０ ＰＥ、ＤＳＰＥ、ＤＬＰＥ，ＤＬｎＰＥ、ＤＡＰＥ、ＤＨＡＰＥ、ＤＯＰＧ、及びこれらの任意の組み合わせからなる非限定的な群から選択される少なくとも１つの対称リン脂質を含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、少なくとも１つの非対称リン脂質を含む。非対称リン脂質は、１ ミリストイル ２ パルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０－１６：０ ＰＣ、ＭＰＰＣ）、１ ミリストイル ２ ステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０－１８：０ ＰＣ、ＭＳＰＣ）、１ パルミトイル ２ アセチル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－０２：０ ＰＣ）、１ パルミトイル ２ ミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１４：０ ＰＣ、ＰＭＰＣ）、１ パルミトイル ２ ステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１８：０ ＰＣ、ＰＳＰＣ）、１ パルミトイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１８：１ ＰＣ、ＰＯＰＣ）、１ パルミトイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１８：２ ＰＣ、ＰＬＰＣ）、１ パルミトイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－２０：４ ＰＣ）、１ パルミトイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０－２２：６ ＰＣ）、１ ステアロイル ２ ミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１４：０ ＰＣ、ＳＭＰＣ）、１ ステアロイル ２ パルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１６：０ ＰＣ、ＳＰＰＣ）、１ ステアロイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１８：１ ＰＣ、ＳＯＰＣ）、１ ステアロイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１８：２ ＰＣ）、１ ステアロイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－２０：４ ＰＣ）、１ ステアロイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－２２：６ ＰＣ）、１ オレオイル ２ ミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１－１４：０ ＰＣ、ＯＭＰＣ）、１ オレオイル ２ パルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１－１６：０ ＰＣ、ＯＰＰＣ）、１ オレオイル ２ ステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１－１８：０ ＰＣ、ＯＳＰＣ）、１ パルミトイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－１８：１ ＰＥ、ＰＯＰＥ）、１ パルミトイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－１８：２ ＰＥ）、１ パルミトイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－２０：４ ＰＥ）、１ パルミトイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－２２：６ ＰＥ）、１ ステアロイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－１８：１ ＰＥ）、１ ステアロイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－１８：２ ＰＥ）、１ ステアロイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－２０：４ ＰＥ）、１ ステアロイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－２２：６ ＰＥ）、１ オレオイル ２ コレステリルヘミサクシニル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、及びこれらの任意の組み合わせからなる非限定的な群から選択され得る。
より顕著なヌクレアーゼ耐性、細胞取り込み効率、及びより顕著なＲＮＡ干渉効果をもたらすために、ホスファチジルエタノールアミン、例えば、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルエタノールアミン、及びジオレオイルホスファチジルエタノールアミンがアンカリング部分として使用され得る。
脂質（例えば、リン脂質）とリンカー組み合わせまたはＢＡＭ、例えば、ＡＳＯの結合部位は、脂質及びリンカーまたはＢＡＭの種類に応じて好適に選択され得る。脂質の疎水性基以外の任意の位置は、化学結合によってリンカーまたはＢＡＭに連結され得る。例えば、ホスファチジルエタノールアミンを使用する場合、連結は、ホスファチジルエタノールアミンのアミノ基とリンカーまたはＢＡＭとの間にアミド結合などを形成することによってなされ得る。ホスファチジルグリセロールを使用する場合、連結は、グリセロール残基のヒドロキシル基とリンカーまたはＢＡＭとの間にエステル結合、エーテル結合などを形成することによってなされ得る。ホスファチジルセリンを使用する場合、連結は、セリン残基のアミノ基またはカルボキシル基とリンカーまたはＢＡＭとの間にアミド結合またはエステル結合などを形成することによってなされ得る。ホスファチジン酸を使用する場合、連結は、リン酸残基とリンカーまたはＢＡＭとの間にホスホエステル結合などを形成することによってなされ得る。ホスファチジルイノシトールを使用する場合、連結は、イノシトール残基のヒドロキシル基とリンカーまたはＢＡＭとの間にエステル結合、エーテル結合などを形成することによってなされ得る。
ＩＩ．Ａ．４．リゾ脂質（例えば、リゾリン脂質）
いくつかの態様において、アンカリング部分は、リゾ脂質、例えば、リゾリン脂質を含む。リゾ脂質は、一般に加水分解によって、一方または両方の脂肪族アシル鎖が除去されている脂質の誘導体である。リゾリン脂質は、加水分解によって、一方または両方の脂肪族アシル鎖が除去されているリン脂質の誘導体である。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、上に開示されるリン脂質のいずれかを含み、当該リン脂質は、一方または両方のアシル鎖が加水分解を介して除去されており、したがって、得られるリゾリン脂質は、脂肪酸アシル鎖を１つ含むか、または含まない。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、リゾグリセロリン脂質、リゾグリコスフィンゴリオピド、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルイノシトール、またはリゾホスファチジルセリンを含む。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、１ ヘキサノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ヘプタノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０７：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ オクタノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０８：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ノナノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０９：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ デカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１０：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ウンデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１１：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ラウロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１２：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ トリデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１３：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ミリストイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ペンタデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１５：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ パルミトイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ヘプタデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１７：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ステアロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ オレオイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ノナデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１９：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ アラキドイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ベヘノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ リグノセロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２４：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ヘキサコサノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１ ミリストイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１４：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）、１ パルミトイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）、１ ステアロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）、１ オレオイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：１ Ｌｙｓｏ ＰＥ）、１ ヘキサデシル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、及びこれらの任意の組み合わせからなる非限定的な群から選択されるリゾ脂質を含む。
ＩＩ．Ａ．５ビタミン
いくつかの態様において、アンカリング部分は、脂溶性ビタミン、例えば、葉酸、ビタミンＡ、ビタミンＥ、またはビタミンＫを含む。いくつかの態様において、アンカリング部分は、ビタミンＡを含む。ビタミンＡは、レチノール、レチナール、レチノイン酸、及びいくつかのプロビタミンＡカロチノイド（なかでも、ベータ－カロチン）を含む、不飽和栄養有機化合物の一群である。いくつかの態様において、アンカリング部分は、レチノールを含む。いくつかの態様において、アンカリング部分は、レチノイドを含む。レチノイドは、ビタミンＡのビタマーまたはビタミンＡに化学的に関連する化合物の一種である。いくつかの態様において、アンカリング部分は、第一世代レチノイド（例えば、レチノール、トレチノイン、イソトレアチノイン、またはアリトレチノイン）、第二世代レチノイド（例えば、エトレチナートまたはアシトレチン）、第三世代レチノイド（例えば、アダパレン、ベキサロテン、またはタザロテン）、またはこれらの任意の組み合わせを含む。
Figure 2022550248000011
いくつかの態様において、アンカリング部分は、ビタミンＥを含む。トコフェロールは、メチル化フェノールの一種であり、その多くがビタミンＥ活性を有する。したがって、いくつかの態様において、アンカリング部分は、アルファ－トコフェロール、ベータ－トコフェロール、ガンマ－トコフェロール、デルタ－トコフェロール、またはこれらの組み合わせを含む。
Figure 2022550248000012
トコトリエノールは、ビタミンＥ活性も有し得る。トコトリエノールとトコフェロールの化学構造の決定的な違いは、トコトリエノールが３つの炭素－炭素二重結合を有する不飽和イソプレノイド側鎖を持つのに対し、トコフェロールは飽和側鎖を持つことである。いくつかの態様において、アンカリング部分は、アルファ－トコトリエノール、ベータ－トコトリエノール、ガンマ－トコトリエノール、デルタ－トコトリエノール、またはこれらの組み合わせを含む。トコトリエノールは、以下の式によって表すことができる：
Figure 2022550248000013
 アルファ（α）－トコトリエノール：Ｒ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝Ｍｅ、Ｒ３＝Ｍｅ；
ベータ（β）－トコトリエノール：Ｒ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝Ｍｅ；
ガンマ（γ）－トコトリエノール：Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝Ｍｅ、Ｒ３＝Ｍｅ；
デルタ（δ）－トコトリエノール：Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝Ｍｅ。
いくつかの態様において、アンカリング部分は、ビタミンＫを含む。化学的に、ビタミンＫファミリーは、２－メチル－１．４－ナフトキノン（３－）誘導体を含む。ビタミンＫは、２つの天然ビタマー：ビタミンＫ１及びビタミンＫ２を含む。ビタミンＫ１（フィトナジオン、フィロキノン、または（Ｅ）－フィトナジオンとしても知られている）の構造は、フィチル基の存在が特徴的である。ビタミンＫ２（メナキノン）の構造は、分子中に存在するポリイソプレニル側鎖が特徴であり、６～１３個のイソプレニル単位を含有し得る。したがって、ビタミンＫ２は、関連する化学サブタイプから構成され、イソプレノイド原子群からなる炭素側鎖の長さが異なる。ＭＫ－４は、最も一般的なビタミンＫ２の形態である。ＭＫ－７、ＭＫ－８及びＭＫ－９などの長鎖形態は、発酵食品に多い。ＭＫ－１０～ＭＫ－１３などのより長鎖形態のビタミンＫ２は、細菌によって合成されるが、吸収がよくなく、生物学的機能をほとんど持っていない。天然形態のビタミンＫに加えて、ビタミンＫ３（メナジオン；２－メチルナフタレン－１，４－ジオン）、ビタミンＫ４、及びビタミンＫ５などの多くの合成形態のビタミンＫが存在する。
したがって、いくつかの態様において、アンカリング部分は、ビタミンＫ１、Ｋ２（例えば、ＭＫ－４、ＭＫ－５、ＭＫ－６、ＭＫ－７、ＭＫ－８、ＭＫ－９、ＭＫ－１０、ＭＫ－１１、ＭＫ－１２、またはＭＫ－１３）、Ｋ３、Ｋ４、Ｋ５、またはこれらの任意の組み合わせを含む。
Figure 2022550248000014
ＩＩ．Ｂ．リンカー組み合わせ
いくつかの態様において、ＢＡＭは、リンカー組み合わせを介して、本明細書で開示される疎水性膜アンカリング部分に連結され、リンカー組み合わせは、切断可能なリンカー及び／または切断不可能なリンカーの任意の組み合わせを含み得る。リンカー組み合わせの主な機能は、１つもしくは複数のアンカリング部分とＢＡＭ標的との間に最適な間隔を提供することである。例えば、ＡＳＯの場合、リンカー組み合わせは、立体障害を減らし、ＡＳＯが標的核酸、例えば、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡと相互作用することができるように配置される必要がある。
リンカーは、切断されやすく（「切断可能なリンカー」）、それにより、生物学的に活性な分子の放出が容易になり得る。したがって、いくつかの態様において、本明細書で開示されるリンカー組み合わせは、切断可能なリンカーを含み得る。そのような切断可能なリンカーは、生物学的に活性な分子が活性を維持する条件で、例えば、酸誘導性切断、光誘導性切断、ペプチダーゼ誘導性切断、エステラーゼ誘導性切断、及びジスルフィド結合切断に感受性であり得る。あるいは、リンカーは、切断に対して実質的に耐性があってもよい（「切断不可能なリンカー」）。いくつかの態様において、切断可能なリンカーは、スペーサーを含む。いくつかの態様において、スペーサーは、ＰＥＧである。
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６以上の本明細書で開示されるリンカーとは異なるリンカーを含む。いくつかの態様において、リンカー組み合わせのリンカーは、エステル連結によって連結され得る（例えば、ホスホジエステルまたはホスホロチオエートエステル）。
いくつかの態様において、リンカーは、アンカリング部分とＢＡＭ、例えば、ＡＳＯとの間の直接結合である。
ＩＩ．Ｂ．１切断不可能なリンカー
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、「切断不可能なリンカー」を含む。切断不可能なリンカーは、本開示の改変された生物学的に活性な分子の２つ以上の構成成分（例えば、生物学的に活性な分子及びアンカリング部分；生物学的に活性な分子及び切断可能なリンカー；アンカリング部分及び切断可能なリンカー）を安定した共有結合的様式で連結することが可能な任意の化学部分であり、切断可能なリンカーについて上に列挙した分類に該当しないものである。したがって、切断不可能なリンカーは、酸誘導性切断、光誘導性切断、ペプチダーゼ誘導性切断、エステラーゼ誘導性切断及びジスルフィド結合切断に対して実質的に耐性である。
更に、切断不可能とは、環状ジヌクレオチド及び／または抗体がその活性を失わない条件で、リンカー中またはリンカーに隣接する化学結合が、酸、光切断剤、ペプチダーゼ、エステラーゼ、またはジスルフィド結合を切断する化学的もしくは生理学的化合物によって誘導される切断に耐える能力を指す。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、リンカーに、別のリンカー、例えば、自己崩壊性リンカーを介して結合される。
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、例えば、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、スクシンイミド、またはこれらの任意の組み合わせを含む、切断不可能なリンカーを含む。いくつかの態様において、切断不可能なリンカーは、生物学的に活性な分子を切断不可能なリンカーに連結するスペーサー単位を含む。
いくつかの態様において、１つ以上の切断不可能なリンカーは、一緒に連結されたより小さな単位（例えば、ＨＥＧ、ＴＥＧ、グリセロール、Ｃ２～Ｃ１２アルキルなど）を含む。一態様において、連結は、エステル連結（例えば、ホスホジエステルまたはホスホロチオエートエステル）または他の連結である。
ＩＩ．Ｂ．１．ａ．エチレングリコール（ＨＥＧ、ＴＥＧ、ＰＥＧ）
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、切断不可能なリンカーを含み、切断不可能なリンカーは、式Ｒ３－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－またはＲ３－（０－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－Ｏ－（Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルであり、ｎは、２～２００の値を有する）を特徴とするポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。いくつかの態様において、リンカーは、スペーサーを含み、ここで、スペーサーは、ＰＥＧである。
いくつかの態様において、ＰＥＧリンカーは、オリゴ－エチレングリコール、例えば、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ペンタエチレングリコール、またはヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）リンカーである。
いくつかの態様において、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７，１８，１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８９、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、または２００の値を有する。いくつかの態様において、ｎは、２～１０の間、１０～２０の間、２０～３０の間、３０～４０の間、４０～５０の間、５０～６０の間、６０～７０の間、７０～８０の間、８０～９０の間、９０～１００の間、１００～１１０の間、１１０～１２０の間、１２０～１３０の間、１３０～１４０の間、１４０～１５０の間、１５０～１６０の間、１６０～１７０の間、１７０～１８０の間、１８０～１９０の間、または１９０～２００の間である。いくつかの具体的な態様において、ｎは、３～２００、３～２０、１０～３０、または９～４５の値を有する。いくつかの態様において、ＰＥＧは、分岐ＰＥＧである。分岐ＰＥＧは、中央のコアグループから伸びる３～１０のＰＥＧ鎖を有する。
ある特定の態様において、ＰＥＧ部分は、単分散ポリエチレングリコールである。本開示の文脈において、単分散ポリエチレングリコール（ｍｄＰＥＧ）は、単一の、定義された鎖長及び分子量を有するＰＥＧである。ｍｄＰＥＧは、典型的に、クロマトグラフィーによる重合混合物からの分離によって生成される。ある特定の式において、単分散ＰＥＧ部分は、ｍｄＰＥＧという略語で示される。
いくつかの態様において、ＰＥＧは、Ｓｔａｒ ＰＥＧである。Ｓｔａｒ ＰＥＧは、中央のコアグループから伸びる１０～１００のＰＥＧ鎖を有する。いくつかの態様において、ＰＥＧは、Ｃｏｍｂ ＰＥＧである。Ｃｏｍｂ ＰＥＧは、通常、ポリマー骨格上にグラフトされた複数のＰＥＧ鎖を有する。
ある特定の態様において、ＰＥＧは、１００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌの間、特に、１００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌの間、より詳細には、およそ１００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。ある特定の態様において、ＰＥＧは、２００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌの間、特に、３００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌの間、より詳細には、およそ４００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。
いくつかの態様において、ＰＥＧは、ＰＥＧ１００、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ７００、ＰＥＧ８００、ＰＥＧ９００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１１００、ＰＥＧ１２００、ＰＥＧ１３００、ＰＥＧ１４００、ＰＥＧ１５００、ＰＥＧ１６００、ＰＥＧ１７００、ＰＥＧ１８００、ＰＥＧ１９００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２１００、ＰＥＧ２２００、ＰＥＧ２３００、ＰＥＧ２４００、ＰＥＧ２５００、ＰＥＧ１６００、ＰＥＧ１７００、ＰＥＧ１８００、ＰＥＧ１９００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２１００、ＰＥＧ２２００、ＰＥＧ２３００、ＰＥＧ２４００、ＰＥＧ２５００、ＰＥＧ２６００、ＰＥＧ２７００、ＰＥＧ２８００、ＰＥＧ２９００、またはＰＥＧ３０００である。特定の一態様において、ＰＥＧは、ＰＥＧ４００である。別の特定の態様において、ＰＥＧは、ＰＥＧ２０００である。
いくつかの態様において、本開示のリンカー組み合わせは、いくつかのＰＥＧリンカーを含み得、例えば、ＰＥＧ、ＨＥＧ、またはＴＥＧリンカーに切断可能なリンカーが挟まれている。いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、（ＨＥＧ）ｎ及び／または（ＴＥＧ）ｎを含み、式中、ｎは、１～５０の間の整数であり、各単位は、例えば、リン酸エステルリンカー、ホスホロチオエートエステル連結、またはこれらの組み合わせを介して接続される。
ＩＩ．Ｂ．１．ｂ．グリセロール及びポリグリセロール（ＰＧ）
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、グリセロール単位または式（（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＨ－ＣＨ２Ｏ）ｎ－）（Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルであり、ｎは、３～２００の値を有する）によって記載されるポリグリセロール（ＰＧ）を含む、切断不可能なリンカーを含む。いくつかの態様において、ｎは、３～２０の値を有する。いくつかの態様において、ｎは、１０～３０の値を有する。
いくつかの態様において、ＰＧリンカーは、ジグリセロール、トリグリセロール、テトラグリセロール（ＴＧ）、ペンタグリセロール、またはヘキサグリセロール（ＨＧ）リンカーである。いくつかの態様において、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７，１８，１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８９、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、または２００の値を有する。いくつかの態様において、ｎは、２～１０の間、１０～２０の間、２０～３０の間、３０～４０の間、４０～５０の間、５０～６０の間、６０～７０の間、７０～８０の間、８０～９０の間、９０～１００の間、１００～１１０の間、１１０～１２０の間、１２０～１３０の間、１３０～１４０の間、１４０～１５０の間、１５０～１６０の間、１６０～１７０の間、１７０～１８０の間、１８０～１９０の間、または１９０～２００の間である。
これらの態様のいくつかの代替において、ｎは、９～４５の値を有する。いくつかの態様において、異種部分は、式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＲ５－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）（Ｒ５は、水素または式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＨ－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）によって記載される直鎖状グリセロール鎖であり、Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルである）によって記載される分岐ポリグリセロールである。いくつかの態様において、異種部分は、式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＲ５－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）（Ｒ５は、水素または式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＲ６－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）（Ｒ６は、水素または式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＲ７－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）（Ｒ７は、水素または式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＨ－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）によって記載される直鎖状グリセロール鎖である）によって記載されるグリセロール鎖であり、Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルである）によって記載されるグリセロール鎖である）によって記載される多分岐ポリグリセロールである。多分岐グリセロール及びその合成の方法は、Ｏｕｄｓｈｏｒｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２７：５４７１－５４７９；Ｗｉｌｍｓ ｅｔ ａｌ．（２０１００ Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４３，１２９－４１、及び当該文献に引用されている参考文献に記載されている。
ある特定の態様において、ＰＧは、１００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌの間、特に、１００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌの間、より詳細には、およそ１００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。ある特定の態様において、ＰＧは、２００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌの間、特に、３００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌの間、より詳細には、およそ４００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。
いくつかの態様において、ＰＧは、ＰＧ１００、ＰＧ２００、ＰＧ３００、ＰＧ４００、ＰＧ５００、ＰＧ６００、ＰＧ７００、ＰＧ８００、ＰＧ９００、ＰＧ１０００、ＰＧ１１００、ＰＧ１２００、ＰＧ１３００、ＰＧ１４００、ＰＧ１５００、ＰＧ１６００、ＰＧ１７００、ＰＧ１８００、ＰＧ１９００、ＰＧ２０００、ＰＧ２１００、ＰＧ２２００、ＰＧ２３００、ＰＧ２４００、ＰＧ２５００、ＰＧ１６００、ＰＧ１７００、ＰＧ１８００、ＰＧ１９００、ＰＧ２０００、ＰＧ２１００、ＰＧ２２００、ＰＧ２３００、ＰＧ２４００、ＰＧ２５００、ＰＧ２６００、ＰＧ２７００、ＰＧ２８００、ＰＧ２９００、またはＰＧ３０００である。特定の一態様において、ＰＧは、ＰＧ４００である。別の特定の態様において、ＰＧは、ＰＧ２０００である。
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、（グリセロール）ｎ、及び／または（ＨＧ）ｎ及び／または（ＴＧ）ｎを含み、式中、ｎは、１～５０の間の整数であり、各単位は、例えば、リン酸エステルリンカー、ホスホロチオエートエステル連結、またはこれらの組み合わせを介して接続される。
ＩＩ．Ｂ．１．ｃ．脂肪族（アルキル）リンカー
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、少なくとも１つの脂肪族（アルキル）リンカー、例えば、プロピル、ブチル、ヘキシル、またはＣ２－Ｃ１０アルキルもしくはＣ２－Ｃ６アルキルなどのＣ２－Ｃ１２アルキルを含む。
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、アルキル鎖、例えば、非置換アルキルを含む。いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、置換もしくは非置換のアルケニル、置換もしくは非置換のアルキニル、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルアリールアルキル、アルキルアリールアルケニル、アルキルアリールアルキニル、アルケニルアリールアルキル、アルケニルレニルアルケニル、アルケニルアリールアルキニル、アルキニルアリールアルキル、アルキニルアリールアルケニル、アルキニルアリールアルキニル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルケニル、アルキルヘテロアリールアルキニル、アルケニルヘテロアリールアルキル、アルケニルヘテロアリールアルケニル、アルケニルヘテロアリールアルキニル、アルキニルヘテロアリールアルキル、アルキニルヘテロアリールアルケニル、アルキニルヘテロアリールアルキニル、アルキルヘテロシクリルアルキル、アルキルヘテロシクリルアルケニル、アルキルヘテロシクリルアルキニル、アルケニルヘテロシクリルアルキル、アルケニルヘテロシクリルアルケニル、またはアルケニルヘテロシクリルアルキニルを含む。
任意選択により、これらの構成成分は、置換される。置換基には、アルコール、アルコキシ（メトキシ、エトキシ、及びプロポキシなど）、直鎖または分枝鎖のアルキル（Ｃ１－Ｃ１２アルキルなど）、アミン、アミノアルキル（アミノＣ１－Ｃ１２アルキルなど）、ホスホロアミダイト、ホスフェート、ホスホロアミデート、ホスホロジチオエート、チオホスフェート、ヒドラジド、ヒドラジン、ハロゲン、（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩなど）、アミド、アルキルアミド（アミドＣ１－Ｃ１２アルキルなど）、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸無水物、カルボン酸ハライド、エーテル、スルホニルハライド、イミデートエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、ハロホルメート、カルボジイミド付加物、アルデヒド、ケトン、スルフヒドリル、ハロアセチル、アルキルハライド、アルキルスルホネート、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣ（＝Ｏ）（マレイミド）、チオエーテル、シアノ、糖（マンノース、ガラクトース、及びグルコースなど）、α，β－不飽和カルボニル、アルキル水銀、またはα，β－不飽和スルホンが含まれる。
「アルキル」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、特に指示がない限り、表記される数の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素ラジカルを意味する（例えば、Ｃ１－Ｃ１０は、１～１０個の炭素原子を意味する）。典型的に、アルキル基は、１～２４個の炭素原子、例えば、１～１０個の炭素原子、１～８個の炭素原子または１～６個の炭素原子を有する。「低級アルキル」基は、１～４個の炭素原子を有するアルキル基である。「アルキル」という用語は、二価及び多価のラジカルを含む。例えば、「アルキル」という用語は、適切な場合、例えば、アルキル基が二価であることを式が示す場合、または置換基が接続して環を形成する場合、「アルキレン」を含む。アルキルラジカルの例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル、ｓｅｃ－ブチルだけでなく、例えば、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル及びｎ－オクチルのホモログ及び異性体が挙げられるが、これらに限定されない。
「アルキレン」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、二価（ジラジカル）のアルキル基を意味し、ここで、アルキルは、本明細書で定義されるものである。「アルキレン」は、限定するものではないが、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－が例示される。典型的に、「アルキレン」基は、１～２４個の炭素原子、例えば、１０または数個の炭素原子（例えば、１～８または１～６個の炭素原子）を有する。「低級アルキレン」基は、１～４個の炭素原子を有するアルキレン基である。
「アルケニル」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、２～２４個の炭素原子及び少なくとも１つの二重結合を有する、直鎖または分枝鎖の炭化水素ラジカルを指す。典型的なアルケニル基は、２～１０個の炭素原子及び少なくとも１つの二重結合を有する。一態様において、アルケニル基は、２～８個の炭素原子または２～６個の炭素原子及び１～３つの二重結合を有する。例示的なアルケニル基としては、ビニル、２－プロペニル、１－ブタ－３－エニル、クロチル、２－（ブタジエニル）、２，４－ペンタジエニル、３－（１，４－ペンタジエニル）、２－イソペンテニル、１－ペンタ－３－エニル、１－ヘキサ－５－エニルなどが挙げられる。
「アルキニル」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、２～２４個の炭素原子及び少なくとも１つの三重結合を有する、直鎖または分枝鎖の不飽和または多不飽和の炭化水素ラジカルを指す。典型的な「アルキニル」基は、２～１０個の炭素原子及び少なくとも１つの三重結合を有する。本開示の一態様において、アルキニル基は、２～６個の炭素原子及び少なくとも１つの三重結合を有する。例示的なアルキニル基としては、プロパ－１－イニル、プロパ－２－イニル（すなわち、プロパルギル）、エチニル及び３－ブチニルが挙げられる。
「アルコキシ」、「アルキルアミノ」及び「アルキルチオ」（またはチオアルコキシ）という用語は、従来の意味で使用され、それぞれ、酸素原子、アミノ基、または硫黄原子を介して、その分子の残部に結合しているアルキル基を指す。
「ヘテロアルキル」という用語は、それ自体でまたは別の用語との組み合わせで、表記される数の炭素原子（例えば、Ｃ２－Ｃ１０、またはＣ２－Ｃ８）と、例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、Ｂ及びＰから選択される少なくとも１つのヘテロ原子（一態様において、Ｎ、Ｏ及びＳ）とからなる安定した直鎖または分枝鎖の炭化水素ラジカルを意味し、ここで、窒素、硫黄及びリン原子は、任意選択により酸化され、窒素原子（複数可）は、任意選択により四級化される。ヘテロ原子（複数可）は、ヘテロアルキル基の任意の内部位置に位置する。ヘテロアルキル基の例としては、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ３、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２－ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｏ－ＣＨ３、－ＣＨ２－Ｓｉ（ＣＨ３）３、－ＣＨ２－ＣＨ＝Ｎ－ＯＣＨ３、及び－ＣＨ＝ＣＨ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない。最大２つのヘテロ原子は、例えば、－ＣＨ２－ＮＨ－ＯＣＨ３及び－ＣＨ２－Ｏ－Ｓｉ（ＣＨ３）３のように、連続していてもよい。
同様に、「ヘテロアルキレン」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、ヘテロアルキルから誘導される二価のラジカルを意味し、限定するものではないが、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２－及び－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ２－が例示される。典型的に、ヘテロアルキル基は、３～２４個の原子（炭素及びヘテロ原子、水素を除く）を有する（３～２４員ヘテロアルキル）。別の例において、ヘテロアルキル基は、合計３～１０個の原子（３～１０員ヘテロアルキル）または３～８個の原子（３～８員ヘテロアルキル）を有する。「ヘテロアルキル」という用語は、適切な場合、例えば、ヘテロアルキル基が二価であることを式が示す場合、または置換基が接続して環を形成する場合、「ヘテロアルキレン」を含む。
「シクロアルキル」という用語は、それ自体でまたは別の用語との組み合わせで、３～２４個の炭素原子、例えば、３～１２個の炭素原子（例えば、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキルまたはＣ３－Ｃ６シクロアルキル）を有する飽和または不飽和の非芳香族炭素環式ラジカルを表す。シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、１－シクロヘキセニル、３－シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。「シクロアルキル」という用語はまた、ノルボルニル、アダマンチル及びビシクロ［２．２．１］ヘプチルなどの架橋多環式（例えば、二環式）構造も含む。「シクロアルキル」基は、アリール（例えば、フェニル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル）及び非芳香族（例えば、炭素環式または複素環式）環から選択される少なくとも１つ（例えば、１～３つ）の他の環に縮合し得る。「シクロアルキル」基が縮合されたアリール、ヘテロアリールまたは複素環式環を含む場合、「シクロアルキル」基は、炭素環式環を介して、その分子の残部に結合している。
「ヘテロシクロアルキル」、「複素環式」、「複素環」、または「ヘテロシクリル」という用語は、それ自体でまたは別の用語との組み合わせで、例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、Ｂ及びＰから選択される少なくとも１つから最大５つまでのヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ及びＳ）を含有する炭素環式非芳香族環（例えば、３～８員環及び例えば、４、５、６または７員環）（ここで、窒素、硫黄及びリン原子は、任意選択により酸化され、窒素原子（複数可）は、任意選択により四級化される）（例えば、窒素、酸素及び硫黄から選択される１～４個のヘテロ原子）、または少なくとも１つから最大１０個のヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～５個のヘテロ原子）を当業者に知られた安定した組み合わせで含有する４～８員環の縮合環系を表す。例示的なヘテロシクロアルキル基は、縮合フェニル環を含む。「複素環式」基が縮合されたアリール、ヘテロアリールまたはシクロアルキル環を含む場合、「複素環式」基は、複素環を介して、その分子の残部に結合している。ヘテロ原子の位置は、複素環が分子の残部に結合している位置を占めることができる。
本開示の例示的なヘテロシクロアルキルまたは複素環式基としては、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルＳ－オキシド、チオモルホリニルＳ，Ｓ－ジオキシド、ピペラジニル、ホモピペラジニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ホモモルホリニル、ホモチオモルホリニル、ホモチオモルホリニルＳ，Ｓ－ジオキシド、オキサゾリジノニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピロリル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロフリル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチエニルＳ－オキシド、テトラヒドロチエニルＳ，Ｓ－ジオキシド、ホモチオモルホリニルＳ－オキシド、１－（１，２，５，６－テトラヒドロピリジル）、１－ピペリジニル、２－ピペリジニル、３－ピペリジニル、４－モルホリニル、３－モルホリニル、テトラヒドロフラン－２－イル、テトラヒドロフラン－３－イル、テトラヒドロチエン－２－イル、テトラヒドロチエン－３－イル、１－ピペラジニル、２－ピペラジニルなどが挙げられる。
「アリール」とは、単環（例えば、フェニル）を有するか、または他の芳香族もしくは非芳香族の環（例えば、１～３つの他の環）に縮合している、５、６または７員の芳香族炭素環基を意味する。「アリール」基が非芳香族環（１，２，３，４－テトラヒドロナフチルなど）またはヘテロアリール基を含む場合、「アリール」基は、アリール環（例えば、フェニル環）を介して、その分子の残部に結合している。アリール基は、任意選択により置換される（例えば、本明細書に記載される１～５つの置換基によって）。一例において、アリール基は、６～１０個の炭素原子を有する。アリール基の非限定的な例としては、フェニル、１－ナフチル、２－ナフチル、キノリン、インダニル、インデニル、ジヒドロナフチル、フルオレニル、テトラリニル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソリルまたは６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［ａ］シクロヘプテニルが挙げられる。一態様において、アリール基は、フェニル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソリル及びナフチルから選択される。アリール基は、更なる別の態様において、フェニルである。
「アリールアルキル」または「アラルキル」という用語は、アリール基またはヘテロアリール基がアルキル基に結合して－アルキル－アリール及び－アルキル－ヘテロアリールのラジカルを生成するラジカルを含むことを意味し、ここで、アルキル、アリール及びヘテロアリールは、本明細書に定義される。例示的な「アリールアルキル」または「アラルキル」基としては、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチルなどが挙げられる。
「アリールオキシ」とは、－Ｏ－アリールの基を意味し、ここで、アリールは、本明細書に定義されるとおりである。一例において、アリールオキシ基のアリール部分は、フェニルまたはナフチルである。アリールオキシ基のアリール部分は、一態様において、フェニルである。
「ヘテロアリール」または「複素環式芳香族」という用語は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ及びＢ（例えば、Ｎ、Ｏ及びＳ）から選択される少なくとも１つのヘテロ原子（例えば、１～５個のヘテロ原子、例えば、１～３個のヘテロ原子）を含有する多価不飽和５、６または７員芳香族部分を指し、ここで、窒素及び硫黄原子は、任意選択により酸化され、窒素原子（複数可）は、任意選択により四級化される。「ヘテロアリール」基は、単環であってもよいし、他のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環（例えば、１～３つの他の環）に縮合していてもよい。「ヘテロアリール」基が縮合されたアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環を含む場合、「ヘテロアリール」基は、ヘテロアリール環を介して、その分子の残部に結合している。ヘテロアリール基は、炭素原子またはヘテロ原子を介して、その分子の残部に結合し得る。
一例において、ヘテロアリール基は、４～１０個の炭素原子と、Ｏ、Ｓ及びＮから選択される１～５ヘテロ原子と、を有する。ヘテロアリール基の非限定的な例としては、ピリジル、ピリミジニル、キノリニル、ベンゾチエニル、インドリル、インドリニル、ピリダジニル、ピラジニル、イソインドリル、イソキノリル、キナゾリニル、キノキサリニル、フタラジニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、インドリジニル、インダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、フラニル、チエニル、ピロリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソチアゾリル、ナフチリジニル、イソクロマニル、クロマニル、テトラヒドロイソキノリニル、イソインドリニル、イソベンゾテトラヒドロフラニル、イソベンゾテトラヒドロチエニル、イソベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ピリドピリジル、ベンゾテトラヒドロフラニル、ベンゾテトラヒドロチエニル、プリニル、ベンゾジオキソリル、トリアジニル、プテリジニル、ベンゾチアゾリル、イミダゾピリジル、イミダゾチアゾリル、ジヒドロベンゾイソオキサジニル、ベンゾイソオキサジニル、ベンゾオキサジニル、ジヒドロベンゾイソチアジニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、クロモニル、クロマノニル、ピリジル－Ｎ－オキシド、テトラヒドロキノリニル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロキノリノニル、ジヒドロイソキノリノニル、ジヒドロクマリニル、ジヒドロイソクマリニル、イソインドリノニル、ベンゾジオキサニル、ベンゾオキサゾリノニル、ピロリルＮ－オキシド、ピリミジニルＮ－オキシド、ピリダジニルＮ－オキシド、ピラジニルＮ－オキシド、キノリニルＮ－オキシド、インドリルＮ－オキシド、インドリニルＮ－オキシド、イソキノリルＮ－オキシド、キナゾリニルＮ－オキシド、キノキサリニルＮ－オキシド、フタラジニルＮ－オキシド、イミダゾリルＮ－オキシド、イソオキサゾリルＮ－オキシド、オキサゾリルＮ－オキシド、チアゾリルＮ－オキシド、インドリジニルＮ－オキシド、インダゾリルＮ－オキシド、ベンゾチアゾリルＮ－オキシド、ベンゾイミダゾリルＮ－オキシド、ピロリルＮ－オキシド、オキサジアゾリルＮ－オキシド、チアジアゾリルＮ－オキシド、トリアゾリルＮ－オキシド、テトラゾリルＮ－オキシド、ベンゾチオピラニルＳ－オキシド、ベンゾチオピラニルＳ，Ｓ－ジオキシドが挙げられる。例示的なヘテロアリール基としては、イミダゾリル、ピラゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、及びピリジルなどが挙げられる。他の例示的なヘテロアリール基としては、１－ピロリル、２－ピロリル、３－ピロリル、３－ピラゾリル、２－イミダゾリル、４－イミダゾリル、ピラジニル、２－オキサゾリル、４－オキサゾリル、２－フェニル－４－オキサゾリル、５－オキサゾリル、３－イソオキサゾリル、４－イソオキサゾリル、５－イソオキサゾリル、２－チアゾリル、４－チアゾリル、５－チアゾリル、２－フリル、３－フリル、２－チエニル、３－チエニル、２－ピリジル、３－ピリジル、ピリジン－４－イル、２－ピリミジル、４－ピリミジル、５－ベンゾチアゾリル、プリニル、２－ベンゾイミダゾリル、５－インドリル、１－イソキノリル、５－イソキノリル、２－キノキサリニル、５－キノキサリニル、３－キノリル、及び６－キノリルなどが挙げられる。上記のアリール環系及びヘテロアリール環系のそれぞれの置換基は、以下に記載される許容可能なアリール基の置換基からなる群から選択される。
脂肪族リンカーの例としては、次の構造：－Ｏ－ＣＯ－Ｏ－；－ＮＨ－ＣＯ－Ｏ－；－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ－；－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－；－Ｓ－（ＣＨ２）ｎ１－；－ＣＯ－（ＣＨ２）ｎ１－ＣＯ－；－ＣＯ－（ＣＨ２）ｎ１－ＮＨ－；－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－ＮＨ－；－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－ＮＨ－ＣＯ－；－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－ＮＨ－ＣＯ－；－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－ＮＨ－Ｃ－（＝Ｓ）－；－ＣＯ－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｏ－ＣＯ－；－Ｃ（＝Ｓ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｏ－ＣＯ－；－Ｃ（＝Ｓ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｏ－Ｃ－（＝Ｓ）－；－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｏ－ＣＯ－；－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｏ－ＣＯ－；－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｏ－Ｃ－（＝Ｓ）－；－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｏ－ＣＯ－；
－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－ＣＯ－；－Ｃ（＝Ｓ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ１－ＮＨ－ＣＯ－；－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｏ－Ｃ－（＝Ｓ）－；－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ２－ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）－；－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ２－ＣＨ２－；－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ２－ＣＨ２－ＣＯ－；－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ３－Ｓ－Ｓ－（ＣＨ２）ｎ４－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）２－；－ＣＯ－（ＣＨ２）ｎ３－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ４－；－ＣＯ－（ＣＨ２）ｎ３－ＣＯ－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ４－；－（ＣＨ２）ｎ１ＮＨ－；－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎ１ＮＨ－；－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ１－Ｃ（Ｏ）－；－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ１－Ｃ（Ｏ）Ｏ－；－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－；－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ１－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－；－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ１－；－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－；－Ｃ（Ｏ）－；－（ＣＨ２）ｎ１－Ｃ（Ｏ）－；－（ＣＨ２）ｎ１－Ｃ（Ｏ）Ｏ－；－（ＣＨ２）ｎ１－；－（ＣＨ２）ｎ１－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－が挙げられ、式中、ｎ１は、１～４０の間の整数（例えば、２～２０、または２～１２）であり、ｎ２は、１～２０の間の整数（例えば、１～１０、または１～６）であり、ｎ３及びｎ４は、同じまたは異なり得、１～２０の間の整数（例えば、１～１０、または１～６である）。
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、（Ｃ３）ｎ、（Ｃ４）ｎ、（Ｃ５）ｎ、（Ｃ６）ｎ、（Ｃ７）ｎ、もしくは（Ｃ８）ｎ、またはこれらの組み合わせを含み、式中、ｎは、１～５０の間の整数であり、各単位は、例えば、リン酸エステルリンカー、ホスホロチオエートエステル結合、またはこれらの組み合わせを介して接続される。
ＩＩ．Ｂ．２．切断可能なリンカー
いくつかの態様において、本明細書で開示されるＡＳＯの異なる構成成分は、切断可能なリンカーによって連結され得る。切断可能なリンカーという用語は、崩壊または切断することができる少なくとも１つの連結または化学結合を含むリンカーを指す。本明細書で使用される場合、切断という用語は、２つ以上の比較的小さな分子を生成するように、比較的大きな分子の１つ以上の化学結合を破壊することを指す。切断は、例えば、ヌクレアーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼ、ホスファターゼ、オキシダーゼ、またはレダクターゼによって、あるいは、例えば、特定の物理化学的条件、例えば、酸化還元環境、ｐＨ、活性酸素種の存在、または特定の光の波長によって媒介され得る。
いくつかの態様において、本明細書で使用される「切断可能」という用語は、例えば、ホスホジエステル及びジスルフィドなどの迅速に分解されるリンカーを指し、一方、「切断不可能」という用語は、例えば、ヌクレアーゼ耐性ホスホロチオエートなどのより安定した連結を指す。
いくつかの態様において、切断可能なリンカーは、ジヌクレオチドもしくはトリヌクレオチドリンカー、ジスルフィド、イミン、チオケタール、ｖａｌ－ｃｉｔジペプチド、またはこれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様において、切断可能なリンカーは、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメートまたはバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む。
ＩＩ．Ｂ．２．ａ．酸化還元切断可能リンカー
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、酸化還元切断可能リンカーを含む。非限定的な例として、切断可能なリンカーの１つのタイプは、還元時または酸化時に切断される酸化還元により切断可能な連結基である。いくつかの態様において、酸化還元切断可能リンカーは、ジスルフィド結合を含有するものであり、すなわち、ジスルフィド切断可能リンカーである。酸化還元切断可能リンカーは、例えば、細胞内のメルカプタン、オキシダーゼ、またはレダクターゼによって還元され得る。
ＩＩ．Ｂ．２．ｂ．活性酸素種（ＲＯＳ）切断可能リンカー
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、例えば、活性化好中球などの炎症プロセスによって生成されるスーパーオキシド（Ｏｆ）または過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）などの活性酸素種（ＲＯＳ）によって切断され得る切断可能なリンカーを含み得る。いくつかの態様において、ＲＯＳ切断可能リンカーは、チオケタール切断可能リンカーである。例えば、米国特許第８，３５４，４５５Ｂ２号を参照されたく、その全体が参照により本明細書に援用される。
ＩＩ．Ｂ．２．ｃ．ｐＨ依存性切断可能リンカー
いくつかの態様において、リンカーは、酸性条件下（ｐＨ＜７）で選択的に切断される連結基である酸切断可能連結基を含む「酸不安定性リンカー」である。
非限定的な例として、酸切断可能連結基は、酸性環境、例えば、約６．０、５．５、５．０以下で切断される。いくつかの態様において、ｐＨは、約６．５以下である。いくつかの態様において、リンカーは、一般的な酸として作用し得る酵素、例えば、ペプチダーゼ（基質特異的であり得る）またはホスファターゼなどの作用物質によって切断される。細胞内において、ある特定のｐＨの低いオルガネラ、例えば、エンドソーム及びリソソームは、酸切断可能連結基に対して切断環境を提供することができる。ヒト血清のｐＨは７．４であるが、細胞内の平均ｐＨはそれよりやや低く、約７．１～７．３の範囲である。エンドソームもまた５．５～６．０の範囲の酸性ｐＨを有し、リソソームは更により酸性のｐＨで約５．０ある。したがって、ｐＨ依存性切断可能リンカーは、当該技術分野において、エンドソーム的に不安定なリンカーと呼ばれることもある。
酸切断可能基は、一般式－Ｃ＝ＮＮ－、Ｃ（Ｏ）Ｏ、または－ＯＣ（Ｏ）を有し得る。別の非限定的な例において、エステル酸素に結合している炭素（アルコキシ基）が、例えば、アリール基、置換されたアルキル基、または三級アルキル基、例えば、ジメチルペンチルもしくはｔ－ブチルに結合している場合である。酸切断可能連結基の例としては、アミン、イミン、アミノエステル、安息香酸イミン、ジオルトエステル、ポリホスホエステル、ポリホスファゼン、アセタール、ビニルエーテル、ヒドラゾン、ｃｉｓ－アコニット酸、ヒドラジド、チオカルバモイル、イミジン、アジドメチル－メチル無水マレイン酸、チオプロピオン酸、マスクされたエンドソーム溶解剤、シトラコニル基、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。ジスルフィド結合もまたｐＨの影響を受けやすい。
いくつかの態様において、リンカーは、低ｐＨ不安定性ヒドラゾン結合を含む。そのような酸不安定性結合は、複合体、例えば、抗体薬物複合体の分野で広く使用されている。例えば、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ（２０１１）Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ １２：１４６０－７；Ｙｕａｎ ｅｔ ａｌ（２００８）Ａｃｔａ Ｂｉｏｍａｔｅｒ．４：１０２４－３７；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（２００７）Ａｃｔａ Ｂｉｏｍａｔｅｒ．６：８３８－５０；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ（２００７）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３２１：４６２－８；Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５８：２２９－３６；Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８－８４を参照されたい。
ある特定の態様において、リンカーは、ジオール及びケトンを形成する、酸性環境で不安定なケタール（例えば、７未満で約４を超えるｐＨ）；ジオール及びアルデヒドを形成する、酸性環境で不安定なアセタール（例えば、７未満で約４を超えるｐＨ）；アミン及びアルデヒドまたはケトンを形成する、酸性環境で不安定なイミンもしくはイミニウム（例えば、７未満で約４を超えるｐＨ）；酸性条件で不安定なケイ素－酸素－炭素連結；ケイ素－窒素（シラザン）連結；ケイ素－炭素連結（例えば、アリールシラン、ビニルシラン、及びアリルシラン）；マレアミド酸（無水マレイン酸誘導体及びアミンから合成されるアミド結合）；オルトエステル；ヒドラゾン；酸触媒による加水分解を受けるように設計された活性化カルボン酸誘導体（例えば、エステル、アミド））；またはビニルエーテルから選択される低ｐＨ不安定性結合を含む。
更なる例は、米国特許第９，７９０，４９４Ｂ２号及び同第８，１３７，６９５Ｂ２号に見出すことができ、それぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。
ＩＩ．Ｂ．２．ｄ．酵素切断可能リンカー
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、細胞内または細胞外の酵素、例えば、プロテアーゼ、エステラーゼ、ヌクレアーゼ、アミダーデによって切断可能なリンカーを含み得る。リンカー組み合わせで特定のリンカーを切断することができる酵素の範囲は、リンカーの特定の結合及び化学構造に依存する。したがって、ペプチドリンカーは、例えば、ペプチダーデによって切断することができ、エステル連結を含有するリンカーは、例えば、エステラーゼによって切断することができ、アミド連結を含むリンカーは、例えば、アミダーデによって切断することができる。
ＩＩ．Ｂ．２．ｅ．プロテアーゼ切断可能リンカー
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、プロテアーゼ切断可能リンカー、すなわち、内因性プロテアーゼによって切断することができるリンカーを含む。ある特定のペプチドのみが細胞内または細胞外で容易に切断される。例えば、Ｔｒｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，７９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，６２６－６２９（１９８２）及びＵｍｅｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．４３ Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６７７－６８４（１９８９）を参照されたい。切断可能なリンカーは、α－アミノ酸単位及びペプチド結合からなる切断可能部位を含有し得、化学的には１つのアミノ酸のカルボキシレートと第２のアミノ酸のアミノ基との間のアミド結合である。他のアミド結合、例えば、カルボキシレートとリシンのα－アミノ酸基との間の結合は、ペプチド結合ではないと理解され、切断不可能なものとみなされる。
いくつかの態様において、プロテアーゼ切断可能リンカーは、プロテアーゼ、一般に、例えば、ネプリライシン（ＣＡＬＬＡまたはＣＤｌＯ）、チメットオリゴペプチダーゼ（ＴＯＰ）、ロイコトリエンＡ４ヒドロラーゼ、エンドセリン変換酵素、ｓｔｅ２４プロテアーゼ、ノイロリシン、ミトコンドリア中間体ペプチダーゼ、間質コラゲナーゼ、コラゲナーゼ、ストロムライシン、マクロファージエラスターゼ、マトリライシン、ゼラチナーゼ、メプリン、プロコラーゲンＣ－エンドペプチダーゼ、プロコラーゲンＮ－エンドペプチダーゼ、ＡＤＡＭ及びＡＤＡＭＴメタロプロテアーゼ、ミエリン関連メタロプロテアーゼ、エナメリシン、腫瘍壊死因子α－変換酵素、インスリシン、ナリジリシン、ミトコンドリアプロセシングペプチダーゼ、マグノリシン、ダクチリシン様メタロプロテアーゼ、好中球コラゲナーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ、膜型マトリックスメタロプロテアーゼ、ＳＰ２エンドペプチダーゼ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、プラスミン、ウロキナーゼ、ヒト線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰα）、トリプシン、キモトリプシン、カルデクリン、膵臓エラスターゼ、膵臓エンドペプチダーゼ、エンテロペプチダーゼ、白血球エラスターゼ、骨髄芽球、キマーゼ、トリプターゼ、グランザイム、角質層キモトリプシン酵素、アクロシン、カリクレイン、補体成分及び因子、第２補体経路ｃ３／ｃ５コンベルターゼ、マンノース－結合タンパク質関連セリンプロテアーゼ、凝固因子、トロンビン、タンパク質ｃ、ｕ及びｔ型プラスミノーゲン活性化因子、カテプシンＧ、ヘプシン、プロスタシン、肝細胞成長因子活性化エンドペプチダーゼ、サブチリシン／ケキシン型プロタンパク質コンベルターゼ、フーリン、プロタンパク質コンベルターゼ、プロリルペプチダーゼ、アシルアミノアシルペプチダーゼ、ペプチジル－グリカミナーゼ、シグナルペプチダーゼ、ｎ－末端求核アミノヒドロラーゼ、２０ｓプロテアソーム、γ－グルタミルトランスペプチダーゼ、ミトコンドリアエンドペプチダーゼ、ミトコンドリアエンドペプチダーゼＩａ、ｈｔｒａ２ペプチダーゼ、マトリプターゼ、ｓｉｔｅ１プロテアーゼ、レグマイン、カテプシン、システインカテプシン、カルパイン、ユビキチンイソペプチダーゼＴ、カスパーゼ、グリコシルホスファチジルイノシトールタンパク質トランスアミダーゼ、がん凝固因子、プロホルモンチオールプロテアーゼ、γ－グルタミルヒドロラーゼ、ブレオマイシンヒドロラーゼ、セプラーゼ、カテプシンＢ、カテプシンＤ、カテプシンＬ、カテプシンＭ、プロテアーゼＫ、ペプシン、キモシン、ガストリクシン、レニン、ヤプシン及び／またはマプシン、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、または任意のＡｓｐ－Ｎ、Ｇｌｕ－Ｃ、Ｌｙｓ－ＣもしくはＡｒｇ－Ｃプロテアーゼに対する切断部位を含む。例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７７（２４）：７０２７－７０３７（２０１７）を参照されたく、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの態様において、切断可能なリンカーの構成成分は、１～１０個のアミノ酸残基を含むペプチドを含む。これらの態様において、ペプチドにより、プロテアーゼによるリンカーの切断が可能となり、それにより、リソソーム酵素などの細胞内プロテアーゼに曝露された際の生物学的に活性な分子の放出が容易になる（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８－７８４）。例示的なペプチドとしては、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、及びヘキサペプチドなどが挙げられるが、これらに限定されない。
ペプチドは、天然に生じる及び／または非天然であるアミノ酸残基を含み得る。「天然に生じるアミノ酸」という用語は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｈｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｉｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒを指す。「非天然アミノ酸」（すなわち、アミノ酸が天然に生じない）には、非限定的な例として、ホモセリン、ホモアルギニン、シトルリン、フェニルグリシン、タウリン、ヨードチロシン、セレノ－システイン、ノルロイシン（「Ｎｌｅ」）、ノルバリン（「Ｎｖａ」）、ベータ－アラニン、Ｌ－またはＤ－ナフタラニン、オルニチン（「Ｏｒｎ」）などが挙げられる。ペプチドは、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ及びＤ、またはプラスミンプロテアーゼによって酵素的に切断されるように設計及び最適化され得る。
アミノ酸にはまた、天然及び非天然アミノ酸のＤ型も含まれる。「Ｄ－」は、天然に生じる（「Ｌ－」）アミノ酸の配置に対して、「Ｄ」（右旋性）配置を有するアミノ酸を指す。天然及び非天然アミノ酸は、商業的に購入することができ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｔｅｃｈ）、または当該技術分野において知られている方法を使用して合成することができる。例示的なジペプチドとしては、バリン－アラニン、バリン－シトルリン、フェニルアラニン－リシン、Ｎ－メチル－バリン－シトルリン、シクロヘキシルアラニン－リシン、及びベータ－アラニン－リシンが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なトリペプチドとしては、グリシン－バリン－シトルリン（ｇｌｙ－ｖａｌ－ｃｉｔ）及びグリシン－グリシン－グリシン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｇｌｙ）が挙げられるが、これらに限定されない。
ＩＩ．Ｂ．２．ｆ．エステラーゼ切断可能リンカー
いくつかのリンカーは、エステラーゼによって切断される（「エステラーゼ切断可能リンカー」）。細胞内または細胞外に存在するエステラーゼ及びアミダーゼによって切断されるのは、ある特定のエステルのみであり得る。エステルは、カルボン酸とアルコールの縮合によって形成される。単純エステルは、脂肪族アルコールなどの単純アルコールと、小さな環状及び小さな芳香族アルコールで生成されるエステルである。エステルベースの切断可能な連結基の例としては、アルキレン基、アルケニレン基及びアルキニレン基のエステルが挙げられるが、これらに限定されない。エステル切断可能な連結基は、一般式－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－を有する。
ＩＩ．Ｂ．２．ｇ．ホスファターゼ切断可能リンカー
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、リン酸基を分解または加水分解する作用物質によって切断されるリン酸系切断可能連結基を含み得る。細胞内のリン酸基を切断する作用物質の例は、細胞内ホスファターゼなどの酵素である。リン酸系連結基の例は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＲｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－ＳＰ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－ＯＰ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－ＯＰ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｓ－、または－ＯＰ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｓ－である。様々な態様において、Ｒｋは、次のもの：ＮＨ２、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６－１０アリール、Ｃ１－６アルコキシ及びＣ６－１０アリール－オキシのうちのいずれかである。いくつかの態様において、Ｃ１－６アルキル及びＣ６－１０アリールは、非置換である。更なる非限定的な例は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＨ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｏ）（Ｈ）－Ｓ－、－ＯＰ（Ｓ）（Ｈ）－Ｓ－、または－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－である。
ＩＩ．Ｂ．２．ｈ．光活性化切断可能リンカー
いくつかの態様において、組み合わせリンカーは、光活性化切断可能リンカー、例えば、ニトロベンジルリンカーまたはニトロベンジル反応性基を含むリンカーを含む。
ＩＩ．Ｂ．２．ｉ．自己崩壊性リンカー
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、自己崩壊性リンカーを含む。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）中の自己崩壊性リンカーは、プロテアーゼ切断可能リンカーの酵素的切断後に１，４脱離を受ける。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）中の自己崩壊性リンカーは、プロテアーゼ切断可能リンカーの酵素的切断後に１，６脱離を受ける。いくつかの態様において、自己崩壊性リンカーは、例えば、ｐ－アミノベンジルカルバメート（ｐＡＢＣ）、ｐ－アミノベンジルエーテル（ＰＡＢＥ）、ｐ－アミノベンジルカーボネートなどのｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）誘導体、またはこれらの組み合わせである。ある特定の態様において、自己崩壊性リンカーは、芳香族基を含む。いくつかの態様において、芳香族基は、ベンジル、シンナミル、ナフチル、及びビフェニルからなる群から選択される。いくつかの態様において、芳香族基は、複素環式である。他の態様において、芳香族基は、少なくとも１つの置換基を含む。いくつかの態様において、少なくとも１つの置換基は、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、ＯＨ、メチル、メトキシ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＯ３＋、ＮＨＣＯＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣＯＣＦ３、アルキル、ハロアルキル、Ｃ１－Ｃ８アルキルハライド、カルボキシレート、サルフェート、スルファメート、及びスルホネートからなる群から選択される。他の態様において、芳香族基中の少なくとも１つのＣは、Ｎ、Ｏ、またはＣ－Ｒ＊（式中、Ｒ＊は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、ＯＨ、メチル、メトキシ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＯ３＋、ＮＨＣＯＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣＯＣＦ３、アルキル、ハロアルキル、Ｃ１－Ｃ８アルキルハライド、カルボキシレート、サルフェート、スルファメート、及びスルホネートから選択される）で置換される。
いくつかの態様において、自己崩壊性リンカーは、アミノベンジルカルバメート基（例えば、パラ－アミノベンジルカルバメート）、アミノベンジルエーテル基、またはアミノベンジルカーボネート基を含む。一態様において、自己崩壊性リンカーは、ｐ－アミノベンジルカルバメート（ｐＡＢＣ）である。ｐＡＢＣは、自己崩壊性部位に特異的なプロドラッグ活性化のための最も効率的で最も広く使用されているコネクター連結である（例えば、Ｃａｒｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：４７９－４８０（１９８１）；ＷＯ１９８１／００１１４５；Ｒａｕｔｉｏ ｅｔ ｌａ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．７：２５５－２７０（２００８）；Ｓｉｍｐｌｉｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ １３：５１９－５４７（２００８）参照）。
いくつかの態様において、自己崩壊性リンカーは、生物学的に活性な分子（例えば、ＡＳＯ）をプロテアーゼ切断可能基質（例えば、Ｖａｌ－Ｃｉｔ）に接続する。特定の態様において、ｐＡＢＣ自己崩壊性リンカーのカルバメート基は、生物学的に活性な分子（例えば、ＡＳＯ）のアミノ基に接続され、ｐＡＢＣ自己崩壊性リンカーのアミノ基は、プロテアーゼにより切断可能な基質に接続される。
芳香環のアミノベンジル基は、芳香環上で１つ以上（例えば、Ｒ１及び／またはＲ２）の置換基で任意選択により置換され得、環を形成する４つの非置換炭素のうちの１つに別様に結合している水素を置き換える。本明細書で使用される場合、「Ｒｘ」の記号（例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４）は、本明細書に記載される置換基を表す一般的な略号である。置換基は、ｐ－アミノベンジル基の自己崩壊性能力を改善することができる（Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１：２７５９－２７７０（１９９９）；Ｓｙｋｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１：１６０１－１６０８（２０００）も参照）。
自己崩壊性脱離は、例えば、１，４脱離、１，６脱離（例えば、ｐＡＢＣ）、１，８脱離（例えば、ｐ－アミノ－シンナミルアルコール）、β－脱離、環化－脱離（例えば、４－アミノブタノールエステル及びエチレンジアミン）、環化／ラクトン化、環化／ラクトール化などを介して起こり得る。例えば、Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１５：１８０２－１８２６（２００８）；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３：４７５－４８７（２０００）を参照されたい。
いくつかの態様において、自己崩壊性リンカーは、例えば、シンナミル、ナフチル、またはビフェニル基を含み得る（例えば、Ｂｌｅｎｃｏｗｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｏｌｙｍ．Ｃｈｅｍ．２：７７３－７９０（２０１１）参照）。いくつかの態様において、自己崩壊性リンカーは、複素環式環を含む（例えば、米国特許第７，３７５，０７８号；同第７，７５４，６８１号参照）。多数のホモ芳香族（例えば、Ｃａｒｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：４７９（１９８１）；Ｓｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：２９７５（１９９０）；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４３：１１９７（１９７８）；Ａｎｄｒｉａｎｏｍｅｎｊａｎａｈａｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２：１９０３（１９９２）参照）、及びクマリン（例えば、Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．４６：５５３（２０１０）参照）、フラン、チオフェン、チアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピロール、ピラゾール（例えば、Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６：５５３３（２００３）参照）、ピリジン（例えば、Ｐｅｒｒｙ－Ｆｅｉｇｅｎｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．７：４８２５（２００９）参照）、イミダゾン（例えば、Ｎａｉｌｏｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．Ｚ：１２６７（１９９９）；Ｈａｙ ａｎｄ Ｄｅｎｎｙ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３８：８４２５（１９９７）参照）、及び水と生理学的条件の両方で自己崩壊性である複素芳香族基に基づくトリアゾール（例えば、Ｂｅｒｔｒａｎｄ ａｎｄ Ｇｅｓｓｏｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．７２：３５９６（２００７）参照）が当該技術分野において知られている。また、米国特許第７，６９１，９６２号；同第７，０９１，１８６号；米国特許公開第ＵＳ２００６／０２６９４８０号；同第ＵＳ２０１０／００９２４９６号；同第ＵＳ２０１０／０１４５０３６号；同第ＵＳ２００３／０１３０１８９号；同第ＵＳ２００５／０２５６０３０号）も参照されたい。
いくつかの態様において、本明細書で開示されるリンカー組み合わせは、タンデムで、１つを超える自己崩壊性リンカー、例えば、２つ以上のｐＡＢＣ単位を含む。例えば、ｄｅ Ｇｒｏｏｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６６：８８１５－８８３０（２００１）を参照されたい。いくつかの態様において、本明細書で開示されるリンカー組み合わせは、自己崩壊性リンカー（例えば、蛍光性プローブに連結されたｐ－アミノベンジルアルコールまたはｐ－カルボキシベンズアルデヒドもしくはグリオキシル酸のヘミチオアミナール誘導体）（例えば、Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．８：１７７７－１７８０（２０１０）参照）を含み得る。
自己崩壊性リンカー中の置換基が左から右に記述される従来の化学式で特定されている場合、これらは、その構造を右から左に記述して得られる化学的に同一の置換基も等しく包括する。例えば、「－ＣＨ２Ｏ－」は、「－ＯＣＨ２－」も列挙することが意図される。
自己崩壊性中の置換基、例えば、上に議論されるｐ－アミノベンジル自己崩壊性リンカー中のＲ１及び／またはＲ２置換基は、例えば、アルキル、アルキレン、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルアミノ、アルキルチオ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールオキシ、ヘテロアリールなどを含み得る。本開示の化合物が１つを超える置換基を含む場合、置換基のそれぞれは独立して選択される。
いくつかの特定の態様において、自己崩壊性リンカーは、切断可能なペプチドリンカーに結合され、次式を有し、その組み合わせは、次式：
－Ａａ－Ｙｙ－
（式中、－Ａ－は独立してアミノ酸単位であり、ａは独立して１～１２の整数であり、－Ｙ－は自己崩壊性スペーサーであり、ｙは１、または２である）を有する。いくつかの態様において、－Ａａ－は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、またはヘキサペプチドである。いくつかの態様において、－Ａａ－は、バリン－アラニン、バリン－シトルリン、フェニルアラニン－リシン、Ｎ－メチルバリン－シトルリン、シクロヘキシルアラニン－リシン、及びベータ－アラニン－リシンからなる群から選択される。いくつかの態様において、－Ａａ－は、バリン－アラニンまたはバリン－シトルリンである。
いくつかの態様において、自己崩壊性リンカー－Ｙｙ－は、次式：
Figure 2022550248000015
 （式中、各Ｒ２は、独立して、Ｃ１－８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－８アルキル）、ハロゲン、ニトロ、またはシアノであり、ｍは、０～４の整数である）を有する。いくつかの態様において、ｍは、０、１、または２である。いくつかの態様において、ｍは、０である。
いくつかの態様において、切断可能なリンカーは、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメートまたはバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートである。
ＩＩ．Ｂ．３．反応性部分（ＲＭ）
本開示のＡＳＯは、化学合成またはその構成成分間の化学反応のいずれかを介して生成される。例えば、いくつかの態様において、反応性基（例えば、マレイミド）を含むアンカリング部分は、マレイミド反応基を含むＢＡＭと反応して、本開示の改変されたＢＡＭをもたらすことができ、ここで、アンカリング部分は、エクソソームの膜の脂質二重層に挿入され、エクソソームの表面にＢＡＭを結合することができる。
本開示の改変されたＢＡＭの任意の構成成分または構成成分の群は、少なくともＲＧ及び／またはＲＭを含むことができ、それにより、１つの反応または一連の反応を通じて構成成分を結合させ、本開示の改変されたＢＡＭをもたらすことが可能となる。改変されたＢＡＭを生産するための例示的な合成スキーマとしては、次が挙げられる：
［ＡＭ］－／ＲＧ／＋／ＲＭ／－［ＢＡＭ］→［ＡＭ］－［ＢＡＭ］
［ＡＭ］－／ＲＭ／＋／ＲＧ／－［ＢＡＭ］→［ＡＭ］－［ＢＡＭ］
［ＡＭ］－［Ｌ］－／ＲＭ／＋／ＲＧ／－［ＢＡＭ］→［ＡＭ］－［Ｌ］－［ＢＡＭ］
［ＡＭ］－［Ｌ］－／ＲＧ／＋／ＲＭ／－［ＢＡＭ］→［ＡＭ］－［Ｌ］－［ＢＡＭ］
［ＡＭ］－／ＲＭ／＋／ＲＧ／－［Ｌ］－［ＢＡＭ］→［ＡＭ］－［Ｌ］－［ＢＡＭ］
［ＡＭ］－／ＲＧ／＋／ＲＭ／－［Ｌ］－［ＢＡＭ］→［ＡＭ］－［Ｌ］－［ＢＡＭ］
［ＡＭ］－［Ｌ］－／ＲＭ／＋／ＲＧ／－［Ｌ］－［ＢＡＭ］→［ＡＭ］－［Ｌ］－［Ｌ］－［ＢＡＭ］
［ＡＭ］－［Ｌ］－／ＲＧ／＋／ＲＭ／－［Ｌ］－［ＢＡＭ］→［ＡＭ］－［Ｌ］－［Ｌ］－［ＢＡＭ］
ここで、［ＡＭ］はアンカリング部分であり、［ＢＡＭ］は生物学的に活性な分子であり、［Ｌ］はリンカーまたはリンカー組み合わせであり、／ＲＭ／は反応性部分であり、／ＲＧ／は反応性基である。提供される略図のいずれにおいても、ＢＡＭは、例えば、その５’末端または３’末端を介して、結合することができる。
ＢＡＭの合成における中間体を生産するための例示的な合成スキーマには、次が挙げられる：
［ＡＭ］－／ＲＭ／＋／ＲＧ／－［Ｌ］→［ＡＭ］－［Ｌ］
［ＡＭ］－／ＲＧ／＋／ＲＭ／－［Ｌ］→［ＡＭ］－［Ｌ］
［Ｌ］－／ＲＭ／＋／ＲＧ／－［Ｌ］→［Ｌ］－［Ｌ］
［Ｌ］－／ＲＧ／＋／ＲＭ／－［Ｌ］→［Ｌ］－［Ｌ］
［Ｌ］－／ＲＭ／＋／ＲＧ／－［ＢＡＭ］→［Ｌ］－［ＢＡＭ］
［Ｌ］－／ＲＧ／＋／ＲＭ／－［ＢＡＭ］→［Ｌ］－［ＢＡＭ］
ここで、［ＡＭ］はアンカリング部分であり、［ＢＡＭ］は生物学的に活性な分子であり、［Ｌ］はリンカーまたはリンカー組み合わせであり、／ＲＭ／は反応性部分であり、／ＲＧ／は反応性基である。提供される略図のいずれにおいても、ＢＡＭは、例えば、その５’末端または３’末端を介して、結合することができる。
いくつかの態様において、反応性基「／ＲＧ／」は、例えば、アミノ基、チオール基、ヒドロキシル基、カルボン酸基、またはアジド基であり得る。これらの反応性基と反応することができる特定の反応性部分「／ＲＭ／」は、以下に、より詳細に記載される。
［ＡＭ］－（／ＲＭ／）ｎ＋（／ＲＧ／－［Ｌ］－［ＢＡＭ］）ｎ→［ＡＭ］－［Ｌ］－［ＢＡＭ］
本明細書で開示されるアンカリング部分、リンカーもしくはリンカー組み合わせ、またはＢＡＭのいずれも、反応性部分、例えば、アミノ反応性部分（例えば、ＮＨＳ－エステル、ｐ－ニトロフェノール、イソチオシアネート、またはアルデヒド）、チオール反応性部分（例えば、アクリレート、マレイミド、またはピリジルジスルフィド）、ヒドロキシ反応性部分（例えば、イソチオシアネートまたはイソシアネート）、カルボン酸反応性部分（例えば、エポキシド）、またはアジド反応性部分（例えば、アルキン）にコンジュゲートすることができる。
本明細書で開示される２つの構成成分（例えば、アンカリング部分及びＢＡＭ、またはアンカリング部分及びリンカー、またはアンカリング部分及びリンカー、または２つのリンカー、またはリンカー及びＢＡＭ、または２つのアンカリング部分）を共有結合するために使用することができる例示的な反応性部分としては、例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート、Ｎ－４－マレイミド酪酸、Ｓ－（２－ピリジルジチオ）システアミン、ヨードアセトキシスクシンイミド、Ｎ－（４－マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミド、Ｎ－［５－（３’－マレイミドプロピルアミド）－１－カルボキシペンチル］イミノジ酢酸、Ｎ－（５－アミノペンチル）イミノジ酢酸、及び１’－［（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト）が挙げられる。二官能性リンカー（２つの官能基を含有するリンカー）もまた使用可能である。
いくつかの態様において、アンカリング部分、リンカー、またはＢＡＭは、末端オキシアミノ基、例えば、－ＯＮＨ２、ヒドラジノ基、－ＮＨＮＨ２、メルカプト基（すなわち、ＳＨまたはチオール）、またはオレフィン（例えば、ＣＨ＝ＣＨ２）を含み得る。いくつかの態様において、アンカリング部分、リンカー、またはＢＡＭは、例えば、末端位置に、求電子性部分、例えば、アルデヒド、アルキルハライド、メシレート、トシレート、ノシレート、もしくはブロシレート、または活性化カルボン酸エステル、例えば、ＮＨＳエステル、ホスホロアミダイト、もしくはペンタフルオロフェニルエステルを含み得る。いくつかの態様において、共有結合は、リガンドの求核基、例えば、ヒドロキシル、チオールまたはアミノ基を求電子基とカップリングさせることによって形成することができる。本発明は、当該技術分野において知られているものを含むがこれらに限定されない、あらゆる種類の反応性基及び反応性部分に適用可能である。
「保護基」という用語は、本明細書で使用される場合、合成手順中の望ましくない反応に対して、ヒドロキシル基、アミノ基及びチオール基を含むがこれらに限定されない反応性基を保護する、当該技術分野において知られている不安定な化学部分を指す。保護基は、典型的に、他の反応部位での反応中に部位を保護するために選択的及び／または直交的に使用され、次いで、保護されていない基をそのまま除去するか、または更なる反応に利用することができる。当該技術分野において知られている保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）に概ね記載されている。
更に、様々な合成ステップが別の順序でまたは所望の化合物を得るために実施され得る。本明細書に記載される化合物の合成に有用な合成化学変換及び保護基の方法論（保護及び脱保護）は、当該技術分野において知られており、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｄ．Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９１）；Ｌ．Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９４）；ならびにＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９５）及びその後続版に記載されているものなどが含まれる。
当該技術分野において知られている固相合成は、追加的または代替的に採用され得る。自動合成技術を含む好適な固相技術は、Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ，ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９１）及びＴｏｙ，Ｐ．Ｈ．；Ｌａｍ，Ｙ（ｅｄ．），Ｓｏｌｉｄ－Ｐｈａｓｅ Ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（２０１２）に記載されている。
いくつかの態様において、反応性基は、別の方法として、以下に記載される１つを超える反応性部分と反応することができる。
ＩＩ．Ｂ．３．ａ．アミン反応性部分
いくつかの態様において、反応性部分は、アミン反応性部分である。本明細書で使用される場合、「アミン反応性部分」という用語は、アミノ部分、例えば、第一級アミンを有する反応性基と反応することができる化学基を指す。例示的なアミン反応性部分は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ－エステル）、ｐ－ニトロフェノール、イソチオシアネート、イソシアネート、及びアルデヒドである。第一級アミンと反応する別の反応性部分も当該技術分野においてよく知られている。いくつかの態様において、アミン反応性部分は、本開示のアンカリング部分、リンカー組み合わせ、またはＢＡＭの末端部分に結合され得る。
いくつかの態様において、アミン反応性部分は、ＮＨＳ－エステルである。典型的に、ＮＨＳ－エステル反応性部分は、反応性基の第一級アミンと反応して、安定したアミド結合及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）をもたらす。
いくつかの態様において、アミン反応性部分は、ｐ－ニトロフェノール基である。典型的に、ｐ－ニトロフェノール反応性部分は、反応性基の第一級アミンと反応して、安定したカルバメート部分及びｐ－ニトロフェノールをもたらす、活性化カルバメートである。
いくつかの態様において、アミン反応性部分は、イソチオシアネートである。典型的に、イソチオシアネートは、反応性基の第一級アミンと反応して、安定したチオ尿素部分をもたらす。
いくつかの態様において、アミン反応性部分は、イソシアネートである。典型的に、イソシアネートは、反応性基の第一級アミンと反応して、安定した尿素部分をもたらす。
いくつかの態様において、アミン反応性部分は、アルデヒドである。典型的に、アルデヒドは、第一級アミンと反応してシッフ塩基を形成し、これが還元的アミノ化を介して更に還元されて共有結合を形成することができる。
ＩＩ．Ｂ．３．ｂ．チオール反応性部分
いくつかの態様において、反応性部分は、チオール反応性部分である。本明細書で使用される場合、「チオール反応性部分」という用語は、チオール部分（またはメルカプト基）を有する反応性基と反応することができる化学基を指す。例示的なチオール反応性部分は、アクリレート、マレイミド、及びピリジルジスルフィドである。チオールと反応する別の反応性部分も当該技術分野においてよく知られている。いくつかの態様において、チオール反応性部分は、本開示のアンカリング部分、リンカー組み合わせ、またはＢＡＭの末端部分に結合され得る。
いくつかの態様において、チオール反応性部分は、アクリレートである。典型的に、アクリレートは、アクリレートのカルボニルに対するβ炭素でチオールと反応して、安定したスルフィド結合を形成する。いくつかの態様において、チオール反応性部分は、マレイミドである。典型的に、マレイミドは、カルボニルに対するβ炭素のいずれかでチオールと反応して、安定したスルフィド結合を形成する。いくつかの態様において、チオール反応性部分は、ピリジルジスルフィドである。典型的に、ピリジルジスルフィドは、ピリジルに対する硫黄原子βでチオールと反応して、安定したジスルフィド結合及びピリジン－２－チオンを形成する。
ＩＩ．Ｂ．３．ｃ．ヒドロキシ反応性部分
いくつかの態様において、反応性部分は、ヒドロキシル反応性部分である。本明細書で使用される場合、「ヒドロキシル反応性部分」という用語は、ヒドロキシル部分を有する反応性基と反応することができる化学基を指す。例示的なヒドロキシル反応性部分は、イソチオシアネート及びイソシアネートである。ヒドロキシル部分と反応する別の反応性部分も当該技術分野においてよく知られている。いくつかの態様において、ヒドロキシル反応性部分は、本開示のアンカリング部分、リンカー組み合わせ、またはＢＡＭの末端部分に結合され得る。
いくつかの態様において、ヒドロキシル反応性部分は、イソチオシアネートである。典型的に、イソチオシアネートは、反応性基のヒドロキシルと反応して、安定したカルバモチオエート部分をもたらす。いくつかの態様において、アミン反応性部分は、イソシアネートである。典型的に、イソシアネートは、反応性基のヒドロキシルと反応して、安定したカルバメート部分をもたらす。
ＩＩ．Ｂ．３．ｄ．カルボン酸反応性部分
いくつかの態様において、反応性部分は、カルボン酸反応性部分である。本明細書で使用される場合、「カルボン酸反応性部分」という用語は、カルボン酸部分を有する反応性基と反応することができる化学基を指す。例示的なカルボン酸反応性部分は、エポキシドである。カルボン酸部分と反応する別の反応性部分も当該技術分野においてよく知られている。いくつかの態様において、カルボン酸反応性部分は、本開示のアンカリング部分、リンカー組み合わせ、またはＢＡＭの末端部分に結合され得る。
いくつかの態様において、カルボン酸反応性部分は、エポキシドである。典型的に、エポキシドは、エポキシドの炭素原子のいずれかで反応性基のカルボン酸と反応して、２－ヒドロキシ酢酸エチル部分を形成する。
ＩＩ．Ｂ．３．ｅ．アジド反応性部分
いくつかの態様において、反応性部分は、アジド反応性部分である。本明細書で使用される場合、「アジド反応性部分」という用語は、アジド部分を有する反応性基と反応することができる化学基を指す。例示的なアジド反応性部分は、アルキンである。アジド部分と反応する別の反応性部分も当該技術分野においてよく知られている。いくつかの態様において、カルボン酸反応性部分は、本開示のアンカリング部分、リンカー組み合わせ、またはＢＡＭの末端部分に結合され得る。
いくつかの態様において、アジド反応性部分は、アルキンである。典型的に、アルキンは、「クリックケミストリー」とも称される１，３－双極子環化付加反応を介して、反応性基のアジドと反応して、１，２，３－トリアゾール部分を形成する。
ＩＩ．Ｂ．４．具体例及びトポロジー
本開示の特定の態様において、リンカー組み合わせは、次式のリンカー：
［アルキルリンカー］ｍ－［ＰＥＧ１］ｎ－［ＰＥＧ２］ｏ
（式中、ｍ、ｎ、及びｏは０または１であり、ｍ、ｎ、またはｏのうちの少なくとも１つは、ゼロではない）からなる。そのような式に従う例示的なリンカー組み合わせは、Ｃ６－ＴＥＧ－ＨＥＧ、Ｃ６－ＨＥＧ、Ｃ６－ＴＥＧ、Ｃ６、ＴＥＧ－ＨＥＧ、ＴＥＧ、Ｃ８－ＴＥＧ－ＨＥＧ、Ｃ８－ＨＥＧ、Ｃ８－ＴＥＧ、及びＣ８である。
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、切断不可能なリンカー（例えば、ＴＥＧまたはＨＥＧ）を、１つ以上の切断可能なリンカー、例えば、酵素切断可能リンカー及び自己崩壊性リンカーと組み合わせて含む。
特定の態様において、リンカー組み合わせは、以下に示されるように、ＴＥＧ（切断不可能なリンカー）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ（切断可能なリンカー）－ｐＡＢ（自己崩壊性リンカー）のリンカー組み合わせを含む。
［コレステロール］－［ＴＥＧ］－［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］－［ｐＡＢ］
Figure 2022550248000016
アンカリング部分の具体的な組み合わせ及びリンカー組み合わせは、以下の表に例示される。
Figure 2022550248000017
Figure 2022550248000018
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、一般構造［ＡＭ］－［リンカー１］－［リンカー２］－［ＢＡＭ］を有し、ここで、アンカリング部分［ＡＭ］はコレステロール、パルミチン酸及びトコフェロールから選択され、第１のリンカー［リンカー１］は疎水性リンカーであり、第２のリンカー［リンカー２］は親水性リンカーである。他の態様において、リンカー組み合わせは、一般構造［ＡＭ］－［リンカー１］－［リンカー２］－［ＢＡＭ］を有し、ここで、アンカリング部分［ＡＭ］はコレステロール、パルミチン酸及びトコフェロールから選択され、第１のリンカー［リンカー１］は親水性リンカーであり、第２のリンカー［リンカー２］は親水性リンカーである。他の態様において、いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、一般構造［ＡＭ］－［リンカー１］－［リンカー２］－［ＡＳＯ］を有し、ここで、アンカリング部分［ＡＭ］はコレステロール、パルミチン酸及びトコフェロールから選択され、第１のリンカー［リンカー１］はＣ６リンカー、Ｃ８リンカー、ＴＥＧリンカー、及びＨＥＧリンカーから選択され、第２のリンカー［リンカー２］はＴＥＧ及びＨＥＧから選択される親水性リンカーである。
いくつかの態様において、リンカー組み合わせは、一般構造［ＡＭ］－［リンカー１］－［リンカー２］－［リンカー３］－［ＡＳＯ］を有し、ここで、アンカリング部分［ＡＭ］は脂質（例えば、リン脂質）であり、第１のリンカー［リンカー１］はＨＥＧ、ＴＥＧ、ＴＥＧ－ＨＥＧ、及びＣ６からなる群から選択されるか、または不在であり、第２のリンカー［リンカー２］はジスルフィド、イミン、チオケタール、トリ／ジヌクレオチド、及びＶａｌ－Ｃｉｔからなる群から選択され、第３のリンカー［リンカー３］はＨＥＧ、ＴＥＧ、ＴＥＧ－ＨＥＧ、及びＣ６からなる群から選択されるか、または不在である。
本開示の具体的なリンカー組み合わせは、以下に例示される。
［コレステロール］－［ＴＥＧ］－［ＨＥＧ］－［ＢＡＭ］
Figure 2022550248000019
 ［コレステロール］－［ＳＭａｌ］－［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］－［ｐＡＢ］－［ＢＡＭ］
Figure 2022550248000020
 ［コレステロール］－［ＴＥＧ］－［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］－［Ｃ６］－［ＢＡＭ］
Figure 2022550248000021
 ［コレステロール］－［ＴＥＧ］－［ＳＳ］－［Ｃ６］－［ＢＡＭ］
Figure 2022550248000022
 ここで、［コレステロール］はコレステロールアンカリング部分であり、［ＴＥＧ］はＴＥＧ切断不可能なリンカーであり、［ＨＥＧ］はＨＥＧ切断不可能なリンカーであり、［ＳＳ］はジスルフィド酸化還元切断可能リンカーであり、［Ｃ６］はアルキル切断不可能なリンカーであり、［ＳＭａｌ］はＳ－マレイミドであり、［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］はバリン－シトルリン切断可能リンカーであり、［ｐＡＢ］はｐＡＢ自己崩壊性リンカーである。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、上に提供される例示的な構造に従う構造であって、１つ以上の構成成分が、例として示されるものと同じクラスの構成成分で置き換えられている構造を有する。例えば、［コレステロール］アンカリング部分は、本明細書で開示される別のアンカリング部分によって置換することができ、［ＴＥＧ］は、本明細書で開示される別のポリマー性切断不可能リンカー（例えば、ＨＥＧ、ＰＥＧ、ＰＧ）によって置換することができ、［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］は、別のペプチダーゼ切断可能リンカーによって置き換えることができ、あるいは、［ｐＡＢ］は、別の自己崩壊性リンカーよって置換することができる。
本開示の追加の具体的なリンカー組み合わせは、以下に例示される。
［飽和リン脂質；エタノールアミン；ＤＬＰＥ］－［ＴＥＧ］－［ＢＡＭ］
Figure 2022550248000023
 ［不飽和リン脂質；エタノールアミン；ＤＯＰＥ］－［ＢＡＭ］
Figure 2022550248000024
 ［飽和脂肪酸；ラウリン酸］－［ＴＥＧ］－［Ｃ６］－［ＢＡＭ］
Figure 2022550248000025
 ［不飽和脂肪酸；リノール酸］－［ＴＥＧ］－［Ｃ６］－［ＢＡＭ］
Figure 2022550248000026
 ［ステアリン酸］－［ＴＥＧ］－［ＨＥＧ］－［ＢＡＭ］
Figure 2022550248000027
ＩＩ．Ｃ．生物学的に活性な分子
いくつかの態様において、本明細書で開示されるＥＶ（例えば、エクソソーム）は、ペイロード（アンカリング部分を介して、ＥＶ、例えば、エクソソームに結合された生物学的に活性な分子）を標的に送達することが可能である。ペイロードは、ＥＶ（例えば、エクソソーム）と接触した標的（例えば、標的細胞）に作用する薬剤である。接触は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは対象において生じ得る。マレイミド部分を介してＥＶ（例えば、エクソソーム）に結合することができるペイロードの非限定的な例としては、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含むか、または転写を阻害するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素などのポリペプチドをコードするＤＮＡもしくはｍＲＮＡ分子、またはｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、もしくはｓｉＲＮＡなどの制御機能を有するＲＮＡ分子）、アミノ酸（例えば、翻訳を阻害する、検出可能な部分もしくは毒素を含むアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、及び小分子（例えば、小分子薬物及び毒素）などの薬剤が挙げられる。いくつかの態様において、ペイロードは、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の内腔内にある。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、１つを超えるペイロードを含み得、例えば、第１のペイロードは、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の内腔の溶液中にあり、第２のペイロードは、アンカリング部分を介して、例えば、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の外部表面に結合される。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子（ペイロード、ＢＡＭ）は、ＥＶ、例えば、エクソソームとともに天然に生じるものではない。いくつかの態様において、ペイロード（ＢＡＭ）は、非天然である。いくつかの態様において、ＢＡＭを含むＥＶは、非天然である。
いくつかの態様において、ペイロードは、腫瘍抗原を標的とする。腫瘍抗原の非限定的な例としては、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、ムチン１（ＭＵＣ１）、Ｔｎ－ＭＵＣ１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、チロシナーゼ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ｃＭＥＴ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＶＥＧＦＲ、アルファ－葉酸受容体、ＣＥ７Ｒ、ＩＬ－３、がん－精巣抗原（ＣＴＡ）、ＭＡＲＴ－１ｇｐ１００、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド、またはこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの態様において、ペイロードは、小分子である。いくつかの態様において、小分子は、タンパク質分解誘導キメラ分子（ＰＲＯＴＡＣ）である。
いくつかの態様において、ペイロードは、ヌクレオチドを含み、ここで、ヌクレオチドは、インターフェロン遺伝子タンパク質活性化因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストである。ＳＴＩＮＧは、細菌によって典型的に産生される環状ジヌクレオチドの細胞質センサーである。活性化すると、Ｉ型インターフェロンの産生を引き起こし、免疫応答を開始する。
いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、アンカリング部分を介してＥＶ（例えば、エクソソーム）に共有結合的に連結された１つ以上のＳＴＩＮＧアゴニストを含む。いくつかの態様において、ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストまたは非環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストを含む。
環状プリンジヌクレオチド、例えば、限定するものではないが、ｃＧＭＰ、環状ジ－ＧＭＰ（ｃ－ジ－ＧＭＰ）、ｃＡＭＰ、環状ジ－ＡＭＰ（ｃ－ジ－ＡＭＰ）、環状－ＧＭＰ－ＡＭＰ（ｃＧＡＭＰ）、環状ジ－ＩＭＰ（ｃ－ジ－ＩＭＰ）、環状ＡＭＰ－ＩＭＰ（ｃＡＩＭＰ）、及びその任意の類似体は、患者の免疫応答または炎症応答を刺激または強化することが知られている。ＣＤＮは、環状ジヌクレオチドを連結する２’２’、２’３’、２’５’、３’３’、もしくは３’５’結合、またはこれらの任意の組み合わせを有し得る。
環状プリンジヌクレオチドを標準的な有機化学技術により修飾して、プリンジヌクレオチドの類似体を生産することができる。好適なプリンジヌクレオチドには、アデニン、グアニン、イノシン、ヒポキサンチン、キサンチン、イソグアニン、または当該技術分野において知られている任意の他の適切なプリンジヌクレオチドが含まれるが、これらに限定されない。環状ジヌクレオチドは、修飾された類似体であってもよい。当該技術分野において知られている任意の好適な修飾を使用することができ、これらには、限定するものではないが、ホスホロチオエート、ビホスホロチオエート、フッ素化、及び二フッ素化修飾が含まれる。
非環状ジヌクレオチドアゴニストは、５，６－ジメチルキサンテノン－４－酢酸（ＤＭＸＡＡ）または当該技術分野において知られている任意の他の非環状ジヌクレオチドアゴニストなども使用され得る。
任意のＳＴＩＮＧアゴニストが使用され得ることが企図される。ＳＴＩＮＧアゴニストのなかでも、ＤＭＸＡＡ、ＳＴＩＮＧアゴニスト－１、ＭＬＲＲ－Ｓ２ＣＤＡ、ＭＬＲＲ－Ｓ２ｃ－ジ－ＧＭＰ、ＭＬ－ＲＲ－Ｓ２ｃＧＡＭＰ、２’３’－ｃ－ジ－ＡＭ（ＰＳ）２、２’３’－ｃＧＡＭＰ、２’３’－ｃＧＡＭＰｄＦＨＳ、３’３’－ｃＧＡＭＰ、３’３’－ｃＧＡＭＰｄＦＳＨ、ｃＡＩＭＰ、ｃＡＩＭ（ＰＳ）２、３’３’－ｃＡＩＭＰ、３’３’－ｃＡＩＭＰｄＦＳＨ、２’２’－ｃＧＡＭＰ、２’３’－ｃＧＡＭ（ＰＳ）２、３’３’－ｃＧＡＭＰ、ｃ－ジ－ＡＭＰ、２’３’－ｃ－ジ－ＡＭＰ、２’３’－ｃ－ジ－ＡＭ（ＰＳ）２、ｃ－ジ－ＧＭＰ、２’３’－ｃ－ジ－ＧＭＰ、ｃ－ジ－ＩＭＰ、ｃ－ジ－ＵＭＰまたはこれらの任意の組み合わせである。特定の態様において、ＳＴＩＮＧアゴニストは、３’３’－ｃＡＩＭＰｄＦＳＨ、別名３－３ｃＡＩＭＰｄＦＳＨである。当該技術分野において知られている更なるＳＴＩＮＧアゴニストもまた使用され得る。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＡＤＣである。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、合成抗腫瘍薬（例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）（ベドチン））、サイトカイン放出阻害物質（例えば、ＭＣＣ９５０）、ｍＴＯＲ阻害物質（例えば、ラパマイシン及びその類似体（ラパログ））、オートタキシン阻害物質（例えば、ＰＡＴ４０９またはＰＡＴ５０５）、リゾホスファチジン酸受容体アンタゴニスト（例えば、ＢＭＳ－９８６０２０）、ＳＴＩＮＧアンタゴニスト（例えば、ＣＬ６５６）、またはこれらの任意の組み合わせ）を含む小分子である。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、融合性ペプチドである。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ｉｎ ｖｉｖｏで発現される様々な遺伝子（転写物）を標的とする。いくつかの態様において、本開示の生物学的に活性な分子は、米国特許第５，０３４，５０６号に開示されているモルフォリノ骨格構造を含み、当該特許は、その全体が参照により本明細書に援用される。いくつかの態様において、本開示の生物学的に活性な分子は、ホスホロジアミデートモルフォリノオリゴマー（ＰＭＯ）を含み、これは、Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．１９９７，７：６３－７０に記載されているように、デオキシリボース部分がモルフォリン環によって置き換えられ、荷電性ホスホジエステルサブユニット間連結が非荷電性ホスホロジアミデート連結によって置き換えられているものである。したがって、いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ホスホロジアミデートモルフォリノオリゴマー（ＰＭＯ）、またはペプチド結合ホスホロジアミデートモルフォリノオリゴマー（ＰＰＭＯ）である。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、マクロファージを標的とする。他の態様において、生物学的に活性な分子は、マクロファージの極性化を誘導する。マクロファージの極性化は、マクロファージが、微小環境からのシグナルに応じて異なる機能プログラムを採用するプロセスである。この能力は、生体内における複数の役割に関連しており、自然免疫系の強力なエフェクター細胞であるだけでなく、細胞デブリの除去、胚の発達及び組織修復においても重要である。
マクロファージの表現型は、簡略的な分類により、２つのグループ：Ｍ１（古典的活性化マクロファージ）及びＭ２（選択的活性化マクロファージ）に分けられている。この大まかな分類は、培養されたマクロファージを表現型の特定の状態への転換を刺激する分子で処理したｉｎ ｖｉｔｒｏ研究に基づく。化学的な刺激に加えて、マクロファージを成長させる基本基質の硬度が、極性状態、機能的役割及び遊走様式を決定付け得ることが示されている。Ｍ１マクロファージは、炎症促進性であり、食作用ならびに炎症促進性サイトカイン及び抗菌分子の分泌など、病原体に対する直接的な宿主防御において重要であることが記載されている。Ｍ２マクロファージは、全く逆の機能を有し、炎症の回復期及び損傷組織の修復を調節することが記載されている。後に、より広範なｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｅｘ ｖｉｖｏの研究では、マクロファージの表現型がはるかに多様で、遺伝子発現及び機能の点で互いに重複していることが示され、これらの多くのハイブリッド状態が微小環境に依存した連続的な活性化状態を形成することが明らかになった。更に、ｉｎ ｖｉｖｏでは、組織マクロファージの異なる集団間で、遺伝子発現プロファイルに高い多様性がある。このように、マクロファージの活性化スペクトルは、環境からの多量の異なるシグナルに応答する複雑な制御経路が関係しており、より広範であると考えられる。マクロファージの表現型の多様性は、ｉｎ ｖｉｖｏではまだ完全に特徴付けられていない。
マクロファージの種類の不均衡は、多数の免疫関連疾患と関連している。例えば、Ｍ１／Ｍ２比の増加は、炎症性腸疾患の発症、及びマウスにおける肥満と相関し得る。一方、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験では、Ｍ２マクロファージが組織線維化の主要なメディエーターであることが示唆された。いくつかの研究では、Ｍ２マクロファージの線維性プロファイルと全身性強皮症の病態が関連付けられている。マクロファージを標的とする生物学的に活性な分子の非限定的な例は、ＰＩ３Ｋγ（ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスフェート３－キナーゼ触媒サブユニットガンマ）、ＲＩＰ１（受容体共役タンパク質（ＲＩＰ）キナーゼ１、ＲＩＰＫ１）、ＨＩＦ－１α（低酸素誘導因子１－アルファ）、ＡＨＲ１（接着及び菌糸制御因子１）、ｍｉＲ１４６ａ、ｍｉＲ１５５、ＩＲＦ４（インターフェロン調節因子４）、ＰＰＡＲγ（ペルオキシゾーム増殖因子活性化受容体ガンマ）、ＩＬ－４ＲＡ（インターロイキン－４受容体サブユニットアルファ）、ＴＬＲ８（Ｔｏｌｌ様受容体８）、及びＴＧＦ－β１（トランスフォーミング増殖因子ベータ－１プロタンパク）である。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＰＩ３Ｋγタンパク質または転写物（ＰＩ３Ｋγアンタゴニスト）を標的とする。いくつかの態様において、ＰＩ３Ｋγアンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。他の態様において、ＰＩ３Ｋγアンタゴニストは、小分子である。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＰＩ３Ｋγをコードする転写物、例えば、ｍＲＮＡを標的とする。ＰＩ３Ｋγ遺伝子の配列は、染色体上の位置７ｑ２２．３にあり、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００７．１４（１０６８６５２８２．．１０６９０８９８０）に見出すことができ、その全体が参照により援用される。ヒトＰＩ３Ｋγタンパク質の配列は、公開されているＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ４８７３６に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＲＩＰ１タンパク質または転写物（ＲＩＰ１アンタゴニスト）を標的とする。いくつかの態様において、ＲＩＰ１アンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。他の態様において、ＲＩＰ１アンタゴニストは、小分子である。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＲＩＰ１をコードする転写物、例えば、ｍＲＮＡを標的とする。ＲＩＰ１遺伝子の配列は、染色体上の位置６ｐ２５．２にあり、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００６．１２（３０６３９６７．．３１１５１８７）に見出すことができ、その全体が参照により援用される。ヒトＲＩＰ１タンパク質の配列は、公開されているＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ１３５４６に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＨＩＦ－１αタンパク質または転写物（ＨＩＦ－１αアンタゴニスト）を標的とする。いくつかの態様において、ＨＩＦ－１αアンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。他の態様において、ＨＩＦ－１αアンタゴニストは、小分子である。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＨＩＦ－１αをコードする転写物、例えば、ｍＲＮＡを標的とする。ＨＩＦ－１α遺伝子の配列は、染色体上の位置１４ｑ２３．２にあり、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００００１４．９（６１６９５５１３．．６１７４８２５９）に見出すことができ、その全体が参照により援用される。ヒトＨＩＦ－１αタンパク質の配列は、公開されているＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ１６６６５に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に援用される。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＨＩＦ－２αをコードするｍＲＮＡを標的とする。ＨＩＦ－２α遺伝子の配列は、染色体上の位置２ｐ２１にあり、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００２．１２（４６２９７４０７．．４６３８６６９７）に見出すことができ、その全体が参照により援用される。ヒトＨＩＦ－２αタンパク質の配列は、公開されているＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ９９８１４に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＡＨＲ１タンパク質または転写物（ＡＨＲ１アンタゴニスト）を標的とする。他の態様において、ＡＨＲ１アンタゴニストは、小分子である。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ｍｉＲ１４６ａ（ｍｉＲ１４６ａ ａｎｔａｇｏｍｉｒ）を標的とする。いくつかの態様において、ｍｉＲ１４６ａ ａｎｔａｇｏｍｉｒは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ｍｉＲ１４６ａ－５ｐ（ｕｇａｇａａｃｕｇａａｕｕｃｃａｕｇｇｇｕｕ）（配列番号５４）に結合する。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ｍｉＲ１４６ａ－３ｐ（ｃｃｕｃｕｇａａａｕｕｃａｇｕｕｃｕｕｃａｇ）（配列番号５５）に結合する。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ｍｉＲ１５５を模倣する（ｍｉＲ１５５模倣物）。いくつかの態様において、ｍｉＲ１５５模倣物は、ＲＮＡまたはＤＮＡである。いくつかの態様において、ｍｉＲ１５５模倣物は、ｍｉＲ１５５－５ｐのヌクレオチド配列（ｕｕａａｕｇｃｕａａｕｃｇｕｇａｕａｇｇｇｇｕ）（配列番号５６）を含む。いくつかの態様において、ｍｉＲ１５５模倣物は、ｍｉＲ１５５－３ｐのヌクレオチド配列（ｃｕｃｃｕａｃａｕａｕｕａｇｃａｕｕａａｃａ）（配列番号５７）を含む。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＩＲＦ－４タンパク質または転写物（ＩＲＦ４アンタゴニスト）を標的とする。いくつかの態様において、ＩＲＦ４アンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＩＲＦ－４をコードする転写物、例えば、ｍＲＮＡを標的とする。ＩＲＦ－４遺伝子の配列は、染色体上の位置６ｐ２５．３にあり、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００６．１２（３９１７３９．．４１１４４３）に見出すことができ、その全体が参照により援用される。ヒトＩＲＦ－４タンパク質の配列は、公開されているＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ１５３０６に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＰＰＡＲγタンパク質または転写物（ＰＰＡＲγアンタゴニスト）を標的とする。いくつかの態様において、ＰＰＡＲγアンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。他の態様において、ＰＰＡＲγアンタゴニストは、小分子である。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＰＰＡＲγをコードする転写物、例えば、ｍＲＮＡを標的とする。ＰＰＡＲγ遺伝子の配列は、染色体上の位置３ｐ２５．２にあり、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００３．１２（１２２８７４８５．．１２４３４３５６）に見出すことができ、その全体が参照により援用される。ヒトＰＰＡＲγタンパク質の配列は、公開されているＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ３７２３１に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＩＬ－４ＲＡタンパク質または転写物（ＩＬ－４ＲＡアンタゴニスト）を標的とする。いくつかの態様において、ＩＬ－４ＲＡアンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＩＬ－４ＲＡをコードする転写物、例えば、ｍＲＮＡを標的とする。ＩＬ－４ＲＡ遺伝子の配列は、染色体上の位置１６ｐ１２．１にあり、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００００１６．１０（２７３１３６６８．．２７３６４７７８）に見出すことができ、その全体が参照により援用される。ヒトＩＬ－４ＲＡタンパク質の配列は、公開されているＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ２４３９４に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、Ｔｏｌｌ様受容体８（ＴＬＲ８）のアゴニストである。ＴＬＲ８は、ＣＤ２８８とも称される。ＴＬＲ８は、自然免疫と適応免疫の重要な構成成分である。ＴＬＲ（Ｔｏｌｌ様受容体）は、微生物に特異的な分子パターンを認識することで、病原体に対する宿主免疫応答を制御する。ＴＬＲは、ＭＹＤ８８及びＴＲＡＦ６を介して作用し、ＮＦ－カッパ－Ｂ活性化、サイトカイン分泌及び炎症反応を引き起こす。ヒトＴＬＲ８タンパク質の配列は、公開されているＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＲ９７に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＴＧＦ－β１タンパク質または転写物（ＴＧＦ－β１アンタゴニスト）を標的とする。いくつかの態様において、ＴＧＦ－β１アンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＴＧＦ－β１をコードする転写物、例えば、ｍＲＮＡを標的とする。ＴＧＦ－β１遺伝子の配列は、染色体上の位置１９ｑ１３．２にあり、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００００１９．１０（４１３３０３２３．．４１３５３９２２、相補鎖側）に見出すことができ、その全体が参照により援用される。ヒトＴＧＦ－β１タンパク質の配列は、公開されているＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１１３７に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ｇａｐｍｅｒ、ｍｉｘｍｅｒ、またはｔｏｔａｌｍｅｒである。本開示のＡＳＯは、修飾糖部分、すなわち、ＤＮＡ及びＲＮＡに見出されるリボース糖部分と比較した場合の糖部分に対する修飾を有する１つ以上のヌクレオシドを含み得る。主に親和性及び／またはヌクレアーゼ耐性などのオリゴヌクレオチドのある特定の特性を改善する目的で、リボース糖部分を修飾したヌクレオシドが多数作製されている。
そのような修飾には、リボース環構造が、例えば、ヘキソース環（ＨＮＡ）との置き換えにより修飾されたもの、または典型的にリボース環上のＣ２’とＣ４’の炭素間にビラジカル架橋を有する二環式環（ＬＮＡ）、または典型的にＣ２’とＣ３’の炭素間に結合がない非連結リボース環（例えば、ＵＮＡ）が含まれる。他の糖修飾ヌクレオシドには、例えば、ビシクロヘキソース核酸（ＷＯ２０１１／０１７５２１）または三環式核酸（ＷＯ２０１３／１５４７９８）が含まれる。修飾ヌクレオシドには、糖部分が、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）では非糖部分、またはモルフォリノ核酸で置き換えられたヌクレオシドも含まれる。
糖修飾にはまた、リボース環上の置換基を水素以外の基に変えること、またはＲＮＡヌクレオシドに天然に見出される２’－ＯＨ基に変えることによってなされる修飾も含まれる。置換基は、例えば、２’、３’、４’、または５’の位置に導入され得る。修飾糖部分を含むヌクレオシドには、２’置換ヌクレオシドなどの２’修飾ヌクレオシドも含まれる。実際、２’置換ヌクレオシドの開発には多くの注目が集まっており、多数の２’置換ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドに組み込むと、ヌクレオシドの耐性の増大及び親和性の向上などの有益な特性を持つことがわかっている。
２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位にＨまたは－ＯＨ以外の置換基を有するヌクレオシド（２’置換ヌクレオシド）であるか、あるいは、２’連結ビラジカルを含み、２’置換ヌクレオシド及びＬＮＡ（２’－４’ビラジカル架橋）ヌクレオシドを含む。例えば、２’修飾糖は、オリゴヌクレオチドに対して、結合親和性の向上（例えば、親和性が向上する２’糖修飾ヌクレオシド）及び／またはヌクレアーゼ耐性の増大をもたらし得る。２’置換修飾ヌクレオシドの例は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－フルロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、及び２’－フルオロ－ＡＮＡヌクレオシドである。更なる例については、例えば、Ｆｒｅｉｅｒ ＆ Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３；Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３；及びＤｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１９，９３７を参照されたい。以下に、いくつかの２’置換修飾ヌクレオシドを例示する。
Figure 2022550248000028
ＬＮＡヌクレオシドは、ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’の間にリンカー基（ビラジカルまたは架橋と称される）（すなわち、２’－４’架橋）を含み、リボース環のコンフォメーションを制限または固定した修飾ヌクレオシドである。これらのヌクレオシドは、文献中、架橋核酸または二環式核酸（ＢＮＡ）とも呼ばれる。リボースのコンフォメーションを固定することは、ＬＮＡが相補的なＲＮＡまたはＤＮＡ分子のオリゴヌクレオチドに組み込まれる場合、ハイブリダイゼーションの親和性の向上（二本鎖の安定化）と関連する。これは、オリゴヌクレオチド／相補二本鎖の融解温度を測定することによって常法的に決定することができる。
非限定的な例示的なＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ９９／０１４２２６、ＷＯ００／６６６０４、ＷＯ９８／０３９３５２、ＷＯ２００４／０４６１６０、ＷＯ００／０４７５９９、ＷＯ２００７／１３４１８１、ＷＯ２０１０／０７７５７８、ＷＯ２０１０／０３６６９８、ＷＯ２００７／０９００７１、ＷＯ２００９／００６４７８、ＷＯ２０１１／１５６２０２、ＷＯ２００８／１５４４０１、ＷＯ２００９／０６７６４７、ＷＯ２００８／１５０７２９、Ｍｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６、Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，Ｖｏｌ ７５（５）ｐｐ．１５６９－８１、及びＭｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８に開示されている。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯの修飾ヌクレオシドまたはＬＮＡヌクレオシドは、式ＩまたはＩＩの一般構造を有する。
Figure 2022550248000029
 式中、
Ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ（Ｒａ）－、－Ｃ（ＲａＲｂ）－から選択され、特に－Ｏ－であり、
Ｂは、核酸塩基または修飾核酸塩基部分であり、
Ｚは、隣接するヌクレオシドへのヌクレオシド間連結または５’－末端基であり、
Ｚ＊は、隣接するヌクレオシドへのヌクレオシド間連結または３’－末端基であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５及びＲ５＊は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニルオキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、ホルミル、アジド、複素環及びアリールから独立して選択され、
Ｘ、Ｙ、Ｒａ及びＲｂは、本明細書に定義されるとおりである。
ＩＩ．Ｃ．１．ＮＬＲＰ３を標的とするＡＳＯ
ＮＬＲＰ３（ＮＬＲＰ３）は、ＮＬＲファミリーパイリンドメイン含有３としても知られている。特に指定のない限り、「ＮＬＲＰ３」という用語は、本明細書で使用される場合、１つ以上の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、及びクマ）に由来するＮＬＲＰ３を指し得る。ＮＬＲＰ３／ＮＬＲＰ３は、同義語が知られており、ＮＬＲＰ３；Ｃ１ｏｒｆ７；ＣＩＡＳ１；ＮＡＬＰ３；ＰＹＰＡＦ１；ヌクレオチド結合オリゴマー形成ドメイン、ロイシンリッチリピート及びパイリンドメイン含有３；寒冷誘導自己炎症性症候群１タンパク質；クリオピン；ＮＡＣＨＴ、ＬＲＲ及びＰＹＤドメイン含有タンパク質３；アンギオテンシン／バソプレッシン受容体ＡＩＩ／ＡＶＰ様；キャタピラータンパク質１．１；ＣＬＲ１．１；寒冷誘導自己炎症性症候群１タンパク質；ならびにＰＹＲＩＮ含有ＡＰＡＦ１様タンパク質１が含まれる。ヒトＮＬＲＰ３遺伝子の配列は、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００１．１１：２４７４１６１５６－２４７４４９１０８に見出すことができる。ヒトＮＬＲＰ３遺伝子は、染色体の位置１ｑ４４の２４７，４１６，１５６～２４７，４４９，１０８に見出される。
ヒトＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ転写物に対する配列（配列番号１）は、染色体１ｑ４４の残基２４７，４１６，１５６～２４７，４４９，１０８の逆相補鎖に対応する。ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１０７９８２１．２）は、配列番号３のヌクレオチド「ｔ」がｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、配列番号３に提供される。ヒトＮＬＲＰ３タンパク質の配列は、公開されているアクセッション番号Ｑ９６Ｐ２０（カノニカル配列、配列番号２）、Ｑ９６Ｐ２０－２（配列番号４）、Ｑ９６Ｐ２０－３（配列番号５）、Ｑ９６Ｐ２０－４（配列番号６）、Ｑ９６Ｐ２０－５（配列番号７）、及びＱ９６Ｐ２０－６（配列番号８）に見出すことができ、そのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。
ヒトＮＬＲＰ３遺伝子産物の天然バリアントは、知られている。例えば、ヒトＮＬＲＰ３タンパク質の天然バリアントは、Ｄ２１Ｈ、Ｉ１７４Ｔ、Ｖ２００Ｍ、Ｒ２６２Ｌ、４２６２Ｐ、Ｒ２６２Ｗ、Ｌ２６６Ｈ、Ｄ３０５Ｇ、Ｄ３０５Ｎ、Ｌ３０７Ｐ、Ｑ３０８Ｋ、Ｆ３１１Ｓ、Ｔ３５０Ｍ、Ａ３５４Ｖ、Ｌ３５５Ｐ、Ｅ３５６Ｄ、Ｈ３６０Ｒ、Ｔ４０７Ｐ、Ｔ４３８Ｉ、Ｔ４３８Ｎ、Ａ４４１Ｔ、Ａ４４１Ｖ、Ｒ４９０Ｋ、Ｆ５２５Ｃ、Ｆ５２５Ｌ、Ｇ５７１Ｒ、Ｙ５７２Ｃ、Ｆ５７５Ｓ、Ｅ６２９Ｇ、Ｌ６３４Ｆ、Ｍ６６４Ｔ、Ｑ７０５Ｋ、Ｙ８６１Ｃ、及びＲ９２０Ｑ、ならびにこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含有し得る。選択的スプライシングから生じるヒトＮＬＲＰ３タンパク質の更なるバリアントもまた当該技術分野において知られている。ＮＬＲＰ３アイソフォーム１（識別子：ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ９６Ｐ２０－２）は、次の点でカノニカル配列（配列番号３）と異なる：配列番号３と比べて残基７２１～７７７及び８３６～８９２の欠失。ＮＬＲＰ３アイソフォーム３（識別子：Ｑ９６Ｐ２０－３）の配列は、次の点でカノニカル配列（配列番号３）と異なる：配列番号３と比べて残基７２０～１０３６の欠失。ＮＬＲＰ３アイソフォーム４（識別子：Ｑ９６Ｐ２０－４）の配列は、次の点でカノニカル配列（配列番号３）と異なる：配列番号３と比べて残基７２１～７７７の欠失。ＮＬＲＰ３アイソフォーム５（識別子：Ｑ９６Ｐ２０－５）の配列は、次の点でカノニカル配列（配列番号３）と異なる：配列番号３と比べて残基８３６～８９２の欠失。ＮＬＲＰ３アイソフォーム６（識別子：Ｑ９６Ｐ２０－６）の配列は、次の点でカノニカル配列（配列番号３）と異なる：配列番号３と比べて残基７７６～７９６の欠失。したがって、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３タンパク質の天然バリアントの発現を減少または阻害するように設計することができる。
ＡＳＯの標的核酸配列の例は、ＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡである。配列番号１は、ヒトＮＬＲＰ３ゲノム配列（すなわち、染色体１ｑ４４のヌクレオチド２４７，４１６，１５６～２４７，４４９，１０８の逆相補鎖）を表す。配列番号１は、配列番号１のヌクレオチド「ｔ」がｐｒｅ－ｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、ＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列と同一である。ある特定の態様において、「標的核酸」は、ＮＬＲＰ３タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのイントロンを含む。他の態様において、標的核酸は、ＮＬＲＰ３タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン領域を含む。更なる他の態様において、標的核酸は、ＮＬＲＰ３タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン－イントロンジャンクションを含む。いくつかの態様において、「標的核酸」は、例えば、研究または診断に使用される場合、上記ＤＮＡまたはＲＮＡ核酸標的から得られるｃＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドであり得る。ＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡによってコードされるヒトＮＬＲＰ３タンパク質配列は、配列番号３に示される。他の態様において、標的核酸は、ＮＬＲＰ３タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、またはその両方を含む。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物、例えば、配列番号１のイントロン内の領域にハイブリダイズする。ある特定の態様において、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物、例えば、配列番号１のエクソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様において、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物、例えば、配列番号１のエクソン－イントロンジャンクション内の領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物、例えば、配列番号１内の領域（例えば、イントロン、エクソン、またはエクソン－イントロンジャンクション）にハイブリダイズし、ここで、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される式：５’ Ａ－Ｂ－Ｃ ３’に従う設計を有する。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３タンパク質の特定のアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１）をコードするｍＲＮＡを標的とする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３タンパク質の全てのアイソフォームを標的とする。他の態様において、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３タンパク質の２つのアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１及びアイソフォーム２、アイソフォーム３及びアイソフォーム４、ならびにアイソフォーム５及びアイソフォーム６）を標的とする。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯのヌクレオチド配列または連続ヌクレオチド配列は、配列番号１０１～２００（すなわち、図１Ａの配列）から選択される配列に対して、少なくとも約８０％の配列同一性、例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、少なくとも約９９％の配列同一性、例えば、約１００％の配列同一性（相同）を有する。いくつかの態様において、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される設計または本明細書で別途示される化学構造を有する（例えば、図１Ａ）。
いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号１０１～２００からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも１０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＮＬＲＰ３転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、または配列番号２００からなる群から選択される配列を含む。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２００に記載される配列を含む。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１～２００に記載される配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一の配列を含むか、またはこれからからなる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号１０１～２００からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号１０１～２００からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＮＬＲＰ３転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０の置換を除き、配列番号１０１～２００からなる群から選択される配列のうちの１つから選択されるか、またはそれを含み、ここで、置換ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物に結合することができる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号１０１～２００からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＮＬＲＰ３転写物に対して相補的な１、２、３、または４つの追加の５’及び／または３’ヌクレオチドを含み得る。
いくつかの態様において、ＮＬＲＰ３をコードするｍＲＮＡ転写物に対する、本明細書で開示されるＮＬＲＰ３転写物を標的とするＡＳＯの結合は、ＮＬＲＰ３の発現レベル及び／または活性レベルを減少させ得る。
ＩＩ．Ｃ．２．ＳＴＡＴ６を標的とするＡＳＯ
ＳＴＡＴ６（ＳＴＡＴ６）は、シグナル伝達兼転写活性化因子６としても知られている。ＳＴＡＴ６／ＳＴＡＴ６の同義語は、知られており、ＩＬ－４ ＳＴＡＴ；ＳＴＡＴ、インターロイキン４誘導；転写因子ＩＬ－４ ＳＴＡＴ；ＳＴＡＴ６Ｂ；ＳＴＡＴ６Ｃ；及びＤ１２Ｓ１６４４が含まれる。ヒトＳＴＡＴ６遺伝子の配列は、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００００１２．１２：ｃ５７１１１４１３－５７０９５４０４に見出すことができる。ヒトＳＴＡＴ６遺伝子は、染色体の位置１２ｑ１３．３の５７１１１４１３～５７０９５４０４、相補鎖側に見出される。特に指定のない限り、「ＳＴＡＴ６」という用語は、本明細書で使用される場合、１つ以上の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、及びクマ）に由来するＳＴＡＴ６を指し得る。
ヒトＳＴＡＴ６ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ転写物に対する配列（配列番号１１）は、染色体１２ｑ１３．３の残基５７１１１４１３～５７０９５４０４、相補鎖側の逆相補鎖に対応する。ＳＴＡＴ６ ｍＲＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１１７８０７８．１）は、配列番号１３のヌクレオチド「ｔ」がｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、配列番号１３に提供される。ヒトＳＴＡＴ６タンパク質の配列は、公開されているアクセッション番号Ｐ４２２２６－１（カノニカル配列、配列番号１２）、Ｐ４２２２６－２（配列番号１４）、及びＰ４２２２６－３（配列番号１５）に見出すことができ、そのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。
ヒトＳＴＡＴ６遺伝子産物の天然バリアントは、知られている。例えば、ヒトＳＴＡＴ６タンパク質の天然バリアントは、Ｍ１１８Ｒ、Ｄ４１９Ｎ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含有し得る。選択的スプライシングから生じるヒトＳＴＡＴ６タンパク質の更なるバリアントもまた当該技術分野において知られている。ＳＴＡＴ６アイソフォーム２（識別子：ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ４２２２６－２）は、次の点でカノニカル配列（配列番号１３）と異なる：配列番号１３と比べて残基１～１７４の欠失及び１７５ＭＥＱ１７７による１７５ＰＳＥ１７７の置換。ＳＴＡＴ６アイソフォーム３の配列（識別子：Ｐ４２２２６－３）は、次の点でカノニカル配列（配列番号１３）と異なる：配列番号１３と比べて残基１～１１０の欠失。したがって、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６タンパク質の天然バリアントの発現を減少または阻害するように設計することができる。
ＡＳＯの標的核酸配列の例は、ＳＴＡＴ６ ｐｒｅ－ｍＲＮＡである。配列番号１１は、ヒトＳＴＡＴ６ゲノム配列（すなわち、染色体１２ｑ１３．３のヌクレオチド５７１１１４１３～５７０９５４０４、相補鎖側の逆相補鎖）を表す。配列番号１１は、配列番号１１のヌクレオチド「ｔ」がｐｒｅ－ｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、ＳＴＡＴ６ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列と同一である。ある特定の態様において、「標的核酸」は、ＳＴＡＴ６タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのイントロンを含む。他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ６タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン領域を含む。更なる他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ６タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン－イントロンジャンクションを含む。いくつかの態様において、「標的核酸」は、例えば、研究または診断に使用される場合、上記ＤＮＡまたはＲＮＡ核酸標的から得られるｃＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドであり得る。ＳＴＡＴ６ ｐｒｅ－ｍＲＮＡによってコードされるヒトＳＴＡＴ６タンパク質配列は、配列番号１３として示される。他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ６タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、またはその両方を含む。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物、例えば、配列番号１１のイントロン内の領域にハイブリダイズする。ある特定の態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物、例えば、配列番号１１のエクソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物、例えば、配列番号１１のエクソン－イントロンジャンクション内の領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物、例えば、配列番号１１内の領域（例えば、イントロン、エクソン、またはエクソン－イントロンジャンクション）にハイブリダイズし、ここで、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される式：５’ Ａ－Ｂ－Ｃ ３’に従う設計を有する。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６タンパク質の特定のアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１）をコードするｍＲＮＡを標的とする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６タンパク質の全てのアイソフォームを標的とする。他の態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６タンパク質の２つのアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１及びアイソフォーム２、アイソフォーム１及びアイソフォーム３、またはアイソフォーム２及びアイソフォーム３）を標的とする。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯのヌクレオチド配列または連続ヌクレオチド配列は、配列番号６０１～７０３（すなわち、図１Ｂの配列）から選択される配列に対して、少なくとも約８０％の配列同一性、例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、少なくとも約９９％の配列同一性、例えば、約１００％の配列同一性（相同）を有する。いくつかの態様において、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される設計または本明細書で別途示される化学構造を有する（例えば、図１Ｂ）。
いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号６０１～７０３からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも１０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＳＴＡＴ６転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６０４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６０５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６０６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６０７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６０８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６０９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６１０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９２０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６１１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６１２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６１３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６１４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６１５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６１６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６１７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６１８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６１９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６３４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６３５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６３６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６３７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０７０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６３８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６３９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６４０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６４１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３６３３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６４２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－６７３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６４３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６４４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６４５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６４６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６４７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３６０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６４８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８３９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６４９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２１８７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－５１３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－６７１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１１３１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１４３２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８２６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８２７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８３３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９２（例え




ば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３４７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３４８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７００（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２７８２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３４３１）に記載される配列を含む。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６０１～７０３に記載される配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一の配列を含むか、またはこれからからなる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号６０１～７０３からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号６０１～７０３からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＳＴＡＴ６転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０の置換を除き、配列番号６０１～７０３からなる群から選択される配列のうちの１つから選択されるか、またはそれを含み、ここで、置換ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物に結合することができる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号６０１～７０３からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＳＴＡＴ６転写物に対して相補的な１、２、３、または４つの追加の５’及び／または３’ヌクレオチドを含み得る。
いくつかの態様において、ＳＴＡＴ６をコードするｍＲＮＡ転写物に対する、本明細書で開示されるＳＴＡＴ６転写物を標的とするＡＳＯの結合は、ＳＴＡＴ６の発現レベル及び／または活性レベルを減少させ得る。
ＩＩ．Ｃ．３．ＣＥＢＰ／βを標的とするＡＳＯ
特に指定のない限り、「ＣＥＢＰ／β」という用語は、本明細書で使用される場合、１つ以上の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、及びクマ）に由来するＣＥＢＰ／βを指し得る。
ＣＥＢＰ／β（ＣＥＢＰ／β）は、ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質ベータとしても知られている。ＣＥＢＰ／β／ＣＥＢＰ／βの同義語は、知られており、Ｃ／ＥＢＰベータ；肝臓活性因子タンパク質；ＬＡＰ；肝臓濃縮抑制タンパク質；ＬＩＰ；核因子ＮＦ－ＩＬ６；転写因子５；ＴＣＦ－５；ＣＥＢＰＢ；ＣＥＢＰｂ；ＣＥＢＰβ；ＣＥＢＰ／Ｂ；及びＴＣＦ５が含まれる。ヒトＣＥＢＰ／β遺伝子の配列は、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００００２０．１１（５０１９０５８３．．５０１９２６９０）に見出すことができる。ヒトＣＥＢＰ／β遺伝子は、染色体の位置２０ｑ１３．１３の５０１９０５８３～５０１９２６９０に見出される。
ヒトＣＥＢＰ／β ｐｒｅ－ｍＲＮＡ転写物に対する配列（配列番号２１）は、染色体２０ｑ１３．１３の残基５０１９０５８３～５０１９２６９０の逆相補鎖に対応する。ＣＥＢＰ／β ｍＲＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１２８５８７８．１）は、配列番号２３のヌクレオチド「ｔ」がｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、配列番号２３に提供される。ヒトＣＥＢＰ／βタンパク質の配列は、公開されているアクセッション番号Ｐ１７６７６（カノニカル配列、配列番号２２）、Ｐ１７６７６－２（配列番号２４）、及びＰ１７６７６－３（配列番号２５）に見出すことができ、そのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。
ヒトＣＥＢＰ／β遺伝子産物の天然バリアントは、知られている。例えば、ヒトＣＥＢＰ／βタンパク質の天然バリアントは、Ａ２４１Ｐ、Ａ２５３Ｇ、Ｇ１９５Ｓ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含有し得る。選択的スプライシングから生じるヒトＣＥＢＰ／βタンパク質の更なるバリアントもまた当該技術分野において知られている。ＣＥＢＰ／βアイソフォーム２（識別子：ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ１７６７６－２）は、次の点でカノニカル配列（配列番号２３）と異なる：配列番号２３と比べて残基１～２３の欠失。ＣＥＢＰ／βアイソフォーム３の配列（識別子：Ｐ１７６７６－３）は、次の点でカノニカル配列（配列番号２３）と異なる：配列番号２３と比べて残基１～１９８の欠失。したがって、本開示のＡＳＯは、当該タンパク質の天然バリアントの発現を減少または阻害するように設計することができる。
ＡＳＯの標的核酸配列の例は、ＣＥＢＰ／β ｐｒｅ－ｍＲＮＡである。配列番号２１は、ヒトＣＥＢＰ／βゲノム配列（すなわち、染色体２０ｑ１３．１３のヌクレオチド５０１９０５８３～５０１９２６９０の逆相補鎖）を表す。配列番号２１は、配列番号２１のヌクレオチド「ｔ」がｐｒｅ－ｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、ＣＥＢＰ／β ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列と同一である。ある特定の態様において、「標的核酸」は、ＣＥＢＰ／βタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのイントロンを含む。他の態様において、標的核酸は、ＣＥＢＰ／βタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン領域を含む。更なる他の態様において、標的核酸は、ＣＥＢＰ／βタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン－イントロンジャンクションを含む。いくつかの態様において、「標的核酸」は、例えば、研究または診断に使用される場合、上記ＤＮＡまたはＲＮＡ核酸標的から得られるｃＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドであり得る。ＣＥＢＰ／β ｐｒｅ－ｍＲＮＡによってコードされるヒトＣＥＢＰ／βタンパク質配列は、配列番号２３として示される。他の態様において、標的核酸は、ＣＥＢＰ／βタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、またはその両方を含む。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＣＥＢＰ／β転写物、例えば、配列番号２１のイントロン内の領域にハイブリダイズする。ある特定の態様において、本開示のＡＳＯは、ＣＥＢＰ／β転写物、例えば、配列番号２１のエクソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様において、本開示のＡＳＯは、ＣＥＢＰ／β転写物、例えば、配列番号２１のエクソン－イントロンジャンクション内の領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＣＥＢＰ／β転写物、例えば、配列番号２１内の領域（例えば、イントロン、エクソン、またはエクソン－イントロンジャンクション）にハイブリダイズし、ここで、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される式：５’ Ａ－Ｂ－Ｃ ３’に従う設計を有する。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＣＥＢＰ／βタンパク質の特定のアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１）をコードするｍＲＮＡを標的とする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＣＥＢＰ／βタンパク質の全てのアイソフォームを標的とする。他の態様において、ＡＳＯは、ＣＥＢＰ／βタンパク質の２つのアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１及びアイソフォーム２、アイソフォーム１及びアイソフォーム３、またはアイソフォーム２及びアイソフォーム３）を標的とする。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯのヌクレオチド配列または連続ヌクレオチド配列は、配列番号７０４～８０６（すなわち、図１Ｃの配列）から選択される配列に対して、少なくとも約８０％の配列同一性、例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、少なくとも約９９％の配列同一性、例えば、約１００％の配列同一性（相同）を有する。いくつかの態様において、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される設計または本明細書で別途示される化学構造を有する（例えば、図１Ｃ）。
いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号７０４～８０６からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも１０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＣＥＢＰ／Β転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５４０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０７（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－６４８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０８（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８１６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０９（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１０（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１１（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８１９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１２（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８２０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１３（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８５１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８５３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８５８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１７（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－９８７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１８（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１９（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２０（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２１（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２２（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０７１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２３（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１４０５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２７（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１４０７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２８（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５３９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２９（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５４０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３０（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３１（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３２（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３３（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－６４４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－６４５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－６４８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３７（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８１９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３８（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８５５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３９（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８６０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４０（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－９８６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４１（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－９８７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４２（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－９９６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４３（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０４９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０５０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４７（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４８（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０８３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４９（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０８８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５０（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２５３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５１（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２６９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５２（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５３（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５３９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５７（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５８（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－６４７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５９（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－６４８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６０（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８１５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６１（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６２（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８２０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６３（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８５４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８５５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８５９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０５０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６７（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０５３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６８（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６９（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７０（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７１（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７２（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７３（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７７（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７８（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７９（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－５６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８０（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８１（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８２（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８３（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２６７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－６４５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８７（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８４８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８８（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８４９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８９（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８５０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７９０（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７９１（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０７０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７９２（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０７１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７９３（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２６２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７９４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７９５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは




、配列番号７９６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－６４４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７９７（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－６４７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７９８（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－８５１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７９９（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２６６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８００（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２６８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０１（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０２（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－６４６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０３（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１０６０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０４（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２６３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０５（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２６９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０６（例えば、ＡＳＯ－ＣＥＢＰｂ－１２７１）に記載される配列を含む。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０４～８０６に記載される配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一の配列を含むか、またはこれからからなる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号７０４～８０６からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号７０４～８０６からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＣＥＢＰｂ転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０の置換を除き、配列番号７０４～８０６からなる群から選択される配列のうちの１つから選択されるか、またはそれを含み、ここで、置換ＡＳＯは、ＣＥＢＰｂ転写物に結合することができる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号７０４～８０６からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＣＥＢＰｂ転写物に対して相補的な１、２、３、または４つの追加の５’及び／または３’ヌクレオチドを含み得る。
いくつかの態様において、ＣＥＢＰｂをコードするｍＲＮＡ転写物に対する、本明細書で開示されるＣＥＢＰｂ転写物を標的とするＡＳＯの結合は、ＣＥＢＰｂの発現レベル及び／または活性レベルを減少させ得る。
ＩＩ．Ｃ．４．ＳＴＡＴ３を標的とするＡＳＯ
シグナル伝達兼転写活性化因子３（ＳＴＡＴ３）は、細胞表面受容体からのシグナルを細胞核に伝達するシグナル伝達転写活性化因子である。ＳＴＡＴ３は、多くのヒトがんで過剰に活性化していることが多い。ＳＴＡＴ３をコードするゲノムＤＮＡは、染色体の位置１７ｑ２１．２に見出すことができる（すなわち、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＧ＿００７３７０．１のヌクレオチド５，００１～８０，１７１）。高レベルの活性化ＳＴＡＴ３は、多くの場合、転移性進行において、ヒト乳癌患者の予後不良と相関することがわかっている（Ｒａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．２００９）したがって、ＳＴＡＴ３は、ＥＲ陽性及びＥＲ陰性の両方の乳癌、更には膵癌、頭頸部癌、前立腺癌及び肺癌などの他のがんの予防及び治療における有望な標的となる。しかしながら、ペプチドの遮断、転座の阻害、二量化の阻止、またはホスファターゼ活性の調節を行うことによってＳＴＡＴ３活性を阻害する現在の戦略は、がん細胞におけるＳＴＡＴ３活性を十分に阻害していない。通常状態では、ＳＴＡＴ３の活性化は、一過性であり、厳密に制御されている。成長因子またはサイトカインなどのリガンドによる細胞刺激により、ＳＴＡＴ３は、重要なチロシン残基（Ｔｙｒ７０５）でリン酸化され、その結果、２つの相補的なホスホチロシン（ｐＴｙｒ）－Ｓｒｃ－相同性２（ＳＨ２）相互作用を介してＳＴＡＴ３の二量化が誘導される。次いで、ＳＴＡＴ３二量体は、核に移行し、標的遺伝子のプロモーター内にある特定のＤＮＡ応答要素に結合することによって、転写を活性化する。ＳＴＡＴ３の異常な活性化は、多くの種類のヒト悪性腫瘍及び固形腫瘍と関連しており、ＳＴＡＴ３は、新規がん治療薬の開発にとって魅力的な分子標的となっている。
ＳＴＡＴ３は、多くの場合、腫瘍細胞において構成的に活性化され、抗アポトーシス遺伝子であるＢｃｌ－ｘＬ、Ｂｃｌ－２、Ｍｃｌ－１及びサバイビンならびに細胞周期進行を促す遺伝子であるｃ－Ｍｙｃ及びサイクリン－Ｄ１などの標的遺伝子を調節することで腫瘍進行に寄与することがわかっている。ＳＴＡＴ３の異常な活性化は、リンパ腫及び白血病、乳癌、前立腺癌、肺癌 頭頸部癌、脳癌及び結腸癌を含む、ほとんどの全ての血液悪性腫瘍及び固形腫瘍に頻繁にみられることから、ＳＴＡＴ３は、抗がん剤の開発にとって魅力的な標的となっている。ＳＴＡＴ活性化の特異性は、特定のサイトカインに起因し、すなわち、各ＳＴＡＴは、少数の特定のサイトカインに応答する。成長因子などの他の非サイトカインシグナル伝達分子もまた、ＳＴＡＴを活性化することがわかっている。これらの因子がプロテインチロシンキナーゼと会合する細胞表面受容体に結合することでもＳＴＡＴのリン酸化が生じる。ＳＴＡＴ３は、特に、インターロイキン－６（ＩＬ－６）及び上皮成長因子（ＥＧＦ）に応答することがわかっている（Ｄａｒｎｅｌｌ，Ｊｒ．，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，２６４，１４１５－１４２１）。ＳＴＡＴ３がＭＡＰＫ経路によって制御され得ることを示唆する証拠が存在する。ＥＲＫ２は、セリンリン酸化を誘導し、更にＳＴＡＴ３と会合する（Ｊａｉｎ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９８，１７，３１５７－３１６７）。ＳＴＡＴ３は、ほとんどの細胞種で発現しており、組織損傷及び炎症への応答に関わる遺伝子の発現の誘導にも関与している。ＳＴＡＴ３の異常な発現または構成的な発現は、多くの疾患プロセスに関連している。ＳＴＡＴ３は、骨髄腫腫瘍細胞において、培養細胞及び多発性骨髄腫の患者に由来する骨髄単核細胞の両方で、構成的に活性化することがわかっている。これらの細胞は、Ｆａｓ媒介性アポトーシスに耐性があり、高レベルのＢｃｌ－ｘＬを発現する。ＳＴＡＴ３ ＳＨ２ドメインは、二量化を促進するために必要である。タンパク質の二量化を標的にすることの限界の１つは、二量体の界面を標的にすることの現実性であり、これは、大きな表面積の平面性に起因して、困難である。
シグナル伝達兼転写活性化因子３（ＳＴＡＴ３）は、様々な名称で当該技術分野において知られている。そのような名称には、ＤＮＡ結合タンパク質ＡＰＲＦ、及び急性期応答因子が含まれる。ヒトＳＴＡＴ３をコードするｍＲＮＡは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００３１５０．３に見出すことができ、配列（配列番号４３）によって表される。
ヒトＳＴＡＴ３遺伝子産物の天然バリアントは、知られている。例えば、ヒトＳＴＡＴ３タンパク質の天然バリアントは、Ｒ３８２Ｌ、Ｒ３８２Ｑ、ＯＲＲ３８２Ｗ、及び任意のこれらの組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含有し得る。選択的スプライシングから生じるヒトＳＴＡＴ３タンパク質の更なるバリアントもまた当該技術分野において知られており、Ｒ３８２Ｗ、Ｆ３８４Ｌ、Ｆ３８４Ｓ、Ｔ３８９Ｉ、Ｎ３９５Ｙ、Ｒ４２３Ｑ、Ｎ４２５Ｙ、Ｈ４３７Ｙ、Ｄｅｌ－４６３、Ｓ６１１Ｎ、Ｆ６２１Ｖ、Ｔ６２２Ｉ、Ｖ６３７Ｌ、Ｖ６３７Ｍ、Ｄｅｌ－６４４、Ｙ６５７Ｃ、Ｐ３３０Ｓ、Ｋ３９２Ｒ、Ｎ６４６Ｋ、Ｋ６５８Ｎ、Ｄｅｌ－７０１、またはＴ７１６Ｍなどがある。したがって、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３タンパク質の天然バリアントの発現を減少または阻害するように設計することができる。
配列番号４１は、配列番号４１のヌクレオチド「ｔ」がｐｒｅ－ｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、ＳＴＡＴ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列と同一である。ある特定の態様において、「標的核酸」は、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのイントロンを含む。他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン領域を含む。更なる他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン－イントロンジャンクションを含む。いくつかの態様において、「標的核酸」は、例えば、研究または診断に使用される場合、上記ＤＮＡまたはＲＮＡ核酸標的から得られるｃＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドであり得る。ＳＴＡＴ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡによってコードされるヒトＳＴＡＴ３タンパク質配列は、配列番号４２として示される。他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、またはその両方を含む。
更なる他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン－イントロンジャンクションを含む。いくつかの態様において、「標的核酸」は、例えば、研究または診断に使用される場合、上記ＤＮＡまたはＲＮＡ核酸標的から得られるｃＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドであり得る。ＳＴＡＴ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡによってコードされるヒトＳＴＡＴ３タンパク質配列は、配列番号４３として示される。他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、またはその両方を含む。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物、例えば、配列番号４１または配列番号４３のイントロン内の領域にハイブリダイズする。ある特定の態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物、例えば、配列番号４１または配列番号４３のエクソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物、例えば、配列番号４１または配列番号４３のエクソン－イントロンジャンクション内の領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物、例えば、配列番号４１または配列番号４３内の領域（例えば、イントロン、エクソン、またはエクソン－イントロンジャンクション）にハイブリダイズし、ここで、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される式：５’ Ａ－Ｂ－Ｃ ３’に従う設計を有する。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３タンパク質の特定のアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１）をコードするｍＲＮＡを標的とする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３タンパク質の全てのアイソフォームを標的とする。他の態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３タンパク質の２つのアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ４０７６３－１）及びアイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ４０７６３－２）、アイソフォーム２及びアイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ４０７６３－３）を標的とする。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物、例えば、配列番号４１または配列番号４３のイントロン内の領域にハイブリダイズする。ある特定の態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物、例えば、配列番号４１または配列番号４３のエクソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物、例えば、配列番号４１または配列番号４３のエクソン－イントロンジャンクション内の領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物、例えば、配列番号４１または配列番号４３内の領域（例えば、イントロン、エクソン、またはエクソン－イントロンジャンクション）にハイブリダイズし、ここで、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される式：５’ Ａ－Ｂ－Ｃ ３’に従う設計を有する。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号４１）内の複数の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物内の２つの異なる標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物内の３つの異なる標的領域にハイブリダイズする。複数の標的領域にハイブリダイズする例示的なＡＳＯの配列、及び異なる標的領域の開始／終了部位は、図１Ｄに示される。いくつかの態様において、ＳＴＡＴ３転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号４１）内の複数の領域にハイブリダイズするＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号４１）内の単一領域にハイブリダイズするＡＳＯと比較して、ＳＴＡＴ３発現を減少させることにおいて、より強力である（例えば、より低いＥＣ５０を有する）。
本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３転写物、例えば、配列番号４１に対応するヌクレオチド配列の領域の相補体に対応する連続ヌクレオチド配列を含む。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯのヌクレオチド配列または連続ヌクレオチド配列は、配列番号８８９～９８８（すなわち、図１Ｄの配列）から選択される配列に対して、少なくとも約８０％の配列同一性、例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、少なくとも約９９％の配列同一性、例えば、約１００％の配列同一性（相同）を有する。いくつかの態様において、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される設計または本明細書で別途示される化学構造を有する（例えば、図１Ｄ）。
いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、ＳＴＡＴ３に対して、配列番号８８９～９８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも１０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＳＴＡＴ３転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。ＳＴＡＴ３遺伝子を標的とする非限定的な例示的ＡＳＯは、図１Ｄに示される。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０４６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－３５１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４５０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７７８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９００（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９０４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９０５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４１１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９０６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９０７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９０８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９０９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７６６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０４３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７８０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４５８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７７９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２７４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０３９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１０３４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４６１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２７３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７８３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２１１５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４８２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９８６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２４１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－４０９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１３５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１９９８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１２３５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１４７５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８９４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２５５２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８８３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８４２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－８５１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－２２６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９８５）に記載される配列を含む。いく




つかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５２４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－５１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１７２１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１１３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－９９３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ３－１１０４）に記載される配列を含む。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８９～９８８に記載される配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一の配列を含むか、またはこれからからなる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号８８９～９８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号８８９～９８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＳＴＡＴ３転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０の置換を除き、配列番号８８９～９８８からなる群から選択される配列のうちの１つから選択されるか、またはそれを含み、ここで、置換ＡＳＯは、ＣＥＢＰｂ転写物に結合することができる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号８８９～９８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＳＴＡＴ３転写物に対して相補的な１、２、３、または４つの追加の５’及び／または３’ヌクレオチドを含み得る。
いくつかの態様において、ＳＴＡＴ３をコードするｍＲＮＡ転写物に対する、本明細書で開示されるＳＴＡＴ３転写物を標的とするＡＳＯの結合は、ＳＴＡＴ３の発現レベル及び／または活性レベルを減少させ得る。
ＩＩ．Ｃ．５．ＮＲＡＳを標的とするＡＳＯ
ＮＲａｓは、ゴルジ装置と原形質膜の間を行き来する膜タンパク質をコードするがん遺伝子である。ＮＲａｓをコードするゲノムＤＮＡは、染色体１ｐ１３．２の位置に見出すことができる（すなわち、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＧ＿００７５７２のヌクレオチド５００１～１７４３８）。具体的には、タイムラプス顕微鏡と光退色技術の組み合わせにより、ＧＦＰタグ付きＮ－Ｒａｓが、パルミトイル化されていない状態で、サイトゾルとＥＲ／ゴルジ膜の間で迅速な交換を行うこと、また、野生型ＧＦＰ－Ｎ－Ｒａｓが、非小胞機構によってゴルジ複合体にリサイクルされることが明らかになった。Ｎ－ｒａｓ変異は、黒色腫、甲状腺癌、奇形癌、線維肉腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、バーキットリンパ腫、急性前骨髄球性白血病、Ｔ細胞白血病、及び慢性骨髄性白血病において記載されている。発がん性Ｎ－Ｒａｓは、マウスにおいて、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）様疾患または慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）様疾患を誘発することができる。
神経芽細胞腫ＲＡＳウイルスがん遺伝子（ＮＲａｓ）は、様々な名称で、当該技術分野において知られている。そのような名称には、ＧＴＰａｓｅ ＮＲａｓ、Ｎ－ｒａｓタンパク質パート４、神経芽細胞腫ＲＡＳウイルス（ｖ－ｒａｓ）がん遺伝子ホモログ 神経芽細胞腫ＲＡＳウイルスがん遺伝子ホモログ、トランスフォーミングタンパク質Ｎ－Ｒａｓ、及びｖ－ｒａｓ神経芽細胞腫ＲＡＳウイルスがん遺伝子ホモログが含まれる。
ＮＲＡＳ遺伝子は、主に細胞分裂の制御に関与するＮ－Ｒａｓと呼ばれるタンパク質を作るための命令を提供する。ヒトＮＲＡＳをコードするｍＲＮＡ配列は、ＮＣＢＩレファレンス配列ＮＭ＿００２５２４．５に見出すことができ、コーディング配列（配列番号５３）によって表される。
ヒトＮＲａｓ遺伝子産物の天然バリアントは、知られている。例えば、ヒトＮＲａｓタンパク質の天然バリアントは、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１３Ｄ、Ｔ５０Ｉ、Ｇ６０Ｅ、及び任意のこれらの組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含有し得る。選択的スプライシングから生じるヒトＮＲａｓタンパク質の更なるバリアントもまた当該技術分野において知られており、Ｇ１３Ｒ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｒ、及びＰ３４Ｌなどがある。したがって、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ３タンパク質の天然バリアントの発現を減少または阻害するように設計することができる。
配列番号５１は、配列番号５１のヌクレオチド「ｔ」がｐｒｅ－ｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、ＮＲａｓ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列と同一である。ある特定の態様において、「標的核酸」は、ＮＲａｓタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのイントロンを含む。他の態様において、標的核酸は、ＮＲａｓタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン領域を含む。更なる他の態様において、標的核酸は、ＮＲａｓタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン－イントロンジャンクションを含む。いくつかの態様において、「標的核酸」は、例えば、研究または診断に使用される場合、上記ＤＮＡまたはＲＮＡ核酸標的から得られるｃＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドであり得る。ＮＲａｓ ｐｒｅ－ｍＲＮＡによってコードされるヒトＮＲａｓタンパク質配列は、配列番号５２として示される。他の態様において、標的核酸は、ＮＲａｓタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、またはその両方を含む。
ある特定の態様において、本開示のＡＳＯはまた、ＮＲａｓ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を下方制御（例えば、減少または除去）することが可能である。この点に関して、本開示のＡＳＯは、典型的に、哺乳動物細胞、例えば、腫瘍細胞などのヒト細胞において、ＮＲａｓ ｍＲＮＡレベルの減少を介して、ＮＲａｓタンパク質の間接的阻害に影響を与えることができる。特に、本開示は、ＮＲａｓ ｐｒｅ－ｍＲＮＡの１つ以上の領域（例えば、イントロン領域、エクソン領域、及び／またはエクソン－イントロンジャンクション領域）を標的とするＡＳＯに関する。特に指定のない限り、「ＮＲａｓ」という用語は、本明細書で使用される場合、１つ以上の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、及びクマ）に由来するＮＲａｓを指し得る。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＮＲＡＳ転写物、例えば、配列番号５１または配列番号５３のイントロン内の領域にハイブリダイズする。ある特定の態様において、本開示のＡＳＯは、ＮＲＡＳ転写物、例えば、配列番号５１または配列番号５３のエクソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様において、本開示のＡＳＯは、ＮＲＡＳ転写物、例えば、配列番号５１または配列番号５３のエクソン－イントロンジャンクション内の領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＮＲＡＳ転写物、例えば、配列番号５１または配列番号５３内の領域（例えば、イントロン、エクソン、またはエクソン－イントロンジャンクション）にハイブリダイズし、ここで、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される式：５’ Ａ－Ｂ－Ｃ ３’に従う設計を有する。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＮＲａｓ転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号５１）内の複数の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＮＲａｓ転写物内の２つの異なる標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＮＲａｓ転写物内の３つの異なる標的領域にハイブリダイズする。複数の標的領域にハイブリダイズする例示的なＡＳＯの配列、及び異なる標的領域の開始／終了部位は、図１Ｅに示される。いくつかの態様において、ＮＲａｓ転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号５１）内の複数の領域にハイブリダイズするＡＳＯは、ＮＲａｓ転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号５１）内の単一領域にハイブリダイズするＡＳＯと比較して、ＮＲａｓ発現を減少させることにおいて、より強力である（例えば、より低いＥＣ５０を有する）。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＮＲＡＳタンパク質の特定のアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１、ＮＣＢＩ ＩＤ：ＮＰ＿００１２２９８２１．１）をコードするｍＲＮＡを標的とする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＮＲａｓタンパク質の全てのアイソフォームを標的とする。他の態様において、ＡＳＯは、ＮＲａｓタンパク質の２つのアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１及びアイソフォーム２（ＮＣＢＩ ＩＤ：ＮＰ＿００９０８９．４）、アイソフォーム２及びアイソフォーム３（ＮＣＢＩ ＩＤ：ＮＰ＿００１１２３９９５）、及びアイソフォーム３及びアイソフォーム４（ＮＣＢＩ ＩＤ：ＮＰ＿００１２２９８２０．１））を標的とする。
本開示のＡＳＯは、ＮＲａｓ転写物、例えば、配列番号５１に対応するヌクレオチド配列の領域の相補体に対応する連続ヌクレオチド配列を含む。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯのヌクレオチド配列または連続ヌクレオチド配列は、配列番号９８９～１０８８（すなわち、図１Ｅの配列）から選択される配列に対して、少なくとも約８０％の配列同一性、例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、少なくとも約９９％の配列同一性、例えば、約１００％の配列同一性（相同）を有する。いくつかの態様において、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される設計または本明細書で別途示される化学構造を有する（例えば、図１Ｅ）。
いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、ＮＲａｓに対して、配列番号９８９～１０８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも１０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＮＲａｓ転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。ＮＲＡＳ遺伝子を標的とする非限定的な例示的なＡＳＯは、図１Ｅに見出すことができる。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８９（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１８０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９０（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１８１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９１（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４３４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９２（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９３（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９４（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９５（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６２０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９６（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３００２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９７（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９８（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９９（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０００（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１００１（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１００２（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１００３（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１００４（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１００５（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６２０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１００６（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１３４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１００７（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１７６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１００８（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１７９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１００９（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１８０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１０（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１８１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１１（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１８３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１２（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３２５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１３（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３３７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１４（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３３８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１５（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３４１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１６（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３７８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１７（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３７９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１８（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３８８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１９（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３８９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２０（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３９９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２１（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４００）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２２（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４０１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２３（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４０２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２４（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４０８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２５（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４２１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２６（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４２２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２７（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４２９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２８（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４９０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２９（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５１３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３０（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５１４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３１（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５２０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３２（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５２１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３３（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５２２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３４（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５２４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３５（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５３２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３６（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５３４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３７（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５３５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３８（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５３６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３９（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５３７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４０（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－５３９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４１（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６０４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４２（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４３（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４４（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４５（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４６（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４７（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４８（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４９（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５０（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６１９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５１（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６２０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５２（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６２２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５３（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６２３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５４（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６２４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５５（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６９０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５６（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－６９１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５７（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－７３１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５８（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－８３５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５９（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－８３６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６０（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－９１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６１（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－９２２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６２（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１０７２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６３（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１０７４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６４（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１３１３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６５（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１４７５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６６（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１６１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６７（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１６１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６８（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１６２１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６９（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１６２２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７０（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１６２３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７１（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１９５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７２（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１９５７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７３（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１９５８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７４（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１９５９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７５（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１９６２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７６（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－１９６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７７（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－２１１３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７８（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－２１１４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７９（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－２１２２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８０（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－２４１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８１（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－２４１９）に記載される配




列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８２（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－２７５９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８３（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－２７６０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８４（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－２７６１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８５（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－２８８６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８６（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－３５５７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８７（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４０２７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８８（例えば、ＡＳＯ－ＮＲａｓ－４０８２）に記載される配列を含む。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８９～１０８８に記載される配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一の配列を含むか、またはこれからからなる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号９８９～１０８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号９８９～１０８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＮＲａｓ転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０の置換を除き、配列番号９８９～１０８８からなる群から選択される配列のうちの１つから選択されるか、またはそれを含み、ここで、置換ＡＳＯは、ＮＲａｓ転写物に結合することができる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号９８９～１０８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＮＲａｓ転写物に対して相補的な１、２、３、または４つの追加の５’及び／または３’ヌクレオチドを含み得る。
いくつかの態様において、ＮＲａｓをコードするｍＲＮＡ転写物に対する、本明細書で開示されるＮＲａｓ転写物を標的とするＡＳＯの結合は、ＮＲａｓの発現レベル及び／または活性レベルを減少させ得る。
ＩＩ．Ｃ．６．ＫＲＡＳを標的とするＡＳＯ
ＫＲＡＳは、様々な名称で、当該技術分野において知られている。そのような名称には、ＫＲＡＳがん原遺伝子、ＧＴＰａｓｅ；Ｖ－Ｋｉ－Ｒａｓ２カーステンラット肉腫２ウイルスがん遺伝子ホモログ；ＧＴＰａｓｅ ＫＲａｓ；Ｃ－Ｋｉ－Ｒａｓ；Ｋ－Ｒａｓ ２；ＫＲＡＳ２；ＲＡＳＫ２；Ｖ－Ｋｉ－Ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ；カーステンラット肉腫ウイルスがん原遺伝子；細胞トランスフォーミングがん原遺伝子；細胞Ｃ－Ｋｉ－Ｒａｓ２がん原遺伝子；トランスフォーミングタンパク質Ｐ２１；ＰＲ３１０Ｃ－Ｋ－Ｒａｓがん遺伝子；Ｃ－カーステン－Ｒａｓタンパク質；Ｋ－ＲａｓＰ２１タンパク質；及びがん遺伝子ＫＲＡＳ２が含まれる。
ヒトＫＲＡＳ遺伝子の配列は、染色体上の位置１２ｐ１２．１にあり、公開されているＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００００１２（２５，２０４，７８９－２５，２５０，９３６）に見出すことができる。ヒト野生型ＫＲＡＳ転写物のゲノム配列は、ＮＣ＿００００１２（配列番号３５）の残基２５，２０４，７８９－２５，２５０，９３６の逆相補鎖に対応する。配列番号３１に提供されるＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄゲノム配列は、ヌクレオチドの位置５，５８７にグアニンからアデニンへの置換を有する点で、配列番号３５とは異なる。例示的なＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ ｍＲＮＡ配列は、配列番号３３のヌクレオチド「ｔ」がｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、配列番号３３に提供される。配列番号３３に提供されるＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ ｍＲＮＡは、ヌクレオチドの位置２２５にグアニンからアデニンへの置換を有する点で、野生型ｍＲＮＡ配列（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００４９８５．５；配列番号３７）とは異なる。ヒトＫＲＡＳタンパク質の配列は、公開されているアクセッション番号Ｐ０１１１６（カノニカル配列）、Ａ８Ｋ８Ｚ５、Ｂ０ＬＰＦ９、Ｐ０１１１８、及びＱ９６Ｄ１０に見出すことができ、そのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。
選択的スプライシングから生じるヒトＫＲＡＳタンパク質（Ｐ０１１１６）には２つのアイソフォームがある。アイソフォーム２Ａ（アクセッション番号：Ｐ０１１１６－１；配列番号３８）は、カノニカル配列である。Ｋ－Ｒａｓ４Ａとしても知られている。アイソフォーム２Ｂ（アクセッション番号：Ｐ０１１１６－２；Ｋ－Ｒａｓ４Ｂとしても知られている；配列番号３６）は、次の点でカノニカル配列とは異なる：（ｉ）１５１－１５３：ＲＶＥ→ＧＶＤ；及び（ｉｉ）１６５－１８９：ＱＹＲＬＫＫＩＳＫＥＥＫＴＰＧＣＶＫＩＫＫＣＩＩＭ（配列番号５９９）→ＫＨＫＥＫＭＳＫＤＧＫＫＫＫＫＫＳＫＴＫＣＶＩＭ（配列番号６００）。いくつかの態様において、本明細書で開示されるＡＳＯは、ＫＲＡＳタンパク質アイソフォーム２Ａ、アイソフォーム２Ｂ、またはその両方の発現を減少または阻害することができる。
ヒトＫＲＡＳ遺伝子産物の天然バリアントは、知られている。例えば、ヒトＫＲＡＳタンパク質の天然バリアントは、Ｋ５Ｅ、Ｋ５Ｎ、Ｇ１０ＧＧ、Ｇ１０Ｖ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１２Ｉ、Ｇ１２Ｌ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｅ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１３Ｖ、Ｖ１４Ｉ、Ｌ１９Ｆ、Ｔ２０Ｍ、Ｑ２２Ｅ、Ｑ２２Ｈ、Ｑ２２Ｋ、Ｑ２２Ｒ、Ｑ２５Ｈ、Ｎ２６Ｙ、Ｆ２８Ｌ、Ｅ３１Ｋ、Ｄ３３Ｅ、Ｐ３４Ｌ、Ｐ３４Ｑ、Ｐ３４Ｒ、Ｉ３６Ｍ、Ｒ４１Ｋ、Ｄ５７Ｎ、Ｔ５８Ｉ、Ａ５９Ｔ、Ｇ６０Ｄ、Ｇ６０Ｒ、Ｇ６０Ｓ、Ｇ６０Ｖ、Ｑ６１Ａ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｐ、Ｑ６１Ｒ、Ｅ６３Ｋ、Ｓ６５Ｎ、Ｒ６８Ｓ、Ｙ７１Ｈ、Ｔ７４Ａ、Ｌ７９Ｉ、Ｒ９７Ｉ、Ｑ９９Ｅ、Ｍ１１１Ｌ、Ｋ１１７Ｎ、Ｋ１１７Ｒ、Ｄ１１９Ｇ、Ｓ１２２Ｆ、Ｔ１４４Ｐ、Ａ１４６Ｐ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ｋ１４７Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｒ１４９Ｋ、Ｌ１５９Ｓ、Ｉ１６３Ｓ、Ｒ１６４Ｑ、Ｉ１８３Ｎ、Ｉ８４Ｍ、またはこれらの組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含有し得る。ＫＲＡＳタンパク質アイソフォーム２Ｂに特異的である天然バリアントは、Ｖ１５２Ｇ、Ｄ１５３Ｖ、Ｆ１５６Ｉ、Ｆ１５６Ｌ、またはこれらの組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含有する。本開示のＡＳＯは、ＫＲＡＳタンパク質のバリアント（例えば、当該技術分野において知られている任意のバリアント）の１つ以上の発現を減少または阻害するように設計することができる。いくつかの態様において、ＫＲＡＳ変異体は、Ｇ１２Ｄのアミノ酸置換を有する。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、１つ以上のＫＲＡＳ変異体を標的とする。他の態様において、ＡＳＯが標的とするＫＲＡＳ変異体は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ（配列番号３２）である。ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ ｍＲＮＡ及びＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄタンパク質の例示的な配列は、配列番号３３及び配列番号３２に提供される。
いくつかの態様において、本明細書で開示されるＡＳＯの標的核酸配列は、ＫＲＡＳ ｐｒｅ－ｍＲＮＡの１つ以上の領域を含む。例えば、配列番号３１（上記）は、配列番号３１のヌクレオチド「ｔ」がｐｒｅ－ｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、ＫＲＡＳ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列と同一である。本明細書で使用される場合、「標的核酸配列」という用語は、本明細書で開示されるＡＳＯに対して相補的な核酸配列を指す。ある特定の態様において、標的核酸配列は、ＫＲＡＳタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン領域を含む。いくつかの態様において、標的核酸配列は、ＫＲＡＳタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのイントロンを含む。更なる態様において、標的核酸配列は、ＫＲＡＳタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン－イントロンジャンクションを含む。いくつかの態様において、標的核酸は、例えば、研究または診断に使用される場合、本明細書に記載されるＤＮＡまたはＲＮＡ核酸標的から得られるｃＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドであり得る。いくつかの態様において、標的核酸は、ＫＲＡＳタンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、またはその両方を含む。
したがって、いくつかの態様において、本明細書で開示されるＡＳＯは、ＫＲＡＳ転写物、例えば、配列番号３１または配列番号３３のエクソン領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＫＲＡＳ転写物、例えば、配列番号３１のイントロン領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＫＲＡＳ転写物、例えば、配列番号３１のエクソン－イントロンジャンクションにハイブリダイズする。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＫＲＡＳ転写物、例えば、配列番号３１内の領域（例えば、イントロン、エクソン、またはエクソン－イントロンジャンクション）にハイブリダイズし、ここで、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される設計を有する。
いくつかの態様において、本明細書で開示されるＡＳＯの標的核酸配列は、ＫＲＡＳ ｍＲＮＡ、例えば、配列番号３３である。したがって、ある特定の態様において、本明細書で開示されるＡＳＯは、ＫＲＡＳ ｍＲＮＡの１つ以上の領域にハイブリダイズすることができる。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＫＲＡＳタンパク質の特定のアイソフォームをコードするｍＲＮＡを標的とする。ある特定の態様において、本明細書で開示されるＡＳＯは、ＫＲＡＳタンパク質の全てのアイソフォームを、その任意のバリアント（例えば、本明細書に記載されるもの）を含め、標的とすることができる。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯによって標的化することができるＫＲＡＳタンパク質は、Ｇ１２Ｄアミノ酸置換を含む。ＫＲＡＳ転写物を標的とする非限定的な例示的ＡＳＯは、図１Ｆに示される。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０７～８２０からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０７（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－０００４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０８（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－０００５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０９（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－０００６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１０（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－０００７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１１（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－０００８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１２（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－０００９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１３（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００１０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１４（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００１１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１５（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００１２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１６（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００１３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１７（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００１４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１８（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００１５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１９（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００１６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２０（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００１７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２１～８３５からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２１（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００１８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２２（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００１９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２３（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００２０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２４（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００２１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２５（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００２２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２６（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００２３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２７（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００２４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２８（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００２５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２９（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００２６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３０（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００２７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３１（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００２８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３２（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００２９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３３（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００３０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３４（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００３１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３５（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００３２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３６～８５１からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３６（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００３３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３７（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００３４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３８（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００３５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３９（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００３６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４０（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００３７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４１（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００３８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４２（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００３９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４３（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００４０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４４（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００４１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４５（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００４２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４６（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００４３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４７（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００４４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４８（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００４５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４９（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００４６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５０（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００４７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５１（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００４８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５２～８６８からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５２（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００４９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５３（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００５０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５４（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００５１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５５（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００５２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５６（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００５３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５７（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００５４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５８（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００５５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５９（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００５６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６０（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００５７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６１（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００５８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６２（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００５９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６３（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００６０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６４（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００６１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６５（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００６２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６６（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００６３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６７（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００６４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６８（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００６５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６９～８８８からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６９（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００６６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７０（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００６７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７１（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００６８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７２（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００６９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７３（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００７０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７４（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００７１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７５（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００７２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７６（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００７３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７７（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００７４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７８（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００７５）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７９（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００７６）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８０（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００７７）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８１（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００７８）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８２（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００７９）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８３（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００８０）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８４（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００８１）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８５（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００８２）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８６（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００８３）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８７（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００８４）に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８８（例えば、ＡＳＯ－ＫＲＡＳ－００８５）に記載される配列を含む。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０７～８８８に記載される配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一の配列を含むか、またはこれからからなる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号８０７～８８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号８０７～８８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＫＲＡＳ転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０の置換を除き、配列番号８０７～８８８からなる群から選択される配列のうちの１つから選択されるか、またはそれを含み、ここで、置換ＡＳＯは、ＫＲＡＳ転写物に結合することができる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号８０７～８８８からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＫＲＡＳ転写物に対して相補的な１、２、３、または４つの追加の５’及び／または３’ヌクレオチドを含み得る。
いくつかの態様において、ＫＲＡＳをコードするｍＲＮＡ転写物に対する、本明細書で開示されるＫＲＡＳ転写物を標的とするＡＳＯの結合は、ＫＲＡＳの発現レベル及び／または活性レベルを減少させ得る。
ＩＩ．Ｃ．７ Ｐｍｐ２２を標的とするＡＳＯ
末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）は、成長停止特異的タンパク質３（ＧＡＳ－３）、としても知られ、ＰＭＰ２２遺伝子によってコードされる。ＰＭＰ２２は、１６０アミノ酸からなる２２ｋＤａの膜貫通型糖タンパク質であり、主に、末梢神経系のシュワン細胞に発現する。シュワン細胞は、ＰＭＰ２２の高発現を示し、コンパクトミエリン中の全タンパク質含量のうち２～５％を構成し得る。コンパクトミエリンは、末梢神経細胞のミエリン鞘の大部分を占め、神経軸索を電気的に絶縁する保護的な脂肪層を提供する。成人の中枢神経系では、ＰＭＰ２２の発現レベルは比較的低い。
ヒトにおいて、ＰＭＰ２２遺伝子は、染色体１７ｐ１１．２に位置し、およそ４０ｋｂに及ぶ。この遺伝子は、ヒトと齧歯類の両方で保存されている６つのエクソンを含有し、その２つは、５’非翻訳エクソン（１ａ及び１ｂ）であり、同一のコーディング配列を持つ２つの異なるＲＮＡ転写物を生じる。２つの転写物は、その５’非翻訳領域が異なり、それぞれが自身の発現制御プロモーターを有する。残りのエクソン（２～５）は、ＰＭＰ２２遺伝子のコード領域を含み、転写後の修飾（すなわち、選択的スプライシング）の後に結合する。ＰＭＰ２２タンパク質は、４つの膜貫通ドメイン、２つの細胞外ループ（ＥＣＬ１及びＥＣＬ２）、及び１つの細胞内ループを特徴とする。ＥＣＬ１は、２つのＰＭＰ２２タンパク質間の同種親和性相互作用を媒介することが示唆されており、一方、ＥＣＬ２は、ＰＭＰ２２タンパク質とミエリンタンパク質ゼロ（ＭＰＺまたはＭＰ０）との間の異好性相互作用を示すことが示されている。
ＰＭＰ２２は、コンパクトミエリンの形成及び維持に不可欠な役割を担っている。ＰＭＰ２２の発現は、シュワン細胞が神経軸索と接触すると著しく上方制御されるのに対し、軸索の変性または切断中にはＰＭＰ２２は下方制御される。ＰＭＰ２２は、他の細胞及び細胞外マトリックスとの接着に関与し、ミエリンの機能をサポートするタンパク質である、閉鎖帯１及びオクルディンとの関連も示されている。細胞接着機能に加えて、ＰＭＰ２２は、シュワン細胞の増殖中にも上方制御されることから、細胞周期を調整する役割が示唆される。ＰＭＰ２２は、非神経組織でも検出されており、その発現は、成長停止特異的（ｇａｓ－３）機能として働くことが示されている。
ＰＭＰ２２遺伝子の遺伝子量が不適切になると、ミエリン鞘のタンパク質合成及び機能に異常が生じる。ミエリンの構成成分は化学量論的に設定されているため、構成成分のいずれの不規則な発現もミエリンの不安定化及び神経障害を引き起こし得る。ＰＭＰ２２遺伝子の発現変化は、シャルコー・マリー・トゥース病１Ａ型（ＣＭＴ１Ａ）、デジュリーヌ・ソッタス病、及び遺伝性圧脆弱性ニューロパチー（ＨＮＰＰ）などの様々な神経障害と関連している。ＰＭＰ２２が多すぎると（例えば、遺伝子重複により生じたもの）は、ＣＭＴ１Ａとなる。ＰＭＰ２２の遺伝子重複は、最も一般的なＣＭＴの遺伝的原因であり、ＰＭＰ２２の過剰生産は、複数のシグナル伝達経路における欠陥、ならびにＫＮＯＸ２０、ＳＯＸ１０及びＥＧＲ２などの転写因子の機能不全をもたらす。
ヒトＰＭＰ２２遺伝子の配列は、公開されているＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ Ａｃｃ．番号ＮＭ＿０００３０４に見出すことができる。別のＲｅｆＳｅｑ ｍＲＮＡ転写物は、アクセッション番号ＮＭ＿００１２８１４５５、ＮＭ－００１２８１４５６、ＮＭ－１５３３２１、及びＮＭ＿１５３３２２をそれぞれ有する。ヒトＰＭＰ２２遺伝子は、染色体の位置１７ｐ１２の１５，２２９，７７７～１５，２６５，３２６に見出される。
ヒトＰＭＰ２２ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ転写物に対する配列（配列番号２６４）は、染色体の位置１７ｐ１２の残基１５，２２９，７７７～１５，２６５，３２６の逆相補鎖に対応する。ＰＭＰ２２ ｍＲＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０００３０４．４）は、配列番号５８に提供される。ヒトＰＭＰ２２タンパク質の配列は、公開されているＵｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ０１４５３（カノニカル配列、配列番号６０）に見出すことができる。潜在的なＰＭＰ２２アイソフォームは、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ａ８ＭＵ７５、Ｊ３ＫＱＷ０、Ａ０Ａ２Ｒ８Ｙ５Ｌ５、Ｊ３ＫＴ３６、及びＪ３ＱＳ０８をそれぞれ有する。本明細書で開示されるアクセッション番号に対応するデータベース項目の公開されている内容は、その全体が参照により援用される。
ヒトＰＭＰ２２遺伝子産物の天然バリアントは、知られている。例えば、ヒトＰＭＰ２２タンパク質の天然バリアントは、Ｌ１６Ｐ、Ｓ２２Ｆ、Δ２５－２６、Ｄ３７Ｖ、Ｖ６５Ｆ、Ｓ７２Ｌ、Ｓ７９Ｃ、Ｇ９３Ｒ、Ｌ１０５Ｒ、Ｇ１０７Ｖ、Ｔ１１８Ｎ、Ｌ１４７Ｒ、Ｈ１２Ｑ、Ｌ１６Ｐ、Ｌ１９Ｐ、Ｍ６９Ｋ、Ｌ７１Ｐ、Ｓ７２Ｌ、Ｓ７２Ｐ、Ｓ７２Ｗ、Ｓ７６Ｉ、Ｓ７９Ｐ、Ｌ８０Ｐ、Ｌ８０Ｒ、Δ８４、Ｇ１００Ｅ、Ｇ１００Ｒ、Ｌ１０５Ｒ、Ｃ１０９Ｒ、Ｓ１４９Ｒ、Ｇ１５０Ｃ、Ｇ１５０Ｄ、Ｒ１５７Ｗ、Ｓ２２Ｆ、Ｖ３０Ｍ、Ａ６７Ｔ、Ｓ２３Ｔ、Ｗ２８Ｒ、Ａ６７Ｐ、Δ１１５－１１８、及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含有し得る。
本開示のＡＳＯは、ＰＭＰ２２タンパク質の天然バリアントの発現を減少または阻害するように設計することができる。
ＡＳＯの標的核酸配列の例は、ＰＭＰ２２ ｐｒｅ－ｍＲＮＡである。配列番号５８は、ヒトＰＭＰ２２ゲノム配列（すなわち、染色体１７ｐ１２のヌクレオチド１５，２２９，７７７～１５，２６５，３２６、相補鎖側の逆相補鎖）を表す。配列番号５８は、配列番号５８のヌクレオチド「ｔ」がｐｒｅ－ｍＲＮＡでは「ｕ」で示されることを除き、ＰＭＰ２２ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列と同一である。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６４に記載されるヌクレオチド配列に対応するＰＭＰ２２転写物（ＰＭＰ２２完全ｍＲＮＡ転写物）のヌクレオチド１～１８２８または配列番号５９に記載されるヌクレオチド配列に対応するＰＭＰ２２転写物（ＰＭＰ２２コーディング配列）のヌクレオチド２０８～６９０内の核酸配列に相補的な１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。
いくつかの態様において、連続ヌクレオチド配列は、ＰＭＰ２２転写物内の核酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％相補的である。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ヒト細胞（例えば、シュワン細胞）において、ＰＭＰ２２タンパク質発現を減少することが可能であり、ここで、ヒト細胞は、ＰＭＰ２２タンパク質を発現する。
いくつかの態様において、ＰＭＰ２２タンパク質発現は、ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞におけるＰＭＰ２２タンパク質発現と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少する。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ヒト細胞（例えば、免疫細胞）において、ＰＭＰ２２ ｍＲＮＡのレベルを減少することが可能であり、ここで、ヒト細胞は、ＰＭＰ２２ ｍＲＮＡを発現する。いくつかの態様において、ＰＭＰ２２ ｍＲＮＡのレベルは、ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞におけるＰＭＰ２２ ｍＲＮＡのレベルと比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少する。
ある特定の態様において、標的核酸は、ＰＭＰ２２タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのイントロンを含む。他の態様において、標的核酸は、ＰＭＰ２２タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン領域を含む。更なる他の態様において、標的核酸は、ＰＭＰ２２タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアント、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのエクソン－イントロンジャンクションを含む。いくつかの態様において、標的核酸は、例えば、研究または診断に使用される場合、上記ＤＮＡまたはＲＮＡ核酸標的から得られるｃＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドであり得る。ヒトＰＭＰ２２コーディング配列（ＣＤＳ）は配列番号５９として示され、ＰＭＰ２２ ｐｒｅ－ｍＲＮＡのコーディング配列によってコードされるタンパク質配列は配列番号６０として示される。他の態様において、標的核酸は、ＰＭＰ２２タンパク質をコードする核酸またはその天然に生じるバリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、またはその両方を含む。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物、例えば、配列番号５８のイントロン内の領域にハイブリダイズする。ある特定の態様において、本開示のＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物、例えば、配列番号５８のエクソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様において、本開示のＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物、例えば、配列番号５８のエクソン－イントロンジャンクション内の領域にハイブリダイズする。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物内の核酸配列に相補的な連続ヌクレオチド配列（例えば、１０～３０ヌクレオチド長、例えば、２０ヌクレオチド長）、例えば、配列番号２６４に対応する領域を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物の核酸配列、または配列内の領域（標的領域）にハイブリダイズする連続ヌクレオチド配列を含み、ここで、連続ヌクレオチド配列は、ＰＭＰ２２転写物の（ｉ）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）；（ｉｉ）コーディング領域；または（ｉｉｉ）３’ＵＴＲ内の核酸配列に相補的である。いくつかの態様において、連続ヌクレオチド配列は、（ｉ）配列番号５８のヌクレオチド１～１７３（エクソン１）；（ｉｉ）配列番号５８のヌクレオチド１７４～２８５（エクソン２）；（ｉｉｉ）配列番号５８のヌクレオチド２８６～３８５（エクソン３）；（ｉｖ）配列番号５８のヌクレオチド３８６～５２６（エクソン４）；（ｖ）配列番号５８の５２７～１８２８（エクソン５）；（ｖｉ）配列番号５８の２００～３００、（ｖｉｉ）配列番号５８のヌクレオチド２００～４００；（ｖｉｉｉ）配列番号５８のヌクレオチド５００～６００；（ｉｘ）配列番号５８のヌクレオチド６００～７００；（ｘ）配列番号５８のヌクレオチド６００～８００；（ｘｉ）配列番号５８の１２００～１３００；（ｘｉｉ）配列番号５８の４００～６００；（ｘｉｉｉ）配列番号５８のヌクレオチド８００～１０００；（ｘｉｖ）配列番号５８のヌクレオチド１０００～１２００；（ｘｖ）配列番号５８のヌクレオチド１２００～１４００；（ｘｖｉ）配列番号５８のヌクレオチド１４００～１６００；または（ｘｖｉｉ）配列番号５８の１６００～１８００を含む核酸配列に対して相補的である。
いくつかの態様において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５８のヌクレオチド１５２～１６８（配列番号６２）、２２５～２４４（配列番号６３）、２２７～２４６（配列番号６４）、２３５～２５４（配列番号６５）、２６５～２８４（配列番号６６）、２７１～２９０（配列番号６７）、３８０～３９９（配列番号６８）、３８３～４０２（配列番号６９）、３８５～４０４（配列番号７０）、４１８～４３７（配列番号７１）、４７９～４９８（配列番号７２）、５８３～６０２（配列番号７３）、６７１～６９０（配列番号７４）、６７２～６９１（配列番号７５）、６７３～６９２（配列番号７６）、６７４～６９３（配列番号７７）、６７５～６９１（配列番号７８）、６７６～６９１（配列番号７９）、６７８～６９３（配列番号８０）、９３９～９５８（配列番号８１）、９４０～９５９（配列番号８２）、１１２７～１１４６（配列番号８３）、１１３０～１１４９（配列番号８４）、１２９３～１３１２（配列番号８５）、１３１６～１３３５（配列番号８６）、１３１７～１３３６（配列番号８７）、１３１９～１３３８（配列番号８８）、１３６５～１３８４（配列番号８９）、１４０４～１４２３（配列番号９０）、１６０４～１６２３（配列番号９１）、１６０５～１６２４（配列番号９２）、１６１１～１６３０（配列番号９３）、１６１２～１６３１（配列番号９４）、または１６７９～１６８８（配列番号２６３）を含む核酸配列に対して相補的である。いくつかの態様において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５８のヌクレオチド１５２～１６８（配列番号６２）、２３５～２５４（配列番号６５）、３８５～４０４（配列番号７０）、４７９～４９８（配列番号７２）、６７２～６９１（配列番号７５）、６７５～６９１（配列番号７８）、９３９～９５８（配列番号８１）、１１３０～１１４９（配列番号８４）、１２９３～１３１２（配列番号８５）、１３６５～１３８４（配列番号８９）、１４０４～１４２３（配列番号９０）、または１６０５～１６２４（配列番号９２）を含む核酸配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含む。
いくつかの態様において、標的領域は、配列番号５８の位置２０８～２２３、２０９～２２４、２１０～２２５、２１１～２２６、２１２～２２７、２１３～２２８、２１４～２２９、２１５～２３０、２１６～２３１、２１７～２３２、２１８～２３３、２１９～２３４、２２０～２３５、２２１～２３６、２２２～２３７、２２３～２３８、２２４～２３９、２２５～２４０、２２６～２４１、２２７～２４２、２２８～２４３、２２９～２４４、２３０～２４５、２３１～２４６、２３２～２４７、２３３～２４８、２３４～２４９、２３５～２５０、２３６～２５１、２３７～２５２、２３８～２５３、２３９～２５４、２４０～２５５、２４１～２５６、２４２～２５７、２４３～２５８、２４４～２５９、２４５～２６０、２４６～２６１、２４７～２６２、２４８～２６３、２４９～２６４、２５０～２６５、２５１～２６６、２５２～２６７、２５３～２６８、２５４～２６９、２５５～２７０、２５６～２７１、２５７～２７２、２５８～２７３、２５９～２７４、２６０～２７５、２６１～２７６、２６２～２７７、２６３～２７８、２６４～２７９、２６５～２８０、２６６～２８１、２６７～２８２、２６８～２８３、２６９～２８４、２７０～２８５、２７１～２８６、２７２～２８７、２７３～２８８、２７４～２８９、２７５～２９０、２７６～２９１、２７７～２９２、２７８～２９３、２７９～２９４、２８０～２９５、２８１～２９６、２８２～２９７、２８３～２９８、２８４～２９９、２８５～３００、２８６～３０１、２８７～３０２、２８８～３０３、２８９～３０４、２９０～３０５、２９１～３０６、２９２～３０７、２９３～３０８、２９４～３０９、２９５～３１０、２９６～３１１、２９７～３１２、２９８～３１３、２９９～３１４、３００～３１５、３０１～３１６、３０２～３１７、３０３～３１８、３０４～３１９、３０５～３２０、３０６～３２１、３０７～３２２、３０８～３２３、３０９～３２４、３１０～３２５、３１１～３２６、３１２～３２７、３１３～３２８、３１４～３２９、３１５～３３０、３１６～３３１、３１７～３３２、３１８～３３３、３１９～３３４、３２０～３３５、３２１～３３６、３２２～３３７、３２３～３３８、３２４～３３９、３２５～３４０、３２６～３４１、３２７～３４２、３２８～３４３、３２９～３４４、３３０～３４５、３３１～３４６、３３２～３４７、３３３～３４８、３３４～３４９、３３５～３５０、３３６～３５１、３３７～３５２、３３８～３５３、３３９～３５４、３４０～３５５、３４１～３５６、３４２～３５７、３４３～３５８、３４４～３５９、３４５～３６０、３４６～３６１、３４７～３６２、３４８～３６３、３４９～３６４、３５０～３６５、３５１～３６６、３５２～３６７、３５３～３６８、３５４～３６９、３５５～３７０、３５６～３７１、３５７～３７２、３５８～３７３、３５９～３７４、３６０～３７５、３６１～３７６、３６２～３７７、３６３～３７８、３６４～３７９、３６５～３８０、３６６～３８１、３６７～３８２、３６８～３８３、３６９～３８４、３７０～３８５、３７１～３８６、３７２～３８７、３７３～３８８、３７４～３８９、３７５～３９０、３７６～３９１、３７７～３９２、３７８～３９３、３７９～３９４、３８０～３９５、３８１～３９６、３８２～３９７、３８３～３９８、３８４～３９９、３８５～４００、３８６～４０１、３８７～４０２、３８８～４０３、３８９～４０４、３９０～４０５、３９１～４０６、３９２～４０７、３９３～４０８、３９４～４０９、３９５～４１０、３９６～４１１、３９７～４１２、３９８～４１３、３９９～４１４、４００～４１５、４０１～４１６、４０２～４１７、４０３～４１８、４０４～４１９、４０５～４２０、４０６～４２１、４０７～４２２、４０８～４２３、４０９～４２４、４１０～４２５、４１１～４２６、４１２～４２７、４１３～４２８、４１４～４２９、４１５～４３０、４１６～４３１、４１７～４３２、４１８～４３３、４１９～４３４、４２０～４３５、４２１～４３６、４２２～４３７、４２３～４３８、４２４～４３９、４２５～４４０、４２６～４４１、４２７～４４２、４２８～４４３、４２９～４４４、４３０～４４５、４３１～４４６、４３２～４４７、４３３～４４８、４３４～４４９、４３５～４５０、４３６～４５１、４３７～４５２、４３８～４５３、４３９～４５４、４４０～４５５、４４１～４５６、４４２～４５７、４４３～４５８、４４４～４５９、４４５～４６０、４４６～４６１、４４７～４６２、４４８～４６３、４４９～４６４、４５０～４６５、４５１～４６６、４５２～４６７、４５３～４６８、４５４～４６９、４５５～４７０、４５６～４７１、４５７～４７２、４５８～４７３、４５９～４７４、４６０～４７５、４６１～４７６、４６２～４７７、４６３～４７８、４６４～４７９、４６５～４８０、４６６～４８１、４６７～４８２、４６８～４８３、４６９～４８４、４７０～４８５、４７１～４８６、４７２～４８７、４７３～４８８、４７４～４８９、４７５～４９０、４７６～４９１、４７７～４９２、４７８～４９３、４７９～４９４、４８０～４９５、４８１～４９６、４８２～４９７、４８３～４９８、４８４～４９９、４８５～５００、４８６～５０１、４８７～５０２、４８８～５０３、４８９～５０４、４９０～５０５、４９１～５０６、４９２～５０７、４９３～５０８、４９４～５０９、４９５～５１０、４９６～５１１、４９７～５１２、４９８～５１３、４９９～５１４、５００～５１５、５０１～５１６、５０２～５１７、５０３～５１８、５０４～５１９、５０５～５２０、５０６～５２１、５０７～５２２、５０８～５２３、５０９～５２４、５１０～５２５、５１１～５２６、５１２～５２７、５１３～５２８、５１４～５２９、５１５～５３０、５１６～５３１、５１７～５３２、５１８～５３３、５１９～５３４、５２０～５３５、５２１～５３６、５２２～５３７、５２３～５３８、５２４～５３９、５２５～５４０、５２６～５４１、５２７～５４２、５２８～５４３、５２９～５４４、５３０～５４５、５３１～５４６、５３２～５４７、５３３～５４８、５３４～５４９、５３５～５５０、５３６～５５１、５３７～５５２、５３８～５５３、５３９～５５４、５４０～５５５、５４１～５５６、５４２～５５７、５４３～５５８、５４４～５５９、５４５～５６０、５４６～５６１、５４７～５６２、５４８～５６３、５４９～５６４、５５０～５６５、５５１～５６６、５５２～５６７、５５３～５６８、５５４～５６９、５５５～５７０、５５６～５７１、５５７～５７２、５５８～５７３、５５９～５７４、５６０～５７５、５６１～５７６、５６２～５７７、５６３～５７８、５６４～５７９、５６５～５８０、５６６～５８１、５６７～５８２、５６８～５８３、５６９～５８４、５７０～５８５、５７１～５８６、５７２～５８７、５７３～５８８、５７４～５８９、５７５～５９０、５７６～５９１、５７７～５９２、５７８～５９３、５７９～５９４、５８０～５９５、５８１～５９６、５８２～５９７、５８３～５９８、５８４～５９９、５８５～６００、５８６～６０１、５８７～６０２、５８８～６０３、５８９～６０４、５９０～６０５、５９１～６０６、５９２～６０７、５９３～６０８、５９４～６０９、５９５～６１０、５９６～６１１、５９７～６１２、５９８～６１３、５９９～６１４、６００～６１５、６０１～６１６、６０２～６１７、６０３～６１８、６０４～６１９、６０５～６２０、６０６～６２１、６０７～６２２、６０８～６２３、６０９～６２４、６１０～６２５、６１１～６２６、６１２～６２７、６１３～６２８、６１４～６２９、６１５～６３０、６１６～６３１、６１７～６３２、６１８～６３３、６１９～６３４、６２０～６３５、６２１～６３６、６２２～６３７、６２３～６３８、６２４～６３９、６２５～６４０、６２６～６４１、６２７～６４２、６２８～６４３、６２９～６４４、６３０～６４５、６３１～６４６、６３２～６４７、６３３～６４８、６３４～６４９、６３５～６５０、６３６～６５１、６３７～６５２、６３８～６５３、６３９～６５４、６４０～６５５、６４１～６５６、６４２～６５７、６４３～６５８、６４４～６５９、６４５～６６０、６４６～６６１、６４７～６６２、６４８～６６３、６４９～６６４、６５０～６６５、６５１～６６６、６５２～６６７、６５３～６６８、６５４～６６９、６５５～６７０、６５６～６７１、６５７～６７２、６５８～６７３、６５９～６７４、６６０～６７５、６６１～６７６、６６２～６７７、６６３～６７８、６６４～６７９、６６５～６８０、６６６～６８１、６６７～６８２、６６８～６８３、６６９～６８４、６７０～６８５、６７１～６８６、６７２～６８７、６７３～６８８、６７４～６８９、６７５～６９０に対応する１６－ｍｅｒのヌクレオチド配列に対応する。
いくつかの態様において、標的領域は、配列番号５８の位置２０８～６９０の間の１６－ｍｅｒヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号５８の位置２０８～６９０の間の１７－ｍｅｒヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号５８の位置２０８～６９０の間の１８－ｍｅｒヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号５８の位置２０８～６９０の間の１９－ｍｅｒヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号５８の位置２０８～６９０の間の２０－ｍｅｒヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、上に開示される１６－ｍｅｒ、１７－ｍｅｒ、１８－ｍｅｒ、１９－ｍｅｒまたは２０－ｍｅｒ標的領域と３’末端及び／または５’末端側±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、または±９０のヌクレオチドに対応する。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＡＴＣＴＴＣＡＡＴＣＡＡＣＡＧＣ（配列番号６１）ではない。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＡＴＣＴＴＣＡＡＴＣＡＡＣＡＧＣ（配列番号６１）である。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号５８）内の複数の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物内の２つの異なる標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物内の３つの異なる標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、ＰＭＰ２２転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号５８）内の複数の領域にハイブリダイズするＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号５８）内の単一領域にハイブリダイズするＡＳＯと比較して、ＰＭＰ２２発現を減少させることにおいて、より強力である（例えば、より低いＥＣ５０を有する）。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、ヒト及び齧歯類（例えば、マウスまたはラット）の両方において、ＰＭＰ２２ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を下方制御（例えば、減少または除去）することが可能である。いくつかの態様において、本明細書に記載される任意のＡＳＯは、少なくとも１つの非ヌクレオチドまたは非ポリヌクレオチドに共有結合的に連結されたＡＳＯを含むコンジュゲートの一部分である。
本開示のＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物、例えば、配列番号５８に対応するヌクレオチド配列の領域の相補体に対応する連続ヌクレオチド配列を含む。
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯのヌクレオチド配列または連続ヌクレオチド配列は、配列番号６２～９５または２０１～２７０（すなわち、図２８及び２９のアンチセンス配列）から選択される配列に対して、少なくとも約８０％の配列同一性、例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、少なくとも約９９％の配列同一性、例えば、約１００％の配列同一性（相同）を有する。いくつかの態様において、ＡＳＯは、本明細書に別途記載される設計または本明細書で別途示される化学構造を有する（すなわち、図２８及び２９のアンチセンス配列）。
いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、ＰＭＰ２２に対して、配列番号６２～９５もしくは２０１～２７０からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも１０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＰＭＰ２２転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。ＰＭＰ２２遺伝子を標的とする非限定的な例示的ＡＳＯは、図２８及び２９に示される。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号７９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号８９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２０１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２０２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２０３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２０４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２０５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２０６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２０７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２０８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２０９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２１０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２１１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２１２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２１３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２１４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２１５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２１６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２１７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２１８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２１９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２２０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２２１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２２２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２２３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２２４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２２５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２２６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２２７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２２８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２２９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２３０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２３１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２３２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２３３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２３４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２３５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２３６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２３７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２３８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２３９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２４０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２４１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２４２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２４３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２４４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２４５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２４６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２４７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２４８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２４９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２５０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２５１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２５２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２５３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２５４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２５５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２５６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２５７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２５８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２５９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６０に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６１に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６２に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６３に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６４に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６５に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６６に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６７に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６８に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２６９に記載される配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号２７０に記載される配列を含む。
いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号６２～９５及び２０１～２７０に記載される配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％同一の配列を含むか、またはこれからからなる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号６２～９５及び２０１～２７０からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号６２～９５及び２０１～２７０からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＰＭＰ２２転写物と比較した場合、１、２、３、または４つのミスマッチを含み得る。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０の置換を除き、配列番号６２～９５及び２０１～２７０からなる群から選択される配列のうちの１つから選択されるか、またはそれを含み、ここで、置換ＡＳＯは、ＰＭＰ２２転写物に結合することができる。いくつかの態様において、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、配列番号６２～９５及び２０１～２７０からなる群から選択される配列のうちの１つ、もしくはその少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０の連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、またはそれを含み、ここで、ＡＳＯ（またはその連続ヌクレオチド部分）は、任意選択により、対応するＰＭＰ２２転写物に対して相補的な１、２、３、または４つの追加の５’及び／または３’ヌクレオチドを含み得る。
いくつかの態様において、ＰＭＰ２２をコードするｍＲＮＡ転写物に対する、本明細書で開示されるＰＭＰ２２転写物を標的とするＡＳＯの結合は、ＰＭＰ２２の発現レベル及び／または活性レベルを減少させ得る。
ＩＩ．Ｄ．ＥＶ、例えば、エクソソーム
本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、直径約２０～約３００ｎｍを有し得る。ある特定の態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、約２０～２９０ｎｍ、２０～２８０ｎｍ、２０～２７０ｎｍ、２０～２６０ｎｍ、２０～２５０ｎｍ、２０～２４０ｎｍ、２０～２３０ｎｍ、２０～２２０ｎｍ、２０～２１０ｎｍ、２０～２００ｎｍ、２０～１９０ｎｍ、２０～１８０ｎｍ、２０～１７０ｎｍ、２０～１６０ｎｍ、２０～１５０ｎｍ、２０～１４０ｎｍ、２０～１３０ｎｍ、２０～１２０ｎｍ、２０～１１０ｎｍ、２０～１００ｎｍ、２０～９０ｎｍ、２０～８０ｎｍ、２０～７０ｎｍ、２０～６０ｎｍ、２０～５０ｎｍ、２０～４０ｎｍ、２０～３０ｎｍ、３０～３００ｎｍ、３０～２９０ｎｍ、３０～２８０ｎｍ、３０～２７０ｎｍ、３０～２６０ｎｍ、３０～２５０ｎｍ、３０～２４０ｎｍ、３０～２３０ｎｍ、３０～２２０ｎｍ、３０～２１０ｎｍ、３０～２００ｎｍ、３０～１９０ｎｍ、３０～１８０ｎｍ、３０～１７０ｎｍ、３０～１６０ｎｍ、３０～１５０ｎｍ、３０～１４０ｎｍ、３０～１３０ｎｍ、３０～１２０ｎｍ、３０～１１０ｎｍ、３０～１００ｎｍ、３０～９０ｎｍ、３０～８０ｎｍ、３０～７０ｎｍ、３０～６０ｎｍ、３０～５０ｎｍ、３０～４０ｎｍ、４０～３００ｎｍ、４０～２９０ｎｍ、４０～２８０ｎｍ、４０～２７０ｎｍ、４０～２６０ｎｍ、４０～２５０ｎｍ、４０～２４０ｎｍ、４０～２３０ｎｍ、４０～２２０ｎｍ、４０～２１０ｎｍ、４０～２００ｎｍ、４０～１９０ｎｍ、４０～１８０ｎｍ、４０～１７０ｎｍ、４０～１６０ｎｍ、４０～１５０ｎｍ、４０～１４０ｎｍ、４０～１３０ｎｍ、４０～１２０ｎｍ、４０～１１０ｎｍ、４０～１００ｎｍ、４０～９０ｎｍ、４０～８０ｎｍ、４０～７０ｎｍ、４０～６０ｎｍ、４０～５０ｎｍ、５０～３００ｎｍ、５０～２９０ｎｍ、５０～２８０ｎｍ、５０～２７０ｎｍ、５０～２６０ｎｍ、５０～２５０ｎｍ、５０～２４０ｎｍ、５０～２３０ｎｍ、５０～２２０ｎｍ、５０～２１０ｎｍ、５０～２００ｎｍ、５０～１９０ｎｍ、５０～１８０ｎｍ、５０～１７０ｎｍ、５０～１６０ｎｍ、５０～１５０ｎｍ、５０～１４０ｎｍ、５０～１３０ｎｍ、５０～１２０ｎｍ、５０～１１０ｎｍ、５０～１００ｎｍ、５０～９０ｎｍ、５０～８０ｎｍ、５０～７０ｎｍ、５０～６０ｎｍ、６０～３００ｎｍ、６０～２９０ｎｍ、６０～２８０ｎｍ、６０～２７０ｎｍ、６０～２６０ｎｍ、６０～２５０ｎｍ、６０～２４０ｎｍ、６０～２３０ｎｍ、６０～２２０ｎｍ、６０～２１０ｎｍ、６０～２００ｎｍ、６０～１９０ｎｍ、６０～１８０ｎｍ、６０～１７０ｎｍ、６０～１６０ｎｍ、６０～１５０ｎｍ、６０～１４０ｎｍ、６０～１３０ｎｍ、６０～１２０ｎｍ、６０～１１０ｎｍ、６０～１００ｎｍ、６０～９０ｎｍ、６０～８０ｎｍ、６０～７０ｎｍ、７０～３００ｎｍ、７０～２９０ｎｍ、７０～２８０ｎｍ、７０～２７０ｎｍ、７０～２６０ｎｍ、７０～２５０ｎｍ、７０～２４０ｎｍ、７０～２３０ｎｍ、７０～２２０ｎｍ、７０～２１０ｎｍ、７０～２００ｎｍ、７０～１９０ｎｍ、７０～１８０ｎｍ、７０～１７０ｎｍ、７０～１６０ｎｍ、７０～１５０ｎｍ、７０～１４０ｎｍ、７０～１３０ｎｍ、７０～１２０ｎｍ、７０～１１０ｎｍ、７０～１００ｎｍ、７０～９０ｎｍ、７０～８０ｎｍ、８０～３００ｎｍ、８０～２９０ｎｍ、８０～２８０ｎｍ、８０～２７０ｎｍ、８０～２６０ｎｍ、８０～２５０ｎｍ、８０～２４０ｎｍ、８０～２３０ｎｍ、８０～２２０ｎｍ、８０～２１０ｎｍ、８０～２００ｎｍ、８０～１９０ｎｍ、８０～１８０ｎｍ、８０～１７０ｎｍ、８０～１６０ｎｍ、８０～１５０ｎｍ、８０～１４０ｎｍ、８０～１３０ｎｍ、８０～１２０ｎｍ、８０～１１０ｎｍ、８０～１００ｎｍ、８０～９０ｎｍ、９０～３００ｎｍ、９０～２９０ｎｍ、９０～２８０ｎｍ、９０～２７０ｎｍ、９０～２６０ｎｍ、９０～２５０ｎｍ、９０～２４０ｎｍ、９０～２３０ｎｍ、９０～２２０ｎｍ、９０～２１０ｎｍ、９０～２００ｎｍ、９０～１９０ｎｍ、９０～１８０ｎｍ、９０～１７０ｎｍ、９０～１６０ｎｍ、９０～１５０ｎｍ、９０～１４０ｎｍ、９０～１３０ｎｍ、９０～１２０ｎｍ、９０～１１０ｎｍ、９０～１００ｎｍ、１００～３００ｎｍ、１１０～２９０ｎｍ、１２０～２８０ｎｍ、１３０～２７０ｎｍ、１４０～２６０ｎｍ、１５０～２５０ｎｍ、１６０～２４０ｎｍ、１７０～２３０ｎｍ、１８０～２２０ｎｍ、または１９０～２１０ｎｍの間の直径を有する。本明細書に記載されるＥＶ（例えば、エクソソーム）のサイズは、当該技術分野において知られている方法に従って測定することができる。
本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、内表面（内腔表面）及び外表面を含む、二重脂質膜（「エクソソーム膜」または「ＥＶ膜」）を含む。内表面は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の内側コア、すなわち、ＥＶの内腔に面している。
ＥＶまたはエクソソーム膜は、脂質及び脂肪酸を含む。例示的な脂質は、リン脂質、糖脂質、脂肪酸、スフィンゴ脂質、ホスホグリセリド、ステロール、コレステロール、及びホスファチジルセリンを含む。ＥＶまたはエクソソーム膜は、内側リーフレット及び外側リーフレットを含む。内側及び外側リーフレットの組成は、当該技術分野において知られている二重層内分布アッセイによって決定することができる。例えば、Ｋｕｙｐｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １９８５ ８１９：１７０を参照されたい。
いくつかの態様において、外側リーフレットの組成は、およそ７０～９０％の間のコリンリン脂質、およそ０～１５％の間の酸性リン脂質、及びおよそ５～３０％の間のホスファチジルエタノールアミンである。いくつかの態様において、内側リーフレットの組成は、およそ１５～４０％の間のコリンリン脂質、およそ１０～５０％の間の酸性リン脂質、及びおよそ３０～６０％の間のホスファチジルエタノールアミンである。いくつかの態様において、ＥＶまたはエクソソーム膜は、グリカンなどの１つ以上の多糖を含む。ＥＶまたはエクソソームの表面上のグリカンは、マレイミド部分への結合またはグリカンとマレイミド部分を接続するリンカーとして機能することができる。グリカンは、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の表面上の１つ以上のタンパク質、例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドなどのスカフォールドＸ上、またはＥＶ（例えば、エクソソーム）の脂質膜上に存在し得る。グリカンは、マレイミド部分をグリカンに結合させる官能基として機能することができるチオフコースを有するように改変することができる。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、ＥＶ（例えば、エクソソーム）上の追加の結合を可能にするために、多数のグリカンを発現するように改変することができる。
ＩＩ．Ｄ．１．スカフォールド部分
いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の表面または内腔にマレイミド部分を介して結合される。いくつかの態様において、生物学的に活性な分子は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の外部表面上または内腔表面上のスカフォールド部分（例えば、スカフォールドＸ）にマレイミド部分を介して結合される。
ある特定の態様において、１つ以上の部分は、トランスフェクションによってＥＶ（例えば、エクソソーム）に導入される。いくつかの態様において、１つ以上の部分は、カチオン性脂質及びポリマーなどの合成巨大分子を使用して、ＥＶ（例えば、エクソソーム）に導入され得る（Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１１８－Ｓ１３０（２００５））。ある特定の態様において、リン酸カルシウム、シクロデキストリン、またはポリブレンなどの化学物質を使用して、１つ以上の部分をＥＶ（例えば、エクソソーム）に導入することができる。
いくつかの態様において、１つ以上のスカフォールド部分は、ＣＤ４７、ＣＤ５５、ＣＤ４９、ＣＤ４０、ＣＤ１３３、ＣＤ５９、グリピカン－１、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、インテグリン、セレクチン、レクチン、カドヘリン、当業者に知られている他の類似のポリペプチド、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。
他の態様において、１つ以上のスカフォールド部分は、産生細胞においてスカフォールド部分を組み換え発現することによって、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の膜に発現される。産生細胞から得られるＥＶ（例えば、エクソソーム）は、マレイミド部分またはリンカーにコンジュゲートされるように更に改変され得る。他の態様において、スカフォールド部分、スカフォールドＸ及び／またはスカフォールドＹは、脱グリコシル化される。いくつかの態様において、スカフォールド部分、スカフォールドＸ及び／またはスカフォールドＹは、高度にグリコシル化され、例えば、同じ条件下で天然に生じるスカフォールドＸ及び／またはスカフォールドＹよりも高度にグリコシル化される。
ＩＩ．Ｄ．１．ａ．スカフォールドＸ
スカフォールド部分の様々な修飾または断片は、本開示の態様に使用することができる。例えば、結合物質を使用して精製することができる表面操作されたＥＶ（例えば、エクソソーム）を生成するために、結合物質に対する親和性を高めるように改変されたスカフォールド部分が使用され得る。ＥＶ（例えば、エクソソーム）及び／または膜に対してより効果的に標的化されるように改変されたスカフォールド部分が使用され得る。ＥＶ（例えば、エクソソーム）膜に対して特異的かつ効果的に標的化するのに必要な最小限の断片を含むように改変されたスカフォールド部分も使用され得る。いくつかの態様において、スカフォールド部分は、本明細書に記載されるマレイミド部分に連結することができる。他の態様において、スカフォールド部分は、マレイミド部分に連結していない。
スカフォールド部分は、合成的または組み換え的に、例えば、融合タンパク質、例えば、スカフォールドＸと別の部分の融合タンパク質として発現されるように操作することができる。例えば、融合タンパク質は、別の部分に連結された本明細書で開示されるスカフォールド部分（例えば、スカフォールドＸ、例えば、ＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、ＡＴＰトランスポーター、またはその断片もしくはバリアント）を含み得る。融合タンパク質の場合、第２の部分は、天然ペプチド、組み換えペプチド、合成ペプチド、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。他の態様において、スカフォールド部分は、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ２、もしくはＬＡＭＰ２Ｂ、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。本開示とともに使用することができる他のスカフォールド部分の非限定的な例としては、アミノペプチダーゼＮ（ＣＤ１３）；ネプリライシン、別名膜メタロエンドペプチダーゼ（ＭＭＥ）；エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー１（ＥＮＰＰ１）；ニューロピリン－１（ＮＲＰ１）；またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。
いくつかの態様において、本明細書に記載される表面（例えば、スカフォールドＸ）操作されたＥＶ（例えば、エクソソーム）は、当該技術分野において知られているＥＶ（例えば、エクソソーム）と比較して、優れた特徴を呈する。例えば、表面（例えば、スカフォールドＸ）操作されたものは、天然に生じるＥＶ（例えば、エクソソーム）または従来のＥＶ（例えば、エクソソーム）タンパク質を使用して生産されたＥＶ（例えば、エクソソーム）よりも、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の外部表面または内腔表面上により高度に濃縮された改変タンパク質を含有する。更に、本開示の表面（例えば、スカフォールドＸ）操作されたＥＶ（例えば、エクソソーム）は、天然に生じるＥＶ（例えば、エクソソーム）または従来のＥＶ（例えば、エクソソーム）タンパク質を使用して生産されたＥＶ（例えば、エクソソーム）と比較して、より大きく、より特異的で、またはより制御された生物学的活性を有し得る。
いくつかの態様において、スカフォールドＸは、プロスタグランジンＦ２受容体の負の調節因子（ＰＴＧＦＲＮポリペプチド）を含む。ＰＴＧＦＲＮポリペプチドはまた、ＣＤ９パートナー１（ＣＤ９Ｐ－１）、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質Ｆ（ＥＷＩ－Ｆ）、プロスタグランジンＦ２－アルファ受容体調節タンパク質、プロスタグランジンＦ２－アルファ受容体関連タンパク質、またはＣＤ３１５とも呼ばれ得る。ヒトＰＴＧＦＲＮポリペプチドの完全長アミノ酸配列（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９Ｐ２Ｂ２）は以下に示される。
ＰＴＧＦＲＮポリペプチド（配列番号３０１）
ＭＧＲＬＡＳＲＰＬＬＬＡＬＬＳＬＡＬＣＲＧＲＶＶＲＶＰＴＡＴＬＶＲＶＶＧＴＥＬＶＩＰＣＮＶＳＤＹＤＧＰＳＥＱＮＦＤＷＳＦＳＳＬＧＳＳＦＶＥＬＡＳＴＷＥＶＧＦＰＡＱＬＹＱＥＲＬＱＲＧＥＩＬＬＲＲＴＡＮＤＡＶＥＬＨＩＫＮＶＱＰＳＤＱＧＨＹＫＣＳＴＰＳＴＤＡＴＶＱＧＮＹＥＤＴＶＱＶＫＶＬＡＤＳＬＨＶＧＰＳＡＲＰＰＰＳＬＳＬＲＥＧＥＰＦＥＬＲＣＴＡＡＳＡＳＰＬＨＴＨＬＡＬＬＷＥＶＨＲＧＰＡＲＲＳＶＬＡＬＴＨＥＧＲＦＨＰＧＬＧＹＥＱＲＹＨＳＧＤＶＲＬＤＴＶＧＳＤＡＹＲＬＳＶＳＲＡＬＳＡＤＱＧＳＹＲＣＩＶＳＥＷＩＡＥＱＧＮＷＱＥＩＱＥＫＡＶＥＶＡＴＶＶＩＱＰＳＶＬＲＡＡＶＰＫＮＶＳＶＡＥＧＫＥＬＤＬＴＣＮＩＴＴＤＲＡＤＤＶＲＰＥＶＴＷＳＦＳＲＭＰＤＳＴＬＰＧＳＲＶＬＡＲＬＤＲＤＳＬＶＨＳＳＰＨＶＡＬＳＨＶＤＡＲＳＹＨＬＬＶＲＤＶＳＫＥＮＳＧＹＹＹＣＨＶＳＬＷＡＰＧＨＮＲＳＷＨＫＶＡＥＡＶＳＳＰＡＧＶＧＶＴＷＬＥＰＤＹＱＶＹＬＮＡＳＫＶＰＧＦＡＤＤＰＴＥＬＡＣＲＶＶＤＴＫＳＧＥＡＮＶＲＦＴＶＳＷＹＹＲＭＮＲＲＳＤＮＶＶＴＳＥＬＬＡＶＭＤＧＤＷＴＬＫＹＧＥＲＳＫＱＲＡＱＤＧＤＦＩＦＳＫＥＨＴＤＴＦＮＦＲＩＱＲＴＴＥＥＤＲＧＮＹＹＣＶＶＳＡＷＴＫＱＲＮＮＳＷＶＫＳＫＤＶＦＳＫＰＶＮＩＦＷＡＬＥＤＳＶＬＶＶＫＡＲＱＰＫＰＦＦＡＡＧＮＴＦＥＭＴＣＫＶＳＳＫＮＩＫＳＰＲＹＳＶＬＩＭＡＥＫＰＶＧＤＬＳＳＰＮＥＴＫＹＩＩＳＬＤＱＤＳＶＶＫＬＥＮＷＴＤＡＳＲＶＤＧＶＶＬＥＫＶＱＥＤＥＦＲＹＲＭＹＱＴＱＶＳＤＡＧＬＹＲＣＭＶＴＡＷＳＰＶＲＧＳＬＷＲＥＡＡＴＳＬＳＮＰＩＥＩＤＦＱＴＳＧＰＩＦＮＡＳＶＨＳＤＴＰＳＶＩＲＧＤＬＩＫＬＦＣＩＩＴＶＥＧＡＡＬＤＰＤＤＭＡＦＤＶＳＷＦＡＶＨＳＦＧＬＤＫＡＰＶＬＬＳＳＬＤＲＫＧＩＶＴＴＳＲＲＤＷＫＳＤＬＳＬＥＲＶＳＶＬＥＦＬＬＱＶＨＧＳＥＤＱＤＦＧＮＹＹＣＳＶＴＰＷＶＫＳＰＴＧＳＷＱＫＥＡＥＩＨＳＫＰＶＦＩＴＶＫＭＤＶＬＮＡＦＫＹＰＬＬＩＧＶＧＬＳＴＶＩＧＬＬＳＣＬＩＧＹＣＳＳＨＷＣＣＫＫＥＶＱＥＴＲＲＥＲＲＲＬＭＳＭＥＭＤ
ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチド（配列番号３０１のアミノ酸１～２５）、細胞外ドメイン（配列番号３０１のアミノ酸２６～８３２）、膜貫通ドメイン（配列番号３０１のアミノ酸８３３～８５３）、及び細胞質ドメイン（配列番号３０１のアミノ酸８５４～８７９）を含有する。成熟ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチドを含まない配列番号３０１、すなわち、配列番号３０１のアミノ酸２６～８７９からなる。いくつかの態様において、本開示に有用なＰＴＧＦＲＮポリペプチド断片は、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの膜貫通ドメインを含む。他の態様において、本開示に有用なＰＴＧＦＲＮポリペプチド断片は、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの膜貫通ドメインと、（ｉ）膜貫通ドメインのＮ末端に少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０アミノ酸、（ｉｉ）膜貫通ドメインのＣ末端に少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、もしくは少なくとも２５アミノ酸、または（ｉ）及び（ｉｉ）の両方と、を含む。
いくつかの態様において、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの断片は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、配列番号３０１のアミノ酸２６～８７９に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様において、スカフォールドＸは、配列番号３０２のＰＴＧＦＲＮポリペプチドの断片に対して、少なくとも約少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様において、スカフォールドＸは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除き、配列番号３０２のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、配列番号３０２のアミノ酸配列と、配列番号３０２のＮ末端及び／またはＣ末端に、１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、もしくは２０アミノ酸またはそれより長いアミノ酸と、を含む。
他の態様において、スカフォールドＸは、配列番号３０１のアミノ酸２６～８７９、配列番号３０１のアミノ酸８３３～８５３、配列番号３０２、または配列番号３０１に対して、少なくとも約少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様において、スカフォールドＸは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除き、配列番号３０１のアミノ酸２６～８７９、配列番号３０１のアミノ酸８３３～８５３、配列番号３０２、または配列番号３０１のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、配列番号３０１のアミノ酸２６～８７９、配列番号３０１のアミノ酸８３３～８５３、配列番号３０２、または配列番号３０１のアミノ酸配列と、配列番号１のアミノ酸２６～８７９、配列番号３０１のアミノ酸８３３～８５３、配列番号３０２、または配列番号３０１のＮ末端及び／またはＣ末端に、１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、もしくは２０アミノ酸またはそれより長いアミノ酸配列と、を含む。
いくつかの態様において、スカフォールドＸは、配列番号３０１（ＰＴＧＦＲＮタンパク質）、配列番号３０２（完全長ＰＴＧＦＲＮのアミノ酸６８７～８７８）、配列番号３０３（ＢＳＧタンパク質）、配列番号３０４（ＩＧＳＦ８タンパク質）、配列番号３０５（ＩＴＧＢ１タンパク質）、配列番号３０６（ＩＴＧＡ４タンパク質）、配列番号３０７（ＳＬＣ３Ａ２タンパク質）に記載されるアミノ配列もしくはその機能性断片を含むか、それからなるか、または本質的になる。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＢＳＧタンパク質、ＩＧＳＦ８タンパク質、ＩＧＳＦ３タンパク質、ＩＴＧＢ１タンパク質、ＳＬＣ３Ａ２タンパク質、ＩＴＧＡ４タンパク質、ＡＴＰ１Ａ１タンパク質、ＡＴＰ１Ａ２タンパク質、ＡＴＰ１Ａ３タンパク質、ＡＴＰ１Ａ４タンパク質、ＡＴＰ１Ａ５タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質、またはＩＧＳＦ２タンパク質を含み、ここで、スカフォールドＸは、対応する成熟ＢＳＧタンパク質、ＩＧＳＦ８タンパク質、ＩＧＳＦ３タンパク質、ＩＴＧＢ１タンパク質、ＳＬＣ３Ａ２タンパク質、ＩＴＧＡ４タンパク質、ＡＴＰ１Ａ１タンパク質、ＡＴＰ１Ａ２タンパク質、ＡＴＰ１Ａ３タンパク質、ＡＴＰ１Ａ４タンパク質、ＡＴＰ１Ａ５タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質、またはＩＧＳＦ２タンパク質（シグナルペプチドを含まない）に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＢＳＧタンパク質、ＩＧＳＦ８タンパク質、ＩＧＳＦ３タンパク質、ＩＴＧＢ１タンパク質、ＳＬＣ３Ａ２タンパク質、ＩＴＧＡ４タンパク質、ＡＴＰ１Ａ１タンパク質、ＡＴＰ１Ａ２タンパク質、ＡＴＰ１Ａ３タンパク質、ＡＴＰ１Ａ４タンパク質、ＡＴＰ１Ａ５タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質、またはＩＧＳＦ２タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他のスカフォールドＸタンパク質の非限定的な例としては、２０１９年２月５日に発行された米国特許第ＵＳ１０，１９５，２９０Ｂ１号に見出すことができ、当該特許は、その全体が参照により援用される：ＡＴＰ輸送タンパク質ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ１Ａ２、ＡＴＰ１Ａ３、ＡＴＰ１Ａ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ１、ＡＴＰ２Ｂ２、及びＡＴＰ２Ｂ４）、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂ。
いくつかの態様において、スカフォールドＸは、ベイシジン（ＢＳＧタンパク質；配列番号３０３）を含む。ＢＳＧタンパク質は、５Ｆ７、コラゲナーゼ刺激因子、細胞外マトリックスメタロプロテアーゼ誘導物質（ＥＭＭＰＲＩＮ）、白血球活性化抗原Ｍ６、ＯＫ血液型抗原、腫瘍細胞由来コラゲナーゼ刺激因子（ＴＣＳＦ）、またはＣＤ１４７としても知られている。ヒトＢＳＧタンパク質のＵｎｉｐｒｏｔ番号は、Ｐ３５６１３である。ＢＳＧタンパク質のシグナルペプチドは、アミノ酸１～２１である。アミノ酸１３８～３２３は細胞外ドメインであり、アミノ酸３２４～３４４は膜貫通ドメインであり、アミノ酸３４５～３８５は細胞質ドメインである。
他の態様において、スカフォールドＸは、ヒトＢＳＧタンパク質のアミノ酸２２～３８５に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ベイシジンポリペプチドの断片は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメイン、例えば、ヒトＢＳＧタンパク質のアミノ酸２２１～３１５を欠く。
いくつかの態様において、スカフォールドＸは、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩｇＳＦ８またはＩＧＳＦ８タンパク質；配列番号３０４）を含み、これは、ＣＤ８１パートナー３、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質２（ＥＷＩ－２）、ケラチノサイト関連膜貫通タンパク質４（ＫＣＴ－４）、ＬＩＲ－Ｄ１、プロスタグランジン調節因子様タンパク質（ＰＧＲＬ）またはＣＤ３１６としても知られている。完全長ヒトＩＧＳＦ８タンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔではアクセッション番号Ｑ９６９Ｐ０である。ヒトＩＧＳＦ８タンパク質は、シグナルペプチド（ヒトＩＧＳＦ８タンパク質のアミノ酸１～２７）、細胞外ドメイン（ヒトＩＧＳＦ８タンパク質のアミノ酸２８～５７９）、膜貫通ドメイン（ヒトＩＧＳＦ８タンパク質のアミノ酸５８０～６００）、及び細胞質ドメイン（ヒトＩＧＳＦ８タンパク質のアミノ酸６０１～６１３）を有する。
他の態様において、スカフォールドＸは、ヒトＩＧＳＦ８タンパク質のアミノ酸２８～６１３に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＩＧＳＦ８タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。他の態様において、スカフォールドＸは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除き、ヒトＩＧＳＦ８タンパク質のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、ヒトＩＧＳＦ８タンパク質のアミノ酸配列と、ヒトＩＧＳＦ８タンパク質のＮ末端及び／またはＣ末端に、１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、もしくは２０アミノ酸またはそれより長いアミノ酸と、を含む。
いくつかの態様において、本開示のためのスカフォールドＸは、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩｇＳＦ３またはＩＧＳＦ３タンパク質；配列番号３０９）を含み、これは、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質３（ＥＷＩ－３）としても知られている。ヒトＩＧＳＦ３タンパク質は、シグナルペプチド（ＩＧＳＦ３タンパク質のアミノ酸１～１９）、細胞外ドメイン（ＩＧＳＦ３タンパク質のアミノ酸２０～１１２４）、膜貫通ドメイン（ＩＧＳＦ３タンパク質のアミノ酸１１２５～１１４５）、及び細胞質ドメイン（ＩＧＳＦ３タンパク質のアミノ酸１１４６～１１９４）を有する。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＩＧＳＦ３タンパク質のアミノ酸２８～６１３に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＩＧＳＦ３タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
いくつかの態様において、本開示のためのスカフォールドＸは、インテグリンベータ－１（ＩＴＧＢ１タンパク質；配列番号３０５）を含み、これは、フィブロネクチン受容体サブユニットベータ、糖タンパク質ＩＩａ（ＧＰＩＩＡ）、ＶＬＡ－４サブユニットベータ、またはＣＤ２９としても知られている。ヒトＩＴＧＢ１タンパク質は、シグナルペプチド（ヒトＩＴＧＢ１タンパク質のアミノ酸１～２０）、細胞外ドメイン（ヒトＩＴＧＢ１タンパク質のアミノ酸２１～７２８）、膜貫通ドメイン（ヒトＩＴＧＢ１タンパク質のアミノ酸７２９～７５１）、及び細胞質ドメイン（ヒトＩＴＧＢ１タンパク質のアミノ酸７５２～７９８）を有する。
他の態様において、スカフォールドＸは、ヒトＩＴＧＢ１タンパク質のアミノ酸２１～７９８に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＩＴＧＢ１タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＩＴＧＡ４タンパク質（配列番号３０６）を含み、シグナルペプチド（ヒトＩＴＧＢ１タンパク質のアミノ酸１～３３）を含まないヒトＩＴＧＢ１タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＩＴＧＡ４タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＳＬＣ３Ａ２タンパク質（配列番号３０７）を含み、シグナルペプチドを含まないＳＬＣ３Ａ２タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＳＬＣ３Ａ２タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＡＴＰ１Ａ１タンパク質（配列番号３１０）を含み、シグナルペプチドを含まないＡＴＰ１Ａ１タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＴＰ１Ａ１タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＡＴＰ１Ａ２タンパク質（配列番号３１１）を含み、シグナルペプチドを含まないＡＴＰ１Ａ２タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＴＰ１Ａ２タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＡＴＰ１Ａ３タンパク質（配列番号３１２）を含み、シグナルペプチドを含まないＡＴＰ１Ａ３タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＴＰ１Ａ３タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＡＴＰ１Ａ４タンパク質（配列番号３１３）を含み、シグナルペプチドを含まないＡＴＰ１Ａ４タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＴＰ１Ａ４タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＡＴＰ１Ｂ３タンパク質（配列番号３１４）を含み、シグナルペプチドを含まないＡＴＰ１Ａ５タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＴＰ１Ａ５タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質（配列番号３１５）を含み、シグナルペプチドを含まないＡＴＰ２Ｂ１タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質（配列番号３１６）を含み、シグナルペプチドを含まないＡＴＰ２Ｂ２タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質（配列番号３１７）を含み、シグナルペプチドを含まないＡＴＰ２Ｂ３タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質（配列番号３１８）を含み、シグナルペプチドを含まないＡＴＰ２Ｂ４タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
他の態様において、スカフォールドＸは、ＩＧＳＦ２タンパク質（配列番号３０８）を含み、シグナルペプチドを含まないＩＧＳＦ２タンパク質に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＩＧＳＦ２タンパク質は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠く。
スカフォールドＸタンパク質の他の非限定的な例は、２０１９年２月５日に発行された米国特許第ＵＳ１０１９５２９０Ｂ１号に見出すことができ、当該特許は、その全体が参照により援用される。
いくつかの態様において、配列は、ネイティブタンパク質のＮ末端から少なくとも５、１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、または８００アミノ酸を欠くスカフォールド部分の断片をコードする。いくつかの態様において、配列は、ネイティブタンパク質のＣ末端から少なくとも５、１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、または８００アミノ酸を欠くスカフォールド部分の断片をコードする。いくつかの態様において、配列は、ネイティブタンパク質のＮ末端とＣ末端の両方から少なくとも５、１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、または８００アミノ酸を欠くスカフォールド部分の断片をコードする。いくつかの態様において、配列は、ネイティブタンパク質の１つ以上の機能的または構造的ドメインを欠くスカフォールド部分の断片をコードする。
いくつかの態様において、スカフォールド部分、例えば、スカフォールドＸ、例えば、ＰＴＧＦＲＮタンパク質は、１つ以上の異種タンパク質に連結される。１つ以上の異種タンパク質がスカフォールド部分のＮ末端に連結され得る。１つ以上の異種タンパク質がスカフォールド部分のＣ末端に連結され得る。いくつかの態様において、１つ以上の異種タンパク質がスカフォールド部分のＮ末端とＣ末端の両方に連結される。いくつかの態様において、異種タンパク質は、哺乳動物タンパク質である。いくつかの態様において、異種タンパク質は、ヒトタンパク質である。
いくつかの態様において、スカフォールドＸは、同時に、任意の部分をＥＶ（例えば、エクソソーム）の内腔表面及び外部表面に連結するために使用することができる。例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、１つ以上の生物学的に活性な分子を、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の外部表面に加えて、マレイミド部分を介して間接的に、またはマレイミド部分もしくはリンカーに直接的に、内腔表面に連結するために使用することができる。したがって、ある特定の態様において、スカフォールドＸは、二重の目的で使用することができる。
他の態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、天然に生じるＥＶ（例えば、エクソソーム）と比較して、より多くの数のスカフォールドＸタンパク質を含む。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、天然に生じるＥＶ（例えば、エクソソーム）と比較して、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約１１０倍、少なくとも約１２０倍、少なくとも約１３０倍、少なくとも約１４０倍、少なくとも約１５０倍、少なくとも約１６０倍、少なくとも約１７０倍、少なくとも約１８０倍、少なくとも約１９０倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約２１０倍、少なくとも約２２０倍、少なくとも約２３０倍、少なくとも約２４０倍、少なくとも約２５０倍、少なくとも約２６０倍、少なくとも約２７０倍多い数のスカフォールドＸ（例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチド）を含む。本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）上のスカフォールドＸ、例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの数は、少なくとも約１００、少なくとも約２００、少なくとも約３００、少なくとも約４００、少なくとも約５００、少なくとも約６００、少なくとも約７００、少なくとも約８００、少なくとも約９００、少なくとも約１０００、少なくとも約１１００、少なくとも約１２００、少なくとも約１３００、少なくとも約１４００、少なくとも約１５００、少なくとも約１６００、少なくとも約１７００、少なくとも約１８００、少なくとも約１９００、少なくとも約２０００、少なくとも約２１００、少なくとも約２２００、少なくとも約２３００、少なくとも約２４００、少なくとも約２５００、少なくとも約２６００、少なくとも約２７００、少なくとも約２８００、少なくとも約２９００、少なくとも約３０００、少なくとも約４０００、少なくとも約５０００、少なくとも約６０００、少なくとも約７０００、少なくとも約８０００、少なくとも約９０００、または少なくとも約１００００である。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）上のスカフォールドＸ、例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの数は、約１００～約１００，０００、約２００～約９０００、約３００～約９０００、約４００～約９０００、約５００～約９０００、約６００～約８０００、約８００～約８０００、約９００～約８０００、約１０００～約８０００、約１１００～約８０００、約１２００～約８０００、約１３００～約８０００、約１４００～約８０００、約１５００～約８０００、約１６００～約８０００、約１７００～約８０００、約１８００～約８０００、約１９００～約８０００、約２０００～約８０００、約２１００～約８０００、約２２００～約８０００、約２３００～約８０００、約２４００～約８０００、約２５００～約８０００、約２６００、約２７００～約８０００、約２８００～約８０００、約２９００～約８０００、約３０００～約８０００、約４０００～約８０００、約５０００～約８０００、約６０００～約８０００、約７０００～約８０００、約８０００、７０００～約９０００、または約６０００～約１００００である。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）上のスカフォールドＸ、例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの数は、約５０００～約８０００、例えば、約５０００、約６０００、約７０００、または約８０００である。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）上のスカフォールドＸ、例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの数は、約６０００～約８０００、例えば、約６０００、約７０００、または約８０００である。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）上のスカフォールドＸ、例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの数は、約４０００～約９０００、例えば、約４０００、約５０００、約６０００、約７０００、約８０００、約９０００である。
いくつかの態様において、スカフォールドＸは、配列番号３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、もしくは３２４のＰＴＧＦＲＮタンパク質断片、配列番号３２６、３２７、もしくは３２８のＢＳＧタンパク質断片、もしくは配列番号３３０、３３１、３３２、もしくは３３３のＩＧＳＦ８タンパク質断片であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、シグナルペプチドを含まないＰＴＧＦＲＮタンパク質、すなわち、２１のＮ末端アミノ酸（ＭＧＲＬＡＳＲＰＬＬＬＡＬＬＳＬＡＬＣＲＧ；配列番号３２５）を含まないＰＴＧＦＲＮタンパク質もしくはその断片であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、シグナルペプチドを含まないＢＳＧタンパク質、すなわち、１８のＮ末端アミノ酸（ＭＡＡＡＬＦＶＬＬＧＦＡＬＬＧＴＨＧ；配列番号３２９）を含まないＢＳＧタンパク質もしくはその断片であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、シグナルペプチドを含まないＩＧＳＦ８タンパク質、すなわち、２７のＮ末端アミノ酸（ＭＧＡＬＲＰＴＬＬＰＰＳＬＰＬＬＬＬＬＭＬＧＭＧＣＷＡ；配列番号３３４）を含まないＩＧＳＦ８タンパク質もしくはその断片であるか、またはそれを含む。
スカフォールドＸタンパク質及びその断片は、配列表に開示されている。
ＩＩ．Ｄ．１．ｂ．スカフォールドＹ
いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、天然に生じるＥＶ（例えば、エクソソーム）とは異なる内部空間（すなわち、内腔）を含む。例えば、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の内腔表面上の組成が、天然に生じるＥＶ（例えば、エクソソーム）とは異なるタンパク質、脂質、またはグリカン含量を有するように変更することができる。
いくつかの態様において、操作されたＥＶ（例えば、エクソソーム）は、エクソソームの内腔表面の組成もしくは含量を変更するスカフォールド部分（例えば、エクソソームタンパク質、例えば、スカフォールドＹ）または当該スカフォールド部分の改変体もしくは断片をコードする外因性配列で形質転換された細胞から産生され得る。ＥＶ（例えば、エクソソーム）の内腔表面上に発現され得る、ＥＶ（例えば、エクソソーム）タンパク質の様々な改変体または断片が本開示の態様に使用され得る。
いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の内腔表面を変えることができるＥＶ（例えば、エクソソーム）タンパク質には、ＭＡＲＣＫＳタンパク質、ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質、ＢＡＳＰ１タンパク質、またはこれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、スカフォールドＹは、脳酸可溶性タンパク質１（ＢＡＳＰ１タンパク質）を含む。ＢＡＳＰ１タンパク質は、２２ｋＤａの神経組織濃縮酸性タンパク質または神経軸索膜タンパク質ＮＡＰ－２２としても知られている。完全長ヒトＢＡＳＰ１タンパク質配列（異性体１）は、以下に示される。選択的スプライシングによって生成される異性体は、配列番号４０３のＢＡＳＰ１タンパク質からアミノ酸８８～１４１が欠落している。
ＢＡＳＰ１タンパク質（配列番号４０３）
ＭＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮＤＥＫＡＫＥＫＤＫＫＡＥＧＡＡＴＥＥＥＧＴＰＫＥＳＥＰＱＡＡＡＥＰＡＥＡＫＥＧＫＥＫＰＤＱＤＡＥＧＫＡＥＥＫＥＧＥＫＤＡＡＡＡＫＥＥＡＰＫＡＥＰＥＫＴＥＧＡＡＥＡＫＡＥＰＰＫＡＰＥＱＥＱＡＡＰＧＰＡＡＧＧＥＡＰＫＡＡＥＡＡＡＡＰＡＥＳＡＡＰＡＡＧＥＥＰＳＫＥＥＧＥＰＫＫＴＥＡＰＡＡＰＡＡＱＥＴＫＳＤＧＡＰＡＳＤＳＫＰＧＳＳＥＡＡＰＳＳＫＥＴＰＡＡＴＥＡＰＳＳＴＰＫＡＱＧＰＡＡＳＡＥＥＰＫＰＶＥＡＰＡＡＮＳＤＱＴＶＴＶＫＥ
成熟ＢＡＳＰ１タンパク質配列は、配列番号４０３から最初のＭｅｔを欠落しており、それゆえ、配列番号４０３のアミノ酸２～２２７を含有する。
いくつかの態様において、本開示に有用なスカフォールドＹは、配列番号４０３のアミノ酸２～２２７に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、スカフォールドＸは、配列番号４０３に対して、少なくとも約少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様において、本開示に有用なスカフォールドＹは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除き、配列番号４０３のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの態様において、本開示に有用なスカフォールドＹは、配列番号４０３のアミノ酸配列と、配列番号４０３のＮ末端及び／またはＣ末端に、１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、もしくは２０アミノ酸、またはそれよりも長いアミノ酸と、を含む。
ある特定の態様において、ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０６１６７９に開示されている配列番号１～１０９のいずれかのタンパク質配列は、本開示のスカフォールドＹ（例えば、リンカーに連結されるスカフォールド部分）であるのに十分である。
ある特定の態様において、本開示に有用なスカフォールドＹは、ＭＧＸＫＬＳＫＫＫまたはＧＸＫＬＳＫＫＫを有するペプチドを含み、ここで、Ｘは、アラニンまたは任意の他のアミノ酸である（配列番号４０４）。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、（Ｍ）（Ｇ）（π）（ξ）（Φ／π）（Ｓ／Ａ／Ｇ／Ｎ）（＋）（＋）または（Ｇ）（π）（ξ）（Φ／π）（Ｓ／Ａ／Ｇ／Ｎ）（＋）（＋）の配列を有するペプチドを含み、ここで、それぞれの括弧付きの位置は、アミノ酸を表し、πは、（Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、ξは、（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、Φは、（Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、（＋）は、（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、位置５は、（＋）ではなく、位置６は、（＋）でも（ＡｓｐまたはＧｌｕ）でもない。更なる態様において、本明細書に記載されるＥＶ（例えば、エクソソーム）（例えば、操作されたエクソソーム）は、（Ｍ）（Ｇ）（π）（Ｘ）（Φ／π）（π）（＋）（＋）または（Ｇ）（π）（Ｘ）（Φ／π）（π）（＋）（＋）の配列を有するペプチドを含み、ここで、それぞれの括弧付きの位置は、アミノ酸を表し、πは、（Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、Ｘは、任意のアミノ酸であり、Φは、（Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、（＋）は、（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、位置５は、（＋）ではなく、位置６は、（＋）でも（ＡｓｐまたはＧｌｕ）でもない。アミノ酸命名法については、Ａａｓｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５１３（２００２）１４１－１４４を参照されたい。
他の態様において、スカフォールドＹは、２０１９年２月５日に発行されたＵＳ１０，１９５，２９０Ｂ１に開示されている配列のいずれか１つに対して、少なくとも約少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載されるスカフォールドＹが操作されたエクソソームは、ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０６１６７９（配列番号４～１０９）に記載されている任意の配列で形質転換された細胞から産生され得る。
他の態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、天然に生じるＥＶ（例えば、エクソソーム）と比較して、より多くの数のスカフォールドＹタンパク質を含む。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、天然に生じるＥＶ（例えば、エクソソーム）と比較して、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約１１０倍、少なくとも約１２０倍、少なくとも約１３０倍、少なくとも約１４０倍、少なくとも約１５０倍、少なくとも約１６０倍、少なくとも約１７０倍、少なくとも約１８０倍、少なくとも約１９０倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約２１０倍、少なくとも約２２０倍、少なくとも約２３０倍、少なくとも約２４０倍、少なくとも約２５０倍、少なくとも約２６０倍、少なくとも約２７０倍多い数のスカフォールドＹ（例えば、ＢＡＳＰ－１ポリペプチド）を含む。本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）上のスカフォールドＹ、例えば、ＢＡＳＰ－１ポリペプチドの数は、少なくとも約１００、少なくとも約２００、少なくとも約３００、少なくとも約４００、少なくとも約５００、少なくとも約６００、少なくとも約７００、少なくとも約８００、少なくとも約９００、少なくとも約１０００、少なくとも約１１００、少なくとも約１２００、少なくとも約１３００、少なくとも約１４００、少なくとも約１５００、少なくとも約１６００、少なくとも約１７００、少なくとも約１８００、少なくとも約１９００、少なくとも約２０００、少なくとも約２１００、少なくとも約２２００、少なくとも約２３００、少なくとも約２４００、少なくとも約２５００、少なくとも約２６００、少なくとも約２７００、少なくとも約２８００、少なくとも約２９００、少なくとも約３０００、少なくとも約４０００、少なくとも約５０００、少なくとも約６０００、少なくとも約７０００、少なくとも約８０００、少なくとも約９０００、または少なくとも約１００００である。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）上のスカフォールドＹ、例えば、ＢＡＳＰ－１ポリペプチドの数は、約１００～約１００，０００、約２００～約９０００、約３００～約９０００、約４００～約９０００、約５００～約９０００、約６００～約８０００、約８００～約８０００、約９００～約８０００、約１０００～約８０００、約１１００～約８０００、約１２００～約８０００、約１３００～約８０００、約１４００～約８０００、約１５００～約８０００、約１６００～約８０００、約１７００～約８０００、約１８００～約８０００、約１９００～約８０００、約２０００～約８０００、約２１００～約８０００、約２２００～約８０００、約２３００～約８０００、約２４００～約８０００、約２５００～約８０００、約２６００、約２７００～約８０００、約２８００～約８０００、約２９００～約８０００、約３０００～約８０００、約４０００～約８０００、約５０００～約８０００、約６０００～約８０００、約７０００～約８０００、約８０００、７０００～約９０００、または約６０００～約１００００である。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）上のスカフォールドＹ、例えば、ＢＡＳＰ－１ポリペプチドの数は、約５０００～約８０００、例えば、約５０００、約６０００、約７０００、または約８０００である。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）上のスカフォールドＹ、例えば、ＢＡＳＰ－１ポリペプチドの数は、約６０００～約８０００、例えば、約６０００、約７０００、または約８０００である。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）上のスカフォールドＹ、例えば、ＢＡＳＰ－１ポリペプチドの数は、約４０００～約９０００、例えば、約４０００、約５０００、約６０００、約７０００、約８０００、約９０００である。
いくつかの態様において、本開示に有用なスカフォールドＹは、「Ｎ末端ドメイン」（ＮＤ）及び「エフェクタードメイン」（ＥＤ）を含み、ここで、ＮＤ及び／またはＥＤは、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面と会合する。いくつかの態様において、本開示に有用なスカフォールドＹは、細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外ドメインを含み、ここで、細胞内ドメインは、「Ｎ末端ドメイン」（ＮＤ）及び「エフェクタードメイン」（ＥＤ）を含み、ＮＤ及び／またはＥＤは、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面と会合する。本明細書で使用される場合、「会合する」という用語は、本開示のスカフォールドタンパク質と、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面との間の、膜構成成分への共有連結を伴わない相互作用を指す。例えば、本開示に有用なスカフォールドは、例えば、脂質アンカー（例えば、ミリスチン酸）、及び／または負電荷を帯びた膜リン脂質の頭部と静電的に相互作用する多塩基ドメインを介して、ＥＶの内腔表面と会合することができる。他の態様において、スカフォールドＹは、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、ここで、ＮＤは、ＥＶの内腔表面と会合し、ＥＤは、イオン相互作用によってＥＶの内腔表面と会合し、ＥＤは、配列中に、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つの連続する塩基性アミノ酸、例えば、リシン（Ｌｙｓ）を含む。
他の態様において、スカフォールドＹは、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、ここで、ＮＤは、ＥＶの内腔表面と会合し、ＥＤは、イオン相互作用によってＥＶの内腔表面と会合し、ＥＤは、配列中に、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つの連続リシン（Ｌｙｓ）を含む。
いくつかの態様において、ＮＤは、脂質化を介して、例えば、ミリストイル化を介して、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面と会合する。いくつかの態様において、ＮＤは、Ｎ末端にＧｌｙを有する。いくつかの態様において、Ｎ末端のＧｌｙは、ミリストイル化されている。
いくつかの態様において、ＥＤは、イオン相互作用によって、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面と会合する。いくつかの態様において、ＥＤは、静電相互作用、特に、引力静電相互作用によって、ＥＶ、例えば、エクソソームの内腔表面と会合する。
いくつかの態様において、ＥＤは、ポリペプチド配列中に（ｉ）１つの塩基性アミノ酸（例えば、リシン）、または（ｉｉ）互いに隣接する２つ以上の塩基性アミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様において、塩基性アミノ酸は、リシン（Ｌｙｓ；Ｋ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）である。いくつかの態様において、塩基性アミノ酸は、（Ｌｙｓ）ｎであり、式中、ｎは、１～１０の間の整数である。
他の態様において、ＥＤのＮ末端がＮＤのＣ末端のリシンに直接連結される場合、すなわち、ＥＤのＮ末端にリシンがあり、ＮＤのＣ末端のリシンに融合される場合、ＥＤは少なくともリシンを含み、ＮＤはＣ末端にリシンを含む。他の態様において、ＥＤのＮ末端がＮＤのＣ末端に、リンカー、例えば、１つ以上のアミノ酸によって連結されている場合、ＥＤは、少なくとも２つのリシン、少なくとも３つのリシン、少なくとも４つのリシン、少なくとも５つのリシン、少なくとも６つのリシン、または少なくとも７つのリシンを含む。
いくつかの態様において、ＥＤは、Ｋ、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号４０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号４０６）、Ｒ、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号４０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号４０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４０９）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４１０）、またはこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、ＥＤは、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号４０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号４０６）、またはこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６に記載されるアミノ酸配列を含み、ここで、ＧはＧｌｙを表し、「：」はペプチド結合を表し、Ｘ２～Ｘ６のそれぞれは独立してアミノ酸を表し、Ｘ６は塩基性アミノ酸を表す。いくつかの態様において、Ｘ６アミノ酸は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択される選択される。いくつかの態様において、Ｘ５アミノ酸は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択される。いくつかの態様において、Ｘ２アミノ酸は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択される。いくつかの態様において、Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択される。
いくつかの態様において、スカフォールドＹは、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６に記載されるアミノ酸配列を含み、ここで、ＧはＧｌｙを表し、「：」はペプチド結合を表し、Ｘ２～Ｘ６のそれぞれは独立してアミノ酸であり、Ｘ６は塩基性アミノ酸を含み、ＥＤは、ペプチド結合によってＸ６に連結され、ＥＤのＮ末端に少なくとも１つのリシンを含む。
いくつかの態様において、スカフォールドＹのＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６のアミノ酸配列を含み、ここで、ＧはＧｌｙを表し、「：」はペプチド結合を表し、Ｘ２はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ３は任意のアミノ酸を表し、Ｘ４はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ，Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ５はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ６はＬｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸を表す。
いくつかの態様において、Ｘ３アミノ酸は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択される。
いくつかの態様において、ＮＤ及びＥＤは、リンカーによって接続される。いくつかの態様において、リンカーは、１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの態様において、「リンカー」という用語は、ペプチドまたはポリペプチド配列（例えば、合成のペプチドまたはポリペプチド配列）または非ポリペプチド、例えば、アルキル鎖を指す。いくつかの態様において、２つ以上のリンカーがタンデムで連結されてもよい。一般に、リンカーは、柔軟性を提供するか、または立体障害を阻止／改善する。リンカーは、典型的に切断されないが、ある特定の態様において、そのような切断が望ましい場合がある。したがって、いくつかの態様において、リンカーは、１つ以上のプロテアーゼ切断可能部位を含むことができ、これらの部位は、リンカーの配列内に位置し得るか、またはリンカー配列のいずれかの末端でリンカーに隣接し得る。ＮＤ及びＥＤがリンカーによって連結されている場合、ＥＤは、少なくとも２つのリシン、少なくとも３つのリシン、少なくとも４つのリシン、少なくとも５つのリシン、少なくとも６つのリシン、または少なくとも７つのリシンを含む。
いくつかの態様において、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの態様において、ペプチドリンカーは、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、または少なくとも約１００のアミノ酸を含み得る。
いくつかの態様において、リンカーは、グリシン／セリンリンカーである。いくつかの態様において、ペプチドリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｎ－Ｓｅｒ］ｍ（式中、ｎは１～１００の任意の整数であり、ｍは１～１００の任意の整数である）に従うグリシン／セリンリンカーである。他の態様において、グリシン／セリンリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｘ－Ｓｅｒｙ］ｚ（式中、ｘは１～４の整数であり、ｙは０または１であり、ｚは１～５０の整数である）に従う。いくつかの態様において、ペプチドリンカーは、配列Ｇｎ（式中、ｎは、１～１００の整数であり得る）を含む。いくつかの態様において、ペプチドリンカーは、配列（ＧｌｙＡｌａ）ｎ（式中、ｎは、１～１００の間の整数である）を含み得る。他の態様において、ペプチドリンカーは、配列（ＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）ｎ（式中、ｎは、１～１００の間の整数である）を含み得る。
いくつかの態様において、ペプチドリンカーは、合成であり、すなわち、非天然である。一態様では、ペプチドリンカーは、アミノ酸の第１の直線状配列を、自然界では天然に連結されていないまたは遺伝子的に融合されていないアミノ酸の第２の直線状配列に連結または遺伝子的に融合するアミノ酸配列を含む、ペプチド（またはポリペプチド）（例えば、天然または非天然ペプチド）を含む。例えば、一態様において、ペプチドリンカーは、天然ポリペプチドの修飾形態である（例えば、付加、置換または欠失などの変異を含む）非天然ポリペプチドを含み得る。
他の態様において、ペプチドリンカーは、非天然アミノ酸を含み得る。更なる他の態様において、ペプチドリンカーは、自然界には存在しない直線状配列で生じる天然アミノ酸を含み得る。更なる他の態様において、ペプチドリンカーは、天然ポリペプチド配列を含み得る。
いくつかの態様において、スカフォールドＹは、ＮＤ－ＥＤを含み、ここで、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６を含み、ＧはＧｌｙを表し、「：」はペプチド結合を表し、Ｘ２はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ３は任意のアミノ酸を表し、Ｘ４はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ，Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ５はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ６はＬｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸を表し、「－」は任意選択のリンカーを表し、ＥＤは、（ｉ）ペプチド結合もしくは１つ以上のアミノ酸によってＸ６に連結される少なくとも２つの連続するリシン（Ｌｙｓ）、または（ｉｉ）ペプチド結合によってＸ６に直接連結される少なくとも１つのリシンを含むエフェクタードメインである。
いくつかの態様において、Ｘ２アミノ酸は、Ｇｌｙ及びＡｌａからなる群から選択される。いくつかの態様において、Ｘ３アミノ酸は、Ｌｙｓである。いくつかの態様において、Ｘ４アミノ酸は、ＬｅｕまたはＧｌｕである。いくつかの態様において、Ｘ５アミノ酸は、Ｓｅｒ及びＡｌａからなる群から選択される。いくつかの態様において、Ｘ６アミノ酸は、Ｌｙｓである。いくつかの態様において、Ｘ２アミノ酸はＧｌｙ、Ａｌａ、またはＳｅｒであり、Ｘ３アミノ酸はＬｙｓまたはＧｌｕであり、Ｘ４アミノ酸はＬｅｕ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、またはＧｌｕであり、Ｘ５アミノ酸はＳｅｒまたはＡｌａであり、Ｘ６アミノ酸はＬｙｓである。いくつかの態様において、「－」リンカーは、ペプチド結合または１つ以上のアミノ酸を含む。
いくつかの態様において、スカフォールドタンパク質中のＥＤは、Ｌｙｓ（Ｋ）、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号４０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号４０６）、Ａｒｇ（Ｒ）、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号４０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号４０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４０９）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号４１０）、またはこれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、スカフォールドＹは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号４１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号４１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号４１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号４１４）、または（ｖ）これらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、スカフォールドＹ中のＮＤは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫ（配列番号４１５）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫ（配列番号４１６）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫ（配列番号４１７）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫ（配列番号４１８）、または（ｖ）これらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、スカフォールドタンパク質中のＥＤは、（ｉ）Ｋ、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＧ（配列番号４１９）、ＫＫＫＧＹ（配列番号４２０）、ＫＫＫＧＹＮ（配列番号４２１）、ＫＫＫＧＹＮＶ（配列番号４２２）、ＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４２３）、ＫＫＫＧＹＳ（配列番号４２４）、ＫＫＫＧＹＧ（配列番号４２５）、ＫＫＫＧＹＧＧ（配列番号４２６）、ＫＫＫＧＳ（配列番号４２７）、ＫＫＫＧＳＧ（配列番号４２８）、ＫＫＫＧＳＧＳ（配列番号４２９）、ＫＫＫＳ（配列番号４３０）、ＫＫＫＳＧ（配列番号４３１）、ＫＫＫＳＧＧ（配列番号４３２）、ＫＫＫＳＧＧＳ（配列番号４３３）、ＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４３４）、ＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号４３５）、ＫＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４３６）、ＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４３７）を含む。
いくつかの態様において、本開示に有用なスカフォールドＹのポリペプチド配列は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号４１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号４１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号４１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号４１４）、または（ｖ）これらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
いくつかの態様において、スカフォールドＹは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号４３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号４３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号４４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号４４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号４４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号４４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号４４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号４４５）、及び（ｉｘ）これらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、本開示に有用なスカフォールドＹのポリペプチド配列は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号４３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号４３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号４４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号４４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号４４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号４４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号４４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号４４５）、及び（ｉｘ）これらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
いくつかの態様において、スカフォールドＹは、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約２６、少なくとも約２７、少なくとも約２８、少なくとも約２９、少なくとも約３０、少なくとも３１、少なくとも約３２、少なくとも約３３、少なくとも約３４、少なくとも約３５、少なくとも約３６、少なくとも約３７、少なくとも約３８、少なくとも約３９、少なくとも約３９、少なくとも約４０、少なくとも約４１、少なくとも約４２、少なくとも約４３、少なくとも約４４、少なくとも約５０、少なくとも約４６、少なくとも約４７、少なくとも約４８、少なくとも約４９、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１１５、少なくとも約１２０、少なくとも約１２５、少なくとも約１３０、少なくとも約１３５、少なくとも約１４０、少なくとも約１４５、少なくとも約１５０、少なくとも約１５５、少なくとも約１６０、少なくとも約１６５、少なくとも約１７０、少なくとも約１７５、少なくとも約１８０、少なくとも約１８５、少なくとも約１９０、少なくとも約１９５、少なくとも約２００、少なくとも約２０５、少なくとも約２１０、少なくとも約２１５、少なくとも約２２０、少なくとも約２２５、少なくとも約２３０、少なくとも約２３５、少なくとも約２４０、少なくとも約２４５、少なくとも約２５０、少なくとも約２５５、少なくとも約２６０、少なくとも約２６５、少なくとも約２７０、少なくとも約２７５、少なくとも約２８０、少なくとも約２８５、少なくとも約２９０、少なくとも約２９５、少なくとも約３００、少なくとも約３０５、少なくとも約３１０、少なくとも約３１５、少なくとも約３２０、少なくとも約３２５、少なくとも約３３０、少なくとも約３３５、少なくとも約３４０、少なくとも約３４５、または少なくとも約３５０のアミノ酸長である。
いくつかの態様において、スカフォールドＹは、約５～約１０、約１０～約２０、約２０～約３０、約３０～約４０、約４０～約５０、約５０～約６０、約６０～約７０、約７０～約８０、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１３０～約１４０、約１４０～約１５０、約１５０～約１６０、約１６０～約１７０、約１７０～約１８０、約１８０～約１９０、約１９０～約２００、約２００～約２１０、約２１０～約２２０、約２２０～約２３０、約２３０～約２４０、約２４０～約２５０、約２５０～約２６０、約２６０～約２７０、約２７０～約２８０、約２８０～約２９０、約２９０～約３００、約３００～約３１０、約３１０～約３２０、約３２０～約３３０、約３３０～約３４０、または約３４０～約２５０の間のアミノ酸長である。
いくつかの態様において、スカフォールドＹは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号４５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号４５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号４５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号４５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４５６）を含む。
いくつかの態様において、本開示に有用なスカフォールドＹのポリペプチド配列は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号４５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号４５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号４５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号４５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４６５）からなる。
本開示に有用なスカフォールドＹの非限定的な例は、以下に列挙される。いくつかの態様において、スカフォールドＹは、配列番号４５７～５６７に記載されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、スカフォールドＹは、配列番号４５７～５６７に記載されるアミノ酸配列からなる。
いくつかの態様において、本開示に有用なスカフォールドＹは、Ｎ末端にＭｅｔを含有しない。いくつかの態様において、スカフォールドＹは、スカフォールドタンパク質のＮ末端に、脂質化アミノ酸、例えば、ミリストイル化アミノ酸を含み、これは、脂質アンカーとして機能する。いくつかの態様において、スカフォールドタンパク質のＮ末端のアミノ酸残基は、Ｇｌｙである。Ｎ末端Ｇｌｙの存在は、Ｎ－ミリストイル化の絶対要件である。いくつかの態様において、スカフォールドタンパク質のＮ末端のアミノ酸残基は、合成である。いくつかの態様において、スカフォールドタンパク質のＮ末端のアミノ酸残基は、グリシン類似体、例えば、アリルグリシン、ブチルグリシン、またはプロパルギルグリシンである。
他の態様において、脂質アンカーは、当該技術分野において知られている任意の脂質アンカー、例えば、パルミチン酸またはグリコシルホスファチジルイノシトールであり得る。通常ではない状況下、例えば、ミリスチン酸が制限されている培地を使用することによって、短鎖及び不飽和を含む、いくつかの他の脂肪酸をＮ末端のグリシンに結合することができる。例えば、ＢＫチャネルでは、ミリスチン酸がヒドロキシエステル連結を介して内部のセリン／トレオニンまたはチロシン残基に翻訳後に結合することが報告されている。当該技術分野において知られている膜アンカーは、以下の表に示される。
Figure 2022550248000030
ＩＩＩ．作製方法
本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、化学合成、組み換えＤＮＡ技術、より大きな分子の生化学的もしくは酵素断片化、前述の組み合わせ、または任意の他の方法によって、生産することができる。一態様において、本開示は、生物学的に活性な分子をＥＶ（例えば、エクソソーム）にコンジュゲートする方法を提供する。方法は、上記のように、生物学的に活性な分子をＥＶ（例えば、エクソソーム）にマレイミド部分を介して連結することを含む。
アミン反応性化合物に加えて、スルフヒドリル（－ＳＨ）と結合を形成する化学基を有する化合物は、タンパク質技術及び他のバイオコンジュゲート技術において、最も一般的な架橋剤及び修飾試薬である。チオールとも呼ばれるスルフヒドリルは、タンパク質中、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）アミノ酸の側鎖に存在する。システインスルフヒドリル基のペアは、三次または四次タンパク質の天然構造の基礎として、多くの場合、ポリペプチド鎖内またはポリペプチド鎖間のジスルフィド結合（－Ｓ－Ｓ－）によって連結される。典型的に、チオール反応性化合物との反応に利用可能なものは、遊離または還元型スルフヒドリル基（－ＳＨ）［ジスルフィド結合中の硫黄原子以外］のみである。
スルフヒドリル基は、タンパク質のコンジュゲーション及び標識に有用な標的である。第１に、スルフヒドリルは、ほとんどのタンパク質中に存在するが、第一級アミンほど多くはないため、スルフヒドリル基を介した架橋は、より選択的であり、正確である。第２に、タンパク質中のスルフヒドリル基は、多くの場合、ジスルフィド結合に関与するため、これらの部位での架橋は、典型的に、タンパク質の基礎構造が大きく変更したり、結合部位を遮断することがない。第３に、利用できる（すなわち、遊離）スルフヒドリル基の数を容易に制御または変更することができ、ネイティブジスルフィド結合の還元によって、スルフヒドリル基を生成することができる。あるいは、２－イミノチオラン（トラウト試薬）、ＳＡＴＡ、ＳＡＴＰ、またはＳＡＴ（ＰＥＧ）などのスルフヒドリル付加試薬を使用した第一級アミンとの反応を介して分子に導入することができる。最後に、スルフヒドリル反応性基をアミン反応性基と組み合わせてヘテロ二官能性架橋剤を作製することで、架橋手順の柔軟性及び制御が高まる。例えば、マレイミド基及びＮＨＳエステルを含有する３－マレイミド－プロピオン酸ＮＨＳエステルを使用すると、ＮＨＳエステルを使用して、タンパク質、アミン修飾オリゴヌクレオチド、及び他のアミン含有分子の第一級アミン（－ＮＨ２）を標識することができる。マレイミド基は、チオール基と反応して共有結合を形成することで、生体分子とチオールとの接続を可能にする。
マレイミド基は、反応混合物のｐＨが６．５～７．５の間である場合、スルフヒドリル基と特異的に反応し、その結果、可逆的ではない安定したチオエーテル連結（すなわち、還元剤で接続することができない結合）が形成される。よりアルカリ性の条件（ｐＨ＞８．５）では、この反応は、第一級アミンに有利に働き、マレイミド基の非反応性マレアミド酸への加水分解速度も増大する。マレイミドは、チロシン、ヒスチジンまたはメチオニンと反応しない。
ジチオスレイトール（ＤＴＴ）及びベータ－メルカプトエタノール（ＢＭＥ）などのチオール含有化合物は、カップリング部位が競合するので、マレイミドとともに使用される反応緩衝液から除外する必要がある。例えば、ＤＴＴを使用してタンパク質中のジスルフィドを還元し、コンジュゲーションに利用可能なスルフヒドリル基を作製する場合、マレイミド反応を開始する前に、脱塩カラムを使用してＤＴＴを完全に除去する必要がある。興味深いことに、ジスルフィド還元剤ＴＣＥＰは、チオールを含有しないので、マレイミド試薬を伴う反応の前に除去する必要がない。
過剰なマレイミドは、反応の最後に遊離チオールを加えることによってクエンチすることができる。ＥＤＴＡをカップリング緩衝液中に含めて、スルフヒドリル（非反応性）の酸化を別様に促進する漂遊二価金属をキレートすることができる。
一態様において、連結は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）を還元剤で処理することを含む。好適な還元剤には、例えば、ＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）、ＢＭＥ（２－メルカプトエタノール）、チオール化剤、及びこれらの任意の組み合わせが含まれる。チオール化剤は、例えば、トラウト試薬（２－イミノチオラン）を含み得る。
還元剤で処理した後、連結反応は、還元されたＥＶ（例えば、エクソソーム）をマレイミド部分と接触させることを更に含む。一態様において、マレイミド部分は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）に連結する前に、生物学的に活性な分子に連結される。いくつかの態様において、マレイミド部分は、マレイミド部分を生物学的に活性な分子に接続するために、リンカーに更に結合される。したがって、いくつかの態様において、１つ以上のリンカーまたはスペーサーがマレイミド部分と生物学的に活性な分子との間に介在する。
いくつかの態様において、本明細書で開示されるＥＶ（例えば、エクソソーム）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで成長させた細胞または対象の体液から産生され得る。エクソソームがｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養から産生される場合、様々な産生細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、及びＭＳＣが使用され得る。ある特定の態様において、産生細胞は、ＨＥＫ２９３細胞である。いくつかの態様において、産生細胞は、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、マスト細胞、好中球、Ｋｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のいずれかに由来する細胞、またはこれらの任意の組み合わせではない。
ヒト胎児腎臓２９３細胞は、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ－２９３、２９３細胞、またはより正確にはＨＥＫ細胞とも呼ばれることがあり、本来は組織培養で成長させたヒト胎児腎臓細胞に由来する特定の細胞株である。
ＨＥＫ２９３細胞は、１９７３年にオランダのライデンにあるＡｌｅｘ ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｂの研究室において、正常なヒト胎児腎臓細胞の培養物に切断したアデノウイルス５ＤＮＡをトランスフェクションすることにより生成された。細胞は、培養され、アデノウイルスによってトランスフェクトされた。その後の分析により、形質転換は、ウイルスゲノムの左腕から約４．５キロベースが挿入されることによって生じ、ヒト１９番染色体に組み込まれたものであったことが示された。
ＨＥＫ２９３及び５つの誘導細胞株のゲノム及びトランスクリプトームの包括的研究では、ＨＥＫ２９３トランスクリプトームとヒトの腎臓、副腎、下垂体及び中枢神経組織が比較された。ＨＥＫ２９３のパターンは、副腎細胞のパターンに最もよく似ており、神経細胞の多くの特性を有する。
ＨＥＫ２９３細胞は、複雑な核型を有し、各染色体は２コピー以上を示し、染色体数は６４である。これらは、低三倍体と記載され、ハプロイドのヒト配偶子の３倍未満の染色体数を含有する。染色体異常は、Ｘ染色体が合計３コピー、１７番染色体及び２２番染色体で４コピーである。
ＥＶを産生するのに有用なＨＥＫ２９３細胞のバリアントには、ＨＥＫ ２９３Ｆ、ＨＥＫ ２９３ＦＴ、及びＨＥＫ ２９３Ｔが含まれるが、これらに限定されない。
ＩＶ．治療用途
本開示は、疾患または状態を治療することを、それを必要とする対象に行う方法であって、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。本開示はまた、疾患または状態の症状を予防または改善することを、それを必要とする対象に行う方法であって、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む組成物を対象に投与することを含む、方法も提供する。また、疾患または状態を診断することを、それを必要とする対象に行う方法であって、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む組成物を対象に投与することを含む、方法も提供される。
一態様において、疾患または障害は、がん、炎症性疾患、神経変性障害、中枢神経疾患、または代謝疾患である。
本開示はまた、疾患または障害を予防及び／または治療することを、それを必要とする対象に行う方法であって、本明細書で開示されるＥＶ（例えば、エクソソーム）を対象に投与することを含む、方法も提供する。いくつかの態様において、本方法で治療することができる疾患または障害は、がん、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、自己免疫疾患、感染症、または線維性疾患を含む。いくつかの態様において、治療は、予防的である。他の態様において、本開示のためのＥＶ（例えば、エクソソーム）は、免疫応答を誘導するために使用される。他の態様において、本開示のためのＥＶ（例えば、エクソソーム）は、対象にワクチン接種するために使用される。
いくつかの態様において、疾患または障害は、がんである。がんを有する対象に投与される場合、ある特定の態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、免疫応答を上方制御し、対象の免疫系の腫瘍標的化を向上させることができる。いくつかの態様において、治療されるがんは、白血球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球）の腫瘍微小環境への浸潤、あるいは、いわゆる「ホット腫瘍」または「炎症性腫瘍」を特徴とする。いくつかの態様において、治療されるがんは、白血球の腫瘍微小環境への浸潤が低レベルまたは検出できないレベルであること、あるいは、いわゆる「コールド腫瘍」または「非炎症性腫瘍」を特徴とする。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、「コールド腫瘍」を「ホット腫瘍」に変換するのに十分な量及び時間で投与され、すなわち、当該投与は、白血球（Ｔ細胞など）の腫瘍微小環境への浸潤をもたらす。ある特定の態様において、がんは、膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、大腸癌、肺癌、頭頸部癌、及び卵巣癌、リンパ腫、肝癌、膠芽腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵癌、またはこれらの組み合わせを含む。その他、「遠位腫瘍」または「遠隔腫瘍」という用語は、元の（または原発性）腫瘍から遠隔の器官または遠隔の組織、例えば、リンパ節に広がった腫瘍を指す。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、転移で広がった後の腫瘍を治療する。
いくつかの態様において、疾患または障害は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）である。いくつかの態様において、本開示で治療することができる疾患または障害は、自己免疫疾患である。自己免疫疾患の非限定的な例としては、多発性硬化症、末梢神経炎、シェーグレン症候群、リウマチ様関節炎、脱毛症、自己免疫膵炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、セリアック病、デビック病（視神経脊髄炎）、糸球体腎炎、ＩｇＡネフロパシー、各種血管炎、強皮症、糖尿病、動脈炎、白斑、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、乾癬、ぶどう膜炎、全身性エリテマトーデス、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの態様において、疾患または障害は、感染症である。ある特定の態様において、疾患または障害は、腫瘍性ウイルスである。いくつかの態様において、本開示で治療することができる感染症には、ヒトガンマヘルペスウイルス４（エプスタインバーウイルス）、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、サイトメガロウイルス、黄色ブドウ球菌、結核菌、トラコーマクラミジア、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、コロナウイルス（例えば、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ及びＳＡＲＳＣｏＶ）、フィロウイルス（例えば、マールブルグ及びエボラ）、化膿レンサ球菌、肺炎球菌、プラスモジウム種（例えば、三日熱及び熱帯熱マラリア）、チクンガウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒトヘルペスウイルス８、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ２）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐ．、緑膿菌、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｓｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ＣｏＮＳ）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｓｐ．、またはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、対象の循環系に静脈内投与される。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、好適な液体で注入され、対象の静脈中に投与される。
いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、対象の循環系に動脈内投与される。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、好適な液体で注入され、対象の動脈中に投与される。
いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、髄腔内投与によって対象に投与される。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、ＥＶが脳脊髄液（ＣＳＦ）に到達するように、脊柱管またはクモ膜下腔への注射を介して投与される。
いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、対象の１つ以上の腫瘍に腫瘍内投与される。
いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、鼻腔内投与によって対象に投与される。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、局所投与または全身投与のいずれかの形態で、鼻を通して吸引され得る。ある特定の態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、鼻腔スプレーとして投与される。
いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、腹腔内投与によって対象に投与される。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、好適な液体で注入され、対象の腹膜中に注射される。いくつかの態様において、腹腔内投与により、ＥＶ（例えば、エクソソーム）のリンパ管への分布が生じる。いくつかの態様において、腹腔内投与により、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の胸腺、脾臓、及び／または骨髄への分布が生じる。いくつかの態様において、腹腔内投与により、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の１つ以上のリンパ節への分布が生じる。いくつかの態様において、腹腔内投与により、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の、頸部リンパ節、鼠経リンパ節、縦隔リンパ節、または胸骨リンパ節のうちの１つ以上への分布が生じる。いくつかの態様において、腹腔内投与により、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の膵臓への分布が生じる。
いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、眼周囲投与によって対象に投与される。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、眼周囲組織に注射される。眼周囲の薬物投与には、結膜下、前テノン嚢下、後テノン嚢下、及び球後の投与経路が含まれる。
Ｖ．医薬組成物及び投与方法
本開示はまた、対象への投与に好適である、本明細書に記載されるＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、通常、複数のＥＶ（例えば、エクソソーム）にマレイミド部分を介して共有結合的に連結された生物学的に活性な分子を含む複数のＥＶ（例えば、エクソソーム）と、対象への投与に好適な形態の薬学的に許容される賦形剤または担体と、を含む。薬学的に許容される賦形剤または担体は、部分的には、投与される特定の組成物によって、更には組成物を投与するために使用される特定の方法によって、決定される。したがって、複数のＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物の好適な製剤は、多岐にわたる。（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８ｔｈ ｅｄ．（１９９０）参照）。医薬組成物は、一般に、無菌状態で、かつ米国食品医薬品局の全ての適正製造基準（ＧＭＰ）規制に完全に準拠して製剤化される。いくつかの態様において、医薬組成物は、１つ以上の化合物、例えば、本明細書に記載されるＥＶ（例えば、エクソソーム）に共有結合的に連結された小分子などを含む。
いくつかの態様において、医薬組成物は、１つ以上の治療薬と、本明細書に記載されるＥＶ（例えば、エクソソーム）と、を含む。ある特定の態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、薬学的に許容される担体中、１つ以上の追加の治療薬と共投与される。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物は、追加の治療薬を投与する前に投与される。他の態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物は、追加の治療薬を投与した後に投与される。更なる態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物は、追加の治療薬と同時に投与される。
所望の程度の純度を有する本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）と、薬学的に許容される担体または賦形剤と、を対象への投与に好適な形態で含む、医薬組成物が本明細書で提供される。薬学的に許容される賦形剤または担体は、部分的には、投与される特定の組成物によって、更には組成物を投与するために使用される特定の方法によって、決定され得る。したがって、複数の細胞外小胞を含む医薬組成物の好適な製剤は、多岐にわたる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．２１ｓｔ ｅｄ．（２００５）参照）。医薬組成物は、一般に、無菌状態で、かつ米国食品医薬品局の全ての適正製造基準（ＧＭＰ）規制に完全に準拠して製剤化される。
いくつかの態様において、医薬組成物は、１つ以上の治療薬と、本明細書に記載されるＥＶ（例えば、エクソソーム）と、を含む。ある特定の態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、薬学的に許容される担体中、１つ以上の追加の治療薬と共投与される。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物は、追加の治療薬を投与する前に投与される。他の態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物は、追加の治療薬を投与した後に投与される。更なる態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物は、追加の治療薬と同時に投与される。
許容される担体、賦形剤、または安定剤は、採用される用量及び濃度でレシピエント（例えば、動物またはヒト）に対して無毒であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；メチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；単糖、二糖、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
担体または希釈剤の例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的活性物質のためのそのような媒体及び化合物の使用は、当該技術分野においてよく知られている。任意の従来の培地または化合物が本明細書に記載される細胞外小胞と適合しない場合を除き、組成物におけるその使用が企図される。補助的な治療薬もまた、組成物に組み込むことができる。典型的に、医薬組成物は、その意図される投与経路と適合するように製剤化される。本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、経直腸、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内の経路によりまたは吸入剤として投与することができる。ある特定の態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物は、静脈内、例えば、注射によって投与される。ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、任意選択により、ＥＶ（例えば、エクソソーム）が意図される疾患、障害、または状態を治療する上で少なくとも部分的に有効である他の治療薬と組み合わせて投与することができる。
溶液または懸濁液は、次の構成成分：水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの無菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌化合物、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤、酢酸、クエン酸、またはリン酸などの緩衝液、及び塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧を調整するための化合物を含むことができる。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調整することができる。調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラスもしくはプラスチックから作製された複数回用量バイアルに封入され得る。
注射用途に好適な医薬組成物は、無菌水溶液（水溶性の場合）または分散液及び無菌粉末を含む。静脈内投与の場合、好適な担体には、生理食塩水、静菌蒸留水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。組成物は、一般に、滅菌されており、容易に注射可能である程度に流動的である。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びその好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散液の場合には必要とされる粒径の維持によって、また界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物作用の防止は、種々の抗菌及び抗真菌化合物、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。所望される場合、等張化合物、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、及び塩化ナトリウムが組成物に添加され得る。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる化合物、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含めることによってもたらすことができる。
注射用無菌溶液は、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）を、必要に応じて、有効量で、本明細書で列挙される成分のうちの１つまたは組み合わせとともに適切な溶媒中に組み込むことによって調製することができる。一般に、分散液は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）を、基本的な分散媒及び任意の所望の他の成分を含有する無菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。注射用無菌溶液を調製するための無菌粉末の場合、調製方法は、真空乾燥及びフリーズドライであり、これにより、予め無菌濾過した当該溶液から、活性成分及び任意の所望の追加成分の粉末が得られる。ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の持続的または拍動性放出を可能にするような様式で製剤化され得るデポ注射またはインプラント調製物の形態で投与され得る。
本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む組成物の全身投与はまた、経粘膜的手段によることもできる。経粘膜投与の場合、浸透すべき障壁に適切な浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は、一般に、当該技術分野において知られており、例えば、経粘膜投与のための界面活性剤、胆汁塩、及びフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与は、鼻腔スプレーの使用により実施することができる。
ある特定の態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物は、医薬組成物から恩恵を受け得る対象に静脈内投与される。ある特定の他の態様において、組成物は、リンパ系に、例えば、リンパ管内注射によって、もしくはリンパ節内注射によって（例えば、Ｓｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １０５（ ４６）：１７９０８（２００８）参照）、または筋肉内注射によって、皮下投与によって、腫瘍内注射によって、胸腺もしくは肝臓への直接注射によって、投与される。
ある特定の態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物は、液体懸濁液として投与される。ある特定の態様において、医薬組成物は、投与後にデポを形成することが可能な製剤として投与される。ある特定の好ましい態様において、デポは、ＥＶ（例えば、エクソソーム）を循環へ緩徐に放出するか、またはデポ形態であり続ける。
典型的に、薬学的に許容される組成物は、汚染物質を含まないように高度に精製され、生体適合性があり、毒性がなく、対象への投与に適している。水が担体の構成要素である場合、水は、汚染物質、例えば、エンドトキシンを含まないように高度に精製及び処理される。
薬学的に許容される担体は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシ安息香酸塩、プロピルヒドロキシ安息香酸塩、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び／または鉱油であり得るが、これらに限定されない。医薬組成物は、滑沢剤、湿潤剤、甘味料、風味増強剤、乳化剤、懸濁剤、及び／または防腐剤を更に含むことができる。
本明細書に記載される医薬組成物は、本明細書に記載されるＥＶ（例えば、エクソソーム）と、任意選択により、薬学的に活性な薬剤または治療薬と、を含む。治療薬は、生物学的製剤、小分子製剤、または核酸製剤であり得る。
本明細書に記載されるＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物を含む剤形が提供される。いくつかの態様において、剤形は、静脈内注射用の液体懸濁液として製剤化される。いくつかの態様において、剤形は、腫瘍内注射用の液体懸濁液として製剤化される。
ある特定の態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）の調製物は、残留している複製能力のある核酸を破壊するために、例えば、Ｘ線、ガンマ線、ベータ粒子、アルファ粒子、中性子、陽子、元素核、ＵＶ線などの放射線に供される。
ある特定の態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）の調製物は、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、または１００ｋＧｙを超える照射線量を使用するガンマ照射に供される。
ある特定の態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）の調製物は、０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、またはそれを超える照射線量を使用するＸ線照射に供される。
本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、他の薬物と同時に使用され得る。具体的には、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、ホルモン療法剤、化学療法剤、免疫療法剤、細胞成長因子または細胞成長因子受容体の作用を阻害する医薬品などの医薬品とともに使用され得る。
ＶＩ．キット
本開示はまた、１つ以上の本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）と、任意選択により、使用説明書と、を含むキットまたは製造品も提供する。いくつかの態様において、キットまたは製造品は、少なくとも１つの本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む本明細書に記載される医薬組成物と、使用説明書と、を含有する。いくつかの態様において、キットまたは製造品は、少なくとも１つの本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）、またはＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物を、１つ以上の容器中に含む。当業者であれば、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）を含む医薬組成物、またはこれらの組み合わせは、当該技術分野においてよく知られている、確立されたキット形式の１つに容易に組み込むことができることを容易に認識するであろう。
いくつかの態様において、キットまたは製造品は、ＥＶ（例えば、エクソソーム） １つ以上の生物学的に活性な分子、マレイミド部分を介して１つ以上の生物学的に活性な分子をＥＶ（例えば、エクソソーム）に共有結合的に結合させる試薬、またはこれらの任意の組み合わせ、及びマレイミド部分を介して１つ以上の生物学的に活性な分子をＥＶ（例えば、エクソソーム）に共有結合的に結合させる反応を実施するための説明書を含む。
いくつかの態様において、キットは、マレイミド部分を介して生物学的に活性な分子をＥＶ（例えば、エクソソーム）にコンジュゲートするための試薬、及びコンジュゲーションを実施するための説明書を含む。
本開示の実施は、特に指定のない限り、当該技術分野の範囲内にある、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組み換えＤＮＡ、及び免疫学の従来の方法を採用する。そのような技術は、文献において十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．，（１９８５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ；Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，６８３，１９５；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４ ａｎｄ １５５；Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）；Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８６）；）；Ｃｒｏｏｋｅ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２ｎｄ Ｅｄ．ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００７）及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照されたい。
上で引用される全ての参考文献は、当該文献中で引用される全ての参考文献もともに、その全体が参照により本明細書に援用される。
以下の実施例は、例示として提供するものであり、限定するものではない。
以下の実施例は、例示の目的で提供されるにすぎず、いかなる形でも本発明の範囲または内容を限定するものとして解釈されるべきではない。本発明の実施は、特に指定のない限り、当該技術分野の範囲内にある、タンパク質化学、生化学、組み換えＤＮＡ技術、及び薬理学の従来の方法を採用する。かかる技術は、文献において十分に説明されている。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）；Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２０１２）；Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ＆ Ｋａｐｌａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２）；Ｓｕｎｄｂｅｒｇ ＆ Ｃａｒｅｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｐａｒｔｓ Ａ ａｎｄ Ｂ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００７）を参照されたい。
実施例１
本明細書に記載されるエクソソームを生成するために、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞株（ＨＥＫ２９３ＳＦ）を使用する。目的の薬剤（例えば、抗原、アジュバント、または免疫調節剤）に連結されたスカフォールドＸ及び／またはスカフォールドＹを、細胞に安定的にトランスフェクトする。例えば、ＣＤ４０Ｌ発現エクソソームは、単量体として、または強制的に三量体として発現するＣＤ４０Ｌ－ＧＦＰ ＰＴＧＦＲＮ融合分子をＨＥＫ２９３ＳＦ細胞にトランスフェクトすることによって生成することができる。
トランスフェクション後、化学的に成分が明らかな培地でＨＥＫ２９３ＳＦ細胞を７日間、高密度になるまで成長させる。次いで、馴化した細胞培養培地を回収し、３００～８００×ｇで５分間、室温で遠心分離して、細胞及び大きなデブリを除去する。培地上清に１０００Ｕ／ＬのＢＥＮＺＯＮＡＳＥ（登録商標）を補充し、水浴中、３７℃で１時間インキュベートする。上清を回収し、１６，０００×ｇで３０分間、４℃で遠心分離して、残余の細胞デブリ及び他の大きな夾雑物を除去する。次いで、上清を１３３，９００×ｇで３時間、４℃で超遠心分離して、エクソソームをペレット化する。上清を破棄し、チューブの底部からあらゆる残留培地を吸引する。ペレットを２００～１０００μＬのＰＢＳ（－Ｃａ－Ｍｇ）中に再懸濁する。
エクソソーム集団を更に濃縮するために、密度勾配精製（スクロースまたはＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標））を介してペレットを処理する。
ＳＷ ４１ Ｔｉローターに配置された１２ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５９）チューブ中で、勾配液を２００，０００×ｇで１６時間、４℃で回転させ、エクソソーム画分を分離する。
次いで、エクソソーム層を上層から穏やかに除去し、３８．５ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５８）チューブ中の約３２．５ｍＬのＰＢＳに希釈し、１３３，９００×ｇで３時間、４℃で再び超遠心分離して、精製エクソソームをペレット化する。得られたペレットを最小体積のＰＢＳ（約２００μＬ）中に再懸濁し、４℃で保存する。
ＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）勾配の場合、ＳＷ ４１ Ｔｉローター用の１２ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５９）チューブ中に、等体積の１０％、３０％、及び４５％ＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）を用いて３層滅菌勾配液を調製する。ペレットをＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）勾配液に加え、２００，０００×ｇで１６時間、４℃で超遠心分離して、エクソソーム画分を分離する。次いで、チューブの上部約３ｍＬからエクソソーム層を穏やかに回収する。
エクソソーム画分を３８．５ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５８）チューブ中の約３２ｍＬのＰＢＳ中に希釈し、１３３，９００×ｇで３時間、４℃で超遠心分離して、精製エクソソームをペレット化する。次いで、ペレット化したエクソソームを最小体積のＰＢＳ（約２００μＬ）中に再懸濁し、使用するまで４℃で保存する。
実施例２
ＫＲＡＳ ｍＲＮＡ及び／またはＫＲＡＳタンパク質減少に関するｉｎ ｖｉｔｒｏ分析
Ｇ１２Ｄ変異を含むＫＲＡＳタンパク質をコードするＫＲＡＳ転写物を特異的に標的とするように、本明細書で開示される例示的なＡＳＯを設計した。図１Ｆを参照されたい。本明細書で開示される任意の他の標的遺伝子（例えば、ＮＬＲＰ３、ＳＴＡＴ６、ＣＥＢＰ／β、ＳＴＡＴ３、またはＮＲＡＳ）を標的とするＡＳＯも同様の方法で使用することができる。開示されるＡＳＯは、ウミシイタケルルシフェラーゼの上流にヒトＫＲＡＳ ｍＲＮＡの野生型（ＷＴ）またはＧ１２Ｄアレルを含有するレポーター細胞株において、ＫＲＡＳ ｍＲＮＡ及び／またはＫＲＡＳタンパク質の発現をノックダウンする能力について試験される。一般的な細胞毒性を制御するために、細胞株は、ホタルルシフェラーゼも含有する。ＫＲＡＳに特異的なｓｉＲＮＡを陽性対照として使用する。
簡潔に述べると、ＷＴまたはＧ１２Ｄ変異ＫＲＡＳタンパク質を発現するレポーター細胞株を細胞培養培地で成長させ、９６ウェルプレートに播種する。次いで、異なる濃度の本明細書で開示される１つ以上のＡＳＯを含むＥＶ（例えば、エクソソーム）（「ＥＶ－ＡＳＯ」）で細胞を処理する。ＥＶ－ＡＳＯ処理のおよそ３日後に、細胞を採種し、細胞からＲＮＡ及び／またはタンパク質を精製する。次いで、ｑＰＣＲ及びウェスタンブロットなどのアッセイを使用して、細胞中のＫＲＡＳ ｍＲＮＡ及び／またはＫＲＡＳタンパク質の発現レベルを定量化する。
実施例３
ＫＲＡＳ ｍＲＮＡ／ＫＲＡＳタンパク質の減少に関するｉｎ ｖｉｖｏ分析
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＫＲＡＳ ｍＲＮＡ及び／またはＫＲＡＳタンパク質レベルの減少に関して、本明細書で開示される１つ以上のＡＳＯを含むＥＶ（例えば、エクソソーム）の効力を評価するために、腫瘍マウスモデルが使用される。本明細書で開示される任意の他の標的遺伝子（例えば、ＮＬＲＰ３、ＳＴＡＴ６、ＣＥＢＰ／β、ＳＴＡＴ３、またはＮＲＡＳ）を標的とするＡＳＯも同様の方法で使用することができる。本明細書で開示されるＡＳＯは、様々な投薬レジメンで腫瘍マウスに投与される。腫瘍成長について、定期的にマウスを観察する。最終的にはマウスを安楽死処分し、各種細胞におけるＫＲＡＳ ｍＲＮＡ及び／またはＫＲＡＳタンパク質レベルを評価する。
実施例４
ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ及び／またはＮＬＲＰ３タンパク質減少に関するｉｎ ｖｉｔｒｏ分析
ＮＬＲＰ３転写物を特異的に標的とするように、本明細書で開示される例示的なＡＳＯを設計した。図１Ａを参照されたい。開示されるＡＳＯは、レポーターの上流にヒトＮＬＲＰ３コーディング配列を含有するレポーター細胞株において、ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ及び／またはＮＬＲＰ３タンパク質の発現をノックダウンする能力について試験される。ＮＬＲＰ３特異的ｓｉＲＮＡは、陽性対照として使用される。
簡潔に述べると、ＮＬＲＰ３を発現するレポーター細胞株を細胞培養培地で成長させ、９６ウェルプレートに播種する。次いで、異なる濃度の本明細書で開示される１つ以上のＡＳＯを含むＥＶ（例えば、エクソソーム）（「ＥＶ－ＡＳＯ」）で細胞を処理する。そのようなＥＶを産生するための方法は、本開示に別途提供されている。ＥＶ－ＡＳＯ処理のおよそ３日後に、細胞を採種し、細胞からＲＮＡ及び／またはタンパク質を精製する。次いで、ｑＰＣＲ及びウェスタンブロットなどのアッセイを使用して、細胞中のＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ及び／またはＮＬＲＰ３タンパク質の発現レベルを定量化する。
実施例５
ＮＬＲＰ３ ＡＳＯの設計
ＮＬＲＰ３（遺伝子ＩＤ番号１１４５４８）発現を標的とするように、マウス及びヒトＡＳＯを設計した。標的配列は、ヒトＮＬＲＰ３の場合はレファレンス配列ＮＭ＿００４８９５、マウスＮＬＲＰ３の場合はＮＭ＿１４５８２７．４を使用して選択した。それぞれの遺伝子について、初期転写物の全長にわたるＡＳＯのＴｉｌｌｉｎｇによって、可能性のあるＡＳＯの一覧を生成した。１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基長を有するＡＳＯを生成した。
ＡＳＯは次の特性に基づいて優先順位を付けた：全てのスプライスフォームにヒットする必要があること；自己二量化エネルギーが低いこと（オンターゲット活性）；ＧＧＧＧモチーフ（配列番号５９８）がないこと（合成上の問題を引き起こし得る）；オリゴ中にＣｐＧジヌクレオチドが３未満であること（免疫促進の可能性）；パリンドローム配列が８塩基未満であること（二量化＆免疫促進の可能性）；既知のｍｉＲＮＡ及びｌｎｃＲＮＡ、及び初期転写物と成熟転写物の両方を含む任意の遺伝子に対するオフターゲットヒットにおいてミスマッチが２を超え、連続塩基が１７を超えないこと；反復配列と重複しないこと；ならびに一般集団におけるＭＡＦが０．０１以上であるＳＮＰと重複しないこと。追加の基準には、予想される種間の交差反応性（例えば、ヒト、カニクイザル、アカゲザル、ラット、マウス転写物）；ならびに成熟転写物で３ミスマッチ（ｍｍ）以下、ｌｎｃ転写物で３ｍｍ以下、ｍｉＲＮＡで３ｍｍ以下、及び初期転写物で３ｍｍ以下のオフターゲット（ＯＴ）フィルターを含めた。
実施例６
ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ／ＮＬＲＰ３タンパク質の減少に関するｉｎ ｖｉｖｏ分析
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ及び／またはＮＬＲＰ３タンパク質レベルの減少に関して、本明細書で開示される１つ以上のＡＳＯを含むＥＶ（例えば、エクソソーム）の効力を評価するために、線維症マウスモデルが使用される。本明細書で開示されるＡＳＯは、様々な投薬レジメンでマウスに投与される。線維症の症状について、マウスを観察する。最終的にはマウスを安楽死処分し、各種細胞におけるＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ及び／またはＮＬＲＰ３タンパク質レベルを評価する。
実施例７
ヒト初代単球及びマクロファージにおける機能性アッセイ
ＮＬＲＰ３経路が活性化すると、ヒト単球及びマクロファージによるＩＬ－１β産生が誘導される。ＮＬＲＰ３経路の活性化は、ヒト全血から単離した単球、及び単球を使用してＭ－ＣＳＦ中で６日間成熟させたＭ０マクロファージを使用して実証されているように、２００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで３時間プライミングした後、５ｍＭ ＡＴＰとともに一晩インキュベーションすることによって達成することができる。ＩＬ－１β産生の誘導は、ＭＣＣ９５０及びＩＣ５０値の遊離薬物による処理によって阻害することができる（図２Ａ～２Ｂ）。ＩＬ－１β濃度は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイを使用して決定される。
ＮＬＲＰ３経路の活性化に伴うヒト細胞によるＩＬ－１βの産生と同様に、マウス骨髄由来マクロファージもまたＩＬ－１βを産生する。これは、２００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで３時間プライミングした後、５ｍＭ ＡＴＰとともに３時間インキュベーションすることによって達成することができる（図２Ｃ）。
実施例８
ｉｎ ｖｉｖｏ腹膜炎モデル
腹腔内のＬＰＳ抗原刺激は、マウスにＩＬ－１βの産生を誘導し、抗原刺激から３時間後には体循環で検出され得る。ＬＰＳ抗原刺激マウスの血清中でのＩＬ－１βの誘導は、抗原刺激の１時間前にＭＣＣ９５０を腹腔内投与する前処理によって阻害することができる（図３Ａ～３Ｂ）。
実施例９
ｍＲＮＡ及び／またはタンパク質減少に関するｉｎ ｖｉｔｒｏ分析
ＳＴＡＴ６転写物（図１Ｂ）またはＣＥＢＰ／β転写物（図１Ｃ）を特異的に標的とするように、本明細書で開示される例示的なＡＳＯを設計した。開示されるＡＳＯは、レポーターの上流にヒトＳＴＡＴ６またはＣＥＢＰ／βコーディング配列を含有するレポーター細胞株において、ＳＴＡＴ６もしくはＣＥＢＰ／β ｍＲＮＡ及び／またはＳＴＡＴ６もしくはＣＥＢＰ／βタンパク質の発現をノックダウンする能力について試験される。ＳＴＡＴ６またはＣＥＢＰ／β特異的ｓｉＲＮＡは、陽性対照として使用される。
簡潔に述べると、ＳＴＡＴ６またはＣＥＢＰ／βを発現するレポーター細胞株を細胞培養培地で成長させ、９６ウェルプレートに播種する。次いで、異なる濃度の本明細書で開示される１つ以上のＡＳＯを含むＥＶ（例えば、エクソソーム）（「ＥＶ－ＡＳＯ」）で細胞を処理する。そのようなＥＶを産生するための方法は、本開示に別途提供されている。ＥＶ－ＡＳＯ処理のおよそ３日後に、細胞を採種し、細胞からＲＮＡ及び／またはタンパク質を精製する。次いで、ｑＰＣＲ及びウェスタンブロットなどのアッセイを使用して、細胞中のＳＴＡＴ６もしくはＣＥＢＰ／βｍＲＮＡ及び／またはＳＴＡＴ６もしくはＣＥＢＰ／βタンパク質の発現レベルを定量化する。
まず、選択的転写物との交差反応性、種間の交差反応性、目的遺伝子に対する特異性、ＡＳＯ内のＳＮＰの存在、ＡＳＯの長さ、位置の多様性、毒性モチーフ、及び予想される結合親和性に基づくｉｎ ｓｉｌｉｃｏ選択を使用してリードＡＳＯを選択する。次に、標的配列（ＳＴＡＴ６またはＣＥＢＰ／β ｍＲＮＡ）をトランスフェクトした細胞株における標的遺伝子発現をノックダウンする能力について、ＡＳＯをスクリーニングする（２ｎＭで少なくとも５０％及び２０ｎＭでＧＡＰＤＨのノックダウン２０％未満）。次いで、少なくとも２名のドナーに由来する初代マクロファージにおける標的遺伝子のノックダウン効力について、ＡＳＯをアッセイする。また、処理後のハウスキーピング遺伝子の発現安定性、配列位置の多様性、及び予想されるオフターゲットの発現も観察される。初代マクロファージにおいて最も高い再プログラミング活性（遺伝子発現変化、サイトカイン産生、Ｔ細胞抑制）を有する最適なＡＳＯをリードＡＳＯとして選択する。
実施例１０
ＡＳＯの設計
ＳＴＡＴ６（遺伝子ＩＤ番号６７７８）またはＣＥＢＰ／β（遺伝子ＩＤ番号１０５１）発現を標的とするように、マウス及びヒトＡＳＯを設計した。標的ＳＴＡＴ６配列は、ヒトＳＴＡＴ６の場合はレファレンス配列ＮＭ＿００１１７８０７８．２、マウスＳＴＡＴ６の場合はＮＭ＿００９２８４．２を使用して選択した。標的ＣＥＢＰ／β配列は、ヒトＣＥＢＰ／βの場合はレファレンス配列ＮＭ＿００１２８５８７８．１、マウスＣＥＢＰ／βの場合はＮＭ＿００９８８３．４を使用して選択した。それぞれの遺伝子について、初期転写物の全長にわたるＡＳＯのＴｉｌｌｉｎｇによって、可能性のあるＡＳＯの一覧を生成した。１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基長を有するＡＳＯを生成した。
ＡＳＯは次の特性に基づいて優先順位を付けた：全てのスプライスフォームにヒットする必要があること；自己二量化エネルギーが低いこと（オンターゲット活性）；ＧＧＧＧモチーフがないこと（合成上の問題を引き起こし得る）；オリゴ中にＣｐＧジヌクレオチドが３未満であること（免疫促進の可能性）；パリンドローム配列が８塩基未満であること（二量化＆免疫促進の可能性）；既知のｍｉＲＮＡ及びｌｎｃＲＮＡ、及び初期転写物と成熟転写物の両方を含む任意の遺伝子に対するオフターゲットヒットにおいてミスマッチが２を超え、連続塩基が１７を超えないこと；反復配列と重複しないこと；ならびに一般集団におけるＭＡＦが０．０１以上であるＳＮＰと重複しないこと。追加の基準には、予想される種間の交差反応性（例えば、ヒト、カニクイザル、アカゲザル、ラット、マウス転写物）；ならびに成熟転写物で３ミスマッチ（ｍｍ）以下、ｌｎｃ転写物で３ｍｍ以下、ｍｉＲＮＡで３ｍｍ以下、及び初期転写物で３ｍｍ以下のオフターゲット（ＯＴ）フィルターを含めた。
実施例１１
エクソソーム上へのＡＳＯローディング
レポーターＡＳＯをローディングした２Ｅ１１エクソソームの単回投与（「エクソＡＳＯ」）または遊離レポーターＡＳＯの単回投与（「遊離ＡＳＯ」）をマウスに静脈内投与した。投与から１時間後、ＭＦＩによって証明されるように、遊離ＡＳＯの局在化と比べて、血液中のＣＤ１１ｂ＋樹状細胞、単球、及びｍＭＤＳＣ（図４Ａ）；肝臓のクッパ－細胞（図４Ｂ）；脾臓の赤脾髄マクロファージ、単球、及びｍＭＤＳＣ（図４Ｃ）；ならびに腫瘍組織の樹状細胞及びｍＭＤＳＣ（図４Ｄ）において、エクソＡＳＯの取り込み増加が観察された。エクソＡＳＯの取り込みは、遊離ＡＳＯ及び陰性対照の取り込み（図４Ｇ～４Ｊ）と比較して、骨髄においてより高かった（図４Ｅ～４Ｆ）。
実施例１２
エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯ及びエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯはＭ２マクロファージを再分極することが可能である
初代ヒトマクロファージをＩＬ４／ＩＬ１０／ＴＧＦβ処理で分極させ、漸増濃度のエクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯまたはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯで処理した。初代ヒトマクロファージをエクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯまたはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯでｉｎ ｖｉｔｒｏ処理すると、それぞれＳＴＡＴ６（図５Ａ）またはＣＥＢＰ／β（図５Ｃ）の用量依存性ノックダウンが誘導され、Ｍ２マクロファージ遺伝子であるＣＤ１６３の下方制御も誘導された（図５Ｂ及び５Ｄ）。効力は、遊離ＡＳＯと比較して、エクソ－ＡＳＯを使用したほうがわずかに高いことがわかった。加えて、エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯまたはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯの処理後、様々なＭ２遺伝子が下方制御され、様々なＭ１遺伝子が上方制御された（図６Ａ～６Ｊ）。
実施例１３
ＣＤ１１ｂ細胞におけるエクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯ及びエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯ標的遺伝子ノックダウン
ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯ及びエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯに対する主要なレシピエント細胞は、ＣＤ１１ｂ細胞である。エクソ－ＡＳＯの取り込み及び既知のダウン効率を更に測定するために、マウスをエクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯまたはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯで処理し、安楽死させた。次いで、ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離し、濃縮した（図７Ａ～７Ｆ）。エンドポイントではないが、腫瘍体積は、スクランブルエクソ－ＡＳＯ対照で処理したマウスと比べて、エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯ処理マウス及びエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯ処理マウスで有意に低く、エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯまたはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯで処理したマウスは、ＳＴＡＴ６遊離ＡＳＯで処理したマウスよりも小さい腫瘍を有する傾向があった（図７Ｇ）。エクソ－ＡＳＯ標的遺伝子のノックダウンは、エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯ（図８Ａ）またはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯ（図８Ｂ）での処理後、非濃縮細胞よりもＣＤ１１ｂ濃縮細胞でより顕著であった。加えて、いずれのエクソ－ＡＳＯも、Ａｒｇ１発現の減少において、非濃縮細胞よりもＣＤ１１ｂ濃縮細胞で大幅に効果的であった（図８Ｃ）。
エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯまたはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯのいずれかで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞もまた、様々なＭ１遺伝子の上方制御及び様々なＭ２遺伝子の下方制御によって証明されるように、マクロファージ再プログラミングを示した（図９Ａ～９Ｖ）。
実施例１４
エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯ及び／またはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯを使用した線維症の治療
過剰なＭ２マクロファージの活性化は、筋線維芽細胞の増殖、ＥＭＴ／ＥｎｄｏＭＴの活性化、及び細胞外マトリックスの沈着を促進するＴＧＦβ及び成長因子の断続的な産生をもたらす。Ｍ２マクロファージは、創傷治癒と線維化促進プロセスの悪化との間のブレークポイントである。エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯまたはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯを使用して対象の線維症を治療できるかどうかを試験するために、初代ヒトＭ２マクロファージを線維症の誘因であるＩＬ－１３／ＴＧＦβ処理で分極させた。次いで、細胞を漸増濃度の遊離ＳＴＡＴ６ ＡＳＯ（図１０Ａ及び１０Ｃ）、遊離ＣＥＢＰ／β ＡＳＯ（図１０Ｂ及び１０Ｄ）、エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯ（図１０Ａ及び１０Ｃ）、またはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯ（図１０Ｂ及び１０Ｄ）に曝露し、標的遺伝子の発現（ＳＴＡＴ６、図１０Ａ；ＣＥＢＰ／β、図１０Ｂ）またはＴＧＦβ１の発現（図１０Ｃ～１０Ｄ）についてアッセイした。
鼻腔内投与を使用したエクソ－ＡＳＯのｉｎ ｖｉｖｏ送達の実現可能性を試験するために、６週齢のマウスをブレオマイシンで処理して肺線維症を誘発させた。２週間後、マウスにエクソ－ＡＳＯ－Ｃｙ５を鼻腔内投与し、投与から４時間後にマウスを安楽死させた。エクソ－ＡＳＯ－Ｃｙ５を投与したブレオマイシン誘発マウスは、エクソ－ＡＳＯ－Ｃｙ５を投与したナイーブマウス（「ＩＮナイーブ」）と比べて、またＰＢＳ陰性対照を投与したナイーブ処理マウス（「－Ｃ」）と比べて、Ｃｙ５の全フラックスの増加を示した（図１１）。
肺マクロファージ及び肺毛細血管内皮細胞によるエクソソームの取り込みが、正常な肺と誘発された肺線維症肺組織の両方において観察された（図１２Ａ～１２Ｈ及び１３Ａ～１３Ｈ）。
実施例１５
エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯ及び／またはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯを使用した肝臓癌マウスモデルの治療
Ｈｅｐａ１－６マウスを使用して、腫瘍の治療に対するエクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯ及びエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を試験する。Ｈｅｐａ１－６系統は、肝臓癌の正所性マウスモデルである。試料をＣＲＯから入手し、ＳＴＡＴ６及びＣＥＢＰ／βの発現についてｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションで分析した（図１４Ａ～１４Ｆ及び１５Ａ～１５Ｆ）。
実施例１６
ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現の分析
ＩＬ－６刺激ＰＡＮＣ－１細胞においてＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ発現を減少する能力について、本開示のＡＳＯを試験した。ＰＡＮＣ－１細胞を細胞培養培地で成長させ、９６ウェルプレートに２０，０００細胞／ウェルの密度で播種した。２つの別個のコホートでＡＳＯを試験した：ＰＡＮＣ－１細胞に２投与または５投与を行い（表３参照）、それぞれの最終濃度を２０ｎＭ及び２ｎＭとした。アッセイでは、リポフェクタミン２０００トランスフェクションを使用し、４８時間の処理サイクルで、３７℃及び５％ＣＯ２でインキュベーションを行った。次いで、分岐ＤＮＡアッセイを使用して、ｍＲＮＡ発現の分析を実施した。
Figure 2022550248000031
実施例１７
ＮＲａｓ ｍＲＮＡ発現の分析
ＨＥＫ－２９３細胞においてＮＲａｓ ｍＲＮＡ発現を減少する能力について、本開示のＡＳＯを試験した。ＨＥＫ－２９３細胞を細胞培養培地で成長させ、９６ウェルプレートに２０，０００細胞／ウェルの密度で播種した。２つの別個のコホートでＡＳＯを試験した：ＨＥＫ－２９３細胞に２投与または５投与を行い（表４、５及び６参照）、それぞれの最終濃度を２０ｎＭ及び２ｎＭとした。アッセイでは、リポフェクタミン２０００トランスフェクションを使用し、４８時間の処理サイクルで、３７℃及び５％ＣＯ２でインキュベーションを行った。次いで、分岐ＤＮＡアッセイを使用して、ｍＲＮＡ発現の分析を実施した。例えば、配列番号２０１は、９８．４５％のＮＲａｓ発現阻害を示した（表６）。
Figure 2022550248000032
Figure 2022550248000033
Figure 2022550248000034
実施例１８
エクソソームの構築
本明細書に記載されるエクソソームを生成するために、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３ＳＦ）を使用する。目的の薬剤（例えば、抗原、アジュバント、または免疫調節剤）に連結されたスカフォールドＸ、スカフォールドＹ、及び／またはアンカリング部分を、細胞に安定的にトランスフェクトする。例えば、ＣＤ４０Ｌ発現エクソソームは、単量体として、または強制的に三量体として発現するＣＤ４０Ｌ－ＧＦＰ ＰＴＧＦＲＮ融合分子をＨＥＫ２９３ＳＦ細胞にトランスフェクトすることによって生成することができる。
トランスフェクション後、化学的に成分が明らかな培地でＨＥＫ細胞を７日間、高密度になるまで成長させる。次いで、馴化した細胞培養培地を回収し、３００～８００×ｇで５分間、室温で遠心分離して、細胞及び大きなデブリを除去する。培地上清に１０００Ｕ／ＬのＢＥＮＺＯＮＡＳＥ（登録商標）を補充し、水浴中、３７℃で１時間インキュベートする。上清を回収し、１６，０００×ｇで３０分間、４℃で遠心分離して、残余の細胞デブリ及び他の大きい夾雑物を除去する。次いで、上清を１３３，９００×ｇで３時間、４℃で超遠心分離して、エクソソームをペレット化する。上清を破棄し、チューブの底部からあらゆる残留培地を吸引する。ペレットを２００～１０００μＬのＰＢＳ（－Ｃａ－Ｍｇ）中に再懸濁する。
エクソソーム集団を更に濃縮するために、密度勾配精製（スクロースまたはＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標））を介してペレットを処理する。
ＳＷ ４１ Ｔｉローターに配置された１２ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５９）チューブ中で、勾配液を２００，０００×ｇで１６時間、４℃で回転させ、エクソソーム画分を分離する。
次いで、エクソソーム層を上層から穏やかに除去し、３８．５ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５８）チューブ中の約３２．５ｍＬのＰＢＳに希釈し、１３３，９００×ｇで３時間、４℃で再び超遠心分離して、精製エクソソームをペレット化する。得られたペレットを最小体積のＰＢＳ（約２００μＬ）中に再懸濁し、４℃で保存する。
ＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）勾配の場合、ＳＷ ４１ Ｔｉローター用の１２ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５９）チューブ中に、等体積の１０％、３０％、及び４５％ＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）を用いて３層滅菌勾配液を調製する。ペレットをＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）勾配液に加え、２００，０００×ｇで１６時間、４℃で超遠心分離して、エクソソーム画分を分離する。次いで、チューブの上部約３ｍＬからエクソソーム層を穏やかに回収する。
エクソソーム画分を３８．５ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５８）チューブ中の約３２ｍＬのＰＢＳ中に希釈し、１３３，９００×ｇで３時間、４℃で超遠心分離して、精製エクソソームをペレット化する。次いで、ペレット化したエクソソームを最小体積のＰＢＳ（約２００μＬ）中に再懸濁し、使用するまで４℃で保存する。
実施例１９
操作されたエクソソームまたはネイティブエクソソームの効力及びローディング量に対するＡＳＯのリンカー構造の影響
操作されたエクソソームまたはネイティブエクソソームへのＡＳＯローディング量に対するＡＳＯリンカー構造の影響、ＡＳＯ効力に対するＡＳＯリンカー構造の影響を評価した。
異なるリンカーにコンジュゲートされた固定ＡＳＯ配列のローディング有効性を、操作されたエクソソームで評価した。ＰＴＧＦＲＮを過剰発現するエクソソームをＨＥＫ２９３細胞で産生し、精製した。混合することによって、ＡＳＯペイロードをエクソソームの表面上にローディングした。したがって、濃度１×１０１３ Ｐ／ｍＬのエクソソームを、ホタルルシフェラーゼ（ＦＦＬｕｃ）の配列を含む、異なるリンカー構造にコンジュゲートされた１００ｕＭのＡＳＯと１：１で混合した。ローディング効率は、エクソソームとカップリングした出発ＡＳＯに対するパーセンテージとして算出した。図２５は、使用したコンストラクトの構造を示す。Ｃ１～Ｃ９のコンストラクトは、コレステロール－Ｃ６脂質アンカーを使用した。Ｔ１～Ｔ９のコンストラクトは、コレステロール－ＴＥＧ脂質アンカーを使用した。Ｌ１のコンストラクトは、トコフェロール－Ｃ８脂質アンカーを使用したのに対し、Ｌ２及びＬ３のコンストラクトは、トコフェロールパルミチン酸－Ｃ６脂質アンカーを使用した。図２５に示される他のリンカー構成成分は、ホスホジエステル（ＰＯ）、ホスホチオエート（ＰＳ）、ヘキサメチレン（Ｃ６）、トリメチレン（Ｃ３）、トリエチレングリコール（ＴＥＧ）、及びヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）である。この結果により、操作されたエクソソーム１つあたりにローディングされるＡＳＯ分子のマウントは、リンカー構造の影響を受けることが示された（図２５）。一般に、ローディング効率は、コレステロール－ＴＥＧアンカーを含むコンストラクトよりも、コレステロール－Ｃ６アンカーを含むコンストラクトのほうが高かった。最も高いローディング効率である６８．７８％は、トコフェロール－Ｃ８脂質アンカーを含むコンストラクトで観察され、これは、エクソソーム１つあたり４，１６７ＡＳＯ単位のローディングに相当する。
操作されたエクソソームを使用して図２５で評価した異なるリンカーにコンジュゲートされたものと同じ固定ＡＳＯ配列のローディング有効性を、ネイティブエクソソームを使用して評価した。ネイティブエクソソームをＨＥＫ２９３細胞で産生し、精製した。濃度１×１０１３ Ｐ／ｍＬのエクソソームを、ホタルルシフェラーゼの配列を含む、異なるリンカー構造にコンジュゲートされた１００ｕＭのＡＳＯと１：１で混合した。ローディング効率は、エクソソームとカップリングした出発ＡＳＯに対するパーセンテージとして算出した。操作されたエクソソームの場合のように、ネイティブエクソソーム１つあたりにローディングされるＡＳＯ分子の量は、リンカー構造の影響を受けた（図２６）。この場合でも、コレステロール－Ｃ６脂質アンカーを含むコンストラクトは、コレステロール－ＴＥＧ脂質アンカーを含むコンストラクトよりも高いローディング効率を示した。９０％を超えるローディング効率がコンストラクトＣ２及びＣ３（９３．６％及び９０．６７％）で観察され、これは、エクソソーム１つあたりそれぞれ５，６１６ＡＳＯ単位及び５，４４０ＡＳＯ単位に相当する。したがって、エクソソーム１つあたりの最大ローディング効率及びＡＳＯ数は、操作されたエクソソームよりもネイティブエクソソームで有意に高かった。
ネイティブエクソソーム上にローディングしたコンストラクトの活性も評価した。ネイティブエクソソームをＨＥＫ２９３細胞で産生し、精製した。濃度１×１０１３ Ｐ／ｍＬのエクソソームを、ホタルルシフェラーゼの配列を含む、異なるリンカーにコンジュゲートされた１００ｕＭのＡＳＯと１：１で混合した。（図２５及び２６参照）。エクソＡＳＯコンストラクトのｉｎ ｖｉｔｒｏ効力について、ホタル及びウミシイタケルルシフェラーゼを発現するＨ１２９９細胞で評価した。効力は、細胞とのインキュベーション後に残っている発光量によって測定した。Ｔ６（四角囲み）を参照として使用し、Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎで測定した試料あたりのＡＳＯ量に対してデータを正規化した。Ｃ１～Ｃ９コンストラクト（図２７Ａ）及びＴ１～Ｔ９コンストラクト（図２７Ｃ）の効力は、Ｌ１～Ｌ３コンストラクト（図２７Ｂ）よりも高かった。
特許請求の範囲の解釈には、発明の概要及び要約書のセクションではなく、発明を実施するための形態のセクションが使用されることが意図されることは理解されるであろう。発明の概要及び要約書のセクションは、発明者（複数可）によって企図される本開示の１つ以上の例示的な態様を、全てではないが、示すことができ、したがって、本発明及び添付の特許請求の範囲を限定することは決して意図されない。
本開示について、特定の機能の実現及びその関係を例示する機能上の基礎的要素を用いて、上に記載してきた。これらの機能上の基礎的要素の境界は、説明の便宜上、本明細書において任意に定義されたものである。特定の機能及びその関係が適切に実施される限り、別の境界を定義することもできる。
特定の態様の前述の説明は、本開示の全般的な性質を完全に明らかにしたものであるので、当業者の技術範囲内の知識を適用することによって、過度な実験をすることなく、本開示の全般的な概要から逸脱せずに、そのような特定の態様を容易に改変したり、及び／または様々な用途に適合させることができる。したがって、そのような適合及び改変は、本明細書に示される教示及び指針に基づき、開示される態様の等価物の意味及び範囲内にあることが意図される。本明細書の表現または用語は、限定するためではなく、説明を目的にするものであり、本明細書の用語または表現は、本教示及び指針に照らして、当業者によって解釈されるものであることを理解されたい。
本開示の広さ及び範囲は、上記の例示的な態様のいずれかによって限定されるものではなく、以下の特許請求の範囲及びその等価物によってのみ定義されるものである。
本出願全体で引用され得る全ての引用参考文献の内容（文献、特許、特許出願、及びウェブサイトを含む）は、いかなる目的であれ、その全体が参照により本明細書に明示的に援用され、当該文献に引用されている参考文献も同様である。
ＮＬＰＲ３転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を列挙した表を示す。表は、次の情報を含む（左から右へ）：（ｉ）ＡＳＯ配列にのみ対して指定された配列番号、（ｉｉ）ＮＬＰＲ３ゲノム配列（配列番号１）上の標的開始位置及び終了位置、（ｉｉｉ）ＮＬＰＲ３ ｍＲＮＡ配列（配列番号２）上の標的開始位置及び終了位置、（ｉｖ）いかなる特定の設計または化学構造を持たないＡＳＯ配列、ならびに（ｖ）化学構造を含むＡＳＯ配列。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） 本明細書に記載される様々なＳＴＡＴ６ ＡＳＯ配列及びｍＲＮＡ配列におけるそれぞれの相補配列の位置を列挙した表を示す。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） 本明細書に記載される様々なＣＥＢＰ／β ＡＳＯ配列及びｍＲＮＡ配列におけるそれぞれの相補配列の位置を列挙した表を示す。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） 本明細書に記載される様々なＳＴＡＴ３ ＡＳＯ配列及びｍＲＮＡ配列におけるそれぞれの相補配列の位置を列挙した表を示す。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） 本明細書に記載される様々なＮＲａｓ ＡＳＯ配列及びｍＲＮＡ配列におけるそれぞれの相補配列の位置を列挙した表を示す。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） 本明細書に記載される様々なＫＲＡＳ ＡＳＯ配列及びｐｒｅ－ｍＲＮＡ（配列番号３０）またはｍＲＮＡ配列（配列番号３２）におけるそれぞれの相補配列の位置を列挙した表を示す。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造中の記号は、次のとおりである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。 （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） （続き） 単球におけるＩＬ－１β産生のグラフ表示である。ＮＬＲＰ３経路は、それぞれの試料タイプで、ＬＰＳで３時間及びＡＴＰで３時間処理することによって活性化された。次いで、試料は、指定されるように漸増濃度のＭＣＣ９５０（ｌｏｇ μＭ）で処理され、ＩＬ－１βレベルが測定された（ｐｇ／ｍＬ）。 Ｍ０マクロファージにおけるＩＬ－１β産生のグラフ表示である。ＮＬＲＰ３経路は、それぞれの試料タイプで、ＬＰＳで３時間及びＡＴＰで３時間処理することによって活性化された。次いで、試料は、指定されるように漸増濃度のＭＣＣ９５０（ｌｏｇ μＭ）で処理され、ＩＬ－１βレベルが測定された（ｐｇ／ｍＬ）。 マウスＢＭＤＭにおけるＩＬ－１β産生のグラフ表示である。ＮＬＲＰ３経路は、それぞれの試料タイプで、ＬＰＳで３時間及びＡＴＰで３時間処理することによって活性化された。次いで、試料は、指定されるように漸増濃度のＭＣＣ９５０（ｌｏｇ μＭ）で処理され、ＩＬ－１βレベルが測定された（ｐｇ／ｍＬ）。 マウスの腹腔内ＬＰＳ抗原刺激のための投与及び試料採取スケジュールを例示するタイムラインである。 漸増量のＭＣＣ９５０を投与した後のマウス血清における血清ＩＬ－１βレベルのグラフ表示である。 Ａ～Ｄは、蛍光（ＭＦＩ）により検出され、ＰＢＳ対照に正規化したＣｙ５レベルのグラフ表示である。Ｃｙ５は、示されるように、血液（図４Ａ）、肝臓（図４Ｂ）、脾臓（図４Ｃ）、及び腫瘍（ＣＴ２６、図４Ｄ）から単離された様々な細胞種におけるＣｙ５ ＡＳＯ（「エクソＡＳＯ」；左）または遊離ＡＳＯ（右）を含むエクソソームの取り込みのマーカーとして使用される。横線は、平均ＭＦＩを示す。 Ｅ～Ｊは、Ｃｙ５－レポーターＡＳＯ（図４Ｅ～４Ｆ）または遊離ＡＳＯ（図４Ｇ～４Ｈ）を含むエクソソームの取り込みをＰＢＳ陰性対照（図４Ｉ～４Ｊ）と比較して示す、２名のドナーからそれぞれ採取された骨髄組織試料の蛍光画像である。 示されるように、ＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理した後の分極化マクロファージにおける、ＳＴＡＴ６の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理した後の分極化マクロファージにおける、ＣＤ１６３の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理した後の分極化マクロファージにおける、ＳＴＡＴ６の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理した後の分極化マクロファージにおける、ＣＤ１６３の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＴＧＦβ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＣＤ１６３の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＳＴＡＴ５ｂの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＳＴＡＴ６の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＣＥＢＰ／βの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＩＬ１２βの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＡＩＦ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＭＹＣの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＨＬＡ ＤＱＡの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯで処理したまたは処理していない初代ヒトマクロファージにおける、ＣＤ７４（ＭＩＦ）の発現のグラフ表示である。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。処理前のＣＤ４５発現を示す。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。陰性対照による処理後（スクランブルエクソＡＳＯ）のＣＤ４５発現を示す。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。エクソ－ＡＳＯによる処理後のＣＤ４５発現を示す。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。処理前のＣＤ１１ｂ発現を示す。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。陰性対照による処理後（スクランブルエクソＡＳＯ）のＣＤ１１ｂ発現を示す。 ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離するフローサイトメトリーの結果のグラフ表示である。エクソ－ＡＳＯによる処理後のＣＤ１１ｂ発現を示す。 腫瘍体積が、スクランブルエクソ－ＡＳＯ対照で処理したマウスと比べて 、エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯ処理マウス及びエクソ－ＣＥＢＰ／ｐ－ＡＳＯ処理マウスで有意に低く、エクソ－ＳＴＡＴ６－ＡＳＯまたはエクソ－ＣＥＢＰ／β－ＡＳＯで処理したマウスは、ＳＴＡＴ６遊離ＡＳＯで処理したマウスよりも小さい腫瘍を有する傾向があったことを示す。 スクランブルエクソ－ＡＳＯ（図８Ａ～８Ｃ）、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、ＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯ（図８Ｂ）、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ（図８Ｂ～８Ｃ）に曝露した後の非濃縮細胞と比較したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＴ６（図８Ａ）、ＣＥＢＰ／β（図８Ｂ）及びＡＲＧ１（図８Ｃ）の発現のグラフ表示である。 スクランブルエクソ－ＡＳＯ（図８Ａ～８Ｃ）、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、ＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯ（図８Ｂ）、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ（図８Ｂ～８Ｃ）に曝露した後の非濃縮細胞と比較したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＴ６（図８Ａ）、ＣＥＢＰ／β（図８Ｂ）及びＡＲＧ１（図８Ｃ）の発現のグラフ表示である。 スクランブルエクソ－ＡＳＯ（図８Ａ～８Ｃ）、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、ＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯ（図８Ｂ）、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ（図８Ａ及び８Ｃ）、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯ（図８Ｂ～８Ｃ）に曝露した後の非濃縮細胞と比較したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＴ６（図８Ａ）、ＣＥＢＰ／β（図８Ｂ）及びＡＲＧ１（図８Ｃ）の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＴ６の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＥＢＰ／βの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＴＧＦβ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＴ３の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＩＲＰ－αの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＤ４７の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＮＯＳ２の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＡＲＧ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＤ２０６の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＤ２７４（図９Ｊ）の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＮＬＲＰ３の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＳＦ１Ｒの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＣＤ３６（図９Ｍ）の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＳＴＡＢ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＩＬ１３の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＰＩ３ＫＧの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＬＹ６Ｃ（図９Ｑ）の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＬＹ６Ｇの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＩＦＮβ１の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＩＦＮγの発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＩＦＮα１（図９Ｕ）の発現のグラフ表示である。 示されるように、スクランブルエクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６－エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ－６ 遊離ＡＳＯ、またはＣＥＢＰ／β－エクソ－ＡＳＯで処理したＣＤ１１ｂ濃縮細胞における、ＩＬ６Ｒαの発現のグラフ表示である。 示されるように、ＩＬ－１３／ＴＧＦβで処理し、続いてＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理して分極させた初代ヒトＭ２マクロファージにおける、ＳＴＡＴ６の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＩＬ－１３／ＴＧＦβで処理し、続いてＣＥＢＰ／β エクソＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理して分極させた初代ヒトＭ２マクロファージにおける、ＣＥＢＰ／βの正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＩＬ－１３／ＴＧＦβで処理し、続いてＳＴＡＴ６ エクソＡＳＯ、ＳＴＡＴ６ 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理して分極させた初代ヒトＭ２マクロファージにおける、ＴＧＦβ１の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 示されるように、ＩＬ－１３／ＴＧＦβで処理し、続いてＣＥＢＰ／β エクソＡＳＯ、ＣＥＢＰ／β 遊離ＡＳＯ、またはスクランブルエクソＡＳＯ（陰性対照）で処理して分極させた初代ヒトＭ２マクロファージにおける、ＴＧＦβ１の正規化遺伝子発現（％）のグラフ表示である。 ナイーブマウスまたはブレオマイシンで処理して肺線維症を誘発させたマウス（「ｂｌｅｏ」）に陰性対照（－Ｃ）またはエクソ－ＡＳＯ－Ｃｙ５（「ＩＮ」）を鼻腔投与した後の肺ＴＤ２における、Ｃｙ５レベルによって証明されるエクソソーム取り込みのグラフ表示である。 Ａ～Ｈは、正常及び誘発線維性肺組織によるエクソソーム取り込みを検出する蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 正常肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 正常肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 誘発線維性肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 誘発線維性肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 正常肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 正常肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 誘発線維性肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 誘発線維性肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション画像の飽和レベルを示すグラフ表示であり、正常及び線維性組織におけるエクソソームの取り込みのレベルを示している。 Ａ～Ｆは、Ｈｅｐａ１－６マウスの肺組織によるエクソソーム取り込みを検出する蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 Ａ～Ｆは、Ｈｅｐａ１－６マウスの肺組織によるエクソソーム取り込みを検出するｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの画像である。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ＮＲａｓ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ［図１７Ａ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｂ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｃ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｄ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｅ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｆ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ［図１７Ｇ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｈ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｉ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｊ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｋ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｌ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ［図１７Ｍ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。［図１７Ｎ］ＳＴＡＴ３ ＡＳＯを使用した様々なＩＣ５０実験の結果を示す。 ｍＲＮＡ全体の枯渇を示すＳＴＡＴ３ ＡＳＯ実験の結果を表すグラフを示す。 ｍＲＮＡ全体の枯渇を示すＮＲａｓ ＡＳＯ実験の結果を表すグラフを示す。 ＳＴＡＴ３ エクソ－ＡＳＯ及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯを接種した後の腫瘍体積反応曲線を示す。 ＳＴＡＴ３、エクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ、及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ ２Ｘを使用したＳＴＡＴ３遺伝子発現プロファイル反応を示す。 ＰＢＳ、スクランブルエクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ エクソ－ＡＳＯ ＭＯＥ、及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ ＭＯＥに曝露した後の浸潤ＭＤＳＣ／ＣＤ４５（ＣＤ１１ｂＨｉｇｈ Ｆ４０／８０Ｈｉｇｈ／ＣＤ４５）のパーセンテージを示す。 ＰＢＳ、スクランブルエクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ エクソ－ＡＳＯ ＭＯＥ、及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯ ＭＯＥに曝露した後の浸潤ＭＤＳＣ／総ＭＤＳＣ（Ｌｙ６ＧＨｉｇｈ ＣＤ１１ｂＨｉｇｈ／ＩＡ／ＩＥＬｏｗ）のパーセンテージを示す。 ＰＢＳ、スクランブルエクソ－ＡＳＯ、ＳＴＡＴ３ エクソ－ＡＳＯ、及びＳＴＡＴ３ 遊離ＡＳＯで処理した後の正規化ｍＲＮＡカウントを示す。 操作されたエクソソーム１つあたりにローディングされるＡＳＯ分子量がリンカー構造の影響を受けることを示す表である。使用されたコンストラクトの構造も示されている。 ネイティブエクソソーム１つあたりにローディングされるＡＳＯ分子量がリンカー構造の影響を受けることを示す表である。使用されたコンストラクトの構造も示されている。 エクソ－ＡＳＯの効力がＡＳＯリンカー構造の影響を受けることを示す。コンストラクトＣ１～Ｃ９、Ｔ１～Ｔ９及びＬ１～Ｌ３のコンストラクトの構造は、図２５に記載されるものである。Ａは、コレステロール－Ｃ６脂質アンカーを含むコンストラクトの効力を示す。Ｂは、トコフェロール－Ｃ８（Ｌ１）またはパルミチン酸トコフェロール－Ｃ６（Ｌ２及びＬ３）脂質アンカーを含むコンストラクトの効力を示す。Ｃは、コレステロール－ＴＥＧ脂質アンカーを含むコンストラクトの効力を示す。 Ｐｍｐ２２を標的とするＡＳＯ分子の配列を示す表である。 Ｐｍｐ２２を標的とするＡＳＯ分子の追加の配列を示す表である。

Claims (125)

  1. 細胞外小胞（ＥＶ）に、アンカリング部分（ＡＭ）を介して共有結合的に連結された生物学的に活性な分子（ＢＡＭ）を含む、ＥＶであって、ここで、前記アンカリング部分は、
    ［ＡＭ］－［リンカー］ｎ－［ＢＡＭ］ 式（Ｉ）
    （式中、ｎは、任意の数である）を含む、前記ＥＶ。
  2. ｎが、０～１０の間の任意の数である、請求項１に記載の細胞外小胞。
  3. 前記アンカリング部分が、ステロール、ＧＭ１、脂質、ビタミン、小分子、ペプチド、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１または２に記載の細胞外小胞。
  4. 前記アンカリング部分が、少なくとも６個の炭素原子、少なくとも７個の炭素原子、少なくとも８個の炭素原子、少なくとも９個の炭素原子、少なくとも１０個の炭素原子、少なくとも１１個の炭素原子、少なくとも１２個の炭素原子、少なくとも１３個の炭素原子、少なくとも１４個の炭素原子、少なくとも１５個の炭素原子、少なくとも１６個の炭素原子、少なくとも１７個の炭素原子、少なくとも１８個の炭素原子、少なくとも１９個の炭素原子、少なくとも２０個の炭素原子、少なくとも２５個の炭素原子、少なくとも３０個の炭素原子、少なくとも３５個の炭素原子、少なくとも４０個の炭素原子、少なくとも４５個の炭素原子、少なくとも５０個の炭素原子、少なくとも５５個の炭素原子、少なくとも６０個の炭素原子、少なくとも６５個の炭素原子、少なくとも７０個の炭素原子、少なくとも７５個の炭素原子、少なくとも８０個の炭素原子、少なくとも８５個の炭素原子、または少なくとも９０個の炭素原子を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  5. 前記アンカリング部分が、ステロール、ステロイド、ホパノイド、ヒドロキシステロイド、セコステロイド、これらの類似体、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  6. 前記アンカリング部分が、エルゴステロール、７－デヒドロコレステロール、コレステロール、２４Ｓ－ヒドロキシコレステロール、ラノステロール、シクロアルテノール、フコステロール、サリンゴステロール、カンペステロール、β－シトステロール、シトスタノール、コプロスタノール、アベナステロール、スチグマステロール、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  7. 前記アンカリング部分が、
    Figure 2022550248000035
     からなる群から選択される構造を有するコレステロールまたは誘導体である、請求項６に記載の細胞外小胞。
  8. 前記アンカリング部分が、ジヒドロテストステロン、ウバオール、ヘチゲニン、ジオスゲニン、プロゲステロン、コルチゾール、またはこれらの任意の組み合わせである、ステロイドを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  9. 前記アンカリング部分が、脂質を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  10. 前記アンカリング部分が、Ｃ２－Ｃ６０鎖を含む、請求項９に記載の細胞外小胞。
  11. 前記アンカリング部分が、Ｃ４－Ｃ４０、Ｃ２－Ｃ３８、Ｃ２－Ｃ３６、Ｃ２－Ｃ３４、Ｃ２－Ｃ３２、Ｃ２－Ｃ３０、Ｃ４－Ｃ３０、Ｃ２－Ｃ２８、Ｃ４－Ｃ２８、Ｃ２－Ｃ２６、Ｃ４－Ｃ２６、Ｃ２－Ｃ２４、Ｃ４－Ｃ２４、Ｃ６－Ｃ２４、Ｃ８－Ｃ２４、Ｃ１０－Ｃ２４、Ｃ２－Ｃ２２、Ｃ４－Ｃ２２、Ｃ６－Ｃ２２、Ｃ８－Ｃ２２、Ｃ１０－Ｃ２２、Ｃ２－Ｃ２０、Ｃ４－Ｃ２０、Ｃ６－Ｃ２０、Ｃ８－Ｃ２０、Ｃ１０－Ｃ２０、Ｃ２－Ｃ１８、Ｃ４－Ｃ１８、Ｃ６－Ｃ１８、Ｃ８－Ｃ１８、Ｃ１０－Ｃ１８、Ｃ１２－Ｃ１８、Ｃ１４－Ｃ１８、Ｃ１６－Ｃ１８、Ｃ２－Ｃ１６、Ｃ４－Ｃ１６、Ｃ６－Ｃ１６、Ｃ８－Ｃ１６、Ｃ１０－Ｃ１６、Ｃ１２－Ｃ１６、Ｃ１４－Ｃ１６、Ｃ２－Ｃ１５、Ｃ４－Ｃ１５、Ｃ６－Ｃ１５、Ｃ８－Ｃ１５、Ｃ９－Ｃ１５、Ｃ１０－Ｃ１５、Ｃ１１－Ｃ１５、Ｃ１２－Ｃ１５、Ｃ１３－Ｃ１５、Ｃ２－Ｃ１４、Ｃ４－Ｃ１４、Ｃ６－Ｃ１４、Ｃ８－Ｃ１４、Ｃ９－Ｃ１４、Ｃ１０－Ｃ１４、Ｃ１１－Ｃ１４、Ｃ１２－Ｃ１４、Ｃ２－Ｃ１３、Ｃ４－Ｃ１３、Ｃ６－Ｃ１３、Ｃ７－Ｃ１３、Ｃ８－Ｃ１３、Ｃ９－Ｃ１３、Ｃ１０－Ｃ１３、Ｃ１０－Ｃ１３、Ｃ１１－Ｃ１３、Ｃ２－Ｃ１２、Ｃ４－Ｃ１２、Ｃ６－Ｃ１２、Ｃ７－Ｃ１２、Ｃ８－Ｃ１２、Ｃ９－Ｃ１２、Ｃ１０－Ｃ１２、Ｃ２－Ｃ１１、Ｃ４－Ｃ１１、Ｃ６－Ｃ１１、Ｃ７－Ｃ１１、Ｃ８－Ｃ１１、Ｃ９－Ｃ１１、Ｃ２－Ｃ１０、Ｃ４－Ｃ１０、Ｃ２－Ｃ９、Ｃ４－Ｃ９、Ｃ２－Ｃ８、Ｃ２－Ｃ７、Ｃ４－Ｃ７、Ｃ２－Ｃ６、またはＣ４－Ｃ６の鎖を含む、請求項９に記載の細胞外小胞。
  12. 前記アンカリング部分が、直鎖脂肪酸、分枝脂肪酸、不飽和脂肪酸、一価不飽和脂肪酸、多価不飽和脂肪酸、ヒドロキシル脂肪酸、ポリカルボン酸、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項９～１１のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  13. 前記アンカリング部分が、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、ヘキサコサン酸、オクタコサン酸、トリアコンタン酸及びｎ－ドトリアコンタン酸、ならびにプロピオン酸、ｎ－吉草酸、エナント酸、ペラルゴン酸、ヘンデカン酸、トリデカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカン酸、ヘンエイコサン酸、トリコサン酸、ペンタコサン酸、ヘプタコサン酸などの奇数の炭素原子を有するもの、またはこれらの任意の組み合わせである、直鎖脂肪酸を含む、請求項１２に記載の細胞外小胞。
  14. 前記アンカリング部分が、イソ酪酸、イソカプロン酸、イソカプリル酸、イソカプリン酸、イソラウリン酸、１１－メチルドデカン酸、イソミリスチン酸、１３－メチル－テトラデカン酸、イソパルミチン酸、１５－メチル－ヘキサデカン酸、イソステアリン酸、１７－メチルオクタデカン酸、イソアラキン酸、１９－メチル－エイコサン酸、α－エチル－ヘキサン酸、α－ヘキシルデカン酸、α－ヘプチルウンデカン酸、２－デシルテトラデカン酸、２－ウンデシルテトラデカン酸、２－デシルペンタデカン酸、２－ウンデシルペンタデカン酸、ファインオキソコール１８００酸（Ｎｉｓｓａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．の製品）、終端にイソブチル基を持つアンテイソ脂肪酸、例えば、６－メチル－オクタン酸、８－メチル－デカン酸、１０－メチル－ドデカン酸、１２－メチル－テトラデカン酸、１４－メチル－ヘキサデカン酸、１６－メチル－オクタデカン酸、１８－メチル－エイコサン酸、２０－メチル－ドコサン酸、２２－メチル－テトラコサン酸、２４－メチル－ヘキサコサン酸、及び２６－メチルオクタコサン酸、またはこれらの任意の組み合わせである、分枝脂肪酸を含む、請求項１２に記載の細胞外小胞。
  15. 前記アンカリング部分が、４－デセン酸、カプロレイン酸、４－ドデセン酸、５－ドデセン酸、ラウロレイン酸、４－テトラデセン酸、５－テトラデセン酸、９－テトラデセン酸、パルミトレイン酸、６－オクタデセン酸、オレイン酸、９－オクタデセン酸、１１－オクタデセン酸、９－エイコセン酸、ｃｉｓ－１１－エイコセン酸、セトレイン酸、１３－ドコセン酸、１５－テトラコセン酸、１７－ヘキサコセン酸、６，９，１２，１５－ヘキサデカテトラエン酸、リノール酸、リノレン酸、α－エレオステアリン酸、β－エレオステアリン酸、プニカ酸、６，９，１２，１５－オクタデカテトラエン酸、パリナリン酸、５，８，１１，１４－エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７－エイコサペンタエン酸、７，１０，１３，１６，１９－ドコサペンタエン酸、４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエン酸、またはこれらの任意の組み合わせである、不飽和脂肪酸を含む、請求項１２に記載の細胞外小胞。
  16. 前記アンカリング部分が、α－ヒドロキシラウリン酸、α－ヒドロキシミリスチン酸、α－ヒドロキシパルミチン酸、α－ヒドロキシステアリン酸、ω－ヒドロキシラウリン酸、α－ヒドロキシアラキン酸、９－ヒドロキシ－１２－オクタデセン酸、リシノール酸、α－ヒドロキシベヘン酸、９－ヒドロキシ－ｔｒａｎｓ－１０，１２－オクタデカジエン酸、カモレン酸、イプロリン酸、９，１０－ジヒドロキシステアリン酸、１２－ヒドロキシステアリン酸、またはこれらの任意の組み合わせである、ヒドロキシ脂肪酸を含む、請求項１２に記載の細胞外小胞。
  17. 前記アンカリング部分が、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、Ｄ，Ｌ－リンゴ酸、またはこれらの任意の組み合わせである、ポリカルボン酸を含む、請求項１２に記載の細胞外小胞。
  18. 前記アンカリング部分が、リン脂質を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  19. 前記リン脂質が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２リゾホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１８に記載の細胞外小胞。
  20. 前記リン脂質が、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、１－パルミトイル－２－オレイルホスファチジルエタノールアミン、１－オレイル－２－パルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジエルコイルホスファチジルエタノールアミン、またはこれらの任意の組み合わせである、ホスファチジルエタノールアミンである、請求項１８に記載の細胞外小胞。
  21. 前記リン脂質が、ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルグリセロール、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジルグリセロール、ジエルコイルホスファチジルグリセロール、またはこれらの任意の組み合わせである、ホスファチジルグリセロールである、請求項１８に記載の細胞外小胞。
  22. 前記リン脂質が、ジラウロイルホスファチジルセリン、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルセリン、ジオレオイルホスファチジルセリン、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルセリン、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジルセリン、ジエルコイルホスファチジルセリン、またはこれらの任意の組み合わせである、ホスファチジルセリンである、請求項１８に記載の細胞外小胞。
  23. 前記リン脂質が、ジラウロイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジステアロイルホスファチジン酸、ジオレオイルホスファチジン酸、１－パルミトイル－２－オレイルホスファチジン酸、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジン酸、ジエルコイルホスファチジン酸、またはこれらの任意の組み合わせである、ホスファチジン酸である、請求項１８に記載の細胞外小胞。
  24. 前記リン脂質が、ジラウロイルホスファチジルイノシトール、ジミリストイルホスファチジルイノシトール、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール、ジステアロイルホスファチジルイノシトール、ジオレオイルホスファチジルイノシトール、１－パルミトイル－２－オレイル－ホスファチジルイノシトール、１－オレイル－２－パルミトイル－ホスファチジルイノシトール、ジエルコイルホスファチジルイノシトール、またはこれらの任意の組み合わせである、ホスファチジルイノシトールである、請求項１８に記載の細胞外小胞。
  25. 前記リン脂質が、１，２ ジプロピオニル ｓｎ－グリセロ ３ ホスホコリン（０３：０ ＰＣ）；１，２ ジブチリル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０４：０ ＰＣ）；１，２ ジペンタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０５：０ ＰＣ）；１，２ ジヘキサノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０６：０ ＰＣ）、１，２ ジヘプタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０７：０ ＰＣ）；１，２ ジオクタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０８：０ ＰＣ）；１，２ ジノナノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０９：０ ＰＣ）；１，２ ジデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１０：０ ＰＣ）；１，２ ジウンデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１１：０ ＰＣ、ＤＵＰＣ）；１，２ ジラウロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１２：０ ＰＣ）；１，２ ジトリデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１３：０ ＰＣ）；１，２ ジミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０ ＰＣ、ＤＭＰＣ）；１，２ ジペンタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１５：０ ＰＣ）；１，２ ジパルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０ ＰＣ、ＤＰＰＣ）；１，２ ジフィタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（４ＭＥ １６：０ ＰＣ）；１，２ ジヘプタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１７：０ ＰＣ）；１，２ ジステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０ ＰＣ、ＤＳＰＣ）；１，２ ジノナデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１９：０ ＰＣ）；１，２ ジアラキドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：０ ＰＣ）；１，２ ジヘナラキドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２１：０ ＰＣ）；１，２ ジベヘノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：０ ＰＣ）；１，２ ジトリコサノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２３：０ ＰＣ）；１，２ ジリグノセロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２４：０ ＰＣ）；１，２ ジミリストレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジミリステライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）；１，２ ジパルミトレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジパルミテライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）；１，２ ジペトロセレノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１（Δ６－Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジオレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＯＰＣ）；１，２ ジエライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＣ）；１，２ ジリノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：２（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＬＰＣ）；１，２ ジリノレノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：３（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＬｎＰＣ）；１，２ ジエイコセノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジアラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：４（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＡＰＣ）；１，２ ジエルコイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：６（Ｃｉｓ）ＰＣ、ＤＨＡＰＣ）；１，２ ジネルボノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２４：１（Ｃｉｓ）ＰＣ）；１，２ ジヘキサノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（０６：０ ＰＥ）；１，２ ジオクタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（０８：０ ＰＥ）；１，２ ジデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１０：０ ＰＥ）；１，２ ジラウロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１２：０ ＰＥ）、１，２ ジミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１４：０ ＰＥ）；１，２ ジペンタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１５：０ ＰＥ）；１，２ ジパルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０ ＰＥ）；１，２ ジフィタノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（４ＭＥ １６：０ ＰＥ）；１，２ ジヘプタデカノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１７：０ ＰＥ）；１，２ ジステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０ ＰＥ、ＤＳＰＥ）；１，２ ジパルミトレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：１ ＰＥ）；１，２ ジオレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：１（Δ９－Ｃｉｓ）ＰＥ、ＤＯＰＥ）；１，２ ジエライドイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：１（Δ９－Ｔｒａｎｓ）ＰＥ）；１，２ ジリノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：２ ＰＥ、ＤＬＰＥ）；１，２ ジリノレノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：３ ＰＥ、ＤＬｎＰＥ）；１，２ ジアラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（２０：４ ＰＥ、ＤＡＰＥ）；１，２ ジドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（２２：６ ＰＥ、ＤＨＡＰＥ）；１，２ ジ Ｏ オクタデセニル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０ ジエーテル ＰＣ）；１，２ ジオレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホ ｒａｃ（１ グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、またはこれらの任意の組み合わせである、対称リン脂質である、請求項１８に記載の細胞外小胞。
  26. 前記リン脂質が、１ ミリストイル ２ パルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０－１６：０ ＰＣ、ＭＰＰＣ）；１ ミリストイル ２ ステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０－１８：０ ＰＣ、ＭＳＰＣ）；１ パルミトイル ２ アセチル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－０２：０ ＰＣ）；１ パルミトイル ２ ミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１４：０ ＰＣ、ＰＭＰＣ）；１ パルミトイル ２ ステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１８：０ ＰＣ、ＰＳＰＣ）；１ パルミトイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１８：１ ＰＣ、ＰＯＰＣ）；１ パルミトイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－１８：２ ＰＣ、ＰＬＰＣ）；１ パルミトイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０－２０：４ ＰＣ）；１ パルミトイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０－２２：６ ＰＣ）；１ ステアロイル ２ ミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１４：０ ＰＣ、ＳＭＰＣ）；１ ステアロイル ２ パルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１６：０ ＰＣ、ＳＰＰＣ）；１ ステアロイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１８：１ ＰＣ、ＳＯＰＣ）；１ ステアロイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－１８：２ ＰＣ）；１ ステアロイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－２０：４ ＰＣ）；１ ステアロイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０－２２：６ ＰＣ）；１ オレオイル ２ ミリストイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１－１４：０ ＰＣ、ＯＭＰＣ）；１ オレオイル ２ パルミトイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１－１６：０ ＰＣ、ＯＰＰＣ）；１ オレオイル ２ ステアロイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１－１８：０ ＰＣ、ＯＳＰＣ）；１ パルミトイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－１８：１ ＰＥ、ＰＯＰＥ）；１ パルミトイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－１８：２ ＰＥ）；１ パルミトイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－２０：４ ＰＥ）；１ パルミトイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０－２２：６ ＰＥ）；１ ステアロイル ２ オレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－１８：１ ＰＥ）；１ ステアロイル ２ リノレオイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－１８：２ ＰＥ）；１ ステアロイル ２ アラキドノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－２０：４ ＰＥ）；１ ステアロイル ２ ドコサヘキサエノイル ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０－２２：６ ＰＥ）；１ オレオイル ２ コレステリルヘミサクシニル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、またはこれらの任意の組み合わせである、非対称リン脂質である、請求項１８に記載の細胞外小胞。
  27. 前記リン脂質が、リゾ脂質である、請求項８に記載の細胞外小胞。
  28. 前記リン脂質が、リゾグリセロリン脂質、リゾグリコスフィンゴリオピド、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルセリン、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項２７に記載の細胞外小胞。
  29. 前記リン脂質が、１ ヘキサノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ヘプタノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０７：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ オクタノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０８：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ノナノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（０９：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ デカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１０：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ウンデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１１：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ラウロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１２：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ トリデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１３：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ミリストイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１４：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ペンタデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１５：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ パルミトイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ヘプタデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１７：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ステアロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ オレオイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１８：１ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ノナデカノイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（１９：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ アラキドイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２０：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ベヘノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２２：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ リグノセロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２４：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ヘキサコサノイル２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（２６：０ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；１ ミリストイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１４：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）；１ パルミトイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１６：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）；１ ステアロイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：０ Ｌｙｓｏ ＰＥ）；１ オレオイル ２ ヒドロキシ ｓｎ グリセロ ３ ホスホエタノールアミン（１８：１ Ｌｙｓｏ ＰＥ）；１ ヘキサデシル ｓｎ グリセロ ３ ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）；またはこれらの任意の組み合わせである、請求項２７に記載の細胞外小胞。
  30. 前記アンカリング部分が、ビタミンを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  31. 前記アンカリング部分が、ビタミンＤ、ビタミンＫ、ビタミンＥ、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  32. 前記アンカリング部分が、前記生物学的に活性な分子と前記アンカリング部分との間にリンカーを更に含む、請求項１～３１のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  33. 前記リンカーが、切断不可能なリンカーを含む、請求項３２に記載の細胞外小胞。
  34. 前記切断不可能なリンカーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、グリセロール、アルキル、スクシンイミド、マレイミド、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項３３に記載の細胞外小胞。
  35. 前記切断不可能なリンカーが、式Ｒ３－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－またはＲ３－（０－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－Ｏ－（式中、Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルであり、ｎは、２～２００の間の整数である）を特徴とするポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、請求項３３に記載の細胞外小胞。
  36. 前記切断不可能なリンカーが、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）、ペンタエチレングリコール、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項３３に記載の細胞外小胞。
  37. 前記リンカーが、式（（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＨ－ＣＨ２Ｏ）ｎ－）であって、式中、Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルであり、ｎは、３～２００の間の整数である式を有するポリグリセロール（ＰＧ）を含む、請求項３２～３４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  38. 前記リンカーが、ジグリセロール、トリグリセロール、テトラグリセロール（ＴＧ）、ペンタグリセロール、ヘキサグリセロール（ＨＧ）、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項３２～３４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  39. 前記リンカーが、アルキルを含む、請求項３２～３４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  40. 前記リンカーが、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルアリールアルキル、アルキルアリールアルケニル、アルキルアリールアルキニル、アルケニルアリールアルキル、アルケニルレイルアルケニル、アルケニルアリールアルキニル、アルキニルアリールアルキル、アルキニルアリールアルケニル、アルキニルアリールアルキニル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルケニル、アルキルヘテロアリールアルキニル、アルケニルヘテロアリールアルキル、アルケニルヘテロアリールアルケニル、アルケニルヘテロアリールアルキニル、アルキニルヘテロアリールアルキル、アルキニルヘテロアリールアルケニル、アルキニルヘテロアリールアルキニル、アルキルヘテロシクリルアルキル、アルキルヘテロシクリルアルケニル、アルキルヘテロシクリルアルキニル、アルケニルヘテロシクリルアルキル、アルケニルヘテロシクリルアルケニル、アルケニルヘテロシクリルアルキニル、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項３２～３４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  41. 前記リンカーが、切断可能なリンカーを含む、請求項３２に記載の細胞外小胞。
  42. 前記切断可能なリンカーが、酸化還元切断可能リンカー、活性酸素切断可能リンカー、ｐＨ依存性切断可能リンカー、酵素切断可能リンカー、プロテアーゼ切断可能リンカー、エステラーゼ切断可能リンカー、ホスファターゼ切断可能リンカー、光活性化切断可能リンカー、自己崩壊性リンカー、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項４１に記載の細胞外小胞。
  43. 前記切断可能なリンカーが、自己崩壊性リンカーである、請求項４１に記載の細胞外小胞。
  44. 前記切断可能なリンカーが、シンナミル基、ナフチル基、ビフェニル基、複素環式環、ホモ芳香族基、クマリン、フラン、チオフェン、チアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピロール、ピラゾール、ピリジン、イミダゾン、トリアゾール、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項４１に記載の細胞外小胞。
  45. 前記リンカーが、式：
    －Ａａ－Ｙｙ－
    （式中、各－Ａ－は、独立してアミノ酸単位であり、ａは独立して１～１２の整数であり、－Ｙ－はスペーサー単位であり、ｙは０、１、または２である）を有する、請求項４１～４４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  46. －Ａａ－が、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、またはヘキサペプチドである、請求項４５に記載の細胞外小胞。
  47. ａが２であり、－Ａａ－がバリン－アラニン、バリン－シトルリン、フェニルアラニン－リシン、Ｎ－メチルバリン－シトルリン、シクロヘキシルアラニン－リシン、及びベータ－アラニン－リシンからなる群から選択される、請求項４６に記載の細胞外小胞。
  48. 前記－Ａａ－が、バリン－アラニンまたはバリン－シトルリンである、請求項４６に記載の細胞外小胞。
  49. ｙが１である、請求項４５～４８のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  50. －Ｙ－が、自己崩壊性スペーサーである、請求項４５～４９のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  51. －Ｙｙ－が、式（Ｖ）：
    Figure 2022550248000036
     （式中、各Ｒ２は、独立して、Ｃ１－８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－８アルキル）、ハロゲン、ニトロ、またはシアノであり、ｍは、０～４の整数である）を有する、請求項５０に記載の細胞外小胞。
  52. ｍが、０、１、または２である、請求項５１に記載の細胞外小胞。
  53. ｍが０である、請求項５１に記載の細胞外小胞。
  54. 前記切断可能なリンカーが、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメートまたはバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートである、請求項４５～５３のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  55. －Ｙ－が、非自己崩壊性スペーサーである、請求項４５～４９のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  56. 前記非自己崩壊性スペーサーが、－Ｇｌｙ－または－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－である、請求項５５に記載の細胞外小胞。
  57. 前記アンカリング部分が、以下を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
    Figure 2022550248000037
  58. （ｉ）配列番号３０１～３３４及び４０１～５６７からなる群から選択されるアンカリング部分と、（ｉｉ）表１または表２のリンカー組み合わせから選択されるリンカーと、を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  59. 前記アンカリング部分が、スカフォールドタンパク質を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  60. スカフォールド部分を更に含む、請求項１～５９のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  61. 前記アンカリング部分及び／または前記スカフォールド部分が、スカフォールドＸである、請求項５９または６０に記載の細胞外小胞。
  62. 前記スカフォールドＸが、プロスタグランジンＦ２受容体の負の調節因子（ＰＴＧＦＲＮタンパク質）；ベイシジン（ＢＳＧタンパク質）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（ＩＧＳＦ２タンパク質）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩＧＳＦ３タンパク質）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩＧＳＦ８タンパク質）；インテグリンベータ－１（ＩＴＧＢ１タンパク質）；インテグリンアルファ－４（ＩＴＧＡ４タンパク質）；４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（ＳＬＣ３Ａ２タンパク質）；ＡＴＰ輸送タンパク質のクラス（ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ１Ａ２、ＡＴＰ１Ａ３、ＡＴＰ１Ａ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＡＴＰ２Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質）；その機能性断片；及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項６１に記載の細胞外小胞。
  63. 前記スカフォールドＸが、ＰＴＧＦＲＮタンパク質またはその機能性断片である、請求項６１に記載の細胞外小胞。
  64. 前記スカフォールドＸが、配列番号３０２に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項６１に記載の細胞外小胞。
  65. 前記スカフォールドＸが、配列番号３０２に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項６１に記載の細胞外小胞。
  66. 前記アンカリング部分及び／または前記スカフォールド部分が、スカフォールドＹである、請求項５９または６０に記載の細胞外小胞。
  67. 前記スカフォールドＹが、前記生物学的に活性な分子を前記細胞外小胞の内腔表面上及び／または前記細胞外小胞の外表面上に係留することが可能なスカフォールドタンパク質である、請求項６６に記載の細胞外小胞。
  68. 前記スカフォールドＹが、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（ＭＡＲＣＫＳタンパク質）、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質）、脳酸可溶性タンパク質１（ＢＡＳＰ１タンパク質）、その機能性断片、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項６６または６７に記載の細胞外小胞。
  69. 前記スカフォールドＹが、ＢＡＳＰ１タンパク質またはその機能性断片である、請求項６６～６８のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  70. 前記スカフォールドＹが、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、前記ＮＤ及び／または前記ＥＤは、前記ＥＶの内腔表面に会合する、請求項６６～６９のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  71. 前記ＮＤが、ミリストイル化を介して、前記エクソソームの前記内腔表面に会合する、請求項７０に記載の細胞外小胞。
  72. 前記ＥＤが、イオン相互作用によって、前記エクソソームの前記内腔表面に会合する、請求項７０または７１に記載の細胞外小胞。
  73. 前記ＥＤが、配列中に（ｉ）１つの塩基性アミノ酸または（ｉｉ）２つ以上の塩基性アミノ酸を含み、前記塩基性アミノ酸は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項７０～７２のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  74. 前記塩基性アミノ酸が（Ｌｙｓ）ｎであり、式中、ｎは、１～１０の間の整数である、請求項７３に記載の細胞外小胞。
  75. 前記ＥＤが、Ｌｙｓ（Ｋ）、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号４０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号４０６）、Ａｒｇ（Ｒ）、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号４０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号４０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号ＸＸ）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号ＸＸ）、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項７０～７４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  76. 前記ＮＤが、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６に記載されるアミノ酸配列を含み、ここで、ＧはＧｌｙを表し、「：」はペプチド結合を表し、Ｘ２～Ｘ６のそれぞれは独立してアミノ酸を表し、Ｘ６は塩基性アミノ酸を表す、請求項７０～７５のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  77. （ｉ）Ｘ２が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択され、
    （ｉｉ）Ｘ４が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ及びＭｅｔからなる群から選択され、
    （ｉｉｉ）Ｘ５が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択され、
    （ｉｖ）Ｘ６が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択され、または
    （ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組み合わせである、
    請求項７６に記載の細胞外小胞。
  78. 前記ＮＤが、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６のアミノ酸配列を含み、
    （ｉ）Ｇは、Ｇｌｙを表し、
    （ｉｉ）「：」は、ペプチド結合を表し、
    （ｉｉｉ）Ｘ２は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり、
    （ｉｖ）Ｘ３は、アミノ酸であり、
    （ｖ）Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸であり、
    （ｖｉ）Ｘ５は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり、
    （ｖｉｉ）Ｘ６は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸である、
    請求項７０～７７のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  79. 前記Ｘ３が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択される、請求項７６～７８のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  80. 前記ＮＤ及び前記ＥＤが、リンカーによって接続される、請求項７０～７９のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  81. 前記リンカーが、１つ以上のアミノ酸を含む、請求項８０に記載の細胞外小胞。
  82. 前記ＮＤが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号４１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号４１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号４１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号４１４）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫ（配列番号４１５）、または（ｖｉ）これらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７０～８１のいずれか１項に記載の方法。
  83. 前記ＮＤが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号４３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号４３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号４４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号４４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号４４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号４４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号４４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号４４５）、及び（ｉｘ）これらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８２に記載の細胞外小胞。
  84. 前記ＮＤが、アミノ酸配列ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号４１１）を含む、請求項７０～８３のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  85. 前記スカフォールドＹが、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１２０、少なくとも約１３０、少なくとも約１４０、少なくとも約１５０、少なくとも約１６０、少なくとも約１７０、少なくとも約１８０、少なくとも約１９０、または少なくとも約２００のアミノ酸長である、請求項７０～８４のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  86. 前記スカフォールドＹが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号４５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号４５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号４５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号４５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４５６）を含む、請求項７０～８５のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  87. 前記スカフォールドＹが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号４４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号４５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号４５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号４５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号４５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号４５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号４５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号４５６）からなる、請求項７０～８５のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  88. 前記スカフォールドＹが、Ｎ末端にＭｅｔを含まない、請求項７０～８７のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  89. 前記スカフォールドＹが、前記スカフォールドタンパク質のＮ末端に、ミリストイル化アミノ酸残基を含む、請求項７０～８８のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  90. 前記スカフォールドＹの前記Ｎ末端の前記アミノ酸残基がＧｌｙである、請求項８９に記載の細胞外小胞。
  91. 前記生物学的に活性な分子が、前記ＥＶの前記外表面上の前記アンカリング部分及び／または前記スカフォールド部分に連結される、請求項１～９０のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  92. 前記生物学的に活性な分子が、前記ＥＶの前記内腔表面上の前記アンカリング部分及び／または前記スカフォールド部分に連結される、請求項１～９０のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  93. 前記生物学的に活性な分子が、ポリペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド（ＤＮＡ及び／またはＲＮＡ）、化合物、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項１～９２のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  94. 前記生物学的に活性な分子が化合物である、請求項９３に記載の細胞外小胞。
  95. 前記化合物が小分子である、請求項９４に記載の細胞外小胞。
  96. 前記生物学的に活性な分子が、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、核酸、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～９５のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  97. 前記生物学的に活性な分子が、ペプチド、タンパク質、抗体もしくはその抗原結合断片、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～９６のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  98. 前記その抗原結合断片が、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、及びＦｄ断片、ダイアボディ、抗体関連ポリペプチド、または任意のその断片を含む、請求項９７に記載の細胞外小胞。
  99. 前記生物学的に活性な分子がＡＳＯを含む、請求項９６に記載の細胞外小胞。
  100. 前記ＡＳＯが転写物を標的とする、請求項９９に記載の細胞外小胞。
  101. 前記転写物が、ＳＴＡＴ６転写物、ＣＥＢＰ／β転写物、ＳＴＡＴ３転写物、ＫＲＡＳ転写物、ＮＲＡＳ転写物、ＮＬＰＲ３転写物、ＰＭＰ２２転写物、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項１００に記載の細胞外小胞。
  102. 前記ＳＴＡＴ６転写物が配列番号１３を含む、請求項１０１に記載の細胞外小胞。
  103. 前記ＡＳＯが、配列番号６０１～配列番号７０３からなる群から選択される配列を含む、請求項１０２に記載の細胞外小胞。
  104. 前記ＣＥＢＰ／β転写物が配列番号２３を含む、請求項１０１に記載の細胞外小胞。
  105. 前記ＡＳＯが、配列番号７０４～配列番号８０６からなる群から選択される配列を含む、請求項１０４に記載の細胞外小胞。
  106. 前記ＳＴＡＴ３転写物が配列番号４３を含む、請求項１０１に記載の細胞外小胞。
  107. 前記ＡＳＯが、配列番号８８９～配列番号９８８からなる群から選択される配列を含む、請求項１０６に記載の細胞外小胞。
  108. 前記ＮＲＡＳ転写物が配列番号５３を含む、請求項１０１に記載の細胞外小胞。
  109. 前記ＡＳＯが、配列番号９８９～配列番号１０８８からなる群から選択される配列を含む、請求項１０８に記載の細胞外小胞。
  110. 前記ＮＬＰＲ３転写物が配列番号３を含む、請求項１０１に記載の細胞外小胞。
  111. 前記ＡＳＯが、配列番号１０１～配列番号２００からなる群から選択される配列を含む、請求項１１０に記載の細胞外小胞。
  112. 前記ＫＲＡＳ転写物がＫＲＡＳ変異転写物である、請求項１０１に記載の細胞外小胞。
  113. 前記ＫＲＡＳ変異体がＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄである、請求項１０１に記載の細胞外小胞。
  114. 前記ＫＲＡＳ転写物が配列番号３２を含む、請求項１１２に記載の細胞外小胞。
  115. 前記ＡＳＯが、配列番号８０７～配列番号８８８からなる群から選択される配列を含む、請求項１１４に記載の細胞外小胞。
  116. 前記ＰＭＰ２２転写物が配列番号５８を含む、請求項１０１に記載の細胞外小胞。
  117. 前記ＡＳＯが、配列番号６２～９５及び２０１～２７０からなる群から選択される配列を含む、請求項１１６に記載の細胞外小胞。
  118. 前記ＥＶがエクソソームである、請求項１～１１７のいずれか１項に記載の細胞外小胞。
  119. 請求項１～１１８のいずれか１項に記載の細胞外小胞及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  120. 生物学的に活性な分子をＥＶにコンジュゲートする方法であって、アンカリング部分を前記ＥＶに連結することを含む、前記方法。
  121. 請求項１～１１８のいずれか１項に記載のＥＶ及び使用説明書を含む、キット。
  122. 生物学的に活性な分子をＥＶにコンジュゲートするための試薬、及び前記コンジュゲーションを実施するための説明書を含み、これにより、請求項１～１１８のいずれか１項に記載のＥＶを作製する、キット。
  123. 疾患または障害を治療または予防することを、それを必要とする対象において行う方法であって、請求項１～１１８のいずれか１項に記載のＥＶを前記対象に投与することを含む、前記方法。
  124. 前記疾患または障害が、がん、炎症性障害、神経変性障害、中枢神経障害、または代謝疾患である、請求項１２１に記載の方法。
  125. 前記ＥＶが、静脈内、腹腔内、経鼻、経口、筋肉内、皮下、非経口、または腫瘍内投与される、請求項１２１または１２２に記載の方法。
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