JP2022547692A

JP2022547692A - 免疫複合体介在性腎臓障害の処置のための組み換えＩｇＧＦｃ多量体

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Publication number: JP2022547692A
Application number: JP2022516034A
Authority: JP
Inventors: ヘレン・ヂィフィ・ツァオ; ロルフ・シュピリグ; アードリアン・チュルヒャー; アドリアーナ・バズ・モレリィ
Original assignee: ツェー・エス・エル・ベーリング・レングナウ・アクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 2019-09-13
Filing date: 2020-09-11
Publication date: 2022-11-15
Also published as: AU2020344164A1; CN114401985A; US20220332847A1; CA3150680A1; EP4028415A1; WO2021048330A1; BR112022003713A2; KR20220062084A

Abstract

本発明は、免疫複合体介在性腎臓障害の処置のための組み換えＩｇＧＦｃ多量体の使用、及び上記多量体を投与することにより免疫複合体介在性腎臓障害を処置する方法に関する。

Description

発明の分野
本開示は、免疫複合体介在性腎臓傷害の処置のための組み換えＩｇＧＦｃ多量体の使用、及び上記多量体を投与することにより免疫複合体介在性腎臓障害を処置する方法を提供する。

背景
血漿由来免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）は、原発性及び続発性免疫不全症を処置するために診療所において使用される。この場合、ＩｇＧは静脈内（ＩＶＩＧ）又は皮下（ＳＣＩＧ）のいずれかに投与される。両方とも１０，０００より多くのドナーの大きな血漿プールから製造され、多様な抗体レパートリーを確実にする。

高用量のＩＶＩＧ又はＳＣＩＧ（１～２ｇ／ｋｇ／用量）の投与は、免疫血小板減少症（ＩＴＰ）、ギラン・バレー症候群、川崎病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、重症筋無力症（ＭＧ）、及びいくつかの他の希少疾患のような慢性又は急性の自己免疫及び炎症性疾患を有する患者の処置のためにますます使用されてきた。さらに、いくつかの他の適応症のためのＩＶＩＧ又はＳＣＩＧの適応外の使用は、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）の処置のためのように現在調査中である。

多数の作用機序が、高用量ＩＶＩＧ／ＳＣＩＧの抗炎症性効果について提案された。これらとしては、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）の遮断、自己抗体クリアランスを増強する新生児ＦｃＲ（ＦｃＲｎ）の飽和、阻害性ＦｃγＲＩＩＢの上方調節（ＣＤ３２Ｂ）、補体タンパク質断片の除去及び補体断片沈着の阻害、ＩＶＩＧ／ＳＣＩＧにおける抗イディオタイプ抗体（Ａｂ）、免疫メディエーター（例えば、サイトカイン）の結合もしくは中和、又は免疫細胞の調節（例えば、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞もしくは免疫寛容原性樹状細胞の誘導）が挙げられる。

免疫複合体介在性腎臓障害のための効果的かつ安全な治療が必要である。これらの障害には、腎臓又は腎臓形構造の炎症が介在する。それらとしては、とりわけ、腎炎、糸球体腎炎、間質性腎炎、抗糸球体基底膜（抗ＧＢＭ）糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、自己免疫腎臓疾患、ループス腎炎、膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、及びブライト病が挙げられる。

抗ＧＢＭ抗体は、糸球体基底膜に沿ったこれらの抗体の沈着を特徴とする生命を脅かす腎疾患であるグッドパスチャー症候群の発症において本質的な役割を果たす（非特許文献１）。これらの沈着は、半月体形成、瘢痕及び腎機能の喪失をもたらす。

様々な組み換えＦｃベースの治療剤が開発中であり、これにはＦｃ融合及び多量体タンパク質が含まれ、これらは関節炎、ＩＴＰ及び炎症性ニューロパチーの実験的動物モデルにおいて有効性を示した（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７）。

複数のＦｃドメインを含む有望なＩＶＩＧ置換タンパク質が、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４又は特許文献５に記載される。複数のＦｃフラグメントを有する構築物の多様な異なる構成が想定されるが、開示されるこのような構築物の主要なクラスはいわゆるストラドマー（ｓｔｒａｄｏｍｅｒｓ）であり、これらはＩｇＧ２ヒンジ領域のような多量体化ドメインを有するＦｃフラグメントを含む。しかし、特許文献１において想定される多量体タンパク質の有効性に関する実施例は提供されていない。

Ｓｕｎらは、補体依存性疾患の処置における特定のストラドマーの使用を記載する（非特許文献８）。詳細には、Ｓｕｎらは、２つの組み換えＦｃ多量体（ストラドマーＧＬ－２０４５から開発された）の試験を記載し、これらは、ＦｃγＲと低い／中程度の親和性で相互作用するが、Ｃ１ｑについては高い親和性で相互作用する限られた能力を有するように改変されている。これらの化合物は、連続した高度に組織化されたＦｃ多量体から構成されることがわかった。著者らは、ＧＬ－２０４５と同様に、これらの薬物がＣ１ｑシンクとして作用することにより機能したと結論づけた。Ｚｕｅｒｃｈｅｒらは、ＧＬ－２０４５が、ヒトＩｇＧ１ＦｃにヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を融合させることにより設計されているので、これによりＩｇＧ１Ｆｃフラグメントが連続的に重合して様々な長さ又は多量体化の程度のＦｃ多量体の不均一なプールを生じ、本質的にラダーを形成することを可能にすると考察する（非特許文献９）。

本発明において有用であるかもしれない多量体化ドメインを有する他のＦｃ多量体構築物としては、ＩｇＭ尾部がＩｇＧＦｃフラグメントを多量体化するために使用される六量体構築物が挙げられる。例えば、特許文献６は、切断型ヒンジ領域を有するＩｇＧ１Ｆｃ領域、ＦｃのＣ末端における４アミノ酸リンカー、及びＩｇＭ尾部を含むＦｃ多量体構築物を開示し、これは多量体化して主に六量体構造となる。Ｆｃ残基３０９及び３１０における変異（Ｌ３０９Ｃ及びＨ３１０Ｌ）は、ＩｇＭの配列を模倣するために導入された。

特許文献７及び特許文献８は、５アミノ酸ヒンジ領域、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、又はＩｇＧ１とＩｇＧ４ＣＨ２及びＣＨ３ドメインとのハイブリッド由来のＦｃ領域、並びにＩｇＭ又はＩｇＡ尾部を含むいくつかのＦｃ多量体構築物を開示する。これらの開示は、融合ペプチドのＦｃ領域においてアミノ酸変化を導入することによりＩｇＧＦｃ多量体の安全性及び有効性を改善する事に関する。

最適化された六量体Ｆｃ－μＴＰ構築物が特許文献９に開示されており、これらは以前に記載されたものよりもインビボ、エクスビボ、及びインビトロでいくつかの利点を有することが示された。Ｆｃ－μＴＰ－及びＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ－結合Ｃ１ｑは、補体タンパク質Ｃ２の切断を誘導せず、従ってＣ３コンバターゼが形成されなかった（Ｃ４ｂ２ａ）。Ｆｃ－μＴＰ及びＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃは、完全古典的補体経路の活性化を選択的に阻害し；代替経路との干渉は全く観察されなかった。

他のＦｃ多量体が特許文献１０、特許文献１１及び特許文献１２において開示された。これらのＦｃ多量体は、多量体化ドメインを使用せずに構築された複数のＦｃ単量体を含む。代わりに、２つ又はそれ以上のＦｃポリペプチドが、例えば可動性ペプチドリンカーを介して線状配置で融合され、そしてさらなるＦｃポリペプチドと同時発現され得；Ｆｃ単量体の構築は選択性モジュール（例えば、ノブ－イン－ホール又は静電変異）の使用により方向づけられ、これにより特定のＦｃポリペプチドのみが組み合わされ得ることになる。

ＷＯ２００８／１５１０８８ＷＯ２０１２／０１６０７３ＷＯ２０１３／１１２９８６ＷＯ２０１７／２１４３２１ＷＯ２０１７／０１９５６５ＷＯ２０１４／０６０７１２ＷＯ２０１５／１３２３６４ＷＯ２０１５／１３２３６５ＷＯ２０１７／１２９７３７ＷＯ２０１５／１６８６４３ＷＯ２０１７／２０５４３６ＷＯ２０１７／２０５４３４

Ｏｔｔｅｎｅｔａｌ．、ＪＩｍｍｕｎｏｌ２００９；１８３：３９８０－３９８８Ａｎｔｈｏｎｙｅｔａｌ．、２００８、Ｓｃｉｅｎｃｅ３２０、３７３－３７６Ｃｚａｊｋｏｗｓｋｙｅｔａｌ．、２０１５、Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．５、９５２６Ｊａｉｎｅｔａｌ．、２０１２、ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｅｓ．１４、Ｒ１９２Ｌｉｎｅｔａｌ．、２００７、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１８６、１３３－１４０Ｎｉｋｎａｍｉｅｔａｌ．、２０１３、Ｊ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒ．Ｎｅｒｖ．Ｓｙｓｔ．１８、１４１－１５２Ｔｈｉｒｕｐｐａｔｈｉｅｔａｌ．、２０１４、Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．５２、６４－７３Ｓｕｎｅｔａｌ．、ＪＡｕｔｏｉｍｍｕｎ２０１７；８４：９７－１０８Ｚｕｅｒｃｈｅｒｅｔａｌ．、ＡｕｔｏｉｍｍｕｎＲｅｖ．２０１６；１５（８）：７８１－５

本発明者らは、驚くべきことに、Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ、ＣＣ、ＳＩＦ１、及びＱ１を含めて本発明において使用されるＦｃ多量体が、例えば抗ＧＢＭ糸球体腎炎のような免疫複合体介在性腎臓障害の処置において有効であることを今や見出した。

本発明において使用されるＦｃ多量体は、Ｓｕｎらのストラドマーのような例えばＣ１ｑのような補体系タンパク質への増強された結合のためのいずれの変異も欠いているが、免疫複合体介在性腎臓障害の病理形成を強く阻害することができる。例えば、抗ＧＢＭ糸球体腎炎のマウスモデルにおいて、Ｃ１ｑに対する増強された結合を誘導する任意の変異を有していない本発明のＦｃ多量体は、補体依存性細胞傷害及び抗体依存性細胞性細胞傷害を阻害することによるアルブミン尿の予防において優れた有効性を示した。

要旨
本開示は、免疫複合体介在性腎臓障害を処置する方法を提供し、該方法は、多量体化ドメインもしくはリンカーの存在を介して構築され、かつ補体系タンパク質に対する結合親和性を増加させる任意の変異を含まないＦｃ多量体を投与することを含む。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明において使用されるＦｃ多量体は、２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含む。ＩｇＧＦｃ融合単量体はそれぞれ２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、そして各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み、ここでＦｃ多量体は、補体系タンパク質に対するその結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。いくつかの好ましい実施形態において、補体系タンパク質はＣ１ｑである。いくつかの実施形態において、本発明において使用されるＦｃ多量体において存在しない変異は、位置２６７、２６８、又は３２４のいずれか１つにおけるＦｃ多量体のＩｇＧ１Ｆｃドメインにおける少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ又はＳ３２４Ｔの少なくとも１つである。いくつかの実施形態において、除外された変異は、位置２６７、２６８、及び３２４のいずれか１つにおける少なくとも１つの変異を含み、そしてさらに位置２３３、２３４、２３５、２３６、２３８、２６５、２９７、２９９、又は３２８のいずれか１つにおける少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、又はＬ３２８Ｆの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、位置２９９におけるアミノ酸は、スレオニンからセリン又はシステイン以外の任意の他のアミノ酸に変異していない。いくつかの実施形態において、位置２９８におけるアミノ酸は、プロリン以外のいずれかのアミノ酸に変異していない。いくつかの実施形態において、位置２３６におけるアミノ酸は欠失していない。好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異はＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異はＧ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異はＰ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異はＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異はＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体はストラドマーではない。いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、多量体化ドメインとしてＩｇＧ２ヒンジドメインを含まない。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、ここで各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖はＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み、そしてここで多量体化ドメインはＩｇＧ２ヒンジを含まない。これらの実施形態のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体はストラドマーではない。

本発明のいくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、ここで各Ｆｃポリペプチド鎖はＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み；そしてここでＦｃ多量体はストラドマーではない。

いくつかの好ましい実施形態において、Ｆｃ多量体は、６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含むＦｃ六量体である。いくつかの好ましい実施形態において、Ｆｃ多量体は多量体化ドメインとしてＩｇＭ尾部を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧヒンジ領域をさらに含み、そしてＦｃ融合ポリペプチド鎖はＦａｂポリペプチドを含まない。

例えば、いくつかの好ましい実施形態において、本発明において使用されるＦｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧ１ヒンジ領域、ＩｇＧ１Ｆｃドメイン、及びＩｇＭ尾部を含み、そしてＦａｂポリペプチドを含まない。好ましい実施形態において、各融合ポリペプチド鎖におけるＩｇＭ尾部は、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの定常領域のＣ末端における２３２アミノ酸と融合された１８アミノ酸を含む。好ましい実施形態において、Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は配列番号１である。さらなる好ましい実施形態において、Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は配列番号１であり、５つまでの保存的アミノ酸変化を有する。別の好ましい実施形態において、Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、配列番号２として表され（ＷＯ２０１７／１２９７３７の配列番号７に対応する）、これから分泌及び成熟Ｆｃ六量体の形成の間にシグナルペプチドが切断される。いくつかの実施形態において、Ｆｃ六量体はストラドマーではない。

いくつかの好ましい実施形態において、成熟Ｆｃ六量体は、組み換えヒトＦｃ六量体である。いくつかの実施形態において、Ｆｃ六量体は、補体系タンパク質に対するその結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。いくつかの好ましい実施形態において、補体系タンパク質はＣ１ｑである。いくつかの実施形態において、本発明において使用されるＦｃ多量体に存在しない変異は、位置２６７、２６８、又は３２４のいずれか１つにおいてＦｃ六量体のＩｇＧ１Ｆｃドメインにおける少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ又はＳ３２４Ｔの少なくとも１つである。いくつかの実施形態において、除外された変異は、位置２６７、２６８、及び３２４のいずれか１つにおいて少なくとも１つの変異を含み、そしてさらに、位置２３３、２３４、２３５、２３６、２３８、２６５、２９７、２９９、又は３２８のいずれか１つにおいて少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、又はＬ３２８Ｆの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、位置２９９におけるアミノ酸は、スレオニンから、セリン又はシステイン以外の任意の他のアミノ酸に変異されない。いくつかの実施形態において、位置２９８におけるアミノ酸は、プロリン以外の任意のアミノ酸に変異されない。いくつかの実施形態において、位置２３６におけるアミノ酸は欠失されない。好ましい実施形態において、除外された変異はＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

好ましい実施形態において、Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧ１ヒンジ領域、ＩｇＧ１Ｆｃドメイン、及びＩｇＭ尾部を含み、ここでＩｇＧ１Ｆｃドメインは、位置３０９（ＥＵナンバリングに従う）においてロイシンの代わりにシステインを有し、そしてここでＦｃ融合ポリペプチドはＦａｂポリペプチドを含まず、そしてＦｃ融合ポリペプチド鎖は配列番号３である（ＷＯ２０１７／１２９７３７の配列番号２に対応する）。さらに好ましい実施形態において、Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、５つまでの保存的アミノ酸変化を含む配列番号３である。別の好ましい実施形態において、Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は配列番号４（ＷＯ２０１７／１２９７３７の配列番号８に対応する）として発現され、これから、分泌及び成熟Ｆｃ六量体の形成の間にシグナルペプチドが切断される。

本発明において使用されるさらなる実施形態は、Ｆｃ融合ポリペプチド鎖をコードするポリヌクレオチドであり、好ましくは該ポリヌクレオチドは、Ｆｃ融合ポリペプチド鎖に連結されたシグナルペプチドもコードする。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は多量体化ドメインを含有しない。

一実施形態において、Ｆｃ多量体は、３つの単量体を形成する４つのポリペプチドから構成される。第一のポリペプチドは、第一のＦｃポリペプチド、第一のリンカー、及び第二のＦｃポリペプチドを含む。第二のポリペプチドは、第三のＦｃポリペプチド、第二のリンカー、及び第四のＦｃポリペプチドを含む。第三のポリペプチドは第五のＦｃポリペプチドを含み、そして第四のポリペプチドは第六のＦｃポリペプチドを含む。この態様において、第一のＦｃポリペプチド及び第三のＦｃポリペプチドは、組み合わさって第一のＦｃ単量体を一緒に形成し；第五のＦｃポリペプチド及び第二のＦｃポリペプチドは、組み合わさって第二のＦｃ単量体を一緒に形成し；そして第六のＦｃポリペプチド及び第四のＦｃポリペプチドは、組み合わさって第三のＦｃ単量体を一緒に形成する。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、抗原認識領域、例えば、可変ドメイン（例えば、Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、超可変領域（ＨＶＲ））又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有しない。

この態様のいくつかの実施形態において、第一及び第三のＦｃポリペプチドはそれぞれ、第一のＦｃポリペプチドと第三のＦｃポリペプチドとの間の二量体化を促進する相補的二量体化選択性モジュールを含み；かつ／又は第二及び第五のＦｃポリペプチドはそれぞれ、第二のＦｃポリペプチドと第五のＦｃポリペプチドとの間の二量体化を促進する相補的二量体化選択性モジュールを含み；かつ／又は第四及び第六のＦｃポリペプチドはそれぞれ、第四のＦｃポリペプチドと第六のＦｃポリペプチドとの間の二量体化を促進する相補的二量体化選択性モジュールを含む。

いくつかの実施形態において、相補的二量体化選択性モジュールは、Ｆｃポリペプチドの選択的二量体化を促進する。Ｆｃポリペプチドの選択的二量体化を促進するために相補的二量体化選択性モジュールを使用する本明細書に記載されるＦｃ構築物のいずれかにおいて、Ｆｃポリペプチドは、２つのＦｃポリペプチド間で（すなわち、Ｆｃ構築物のＦｃポリペプチドと別のＦｃポリペプチドとの間で）異なる配列、例えば、２０以下のアミノ酸だけ異なる（例えば、１５以下、１０以下のアミノ酸）、例えば、２０、１５、１０、８、７、６、５、４、３又は２以下のアミノ酸だけ異なる配列を有し得る。例えば、いずれのＦｃ構築物の相補的二量体化選択性モジュールも、一方のＦｃポリペプチドのＣ_Ｈ３抗体定常ドメインにおける操作された空隙及び他方のＦｃポリペプチドのＣ_Ｈ３抗体定常ドメインにおける操作された隆起を含み得、ここで操作された空隙及び操作された隆起はＦｃポリペプチドの空隙中に入る隆起の対（ｐｒｏｔｕｂｅｒａｎｃｅ－ｉｎｔｏ－ｃａｖｉｔｙｐａｉｒ）を形成するように位置づけられるので、本明細書において記載される構築物のＦｃポリペプチド配列は異なっていてもよい。いくつかの実施形態において、Ｆｃ構築物はＣ_Ｈ３ドメインにアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ構築物は、Ｆｃポリペプチド（１つ又はそれ以上のＦｃポリペプチド）のＣ_Ｈ３ドメインに選択的二量体化のためのアミノ酸修飾を含む。例となる操作された空隙及び隆起は当該分野で公知である。他の実施形態において、相補的二量体化選択性モジュールは、一方のＦｃポリペプチドのＣ_Ｈ３抗体定常ドメインにおいて操作された（置換された）負に荷電したアミノ酸、及び他方のＦｃポリペプチドのＣ_Ｈ３抗体定常ドメインにおいて操作された（置換された）正に荷電したアミノ酸を含み、ここで負に荷電したアミノ酸及び正に荷電したアミノ酸は、相補的Ｆｃポリペプチド間でＦｃドメインの形成を促進するように位置づけられる。例となる相補的アミノ酸変化は当該分野で公知である。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの１つ又はそれ以上は同じ配列である。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの１つ又はそれ以上は同じ改変を有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの１つ、２つ、３つ、又は４つのみが同じ改変を有する。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、３つのＦｃ単量体を形成する４つのポリペプチドを含み、ここで第一のポリペプチドは、第一のＦｃポリペプチド、第一のリンカー、及び第二のＦｃポリペプチドを含み、ここで第二のポリペプチドは、第三のＦｃポリペプチド、第二のリンカー、及び第四のＦｃポリペプチドを含み、ここで第三のポリペプチドは第五のＦｃポリペプチドを含み、第四のポリペプチドは第六のＦｃポリペプチドを含み、ここで第一のＦｃポリペプチド及び第三のＦｃポリペプチドは第一のＦｃ単量体を形成し、ここで第五のＦｃポリペプチド及び第二のＦｃポリペプチドは第二のＦｃ単量体を形成し、そして第六のＦｃポリペプチド及び第四のＦｃポリペプチドは第三のＦｃ単量体を形成する。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、リンカーを介して接合された少なくとも２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は少なくとも１つのリンカーを含む。リンカーは、アミノ酸３～２００個（例えば、３～１５０、３～１００、３～６０、３～５０、３～４０、３～３０、３～２０、３～１０、３～８、３～５、４～３０、５～３０、６～３０、８～３０、１０～２０、１０～３０、１２～３０、１４～３０、２０～３０、１５～２５、１５～３０、１８～２２及び２０～３０アミノ酸）を含むアミノ酸スペーサーであってもよい。適切なペプチドリンカーは当該分野で公知であり、これらとしては、例えば、グリシン及びセリンのような可動性アミノ酸残基を含有するペプチドリンカーが挙げられる。特定の実施形態において、リンカーは、モチーフ、例えばＧＳ、ＧＧＳ、ＧＧＳＧ、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧ、ＧＧＧＧの単一、複数又は繰り返しのモチーフを含有し得る。特定の実施形態において、リンカーは、ＧＳ、ＧＧＳ、ＧＧＳＧ、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧ、ＧＧＧＧ又は配列番号１２８～１５５のいずれかを含み得る。いくつかの実施形態において、リンカーは、直列に連続して２つのＦｃポリペプチドを接続するために使用される。他の実施形態において、リンカーは、Ｃ_Ｌ及びＣ_Ｈ１抗体定常ドメインを接続するために使用される。他の実施形態において、リンカーは、グリシン及びセリン以外のアミノ酸も含有し得る、例えば配列番号１５６～１６２。

本明細書に記載されるいくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、配列番号９７～１２７、又は１０個まで（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個まで）の単一アミノ酸改変（例えば、置換、例えば、保存的置換）を有する配列番号９７～１２７を含むポリペプチドを含み得る。いくつかの実施形態において、構築物のＦｃドメインのＦｃポリペプチドは、２つのＦｃポリペプチドの間で（すなわち、Ｆｃ構築物のＦｃポリペプチドと別のＦｃポリペプチドとの間で）、異なる配列、例えば、２０個以下のアミノ酸（例えば、１５、１０以下のアミノ酸）、例えば、２０、１５、１０、８、７、６、５、４、３又は２個以下のアミノ酸だけ異なる配列を有し得る。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ構築物中の１つ又はそれ以上のポリペプチドは、末端リジン残基を含有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃ構築物中の１つ又はそれ以上のＦｃポリペプチドは、末端リジン残基を含有しない。いくつかの実施形態において、Ｆｃ構築物中の全てのＦｃポリペプチドは、末端リジン残基を含有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃ構築物中の全てのＦｃポリペプチドは、末端リジン残基を含有しない。いくつかの実施形態において、配列番号９８、１００、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、及び１１７のいずれか１つの配列を含むか、その配列からなるか、又は本質的にその配列からなるＦｃポリペプチド中の末端リジン残基は、末端リジン残基を含有しない対応するＦｃポリペプチドを生成するために除去され得る。いくつかの実施形態において、末端リジン残基は、末端リジン残基を含有する対応するＦｃポリペプチドを生成するために、配列番号９７、９９、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、及び１１８～１２７の配列を含むか、それらの配列からなるか、又は本質的にそれらの配列からなるＦｃポリペプチドに付加され得る。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、補体系タンパク質に対するＦｃ多量体の結合親和性を増加させるいずれの変異も欠失している。いくつかの好ましい実施形態において、補体系タンパク質はＣ１ｑである。いくつかの実施形態において、本発明において使用されるＦｃ多量体に存在しない変異は、位置２６７、２６８、又は３２４のいずれか１つにおいてＦｃ多量体のＩｇＧ１Ｆｃドメインにおける少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ又はＳ３２４Ｔの少なくとも１つである。いくつかの実施形態において、除外された変異は、位置２６７、２６８、及び３２４のいずれか１つにおける少なくとも１つの変異を含み、そして位置２３３、２３４、２３５、２３６、２３８、２６５、２９７、２９９、又は３２８のいずれか１つにおける少なくとも１つの点変異を更に含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、又はＬ３２８Ｆの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、位置２９９におけるアミノ酸は、スレオニンから、セリン又はシステイン以外の任意の他のアミノ酸に変異されない。いくつかの実施形態において、位置２９８におけるアミノ酸は、プロリン以外の任意のアミノ酸に変異されない。いくつかの実施形態において、位置２３６におけるアミノ酸は欠失されない。好ましい実施形態において、除外された変異はＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異はＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異はＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

好ましい実施形態において、Ｆｃ多量体は静脈内又は非静脈内に投与される。一実施形態において、Ｆｃ多量体は皮下投与される。一実施形態において、Ｆｃ多量体は、経口、又は髄腔内、又は吸入により肺内に適用される。

好ましい実施形態において、Ｆｃ多量体は、約３ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ量で投与される。一実施形態において、Ｆｃ多量体は、約１ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ量で投与される。全ての用量はＦｃ多量体が投与される対象の体重１ｋｇあたりである。

代替の実施形態において、本発明において使用されるＦｃ多量体はストラドマーであり、この場合、ＩｇＧＦｃフラグメントは、ＷＯ２００８／１５１０８８、ＷＯ２０１２／０１６０７３、ＷＯ２０１７／２１４３２１又はＷＯ２０１７／０１９５６５に開示されるように、多量体化ドメイン、好ましくはＩｇＧ２ヒンジ領域を備えているが、ここでＦｃ多量体は、補体系タンパク質に対するその結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。いくつかの好ましい実施形態において、補体系タンパク質はＣ１ｑである。好ましい実施形態において、Ｆｃ多量体は、配列番号５を含むポリペプチド鎖を発現させることにより製造され、これにより成熟Ｆｃ多量体は配列番号５の残基２１～２６４を含む。

当然のことながら、前述の全般的な記載及び以下の詳細な記載は、例示及び説明のみのためであり、開示のさらなる非限定的な説明を提供することを意図される。

図１は、ＥＬＩＳＡキットによりマウス尿において検出されたアルブミンのレベルにより表される、抗ＧＢＭ糸球体腎炎のインビボモデルにおける、ＣＨＯ細胞で生成されたＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ六量体（ＣＳＬ７７７）の効果を示す。図２は、ＥＬＩＳＡキットによりマウス尿において検出されたアルブミンのレベルにより表される、抗ＧＢＭ糸球体腎炎のインビボモデルにおける、ＣＨＯ細胞（Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＣＨＯ））及びＨＥＫ２９３細胞（Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＨＥＫ））で生成されたＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ六量体（ＣＳＬ７７７）、並びに減少したＣ１ｑ結合能を有する変異六量体（Ｋ３２２Ａ）の効果を示す。図３は、ＥＬＩＳＡキットによりマウス尿において検出されたアルブミンのレベルにより表される、抗ＧＢＭ糸球体腎炎のインビボモデルにおけるＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ六量体（ＣＳＬ７７７）及び他のＦｃ多量体（ＣＣ、ＳＩＦ１、及びＱ１）の効果を示す。図４は、ＥＬＩＳＡキットによりマウス尿において検出されたアルブミンのレベルにより表される、抗ＧＢＭ糸球体腎炎のインビボモデルにおけるＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ六量体（ＣＳＬ７７７）の用量－応答効果を示す。図５：ＷＯ２０１７／１２９７３７からの配列図６：本発明の実施形態において使用される他の六量体配列図６－１の続き。図６－２の続き。図６－３の続き。図６－４の続き。図６－５の続き。図６－６の続き。図７：本発明の実施形態において使用されるストラドマー配列図８：本発明の実施形態において使用される、ＷＯ２０１７／１７２８５３において開示される組み換えＦｃ化合物図９：本発明の実施形態において使用されるＦｃ多量体において使用される適切なヒンジ領域の例図１０：本発明の実施形態において使用される三価Ｆｃ多量体についての配列図１０－１の続き。図１０－２の続き。図１０－３の続き。図１０－４の続き。

詳細な説明
以下の詳細な説明及び実施例は、本開示の特定の実施形態を説明する。当業者には当然のことながら、その範囲に包含される本開示の多数の変形及び改変がある。従って、特定の実施形態の記載は、限定とみなされるべきではない。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、そして各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み；そしてここでＦｃ多量体は、補体系タンパク質に対するＦｃ多量体の結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。

いくつかの実施形態において、補体系タンパク質に対するＦｃ多量体の結合親和性を増加させ、かつ従って本発明において使用されるＦｃ多量体から除外される変異は、Ｆｃ多量体の１つ又はそれ以上のＩｇＧ１Ｆｃドメインにおける少なくとも１つの点変異であり得る。いくつかの実施形態において、除外された変異は、ＩｇＧ１Ｆｃドメインの位置２６７、２６８、及び／又は３２４における点変異に対応する。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔの少なくとも１つである。いくつかの実施形態において、除外された変異は、位置２６７、２６８、及び／又は３２４の少なくとも１つに対応する１つ又はそれ以上の点変異であり得、そしてさらに位置２３３、及び／又は位置２３４、及び／又は位置２３５、及び／又は位置２３６、及び／又は位置２３８、及び／又は位置２６５、及び／又は位置２９７、及び／又は位置２９９、及び／又は位置３２８における少なくとも１つの点変異を更に含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、位置２３３、及び／又は位置２３４、及び／又は位置２３５、及び／又は位置２３６、及び／又は位置２３８、及び／又は位置２６５、及び／又は位置２９７、及び／又は位置２９９、及び／又は位置３２８における少なくとも１つの点変異であり得る。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、及びＬ３２８Ｆの少なくとも１つである。いくつかの実施形態において、位置２９９におけるアミノ酸は、スレオニンから、セリン又はシステイン以外の任意の他のアミノ酸に変異していない。いくつかの実施形態において、位置２９８におけるアミノ酸は、プロリン以外の任意のアミノ酸に変異していない。いくつかの実施形態において、位置２３６におけるアミノ酸は欠失されない。いくつかの実施形態において、補体系タンパク質Ｃ１ｑであり得る。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体はストラドマーではない。いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、多量体化ドメインとしてＩｇＧ２ヒンジを含まない。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、そして各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み、そしてここで多量体化ドメインはＩｇＧ２ヒンジを含まない。さらなる実施形態において、Ｆｃ多量体はストラドマーではない。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、そして各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖はＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み；そしてここでＦｃ多量体はストラドマーではない。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は６つのＩｇＧ融合単量体を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は多量体化ドメインとしてＩｇＧＭ尾部を含む。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は組み換えヒトＦｃ六量体である。いくつかの実施形態において、組み換えヒトＦｃ六量体は６つのヒトＩｇＧ１Ｆｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのヒトＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、そして各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド及びヒトＩｇＭ尾部を含み、そしてさらに、各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖におけるＩｇＭ尾部は、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの定常領域のＣ末端における２３２アミノ酸と融合した１８アミノ酸を含む。

いくつかの実施形態において、組み換えヒトＦｃ六量体は、補体系タンパク質に対するその結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。いくつかの好ましい実施形態において、補体系タンパク質はＣ１ｑである。いくつかの実施形態において、本発明において使用されるＦｃ多量体に存在しない変異は、位置２６７、２６８、又は３２４のいずれか１つにおけるＦｃ六量体のＩｇＧ１Ｆｃドメインにおける少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ又はＳ３２４Ｔの少なくとも１つである。いくつかの実施形態において、除外された変異は、位置２６７、２６８、及び３２４のいずれか１つにおける少なくとも１つの変異を含み、そしてさらに、位置２３３、２３４、２３５、２３６、２３８、２６５、２９７、２９９、又は３２８のいずれか１つにおける少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、又はＬ３２８Ｆの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、位置２９９におけるアミノ酸は、スレオニンから、セリン又はシステイン以外の任意の他のアミノ酸に変異されない。いくつかの実施形態において、位置２９８におけるアミノ酸は、プロリン以外の任意のアミノ酸に変異されない。いくつかの実施形態において、位置２３６におけるアミノ酸は欠失されない。好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異はＰ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異はＰ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。いくつかの実施形態において、組み換えヒトＦｃ六量体はストラドマーではない。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、３つのＦｃ単量体を形成する４つのポリペプチドを含み、ここで第一のポリペプチドは、第一のＦｃポリペプチド、第一のリンカー、及び第二のＦｃポリペプチドを含み、ここで第二のポリペプチドは、第三のＦｃポリペプチド、第二のリンカー、及び第四のＦｃポリペプチドを含み、ここで第三のポリペプチドは第五のＦｃポリペプチドを含み、ここで第四のポリペプチドは第六のＦｃポリペプチドを含み、ここで第一のＦｃポリペプチド及び第三のＦｃポリペプチドは第一のＦｃ単量体を形成し、ここで第五のＦｃポリペプチド及び第二のＦｃポリペプチドは第二のＦｃ単量体を形成し、そしてここで第六のＦｃポリペプチド及び第四のＦｃポリペプチドは第三のＦｃ単量体を形成する。

さらなる実施形態において、Ｆｃ多量体は、補体系タンパク質に対するその結合を増加させる任意の変異を欠失している。いくつかの好ましい実施形態において、補体系タンパク質はＣ１ｑである。いくつかの実施形態において、本発明において使用されるＦｃ多量体に存在しない変異は、位置２６７、２６８、又は３２４のいずれか１つにおいてＦｃ多量体のＩｇＧ１Ｆｃドメインにおける少なくとも１つ点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ又はＳ３２４Ｔの少なくとも１つである。いくつかの実施形態において、除外された変異は、位置２６７、２６８、及び３２４のいずれか１つにおける少なくとも１つの変異を含み、そしてさらに、位置２３３、２３４、２３５、２３６、２３８、２６５、２９７、２９９、又は３２８のいずれか１つにおける少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、又はＬ３２８Ｆの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、位置２９９におけるアミノ酸は、スレオニンから、セリン又はシステイン以外の任意の他のアミノ酸に変異していない。いくつかの実施形態において、位置２９８におけるアミノ酸はプロリン以外の任意のアミノ酸に変異していない。いくつかの実施形態において、位置２３６におけるアミノ酸は欠失していない。好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

本明細書で使用されるように用語「Ｆｃ単量体」は、ＩｇＧの重鎖ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含有する免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）重鎖定常領域の一部、又はそのバリアントもしくはフラグメントとして定義される。ＩｇＧＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、それぞれＣγ２及びＣγ３ドメインとも呼ばれる。

Ｆｃ単量体は、ポリペプチドのＮ末端部分においてシステイン残基間のジスルフィド結合により連結された２つの同一なＦｃポリペプチドから構成され得る。ＩｇＧについて記載されたジスルフィド連結の配置は、天然ヒト抗体に関するものである。他の脊椎動物種由来の抗体間ではいくらかの変動があるが、このような抗体は、本発明の状況において適切であるかもしれない。Ｆｃポリペプチドは、組み換え発現技術により製造され得、そして天然抗体において起こるようにジスルフィド結合により結合する。あるいは、１つ又はそれ以上の新しいシステイン残基が、ジスルフィド結合を形成させることを可能にするためにＦｃポリペプチドにおける適切な位置に導入され得る。

一実施形態において、本発明において使用されるＦｃ単量体は、ＷＯ２０１７／１２９７３７に記載されるようにヒトＩｇＧ１ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む２つの同一のポリペプチド鎖を含む。

別の実施形態において、本発明において使用されるＦｃ単量体は、ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン全体を含み、そしてＷＯ２０１７／１２９７３７において開示されるように、それぞれＣＨ２のＮ末端又はＣＨ３のＣ末端で切断されている。典型的に、Ｆｃ単量体は免疫グロブリンのＦａｂポリペプチドを欠いている。Ｆａｂポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン及び重鎖可変領域ドメインから構成される。

本発明において使用されるＦｃ単量体は、免疫グロブリンのＣＨ２及びＣＨ３部分より多くを含み得る。例えば、一実施形態において、単量体は、免疫グロブリンのヒンジ領域、それらのフラグメントもしくはバリアント、又は改変されたヒンジ領域を含む。天然ヒンジ領域は、天然免疫グロブリンにおいてＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間に存在する免疫グロブリンの領域である。バリアント又は改変されたヒンジ領域は、天然ヒンジ領域と長さ及び／又は組成が異なる任意のヒンジである。このようなヒンジは、他の種由来のヒンジ領域を含む場合がある。他の改変されたヒンジ領域は、Ｆｃ部分のクラス又はサブクラスと異なるクラス又はサブクラスの抗体に由来する完全ヒンジ領域を含む。あるいは、改変されたヒンジ領域は、天然ヒンジの一部又は繰り返し中の各単位が天然ヒンジ領域由来である繰り返し単位を含む。別の代替において、天然ヒンジ領域は、システイン残基の数を増加させるか又は減少させることにより変更される。他の改変されたヒンジ領域は完全に非天然であり、そして長さ、システイン組成、及び可動性のような所望の特性を有するように設計される。

本発明の使用のための多数の改変されたヒンジ領域は、例えば、ＵＳ５，６７７，４２５、ＷＯ１９９８／２５９７１、ＷＯ１９９９／１５５４９、ＷＯ２００５／００３１６９、ＷＯ２００５／００３１７０及びＷＯ２００５／００３１７１において記載されている。

本発明の一実施形態において使用されるＦｃ多量体におけるＦｃポリペプチドは、そのＮ末端にヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を有する。一実施形態において、ヒンジ領域は配列番号１の残基１～１５の配列を有する。

本発明のいくつかの実施形態において使用されるＦｃポリペプチド鎖は、ＷＯ２０１７／１２９７３７に開示されるようなシグナルペプチドを含んで発現される。シグナルペプチドは、Ｆｃポリペプチド鎖の分泌を方向づけ、その後、Ｆｃポリペプチド鎖の残りの部分から切断される。

本発明の実施形態において使用されるＦｃポリペプチドは、ヒンジ領域のＮ末端に融合されたシグナルペプチドを含む。シグナルペプチドは、配列番号２の残基１～１９の配列を有し得る；しかし、当業者には当然のことながら、哺乳動物細胞からのタンパク質の分泌を方向づける他のシグナル配列も使用され得る。

２つ又はそれ以上のＦｃ単量体の多量体構造の形成を改善するために、Ｆｃポリペプチドは尾部に融合され、これは単量体単位を集合させて多量体にする。Ｆｃポリペプチドの尾部への融合の生成物は、本明細書で使用されるように「Ｆｃ融合ポリペプチド」である。Ｆｃポリペプチドが二量体化してＦｃ単量体を形成するように、Ｆｃ融合ポリペプチドも同様に二量体化してＦｃ融合単量体を形成する。

従って、本明細書で使用されるように「Ｆｃ融合単量体」は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、そして各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧＦｃポリペプチド及びＩｇＭ尾部又はＩｇＡ尾部、好ましくはＩｇＭ尾部を含む。

適切な尾部は、ＩｇＭ又はＩｇＡ由来である。ＩｇＭ及びＩｇＡは、共通のＨ_２Ｌ_２抗体単位の共有結合多量体としてヒトにおいて天然に存在する。ＩｇＭは、Ｊ鎖を組み込んだ場合は五量体として、又はＪ鎖を欠いている場合には六量体として存在する。ＩｇＡは単量体として存在し、そして二量体を形成する。ＩｇＭ及びＩｇＡの重鎖はそれぞれ、尾部として知られるＣ末端定常ドメインへのそれぞれ１８アミノ酸伸長を有する。この尾部は、ポリマーにおいて重鎖間にジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含み、そして重合において重要な役割を有すると考えられる。尾部はグリコシル化部位も含む。

本開示の尾部は、任意の適切なアミノ酸配列を含む。尾部は、天然に存在する抗体において見られる尾部であるか、またあるいは、天然の尾部とは長さ及び／又は組成が異なる改変された尾部である。他の改変された尾部は、完全に非天然であり、そして長さ、可動性及びシステイン組成のような多量体化に望まれる特性を有するように設計される。

本発明の実施形態において使用されるＦｃ多量体における尾部は、配列番号１の残基２３３～２５０において及び配列番号９において示されるようなヒトＩｇＭ由来の１８アミノ酸配列の全て又は一部を含む。あるいは、尾部は、ヒトＩｇＭ尾部のフラグメント又はバリアントでもよい。

本発明の一実施形態において使用されるＦｃ多量体における尾部は、Ｆｃポリペプチドの定常領域のＣ末端に直接融合されて、Ｆｃ融合ポリペプチドを形成する。あるいは、尾部はＦｃポリペプチド、好ましくはヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの定常領域のＣ末端で２３２アミノ酸のセグメントに融合される。あるいは、尾部は、介在するアミノ酸配列を用いて間接的に融合される。例えば、短いリンカー配列は、尾部とＦｃポリペプチドとの間に提供され得る。リンカー配列は、１アミノ酸長と２０アミノ酸長との間であり得る。

多量体構造の形成は、Ｆｃ融合ポリペプチドのＦｃ部分のロイシン３０９をシステインに変異させることにより更に改善され得る。Ｌ３０９Ｃ変異は、Ｆｃ融合単量体間のさらなるジスルフィド結合形成を可能にし、これがさらに、Ｆｃ融合単量体の多量体化を促進する。ＩｇＧＦｃ部分の残基は、ＥｄｅｌｍａｎＧＭｅｔａｌ（１９６９）、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ６３、７８－８５に記載される、ＩｇＧについてのＥＵナンバリングシステムに従って番号付けられる；Ｋａｂａｔｅｔａｌ．、１９８３、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ、ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、ＤＣも参照のこと。ＩｇＧのＬｅｕ３０９は、配列相同性により、ＩｇＭのＣμ３ドメインにおけるＣｙｓ４１４及びＩｇＡのＣα２ドメインにおけるＣｙｓ３０９に対応する。

他の変異はさらに、又はあるいは、所望の効果を達成するためにＦｃ融合ポリペプチドに導入される。本明細書において使用されるように用語「変異」は、１つ又はそれ以上のアミノ酸の置換、付加、又は欠失を含む。いくつかの実施形態において、ＷＯ２０１７／１２９７３７に記載されるように、Ｆｃ融合ポリペプチドは、２０個まで、１０個まで、５個まで、又は２個までのアミノ酸変異を含む。

本発明の一実施形態において使用されるＦｃ多量体における変異は、ＷＯ２０１７／１２９７３７に記載されるような保存的アミノ酸変化である。本明細書において使用されるように用語「保存的アミノ酸変化」は、あるアミノ酸の、電荷、疎水性、構造、及び／又は寸法のような類似した生化学的特性を有する異なるアミノ酸への変化を指す。本発明の一実施形態において使用されるＦｃ融合ポリペプチドは、２０個まで、１０個まで、５個まで、又は２個までの保存的アミノ酸変化を含む。例えば、Ｆｃ融合ポリペプチドは、５個までの保存的アミノ酸変化を含む。

保存的アミノ酸変化は、以下の残基の群の間での変化を含む：Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ；Ａｓｐ、Ｇｌｕ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ；及びＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ。

ペプチド、タンパク質、又はそれらのフラグメントを記載するために本明細書において使用される場合の「バリアント」は、改変されたアミノ酸を有し得る。適切な改変としては、アセチル化、グリコシル化、ヒドロキシル化、メチル化、ヌクレオチジル化、リン酸化、ＡＤＰ－リボシル化、及び当該分野で公知の他の改変が挙げられる。このような改変は、ペプチドが組み換え技術により製造される場合には翻訳後に起こり得る。それ以外の場合には、改変は当該分野で公知の技術を使用して合成ペプチドに対して行われ得る。改変は、アミノ酸のペプチドへの組み込みの前に含められ得る。カルボン酸基はエステル化されても、アミドに変換されてもよく、アミノ基は、アルキル化、例えばメチル化され得る。バリアントはまた、例えば炭水化物側鎖又は個々の糖部分を除去又は付加するために、翻訳後に改変され得る。

本明細書において使用されるように用語「Ｆｃ多量体」は、２つ又はそれ以上の重合したＦｃ単量体を記載する。Ｆｃ単量体はＦｃ融合単量体であり得る。Ｆｃ多量体は、２～６つのＦｃ単量体を含み、Ｆｃ二量体、Ｆｃ三量体、Ｆｃ四量体、Ｆｃ五量体、及びＦｃ六量体を生じる。Ｆｃ単量体は結合して、様々な数の単量体単位を有するポリマーとなる。

本明細書で使用されるように、用語「接合された」は、化学的結合体化、組み換え手段、並びに化学結合、例えばジスルフィド結合及びアミド結合を含む手段による、２つ又はそれ以上のエレメント、成分、又はタンパク質ドメイン、例えばポリペプチドの組み合わせ又は連結を記載するために使用される。例えば、２つの単一のポリペプチドは、化学的結合体化、化学結合、ペプチドリンカー、又は任意の他の共有結合連結手段を介して接合されて、１つの連続的タンパク質構造を形成し得る。いくつかの実施形態において、第一のＦｃポリペプチドは、リンカー、例えばペプチドリンカーを用いて第二のＦｃポリペプチドに接合され、ここでペプチドリンカーのＮ末端は、化学結合、例えばペプチド結合を介して第一のＦｃポリペプチドのＣ末端に接合され、そしてペプチドリンカーのＣ末端は、化学結合、例えばペプチド結合を介して第二のＦｃポリペプチドのＮ末端に接合される。

本明細書で使用されるように、用語「リンカー」は、２つのエレメント、例えばＦｃポリペプチドの間の「スペーサー」を指す。用語「スペーサー」は、２つのポリペプチド又はポリペプチドドメインの間に存在して、２つのポリペプチド又はポリペプチドドメインの間に空間及び／又は可動性をもたらす、部分（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー）又はアミノ酸配列（例えば、３～２００アミノ酸、３～１５０アミノ酸、又は３～１００アミノ酸配列）を指す。アミノ酸スペーサーは、ポリペプチドの一次配列の部分である（例えば、ポリペプチド骨格を介して間を空けられたポリペプチド又はポリペプチドドメイン）。「リンカー」は、２つのポリペプチドの間に存在して可動性及び／又は空間をもたらすことができる。

ＷＯ２０１７／１２９７３７において、Ｆｃ多量体の大部分は六量体である。本明細書で使用されるように、用語「大部分」は、５０％より多い、６０％より多い、７０％より多い、８０％より多い、又は９０％より多いことを指す。一実施形態において、Ｆｃ多量体の８０％より多くがＦｃ六量体である。

特定の数の単量体を含有するＦｃ多量体が必要な場合、Ｆｃ多量体は、分子サイズによって、例えばゲルろ過（サイズ排除クロマトグラフィー）により分離され得る。

一実施形態において、本発明において使用されるＦｃ多量体は、例えば、ＷＯ２００８／１５１０８８、又はＷＯ２０１２／０１６０７３に記載されるように、複数のＦｃドメインを含む有望なＩＶＩＧ置換タンパク質である。

別の実施形態において、ＷＯ２００８／１５１０８８に記載されるように、多量体Ｆｃは、ＩｇＧ２ヒンジ領域のような多量体化ドメインを有するストラドマーであり、ここでストラドマーは、補体系タンパク質に対するその結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。好ましい実施形態において、補体系タンパク質はＣ１ｑである。

一実施形態において、例えば、ＷＯ２００８／１５１０８８、ＷＯ２０１２／０１６０７３及びＷＯ２０１７／２１４３２１（それら全体として参照により本明細書に加入される）において開示されるように、本発明において使用されるＦｃ多量体は、２つ又はそれ以上の多量体化単位を含む化合物であり、ここで上記単位はそれぞれ、多量体化領域、及びＦｃγ受容体に結合することができる少なくとも１つのＦｃドメインを含む領域を含み、ここで上記単位はそれぞれ、多量体化領域単量体、及び少なくとも１つのＦｃポリペプチドを含む領域を含み、ここで２つの単量体の二量体化は、多量体化領域、及びＦｃγ受容体に結合することができる少なくとも１つのＦｃドメインを含む領域を形成し、ここで２つ又はそれ以上の単位の多量体化領域は多量体化して化合物を形成し、そしてここでこの化合物は、第一のＦｃドメインを介して第一のＦｃγ受容体に、そして第二のＦｃドメインを介して第二のＦｃγ受容体に結合することができ、ここで多量体化領域は、ＩｇＧ２ヒンジ、ＩｇＥＣＨ２ドメイン、ロイシンジッパー、イソロイシンジッパー及び亜鉛フィンガーからなる群から選択され、そしてここでＦｃγ受容体に結合することができる少なくとも１つのＦｃドメインを含む領域はそれぞれ、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ１ＣＨ３ドメインを含む。しかし、本発明の実施形態は、例えばＣ１ｑのような補体系タンパク質に対するそれらの結合親和性を増加する任意の変異を欠失している。いくつかの実施形態において、多量体化領域は、ＩｇＧ２ヒンジ領域、例えば、ＩｇＧ２１２アミノ酸ヒンジ領域ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号５における残基２５３～２６４）である。より好ましくは、Ｆｃ多量体は、配列番号５のポリペプチド（ＷＯ２０１２／０１６０７３における配列番号４）の発現により得られ、これはＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインを介して自発的に多量体化する。

別の代替の実施形態において、本発明において使用される組み換えＦｃ化合物は、その全体として参照により本明細書に加入されるＷＯ２０１７／１７２８５３いおいて開示されるとおりである。好ましくは、組み換えＦｃ化合物は、２つのＣＨ２－ＣＨ３Ｆｃドメインを含む単鎖Ｆｃペプチド、及びオリゴマー化ペプチドドメインを含む。好ましくは、組み換えＦｃ化合物は、配列番号６（ＷＯ２０１７１７２８５３における配列番号６）又は配列番号７（ＷＯ２０１７１７２８５３における配列番号４）のタンパク質を含む。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、補体系タンパク質に対するＦｃ多量体の結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。補体系タンパク質の例はＣ１ｑである。いくつかの実施形態において、除外された変異は、２６７、２６８、又は３２４のいずれか１つにおいてＦｃ多量体のＩｇＧ１Ｆｃドメインにおける少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ又はＳ３２４Ｔの少なくとも１つである。いくつかの実施形態において、除外された変異は、位置２６７、２６８、及び３２４のいずれか１つにおける少なくとも１つの変異を含み、そしてさらに、位置２３３、２３４、２３５、２３６、２３８、２６５、２９７、２９９、又は３２８のいずれか１つにおける少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態において、除外された変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、又はＬ３２８Ｆの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、位置２９９におけるアミノ酸は、スレオニンから、セリン又はシステイン以外の任意の他のアミノ酸に変異されない。いくつかの実施形態において、位置２９８におけるアミノ酸は、プロリン以外の任意のアミノ酸に変異されない。いくつかの実施形態において、位置２３６におけるアミノ酸は欠失されない。好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。別の好ましい実施形態において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

別の代替の実施形態において、本発明において使用される組み換えＦｃ化合物は、ＷＯ２０１５／１６８６４３、ＷＯ２０１７／２０５４３６、ＷＯ２０１７／２０５４３４及びＷＯ２０１８／１２９２５５（それら全体として参照により本明細書に加入される）において開示されるとおりである。好ましくは、組み換えＦｃ化合物は、２～１０のＦｃドメイン、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のＦｃドメインを有するＦｃ構築物を含む。いくつかの実施形態において、組み換えＦｃ化合物は３つのＦｃドメインを含む。

一態様において、本開示は、３つのＦｃドメインを形成する４つのポリペプチドを含むＦｃ構築物を特徴とする。第一のポリペプチドは式Ａ－Ｌ－Ｂを有し、式中、Ａは第一のＦｃポリペプチドを含み；Ｌはリンカーであり；そしてＢは第二のポリペプチドを含む。第二のポリペプチドは式Ａ’－Ｌ’－Ｂ’を有し、ここでＡ’は第三のＦｃポリペプチドを含み；Ｌ’はリンカーであり；そしてＢ’は第四のＦｃポリペプチドを含む。第三のポリペプチドは第五のＦｃポリペプチドを含み、そして第四のポリペプチドは第六のＦｃポリペプチドを含む。この態様において、Ａ及びＡ’は、組み合わさって第一のＦｃドメインを形成し、Ｂ及び第五のＦｃポリペプチドは組み合わさって第二のＦｃドメインを形成し、そしてＢ’及び第六のＦｃポリペプチドは組み合わさって第三のＦｃドメインを形成する。

この態様のいくつかの実施形態において、Ａ及びＡ’はそれぞれ、これらのＦｃポリペプチド間の二量体化を促進する二量体化選択性モジュールを含む。他の実施形態において、Ｂ及び第五のＦｃポリペプチドはそれぞれ、これらのＦｃポリペプチド間の二量体化を促進する二量体化選択性モジュールを含む。さらに他の実施形態において、Ｂ’及び第六のＦｃポリペプチドはそれぞれ、これらのＦｃポリペプチド間の二量体化を促進する二量体化選択性モジュールを含む。

この態様のいくつかの実施形態において、Ａ、Ｂ、Ａ’、Ｂ’、第三のポリペプチド、及び第四のポリペプチドの１つ又はそれ以上は、Ｆｃポリペプチドからなる。いくつかの実施形態において、Ａ、Ｂ、Ａ’、Ｂ’、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドはそれぞれ、Ｆｃポリペプチドからなる。

この態様のいくつかの実施形態において、Ｂ及びＢ’の各々は変異Ｄ３９９Ｋ及びＫ４０９Ｄを含み、Ａ及びＡ’の各々は変異Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＥ３５７Ｋを含み、そして第五及び第六のＦｃポリペプチドの各々は、変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ３７０Ｄを含む。

この態様のいくつかの実施形態において、Ａ及びＡ’の各々は変異Ｄ３９９Ｋ及びＫ４０９Ｄを含み、Ｂ及びＢ’の各々は変異Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＥ３５７Ｋを含み、そして第五及び第六のＦｃポリペプチドの各々は、変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ３７０Ｄを含む。

この態様のいくつかの実施形態において、Ｌ及びＬ’の各々は、少なくとも４、８、１２、１４、１６、１８、又は２０個のグリシンを含む。いくつかの実施形態において、Ｌ及びＬ’の各々は、４～３０、８～３０、又は１２～３０個のグリシンを含む。この態様のいくつかの実施形態において、Ｌ及びＬ’の各々は、ＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧ（配列番号１５５）を含むか、それからなるか、又は本質的それからなる。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ構築物は、ＩｇＧＣ_Ｌ抗体定常ドメイン及びＩｇＧＣ_Ｈ１抗体定常ドメインをさらに含んでいてもよく、ここでＩｇＧＣ_Ｌ抗体定常ドメインは、リンカーを用いてＩｇＧＣ_Ｈ１抗体定常ドメインのＮ末端に結合され、そしてＩｇＧＣ_Ｈ１抗体定常ドメインは、例えば、リンカーを用いて、ＡのＮ末端に結合される。一実施形態において、Ｆｃ構築物は、第二のＩｇＧＣ_Ｌ抗体定常ドメイン及び第二のＩｇＧＣ_Ｈ１抗体定常ドメインを更に含み、ここで第二のＩｇＧＣ_Ｌ抗体定常ドメインは、例えばリンカーを用いて、第二のＩｇＧＣ_Ｈ１抗体定常ドメインのＮ末端に結合され、そして第二のＩｇＧＣ_Ｈ１抗体定常ドメインは、例えばリンカーを用いて、Ａ’のＮ末端に結合される。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ構築物は、Ｂ又はＢ’のＮ末端又はＣ末端に、例えばリンカーを用いて接合された異種部分、例えばペプチド、例えばアルブミン結合ペプチドを更に含む。

他の実施形態において、Ｆｃ構築物の第一及び第二のポリペプチドは、同じアミノ酸配列を有し、そしてＦｃ構築物の第三及び第四のポリペプチドは、同じアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、第一及び第二のポリペプチドは配列番号１２０の配列を含むか、配列番号１２０の配列からなるか、又は本質的に配列番号１２０の配列からなり、そして第三及び第四のポリペプチドは、配列番号１１９の配列を含むか、配列番号１１９の配列からなるか、又は本質的に配列番号１１９の配列からなる。本開示のいくつかの実施形態において、第一及び第二のポリペプチドの各々は、１０個まで（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個まで）の単一アミノ酸改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有する配列番号１２０の配列を含むか、その配列からなるか、又は本質的にその配列からなり、そして第三及び第四のポリペプチドは、１０個まで（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個まで）の単一アミノ酸改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有する配列番号１１９の配列を含むか、その配列からなるか、又は本質的にその配列からなる。いくつかの場合、第一及び第二のポリペプチドは、配列番号１２５の配列を含むか、配列番号１２５の配列からなるか、又は本質的に配列番号１２５の配列からなり、そして第三及び第四のポリペプチドは、配列番号１２４の配列を含むか、配列番号１２４の配列からなるか、又は本質的に配列番号１２４の配列からなる。本開示のいくつかの実施形態において、第一及び第二のポチペプチドの各々は、１０個まで（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個まで）の単一アミノ酸改変（例えば、置換、例えば、保存的置換）を有する配列番号１２５の配列を含むか、その配列からなるか、又は本質的にその配列からなり、そして第三及び第四のポリペプチドは、１０個まで（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個まで）の単一アミノ酸改変（例えば、置換、例えば、保存的置換）を有する配列番号１２４の配列を含むか、その配列からなるか、又は本質的にその配列からなる。いくつかの実施形態において、第一及び第二のポリペプチドは、配列番号１１３もしくは１１４の配列を含むか、配列番号１１３もしくは１１４の配列からなるか、又は本質的に配列番号１１３もしくは１１４の配列からなり、そして第三及び第四のポリペプチドは、配列番号１０７もしくは１０８の配列を含むか、配列番号１０７もしくは１０８の配列からなるか、又は本質的に配列番号１０７もしくは１０８の配列からなる。本開示のいくつかの実施形態において、第一及び第二のポリペプチドの各々は、１０個まで（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個まで）の単一アミノ酸改変（例えば、置換、例えば、保存的置換）を有する配列番号１１３もしくは１１４の配列を含むか、その配列からなるか、又は本質的にその配列からなり、そして第三及び第四のポリペプチドは、１０個まで（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個まで）の単一アミノ酸改変（例えば、置換、例えば、保存的置換）を有する配列番号１０７もしくは１０８の配列を含むか、その配列からなるか、又は本質的にその配列からなる。いくつかの実施形態において、第一及び第二のポリペプチドは、配列番号１２６の配列を含むか、配列番号１２６の配列からなるか、又は本質的に配列番号１２６の配列からなり、そして第三及び第四のポリペプチドは、配列番号１２２の配列を含むか、配列番号１２２の配列からなるか、又は本質的に配列番号１２２の配列からなる。本開示のいくつかの実施形態において、第一及び第二のポリペプチドの各々は、１０個まで（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個まで）の単一アミノ酸改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有する配列番号１２６の配列を含むか、その配列からなるか、又は本質的にその配列からなり、そして第三及び第四のポリペプチドは、１０個まで（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個まで）の単一アミノ酸改変（例えば、置換、例えば、保存的置換）を有する配列番号１２２の配列を含むか、その配列からなるか、又は本質的にその配列からなる。

本開示のこの態様のいくつかの実施形態において、第一及び第三のＦｃポリペプチドの各々は、第一のＦｃポリペプチドと第三のＦｃポリペプチドとの間の二量体化を促進する相補的二量体化選択性モジュールを含み、そして第二及び第四のＦｃポリペプチドの各々は、第二のＦｃポリペプチドと第四のＦｃポリペプチドとの間の二量体化を促進する相補的二量体化選択性モジュールを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第二のＦｃポリペプチドの各々の相補的二量体化選択性モジュールは操作された隆起を含み、そして第三及び第四のＦｃポリペプチドの各々の相補的二量体化選択性モジュールは操作された空隙を含む。

いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの１つ又はそれ以上は、ＩｇＧヒンジドメイン又はその部分、ＩｇＧＣ_Ｈ２抗体定常ドメイン、及びＩｇＧＣ_Ｈ３抗体定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの各々は、ＩｇＧヒンジドメイン又はその部分、ＩｇＧＣ_Ｈ２抗体定常ドメイン、及びＩｇＧＣ_Ｈ３抗体定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの各々はＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである。

本開示の前の２つの態様のいくつかの実施形態において、第一、第二、第三、及び第四のポリペプチドの１つ又はそれ以上におけるＮ末端Ａｓｐは、Ｇｌｎに変異される。いくつかの実施形態において、第一、第二、第三、及び第四のポリペプチドの各々におけるＮ末端ＡｓｐはＧｌｎに変異される。

いくつかの実施形態において、第一、第二、第三、及び第四のポリペプチドの１つ又はそれ以上は、Ｃ末端リジンを欠失している。いくつかの実施形態において、第一、第二、第三、及び第四のポリペプチドの各々は、Ｃ末端リジンを欠失している。

いくつかの実施形態において、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは同じアミノ酸配列を有し、そして第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、同じアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、同じアミノ酸配列を有していない。いくつかの実施形態において、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、同じアミノ酸配列を有していない。

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインの少なくとも１つは、（ｉ）１つもしくはそれ以上のＦｃ受容体に対する結合親和性、（ｉｉ）エフェクター機能、（ｉｉｉ）Ｆｃドメイン硫酸化のレベル、（ｉｖ）半減期、（ｖ）プロテアーゼ耐性、（ｖｉ）Ｆｃドメイン安定性、及び／又は（ｖｉｉ）分解に対する感受性の１つ又はそれ以上を変更するアミノ酸改変を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、１つ又はそれ以上のＦｃ受容体に対する結合親和性を変更するアミノ酸改変、例えば、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆを含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ受容体はＦｃγＲＩＩｂである。いくつかの場合、本明細書において記載される改変は、ＦｃγＲＩＩｂ受容体に対する親和性を増加させる。いくつかの場合、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ改変は、ＦｃγＲＩＩｂに対する結合親和性を増加させる。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメイン硫酸化のレベルを変更するアミノ酸改変、例えば、２４１Ｆ、２４３Ｆ、２４６Ｋ、２６０Ｔ、又は３０１Ｒを含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、例えば以下の組から選択される、プロテアーゼ耐性を変更するアミノ酸改変を含む：２３３Ｐ、２３４Ｖ、２３５Ａ、及び２３６欠失；２３７Ａ、２３９Ｄ、及び３３２Ｅ；２３７Ｄ、２３９Ｄ、及び３３２Ｅ；２３７Ｐ、２３９Ｄ、及び３３２Ｅ；２３７Ｑ、２３９Ｄ、及び３３２Ｅ；２３７Ｓ、２３９Ｄ、及び３３２Ｅ；２３９Ｄ、２６８Ｆ、３２４Ｔ、及び３３２Ｅ；２３９Ｄ、３２６Ａ、及び３３３Ａ；２３９Ｄ及び３３２Ｅ；２４３Ｌ、２９２Ｐ、及び３００Ｌ；２６７Ｅ、２６８Ｆ、３２４Ｔ、及び３３２Ｅ；２６７Ｅ及び３３２Ｅ；２６８Ｆ、３２４Ｔ、及び３３２Ｅ；３２６Ａ、３３２Ｅ、及び３３３Ａ；又は３２６Ａ及び３３３Ａ。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、分解に対するＦｃドメイン感受性を変更するアミノ酸改変、例えば、Ｃ２３３Ｘ、Ｄ２３４Ｘ、Ｋ２３５Ｘ、Ｓ２３６Ｘ、Ｔ２３６Ｘ、Ｈ２３７Ｘ、Ｃ２３９Ｘ、Ｓ２４１Ｘ、及びＧ２４９Ｘを含み、ここでＸは任意のアミノ酸である。

いくつかの実施形態において、本開示は、ａ）ｉ）第一のＦｃポリペプチド；ｉｉ）第二のＦｃポリペプチド；及びｉｉｉ）第一のＦｃポリペプチドを第二のＦｃポリペプチドに接合するリンカー、を含む第一のポリペプチド；ｂ）ｉ）第三のＦｃポリペプチド；ｉｉ）第四のＦｃポリペプチド；及びｉｉｉ）第三のＦｃポリペプチドを第四のＦｃポリペプチドを接合するリンカー、を含む第二のポリペプチド；ｃ）第五のＦｃポリペプチドを含む第三のポリペプチド；並びにｄ）第六のＦｃポリペプチドを含む第四のポリペプチド、を含むＦｃ構築物を特徴とし；ここで第一のＦｃポリペプチド及び第五のＦｃポリペプチドは、組み合わさって第一のＦｃドメインを形成し、第二のＦｃポリペプチド及び第四のＦｃポリペプチドは、組み合わさって第二のＦｃドメインを形成し、そして第三のＦｃポリペプチド及び第六のＦｃポリペプチドは、組み合わさって第三のＦｃドメインを形成し、そしてここで少なくとも１つのＦｃドメインは、位置Ｉ２５３においてアミノ酸改変（例えば、位置Ｉ２５３における単一アミノ酸改変）を含む。

いくつかの実施形態において、第一及び第二のポリペプチドは互いに同一であり、そして第三及び第四のポリペプチドは互いに同一である。いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメインは、位置Ｉ２５３においてアミノ酸改変を含む。いくつかの場合、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方は、位置Ｉ２５３においてアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、第二のＦｃドメインは、位置Ｉ２５３においてアミノ酸改変を含む。いくつかの実施形態において、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、位置Ｉ２５３においてアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、第三のＦｃドメインは、位置Ｉ２５３におけるアミノ酸改変を含む。いくつかの実施形態において、第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方は、位置Ｉ２５３においてアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、位置Ｉ２５３における各アミノ酸改変（例えば、置換）は、Ｉ２５３Ａ、Ｉ２５３Ｃ、Ｉ２５３Ｄ、Ｉ２５３Ｅ、Ｉ２５３Ｆ、Ｉ２５３Ｇ、Ｉ２５３Ｈ、Ｉ２５３Ｉ、Ｉ２５３Ｋ、Ｉ２５３Ｌ、Ｉ２５３Ｍ、Ｉ２５３Ｎ、Ｉ２５３Ｐ、Ｉ２５３Ｑ、Ｉ２５３Ｒ、Ｉ２５３Ｓ、Ｉ２５３Ｔ、Ｉ２５３Ｖ、Ｉ２５３Ｗ、及びＩ２５３Ｙからなる群から独立して選択される。いくつかの実施形態において、位置Ｉ２５３における各アミノ酸改変（例えば、置換）はＩ２５３Ａである。

別の態様において、本開示は：ａ）：ｉ）．第一のＦｃポリペプチド；ｉｉ）．第二のＦｃポリペプチド；及びｉｉｉ）．第一のＦｃポリペプチドを第二のＦｃポリペプチドを接合するリンカー、を含む第一のポリペプチド；ｂ）．ｉ）．第三のＦｃポリペプチド；ｉｉ）．第四のＦｃポリペプチド；及びｉｉｉ）．第三のＦｃポリペプチドを第四のＦｃポリペプチドに接合するリンカー、を含む第二のポリペプチド；ｃ）．第五のＦｃポリペプチドを含む第三のポリペプチド；並びにｄ）．第六のＦｃポリペプチドを含む第四のポリペプチド、を含むＦｃ構築物を特徴とし；ここで第一のＦｃポリペプチド及び第五のＦｃポリペプチドは、組み合わさって第一のＦｃドメインを形成し、第二のＦｃポリペプチド及び第四のＦｃポリペプチドは組み合わさって第二のＦｃドメインを形成し、そして第三のＦｃポリペプチド及び第六のＦｃポリペプチドは、組み合わさって第三のＦｃドメインを形成し、そしてここで少なくとも１つのＦｃドメインは、位置Ｒ２９２にアミノ酸改変（例えば、単一アミノ酸改変）を含む。

いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメインは、位置Ｒ２９２においてアミノ酸改変を含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方は、位置Ｒ２９２においてアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、第二のＦｃドメインは、位置Ｒ２９２においてアミノ酸改変を含む。いくつかの実施形態において、第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方は、位置Ｒ２９２においてアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、第三のＦｃドメインは、位置Ｒ２９２においてアミノ酸改変を含む。いくつかの実施形態において、第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方は、位置Ｒ２９２においてアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、第一、第二、及び第三のＦｃドメインの各々は、位置Ｒ２９２においてアミノ酸改変（例えば、置換）を含む。いくつかの実施形態において、第一、第二、及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸改変（例えば、置換）Ｒ２９２Ｐを含む（すなわち、各ＦｃモノマーはＲ２９２Ｐ改変を有する）。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、そして第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。

いくつかの実施形態において、位置Ｒ２９２における各アミノ酸改変（例えば、置換）は、Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２９２Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｒ２９２Ｑ、Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２Ｔ、又はＲ２９２Ｙから独立して選択される。いくつかの実施形態において、位置Ｒ２９２における各アミノ酸改変（例えば、置換）はＲ２９２Ｐである。いくつかの実施形態において、第一及び第三のＦｃドメインの各々はアミノ酸改変（例えば、置換）Ｉ２５３Ａを含み、そして第一、第二、及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸改変（例えば、置換）Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、そして第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一、第二、及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸改変（例えば、置換）Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、そして第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、そして第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。

いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含み、そして第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの場合、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；そして第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。

いくつかの実施形態において、第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。いくつかの実施形態において、第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、そして第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン、第二のＦｃドメイン、及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、そして第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。

いくつかの実施形態において、第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、そして第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、そして第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；そして第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。

いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、そして第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；そして第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、そして第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。

いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、そして第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；そして第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々は、Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む（例えば、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む）。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；そして第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。

いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含み、そして第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；そして第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン、第二のＦｃドメイン、及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；そして第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。

いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、そして第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；そして第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一のＦｃドメイン、第二のＦｃドメイン、及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み；第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み；そして第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。

いくつかの実施形態において、第一、第二、及び第三のＦｃドメインの各々はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第一及び第五のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第三及び第六のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。いくつかの実施形態において、第二及び第四のＦｃポリペプチドの一方又は両方はアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃ構築物は、抗原認識領域、例えば、可変ドメイン又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含まない。いくつかの実施形態において、Ｆｃ構築物（又はＦｃ構築物内のＦｃドメイン）は、全体に又は部分的に、異なるポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドの結合により形成される。特定の実施形態において、Ｆｃ構築物は、２つのポリペプチドの結合を促進する追加のドメイン（例えば、ＩｇＭ尾部又はＩｇＡ尾部）を含まない。他の実施形態において、共有結合連結（例えば、ジスルフィド架橋）は、接合してＦｃドメインを形成する２つのＦｃポリペプチド間のみに存在する。他の実施形態において、Ｆｃ構築物は、Ｆｃドメイン間に共有結合連結（例えば、ジスルフィド架橋）を含まない。なお他の実施形態において、Ｆｃ構築物は、Ｆｃ構築物中のＦｃドメインの全て又は実質的に全てが、細胞表面上のＦｃ受容体と同時に相互作用できるような十分な構造的可動性をもたらす。一実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、それらが二量体化選択性モジュールを有するという点において、野生型と又は互いに一次配列が異なる。

別の態様において、本開示は、Ｆｃポリペプチドの選択的二量体化を促進するための組成物及び方法を特徴とする。本開示は、Ｆｃドメインの２つのＦｃポリペプチドが、Ｃ_Ｈ３抗体定常ドメイン間の境界部で荷電した残基の環内の少なくとも２つの位置において同一の変異を含む、Ｆｃドメインを含む。本開示はまた、上記Ｆｃドメインを製造する方法を含み、該方法は、Ｃ_Ｈ３抗体定常ドメイン間の境界部で荷電した残基の環内の少なくとも２つの位置において、２つのＦｃポリペプチド配列において同一の変異を有する相補的二量体化選択性モジュールを導入することを含む。Ｃ_Ｈ３抗体定常ドメイン間の境界部は、荷電した残基の環により取り囲まれた疎水性パッチからなる。１つのＣ_Ｈ３抗体定常ドメインが別のものと一緒になる場合、これらの荷電した残基は、反対の電荷の残基と対になる。２つ又はそれ以上の相補的残基対の両方のメンバーの電荷を逆にすることにより、変異したＦｃポリペプチドは、同じ変異した配列のＦｃポリペプチドに対して相補的なままであるが、それらの変異を有していないＦｃポリペプチドに対してより低い相補性を有する。この実施形態において、同一の二量体化選択性モジュールは、ホモ二量体化を促進する。このようなＦｃドメインは、二重変異Ｋ４０９Ｄ／Ｄ３９９Ｋ、Ｋ３９２Ｄ／Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ／Ｋ３７０Ｅ、Ｄ３５６Ｋ／Ｋ４３９Ｄ、Ｋ４０９Ｅ／Ｄ３９９Ｋ、Ｋ３９２Ｅ／Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ／Ｋ３７０Ｄ、又はＤ３５６Ｋ／Ｋ４３９Ｅを含有するＦｃポリペプチドを含む。別の実施形態において、Ｆｃドメインは、二重変異のいずれかの対、例えば、Ｋ４０９Ｄ／Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５７Ｋ／Ｋ３７０Ｅを組み合わせた四重変異を含むＦｃポリペプチドを含む。

別の実施形態において、同一の二量体化選択性モジュールに加えて、ＦｃドメインのＦｃポリペプチドは、特定の結合を促進する非同一の変異（例えば、操作された空隙及び隆起）を有する相補的二量体化選択性モジュールを含む。結果として、２つのＦｃポリペプチドは、２つの二量体化選択性モジュールを含み、そして互いに対して相補的なままであるが、他のＦｃポリペプチドに対して減少した相補性を有する。この実施形態は、空隙含有Ｆｃポリペプチドと隆起含有Ｆｃポリペプチドとの間のヘテロ二量体化を促進する。一例において、両方のＦｃポリペプチドの荷電した残基対において非同一の変異を有する相補的二量体化選択性モジュールは、一方のＦｃポリペプチド上の隆起及び他方のＦｃポリペプチド上の空隙と組み合わされる。別の実施形態において、ＦｃドメインのＦｃポリペプチドは、特定の結合を促進する非同一の変異を有する相補的二量体化選択性モジュール（例えば、操作された空隙及び隆起）を含み、かつ同一の二量体化選択性モジュールを含まない。

本明細書に記載されるＦｃ構築物のいずれにおいても、Ｆｃポリペプチドの順序は交換可能であるということが理解される。例えば、式Ａ－Ｌ－Ｂを有するポリペプチドにおいて、Ａのカルボキシ末端はＬのアミノ末端に接合され得、これが今度はそのカルボキシ末端においてＢのアミノ末端に接合される。あるいは、Ｂのカルボキシ末端は、Ｌのアミノ末端に接合され得、これが今度はそのカルボキシ末端においてＣのアミノ末端に接合される。これらの構成の両方が式Ａ－Ｌ－Ｂにより包含される。

これらの構築物の特性は、実質的に均一な組成物の効率的な生成を可能にする。組成物の均一性の程度は、組成物の薬物動態及びインビボ性能に影響を及ぼす。組成物におけるこのような均一性は、その組成物の安全性、有効性、均一性、及び信頼性を確実にするために望ましい。本開示のＦｃ構築物は、実質的に均一である集団又は組成物（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％均一）中に存在し得る。

本明細書においてさらに詳細に記載されるように、本開示は、全て同じ数のＦｃドメインを有するＦｃ構築物を含有する実質的に均一な組成物、さらにはこのような実質的に均一な組成物を製造する方法を特徴とする。

本開示のＦｃ構築物は、２～１０個のＦｃドメイン（例えば、２～８個のＦｃドメイン、２～６個のＦｃドメイン、２～４個のＦｃドメイン、２～３個のＦｃドメイン、３～５個のＦｃドメイン、又は５～１０個のＦｃドメイン）を有するＦｃ構築物、例えば、本明細書に記載されるような、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のＦｃドメインを有する構築物の、実質的に均一な集団（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％均一）を含む医薬組成物中に存在し得る。その結果として、Ｆｃ構築物の実質的な凝集又は望ましくない多量体化を有しない医薬組成物が製造され得る。

ポリヌクレオチド
本開示はさらに、Ｆｃ融合ポリペプチド又はＦｃ多量体のためのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。用語「ポリヌクレオチド」は、一般に、未改変のＲＮＡ又はＤＮＡでも改変されたＲＮＡ又はＤＮＡでもよい任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖又は二本鎖ＤＮＡ、一本鎖又は二本鎖ＲＮＡであり得る。本明細書において使用されるように、用語「ポリヌクレオチド」はまた、イノシンのような、１つ又はそれ以上の改変された塩基及び／又は異常な塩基を含むＤＮＡ又はＲＮＡを含む。当然のことながら、当業者に公知の多くの有用な目的に役立つ様々な改変がＤＮＡ及びＲＮＡに対して行われ得る。本明細書において使用されるように用語「ポリヌクレオチド」は、このようなポリヌクレオチドの化学的、酵素的、又は代謝により改変された形態、さらにはウイルス、並びに例えば、単純な及び複雑な細胞を含めて細胞に特徴的なＤＮＡ及びＲＮＡの化学形態を包含する。

当業者には当然のことながら、遺伝コードの縮重に起因して、所定のポリペプチドは異なるポリヌクレオチドによりコードされ得る。これらの「バリアント」は、本明細書において開示されるＦｃ多量体により包含される。

Ｆｃ多量体のポリヌクレオチドは、単離されたポリヌクレオチドであってよい。用語「単離された」ポリヌクレオチドは、他の核酸配列、例えば限定されないが、他の染色体及び染色体外ＤＮＡ及びＲＮＡを実質的に含まないポリヌクレオチドを指す。一実施形態において、単離されたポリヌクレオチドは、宿主細胞から精製される。当業者に公知の従来の核酸精製方法が、単離されたポリヌクレオチドを得るために使用され得る。この用語はまた、組み換えポリヌクレオチド及び化学的に合成されたポリヌクレオチドも含む。

本開示の別の態様は、本開示に従うポリヌクレオチドを含むプラスミド又はベクターである。一実施形態において、ＷＯ２０１７／１２９７３７において開示されるように、プラスミド又はベクターは発現ベクターを含む。一実施形態において、ベクターは、ヒト遺伝子治療における使用のための導入ベクターである。本開示の別の態様は、本開示のポリヌクレオチド、プラスミド、又はベクターを含む宿主細胞である。

本開示の宿主細胞は、Ｆｃ多量体を製造する方法において使用される。該方法は：
（ａ）本開示の宿主細胞を、所望の挿入タンパク質が発現されるような条件下で培養すること；及び
（ｂ）場合により、宿主細胞から又は培地から所望の挿入タンパク質を回収すること
を含む。

別の実施形態において、Ｆｃ多量体は、混入高分子、例えば他のタンパク質及び核酸に関して純度≧８０％、純度≧９０％、純度≧９５％、純度≧９９％、又は純度≧９９．９％まで精製され、そして感染性及び発熱性の物質を含まない。本開示の単離されたＦｃ多量体は、他の無関係なポリペプチドを実質的に含まないものであり得る。

本発明の特定の実施形態において、Ｆｃ多量体は／０６０７１２において記載されるものである。例としては、５、６又は７つのポリペプチド単量体単位を含むポリマータンパク質が挙げられ、ここで各ポリペプチド単量体単位は、２つの免疫グロブリンＧ重鎖定常領域を含むＦｃ受容体結合部分を含み、ここで各免疫グロブリンＧ重鎖定常領域は、隣接するポリペプチド単量体単位の免疫グロブリンＧ重鎖定常領域のシステイン残基にジスルフィド結合を介して連結されるシステイン残基を含み、ここでポリマータンパク質は、哺乳動物対象に投与された場合に抗原特異的免疫抑制を引き起こすさらなる免疫調節性部分又は抗原部分を含まない。特定の態様において、２つの免疫グロブリンＧ重鎖定常領域は、単鎖Ｆｃとしてポリペプチドリンカーを介して連結される。他の態様において、ポリペプチド単量体単位は、Ｆｃ受容体結合部分及び２つの免疫グロブリンＧ重鎖定常領域に融合された尾部領域からなり、これは単量体単位のポリマーへの構築を促進する。

別の実施形態において、免疫グロブリンＧ重鎖定常領域の各々は、哺乳動物重鎖定常領域、好ましくはヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列；又はそのバリアントを含む。適切なヒトＩｇＧサブタイプはＩｇＧ１である。

Ｆｃ受容体結合部分は、免疫グロブリンのＦｃ部分より多くを含んでいてもよい。例えば、ＷＯ２０１４／０６０７１２に記載されるように、天然免疫グロブリンにおいてＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間に存在する免疫グロブリンのヒンジ領域を含み得る。特定の免疫グロブリンについて、ヒンジ領域は、Ｆｃ受容体への結合のために必要である。好ましくは、Ｆｃ受容体結合部分は、ＣＨ１ドメイン及び重鎖可変領域ドメイン（ＶＨ）を欠失している。Ｆｃ受容体結合部分は、対応する免疫グロブリンのＦｃ部分と比較して、Ｃ末端及び／又はＮ末端において切断され得る。ポリマータンパク質は、隣接するポリペプチド単量体単位の免疫グロブリンＧ重鎖定常領域のシステイン残基へのジスルフィド結合を介して連結されたシステイン残基を含む各免疫グロブリンＧ重鎖定常領域により形成される。ＩｇＧ重鎖定常領域に基づく単量体単位のポリマーを形成する能力は、ＩｇＧ重鎖定常領域の部分を、ＩｇＭ又はＩｇＡの対応する部分により似るように改変することにより改善され得る。免疫グロブリン重鎖定常領域又はそのバリアントの各々は、位置３０９においてシステイン残基、及び好ましくは位置３１０におけるロイシン残基を含むアミノ酸配列を含むＩｇＧ重鎖定常領域である。

尾部領域が存在する本発明の態様について、各ポリペプチド単量体単位は、２つの免疫グロブリンＧは、重鎖定常領域の各々に融合された尾部領域を含み、ここで各ポリペプチド単量体単位の尾部領域は、単量体単位の、ＷＯ２０１４／０６０７１２に記載されるようなポリマーへの構築を促進する。例えば、尾部領域は、２つの免疫グロブリン重鎖定常領域の各々に対してＣ末端に融合される。尾部領域はＩｇＭもしくはＩｇＡ尾部でも、又はそれらのフラグメントもしくはバリアントでもよい。

一実施形態において、介在するアミノ酸配列は、重鎖定常領域と尾部との間に提供され得、又は尾部は、ＷＯ２０１４／０６０７１２において開示されるように、重鎖定常領域のＣ末端に直接融合され得る。例えば、短いリンカー配列が、尾部領域と免疫グロブリン重鎖定常領域との間に提供され得る。典型的なリンカー配列は、１アミノ酸長と２０アミノ酸長との間であり、典型的には２、３、４、５、６又は８、１０、１２、もしくは１６アミノ酸長までである。重鎖領域と尾部領域との間を含めるために適切なリンカーは、Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号８）をコードする。好ましい尾部領域はヒトＩｇＭの尾部領域であり、これはＰＴＬＹＮＶＳＬＶＭＳＤＴＡＧＴＣＹ（配列番号９）である（ＲａｂｂｉｔｔｓＴＨｅｔａｌ、１９８１．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．９（１８）、４５０９－４５２４；Ｓｍｉｔｈｅｔａｌ（１９９５）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１５４：２２２６－２２３６）。この尾部は、最初のＴｈｒをＰｒｏで置換することによりＮ末端において改変され得る。これは尾部が単量体の重合を促進する能力に影響を及ぼさない。ヒトＩｇＭ尾部のさらに適切なバリアントは、Ｓｏｒｅｎｓｅｎｅｔａｌ（１９９６）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１５６：２８５８－２８６５に記載される。さらなるＩｇＭ尾部配列は、齧歯動物由来のＧＫＰＴＬＹＮＶＳＬＩＭＳＤＴＧＧＴＣＹ（配列番号１０）である。代替の好ましい尾部領域はヒトＩｇＡの尾部領域であり、これはＰＴＨＶＮＶＳＶＶＭＡＥＶＤＧＴＣＹ（配列番号１１）である。他の種のＩｇＭもしくはＩｇＡ由来の他の適切な尾部、又は単量体単位のポリマーへの構築を促進する合成の配列も使用され得る。免疫グロブリン重鎖定常領域が由来する種と同じ種由来の免疫グロブリン尾部を使用することは、必ずしも必要ではないが、そうすることが好ましい。

特定の態様において、ポリマータンパク質は、補体の古典的経路を活性化しないが、Ｃ１ｑに結合することはできるかもしれない。ポリマータンパク質は、１５～２５ｎｍ又は３０ｎｍまでのような典型的には直径約２０ｎｍを有する。分子サイズ及び直径の結果として、ポリマータンパク質は、典型的には良好な程度の組織浸透を有する。

ＷＯ２０１４／０６０７１２に記載される好ましいＦｃ多量体は、配列番号１２（ＷＯ２０１４／０６０７１２における配列番号８）の六量体であり、これからシグナルペプチドが分泌の間に切断され、その結果成熟産物は配列番号１２の残基２１～２６９を含む。

本発明の特定の実施形態において、使用されるＦｃ多量体はＷＯ２０１５／１３２３６４に記載されるものであり、これはヒトＦｃ受容体に結合する多量体融合タンパク質に関する。融合タンパク質は、尾部を含み、位置３０９にシステイン残基は存在しない。

一実施形態において、多量体融合タンパク質は、２つ又はそれ以上のポリペプチド単量体単位を含み、ここで各ポリペプチド単量体単位は、２つの重鎖Ｆｃ領域を含む抗体Ｆｃドメインを含む。各重鎖Ｆｃ領域は、位置３０９においてシステイン以外の任意のアミノ酸残基を含み、そしてそのＣ末端において尾部に融合される、単量体単位をの多量体への構築を引き起こす。各ポリペプチド単量体単位は、抗体可変領域を含まない。

特定の態様において、多量体融合タンパク質は融合パートナーを更に含み、これは抗原、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）、薬物、リガンド、受容体、サイトカイン又はケモカインである場合がある。融合パートナーは、各重鎖Ｆｃ領域のＮ末端に、直接的に、又はヒンジのような介在するアミノ酸配列をもちいて間接的に融合される。あるいは、短いリンカー配列が、融合パートナーと重鎖Ｆｃ領域との間に提供され得る。

他の態様において、多量体融合タンパク質は、１つ又はそれ以上の抗体可変領域を含まない。典型的には、分子はＶＨ又はＶＬ抗体可変領域のどちらも含まない。特定のさらなる態様において、ＷＯ２０１５／１３２３６４の多量体融合タンパク質はＦａｂフラグメントを含まない。

別の実施形態において、多量体融合タンパク質の各ポリペプチド単量体単位は、抗体Ｆｃドメインを含み、これは例えばヒトを含む任意の適切な種由来であってよい。さらに、抗体Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスｌｇＡ１及びｌｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３及びｌｇＧ４を含む）、及びＩｇＭを含む任意の適切な抗体クラス由来であってよい。

抗体Ｆｃドメインは、それぞれ重鎖Ｆｃ領域と呼ばれる２つのＦｃポリペプチド鎖を含む。２つの重鎖Ｆｃ領域は二量体化して抗体Ｆｃドメインを生成する。抗体Ｆｃドメイン内の２つの重鎖Ｆｃ領域は、互いに異なっていてもよいが、典型的には同じものである。

典型的に、各重鎖Ｆｃ領域は、２つもしくは３つの重鎖定常ドメインを含むか又はそれらからなる。例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＧは、２つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ２及びＣＨ３）から構成されるが、ＩｇＥ及びＩｇＭは、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４）から構成される。重鎖Ｆｃ領域は、１つ又はそれ以上の異なる抗体クラス、例えば１、２又は３つの異なるクラス由来の重鎖定常ドメインを含み得る。

従って、本発明の一実施形態において使用されるＦｃ多量体における重鎖Ｆｃ領域は、ＷＯ２０１５／１３２３６４において開示されるようなｌｇＧ１由来のＣＨ３ドメインを含む。別の実施形態において、重鎖Ｆｃ領域は、ｌｇＧ４由来のＣＨ２ドメイン及びｌｇＧ１由来のＣＨ３ドメインを含む。特定の実施形態において、重鎖Ｆｃ領域は位置３５５にアルギニン残基を含む。他の実施形態において、重鎖Ｆｃ領域は位置３５５にシステイン残基を含む。

本発明の一実施形態において使用されるＦｃ多量体における重鎖Ｆｃ領域は、ＩｇＭ由来のＣＨ４ドメインを含む。ＩｇＭＣＨ４ドメインは、典型的にはＣＨ３ドメインと尾部との間に位置する。

他の態様において、重鎖Ｆｃ領域は、ＩｇＧ由来のＣＨ２及びＣＨ３ドメイン並びにＩｇＭ由来のＣＨ４ドメインを含む。

多量体融合タンパク質の尾部は、任意の適切なアミノ酸配列を含み得る。それは天然に存在する抗体において見いだされる尾部であってもよく、またあるいは、天然の尾部と長さ及び／又は組成が異なる改変された尾部であってもよい。他の改変された尾部は、全体的に合成されてもよく、そして長さ、可動性及びシステイン組成のような多量体化に望ましい特性を有するように設計されてもよい。尾部は、ヒトを含む任意の適切な種由来のものであり得る。

尾部は、配列番号９又は配列番号１１に示されるヒトＩｇＭ又はＩｇＡ由来の１８アミノ酸尾部配列の全て又は一部を含み得る。

尾部は、重鎖Ｆｃ領域のＣの末端に直接的に、またあるいは、介在するアミノ酸配列を用いて間接的に融合され得る。例えば、短いリンカー配列が、尾部と重鎖Ｆｃ領域との間に供給され得る。

尾部は、上記の天然の配列のバリアント又はフラグメントを含み得る。ＩｇＭ又はＩｇＡ尾部のバリアントは、典型的には、１８個のアミノ酸位置のうち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、又は１７個において天然の配列と同一であるアミノ酸配列を有する。フラグメントは、典型的には８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、又は１７個のアミノ酸を含む。尾部はハイブリッドＩｇＭ／ｌｇＡ尾部であり得る。

本発明の実施形態において使用されるＦｃ多量体における各重鎖Ｆｃ領域は、場合により、そのＮ末端に天然又は改変されたヒンジ領域を有し得る。本発明において使用されるＦｃ多量体に組み込むことができる改変されたヒンジ領域の種類は、ＷＯ２０１５／１３２３６４において開示される。例えば、重鎖Ｆｃ領域は、そのＮ末端にインタクトなヒンジ領域を有する。特定の態様において、ＷＯ２０１５／１３２３６４で開示されるように、重鎖Ｆｃ領域及びヒンジ領域はｌｇＧ４に由来し、そしてヒンジ領域は、変異した配列ＣＰＰＣ（配列番号１３）を含む。

適切なヒンジ配列の例を配列番号１３～３５に示す。

例えば、多量体融合タンパク質は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２又はそれ以上のポリペプチド単量体単位を含み得る。さらに、多量体融合タンパク質は、様々な数のポリペプチド単量体単位を有する、様々なサイズの多量体融合タンパク質の混合物を含み得る。

従って、特定の実施形態において、本発明において使用される多量体融合タンパク質は、６つのポリペプチド単量体単位からなり、ここで各ポリペプチド単量体単位は、抗体Ｆｃドメイン及び尾部領域からなり、ここで各抗体Ｆｃドメインは、位置３０９におけるアミノ酸残基がシステイン以外の任意のアミノ酸残基である２つの重鎖Ｆｃ領域からなり、そして場合により、各重鎖Ｆｃ領域はＮ末端にヒンジ領域を有し、そしてここで尾部領域は、各重鎖Ｆｃ領域のＣ末端に融合され、そして単量体単位の多量体への構築を引き起こす。

同様に、特定の多量体融合タンパク質内のポリペプチド単量体単位は、互いと同じであっても、互いに異なっていてもよい。

特定の実施形態において、ポリペプチド単量体単位のポリペプチド鎖は、場合により代替のヒンジ又は尾部配列を有する、配列番号３６～５７において提供されるアミノ酸配列を含む。

別の例において、本発明において使用される多量体融合タンパク質は、２つ又はそれ以上、好ましくは６つのポリペプチド単量体単位を含むか又はそれらからなり、ここで各ポリペプチド単量体単位は、２つの同一のポリペプチド鎖を含み、各ポリペプチド鎖は、上の配列番号３６～５７（ＷＯ２０１５／１３２３６４の配列番号２６～４７）のいずれか１つにおいて示される配列を含むか又はその配列からなり、そしてここで各ポリペプチド単量体単位は、抗体可変領域を含まない。

特定の実施形態において、多量体融合タンパク質は、未改変の多量体融合タンパク質と比較した場合に、サイトカイン放出を減少させ、かつ／又は血小板活性化を減少させ、かつ／又はＣ１ｑ結合を減少させ、かつ／又は抗体被覆標的細胞のマクロファージ食作用の阻害の効力を増加させ、かつ／又は１つもしくはそれ以上のＦｃ受容体に対する結合を変更する、１つ又はそれ以上の変異を含む。

本発明の特定の実施形態において、使用されるＦｃ多量体はＷＯ２０１５／１３２３６５に記載されるものであり、これはヒトＦｃ受容体に結合する多量体融合タンパク質に関する。

本発明の実施形態において使用される多量体融合タンパク質は２つ又はそれ以上のポリペプチド単量体単位を含み、ここで各ポリペプチド単量体単位は、ＷＯ２０１５／１３２３６５において開示されるもののような２つの重鎖Ｆｃ領域を含む抗体Ｆｃドメインを含む。各重鎖Ｆｃ領域は、位置３０９にシステイン残基、及びＦｃＲ結合を変更する少なくとも１つのさらなる変異を含み、そしてそのＣ末端において尾部に融合されて、これが単量体単位を多量体に集合させる。各ポリペプチド単量体単位は、抗体可変領域を含まない。

特定の態様において、多量体融合タンパク質は、上記のような融合パートナーを更に含む。他の態様において、多量体融合タンパク質は、上記のように、１つ又はそれ以上の抗体可変領域もＦａｂフラグメントも含まない。一実施形態において、多量体融合タンパク質の各ポリペプチド単量体単位は、上記のように、重鎖Ｆｃ領域を有する抗体Ｆｃドメインを含む。本発明の多量体融合タンパク質の尾部、改変されたヒンジ領域、及びポリペプチド単量体単位は、上に記載される特徴を含む。

本発明の特定の実施形態において使用される多量体融合タンパク質は、６つのポリペプチド単量体単位からなり、ここで各ポリペプチド単量体単位は、抗体Ｆｃドメイン及び尾部領域からなり、ここで各抗体Ｆｃドメインは、各重鎖Ｆｃ領域における位置３０９のアミノ酸残基がシステイン残基である２つの重鎖Ｆｃ領域からなり、そして各重鎖Ｆｃ領域は、ＦｃＲ結合を変更する少なくとも１つのさらなる変異を含み、そして場合により、各重鎖Ｆｃ領域はＮ末端にヒンジ領域を有し、そしてここで尾部領域は各重鎖Ｆｃ領域のＣ末端に融合され、そして単量体単位の多量体への集合を引き起こす。

特定の実施形態において、ポリペプチド単量体単位のポリペプチド鎖は、上記のアミノ酸配列を含む。

別の例において、多量体融合タンパク質は、２つ又はそれ以上、好ましくは６つのポリペプチド単量体単位を含むか、又はそれらからなり、ここで各ポリペプチド単量体単位は、２つの同一のポリペプチド鎖を含み、各ポリペプチド鎖は、配列番号５８～９４（ＷＯ２０１５／１３２３６５の配列番号２６～３２及び５０～６４に対応する）のいずれか１つにおいて示される配列を含むかその配列からなり、そしてここで各ポリペプチド単量体単位は、抗体可変領域を含まない。

特定の実施形態において、ＷＯ２０１５／１３２３６５において教示されるように、本発明において使用される多量体融合タンパク質は、上に記載されるような機能を可能にする１つ又はそれ以上の変異を含む。

本開示の様々な生成物は医薬として有用である。したがって、本開示は、Ｆｃ多量体を含む医薬組成物、本開示のポリヌクレオチド、又は本開示のプラスミドもしくはベクターに関する。

本発明の一態様は、処置を必要とする対象において免疫複合体介在性腎臓障害を処置する方法である。該方法は、治療有効量のＦｃ多量体を該対象に投与することを含む。別の実施形態において、該方法は、治療有効量の本開示のポリヌクレオチド又は本開示のプラスミドもしくはベクターを該対象に投与することを含む。

提案されるＦｃ多量体の発現
適切な宿主細胞における高レベルでの組み換えタンパク質の製造は、当業者に公知の方法に従って、様々な発現系において増殖され得る組み換え発現ベクターにおいて適切な調節エレメントと一緒に、有効な転写単位に上述の改変されたｃＤＮＡを構築することが必要である。有効な転写調節エレメントは、それらの天然宿主として動物細胞を有するウイルス由来又は動物細胞の染色体ＤＮＡ由来であり得る。例えば、サルウイルス４０、アデノウイルス、ＢＫポリオーマウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、もしくはラウス肉腫ウイルスの末端反復配列由来のプロモーター－エンハンサーの組み合わせ、又はベータ－アクチンもしくはＧＲＰ７８のような動物細胞において強く恒常的に転写される遺伝子を含むプロモーター－エンハンサーの組み合わせが使用され得る。ｃＤＮＡから転写される安定した高レベルのｍＲＮＡを達成するために、転写単位は、その３’－近位部分において、転写終結－ポリアデニル化配列をコードするＤＮＡ領域を含有するべきである。例えば、この配列は、サルウイルス４０初期転写領域、ウサギベータグロビン遺伝子、又はヒト組織プラスミノーゲン活性化因子遺伝子由来であり得る。

次いで、ｃＤＮＡは、Ｆｃ多量体の発現のために適した宿主細胞のゲノムに組み込まれ得る。いくつかの実施形態において、この細胞株は、正確なフォールディング、ジスルフィド結合形成、アスパラギン連結グリコシル化及び他の翻訳後修飾、さらには培地中への分泌を確実にするために、脊椎動物起源の動物細胞株であるべきである。他の翻訳後修飾の例は、チロシンＯ－硫酸化及び新生ポリペプチド鎖のタンパク質分解プロセシングである。使用され得る細胞株の例は、サルＣＯＳ細胞、マウスＬ細胞、マウスＣ１２７細胞、ハムスターＢＨＫ－２１細胞、ヒト胎児由来腎臓２９３細胞、及びハムスターＣＨＯ細胞である。

対応するｃＤＮＡをコードする組み換え発現ベクターは、いくつかの異なる方法で動物細胞株に導入され得る。例えば、組み換え発現ベクターは、異なる動物ウイルスに基づくベクターから生成され得る。これらの例は、バキュロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、及びウシパピローマウイルスに基づくベクターである。

組み換えＤＮＡをそれらのゲノム中に組み込んだ特定の細胞クローンの単離を容易にするために、これらの細胞において優性選択可能マーカーとして機能し得る別の組み換え遺伝子と一緒に、対応するＤＮＡをコードする転写単位を動物細胞中に導入することもできる。この種の優性選択可能マーカー遺伝子の例は、ジェネテシン（Ｇ４１８）に対する耐性を付与するＴＮ４アミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ、ハイグロマイシンに対する耐性を付与するハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ、及びピューロマイシンに対する耐性を付与するピューロマイシンアセチルトランスフェラーゼである。このような選択可能マーカーをコードする組み換え発現ベクターは、所望のタンパク質のｃＤＮＡをコードするものと同じベクター上にあっても、又は宿主細胞のゲノムに同時に導入されて組み込まれる別個のベクター上にコードされてもよく、これはしばしば、異なる転写単位間に緊密な物理的連結を生じる。

所望のタンパク質のｃＤＮＡと一緒に使用することができる他の種類の選択可能マーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸還元酵素（ｄｈｆｒ）をコードする様々な転写単位に基づく。内因性ｄｈｆｒ活性を欠いている細胞、例えばＣＨＯ細胞（ＤＵＫＸ－Ｂ１１、ＤＧ－４４）へのこの種の遺伝子の導入後に、ヌクレオシドを欠いている培地中でこれらを増殖させることが可能となる。このような培地の例は、ヒポキサンチン、チミジン、及びグリシンを含まないＨａｍＦ１２である。これらのｄｈｆｒ－遺伝子は、同じベクター上で連結されるか又は異なるベクター上で、上記の種類のＣＨＯ細胞中に、ＩｇＧＦｃ融合単量体をコードするｃＤＮＡと一緒に導入され得、結果として組み換えタンパク質を産生するｄｈｆｒ－ポジティブ細胞株を生成する。

上記細胞株が細胞傷害性ｄｈｆｒ阻害剤メトトレキサートの存在下で増殖される場合、メトトレキサートに耐性の新しい細胞株が現れる。これらの細胞株は、増幅された数の連結されたｄｈｆｒ及び所望のタンパク質の転写単位に起因して、増加した速度で組み換えタンパク質を産生し得る。増加する濃度のメトトレキサート（１～１０，０００ｎＭ）中でこれらの細胞株を増殖させる場合、所望のタンパク質を非常に高速に産生する新しい細胞株を得ることができる。

所望のタンパク質を産生する上記細胞株は、懸濁培養又は様々な固体支持体上で大規模に増殖させることができる。これらの支持体の例は、デキストランもしくはコラーゲンマトリックスに基づくマイクロキャリア、又は中空繊維もしくは様々なセラミック材料の形態の固体支持体である。細胞懸濁培養又はマイクロキャリア上で増殖される場合、上記細胞株の培養は、槽培養として又は長期に渡る条件培地の連続製造を用いた灌流培養のいずれかで行われ得る。したがって、本開示によれば、上記細胞株は、所望の組み換えタンパク質の製造のための工業工程の開発に十分適している。

精製及び製剤化
組み換えタンパク質は、所望のタンパク質と宿主細胞中又は細胞培養培地中の他の物質との間のサイズ、電荷、疎水性、可溶性、特異的親和性などの差異を利用する方法を含む、様々な生化学的及びクロマトグラフィー方法により濃縮され精製され得る。

このような精製の例は、例えば、固体支持体に固定された、Ｆｃ多量体のＦｃ部分又は別のＦｃ結合リガンド（例えば、プロテインＡ又はプロテインＧ）に特異的なモノクローナル抗体への組み換えタンパク質の吸着である。Ｆｃ多量体の支持体への吸着、洗浄及び脱離後に、タンパク質は、上記の特性に基づいた様々なクロマトグラフィー技術によりさらに精製され得る。精製工程の順序は、例えば、工程の容量及び選択性、支持体の安定性又は他の局面によって選択される。精製工程は、例えば、限定されないが、イオン交換クロマトグラフィー工程、免疫アフィニティークロマトグラフィー工程、アフィニティークロマトグラフィー工程、色素クロマトグラフィー工程、及びサイズ排除クロマトグラフィー工程であり得る。

ウイルス混入の理論的リスクを最小にするために、ウイルスの有効な不活化又は除去を可能にする追加の工程が、プロセスに含まれ得る。例えば、このような工程は、液体もしくは固体状態での熱処理、溶媒及び／もしくは界面活性剤での処理、可視もしくはＵＶスペクトルでの照射、ガンマ線照射、精製の間の分配、又はウイルス濾過（ナノ濾過）を含み得る。

本明細書に記載されるＦｃ多量体は、治療用途のために医薬製剤に製剤化され得る。医薬製剤の成分は、医薬製剤を提供するために、そこに添加され得る従来の生理学的に適合性の水性緩衝水溶液、場合により医薬品賦形剤に再懸濁又は溶解され得る。医薬製剤の成分は、全ての必要な薬学的、生理学的に適合性の賦形剤を既に含有していてもよく、そして医薬製剤を提供するために注射用水中に溶解されてもよい。

このような医薬担体及び賦形剤、さらには適切な医薬製剤の製造は、当該分野で周知である（例えば、「ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＰｅｐｔｉｄｅｓａｎｄＰｒｏｔｅｉｎｓ」Ｆｒｏｋｊａｅｒら、Ｔａｙｌｏｒ＆Ｆｒａｎｃｉｓ（２０００）又は「ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」第３版、Ｋｉｂｂｅら、ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｓｓ（２０００）を参照のこと）。特定の実施形態において、医薬組成物は、増量剤、緩衝剤、又は安定剤のような少なくとも１つの添加剤を含み得る。標準的な医薬製剤技術は、当業者に周知である（例えば、２００５Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ ＤｅｓｋＲｅｆｅｒｅｎｃｅ（登録商標）、ＴｈｏｍｓｏｎＨｅａｌｔｈｃａｒｅ：Ｍｏｎｖａｌｅ、ＮＪ、２００４；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｇｅｎｎａｒｏら編ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、２０００を参照のこと）。適切な医薬添加剤としては、例えば、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、スクロース、トレハロース、又はその他のような糖類、ヒスチジン、アルギニン、リジン、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、スレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン、アスパラギン、フェニルアラニン、プロリン、又はその他のようなアミノ酸、塩化ナトリウム又は他の塩のような等張条件を達成する添加剤、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、塩化カルシウム、又はその他のような安定剤、トリス（ヒドロキシメチルアミノメタン）のような生理的ｐＨ緩衝化剤などが挙げられる。特定の実施形態において、医薬組成物は、ｐＨ緩衝化試薬及び湿潤剤もしくは乳化剤を含有し得る。さらなる実施形態において、組成物は、保存料又は安定剤を含有し得る。特に、本明細書に記載されるＦｃ多量体を含む医薬製剤は、凍結乾燥された形態又は安定な可溶性形態で製剤化され得る。Ｆｃ多量体は、当該分野で公知の様々な手順により凍結乾燥され得る。凍結乾燥された製剤は、注射用滅菌水又は滅菌生理食塩水又は適切な緩衝液のような１つ又はそれ以上の薬学的に許容しうる希釈剤の添加により、使用前に再構成される。

Ｆｃ多量体の医薬製剤の組成物は、任意の薬学的に適切な手段により個体に送達され得る。様々な送達系が公知であり、そして任意の都合の良い経路により組成物を投与するために使用され得る。Ｆｃ多量体の医薬製剤の組成物は、従来の方法に従う静脈内又は非静脈内注射用に、又は経腸（例えば、経口、経膣、又は直腸）送達用に製剤化され得る。非静脈内投与については、Ｆｃ多量体の組成物は、皮下、筋肉内、関節内、腹腔内、脳内、髄腔内、肺内（例えば、噴霧）、鼻腔内、皮内、経口又は経皮投与のために製剤化され得る。一実施形態において、Ｆｃ多量体の組成物は、静脈内注射のために製剤化される。他の実施形態において、Ｆｃ多量体の組成物は、皮下、筋肉内、又は経皮投与のため、好ましくは皮下投与のために製剤化される。製剤は、注入により連続的に、又はボーラス注射により投与され得る。いくつかの製剤は、持続放出系を包含し得る。

Ｆｃ多量体の医薬製剤の組成物は、治療有効用量で患者に投与される。用語「治療有効」は、本明細書で使用されるように、許容されない有害副作用を生じる用量を教示することなく、所望の効果、免疫複合体介在性腎臓障害の重症度もしくは広がりの予防もしくは低減をもたらすため、又は検出可能な治療効果もしくは予防効果を示すために十分な用量を記載する。正確な用量は、例えば処方及び投与様式のような多くの因子に依存する。治療有効量は、細胞培養アッセイにおいて、又は動物モデル、例えば齧歯動物、ウサギ、イヌ、ブタ、又は霊長類モデルにおいて最初に見積もられ得る。次いでこのような情報は、ヒトにおける投与について有用な用量及び経路を決定するために使用され得る。

一実施形態において、１つの静脈内又は１つの非静脈内注射のためのＦｃ多量体の用量は、体重１ｋｇあたり１，０００ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり８００ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり６００ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり４００ｍｇ未満、体重１ｋｇあたり２００ｍｇ未満、又は体重１ｋｇあたり１００ｍｇ未満である。例えば、一実施形態において、Ｆｃ多量体の用量は、体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ～体重１ｋｇあたり約１，０００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約１ｍｇ～体重１ｋｇあたり約８００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約１ｍｇ～体重１ｋｇあたり約７００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約１ｍｇ～体重１ｋｇあたり約６００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約１ｍｇ～体重１ｋｇあたり約５００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約１ｍｇ～体重１ｋｇあたり約４００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約１ｍｇ～体重１ｋｇあたり約３００ｍｇ、又は体重１ｋｇあたり約３ｍｇ～体重１ｋｇあたり約２００ｍｇである。一実施形態において、Ｆｃ多量体の用量な、体重１ｋｇあたり約３ｍｇ～体重１ｋｇあたり約１，０００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約３ｍｇ～体重１ｋｇあたり約８００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約３ｍｇ～体重１ｋｇあたり約６００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約３ｍｇ～体重１ｋｇあたり約５００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約３ｍｇ～体重１ｋｇあたり約４００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約３ｍｇ～体重１ｋｇあたり約３００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約３ｍｇ～体重１ｋｇあたり約２００ｍｇ、又は体重１ｋｇあたり約３ｍｇ～体重１ｋｇあたり約１００ｍｇである。一実施形態において、Ｆｃ多量体の用量は、体重１ｋｇあたり約１０ｍｇ～体重１ｋｇあたり約５００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約１０ｍｇ～体重１ｋｇあたり約４００ｍｇ、体重１ｋｇあたり約１０ｍｇ～体重１ｋｇあたり約３００ｍｇ、又は体重１ｋｇあたり約１０ｍｇ～体重１ｋｇあたり約２００ｍｇである。

別の実施形態において、Ｆｃ多量体の医薬組成物は、単独で、又は他の治療剤と併せて投与される。一実施形態において、これらの薬剤は、同じ医薬の一部として組み込まれる。一実施形態において、Ｆｃ多量体は、ステロイドのような免疫抑制治療と併せて投与される。別の実施形態において、Ｆｃ多量体は、任意のＢ細胞もしくはＴ細胞調節剤又は免疫調節薬とともに投与される。

Ｆｃ多量体の投与頻度は、処方、投薬量、及び投与様式のような多くの因子に依存する。一実施形態において、Ｆｃ多量体の用量は、１日に複数回、１日に１回、１日おきに１回、３日ごとに１回、週に２回、週に１回、２週ごとに１回、３週ごとに１回、又は月に１回投与される。

治療効果
用語「治療効果」は、本明細書で使用されるように、それが特徴づけるパラメーターを改善することにより、またあるいは、その疾患／障害パラメターを全体で防止することにより疾患もしくは障害を処置することを記載する。例えば、治療効果は、（１）細胞培養モデルにおいてインビトロで、又は（２）ある用量のＦｃ多量体を投与することにより疾患のマウスモデルにおいてインビボで決定され得る。Ｆｃ多量体の用量は、１０～１０００ｍｇ／ｋｇ、例えば、２００ｍｇ／ｋｇであり得る。Ｆｃ多量体は、静脈内もしくは非静脈内注射又は静脈内注入により投与され得る。動物の臨床評価は、Ｆｃ多量体の投与後の最終時点まで所定の時点で行われ得る。臨床評価は、特定の疾患又は障害の臨床症状に基づいてスコア付けすることを含み得る。生物学的サンプルはまた、Ｆｃ多量体の投与後の最終時点まで所定の時点に動物から採取され得る。用語「生物学的サンプル」は、本明細書で使用されるように、例えば、組織、血液、及び尿を指す。次いで生物学的サンプルは、免疫複合体介在性腎臓障害のマーカー又は指標の改善について評価され得る。

用語「誘導する」は、本明細書で使用されるように、引き起こす、供給する、達成する、生成する、生じる、もたらす、又は促進することとして定義される。

好ましい実施形態において、Ｆｃ多量体の治療効果は、Ｆｃ多量体を用いた処置の際に抗ＧＢＭ糸球体腎炎のマウスモデルにおいて尿アルブミンレベルの減少により示され得る。抗ＧＢＭ糸球体腎炎のマウスモデルは、Ｏｔｔｅｎらにより記載される（Ｏｔｔｅｎｅｔａｌ．、ＪＩｍｍｕｎｏｌ２００９；１８３：３９８０－３９８８）。この研究において、著者は、ＦｃγＲ及び補体プロセスの両方が、抗ＧＢＭ疾患の新規な弱毒化受動的モデルにおける悪化した炎症に必須であると結論づけた。このモデルにおいて、腎炎下（ｓｕｂｎｅｐｈｒｉｔｏｇｅｎｉｃ）用量のウサギ抗ＧＢＭ抗体を動物に投与し、続いてウサギＩｇＧに対する固定用量のマウスｍＡｂを投与し、糸球体腎炎の誘導のためのタイミング及び投薬を可能にした。これにより、野生型マウスにおいて補体古典的経路を経た再現性のある補体活性化及びアルブミン尿が生じた。アルブミン尿は、ＦｃＲ－γ鎖^－／－であるマウス又はＣ３^－／－が減少したマウスにおいて検出されず、両方についての役割がこのモデルの病態形成におけるＦｃＲ－γ及び補体であることを示唆した。さらに、おそらく機能的古典的及びレクチン経路を欠いているＣ１ｑ^－／－及びＣ４^－／－マウスは、アルブミン尿を生じたことがわかったので、Ｏｔｔｅｎらは、代替補体経路の関与を示唆した。

古典的補体経路の活性化
古典的補体経路は、特定の抗体応答を媒介し、そして補体成分のカスケードにより媒介される。このカスケードは、主に抗原－抗体複合体により活性化される。この経路の初期成分はタンパク質複合体Ｃ１であり、これは１つのＣ１ｑ及びＣ１ｒ２ｓ２の２つのサブユニットから構成される。免疫グロブリンのＣ１ｑへの結合は、古典的補体経路の活性化からＣ１ｒ２ｓ２の触媒活性サブユニットへの活性化までの第一の工程をもたらす。活性化Ｃ１はＣ４をＣ４ａ及びＣ４ｂに、そしてＣ２をＣ２ａ及びＣ２ｂに切断する。次いでＣ２ａはＣ４ｂに結合してＣ４ｂ２ａを形成し、これはＣ３転換酵素としても知られる。Ｃ３転換酵素は、Ｃ３のＣ３ａ及びＣ３ｂへの切断を触媒する。次いでＣ３ｂは活性化Ｃ４ｂ２ａに結合してＣ４ｂ２ａ３ｂを形成し、これはＣ５転換酵素としても知られる。Ｃ５転換酵素は、Ｃ５をフラグメントＣ５ａ及びＣ５ｂに転換する。Ｃ５ｂは、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、及びＣ９成分と一緒に、Ｃ５ｂ－９複合体として知られる複合体を形成する。この複合体は、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）又は終末補体複合体（ＴＣＣ）としても知られ、そして標的細胞において膜貫通チャネルを形成し、細胞溶解をもたらす。

「完全古典的補体経路の活性化」は、本明細書において使用されるように、上記のような古典的補体経路全体の全行程の活性化として定義される。完全古典的補体経路の活性化は、古典的補体経路の活性化の最初の工程であるＦｃ多量体のＣ１ｑへの結合、及び典的補体経路における最終エフェクターであるＣ４ａ、Ｃ５ａ又は可溶性もしくは膜結合Ｃ５ｂ－９複合体の形成を調べることにより決定することができる。例えば、タンパク質がＣ１ｑに結合するが可溶性Ｃ５ｂ－９は本質的に形成されない、すなわち、それぞれのポジティブコントロールの５０％未満しか形成されない、好ましくは４０％未満、好ましくは３０％未満、好ましくは２０％未満、好ましくは１０％未満、より好ましくは５％未満しか形成されない場合、Ｆｃ多量体は、古典的補体経路の完全活性化を誘導しない。古典的補体経路の活性化はまた、Ｃ４ａの生成、Ｃ２の切断、又はＣ３転換酵素の形成を評価することにより決定され得る。例えば、Ｆｃ多量体は、Ｃ４ａの生成を誘導するがＣ２の切断を誘導しないか又はＣ３転換酵素の形成を誘導しない場合には、完全古典的補体経路の活性化を誘導しない。「誘導しない」は、それぞれのポジティブコントロールの５０％未満、好ましくは４０％未満、好ましくは３０％未満、好ましくは２０％未満、好ましくは１０％未満、より好ましくは５％未満が形成されることを意味する。

Ｆｃ多量体のＣ１ｑに結合する能力は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）のようなインビトロ結合アッセイにより決定され得る。例えば、９６ウェルプレートのウェルは、ヒトＣ１ｑでプレコーティングされ得、その後Ｆｃ多量体が加えられる。精製されたペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ結合体を加えてもよく、そして結合した結合体は発色性ペルオキシダーゼ基質、例えば３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を使用することにより可視化され得る。

Ｆｃ多量体による古典的補体経路の活性化は、インビトロアッセイにより決定することができ、そしてＣ４ａ及び可溶性Ｃ５ｂ－９の生成により示され得る。例えば、様々な濃度のＦｃ多量体を、所定の時間の間、全血又は血清中でインキュベートし、そしてＣ４ａ又は可溶性Ｃ５ｂ－９（ｓＣ５ｂ－９）の結果としての生成を、ＥＬＩＳＡのような免疫検出により決定することができる。使用されるＦｃ多量体の濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｌ～２ｍｇ／ｍｌ、例えば、０．０４ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、又は１．０ｍｇ／ｍｌであり得る。

Ｆｃ多量体により誘導されたＣ４ａ及びｓＣ５ｂ－９の生成は、古典的補体経路の強力な活性化因子である熱凝集ガンマグロブリン（ＨＡＧＧ）により誘導されるこれらの成分の生成と比較され得る。例えば、このアッセイは全血において行われ得る。いくつかの実施形態によれば、ＷＯ２０１７／１２９７３７に記載されるように、Ｆｃ多量体は、ＨＡＧＧにより誘導されたｓＣ５ｂ－９生成と比較して、５０％未満のｓＣ５ｂ－９生成、４０％未満のｓＣ５ｂ－９生成、３０％未満のｓＣ５ｂ－９生成、２０％未満のｓＣ５ｂ－９生成、又は１０％未満のｓＣ５ｂ－９生成を誘導する。一実施形態において、Ｆｃ多量体は、全血においてＨＡＧＧにより誘導されたｓＣ５ｂ－９生成と比較して、全血において２０％未満のｓＣ５ｂ－９生成を誘導する。別の実施形態において、Ｆｃ多量体は、全血においてＨＡＧＧにより誘導されたｓＣ５ｂ－９生成と比較して、全血において１０％未満のｓＣ５ｂ－９生成を誘導する。さらに別の実施形態において、Ｆｃ多量体はｓＣ５ｂ－９生成を誘導しない。

用語「熱凝集ＩｇＧを用いて活性化された正常ヒト血清」は、本明細書で使用されるように、ほとんど全てのＣ４の切断が熱凝集ＩｇＧを用いて誘導された正常ヒト血清サンプルを指す。

Ｆｃ多量体による古典的補体経路の活性化はまた、Ｃ２タンパク質を検出することにより決定され得る。Ｃ２タンパク質がＣ２ａ及びＣ２ｂに切断される場合、Ｃ２タンパク質のレベルは減少し、古典的補体経路の活性化を示す。様々な濃度のＦｃ多量体は、全血又は血清中で所定の時間の間、例えば２時間インキュベートされ得、その後Ｃ２タンパク質レベルが、免疫ブロット法のような免疫検出により決定され得る。古典的補体経路の活性化は、Ｃ２タンパク質の切断により示される。正常ヒト血清中のＣ２タンパク質のレベルを、Ｆｃ多量体とのプレインキュベーション後のＣ２タンパク質のレベルと比較して、Ｃ２切断の量を決定することができ、したがって、古典的補体経路の活性化を決定することができる。ＨＡＧＧのような古典的補体経路の既知の活性化因子を、正常ヒト血清においてＣ２タンパク質の大部分の切断を誘導するためのポジティブコントロールとして使用することができる。用語「大部分」は、本明細書において使用されるように、５０％より多く、６０％より多く、７０％より多く、８０％より多く、又は９０％より多くを含むと定義される。いくつかの実施形態において、ＷＯ２０１７／１２９７３７に記載されるように、Ｆｃ多量体は、Ｃ２タンパク質の大部分の切断を誘導しない。

Ｆｃ多量体による古典的補体経路の活性化は、Ｃ３転換酵素の形成を評価することによっても決定され得る。上記のように、Ｃ３転換酵素は、Ｃ２ａ及びＣ４ｂサブユニット（Ｃ４ｂ２ａ）からなる。Ｃ２タンパク質がＣ２ａ及びＣ２ｂに切断されない場合、Ｃ３転換酵素は形成され得ない。そのようにして、Ｃ３転換酵素形成は、Ｃ２タンパク質切断を決定するために上記のように評価され得る。いくつかの実施形態において、ＷＯ２０１７／１２９７３７に記載されるように、Ｆｃ多量体は、Ｃ３転換酵素の形成を誘導しない。

古典的補体経路の阻害
Ｆｃ多量体による古典的補体経路の阻害は、Ｃ５ａ及びｓＣ５ｂ－９生成の阻害を決定することにより、又はＣ２タンパク質の切断の阻害を決定することにより、決定され得る。様々な濃度のＦｃ多量体を、古典的補体経路の既知の活性化因子とともに全血又は血清中でインキュベートし得る。次いで、Ｆｃ多量体及び古典的補体経路の既知の活性化因子の存在下で生成されたｓＣ５ｂ－９のレベルを、古典的補体経路の既知の活性化因子のみを用いて生成されたｓＣ５ｂ－９のレベルと比較し得る。生成されたｓＣ５ｂ－９のレベルは上記のように決定され得る。使用されるＦｃ多量体の濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｌ～２ｍｇ／ｍｌ、例えば、０．０４ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、又は１．０ｍｇ／ｍｌであり得る。古典的補体経路の既知の活性化因子はＨＡＧＧであり得る。古典的補体経路の活性化因子のみの存在下で生成されたｓＣ５ｂ－９のレベルと比較して、Ｆｃ多量体及び古典的補体経路の活性化因子の存在下で生成されたｓＣ５ｂ－９のレベルが低いほど、Ｆｃ多量体によるｓＣ５ｂ－９生成の阻害は大きい。いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、ＨＡＧＧにより誘導されたｓＣ５ｂ－９生成と比較して、５０％より多くのｓＣ５ｂ－９生成、６０％より多くのｓＣ５ｂ－９生成、７０％より多くのｓＣ５ｂ－９生成、８０％より多くのｓＣ５ｂ－９生成又は９０％より多くのｓＣ５ｂ－９生成を阻害する。一実施形態において、ＷＯ２０１７／１２９７３７に記載されるように、Ｆｃ多量体は、ＨＡＧＧにより誘導されたｓＣ５ｂ－９生成の８０％より多くを阻害する。

用語「阻害する」は、本明細書で使用されるように、抑制すること、制限すること、防止すること、干渉すること、止めること、又は遮断することとして定義される。

Ｃ２タンパク質の切断の阻害は、同様に決定され得る。様々な濃度のＦｃ多量体を、古典的補体経路の既知の活性化因子とともに全血又は血清中でインキュベートし得る。古典的補体経路の既知の活性化因子のみの存在下でのＣ２タンパク質のレベルと比較して、Ｆｃ多量体及び古典的補体経路の既知の活性化因子の存在下でのＣ２タンパク質のレベルが高いほど、Ｆｃ多量体によるＣ２切断の阻害は高い。Ｃ２タンパク質のレベルは上記のように決定され得る。使用されるＦｃ多量体の濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｌ～２ｍｇ／ｍｌ、例えば、０．０４ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、又は１．０ｍｇ／ｍｌであり得る。古典的補体経路の既知の活性化因子はＨＡＧＧであり得る。いくつかの実施形態において、ＷＯ２０１７／１２９７３７に記載されるように、Ｆｃ多量体は、ＨＡＧＧによるＣ２タンパク質の大部分の切断を阻害する。

古典的補体経路の阻害はまた、抗体感作又はオプソニン化赤血球を使用して古典的補体経路についての溶血アッセイを使用して決定することもできる。例えば、ヒツジ赤血球は、ウサギ抗ヒツジ抗体を用いてオプソニン化され得る。正常ヒト血清（ＮＨＳ）は、オプソニン化赤血球の溶解を誘導する。Ｆｃタンパク質はＮＨＳとともにプレインキュベートされ、次いで赤血球に加えられ、そして
１時間３７℃でインキュベートされ得る。Ｆｃ構築物の濃度は、１～１０００μｇ／ｍｌ、例えば２．５、２５、５０、１２５、２５０、又は５００μｇ／ｍｌであり得る。あるいは、Ｆｃ単量体もまた、Ｆｃ構築物について示された濃度と同じ濃度でＮＨＳとともにプレインキュベートされ得る。インキュベーション後に、混合物を遠心分離し、そして上清の４１２ｎｍでの放出されたヘモグロビンの吸光度を測定することにより溶解の程度を決定することができる。

Ｆｃ多量体による古典的補体経路の阻害は、ＮＨＳを有するがＦｃ多量体を有しない混合物と比較して、Ｆｃ多量体を含有する混合物における赤血球の減少した溶解により示され得る。Ｆｃ多量体によるオプソニン化赤血球の溶解の阻害は、Ｆｃ単量体の存在下でのオプソニン化赤血球の溶解と比較され得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃ多量体は、Ｆｃ単量体と比較して、オプソニン化ヒツジ赤血球の溶解を阻害する。一実施形態において、ＷＯ２０１７／１２９７３７に記載されるように、Ｆｃ多量体は、Ｆｃ単量体と比較して、オプソニン化ヒツジ赤血球の溶解を７０％より多く阻害する。

本発明の実施形態において、Ｆｃ多量体は、古典的補体経路又は副補体経路の活性化を阻害することにより、免疫複合体介在性腎臓障害の病態形成を防止する。

抗体依存性細胞毒性の活性化
抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）とも呼ばれる抗体依存性細胞傷害は、抗体が標的細胞を被覆し、そしてエフェクター細胞を動員して非食作用機序により標的細胞死を誘導するプロセスである（Ｚａｈａｖｉｅｔａｌ．ＡｎｔｉｂｏｄｙＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ２０１８；１（１）：７－１２）。抗体は、それらの抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）部分を介して標的細胞表面上のそれらの特異的抗原に結合し、そしてそれらのフラグメント結晶化可能領域（Ｆｃ）部分を介してエフェクター細胞と相互作用し、それによりエフェクターを標的に連結する架橋として作用する。エフェクター細胞は、抗体に結合するＦｃ受容体（ＦｃＲ）の発現によりＡＤＣＣを行うことができる。ＡＤＣＣ活性は、好中球、単球及びＦｃ受容体保有（ＦｃＲ^＋）Ｔ及び非Ｔリンパ球について報告されている（Ｋａｔｚｅｔａｌ．、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ．１９８０；６５（１）：５５－６３）。公知のクラスのＦｃＲとしてはＦｃγＲ［ＩｇＧに結合する］；ＦｃαＲ［ＩｇＡに結合する］；及びＦｃεＲ［ＩｇＥに結合する］が挙げられる。ＦｃγＲは、骨髄系細胞による腫瘍細胞クリアランスのために最も重要であり、そして活性化するＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）、及び阻害性ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）受容体から構成される（Ｚａｈａｖｉら）。抗体のＦｃ部分にＦｃγＲが結合すると、受容体架橋及び下流シグナル伝播が起こる。これらのエフェクター細胞が活性化されると、それらは細胞傷害性顆粒放出、Ｆａｓシグナル伝達、又は反応性酸素種生成により抗体被覆標的細胞の死を媒介する。ＡＤＣＣにおいて利用される最もよく特徴づけされた機序は、エフェクター細胞顆粒からのパーフォリン及びグランザイムの放出である。

抗体依存性細胞毒性の阻害
高い生理学的レベルの免疫グロブリンＧは、ＡＤＣＣの誘導を目的とした抗体ベースのがん処置においてＡＤＣＣを強く阻害することが見いだされた（Ｐｒｅｉｔｈｎｅｒｅｔａｌ．ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ．２００６；４３（８）：１１８３－９３）。この知見の説明は、Ｆｃ受容体への結合についての血清ＩｇＧと治療用抗体との競合において見いだされた。この競合機序は、自己免疫及び炎症性疾患の処置において利用され得る。以前に言及されたように、高用量ＩＶＩＧの抗炎症性効果について提案された作用機序の１つは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）の遮断である。いくつかの実施形態において、本発明のＦｃ多量体は、Ｆｃ受容体に結合し、疾患抗体と競合し、そして抗体依存性細胞毒性を阻害することができる。

例となる実施形態
いくつかの態様において、本発明は、免疫複合体介在性腎臓障害の処置における使用のためのＦｃ多量体に関し、ここでＦｃ多量体は２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、ここで各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み；そしてここでＦｃ多量体は、補体系タンパク質に対するＦｃ多量体の結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。発明のいくつかの態様において、除外された変異は、Ｆｃ多量体のＩｇＧ１ＦｃドメインにおけるＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、及びＬ３２８Ｆの少なくとも１つである。本発明の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体はストラドマーではない。本発明のいくつかの態様において、多量体化ドメインはＩｇＧ２ヒンジを含まない。

いくつかの態様において、本発明は、免疫複合体介在性腎臓障害の処置における使用のためのＦｃ多量体に関し、ここでＦｃ多量体は２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、ここで各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み、そしてここで多量体化ドメインはＩｇＧ２ヒンジを含まない。本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体はストラドマーではない。

いくつかの態様において、本発明は、免疫複合体介在性腎臓障害の処置における使用のためのＦｃ多量体に関し、ここでＦｃ多量体は、２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、ここで各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み；そしてここでＦｃ多量体はストラドマーではない。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体は、６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含む六量体である。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体は、ＩｇＧＦｃポリペプチドと多量体化ドメインとの間にリンカー配列を更に含む。

本発明のいくつかの態様において、多量体化ドメインはＩｇＭ尾部を含む。本発明のいくつかの態様において、ＩｇＭ尾部は、ＩｇＭ尾部ドメイン由来の１８個又はそれ以下のアミノ酸を含む。本発明のいくつかの態様において、ＩｇＭ尾部は、配列番号１の残基２３３～２５０を含む。本発明のいくつかの態様において、ＩｇＭ尾部は、ＩｇＧＦｃポリペプチドのＣ末端の２３２アミノ酸配列セグメントに融合される。

本発明のいくつかの態様において、ＩｇＧＦｃポリペプチドはＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドを含む。本発明のいくつかの態様において、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、Ｎ末端において切断されたＣＨ２ドメイン及び／又はＣ末端において切断されたＣＨ３ドメインを含む。

本発明のいくつかの態様において、少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は、免疫グロブリンヒンジ領域、そのフラグメント、その変形、又はその改変された形態を更に含む。本発明のいくつかの態様において、少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖はＩｇＧ１ヒンジ領域を更に含む。本発明のいくつかの態様において、少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は、配列番号１の残基１～１５を含む免疫グロブリンヒンジ領域を更に含む。本発明のいくつかの態様において、少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は配列番号１を含む。

本発明のいくつかの態様において、少なくとも１つＦｃ融合ポリペプチド鎖は、配列番号２、又は配列番号２の残基２０～２６９を含む。本発明のいくつかの態様において、少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は、少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖のＩｇＧＦｃポリペプチドの位置３０９においてロイシンがシステインに変異した配列番号３を含む。本発明のいくつかの態様において、少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は、配列番号４、又は配列番号４の残基２０～２６９を含み、そして少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖のＩｇＧＦｃポリペプチドの位置３０９におけるロイシンがシステインに変異している。

本発明のいくつかの態様において、少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は、５つまでの保存的アミノ酸変化を有する。

本発明のいくつかの態様において、少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は、Ｆａｂポリペプチドを含まない。

いくつかの態様において、本発明は、免疫複合体介在性腎臓障害の処置における使用のための組み換えヒトＦｃ六量体に関し、ここで組み換えヒトＦｃ六量体は、６つのヒトＩｇＧ１Ｆｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのヒトＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、そして各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド及びヒトＩｇＭ尾部を含み、そしてさらにここで各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖におけるＩｇＭ尾部は、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの定常領域のＣ末端において２３２アミノ酸と融合した１８アミノ酸を含む。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ六量体は、補体系タンパク質に対するＦｃ六量体の結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。本発明のいくつかの態様において、除外された変異は、Ｆｃ六量体のＩｇＧ１ＦｃドメインにおけるＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、及びＬ３２８Ｆの少なくとも１つである。本発明の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ六量体はストラドマーではない。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ六量体の各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧ１ヒンジ領域をさらに含み、そしてＦａｂポリペプチドを含まない。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ六量体の各ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、位置３０９においてロイシンからシステインの変異を含む。

いくつかの態様において、本発明は、免疫複合体介在性腎臓障害の処置における使用のためのＦｃ多量体に関し、ここでＦｃ多量体は３つのＦｃ単量体を形成する４つのポリペプチドを含み、ここで第一のポリペプチドは第一のＦｃポリペプチド、第一のリンカー、及び第二のＦｃポリペプチドを含み、ここで第二のポリペプチドは、第三のＦｃポリペプチド、第二のリンカー及び第四のＦｃポリペプチドを含み、ここで第三のポリペプチドは第五のＦｃポリペプチドを含み、ここで第四のポリペプチドは第六のＦｃポリペプチドを含み、ここで第一のＦｃポリペプチド及び第三のＦｃポリペプチドは第一のＦｃ単量体を形成し、ここで第五のＦｃポリペプチド及び第二のＦｃポリペプチドは第二のＦｃ単量体を形成し、そしてここで第六のＦｃポリペプチド及び第四のＦｃポリペプチドは第三のＦｃ単量体を形成する。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体は、Ｆｃ多量体の補体系タンパク質に対する結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。本発明のいくつかの態様において、除外された変異は、Ｆｃ多量体のＩｇＧ１ＦｃドメインにおけるＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、及びＬ３２８Ｆの少なくとも１つである。本発明の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

いくつかの態様において、本発明は、Ｆｃ多量体を対象に投与することを含む、免疫複合体介在性腎臓障害を処置する方法に関し、ここでＦｃ多量体は、２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、ここで各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み、そしてここでＦｃ多量体は、補体系に対するＦｃ多量体の結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。本発明のいくつかの態様において、除外された変異は、Ｆｃ多量体のＩｇＧ１ＦｃドメインにおけるＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、及びＬ３２８Ｆの少なくとも１つである。本発明の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

いくつかの態様において、本発明は、Ｆｃ多量体を対象に投与することを含む、免疫複合体介在性腎臓障害を処置する方法に関し、ここでＦｃ多量体は２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、ここで各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み、そしてここで多量体化ドメインはＩｇＧ２ヒンジを含まない。本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体はストラドマーではない。

いくつかの態様において、本発明は、対象にＦｃ多量体を投与することを含む、免疫複合体介在性腎臓障害を処置する方法に関し、ここでＦｃ多量体は２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃポリペプチド鎖を含み、ここで各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含み；そしてここでＦｃ多量体はストラドマーではない。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体の多量体化ドメインはＩｇＭ尾部を含む。本発明のいくつかの態様において、ＩｇＭ尾部は配列番号１の残基２３３～２５０を含む。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体の少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧヒンジ領域を含み、かつＦａｂポリペプチドを含まない。本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体の少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は、ＩｇＧ１ヒンジ領域及びＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドを含む。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体の少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は、配列番号１又は配列番号３を含む。本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体の少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は配列番号３を含み、そして少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖のＩｇＧＦｃポリペプチドの位置３０９においてロイシンはシステインに変異している。本発明のいくつかの態様において、少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は配列番号４を含み、そして少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖のＩｇＧＦｃポリペプチドの位置３０９においてロイシンはシステインに変異している。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体の少なくとも１つのＦｃ融合ポリペプチド鎖は、５つまでの保存的アミノ酸変化を有する。

いくつかの態様において、本発明は、組み換えヒトＦｃ六量体を対象に投与することを含む、免疫複合体介在性腎臓障害を処置する方法に関し、ここで組み換えヒトＦｃ六量体は６つのヒトＩｇＧ１Ｆｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのヒトＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、そして各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド及びヒトＩｇＭ尾部を含み、そしてさらにここで各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖におけるＩｇＭ尾部は、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの定常領域のＣ末端における２３２アミノ酸と融合した１８アミノ酸を含む。

本発明のいくつかの態様において、組み換えヒトＦｃ六量体は、補体系タンパク質に対する組み換えヒトＦｃ六量体の結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。本発明のいくつかの態様において、除外された変異は、Ｆｃ六量体のＩｇＧ１ＦｃドメインにおけるＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、及びＬ３２８Ｆの少なくとも１つである。本発明の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ六量体の各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖はＩｇＧ１ヒンジ領域を含み、かつＦａｂポリペプチドを含まない。

本発明のいくつかの態様において、ｆｃ六量体の各ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、位置３０９においてロイシンからシステインへの変異を含む。

いくつかの態様において、本発明は、Ｆｃ多量体を対象に投与することを含む、免疫複合体介在性腎臓障害を処置する方法に関し、ここでＦｃ多量体は、３つのＦｃ単量体を形成する４つのポリペプチドを含み、ここで第一のポリペプチドは、第一のＦｃポリペプチド、第一のリンカー、及び第二のＦｃポリペプチドを含み、ここで第二のポリペプチドは、第三のＦｃポリペプチド、第二のリンカー、及び第四のＦｃポリペプチドを含み、ここで第三のポリペプチドは第五のＦｃポリペプチドを含み、ここで第四のポリペプチドは第六のＦｃポリペプチドを含み、ここで第一のＦｃポリペプチド及び第三のＦｃポリペプチドは、第一のＦｃ単量体を一緒に形成し、ここで第五のＦｃポリペプチド及び第二のＦｃポリペプチドは、第二の単量体を一緒に形成し、そしてここで第六のＦｃポリペプチド及び第四のＦｃポリペプチドは、第三のＦｃ単量体を形成する。

いくつかの態様において、Ｆｃ多量体は、補体系タンパク質に対するＦｃ多量体の結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している。本発明のいくつかの態様において、除外された変異は、Ｆｃ多量体のＩｇＧ１ＦｃドメインにおけるＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、及びＬ３２８Ｆの少なくとも１つである。本発明の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＮ２９７Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＤ２６５Ａである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｇ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ｗ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２８Ｆ、及びＧ２３６の欠失である。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、及びＬ３２８Ｆである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、及びＳ３２４Ｔである。本発明の別の好ましい態様において、除外された変異は、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ及びＮ２９７Ａである。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体又は組み換えヒトＦｃ六量体は、インビトロで補体依存性細胞傷害及び抗体依存性細胞傷害を阻害する。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体又は組み換えヒトＦｃ六量体は、古典的補体経路又は副補体経路の活性化を阻害する。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体又は組み換えヒトＦｃ六量体は、免疫複合体介在性腎臓障害のマウスモデルにおいてインビボで病態形成を阻害する。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体又は組み換えヒトＦｃ六量体の少なくとも１つのＦｃ単量体又はＦｃ融合単量体は、Ｆｃγ受容体に結合することができる。本発明のいくつかの態様において、第一のＦｃ単量体又はＦｃ融合単量体は、第一のＦｃγ受容体に結合することができ、第二のＦｃ単量体又は第二のＦｃ融合単量体は、第二のＦｃγ受容体に結合することができる。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体又は組み換えヒトＦｃ六量体は、免疫複合体介在性腎臓障害の処置において使用され、ここで免疫複合体介在性腎臓障害は、腎炎、糸球体腎炎、間質性腎炎、抗糸球体基底膜抗体（抗ＧＢＭ）病、グッドパスチャー症候群、自己免疫腎疾患、ループス腎炎、膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、又はブライト病のうちの１つである。本発明のいくつかの態様において、免疫複合体介在性腎臓障害はループス腎炎である。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体又は組み換えヒトＦｃ六量体は、静脈内、皮下、経口、髄腔内、又は噴霧により肺内に投与される。

本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体又は組み換えヒトＦｃ六量体は、約３ｍｇ／ｋｇ～２００ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ量で対象に投与される。本発明のいくつかの態様において、Ｆｃ多量体又は組み換えヒトＦｃ六量体は、約２５ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ量で投与される。

実施例１：ＩｇＧ１Ｆｃ多量体の製造
ヒトＩｇＭ尾部の１８アミノ酸残基（ＰＴＬＹＮＶＳＬＶＭＳＤＴＡＧＴＣＹ配列番号９）を、ヒトＩｇＧ１Ｆｃフラグメントの定常領域（アミノ酸残基２１６～４４７、ＥＵナンバリング；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０１８５７）のＣ末端に融合させることにより、Ｆｃ－μＴＰを生成した。Ｆｃ－μＴＰのＬｅｕ残基３０９（ＥＵナンバリング）をＣｙｓに変異することによりＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃを生成した。Ｆｃ－μＴＰ及びＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９ＣをコードするＤＮＡフラグメントを合成し、そしてＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ＭＡ、ＵＳＡ）によるヒト細胞発現のためにコドン最適化した。ＤＮＡフラグメントを、ｐＲｈＧ４哺乳動物細胞発現ベクターのＡｐａＬＩ及びＸｂａＩ部位にＩｎＴａｇポジティブ選択法（Ｃｈｅｎ、ＣＧｅｔａｌ、（２０１４）．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ４２（４）：ｅ２６；ＪｏｓｔｏｃｋＴ、ｅｔａｌ（２００４）．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２８９：６５－８０）を使用してクローン化した。手短には、Ｆｃ－μＴＰ及びＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃフラグメントを、ＡｐａＬＩ及びＡｓｃＩ消化により単離した。ＢＧＨｐｏｌｙＡ付加部位（ＢＧＨｐＡ）及びクロラムフェニコール耐性遺伝子（ＣｍＲ）から構成されるＣｍＲＩｎＴａｇアダプターも、ＡｓｃＩ及びＳｐｅＩ消化により単離した（Ｃｈｅｎ、ＣＧｅｔａｌ、（２０１４）．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ４２（４）：ｅ２６）。Ｆｃ分子及びＣｍＲＩｎＴａｇアダプターを、ｐＲｈＧ４ベクターのＡｐａＬＩ及びＸｂａＩ部位にＴ４ＤＮＡリガーゼを使用して同時クローン化（ｃｏ－ｃｌｏｎｅｄ）した。ポジティブクローンを、３４μｇ／ｍｌクロラムフェニコールを含有する寒天プレート上で選択した。ミニプレップ（Ｍｉｎｉｐｒｅｐ）プラスミドＤＮＡを、ＱＩＡｐｒｅｐＳｐｉｎミニプレップキット（ＱＩＡＧＥＮ、Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して精製し、そして配列をＤＮＡ配列決定分析により確認した。制限酵素及びＴ４ＤＮＡリガーゼはＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏＬａｂｓ（ＭＡ、ＵＳＡ）から購入された。

Ｅｘｐｉ２９３^ＴＭ発現系（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＮＹ、ＵＳＡ）を使用した一過性トランスフェクションを、製造者の指示に従って行った。手短には、プラスミドＤＮＡ（０．８μｇ）を０．４ｍｌＯｐｔｉ－ＭＥＭ中で希釈し、そして穏やかに混合した。Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ２９３試薬（２１．６μＬ）を０．４ｍｌＯｐｔｉ－ＭＥＭ中で希釈し、穏やかに混合し、そして５分間室温でインキュベートした。次いで希釈したＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅを希釈したＤＮＡに加え、穏やかに混合し、そして室温で２０～３０分間インキュベートし、ＤＮＡ－Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ複合体を形成させた。次いでＤＮＡ－Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ複合体を、Ｅｘｐｉ２９３細胞６．８ｍｌ（２ｘ１０^７細胞）を入れた５０ｍｌバイオリアクターチューブに加えた。細胞を３７℃で８％ＣＯ_２のインキュベーターで２５０ｒｐｍで振盪しながら約１６～１８時間インキュベートした。４０μｌエンハンサー１（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＮＹ、ＵＳＡ）、４００μｌエンハンサー２（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＮＹ、ＵＳＡ）及び２００μｌＬｕｃｒａＴｏｎｅ^ＴＭＬｕｐｉｎからなるマスター混合物を調製し、そして各バイオリアクターチューブに加えた。細胞を更に４日間３７℃、８％ＣＯ_２のインキュベーターで２５０ｒｐｍで振盪しながらインキュベートした。４０００ｒｐｍで２０分間の上清の遠心分離からタンパク質を採取し、そしてきれいなチューブ中に０．２２μｍフィルターを使用して濾過した後、ＨＰＬＣ定量及び精製を行った。

ＩｇＧ１Ｆｃ多量体を製造するために、組み換えヒトＩｇＧ１ＦｃのＣ末端を、ＩｇＭの１８アミノ酸の尾部に融合した。ＩｇＭ尾部（μＴＰ）は、五量体及び六量体の形成を促進する。残基３０９におけるロイシンからシステインへの点変異を有するＦｃ融合タンパク質（Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ）を、野生型（ＷＴ）ヒトＩｇＧ１Ｆｃペプチド（Ｆｃ－μＴＰ）又はそれらのバリアントのいずれかを用いて製造した。ロイシン３０９からシステインへの点変異（Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ）は、Ｆｃ分子間の共有結合の形成に起因して、ＷＴ（Ｆｃ－μＴＰ）よりも安定な構造を生じると期待された。この安定化はＪ鎖無しで達成される。

Ｆｃ－μＴＰ及びＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ融合単量体サブユニットは、以下の領域（残基番号はそれぞれ配列番号２及び４における残基番号を指す）を含む２つのペプチドから生じる：
シグナルペプチド残基１～１９
ヒトＩｇＧ１のヒンジ領域残基２０～３４
ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域残基３５～２５１
ヒトＩｇＭの尾部残基２５２～２６９
Ｆｃ－μＴＰ及びＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃペプチドの成熟形態についてのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号１及び配列番号３として提供する。核酸コード配列をそれぞれ配列番号９５（ＷＯ２０１７／１２９７３７の配列番号９に対応する）及び配列番号９６（ＷＯ２０１７／１２９７３７の配列番号１０に対応する）として提供する。

発現の間、シグナルペプチドは切断されて、成熟Ｆｃ－μＴＰ及びＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ融合ペプチドを形成する。未成熟融合ペプチドの配列をそれぞれ配列番号２及び４に示す。

多量体Ｆｃタンパク質のＳＤＳ－ＰＡＧＥは、Ｆｃ構築物の単量体、二量体、三量体、四量体、五量体及び六量体に対応する各調製物についてのはしご状パターンを示した。Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃは、予測される六量体位置に主要なバンドを有しているが、Ｆｃ－μＴＰは有しておらず、これは破壊的な電気泳動緩衝条件下でのより安定な構造と一致していた。より高次の構造、最も可能性が高いのは六量体の二量体、もまたＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃについて明白であった。以下の実施例について、この物質の六量体フラクションを精製した。

組み換えヒトＩｇＧ１Ｆｃ単量体（配列番号１の残基１～２３２）もまた製造し、対照として使用した。

実施例４において使用される三価Ｆｃ構築物のために、ＦｃＤＮＡ配列をヒトＩｇＧ１Ｆｃから誘導した。隆起、空隙及び電荷変異を親Ｆｃ配列において置換した。ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖由来のリーダーペプチドをコードするＤＮＡを、５’領域に結合させた。当然のことながら、様々なリーダーペプチドのいずれか１つを本発明に関連して使用してもよい。リーダーペプチドは、通常は小胞体内腔において切り取られる。５’末端ＥｃｏＲ１部位を含有する１１ヌクレオチド配列を、ＡＴＧ開始コドンの上流に加えた。３’末端Ｘｈｏ１部位を含有する３０ヌクレオチド配列を、３’末端ＴＧＡ翻訳終止コドンの下流に加えた。ＤＮＡ配列を哺乳動物細胞における発現のために最適化し、そしてｐｃＤＮＡ３．４哺乳動物発現ベクターにクローン化した。

実施例４において使用される分泌されたポリペプチドのアミノ酸配列を以下に示す。

ＳＩＦ１
配列番号１０７又は１０８
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(K)
配列番号１１３又は１１４
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(K)
ＣＣ
配列番号１２４
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVDGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
配列番号１２５
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDKLTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
Ｑ１
配列番号１２２
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMASRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVDGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
配列番号１２６
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMASRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDKLTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

Ｆｃ構築物のタンパク質発現のために、上に示したポリペプチド対を発現するＤＮＡプラスミド構築物の２つををＥＸＰＩ２９３細胞（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にトランスフェクトした。リポソームトランスフェクションを使用して、プラスミドＤＮＡをＥＸＰＩ２９３細胞に導入した。トランスフェクトしたプラスミド構築物の総量を固定したが、異なるプラスミド構築物の比を所望の構築物の収量を最大にするように変えた。

タンパク質発現後、発現された構築物を、プロテインＡベースのアフィニティーカラムクロマトグラフィーにより細胞培養上清から精製した。培地上清を、ＰｏｒｏｓＭａｂＣａｐｔｕｒｅＡ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）カラム上にＡＫＴＡＡｖａｎｔ分取クロマトグラフィーシステム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してロードした。次いで捕捉されたＦｃ構築物を、リン酸緩衝化食塩水（低濃度塩洗浄）、続いて５００ｍＭＮａＣｌを添加したリン酸緩衝化食塩水（高濃度塩洗浄）を用いて洗浄した。Ｆｃ構築物を１００ｍＭグリシン、１５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ３緩衝液で溶出した。カラムから出てきたタンパク質溶液に１ＭＴＲＩＳｐＨ７．４を加えて中和し、最終濃度１００ｍＭとした。Ｆｃ構築物を、Ｐｏｒｏｓ（登録商標）ＸＳ樹脂（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号４４０４３３６）を使用するイオン交換クロマトグラフィーによりさらに分画した。このカラムを１０ｍＭＭＥＳ、ｐＨ６（緩衝液Ａ）を用いて予め平衡化し、そしてサンプルを、１０ｍＭＭＥＳ、５００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６（緩衝液Ｂ）に対する勾配を用いて溶出した。

精製されたＦｃ構築物をＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）により還元条件下及び非還元条件下の両方で分析し、続いてクーマシーブルー染色を行って期待されたサイズのタンパク質バンドの存在を確認した。

実施例２：Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＣＨＯ）は抗ＧＢＭ糸球体腎炎を阻害する
ＣＨＯ細胞から生成されたＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ［Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＣＨＯ）］の効果を、抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）糸球体腎炎のインビボモデルにおいて測定した。

手短には、０日目に抗ＧＢＭ糸球体腎炎をＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて、ポリクローナルウサギ抗ＧＢＭ抗体１ｍｇを静脈内（ｉ．ｖ．、尾静脈）注射し、その後、マウスモノクローナル抗ウサギＩｇＧ（ハイブリドーマＣＲＬ－１７５３（ＡＴＣＣ）から製造されたＭｓαＲｂＩｇＧ）２ｍｇを６日目に腹腔内（ｉ．ｐ．）注射することにより誘導した。マウスに、ＰＢＳ又は５０、１００もしくは２００ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃを６日目にｉ．ｐ．注射し、これはＭｓαＲｂＩｇＧｍＡｂの注射の約１時間前であった。ＭｓαＲｂの注射後に、マウスを個別に代謝ケージ（Ｔｅｃｎｉｐｌａｓｔ）に入れて、２４時間の間尿を集めた。尿アルブミンレベルをＥＬＩＳＡキット（ＢｅｔｈｙｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）により測定し、マウスあたりのアルブミン尿を２４時間あたりのμｇとしてプロットした。

図１に示されるように、尿アルブミンレベルは、試験した用量の全てにおいてＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃで処置されたマウスにおいて有意に減少した（ＰＢＳ対２００ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．００１６；ＰＢＳ対１００ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．００３６；ＰＢＳ対５０ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．０１０１）。表１は測定された値を示す。

実施例３：Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ及び減少したＣ１ｑ結合能を有するそのバリアントは抗ＧＢＭ糸球体腎炎を阻害する
ＣＨＯ［Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＣＨＯ）］及びＨＥＫ２９３細胞［Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＨＥＫ）］から生成されたＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ及び減少したＣ１ｑ結合能を有するその変異体（ＨＥＫ２９３細胞から生成されたＫ３２２Ａ）の効果を、抗ＧＢＭ糸球体腎炎のインビボモデルにおいて決定した。

手短には、０日目にポリクローナルウサギ抗ＧＢＭ抗体１ｍｇを静脈内（ｉ．ｖ．、尾静脈）注射し、その後、６日目にマウスモノクローナル抗ウサギＩｇＧ（ハイブリドーマＣＲＬ－１７５３（ＡＴＣＣ）から製造されたＭｓαＲｂＩｇＧ）２ｍｇを腹腔内（ｉ．ｐ．）注射することによりＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて抗ＧＢＭ糸球体腎炎を誘導した。ＭｓαＲｂＩｇＧｍＡｂの注射の約１時間前に、マウスにＰＢＳ、５０ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＣＨＯ）、Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＨＥＫ）又はＫ３２２Ａをｉ．ｐ．注射した。ＭｓαＲｂの注射後に、マウスを個別に代謝ケージ（Ｔｅｃｎｉｐｌａｓｔ）に入れて、２４時間の間尿を集めた。尿アルブミンレベルをＥＬＩＳＡキット（ＢｅｔｈｙｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）により測定し、マウスあたりのアルブミン尿を２４時間あたりのμｇとしてプロットした。

図２に示されるように、尿アルブミンレベルは、全ての形態のＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃを用いて処置されたマウスにおいて有意に減少した（ＰＢＳ対ＣＨＯ細胞から生成されたＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．００３８；ＰＢＳ対ＨＥＫ２９３細胞からのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．００１２；ＰＢＳ対Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９ＣＫ３２２Ａバリアント：ｐ＝０．００１１）。表２は測定された値を示す。

実施例４：Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ、ＣＣＳＩＦ１、及びＱ１は抗ＧＢＭ糸球体腎炎を阻害する
ＨＥＫ２９３細胞から生成されたＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ、すなわちＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＨＥＫ）、及び三価Ｆｃ多量体（実施例１に記載されるとおり）ＣＣ、ＳＩＦ１及びＱ１の効果を、抗ＧＢＭ糸球体腎炎のインビボモデルにおいて決定した。

手短には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて０日目にポリクローナルウサギ抗ＧＢＭ抗体１ｍｇを静脈内（ｉ．ｖ．、尾静脈）注射し、その後、６日目にマウスモノクローナル抗ウサギＩｇＧ（ハイブリドーマＣＲＬ－１７５３（ＡＴＣＣ）から製造されたＭｓαＲｂＩｇＧ）２ｍｇを腹腔内（ｉ．ｐ．）注射することにより抗ＧＢＭ糸球体腎炎を誘導した。ＭｓαＲｂＩｇＧｍＡｂの注射の約１時間前に、マウスにＰＢＳ、Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＨＥＫ）又は３つの三価Ｆｃ多量体（ＣＣ、ＳＩＦ１及びＱ１）のうちの１つを５０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．注射した。ＭｓαＲｂの注射後に、マウスを個別に代謝ケージ（Ｔｅｃｎｉｐｌａｓｔ）に入れて、２４時間の間尿を集めた。尿アルブミンレベルをＥＬＩＳＡキット（ＢｅｔｈｙｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて測定し、マウスあたりのアルブミン尿を２４時間あたりのμｇとしてプロットした。

図３に示されるように、尿アルブミンレベルは、Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ又は三価Ｆｃ多量体を用いて処置されたマウスにおいて有意に減少した。（ＰＢＳ対Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．０２２０；ＰＢＳ対ＣＣ：ｐ＝０．０１９０；ＰＢＳ対ＳＩＦ１：ｐ＝０．０２０８；ＰＢＳ対Ｑ１：ｐ＝０．０１１９）。表３は測定された値を示す。

実施例５：Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃは用量依存的に抗ＧＢＭ糸球体腎炎を阻害する
ＨＥＫ２９３細胞から生成されたＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ［Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ（ＨＥＫ）］の用量－応答効果を、抗糸球体基底膜（ＧＢＭ）糸球体腎炎のインビボモデルにおいて決定した。

手短には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて０日目にポリクローナルウサギ抗ＧＢＭ抗体１ｍｇを静脈内（ｉ．ｖ．、尾静脈）注射し、その後、６日目にマウスモノクローナル抗ウサギＩｇＧ（ハイブリドーマＣＲＬ－１７５３（ＡＴＣＣ）から製造されたＭｓαＲｂＩｇＧ）２ｍｇを腹腔内（ｉ．ｐ．）注射することにより抗ＧＢＭ糸球体腎炎を誘導した。６日目にマウスに、ＰＢＳ又は１、５、１０、２０もしくは５０ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃを腹腔内注射した。これはＭｓαＲｂＩｇＧｍＡｂの注射の約１時間前だった。ＭｓαＲｂの注射後に、マウスを個別に代謝ケージ（Ｔｅｃｎｉｐｌａｓｔ）に入れて、２４時間の間尿を集めた。尿アルブミンレベルをＥＬＩＳＡキット（ＢｅｔｈｙｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）により測定し、マウスあたりのアルブミン尿を２４時間あたりのμｇとしてプロットした。

図４に示されるように、Ｆｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃは、用量依存性様式で抗ＧＢＭ抗体誘導ｗｗｗｗｗ糸球体腎炎を阻害した（ＰＢＳ対５０ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．０１９４；ＰＢＳ対２０ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．０２０１；ＰＢＳ対１０ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．０２８６；ＰＢＳ対５ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．２５０５；ＰＢＳ対１ｍｇ／ｋｇのＦｃ－μＴＰ－Ｌ３０９Ｃ：ｐ＝０．７８７５）。表４は測定された値を示す。

Claims

免疫複合体介在性腎臓障害の処置における使用のためのＩｇＧＦｃ多量体であって、ここでＦｃ多量体は、Ｃ１ｑに対するＦｃ多量体の結合親和性を増加させる任意の変異を欠失している、上記Ｆｃ多量体。
欠失した変異は、Ｆｃ多量体のＩｇＧ１ＦｃドメインにおけるＳ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｎ２９７Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ２３４Ｖ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ｗ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｔ２９９Ａ、及びＬ３２８Ｆの少なくとも１つである、請求項１に記載の使用のためのＦｃ多量体。
Ｆｃ多量体は２～６つのＩｇＧＦｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は２つのＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖はＩｇＧＦｃポリペプチド及び多量体化ドメインを含む、請求項１又は請求項２に記載の使用のためのＩｇＧＦｃ多量体。
Ｆｃ多量体化ドメインはＩｇＧ２ヒンジを含まない、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のためのＦｃ多量体。
Ｆｃ多量体はストラドマーではない、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用のためのＦｃ多量体。
Ｆｃ多量体は６つのヒトＩｇＧ１Ｆｃ融合単量体を含み、ここで各Ｆｃ融合単量体は、２つのヒトＦｃ融合ポリペプチド鎖を含み、そして各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド及びヒトＩｇＭ尾部を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用のためのＦｃ多量体。
各Ｆｃ融合ポリペプチド鎖におけるＩｇＭ尾部は、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの定常領域のＣ末端で２３２アミノ酸と融合した１８アミノ酸を含む、請求項６に記載のＦｃ多量体。
各ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドは、位置３０９にロイシンからシステインへの変異を含む、請求項６又は請求項７に記載の使用のためのＦｃ多量体。
Ｆｃ融合ポリペプチド鎖は配列番号３の配列を含む、請求項８に記載の使用のためのＦｃ多量体。
Ｆｃ多量体は、３つのＦｃ単量体を形成する４つのポリペプチドを含み、ここで第一のポリペプチドは、第一のＦｃポリペプチド、第一のリンカー、及び第二のＦｃポリペプチドを含み、ここで第二のポリペプチドは、第三のＦｃポリペプチド、第二のリンカー、及び第四のＦｃポリペプチドを含み、ここで第三のポリペプチドは第五のＦｃポリペプチドを含み、ここで第四のポリペプチドは第六のＦｃポリペプチドを含み、ここで第一のＦｃポリペプチド及び第三のＦｃポリペプチドは第一のＦｃ単量体を形成し、ここで第五のＦｃポリペプチド及び第二のＦｃポリペプチドは第二のＦｃ単量体を形成し、そしてここで第六のＦｃポリペプチド及び第四のＦｃポリペプチドは第三のＦｃ単量体を形成する、請求項１又は請求項２に記載の使用のためのＦｃ多量体。
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは同一であり、そしてさらに、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは同一である、請求項１０に記載の使用のためのＦｃ多量体。
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは配列番号１２０を含み、そして第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは配列番号１１９を含むか；又は第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは配列番号１２５を含み、そして第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは配列番号１２４を含むか；又は第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは配列番号１２６を含み、そして第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは配列番号１２２を含むか；又は第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは配列番号１０７もしくは配列番号１０８を含み、そして第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは配列番号１１３もしくは配列番号１１４を含む、請求項１１に記載の使用のためのＦｃ多量体。
免疫複合体介在性腎臓障害は、腎炎、糸球体腎炎、間質性腎炎、抗糸球体基底膜抗体（抗ＧＢＭ）病、グッドパスチャー症候群、自己免疫腎疾患、ループス腎炎、膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、又はブライト病のうちの１つである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用のためのＦｃ多量体。
Ｆｃ多量体は、補体依存性細胞傷害及び／又は抗体依存性細胞性細胞傷害を阻害する、請求項１～１３のいずれか１項に記載の使用のためのＦｃ多量体。