JP2022534514A - Ａｌｋ７結合タンパク質及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本開示は、抗ＡＬＫ７抗体等のＡＬＫ７結合性タンパク質、ならびに組成物及びＡＬＫ７結合性タンパク質を作製するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７活性を阻害するかまたはそれに拮抗する。さらに、本開示は、過体重、肥満、糖尿病、過体重、肥満、２型糖尿病、及びそれらに関連する状態；代謝障害、ならびにＡＬＫ７を標的とすることにより治療、予防または改善され得る他の疾患もしくは状態を、診断及び治療するための組成物及び方法を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願
本特許出願は、２０１９年５月３０日に提出された米国仮特許出願第６２／８５４，６１９号に対する優先権を主張するものであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２０年４月１０日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーはＡＰＨ－００７２５＿ＳＬ．ｔｘｔという名前であり、サイズは４６，５９５バイトである。
米国及び世界中のいくつかの国々では過体重及び肥満がまん延しており、すべての年齢、人種及び民族の集団で男女ともに増加している。過体重及び肥満はまた、生命活動及び生活習慣を障害する他の疾患または状態と関連する。肥満は、２型糖尿病、炎症、ならびに心血管疾患、肺疾患、脂肪性肝疾患、神経疾患、及び肝疾患、及び腎疾患等、他の疾患及び状態重篤な危険因子として認識されている。
２型糖尿病は慢性の進行性疾患であり、これも同様にまん延している。ＩＩ型糖尿病に対する確立された治療法はないが、疾患の避けられない転帰を遅延または軽減するための、認識されている治療が多数ある。２型糖尿病は最初に、特に肥満の対象では、食事と運動の調整により、また体重減少により治療されることがほとんどである。臨床像を改善する体重減少量はときにわずか（例えば、４．４～１１ポンド）であり、これは、脂肪組織活性、例えば、化学的シグナル伝達（特に、腹部臓器とその周辺の内臓脂肪組織での）の十分に解明されていない側面による可能性が高い。
上述を考慮し、過体重、肥満及び２型糖尿病の流行を制御し治療するための新たな治療剤が必要とされている。追加のＡＬＫ７結合性タンパク質及びその使用は、過体重、肥満、２型糖尿病、及びそれらに関連する状態；代謝障害、ならびにＡＬＫ７を標的とすることにより治療、予防または改善され得る他の疾患もしくは状態の、診断と治療、予防及び／または改善に有用であろう。
本開示は、ＡＬＫ７結合性タンパク質及びかかるＡＬＫ７結合性タンパク質を使用する方法を提供する。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７が１つ以上の同族ＡＬＫ７リガンド及び／または１つ以上の同族ＡｃｔＲＩ受容体と結合することを阻害もしくは阻止する能力がある。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７、ならびにＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）及びＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、またはＮｏｄａｌの多量体化を阻害もしくは阻止する能力がある。開示はまた、ＡＬＫ７発現及び／またはＡＬＫ７媒介性シグナル伝達上昇と関連する疾患もしくは状態の診断、もしくは治療、予防及び／または改善のためのＡＬＫ７結合性タンパク質を使用する方法も提供する。そのような疾患または状態としては、過体重、肥満（例えば、腹部肥満）；インスリン抵抗性；メタボリックシンドローム及び他の代謝性の疾患もしくは状態；ＨＤＬ低値、ＬＤＬ高値、高脂血症、高トリグリセリド血症もしくは脂質異常症等の脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド低下；炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）、脂肪性肝疾患；非アルコール性脂肪性肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、ＬＤＬ高値及び高コレステロール血症）；冠動脈心疾患を含む心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、線維素溶解障害、アテローム性動脈硬化等の心血管疾患；動脈硬化、及び高血圧；シンドロームＸ；血管再狭窄；ニューロパチー；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸機能障害、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚上の暗色斑）；及びがん（例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌もしくは結腸癌）；ならびに上記の疾患もしくは状態のうち１つ以上か、または過剰体重（例えば、体格指数（ＢＭＩ）≧２５ｋｇ／ｍ２）か、または体脂肪過多と関連する他の障害／状態が挙げられるが、これらに限定されない。本開示はまた、限定するわけではないが、抗体等のアンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質を使用して、体重を減少させる（例えば、体重減少を促進する）ための方法、及び体重増加を減少させる（例えば、体重増加を予防する）ための方法も提供する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合する。さらなる実施形態では、提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、（ａ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドの存在下で、ＡＬＫ７及びＡｃｔＲＩＩ受容体を発現している細胞表面上での、ＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）を含有する複合体の形成を減少させる、（ｂ）ＡＬＫ７への結合をＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）と競合する、（ｃ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）と競合する、（ｄ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＡＬＫ７のリン酸化を減少させる、（ｅ）１つ以上のＴＧＦ－ベータリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる、（ｆ）ＡＬＫ７に、１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により決定した場合）で結合する、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏ及び／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含有する複合体の形成を減少させる、という特性から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を使用した脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７への結合を、本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性のＶＨとＶＬの対を有する抗体と交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、相補性決定領域（ＣＤＲ）のセット、すなわち、重鎖可変領域（ＶＨ）－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、軽鎖可変領域（ＶＬ）－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、かかるＣＤＲは、表１に開示されている重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）の対に存在する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、（ａ）配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、（ｃ）配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、及び（ｄ）配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列、から選択されるＶＨとＶＬの対に存在するＣＤＲのセットを含む。
追加の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＣＤＲのセット、すなわち、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、かかるＣＤＲのセットは、ＣＤＲの参照セット、すなわち、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を含むというセットと同一であるか、あるいはそこから合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、もしくは１０未満の、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有し、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＣＤＲのセット、すなわち、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を含むというセットを含み、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗原結合領域（ＡＢＲ）のセット、すなわち、重鎖可変領域（ＶＨ）－ＡＢＲ１、ＶＨ－ＡＢＲ２、ＶＨ－ＡＢＲ３、軽鎖可変領域（ＶＬ）－ＡＢＲ１、ＶＬ－ＡＢＲ２及びＶＬ－ＡＢＲ３を含み、かかるＡＢＲは、表１に開示されている重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）の対に存在する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、（ａ）配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、（ｃ）配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、及び（ｄ）配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列、から選択されるＶＨとＶＬの対に存在するＡＢＲのセットを含む。
追加の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＡＢＲのセット、すなわち、ＶＨ－ＡＢＲ１、ＶＨ－ＡＢＲ２、ＶＨ－ＡＢＲ３、ＶＬ－ＡＢＲ１、ＶＬ－ＡＢＲ２、及びＶＬ－ＡＢＲ３を含み、かかるＡＢＲのセットは、ＡＢＲの参照セット、すなわち、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７３のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７４または６９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号７５または７０のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号７１のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号７２のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号８７のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７７または８８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９２のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８０または９３のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８１または９４のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９６のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号８２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８３または９８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８４または９９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号１０１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号１０２のアミノ酸配列を含むというセットと同一であるか、あるいはそこから合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、もしくは１０未満の、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有し、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＡＢＲのセット、すなわち、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７３のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７４または６９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号７５または７０のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号７１のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号７２のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号８７のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７７または８８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９２のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８０または９３のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８１または９４のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９６のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号８２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８３または９８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８４または９９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号１０１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号１０２のアミノ酸配列を含むというセットを含み、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＶＨとＶＬの対、すなわち、（ａ）（ｉ）配列番号４に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１３に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｂ）（ｉ）配列番号２２に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号３１に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｃ）（ｉ）配列番号４０に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号４９に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、及び（ｄ）（ｉ）配列番号５８に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号６７に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、から選択される対を含み、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＶＨとＶＬの対、すなわち、（ａ）（ｉ）配列番号４から選択される参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１３の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、（ｂ）（ｉ）配列番号２２の参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号３１の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、（ｃ）（ｉ）配列番号４０の参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号４９の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、ならびに（ｄ）（ｉ）配列番号５８の参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号６７の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、から選択される対を含み、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合する抗体である。追加の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７結合性抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、及び一本鎖抗体分子（例えば、ＢｉＴＥ）から選択される抗体断片である。
ＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする核酸及び核酸のセットもまた提供される。核酸及び核酸のセットを含有する、ベクター及びベクターのセット、ならびに核酸及びベクターで形質転換された宿主細胞がさらに提供される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ハイブリドーマまたはＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、もしくはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞等の哺乳類宿主細胞である。ＡＬＫ７結合性タンパク質を産生する哺乳類宿主細胞及びハイブリドーマを含めた宿主細胞もまた提供される。
ＡＬＫ７結合性タンパク質を作製するための方法もまた提供される。いくつかの実施形態では、方法は、ＡＬＫ７結合性タンパク質を発現する能力がある宿主細胞を、かかるタンパク質を発現させるための好適な条件下で培養し、任意選択で、発現されたＡＬＫ７結合性タンパク質を単離することを含む。本明細書に開示される方法または当該技術分野で知られる他の方法を使用して調製及び／または単離されるＡＬＫ７結合性タンパク質もまた提供される。
ＡＬＫ７結合性タンパク質と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物がさらに提供される。いくつかの実施形態では、開示は、ＡＬＫ７発現もしくはＡＬＫ７媒介性シグナル伝達の上昇と関連するか、またはＡＬＫ７シグナル伝達の低下により治療及び／または改善され得る、対象における状態を治療及び／または改善する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法により、対象でのＡＬＫ７媒介性シグナル伝達が低下する。
提供される方法を使用して対象において治療及び／または改善され得る状態としては、肥満（例えば、腹部肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリックシンドローム及び他の代謝性の疾患もしくは状態；ＨＤＬ低値、ＬＤＬ高値、高脂血症、高トリグリセリド血症もしくは脂質異常症等の脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド低下；炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）、脂肪性肝疾患；非アルコール性脂肪性肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、ＬＤＬ高値及び高コレステロール血症）；冠動脈心疾患を含む心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、線維素溶解障害、アテローム性動脈硬化等の心血管疾患；動脈硬化、及び高血圧；シンドロームＸ；血管再狭窄；ニューロパチー；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸機能障害、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚上の暗色斑）；及びがん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、あるいは卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌及び／または結腸癌）；ならびに上記の疾患もしくは状態のうち１つ以上と関連するか、または過体重（例えば、ＢＭＩ≧２５ｋｇ／ｍ２）もしく体脂肪過多と関連する他の障害／状態が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、開示の方法には、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体等のアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することが含まれる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、単独で投与される。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、併用療法として投与される。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、標準治療／治療法に対する併用療法として投与される。
ＡＬＫ７活性（例えば、リガンド結合及び／またはシグナル伝達）を阻止するかまたは低下させる方法もまた提供される。いくつかの実施形態では、方法は、ＡＬＫ７結合性タンパク質と、ＡＬＫ７を発現する細胞（例えば、分化した白色脂肪細胞または褐色脂肪細胞）とを接触させることを含む。場合によっては、方法は、ＡＬＫ７結合性タンパク質とＡＬＫ７を発現する細胞とを、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及び／またはＮｏｄａｌの存在下で接触させることを含む。いくつかの実施形態では、方法はインビボで実施される。他の実施形態では、方法はインビトロで実施される。いくつかの実施形態では、阻止されるかまたは低下するＡＬＫ７活性は、ＡＬＫ７のリン酸化である。追加の実施形態では、阻止されるかまたは低下するＡＬＫ７活性は、Ｓｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化である。いくつかの実施形態では、開示は、対象におけるＡＬＫ７活性を阻止するかまたは低下させる方法を提供し、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む。
また、ＡＬＫ７発現及び／またはＡＬＫ７シグナル伝達と関連する病的状態、もしくはＡＬＫ７リガンドの活性を低下させるかもしくは阻害することにより治療及び／または改善され得る病的状態でのＡＬＫ７活性を阻止するかまたは低下させる方法も提供される。場合によっては、方法は、ＡＬＫ７またはＡＬＫ７リガンドの発現が増加している対象にＡＬＫ７結合性タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、病的状態は、肥満、糖尿病、代謝性疾患、脂質異常症；心血管疾患、２型糖尿病、炎症、または肺疾患、脂肪性肝疾患、神経疾患、及び肝疾患、または腎疾患である。
別の態様では、本開示は、過体重もしくは過体重であることと関連する状態を治療または改善する方法であって、過体重の対象に有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体等のアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、治療または改善される状態は、肥満である。他の実施形態では、治療または改善される状態は、脂質異常症、高脂血症、高コレステロール血症、血清ＨＤＬ低値、血清ＬＤＬ高値（例えば、ＬＤＬ－Ｃが１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上）、及び高トリグリセリド血症（例えば、ＴＧが１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、１７０ｍｇ／ｄＬ以上）から選択されるメンバーである。さらに別の実施形態では、治療または改善される状態は、高血圧である。さらなる実施形態では、治療または改善される状態は、糖尿病である。ある特定のそのような実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７アンタゴニストである。ある特定のそのような実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を含む。関連実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの配列対を含む抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。さらに別の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を含む。関連実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの配列対を含む抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。
別の態様では、本開示は、肥満もしくは肥満と関連する状態を治療または改善する方法であって、肥満の対象に有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体等のアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を投与することを含む方法を提供する。ある特定のそのような実施形態では、治療または改善される状態は、高血圧、脂質異常症（例えば、総コレステロール高値またはトリグリセリド高値）、２型糖尿病、冠動脈心疾患、脳卒中、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠障害、呼吸器系の問題、がん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、あるいは卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌及び／または結腸癌）、肥満が関連する胆嚢疾患、肥満が関連する炎症、肥満により誘発される睡眠時無呼吸、脂肪症（脂肪肝）、グルカゴノーマ、動脈硬化または心不全である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、高血圧、脂質異常症（例えば、総コレステロール高値またはトリグリセリド高値）、２型糖尿病、冠動脈心疾患、脳卒中、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠障害、呼吸器系の問題、がん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌もしくは結腸癌）、肥満が関連する胆嚢疾患、肥満が関連する炎症、肥満により誘発される睡眠時無呼吸、脂肪症、グルカゴノーマ、動脈硬化または心不全を発症するリスクがある。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７アンタゴニストである。ある特定のそのような実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を含む。関連実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの配列対を含む抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。
別の態様では、本開示は、ＩＩ型糖尿病もしくはＩＩ型糖尿病と関連する状態を治療または改善する方法であって、糖尿病の対象に有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体等のアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を投与することを含む方法を提供する。関連実施形態では、本開示は、ＩＩ型糖尿病と関連する状態、例えば、眼疾患（例えば、緑内障、白内障、及び網膜症）、心血管疾患（例えば、高血圧、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、及び脳卒中）、高血糖症、末梢神経障害、及び腎疾患（例えば、腎症）を治療または改善する方法を提供する。ある特定の実施形態では、対象は、ＩＩ型糖尿病またはＩＩ型糖尿病と関連する状態、例えば、眼疾患（例えば、緑内障、白内障、及び網膜症）、心血管疾患（例えば、高血圧、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、線維素溶解障害、及び脳卒中）、高血糖症、末梢神経障害、または腎疾患（例えば、腎症）を発症するリスクがある。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７アンタゴニストである。ある特定のそのような実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を含む。関連実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの配列対を含む抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。
別の態様では、本開示は、代謝性疾患もしくは障害または代謝性疾患もしくは障害と関連する状態を治療または改善する方法であって、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体等のアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。ある特定のそのような実施形態では、治療または改善される状態は、脂質、リポタンパク質またはアポリポタンパク質の代謝の変化である。他のそのような実施形態では、代謝状態は、血漿トリグリセリド高値、高血圧、脂質異常症 空腹時血糖高値、ＨＤＬコレステロール低値である。さらに別の実施形態では、治療または改善される状態は、アテローム性動脈硬化、動脈硬化、または内皮機能障害である。さらに他の実施形態では、治療または改善される状態は、慢性炎症である。さらなる実施形態では、治療または改善される状態は、非アルコール性脂肪性肝疾患（例えば、脂肪肝及び／またはＮＡＳＨ）である。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７アンタゴニストである。ある特定のそのような実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を含む。関連実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの配列対を含む抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。
さらに別の態様では、本開示は、インスリン抵抗性またはインスリン抵抗性と関連する状態を治療または改善する方法であって、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体等のアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。ある特定のそのような実施形態では、治療または改善される状態は、耐糖能異常または高血糖症と関連する。他のそのような実施形態では、治療または改善される状態は、高血圧またはアテローム性動脈硬化と関連する。さらに別の実施形態では、治療または改善される状態は、脂質異常症、高脂血症、高コレステロール血症、血清ＨＤＬ低値、血清ＬＤＬ高値（例えば、ＬＤＬ－Ｃが１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上）、及び高トリグリセリド血症（例えば、ＴＧが１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、１７０ｍｇ／ｄＬ以上）から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７アンタゴニストである。ある特定のそのような実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を含む。関連実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの配列対を含む抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。
さらに別の態様では、本開示は、眼、神経系、腎臓、肺、及び／または肝臓の疾患もしくは障害、または関連する状態を治療または改善する方法であって、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体等のアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。ある特定のそのような実施形態では、治療または改善される状態は、炎症である。他のそのような実施形態では、治療または改善される状態は、腎症（例えば、糖尿病性腎症）、腎動脈の動脈硬化）、または腎不全である。さらに他の実施形態では、治療または改善される状態は、慢性炎症である。さらに別の実施形態では、治療または改善される状態は、脂肪組織の炎症である。さらなる実施形態では、治療または改善される状態は、肝臓の炎症である。さらに他の実施形態では、治療または改善される状態は、ＮＡＦＬＤ（例えば、脂肪肝及び／またはＮＡＳＨ）である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、腎臓、肺、または肝臓の疾患もしくは障害を発症するリスクがある。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、腎症を発症するリスクがある。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、腎症を発症するリスクがある。ある特定の実施形態では、対象は、慢性炎症を発症するリスクがある。他の実施形態では、対象は、脂肪組織の炎症を発症するリスクがある。さらに他の実施形態では、対象は、肝臓の炎症を発症するリスクがある。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７アンタゴニストである。ある特定のそのような実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を含む。関連実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの配列対を含む抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。
別の態様では、本開示は、心血管疾患もしくは障害または心血管疾患もしくは障害と関連する状態を治療または改善する方法であって、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体等のアンタゴニストＡＬＫ７結合タンパク質）を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。ある特定のそのような実施形態では、治療または改善される状態は、冠動脈心疾患、うっ血性心不全、血管再狭窄、脳卒中、末梢血管疾患、細小血管疾患、線維素溶解障害、または動脈硬化である。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、冠動脈心疾患、うっ血性心不全、血管再狭窄、脳卒中、末梢血管疾患、細小血管疾患、または動脈硬化を発症するリスクがある。ある特定の実施形態では、治療または改善される状態は、高血圧（例えば、安静時、血圧が１３０／８０ｍｍＨｇ超）である。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、高血圧を発症するリスクがある。他の実施形態では、治療または改善される状態は、アテローム性動脈硬化である。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合タンパク質が投与される対象は、アテローム性動脈硬化を発症するリスクがある。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７アンタゴニストである。ある特定のそのような実施形態では、投与されるアンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。ある特定の実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を含む。関連実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、表１に開示されているＶＨとＶＬの配列対を含む抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。
本開示は、単離及び／または組換えＡＬＫ７結合性タンパク質を提供する。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体である。
ＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする核酸、当該核酸を含有するベクター及び宿主細胞、ならびにＡＬＫ７結合性タンパク質を作製及び使用する方法もまた提供される。提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７の発現及び／またはシグナル伝達と関連する疾患及び状態の診断、治療、及び／または改善に使用される。そのような使用としては、肥満（例えば、腹部肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリックシンドローム及び他の代謝性の疾患もしくは状態；ＨＤＬ低値、ＬＤＬ高値、高脂血症、高トリグリセリド血症もしくは脂質異常症等の脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド低下；炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）、脂肪性肝疾患；非アルコール性脂肪性肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、ＬＤＬ高値及び高コレステロール血症）；冠動脈心疾患を含む心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化等の心血管疾患；動脈硬化、及び高血圧；シンドロームＸ；血管再狭窄；ニューロパチー；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸機能障害、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚上の暗色斑）；及びがん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、あるいは卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌及び／または結腸癌）；ならびに上記の疾患もしくは状態のうち１つ以上と関連するか、または過体重（例えば、ＢＭＩが２５ｋｇ／ｍ２）もしくは体脂肪過多と関連する他の障害／状態を予防すること、及び／または改善することが挙げられるが、これらに限定されない。
定義
別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的及び科学的用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓでは、本開示で使用されている用語の多くに関する一般的辞書を当業者に提供している。本明細書で記載されている見出しは、様々な実施形態についての限定ではなく、概して、明細書の参照により使用され得るものである。さらに、このすぐ後で定義される用語は、明細書を全体として参照することにより、さらに詳細に定義される。
「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という用語には、その用語が使用されている文脈で他の意味が明確に指示されない限り、複数の指示対象が含まれる。「ａ」（または「ａｎ」）という用語、ならびに「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書では同じ意味で使用される。さらに、本明細書で「及び／または」が使用される場合、２つ以上の指定されている特徴または構成要素について、一方が他方を伴う場合も伴わない場合も、それら各々が具体的に開示されていると解釈されるべきである。したがって、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」のような語句で使用される場合の「及び／または」という用語、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）が含まれることが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」のような語句で使用される場合の「及び／または」という用語、Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）という実施形態の各々が包含されることが意図される。
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は一般に、含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）の意味として、すなわち、１つ以上の特徴または構成要素の存在を認めるという意味で使用される。場所を問わず、本明細書で実施形態が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言葉を用いて記載されている場合、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及び／または「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で記載される他の類似の実施形態もまた提供される。
明細書及び請求項を通じて数値との関連で使用される「約」及び「おおよそ」という用語は、当業者によく知られ、かつ許容され得る精度の区間を意味する。一般に、そのような精度の区間は±１０％である。あるいは、特に生物系では、「約」及び「おおよそ」という用語は、所与の値の１桁分以内、好ましくは５倍以下、より好ましくは２倍以下である値を意味し得る。
数範囲には、その範囲を定義している数が含まれる。
ＡＬＫ７結合性タンパク質とは、ＡＬＫ７に特異的に結合するタンパク質、好ましくはＡＬＫ７の細胞外ドメインに結合するものを指す。
「ＡＬＫ７」及び「ＡＬＫ７受容体」という用語は同じ意味で使用され、ＡＬＫ７（文献中、ＡＣＶＲＬＫ７、アクチビンＡ受容体、ＩＣ型、ＡＣＶＲ－１Ｃ、アクチビン受容体様キナーゼ７、及びＥＣ２．７．１１とも呼ばれる）を指す。ヒトＡＬＫ７の参照配列は、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１１０４５０１．１で提供されている。提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、配列番号８５のアミノ酸配列に対応するヒトＡＬＫ７の細胞外ドメインと結合する。ラットＡＬＫ７の参照配列は、ＮＣＢＩ参照配列Ｐ７０５３９で提供されている。いくつかの実施形態では、提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、配列番号８６のアミノ酸配列に対応するラットＡＬＫ７の細胞外ドメインと結合する。
ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、中和抗体）との関連において使用される場合の「競合する」という用語は、アッセイにより決定される抗原結合タンパク質間の競合であり、アッセイにおいて、被験抗原結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片）が、参照抗原結合タンパク質（例えば、リガンド、または参照抗体）が共通の抗原（例えば、ＡＬＫ７細胞外ドメインまたはその断片）に特異的に結合することを防ぐかまたは阻害することを意味する。多数の種類の競合結合アッセイ、例えば、固相ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）の直接法または間接法（例えば、Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７－８２（１９９０）及びＭｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５（１９８８）を参照のこと）、固相酵素免疫測定法（ＥＩＡ）の直接法または間接法、固相ビオチン－アビジンＥＩＡの直接法（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２（１９９０）及びＫｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９（１９８６）を参照のこと）、及びサンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９２：２４２－２５３（１９８３）を参照のこと）を使用することができる。典型的には、そのようなアッセイでは、固体表面または細胞に結合している精製抗原（これらのいずれかを担持）、非標識の被験抗原結合タンパク質及び標識した参照抗原結合タンパク質の使用を伴う。
競合的阻害は、被験抗原結合タンパク質の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することにより測定することができる。通常、被験抗原結合タンパク質は過剰に存在する。競合アッセイで同定される抗原結合タンパク質（競合する抗原結合タンパク質）としては参照ＡＬＫ７結合性タンパク質と同一のエピトープに結合するＡＬＫ７結合性タンパク質、ならびに、立体障害が発生するように、参照ＡＬＫ７結合性タンパク質が結合しているエピトープに十分に近位の隣接エピトープに結合するＡＬＫ７結合性タンパク質が含まれる。通常、競合するＡＬＫ７結合性タンパク質が過剰に存在する場合、ＡＬＫ７への参照ＡＬＫ７結合性タンパク質の特異的結合は少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％または７５％阻害される。場合によっては、競合する抗原結合タンパク質は、参照ＡＬＫ７結合性タンパク質の特異的結合を少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％９８％、または９９％阻害する。
ＡＬＫ７タンパク質との関連において使用される場合の「エピトープ」という用語は、本開示のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗体）への結合能のあるＡＬＫ７（例えば、ヒトＡＬＫ７またはマウスＡＬＫ７）タンパク質決定基を指す。エピトープは通常、アミノ酸または糖側鎖のような化学的に活性な表面分子団からなり、通常、特定の三次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。立体構造エピトープと非立体構造エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合は失われるが、後者への結合は失われないという点で区別される。ＡＬＫ７結合性タンパク質が結合したＡＬＫ７のエピトープは、当該技術分野で公知の技術を使用して容易に決定することができる。
本明細書に開示される、抗ＡＬＫ７結合性抗体及びそのＡＬＫ７結合性断片、バリアント、または誘導体等の抗原結合タンパク質は、それらが認識するかまたは特異的に結合する抗原、例えば、標的ポリペプチドのエピトープ（複数可）もしくは部分（複数可）の点から表すかまたは特定することができる。例えば、本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性タンパク質の抗原結合ドメインと特異的に相互作用するＡＬＫ７の部分が「エピトープ」である。エピトープは、連続アミノ酸、またはタンパク質の三次折り畳みにより並列している非連続アミノ酸のいずれからも形成され得る。連続アミノ酸から形成されたエピトープは典型的には、変性溶媒への曝露時に保持されるが、三次折り畳みにより形成されたエピトープは典型的には、変性溶媒での処理時に失われる。エピトープ決定基には、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基等の化学的に活性な表面分子団が含まれ得、また特定の三次元構造特性、及び／または特定の電荷特性を有し得る。エピトープには典型的に、少なくとも３つ、４つ、５つ、６つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５のアミノ酸が固有の空間的コンホメーションで含まれる。エピトープは、当該技術分野で公知の方法を使用して日常的に決定することができる。
「阻害する」、「阻止する」、「低下させる」、「減少させる」、「抑制する」、「拮抗する（antagonize）」、及び「中和する」という用語は同じ意味で使用され、活性の完全阻止を含めた、活性（例えば、ＡＬＫ７リガンドの結合及び／またはＡＬＫ７シグナル伝達）の統計学的に有意ないかなる減少も指す。例えば、「阻害」、「抑制」、または「拮抗する」とは、対照と比較した、活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％の減少を指し得る。
いくつかの実施形態では、「減少させる」、「阻害する」、または「拮抗する」という用語は、抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片等のＡＬＫ７結合性タンパク質が、ＡＬＫ７及びＡｃｔｒＩＩＡ／Ｂを発現する細胞と、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及び／またはＮｏｄａｌ等のＡＬＫ７リガンドとの接触により誘導される１つ以上のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を、ＡＬＫ７結合性タンパク質と接触しなかった細胞でのＳｍａｄリン酸化の程度と比べて統計学的に有意に（例えば、ｐ値が０．０５以下）減少させる能力を指し得る。ＡＬＫ７を発現する細胞は、天然に存在する細胞または細胞株であり得、またはＡＬＫ７をコードする核酸を宿主細胞内に導入することにより組換えで生産することもできる。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質、例えば、ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片は、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で知られる他の技術を使用して、例えば、ウェスタンブロッティングと、その後の抗ホスホチロシン抗体を用いたプローブによるか、またはＥＬＩＳＡ（例えば、Ｐ－Ｓｍａｄ ＥＬＩＳＡ）もしくはＳｍａｄ依存的レポーター遺伝子アッセイにより決定した場合、ＡＬＫ７リガンド媒介性の１つ以上のＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化に少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％、または約１００％拮抗する（低下させる）。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害に拮抗する（低下させる）。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストであり、脂肪分解アッセイで決定した場合、白色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害に５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％拮抗する。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイで決定した場合、白色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害を少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、もしくは約１００％抑制するかまたは低下させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される）。
ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストであり、脂肪分解アッセイで決定した場合、白色脂肪細胞及び／または褐色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害に５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％拮抗する。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイで決定した場合、白色脂肪細胞及び／または褐色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害を少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、もしくは約１００％抑制するかまたは低下させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。
「増大させる」、「促進する」及び「アゴニスト」という用語は同じ意味で使用され、活性（例えば、ＡＬＫ７リガンドの結合及び／またはＡＬＫ７シグナル伝達）の統計学的に有意ないかなる増大も指す。例えば、「増大させる」または「促進する」とは、対照と比較した、活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％の増大を指し得る。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、細胞での脂肪分解を増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイで決定した場合、細胞での脂肪分解を少なくとも５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイで決定した場合、脂肪細胞での脂肪分解を少なくとも５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％増大させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、白色脂肪細胞または褐色脂肪細胞での脂肪分解を増大させる。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、白色脂肪細胞での脂肪分解を増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイで決定した場合、白色脂肪細胞での脂肪分解を少なくとも５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％増大させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、褐色脂肪細胞での脂肪分解を増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイで決定した場合、褐色脂肪細胞での脂肪分解を少なくとも５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％増大させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、白色脂肪細胞及び褐色脂肪細胞での脂肪分解を増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイで決定した場合、白色脂肪細胞及び褐色脂肪細胞での脂肪分解を少なくとも５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％増大させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。
追加の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で実施される脂肪分解アッセイで標準的技術と条件を使用して（例えば、本明細書中の例に記載のように）決定した場合、白色脂肪細胞での脂肪分解を少なくとも５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％増大させる。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解阻害アッセイで標準的技術と条件を使用して決定した場合、白色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害を少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、もしくは約１００％抑制するかまたは低下させる。ある特定のそのような実施形態では、脂肪分解アッセイは、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で実施される（例えば、本明細書中の例に記載のように）。
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で実施される脂肪分解アッセイで標準的技術と条件を使用して（例えば、本明細書中の例に記載のように）決定した場合、白色脂肪細胞及び／または褐色脂肪細胞での脂肪分解を少なくとも５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％増大させる。さらに他の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解阻害アッセイで標準的技術と条件を使用して決定した場合、白色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害を少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、もしくは約１００％抑制するかまたは低下させる。ある特定のそのような実施形態では、脂肪分解アッセイは、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で実施される（例えば、本明細書中の例に記載のように）。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞でのグリセロール生成を増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイで決定した場合、脂肪細胞でのグリセロール生成を少なくとも５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％増大させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、白色脂肪細胞または褐色脂肪細胞でのグリセロール生成を増大させる。
「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は本明細書では同じ意味で使用され、全（完全長）抗体及びその抗原結合性断片または一本鎖が含まれる。典型的な抗体は、ジスルフィド結合で相互に接続された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、ＣＨＩ、ＣＨ２、及びＣＨ３という３つのドメインで構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）及び軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、ＣＬという１つのドメインで構成される。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができ、フレームワーク領域（ＦＷ）と呼ばれる、より保存性の高い領域が散在する。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＷで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へ向かってＦＷ１、ＣＤＲ１、ＦＷ２、ＣＤＲ２、ＦＷ３、ＣＤＲ３、ＦＷ４という順序で配列されている。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含めた宿主の組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。例示的抗体としては、典型的抗体、ｓｃＦｖ、及びそれらの組み合わせが含まれ、その場合、例えば、ｓｃＦｖが典型的抗体の重鎖及び／または軽鎖のいずれかのＮ末端もしくはＣ末端に共有結合で連結されている（例えば、ペプチド結合または化学的リンカーを介して）か、または典型的抗体の重鎖及び／または軽鎖内に介在する。
「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、抗体が所望の結合活性を示す限り、無傷ポリクローナル抗体、無傷モノクローナル抗体、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片等）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）の誘導体と変異体、二重特異性抗体等の多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む他の任意の修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューとそれぞれ呼ばれる重鎖定常ドメインの固有性に基づく５つの主要クラスの免疫グロブリン、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌ及びＩｇＡ２）のいずれでもあり得る。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なった、よく知られているサブユニット構造及び三次元立体配置を有する。抗体は、裸であるか、または毒素、放射性同位体等の他の分子に結合させたものでもよい。「ＩｇＧ」という用語は、認識された免疫グロブリンガンマ遺伝子に実質的にコードされる抗体のクラスに属するポリペプチドを指す。ヒトでは、このクラスはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む。マウスでは、このクラスはＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、及びＩｇＧ３を含む。
「ＡＬＫ７抗体」、「ＡＬＫ７に結合する抗体」、または「抗ＡＬＫ７抗体」という用語は、その抗体が、治療剤または診断用試薬としてＡＬＫ７を標的とする際に有用であるよう十分な親和性でそれぞれＡＬＫ７と結合する能力がある抗体を指す。
ＡＬＫ７タンパク質との関連において使用される場合の「特異的に結合する」とは一般に、抗体等、ある結合性タンパク質が、ＡＬＫ７（例えば、ヒトＡＬＫ７、好ましくはＡＬＫ７の細胞外ドメイン）に対して、その結合性タンパク質が、関連のない対照タンパク質に結合する場合よりも高い親和性で結合する能力を意味する。いくつかの実施形態では、対照タンパク質は、ニワトリ卵白リゾチームである。好ましくは、結合性タンパク質は、少なくとも、対照タンパク質に対する親和性より１００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性でＡＬＫ７と結合する。好ましくは、結合性タンパク質は、当該技術分野で公知の結合アッセイを使用して測定した場合、ヒトＡＬＫ７に対する結合親和性が１×１０－７Ｍ以下または１×１０－８以下である。いくつかの実施形態では、結合親和性は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）を使用して測定される（例えば、ＡＬＫ７を分析対象物として、またＡＬＫ７結合性タンパク質をリガンドとして使用するか、またはその逆で使用）。
いくつかの実施形態では、関連のない非ＡＬＫ７タンパク質に対するＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）の結合の程度は、ＡＬＫ７に対するそのＡＬＫ７結合性タンパク質の結合の約１０％未満であり、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（組換え型ＡＬＫ７を分析対象物として、またＡＬＫ７結合性タンパク質をリガンドとして使用するか、またはその逆で使用）、結合平衡除外法（ＫＩＮＥＸＡ（登録商標））、または当該技術分野で公知の他の結合アッセイによって測定される。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、解離定数（ＫＤ）が１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下の、完全長抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。
「抗原結合抗体断片」（例えば、「ＡＬＫ７結合性抗体断片」）という用語は、無傷抗体の抗原結合可変領域（例えば、ＣＤＲ３）の全部または一部を含有する断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって実行され得ることが知られている。抗体断片の例としては、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦｖ断片、線状抗体、一本鎖抗体、ならびに１つ以上の抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＬＫ７結合性抗体断片であって、抗体断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子であるものを提供する。
Ｆｃ領域には、第１の定常領域免疫グロブリンドメイン以外の抗体定常領域を含むポリペプチドが含まれる。したがって、Ｆｃとは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥ及びＩｇＭの後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにこれらのドメインの柔軟性のあるヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡ及びＩｇＭの場合、ＦｃにはＪ鎖が含まれ得る。ＩｇＧの場合、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインであるＣγ２及びＣγ３、ならびにＣγ１とＣγ２の間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧの重鎖Ｆｃ領域は通常そのカルボキシル末端に残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むと定義され、ここでの番号付けは、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））に記載されているＥＵインデックスに従って行われる。Ｆｃとは、単独でこの領域を指すか、または全抗体、抗体断片、もしくはＦｃ融合タンパク質との関連においてこの領域を指し得る。ＥＵインデックスで番号付けした場合の２７０位、２７２位、３１２位、３１５位、３５６位、及び３５８位等、これらに限定されない、いくつかの異なるＦｃ位置にて多型が観察されており、そのため、提示配列と従来技術での配列との間にわずかな相違が存在する場合がある。
「モノクローナル抗体」とは、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な認識及び結合に関与する均一な抗体集団を指す。これは、典型的には異なる抗原決定基に対して指向される異なる抗体が含まれたポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル抗体」という用語は、無傷及び完全長のモノクローナル抗体の両方、ならびに抗体部分を含む抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ等）、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体、及び融合タンパク質）、ならびに抗原認識部位を含む他の任意の修飾免疫グロブリン分子を包含する。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物等、これらに限定されない任意の数の方法で作製してよい。
「キメラ抗体」という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ以上の種に由来している抗体を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、抗原と結合する所望の特異性、親和性、及び／または能力を有する、哺乳類（例えば、マウス、ラット、ウサギ等）の１つの種に由来する抗体の可変領域に対応する一方、定常領域は、別の種（通常はヒト）での免疫応答誘発を回避するために、その種に由来する抗体の配列に相同である。
「ヒト化抗体」という用語は、少ない、好ましくは最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有するよう操作されている、非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリンに由来する抗体を指す。典型的には、ヒト化抗体は、ＣＤＲからの残基が、抗原と結合する所望の特異性、親和性、及び／または能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター）のＣＤＲからの残基で置き換えられているヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６（１９８８））。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＷ）残基が、抗原と結合する所望の特異性、親和性、及び／または能力を有する非ヒト種からの抗体における対応残基と置き換えられる。ヒト化抗体は、抗体の特異性、親和性、及び／または能力を精密化及び最適化するために、Ｆｖフレームワーク領域で、及び／または置き換えた非ヒト残基内のいずれにおいても、追加の残基の置換によりさらに修飾することができる。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するすべてまたは実質的にすべてのＣＤＲ領域を含有するが、すべてまたは実質的にすべてのＦＲ領域はヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のものである、少なくとも１つの可変ドメイン、典型的には２つもしくは３つの可変ドメインの実質的にすべてを含む。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリンの定常領域または定常ドメイン、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域または定常ドメインの少なくとも一部も含み得る。ヒト化抗体を作製するために使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号及び同第５，６３９，６４１号に記載されている。
「ヒト抗体」という用語は、ヒトにより産生される抗体、または当該技術分野で公知の任意の技術を使用して作製された、ヒトにより産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。「ヒト抗体」という用語には、無傷（完全長）抗体、その断片、及び／または、少なくとも１つのヒトの重鎖及び／または軽鎖のポリペプチドを含む抗体、例えば、マウス軽鎖ポリペプチドとヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体等が含まれる。
「アンタゴニスト」、「阻止」、または「中和」結合性タンパク質は、それが結合するＡＬＫ７等の抗原の活性を阻害するかまたは低下させるものである。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と、ＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及び／またはＮｏｄａｌとの多量体化を低下させるかもしくは阻害する。ある特定の実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７の活性を実質的または完全に阻害する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７活性は、１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％低下される。ある特定の実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、完全長抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体である。さらなる実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、ＡＬＫ７の活性を少なくとも１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％も阻害するかまたは低下させる。
「結合親和性」とは一般に、ある分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との非共有結合による相互作用の総体的強度を指す。別段に示されていない限り、「結合親和性」とは、結合対のメンバー間（例えば、抗体と抗原）の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含め、当該技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができ、また本開示の目的に使用することができる。
「効力」は、所与の強度の効果を生み出すのに必要な化合物の量に関して表される化合物の薬理学的活性の尺度である。これは、定義された生物学的効果を達成するために必要な化合物の量を指し、必要な用量が少ないほど薬物は強力である。効力は通常、特に明記しない限り、ＩＣ５０値（ｎＭ）として表される。ＩＣ５０は、ＡＬＫ７結合タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）の阻害濃度の中央値である。機能解析では、ＩＣ５０は生物学的応答をその最大値の５０％低下させる濃度である。リガンド－受容体結合試験では、ＩＣ５０は、リガンド－受容体結合を最大特異的結合レベルの５０％減少させる濃度である。ＩＣ５０は、当該技術分野で公知の任意の数の手段により計算することができる。本明細書で提供される抗体または他の結合性タンパク質の効力の改善倍率は、参照抗ＡＬＫ７抗体または他のＡＬＫ７結合性タンパク質と比較した場合、少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、または少なくとも１８０倍であり得る。
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌Ｉｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて標的細胞を細胞毒で死滅させるのを可能にする、細胞傷害の一形態である。標的細胞の表面に指向された特定の高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞を「武装」させるため、そのような死滅に絶対的に必要とされる。標的細胞の溶解は細胞外であり、細胞間の直接の接触を必要とし、補体の関与はない。抗体に加えて、ＡＬＫ７を持つ標的細胞に対する特異的結合能のある、Ｆｃ領域を含む他のタンパク質、特にＦｃ融合タンパク質は、細胞媒介性細胞傷害をもたらすことができることが意図される。簡潔にするために、Ｆｃ融合タンパク質の活性に起因する細胞媒介性細胞傷害は、本明細書ではＡＤＣＣ活性とも呼ばれる。
「単離された」、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７抗体であり、これにはそのＡＬＫ７結合性断片、バリアント、及び誘導体が含まれる）、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然では見られない形態にあるタンパク質（例えば、抗体）、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物には、それらがもはや天然で見られる形態ではなくなる程度まで精製されているものが含まれる。いくつかの実施形態では、単離されているタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。単離されたタンパク質及び単離された核酸は、それらが天然で関連している物質、例えば、それらの天然環境、またはそれらがインビトロもしくはインビボで実施される組換えＤＮＡ技術によって調製される場合の調製環境（例えば、細胞培養）においてそれらと共に見出される他のポリペプチドもしくは核酸等を、含まないかまたは実質的に含まない。タンパク質及び核酸は、希釈剤またはアジュバントと共に製剤化され得、さらに実用的目的のために単離され得、例えば、タンパク質は、通常は、イムノアッセイでの使用のためのマイクロタイタープレートをコートするために使用される場合は、ゼラチンまたは他の担体と共に混合されるか、または診断もしくは治療に使用する場合は、薬学的に許容される担体もしくは希釈剤と共に混合される。
「対象」、「個体」、「動物」、「患者」、及び「哺乳類」という用語は、診断、予後、または治療が望まれる任意の対象、特に哺乳類の対象を指す。哺乳類の対象としては、特定の処置の対象レシピエントである、ヒト、非ヒト霊長類、飼育動物、家畜、げっ歯類等が含まれるが、これらに限定されない。
「医薬組成物」という用語は、有効成分の生物学的活性が有効となり得るような形態にあり、かつ、組成物が投与されると考えられている対象にとって許容できないほどの毒性のある濃度でのいかなる追加構成成分も含有しない調製物を指す。そのような組成物は無菌であり得る。
本明細書に開示されるような、ポリペプチド、例えば、抗体等の抗原結合タンパク質の「有効量」は、具体的に記述された目的を実行するのに十分な量である。「有効量」は、記述された目的に関連して、経験的に、日常的方法で決定することができる。「治療的有効量」という用語は、対象（例えば、ヒト等の哺乳類）の疾患もしくは状態を「治療」するのに有効であり、かつ、かかる疾患もしくは状態を有する対象に何らかの改善または利益をもたらす、ポリペプチド、例えば、抗体等の抗原結合タンパク質または他の薬物の量を指す。したがって、「治療的に有効な」量とは、ＡＬＫ７媒介性の疾患もしくは状態の少なくとも１つの臨床的症状の、ある程度の軽減、緩和、及び／または減少をもたらす量である。本開示の方法によって治療することができる疾患または状態と関連する臨床症状はよく知られている。さらに、対象にある程度の利益がもたらされる限り、治療効果は完全または治癒的である必要はない。いくつかの実施形態では、「治療的に有効な」という用語は、それを必要とする対象においてＡＬＫ７活性を低下させることができる治療剤量を指す。実際の投与量及び投与の速度と時間経過は、治療されるものの性質と重症度に応じて異なる。治療の処方、例えば、投与量の決定等は、一般医及び他の医師の責任の範囲内である。抗体及びその抗原結合性断片の適切な用量は一般に知られており、Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４７：６５９－６６４（１９９１）、Ｂａｇｓｈａｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．４：９１５－９２２（１９９１）を参照のこと。
ＡＬＫ７媒介性の疾患または状態を有する対象において特定の結果を達成するための「十分量」または「十分な量」とは、所望の効果、任意選択で治療効果を生み出すのに効果的である（すなわち、治療的有効量の投与による）治療剤（例えば、本明細書に開示されるような、抗体等の抗原結合タンパク質）の量を指す。いくつかの実施形態では、そのような特定の結果は、ＡＬＫ７活性の低下が、それを必要とする対象においてあることである。
「標識」という用語は、「標識された」部分が生成されるよう、抗ＡＬＫ７抗体等の部分に直接または間接的に結合されている検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体が検出可能（例えば、放射性同位体標識または蛍光標識）であってよく、または酵素標識の場合、検出可能な基質化合物もしくは基質組成物の化学的変化を触媒してもよい。
「治療すること」、もしくは「治療」、「治療する」または「改善すること」及び「改善する」という等の用語は、（ａ）診断された病的状態もしくは障害について、症状を治癒、減速、軽減させる、及び／または進行を停止させる、治療処置、及び（ｂ）標的とする疾患もしくは状態の発症を予防及び／または遅くする、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の両方を指す。したがって、治療を必要とする対象には、すでに疾患または状態にある対象、疾患または状態を発症するリスクのある対象、疾患または状態が予防されるべき対象が含まれる。ある特定の実施形態では、対象が、例えば、疾患または状態と関連する症状の全体的、部分的、もしくは一過性の改善または消失を示す場合、その対象は、本明細書で提供される方法に従って首尾よく「治療」されている。いくつかの実施形態では、本開示は、肥満（例えば、腹部肥満）；インスリン抵抗性；メタボリックシンドローム及び他の代謝性の疾患もしくは状態；ＨＤＬ低値、ＬＤＬ高値、高脂血症、高トリグリセリド血症もしくは脂質異常症等の脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド低下；炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）、脂肪性肝疾患；非アルコール性脂肪性肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、ＬＤＬ高値及び高コレステロール血症）；冠動脈心疾患を含む心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化等の心血管疾患；動脈硬化、及び高血圧；シンドロームＸ；血管再狭窄；ニューロパチー；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸機能障害、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚上の暗色斑）；及びがん（例えば、骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、または卵巣癌（例えば、皮性卵巣癌）、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌、もしくは結腸癌）；ならびに上記の疾患もしくは状態のうち１つ以上か、または過体重（例えば、ＢＭＩが２５ｋｇ／ｍ２）と関連するか、または体脂肪過多と関連する他の障害／状態から選択される疾患、障害もしくは状態を治療するための方法を提供する。
本明細書で使用される場合、「と組み合わせて」または「併用療法」とは、追加の療法（例えば、第２、第３、第４等）が、体内でさらに有効であるような投与の任意の形態を指す（例えば、複数の化合物が、対象において同時に有効であり、これには、それらの化合物の相乗効果が含まれ得る）。有効性は、血液、血清、または血漿中での薬剤の測定可能な濃度と相関しない場合がある。例えば、異なる治療用化合物は、同じ製剤にして投与することができ、別個の製剤にして、同時または順次に、異なるスケジュールで投与することもできる。したがって、そのような治療を受ける対象は、異なる治療法の併用効果による利益を得ることができる。本明細書で提供される１つ以上のＡＬＫ７結合性タンパク質は、１つ以上の他の追加薬剤及び／または支持療法と同時か、それより前か、またはその後に投与することができる。一般に、各治療剤は、その特定の薬剤について決定された用量及び／またはタイムスケジュールで投与される。レジメンで使用する特定の組み合わせでは、本開示のアンタゴニストと治療及び／または所望の転帰との適合性が考慮される。
本開示の方法及び技術は一般に、別段に示されていない限り、公知の従来方法に従って、本開示全体を通して引用及び考察される様々な一般参考文献及びより詳細な参考文献に記載のように実施される。例えば、いずれも参照により本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１）及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）、ならびにＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照のこと。
「がん」、「腫瘍」、「がん性」、及び「悪性」という用語は、典型的には無秩序な細胞増殖を特徴とする、哺乳類における生理学的状態を指すかまたは表す。がんの例としては、腺癌等の癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、黒色腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。そのようながんのより具体的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、消化管癌、ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫、膵癌、膠芽腫、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌（ｈｅｐａｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）及び肝癌（ｈｅｐａｔｏｍａ）等の肝癌（ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌、乳癌（ホルモンによる乳癌を含む；例えば、Ｉｎｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ９４：１０５７－１０６５（２００６）を参照のこと）、結腸癌、大腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫（多発性骨髄腫等）、唾液腺癌、腎細胞癌及びウィルムス腫瘍等の腎臓癌、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、精巣癌、食道癌、頭頸部癌各種及び粘液性卵巣癌等の粘液を発生母地とするがん、胆管癌（肝臓）及び腎臓乳頭癌が挙げられる。特定の実施形態では、がんは、乳癌、子宮内膜癌、または子宮癌である。他の実施形態では、がんは、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、及び髄外骨髄腫）、または子宮内膜癌、胃癌、肝癌、結腸癌、腎臓癌もしくは膵癌である。
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は同じ意味で使用され、単一の核酸及び複数の核酸を包含することが意図され、単離された核酸の分子またはコンストラクト、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、通常のホスホジエステル結合または通常以外の結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）で見られるようなアミド結合）を含む。「核酸」という用語は、ポリヌクレオチド中に存在する任意の１つ以上の核酸セグメント、例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡ断片を指す。核酸またはポリヌクレオチドに適用される場合、「単離された」という用語は、その天然環境から取り除かれている核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡを指し、例えば、ベクター内に含有された抗原結合タンパク質をコードする組換えポリヌクレオチドは、本開示の目的のために単離されていると見なされる。単離されたポリヌクレオチドのさらなる例としては、異種宿主細胞内に維持されているか、または他のポリヌクレオチドから（部分的または実質的に）精製された溶液中の組換えポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたＲＮＡ分子には、インビボまたはインビトロでの、本開示のポリヌクレオチドのＲＮＡ転写産物が含まれる。本開示による単離されたポリヌクレオチドまたは核酸にはさらに、合成により生成されたそのような分子が含まれる。さらに、ポリヌクレオチドまたは核酸にはプロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、または転写終結シグナル等の調節エレメントが含まれ得る。
「ベクター」という用語は、宿主細胞に、目的の１つ以上の遺伝子（複数可）または配列（複数可）を送達する能力、及び実施形態によっては、それらを発現する能力のあるコンストラクトを意味する。ベクターの例としては、ウイルスベクター、裸のＤＮＡもしくはＲＮＡの発現ベクター、プラスミド、コスミド、もしくはファージのベクター、カチオン性縮合剤と会合させたＤＮＡもしくはＲＮＡの発現ベクター、リポソームに封入したＤＮＡもしくはＲＮＡの発現ベクター、及びプロデューサー細胞等のある特定の真核細胞が挙げられるが、これに限定されるものではない。
「宿主細胞」という用語は、組換え核酸を有するか、または有する能力がある、細胞または細胞集団を指す。宿主細胞は、原核生物のもの（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、または真核生物のものであり得る。宿主細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、またはＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ等の酵母を含め、真菌細胞であり得る。宿主細胞はまた、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ－９）または哺乳類細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｆ、ＣＨＯ、ＣＯＳ－７、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）、及びハイブリドーマ）等の様々な動物細胞のいずれでもあり得る。さらなる実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ－Ｋ、ＣＨＯ－０、ＣＨＯ－Ｌｅｃ１０、ＣＨＯ－Ｌｅｃ１３、ＣＨＯ－Ｌｅｃ１、ＣＨＯＰｒｏ－５、及びＣＨＯｄｈｆｒ－から選択されるＣＨＯ細胞である。特定の実施形態では、宿主細胞は、ハイブリドーマである。
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は本明細書では同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸ポリマーを指す。ポリマーは、直鎖でも分岐でもあり得、修飾アミノ酸を含むことができ、非アミノ酸により中断され得る。かかる用語はまた、自然に、または介入により修飾されているアミノ酸ポリマー、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質付加、アセチル化、リン酸化、または他の任意の操作もしくは修飾、例えば、標識成分との結合等によって修飾されているものも包含する。この定義内には、例えば、アミノ酸（例えば、非天然アミノ酸等を含む）の１つ以上の類似体及び当該技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。実施形態によっては、提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質は抗体に基づくため、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、一本鎖としても結合鎖としても生じ得ることが理解される。
「組換え型」ポリペプチド、タンパク質または抗体とは、組換えＤＮＡ技術により生産されたポリペプチド、タンパク質または抗体を指す。組換えにより生産された、宿主細胞で発現させたポリペプチド、タンパク質及び抗体は、本開示の目的のために単離されたと見なされ、任意の好適な技術によって分離、分画、または部分的もしくは実質的に精製されている、天然ポリペプチドまたは組換えポリペプチドも同様である。
本開示にはまた、ポリペプチドの断片、バリアント、または誘導体、及びそれらの任意の組み合わせも含まれる。ポリペプチド及びタンパク質に言及する場合の「断片」という用語には、参照ポリペプチドまたは参照タンパク質の特性のうち少なくともいくつかを保持する任意のポリペプチドまたはタンパク質が含まれる。ポリペプチドの断片としては、タンパク質分解断片、及び欠失断片が挙げられる。
「バリアント」という用語は、少なくとも１つのアミノ酸修飾のために、親である抗体またはポリペプチドの配列とは異なる、抗体またはポリペプチドの配列を指す。抗体またはポリペプチドのバリアントには、断片が含まれるほか、アミノ酸の置換、欠失、もしくは挿入のためにアミノ酸配列が改変されている、抗体またはポリペプチドも含まれる。バリアントは、天然に存在しても、または天然に存在しなくてもよい。天然には存在しないバリアントは、任意の好適な変異誘発技術を使用して作製することができる。バリアントポリペプチドは、保存的または非保存的なアミノ酸の置換、欠失もしくは付加を含むことができる。
抗体またはポリペプチドに適用される場合の「誘導体」という用語は、天然の抗体またはポリペプチドでは見られない追加の特徴を示すように改変されている抗体またはポリペプチドを指す。「誘導体」抗体の一例は、第２のポリペプチドまたは別の分子（例えば、ＰＥＧ等のポリマー、発色団、またはフルオロフォア）または原子（例えば、放射性同位体）との融合体もしくは複合体である。
「アミノ酸置換」という用語は、親配列中に存在するアミノ酸残基を別のアミノ酸残基に置き換えることを指す。アミノ酸は、例えば、化学的ペプチド合成によるかまたは公知の組換え法により親配列内で置換することができる。したがって、「Ｘ位での置換」への言及または「Ｘ位での置換」とは、Ｘ位に存在するアミノ酸残基の代替アミノ酸残基での置換を指す。いくつかの実施形態では、置換パターンは、スキーマＡＸＹに従って表すことができ、ここで、Ａは、天然ではＸ位に存在するアミノ酸残基に対応する一文字表記であり、Ｙは、置換アミノ酸残基である。他の実施形態では、置換パターンは、スキーマＸＹに従って表すことができ、ここで、Ｙは、天然ではＸ位に存在するアミノ酸残基を置換するアミノ酸残基に対応する一文字表記である。
「保存的アミノ酸置換」は、そのアミノ酸残基が、類似側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられている置換である。類似側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは以前に定義されており、これには、塩基性側鎖（例えば、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）、酸性側鎖（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、電荷を持たない極性側鎖（例えば、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ）、非極性側鎖（例えば、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ）、ベータ－分岐側鎖（例えば、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ）及び芳香族側鎖（例えば、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ）が含まれる。したがって、ポリペプチド内のあるアミノ酸残基が同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基に置き換えられている場合、その置換は保存的であると見なされる。あるいは、一連のアミノ酸残基は、順序及び／または組成が異なる、構造的に類似する一連の側鎖ファミリーメンバーに保存的に置き換えることができる。
非保存的置換としては、（ａ）正電荷側鎖を有する残基（例えば、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓ）が、負電荷残基（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）の代替となるか、もしくはそれにより置換されているもの、（ｂ）親水性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が、疎水性残基（例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、またはＶａｌ）の代替となるか、もしくはそれにより置換されているもの、（ｃ）ＣｙｓまたはＰｒｏが、他の任意の残基の代替となるか、もしくはそれにより置換されているもの、または（ｄ）かさ高い疎水性もしくは芳香族の側鎖を有する残基（例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、またはＴｒｐ）が、より小さい側鎖を有する残基（例えば、ＡｌａまたはＳｅｒ）もしくは側鎖のない残基（例えば、Ｇｌｙ）の代替となるか、もしくはそれにより置換されているものが挙げられる。
他の置換は容易に特定することができる。例えば、アミノ酸のアラニンの場合、置換は、Ｄ－Ａｌａ、Ｇｌｙ、ベータ－Ａｌａ、Ｌ－Ｃｙｓ及びＤ－Ｃｙｓのいずれか１つから行うことができる。リジンの場合、置き換えは、Ｄ－Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ、ホモ－Ａｒｇ、Ｍｅｔ、Ｄ－Ｍｅｔ、オルニチン、またはＤ－オルニチンのいずれか１つであり得る。一般に、単離されたポリペプチドの特性の変更を誘導することが予測され得る、機能的に重要な領域での置換は、（ａ）極性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が、疎水性残基（例えば、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、またはＡｌａ）の代替となる（またはそれにより置換されている）もの；（ｂ）Ｃｙｓ残基が、他の任意の残基の代替となる（またはそれにより置換されている）もの；（ｃ）正電荷側鎖を有する残基（例えば、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓ）が、負電荷側鎖を有する残基（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）の代替となる（またはそれにより置換されている）もの；または（ｄ）かさ高い側鎖を有する残基（例えば、Ｐｈｅ）が、そのような側鎖を有しないもの（例えば、Ｇｌｙ）の代替となる（またはそれにより置換されている）ものである。前述の非保存的置換のうちの１つがタンパク質の機能特性を変化させ得る可能性はまた、タンパク質の機能的に重要な領域に関して置換の位置とも相関し、そのため、一部の非保存的置換は、生物学的特性に対する影響がほとんどないか、またはまったくない場合がある。
「アミノ酸挿入」という用語は、親配列中に存在する２つのアミノ酸残基の間に新たなアミノ酸残基を導入することを指す。アミノ酸残基は、親配列内に、例えば、化学的ペプチド合成によるかまたは当該技術分野で公知の組換え法により挿入することができる。したがって、「Ｘ位とＹ位の間での挿入」または「ＫａｂａｔによるＸ位とＹ位の間での挿入」という表現では、Ｘ及びＹは、アミノ酸残基の位置に対応し（例えば、システインアミノ酸残基の２３９位と２４０位の間での挿入）、かかる表現は、Ｘ位とＹ位の間でのアミノ酸残基の挿入を指し、また、核酸配列において、あるアミノ酸残基をコードするコドンを、Ｘ位のアミノ酸残基をコードするコドンとＹ位のアミノ酸残基をコードするコドン間に挿入することも指す。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの２つの配列間の「配列同一性パーセント」または「同一性パーセント」という用語は、２配列間の最適アラインメントのために導入しなければならない付加または欠失（すなわち、ギャップ）を考慮に入れた、比較枠全体にわたってそれらの配列が共有する同一の一致位置の数を指す。一致位置は、同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が標的配列と参照配列の両方で提示されている任意の位置である。ギャップはヌクレオチドでもアミノ酸でもないため、標的配列で提示されているギャップは数えない。同様に、参照配列からのヌクレオチドまたはアミノ酸ではなく、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸を数えるため、参照配列で提示されているギャップは数えない。配列同一性のパーセンテージは、両方の配列内で同一のアミノ酸残基または核酸塩基が生じる位置の数を決定して一致位置の数を得、その一致位置の数を比較枠内の位置総数で除し、その結果に１００を乗じて配列同一性のパーセンテージを得ることにより計算することができる。配列比較及び２配列間の同一性パーセントの決定は、容易に利用可能なソフトウェアプログラムを使用して達成することができる。好適なソフトウェアプログラムは、様々な提供元から入手可能であり、タンパク質配列とヌクレオチド配列の両方に利用可能である。配列同一性パーセントを決定するための好適なプログラムの１つは、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎのＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なプログラムのＢＬＡＳＴパッケージの一部である、ｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムを使用して２配列間の比較を実行する。ＢＬＡＳＴＮは核酸配列を比較するために使用され、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは、例えば、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳパッケージの一部であるＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒであり、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａでＥｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）から入手することもできる。
ＣＤＲまたはＣＤＲのセットを保持させるための構造は一般に、抗体の重鎖配列もしくは軽鎖配列またはその実質的部分のものであり、ＣＤＲまたはＣＤＲのセットは、再構成された免疫グロブリン遺伝子によりコードされる天然に存在するＶＨ抗体可変ドメイン及びＶＬ抗体可変ドメインのＣＤＲまたはＣＤＲのセットに対応する位置に位置する。免疫グロブリン可変ドメイン及びそれらのＣＤＲの構造及び位置は、プログラムを使用して当業者により容易に決定され得、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｈｏｔｈｉａ＋、及びＫａｂａｔ等の既知の可変ドメイン残基番号付けシステムが、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｕ．Ｓ．ＤＨＨＳ．１９８７、及びインターネット上で利用可能なツール（例えば、ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｙｓｉｓ／ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｉｎｐｕｔ／ｋｅｙ＿ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ／ｋｅｙ＿ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ．ｈｔｍｌ、及びｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕにて））への参照により日常的に決定することができる。
ＣＤＲはまた、他の足場、例えば、フィブロネクチン、シトクロムＢ、アルブミン（例えば、ＡＬＢＵｄＡｂ（Ｄｏｍａｎｔｉｓ／ＧＳＫ）及びＡＬＢ－Ｋｕｎｉｔｚ（Ｄｙａｘ））、３個または６個のアミノ酸の構造不定反復配列（例えば、ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ（登録商標）技術及びＸＴＥＮ（登録商標）技術）、及びエラスチン様反復ドメインを含有する配列（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第６１／４４２，１０６号を参照のこと）等により保持させることもできる。
実質的に本明細書に記載されるＣＤＲアミノ酸配列は、ヒト可変ドメインまたはその実質的部分にＣＤＲとして保持させることができる。実質的に本明細書に記載されるＨＣＤＲ３配列は、本開示の実施形態を表し、これらの各々は、ヒト重鎖可変ドメインまたはその実質的部分にＨＣＤＲ３として保持され得る。
本開示で使用される可変ドメインは、どの生殖細胞系列または再構成されたヒト可変ドメインからも取得することができ、また既知のヒト可変ドメインのコンセンサス配列に基づく合成可変ドメインでもあり得る。ＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲ３）は、組換えＤＮＡ技術を使用して、ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）を欠く可変ドメインのレパートリー内に導入することができる。
例えば、Ｍａｒｋｓら（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２））は、抗体可変ドメインのレパートリーを生成する方法を提供しており、抗体可変ドメインでは、可変ドメイン領域の５’末端またはそれに隣接して指向されたコンセンサスプライマーを、ヒトＶＨ遺伝子の第３のフレームワーク領域に対するコンセンサスプライマーと併用して、ＣＤＲ３を欠くＶＨ可変ドメインのレパートリーを得ている。Ｍａｒｋｓらはさらに、このレパートリーを特定の抗体のＣＤＲ３と組み合わせることができる方法について記載している。類似の技術を使用して、本開示のＣＤＲ３由来配列を、ＣＤＲ３を欠くＶＨドメインまたはＶＬドメインのレパートリーとシャッフルし、シャッフルして完成したＶＨドメインまたはＶＬドメインを同族のＶＬドメインまたはＶＨドメインと合わせて抗原結合タンパク質を得ることができる。その後、レパートリーを、国際出願公開第ＷＯ９２／０１０４７号、またはそれに続く、Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９６） Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ等の大量の文献のいずれかのファージディスプレイ系等の好適な宿主系に提示させて、好適な抗原結合タンパク質が選択され得るようにすることができる。レパートリーは、別個の１０４以上のメンバーから、例えば、１０６～１０８、または１０１０のメンバーからのいずれからもなり得る。他の好適な宿主系としては、酵母ディスプレイ、細菌ディスプレイ、Ｔ７ディスプレイ、及びリボソームディスプレイが挙げられる。リボソームディスプレイの概説については、いずれも本明細書で参照することによりその全体が本明細書に組み込まれるＬｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５１７－５２７（２００４）及び国際出願公開第ＷＯ９２／０１０４７号を参照のこと。類似のシャッフリングまたはコンビナトリアル技術がＳｔｅｍｍｅｒ（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＮａｔｕｒｅ ３７０：３８９－３９１（１９９４））によっても開示されており、β－ラクタマーゼ遺伝子との関連における技術を記載しているが、その手法が抗体作製に使用され得ることが観察されている。
「抗原結合性領域」または「ＡＢＲ」という用語は、抗原（Ａｇ）を認識して結合する抗体内部の残基であるパラトープを指す。ＡＢＲまたはＡＢＲのセットは一般に、抗体の重鎖配列もしくは軽鎖配列またはその実質的部分のものであり、ＡＢＲまたはＡＢＲのセットは、再構成された免疫グロブリン遺伝子によりコードされる天然に存在するＶＨ抗体可変ドメイン及びＶＬ抗体可変ドメインのＡＢＲまたはＡＢＲのセットに対応する位置に位置する。免疫グロブリン可変ドメイン及びそれらのＡＢＲの構造及び位置は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、プログラム及び既知の可変ドメイン残基番号付けシステム及びインターネット上で利用可能なツールを使用して、当業者により容易に決定され得る（例えば、Ｋｕｎｉｋ Ｖ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１２ Ｊｕｌ；４０）。
ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、それが、ＡＬＫ７に対する参照分子の結合をある程度阻止する範囲でＡＬＫ７に結合する場合、ＡＬＫ７への結合を参照分子と「競合する」と言われる。タンパク質が、ＡＬＫ７への結合に対して競合し、そのためＡＬＫ７への互いの結合を妨げる、阻止する、または「交差阻止する」能力は、例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標），Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）またはＳｃａｔｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０－６７２（１９４９））により記載されている方法に従うものを含め、当該技術分野で公知の任意の標準的競合結合アッセイにより決定することができる。ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７に対する参照分子の結合を、例えば、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害すると言われ得る。いくつかの実施形態によれば、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７に対する参照分子の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害する。他の実施形態によれば、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７に対する参照分子の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害する。
ＡＬＫ７結合性タンパク質
ＡＬＫ７と特異的に結合するタンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は抗体である。さらなる実施形態では、抗体は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体である。
本明細書で使用される場合、「ＡＬＫ７」という用語は、任意の種からのアクチビン受容体様キナーゼ－７タンパク質及びそのようなＡＬＫ７タンパク質から変異誘発または他の修飾によって誘導されたバリアントのファミリーを指す。本明細書でのＡＬＫ７への言及は、現在同定されている形態のいずれか１つへの言及であると理解される。ＡＬＫ７ファミリーのメンバーは一般に膜貫通タンパク質であり、システインに富む領域を有するリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びセリン／トレオニンキナーゼ活性が予測される細胞質ドメインで構成される。ヒトＡＬＫ７には、天然に存在する様々なアイソフォームがある。標準ヒトＡＬＫ７アイソフォーム１前駆体タンパク質の配列（ＮＣＢＩ参照ＮＰ＿６６０３０２．２）は、以下のとおりである：
Figure 2022534514000001
（配列番号８５）。シグナルペプチドは一重下線で示され、細胞外ドメインは太字フォントで示されている。
標準ラットＡＬＫ７前駆体タンパク質の配列（ＮＣＢＩ参照配列Ｐ７０５３９．１）は、以下のとおりである：
Figure 2022534514000002
（配列番号８６）。シグナルペプチドは一重下線で示され、細胞外ドメインは太字フォントで示されている。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＴＧＦ－ベータ受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡＬＫ７結合性タンパク質の親和性より少なくとも１００倍、５００倍、または１０００倍大きい親和性でＡＬＫ７と結合する。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質はＡＬＫ７と結合し、解離定数（ＫＤ）が１μΜ未満、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、１０ｐＭ未満、１ｐＭ未満、または０．１ｐＭ未満である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ヒトＡＬＫ７に対するＫＤが１μＭ以下かつ０．１ｐＭ以上、１００μＭ以下かつ０．１ｐＭ以上、または１００μＭ以下かつ１ｐＭ以上の範囲内である。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）が、参照ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）によるＡＬＫ７タンパク質への結合と競合／結合を阻止する能力を決定するためにＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析が使用される。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）装置（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００）を、製造者の推奨事項に従って操作するさらなる実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合タンパク質は、事前に結合させた抗ｎｉＦｃ ＩｇＧにより、ＣＭ５ ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップに捕捉され、ＡＬＫ７でコートされた表面が生成される。典型的には、２００～８００レゾナンスユニットのＡＬＫ７－Ｆｃ（二量体）がチップに結合されると考えられる（測定可能なレベルの結合が容易に得られるが、使用される試験試薬の濃度により容易に飽和可能な量）。
互いに競合／阻止する能力についての評価対象である２つのＡＬＫ７結合性タンパク質（Ａ＊及びＢ＊と称する）を、好適な緩衝液中で結合部位のモル比を１対１にして混合し、試験混合物を作製する。結合部位に基づいて濃度を計算する場合、ＡＬＫ７結合性タンパク質の分子量は、ＡＬＫ７結合性タンパク質の総分子量を、そのＡＬＫ７結合性タンパク質上のＡＬＫ７結合部位数で除したものであると想定する。試験混合物中の各ＡＬＫ７結合性タンパク質（すなわち、Ａ＊及びＢ＊）の濃度は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップに捕捉されたＡＬＫ７－Ｆｃ分子上のそのＡＬＫ７結合性タンパク質に対する結合部位が容易に飽和するよう十分に高くあるべきである。混合物中のＡＬＫ７結合性タンパク質のＡ＊及びＢ＊は、（結合に基づいて）同じモル濃度であり、その濃度は典型的には（結合部位に基づいて）１．００～１．５マイクロモルであろう。ＡＬＫ７結合性タンパク質Ａ＊単独及びＡＬＫ７結合性タンパク質Ｂ＊単独を含有する別々の溶液もまた調製される。これらの溶液中のＡＬＫ７結合性タンパク質Ａ＊及びＡＬＫ７結合性タンパク質Ｂ＊は、試験混合物中のように同じ緩衝液中で同じ濃度であるべきである。試験混合物をＡＬＫ７－ＦｃでコートしたＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップ上に通し、結合総量を記録する。次いで、チップに結合したＡＬＫ７－Ｆｃを損傷することなく結合したＡＬＫ７結合性タンパク質が除去されるようチップを処理する。典型的には、これは、チップを３０ｍＭのＨＣ１で６０秒間処理することにより行われる。次いで、ＡＬＫ７結合性タンパク質Ａ＊単独の溶液を、ＡＬＫ７－Ｆｃでコートした表面に通し、結合量を記録する。チップに結合したＡＬＫ７－Ｆｃを損傷することなく結合した抗体が除去されるようチップを再度処理する。次いで、ＡＬＫ７結合性タンパク質Ｂ＊単独の溶液をＡＬＫ７－Ｆｃでコートした表面に通し、結合量を記録する。ＡＬＫ７結合性タンパク質Ａ＊とＡＬＫ７結合性タンパク質Ｂ＊の混合物の理論的最大結合を次に計算するが、これは、ＡＬＫ７表面を単独で通した際の各ＡＬＫ７結合性タンパク質の結合の和である。混合物の実際に記録された結合がこの理論的最大値より小さい場合は、２つのＡＬＫ７結合性タンパク質は互いに競合／阻止しあっている。したがって、一般に、阻止性ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）阻止アッセイにおいて、アッセイ中及び第２のＡＬＫ７結合性タンパク質の存在下で、記録された結合が、組み合わせた２つのＡＬＫ７結合性タンパク質の理論的最大結合（上記で定義したとおり）の８０％～０．１％（例えば、８０％未満～４％）具体的には理論的最大結合の７５％～０．１％（例えば、７５％～４％）、より具体的には理論的最大結合の７０％～０．１％（例えば、７０％～４％）となるようにＡＬＫ７に結合するものである。
上記のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイは、抗ＡＬＫ７抗体等の２つＡＬＫ７結合性タンパク質が、ＡＬＫ７への結合に対して互いに競合／結合を阻止しあうかどうかを決定するために使用される例示的アッセイである。まれに、特定のＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗Ｆｃ ＩｇＧを介してＣＭ５ ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップに結合されているＡＬＫ７－Ｆｃに結合しない場合がある（これは、ＦｃへのＡＬＫ７の連結によってＡＬＫ７上の関連結合部位が遮蔽または破壊されている場合に起こり得る）。そのような場合には、ＡＬＫ７のタグ付きバージョン、例えば、Ｃ末端にＨｉｓ－タグを付けたＡＬＫ７を使用して阻止を決定することができる。この特定のフォーマットでは、抗Ｈｉｓ抗体をＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）チップに結合させ、その後、Ｈｉｓタグ付きＡＬＫ７をチップ表面上に通し、抗Ｈｉｓ抗体により捕捉させることとなる。本質的には上記のように交差阻止分析が行われるが、ただし、各チップ再生サイクルの後、抗Ｈｉｓ抗体でコートされた表面に再び新たなＨｉｓタグ付きＡＬＫ７をロードすることとなる。さらに、そのような阻止分析には他の様々な既知のタグとタグ結合性タンパク質の組み合わせを使用することができる（例えば、ＨＡタグと抗ＨＡ抗体；ＦＬＡＧタグと抗ＦＬＡＧ抗体；ビオチンタグとストレプトアビジン）。以下に、ＡＬＫ７結合性タンパク質が、ＡＬＫ７に対する参照ＡＬＫ７結合性タンパク質の結合を阻止するのか、または阻止する能力があるのかどうかを決定するためのＥＬＩＳＡアッセイを概説する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）が、ＡＬＫ７への結合に対して参照ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７リガンド）と競合する能力を決定するためにＥＬＩＳＡが使用される。そのようなアッセイの一般原理は、参照ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）をＥＬＩＳＡプレートのウェルにコートすることである。過剰量の潜在的に阻止性の第２の被験ＡＬＫ７結合性タンパク質を溶液中に加える（すなわち、ＥＬＩＳＡプレートには結合していない）。次いで、限られた量のＡＬＫ７（または別法としてＡＬＫ７－Ｆｃ）をウェルに加える。コートされた参照ＡＬＫ７結合性タンパク質と溶液中の被験ＡＬＫ７結合性タンパク質は、限られた数のＡＬＫ７（またはＡＬＫ７－Ｆｃ）分子の結合に対して競合する。プレートを洗浄して、コートされた参照ＡＬＫ７結合性タンパク質が結合していないＡＬＫ７を除去し、また、液相の被験ＡＬＫ７結合性タンパク質、及び液相の被験ＡＬＫ７結合性タンパク質とＡＬＫ７の間で形成された複合体も除去する。次いで、結合したＡＬＫ７の量を、適切なＡＬＫ７検出試薬を使用して測定する。コートされた参照ＡＬＫ７結合性タンパク質のＡＬＫ７への結合を阻止することができる溶液中の被験ＡＬＫ７結合性タンパク質は、コートされた参照ＡＬＫ７結合性タンパク質が第２の液相被験ＡＬＫ７結合性タンパク質の非存在下で結合することができるＡＬＫ７分子の数と比べて、コートされた参照ＡＬＫ７結合性タンパク質が結合することができるＡＬＫ７分子の数の減少を引き起こすことができる。アッセイのバックグラウンドシグナルは、コートされた参照ＡＬＫ７結合性タンパク質、液相被験ＡＬＫ７結合性タンパク質、ＡＬＫ７緩衝液のみ（すなわち、ＡＬＫ７なし）及びＡＬＫ７検出試薬を含むウェルで得られるシグナルと定義される。アッセイの陽性対照シグナルは、コートされた参照ＡＬＫ７結合性タンパク質、液相被験ＡＬＫ７結合性タンパク質緩衝液のみ（すなわち、液相被験ＡＬＫ７結合性タンパク質なし）、ＡＬＫ７及びＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）検出試薬を含むウェルで得られるシグナルと定義される。ＥＬＩＳＡアッセイは、バックグラウンドシグナルの少なくとも３倍の陽性対照シグナルが得られるように実行される。方法上のアーチファクトの対照として、交差阻止アッセイを上述の形式で実行しても、またその逆で、コートされた抗体として被験ＡＬＫ７結合性タンパク質を、液相抗体として参照ＡＬＫ７結合性タンパク質を用いて実行してもよい。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＴＧＦ－ベータ受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡＬＫ７結合性タンパク質の親和性より少なくとも１００倍、５００倍、または１０００倍大きい親和性でＡＬＫ７と結合する。追加の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＴＧＦ－ベータ受容体ファミリーメンバーではない対照タンパク質に対するＡＬＫ７結合性タンパク質の親和性より少なくとも１００倍、５００倍、または１０００倍大きい親和性でＡＬＫ７と結合する。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質はＡＬＫ７と結合し、解離定数（ＫＤ）が１μΜ未満、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、１０ｐＭ未満、１ｐＭ未満、または０．１ｐＭ未満である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ヒトＡＬＫ７に対するＫＤが１μＭ以下かつ０．１ｐＭ以上、１００μＭ以下かつ０．１ｐＭ以上、または１００μＭ以下かつ１ｐＭ以上の範囲内である。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体）が、哺乳類の白色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害を低下させる（阻害する）能力を決定するために細胞ベースの脂肪分解阻害アッセイが使用される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）がＡＬＫ７活性を低下させる能力を決定するために、成熟白色脂肪細胞（例えば、ヒト、マウス、またはラット）を使用して脂肪分解阻害アッセイを実施する。脂肪分解アッセイを行うためのキット、試薬及び方法は市販されており、当該技術分野で公知である。特定の実施形態では、脂肪分解阻害アッセイは、本明細書の実施例で提供されているように実施される。他の実施形態では、アッセイは市販されている脂肪分解アッセイキット（例えば、ＢｉｏＡｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＥｎｚｙＣｈｒｏｍ（商標）Ａｄｉｐｏｌｙｓｉｓ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ、カタログ番号ＥＡＰＬ－２００；Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ１８５４３３；Ｚｅｎ－Ｂｉｏ、カタログ番号ＬＩＰ－１－ＮＣＬ１；ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ、カタログ番号Ｋ５７７－１００；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号ＭＡＫ２１１；及びＡｄｉｐｏＬｙｚｅ（商標）Ｌｉｐｏｌｙｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ，Ｌｏｎｚａ、カタログ番号１９３３３９）で提供される説明書及び試薬に従って実施される。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質はＡＬＫ７アンタゴニストであり、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で実施される脂肪分解阻害アッセイで標準的技術と条件を使用して（例えば、本明細書中の例に記載のように）決定した場合、成熟白色脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６５％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％増大させる。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で実施される脂肪分解阻害アッセイで標準的技術と条件を使用して（例えば、本明細書中の例に記載のように）決定した場合、成熟白色脂肪細胞での脂肪分解を少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、または約１００％増大させる。
ＡＬＫ７シグナル伝達に依存する薬力学的パラメータは、ＡＬＫ７を中和し、治療的利益を提供することができる結合性タンパク質を同定するために、ＡＬＫ７結合性タンパク質のインビボ試験のエンドポイントとして測定され得る。ＡＬＫ７中和結合物質は、ビヒクルで処置された動物と比較して、そのような薬力学的パラメータの統計学的に有意な変化を生じさせることができるものと定義される。そのようなインビボ試験は、任意の好適な哺乳類（例えば、マウス、ラット、またはサル）で実施することができる。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合する抗体である。追加の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、完全長抗ＡＬＫ７抗体である。追加の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、またはそのＡＬＫ７結合性抗体断片である。
いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、ＡＬＫ７結合性抗体断片である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子である。追加の実施形態では、ＡＬＫ７抗体は、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合したＦｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、細胞内抗体、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃＦｖ－Ｆｃまたはビス－ｓｃＦｖである。
追加の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＶＨ及びＶＬが含まれている抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体にはさらに、重鎖定常領域またはその断片が含まれている。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）ヒトＩｇＡ定常領域、またはその断片、（ｂ）ヒトＩｇＤ定常領域、またはその断片、（ｃ）ヒトＩｇＥ定常ドメイン、またはその断片；（ｄ）ヒトＩｇＧ１定常領域、またはその断片、（ｅ）ヒトＩｇＧ２定常領域、またはその断片、（ｆ）ヒトＩｇＧ３定常領域、またはその断片、（ｇ）ヒトＩｇＧ４定常領域、またはその断片、及び（ｈ）ヒトＩｇＭ定常領域、またはその断片から選択される重鎖免疫グロブリン定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、重鎖定常領域またはその断片、例えば、ヒトＩｇＧ定常領域またはその断片を含む。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、エフェクター機能及び／または半減期が変化しているかもしくは変化するよう変異させてある重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、エフェクター機能を低下させる変異を含有しているＩｇＧ１重鎖定常領域を含む抗体である（例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１－２５７５（２００１）、Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０５：２０１６７－２０１７２（２００８）、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３４：２２０４－２２１０（２００７）、Ｂｏｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：４０３－４１１（１９９３）、Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３（１９９４）、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００：１６－２６（２０００）、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８：５６３－５７１（１９９９）、Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９２：１１９８０－１１９８４（１９９５）、Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５－１９３３（２０００）、ＷＯ９７／１１９７１、及びＷＯ０７／１０６５８５、米国出願公開第２００７／０１４８１６７Ａ１号、ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９：１１８５－１１９２（２００７）、Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：６８５－６９１（２００９）、及びＫｕｍａｇａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４７：１４８９－１４９７（２００７）を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、重鎖定常領域またはその断片には、野生型ＩｇＧ定常ドメインに対する１つ以上のアミノ酸置換が含まれ、その修飾されたＩｇＧは、野生型ＩｇＧ定常ドメインを有するＩｇＧの半減期と比較してＡＤＣＣが低下している。ＡＤＣＣを低下させる提供抗体内に含有されるＦｃ配列操作修飾の例としては、ＩｇＧ１－Ｋ３２６Ｗ、Ｅ３３３Ｓ；ＩｇＧ２－Ｅ３３３Ｓ；ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ；ＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ２－Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ；ＩｇＧ４－Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ；ＩｇＧ４－Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ；ＩｇＧ２－ＥＵ配列の１１８～２６０；ＩｇＧ４－ＥＵ配列の２６１～４４７；ＩｇＧ２－Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；及びＩｇＧ１－Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓに対応する１つ以上の修飾が挙げられ、位置の番号付けはＫａｂａｔの場合同様、ＥＵインデックスに従っている。
ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＣＤＣ活性が低下しているかまたは低下するよう変異させてある重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＣＤＣ活性を低下させる変異を含有しているＩｇＧ１重鎖定常領域を含む抗体である（例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ９７／１１９７１及びＷＯ０７／１０６５８５、米国出願公開第２００７／０１４８１６７Ａ１号、ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９：１１８５－１１９２（２００７）；Ｈａｙｄｅｎ－Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ １５：２７３９－２７４６（２００９）、Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０３：４００５－４０１０（２００６）、Ｂｒｕｃｋｈｅｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ １１：５０９－５１７（２００９）、Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：６８５－６９１（２００９）、ならびにＳａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０５：２０１６７－２０１７２（２００８）を参照のこと）。ＣＤＣを低下させる抗ＡＬＫ７抗体内に含有されるＦｃ配列操作修飾の例としては、ＩｇＧ１－Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ；ＩｇＧ２ ＥＵ配列の１１８～２６０；ＩｇＧ４－ＥＵ配列の２６１～４４７；ＩｇＧ２－Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ１－Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ；及びＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｐ２３０Ｓに対応する１つ以上の修飾が挙げられる。
さらなる実施形態では、重鎖定常領域またはその断片には、野生型ＩｇＧ定常ドメインに対する１つ以上のアミノ酸置換が含まれ、その修飾されたＩｇＧは、野生型ＩｇＧ定常ドメインを有するＩｇＧの半減期と比較して半減期が長い。例えば、ＩｇＧ定常ドメインは、２５１～２５７位、２８５～２９０位、３０８～３１４位、３８５～３８９位、及び４２８～４３６位におけるアミノ酸残基の１つ以上のアミノ酸置換を含有することができ、ここで、アミノ酸位置の番号付けは、Ｋａｂａｔに記載されているＥＵインデックスに従って行われる。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインは、Ｋａｂａｔ位置２５２位のアミノ酸のＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、もしくはＴｈｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置２５４位のアミノ酸のＴｈｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置２５６位のアミノ酸のＳｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、もしくはＴｈｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置２５７位のアミノ酸のＬｅｕによる置換；Ｋａｂａｔ位置３０９位のアミノ酸のＰｒｏによる置換；Ｋａｂａｔ位置３１１位のアミノ酸のＳｅｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置４２８位のアミノ酸のＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、もしくはＳｅｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置４３３位のアミノ酸のＡｒｇ、Ｓｅｒ、Ｉｓｏ、Ｐｒｏ、もしくはＧｌｎによる置換；またはＫａｂａｔ位置４３４位のアミノ酸のＴｒｐ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、もしくはＴｙｒによる置換のうちの１つ以上を含有することができる。具体的には、ＩｇＧ定常ドメインは、Ｋａｂａｔ位置２５２位のアミノ酸のＴｙｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５４位のアミノ酸のＴｈｒによる置換、及びＫａｂａｔ位置２５６位のアミノ酸のＧｌｕによる置換を含め、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインに対するアミノ酸置換を含有することができる。
追加の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、軽鎖免疫グロブリン定常領域を含む抗体である。さらなる実施形態では、抗体は、ヒトＩｇカッパ定常領域またはヒトＩｇラムダ定常領域を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、相補性決定領域（ＣＤＲ）のセット、すなわち、重鎖可変領域（ＶＨ）－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、軽鎖可変領域（ＶＬ）－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、かかるＣＤＲは、表１に開示されている重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）の対に存在する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、（ａ）配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、（ｃ）配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、及び（ｄ）配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列、から選択されるＶＨとＶＬの対に存在するＣＤＲのセットを含む。
追加の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＣＤＲのセット、すなわち、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、及びＶＬ－ＣＤＲ３を含み、かかるＣＤＲのセットは、ＣＤＲの参照セット、すなわち、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を含むというセットと同一であるか、あるいはそこから合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、もしくは１０未満の、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有し、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＣＤＲのセット、すなわち、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を含むというセットを含み、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗原結合領域（ＡＢＲ）のセット、すなわち、重鎖可変領域（ＶＨ）－ＡＢＲ１、ＶＨ－ＡＢＲ２、ＶＨ－ＡＢＲ３、軽鎖可変領域（ＶＬ）－ＡＢＲ１、ＶＬ－ＡＢＲ２及びＶＬ－ＡＢＲ３を含み、かかるＡＢＲは、表１に開示されている重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）の対に存在する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、（ａ）配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、（ｃ）配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、及び（ｄ）配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列、から選択されるＶＨとＶＬの対に存在するＡＢＲのセットを含む。
追加の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＡＢＲのセット、すなわち、ＶＨ－ＡＢＲ１、ＶＨ－ＡＢＲ２、ＶＨ－ＡＢＲ３、ＶＬ－ＡＢＲ１、ＶＬ－ＡＢＲ２、及びＶＬ－ＡＢＲ３を含み、かかるＡＢＲのセットは、ＡＢＲの参照セット、すなわち、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７３のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７４または６９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号７５または７０のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号７１のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号７２のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号８７のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７７または８８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９２のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８０または９３のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８１または９４のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９６のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号８２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８３または９８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８４または９９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号１０１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号１０２のアミノ酸配列を含むというセットと同一であるか、あるいはそこから合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、もしくは１０未満の、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有し、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＡＢＲのセット、すなわち、（ａ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７３のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７４または６９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号７５または７０のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号７１のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号７２のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号８７のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７７または８８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９２のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８０または９３のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８１または９４のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９６のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号８２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８３または９８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８４または９９のアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号１０１のアミノ酸を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号１０２のアミノ酸配列を含むというセットを含み、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＶＨとＶＬの対、すなわち、（ａ）（ｉ）配列番号４に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号１３に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｂ）（ｉ）配列番号２２に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号３１に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、（ｃ）（ｉ）配列番号４０に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号４９に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、及び（ｄ）（ｉ）配列番号５８に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｉｉ）配列番号６７に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬ、から選択される対を含み、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＶＨとＶＬの対、すなわち、（ａ）（ｉ）配列番号４から選択される参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号１３の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、（ｂ）（ｉ）配列番号２２の参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号３１の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、（ｃ）（ｉ）配列番号４０の参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号４９の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、ならびに（ｄ）（ｉ）配列番号５８の参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、（ｉｉ）配列番号６７の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、から選択される対を含み、かかるタンパク質はＡＬＫ７と結合する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合する抗体である。追加の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７結合性抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、及び一本鎖抗体分子（例えば、ＢｉＴＥ）から選択される抗体断片である。
さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドの存在下で、ＡＬＫ７及びＩＩ型受容体を発現している細胞表面上での、ＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）を含有する複合体の形成を減少させる、（ｂ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＩＩ型受容体と競合する、（ｃ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）と競合する、（ｄ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＡＬＫ７のリン酸化を減少させる、（ｅ）１つ以上のＴＧＦ－ベータリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる、（ｆ）ＡＬＫ７に、１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により決定した場合）で結合する及び（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏ及び／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含有する複合体の形成を減少させる、という特性から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を使用した脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、少なくとも１つの変異、修飾、及び／または置換、例えば、Ｆｃ領域またはＦａｂ領域での変異を含む。そのような変異及び／または置換は、例えば、ＡＬＫ７結合性タンパク質の発現量、翻訳後修飾、安定性／半減期、及び／または活性を増大させるかまたは改善し得る。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、例えば、宿主において、エフェクター活性及び／または毒性を低下させるよう、及び／または補体の結合と固定化を低下させる、Ｆｃ－ｇ依存性の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を低下させる、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を低下させる、及び／または生物学的利用能及び／または安定性／半減期を改善するように、少なくとも１つの変異、修飾、及び／または置換をそのＦｃ領域に含む。
１つ以上が提供抗体内に含まれ得る、ＡＤＣＣを低下させるＦｃ配列操作修飾の例としては、ＩｇＧ１－Ｋ３２６Ｗ、Ｅ３３３Ｓ；ＩｇＧ２－Ｅ３３３Ｓ；ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ；ＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ２－Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ；ＩｇＧ４－Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ；ＩｇＧ４－Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ；ＩｇＧ２－ＥＵ配列の１１８～２６０；ＩｇＧ４－ＥＵ配列の２６１～４４７；ＩｇＧ２－Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；及びＩｇＧ１－Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓに対応する修飾が挙げられ、位置の番号付けはＫａｂａｔの場合同様、ＥＵインデックスに従っている。
１つ以上が提供抗体内に含まれ得る、ＣＤＣ活性を低下させるＦｃ配列操作修飾の例としては、例えば、ＷＯ９７／１１９７１及びＷＯ０７／１０６５８５、米国出願公開第２００７／０１４８１６７Ａ１号、ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９：１１８５－１１９２（２００７）；Ｈａｙｄｅｎ－Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ １５：２７３９－２７４６（２００９）、Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０３：４００５－４０１０（２００６）、Ｂｒｕｃｋｈｅｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ １１：５０９－５１７（２００９）、Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：６８５－６９１（２００９）、ならびにＳａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０５：２０１６７－２０１７２（２００８）に記載されている１つ以上の修飾が挙げられ、その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定のそのような修飾には、ＩｇＧ１－Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ；ＩｇＧ２ ＥＵ配列の１１８～２６０；ＩｇＧ４－ＥＵ配列の２６１～４４７；ＩｇＧ２－Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ１－Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ；及びＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｐ２３０Ｓに対応する修飾が含まれる。
１つ以上が提供抗体内に含まれ得る、半減期を改善するＦｃ配列操作修飾の例としては、２５１～２５７位、２８５～２９０位、３０８～３１４位、３８５～３８９位、及び４２８～４３６位におけるアミノ酸残基の置換が挙げられ、ここで、アミノ酸位置の番号付けは、Ｋａｂａｔに記載されているＥＵインデックスに従って行われる。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインは、Ｋａｂａｔ位置２５２位のアミノ酸のＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、もしくはＴｈｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置２５４位のアミノ酸のＴｈｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置２５６位のアミノ酸のＳｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、もしくはＴｈｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置２５７位のアミノ酸のＬｅｕによる置換；Ｋａｂａｔ位置３０９位のアミノ酸のＰｒｏによる置換；Ｋａｂａｔ位置３１１位のアミノ酸のＳｅｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置４２８位のアミノ酸のＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、もしくはＳｅｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置４３３位のアミノ酸のＡｒｇ、Ｓｅｒ、Ｉｓｏ、Ｐｒｏ、もしくはＧｌｎによる置換；またはＫａｂａｔ位置４３４位のアミノ酸のＴｒｐ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、もしくはＴｙｒによる置換のうちの１つ以上を含有する。具体的には、ＩｇＧ定常ドメインは、Ｋａｂａｔ位置２５２位のアミノ酸のＴｙｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５４位のアミノ酸のＴｈｒによる置換、及びＫａｂａｔ位置２５６位のアミノ酸のＧｌｕによる置換を含め、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインに対する１つ以上のアミノ酸置換を含有することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、少なくとも１つの変異、修飾、及び／または置換、例えば、ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ作用を低下させるため、及び／または半減期を改善するための本明細書に開示されるＦｃ領域もしくはＦａｂ領域での変異を含む。他の実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、もしくはそれ以上の置換、例えば、本明細書に開示されるＦｃ領域またはＦａｂ領域での変異を含む。
いくつかの特定の変異（複数可）、修飾（複数可）、及び／または置換（複数可）が、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合性タンパク質に単独で導入されてよく、また上記の少なくとも１つの変異、修飾、及び／または置換と組み合わせて導入されてもよい。例えば、抗体細胞毒性を低下させるため、残基Ｎ２９７におけるＮ－結合型グリコシル化は、Ｎ２９７をアラニン、グリシン、またはアスパラギン酸に置換することにより排除することができる（Ｔａｏ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４３：２５９５－２６０１、Ｈｒｉｓｔｏｄｏｒｏｖ ｅｔ ａｌ．（２０１３） Ｍｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ５４：１０５６－１０６８）。同様に、２９９位のセリン／トレオニン残基を修飾することができる（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．（２００８） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０５：２０１６７－２０１７２）。Ｎ２９７における変異はさらにＤ２６５Ａ変異と組み合わせることができ（Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．（１９９６） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５７：４９６３－４９６９）、例えば、ＤＡＮＡ（Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ａ）またはＤＡＮＧ（Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｇ）として表される、一般的に使用されるアミノ酸変化の２つの対がある。抗体のエフェクター機能を軽減するための代替変異としては、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ、Ｋａｂａｔ位置）等、抗体の下方のヒンジでの残基の置換が挙げられる（Ｃｈａｐｐｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８８：９０３６－９０４０）。これらの残基は、ＣＨ２ドメイン上のＦｃ－γ受容体結合部位の一部を形成し、より高いまたはより低いエフェクター機能の抗体アイソタイプ間でのこれらの残基の交換により、ＡＤＣＣにおけるそれらの重要性が確認された。これらの部位でのアラニン置換は、ヒト抗体とマウス抗体の両方でＡＤＣＣを低下させるのに有効であるが、これらの置換はＣＤＣ活性を低下させるのにはそれほど有効ではない。ＦｃのＣ１ｑ結合部位をマッピングするためのランダム変異誘発法により同定された別の単一バリアントＰ３２９Ａは、ＡＤＣＣ活性を保持しつつＣＤＣ活性を低下させるのにきわめて有効である。Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ａ（ＬＡＬＡ－ＰＧ、Ｋａｂａｔ位置）の置換の組み合わせは、ヒトＩｇＧ１抗体のエフェクター機能を効果的にサイレンシングすることが示されている。ＬＡＬＡ、ＬＡＬＡ－ＰＧ、及び他の変異の詳細な考察については、その内容が本明細書で参照することによりその全体が本明細書に組み込まれるＬｏ ｅｔ ａｌ．（２０１７） Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９２：３９００－３９０８を参照のこと。本明細書に記載されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、少なくとも１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の本明細書に記載の変異を有し得る。
ある特定の好ましい実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、重鎖（ＬＡＬＡ ＨＣ）のＦｃ領域でのＬ２３４Ａ変異及びＬ２３５Ａ変異（ＬＡＬＡ、Ｋａｂａｔ位置）を含む。他の好ましい実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、重鎖のＦｃ領域での、Ｌ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、及びＰ３２９Ｇ変異（ＬＡＬＡ－ＰＧ；Ｋａｂａｔ位置）を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、マウス抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、多重特異性抗体、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｄｓＦｖ断片、ｓｃＦｖ断片、またはｓｃ（Ｆｖ）２断片である。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＡＬＫ７リガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、またはＮｏｄａｌ）の活性を阻止する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏ）の活性を阻止する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、ＡＬＫ７リガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、またはＮｏｄａｌ）の活性と関連する脂肪形成を減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、過体重、肥満または代謝障害と関連する１つ以上の疾患または状態を治療または改善する。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、ＩＩ型糖尿病である。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、高血圧である。いくつかの実施形態では、代謝障害は、脂質異常症、インスリン抵抗性、高インスリン血症または高血糖症である。
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７媒介性Ｓｍａｄシグナル伝達を低下させる。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイで決定した場合、白色脂肪細胞及び／または褐色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害に５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％拮抗する。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイで決定した場合、白色脂肪細胞及び／または褐色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害を少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、もしくは約１００％抑制するかまたは低下させる。いくつかの実施形態では、脂肪分解アッセイは、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７に結合し、過体重、肥満、インスリン抵抗性、糖尿病、アテローム性動脈硬化、高血圧、炎症、及び／またはＮＡＦＬＤ（例えば、脂肪肝及び／またはＮＡＳＨ）と関連する１つ以上の状態を阻害するかまたは低下させる。
特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７媒介性Ｓｍａｄシグナル伝達を低下させる。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で実施される脂肪分解阻害アッセイで標準的技術と条件を使用して（例えば、本明細書中の例に記載のように）決定した場合、白色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害を５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％阻害する。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で実施される脂肪分解阻害アッセイで標準的技術と条件を使用して（例えば、本明細書中の例に記載のように）決定した場合、白色脂肪細胞におけるＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害を少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、もしくは約１００％抑制するかまたは低下させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７に結合し、過体重、肥満、インスリン抵抗性、糖尿病、アテローム性動脈硬化、高血圧、炎症、及び／またはＮＡＦＬＤ（例えば、脂肪肝及び／またはＮＡＳＨ）と関連する１つ以上の状態を阻害するかまたは低下させる。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）によりＡＬＫ７活性を阻止することで、過体重、インスリン抵抗性、肥満もしくは糖尿病と関連する１つ以上の状態、例えば、高血圧、がん、ならびにニューロパチー、網膜症、ならびに心血管疾患、肺疾患及び腎疾患が阻害されるかまたは低下する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７を阻止することで、代謝性疾患と関連する１つ以上の状態を阻害するかまたは低下させる。特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、もしくはＮｏｄａｌによるＡＬＫ７への結合を阻害するかまたは低下させる。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、Ｓｍａｄ依存性経路による脂肪分解の阻害を阻害するかまたは低下させる。
上記のように、いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７と結合するＶＨアミノ酸配列及び／またはＶＬアミノ酸配列を含有する抗ＡＬＫ７抗体（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片、ならびにそのバリアントと誘導体）は、本明細書に記載される配列に対する配列同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％９９％、または１００％であり得る。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７と結合するＶＨアミノ酸配列（複数可）及び／またはＶＬアミノ酸配列（複数可）は、本明細書に記載される配列に対して８つ、７つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、１つのアミノ酸の付加、置換（例えば、保存的置換）または欠失を含む。追加の実施形態では、ＶＨ及び／またはＶＬアミノ酸配列と結合するＡＬＫ７は、本明細書で記載される配列に対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくはそれ以上のアミノ酸の付加、置換（例えば、保存的置換）または欠失を含む。ＶＨ領域もしくはＶＬ領域に対する類似性が、ある特定のパーセントであるＶＨ領域及びＶＬ領域、あるいは１つ以上の置換、欠失及び／または挿入（例えば、保存的置換）を有するＶＨ領域及びＶＬ領域を含有する抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書に記載されるＶＨ領域及び／またはＶＬ領域をコードする核酸分子の変異誘発（例えば、部位特異的またはＰＣＲ媒介性変異誘発）、それに続く、コードされた改変抗体をＡＬＫ７への結合について試験すること、及び任意選択で、本明細書に記載される機能解析を使用するかまたは保持された機能を試験するために日常的に変更可能な当該技術分野で公知のアッセイを使用して、保持された機能について試験することにより得ることができる。
ｈＡＬＫ７またはｍｕｒＡＬＫ７に対する抗ＡＬＫ７抗体（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片、ならびにそのバリアントと誘導体）等のＡＬＫ７結合性タンパク質の親和性または結合力は、当該技術分野で公知の任意の好適な方法、例えば、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、もしくはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または動態（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）またはＫＩＮＥＸＡ（登録商標）分析）を使用して実験的に決定することができる。直接結合アッセイ及び競合結合アッセイのフォーマットを容易に使用することができる。（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ ｅｔ ａｌ．， “Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ， ” Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）、Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）、及び本明細書に記載される方法を参照のこと）。特定の抗体－抗原相互作用の測定される親和性は、異なる条件（例えば、塩濃度、ｐＨ、温度）で測定した場合は異なり得る。したがって、親和性及び他のＡＬＫ７の結合性のパラメータ（例えば、ＫＤまたはＫｄ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定は、ＡＬＫ７結合性タンパク質及びＡＬＫ７の標準液を用いて行われ、また測定は、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で知られる他の標準化された条件と方法を使用して実施される。
本開示はさらに、本明細書に記載される抗ＡＬＫ７抗体等のＡＬＫ７結合性タンパク質を提供し、その場合、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、異種物質に結合されている。ある特定の実施形態では、異種物質は、抗菌剤、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、脂質、生物学的応答調節物質、医薬剤、リンホカイン、異種抗体もしくは抗体断片、検出可能な標識、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ヘテロ複合体ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書の他の箇所でより詳しく考察される。
ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体ではない。タンパク質標的に高親和性で結合する非抗体ポリペプチドを同定及び生成するための様々な方法が当該技術分野で公知である。例えば、その各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１８：２９５－３０４（２００７）、Ｈｏｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ １５：１４－２７（２００６）、Ｇｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：６５３－６５８（２００６）、Ｎｙｇｒｅｎ，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６６８－２６７６（２００８）、及びＳｋｅｒｒａ，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６７７－２６８３（２００８）を参照のこと。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質を同定／生成するためにファージディスプレイ技術を使用することができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＶＡＳＰポリペプチド、鳥類膵臓ポリペプチド（ａＰＰ）、テトラネクチン（ＣＴＬＤ３に基づく）、アフィリン（γＢ－クリスタリン／ユビキチンに基づく）、ノッチン、ＳＨ３ドメイン、ＰＤＺドメイン、テンダミスタット、トランスフェリン、コンセンサスアンキリン反復ドメイン（例えば、ＤＡＲＰｉｎ）、リポカリンタンパク質フォールド（例えば、アンチカリン及びデュオカリン（Ｄｕｏｃａｌｉｎ））、タンパク質エピトープミメティック（ＰＥＭ）、マキシボディ／アビマー、ドメイン抗体フィブロネクチンドメイン（例えば、１０ Ｆｎ３、例えば、いずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国出願公開第２００３／０１７０７５３号及び同第２００９０１５５２７５号を参照のこと）、プロテインＡのドメイン（例えば、アフィボディ）、及びチオレドキシンから選択される種類に基づくタンパク質足場を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で提供される抗ＡＬＫ７抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合するＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、完全長抗ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体）を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質と同じＡＬＫ７のエピトープに結合するＡＬＫ７結合性タンパク質を提供する。被験ＡＬＫ７結合性タンパク質が、例えば、配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、または配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列を含む抗体等の参照結合性タンパク質のＡＬＫ７に対する結合を阻害する能力は、被験ＡＬＫ７結合性タンパク質がＡＬＫ７への結合に対して参照抗体と競合することができることを実証している。そのようなＡＬＫ７結合性タンパク質は、非限定的理論に従って、それが競合するＡＬＫ７参照抗体と同じかまたは関連する（例えば、構造的に同様であるかまたは空間的に近位の）ＡＬＫ７上のエピトープに結合することができる。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、または配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列を含むそれぞれの抗体と同じＡＬＫ７上のエピトープに結合する。
一般に、ＡＬＫ７等の１型ＴＧＦ－ベータ受容体ファミリーメンバーは、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢ）によりリン酸化されること、及びＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を介してシグナル伝達を行うことが知られている。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７及びＩＩ型受容体を発現している細胞（例えば、脂肪細胞）において、１つ以上のＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ）によるＡＬＫ７のリン酸化を減少させることができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、ＡＬＫ７及びＩＩ型受容体を発現している細胞（例えば、脂肪細胞）において、Ｓｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のＡＬＫ７媒介性リン酸化を減少させることができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７受容体発現細胞は、マウス細胞である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７受容体発現細胞は、ヒト細胞である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７受容体発現細胞は、脂肪細胞である。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドの存在下で、ＡＬＫ７及びＡｃｔＲＩＩ受容体を発現している細胞の表面での、ＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）を含有する複合体の形成を減少させる、（ｂ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＩＩ型受容体と競合する、（ｃ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）と競合する、（ｄ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＡＬＫ７のリン酸化を減少させる、（ｅ）１つ以上のＴＧＦ－ベータリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる、（ｆ）ＡＬＫ７に、１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により決定した場合）で結合する、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏ及び／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含有する複合体の形成を減少させる、という特性から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を使用した脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性のＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合について競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７及びＡｃｔＲＩＩ受容体を発現している細胞の表面での、ＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）を含有する複合体の形成を、当該ＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドのうち１つ以上の存在下で減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を使用した脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性のＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合は、ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＩＩ型受容体と競合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を使用した脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性のＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、１つ以上のＴＧＦ－ベータリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下で、ＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を低下させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、細胞ベースのアッセイを使用して測定した場合、Ｓｍａｄのリン酸化を減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、細胞ベースのアッセイを使用して測定した場合、ＡＬＫ７媒介性リン酸化を、５００ｐＭ未満、３５０ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、７５ｐＭ未満、６０ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、４０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＩＣ５０で減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を使用した脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性のＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７に、１ｎＭ以上かつ１ｐＭ未満のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により決定した場合）で結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を使用した脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７への結合を、本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性のＶＨとＶＬの対を有する抗体と交差阻止するかまたは競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏ及び／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含有する複合体の形成を減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を使用した脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７への結合を、本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性のＶＨとＶＬの対を有する抗体と交差阻止するかまたは競合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片である。
ＡＬＫ７結合性タンパク質の調製
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７の細胞外ドメインと結合する。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、完全長抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体、ならびにそのバリアント、及び誘導体である。
ＡＬＫ７結合性タンパク質は、既知の技術を使用して容易に調製することができる。モノクローナル抗ＡＬＫ７抗体は、ハイブリドーマ法、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７ （１９７５）により記載されているものを含め、当該技術分野で公知の技術を使用して調製することができる。ハイブリドーマ法を使用して、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物が、リンパ球による、免疫抗原に特異的に結合する抗体の産生を誘発するよう、上記のように免疫化される。リンパ球は、インビトロで免疫化することができる。免疫化の後、リンパ球を単離し、好適な骨髄腫細胞株と融合させてハイブリドーマ細胞を形成した後、それらを選択して、融合していないリンパ球及び骨髄腫細胞から離すことができる。免疫沈降法、免疫ブロット法によるかまたはインビトロでの結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ））により決定される、ｈＡＬＫ７等のＡＬＫ７に対して特異的に指向されるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、その後、標準的方法（例えば、Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６を参照のこと）を使用したインビトロ培養または動物の腹水腫瘍としてインビボで増殖させることができる。その後、モノクローナル抗体を、上記のポリクローナル抗体の場合のように培地または腹水液から精製することができる。
提供されるモノクローナル抗体は、米国特許第４，８１６，５６７号に記載のような組換えＤＮＡ法を使用して作製することもでき、ここで、モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは、その抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅させるオリゴヌクレオチドプライマーを使用したＲＴ－ＰＣＲ等により、成熟Ｂ細胞またはハイブリドーマ細胞から単離され、それらの配列を、既知の手順を使用して決定する。次いで、その後、重鎖及び軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを適切な発現ベクター内にクローニングし、これらを、他の場合には免疫グロブリンタンパク質を産生しないＥ．ｃｏｌｉ細胞、シミアンＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｐｅｒ．Ｃ６細胞、または骨髄腫細胞（例えば、ＮＳ０細胞）等の宿主細胞にトランスフェクトすると、宿主細胞によりモノクローナル抗体が生成される。組換え抗ＡＬＫ７モノクローナル抗体はまた、既知の技術を使用して、所望の種のＣＤＲを発現するファージディスプレイライブラリーから容易に単離することができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４（１９９０）、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）、及び Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９１）を参照のこと）。
抗ＡＬＫ７抗体は、任意選択で、ＡＬＫ７抗原に対する高親和性及び他の好ましい生物学的特性を示すよう、ヒト化、表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）、及び操作することができる。例えば、ヒト化（またはヒト）抗ＡＬＫ７抗体、は、ＡＬＫ７に対する親和性増大等の所望の抗体特性が得られるよう、一般的に利用可能な三次元免疫グロブリンモデリング、ならびにフレームワーク（ＦＷ）残基、コンセンサス配列、及び生殖細胞系列配列を選択するための既知の手順を使用して、容易に設計及び調製することができる。
親和性成熟戦略及び鎖シャッフリング戦略は当該技術分野で公知であり、高親和性抗ＡＬＫ７抗体ならびに本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性タンパク質の誘導体及びバリアントを作製するために利用することができる。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）を参照のこと。高親和性抗ＡＬＫ７抗体ならびに本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性タンパク質の誘導体及びバリアントを作製するための追加戦略は、可変ドメイン全体の内部に変異を生成するために１つ以上の選択されたＶＨ遺伝子及び／またはＶＬ遺伝子のランダム変異誘発を使用して、本開示のＣＤＲ由来配列を保持する新規のＶＨ領域またはＶＬ領域を生成することである。エラープローンＰＣＲを使用するそのような技術は、Ｇｒａｍらにより記載されている（ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８９：３５７６－３５８０（１９９２））。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ及び／またはＶＬ ＣＤＲのセット内で１つもしくは２つのアミノ酸置換が行われる。さらなる戦略では、本明細書に開示される抗ＡＬＫ７抗体をコードするＶＨ遺伝子またはＶＬ遺伝子のＣＤＲ領域に対する直接変異誘発を使用した。そのような技術の例は、Ｂａｒｂａｓら（ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９１：３８０９－３８１３（１９９４））及びＳｃｈｉｅｒら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１－５６７（１９９６））により開示されている。
本開示の抗ＡＬＫ７抗体のヒト化、表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）または操作は、既知の任意の方法を使用して実施することができ、その方法としては、それぞれ参照することにより本明細書に全体が組み込まれる、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８））、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１： ２２９６（１９９３）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８９：４２８５（１９９２）、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）、米国特許第５，６３９，６４１号、同第５，７２３，３２３号、同第５，９７６，８６２号、同第５，８２４，５１４号、同第５，８１７，４８３号、同第５，８１４，４７６号、同第５，７６３，１９２号、同第５，７２３，３２３号、同第５，７６６，８８６号、同第５，７１４，３５２号、同第６，２０４，０２３号、同第６，１８０，３７０号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，２２５，５３９号、同第４，８１６，５６７号、同第７，５５７，１８９号、同第７，５３８，１９５号、及び同第７，３４２，１１０号、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０号、同第ＰＣＴ／ＵＳ９６／１８９７８号、同第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０９６３０号、同第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５９３９号、同第ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１２３４号、同第ＰＣＴ／ＧＢ８９／０１３３４号、同第ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号、同第ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５号、国際出願公開第ＷＯ９０／１４４４３号、同第ＷＯ９０／１４４２４号、同第ＷＯ９０／１４４３０号、及び欧州特許公開第ＥＰ２２９２４６号に記載のものが挙げられるが、これらに限定されない。同様に、望ましい特徴を示す抗ＡＬＫ７抗体を容易に選択するために既知のアッセイが利用可能である（例えば、ＡＬＫ７への結合親和性を決定するためのアッセイ、本明細書に記載されるＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）を用いたヒトＡＬＫ７結合性タンパク質競合結合アッセイ等の交差阻止アッセイ）。
非ヒトもしくはヒト抗体を操作、ヒト化または表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）するための方法もまた使用することができ、当該技術分野で公知である。ヒト化、表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）または同様の操作が行われた抗体は、非ヒト、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類または他の哺乳類であるがこれらに限定されない供給源からの１つ以上のアミノ酸残基を有し得る。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「移入」残基と呼ばれることの多い、典型的には既知のヒト配列の「移入」可変、定常または他のドメインから取得される残基により置き換えられる。そのような移入された配列を、当該技術分野で公知のように、免疫原性を低下させるため、あるいは結合、親和性、会合速度、解離速度、結合力、特異性、半減期、もしくは他の任意の好適な特性を抑制、増強または修飾するために使用することができる。好ましくは、非ヒトまたはヒトのＣＤＲ配列の一部または全部が維持されるが、可変領域と定常領域の非ヒト配列は、ヒトのアミノ酸または他のアミノ酸と置き換えることができる。
完全長抗ＡＬＫ７抗体等のＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする核酸（複数可）はさらに、代替抗体作製のために、組換えＤＮＡ技術を使用するいくつかの異なる方法で修飾することができる。いくつかの実施形態では、例えば、マウスモノクローナル抗体の、軽鎖及び重鎖の定常ドメインをコードする核酸（複数可）は、（ａ）キメラ抗体を作製するために、例えばヒト抗体の、コード領域の代替となるか、または（ｂ）融合抗体を作製するために、非免疫グロブリンをコードする核酸（複数可）の代替となることができる。いくつかの実施形態では、定常領域が、モノクローナル抗体の所望の抗体断片を生成するために切断または除去される。モノクローナル抗体の特異性、親和性等最適化するために可変領域コード配列の部位特異的変異誘発または高密度変異誘発を使用することができる。
抗ＡＬＫ７ヒト抗体は、当該技術分野で公知の多数の技術のいずれを使用しても直接調製することができる。（例えば、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６－９５（１９９１）、及び米国特許第５，７５０，３７３号を参照のこと）。同様に、ヒト抗ＡＬＫ７抗体は、インビトロで免疫化された不死化ヒトＢリンパ球から容易に取得することができ、またＡＬＫ７に対して指向する抗体を産生する免疫個体から容易に分離することもできる。
ヒト抗ＡＬＫ７抗体はまた、例えば、Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：３０９－３１４（１９９６）、Ｓｈｅｅｔｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９５：６１５７－６１６２（１９９８）、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）、及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１（１９９１）に記載のように、ヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択することもできる。抗体ファージライブラリーを生成及びスクリーニングするための技術はまた、米国特許第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７号、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号、同第６，５９３，０８１号、同第６，３００，０６４号、同第６，６５３，０６８号、同第６，７０６，４８４号、及び同第７，２６４，９６３号、ならびにＲｏｔｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７６（４）：１１８２－１２００（２００８）にも記載されている（その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ヒト抗ＡＬＫ７抗体は、免疫化時に免疫グロブリンの内因的産生がなくてもヒト抗体産生能のあるヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有するトランスジェニックマウスで作製することもできる。この方法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、及び同第５，６６１，０１６号で記載されている。
ヒト抗ＡＬＫ７抗体はまた、例えば、それぞれの内容が参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ０１２／００９５６８、ＷＯ０９／０３６３７９、ＷＯ１０／１０５２５６、ＷＯ０３／０７４６７９及び米国出願公開第ＵＳ２００２／０１７７１７０号に開示されるように、酵母を用いた抗体提示ライブラリーから選択及び／または単離することもできる。そのようなライブラリーは、ヒトの免疫前レパートリーにより提供される多様性が反映されるようインシリコで設計される。
別法として、抗ＡＬＫ７抗体は、酵母により提示される抗体ライブラリーから選択され得、例えば、Ｂｌａｉｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ３４２（２）：２１１－２１８（２００４）、Ｂｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５（６）：５５３－５５７（１９９７）、Ｋｕｒｏｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．３３（１）：１－９（２０１１）．Ｒｅｖｉｅｗ、Ｌａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０１（１）：１０２－１５（２０１２）、Ｏｒｃｕｔｔ Ｋ．Ｄ．ａｎｄ Ｗｉｔｔｒｕｐ Ｋ．Ｄ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｙｅａｓｔ ｄｉｓｐｌａｙ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ（２０１０），２０７－２３３、Ｒａｋｅｓｔｒａｗ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２４（６）：５２５－３０（２０１１）、及び米国特許第６，４２３，５３８号、同第６，６９６，２５１号、及び同第６，６９９，６５８号を参照のこと。
抗原結合性抗体断片の生成のために様々な技術が知られている。従来より、これらの断片は、無傷抗体のタンパク消化を介して誘導される（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈ．２４：１０７－１１７（１９９３）、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１（１９８５）を参照のこと）。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性抗体断片は、組換えにより生成される。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖの抗体断片はすべて、Ｅ．ｃｏｌｉまたは他の宿主細胞で発現させ、またそれから分泌させることができるため、これらの断片を大量に生成することが可能である。そのようなＡＬＫ７結合性抗体断片はさらに、前述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性抗体断片は、米国特許第５，６４１，８７０号に記載のような線状抗体である。抗原結合性抗体断片の生成のための他の技術は当該技術分野で公知である。
ＡＬＫ７と結合する一本鎖抗体の生成には公知の技術を容易に適合させることができる（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと）。さらに、Ｆａｂ発現ライブラリーの構築に公知の方法を日常的に適合させて（例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５－１２８１（１９８９）を参照のこと）、ＡＬＫ７に対する所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ有効な同定を可能にすることができる。ＡＬＫ７結合性抗体断片は、当該技術分野で公知の技術により生成することができ、それらには、（ａ）抗体のペプシン消化により生成されるＦ（ａｂ’）２断片、（ｂ）Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元させることにより生成されるＦａｂ断片、（ｃ）パパイン及び還元剤を用いた抗ＡＬＫ７抗体の処理により生成されるＦａｂ断片、及び（ｄ）Ｆｖ断片が含まれるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）は、その血清中半減期を増大させるために修飾することができる。これは、例えば、ＡＬＫ７結合性タンパク質の適切な領域の変異による、ＡＬＫ７結合性タンパク質へのサルベージ受容体結合エピトープの組み込みによるか、またはペプチドタグにサルベージ受容体エピトープを組み込み、次いで、それをＡＬＫ７結合性タンパク質のいずれかの末端もしくは中央に（例えば、ＤＮＡまたはペプチドの合成によって）融合させることにより達成することができる。ＡＬＫ７結合性タンパク質の血清中半減期を延長するための他の方法、例えば、ＰＥＧ等の異種分子への結合は、当該技術分野で公知である。
ヘテロ複合体ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、完全長抗ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体、ならびにそのバリアント及び誘導体）もまた、開示の範囲内である。ヘテロ複合体ＡＬＫ７結合性タンパク質は、共有結合で連結された２つのタンパク質で構成される。ヘテロ複合体ＡＬＫ７結合性タンパク質は、架橋剤を伴う方法を含め、合成タンパク質化学の公知の方法を使用してインビトロで調製できることが意図される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用しても、またはチオエーテル結合の形成によっても構築することができる。この目的のための好適な試薬の例としては、イミノチオラート及びメチル－４－メルカプトブチルイミダートが挙げられる。
ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７との抗体の会合を提供する任意の種類の可変領域を含むことができる。そのような可変領域は、ＡＬＫ７抗原に対する液性応答を開始して免疫グロブリンを生成するよう誘導することができる任意の哺乳類に含まれ得るかまたはそれに由来し得る。抗ＡＬＫ７抗体の可変領域は、例えば、ヒト、マウス、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル、マカクザル等）またはオオカミに由来するものであり得る。いくつかの実施形態では、修飾抗ＡＬＫ７抗体の可変領域と定常領域の両方がヒトのものである。他の実施形態では、適合性のある抗体の可変領域（通常は非ヒト供給源に由来する）は、結合特性が改善するよう、または分子の免疫原性が低下するよう、操作もしくは特異的に調整することができる。これに関し、開示による有用な可変領域は、親和性成熟、変異誘発手順、鎖シャッフリングの各戦略及び／または本明細書に記載されるかもしくは当該技術分野で知られる他の方法を使用して移入アミノ酸配列を含めることにより、ヒト化するか、そうでなければ変化させることができる。
ある特定の実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体の重鎖と軽鎖の両方の可変ドメインが、１つ以上のＣＤＲの少なくとも部分的な置き換えによって、及び／または部分的なフレームワーク領域の置き換えと配列変化によって改変される。ＣＤＲは、フレームワーク領域が由来する抗体と同じクラスの抗体、さらにはサブクラスの抗体に由来し得るが、ＣＤＲが、異なるクラスの抗体に由来すること、またはある特定の実施形態では異なる種に由来することが予測される。ある可変ドメインの抗原結合能を別の可変ドメインに移すために、ＣＤＲのすべてをドナー可変領域からの完全ＣＤＲで置き換える必要はない。むしろ、抗原結合部位の活性を維持するために必要な残基を移すだけでよい。免疫原性の低い機能性抗体を日常的に得ることは、十分に当業者の能力の範囲内である。例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号及び同第５，６９３，７６２号を参照のこと。
可変領域に対する改変にもかかわらず、開示の修飾抗ＡＬＫ７抗体が、天然または未変化の定常領域を含む免疫原性がほぼ同じ抗体と比較した場合に、ＡＤＣＣ低下または血清中半減期延長等の所望の生化学的特性が得られるように定常領域ドメインのうち１つ以上の少なくともごく一部を欠失させてあるか、そうでなければ変化させてある抗体を含むことを当業者は理解するであろう。いくつかの実施形態では、修飾抗ＡＬＫ７抗体の定常領域は、ヒト定常領域を含む。定常領域に対する修飾には、１つ以上のドメインにおける１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換が含まれ得る。本明細書に開示される修飾抗ＡＬＫ７抗体は、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）のうち１つ以上に対する改変もしくは修飾、及び／または軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）に対する改変もしくは修飾を含むことができる。いくつかの実施形態では、修飾抗ＡＬＫ７抗体は、１つ以上のドメインが部分的または完全に欠失している定常領域を含むことが企図される。いくつかの実施形態では、修飾抗ＡＬＫ７抗体は、ＣＨ２ドメイン全体が除去されている、ドメインが欠失したコンストラクトまたはバリアントを含む（ΔＣＨ２コンストラクト）。いくつかの実施形態では、取り除かれた定常領域ドメインは、典型的には欠けた定常領域により付与されるいくらかの分子柔軟性を提供する、短いアミノ酸スペーサー（例えば、１０残基）に置き換えることができる。
定常領域がいくつかのエフェクター機能を仲介することが一般に理解される。例えば、補体のＣ１成分の抗体への結合により補体系が活性化される。補体の活性化は、オプソニン作用及び細胞病原体の溶解に重要である。補体の活性化はまた、炎症反応を刺激し、自己免疫性過敏症にも関与し得る。さらに、抗体は、Ｆｃ領域を介して細胞に結合し、抗体Ｆｃ領域上のＦｃ受容体部位が細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合する。各種クラスの抗体に特異的なＦｃ受容体がいくつかあり、ＩｇＧ（ガンマ受容体）、ＩｇＥ（エータ受容体）、ＩｇＡ（アルファ受容体）及びＩｇＭ（ミュー受容体）が含まれる。細胞表面のＦｃ受容体への抗体の結合により、抗体に覆われた粒子の貪食及び破壊、免疫複合体除去、キラー細胞による、抗体に覆われた標的細胞の溶解（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、またはＡＤＣＣと呼ばれる）、炎症メディエーターの放出、胎盤移行、ならびに免疫グロブリン産生制御が含まれる、いくつかの重要かつ多様な生体応答が誘発される。
ある特定の実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、エフェクター機能が改変されており、それが、投与される抗ＡＬＫ７抗体の生物学的プロファイルに影響を及ぼす。例えば、定常領域ドメインの欠失または不活化（点変異または他の手段による）により、循環血中修飾抗体のＦｃ受容体結合が減少し得る。他の場合には、定常領域修飾により補体結合が抑えられ、そのため、結合細胞毒素の血清中半減期及び非特異的会合が低減され得る。ジスルフィド結合またはオリゴ糖部分を排除するよう定常領域のさらに他の修飾を使用することができ、抗原特異性または抗体柔軟性の増大による局在化の向上を可能にすることができる。同様に、本開示に従った定常領域に対する修飾は、当業者に公知の生化学的または分子的工業技術を使用して容易に行うことができる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、１つ以上のエフェクター機能を有していないＡＬＫ７抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有しない、及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有しない。ある特定の実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体はＦｃ受容体及び／または補体因子に結合しない。ある特定の実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、エフェクター機能を有しない。ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性ならびにＦｃ受容体及び／または補体因子の結合を低減するかもしくは排除するＦｃ配列操作修飾の例は、本明細書に記載されるか、そうでなければ当該技術分野で公知であり、それらを試験するためのアッセイ及び手順も同様である。
いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、ＣＨ３ドメインをそれぞれの修飾抗体のヒンジ領域に直接融合させるよう操作される。他のコンストラクトでは、ヒンジ領域と、修飾されたＣＨ２及び／またはＣＨ３のドメインとの間にペプチドスペーサーが挿入される。例えば、ＣＨ２ドメインを欠失させてあり、残りのＣＨ３ドメイン（修飾または未修飾）が５～２０アミノ酸スペーサーでヒンジ領域に連結されている適合性のあるコンストラクトを発現させることができる。そのようなスペーサーを付加して、例えば、定常ドメインの調節エレメントが自由かつ接近可能な状態にあること、またはヒンジ領域が柔軟な状態にあることを保証することができる。アミノ酸スペーサーは場合によっては免疫原性であることが示され、コンストラクトに対する望ましくない免疫応答を誘発し得る。したがって、ある特定の実施形態では、コンストラクトに付加されるいかなるスペーサーも、修飾抗ＡＬＫ７抗体の所望の生化学的品質を維持するために比較的非免疫原性であり得るか、または完全に取り除くこともできる。
追加の実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体は、定常領域の少数、さらには単一のアミノ酸の部分的な欠失もしくは置換により修飾される。例えば、ＣＨ２ドメインの選択領域での単一アミノ酸の変異はＦｃ結合を実質的に減少させ、それにより十分であり得る。同様に、エフェクター機能（例えば、補体Ｃ１Ｑ結合）を制御する１つ以上の定常領域ドメインを、完全または部分的に欠失させることができる。定常領域のそのような部分的欠失により、抗ＡＬＫ７抗体の選択された特性（例えば、血清中半減期）を改善しつつ、対応する定常領域ドメインと関連する他の望ましい機能はそのまま残すことができる。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ７抗体の定常領域は、得られるコンストラクトのプロファイルを増強させる、１つ以上のアミノ酸の変異または置換を介して修飾される。これに関し、修飾抗ＡＬＫ７抗体の立体配置と免疫原性プロファイルを実質的に維持しつつ、保存された結合部位（例えば、Ｆｃ結合）により提供される活性を破壊することが可能である。本開示はまた、エフェクター機能を増減させること、または１つ以上の細胞毒素、標識もしくは炭水化物部分のための結合部位を提供すること等の望ましい特徴を増強させるために定常領域に対する１つ以上のアミノ酸の付加を含有する抗ＡＬＫ７抗体も提供する。そのような実施形態では、選択された定常領域ドメインに由来する特定の配列を挿入または複製することが望ましい場合がある。
本開示はまた、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質に対するバリアントであるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、マウス、キメラ、ヒト化及びヒトのＡＬＫ７結合性タンパク質）も提供する。特定の実施形態では、バリアントＡＬＫ７結合性タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドの存在下で、ＡＬＫ７及びＡｃｔＲＩＩ受容体を発現している細胞表面上での、ＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）を含有する複合体の形成を減少させる、（ｂ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＩＩ型受容体と競合する、（ｃ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）と競合する、（ｄ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＡＬＫ７のリン酸化を減少させる、（ｅ）１つ以上のＴＧＦ－ベータリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる、（ｆ）ＡＬＫ７に、１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により決定した場合）で結合する、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏ及び／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含有する複合体の形成を減少させる、という特性から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を使用した脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
抗ＡＬＫ７抗体等の提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７結合性タンパク質の、例えば、溶解度、生物学的半減期、生物学的利用能を改善するための当該技術分野で公知の追加の化学部分を含有するよう、また他の方法でその安定性、製剤及び／または治療上の特性を改善するよう、誘導体化することができる。そのような部分についての非網羅的概要は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（２０００）に見出すことができる。
ＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする核酸及びそれらの発現
ＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする核酸分子及び核酸分子の組み合わせもまた提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、完全長抗ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体コードする。さらなる実施形態では、本開示は、本明細書で提供される完全長抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片のバリアントもしくは誘導体をコードする核酸分子を提供する。
本明細書に開示される核酸分子は、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが含まれ、これらは二本鎖でも一本鎖でもあり得、一本鎖の場合は、コード鎖でも非コード（アンチセンス）鎖でもあり得る。ある特定の実施形態では、核酸分子は単離されている。追加の実施形態では、核酸分子は、実質的に純粋である。いくつかの実施形態では、核酸は、ｃＤＮＡであるかまたはｃＤＮＡに由来する。いくつかの実施形態では、核酸は、組換えにより生成される。
いくつかの実施形態では、核酸分子は、宿主細胞またはインビトロにおいてコード配列の発現を制御する制御配列に機能的に連結されたＡＬＫ７結合性タンパク質コード配列を含む。特定の実施形態では、コード配列はｃＤＮＡである。開示はまた、宿主細胞またはインビトロにおいてコード配列の発現を制御する制御配列に機能的に連結されたＡＬＫ７結合性タンパク質コード配列を含む核酸分子を含有するベクターに関する。
いくつかの実施形態では、核酸分子は、同じリーディングフレーム内で異種ポリヌクレオチド配列に融合されている成熟ＡＬＫ７結合性タンパク質のためのコード配列を含む。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチド配列は、ＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする核酸分子（複数可）で形質転換された宿主細胞からの発現タンパク質の分泌を促進するリーダーペプチド配列をコードする。リーダー配列を含有するタンパク質は前駆体タンパク質と呼ばれ、リーダー配列を宿主細胞により切断させて成熟形態のＡＬＫ７結合性タンパク質を形成することができる。そのようなリーダーペプチド配列及び宿主細胞での組換えタンパク質の分泌を促進するそれらの使用は一般に当該技術分野で公知である。追加の実施形態では、異種ポリヌクレオチド配列は、例えば、組換え発現されたＡＬＫ７結合性タンパク質の精製を容易にし、タンパク質の安定性及び／または治療もしくは診断の特性を追加もしくは改善するよう、機能することができる追加の５’アミノ酸残基をコードする。
いくつかの実施形態では、本開示は、ハイブリダイゼーションプローブ、ＰＣＲプライマーまたはシーケンシングプライマーとしての使用に十分である、ＡＬＫ７結合性タンパク質をコードするｃＤＮＡ断片等の単離された核酸を提供する。
いくつかの実施形態では、バリアントＡＬＫ７結合性タンパク質は、（ａ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドの存在下で、ＡＬＫ７及びＡｃｔＲＩＩ受容体を発現している細胞表面上での、ＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）を含有する複合体の形成を減少させる、（ｂ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＩＩ型受容体と競合する、（ｃ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）と競合する、（ｄ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＡＬＫ７のリン酸化を減少させる、（ｅ）１つ以上のＴＧＦ－ベータリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる、（ｆ）ＡＬＫ７に、１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により決定した場合）で結合する、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏ及び／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含有する複合体の形成を減少させる、という特性から選択される少なくとも１つの特性を有する。いくつかの実施形態では、コードされたＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、コードされたＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７を発現する脂肪細胞での脂肪分解を増大させる。いくつかの実施形態では、コードされたＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、コードされたＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。いくつかの実施形態では、コードされたＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるＡＬＫ７結合性のＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。追加の実施形態では、コードされたＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、コードされたＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるＶＨとＶＬの対を有するＡＬＫ７結合抗体と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する。追加の実施形態では、コードされたＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。さらなる実施形態では、核酸分子は、ＡＬＫ７と特異的に結合し、かつＶＨとＶＬを含む、ＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする核酸及び核酸のセットを含有する、ベクター及びベクターのセットを提供する。これらの核酸、核酸のセット、ベクター、及びベクターのセットで形質転換された宿主細胞もまた提供され、ＡＬＫ７結合性タンパク質を作製及び使用する方法も提供される。
いくつかの実施形態では、本開示は、上記で提供されるような核酸分子もしくは核酸分子の組み合わせまたはベクターを含む宿主細胞を提供し、その場合、宿主細胞は、場合によっては、ＡＬＫ７に特異的に結合するＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体）を発現することができる。さらなる実施形態では、本開示は、上記で提供されるような核酸分子もしくは核酸分子の組み合わせまたはベクターで形質転換された宿主細胞を提供し、その場合、宿主細胞は、場合によっては、ＡＬＫ７に特異的に結合するＡＬＫ７結合性タンパク質を発現することができる。そのような宿主細胞は、本明細書で提供されるようなＡＬＫ７結合性タンパク質を作製する方法で利用することができ、その場合、方法には、（ａ）宿主細胞を培養すること、及び（ｂ）宿主細胞からされたＡＬＫ７結合性タンパク質を単離することが含まれる。
本開示はまた、好適な条件下でＡＬＫ７結合性タンパク質を発現する能力がある宿主細胞（例えば、ハイブリドーマまたは形質転換された哺乳類宿主細胞）を培養することを含む、ＡＬＫ７結合性タンパク質を作製する方法も提供し、任意選択で、宿主細胞から分泌されたＡＬＫ７結合性タンパク質を単離するための方法を提供する。また、本開示はさらに、開示の方法を使用して単離されたＡＬＫ７結合性タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、同じリーディングフレーム内で、例えば、コードされたポリペプチドの精製を可能にするマーカー配列に融合されている成熟ＡＬＫ７結合性タンパク質（複数可）（例えば、完全長抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７抗体）のためのコード配列（複数可）を含む。例えば、マーカー配列は、細菌宿主の場合は、マーカーに融合させた成熟ポリペプチドの精製を提供するためのｐＱＥ－９ベクターにより供給されるヘキサ－ヒスチジンタグ（配列番号１０３）であり得、また哺乳類宿主（例えば、ＣＯＳ－７細胞）が使用される場合には、マーカー配列は、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するヘマグルチニン（ＨＡ）タグであり得る。
抗ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする核酸バリアントもまた提供される。核酸バリアントは、コード領域、非コード領域、またはその両方においての改変を含有することができる。いくつかの実施形態では、核酸バリアントは、サイレントな置換、付加、または欠失を生じさせるがコードされたポリペプチドの特性もしくは活性は変化させない改変を含有する。いくつかの実施形態では、核酸バリアントは、遺伝暗号の縮重によるサイレント置換により生成される。核酸バリアントは、例えば、特定の宿主についてコドン発現を最適化する（ヒトｍＲＮＡのコドンをＥ．ｃｏｌｉ等の細菌宿主に好ましいコドンに変更する）ため等、様々な理由で生成され得る。本明細書に記載される核酸を含むベクター及び細胞もまた提供される。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、完全長抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体）をコードする核酸配列は、オリゴヌクレオチドシンセサイザーを使用する化学合成により構築される。そのようなオリゴヌクレオチドは、所望のポリペプチドのアミノ酸配列及び宿主細胞の選択性に基づいたコドン最適化に基づいて設計することができる。ＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチド配列を合成するために、標準的方法を日常的に適用することができる。
（合成、部位特異的変異誘発または別の方法により）構築された時点で、ＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする核酸配列は、日常的に、所望宿主でのＡＬＫ７結合性タンパク質の発現に適切な制御配列に機能的に連結させることができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする核酸配列（複数可）は、１つ以上の発現ベクターに挿入され、所望宿主でのタンパク質の発現に適切な制御配列（複数可）に機能的に連結される。トランスフェクトされたコード配列の高発現量を宿主において得るために、コード配列は、選択した発現宿主で機能的な転写及び翻訳の発現制御配列と機能的に連結させるかまたは会合させることができる。
ある特定の実施形態では、組換え発現ベクターが、抗ＡＬＫ７抗体またはＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７結合性タンパク質をコードするＤＮＡを増幅及び発現させるために使用される。組換え発現ベクターは、哺乳類、微生物、ウイルスまたは昆虫の遺伝子に由来する好適な転写もしくは翻訳の調節エレメントに機能的に連結されたＡＬＫ７結合性タンパク質のポリペプチド鎖をコードする、合成またはｃＤＮＡ由来のＤＮＡ断片を有する複製可能なＤＮＡコンストラクトである。転写ユニットは一般に、以下で詳述されるように、（１）遺伝子発現において調節的役割を担う遺伝要素（複数可）、例えば、転写のプロモーターまたはエンハンサーと、（２）ｍＲＮＡに転写されタンパク質に翻訳される、構造配列またはコード配列と、（３）適切な転写及び翻訳の、開始配列及び終結配列との構築体を含む。そのような調節エレメントには、転写を制御するオペレーター配列が含まれ得る。通常は複製起点により付与される宿主での複製能、及び形質転換体の認識を容易にする選択遺伝子をさらに組み込むことができる。ＤＮＡ領域は、それらが互いに機能的に関連している場合、機能的に連結されている。例えば、シグナルペプチド（分泌リーダー）のＤＮＡは、あるポリペプチドの分泌に関与する前駆体として発現されている場合、そのポリペプチドのＤＮＡに機能的に連結されており、プロモーターは、それがコード配列の転写を制御している場合、その配列に機能的に連結されており、またはリボソーム結合部位は、それが翻訳を可能にするような位置にある場合、コード配列に機能的に連結されている。酵母発現系での使用が意図される構造要素には、翻訳されたタンパク質の宿主細胞による細胞外分泌を可能にするリーダー配列が含まれる。別法として、組換えタンパク質が、リーダー配列または輸送配列を含まずに発現される場合、タンパク質には、Ｎ末端メチオニン残基が含まれ得る。この残基は、任意選択で、最終タンパク質が提供されるようにその後、発現した組換えタンパク質から切断され得る。ある特定の実施形態では、本開示は、上記または本明細書の他の箇所に記載されるような核酸またはベクターを含み、任意選択で１つ以上の、担体、希釈剤、添加剤、または他の添加物をさらに含む、組成物、例えば、医薬組成物を提供する。
また、本明細書に開示される核酸分子もしくはｃＤＮＡ分子及び／またはベクターで形質転換された宿主細胞も提供される。本開示はまた、開示の核酸分子かまたは制御配列に機能的に連結され、任意選択でベクターに挿入された分子で形質転換された宿主細胞も提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳類宿主細胞である。さらなる実施形態では、哺乳類宿主細胞は、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。他の実施形態では、宿主細胞は、ハイブリドーマである。
追加の実施形態では、本開示は、ＡＬＫ７結合性タンパク質を産生するための好適な条件下で、本明細書に開示される形質転換された宿主細胞またはハイブリドーマを培養することを含む、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体、ならびにそのバリアント及び誘導体）を作製するための方法を提供する。本開示は、任意選択で、宿主細胞から分泌されたＡＬＫ７結合性タンパク質を単離することを提供する。開示はまた、任意選択で、この方法を使用して生成されたＡＬＫ７結合性タンパク質、ならびにＡＬＫ７結合性タンパク質と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
発現制御配列及び発現ベクターの選択は、宿主の選択に応じて異なる。多種多様な発現宿主／ベクターの組み合わせを利用することができる。真核生物宿主に有用な発現ベクターには、例えば、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、アデノウイルス、及びサイトメガロウイルスからの発現制御配列を含むベクターが含まれる。細菌宿主に有用な発現ベクターには、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９及びそれらの誘導体が含まれるＥ．ｃｏｌｉ由来プラスミドのような既知の細菌プラスミド、またＭ１３及び他の繊維状１本鎖ＤＮＡファージ等の広宿主域プラスミドが含まれる。
ＡＬＫ７結合性タンパク質の発現に好適な宿主細胞としては、適切なプロモーター制御下の原核生物、酵母、昆虫または高等真核生物の細胞が挙げられる。原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性の生物、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたは桿菌が含まれる。高等真核細胞には、以下に記載の哺乳類由来の樹立細胞株が含まれる。無細胞翻訳系もまた使用でき得る。抗体産生を含め、タンパク質産生の方法に関する追加情報は、例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国出願公開第２００８／０１８７９５４号、米国特許第６，４１３，７４６号及び同第６，６６０，５０１号、ならびに国際出願公開第ＷＯ０４／００９８２３号に見出すことができる。
様々な哺乳類細胞または昆虫細胞の培養系もまた、組換え型ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体、ならびにそのバリアント及び誘導体）を発現させるために有利に使用することができる。哺乳類細胞での組換えＡＬＫ７結合性タンパク質の発現は、そのようなタンパク質が一般に正確に折り畳まれ、適切に修飾され、また完全に機能的であることから、実施可能である。好適な哺乳類宿主細胞株の例としては、ＨＥＫ－２９３及びＨＥＫ－２９３Ｔ、Ｇｌｕｚｍａｎ（Ｃｅｌｌ ２３：１７５ （１９８１））で記載されているサル腎細胞のＣＯＳ－７株、ならびに、例えば、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ及びＢＨＫ細胞株等の他の細胞株が挙げられる。哺乳類発現ベクターは、非転写要素、例えば、複製起点、発現対象遺伝子に連結された適切なプロモーターとエンハンサー、及び５’または３’に隣接する他の非転写配列等、ならびに５’または３’の非翻訳配列、例えば、必要な、リボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナー部位とスプライスアクセプター部位、及び転写終結配列等を含むことができる。細胞での異種タンパク質の産生のためのバキュロウイルス系は、Ｌｕｃｋｏｗ ａｎｄ Ｓｕｍｍｅｒｓ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：４７（１９８８）で概説されている。
形質転換された宿主細胞またはハイブリドーマにより産生されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、任意の好適な方法に従って精製することができる。そのような標準的方法としては、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、及びサイズ調整カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、分別溶解法、または他の任意の標準的タンパク質精製技術が挙げられる。適切なアフィニティーカラムを通過させることで容易に精製できるよう、ヘキサヒスチジン（配列番号１０３）、マルトース結合ドメイン、インフルエンザコート配列、及びグルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ等のアフィニティータグをタンパク質に結合させることができる。ＡＬＫ７結合性タンパク質は、タンパク質分解、核磁気共鳴及びＸ線結晶解析のような技術を使用して物理的に特徴付けることもできる。
例えば、組換えＡＬＫ７結合性タンパク質を培地中に分泌する系からの上清は市販されているタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外ろ過ユニットを使用して最初に濃縮することができる。濃縮ステップに続き、濃縮物を適切な精製マトリックスに適用することができる。別法として、陰イオン交換樹脂、例えば、ペンダントのジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基を有するマトリックスまたは基質を使用することができる。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、またはタンパク質精製に一般的に用いられる他の種類のマトリックスであり得る。別法として、陽イオン交換ステップを使用することができる。好適な陽イオン交換体には、スルホプロピル基またはカルボキシメチル基を含む様々な不溶性マトリックスが含まれる。最後に、疎水性ＲＰ－ＨＰＬＣ媒体、例えば、ペンダントのメチル基または他の脂肪族基を有するシリカゲルを使用する１つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）ステップを使用して、ＡＬＫ７結合性タンパク質をさらに精製することができる。上述の精製ステップの一部または全部は、様々な組み合わせで、均一な組換えＡＬＫ７結合性タンパク質を得るために日常的に使用することもできる。
細菌培養で産生された組換えＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体ならびにそのバリアント及び誘導体）は、例えば、細胞ペレットからの最初の抽出、その後の１つ以上の、濃縮、塩析、水性イオン交換またはサイズ排除クロマトグラフィーのステップにより単離することができる。最終精製ステップでは高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用することができる。組換えタンパク質の発現で使用された微生物細胞は、凍結融解サイクリング、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を含め、任意の好都合な方法で破壊することができる。
完全長抗体及び抗原結合性抗体断片等の標的結合性タンパク質を精製するための当該技術分野で公知の方法には、例えば、米国出願公開第２００８／０３１２４２５号、同第２００８／０１７７０４８号、及び同第２００９／０１８７００５号に記載のものも含まれ、その各々は、本明細書で参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は抗体ではない。タンパク質標的に高親和性で結合する非抗体ポリペプチドを同定及び生成するための様々な方法が知られている。例えば、その各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：２９５－３０４（２００７）、Ｈｏｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ １５：１４－２７（２００６）、Ｇｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：６５３－６５８（２００６）、Ｎｙｇｒｅｎ，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６６８－２６７６（２００８）、及びＳｋｅｒｒａ，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６７７－２６８３（２００８）を参照のこと。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質を同定／生成するためにファージディスプレイ技術が使用される。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、プロテインＡ、リポカリン、フィブロネクチンドメイン（例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３））、コンセンサスアンキリン反復ドメイン、及びチオレドキシンから選択される種類のタンパク質足場を含む。
使用方法及び医薬組成物
提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質（抗体、免疫複合体、及びポリペプチドを含む）は、様々な用途において有用であり、それらには、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体）を用いた様々な疾患及び状態の診断方法ならびにそれらを治療及び／または改善する方法が含まれるが、これらに限定されない。ＡＬＫ７シグナル伝達、ＡＬＫ７発現変化と関連する疾患もしくは状態、及び／またはＡＬＫ７シグナル伝達低下により改善され得る疾患もしくは状態を有する対象を治療するための、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合する完全長抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体、ならびにそのバリアント及び誘導体）の使用のための方法が提供される。追加の実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質と薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、医薬品として使用するための、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質と薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物を提供する。本開示はまた、ＡＬＫ７シグナル伝達、ＡＬＫ７発現変化と関連する疾患もしくは状態、及び／またはＡＬＫ７シグナル伝達の低下により改善され得る疾患もしくは状態を、治療及び／または改善するための本明細書に開示される医薬組成物の使用も提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物を使用して治療される疾患または状態は、肥満（例えば、腹部肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリックシンドローム及び他の代謝性の疾患もしくは状態；ＨＤＬ低値、ＬＤＬ高値、高脂血症、高トリグリセリド血症もしくは脂質異常症等の脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド低下；炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）、脂肪性肝疾患；非アルコール性脂肪性肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、ＬＤＬ高値及び高コレステロール血症）；冠動脈心疾患を含む心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化等の心血管疾患；動脈硬化、及び高血圧；シンドロームＸ；血管再狭窄；ニューロパチー；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸機能障害、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚上の暗色斑）；または骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、及び髄外骨髄腫）、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、及び結腸癌）等のがん；あるいは上記の疾患または状態のうち１つ以上と関連する別の障害／状態である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物を使用して治療される疾患または状態は、過体重（例えば、ＢＭＩ≧２５ｋｇ／ｍ２）と関連するかまたは体脂肪過多と関連する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体）及び薬学的に許容される担体を含有し、ＡＬＫ７結合性タンパク質はさらに、標識基またはエフェクター基を含む。「標識」とは、スクリーニングで検出を可能にするためによう結合された１つ以上の元素、同位体、または化学物質を指す。標識は一般に、３つのクラス、すなわち、（ａ）放射性または重同位体であり得る同位体標識、（ｂ）蛍光色素及び比色色素、または他の標識方法を可能にするビオチン等の分子が含まれ得る小分子標識、及び（ｃ）抗体により認識される融合パートナーとして組み込まれるエピトープであり得る免疫標識に分類され、「標識基（labeling group）」とは、任意の検出可能な標識を指す。いくつかの実施形態では、標識基は、潜在的な立体障害が低減されるようスペーサー（例えば、ペプチドスペーサー）を介してＡＬＫ７結合性タンパク質に結合される。標識は、どの位置でも化合物に組み込まれ得、また、タンパク質発現中にインビトロまたはインビボのいずれでも組み込まれ得る。タンパク質を標識するための様々な方法が当該技術分野で公知であり、提供される方法を実施する際に使用され得る。追加の実施形態では、標識基は、同位体標識、磁気標識、酸化還元活性部分、光学色素、ビオチン化基及び二次レポーターにより認識されるポリペプチドエピトープから選択される。いくつかの実施形態では、標識基は、緑色蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、高感度ＧＦＰ、青色蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、ＥＢＦＰ（高感度青色蛍光タンパク質）、ＥＢＦＰ２、Ａｚｕｒｉｔｅ、ｍＫａｌａｍａ１、シアン蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、ＥＣＦＰ（高感度シアン蛍光タンパク質）、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ＣｙＰｅｔ）、黄色蛍光タンパク質またはその誘導体（例えば、ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＹＰｅｔ）等の蛍光タンパク質である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドエピトープは、ビオチンシグナル伝達ペプチド、ヒスチジンペプチド（ｈｉｓ）、ヘマグルチニン（ＨＡ）、Ｆｌａｇ、金結合ペプチドから選択されるメンバーである。追加の実施形態では、エフェクター基（effector group）は、放射性同位体、放射性ヌクレオチド、毒素、治療剤及び化学療法剤から選択される。
本開示のＡＬＫ７結合性タンパク質は、インビトロ及びインビボでの診断上及び治療上の有用性において応用される。例えば、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、様々な疾患もしくは状態を、治療、予防または診断するために、例えば、インビトロもしくはインビボで培養中の細胞、または対象の細胞に投与することができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ヒト抗体、マウス抗体、またはヒト化抗体である。
ＡＬＫ７活性を阻止する方法も提供される。いくつかの実施形態では、方法は、ＡＬＫ７を、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質と接触させることを含む。さらなる実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体である。いくつかの例では、方法はインビボで実施される。他の場合には、方法はインビトロで実施される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７活性阻止は、（ａ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドの存在下で、ＡＬＫ７及びＡｃｔＲＩＩ受容体を発現している細胞の表面での、ＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）を含有する複合体の形成を減少させること、（ｂ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＩＩ型受容体と競合すること、（ｃ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）と競合すること、（ｄ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＡＬＫ７のリン酸化を減少させること、（ｅ）１つ以上のＴＧＦ－ベータリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させること、（ｆ）ＡＬＫ７に、１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により決定した場合）で結合すること、ならびに（ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏ及び／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含有する複合体の形成を減少させること、から選択される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト（例えば、抗ＡＬＫ７中和抗体）である。さらなる実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞）を使用した脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち２つ、３つ、または４つを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、上記の特性のうち少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つを有する。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＡＬＫ７シグナル伝達、ＡＬＫ７発現変化と関連する疾患もしくは状態、及び／またはＡＬＫ７シグナル伝達の低下により改善され得る疾患もしくは状態を、有するかまたは発症するリスクがある対象に対し、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体）を投与することを含む、疾患または状態の治療、予防及び／または改善を提供する。他の実施形態では、治療には、対象からの分離された組織または細胞へのＡＬＫ７結合性タンパク質の投与が含まれ、その場合、対象は、ＡＬＫ７発現またはＡＬＫ７シグナル伝達と関連する、疾患もしくは状態を有するか、または疾患もしくは状態を発症するリスクがある。
本開示は、ＡＬＫ７結合性タンパク質と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。対象におけるＡＬＫ７媒介性の活性と関連する状態を治療及び／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に対し、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質を含む医薬組成物を有効量にて投与することを含む方法もまた提供される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、単独で投与される。他の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、併用療法として投与される。対象でのＡＬＫ７活性を低下させる方法であって、それを必要とする対象に有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質を投与することを含む方法も提供される。
本明細書で提供される場合、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）は、体重を減少させる（例えば、体重減少を促進する）、体重増加を減少させる（例えば、体重増加を予防する）、及び／または肥満を治療するために投与することができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与される抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対してい競合する。いくつかの実施形態では、投与される抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。ある特定の場合には、対象は、２型糖尿病を有する。
特定の実施形態では、本開示は、体重を減少させることを望むかまたはそれを必要とする対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む、体重を減少させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、過体重（例えば、前肥満）である。いくつかの実施形態では、対象は、体格指数（ＢＭＩ）が２５ｋｇ／ｍ２以上である。さらなる実施形態では、対象は、ＢＭＩが２５ｋｇ／ｍ２～２９．９ｋｇ／ｍ２、３０ｋｇ／ｍ２～３９．９ｍｋｇ／ｍ２、２５ｋｇ／ｍ２～３９．９ｋｇ／ｍ２、または２５ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０～３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２）である。いくつかの実施形態では、対象は、病的肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが４０ｋｇ／ｍ２以上である。さらなる実施形態では、対象は、ＢＭＩが４０ｋｇ／ｍ２～４５ｋｇ／ｍ２、または４０ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、中心性肥満（例えば、腹部脂肪及び／または内臓脂肪等、腹部の過剰な脂肪蓄積）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ウエスト／ヒップ周径囲比（ＷＨＲ）が０．８５以上である。いくつかの実施形態では、対象は、末梢性肥満（例えば、ヒップの過剰な脂肪蓄積）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。ＡＬＫ７結合性タンパク質は、単独、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食事及び／または運動に対する補助である。
ある特定の実施形態では、本開示は、体重増加の減少を望むかまたはそれを必要とする対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む、体重増加を減少させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、過体重（例えば、前肥満）である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが２５ｋｇ／ｍ２以上である。さらなる実施形態では、対象は、ＢＭＩが２５ｋｇ／ｍ２～２９．９ｋｇ／ｍ２、３０ｋｇ／ｍ２～３９．９ｍｋｇ／ｍ２、２５ｋｇ／ｍ２～３９．９ｋｇ／ｍ２、または２５ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０～３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２）である。いくつかの実施形態では、対象は、病的肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが４０ｋｇ／ｍ２以上である。さらなる実施形態では、対象は、ＢＭＩが４０ｋｇ／ｍ２～４５ｋｇ／ｍ２、または４０ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。
また、過体重と関連する疾患または状態を治療または予防する方法であって、治療または予防を必要とする対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む方法も提供される。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、肥満である。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、インスリン抵抗性である。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、脂質異常症、高脂血症（総コレステロール値が２４０ｍｇ／ｄＬ超）、高コレステロール血症（例えば、総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬ超、２２０ｍｇ／ｄＬ超、２４０ｍｇ／ｄＬ超、２５０ｍｇ／ｄＬ超、または２７５ｍｇ／ｄＬ超）、血清ＨＤＬ低値（例えば、４０ｍｇ／ｄＬ未満、４５ｍｇ／ｄＬ未満、または＜５０ｍｇ／ｄＬ未満）、血清ＬＤＬ高値（例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、または１９０ｍｇ／ｄＬ以上）、及び高トリグリセリド血症（例えば、空腹時ＴＧ値が１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１７５ｍｇ／ｄＬ以上、２００ｍｇ／ｄＬ以上、３００ｍｇ／ｄＬ以上、４００ｍｇ／ｄＬ以上、または４９９ｍｇ／ｄＬ以上）から選択されるメンバーである。ある特定の場合には、投与は、食事及び／または運動に対する補助である。
他の実施形態では、本開示は、過体重である対象において体重を減少させる方法を提供する。方法には、過体重の対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することが含まれる。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、体格指数（ＢＭＩ）が２５ｋｇ／ｍ２以上である。さらなる実施形態では、対象は、ＢＭＩが２５ｋｇ／ｍ２～２９．９ｋｇ／ｍ２、３０ｋｇ／ｍ２～３９．９ｍｋｇ／ｍ２、２５ｋｇ／ｍ２～３９．９ｋｇ／ｍ２、または２５ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２、または２７～４０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０～３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２）である。ＡＬＫ７結合性タンパク質は、単独、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食事及び／または運動に対する補助である。
ある特定の実施形態では、本開示は、肥満の対象において体重を減少させる方法を提供する。方法には、対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することが含まれる。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０～３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが４０ｋｇ／ｍ２以上である。いくつかの実施形態では、対象は、中心性肥満（例えば、腹部脂肪及び／または内臓脂肪等、腹部の過剰な脂肪蓄積）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ウエスト／ヒップ周径囲比（ＷＨＲ）が０．８５以上である。いくつかの実施形態では、対象は、末梢性肥満（例えば、ヒップの過剰な脂肪蓄積）を有する。ＡＬＫ７結合性タンパク質は、単独、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食事及び／または運動に対する補助である。
他の実施形態では、本開示は、肥満または肥満と関連する疾患もしくは状態を治療及び／または改善する方法であって、肥満の対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上である。さらなる実施形態では、対象は、ＢＭＩが３０～３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、病的肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、体のＢＭＩが４０ｋｇ／ｍ２以上である。さらなる実施形態では、対象は、ＢＭＩが４０ｋｇ／ｍ２～４５ｋｇ／ｍ２、または４０ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２であり、いくつかの実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０～３９．９ｋｇ／ｍ２）である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが少なくとも４０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、中心性肥満（例えば、腹部脂肪及び／または内臓脂肪等、腹部の過剰な脂肪蓄積）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ウエスト／ヒップ周径囲比（ＷＨＲ）が０．８５以上である。いくつかの実施形態では、対象は、末梢性肥満（例えば、ヒップの過剰な脂肪蓄積）を有する。ＡＬＫ７結合性タンパク質は、単独、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食事及び／または運動に対する補助である。
また、肥満と関連する疾患または状態を治療または予防する方法であって、治療または予防を必要とする対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む方法も提供される。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、脂質異常症、高脂血症（総コレステロール値が２４０ｍｇ／ｄＬ超）、高コレステロール血症（例えば、総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬ超、２２０ｍｇ／ｄＬ超、２４０ｍｇ／ｄＬ超、２５０ｍｇ／ｄＬ超、または２７５ｍｇ／ｄＬ超）、血清ＨＤＬ低値（例えば、４０ｍｇ／ｄＬ未満、４５ｍｇ／ｄＬ未満、または５０ｍｇ／ｄＬ未満）、血清ＬＤＬ高値（例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上、≧１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、または１９０ｍｇ／ｄＬ以上）、及び高トリグリセリド血症（例えば、空腹時ＴＧ値が１５０ｍｇ／ｄＬ以上、≧１７５ｍｇ／ｄＬ以上、２００ｍｇ／ｄＬ以上、３００ｍｇ／ｄＬ以上、４００ｍｇ／ｄＬ以上、または４９９ｍｇ／ｄＬ以上）から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、心血管疾患である。追加の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、高血圧、心筋梗塞、脳卒中、末梢動脈疾患、血圧調節機能不全、動脈硬化うっ血性心不全、アテローム性動脈硬化、冠動脈心疾患、または細小血管疾患である。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、炎症である。他の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、網膜症、腸疾患、潰瘍性大腸炎、及び喘息、炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）という群から選択されるメンバーである。他の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、網膜症、腸疾患、潰瘍性大腸炎、及び喘息、炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）という群から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、肝疾患である。ある特定の実施形態では、治療または予防される肝臓の疾患または状態は、ＮＡＦＬＤである。ある特定の実施形態では、肝疾患は、脂肪肝である。特定の実施形態では、肝疾患は、ＮＡＳＨである。他の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、脂肪性肝炎、脂肪症、線維症、及び／または肝硬変という群から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、白内障、黄斑性変性、閉塞性睡眠時無呼吸、静脈炎、痛風、変形性関節症、胆嚢疾患、腎疾患、肺疾患（例えば、喘息、低喚気症候群、または呼吸機能障害）、及び／またはがん（例えば、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、及び／または結腸癌、及び／またはがん転移（例えば、リンパ行性転移、血流転移、及び／または腫瘍の増殖と浸潤）から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、感染症である。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、治癒が遅いかまたは治癒しない創傷である。ある特定の場合には、投与は、食事及び／または運動に対する補助である。
ある特定の実施形態では、本開示は、肝脂肪を減少させる方法であって、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、過体重（例えば、前肥満）である。いくつかの実施形態では、対象は、体格指数（ＢＭＩ）が２５ｋｇ／ｍ２以上である。さらなる実施形態では、対象は、ＢＭＩが２５ｋｇ／ｍ２～２９．９ｋｇ／ｍ２、３０ｋｇ／ｍ２～３９．９ｍｋｇ／ｍ２、２５ｋｇ／ｍ２～３９．９ｋｇ／ｍ２、または２５ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０～３９．９ｋｇ／ｍ２または３０ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２）である。いくつかの実施形態では、対象は、病的肥満である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが４０ｋｇ／ｍ２以上である。さらなる実施形態では、対象は、ＢＭＩが４０ｋｇ／ｍ２～４５ｋｇ／ｍ２、または４０ｋｇ／ｍ２～５０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、中心性肥満（例えば、腹部脂肪及び／または内臓脂肪等、腹部の過剰な脂肪蓄積）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ウエスト／ヒップ周径囲比（ＷＨＲ）が０．８５以上である。いくつかの実施形態では、対象は、末梢性肥満（例えば、ヒップの過剰な脂肪蓄積）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。ＡＬＫ７結合性タンパク質は、単独、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食事及び／または運動に対する補助である。
他の実施形態では、本開示は、２型糖尿病または糖尿病と関連する疾患もしくは状態を治療、改善、及び／または予防する方法であって、２型糖尿病を有するかまたは２型糖尿病を発症するリスクのある対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象は、体格指数であるＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上（例えば、３０～３９．９ｋｇ／ｍ２）である。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＭＩが少なくとも４０ｋｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、対象は、中心性肥満（例えば、腹部脂肪及び／または内臓脂肪等、腹部の過剰な脂肪蓄積）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ＷＨＲが０．８５以上である。いくつかの実施形態では、対象は、末梢性肥満（例えば、ヒップの過剰な脂肪蓄積）を有する。ＡＬＫ７結合性タンパク質は、単独、または併用療法として投与される。いくつかの実施形態では、投与は、食事及び／または運動に対する補助である。
また、糖尿病と関連する疾患もしくは状態を治療、改善または予防する方法であって、糖尿病を有する対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）投与することを含む方法も提供される。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、アンタゴニスト抗体）は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、脂質異常症、高脂血症（総コレステロール値が２４０ｍｇ／ｄＬ超）、高コレステロール血症（例えば、総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬ超、２２０ｍｇ／ｄＬ超、＞２４０ｍｇ／ｄＬ超、２５０ｍｇ／ｄＬ超、または２７５ｍｇ／ｄＬ超）、血清ＨＤＬ低値（例えば、４０ｍｇ／ｄＬ未満、４５ｍｇ／ｄＬ未満、または５０ｍｇ／ｄＬ未満）、血清ＬＤＬ高値（例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、または１９０ｍｇ／ｄＬ以上）、及び高トリグリセリド血症（例えば、空腹時ＴＧ値が１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１７５ｍｇ／ｄＬ以上、２００ｍｇ／ｄＬ以上、３００ｍｇ／ｄＬ以上、≧４００ｍｇ／ｄＬ以上、または４９９ｍｇ／ｄＬ以上）から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、心血管疾患である。追加の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、高血圧、心筋梗塞、脳卒中、末梢動脈疾患、血圧調節機能不全、または動脈硬化である。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、炎症（例えば、全身性炎症、肝臓の炎症、及び脂肪組織の炎症）である。他の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、アテローム性動脈硬化、網膜症、腸疾患、潰瘍性大腸炎、喘息、肝臓の炎症、及び／または脂肪組織の炎症）という群から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、肝疾患である。他の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、脂肪性肝疾患、脂肪性肝炎、脂肪症、及び／または肝硬変という群から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、白内障、黄斑性変性、閉塞性睡眠時無呼吸、静脈炎、痛風、変形性関節症、胆嚢疾患、高コレステロール、肺疾患（例えば、喘息、及び／または低喚気症候群）、ニューロパチー、網膜症、血管障害 微小血管障害、腎症、腎不全、及び／またはがん（例えば、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、及び／または結腸癌）、ならびにがん転移（例えば、リンパ行性転移、血流転移、及び／または腫瘍の増殖と浸潤）から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療または予防される疾患または状態は、感染症または治癒しない創傷である。ある特定の場合には、投与は、食事及び／または運動に対する補助である。
本開示はまた、対象における血中脂質プロファイルを改善させるための方法であって、そのような治療を必要とする対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト（中和）抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む方法も提供する。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示される抗体である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＤＬコレステロール値を低下させるかまたはＨＤＬコレステロール値を増大させるための方法を提供する。ある特定の実施形態では、対象は、脂質異常症を有する。他の実施形態では、対象は、血清脂質上昇（例えば、コレステロール（高コレステロール血症）及び／またはトリグリセリド上昇（例えば、高トリグリセリド血症））を有する。ある特定の実施形態では、対象は、ＬＤＬ－Ｃが１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、または１６０ｍｇ／ｄＬ以上である。ある特定の実施形態では、対象は、ＴＧが１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、１７０ｍｇ／ｄＬ以上である。ある特定の実施形態では、対象は、血漿インスリン値上昇（高インスリン血症；例えば、空腹時インスリン値２０μｇ／ｍｌ超が１００を超え得る）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。
ある特定の実施形態によれば、本開示は、代謝性疾患もしくは障害または代謝性疾患もしくは障害と関連する状態を治療または予防する方法であって、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、治療される代謝性の疾患、障害、または状態は、高血糖症（例えば、経口糖負荷試験中、空腹時またはグルコース投与後に１３０ｍｇ／ｄＬ超）である。ある特定の実施形態では、治療される代謝性の疾患、障害、または状態は、脂質代謝の疾患、障害、または状態である。ある特定の実施形態では、治療される代謝性の疾患、障害、または状態は、脂質異常症である。さらなる実施形態では、脂質代謝の疾患、障害、または状態は、ＨＤＬ低値、ＬＤＬ高値、トリグリセリド高値、高脂血症、及びリポタンパク質異常から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬ超、２２０ｍｇ／ｄＬ超、２４０ｍｇ／ｄＬ超、２５０ｍｇ／ｄＬ超、または２７５ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、血清ＨＤＬ値が４０ｍｇ／ｄＬ未満、４５ｍｇ／ｄＬ未満、または５０ｍｇ／ｄＬ未満である。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、血清ＬＤＬ値１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、または１９０ｍｇ／ｄＬ以上である。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、空腹時ＴＧ値が１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１７５ｍｇ／ｄＬ以上、２００ｍｇ／ｄＬ以上、３００ｍｇ／ｄＬ以上、４００ｍｇ／ｄＬ以上、または４９９ｍｇ／ｄＬ以上である。ある特定の実施形態では、治療される代謝性の疾患、障害、または状態は、グルコース代謝の疾患、障害、または状態である。さらなる実施形態では、グルコース代謝の疾患、障害、または状態は、耐糖能障害、インスリン抵抗性、耐糖能異常（ＩＧＴ）、空腹時血糖異常（ＩＦＧ）から選択されるメンバーである。特定の実施形態では、治療される代謝性の疾患、障害、または状態は、尿酸値高値、ＮＡＦＬＤ、脂肪肝、ＮＡＳＨ、及び多嚢胞性卵巣症候群から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療される対象は、高インスリン血症を有する。ある特定の実施形態では、治療される対象は、肥満である（例えば、対象は、内臓肥満または腹部肥満を有する）。他の実施形態では、治療される対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。
メタボリックシンドロームは、心疾患のリスクを高める一連の障害を伴う状態である。メタボリックシンドロームの主な構成要素は、過体重、心血管パラメータ（高血圧、脂質異常症、血中のトリグリセリド高値及び／またはＨＤＬ低値）、アテローム性動脈硬化、糖尿病、及び／またはインスリン抵抗性である。これらの構成要素のうちのいくつかを有する、すなわち、メタボリックシンドロームである対象は、心疾患に極めて罹患しやすいが、構成要素はそれぞれが危険因子である。開示はまた、上記のメタボリックシンドローム構成要素のうちの１つ、２つ、３つ、もしくはそれ以上を治療または予防するための方法であって、治療を必要とする対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む方法も提供する。
本開示はまた、対象のプラダー－ウィリー症候群またはプラダー－ウィリー症候群と関連する状態を治療、予防または改善するための組成物及び方法であって、そのような治療を必要とする対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む、組成物及び方法も提供する。プラダー－ウィリー症候群は、ラブハルト－ウィリー症候群、プラダー症候群、プラダー－ラブハルト－ウィリー－ファンコーニ症候群としても知られ、体の多くの部分を侵す複雑な遺伝性疾患である。乳児期には、この状態は、弱い筋緊張（筋緊張低下）、哺乳困難、成長不良、及び発達遅延により特徴付けられる。小児期に始まり、罹患者は、飽くことのない食欲を発症し、これが慢性的な過食（過食症）及び肥満を引き起こす。プラダー・ウィリー症候群の人々、特に肥満の人々はまた、２型糖尿病（最もよく見られる糖尿病の形態）を発症する場合もある。プラダー・ウィリー症候群の人々は典型的に、軽度から中等度の知能障害及び学習障害を有する。感情爆発、強情、及び皮膚をむしる等の強迫性の行動を含め、行動上の問題がよく見られる。睡眠障害も起こり得る。この状態の追加的特徴としては、狭い額、アーモンド形の目、及び三角の口等の特徴的な顔貌；低身長；ならびに小さな手と足が挙げられる。プラダー・ウィリー症候群の人々は異常に肌が白く、毛髪の色が薄い場合がある。罹患した男性も女性も性器が発育不良である。思春期は遅いかまたは不全であり、ほとんどの罹患者は子供をもうけることができない（不妊）。他の関連症状は、乳児期の筋緊張低下から、小児期早期の行動上の問題、及び乳児期の症状、例えば、眼の協調欠損、生まれつきのアーモンド形の目、強い吸啜反射（筋緊張低下のため）、弱い啼泣、起きることが困難、上唇が薄い等の範囲に及ぶ。成人期の症状としては、例えば、不妊、性腺機能低下、薄い陰毛、肥満、筋緊張低下（筋緊張が弱い）、学習障害／境界域の知的機能、糖尿病にかかりやすい、極度の柔軟性等が挙げられる。現在は、（父方のＰＷＳ／ＡＳ領域の欠損についての）遺伝子検査ならびに臨床所見により診断される。
プラダー・ウィリー症候群は、一般に、父方１５番染色体の一部分が欠如する（約７０％の患者）かまたは母方１５番染色体が２コピーある（母方片親性ダイソミー；約２５％の患者）ことによって生じる。まれに、プラダー・ウィリー症候群は、転座と呼ばれる染色体再構成によるか、または、父方１５番染色体の遺伝子を以上に遮断する（不活性化させる）変異または他の欠陥によっても生じ得る。プラダー・ウィリー症候群の原因である１５番染色体上の部分、１５ｑ１１－１３領域（いわゆるＰＷＳ／ＡＳ領域）は、少なくとも、核内低分子リボ核タンパク質関連タンパク質Ｎ（ＳＮＲＰＮ）及びネクジン（ＮＤＮ）、ならびに核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）のクラスター、例えば、ＳＮＯＲＤ６４、ＳＮＯＲＤ１０７、ＳＮＯＲＤ１０８及び２コピーのＳＮＯＲＤ１０９、２９コピーのＳＮＯＲＤ１１６（ＨＢＩＩ－８５）及び４８コピーのＳＮＯＲＤ１１５（ＨＢＩＩ－５２）が含まれる遺伝子を含む。母方染色体上の同領域の欠失は、アンジェルマン症候群（ＡＳ）を引き起こす。ＰＷＳ及びＡＳは、ヒトでのインプリンティング異常が報告された最初の例である。
プラダー－ウィリー症候群は、治療法はない。しかしながら、状態の症状を軽減するためにいくつかの治療が行われている。乳児期、対象は、成長ホルモン（ＧＨ）療法（例えば、ＧＨ連日注射）等、筋力を改善するための療法を受ける必要がある。言語療法及び作業療法も適応される。重度の肥満による閉塞性睡眠時無呼吸に気道陽性装置が必要とされることが多い。場合によっては外科的処置が用いられ得る。セロトニンアゴニストが、かんしゃくの軽減及び強迫性の改善において最も有効性が示されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、プラダー－ウィリー症候群またはプラダー－ウィリー症候群と関連する状態を治療する、予防する、もしくは改善するために使用される。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片等のアンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質、例えば、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。
さらに、心血管性の疾患もしくは状態を治療、予防または改善する方法であって、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む方法が提供される。ある特定の実施形態では、治療、予防、または改善される心血管性の疾患または状態は、アテローム性動脈硬化である。ある特定の実施形態では、治療、予防、または改善される心血管性の疾患または状態は、高血圧（例えば、安静時、血圧が１３０／８０ｍｍＨｇ超または１４０／９０ｍｍＨｇ超）である。ある特定の実施形態では、心血管性の疾患または状態は、末梢血管疾患、微小血管性もしくは微小血管性合併症、脳卒中、及び／または網膜症である。特定の実施形態では、心血管疾患は、アテローム性動脈硬化（冠動脈心疾患）である。
ある特定の実施形態では、本開示は、炎症性の疾患または状態を治療及び／または改善するための方法を提供し、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、炎症性の疾患または状態は、慢性炎症である。他の実施形態では、炎症性の疾患または状態は、脂肪組織の炎症である。他の実施形態では、疾患または状態は、肝臓の炎症である。ある特定の実施形態では、疾患または状態は、ＮＡＦＬＤである。さらなる実施形態では、疾患または状態は、脂肪肝である。さらなる実施形態では、疾患または状態は、脂肪症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。
本開示はまた、血糖コントロールを改善する方法であって、治療を必要とする対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、空腹時血糖値が１３０ｍｇ／ｄＬ超、１３５ｍｇ／ｄＬ超、１４０ｍｇ／ｄＬ、１４５ｍｇ／ｄＬ超、または１５０ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、食事の２時間後、食後血糖値が１８０ｍｇ／ｄＬ超、１８５ｍｇ／ｄＬ超、１９０ｍｇ／ｄＬ超、１９５ｍｇ／ｄＬ超、または２００ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の場合には、投与は、食事及び／または運動に対する補助である。投与により、体重を減少させるかまたは肥満を治療することもできる。ある特定の場合には、対象は、２型糖尿病を有する。ある特定の場合には、対象は、ＢＭＩが２７～４０ｋｇ／ｍ２である。特定の場合には、対象は、ＢＭＩが３０～３９．９ｋｇ／ｍ２である。特定の場合には、対象は、ＢＭＩが少なくとも４０である。ある特定の場合には、対象は、過体重である。特定の場合には、対象は、肥満である。血糖コントロールの改善は、混合食試験等の当該技術分野で公知の技術を使用して評価することができる。
本開示はまた、対象の高血糖症もしくは高血糖症と関連する状態を治療、予防または改善するための組成物及び方法であって、そのような治療を必要とする対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む、組成物及び方法も提供する。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、空腹時血糖値が１３０ｍｇ／ｄＬ超、１３５ｍｇ／ｄＬ超、１４０ｍｇ／ｄＬ超、１４５ｍｇ／ｄＬ超、または１５０ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、食事の２時間後、食後血糖値が１８０ｍｇ／ｄＬ超、１８５ｍｇ／ｄＬ超、１９０ｍｇ／ｄＬ超、１９５ｍｇ／ｄＬ超、または２００ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の実施形態では、治療、予防または改善の結果は、治療前の対象での血清濃度と比較した場合の、血清グルコース値の低下、血清トリグリセリド値の低下、血清インスリン値の低下、及び／または遊離脂肪酸の血清濃度の低下から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療、予防または改善の結果は、治療前の対象の体温と比較した場合の約０．４℃～１℃の体温上昇である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与により、対象の体重も減少する。
他の実施形態では、本開示は、対象での血漿インスリン値を低下させる方法であって、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を、そのような治療を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、空腹時血糖値が１３０ｍｇ／ｄＬ超、１３５ｍｇ／ｄＬ超、１４０ｍｇ／ｄＬ超、１４５ｍｇ／ｄＬ超、または１５０ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、食事の２時間後、食後血糖値が＞１８０ｍｇ／ｄＬ超、１８５ｍｇ／ｄＬ超、１９０ｍｇ／ｄＬ超、１９５ｍｇ／ｄＬ超、または２００ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の実施形態では、対象は、過体重である。ある特定の実施形態では、対象は、肥満である。他の実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
本開示はまた、対象の高血糖症もしくは高血糖症と関連する状態を治療、予防または改善するための組成物及び方法であって、そのような治療を必要とする対象に、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を投与することを含む、組成物及び方法も提供する。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、空腹時血糖値が１３０ｍｇ／ｄＬ超、１３５ｍｇ／ｄＬ超、１４０ｍｇ／ｄＬ超、１４５ｍｇ／ｄＬ超、または１５０ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、食事の２時間後、食後血糖値が１８０ｍｇ／ｄＬ超、１８５ｍｇ／ｄＬ超、１９０ｍｇ／ｄＬ超、１９５ｍｇ／ｄＬ超、または２００ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の実施形態では、治療、予防または改善の結果は、治療前の対象での血清濃度と比較した場合の、血清グルコース値の低下、血清トリグリセリド値の低下、血清インスリン値の低下、及び／または遊離脂肪酸の血清濃度の低下から選択されるメンバーである。ある特定の実施形態では、治療、予防または改善の結果は、治療前の対象の体温と比較した場合の約０．４℃～１℃の体温上昇である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、投与により、対象の体重も減少する。
他の実施形態では、本開示は、対象での血漿インスリン値を低下させる方法であって、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を、そのような治療を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、空腹時血糖値が１３０ｍｇ／ｄＬ超、１３５ｍｇ／ｄＬ超、１４０ｍｇ／ｄＬ超、１４５ｍｇ／ｄＬ超、または１５０ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が投与される対象は、食事の２時間後、食後血糖値が１８０ｍｇ／ｄＬ超、１８５ｍｇ／ｄＬ超、１９０ｍｇ／ｄＬ超、１９５ｍｇ／ｄＬ超、または２００ｍｇ／ｄＬ超である。ある特定の実施形態では、対象は、過体重である。ある特定の実施形態では、対象は、肥満である。他の実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
他の実施形態では、本開示は、対象の肝疾患を治療、予防、または改善する方法であって、有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を、肝疾患を有する対象に投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、対象は、肝臓の炎症を有する。ある特定の実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤを有する。いくつかの実施形態では、対象は、脂肪肝を有する。他の実施形態では、対象は、ＮＡＳＨを有する。ある特定の実施形態では、治療、予防または改善される肝疾患は、線維症、瘢痕化、肝硬変、または肝不全である。他の実施形態では、治療、予防または改善される肝疾患は、肝癌である。ある特定の実施形態では、対象は、過体重である。他の実施形態では、対象は、肥満である。他の実施形態では、対象は、２型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、投与されるアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。
追加の実施形態では、本開示は、がんもしくはがんと関連する状態を治療及び／または改善する方法を提供し、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片）を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗ＡＬＫ７抗体またはそのＡＬＫ７結合性断片である。いくつかの実施形態では、対象は、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌もしくは結腸癌から選択されるがんを有する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、リンパ行性転移、血流転移、腫瘍増殖、または腫瘍浸潤を治療または予防するために投与される。
ある特定の実施形態では、本開示は、がんを治療する方法を提供し、ＡＬＫ７を発現しているがん細胞、腫瘍関連間質細胞、または内皮細胞と、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）とを接触させることを含む。追加の実施形態では、がん細胞は、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌及び／または結腸癌の細胞である。いくつかの実施形態では、接触させる細胞は、がん株からのものである。いくつかの実施形態では、がん細胞をインビボで接触させる。
ある特定の実施形態では、本開示は、脂肪分解を増大させる方法であって、白色脂肪細胞または脂肪組織と、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）とを接触させることを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞での脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪分解アッセイにおいて脂肪分解を５％～１００％、１０％～８０％、または１０％～６０％増大させる。さらなる実施形態では、脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書で提供される抗体を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、白色脂肪細胞または脂肪組織をインビトロで接触させる。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織をインビボで接触させる。ある特定の実施形態では、方法は、インビボで、例えば、哺乳類対象（例えば、動物モデル）で行われる。さらなる実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、方法により、グリセロール生成増加がもたらされる。さらなる実施形態では、方法により、培養脂肪細胞でのグリセロール及び／または遊離脂肪酸の増加がもたらされる。いくつかの実施形態では、方法により、脂肪細胞または脂肪組織でのトリグリセリド（ＴＧ）含量の減少がもたらされる。いくつかの実施形態では、方法により、対象での血漿ＴＧ値低下がもたらされる。
他の実施形態では、本開示は、脂肪細胞または脂肪組織でのアドレナリン受容体－β（ＡＤＲＢ）シグナル伝達を増大させる方法を提供する。方法は、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織と、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）とを、ＡＤＲＢシグナル伝達を増大させるのに十分な量で接触させることを含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書で提供される抗体を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織をインビトロで接触させる。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織をインビボで接触させる。ある特定の実施形態では、方法は、インビボで、例えば、哺乳類対象（例えば、動物モデル）で行われる。さらなる実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、方法により、グリセロール生成増加がもたらされる。さらなる実施形態では、方法により、培養脂肪細胞でのグリセロール及び／または遊離脂肪酸の増加がもたらされる。いくつかの実施形態では、方法により、脂肪細胞または脂肪組織でのＴＧ含量の減少がもたらされる。いくつかの実施形態では、方法により、対象での血漿ＴＧ値低下がもたらされる。いくつかの実施形態では、方法により、栄養過負荷中の脂肪細胞または脂肪組織でのＡＤＲＢシグナル伝達増大がもたらされる。
他の実施形態では、本開示は、脂肪細胞または脂肪組織（例えば、分化した白色脂肪細胞）でのペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲガンマ）のシグナル伝達を減少させる方法を提供する。方法には、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織と、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）とを、ＰＰＡＲガンマ活性を低下させるための有効量にて接触させることが含まれる。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書で提供される抗体を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織をインビトロで接触させる。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織をインビボで接触させる。ある特定の実施形態では、方法は、インビボで、例えば、哺乳類対象（例えば、動物モデル）で行われる。さらなる実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、方法により、グリセロール生成増加がもたらされる。さらなる実施形態では、方法により、培養脂肪細胞でのグリセロール及び／または遊離脂肪酸の増加がもたらされる。いくつかの実施形態では、方法により、脂肪細胞または脂肪組織でのＴＧ含量の減少がもたらされる。いくつかの実施形態では、方法により、対象での血漿ＴＧ値低下がもたらされる。
他の実施形態では、本開示は、脂肪細胞または脂肪組織（例えば、分化した白色脂肪細胞）でのインスリン抵抗性を低下させる方法を提供する。方法には、脂肪細胞または脂肪組織と、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）とを、インスリン抵抗性を低下させるための有効量にて接触させることが含まれる。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書で提供される抗体を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と、ＡＬＫ７との結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７との結合に対して競合する。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織をインビトロで接触させる。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織をインビボで接触させる。ある特定の実施形態では、方法は、インビボで、例えば、哺乳類対象（例えば、動物モデル）で行われる。さらなる実施形態では、対象はヒトである。
他の実施形態では、本開示は、脂肪細胞または脂肪組織での代謝率を高める方法を提供する。方法には、脂肪細胞または脂肪組織と、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）とを、脂肪細胞または脂肪組織の代謝を高めるための有効量にて接触させることが含まれる。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＡＬＫ７結合性タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、本明細書で提供される抗体を含む。いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗体は、ＡＬＫ７との結合を、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と交差阻止するかまたは競合し、いくつかの実施形態では、アンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体は、表１に開示されているＶＨとＶＬの対を有する抗体と同じＡＬＫ７のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織をインビトロで接触させる。いくつかの実施形態では、分化した白色脂肪細胞または脂肪組織をインビボで接触させる。ある特定の実施形態では、方法は、インビボで、例えば、哺乳類対象（例えば、動物モデル）で行われる。さらなる実施形態では、対象はヒトである。
本開示は、ＡＬＫ７介在性の疾患及び／または状態、例えば、肥満（例えば、腹部肥満または内臓肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリックシンドローム及び他の代謝性の疾患もしくは状態；ＨＤＬ低値、ＬＤＬ高値、高脂血症、高トリグリセリド血症もしくは脂質異常症等の脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド低下；炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）、脂肪性肝疾患；非アルコール性脂肪性肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、ＬＤＬ高値及び／または高コレステロール血症）；冠動脈心疾患を含む心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化等の心血管疾患；動脈硬化、及び／または高血圧；シンドロームＸ；血管再狭窄；ニューロパチー；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸機能障害、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚上の暗色斑）；及び／またはがん（例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌または結腸癌）；及び／または上記の疾患もしくは状態のうち１つ以上と関連する、及び／または過体重（例えば、ＢＭＩ≧２５ｋｇ／ｍ２）と関連する、もしくは体脂肪過多と関連する他の障害／状態を、有するかまたは発症するリスクのある対象に対し、治療的有効量のＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合するアンタゴニスト抗ＡＬＫ７抗体またはアンタゴニストＡＬＫ７結合性抗体断片）を単独で、または１つ以上の追加の療法（例えば、１つ以上の追加の治療剤）と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
また、例えば所与の治療レジメンの有効性を決定するために、臨床検査手順の一部として血中または組織中のタンパク質濃度（例えば、ＡＬＫ７濃度）を診断的にモニタリングするための本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質の使用も提供される。例えば、検出は、ＡＬＫ７結合性タンパク質を検出可能物質に結合させることにより容易にすることができる。検出可能物質の例としては、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、及び／または放射性物質が挙げられる。好適な酵素の例としては、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、補欠分子族複合体の好適な例としては、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられ、蛍光物質の好適な例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）、ダンシルクロリドまたはフィコエリスリンが挙げられ、発光物質の一例としては、ルミノールが挙げられ、生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが挙げられ、放射性物質の好適な例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、または３Ｈが挙げられる。
医薬組成物及び投与方法
ＡＬＫ７結合性タンパク質を調製し、それを必要とする対象にそれを投与する方法は、当業者に知られているかまたは当業者により容易に決定される。ＡＬＫ７結合性タンパク質の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入によるかもしくは局所的であり得る。非経口という用語には、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、眼球内、皮下、直腸内、または膣内の投与が含まれる。これらの投与形態はいずれも、開示の範囲内であることが明確に企図されるが、投与のための形態の別の例は、注射用、特に静脈内もしくは動脈内への注射用液または点滴用液であろう。通常、好適な医薬組成物は、緩衝液（例えば、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液またはクエン酸緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意選択で、安定剤（例えば、ヒトアルブミン）等を含むことができる。本明細書の教示に適合する他の方法では、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質を線維症もしくは腫瘍の器官及び／または部位に直接送達し、それにより治療剤への罹患組織の曝露を増大させることができる。ある特定の実施形態では、投与は、例えば、吸入または鼻腔内投与により気道に対して直接的なものである。
本明細書で考察されるように、ＡＬＫ７結合性タンパク質は、肥満、糖尿病、代謝性疾患、脂質異常症；心血管疾患、２型糖尿病、炎症、または心血管疾患、肺疾患、脂肪性肝疾患、神経疾患、及び肝疾患、もしくは腎疾患、ならびにがん等の、ＡＬＫ７介在性の疾患及び状態のインビボ治療のために薬学的有効量で投与することができる。これに関し、開示されているＡＬＫ７結合性タンパク質は、投与を容易にするよう、また活性物質の安定性を促進するように製剤化可能であることは認識されよう。本開示による医薬組成物は、薬学的に許容される無毒な無菌の担体、例えば、生理食塩水、無毒性緩衝液、保存剤等を含むことができる。本出願の目的では、ＡＬＫ７結合性タンパク質の薬学的有効量とは、結合型であっても非結合型であっても、ＡＬＫ７への有効な結合を達成するため、及び利益を達成するため、例えば、疾患もしくは状態の症状を改善するか、または物質もしくは細胞を検出するために十分な量を意味する。本明細書に開示される治療法での使用に好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．） １６ｔｈ ｅｄ．（１９８０）に記載されている。
本明細書で提供される、ある特定の医薬組成物は、例えば、カプセル、錠剤、水性懸濁液または溶液を含め、許容される剤形で経口投与することができる。ある特定の医薬組成物はまた、経鼻エアロゾルまたは吸入で投与することもできる。そのような組成物は、ベンジルアルコールもしくは他の好適な保存剤、生物学的利用能を高める吸収促進剤、及び／または従来の他の可溶化剤もしくは分散剤を用いて生理食塩水中に溶液として調製することができる。
単一剤形を生産するために担体材料と合わせることができるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合する抗体）の量は、治療される対象及び個別の投与方法により異なる。組成物は、単回投与、多回投与、または設定された期間にわたる注入で投与することができる。投与レジメンはまた、最適の所望反応（例えば、治療反応または予防的反応）が得られるよう調整することができる。
本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、ヒトまたは他の対象に対し、治療効果を生み出すのに十分な量で前述の治療方法に従って投与することができる。本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、そのようなヒトまたは他の動物に対し、ＡＬＫ７結合性タンパク質と、従来の薬学的に許容される担体または希釈剤とを公知の技術に従って合わせることにより調製される従来の剤形で投与することができる。薬学的に許容される担体または希釈剤の形態及び特性は、それと合わせる有効成分の量、投与経路及び他の周知の可変要素により決定することができる。１つ以上の異なるＡＬＫ７結合性タンパク質を含むカクテルも使用することができる。
ＡＬＫ７介在性の疾患または状態、例えば、肥満、糖尿病、代謝性疾患、脂質異常症；心血管疾患、２型糖尿病、炎症、または心血管疾患、肺疾患、脂肪性肝疾患、神経疾患、及び肝疾患、もしくは腎疾患及び／またはがんの治療のためのＡＬＫ７結合性組成物の治療上有効な用量は、投与手段、標的部位、対象の生理的状態、対象がヒトなのか動物なのか、他の投与薬剤、及び治療が予防的なのか治療的なのか等、多くの異なる要因により異なる。通常、対象はヒトであるが、トランスジェニック哺乳類等の非ヒト哺乳類を治療することもできる。治療投与量は、安全性及び有効性を最適化するための当業者に公知の日常的方法を用いて調節することができる。
ＡＬＫ７結合性タンパク質の投与により特定の疾患または状態の症状を改善することとは、永続的なのか一時的なのか、持続性なのか一過性なのかを問わず、ＡＬＫ７結合性の投与に起因し得る、またはそれと関連し得る、任意の軽減を指す。
本開示はまた、例えば、肥満、糖尿病、代謝性疾患、脂質異常症；心血管疾患、２型糖尿病、炎症、または心血管疾患、肺疾患、脂肪性肝疾患、神経疾患、及び肝疾患、もしくは腎疾患及び／またはがんを治療、予防または改善するための医薬品の製造における抗ＡＬＫ７抗体等のＡＬＫ７結合性タンパク質の使用も提供する。
併用療法
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体、またはそのバリアントもしくは誘導体）は、１つ以上の他の療法と組み合わせて投与される。そのような療法には、追加の治療剤及び他の医学的介入が含まれる。本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質と組み合わせて投与され得る例示的治療剤としては、抗ＳＤＩ線維化剤、コルチコステロイド、抗炎症薬、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、利尿薬、抗糖尿病薬、免疫抑制薬、化学療法薬、代謝拮抗薬、及び／または免疫調節薬が挙げられるが、これらに限定されない。様々な実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質が、外科的切除／除去の手技前、手技中、及び／または手技後に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の抗ＡＬＫ７抗体、またはそのバリアントもしくは誘導体）は、１つ以上の（ａ）ビグアナイド薬（例えば、ブホルミン、メトホルミン、フェンホルミン）、（ｂ）インスリン、（ｃ）ソマトスタチン、（ｄ）アルファ－グルコシダーゼ阻害薬（例えば、ボグリボース、ミグリトール、アカルボース）、（ｅ）シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、サキサグリプチン等のＤＰＰ－ＩＶ阻害剤（例えば、米国特許第６，６９９，８７１号Ｂ１に開示されているようなもの）、（ｆ）ＬＸＲ調節因子、（ｇ）インスリン分泌促進物質（例えば、アセトヘキサミド、カルブタミド、クロルプロパミド、グリボルヌリド、グリクラジド、グリメルピリド（ｇｌｉｍｅｒｐｉｒｉｄｅ）、グリピジド、グリキジン（ｇｌｉｑｕｉｄｉｎｅ）、グリソキセピド、グリブリド、グリヘキサミド、グリピナミド、フェンブタミド（ｐｈｅｎｂｕｔａｍｉｄｅ）、トラザミド、トルブタミド、トルシクラミド、ナテグリニド及び／またはレパグリニド）、（ｋ）リモナバント、タラナバント、ならびに国際出願公開第ＷＯ０３／０７７８４７Ａ２号及び同第ＷＯ０５／０００８０９Ａ１号に開示されている化合物等のＣＢ１阻害剤、または（ｉ）．シブトラミン、トピラマート、オルリスタット、キネクサ（Ｑｎｅｘａ）、メバスタチン、シンバスタチン、エゼチミブ、アトルバスタチン、ナルトレキソン、ブプリオピオン（ｂｕｐｒｉｏｐｉｏｎ）、フェンテルミン、ヒドロクロロチアジド、もしくはロサルタンと組み合わせて投与される。
診断法
本開示はまた、ＡＬＫ７介在性の疾患及び状態（肥満（例えば、腹部肥満または内臓肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリックシンドローム及び／または他の代謝性の疾患もしくは状態；ＨＤＬ低値、ＬＤＬ高値、高脂血症、高トリグリセリド血症もしくは脂質異常症等の脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド低下；炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）、脂肪性肝疾患；非アルコール性脂肪性肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、ＬＤＬ高値及び／または高コレステロール血症）；冠動脈心疾患を含む心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化等の心血管疾患；動脈硬化、及び／または高血圧；シンドロームＸ；血管再狭窄；ニューロパチー；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸機能障害、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚上の暗色斑）；及び／またはがん（例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌もしくは結腸癌）；及び／または上記の疾患もしくは状態のうち１つ以上と関連するか、もしくは体脂肪過多と関連する他の障害／状態等）の診断の際に有用な診断法も提供し、これには、個体からのＡＬＫ７タンパク質組織もしくは体液の発現量を測定すること、及び測定された発現量を正常な組織もしくは体液での標準的ＡＬＫ７発現量と比較することを伴い、それにより、標準と比較したＡＬＫ７発現量の増加は、本明細書で提供される完全長抗ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等の、本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質により治療可能な障害であることを示す。
抗ＡＬＫ７抗体（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片、ならびにそのバリアント及び誘導体）等の本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質は、当業者に公知の古典的な免疫組織学的方法（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６－９８５（１９８５）、Ｊａｌｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７－３０９６（１９８７）を参照のこと）を使用して生体試料中のＡＬＫ７レベルを評価するために使用することができる。ＡＬＫ７タンパク質の発現を検出するのに有用な他の抗体ベースの方法としては、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降法、またはウェスタンブロッティング等のイムノアッセイが挙げられる。
「ＡＬＫ７タンパク質の発現量を評価すること」とは、第１の生体試料中のＡＬＫ７タンパク質濃度を、直接的（例えば、絶対タンパク質濃度を決定または推定することによる）または相対的に（例えば、第２の生体試料中の疾患関連ポリペプチド濃度と比較することにより）、定性的または定量的に測定または推定することを意図する。第１の生体試料中のＡＬＫ７タンパク質発現量は、測定または推定して、標準的ＡＬＫ７タンパク質濃度と比較することができ、かかる標準は、障害を有していない個体から取得された第２の生体試料から測定されるか、または障害を有していない個体の集団からの濃度を平均することにより決定される。当該技術分野で理解されるように、「標準」ＡＬＫ７タンパク質濃度が分かった後は、それを比較用標準として繰り返し使用することができる。
「生体試料」とは、ＡＬＫ７を発現する可能性のある、個体、細胞株、組織培養、または他の細胞源から取得された任意の生体試料が意図される。哺乳類から組織生検及び体液を取得するための方法は当該技術分野で公知である。
ＡＬＫ７結合性タンパク質を含むキット
本開示はさらに、好適なパッケージに入ったＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、完全長ＡＬＫ７抗体及びＡＬＫ７結合性抗体断片等のＡＬＫ７と特異的に結合する抗体、ならびにそのバリアント及び誘導体）、及び資料が含まれる、本明細書に記載される方法を実施するために使用することができるキットを提供する。資料には、使用説明書、臨床試験についての考察、副作用の一覧、参考科学文献、添付文書資料、臨床試験結果、及び／またはこれらの概要等という情報のうちのいずれもが含まれ得る。資料では、組成物の活性及び／または利点を示すかもしくは立証すること、及び／または投薬、投与、副作用、薬物相互作用、もしくは医療提供者に有用な他の情報を説明することができる。そのような情報は、様々な試験、例えば、インビボモデルを伴う実験動物を使用した試験及び／またはヒトの臨床試験に基づいた試験の結果に基づき得る。キットにはさらに、別の治療法（例えば、別の薬剤）、及び／または他の治療法（例えば、他の薬剤）に関する情報を提供する役目を果たす上記のような資料が含有され得る。
ある特定の実施形態では、キットは、１つ以上の容器に入った少なくとも１つの精製ＡＬＫ７結合性タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、キットには、すべての対照、アッセイ実施のための説明書、及び／または結果の分析と提示に必要な任意のソフトウェアを含め、検出アッセイを実施するために必要及び／または十分な構成成分のすべてが含有される。
イムノアッセイ
ＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合する抗体及びＡＬＫ７と特異的に結合する抗体のＡＣＴＲＩＩＡ／Ｂ結合性断片、ならびにバリアント、またはその誘導体）は、当該技術分野で公知の任意の方法により免疫特異的結合を評価することができる。使用することができるイムノアッセイとしては、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ（ＲＥＡ）、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量測定法、蛍光イムノアッセイ、またはプロテインＡイムノアッセイ等の技術を使用する、競合的及び非競合的なアッセイ系が挙げられるが、これらに限定されない。そのようなアッセイは日常的であり、当該技術分野で公知である（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，（１９９４） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ） Ｖｏｌ．１を参照のこと）。
本明細書で提供されるＡＬＫ７結合性タンパク質（例えば、ＡＬＫ７と特異的に結合する抗体及びＡＬＫ７と特異的に結合する抗体のＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）結合性断片、ならびにバリアント、またはその誘導体）は、免疫蛍光法、免疫電子顕微鏡法または非免疫学的アッセイの場合のように、ＡＬＫ７または保存されたバリアントもしくはそのペプチド断片のインサイチュでの検出のために組織学的に利用することができる。インサイチュでの検出は、当該技術分野で公知の方法に従って達成することができる。当業者は、日常的な実験を用いることにより、それぞれの決定について有効かつ最適なアッセイ条件を決定することができる。ＡＬＫ７結合性タンパク質の結合特性の決定に好適な方法は、本明細書に記載されているか、そうでなければ当該技術分野で知られている。そのような動態解析用に設計された装置及びソフトウェアは市販されている（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（登録商標）ソフトウェア、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）。
別段に示されていない限り、本開示の実施には、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、及び免疫学の従来の技術が使用され、これらは当業者の技量の範囲内である。
以下の実施例は、例示として提供されるものであり、限定として提供されるものではない。
具体的な実施形態についての前述の説明から、本開示の一般的性質は十分に明らかになるため、他の人々でも、過度の実験を伴うことなく、本開示の一般概念から逸脱せずに、当業者の技量の範囲内の知識を応用することで、そのような具体的な実施形態を様々な用途のために容易に変更すること及び／または適応させることができる。したがって、そのような適応及び変更は、本明細書で提示されている教示及び指導に基づき、開示された実施形態の均等物の意味及び範囲内であることが意図される。本明細書での表現または用語は説明を目的とするものであって制限のためではなく、そのため、本明細書の用語または表現は、教示及び指導に鑑みて当業者により解釈されるべきであることを理解されるべきである。
本開示の広さと範囲は、上記の例示的実施形態のいずれによっても限定されるべきではなく、以下の請求項及びそれらの均等物によってのみ定義されるべきである。
明細書で引用されている刊行物、特許、特許出願、及び／または他の文書はすべて、個々の刊行物、特許、特許出願、及び／または他の文書が各々あらゆる目的のために参照することにより組み込まれることが個別に示されているかの如く同程度に、あらゆる目的のために参照することによりその全体が組み込まれる。
実施例１．ＡＬＫ７結合性抗体の選択、特徴付け及び生成
ＡＬＫ７と高親和性で結合するヒトＩｇＧ抗体について選択するためにマルチラウンド選択手順を使用し、以下に詳述する。
材料及び方法
ＰｉｅｒｃｅのＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用してヒトＡＬＫ７－Ｆｃを含むタンパク質をビオチン化した。ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２カッパ－ＦＩＴＣ（ＬＣ－ＦＩＴＣ）、Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ－ＰＥ（ＥＡ－ＰＥ）及びストレプトアビジン－６３３（ＳＡ－６３３）をそれぞれ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｓｉｇｍａ及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓから入手した。ストレプトアビジンＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ及びＭＡＣＳＬＣ分離カラムをＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃより購入した。
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ１００／Ｔ２００バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ／ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を２５℃及び３７℃で使用して実験を実施した。ＡＬＫ７抗体を特注のＦＡＢチップに捕捉した。一連の濃度の、ＡＬＫ７－Ｆｃを含むタンパク質を５０μｌ／ｍｌの流速でフローセルに注入した。動的速度定数を得るため、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して補正データを１：１相互作用モデルに適合させた。結合速度定数の比ｋｄ／ｋａにより平衡結合定数ＫＤを決定した。
それぞれ多様性が約１０９の８つのナイーブなヒト合成酵母ライブラリーを、以前に報告されているように増殖させた（例えば、ＷＯ０９／０３６３７９、ＷＯ１０／１０５２５６、ＷＯ１２／００９５６８を参照のこと）。選択の最初の２ラウンドでは、報告されているように（例えば、Ｓｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２８６（１－２）：１４１－１５３（２００４）を参照のこと）Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣｓシステムを用いて磁気ビーズ選別手法を実施した。簡単に言えば、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリー）と、３ｍｌのビオチン化したＡＬＫ７－Ｆｃを含むタンパク質（１０ｎＭ）とを、ＦＡＣＳ洗浄緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中で室温にて１５分間インキュベートした。５０ｍｌの氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを４０ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁させ、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（５００μｌ）を酵母に加えて４℃で１５分間インキュベートした。次に、酵母をペレット状にし、５ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁させ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムに添加した。５ｍＬが添加された後、３ｍｌのＦＡＣＳ洗浄緩衝液でカラムを３回洗浄した。その後、カラムを磁場から外し、酵母を５ｍＬの増殖培地で溶出させた後、一晩増殖させた。フローサイトメトリーを使用して以下の選別ラウンドを実施した。約１×１０８の酵母をペレット状にし、洗浄緩衝液で３回洗浄し、ビオチン化したＡＬＫ７－Ｆｃを含むタンパク質の濃度を徐々に下げながら（１００ｎＭから１ｎＭ）平衡条件下で室温にてインキュベートした。次いで、酵母を２回洗浄し、ＬＣ－ＦＩＴＣ（１：１００で希釈）、及び二次試薬のＳＡ－６３３（１：５００で希釈）またはＥＡ－ＰＥ（１：５０で希釈）で４℃にて１５分間染色した。氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．４ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁させ、ストレーナーキャップ付き選別チューブに移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して選別を実施し、バックグラウンド対照と比べて特定の結合物質を選択するため選別ゲートを割り当てた。その後の選択ラウンドが、ＣＨＯ細胞からの可溶性膜タンパク質を利用して非特異的な試薬結合物質数を減らすため（例えば、ＷＯ１４／１７９３６３及びＸｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２６（１０）：６６３－６７０（２０１３）を参照のこと）、及びＡＬＫ７－Ｆｃを含むタンパク質を使用して、ＡＬＫ７に対する親和性が改善された結合物質を同定するために使用された。最終選別ラウンドの後、酵母を播種し、個々のコロニーを特徴付け用及び親和性成熟についてのクローンの指定用に収穫した。
親和性成熟
ナイーブクローンの結合最適化は、軽鎖の多様化；ＣＤＲＨ及び／ＣＤＲＨ２の多様化；ならびにＶＨとＶＬの順次変異誘発の実施という３つの成熟戦略を利用して行われた。
軽鎖の多様化：重鎖プラスミドは、抽出されたナイーブな産出物（上記）であり、多様性が１×１０６の軽鎖ライブラリーに変換された。選択は、１ラウンドのＭＡＣＳ選別及び２ラウンドのＦＡＣＳ選別で、（それぞれのラウンドに）１０ｎＭまたは１ｎＭのビオチン化したＡＬＫ７－Ｆｃ抗原を使用して上記のように実施した。
ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２の選択：軽鎖の多様化手順により選択されたクローンからのＣＤＲＨ３を、多様性が１×１０８の、ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２のバリアントを有する作製済みライブラリー内に組み換え、上記のようにＡＬＫ７を使用して選択を実施した。親和性の最も高い抗体選択するため、ビオチン化抗原－抗体酵母複合体と、非ビオチン化抗原とを様々な時間インキュベートすることにより親和性圧力をかけた。
ＶＨｍｕｔ／ＶＫｍｕｔの選択：ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２の選択手順により得られたクローンを、エラープローンＰＣＲに基づく重鎖及び／または軽鎖の変異誘発による親和性成熟の追加ラウンドに供した。選択は、ＡＬＫ７を抗原として使用して概ね上記実施例２に記載のように実施されたが、すべての選択ラウンドについてＦＡＣＳ選別を使用することを追加した。抗原濃度を下げ、低温での抗原競合時間を増やして、最適な親和性のためにさらに圧力をかけた。
表面プラズモン共鳴分析－
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ１００／Ｔ２００バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ／ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を２５℃及び３７℃で使用して実験を実施した。ＡＬＫ７抗体を特別仕様のＦＡＢチップに捕捉した。一連の濃度の、ＡＬＫ７－Ｆｃを含むタンパク質を５０μｌ／ｍｌの流速でフローセルに注入した。動的速度定数を得るため、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して補正データを１：１相互作用モデルに適合させた。結合速度定数の比ｋｄ／ｋａにより平衡結合定数ＫＤを決定した。
抗体の生成及び精製
さらなる特徴付け用に十分な量の選択抗体を生成するために、酵母クローンを飽和まで増殖させ、次いで、振とうしながら３０℃で４８時間誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット状にし、上清を精製用に回収した。プロテインＡカラムを使用してＩｇＧを精製し、酢酸（ｐＨ２．０）で溶出させた。パパイン消化によりＦａｂ断片を生成し、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。
ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＫＤ測定
選択抗体についてのＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、概ね前述のように実施した（例えば、Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｂｓ，５（２）：２７０－２７８（２０１３）を参照のこと）。簡単に言えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、ＩｇＧをオンラインでＡＨＱセンサーに添加して実施された。センサーをオフラインでアッセイ緩衝液中にて３０分間平衡化させた後、ベースラインの確立のためにオンラインで６０秒間モニターした。添加したＩｇＧを有するセンサーを１００ｎＭの抗原に５分間に曝露した後、解離速度測定のためそれらをアッセイ緩衝液に５分間移した。１：１結合モデルを使用して動態を分析した。
Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ３８４でのエピトープビニング／リガンド阻止
標準的サンドイッチ形式の交差阻止アッセイを使用して選択抗体のエピトープビニング／リガンド阻止を実施した。対照の抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサーに添加し、センサー上の非占有Ｆｃ結合性部位を無関係のヒトＩｇＧ１抗体でブロッキングした。次いで、センサーを１００ｎＭの標的抗原に曝露してから、第２の抗標的抗体またはリガンドに曝露した。ＦｏｒｔｅＢｉｏのＤａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７．０を使用してデータを処理した。抗原会合後の第２の抗体またはリガンドによる追加の結合は、非占有エピトープ（非競合）を示し、結合がない場合はエピトープ阻止（競合物質またはリガンド阻止）を示す。
サイズ排除クロマトグラフィー
ＴＳＫｇｅｌ ＳｕｐｅｒＳＷ ｍＡｂ ＨＴＰカラム（２２８５５）を使用して酵母で産生されたｍＡｂの高速ＳＥＣ分析をランあたり６分のサイクルタイムで０．４ｍｌ／分にて行った。２００ｍＭのリン酸ナトリウムと２５０ｍＭの塩化ナトリウムを移動相として使用した。
動的走査蛍光定量法
１０μＬの２０×Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅを、２０μＬのｍＡｂまたはＦａｂ溶液（０．２～１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。ＲＴ－ＰＣＲ装置（ＢｉｏＲａｄ ＣＦＸ９６ ＲＴ ＰＣＲ）を使用してサンプルプレート温度の勾配を０．５℃ずつ４０°から９５℃まで上昇させ、各温度で２分間の平衡を設けた。生データのマイナスの一次導関数を使用してＴｍを引き出した。
前述の分析に基づき、好ましい特性を有するナイーブＡｃｔＲＩＩ結合性抗体の配列を確認し、上記の成熟戦略を使用した結合最適化用に選択した。
作製された例示的な最適化ＡｃｔＲＩＩ結合性タンパク質は、表１に提示されているＭ０１、Ｎ０１、Ｐ０１、及びＱ０１である。
実施例２．ＡＬＫ７結合性抗体の特徴付け
先の例に従って作製された例示的ＡＬＫ７結合性タンパク質を、配列、ＳＰＲ、及び細胞ベースの脂肪分解阻害アッセイ分析によりさらに特徴付けした。
実施例１に記載の方法に従って作製された例示的ＡＬＫ７結合性抗体の配列を表１に示す（例示的ＣＤＲ配列には下線が引かれている）。
Figure 2022534514000003
Figure 2022534514000004
Figure 2022534514000005
Figure 2022534514000006
ＳＰＲ（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）による分析）及び細胞ベースの脂肪分解阻害アッセイを使用して、表１に記載の例示的セットのＡＬＫ７結合性タンパク質をより詳細に特徴付けした。
表面プラズモン共鳴分析－
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ１００／Ｔ２００バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ／ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を２５及び３７℃で使用して実験を実施した。ＡＬＫ７抗体を特別仕様のＦＡＢチップに捕捉した。一連の濃度の、ＡＬＫ７－Ｆｃを含むタンパク質を５０μｌ／ｍｌの流速でフローセルに注入した。動的速度定数を得るため、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して補正データを１：１相互作用モデルに適合させた。結合速度定数の比ｋｄ／ｋａにより平衡結合定数ＫＤを決定した。
脂肪分解阻害アッセイ
脂肪分解は、細胞内のトリグリセリドからグリセロールと遊離脂肪酸への加水分解である。グリセロールと遊離脂肪酸はそこで、血流または培地に放出される。脂肪分解は本質的にすべての細胞で起こるが、白色脂肪細胞及び褐色脂肪細胞で最も多い。３Ｔ３－Ｌ１細胞（ＡＴＣＣが供給；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＬ－１７３（商標））を、１０％ウシ血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；１６１７０－０６０）含有ダルベッコ改変イーグル培地（ＡＴＣＣ；ＡＴＣＣ（登録商標）３０－２００２（商標））でコンフルエントな状態に達するまで増殖させる。分化を誘導するため、コンフルエントな状態の２日後、培地を、１０％ウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；１００８２１４７）、デキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ、Ｄ８８９３）、ＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ、Ｉ７０１８）及びインスリン（Ｓｉｇｍａ、Ｉ０５１６）を含有する新鮮なダルベッコ改変イーグル培地（ＡＴＣＣ；ＡＴＣＣ（登録商標）３０－２００２（商標））に交換し、２週間置く。顕微鏡により決定される、細胞上の脂肪滴の蓄積が、成熟脂肪細胞への完全な分化を確認するために使用される。脂肪細胞を、ビヒクル（ＰＢＳ）、アクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）で一晩処理するか、またはアクチビンＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）とＡＬＫ７抗体（５μｇ／ｍｌ）で同時処理する。細胞を、ＰＢＳで２回洗浄し、脂肪分解アッセイ緩衝液（Ａｂｃａｍが供給；ａｂ１８５４３３）と共にインキュベートする。脂肪分解アッセイ緩衝液を３時間に回収し、グリセロールレベルを製造者の説明書（Ａｂｃａｍ；ａｂ１８５４３３）に従って測定する。
ＳＰＲの結果を表２に示し、例示的ＡＬＫ７結合性タンパク質の細胞ベースの脂肪分解阻害アッセイを表２に示す。
Figure 2022534514000007
ＡＬＫ７シグナル伝達は、脂肪分解を抑制し、結果として脂肪細胞及び脂肪組織での脂肪蓄積を引き起こすと考えられている。抗体Ｍ０１、Ｎ０２、Ｐ０３、及びＱ０４が、ＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害を妨げる能力は、細胞ベースの脂肪分解阻害アッセイで評価される。
ヒトＡＬＫ７（配列番号８５）及びラットＡＬＫ７（配列番号８６）の細胞外ドメインは９７％の配列同一性を共有している。ヒトＡＬＫ７及びラットＡＬＫ７に対する抗体Ｍ０１、Ｎ０２、Ｐ０３、及びＱ０４の結合を、ＳＰＲを使用して決定する。
実施例３．肥満マウスにおける脂肪蓄積及び除脂肪体重に対するＡＬＫ７ Ａｂの効果
食餌性肥満マウスモデルにおける脂肪及び除脂肪組織量に対するいくつかのヒトモノクローナルＡＬＫ７抗体（ＡＬＫ７ ｍＡｂ）の効果を検討する。
雄マウス（ｎ＝８／群）で、ベースライン時にＮＭＲを使用して脂肪及び除脂肪筋肉の量を評価する。次いで、マウスを以下の異なる処置群に分ける：１）標準固形飼料（ＳＤ）を与えられ、ＴＢＳビヒクルによる週２回の皮下処置を受けるマウス、２）高脂肪食（ＨＦＤ）を与えられ、ＴＢＳビヒクルによる週２回の皮下処置を受けるマウス、３）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７ ｍＡｂＭ０１による週２回の皮下処置を受けるＨＤＦマウス、４）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７ ｍＡｂＮ０１による週２回の皮下処置を受けるＨＤＦマウス、５）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７ ｍＡｂＰ０１による週２回の皮下処置を受けるＨＤＦマウス、及び６）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７ ｍＡｂＱ０１による週２回の皮下処置を受けるＨＤＦマウス。３週間後、マウスに再び全身ＮＭＲスキャンを行って脂肪及び除脂肪組織の量を評価し、これらの測定値を、ベースラインの脂肪及び除脂肪筋肉の量と比較する。
実施例４．確立された肥満のマウスに対するＡＬＫ７ Ａｂの効果
本実施例では、確立された肥満のマウスにおける体重、脂肪及び除脂肪組織量の分布に対するヒトモノクローナルＡＬＫ７抗体（ＡＬＫ７ ｍＡｂ）の治療可能性についての研究を記載する。ＡＬＫ７抗体の可能性を試験するために、マウス（Ｃ５７ＢＬ／６系統）を体重に基づいて無作為化し、各マウスの体重が試験ベースライン時に約３５グラムに達するまで高脂肪食（ＨＦＤ）を与える。対照マウス（ｎ＝５）には、標準固形飼料（ＳＤ）を与える。次いで、マウス（ｎ＝５～９／群）を以下の異なる処置群に分ける：１）ＴＢＳビヒクルによる週２回の皮下処置を受けるＳＤマウス（すなわち、ＳＤを与えられるマウス）、２）ＴＢＳビヒクルによる週２回の皮下処置を受けるＨＦＤマウス（すなわち、ＨＦＤを与えられるマウス）、３）１ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７ ｍＡｂＭ０１による週２回の皮下処置を受けるＨＤＦマウス、４）３ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７ ｍＡｂＮ０１による週２回の皮下処置を受けるＨＤＦマウス、５）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７ ｍＡｂＰ０１による週２回の皮下処置を受けるＨＤＦマウス、及び５）１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＫ７ ｍＡｂＱ０１による週２回の皮下処置を受けるＨＤＦマウス。マウスに全身ＮＭＲスキャンを行い、ベースライン、３週目及び６週目の時点で脂肪及び除脂肪組織の量を評価する。試験期間中、体重を週２回、計量天秤を使用して記録する。

Claims (47)

  1. ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２及びＶＬ－ＣＤＲ３というＣＤＲのセット、及び／またはＶＨ－ＡＢＲ１、ＶＨ－ＡＢＲ２、ＶＨ－ＡＢＲ３、ＶＬ－ＡＢＲ１、ＶＬ－ＡＢＲ２及びＶＬ－ＡＢＲ３というＡＢＲのセットを含むＡＬＫ７結合性タンパク質であって、
    前記ＣＤＲ及び／またはＡＢＲは、
    （ａ）（ｉ）配列番号４のＶＨ配列と、
    （ｉｉ）配列番号１３のＶＬ配列、
    （ｂ）（ｉ）配列番号２２のＶＨ配列と、
    （ｉｉ）配列番号３１のＶＬ配列、
    （ｃ）（ｉ）配列番号４０のＶＨ配列と、
    （ｉｉ）配列番号４９のＶＬ配列、または
    （ｄ）（ｉ）配列番号５８のＶＨ配列と、
    （ｉｉ）配列番号６７のＶＬ配列
    から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）の対からのものであり、前記タンパク質はＡＬＫ７に結合する、前記ＡＬＫ７結合性タンパク質。
  2. ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２及びＶＬ－ＣＤＲ３というＣＤＲのセットを含み、前記ＣＤＲのセットは、ＣＤＲの参照セット、すなわち、
    （ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、
    （ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、
    （ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
    （ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を含む、
    というセットから合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１０未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有し、前記タンパク質はＡＬＫ７に結合する、請求項１に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  3. ＣＤＲのセット、すなわち、
    （ａ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号１１のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、
    （ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号２８のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号２９のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、
    （ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または
    （ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３が配列番号６６のアミノ酸配列を含む、
    というセットを含み、前記タンパク質はＡＬＫ７に結合する、請求項１または２に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  4. ＡＢＲのセット、すなわち、ＶＨ－ＡＢＲ１、ＶＨ－ＡＢＲ２、ＶＨ－ＡＢＲ３、ＶＬ－ＡＢＲ１、ＶＬ－ＡＢＲ２及びＶＬ－ＡＢＲ３を含み、前記ＡＢＲのセットは、ＡＢＲの参照セット、すなわち、
    （ａ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７３のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７４または６９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号７５または７０のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号７１のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号８７のアミノ酸配列を含むか、
    （ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７７または８８のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号７８または８９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９１のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９２のアミノ酸配列を含むか、
    （ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８０または９３のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８１または９４のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、または
    （ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号８２のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８３または９８のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８４または９９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号１０１のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号１０２のアミノ酸配列を含む、
    というセットから合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１０未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有し、前記タンパク質はＡＬＫ７に結合する、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  5. ＡＢＲのセット、すなわち、
    （ａ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７３のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７４または６９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号７５または７０のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号７１のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号８７のアミノ酸配列を含むか、
    （ｂ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号７７または８８のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号７８または８９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９１のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９２のアミノ酸配列を含むか、
    （ｃ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号７９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８０または９３のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８１または９４のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号９５のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号９６のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、または
    （ｄ）（ｉ）ＶＨ－ＡＢＲ１が配列番号８２のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ２が配列番号８３または９８のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）ＶＨ－ＡＢＲ３が配列番号８４または９９のアミノ酸配列を含み、
    （ｉｖ）ＶＬ－ＡＢＲ１が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、
    （ｖ）ＶＬ－ＡＢＲ２が配列番号１０１のアミノ酸配列を含み、かつ
    （ｖｉ）ＶＬ－ＡＢＲ３が配列番号１０２のアミノ酸配列を含む、
    というセットを含み、前記タンパク質はＡＬＫ７に結合する、請求項１～４のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  6. （ａ）（ｉ）配列番号４に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するＶＨと、
    （ｉｉ）配列番号１３に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するＶＬ、
    （ｂ）（ｉ）配列番号２２に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するＶＨと、
    （ｉｉ）配列番号３１に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するＶＬ、
    （ｃ）（ｉ）配列番号４０に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するＶＨと、
    （ｉｉ）配列番号４９に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するＶＬ、または
    （ｄ）（ｉ）配列番号５８に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するＶＨと、
    （ｉｉ）配列番号６７に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するＶＬ
    から選択されるＶＨとＶＬの対を含み、前記タンパク質はＡＬＫ７に結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  7. 前記ＶＨとＶＬの対は、
    （ａ）配列番号４のＶＨ配列と配列番号１３のＶＬ配列、
    （ｂ）配列番号２２のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、
    （ｃ）配列番号４０のＶＨ配列と配列番号４９のＶＬ配列、または
    （ｄ）配列番号５８のＶＨ配列と配列番号６７のＶＬ配列
    から選択され、前記タンパク質はＡＬＫ７に結合する、請求項６に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  8. （ａ）（ｉ）配列番号４の参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、
    （ｉｉ）配列番号１３の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、
    （ｂ）（ｉ）配列番号２２の参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、
    （ｉｉ）配列番号３１の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、
    （ｃ）（ｉ）配列番号４０の参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、
    （ｉｉ）配列番号４９の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列、または
    （ｄ）（ｉ）配列番号５８の参照ＶＨ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＨ配列と、
    （ｉｉ）配列番号６７の参照ＶＬ配列から合計で１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１５未満、もしくはゼロの、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入を有するＶＬ配列
    から選択されるＶＨとＶＬの対を含み、前記タンパク質はＡＬＫ７に結合する、請求項１～７のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  9. 請求項１～８のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質と、ＡＬＫ７への結合を交差阻止するかまたはＡＬＫ７への結合に対して競合する、ＡＬＫ７結合性タンパク質。
  10. ＡＬＫ７活性に拮抗する能力がある、請求項１～９のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  11. 脂肪細胞での脂肪分解を増大させる能力がある、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  12. 白色脂肪細胞または褐色脂肪細胞での脂肪分解を増大させる能力がある、請求項１１に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  13. 脂肪細胞でのＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害に拮抗する能力がある、請求項９～１２のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  14. 白色脂肪細胞または褐色脂肪細胞でのＡＬＫ７媒介性の脂肪分解阻害に拮抗する能力がある、請求項９～１３のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  15. 脂肪細胞での脂肪分解を少なくとも５％～１００％、１０％～９５％、１０～９０％、１０～８５％、１０～８０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～７５％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５５％、１０～５０％、または１０～４５％増大させる能力がある、請求項１１～１２のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  16. 脂肪分解は、１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される脂肪分解アッセイにおいて決定される、請求項１１～１２のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  17. 前記脂肪分解アッセイは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡ／Ｂ、及びＮｏｄａｌから選択される１つ以上のＡＬＫ７リガンドの存在下で実施される、請求項１１～１６のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  18. 前記結合性タンパク質は、
    （ａ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドの存在下で、ＡＬＫ７及びＡｃｔＲＩＩ受容体を発現している細胞表面上での、ＡＬＫ７、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）を含有する複合体の形成を減少させる、
    （ｂ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＩＩ型受容体と競合する、
    （ｃ）ＡＬＫ７への結合に対して１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３及び／またはＧＤＦ８）と競合する、
    （ｄ）１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＡＬＫ７のリン酸化を減少させる、
    （ｅ）１つ以上のＴＧＦ－ベータリガンド（例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、及び／またはＮｏｄａｌ）の存在下でＡＬＫ７及びＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／またはＡｃｔＲＩＩＢ）を発現している細胞でのＳｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ２及び／またはＳｍａｄ３）のリン酸化を減少させる、
    （ｆ）ＡＬＫ７に、１ｎＭ以下かつ１ｐＭ以上のＫＤ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により決定した場合）で結合する、ならびに
    （ｇ）ＡＬＫ７、共受容体（例えば、ｃｒｉｐｔｏ及び／またはｃｒｙｐｔｉｃ）、及び１つ以上のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンド（例えば、Ｎｏｄａｌ）を含有する複合体の形成を減少させる、
    という特性から選択される少なくとも１つの特性を有する、請求項１～１７のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  19. 前記ＡＬＫ７結合性タンパク質は、脂肪細胞でのグリセロール生成を増大させる、請求項１～１８のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  20. 前記ＡＬＫ７結合性タンパク質は、ＡＬＫ７と特異的に結合する抗体である、請求項１～１９のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  21. 請求項２０に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質であって、その重鎖定常領域にＬＡＬＡ変異またはＬＡＬＡ－ＰＧ変異をさらに含む、前記ＡＬＫ７結合性タンパク質。
  22. 前記抗体は、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、またはＡＬＫ７結合性抗体断片である、請求項２０または２１に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  23. 前記ＡＬＫ７結合性抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子である、請求項２２に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  24. 前記抗体はさらに、
    （ａ）ヒトＩｇＡ定常ドメイン、
    （ｂ）ヒトＩｇＤ定常ドメイン、
    （ｃ）ヒトＩｇＥ定常ドメイン、
    （ｄ）ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、
    （ｅ）ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、
    （ｆ）ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、
    （ｇ）ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、及び
    （ｈ）ヒトＩｇＭ定常ドメイン
    から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項２０～２３のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  25. 前記抗体はさらに、
    （ａ）ヒトＩｇカッパ定常ドメイン、及び
    （ｂ）ヒトＩｇラムダ定常ドメイン
    から選択される軽鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項２０～２４のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  26. 前記抗体はさらに、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン及びヒトカッパ軽鎖定常ドメインを含む、請求項２０～２５のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  27. 前記抗体はさらに、その重鎖定常ドメインに変異、置換、または修飾を含む、請求項２０～２６のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質。
  28. 請求項１～２７のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質をコードする、核酸分子または核酸分子のセット。
  29. ｃＤＮＡである、請求項２８に記載の核酸分子または核酸分子のセット。
  30. 請求項２８～２９のいずれか一項に記載の核酸分子を含む、ベクター。
  31. 請求項２８～２９のいずれか一項に記載の核酸分子、または請求項３０に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  32. 前記宿主細胞は、哺乳類宿主細胞である、請求項３１に記載の宿主細胞。
  33. 前記宿主細胞は、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項３１に記載の宿主細胞。
  34. 請求項１～２７のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質を作製する方法であって、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記ＡＬＫ７結合性タンパク質を産生するための好適な条件下で培養することを含む、前記方法。
  35. 前記宿主細胞から分泌されるＡＬＫ７結合性タンパク質を単離することをさらに含む、請求項３４に記載の方法。
  36. 請求項３４または３５に記載の方法を使用して生成される、ＡＬＫ７結合性タンパク質。
  37. 請求項１～２７のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  38. 医薬品として使用するための、請求項３７に記載の医薬組成物。
  39. ＡＬＫ７発現またはＡＬＫ７シグナル伝達と関連する疾患もしくは状態を治療及び／または改善するための、請求項３８に記載の医薬組成物の使用。
  40. 前記疾患または状態は、肥満（例えば、腹部肥満または内臓肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリックシンドローム及び他の代謝性の疾患もしくは状態；ＨＤＬ低値、ＬＤＬ高値、高脂血症、高トリグリセリド血症もしくは脂質異常症等の脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド低下；炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）、脂肪性肝疾患；非アルコール性脂肪性肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、ＬＤＬ高値及び高コレステロール血症）；冠動脈心疾患を含む心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化等の心血管疾患；動脈硬化、及び高血圧；シンドロームＸ；血管再狭窄；ニューロパチー；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸機能障害、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚上の暗色斑）；及びがん（例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌もしくは結腸癌）；及び／または上記の疾患もしくは状態のうち１つ以上と関連するか、もしくは体脂肪過多と関連する他の障害／状態、から選択されるメンバーである、請求項３９に記載の使用。
  41. 前記ＡＬＫ７結合性タンパク質はさらに、標識基またはエフェクター基を含む、請求項３７または３８に記載の医薬組成物。
  42. 前記エフェクター基は、放射性同位体、放射性核種、毒素、治療剤及び化学療法剤から選択される、請求項４１に記載の医薬組成物。
  43. 対象におけるＡＬＫ７発現もしくはＡＬＫ７媒介性シグナル伝達上昇と関連する疾患もしくは状態を治療及び／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～２７のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質を含む組成物、または請求項３７、３８、４１、もしくは４２に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
  44. 前記疾患または状態は、肥満（例えば、腹部肥満）；過体重；インスリン抵抗性；メタボリックシンドローム及び他の代謝性の疾患もしくは状態；ＨＤＬ低値、ＬＤＬ高値、高脂血症、高トリグリセリド血症もしくは脂質異常症等の脂質障害；リポタンパク質異常；トリグリセリド低下；炎症（例えば、肝臓の炎症及び／または脂肪組織の炎症）、脂肪性肝疾患；非アルコール性脂肪性肝疾患；高血糖症；耐糖能異常（ＩＧＴ）；高インスリン血症；高コレステロール（例えば、ＬＤＬ高値及び高コレステロール血症）；冠動脈心疾患を含む心疾患、うっ血性心不全、脳卒中、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化等の心血管疾患；動脈硬化、及び高血圧；シンドロームＸ；血管再狭窄；ニューロパチー；網膜症；神経変性疾患；内皮機能障害、呼吸機能障害、腎疾患（例えば、腎症）；膵炎；多嚢胞性卵巣症候群；尿酸値上昇；ヘモクロマトーシス（鉄過剰）；黒色表皮腫（皮膚上の暗色斑）；及びがん（例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫、または髄外骨髄腫）、または卵巣癌、乳癌、結腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、子宮癌もしくは結腸癌）；及び／または上記の疾患もしくは状態のうち１つ以上と関連するか、もしくは体脂肪過多と関連する他の障害／状態、から選択されるメンバーである、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記ＡＬＫ７結合性タンパク質または医薬組成物は、単独で、または併用療法として投与される、請求項４３または４４に記載の方法。
  46. 対象でのＡＬＫ７活性を低下させる方法であって、請求項１～２７のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質、または請求項３７、３８、４１、もしくは４２に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
  47. プラダー－ウィリー症候群を治療及び／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～２７のいずれか一項に記載のＡＬＫ７結合性タンパク質を含む組成物、または請求項３７、３８、４１、もしくは４２に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
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