JP2022535356A - 多形性神経膠芽腫を処置するための免疫療法組成物 - Google Patents
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Abstract
本開示は、多形性神経膠芽腫（ＧＢＭ）を処置するために有用な方法及び組成物、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）コアタンパク質及びヒトサイトメガロウイルスエピトープ、ｇＢ及びｐｐ６５を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む、ＧＭ－ＣＳＦを配合した組成物を提供し、これは、少なくとも１０ｐｇのｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇの用量で、ＧＢＭ患者における抗ＨＣＭＶ免疫の調節不全を後退させる。【選択図】なし
Description
[0002]本発明は、免疫腫瘍学、特に多形性神経膠芽腫の処置に使用するためのウイルス様粒子ワクチンの分野にある。
[0003]多形性膠芽腫（ＧＢＭ）は、脳腫瘍の最も一般的で侵襲性の原発性形態であり、生存期間中央値は、処置なしでは３か月にすぎない。ＧＢＭは、米国及び欧州において毎年１００，０００人当たり２～３人の成人に罹患する。米国のみでは、毎年、ＧＢＭは、２０，０００超の人において診断され、約１５，０００人の死亡の原因となっている。
[0004]本開示は、ＧＢＭの処置のための有用な組成物及び方法を提供する。より詳細には、本開示は、ＨＣＭＶ由来の抗原を発現するウイルス様粒子（ＶＬＰ）及びその使用方法を提供する。本発明の組成物は、ＨＣＭＶ抗原ｇＢ及びｐｐ６５を発現するＶＬＰを含む。
[0005]本発明の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アジュバントとして顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ－ＣＳＦ」）を配合したｐｐ６５－ｇＢ ＶＬＰを含む。
[0006]本発明の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも約０．４μｇのｐｐ６５及び約２００μｇのＧＭ－ＣＳＦの用量で、アジュバントとしてＧＭ－ＣＳＦを配合したｐｐ６５－ｇＢ ＶＬＰを含む。本発明の他の実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも約１０μｇのｐｐ６５及び約２００μｇのＧＭ－ＣＳＦの用量で、アジュバントとしてＧＭ－ＣＳＦを配合したｐｐ６５－ｇＢ ＶＬＰを含む。
[0007]本開示は、また、ＧＢＭに罹患している患者を処置する方法であって、皮内注入によって本発明の組成物を投与することを含む、方法を提供する。好ましい実施形態において、注入は、別個の部位における２つの半用量注入として投与される。特に好ましい実施形態において、注入は、月ベースで、別個の部位における２つの半用量注入として投与される。さらなる実施形態において、本開示は、ＧＢＭに罹患している患者を処置する方法を提供し、ここで、患者は、ＨＣＭＶに対する免疫調節不全を示し、方法は、少なくとも約１０μｇのｐｐ６５、及び約２００μｇのＧＭ－ＣＳＦの用量の本発明の組成物の投与を含む。
[0008]本発明の他の特徴、目的及び利点は以下の詳細な説明において明らかである。しかしながら、詳細な説明は、本発明の実施形態を示すものではあるが、これは例示のためのものにすぎず、限定するものではないということは理解されるべきである。本発明の範囲内にある種々の変化及び改変は、詳細な説明から、当技術分野の当業者には明らかになるであろう。
[0009]以下は本明細書で言及する配列のリストである：
[0010]配列番号１はＭＭＬＶ－Ｇａｇアミノ酸配列である
MGQTVTTPLSLTLGHWKDVERIAHNQSVDVKKRRWVTFCSAEWPTFNVGWPRDGTFNRDLITQVKIKVFSPGPHGHPDQVPYIVTWEALAFDPPPWVKPFVHPKPPPPLPPSAPSLPLEPPRSTPPRSSLYPALTPSLGAKPKPQVLSDSGGPLIDLLTEDPPPYRDPRPPPSDRDGNGGEATPAGEAPDPSPMASRLRGRREPPVADSTTSQAFPLRAGGNGQLQYWPFSSSDLYNWKNNNPSFSEDPGKLTALIESVLITHQPTWDDCQQLLGTLLTGEEKQRVLLEARKAVRGDDGRPTQLPNEVDAAFPLERPDWDYTTQAGRNHLVHYRQLLLAGLQNAGRSPTNLAKVKGITQGPNESPSAFLERLKEAYRRYTPYDPEDPGQETNVSMSFIWQSAPDIGRKLERLEDLKNKTLGDLVREAEKIFNKRETPEEREERIRRETEEKEERRRTEDEQKEKERDRRRHREMSKLLATVVSGQKQDRQGGERRRSQLDRDQCAYCKEKGHWAKDCPKKPRGPRGPRPQTSLLTLDD
MGQTVTTPLSLTLGHWKDVERIAHNQSVDVKKRRWVTFCSAEWPTFNVGWPRDGTFNRDLITQVKIKVFSPGPHGHPDQVPYIVTWEALAFDPPPWVKPFVHPKPPPPLPPSAPSLPLEPPRSTPPRSSLYPALTPSLGAKPKPQVLSDSGGPLIDLLTEDPPPYRDPRPPPSDRDGNGGEATPAGEAPDPSPMASRLRGRREPPVADSTTSQAFPLRAGGNGQLQYWPFSSSDLYNWKNNNPSFSEDPGKLTALIESVLITHQPTWDDCQQLLGTLLTGEEKQRVLLEARKAVRGDDGRPTQLPNEVDAAFPLERPDWDYTTQAGRNHLVHYRQLLLAGLQNAGRSPTNLAKVKGITQGPNESPSAFLERLKEAYRRYTPYDPEDPGQETNVSMSFIWQSAPDIGRKLERLEDLKNKTLGDLVREAEKIFNKRETPEEREERIRRETEEKEERRRTEDEQKEKERDRRRHREMSKLLATVVSGQKQDRQGGERRRSQLDRDQCAYCKEKGHWAKDCPKKPRGPRGPRPQTSLLTLDD
[0011]配列番号２は、ＭＭＬＶ－Ｇａｇヌクレオチド配列である
ATGGGCCAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTTTGACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACCTTCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGAGACCTCATCACCCAGGTTAAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTGGCTTTTGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCGTCTCTCCCCCTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACTCCTTCTCTAGGCGCCAAACCTAAACCTCAAGTTCTTTCTGACAGTGGGGGGCCGCTCATCGACCTACTTACAGAAGACCCCCCGCCTTATAGGGACCCAAGACCACCCCCTTCCGACAGGGACGGAAATGGTGGAGAAGCGACCCCTGCGGGAGAGGCACCGGACCCCTCCCCAATGGCATCTCGCCTACGTGGGAGACGGGAGCCCCCTGTGGCCGACTCCACTACCTCGCAGGCATTCCCCCTCCGCGCAGGAGGAAACGGACAGCTTCAATACTGGCCGTTCTCCTCTTCTGACCTTTACAACTGGAAAAATAATAACCCTTCTTTTTCTGAAGATCCAGGTAAACTGACAGCTCTGATCGAGTCTGTTCTCATCACCCATCAGCCCACCTGGGACGACTGTCAGCAGCTGTTGGGGACTCTGCTGACCGGAGAAGAAAAACAACGGGTGCTCTTAGAGGCTAGAAAGGCGGTGCGGGGCGATGATGGGCGCCCCACTCAACTGCCCAATGAAGTCGATGCCGCTTTTCCCCTCGAGCGCCCAGACTGGGATTACACCACCCAGGCAGGTAGGAACCACCTAGTCCACTATCGCCAGTTGCTCCTAGCGGGTCTCCAAAACGCGGGCAGAAGCCCCACCAATTTGGCCAAGGTAAAAGGAATAACACAAGGGCCCAATGAGTCTCCCTCGGCCTTCCTAGAGAGACTTAAGGAAGCCTATCGCAGGTACACTCCTTATGACCCTGAGGACCCAGGGCAAGAAACTAATGTGTCTATGTCTTTCATTTGGCAGTCTGCCCCAGACATTGGGAGAAAGTTAGAGAGGTTAGAAGATTTAAAAAACAAGACGCTTGGAGATTTGGTTAGAGAGGCAGAAAAGATCTTTAATAAACGAGAAACCCCGGAAGAAAGAGAGGAACGTATCAGGAGAGAAACAGAGGAAAAAGAAGAACGCCGTAGGACAGAGGATGAGCAGAAAGAGAAAGAAAGAGATCGTAGGAGACATAGAGAGATGAGCAAGCTATTGGCCACTGTCGTTAGTGGACAGAAACAGGATAGACAGGGAGGAGAACGAAGGAGGTCCCAACTCGATCGCGACCAGTGTGCCTACTGCAAAGAAAAGGGGCACTGGGCTAAAGATTGTCCCAAGAAACCACGAGGACCTCGGGGACCAAGACCCCAGACCTCCCTCCTGACCCTAGATGAC
ATGGGCCAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTTTGACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACCTTCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGAGACCTCATCACCCAGGTTAAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTGGCTTTTGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCGTCTCTCCCCCTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACTCCTTCTCTAGGCGCCAAACCTAAACCTCAAGTTCTTTCTGACAGTGGGGGGCCGCTCATCGACCTACTTACAGAAGACCCCCCGCCTTATAGGGACCCAAGACCACCCCCTTCCGACAGGGACGGAAATGGTGGAGAAGCGACCCCTGCGGGAGAGGCACCGGACCCCTCCCCAATGGCATCTCGCCTACGTGGGAGACGGGAGCCCCCTGTGGCCGACTCCACTACCTCGCAGGCATTCCCCCTCCGCGCAGGAGGAAACGGACAGCTTCAATACTGGCCGTTCTCCTCTTCTGACCTTTACAACTGGAAAAATAATAACCCTTCTTTTTCTGAAGATCCAGGTAAACTGACAGCTCTGATCGAGTCTGTTCTCATCACCCATCAGCCCACCTGGGACGACTGTCAGCAGCTGTTGGGGACTCTGCTGACCGGAGAAGAAAAACAACGGGTGCTCTTAGAGGCTAGAAAGGCGGTGCGGGGCGATGATGGGCGCCCCACTCAACTGCCCAATGAAGTCGATGCCGCTTTTCCCCTCGAGCGCCCAGACTGGGATTACACCACCCAGGCAGGTAGGAACCACCTAGTCCACTATCGCCAGTTGCTCCTAGCGGGTCTCCAAAACGCGGGCAGAAGCCCCACCAATTTGGCCAAGGTAAAAGGAATAACACAAGGGCCCAATGAGTCTCCCTCGGCCTTCCTAGAGAGACTTAAGGAAGCCTATCGCAGGTACACTCCTTATGACCCTGAGGACCCAGGGCAAGAAACTAATGTGTCTATGTCTTTCATTTGGCAGTCTGCCCCAGACATTGGGAGAAAGTTAGAGAGGTTAGAAGATTTAAAAAACAAGACGCTTGGAGATTTGGTTAGAGAGGCAGAAAAGATCTTTAATAAACGAGAAACCCCGGAAGAAAGAGAGGAACGTATCAGGAGAGAAACAGAGGAAAAAGAAGAACGCCGTAGGACAGAGGATGAGCAGAAAGAGAAAGAAAGAGATCGTAGGAGACATAGAGAGATGAGCAAGCTATTGGCCACTGTCGTTAGTGGACAGAAACAGGATAGACAGGGAGGAGAACGAAGGAGGTCCCAACTCGATCGCGACCAGTGTGCCTACTGCAAAGAAAAGGGGCACTGGGCTAAAGATTGTCCCAAGAAACCACGAGGACCTCGGGGACCAAGACCCCAGACCTCCCTCCTGACCCTAGATGAC
[0012]配列番号３は、コドン最適化ＭＭＬＶ－Ｇａｇヌクレオチド配列である
ATGGGACAGACCGTCACAACACCCCTGAGCCTGACCCTGGGACATTGGAAAGACGTGGAGAGGATCGCACATAACCAGAGCGTGGACGTGAAGAAACGGAGATGGGTCACATTCTGCAGTGCTGAGTGGCCAACTTTTAATGTGGGATGGCCCCGAGACGGCACTTTCAACAGGGATCTGATCACCCAGGTGAAGATCAAGGTCTTTAGCCCAGGACCTCACGGACATCCAGACCAGGTGCCTTATATCGTCACCTGGGAGGCACTGGCCTTCGATCCCCCTCCATGGGTGAAGCCATTTGTCCACCCAAAACCACCTCCACCACTGCCTCCAAGTGCCCCTTCACTGCCACTGGAACCACCCCGGAGCACACCACCCCGCAGCTCCCTGTATCCTGCTCTGACTCCATCTCTGGGCGCAAAGCCAAAACCACAGGTGCTGAGCGACTCCGGAGGACCACTGATTGACCTGCTGACAGAGGACCCCCCACCATACCGAGATCCTCGGCCTCCACCAAGCGACCGCGATGGAAATGGAGGAGAGGCTACTCCTGCCGGCGAAGCCCCTGACCCATCTCCAATGGCTAGTAGGCTGCGCGGCAGGCGCGAGCCTCCAGTGGCAGATAGCACCACATCCCAGGCCTTCCCTCTGAGGGCTGGGGGAAATGGGCAGCTCCAGTATTGGCCATTTTCTAGTTCAGACCTGTACAACTGGAAGAACAATAACCCCTCTTTCAGTGAGGACCCCGGCAAACTGACCGCCCTGATCGAATCCGTGCTGATTACCCATCAGCCCACATGGGACGATTGTCAGCAGCTCCTGGGCACCCTGCTGACCGGAGAGGAAAAGCAGCGCGTGCTGCTGGAGGCTCGCAAAGCAGTCCGAGGGGACGATGGACGGCCCACACAGCTCCCTAATGAGGTGGACGCCGCTTTTCCACTGGAAAGACCCGACTGGGATTATACTACCCAGGCAGGGAGAAACCACCTGGTCCATTACAGGCAGCTCCTGCTGGCAGGCCTGCAGAATGCCGGGAGATCCCCCACCAACCTGGCCAAGGTGAAAGGCATCACACAGGGGCCTAATGAGTCACCAAGCGCCTTTCTGGAGAGGCTGAAGGAAGCTTACCGACGGTATACCCCATACGACCCTGAGGACCCCGGACAGGAAACAAACGTCTCCATGTCTTTCATCTGGCAGTCTGCCCCAGACATTGGGCGGAAGCTGGAGAGACTGGAAGACCTGAAGAACAAGACCCTGGGCGACCTGGTGCGGGAGGCTGAAAAGATCTTCAACAAACGGGAGACCCCCGAGGAAAGAGAGGAAAGGATTAGAAGGGAAACTGAGGAAAAGGAGGAACGCCGACGGACCGAGGACGAACAGAAGGAGAAAGAACGAGATCGGCGGCGGCACCGGGAGATGTCAAAGCTGCTGGCCACCGTGGTCAGCGGACAGAAACAGGACAGACAGGGAGGAGAGCGACGGAGAAGCCAGCTCGACAGGGATCAGTGCGCATACTGTAAGGAAAAAGGCCATTGGGCCAAGGATTGCCCCAAAAAGCCAAGAGGACCAAGAGGACCAAGACCACAGACATCACTGCTGACCCTGGACGAC（配列番号４）
GGMSWFSQILIGTLLMWLGLNAKNGSISLMCLALGGVLIFLSTAVSA
ATGGGACAGACCGTCACAACACCCCTGAGCCTGACCCTGGGACATTGGAAAGACGTGGAGAGGATCGCACATAACCAGAGCGTGGACGTGAAGAAACGGAGATGGGTCACATTCTGCAGTGCTGAGTGGCCAACTTTTAATGTGGGATGGCCCCGAGACGGCACTTTCAACAGGGATCTGATCACCCAGGTGAAGATCAAGGTCTTTAGCCCAGGACCTCACGGACATCCAGACCAGGTGCCTTATATCGTCACCTGGGAGGCACTGGCCTTCGATCCCCCTCCATGGGTGAAGCCATTTGTCCACCCAAAACCACCTCCACCACTGCCTCCAAGTGCCCCTTCACTGCCACTGGAACCACCCCGGAGCACACCACCCCGCAGCTCCCTGTATCCTGCTCTGACTCCATCTCTGGGCGCAAAGCCAAAACCACAGGTGCTGAGCGACTCCGGAGGACCACTGATTGACCTGCTGACAGAGGACCCCCCACCATACCGAGATCCTCGGCCTCCACCAAGCGACCGCGATGGAAATGGAGGAGAGGCTACTCCTGCCGGCGAAGCCCCTGACCCATCTCCAATGGCTAGTAGGCTGCGCGGCAGGCGCGAGCCTCCAGTGGCAGATAGCACCACATCCCAGGCCTTCCCTCTGAGGGCTGGGGGAAATGGGCAGCTCCAGTATTGGCCATTTTCTAGTTCAGACCTGTACAACTGGAAGAACAATAACCCCTCTTTCAGTGAGGACCCCGGCAAACTGACCGCCCTGATCGAATCCGTGCTGATTACCCATCAGCCCACATGGGACGATTGTCAGCAGCTCCTGGGCACCCTGCTGACCGGAGAGGAAAAGCAGCGCGTGCTGCTGGAGGCTCGCAAAGCAGTCCGAGGGGACGATGGACGGCCCACACAGCTCCCTAATGAGGTGGACGCCGCTTTTCCACTGGAAAGACCCGACTGGGATTATACTACCCAGGCAGGGAGAAACCACCTGGTCCATTACAGGCAGCTCCTGCTGGCAGGCCTGCAGAATGCCGGGAGATCCCCCACCAACCTGGCCAAGGTGAAAGGCATCACACAGGGGCCTAATGAGTCACCAAGCGCCTTTCTGGAGAGGCTGAAGGAAGCTTACCGACGGTATACCCCATACGACCCTGAGGACCCCGGACAGGAAACAAACGTCTCCATGTCTTTCATCTGGCAGTCTGCCCCAGACATTGGGCGGAAGCTGGAGAGACTGGAAGACCTGAAGAACAAGACCCTGGGCGACCTGGTGCGGGAGGCTGAAAAGATCTTCAACAAACGGGAGACCCCCGAGGAAAGAGAGGAAAGGATTAGAAGGGAAACTGAGGAAAAGGAGGAACGCCGACGGACCGAGGACGAACAGAAGGAGAAAGAACGAGATCGGCGGCGGCACCGGGAGATGTCAAAGCTGCTGGCCACCGTGGTCAGCGGACAGAAACAGGACAGACAGGGAGGAGAGCGACGGAGAAGCCAGCTCGACAGGGATCAGTGCGCATACTGTAAGGAAAAAGGCCATTGGGCCAAGGATTGCCCCAAAAAGCCAAGAGGACCAAGAGGACCAAGACCACAGACATCACTGCTGACCCTGGACGAC（配列番号４）
GGMSWFSQILIGTLLMWLGLNAKNGSISLMCLALGGVLIFLSTAVSA
[0013]配列番号４は、ＭＭＬＶ Ｇａｇ－ＣＭＶ ｐｐ６５アミノ酸配列である
[0014]配列番号５は、ＭＭＬＶ Ｇａｇ－ＣＭＶ ｐｐ６５ヌクレオチド配列である
[0015]配列番号６はコドン最適化ＭＭＬＶ Ｇａｇ－ＣＭＶ ｐｐ６５ヌクレオチド配列である
[0016]配列番号７は、コドン最適化ＭＭＬＶ Ｇａｇ－ＣＭＶ ｐｐ６５ヌクレオチド配列である
[0017]配列番号８は、ＨＣＭＶ ｇＢアミノ酸配列である
MESRIWCLVVCVNLCIVCLGAAVSSSSTRGTSATHSHHSSHTTSAAHSRSGSVSQRVTSS
QTVSHGVNETIYNTTLKYGDVVGVNTTKYPYRVCSMAQGTDLIRFERNIVCTSMKPINEDLDEGIMVVYKRNIVAHTFKVRVYQKVLTFRRSYAYIHTTYLLGSNTEYVAPPMWEIHHINSHSQCYSSYSRVIAGTVFVAYHRDSYENKTMQLMPDDYSNTHSTRYVTVKDQWHSRGSTWLYRETCNLNCMVTITTARSKYPYHFFATSTGDVVDISPFYNGTNRNASYFGENADKFFIFPNYTIVSDFGRPNSALETHRLVAFLERADSVISWDIQDEKNVTCQLTFWEASERTIRSEAEDSYHFSSAKMTATFLSKKQEVNMSDSALDCVRDEAINKLQQIFNTSYNQTYEKYGNVSVFETTGGLVVFWQGIKQKSLVELERLANRSSLNLTHNRTKRSTDGNNATHLSNMESVHNLVYAQLQFTYDTLRGYINRALAQIAEAWCVDQRRTLEVFKELSKINPSAILSAIYNKPIAARFMGDVLGLASCVTINQTSVKVLRDMNVKESPGRCYSRPVVIFNFANSSYVQYGQLGEDNEILLGNHRTEECQLPSLKIFIAGNSAYEYVDYLFKRMIDLSSISTVDSMIALDIDPLENTDFRVLELYSQKELRSINVFDLEEIMREFNSYKQRVKYVEDKVVDPLPPYLKGLDDLMSGLGAAGKAVGVAIGAVGGAVASVVEGVATFLKNPFGAFTIILVAIAVVIIIYLIYTRQRRLCMQPLQNLFPYLVSADGTTVTSGNTKDTSLQAPPSYEESVYNSGRKGPGPPSSDASTAAPPYTNEQAYQMLLALVRLDAEQRAQQNGTDSLDGQTGTQDKGQKPNLLDRLRHRKNGYRHLKDSDEEENV*（配列番号８）（ＴＭ及びＣＤに下線を付す）
MESRIWCLVVCVNLCIVCLGAAVSSSSTRGTSATHSHHSSHTTSAAHSRSGSVSQRVTSS
QTVSHGVNETIYNTTLKYGDVVGVNTTKYPYRVCSMAQGTDLIRFERNIVCTSMKPINEDLDEGIMVVYKRNIVAHTFKVRVYQKVLTFRRSYAYIHTTYLLGSNTEYVAPPMWEIHHINSHSQCYSSYSRVIAGTVFVAYHRDSYENKTMQLMPDDYSNTHSTRYVTVKDQWHSRGSTWLYRETCNLNCMVTITTARSKYPYHFFATSTGDVVDISPFYNGTNRNASYFGENADKFFIFPNYTIVSDFGRPNSALETHRLVAFLERADSVISWDIQDEKNVTCQLTFWEASERTIRSEAEDSYHFSSAKMTATFLSKKQEVNMSDSALDCVRDEAINKLQQIFNTSYNQTYEKYGNVSVFETTGGLVVFWQGIKQKSLVELERLANRSSLNLTHNRTKRSTDGNNATHLSNMESVHNLVYAQLQFTYDTLRGYINRALAQIAEAWCVDQRRTLEVFKELSKINPSAILSAIYNKPIAARFMGDVLGLASCVTINQTSVKVLRDMNVKESPGRCYSRPVVIFNFANSSYVQYGQLGEDNEILLGNHRTEECQLPSLKIFIAGNSAYEYVDYLFKRMIDLSSISTVDSMIALDIDPLENTDFRVLELYSQKELRSINVFDLEEIMREFNSYKQRVKYVEDKVVDPLPPYLKGLDDLMSGLGAAGKAVGVAIGAVGGAVASVVEGVATFLKNPFGAFTIILVAIAVVIIIYLIYTRQRRLCMQPLQNLFPYLVSADGTTVTSGNTKDTSLQAPPSYEESVYNSGRKGPGPPSSDASTAAPPYTNEQAYQMLLALVRLDAEQRAQQNGTDSLDGQTGTQDKGQKPNLLDRLRHRKNGYRHLKDSDEEENV*（配列番号８）（ＴＭ及びＣＤに下線を付す）
[0018]配列番号９は、ＨＣＭＶ ｇＢヌクレオチド配列である
ATGGAGTCAAGGATTTGGTGCCTGGTCGTGTGCGTCAATCTGTGCATCGTCTGTCTGGGGGCTGCCGTGTCATCAAGTTCTACAAGAGGCACCAGCGCCACCCACTCACACCATAGCTCCCATACCACATCCGCCGCTCACTCCCGGTCTGGCAGCGTGAGCCAGAGAGTCACATCTAGTCAGACCGTGAGCCACGGGGTCAACGAGACCATCTACAATACTACCCTGAAGTATGGCGACGTGGTCGGGGTGAACACAACTAAATACCCATATAGGGTCTGCAGTATGGCCCAGGGCACTGATCTGATTAGATTCGAAAGGAACATCGTGTGCACCAGCATGAAGCCCATTAATGAGGACCTGGATGAAGGGATCATGGTGGTCTACAAACGCAATATTGTGGCCCATACCTTCAAGGTGCGAGTCTATCAGAAAGTGCTGACATTTCGGAGATCTTACGCATATATCCACACCACATACCTGCTGGGGAGTAACACCGAGTATGTGGCTCCCCCTATGTGGGAAATTCACCATATCAATAGCCATTCCCAGTGCTACTCAAGCTACAGCAGAGTGATCGCTGGAACAGTGTTCGTCGCATACCACAGAGACTCTTATGAGAACAAGACTATGCAGCTCATGCCCGACGATTACAGCAATACACATTCCACTAGATATGTGACAGTCAAAGATCAGTGGCACTCAAGGGGCAGCACCTGGCTGTACCGCGAGACATGCAACCTGAATTGTATGGTGACTATCACTACCGCTAGATCCAAGTACCCCTATCACTTCTTTGCAACTTCCACCGGGGACGTGGTCGATATTTCTCCTTTCTACAACGGCACAAACCGGAATGCATCTTATTTTGGGGAGAACGCCGACAAGTTCTTTATTTTCCCAAATTACACCATCGTGTCTGATTTTGGCAGACCCAACAGTGCCCTGGAGACACATCGACTGGTGGCATTCCTGGAACGGGCCGACTCCGTCATTTCTTGGGACATCCAGGATGAGAAG
AATGTGACCTGCCAGCTCACCTTCTGGGAGGCCAGCGAACGCACCATCCGATCCGAGGCTGAAGATTCTTACCACTTCTCCTCTGCCAAAATGACAGCTACTTTTCTGAGCAAGAAACAGGAGGTGAACATGTCTGACAGTGCTCTGGATTGCGTGCGGGACGAAGCAATTAATAAGCTGCAGCAGATCTTCAACACATCATACAACCAGACTTACGAGAAGTACGGAAACGTGAGCGTCTTCGAAACAACTGGCGGGCTGGTGGTCTTTTGGCAGGGCATCAAGCAGAAATCCCTGGTGGAGCTGGAAAGGCTGGCCAATCGCAGTTCACTGAACCTGACTCATAATCGGACCAAGAGATCTACAGACGGAAACAATGCCACACATCTGTCTAACATGGAGAGTGTGCACAATCTGGTCTACGCTCAGCTCCAGTTTACCTACGACACACTGAGAGGCTATATTAACAGGGCACTGGCCCAGATCGCTGAAGCATGGTGCGTGGATCAGAGGCGCACCCTGGAGGTCTTCAAGGAACTGTCCAAAATCAACCCTTCAGCAATTCTGAGCGCCATCTACAATAAGCCAATTGCAGCCAGGTTTATGGGAGACGTGCTGGGCCTGGCCAGTTGCGTCACTATCAACCAGACCTCAGTGAAGGTCCTGCGCGATATGAATGTGAAAGAGAGTCCCGGCAGATGCTATTCACGGCCTGTGGTCATCTTCAACTTTGCTAATAGCTCCTACGTGCAGTATGGACAGCTCGGCGAGGACAACGAAATTCTGCTGGGGAATCACAGGACCGAGGAATGTCAGCTCCCTAGCCTGAAGATTTTCATCGCTGGAAACTCCGCATACGAGTATGTGGATTACCTGTTCAAGCGGATGATTGACCTGTCTAGTATCTCCACTGTGGATTCTATGATTGCCCTGGACATCGATCCACTGGAAAATACCGACTTCAGGGTGCTGGAGCTGTATAGCCAGAAGGAACTGCGCTCCATCAACGTGTTCGATCTGGAGGAAATTATGAGAGAGTTTAATAGCTACAAGCAGAGGGTGAAATATGTCGAAGATAAGGTGGTCGACCCCCTGCCACCCTACCTGAAAGGCCTGGACGATCTGATGAGCGGGCTGGGAGCTGCAGGGAAGGCAGTGGGAGTCGCTATCGGCGCAGTGGGAGGAGCCGTGGCCAGCGTGGTCGAGGGAGTGGCAACATTCCTGAAAAACCCCTTCGGGGCCTTCACCATCATTCTGGTGGCAATCGCCGTGGTCATCATTATCTACCTGATCTACACAAGGCAGCGGCGGCTGTGCATGCAGCCTCTGCAGAACCTGTTTCCATACCTGGTGAGCGCCGACGGGACCACAGTCACCTCAGGAAATACTAAGGATACCTCTCTGCAGGCCCCCCCAAGTTACGAGGAATCAGTGTATAACAGCGGCAGAAAAGGACCAGGACCACCTTCAAGCGACGCCAGCACTGCCGCTCCACCCTACACCAATGAGCAGGCCTATCAGATGCTGCTGGCTCTGGTGCGCCTGGATGCCGAACAGCGAGCTCAGCAGAACGGGACCGACTCCCTGGATGGACAGACCGGAACACAGGACAAGGGACAGAAACCTAATCTGCTGGATCGGCTGCGGCACAGAAAAAACGGGTATAGGCACCTGAAGGACTCCGACGAAGAAGAAAATGTCTAA（配列番号９）（ＴＭ及びＣＤに下線を付す）
ATGGAGTCAAGGATTTGGTGCCTGGTCGTGTGCGTCAATCTGTGCATCGTCTGTCTGGGGGCTGCCGTGTCATCAAGTTCTACAAGAGGCACCAGCGCCACCCACTCACACCATAGCTCCCATACCACATCCGCCGCTCACTCCCGGTCTGGCAGCGTGAGCCAGAGAGTCACATCTAGTCAGACCGTGAGCCACGGGGTCAACGAGACCATCTACAATACTACCCTGAAGTATGGCGACGTGGTCGGGGTGAACACAACTAAATACCCATATAGGGTCTGCAGTATGGCCCAGGGCACTGATCTGATTAGATTCGAAAGGAACATCGTGTGCACCAGCATGAAGCCCATTAATGAGGACCTGGATGAAGGGATCATGGTGGTCTACAAACGCAATATTGTGGCCCATACCTTCAAGGTGCGAGTCTATCAGAAAGTGCTGACATTTCGGAGATCTTACGCATATATCCACACCACATACCTGCTGGGGAGTAACACCGAGTATGTGGCTCCCCCTATGTGGGAAATTCACCATATCAATAGCCATTCCCAGTGCTACTCAAGCTACAGCAGAGTGATCGCTGGAACAGTGTTCGTCGCATACCACAGAGACTCTTATGAGAACAAGACTATGCAGCTCATGCCCGACGATTACAGCAATACACATTCCACTAGATATGTGACAGTCAAAGATCAGTGGCACTCAAGGGGCAGCACCTGGCTGTACCGCGAGACATGCAACCTGAATTGTATGGTGACTATCACTACCGCTAGATCCAAGTACCCCTATCACTTCTTTGCAACTTCCACCGGGGACGTGGTCGATATTTCTCCTTTCTACAACGGCACAAACCGGAATGCATCTTATTTTGGGGAGAACGCCGACAAGTTCTTTATTTTCCCAAATTACACCATCGTGTCTGATTTTGGCAGACCCAACAGTGCCCTGGAGACACATCGACTGGTGGCATTCCTGGAACGGGCCGACTCCGTCATTTCTTGGGACATCCAGGATGAGAAG
AATGTGACCTGCCAGCTCACCTTCTGGGAGGCCAGCGAACGCACCATCCGATCCGAGGCTGAAGATTCTTACCACTTCTCCTCTGCCAAAATGACAGCTACTTTTCTGAGCAAGAAACAGGAGGTGAACATGTCTGACAGTGCTCTGGATTGCGTGCGGGACGAAGCAATTAATAAGCTGCAGCAGATCTTCAACACATCATACAACCAGACTTACGAGAAGTACGGAAACGTGAGCGTCTTCGAAACAACTGGCGGGCTGGTGGTCTTTTGGCAGGGCATCAAGCAGAAATCCCTGGTGGAGCTGGAAAGGCTGGCCAATCGCAGTTCACTGAACCTGACTCATAATCGGACCAAGAGATCTACAGACGGAAACAATGCCACACATCTGTCTAACATGGAGAGTGTGCACAATCTGGTCTACGCTCAGCTCCAGTTTACCTACGACACACTGAGAGGCTATATTAACAGGGCACTGGCCCAGATCGCTGAAGCATGGTGCGTGGATCAGAGGCGCACCCTGGAGGTCTTCAAGGAACTGTCCAAAATCAACCCTTCAGCAATTCTGAGCGCCATCTACAATAAGCCAATTGCAGCCAGGTTTATGGGAGACGTGCTGGGCCTGGCCAGTTGCGTCACTATCAACCAGACCTCAGTGAAGGTCCTGCGCGATATGAATGTGAAAGAGAGTCCCGGCAGATGCTATTCACGGCCTGTGGTCATCTTCAACTTTGCTAATAGCTCCTACGTGCAGTATGGACAGCTCGGCGAGGACAACGAAATTCTGCTGGGGAATCACAGGACCGAGGAATGTCAGCTCCCTAGCCTGAAGATTTTCATCGCTGGAAACTCCGCATACGAGTATGTGGATTACCTGTTCAAGCGGATGATTGACCTGTCTAGTATCTCCACTGTGGATTCTATGATTGCCCTGGACATCGATCCACTGGAAAATACCGACTTCAGGGTGCTGGAGCTGTATAGCCAGAAGGAACTGCGCTCCATCAACGTGTTCGATCTGGAGGAAATTATGAGAGAGTTTAATAGCTACAAGCAGAGGGTGAAATATGTCGAAGATAAGGTGGTCGACCCCCTGCCACCCTACCTGAAAGGCCTGGACGATCTGATGAGCGGGCTGGGAGCTGCAGGGAAGGCAGTGGGAGTCGCTATCGGCGCAGTGGGAGGAGCCGTGGCCAGCGTGGTCGAGGGAGTGGCAACATTCCTGAAAAACCCCTTCGGGGCCTTCACCATCATTCTGGTGGCAATCGCCGTGGTCATCATTATCTACCTGATCTACACAAGGCAGCGGCGGCTGTGCATGCAGCCTCTGCAGAACCTGTTTCCATACCTGGTGAGCGCCGACGGGACCACAGTCACCTCAGGAAATACTAAGGATACCTCTCTGCAGGCCCCCCCAAGTTACGAGGAATCAGTGTATAACAGCGGCAGAAAAGGACCAGGACCACCTTCAAGCGACGCCAGCACTGCCGCTCCACCCTACACCAATGAGCAGGCCTATCAGATGCTGCTGGCTCTGGTGCGCCTGGATGCCGAACAGCGAGCTCAGCAGAACGGGACCGACTCCCTGGATGGACAGACCGGAACACAGGACAAGGGACAGAAACCTAATCTGCTGGATCGGCTGCGGCACAGAAAAAACGGGTATAGGCACCTGAAGGACTCCGACGAAGAAGAAAATGTCTAA（配列番号９）（ＴＭ及びＣＤに下線を付す）
[0019]配列番号１０は、コドン最適化ＨＣＭＶ ｇＢヌクレオチド配列である
ATGGAATCCAGGATCTGGTGCCTGGTAGTCTGCGTTAACTTGTGTATCGTCTGTCTGGGTGCTGCGGTTTCCTCATCTTCTACTCGTGGAACTTCTGCTACTCACAGTCACCATTCCTCTCATACGACGTCTGCTGCTCATTCTCGATCCGGTTCAGTCTCTCAACGCGTAACTTCTTCCCAAACGGTCAGCCATGGTGTTAACGAGACCATCTACAACACTACCCTCAAGTACGGAGATGTGGTGGGGGTCAACACCACCAAGTACCCCTATCGCGTGTGTTCTATGGCACAGGGTACGGATCTTATTCGCTTTGAACGTAATATCGTCTGCACCTCGATGAAGCCCATCAATGAAGACCTGGACGAGGGCATCATGGTGGTCTACAAACGCAACATCGTCGCGCACACCTTTAAGGTACGAGTCTACCAGAAGGTTTTGACGTTTCGTCGTAGCTACGCTTACATCCACACCACTTATCTGCTGGGCAGCAACACGGAATACGTGGCGCCTCCTATGTGGGAGATTCATCATATCAACAGTCACAGTCAGTGCTACAGTTCCTACAGCCGCGTTATAGCAGGCACGGTTTTCGTGGCTTATCATAGGGACAGCTATGAAAACAAAACCATGCAATTAATGCCCGACGATTATTCCAACACCCACAGTACCCGTTACGTGACGGTCAAGGATCAATGGCACAGCCGCGGCAGCACCTGGCTCTATCGTGAGACCTGTAATCTGAATTGTATGGTGACCATCACTACTGCGCGCTCCAAGTATCCCTATCATTTTTTCGCAACTTCCACGGGTGATGTGGTTGACATTTCTCCTTTCTACAACGGAACTAATCGCAATGCCAGCTATTTTGGAGAAAACGCCGACAAGTTTTTCATTTTTCCGAACTACACTATCGTCTCCGACTTTGGAAGACCGAATTCTGCGTTAGAGACCCACAGGTTGGTGGCTTTTCTTGAACGTGCGGACTCAGTGATCTCCTGGGATATACAGGACGAGAAGAATGTTACTTGTCAACTCACTTTCTGGGAAGCCTCGGAACGCACCATTCGTTCCGAAGCCGAGGACTCGTATCACTTTTCTTCTGCCAAAATGACCGCCACTTTCTTATCTAAGAAGCAAGAGGTGAACATGTCCGACTCTGCGCTGGACTGTGTACGTGATGAGGCCATAAATAAGTTACAGCAGATTTTCAATACTTCATACAATCAAACATATGAAAAATATGGAAACGTGTCCGTCTTTGAAACCACTGGTGGTTTGGTGGTGTTCTGGCAAGGTATCAAGCAAAAATCTCTGGTGGAACTCGAACGTTTGGCCAACCGCTCCAGTCTGAATCTTACTCATAATAGAACCAAAAGAAGTACAGATGGCAACAATGCAACTCATTTATCCAACATGGAGTCGGTGCACAATCTGGTCTACGCCCAGCTGCAGTTCACCTATGACACGTTGCGCGGTTACATCAACCGGGCGCTGGCGCAAATCGCAGAAGCCTGGTGTGTGGATCAACGGCGCACCCTAGAGGTCTTCAAGGAACTTAGCAAGATCAACCCGTCAGCTATTCTCTCGGCCATCTACAACAAACCGATTGCCGCGCGTTTCATGGGTGATGTCCTGGGTCTGGCCAGCTGCGTGACCATTAACCAAACCAGCGTCAAGGTGCTGCGTGATATGAATGTGAAGGAATCGCCAGGACGCTGCTACTCACGACCAGTGGTCATCTTTAATTTCGCCAACAGCTCGTACGTGCAGTACGGTCAACTGGGCGAGGATAACGAAATCCTGTTGGGCAACCACCGCACTGAGGAATGTCAGCTTCCCAGCCTCAAGATCTTCATCGCCGGCAACTCGGCCTACGAGTACGTGGACTACCTCTTCAAACGCATGATTGACCTCAGCAGCATCTCCACCGTCGACAGCATGATCGCCCTAGACATCGACCCGCTGGAAAACACCGACTTCAGGGTACTGGAACTTTACTCGCAGAAAGAATTGCGTTCCATCAACGTTTTTGATCTCGAGGAGATCATGCGCGAGTTCAATTCGTATAAGCAGCGGGTAAAGTACGTGGAGGACAAGGTAGTCGACCCGCTGCCGCCCTACCTCAAGGGTCTGGACGACCTCATGAGCGGCCTGGGCGCCGCGGGAAAGGCCGTTGGCGTAGCCATTGGGGCCGTGGGTGGCGCGGTGGCCTCCGTGGTCGAAGGCGTTGCCACCTTCCTCAAAAACCCCTTCGGAGCCTTCACCATCATCCTCGTGGCCATAGCCGTCGTCATTATCATTTATTTGATCTATACTCGACAGCGGCGTCTCTGCATGCAGCCGCTGCAGAACCTCTTTCCCTATCTGGTGTCCGCCGACGGGACCACCGTGACGTCGGGCAACACCAAAGACACGTCGTTACAGGCTCCGCCTTCCTACGAGGAAAGTGTTTATAATTCTGGTCGCAAAGGACCGGGACCACCGTCGTCTGATGCATCCACGGCGGCTCCGCCTTACACCAACGAGCAGGCTTACCAGATGCTTCTGGCCCTGGTCCGTCTGGACGCAGAGCAGCGAGCGCAGCAGAACGGTACAGATTCTTTGGACGGACAGACTGGCACGCAGGACAAGGGACAGAAGCCCAACCTGCTAGACCGACTGCGACACCGCAAAAACGGCTACCGACACTTGAAAGACTCCGACGAAGAAGAGAACGTCTGA（配列番号１０）（ＴＭ及びＣＤに下線を付す）
ATGGAATCCAGGATCTGGTGCCTGGTAGTCTGCGTTAACTTGTGTATCGTCTGTCTGGGTGCTGCGGTTTCCTCATCTTCTACTCGTGGAACTTCTGCTACTCACAGTCACCATTCCTCTCATACGACGTCTGCTGCTCATTCTCGATCCGGTTCAGTCTCTCAACGCGTAACTTCTTCCCAAACGGTCAGCCATGGTGTTAACGAGACCATCTACAACACTACCCTCAAGTACGGAGATGTGGTGGGGGTCAACACCACCAAGTACCCCTATCGCGTGTGTTCTATGGCACAGGGTACGGATCTTATTCGCTTTGAACGTAATATCGTCTGCACCTCGATGAAGCCCATCAATGAAGACCTGGACGAGGGCATCATGGTGGTCTACAAACGCAACATCGTCGCGCACACCTTTAAGGTACGAGTCTACCAGAAGGTTTTGACGTTTCGTCGTAGCTACGCTTACATCCACACCACTTATCTGCTGGGCAGCAACACGGAATACGTGGCGCCTCCTATGTGGGAGATTCATCATATCAACAGTCACAGTCAGTGCTACAGTTCCTACAGCCGCGTTATAGCAGGCACGGTTTTCGTGGCTTATCATAGGGACAGCTATGAAAACAAAACCATGCAATTAATGCCCGACGATTATTCCAACACCCACAGTACCCGTTACGTGACGGTCAAGGATCAATGGCACAGCCGCGGCAGCACCTGGCTCTATCGTGAGACCTGTAATCTGAATTGTATGGTGACCATCACTACTGCGCGCTCCAAGTATCCCTATCATTTTTTCGCAACTTCCACGGGTGATGTGGTTGACATTTCTCCTTTCTACAACGGAACTAATCGCAATGCCAGCTATTTTGGAGAAAACGCCGACAAGTTTTTCATTTTTCCGAACTACACTATCGTCTCCGACTTTGGAAGACCGAATTCTGCGTTAGAGACCCACAGGTTGGTGGCTTTTCTTGAACGTGCGGACTCAGTGATCTCCTGGGATATACAGGACGAGAAGAATGTTACTTGTCAACTCACTTTCTGGGAAGCCTCGGAACGCACCATTCGTTCCGAAGCCGAGGACTCGTATCACTTTTCTTCTGCCAAAATGACCGCCACTTTCTTATCTAAGAAGCAAGAGGTGAACATGTCCGACTCTGCGCTGGACTGTGTACGTGATGAGGCCATAAATAAGTTACAGCAGATTTTCAATACTTCATACAATCAAACATATGAAAAATATGGAAACGTGTCCGTCTTTGAAACCACTGGTGGTTTGGTGGTGTTCTGGCAAGGTATCAAGCAAAAATCTCTGGTGGAACTCGAACGTTTGGCCAACCGCTCCAGTCTGAATCTTACTCATAATAGAACCAAAAGAAGTACAGATGGCAACAATGCAACTCATTTATCCAACATGGAGTCGGTGCACAATCTGGTCTACGCCCAGCTGCAGTTCACCTATGACACGTTGCGCGGTTACATCAACCGGGCGCTGGCGCAAATCGCAGAAGCCTGGTGTGTGGATCAACGGCGCACCCTAGAGGTCTTCAAGGAACTTAGCAAGATCAACCCGTCAGCTATTCTCTCGGCCATCTACAACAAACCGATTGCCGCGCGTTTCATGGGTGATGTCCTGGGTCTGGCCAGCTGCGTGACCATTAACCAAACCAGCGTCAAGGTGCTGCGTGATATGAATGTGAAGGAATCGCCAGGACGCTGCTACTCACGACCAGTGGTCATCTTTAATTTCGCCAACAGCTCGTACGTGCAGTACGGTCAACTGGGCGAGGATAACGAAATCCTGTTGGGCAACCACCGCACTGAGGAATGTCAGCTTCCCAGCCTCAAGATCTTCATCGCCGGCAACTCGGCCTACGAGTACGTGGACTACCTCTTCAAACGCATGATTGACCTCAGCAGCATCTCCACCGTCGACAGCATGATCGCCCTAGACATCGACCCGCTGGAAAACACCGACTTCAGGGTACTGGAACTTTACTCGCAGAAAGAATTGCGTTCCATCAACGTTTTTGATCTCGAGGAGATCATGCGCGAGTTCAATTCGTATAAGCAGCGGGTAAAGTACGTGGAGGACAAGGTAGTCGACCCGCTGCCGCCCTACCTCAAGGGTCTGGACGACCTCATGAGCGGCCTGGGCGCCGCGGGAAAGGCCGTTGGCGTAGCCATTGGGGCCGTGGGTGGCGCGGTGGCCTCCGTGGTCGAAGGCGTTGCCACCTTCCTCAAAAACCCCTTCGGAGCCTTCACCATCATCCTCGTGGCCATAGCCGTCGTCATTATCATTTATTTGATCTATACTCGACAGCGGCGTCTCTGCATGCAGCCGCTGCAGAACCTCTTTCCCTATCTGGTGTCCGCCGACGGGACCACCGTGACGTCGGGCAACACCAAAGACACGTCGTTACAGGCTCCGCCTTCCTACGAGGAAAGTGTTTATAATTCTGGTCGCAAAGGACCGGGACCACCGTCGTCTGATGCATCCACGGCGGCTCCGCCTTACACCAACGAGCAGGCTTACCAGATGCTTCTGGCCCTGGTCCGTCTGGACGCAGAGCAGCGAGCGCAGCAGAACGGTACAGATTCTTTGGACGGACAGACTGGCACGCAGGACAAGGGACAGAAGCCCAACCTGCTAGACCGACTGCGACACCGCAAAAACGGCTACCGACACTTGAAAGACTCCGACGAAGAAGAGAACGTCTGA（配列番号１０）（ＴＭ及びＣＤに下線を付す）
［実施形態の詳細な説明］
[0020]ＧＢＭは、腫瘍の位置、細胞の化学療法に対する固有の耐性、及び脳細胞の自己修復能の低さを含む多数の要因によって、処置に対する応答が良好ではない。典型的には、ＧＢＭ腫瘍は、可能な程度に外科的に除去されるが、ＧＢＭ細胞は周囲の組織に急速に浸潤するために完全な除去は通常不可能である。放射線及び化学療法が、疾患の進行を遅延させるために、しばしば外科的処置の後に用いられる。しかしながら、ＧＢＭ腫瘍は通常再発し、処置を受けた患者の生存期間中央値は、１２か月～１５か月にすぎない。
[0020]ＧＢＭは、腫瘍の位置、細胞の化学療法に対する固有の耐性、及び脳細胞の自己修復能の低さを含む多数の要因によって、処置に対する応答が良好ではない。典型的には、ＧＢＭ腫瘍は、可能な程度に外科的に除去されるが、ＧＢＭ細胞は周囲の組織に急速に浸潤するために完全な除去は通常不可能である。放射線及び化学療法が、疾患の進行を遅延させるために、しばしば外科的処置の後に用いられる。しかしながら、ＧＢＭ腫瘍は通常再発し、処置を受けた患者の生存期間中央値は、１２か月～１５か月にすぎない。
[0021]近年、免疫療法は、ＧＢＭの処置として提案されており、これは、Ｔ細胞が腫瘍細胞を死滅させること、及び脳腫瘍に浸潤することが示されているという知見に基づいている。しかしながら、ＧＢＭを処置するための免疫療法剤の開発は困難であることが示されており、これは、腫瘍細胞が多様であり、免疫標的として機能し得る共通の腫瘍拒絶抗原が存在しないためである。同様に、多くのＧＢＭ患者は、種々の異なるＴ細胞機能不全、例えばアネルギー、耐性及びＴ細胞疲弊を示す（Ｗｏｒｏｎｉｅｃｋａら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２０１８）２４ ４１７５～４１８６）。患者はまた、抗体応答の弱体化を示す。
[0022]免疫チェックポイントの調節を目的とするいくつかの抗癌免疫療法、特に、免疫細胞の活性を刺激又は阻害する分子が開発されている。例えば、ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１等の調節因子は、Ｔ細胞の活性を阻害することが知られており、そのために免疫療法薬剤の魅力的な標的となっており、これは種々の形態の癌を処置するための使用が成功している。いくつかの生存利益が、抗ＰＤ１阻害剤によって処置したＧＢＭ患者の小規模試験において観察された（Ｃｌｏｕｇｈｅｓｙら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、（２０１９）２５：４７７～４８６）が、大規模な第３相試験は失敗しており、この時、放射線を併用した抗ＰＤ１阻害剤は、放射線化学療法と比較して、患者の寿命を延長することができなかった（ＢＭＳ－Ｏｐｔｉｖｏ ＣｈｅｃｋＭａｔｅ ４９８臨床試験－２０１９年５月９日）。
[0023]他の試験は、自己免疫の危険性を低下させる合成ペプチドによるワクチン接種を試みている（Ｓｃｈｕｓｔｅｒ Ｎｅｕｒｏ Ｏｎｃｏｌ ２０１５、１７：８５４～８６１）。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、ＧＢＭの約３０％に見出されるが、正常細胞では見られない上皮成長因子受容体（「ＥＧＦＲ」）の切断型バリアントである。ＥＧＦＲｖＩＩＩ由来の１３ｍｅｒのペプチドに対するワクチン接種を用いた初期の第Ｉ相及び第ＩＩ相臨床試験は、再発したＧＢＭを有する免疫された患者において、全生存期間を２６か月まで有意に増加させ、このことから、ＧＢＭに対する治療的ワクチン接種を奨励する支持が得られた。しかしながら、新しくＧＢＭと診断された患者における、より大規模な第ＩＩＩ相試験は、薬剤が生存利益を示さなくなった後に中止された（ＡＢＢＶＩＥプレスリリース、２０１９年５月１７日）。残念な第ＩＩＩ相試験の結果に加えて、ＥＧＦＲｖＩＩＩワクチン接種は、腫瘍がＥＧＦＲｖＩＩＩを発現しているＧＢＭ患者のサブセットのみに限定されており、ワクチン接種後のＥＧＦＲｖＩＩＩ抗原を欠く腫瘍細胞の免疫回避が既に明らかとなっており、これは、このアプローチの長期間の有効性を制限するものである（Ｓｗａｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｈ． Ｊ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌ．２０１０；２８：４７２２～４７２９）。
[0024]他のＧＢＭを処置するための免疫療法的なアプローチが、正常な脳組織では発現がより低い、ＧＢＭ腫瘍細胞におけるウイルス抗原の発見に基づいて提案されている。２００２年には、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）がＧＢＭ細胞に存在することは発見されていた（Ｃｏｂｂｓら、Ｃａｎ．Ｒｅｓ（２００２）６２：３３４７）。ＨＣＭＶは、β－ヘルペスウイルスであり、遍在性に存在する病原体である。免疫適格性の人において、ＨＣＭＶ感染は通常認知されず、存在する場合でも軽度及び非特異的な症候を有する。ＨＣＭＶ ＤＮＡ及びタンパク質は、ＧＢＭ細胞の９０％超において発現するが、周囲の正常脳組織においては発現しない（Ｄｚｉｕｒｚｙｎｓｋｉら、Ｎｅｕｒｏ－Ｏｎｃ．（２０１２）１４：２４６）。ＧＢＭにおけるＨＣＭＶの役割はよく理解されていないが、ＨＣＭＶ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）は、受容体のチロシンキナーゼＰＤＧＦＲ－アルファ（ＰＤＧＦＲα）に結合し、その結果、ＰＩ３キナーゼ／Ａｋｔシグナル伝達経路を活性化することによって、神経膠腫細胞への進入を媒介することが示されているが、この進入が腫瘍増殖及び浸潤性の両方を増強する（Ｃｏｂｂｓ，Ｃ．、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ２０１４；５：１０９１～１１００）。低レベルのＨＣＭＶ発現は、ＧＢＭ患者における全生存期間の改善と相関している（Ｒａｈｂａｒ，Ａ． Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ ２０１２；３：３）。
[0025]ＧＢＭ細胞にＨＣＭＶが遍在性に存在することによって、ＨＣＭＶ抗原が免疫療法的処置の治療標的を構成し得るという提案がもたらされる。標的としてのＨＣＭＶ抗原の使用に特に有益な可能性があることは、それらが「外来性」であると免疫学的に認識されること、及びＴ細胞は、自己抗原よりも外来性の抗原に対してはるかに高い親和性を有することである。
[0026]いくつかの研究は、ＧＢＭの処置におけるＨＣＭＶ抗原に対する免疫療法を検討している。一試験において、ＨＣＭＶ特異的なＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋多機能Ｔ細胞）は、自家性ＧＢＭ腫瘍細胞を認識及び死滅させることが示されており、これはＨＣＭＶ抗原が、免疫学的に関連するレベルで腫瘍細胞によって提示される根拠を提供している（Ｎａｉｒ，ＳＫ．、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１４；２０：２６８４～２６９４）。これらの観察を、自家性のＨＣＭＶ特異的なＴ細胞を用いた臨床的な養子Ｔ細胞療法に拡張することにより、励ましとなる早期の臨床的な結果が示され、１０人の患者のうちの４人は、試験期間の間、無病を維持していた（Ｓｃｈｕｅｓｓｌｅｒ，Ａ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１４；７４：３４６６～３４７６）。
[0027]これらの予備的な研究により、ＨＣＭＶ標的免疫療法についての見込みが示され、一方、他の研究は、ＧＢＭ患者が健常な人と比較して、ＨＣＭＶに対して有意に低い免疫応答を示すことを示した（Ｌｉｕら、Ｊ．Ｔｒａｎｓ Ｍｅｄ．，２０１８ １６：１８２）。特に、ＧＢＭ患者は、ＨＣＭＶ陽性である健常な対象と比較して、有意に低い抗ＨＣＭＶ抗体（ＩｇＧ）を産生することが示された（Ｌｉｕ、２０１８）。一試験において、ＨＣＭＶを有するＧＢＭ腫瘍を有する患者のうちの３１％は、抗ＣＭＶ抗体を完全に欠損していた（Ｒａｈｂａｒ、２０１５）。したがって、多くのＧＢＭ患者は、ＨＣＭＶに対する免疫の顕著な調節不全を示し、これによりＨＣＭＶ抗原に基づく免疫療法的な処置の開発が難題となっている。
[0028]ＨＣＭＶに対する免疫の弱体化を克服するために、研究者達は、ＨＣＭＶ抗原に対するＲＮＡによりパルスされたＧＢＭ患者由来の樹状細胞を用いた処置を開発した。小規模の対照された第Ｉ相試験によって、ＨＣＭＶ非構造タンパク質、ｐｐ６５に対するＲＮＡによりパルスされた自家性樹状細胞を用いたワクチン接種の２日前における、注入部位における樹状細胞プレコンディショニングが、原発性ＧＢＭを有する患者における全生存期間を有意に改善することが示された（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｄ．Ａ． Ｎａｔｕｒｅ ２０１５；５１９：３６６～３６９）。患者において観察された全生存期間の実質的な増加は、樹状細胞の動態化と関連するケモカインであるＣＣＬ３の高血清レベルと相関しており、このバイオマーカーはマウスモデルにおいて確認された。より近年には、テモゾロミド化学療法と組み合わせた、同一のＨＣＭＶ ｐｐ６５樹状細胞ワクチンが、ＧＢＭ患者の生存期間を改善した（Ｂａｔｉｃｈら、（２０１７）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２３ １８９８～１９０９）。この試験において、ＨＣＭＶ ｐｐ６５抗原に対するＩＦＮ－γ分泌ＣＤ８＋Ｔ細胞は、臨床的な利点と相関していた。これらの試験は、ＨＣＭＶ ｐｐ６５タンパク質が、免疫療法のための可能性のある標的を構成し得ることを示しており、一方、この方法は各患者について、特有のパルスされた樹状細胞を産生することを必要としており、このことは、高価、及びほとんどの集団では利用不可能であるレベルの個別化処置を伴う。
[0029]ＧＢＭ腫瘍細胞を効果的に標的とし、広範の患者集団において使用するために製剤化し得る、ＧＢＭのためのアクセス可能な免疫療法処置の必要性が存在している。
[0030]本開示は、免疫療法組成物及びＧＢＭの処置のためのその使用方法を提供する。本発明の免疫原性組成物は、ＨＣＭＶ発現ＧＢＭ腫瘍に対する抗ＨＣＭＶ Ｔ細胞免疫を刺激する。さらに、本開示の組成物は、ＧＢＭ患者における腫瘍応答及び生存時間の改善という観点で臨床的有効性を示した。特に、本発明の免疫原性組成物に対して応答した臨床的対象は、処置に応答しなかった対象と比較して、全生存期間中央値の６．２５か月の改善を示した。予想外にも、少なくとも１０μｇのｐｐ６５及び２００μｇのＧＭ－ＣＳＦの用量で、本発明の組成物は、ＨＣＭＶ ｇＢ抗原に対する抗体応答の欠如によって示されるように、ＨＣＭＶに対する顕著な免疫調節不全を示していたＧＢＭ患者における応答を誘導することができた。
[0031]本開示の免疫療法組成物は、ウイルス様粒子（「ＶＬＰ」）を含む。ＶＬＰは、一般的に１つ又は複数のウイルスタンパク質から構成される多タンパク質構造である。ＶＬＰは、ウイルスの立体構造を模倣しているが、遺伝物質を欠いており、そのため感染性ではない。それらは、適切な環境下において、ウイルス構造タンパク質の発現時に形成（又は「自己組織化」）することができる。ＶＬＰは、弱毒化ウイルスを用いて製造したワクチンの不利益のいくつかを克服しており、これは、ＶＬＰが産生プロセスの間に生存ウイルスが存在している必要がなく産生し得るためである。広範のＶＬＰが製造されている。例えば、エンベロープタンパク質及び／又は表面糖タンパク質を有する、又は有しない、単一又は複数のカプシドタンパク質を含むＶＬＰが製造されている。いくつかの場合において、ＶＬＰは無エンベロープであり、１つの主要なカプシドタンパク質のみの発現によって組織化する。他の場合において、ＶＬＰは有エンベロープであり、対応する天然のウイルスに見出される複数の抗原性タンパク質を含み得る。有エンベロープＶＬＰの自己組織化は、無エンベロープＶＬＰよりも複雑であり、これは、宿主細胞膜との融合（Ｇａｒｒｏｎｅら、２０１１ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．３：１～８）及びＶＬＰが完全有エンベロープの別個の粒子を形成するための「出芽」に複雑な反応が必要であるためである。インタクトなＶＬＰの形成は、電子顕微鏡を使用して粒子をイメージングすることにより確認し得る。
[0032]ＶＬＰは、典型的には、対応する天然のウイルスに類似しており、多価の粒子構造であり得る。ＶＬＰの状況で表面糖タンパク質を提示することは、他の形態の抗原提示、例えばＶＬＰに結合していない可溶性抗原と比較して、ポリペプチドに対する中和抗体の誘導について有益である。中和抗体は、最も頻繁に、三次構造又は四次構造を認識し、これは、しばしば天然のウイルス立体構造の抗原性タンパク質、例えばエンベロープ糖タンパク質を提示することを必要とする。
[0033]ＶＬＰの表面に発現される抗原はまた、中和抗体及び細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答の両方の誘発及び維持を補助し得るＣＤ４制限ヘルパーＴ細胞を誘導し得る。対照的に、ＶＬＰの内部空間内に提示された抗原は、交差プライミング及び提示と称するプロセスにおける、ＶＬＰの樹状細胞取込みを介して、ＣＤ８制限ＣＴＬ応答を促進し得る。
[0034]本開示のＶＬＰは、レトロウイルスベクターを含み得る。レトロウイルスは、レトロウイルス（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）科に属する有エンベロープＲＮＡウイルスである。レトロウイルスによる宿主細胞の感染後、ＲＮＡは、逆転写酵素を介してＤＮＡに転写される。ＤＮＡは次いで、インテグラーゼ酵素によって宿主細胞のゲノムに取り込まれ、その後、宿主細胞のＤＮＡの一部として複製する。レトロウイルス科は、以下の属、アルファレトロウイルス属（Ａｌｐｈａｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、ベータレトロウイルス属（Ｂｅｔａｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、ガンマレトロウイルス属（Ｇａｍｍｅａｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、デルタレトロウイルス属（Ｄｅｌｔａｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、イプシロンレトロウイルス属（Ｅｐｓｉｌｏｎｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、レンチウイルス属（Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ）及びスプーマウイルス属（Ｓｐｕｍａｖｉｒｕｓ）を含む。このレトロウイルス科に対する宿主は、一般的には脊椎動物である。レトロウイルスは、宿主細胞膜に由来する脂質二重層によって囲まれる球状のヌクレオカプシド（ウイルス構造タンパク質と複合体化したウイルスゲノム）を含む感染性ウイルス粒子を産生する。
[0035]レトロウイルスベクターは、レトロウイルス由来のゲノムを欠いており、そのため非複製性であるＶＬＰの生成に使用し得る。これは、レトロウイルスのコード領域の大部分を、移行される遺伝子又はヌクレオチド配列に置換し、ベクターがさらなる複製を行うのに必要なタンパク質を作製することができないようにすることによって達成される。粒子の表面に存在する糖タンパク質の性質に依存して、ＶＬＰは、宿主細胞に結合し、進入する限定的な能力を有するが、増殖することはできない。そのため、ＶＬＰは、免疫原性組成物として安全に投与することができる。
[0036]本発明は、レトロウイルス構造タンパク質、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）構造タンパク質、及び特にモロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）を含むＶＬＰを使用している。これらのレトロウイルスのゲノムはデータベースにおいて容易に入手可能である。
[0037]本発明にしたがって使用するためのレトロウイルス構造タンパク質は、Ｇａｇポリペプチドである。レトロウイルスのＧａｇタンパク質は、全体的に構造類似性を有し、各群のレトロウイルス内では、アミノ酸レベルで保存されている。レトロウイルスのＧａｇタンパク質は、ウイルス組織化において主要な機能を果たす。いくつかのウイルス（例えば、マウス白血病ウイルス、例えばＭＭＬＶ）のＧａｇのいくつかの宿主細胞における発現は、ＶＬＰ中への発現産物の自己組織化をもたらし得る。ポリタンパク質形態のＧａｇ遺伝子発現産物により、ＶＬＰのコア構造タンパク質が得られる。機能的には、Ｇａｇポリタンパク質は、３つのドメイン、Ｇａｇポリタンパク質を細胞膜へと標的化させる膜結合ドメイン、Ｇａｇ多量体化を促進する相互作用ドメイン、及び宿主細胞からの新生ウイルス粒子の放出を促進するレイトドメインに分けられる。一般的に、ウイルス粒子の組織化を媒介するＧａｇタンパク質の形態はポリタンパク質である。レトロウイルスは、Ｇａｇポリタンパク質から構成されるが、未成熟なウイルス粒子の構造タンパク質として、Ｇａｇと共に他のウイルス要素、例えばウイルスプロテアーゼを有さない未成熟なカプシドを組織化する。
[0038]ＭＭＬＶ Ｇａｇ遺伝子は、成熟ウイルス粒子中で、ＭＬＶプロテアーゼによって、４つの構造タンパク質（マトリックス（ＭＡ）、ｐ１２、カプシド（ＣＡ）、及びヌクレオカプシド（ＮＣ））にタンパク質分解によって切断される、６５ｋＤａのポリタンパク質前駆体をコードする。ＭＬＶプロテアーゼの非存在下において、ポリタンパク質は切断されないままであり、得られる粒子は未成熟形態のままである。ＭＭＬＶ核酸をコードする遺伝子を、配列番号２として本明細書中に示す。ＭＭＬＶ核酸の例示的なコドン最適化配列は配列番号３として示す。
[0039]したがって、いくつかの実施形態において、本発明に適切なＧａｇポリペプチドは、実質的に、配列番号１であるＭＭＬＶ Ｇａｇポリペプチドと相同である。いくつかの実施形態において、本発明に適切なＧａｇポリペプチドは、配列番号１に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上相同であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、本発明に適切なＧａｐポリペプチドは、配列番号１と実質的に同一である、若しくは同一である、又はそのコドン縮重バージョンである。配列番号１と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上の同一性を共有するＧａｇポリペプチドバリアントが当技術分野において公知である。
[0040]いくつかの実施形態において、適切なＭＭＬＶ Ｇａｇポリペプチドは、配列番号２に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、適切なＭＭＬＶ Ｇａｇポリペプチドは、配列番号２を有する核酸配列、又はそのコドン縮重バージョンによってコードされる。
[0041]当業者には周知であるように、特定のアミノ酸についてコードする核酸（すなわちコドン）を、宿主生物でよりよく発現されている他のコドンで置換することによって、宿主生物における核酸配列の発現を改善することが可能である。この効果が生じる１つの理由は、生物種が異なれば、コドンについての優先度が異なることによるものである。コドン優先度に基づいて、よりよい発現を達成するために核酸配列を変更するプロセスを、コドン最適化と称する。種々の生物におけるコドン使用バイアスを解析するための種々の方法が、当技術分野において公知であり、コドン最適化遺伝子配列の設計においてこれらの解析を実施するための多くのコンピューターアルゴリズムが開発されている。したがって、いくつかの実施形態において、適切なＭＭＬＶ Ｇａｇポリペプチドは、ＭＭＬＶ Ｇａｇをコードし、配列番号３に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する核酸配列のコドン最適化バージョンによってコードされる。いくつかの実施形態において、適切なＭＭＬＶ Ｇａｇポリペプチドは、配列番号３と本質的に同一である、又は同一である核酸配列によってコードされる。
[0042]当技術分野で周知であるように、アミノ酸又は核酸配列は、種々のアルゴリズム、例えば市販のコンピュータープログラムで利用可能なもの、例えばヌクレオチド配列についてはＢＬＡＳＴＮ、及びアミノ酸配列についてはＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ－ＢＬＡＳＴの任意のものを使用して比較し得る。かかるプログラムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５（３）：４０３～４１０、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９６、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２６６：４６０～４８０、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～３４０２、Ｂａｘｅｖａｎｉｓら、１９９８、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｗｉｌｅｙ、及びＭｉｓｅｎｅｒら（編）、１９９９、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１３２）、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓに記載されている。相同配列を同定することに加えて、上述するプログラムは、典型的には、相同性の程度についての指標を提供する。いくつかの実施形態において、２つの配列は、対応する残基の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上が関連する残基の伸長部にわたって相同である場合、本質的に同一であると考えられる。いくつかの実施形態において、関連する伸長部は完全な配列である。いくつかの実施形態において、関連する伸長部は、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００又はそれ以上の残基である。
[0043]本明細書で使用するＧａｇポリペプチドは、野生型又は天然に存在するＧａｇポリペプチドと比較して、実質的な自己組織化活性を維持しながら、１つ又は複数の、アミノ酸置換、欠失、及び／又は挿入を含む改変レトロウイルスＧａｇポリペプチドであってもよい。典型的には、天然で、Ｇａｇタンパク質は、レトロウイルスプロテアーゼ、逆転写酵素、及びインテグラーゼ酵素活性を含み得る、大きなＣ末端延長部を含む。しかしながら、ＶＬＰの組織化は、一般的には、かかる構成要素の存在を必要としていない。いくつかの場合において、レトロウイルスＧａｇタンパク質単独（例えば、Ｃ末端延長部を欠損、又はゲノムＲＮＡ、逆転写酵素、ウイルスプロテアーゼ、若しくはエンベロープタンパク質のうちの１つ若しくは複数を欠損している）で自己組織化し、インビトロ及びインビボの両方において、ＶＬＰを形成することができる（Ｓｈａｒｍａ Ｓら、１９９７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：１０８０３～８）。
[0044]本発明にしたがって使用するためのＧａｇポリペプチドは、Ｃ末端延長部を欠損しており、ＨＣＭＶ由来のｐｐ６５抗原との融合タンパク質として発現する。天然に存在するＨＣＭＶにおいて、ｐｐ６５は、カプシドとウイルスエンベロープとの間のテグメント内に局在する。これは、細胞傷害性Ｔ細胞応答の主要な標的であり、ＨＣＭＶに対してヘルパーＴ細胞の形成を刺激すること、及びまた、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を誘導することが知られている。ｐｐ６５ポリペプチドは、例えば、Ｇａｇポリペプチドコード配列の３’末端において、インフレームでスプライシングされ、Ｇａｇポリペプチドコード配列になる。Ｇａｇポリペプチドコード配列及びｐｐ６５抗原は単一のプロモーターにより発現される。
[0045]本発明のＶＬＰはまた、ＶＬＰの表面のＨＣＭＶ ｇＢエンベロープ糖タンパク質を発現する。ｇＢは、ＨＣＭＶにおける主要なＢ細胞抗原のうちの１つであり、中和、保護免疫応答、例えば強力な体液性免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、野生型エンベロープＨＣＭＶ ｇＢポリペプチド、配列番号８の配列又は配列番号８のコドン縮重バージョンを含むＶＬＰを含む。ポリペプチドをコードする核酸を配列番号９として示す。配列番号９のコドン最適化バージョンは、配列番号１０として示す。いくつかの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、配列番号８に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上相同であるアミノ酸配列を有するｇＢポリペプチドを含むＶＬＰを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号９に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上相同である核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号９の核酸配列のコドン最適化バージョンによってコードされ、これは、配列番号１０に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上相同である。
[0046]ＶＬＰを含む組成物は、典型的には、広範のサイズのＶＬＰの混合物を含むことは理解されるであろう。以下に列挙する直径値は、混合物中の最も頻度の高い直径に対応することは理解されるべきである。いくつかの実施形態において、組成物中の９０％超のベシクルは、最頻値の５０％以内（例えば、１０００±５００ｎｍ）にある直径を有する。いくつかの実施形態において、分布はより狭くてもよく、例えば、組成物中の９０％超のベシクルは、最頻値の４０、３０、２０、１０又は５％以内にある直径を有していてもよい。いくつかの実施形態において、音波処理又は超音波処理を、ＶＬＰ形成の促進、及び／又はＶＬＰサイズの変更のために使用してもよい。いくつかの実施形態において、濾過、透析及び／又は遠心分離を、ＶＬＰサイズ分布を調整するために使用してもよい。
[0047]一般的に、本開示のＶＬＰは、任意のサイズであり得る。特定の実施形態において、組成物は、約２０ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径を有するＶＬＰを含み得る。いくつかの実施形態において、ＶＬＰは、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００ｎｍの下限によって限られ、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、１８０、又は１７０ｎｍの上限によって限られる範囲内の直径を有することによって特徴付けられる。いくつかの実施形態において、集団内のＶＬＰは、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００ｎｍの下限によって限られ、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、１８０、又は１７０ｎｍの上限によって限られる範囲内の平均直径を有する。いくつかの実施形態において、集団内のＶＬＰは、０．５未満（例えば、０．４５未満、０．４未満、又は０．３未満）の多分散指数を有する。いくつかの実施形態において、ＶＬＰ直径は、ナノサイズ化によって決定される。いくつかの実施形態において、ＶＬＰ直径は、電子顕微鏡によって決定される。
[0048]本発明によるＶＬＰは、当業者に公知の一般的な方法によって製造し得る。例えば、核酸分子、再構成されたベクター又はプラスミドは、当業者に周知の技術を使用して調製し得る。ＶＬＰのためのポリペプチドの組換え発現は、１つ又は複数のポリペプチド（複数可）をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を必要とする。１つ又は複数のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが得られると、ポリペプチドの産生用のベクターを、当技術分野で公知の技術を使用した組換えＤＮＡ技術によって産生し得る。本発明によって使用し得る発現ベクターとしては、とりわけ、哺乳動物及びトリ発現ベクター、バキュロウイルス発現ベクター、植物発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））、プラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）が挙げられるが、これらに限定されない。
[0049]本発明のＶＬＰは、任意の利用可能なタンパク質発現システムにおいて産生し得る。典型的には、発現ベクターは、慣用的な技術によって宿主細胞に移行され、次いで、トランスフェクションされた細胞は慣用的な技術によって培養されて、ＶＬＰを産生する。いくつかの実施形態において、ＶＬＰは、一過性の細胞のトランスフェクションによって産生される。いくつかの実施形態において、ＶＬＰは、安定的にトランスフェクションされた細胞を用いて産生される。ＶＬＰの産生に使用し得る典型的な細胞株としては、哺乳動物細胞株、例えばヒト胎児由来腎臓細胞（ＨＥＫ）２９３、ＷＩ３８、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ＨＴ１０８０細胞、Ｃ１０細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、３Ｔ３細胞、Ｃ１２７細胞、ＣＶ－１細胞、ＨａＫ細胞、ＮＳ／Ｏ細胞、及びＬ－９２９細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特定の非限定的な例としては、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫細胞株（ＮＳＯ／ｌ、ＥＣＡＣＣ、第８５１１０５０３番）、ヒト網膜芽細胞腫（ＰＥＲ．Ｃ６（ＣｒｕＣｅｌｌ、Ｌｅｉｄｅｎ、オランダ））、ＳＶ４０により形質転換されたマウス腎臓ＣＶ１細胞株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胎児由来腎臓細胞株（浮遊培養における増殖用にサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．、３６：５９（１９７７））ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞＋／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０））、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．、２３：２４３～２５１（１９８０））、マウス腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１ ５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、３８３：４４～６８（１９８２））、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞、及びヒト肝細胞腫細胞株（Ｈｅｐ Ｇ２）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＶＬＰ産生に使用し得る細胞株としては、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ－９、Ｓｆ－２１、Ｔｎ－３６８、Ｈｉ５）又は植物細胞（例えば、マメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａ）、穀類又はタバコ）が挙げられる。いくつかの実施形態において、特にグリコシル化がタンパク質機能に重要である場合、哺乳動物細胞がタンパク質発現及び／又はＶＬＰ産生に好ましいことは理解されるであろう（例えば、Ｒｏｌｄａｏ Ａら、２０１０ Ｅｘｐｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ９：１１４９～７６を参照のこと）。
[0050]挿入された配列の発現を調節する、又は特定の方法で遺伝子産物を改変及びプロセシングする細胞系統を選択してもよいことは理解されるであろう。異なる細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後のプロセシング及び改変についての特性及び特定の機構を有する。適切な細胞株又は宿主システムを、発現する外来性のタンパク質の正確な改変及びプロセシングを確実にするように選択し得る。一般的に、遺伝子産物の一次転写、グリコシル化及びリン酸化の適当なプロセシングについての適当な細胞機構を有する真核宿主細胞（パッケージング細胞とも称する（例えば、２９３Ｔヒト胎児由来腎臓細胞））を本発明によって使用し得る。
[0051]ＶＬＰは、公知の技術、例えば遠心分離、勾配、スクロース勾配超遠心分離、接戦流濾過及びクロマトグラフィー（例えば、イオン交換（陽イオン及び陰イオン）クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、及びサイズ分類カラムクロマトグラフィー）、又は差次的溶解度によって精製し得る。或いは、又はさらに、細胞上清を、精製ステップなしに直接的に使用してもよい。さらなる実体、例えばさらなる抗原又はアジュバントを精製したＶＬＰに添加してもよい。
[0052]いくつかの実施形態において、本開示のＶＬＰを産生するために、細胞を２つの発現ベクターを用いて共トランスフェクションし、第１のベクターはＧａｇ－ｐｐ６５融合ポリペプチドをコードし、第２のベクターはｇＢエンベロープ糖タンパク質をコードする。共トランスフェクションしたＨＣＭＶ ｇＢプラスミドは、細胞表面から出芽している粒子による、ｇＢタンパク質の脂質二重層への取込みを可能にする。結果として、ＨＣＭＶ ｐｐ６５非構造タンパク質及びＨＣＭＶ ｇＢエンベロープ糖タンパク質を含む「二価」のＶＬＰが産生される。典型的には、これらのＶＬＰは、ｐｐ６５の含量の１／４０～１／５、典型的には、ｐｐ６５の１／１０～１／２０のｇＢ含量を有する。
[0053]本発明者らは、以前に中和抗体の産生を刺激する天然の立体構造で提示されるｇＢ表面抗原、及びヘルパーＴ細胞（ＴＨリンパ球）及び細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を誘導するｐｐ６５テグメントタンパク質を含む、ＨＣＭＶ ＶＬＰワクチンの開発を報告した（国際公開第２０１３／０６８８４７号）。健常な対象由来の末梢血単核球を使用した試験において、このＶＬＰは、組換えｇＢ及びｐｐ６５抗原単独により産生される応答よりも優れている、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞免疫応答を刺激することが示された（実施例３参照）。
[0054]本発明の組成物は、アジュバントである、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）をさらに含む。ＧＭ－ＣＳＦは、マクロファージ、Ｔ細胞、肥満細胞、ナチュラルキラー細胞、内皮細胞及び線維芽細胞によって分泌される、サイトカインとして機能する単量体の糖タンパク質である。研究により、ＧＭ－ＣＳＦを産生するように遺伝的に改変された照射された腫瘍細胞によるワクチン接種は、強力な抗腫瘍免疫を促進することが示されている（Ｄｒａｎｏｆｆ，Ｇ． Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９９３；９０：３５３９～３５４２）。ＧＭ－ＣＳＦは、抗原提示細胞の発生及び成熟を促進し、Ｔｈ１型応答に対して免疫系を向けることが示されている（Ａｒｅｌｌａｎｏ，Ｍ．＆Ｌｏｎｉａｌ，Ｓ． Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ．２００８；２：１３～２７）。結果として、ＧＭ－ＣＳＦは、ＧＢＭの処置を含む（Ｓｃｈｉｊｎｓ，Ｖ．Ｅ． Ｖａｃｃｉｎｅ ２０１５；３３：２６９０～２６９６）癌免疫療法におけるアジュバントとして提案されている（Ｃｌｉｖｅ，Ｋ．Ｓ． Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ２０１０；９：５２９～５２５）。
[0055]健常なＨＣＭＶ陽性対象由来の細胞を用いたエクスビボ試験において、本開示の発明者らは、本開示の組成物にＧＭ－ＣＳＦを含むことにより、ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰ刺激による、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のＴ細胞産生を増強することを示している。上述のように、ＩＦＮ－γは、抗腫瘍エフェクター分子として同定されており、ＩＦＮ－γ又はＩＦＮ－γシグナル伝達が欠損しているマウスは、腫瘍形成が起こりやすい。したがって、腫瘍応答性Ｔ細胞によるＩＦＮ－γの分泌は、さらなる有効性と関連し得る望ましいバイオマーカーを表している。実施例４にさらに記載するように、健常な対象由来の細胞は、本発明の組成物の存在下において、ＩＦＮ－γの増加を示す。これらのデータは、ＩＦＮ－γの産生が維持されたＴｈ１応答に対するＴ細胞の再活性化を誘導するために、ＧＭ－ＣＳＦを配合したｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ｅＶＬＰを使用することを支持している。
[0056]本開示の例示的な組成物の免疫的学的な効果をさらに評価するために、ナイーブな健康なマウスにおいて試験を行った。処置に対するＴ細胞応答は、ＩＦＮ－γ分泌ＣＤ４＋Ｔ細胞の変化を測定することによって評価した。処置マウス由来の脾細胞において、本発明の組成物は、組換えｐｐ６５によるエクスビボの再活性化後のＩＦＮ－γ分泌ＣＤ４＋Ｔ細胞の増加によって示されるように、ＨＣＭＶ特異的なＴｈ１応答を刺激することができた。これらのデータは、本発明の例示的な組成物は、ナイーブな健康動物において新規のＨＣＭＶ特異的なＴ細胞応答を誘導することができることを示しており、これは、健康なＨＣＭＶ陽性対象から得られた細胞を使用したエクスビボ試験において得られた結果を確認するものである。しかしながら、齧歯類試験からの結果は、ＨＣＭＶに対する免疫を示すヒトＧＢＭ患者におけるＴ細胞応答を刺激する、本発明の組成物の効果を示し得るものではない。本開示の組成物が、ＧＢＭ対象における免疫調節不全の効果を相殺する上で効果的であるかどうかを評価するためには、ヒトＧＢＭ患者において組成物を試験することが必要である。
[0057]本発明の組成物は、第Ｉ～ＩＩ相の用量漸増試験において、ヒトＧＢＭ患者において試験した。再発性のＧＢＭを有する計１８人の対象を、各６人の対象の３つの群に分けた。各群を、本発明の組成物の以下の３つの用量のうちの１つに割り当てた：
低用量－０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した（０．４μｇのｐｐ６５含量）
中間用量－０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した（２μｇのｐｐ６５含量）
高用量－０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した（１０μｇのｐｐ６５含量）。
組成物は、別個の部位において投与される、２つの同量の皮内注入で、疾患進行が確立するまで４週間ごとに投与された。
低用量－０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した（０．４μｇのｐｐ６５含量）
中間用量－０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した（２μｇのｐｐ６５含量）
高用量－０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した（１０μｇのｐｐ６５含量）。
組成物は、別個の部位において投与される、２つの同量の皮内注入で、疾患進行が確立するまで４週間ごとに投与された。
[0058]患者は、１回目の注入前に、ＨＣＭＶ ｇＢ抗原に対する抗体について試験された。半分超の患者は、ｇＢに対する抗体を全く示さず、これは、患者集団におけるＨＣＭＶに対する免疫の顕著な調節不全を示していた。
[0059]第Ｉ～ＩＩ相臨床試験からの結果は、試験組成物の各用量が、いくらかのＧＢＭ患者における免疫応答を刺激することができたことを示している。組成物に対する免疫応答を示した６人の対象のうち、３人は、最高用量の群であり、２人は最低用量の群であり、１人は中間用量群であった。したがって、各用量において、いくらかの対象が免疫応答を示した。しかしながら、低用量及び中間用量の組成物は、ＨＣＭＶ ｇＢタンパク質に対する検出可能な抗体の欠如によって示されるように、１回目の注入前に免疫調節不全を示している患者においてはＴ細胞応答を刺激しなかった。驚くべきことに、最高用量の組成物は、ＨＣＭＶに対する顕著な免疫調節不全を示す５人の患者のうちの３人においてＴ細胞応答を刺激することができた。全ての用量群において、ワクチンに対して応答した患者はまた、疾患安定化の形態で生理学的応答を示した。特に、ワクチン応答者は、１２週間超にわたって、安定疾患を示し、非応答者と比較して、全生存期間中間値の６．２５か月の改善を示した。最も驚くべきことに、最高用量群の２人の患者は、その原発性腫瘍のサイズの６０％の低下を経験した。結果は、各用量の組成物が、免疫応答を誘導する能力を有することを示している。しかし、最高用量の組成物を投与された患者は、低用量及び中間用量を投与された患者とは異なる応答をした。詳細には、最高用量は、ＧＢＭ患者において観察される免疫調節不全を克服することができた。ＨＣＭＶに対する免疫の回復と共に、応答性のＧＢＭ患者は、Ｔ細胞の、ＧＢＭ腫瘍細胞の増殖を防止する能力を利用することができ、結果として全生存期間の改善を経験することができた。したがって、本開示は、ＧＢＭの免疫学的な処置の顕著な進歩、特に、特定のＧＢＭ患者において安定疾患及びより長い生存期間を達成することができる、並びに１０μｇのｐｐ６５含量の用量での処置を使用してＨＣＭＶ免疫調節不全を後退させることができる組成物を記載している。
[0060]したがって、いくつかの実施形態において、本開示は、少なくとも０．４μｇのｐｐ６５及び２００μｇのＧＭ－ＣＳＦの用量で、アジュバントとしてＧＭ－ＣＳＦを配合したｐｐ６５－ｇＢ ＶＬＰを含む、ＧＢＭを処置するための組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、少なくとも１０μｇのｐｐ６５及び２００μｇのＧＭ－ＣＳＦの用量で、アジュバントとしてＧＭ－ＣＳＦを配合したｐｐ６５－ｇＢ ＶＬＰを含む、ＧＢＭを処置するための組成物をさらに提供し、この用量は、ＨＣＭＶに対する免疫調節不全を示すＧＢＭ患者におけるＴ細胞応答を刺激する上で有効である。
[0061]本発明はまた、本明細書に記載するＶＬＰ及びＧＭ－ＣＳＦを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも１つのさらなる薬学的に許容される賦形剤、アジュバント及び／又はキャリアを含む。かかる医薬組成物は、任意選択で、１つ又は複数のさらなる治療的有効物質と組み合わせて投与してもよい。
[0062]いくつかの実施形態において、本明細書で提供する医薬組成物は、無菌注入用形態（例えば、皮内注入に適切な形態）で投与してもよい。例えば、いくつかの実施形態において、医薬組成物は注入に適切な液体剤形で提供される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、任意選択で真空下において、（例えば、凍結乾燥、及び／又は無菌化）散剤として提供され、これは、水性希釈剤（例えば、水、緩衝剤、塩溶液等）により、注入前に再構成される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、水、塩化ナトリウム溶液、酢酸ナトリウム溶液、ベンジルアルコール溶液、リン酸化緩衝生理食塩水等中に希釈及び／又は再構成される。いくつかの実施形態において、散剤は、水性希釈剤と優しく混合しなければならない（例えば、振盪はしない）。
[0063]いくつかの実施形態において、提供される医薬組成物は、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤（例えば、保存剤、不活性希釈剤、分散剤、表面活性剤、及び／又は乳化剤、緩衝剤等）を含む。適切な賦形剤としては、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、スクロース、トレハロース、グリセロール、エタノール又は類似のもの、及びその組合せが挙げられる。ＲｅｍｉｎｇｔｏｎのＴｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、２００６）は、医薬組成物の製剤化に使用される種々の賦形剤及びその調製のための公知の技術を開示している。任意の慣用的な賦形剤媒体は、例えば任意の望ましくない生物学的効果をもたらすか、又は他の方法で医薬組成物の他の任意の構成要素（複数可）と有害な方法で相互作用することによって、物質又はその誘導体と不適合性でない限り、その使用は本発明の範囲内にあると考えられる。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、１つ又は複数の保存剤を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は保存剤を含まない。
[0064]いくつかの実施形態において、医薬組成物は、冷蔵及び／又は冷凍し得る形態で提供される。いくつかの実施形態において、再構成された溶液及び／又は液体の剤形は、再構成後、一定期間（例えば、２時間、１２時間、２４時間、２日、５日、７日、１０日、２週間、１か月、２か月、又はそれ以上）保存し得る。いくつかの実施形態において、特定の期間を超えるＶＬＰ製剤の保存は、ＶＬＰの分解をもたらす。
[0065]本明細書に記載する医薬組成物の製剤は、任意の公知の方法又は薬理学の分野で今後開発される方法によって調製し得る。いくつかの実施形態において、かかる調製方法は、活性成分を１つ又は複数の賦形剤、及び／又は他の副成分と会合させ、その後、必要及び／又は所望に応じて、産物を所望の単一若しくは複数の用量単位に包装するステップを含む。
[0066]本発明による医薬組成物は、バルクで、単一単位用量、及び／又は複数の単一単位用量として、調製、包装、及び／又は販売し得る。本明細書で使用する、「単位用量」は、所定の量の活性成分を含む医薬組成物の別個の量である。活性成分の量は、一般的に、対象に投与される用量、及び／又はかかる用量の好都合な割合、例えば、かかる用量の２分の１、又は３分の１と等しい。本発明の好ましい実施形態において、本発明の組成物の用量は、同時に２つの別個の半用量で送達される。
[0067]本発明による医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容される賦形剤、及び／又は任意のさらなる成分の相対量は、対象の同一性、サイズ、及び／若しくは状態によって、並びに／又は組成物を投与する経路によって変動し得る。
[0068]いくつかの実施形態において、処置は、適当に時間間隔を空けた、本開示の組成物の複数の投与を含む。本明細書に記載する組成物は、一般的に、免疫応答を誘導し続ける期間にわたって、又は患者が疾患の進行を経験する時点まで、投与し得る。本発明の好ましい実施形態において、本発明の組成物は４週間ごとに投与される。
[0069]いくつかの実施形態において、投与される免疫原性組成物の厳密な量は、少なくとも約０．４μｇのｐｐ６５及び約２００μｇのＧＭ－ＣＳＦであり、ＨＣＭＶに対して免疫調節不全を示す対象については、少なくとも約１０μｇのｐｐ６５及び約２００μｇのＧＭ－ＣＳＦである。いくつかの実施形態において、投与される免疫原性組成物は、（ｉ）少なくとも約０．４μｇのｐｐ６５（例えば約０．４μｇ、約０．５μｇ、約０．６μｇ、約０．７μｇ、約０．８μｇ、約０．９μｇ、約１μｇ、約２μｇ又はそれ以上のｐｐ６５）、及び（ｉｉ）少なくとも約２００μｇのＧＭ－ＣＳＦ（例えば、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約３５０μｇ、約４００μｇ、約４５０μｇ、約５００μｇ、又はそれ以上のＧＭ－ＣＳＦ）を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣＭＶに対して免疫調節不全を示す対象については、投与される免疫原性組成物は、（ｉ）少なくとも約１０μｇのｐｐ６５（例えば、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約２５μｇ、約３０μｇ、約３５μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ又はそれ以上のｐｐ６５）、及び（ｉｉ）少なくとも約２００μｇのＧＭ－ＣＳＦ（例えば、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約３５０μｇ、約４００μｇ、約４５０μｇ、約５００μｇ又はそれ以上のＧＭ－ＣＳＦ）を含む。好ましい用量は、対象によって変動してもよく、いくつかの要因に依存していてもよい。したがって、一般的に、使用される正確な用量は、処方する医師によって決定され、対象の体重のみでなく、対象の年齢、並びに、おそらく疾患の進行及び患者におけるＨＣＭＶに対する免疫調節不全の程度にも依存する。
[0070]特定の実施形態において、提供される組成物は、非経口、例えば注入による送達のために製剤化し得る。かかる実施形態において、投与は例えば、静脈内、筋肉内、皮内、若しくは皮下、又は灌注若しくは無針注入技術を介するものであってもよい。好ましい実施形態において、組成物は皮内注入用に製剤化される。
[0071]本明細書において言及する全ての出版物、特許出願、特許及び他の参照文献は参照によりその全体が組み込まれる。さらに、材料、方法及び実施例は例示のためのみのものであって、限定することを意図するものではない。特に定義しない限り、本明細書において使用する全ての技術的用語及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者が通常理解するのと同じ意味を有する。本明細書に記載するものに類似又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は試験において使用してもよいが、適切な方法及び材料は本明細書に記載される。
[0072]本開示は、以下の実施例によってさらに示される。実施例は、例示目的のためにのみ示される。実施例は、開示の範囲又は内容をいずれの方法においても限定するものと解されるべきではない。
実施例１：ＤＮＡ発現プラスミドの構築
[0073]本実施例は、組換えＨＣＭＶ遺伝子配列（ｇＢ及びＧａｇ／ｐｐ６５融合遺伝子配列）の発現のための発現プラスミド及びコンストラクトの開発を記載している。標準的な発現プラスミドは、一般的に、哺乳動物起源のプロモーター配列、イントロン配列、ポリアデニル化シグナル配列（ポリＡ）、ｐＵＣ複製起点配列（ｐＵＣ－ｐＢＲ３２２は、ｃｏｌＥ１の複製開始の起点／部位であり、細菌、例えば大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）（ＤＨ５α）においてプラスミドを複製するのに使用される）、及びプラスミドプラーク選択のための選択マーカーとしての抗生物質耐性遺伝子からなる。プラスミド内では、イントロンの後には、目的の遺伝子又は部分的な遺伝子配列をスプライシングするのに使用し得る種々の制限酵素部位がある。
[0073]本実施例は、組換えＨＣＭＶ遺伝子配列（ｇＢ及びＧａｇ／ｐｐ６５融合遺伝子配列）の発現のための発現プラスミド及びコンストラクトの開発を記載している。標準的な発現プラスミドは、一般的に、哺乳動物起源のプロモーター配列、イントロン配列、ポリアデニル化シグナル配列（ポリＡ）、ｐＵＣ複製起点配列（ｐＵＣ－ｐＢＲ３２２は、ｃｏｌＥ１の複製開始の起点／部位であり、細菌、例えば大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）（ＤＨ５α）においてプラスミドを複製するのに使用される）、及びプラスミドプラーク選択のための選択マーカーとしての抗生物質耐性遺伝子からなる。プラスミド内では、イントロンの後には、目的の遺伝子又は部分的な遺伝子配列をスプライシングするのに使用し得る種々の制限酵素部位がある。
[0074]プロポール（Ｐｒｏｐｏｌ）ＩＩ発現プラスミドは、ｐＨＣＭＶ（ＨＣＭＶの初期プロモーター）、ベータグロビンイントロン（ＢＧＬイントロン）、ウサギグロビンポリアデニル化シグナル配列（ＰｏｌｙＡ）、ｐＵＣ複製起点配列（ｐＵＣ－ｐＢＲ３２２は、ｃｏｌＥ１の複製開始起点／部位であり、細菌、例えば大腸菌（ＤＨ５α）においてプラスミドを複製するのに使用される）、及びアンピシリン耐性遺伝子β－ラクタマーゼ（Ａｍｐ Ｒ－プラスミドについての選択マーカーはアンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）に対する耐性を付与する）を含む。
[0075]Ｇａｇ ＭＭＬＶ発現ベクター（「ＭＬＶ－Ｇａｇ」）を開発するために、ＭＭＬＶのＧａｇポリタンパク質（Ｃ末端Ｐｏｌ配列を有さないＧａｇ）をコードする相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）配列（配列番号３）を、Ｐｒｏｐｏｌ ＩＩ発現ベクターにクローニングした。ｇＢ発現コンストラクト（「ｇＢ」）を開発するために、ｇＢの全長配列を、ヒト発現のためにコドン最適化し（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）、ｇＢの細胞外部分、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、及び細胞質部分（Ｃｙｔｏ）を含んで、Ｐｒｏｐｏｌ ＩＩ発現ベクターにクローニングした。Ｇａｇ／ｐｐ６５発現コンストラクト（「Ｇａｇ／ｐｐ６５」）を開発するために、ＭＭＬＶのＧａｇポリタンパク質（Ｃ末端Ｐｏｌ配列を有さないＧａｇ）をコードする配列を、ヒト発現のためにコドン最適化した（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）ｐｐ６５の全長配列と融合し、Ｐｒｏｐｏｌ ＩＩ発現ベクターにクローニングした。
[0076]ＤＮＡプラスミドを、コンピテントな大腸菌（ＤＨ５α）において増幅し、エンドトキシン非含有調製キットを標準のプロトコルにしたがって使用して精製した。
実施例２：ウイルス様粒子の製造
[0077]本実施例は、実施例１に記載する種々の組換えＨＣＭＶ抗原を含むウイルス様粒子を産生するための方法を記載している。
実施例２：ウイルス様粒子の製造
[0077]本実施例は、実施例１に記載する種々の組換えＨＣＭＶ抗原を含むウイルス様粒子を産生するための方法を記載している。
[0078]ＨＥＫ ２９３細胞由来の２９３ＳＦ－３Ｆ６細胞株は、無血清の既知組成培地で増殖した、特許保護された浮遊細胞培養物である（加国特許第２，２５２，９７２号、及び米国特許第６，２１０，９２２号）。細胞を、ＭＭＬＶ－Ｇａｇ ／ｐｐ６５ ＤＮＡ発現プラスミドを用いてリン酸カルシウム法を使用して一過性にトランスフェクションし、ｇＢ ＤＮＡ発現プラスミドを共トランスフェクションした。ＨＥＫ ２９３細胞によるＨＣＭＶ抗原の発現は、フローサイトメトリーにより確認した。トランスフェクションの４８～７２時間後、ＶＬＰを含む上清を回収し、０．４５μｍ孔径のメンブレンを通して濾過し、ＳＷ３２ Ｂｅｃｋｍａｎローター（２５，０００ｒｐｍ、２時間、４℃）で、２０％スクロースクッションを通す限外濾過によってさらに濃縮及び精製した。ペレットを無菌エンドトキシン非含有ＰＢＳ（ＧＩＢＣＯ）中に再懸濁し、５００倍に濃縮されたＶＬＰストックを得た。総タンパク質をＢｒａｄｆｏｒｄアッセイ定量キット（ＢｉｏＲａｄ）によってアリコートについて決定した。精製したＶＬＰを使用するまで－８０℃で保存した。各ロットの精製したＶＬＰを、ＳＤＳ－Ｐａｇｅ及びｇＢ（ｇＢに対するＣＨ２８マウスモノクローナル抗体、Ｖｉｒｕｓｙｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｐｅｒｅｉｒａ，Ｌら、１９８４ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １３９：７３～８６）、及びｐｐ６５（ＵＬ８３／ｐｐ６５に対するＣＨ１２マウスモノクローナル抗体、Ｖｉｒｕｓｙｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｐｅｒｅｉｒａ、Ｌ．ら、１９８２ Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ３６：９２４～９３２）に対する特異的な抗体を用いるウェスタンブロットによって、ｇＢ、及びＭＭＬＶ－Ｇａｇ／ｐｐ６５の発現について解析した。抗体は、ＥＣＬ（ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｈｅｍｉｌｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）を使用して検出した。
実施例３：ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰを用いる健常なＨＣＭＶ陽性の対象由来のＰＢＭＣにおけるＴ細胞の刺激
実施例３：ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰを用いる健常なＨＣＭＶ陽性の対象由来のＰＢＭＣにおけるＴ細胞の刺激
[0079]本試験の目的は、実施例２により記載するように産生され、スクロースクッション超遠心分離により精製されるｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰの、健常なＨＣＭＶ陽性の対象由来の末梢血単核球（「ＰＢＭＣ」）における既存のＨＣＭＶ特異的なＣＤ４＋及びＣＤ８－Ｔ細胞を活性化させる能力を評価することであった。
[0080]ヒト末梢血は、ＣＭＶ＋の健常なドナーより得た。ＰＢＭＣは、フィコール勾配分離を使用して全血から単離し、単回使用アリコートを作製した。ＰＢＭＣは、分離後新鮮な状態、又は－１７０℃での保存後のいずれかで使用した。端的には、ＰＢＭＣは、４ｍＬのＰＰ培養管中で、１×１０６細胞／ｍＬで培養した。ｇＢ／ｐｐ６５ ｅＶＬＰ、及び対照を細胞に添加した。細胞は、刺激剤と共に３時間培養した後、モネンシンを添加し、さらに１０時間培養した。
[0081]力価は、ＩＦＮ－γ分泌ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の観点から、エクスビボのＰＢＭＣ培養において評価した。細胞を収集し、ＰｅｒＣＰコンジュゲート抗ＣＤ３、ＰＥコンジュゲート抗ＣＤ４、及びＡＰＣコンジュゲート抗ＣＤ８モノクローナル抗体を使用して表面抗原について染色した。次いで、ＢＶ５１０コンジュゲート抗ＩＦＮγによる細胞内染色のために、細胞を透過処理及び固定した。染色した細胞をＦＡＣＳ Ａｃｃｕｒｉ（Ｂｅｃｋｔｏｎ－Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）におけるフローサイトメトリー解析によって解析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）を用いて、ゲーティングを最初にＣＤ３＋細胞について行って、ＣＤ３＋ＣＤ４＋又はＣＤ３＋ＣＤ８＋集団のいずれかの間のＩＦＮ－γ分泌細胞の割合を評価した。
[0082]データを以下の表１に示す。データは、（ｇＢ／ｐｐ６５ ＶＬＰを含む組成物の場合）空ＶＬＰによる刺激、又は非刺激細胞（組換えタンパク質の場合）に対するバックグラウンド応答を差し引いた後の、細胞の平均パーセンテージとして示す。
[0083]表１に示すように、二価のｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰは、エクスビボのＣＤ４＋及びＣＤ８＋両方のＩＦＮ－γ分泌Ｔ細胞応答を刺激する。組換えｇＢ及びｐｐ６５タンパク質の組合せは、健常な対象由来のＰＢＭＣにおけるＣＤ８＋及び、特にＣＤ４＋Ｔ細胞応答を刺激する上で、二価のＶＬＰよりも有効性が低かった。
実施例４：ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰをＧＭ－ＣＳＦと共に使用する、健常な対象由来のＰＢＭＣにおけるＴ細胞の刺激
実施例４：ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰをＧＭ－ＣＳＦと共に使用する、健常な対象由来のＰＢＭＣにおけるＴ細胞の刺激
[0084]本試験の目的は、ＧＭ－ＣＳＦを配合したｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰの、健常なドナー由来の、ＨＣＭＶ特異的なエクスビボ培養されたＴ細胞を再活性化させる能力を評価することであった。Ｔ細胞再活性化は、ＩＦＮ－γ分泌ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の観点から、又はサイトカイン及びケモカインのパネルの分泌に基づいて評価した。
[0085]ＰＢＭＣは、実施例３の方法を使用して４人の健常なドナーから単離し、２用量のｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰ及び２用量のＧＭ－ＣＳＦ並びに刺激対照と共に培養した。培養後、細胞を実施例３に記載するように、表面及び細胞内染色のために回収し、市販のＥＬＩＳＡキットを製造者の指示にしたがって使用してサイトカイン及びケモカインを分析するために上清を回収した。
[0086]結果を、ＩＦＮ－γ分泌Ｔ細胞の頻度として表２に示す。
[0087]表２に示すように、ＧＭ－ＣＳＦを配合したｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰは、培養ＰＢＭＣにおいてＩＦＮ－γ産生ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激する。
実施例５：ＧＭ－ＣＳＦを配合したｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰを用いたマウスにおける免疫応答の特性決定
[0088]本試験の目的は、ＧＭ－ＣＳＦを配合した二価のｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰによってマウスにおいてインビボで誘導された免疫応答を特性決定することであった。
実施例５：ＧＭ－ＣＳＦを配合したｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰを用いたマウスにおける免疫応答の特性決定
[0088]本試験の目的は、ＧＭ－ＣＳＦを配合した二価のｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰによってマウスにおいてインビボで誘導された免疫応答を特性決定することであった。
[0089]２４匹の６～８週齢の雌のＢａｌｂ／ＣマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｔ－Ｃｏｎｓｔａｎｔ、Ｑｕｅｂｅｃ、カナダ）から購入した。動物を気候順応させた。到着時のマウスの体重は１８．１±０．４２ｇであった。到着時に、マウスを群当たり４匹の動物を含む３つの群に無作為に割り当てた。全ての群におけるＶＬＰ用量は、ＥＬＩＳＡを用いるｇＢ含量に基づく０．５μｇのｇＢ及び２．５μｇ／用量のマウスＧＭ－ＣＳＦであった。マウスは、５μｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦを配合した二価のｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰ又は空のＶＬＰ－ＧＭ－ＣＳＦ対照のいずれかによって、０日目及び２８日目に免疫化した。
[0090]群当たり４匹の動物からの脾細胞及び血液の収集は、２回目の免疫化の１０日後に計画していた。新しく単離した細胞を完全ＤＭＥＭ中で培養しｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰ又は組換えｇＢ、組換えｐｐ６５又は空のＧａｇ ＶＬＰを用いて１６時間刺激した後、フローサイトメトリー解析を行った。ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮ－γの発現レベルを市販のキットを使用して評価した。
[0091]結果を以下の表３に示す。
[0092]表３に示すように、ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰは、組換えｐｐ６５によるエクスビボ再活性化後のＩＦＮ－γ分泌ＣＤ４＋Ｔ細胞の増加によって示される、ＣＭＶ特異的なＴｈ１応答を誘導し得る。これらのデータは、ＧＭ－ＣＳＦを配合したｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ｅＶＬＰが、ナイーブな動物における新規のＭＶ特異的なＴ細胞応答を誘導し得ることを示しており、これは、健常な対象及びＧＢＭ患者から得たＰＢＭＣのエクスビボ刺激試験において確認された結果を確認するものである。
実施例６：ヒトＧＢＭ患者におけるｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰの臨床試験
実施例６：ヒトＧＢＭ患者におけるｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰの臨床試験
[0093]アジュバントとしてＧＭ－ＣＳＦを配合したｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰを含む免疫原性組成物の安全性、耐用性、及び最適化用量レベルを明確にするために、ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰを用量漸増試験において試験した。
[0094]再発性のＷＨＯグレードＩＶ ＧＢＭ及び、テモゾロミドを含む、若しくは含まない外科手術及び照射療法を含む初期の処置後の腫瘍再発又は進行の明確な根拠を有する１８人の成人対象（年齢１８～７０歳）を試験に登録した。対象を各６人の参加者の３つの群に分けた。各群に、臨床的な疾患進行が確認されるまで、４週間ごとに、治験産物の以下の３つの用量のうちの１つを投与した：
群１：０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した低用量（０．４μｇ ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰ）ワクチン。
群２：０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した中間用量（２μｇ ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰ）ワクチン。
群３：０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した高用量（１０μｇ ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰ）ワクチン。
群１：０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した低用量（０．４μｇ ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰ）ワクチン。
群２：０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した中間用量（２μｇ ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰ）ワクチン。
群３：０．２ｍＬ体積のＧＭ－ＣＳＦ（２００μｇ）を配合した高用量（１０μｇ ｇＢ／ｐｐ６５Ｇａｇ ＶＬＰ）ワクチン。
[0095]治験薬は別個の注入部位において２つの同量の内皮注入で投与した。対象が臨床的な疾患進行の判断基準に達する場合、対象を試験処置から取り下げ、以降ワクチン応答について評価しなかった。臨床的な疾患進行は、ＭＲＩを用いた腫瘍サイズの測定によってモニタリングした。対象は、１回目の注入の日から、対照が確認された腫瘍進行を示すまでモニタリングした。
[0096]治験薬に対する応答は以下のように決定した：
ベースライン及び注入後サンプルにおける血清ＩｇＧ抗ｇＢ抗体力価として結果が示される、ベースライン及び薬剤の各投与の２週間後における、ＥＬＩＳＡアッセイによるＨＣＭＶ ｇＢ抗原に対する抗体力価。
ベースライン及び注入後サンプルにおける血清ＩｇＧ抗ｇＢ抗体力価として結果が示される、ベースライン及び薬剤の各投与の２週間後における、ＥＬＩＳＡアッセイによるＨＣＭＶ ｇＢ抗原に対する抗体力価。
ベースライン及び各投与の２週間後において評価される、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－５ ＥＬＩＳＰＯＴを使用するＨＣＭＶ ｇＢ及びｐｐ６５抗原に対する細胞免疫。結果は、ベースライン及び各処置後のＨＣＭＶ刺激後のＩＦＮ－γ及びＩＬ－５スポット／３×１０５ ＰＢＭＣの頻度として示す。
１回目の投与の日から進行（又は死亡）の日時までの無増悪生存期間（ＰＦＳ）。
[0097]サンプルは、３人の臨床試験対象からは、疾患進行が急速であるために得ることはできず、そのため、これらの対象についてのデータは得られなかった。残りの１５人の対象については、データを以下の表４ａ及びｂ（低用量）、５ａ及びｂ（中間用量）、及び６ａ及びｂ（高用量）に示す。細胞免疫（ＣＭＩ）データは、１０６個のＰＢＭＣ当たりのＳＦＣ（ｓｐｏｔ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌ）として表される。腫瘍応答は、それぞれの月について、対象が試験にＳＤ（安定疾患）、ＰＤ（進行疾患）又は？（試験の結論がない）として維持されていると示される。
[0098]表４及び５から見られるように、低用量及び中間用量はいずれも、１回目の注入前（すなわちベースライン）において、ｇＢ抗原に対する抗体を有しているＧＢＭ患者におけるＴ細胞応答を刺激した。しかし、低用量及び中間用量はいずれも１回目の注入前にｇＢに対する抗体を有さない患者におけるＴ細胞応答を刺激することはできず、これは、ＨＣＭＶ免疫調節不全の根拠となっている。
[0099]しかしながら、驚くべきことに、高用量の本開示の組成物は、１回目の注入前にｇＢに対する抗体を有さない患者の大部分（５人のうち３人）において免疫応答を刺激した（表６を参照）。これらの患者は、処置前にはＨＣＭＶ免疫の顕著な調節不全を示していた。しかしながら、高用量において、免疫調節不全は克服され、患者はＨＣＭＶ抗原に対する抗体及びＴ細胞応答を開始した。さらにより顕著なことに、ワクチン接種後にＨＣＭＶ特異的な免疫調節不全を克服した患者は、また腫瘍成長及び疾患進行の観点から、陽性の臨床応答を示した。
[0100]安定化疾患を有する患者の腫瘍を、ＭＲＩを使用して測定した。結果を以下の表７に示す。時間は、週で示し、時間ゼロは１回目の処置の日である。
[0101]上記表７に見られるように、安定疾患を有する対象のうちの２人は、その原発性腫瘍のサイズの低下を示した。
[0102]臨床試験の対象を死亡までの生存期間について、試験後に経過観察を行った。以下の表８は、試験に参加した各対象についてのＰＦＳ及び全生存期間（週）を、対象が試験ワクチンに応答したかどうかと共に示す。
[0103]表８に見られるように、ワクチン接種応答者の全生存率は、非応答者のその率を有意に超えており、ワクチン非応答者が１２か月時点で２５％の全生存率に対して、ワクチン応答者は１２か月時点で８３％の全生存率であった。ワクチン非応答者についての全生存中央値は３１週であったのに対して、ワクチン応答者については５６週であり、６．２５か月改善された。したがって、ワクチンに対する応答は、改善された生存期間と高度に相関していた。
〔等価物〕
[0104]本開示は、その詳細な記載と組み合わせて記載されているが、前述の記載は、本発明を例示することを意図しており、本発明の範囲を限定することを意図するものではなく、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって定義されるものであることは理解されるべきである。他の態様、利点及び改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内にある。
[0104]本開示は、その詳細な記載と組み合わせて記載されているが、前述の記載は、本発明を例示することを意図しており、本発明の範囲を限定することを意図するものではなく、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって定義されるものであることは理解されるべきである。他の態様、利点及び改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内にある。
〔関連出願の相互参照〕
[0001]本出願は、２０１９年５月３１日に出願された、米国仮特許出願第６２／８５５，１２０号の利益を主張し、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
[0001]本出願は、２０１９年５月３１日に出願された、米国仮特許出願第６２／８５５，１２０号の利益を主張し、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
[0012]配列番号３は、コドン最適化ＭＭＬＶ－Ｇａｇヌクレオチド配列である
ATGGGACAGACCGTCACAACACCCCTGAGCCTGACCCTGGGACATTGGAAAGACGTGGAGAGGATCGCACATAACCAGAGCGTGGACGTGAAGAAACGGAGATGGGTCACATTCTGCAGTGCTGAGTGGCCAACTTTTAATGTGGGATGGCCCCGAGACGGCACTTTCAACAGGGATCTGATCACCCAGGTGAAGATCAAGGTCTTTAGCCCAGGACCTCACGGACATCCAGACCAGGTGCCTTATATCGTCACCTGGGAGGCACTGGCCTTCGATCCCCCTCCATGGGTGAAGCCATTTGTCCACCCAAAACCACCTCCACCACTGCCTCCAAGTGCCCCTTCACTGCCACTGGAACCACCCCGGAGCACACCACCCCGCAGCTCCCTGTATCCTGCTCTGACTCCATCTCTGGGCGCAAAGCCAAAACCACAGGTGCTGAGCGACTCCGGAGGACCACTGATTGACCTGCTGACAGAGGACCCCCCACCATACCGAGATCCTCGGCCTCCACCAAGCGACCGCGATGGAAATGGAGGAGAGGCTACTCCTGCCGGCGAAGCCCCTGACCCATCTCCAATGGCTAGTAGGCTGCGCGGCAGGCGCGAGCCTCCAGTGGCAGATAGCACCACATCCCAGGCCTTCCCTCTGAGGGCTGGGGGAAATGGGCAGCTCCAGTATTGGCCATTTTCTAGTTCAGACCTGTACAACTGGAAGAACAATAACCCCTCTTTCAGTGAGGACCCCGGCAAACTGACCGCCCTGATCGAATCCGTGCTGATTACCCATCAGCCCACATGGGACGATTGTCAGCAGCTCCTGGGCACCCTGCTGACCGGAGAGGAAAAGCAGCGCGTGCTGCTGGAGGCTCGCAAAGCAGTCCGAGGGGACGATGGACGGCCCACACAGCTCCCTAATGAGGTGGACGCCGCTTTTCCACTGGAAAGACCCGACTGGGATTATACTACCCAGGCAGGGAGAAACCACCTGGTCCATTACAGGCAGCTCCTGCTGGCAGGCCTGCAGAATGCCGGGAGATCCCCCACCAACCTGGCCAAGGTGAAAGGCATCACACAGGGGCCTAATGAGTCACCAAGCGCCTTTCTGGAGAGGCTGAAGGAAGCTTACCGACGGTATACCCCATACGACCCTGAGGACCCCGGACAGGAAACAAACGTCTCCATGTCTTTCATCTGGCAGTCTGCCCCAGACATTGGGCGGAAGCTGGAGAGACTGGAAGACCTGAAGAACAAGACCCTGGGCGACCTGGTGCGGGAGGCTGAAAAGATCTTCAACAAACGGGAGACCCCCGAGGAAAGAGAGGAAAGGATTAGAAGGGAAACTGAGGAAAAGGAGGAACGCCGACGGACCGAGGACGAACAGAAGGAGAAAGAACGAGATCGGCGGCGGCACCGGGAGATGTCAAAGCTGCTGGCCACCGTGGTCAGCGGACAGAAACAGGACAGACAGGGAGGAGAGCGACGGAGAAGCCAGCTCGACAGGGATCAGTGCGCATACTGTAAGGAAAAAGGCCATTGGGCCAAGGATTGCCCCAAAAAGCCAAGAGGACCAAGAGGACCAAGACCACAGACATCACTGCTGACCCTGGACGAC（配列番号３）
ATGGGACAGACCGTCACAACACCCCTGAGCCTGACCCTGGGACATTGGAAAGACGTGGAGAGGATCGCACATAACCAGAGCGTGGACGTGAAGAAACGGAGATGGGTCACATTCTGCAGTGCTGAGTGGCCAACTTTTAATGTGGGATGGCCCCGAGACGGCACTTTCAACAGGGATCTGATCACCCAGGTGAAGATCAAGGTCTTTAGCCCAGGACCTCACGGACATCCAGACCAGGTGCCTTATATCGTCACCTGGGAGGCACTGGCCTTCGATCCCCCTCCATGGGTGAAGCCATTTGTCCACCCAAAACCACCTCCACCACTGCCTCCAAGTGCCCCTTCACTGCCACTGGAACCACCCCGGAGCACACCACCCCGCAGCTCCCTGTATCCTGCTCTGACTCCATCTCTGGGCGCAAAGCCAAAACCACAGGTGCTGAGCGACTCCGGAGGACCACTGATTGACCTGCTGACAGAGGACCCCCCACCATACCGAGATCCTCGGCCTCCACCAAGCGACCGCGATGGAAATGGAGGAGAGGCTACTCCTGCCGGCGAAGCCCCTGACCCATCTCCAATGGCTAGTAGGCTGCGCGGCAGGCGCGAGCCTCCAGTGGCAGATAGCACCACATCCCAGGCCTTCCCTCTGAGGGCTGGGGGAAATGGGCAGCTCCAGTATTGGCCATTTTCTAGTTCAGACCTGTACAACTGGAAGAACAATAACCCCTCTTTCAGTGAGGACCCCGGCAAACTGACCGCCCTGATCGAATCCGTGCTGATTACCCATCAGCCCACATGGGACGATTGTCAGCAGCTCCTGGGCACCCTGCTGACCGGAGAGGAAAAGCAGCGCGTGCTGCTGGAGGCTCGCAAAGCAGTCCGAGGGGACGATGGACGGCCCACACAGCTCCCTAATGAGGTGGACGCCGCTTTTCCACTGGAAAGACCCGACTGGGATTATACTACCCAGGCAGGGAGAAACCACCTGGTCCATTACAGGCAGCTCCTGCTGGCAGGCCTGCAGAATGCCGGGAGATCCCCCACCAACCTGGCCAAGGTGAAAGGCATCACACAGGGGCCTAATGAGTCACCAAGCGCCTTTCTGGAGAGGCTGAAGGAAGCTTACCGACGGTATACCCCATACGACCCTGAGGACCCCGGACAGGAAACAAACGTCTCCATGTCTTTCATCTGGCAGTCTGCCCCAGACATTGGGCGGAAGCTGGAGAGACTGGAAGACCTGAAGAACAAGACCCTGGGCGACCTGGTGCGGGAGGCTGAAAAGATCTTCAACAAACGGGAGACCCCCGAGGAAAGAGAGGAAAGGATTAGAAGGGAAACTGAGGAAAAGGAGGAACGCCGACGGACCGAGGACGAACAGAAGGAGAAAGAACGAGATCGGCGGCGGCACCGGGAGATGTCAAAGCTGCTGGCCACCGTGGTCAGCGGACAGAAACAGGACAGACAGGGAGGAGAGCGACGGAGAAGCCAGCTCGACAGGGATCAGTGCGCATACTGTAAGGAAAAAGGCCATTGGGCCAAGGATTGCCCCAAAAAGCCAAGAGGACCAAGAGGACCAAGACCACAGACATCACTGCTGACCCTGGACGAC（配列番号３）
Claims (11)
- ヒト対象における多形性神経膠芽腫（ＧＢＭ）を処置するための免疫療法組成物であって、
（ｉ） （ａ）ＨＣＭＶに見出されるｐｐ６５タンパク質の上流に融合した、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）に見出されるｇａｇタンパク質のＮ末端部分を含む融合タンパク質、及び
（ｂ）ＨＣＭＶに見出される糖タンパク質（ｇＢ）タンパク質を含むポリペプチド
を含む、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、並びに
（ｉｉ） ＧＭ－ＣＳＦ
を含み、
前記ＶＬＰが、１用量当たり少なくとも４μｇのｇＢ／ｐｐ６５ Ｇａｇの量で存在する、免疫療法組成物。 - 前記融合タンパク質が、配列番号４に少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ポリペプチドが、配列番号７に少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の免疫療法組成物。
- 前記融合タンパク質が、配列番号４のアミノ酸配列を含み、前記ポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の免疫療法組成物。
- 前記ＧＭ－ＣＳＦが、１用量当たり少なくとも２００μｇの量で存在する、請求項１に記載の免疫療法組成物。
- 請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、ＧＢＭを有する対象を処置する方法。
- ヒト対象における多形性神経膠芽腫（ＧＢＭ）を処置するための免疫療法組成物であって、
（ｉ） （ａ）ＨＣＭＶに見出されるｐｐ６５タンパク質の上流に融合した、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）に見出されるｇａｇタンパク質のＮ末端部分を含む融合タンパク質、及び
（ｂ） ＨＣＭＶに見出される糖タンパク質（ｇＢ）タンパク質を含むポリペプチド
を含む、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、並びに
（ｉｉ） ＧＭ－ＣＳＦ
を含み、
前記ＶＬＰが、１用量当たり少なくとも１０μｇのｇＢ／ｐｐ６５ Ｇａｇの量で存在する、免疫療法組成物。 - 前記融合タンパク質が、配列番号４に少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ポリペプチドが、配列番号７に少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の免疫療法組成物。
- 前記融合タンパク質が、配列番号４のアミノ酸配列を含み、前記ポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の免疫療法組成物。
- 前記ＧＭ－ＣＳＦが、１用量当たり少なくとも２００μｇの量で存在する、請求項６に記載の免疫療法組成物。
- 請求項６に記載の組成物を対象に投与することを含む、ＧＢＭを有する対象を処置する方法。
- 前記対象が、ＨＣＭＶに対する免疫の調節不全を示し、前記調節不全が、ＨＣＭＶ ｇＢタンパク質に対する検出可能な抗体応答の欠如によって測定される、請求項１０に記載の方法。
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