JP2022533432A - 抗ｔｄｐ－４３結合分子およびその使用 - Google Patents

抗ｔｄｐ－４３結合分子およびその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、４３ｋＤａの分子量を有するトランス活性化応答ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＡＲＤＢまたはＴＤＰ－４３）の分野に関するものである。本発明は、ＴＤＰ－４３特異的結合分子、特に抗ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体およびその使用に関する。本発明は、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側頭硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、および大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）を含むが、これらに限定されないＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常を診断し、予防し、軽減し、および／または治療するための手法および方法を提供する。【選択図】なし

Description

本発明の分野
本発明は、４３ｋＤａの分子量を有するトランス活性化応答ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＡＲＤＢまたはＴＤＰ－４３）の分野に関するものである。本発明は、ＴＤＰ－４３特異的結合分子、特に、抗ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体およびその使用に関する。本発明は、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側頭硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、および大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）を含むが、これらに限定されない、ＴＤＰ－４３、特に、ＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断し、予防し、軽減し、および／または治療するための手法および方法を提供する。
中枢神経系（ＣＮＳ）および末梢器官におけるタンパク質の病理学的凝集（タンパク質症）によって特徴付けられる年齢に伴う脳疾患は、世界における障害及び死亡率の主因の１つである。凝集物を形成する最も特徴付けられているタンパク質は、アルツハイマー病およびその関連疾患におけるアミロイドベータである。神経変性を引き起こす他の疾患に関連する凝集しやすいタンパク質としては、以下に限定されないが、Ｔａｕ、アルファシヌクレイン（ａＳｙｎ、ａ－ｓｙｎ）、ハンチンチン、ｆｕｓｅｄ ｉｎ ｓａｒｃｏｍａ（ＦＵＳ）、ジペプチドリピートタンパク質（ＤＰＲ）（Ｃ９ｏｒｆ７２リピート伸長の特殊な翻訳によって生成）、スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）、およびＴＤＰ－４３が挙げられる。ＴＤＰ－４３凝集に関する疾患は、一般に、ＡＬＳおよびＦＴＤを含むが、これらに限定されないＴＤＰ－４３タンパク質症として記載される。
Ｉ．ＴＤＰ－４３序論
トランス活性化応答（ＴＡＲ）ＤＮＡ結合タンパク質４３ｋＤａ（ＴＤＰ－４３）は、染色体１ｐ３６．２（ＡＬＳ１０）上のＴＡＲＤＢＰ遺伝子によってコードされる４１４アミノ酸タンパク質である。ＴＡＲＤＢＰは、６つのエクソン（エクソン１は非コーディングであり；エクソン２～６はタンパク質コーディングである）から構成される。ＴＤＰ－４３は、異種性リボ核タンパク質（ｈｎＲＮＰ）ＲＮＡ結合タンパク質ファミリーに属する（Wang et al., Trends in Molecular Medicine Vol.14 No.11, 2008, 479-485; Lagier-Tourenne et al., Human Molecular Genetics, 2010, Vol. 19, Review Issue 1 R46-R64）。ＴＤＰ－４３は、５個の機能ドメイン（Warraich et al., The International Journal of Biochemistry & Cell Biology 42 (2010) 1606-1609における図１）：２個のＲＮＡ認識モチーフ（ＲＲＭ１およびＲＲＭ２）（２個の高度に保存された六量体リボ核タンパク質２（ＲＮＰ２）および八量体リボ核タンパク質１（ＲＮＰ１）領域を有する）、核外移行シグナル（ＮＥＳ）および核移行シグナル（ＮＬＳ）（核と細胞質間を往復して結合したｍＲＮＡを輸送することを可能にする）、ならびにＣ末端にグリシン富化ドメイン（タンパク質－タンパク質間の相互作用を介在する）を含有する。ＴＤＰ－４３は、転写、スプライシング、輸送、および安定化を含む、ＲＮＡプロセッシングの複数の局面に関連する（Buratti and Baralle, FEBS Journal 277 (2010) 2268-2281）。これは、核と細胞質との間を断続的に往復するが、核に局在することが多く、厳密に自己調節された発現レベルをもって、高度に保存された遍在的に発現されるタンパク質である。２００６年に、ＴＤＰ－４３は、タウ陰性のユビキチン陽性封入体（ＦＴＬＤ－ＴＤＰと称される）を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）の大部分の場合および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の大半の場合に蓄積するタンパク質として同定された（Arai et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 351 (2006) 602-611; Neumann et al., Science 314, (2006), 130-133）。
ＴＤＰ－４３における３８個のネガティブドミナント変異は、孤発性および家族性ＡＬＳ患者、ならびにグリシン富化ドメインに大半が局在する遺伝性ＦＴＤ患者で同定されている（Lagier-Tourenne and Cleveland, Cell 136, 2009, 1001-1004における図１）。ＴＤＰ－４３は、沈降アッセイによって示されるように、本質的に凝集する傾向にあり、この傾向は、ＴＤＰ－４３凝集と臨床的な疾患の症状とを結び付けるＡＬＳ関連ＴＡＲＤＢＰ変異のいくつかによってさらに増加される（Ticozzi et al., CNS Neurol. Disord. Drug Targets. 2010, 9(3), 285-296.）。
ＩＩ．神経変性におけるＴＤＰ－４３
ＴＤＰ－４３凝集は、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）（例えば、孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うか、または伴わず、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異を有し、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を有し、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異を有し、染色体９ｐに関連するもの、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒病、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢変異性原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）など）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例えば、孤発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異を有する）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ）（散発性および家族性のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３；マシャド・ジョセフ病としても公知））、海馬硬化症認知症およびミオパチー（孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異を有する封入体ミオパチー（骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う））、眼咽頭筋型筋ジストロフィー（縁取り空胞を伴う）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）またはパーキンソン病（ＰＤ）を含むが、これらに限定されない神経変性状態の増加するリスト（Lagier-Tourenne et al., Human Molecular Genetics, 2010, Vol. 19, Review Issue 1 R46-R64）において同定されている。
患者の脳に由来する凝集されたＴＤＰ－４３は、過剰リン酸化、ユビキチン化、アセチル化、およびタンパク質切断によるＣ末端フラグメントを含む多くの異常な修飾を示す（Arai et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 351 (2006) 602-611; Neumann et al., Science 314, (2006), 130-133; Neumann et al., Acta Neuropathol. (2009) 117: 137-149; Hasegawa et al., (2008) Annals of Neurology Vol 64 No 1, 60-70; Cohen et al., Nat Commun. 6: 5845, 2015）。ＴＤＰ－４３病変の別の性質は、ＴＤＰ－４３の核から細胞質への再分布と蓄積である。ＦＴＬＤ－ＴＤＰの特徴的な病変は、神経とグリアの細胞質内封入体（ＮＣＩおよびＧＣＩ各々）および変性神経突起（ＤＮ）であり、ＴＤＰ－４３、ならびにユビキチンおよびｐ６２に免疫応答性であるが、他の神経変性症関連タンパク質に陰性である。封入形態とその組織分布における差異は、特異的な変異および／または臨床的な症状に関連している。ＴＤＰ－４３病変の４つのタイプがこれまでに組織学的な分類によって報告されている（Mackenzie and Neumann, J. Neurochem. (2016) 138 (Suppl. 1), 54-70）。ＦＴＬＤ－ＴＤＰタイプＡの場合は、主に新皮質の層ＩＩにおける大量の短い神経変性突起（ＤＮ）および小さい卵型または半月状のＮＣＩによって特徴付けられる（Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70における図２ｆ）。この病変の場合は、通常、行動障害型前頭側頭葉型認知症（ｂｖＦＴＤ）または原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）のいずれかを臨床的に示し、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異に関連する。タイプＢの場合は、皮質表面層および深層の両方における中程度の数の小さいか、または粒状のＮＣＩを比較的少ないＤＮおよびＮＩＩとともに示す（神経核内封入体；Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70における図２ｇ）。ＦＴＤおよびＡＬＳ症状を同時に発現する多くの場合は、ＦＴＬＤ－ＴＤＰタイプＢ病変を示すことが見出されている。タイプＣの場合は、特に皮質表面層で豊富な長い蛇行状の神経突起を有し、ＮＣＩはほとんどまたは全く存在しない（Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70における図２ｊ）。この病変は、特に、原発性進行性失語（ｓｖＰＰＡ）を伴って示す場合に見られる。ＦＴＬＤ－ＴＤＰタイプＤは、新皮質における豊富な神経核内封入体（ＮＩＩ）および短いＤＮを極めてまれなＮＣＩとともに示す（Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70における図２ｋ）。タイプＥは、白質の曲線状希突起膠細胞封入体を含む全ての新皮質層に影響を与える顆粒線維性ニューロン封入体（ＧＦＮＩ）および非常に微細な点状の神経網凝集体によって特徴付けられる（Edward B. Lee et al., Acta Neuropathol. 2017 July ; 134(1): 65-78.）。この病変パターンは、封入体筋炎に関連するＶＣＰの場合にのみ見られる。
ＩＩＩ．ＦＴＤにおけるＴＤＰ－４３
前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）は、前頭葉と側頭葉の変性（前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）と呼ばれる病理学的特徴）に基づく広範囲の疾患を含む臨床学的用語である。ＦＴＤは、６５歳より以下の年代における初期の変性認知症のうち２番目に多い症例である（Le Ber, Revue Neurologique 169 (2013) 811-819）。ＦＴＤは、性格と行動の変化によって特徴付けられるｂｖＦＴＤ；言語機能の変化によって特徴付けられる意味性認知症（ＳＤ）および進行性非流暢性失語（ＰＮＦＡ）；運動機能障害によって特徴付けられる大脳皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、進行性核上性麻痺症候群および運動ニューロン疾患（ＦＴＤ－ＭＮＤ）を含むいくつかの症状によって示される。これらの症状の臨床的診断は複雑であり、最終的な結論は、凝集されたタンパク質を検出し、罹患した脳領域を特定するためには、死後の組織病理学的解析によってのみ行うことができる。病理学的観点から、タンパク質封入のうち、約４５％の場合がミスフォールドされたタウの病理学的蓄積を示し、４５％の症例が病理学的ＴＤＰ－４３を示し、少ない集団がＦＵＳおよび他のタンパク質の凝集を示す。
ＩＶ．ＡＬＳにおけるＴＤＰ－４３
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、上下運動神経の早期喪失によって特徴付けられる神経変性疾患である。ＡＬＳの進行は、１～５年の診断から死亡までの病気進行に伴い、致命的な運動麻痺と呼吸不全が顕著である。孤発性ＡＬＳのほとんどの症例において、その神経病変は、一次運動皮質、脳幹運動核、脊髄、および関連する白質路の神経およびグリアにおけるＴＤＰ－４３の異常な細胞質蓄積によって特徴付けられる。認知症を伴うＡＬＳは、運動外新皮質（extramotor neocortex）および海馬におけるＴＤＰ－４３の蓄積に関する。ＡＬＳ患者におけるＴＤＰ－４３のリン酸化の役割は、ＴＤＰ－４３のリン酸化の主な部位としてのアミノ酸Ｓ３７９、Ｓ４０３、Ｓ４０４、Ｓ４０９、Ｓ４１０による核および細胞質の封入体におけるリン酸化ＴＤＰ－４３に特異的に結合する抗体の助けを借りて研究されている（Hasegawa et al., Ann Neurol 2008; 64: 60-70; Neumann et al., Acta Neuropathol (2009) 117: 137-149）。
Ｖ．ＡＤおよび他の疾患におけるＴＤＰ－４３
ＴＤＰ－４３病変は、アルツハイマー病患者の脳の５７％近くまでで生じる（Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(6): 811-824; Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(3): 441-450; McAleese et al., Brain Pathol. 2017 Jul; 27(4): 472-479）。ＴＤＰ－４３凝集は、患者の年齢に関連し、ＡＤにおける認知機能の衰退、記憶喪失、および側頭葉内側萎縮と相関する。ＡＤにおけるＴＤＰ－４３は、内側側頭葉におけるアミロイドベータおよびタウ病変と重複する脳分布を共有する二次的または独立的な病変を示すようである。病変ＴＤＰ－４３は、いわゆる、ＡＤのＴＤＰ－４３（ＴＡＤ）段階化スキーム：最初に、扁桃体（ステージＩ）、続いて海馬、辺縁系、側頭、最終的に、線条体前部（ステージＶ）におけるＴＤＰ－４３の沈着によって報告されている進行性沈着の画一的パターンに従う（Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(6): 811-824; Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(3): 441-450）。
ＶＩ．ＴＤＰ－４３伝播
ＡＬＳおよびＦＴＤの開始と最初の症状は患者間で著しく異なるが、病気進行の共通する特徴は、最初の限局的な領域から多くの神経への病変の広がることである。症状の断続的な悪化は、ＴＤＰ－４３病変の進行的な広がりによって説明しうるかもしれない。ＡＬＳ患者の脳におけるＴＤＰ－４３病変は、四段階プロセスでの伝播であり得、順行性軸索移行を用いて皮質下行性軸索投射によりシナプス経由で伝播が生じていると考えられる（Brettschneider et al., Ann Neurol. 2013 July; 74(1): 20-38.）。最近の実験の証拠により、開始点と組織分布の広がるパターンが４つのタンパク質で異なるという、プリオンに類似したメカニズム（Hasegawa et al., 2017）によるアミロイドベータ、Ｔａｕ、アルファシヌクレイン、およびＴＤＰ－４３の神経組織におけるタンパク質増殖の仮説が支持されている（Brettschneider J et al., Nature Rev. Neuroscience, 2015, 109）。この共通する疾患統合メカニズムは、病変のタンパク質凝集体の細胞間の拡散に基づくものと考えられている。このメカニズムは、病変の細胞からの凝集体の放出、内在性細胞による取り込み、および内在性タンパク質の鋳型化された構造変化による病変タンパク質の立体構造の播種からなるものである。
ＴＤＰ－４３の細胞間伝播は、いくつかのインビトロモデルにおいて分子レベルで研究されており、患者の脳由来の不溶性ＴＤＰ－４３調製物は、レポーター細胞において細胞内の凝集体形成を誘導することができる（Nonaka et al., Cell Reports 4 (2013), 124-134; Feiler et al., 2015; Porta et al., Nat. Comm., 2018）。さらに、細胞内ＴＤＰ－４３凝集体は、その隣接細胞へ伝播する前にエクソソームに結合して遊離されることが示された（Nonaka et al., Cell Reports 4 (2013, 124-134)）。同様に、アデノウイルスで導入したＴＤＰ－４３発現は、リン酸化され、遍在化され、最も重要なこととして細胞間の伝播を開始する種として作用する細胞質凝集を引き起こす（Ishii et al., PLoS ONE 12(6): e0179375, 2017）。患者由来の病変ＴＤＰ－４３は、トランスジェニックマウスおよび野生型マウスへの脳内接種後に内在性ＴＤＰ－４３の広範な分布を引き起こしうる（Porta et al., Nat. Comm., 2018）。
ＶＩＩ．ＴＤＰ－４３タンパク質症の予防および治療
病変ＴＤＰ－４３の凝集および伝播は、ＡＬＳおよびＦＴＤ（現在利用できる治療法が存在しない致命的な疾患）の主な特徴である。ＴＤＰ－４３における変異は、ＴＤＰ－４３ミスフォールディングと病気の進行との因果関係を供するＡＬＳおよびＦＴＤの家族性症例に関連している。
ＶＩＩＩ．ＴＤＰ－４３タンパク質症の診断
臨床的症状に基づくＦＴＤの診断は、特に、初期の段階において、その臨床的症状が他の疾患と重複しうるために不十分である。
多くのアプローチは、異なるタイプのＦＴＤ病変を区別するための生化学的バイオマーカーの開発を目的としている。ＴＤＰ－４３の異なる立体構造に対する抗体の開発は、より感度の高い特異的な診断ツールの作成を可能にしうる。生化学的バイオマーカーと並行して、イメージング用バイオマーカーの開発は、ＴＤＰ－４３タンパク質症における病変の早期の特異的な検出を可能にしうる。脳のＴＤＰ－４３沈着をイメージングする能力は、ＴＤＰ－４３タンパク質症の診断および薬物開発のための大きな成果となりうる。細胞透過性の抗体フラグメントの使用はこのような検出を可能にしうる。
異なるタンパク質のミスフォールディングに基づく神経変性疾患の最も初期の事象は、タンパク質を毒性のものとする別の立体構造の出現である。さらに、このミスフォールドされた立体構造は、罹患した組織を通して観察された伝播の基本メカニズムとして、内在性の正常なタンパク質をミスフォールドされた立体構造として補充することにより自己増殖することができる。
一定のタンパク質の異なる立体構造の状態に対する抗体を開発するために、提示された抗原の立体構造が特定の立体構造の状態における所定の標的に対する立体構造特異的な抗体を生じるように調節された超分子抗原構築物が設計された（ＷＯ２０１２／０５５９３３およびＷＯ２０１２／０２０１２４）。立体構造特異的な抗体は、それらが、これらのタンパク質の疾患に関連する立体構造と機能的で内在的な立体構造とを区別することができるため、多くの有利な点を供する。このアプローチは、このような抗体が、タンパク質の正常な立体構造に吸着される可能性が低い一方、ミスフォールドされた疾患に関連するそのアイソフォームを標的とするため、治療への応用において多くの利点を提供する。診断への応用においても同様に、このような抗体は、疾患に関連するタンパク質の立体構造状態のみを認識し、感度の高い特異的な診断の開発に最重要である。
ＴＤＰ－４３タンパク質症におけるＴＤＰ－４３に基づいたバイオマーカーの使用はまだ確立されていない。このような評価は、生体液中の病変ＴＤＰ－４３の定量化に適した免疫アッセイで用いることができる高い親和性抗体がないために一部妨げられている（Feneberg et al., Molecular Neurobiology, 2018）。
よって、異なるタイプのＴＤＰ－４３タンパク質症を診断するために、および／またはＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体またはＴＤＰ－４３タンパク質症に関連する疾患、障害、および異常の治療に用いられる治療薬の有効性をモニターするために、特にヒト試料において、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３を検出することができるバイオマーカーが明らかに必要である。
ＴＤＰ－４３タンパク質症は、病変ＴＤＰ－４３によって特徴付けられる一連の神経変性疾患として定義される。
ＩＸ．先行技術
特許出願ＷＯ２００８／１５１０５５は、生物学的液体中のＴＤＰ－４３ポリペプチドおよび／またはＴＤＰ－４３ポリペプチド切断産物（例えば、２５ｋＤおよび３５ｋＤのＴＤＰ－４３ポリペプチド切断産物）のレベルを用いて、哺乳類が神経変性疾患に罹っているか否かを調べるための方法および物質を開示する。
特許出願ＷＯ２０１３／０６１１６３は、ポリペプチド、例えば、ヒト、抗体、ならびにそのフラグメント、誘導体および変異体を含むＴＤＰ－４３特異的結合分子を開示する。
上記を考慮して、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３、特にヒトＴＤＰ－４３に結合する抗ＴＤＰ－４３結合分子が必要である。さらに、ＦＴＤスペクトル内の病変タイプ間の区別を可能にする高感度で特異的なバイオマーカーの開発が緊急の課題である。
技術的な課題は、本明細書で提供される実施態様によって解決される。
よって、本発明は、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３を特異的に認識する結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。本発明の範囲内において、ミスフォールドされたＴＤＰ－４３は、ミスフォールドされた単量体の、および／またはミスフォールドされたオリゴマーの、および／またはミスフォールドされ凝集され、および／または翻訳後修飾され、および／またはミスフォールドされた短縮型のＴＤＰ－４３を含む。翻訳後修飾されたＴＤＰ－４３は、リン酸化、ユビキチン化、アセチル化、ＳＵＭＯ化、および／またはメチル化されたＴＤＰ－４３を含む。生理学的ＴＤＰ－４３には、可溶性核ＴＤＰ－４３が含まれる。本明細書において、ＴＤＰ－４３凝集体およびリン酸化ＴＤＰ－４３を含む本発明の結合分子は、病変ＴＤＰ－４３に結合することができることが示されている（実施例１３を参照のこと）。よって、本発明は、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３を特異的に認識する結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。このような結合分子は、本明細書において「汎ＴＤＰ－４３」結合分子、特に汎ＴＤＰ－４３抗体と称される。本明細書で説明されるように、本発明のＴＤＰ－４３結合分子は、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３に同等に、またはＴＤＰ－４３の両方のカテゴリーに特異的に結合するがいずれか一方に優先的に結合してもよい。本発明はまた、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体またはＴＤＰ－４３タンパク質症に関連する疾患、障害および異常の予防、軽減、治療および／または診断のための、結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。本発明はまた、神経変性を引き起こす特定の病変タイプを検出し、および／または認識する（すなわち、同定する）ための結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。臨床研究において縦断的にモニターするためのより効率的でかつ正確な被験者の選別を可能にする診断バイオマーカーとしての使用が想定されており、ＴＤＰ－４３タンパク質症のための新たな治療法の開発をサポートする。
本発明はまた、医薬（治療薬）として、ＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
理論に拘束されることは望まれないが、本発明は、改変された立体構造特異的な抗原ペプチドおよびＴＤＰ－４３タンパク質またはＴＤＰ－４３タンパク質全体に由来するペプチドフラグメント、ならびに前記ペプチドもしくはフラグメントまたはＴＤＰ－４３タンパク質全体によって得ることができるか、または得られた抗体またはフラグメントが、ＴＤＰ－４３細胞間伝播を阻害し、および／またはＴＤＰ－４３凝集体を分解し、および／またはＴＤＰ－４３播種を阻害し、および／またはＴＤＰ－４３タンパク質またはそのフラグメントの凝集を阻害する。本発明の結合分子、特に、ポリペプチド、より具体的には、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３、特に細胞質および細胞外のミスフォールドされたＴＤＰ－４３に結合する。本発明の結合分子、特に、ポリペプチド、より具体的には、抗体またはその抗原結合フラグメントは、全長ＴＤＰ－４３および／または短縮型ＴＤＰ－４３に結合する。１の実施態様において、本発明の結合分子、特に、ポリペプチド、より具体的には、抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞質のミスフォールドされたＴＤＰ－４３に特異的に結合する。
ミスフォールドされ凝集され、または病変に関連するＴＤＰ－４３は、その正常な折り畳み（すなわち、ミスフォールドされた）と局在を失ったＴＤＰ－４３タンパク質で構成される。ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３は、ＴＤＰ－４３に対して免疫反応性を示す、前駆封入体（preinclusion）、神経およびグリア細胞質封入体（各々、ＮＣＩおよびＧＣＩ）、神経核内封入体（ＮＩＩ）、および変性神経突起（ＤＮ）で見出すことができる。
凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３は、主に核に位置し、細胞質を行き来する生理学的に機能的なＴＤＰ－４３タンパク質であり、インビボ細胞環境でその望ましい機能を発揮できる状態にある。
本発明の結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、驚くべきことに、以下の特徴のうちの少なくとも１つ、好ましくは２つ、より好ましくは３つ、さらにより好ましくは４つ全てを有する。
－ＴＤＰ－４３の細胞間伝播を阻害する；
－ＴＤＰ－４３凝集を分解する；
－ＴＤＰ－４３タンパク質またはそのフラグメントの凝集を阻害する；
－ＴＤＰ－４３播種を阻害する。
１つ、２つ、３つ、または４つの上記に記載の特徴の組み合わせに関わらず、本発明の結合分子、好ましくは抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＤＰ－４３タンパク質症のインビボモデル、より重要なことには、ＴＤＰ－４３病変を有する患者におけるＴＤＰ－４３病変の形成を緩和し／阻害し／軽減しうる。
本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、ミクログリアを動員し、および／または活性化することができる。より具体的には、本明細書において、本発明のＴＤＰ－４３結合分子が、細胞サイズおよび活性化状態についてミクログリアの形態形成に影響を及ぼしうることが示されている（実施例１０および図５を参照のこと）。このことが、本発明のＴＤＰ－４３結合分子によって示されるＴＤＰ－４３病変の減少に寄与している可能性がある。
本発明において、結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＤＰ－４３を特異的に認識する。本発明の結合分子には、ＴＤＰ－４３タンパク質に特異的なポリペプチド、抗体、および／またはその抗原結合フラグメントが含まれる。「ＴＤＰ－４３を特異的に認識する」とは、本発明の結合分子が、他のエピトープより高い親和性をもって、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３内のいくつかのエピトープ、特にＴＤＰ－４３タンパク質の１つまたはそれ以上の病変の立体構造において露出／アクセス可能なエピトープに特異的に、一般的に、そして集合的に結合することを意味する。ＴＤＰ－４３に特異的に結合する本発明の結合分子、特にポリペプチド、より具体的には抗体またはその抗原結合フラグメントは、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３を特異的に認識する。好ましい実施態様において、全長ヒトＴＤＰ－４３は、好ましくは、配列番号１の配列を含む。本発明の別の好ましい実施態様において、結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、全長および／または短縮型ＴＤＰ－４３内の定義された結合領域に特異的に結合するものであって、前記結合領域は、好ましくは、配列番号１の配列を有する全長ヒトＴＤＰ－４３のうちのアミノ酸１８１～１９５、１９９～２１３、３０７～３２１、３５２～３６６、３８９～４１１、３９７～４１１または１４０～２００内に含まれ、より好ましくは、前記結合領域は、アミノ酸１８３～１８８、２０３～２１３、２０４～２０８、２０４～２１１、２０５～２１０、３１６～３２３、３５８～３６１、４００～４０５、４００～４０６または４００～４１２内に含まれる。よって、結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、好ましくは、配列番号１の配列を有する全長ヒトＴＤＰ－４３のアミノ酸１８１～１９５、１９９～２１３、３０７～３２１、３５２～３６６、３８９～４１１、３９７～４１１または１４０～２００からなる結合領域を含む、好ましくは前記結合領域からなるペプチドに特異的に結合する。本発明の別の好ましい実施態様において、結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、好ましくは、ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸１８３～１８８、２０３～２１３、２０４～２０８、２０４～２１１、２０５～２１０、３１６～３２３、３５８～３６１、４００～４０５、４００～４０６または４００～４１２からなる結合領域を含む、好ましくは前記結合領域からなるペプチドに特異的に結合する。ある実施態様において、ＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＤＰ－４３のＣ末端領域内に結合する。これは、例えば、ＴＤＰ－４３のＣ末端フラグメントが不溶性画分に見られ、それにより病理学的に関連している可能性があるため有効でありうる。より具体的には、ＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基４００～４０５、４００～４０６または４００～４１２内のエピトープに結合しうる。本発明のある実施態様において、抗体は、モノクローナル抗体である。ある実施態様において、抗体は、マウス、マウス化、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。同等の結合領域は、非ヒトＴＤＰ－４３に存在することが理解される。よって、例えば、マウスＴＤＰ－４３アミノ酸配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｑ９２１Ｆ２を参照）もまた、４１４アミノ酸の長さであり、ヒト配列と９６％（３９８／４１４残基）同一である。本発明は、非ヒトＴＤＰ－４３、特にマウスＴＤＰ－４３における配列番号１を参照して上記で特定される領域／ペプチドと同等の領域／ペプチドに結合する結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントを包含する。
特に、本発明は、以下の実施態様に要約される。
１．ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３、特にヒトＴＤＰ－４３に結合する、ＴＤＰ－４３結合分子。
２．ヒトＴＤＰ－４３結合分子（配列番号１）のアミノ酸残基１８１～１９５、１９９～２１３、３０７～３２１、３５２～３６６、３８９～４１１、３９７～４１１または１４０～２００内のエピトープに結合する、前記実施態様に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
３．ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８３～１８８、２０３～２１３、２０４～２０８、２０４～２１１、２０５～２１０、３１６～３２３、３５８～３６１、４００～４０５、４００～４０６または４００～４１２内のエピトープに結合する、前記実施態様に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
４．抗体またはその抗原結合フラグメントである、前記実施態様のいずれか１つに記載の結合分子。
５．
ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列７３を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｇ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｊ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；あるいは
ｋ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む、前記実施態様のいずれか１つに記載の結合分子またはＴＤＰ－４３結合分子。
６．
ａ．配列番号１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｂ．配列番号２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｃ．配列番号３０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｄ．配列番号４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｅ．配列番号６０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号６４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｆ．配列番号７０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｇ．配列番号８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号８４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｈ．配列番号１００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１０４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｉ．配列番号１２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｊ．配列番号１４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；あるいは
ｋ．配列番号１５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントである、前記実施態様のいずれか１つに記載の結合分子またはＴＤＰ－４３結合分子。
７．
ａ．配列番号１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｃ．配列番号２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｄ．配列番号３０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｅ．配列番号４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｆ．配列番号６０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号６４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｇ．配列番号７０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｈ．配列番号８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号８４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｉ．配列番号１００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１０４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｊ．配列番号１２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｋ．配列番号１４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｌ．配列番号１５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントである、前記実施態様のいずれか１つに記載の結合分子またはＴＤＰ－４３結合分子。
ある実施態様において、前記抗体は：
ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｇ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｊ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；あるいは
ｋ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む。
ある実施態様において、前記抗体は：
ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
ｇ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
ｊ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｋ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３
を含む。
ある実施態様において、前記抗体は：
ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｄ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｅ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｆ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｉ）配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む。
ある実施態様において、前記抗体は：
ａ）配列番号１１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｃ）配列番号３１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｄ）配列番号４１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号４２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号４３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｅ）配列番号６１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号６２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号６３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｆ）配列番号７１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号７２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号７３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｇ）配列番号８１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号８３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１０１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１０２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１０３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１２１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１２３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｊ）配列番号１４１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１４２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１４３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；あるいは
ｋ）配列番号１５１に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１５２に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１５３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む。
ある実施態様において、前記抗体は：
ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；ならびに配列番号１７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号２５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号２７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号３５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号３６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号３７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号４５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号４６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号４７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号６５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号６６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号６７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号７５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号７７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｇ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号８５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号８６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号８７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１０６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号１０７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１２５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号１２７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｊ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１４５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１４６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号１４７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；あるいは
ｋ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５５に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１５６に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号１５７に対して少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、３個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも４、５、または６個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、または３個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも４、５、または６個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。
別の実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、配列番号１０、２０、３０、４０、６０、７０、８０、１００、１２０、１４０、１５０（前記配列の翻訳後修飾を含む）から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。特定の実施態様において、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）は、（ａ）配列番号１１、２１、３１、４１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１４１、１５１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１２、２２、３２、４２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１４２、１５２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３３、４３、６３、７３、８９、１０３、１２３、１４３、１５３、およびＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、または３個のＣＤＲを含む。
別の実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、配列番号１４、２４、３４、６４、７４、８４、１０４、１２４、１５４（前記配列の翻訳後修飾を含む）から選択される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施態様において、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、（ａ）配列番号１５、２５、３５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１５５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１６、３６、６６、８６、１０６、１５６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１７、２７、３７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１５７、およびＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、または３個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号１１、２１、３１、４１、６１、７１、８１、１０１、１１１、１２１、１４１、１５１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１２、２２、３２、４２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１４２、１５２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３３、４３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１４３、１５３、およびＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、または３個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号１５、２５、３５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１５５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１６、３６、６６、８６、１０６、１５６から選択されたアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、（ｃ）１７、２７、３７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１５７から選択されたアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、または３個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、（ａ）配列番号１５、２５、３５、４５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１４５、１５５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１６、３６、６６、８６、１０６、１５６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１７、２７、３７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１５７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１、２、または３個のＣＤＲを含む。
ある実施態様において、本発明は、ハイブリドーマクローン６３１Ｂ２Ａ２、６３３Ｂ１２Ｃ８、６３４Ｈ１０Ｈ７、６３６Ｅ５Ｂ８、６４１Ｈ１Ｅ７、６４２Ａ１０Ｂ１１、６４２Ｄ１２Ｂ４、６４６Ｂ７Ｆ７、７１２Ａ６Ｂ１０、８０９Ｄ９Ｃ２、または８０９Ｆ１２Ｄ８に由来する抗体に関する。
ある実施態様において、本発明は、ＡＣＩ－７０６９－６３１Ｂ２－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６３４Ｈ１０－Ａｂ２、ＡＣＩ－７０６９－６３６Ｅ５－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６４１Ｈ１－Ａｂ２、ＡＣＩ－７０６９－６４２Ａ１０－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６４６Ｂ７－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０７１－７１２Ａ６－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０７１－８０９Ｄ９－Ａｂ２、およびＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１から選択される抗体に関する。
特定の実施態様において、本明細書で供される結合分子または抗体は、特に、結合ＴＤＰ－４３、特に、可溶性ＴＤＰ－４３、凝集ＴＤＰ－４３および／またはオリゴマーＴＤＰ－４３に関して、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍまたはそれ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数を有する。ある実施態様において、本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、可溶性ＴＤＰ－４３よりも凝集ＴＤＰ－４３に対してより低いＫＤを有しうる。例えば、本発明のＴＤＰ－４３結合分子は、３０ｎＭまたはそれ以下、特定の実施態様では、１ｎＭまたはそれ以下の凝集ＴＤＰ－４３のＫＤ、および５００ｎＭまたはそれ以下の可溶性ＴＤＰ－４３のＫＤを有しうる。これは、表８を参照した実施例８Ａにおいて、本発明のＴＤＰ－４３結合分子について示されている。
１の実施態様において、可溶性または凝集ＦＬ ＴＤＰ－４３への結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて解離定数（ＫＤ）を調べることによって評価することができる。用いられうる適当なＳＰＲ法の詳細な説明については、実施例８Ａおよび８Ｂが参照されうる。
本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、典型的には、高い親和性でＴＤＰ－４３に結合する。例えば、それらは、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイによって決定されるように、２００ｐＭまたはそれ以下、より好ましくは、２０ｐＭまたはそれ以下、さらにより好ましくは、１０ｐＭまたはそれ以下のＥＣ５０値を示しうる。適切なアッセイのさらなる詳細については、実施例３を参照しうる。同様に、それらは、間接ＥＬＩＳＡによって決定されるように、１６００ｎｇ／ｍｌまたはそれ以下、より好ましくは、１２０ｎｇ／ｍｌまたはそれ以下、さらにより好ましくは、６０ｎｇ／ｍｌまたはそれ以下のＥＣ５０値を示しうる。適切なアッセイのさらなる詳細については、実施例４を参照しうる。
本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３および凝集されたＴＤＰ－４３の両方に結合する。よって、本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、可溶性で凝集されたＴＤＰ－４３にほぼ同様に十分に結合しうる。本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、凝集されてないＴＤＰ－４３と比較して、凝集されたＴＤＰ－４３にほぼ同等に結合しうる。より具体的には、本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、核内の凝集されていないＴＤＰ－４３と比較して、細胞質内の凝集されたＴＤＰ－４３にほぼ同等に結合しうる。他の実施態様において、本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、両方に結合するが、凝集されていないＴＤＰ－４３と比較して、凝集されたＴＤＰ－４３に優先的に結合しうる。より具体的には、本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、両方に結合するが、核内の凝集されていないＴＤＰ－４３と比較して、細胞質内の凝集されたＴＤＰ－４３に優先的に結合しうる。あるいは、他の実施態様において、本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、両方に結合するが、凝集されたＴＤＰ－４３と比較して、凝集されていないＴＤＰ－４３に優先的に結合しうる。より具体的には、本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、両方に結合するが、細胞質内の凝集されたＴＤＰ－４３と比較して、核内の凝集されていないＴＤＰ－４３に優先的に結合しうる。これらの結合特性は、例えば、免疫組織化学を用いて示されてもよい。適切な方法は、本明細書において、関連するコントールが供される実施例６を参照して記載されている。結果を表７に示す。
本発明はまた、本明細書に記載される本発明の結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメント（ＴＤＰ－４３結合抗体フラグメントおよび誘導体を含む）を含む組成物に関する。さらに、本発明は、このような組成物を、ＴＤＰ－４３タンパク質症の予防、診断および／または治療において用いる免疫治療および／または免疫診断方法であって、前記組成物の有効量が、それを必要とする対象に投与される方法に関する。
ある実施態様において、本発明は、ＴＤＰ－４３に特異的に結合する本明細書に記載の本発明の結合分子、特に抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、および大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）を含むが、これらに限定されない、ＴＤＰ－４３（特にＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断し、予防し、軽減し、および／または治療するためのこれらの結合分子の使用を包含する。本明細書に記載の方法および組成物は、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含むが、これらに限定されない、ＴＤＰ－４３（特にＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の診断、予防、軽減、および／または治療に適用される。好ましくは、ＴＤＰ－４３（特にＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断し、予防し、軽減し、および／または治療するためのこれらの結合分子の使用は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）または前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）に関する。より好ましくは、前記使用は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に関する。より好ましくは、前記使用は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に関する。より好ましくは、前記使用は、アルツハイマー病（ＡＤ）に関する。より好ましくは、前記使用は、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）に関する。
別の実施態様において、ＴＤＰ－４３に特異的な本明細書に記載の本発明の結合分子、特に抗体およびその抗原結合フラグメントは、試料と接触させることにより、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）（例えば、孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うか、または伴わず、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異を有し、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を有し、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異を有し、染色体９ｐに関連するもの、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒病、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢変異性原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）など）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例えば、孤発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異を有する）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ）（散発性および家族性のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３；マシャド・ジョセフ病としても公知））、海馬硬化症認知症およびミオパチー（孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異を有する封入体ミオパチー（骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う））、眼咽頭筋型筋ジストロフィー（縁取り空胞を伴う）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択される、ＴＤＰ－４３（特にＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を検出し、診断し、および／またはモニターする。
１の実施態様において、本発明は、ＴＤＰ－４３に特異的に結合する本明細書に記載の本発明の結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに試料中のＴＤＰ－４３の存在を検出するためのこれらの分子、特にこれらの抗体の使用を包含する。よって、本発明のＴＤＰ－４３結合分子、例えば、本明細書に記載の抗ＴＤＰ４３抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡに基づくアッセイまたは表面適合アッセイを用いることによって、試料中のＴＤＰ－４３の存在を確認するための臨床試料、特に、ヒト血液、ＣＳＦ、間質液（ＩＳＦ）および／または尿をスクリーニングするために使用することができる。組織試料は、脳組織試料などのある状況時において用いられてもよい。本発明の方法および組成物はまた、発症前の疾患を診断すること、ならびに／あるいは疾患の進行および／または治療効果をモニターすることに適用される。ある実施態様によれば、ＴＤＰ－４３に特異的な抗体（例えば、全長抗体または抗体のＴＤＰ－４３結合フラグメントもしくは誘導体）は、試料（例えば、血液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、間質液、または脳組織）と接触させることにより、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）（例えば、孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うか、または伴わず、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異を有し、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を有し、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異を有し、染色体９ｐに関連するもの、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒病、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢変異性原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）など）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例えば、孤発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異を有する）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ）（散発性および家族性ＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３；マシャド・ジョセフ病としても公知））、海馬硬化症認知症およびミオパチー（孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異を有する封入体ミオパチー（骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う））、眼咽頭筋型筋ジストロフィー（縁取り空胞を伴う）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択される、ＴＤＰ－４３（特にＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を検出し、診断し、および／またはモニターする。本発明のＴＤＰ－４３結合分子は、疾患および／またはより進行した疾患を示す適切なコントロールと比較して、相対的に高いＴＤＰ－４３レベルをもって、血液、ＣＳＦ、ＩＳＦまたは尿などの臨床試料中のＴＤＰ－４３を定量化するために用いることができる。多くの適当な免疫アッセイ方法が公知である。よって、前記方法（例えば、ＥＬＩＳＡ、ＭＳＤ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）、ＨＴＲＦ（Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ｔｉｍｅ Ｒｅｓｏｌｖｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）、およびＡｌｐｈａＬＩＳＡなど）は、疾患を示すＴＤＰ－４３の高いレベルを利用して診断のために行われうる。あるいは、前記方法は、モニターするために行われてもよい。時間の経過に伴うレベルの増加は、疾患の進行を示しうる。時間の経過に伴うレベルの減少は、疾患の退縮を示しうる。前記方法はまた、治療をモニターするために、特に、特定の治療の有効性をモニターするために用いられてもよい。治療の成功は、治療後のＴＤＰ－４３レベルの安定または低下を参照して測定することができる。本明細書（実施例１２）において、ＴＤＰ－４３レベルは、本発明の抗体を使用して測定した場合、健常な対象（健常なコントロール）から採取したコントロール試料よりもＴＤＰ－４３タンパク質症患者からのＣＳＦ試料において高かったことが示されている。コントロール試料は、試験試料と並行して試験されてもよく、あるいは試験されてなくてもよい。ある実施態様において、コントロールレベルは、同様または同一の実験条件下で健常な対象から採取された一連の試験試料から調べられ、試験試料で調べたレベルの比較対象として用いられる。本発明の結合分子を用いた適当な試料中のＴＤＰ－４３を定量化するための方法もまた、（対象のさらなる治療のための）治療を選択するために用いられうる。よって、個別の治療方法が想定される。試料は、治療前と治療後に採取される。前記治療法を使用する治療が、治療後にＴＤＰ－４３レベルを安定し、または好ましくは減少させる場合、前記治療法は、その対象のために選択されてもよい。前記治療が、治療後にＴＤＰ－４３レベルを安定せず、または好ましくは減少させない場合、前記治療法は、その対象に対して選択されない。前記治療は、ＴＤＰ－４３タンパク質症の治療のために適切な候補治療薬でありうる。好ましい実施態様において、前記治療法は、典型的には、本明細書に記載の医薬組成物の形態において、本発明のＴＤＰ－４３結合分子を含む。
本発明のＴＤＰ－４３結合分子はまた、特定のタイプまたはサブタイプへの疾患分類のために用いられてもよい。よって、ＴＤＰ－４３（特に、ＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害および／または異常を分類し、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類するための方法であって、
ａ．ＴＤＰ－４３レベルが、適切なコントロールと比較して定量化される本発明の方法を行い、
ｂ．必要に応じて、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異、Ｃ９ｏｒｆ７２変異、ＴＡＲＤＢＰ変異、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異、ＴＡＲＤＢＰ変異、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異、またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を含むがこれらに限定されない、対象からの試料における変異を同定し、次いで
ｃ．ＴＤＰ－４３（特に、ＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害および／または異常、あるいはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類すること
を含む方法が提供される。
同様に、ＴＤＰ－４３（特に、ＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害および／または異常を分類し、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類するための方法であって、ＴＤＰ－４３レベルが、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、あるいはＴＤＰ－４３タンパク質症の患者から得られた試料において定量化され、前記レベルが、ＴＤＰ－４３（特に、ＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害および／または異常、あるいはＴＤＰ－４３タンパク質症の異なるタイプまたはサブタイプの対象から採取されたコントロール試料と比較される（すなわち、代表的なセットのコントロールレベルが目的のタイプまたはサブタイプについて調べられる）本発明の方法を行い；次いで前記比較に基づいて、ＴＤＰ－４３（特に、ＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害および／または異常、あるいはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類することを含む方法が提供される。よって、前記分類は、試験試料と１つまたはそれ以上のコントロール試料との間の最も近い対応を調べることに基づく。これらの方法は、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異、Ｃ９ｏｒｆ７２変異、ＴＡＲＤＢＰ変異、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異、ＴＡＲＤＢＰ変異、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異、またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を含むがこれらに限定されない、試料における変異を同定することをさらに含み、前記同定された変異はまた、ＴＤＰ－４３（特に、ＴＤＰ－４３凝集体）に関連する疾患、障害および／または異常、あるいはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類するために用いられてもよい。誤認を避けるために、試料における変異の同定は、例えば、試料内の核酸分子の核酸の配列決定に基づくいずれかの適切な方法で行われうる。試料は、ＴＤＰ－４３レベルが決定される試料とは別の異なるものであってもよいが、同一対象に由来するものである。
他の実施態様において、本発明は、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を予防し、軽減し、および／または治療するための方法を提供する。１の実施態様によれば、本発明の方法は、本明細書に記載されるＴＤＰ－４３に特異的な本発明の結合分子、特に、抗体（例えば、全長抗体または抗体のＴＤＰ－４３結合フラグメントもしくは誘導体）の有効濃度を対象に投与することを含む。別の実施態様において、本発明は、ＴＤＰ－４３タンパク質症を予防し、軽減し、および／または治療するための方法を提供する。ある実施態様によれば、ＴＤＰ－４３に特異的な本明細書に記載される本発明の結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療し、軽減し、および／または予防するために投与される。別の実施態様において、ＴＤＰ－４３に特異的な本明細書に記載される本発明の結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性ＡＤを含む）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）から選択される神経変性疾患を予防し、軽減し、および／または治療するために投与される。
別の実施態様において、ＴＤＰ－４３に特異的な本明細書に記載される本発明の結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）（例えば、孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うか、または伴わず、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異を有し、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を有し、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異を有し、染色体９ｐに関連するもの、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒病、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢変異性原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）など）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例えば、孤発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異を有する）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ）（散発性および家族性ＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３；マシャド・ジョセフ病としても公知））、海馬硬化症認知症およびミオパチー（孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異を有する封入体ミオパチー（骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う））、眼咽頭筋型筋ジストロフィー（縁取り空胞を伴う）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択される疾患を予防し、軽減し、および／または治療するために投与される。
Ａ型病変の前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）の対象からの組織切片におけるＴＤＰ－４３の検出を示す。免疫組織化学を、検出のために蛍光標識した二次抗体を用いて、Ａ型病変のＦＴＤ対象の前頭皮質からの厚さ１０μｍの凍結切片で行った。以下の抗体をコントロールとして使用した：病変封入体および生理学的核ＴＤＰ－４３を検出するためのウサギポリクローナル汎ＴＤＰ－４３抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ，１０７８２－２－ＡＰ）；病変の凝集されリン酸化されたＴＤＰ－４３を検出するためのウサギモノクローナルホスホＴＤＰ－４３ ｐ４０９／４１０抗体（Ｃｏｓｍｏｂｉｏ，ＴＩＰ－ＰＴＤ－Ｐ０２）。矢印は、ＴＤＰ－４３凝集体を示す。太い矢印は、核内の生理学的ＴＤＰ－４３を示す（核は、ＤＡＰＩ染色によって視覚化されている）。ハイブリドーマの名称または市販の抗体の供給源を各画像の左上隅に示す。 Ａ型ＦＴＤの死後脳組織（前頭皮質）から得られた界面活性剤（サルコシル）の可溶性および不溶性画分におけるＴＤＰ－４３の検出を示す。Ｎ末端領域（Ａ、Ｂ）またはＣ末端領域（Ｃ）のいずれかに結合する市販の抗体による免疫ブロットは、サルコシル可溶性（レーン１）および不溶性（レーン２）画分におけるＴＤＰ－４３の存在を示す。免疫ブロットは、ＴＤＰ－４３のＮ末端領域におけるエピトープ（ＤＩ）を用いてこの実験で作成したＴＤＰ－４３に対するｍＡｂを使用した。免疫ブロットは、ＴＤＰ－４３のＣ末端領域（ＪＮ）に結合するＴＤＰ－４３に対するｍＡｂを使用した。ＴＤＰ－４３に対する全てのｍＡｂは、全長のＴＤＰ－４３を特異的に認識する。さらに、一部のｍＡｂ（Ｋ、Ｍ、Ｎ）は、不溶性画分のＣ末端フラグメントなどの病態の病理学的特徴を認識する。 べヒクル（ｎ＝３０、灰色バー）およびＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）で治療したマウス（ｎ＝２５、灰色の点バー）について測定したｐＴＤＰ－４３免疫反応対象物の密度を、２つの脳領域：線条体（Ａ）および大脳皮質（Ｂ）について示す。（Ｃ）左脳半球の皮質から得られた不溶性画分を、ベヒクル（ｎ＝３０）およびＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）（ｎ＝２５）治療群（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）における総ＴＤＰ－４３について定量化した。 ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）またはアイソタイプコントロールの存在下でＴＥＶ切断によって誘導されるＴＤＰ－４３凝集を、３０時間後の６００ｎｍでの濁度によって測定する。３０時間後のエンドポイントを、アイソタイプコントロール（灰色バー）に対して正規化し、ＴＤＰ－４３凝集％をＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（灰色の点バー）について算出した。３つの独立した実験の平均値±ＳＤを示し、アイソタイプコントロールとＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）との統計学的な差異をウェルチのｔ検定によって分析した（＊＊＊ｐ＜０．００１）。 （Ａ）ベヒクル（ｎ＝１６、灰色バー）およびＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）で治療したマウス（ｎ＝１６、灰色の点バー）について測定したＩｂａ１陽性免疫反応領域を大脳皮質について示す。エラーバーは、平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。（Ｂ－Ｃ）ベヒクル（ｎ＝１６、灰色バー）およびＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）で治療したマウス（ｎ＝１６、灰色の点バー）について測定した平均ミクログリア細胞サイズを大脳皮質について示す。ミクログリアを、その形態に基づいて３つのクラス：（Ｂ）大きな肥大型、（Ｃ）小さな分岐型、および（Ｄ）分岐した静止型に分類した。ベヒクルコントロールとＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）との間の統計学的な差異をｔ検定によって分析した（＊ｐ＜０．０５）。 ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）およびＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）を用いたＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイによる、様々なＦＴＬＤ－ＴＤＰ患者と健常者コントロールのＣＳＦにおけるＴＤＰ－４３レベルの定量化を示す。様々なＣＳＦ試料（ｘ軸）について得られた総ＴＤＰ－４３の生のＡｌｐｈａＬＩＳＡカウント（ｙ軸）を示す。統計分析は、３つの独立した実験からのデータを用いて、群、実験、性別、年齢を固定因子とし、個人をランダム因子として使用して、生のカウントについての線形混合モデルを用いて行った（＊＊ｐ＜０．０１） Ａ型ＦＴＤの死後脳組織から得られた界面活性剤（サルコシル）不溶性画分からの抗体ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）（１）、ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）（２）、およびマウスＩｇＧ２ａコントロール（３）によるＴＤＰ－４３およびｐＴＤＰ－４３の免疫枯渇を示す。免疫枯渇画分１～３を、ＴＤＰ－４３またはｐＴＤＰ－４３特異的な検出抗体を用いてウエスタンブロットによって分析した。ＩＮは（免疫枯渇前の）投与物質用である。
本発明の実施態様の詳細な説明
Ｘ．定義
本明細書で用いられる「抗原結合分子」は、抗原（特に、ＴＤＰ－４３）に特異的または選択的に結合することができる分子である。結合分子は、抗体またはそのフラグメントを含むか、または抗体またはそのフラグメントであってもよい。抗ＴＤＰ－４３結合分子は、エピトープ特異的認識部位でＴＤＰ－４３タンパク質に結合する分子、例えば、抗ＴＤＰ－４３抗体またはそのフラグメントである。すなわち、本発明の抗原結合分子は、配列番号１のアミノ酸配列内でエピトープに結合する。本明細書で提供される抗原結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントは、全長ＴＤＰ－４３を認識する。他の抗ＴＤＰ－４３結合分子はまた、多価分子、多特異的分子（例えば、二特異性抗体）、融合分子、アプタマー、アビマー（Avimer）、または他の天然に存在するか、もしくは組み換えて作り出された分子を含みうる。本発明に有用な例示的な抗原結合分子には、抗体様分子（antibody-like molecule）が含まれる。前記抗体様分子は、標的分子に結合することによって機能を示すことができる分子であり（例えば、Current Opinion in Biotechnology 2006, 17:653-658; Current Opinion in Biotechnology 2007, 18:1-10; Current Opinion in Structural Biology 1997, 7:463-469; Protein Science 2006, 15:14-27を参照）、例えば、ＤＡＲＰｉｎ（ＷＯ２００２／０２０５６５）、アフィボディ（ＷＯ１９９５／００１９３７）、アビマー（Avimer）（ＷＯ２００４／０４４０１１；ＷＯ２００５／０４０２２９）、アドネクチン（Adnectin）（ＷＯ２００２／０３２９２５）、およびフィノマー（fynomer）（ＷＯ２０１３／１３５５８８）が挙げられる。
本明細書で用いられる用語「抗ＴＤＰ－４３抗体」および「ＴＤＰ－４３に結合する抗体」または単に「抗体」は、ＴＤＰ－４３に、抗体がＴＤＰ－４３を標的する診断薬および／または治療剤として有用であるために十分な親和性で結合することができる抗体を意味する。一般に、用語「抗体」は、本明細書において、最も広範囲の意味で用いられ、以下に限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、全ヒト抗体、および抗体フラグメント（それらは所望される抗原結合活性を示すものに限定される）を含む様々な抗体構造を包含する。本発明内の抗体はまた、キメラ抗体、組み換え抗体、組み換え抗体の抗原結合フラグメント、ヒト化抗体、あるいはファージの表面により提示されるか、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の表面により提示される抗体でありうる。
抗体の「抗原結合フラグメント」は、インタクトな抗体の一部を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体以外の分子を意味する。抗体フラグメントの例には、以下に限定されないが、抗体フラグメントから形成されるＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；二特異性抗体；線状抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；および多特異性抗体が含まれる。
タンパク質の規定された領域内の「エピトープに結合する抗体」は、前記タンパク質に結合するための領域内のアミノ酸の１つまたはそれ以上の存在を必要とする抗体である。
ある実施態様において、タンパク質の規定された領域内の「エピトープに結合する抗体」は、前記タンパク質のアミノ酸に変異を入れ、前記抗体の生じた変化したタンパク質（例えば、変化したタンパク質（前記エピトープを含む））への結合が、変化していないタンパク質への結合の少なくとも２０％であるまで決定される変異分析によって同定される。ある実施態様において、タンパク質の規定された領域内の「エピトープに結合する抗体」は、前記タンパク質のアミノ酸に変異を入れ、前記抗体の生じた変化したタンパク質（例えば、変化したタンパク質（前記エピトープを含む））への結合が、変化していないタンパク質への結合の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％であるまで決定される変異分析によって同定される。ある実施態様において、前記抗体の結合は、ＦＡＣＳ、ＷＢによって、または適する結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
本発明で用いられる用語「に結合する」は、相互に少なくとも２つの「抗原相互作用部位」の結合（相互作用）を定義する。用語「抗原相互作用部位」は、本発明によれば、ポリペプチドのモチーフ、すなわち、ＴＤＰ－４３の抗原の特異的な抗原または特異的なグループと特異的に相互作用する能力を示す本発明の抗体または抗原結合フラグメントの一部を定義する。前記結合／相互作用はまた、「特異的な認識」を定義するために理解される。用語「特異的に認識する」は、本発明によれば、前記抗体が、本明細書で定義されるＴＤＰ－４３の少なくとも２個のアミノ酸に特異的に相互作用し、および／または結合することができ、特に、ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８１～１９５、１９９～２１３、３０７～３２１、３５２～３６６、３８９～４１１、３９７～４１１、および１４０～２００内の少なくとも２個のアミノ酸に相互作用し／結合し、さらにより具体的には、ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８３～１８８、２０３～２１３、２０４～２０８、２０４～２１１、２０５～２１０、３１６～３２３、３５８～３６１、４００～４０５、４００～４０６または４００～４１２内の少なくとも２個のアミノ酸に相互作用／結合できることを意味する。
用語「汎ＴＤＰ－４３抗体」は、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３に結合する抗体を意味し、モノマーＴＤＰ－４３、オリゴマーＴＤＰ－４３、翻訳後修飾されたＴＤＰ－４３（例えば、リン酸化、ユビキチン化、アセチル化、ＳＵＭＯ化、および／またはメチル化など）、凝集したＴＤＰ－４３、および短縮型ＴＤＰ－４３を含む。
本発明により用いられる用語「特異的な相互作用」は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントが、類似する構造の（ポリ）ペプチドと交差反応しないか、または実質的にしないことを意味する。よって、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８１～１９５、１９９～２１３、３０７～３２１、３５２～３６６、３８９～４１１、３９７～４１１、および１４０～２００内の特定のアミノ酸配列によって形成されるＴＤＰ－４３の構造に特異的に結合／相互作用し、より具体的には、ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８３～１８８、２０３～２１３、２０４～２０８、２０４～２１１、２０５～２１０、３１６～３２３、３５８～３６１、４００～４０５、４００～４０６、または４００～４１２内の特定のアミノ酸配列によって形成されるＴＤＰ－４３の構造に特異的に結合／相互作用する。
抗原結合分子、特に、研究中の抗体またはその抗原結合フラグメントの一団の交差反応性は、一般的な条件下での抗体またはその抗原結合フラグメントの前記一団の結合（例えば、Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1988)、およびUsing Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1999)を参照のこと）の目的の（ポリ）ペプチドならびに多くの程度の差があるが（構造的におよび／または機能的に）密接に関連する（ポリ）ペプチドへの結合を評価することによって試験されうる。本明細書で定義されるＴＤＰ－４３の特定の構造、例えば、本明細書に記載されるＴＤＰ－４３の特異的なエピトープまたは（ポリ）ペプチド／タンパク質に結合するが、同一のＴＤＰ－４３の他のエピトープまたは（ポリ）ペプチドのいずれにも結合しないか、または実質的に結合しないこれらの構築物（すなわち、抗体、これらの抗原結合フラグメントなど）のみが、目的のエピトープまたは（ポリ）ペプチド／タンパク質に特異的であると考慮され、本明細書で供される方法によるさらなる実験のために選択される。これらの方法には、とりわけ、構造的におよび／または機能的に密接に関連する分子との結合実験、遮断および競合実験が含まれうる。これらの結合実験にはまた、ＦＡＣＳ分析、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））、分析用超遠心、等温滴定カロリメトリー、蛍光異方性、蛍光分光法、または放射性標識リガンド結合アッセイが含まれる。
よって、特異性は、当該技術分野で公知の方法および本明細書に記載される方法によって実験的に調べることができる。このような方法には、以下に限定されないが、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ試験、およびペプチドスキャンが含まれる。
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を意味し、すなわち、前記集団を含む各抗体は、少量で存在しうる可能性のある天然に生じる変異の除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一抗原部位に対して高度に特異的である。モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンが実質的に混在しないハイブリドーマ培養によって合成されうる点で有利である。前記調製された「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団としての抗体の特徴を示し、いずれか特定の方法による抗体の生成が必要であるものと解釈されるべきではない。上記に記載されるように、本発明により用いられるモノクローナル抗体は、Kohler, Nature 256 (1975), 495に記載されるハイブリドーマ方法によって作成されてもよい。
本明細書で用いられる用語「ポリクローナル抗体」は、１つまたはそれ以上の他の非同一の抗体間または存在下で生成された抗体を意味する。一般に、ポリクローナル抗体は、非同一の抗体を生成した数種類の他のＢリンパ球の存在下でＢリンパ球から生成される。通常、ポリクローナル抗体は、免疫化された動物から直接得られる。
本明細書で用いられる用語「全ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。全ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、またはマウス細胞由来のハイブリドーマで生成される場合、マウス糖鎖を含有しうる。同様に、「マウス（mouse）抗体」または「マウス（murine）抗体」は、マウス（mouse）／マウス（murine）免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。あるいは、「全ヒト抗体」は、ラット、ラット細胞、ラット細胞由来のハイブリドーマで生成される場合、ラット糖鎖を含有しうる。同様に、用語「ラット抗体」は、ラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。全ヒト抗体はまた、例えば、全ヒト抗体の生成とスクリーニングを可能にする広く用いられているスクリーニング技術であるファージディスプレイによって生成されうる。ファージ抗体もまた、本発明で用いることができる。ファージディスプレイ法は、例えば、ＵＳ５４０３４８４、ＵＳ５９６９１０８、およびＵＳ５８８５７９３に記載されている。全ヒト抗体の開発を可能にする別の技術は、マウスハイブリドーマ技術の改変法に関するものである。マウスは、それら自身のマウス遺伝子の代わりにヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むように導入される（例えば、ＵＳ５８７７３９７を参照のこと）。
用語「キメラ抗体」は、別のヒトまたは非ヒト種（例えば、マウス、ウマ、ラビット、イヌ、ウシ、ニワトリ）に由来する抗体領域（例えば、定常領域）に融合されるか、またはキメラ化された、本発明の可変領域を含む抗体を意味する。
用語「抗体」はまた、組み換えヒト抗体、異種抗体、およびヘテロハイブリッド抗体に関する。用語「組み換え（ヒト）抗体」には、組み換え法によって調製され、発現され、作成され、または単離される全てのヒト配列抗体、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック動物（例えば、マウス）から単離される抗体；宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを用いて発現される抗体、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体、あるいはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングに関する他のいずれかの手法によって調製され、発現され、作成され、または単離される抗体が含まれる。このような組み換えヒト抗体は、（存在すれば）ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかしながら、このような抗体は、インビトロ変異誘発（またはヒトＩｇ配列の動物トランスジェニックを用いる場合、インビボ体細胞変異誘発）にかけることができ、それにより、前記組み換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連しているが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内において天然に存在しえない配列である。
「異種抗体」は、このような抗体を生成するトランスジェニック非ヒト生物に関して定義される。この用語は、トランスジェニック非ヒト動物ではない生物、一般に、トランスジェニック非ヒト動物の種以外の種に由来する生物で見出されるアミノ酸配列またはこれに対応する核酸配列を有する抗体を意味する。
用語「ヘテロハイブリッド抗体」は、異なる生物由来の軽鎖および重鎖を有する抗体を意味する。例えば、マウス軽鎖に結合したヒト重鎖を有する抗体は、ヘテロハイブリッド抗体である。ヘテロハイブリッド抗体の例には、キメラおよびヒト化抗体が挙げられる。
用語「抗体」はまた、ヒト化抗体に関する。非ヒト（例えば、マウスまたはウサギ）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはこれらのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合部分配列）である。多くの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望される特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種のＣＤＲ（ドナー抗体）に由来する残基によって置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ある例において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも導入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られない残基を含みうる。これらの改変は、抗体の機能をさらに改善し、最適化するためになされる。一般に、前記ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には、２つの可変領域の実質的に全てを含むものであって、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン共通配列のものである。前記ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含んでいてもよい。さらなる詳細については、Jones et al., Nature 321 (1986), 522-525; Reichmann Nature 332 (1998), 323-327 and Presta Curr Op Struct Biol 2 (1992), 593-596を参照のこと。
抗体のヒト化のための一般的な方法は、非ヒトドナーの抗体由来の機能的な抗原結合部位がヒトアクセプター抗体に移植されるＣＤＲ移植に関するものである。ＣＤＲ移植法は、当該技術分野で公知であり、例えば、ＵＳ５２２５５３９、ＵＳ５６９３７６１、およびＵＳ６４０７２１３に記載されている。別の関連する方法は、遺伝子再構成と遺伝子変換を起こすことができる１つまたはそれ以上のヒト化免疫グロブリン遺伝子座を含むように遺伝学的に操作されているトランスジェニック動物由来のヒト化抗体の生成である（例えば、ＵＳ７１２９０８４を参照のこと）。
よって、本発明において、用語「抗体」は、全免疫グロブリン分子ならびにこのような免疫グロブリン分子の一部（すなわち、「その抗原結合フラグメント」）に関する。さらに、前記用語は、上記に記載されるように、改変され、および／または変換された抗体分子に関する。前記用語はまた、組み換えまたは合成して作成され／合成された抗体に関する。前記用語はまた、インタクトな抗体、ならびにその抗体フラグメント（例えば、分離させた軽鎖および重鎖、Ｆａｂ、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２に関する。用語抗体はまた、以下に限定されないが、全ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、および抗体構築物、例えば、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）もしくは抗体融合タンパク質を含む
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、本発明の文脈において、抗体のＶＨおよびＶＬ領域を有するものであって、これらの領域は、単一ポリペプチド鎖で存在する。一般に、前記ｓｃＦｖ ポリペプチドには、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望される構造を形成することを可能にするＶＨおよびＶＬ領域の間のポリペプチドリンカーがさらに含まれる。単鎖抗体の作成について記載される技術は、例えば、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, N.Y. (1994), 269-315に開示されている。
本明細書で用いられる「Ｆａｂフラグメント」は、１つの軽鎖およびＣＨ１、ならびに１つの重鎖の可変領域から構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ２およびＣＨ３領域を含む２つの重鎖フラグメントを含有する。前記２つの重鎖フラグメントは、２つまたはそれ以上のジスルフィド結合およびＣＨ３領域の疎水性相互作用によって結合されている。
「Ｆａｂ’フラグメント」は、１つの軽鎖ならびにＶＨ領域およびＣＨ１領域を含有する１つの重鎖の一部を含み、さらに２つのＦａｂ’フラグメントの２つの重鎖間で鎖間ジスルフィド結合が形成されてＦ（ａｂ’）２分子を形成できるようなＣＨ１およびＣＨ２領域の間の領域を含む。
「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２つの軽鎖、ならびにＣＨ１およびＣＨ２領域の間の定常領域の一部を含む２つの重鎖を含有するものであって、前記２つの重鎖間に鎖間ジスルフィド結合が形成される。よって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、前記２つの重鎖間のジスルフィド結合によって結合されている２つのＦａｂ’フラグメントから構成される。
前記「Ｆｖ領域」は、重鎖および軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域を欠如している。
本発明により用いられる抗体、抗体構築物、抗体フラグメント、抗体誘導体（全てＩｇに由来する）、またはそれらの対応する免疫グロブリン鎖は、当該技術分野で公知の従来技術を用いて、例えば、アミノ酸の欠失、挿入、置換、付加、および／または組換、ならびに／あるいは当該技術分野で公知のいずれか他の改変を単独で、または組み合わせて用いることによってさらに改変することができる。免疫グロブリン鎖のアミノ酸配列に内在するＤＮＡ配列におけるこのような改変を導入するための方法は、当業者に周知であり；例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd edition (1989) and 3rd edition (2001)を参照のこと。用語「Ｉｇに由来する領域」は、特に、少なくとも１つのＣＤＲを含む（ポリ）ペプチド構築物に関する。記載されるＩｇに由来する領域のフラグメントまたは誘導体は、上記抗体分子の一部であり、ならびに／あるいは化学／生化学的方法または分子生物学的方法によって改変されている（ポリ）ペプチドを定義する。対応する方法は、当該技術分野で公知であり、とりわけ、研究室用マニュアルに記載されている（Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd edition (1989) and 3rd edition (2001); Gerhardt et al., Methods for General and Molecular Bacteriology ASM Press (1994); Lefkovits, Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques; Academic Press (1997); Golemis, Protein-Protein Interactions: A Molecular Cloning Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press (2002)を参照のこと）。
本明細書で用いられる用語「ＣＤＲ」は、当該技術分野で周知である「相補性決定領域」に関する。ＣＤＲは、前記分子の特異性を決定する免疫グロブリンの一部であり、特定のリガンドと接触する。ＣＤＲは、分子のうちの最も変化しやすい部分であり、これらの分子の多様性に寄与している。各Ｖ領域において３つのＣＤＲ領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）が存在する。ＣＤＲ－Ｈは、可変重鎖のＣＤＲ領域を表し、ＣＤＲ－Ｌは、可変軽鎖のＣＤＲ領域に関する。ＶＨは、可変重鎖を意味し、ＶＬは、可変軽鎖を意味する。Ｉｇに由来する領域のＣＤＲ領域は、Kabat "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5th edit. NIH Publication no. 91-3242 U.S. Department of Health and Human Services (1991)に記載されるように決定されうる。本明細書で提供されるＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔによって定義される。しかしながら、本発明は、ＣＤＲ配列がいずれの有用な同定／ナンバリング方法によって定義される結合分子が包含されることとされることを当業者によって理解されるであろう。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ（Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. Chothia C, Lesk AM. J Mol Biol. 1987 Aug 20; 196(4):901-17）ＩＭＧＴ（IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Giudicelli V, Chaume D, Bodmer J, Muller W, Busin C, Marsh S, Bontrop R, Marc L, Malik A, Lefranc MP. Nucleic Acids Res. 1997 Jan 1; 25(1):206-11 and Unique database numbering system for immunogenetic analysis. Lefranc MP. Immunol Today. 1997 Nov; 18(11):509）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（MacCallum RM, Martin AC, Thornton JM, J Mol Biol. 1996 Oct 11; 262(5):732-45）およびＭａｒｔｉｎ（Abhinandan KR, Martin ACR. Analysis and improvements to Kabat and structurally correct numbering of antibody variable domains. Mol Immunol. (2008) 45:3832-9. 10.1016/j.molimm.2008.05.022）のナンバリング方法がＣＤＲを定義するために用いられてもよい。
よって、本発明において、上記の本明細書に記載の抗体分子は、全長抗体（免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＡ１、ＩｇＧＡ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ）、Ｆ（ａｂ）－、Ｆａｂ’－ＳＨ－、Ｆｖ－、Ｆａｂ’－、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、全ヒト抗体、二価抗体構築物、抗体融合タンパク質、合成抗体、二価単鎖抗体、三価単鎖抗体、および多価単鎖抗体からなる群から選択される。
「ヒト化方法」は、当該技術分野で周知であり、特に、抗体分子、例えば、Ｉｇ由来分子について記載されている。用語「ヒト化」は、非ヒト抗体に由来する配列のある一部を含有する非ヒト（例えば、マウス）抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）、ｓｃＦｖｓ、または他の抗体の抗原結合部分配列）のヒト化型を意味する。ヒト化抗体には、ヒト免疫グロブリンの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望される結合特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、またはウサギ）のＣＤＲに由来する残基によって置換されているヒト免疫グロブリンが含まれる。一般に、前記ヒト化抗体は、少なくとも１つ、一般的に、２つの可変領域を実質的に全て含むものであって、前記ＣＤＲ領域の全てまたは実質的な全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、前記ＦＲ領域の全てまたは実質的な全てが、ヒト免疫グロブリン共通配列のものである。ヒト化抗体は、適宜、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含んでいてもよい；とりわけ、Jones et al., Nature 321 (1986),522-525, Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2 (1992), 593-596を参照のこと。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該技術分野で周知である。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトがその抗体の元々の結合活性をまだ維持する供給源からそこに導入された１つまたはそれ以上のアミノ酸を有する。抗体／抗体分子のヒト化のための方法は、Jones et al., Nature 321 (1986),522-525; Reichmann et al., Nature 332 (1988),323-327;およびVerhoeyen et al., Science 239 (1988),1534-1536にさらに詳細に記載されている。ヒト化抗体、例えば、ＥｐＣＡＭに対する抗体の特定の例が、当該技術分野で公知である（例えば、LoBuglio, Proceedings of the American Society of Clinical Oncology Abstract (1997), 1562 and Khor, Proceedings of the American Society of Clinical Oncology Abstract (1997), 847を参照のこと）。
よって、本発明において、ヒト化であり、医薬組成物でさらに用いることができる抗体分子またはその抗原結合フラグメントが提供される。
本発明の抗体または抗原結合フラグメントの特異性は、上記で定義される抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸配列の形によって発現されるだけではなく、その抗体が結合することができるエピトープによっても発現されうる。よって、本発明は、１の実施態様において、本発明の抗体と同一のエピトープを認識する抗ミスフォールドＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
当業者によれば、前記エピトープは、ＴＤＰ－４３タンパク質中に含まれうるが、分解産物中に含まれてもよく、または化学的に合成されたペプチドであってもよいことが理解されうる。アミノ酸位置は、ＴＤＰ－４３タンパク質の配列において対応するアミノ酸配列の位置を示すために示されるのみである。本発明には、前記エピトープを含む全てのペプチドが包含される。前記ペプチドは、１００以上のアミノ酸長のポリペプチドの一部であってもよく、あるいは１００以下のペプチド、好ましくは、５０以下、より好ましくは、２５以下のアミノ酸、さらにより好ましくは、１６以下のアミノ酸の小さいペプチドであってもよい。このようなペプチドのアミノ酸は、天然のアミノ酸または非天然のアミノ酸（例えば、ベータアミノ酸、ガンマアミノ酸、Ｄ－アミノ酸）あるいはこれらの組み合わせであってもよい。さらに、本発明は、エピトープの各レトロインベルソ（retro-inverso）ペプチドを包含しうる。前記ペプチドは結合しなくてもよく、または結合してもよい。それは、例えば、低分子（例えば、薬物またはフルオロフォア）、高分子量ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、メタクリル酸ヒドロキシプロピル（ＨＰＭＡ）など）、あるいはタンパク質、脂肪酸、糖部分に結合していてもよく、あるいは膜内に挿入されていてもよい。
問題の抗体および本発明の抗体が同一のエピトープを認識するかどうかを試験するために、下記の競合実験が行われうる：３ＭＯＩ（感染の多重度）で感染させたベロ細胞を、２０時間後に、問題の抗体の各種濃度を競合因子として１時間インキュベートする。２回目のインキュベーション工程において、本発明の抗体を１００ｎＭの規定濃度で適用し、その結合は、本発明の抗体の定常領域に対する蛍光標識抗体を用いてフローサイトメトリーで検出する。問題とする抗体の濃度に対して反比例（逆比例）して生じる結合は、両方の抗体が同一のエピトープを認識している指標である。しかしながら、用いられうる多くの他のアッセイが当該技術分野で公知である。
本発明はまた、ＴＤＰ－４３の内在性ポリペプチドおよび組み換えポリペプチドに対する特異的な抗体の生成に関する。この生成は、例えば、動物（例えば、マウス）の免疫化に基づくものである。しかしながら、抗体／抗血清の生成のための他の動物もまた、本発明内に含まれる。例えば、モノクローナルおよびポリクローナル抗体は、ウサギ、マウス、ヤギ、ロバなどによって生成させることができる。ＴＤＰ－４３に対応して選択したポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、適当なベクターにサブクローン化することができ、前記組み換えポリペプチドは、発現できる生物、例えば、細菌で発現される。よって、発現される組み換えタンパク質は、マウスに腹腔内で注入することができ、生じる特異的な抗体は、例えば、心臓内血液穿刺によって供されるマウス血清から取得することができる。本発明はまた、記載の例で例示されるようにＤＮＡワクチン法を用いることによる内在性ポリペプチドおよび組み換えポリペプチドに対する特異的な抗体の生成が想定される。ＤＮＡワクチン法は、当該技術分野で周知であり、遺伝子銃またはジェット注射および筋肉内または皮下注射によるリポソーム介在送達を包含する。よって、ＴＤＰ－４３のポリペプチドもしくはタンパク質またはエピトープ、特に、本明細書で供される抗体のエピトープは、ＴＤＰ－４３の所望されるポリペプチドもしくはタンパク質またはエピトープ、特に、配列番号１のアミノ酸残基１８１～１９５、１９９～２１３、３０７～３２１、３５２～３６６、３８９～４１１、３９７～４１１、および１４０～２００内に存在する本発明の抗体のエピトープ、より具体的には、アミノ酸残基１８３～１８８、２０３～２１３、２０４～２０８、２０４～２１１、２０５～２１０、３１６～３２３、３５８～３６１、４００～４０５、４００～４０６、４００～４１２内に存在する本発明の抗体のエピトープを発現するベクターを筋肉内に直接注射することにより動物を直接免疫化することによって得ることができる。得られた特異的な抗体の量は、下記の本明細書にも記載されるＥＬＩＳＡを用いて定量化することができる。抗体の生成のためのさらなる方法は当該技術分野で周知であり、例えば、Harlow and Lane, "Antibodies, A Laboratory Manual", CSH Press, Cold Spring Harbor, 1988を参照のこと。
よって、特定のアッセイ条件下において、ＴＤＰ－４３の特定の抗体および対応するエピトープは、相互に結合し、試料中に存在するかなりの量の他の構成成分に結合しない。このような条件下での標的分析物への特異的な結合は、特定の標的分析物に対してその特性について選択される結合部分が必要とされうる。様々な免疫アッセイ方法が特定の抗原に特異的に反応する抗体を選択するために用いられてもよい。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、分析物と特異的な免疫反応性を有するモノクローナル抗体を選択するために日常的に用いられる。特異的な免疫反応性を調べるために用いることができる免疫アッセイ方法および条件の説明については、Shepherd and Dean (2000), Monoclonal Antibodies: A Practical Approach, Oxford University Pressおよび／またはHoward and Bethellを参照のこと。典型的には、特異的または選択的な反応は、ノイズによるバックグラウンドシグナルの少なくとも２倍、より典型的には、バックグラウンドより１０～１００倍以上高いものである。当業者は、新規のポリペプチドに対して特異的な結合分子を提供し、作成する位置にいる。特定の結合アッセイについては、望ましくない交差反応を回避するために容易に用いることができ、例えば、ポリクローナル抗体は、公知の方法によって容易に精製し、選択することができる（Shepherd and Dean, loc. citを参照のこと）。
抗体の「クラス」は、定常領域のタイプまたはその重鎖が有する定常領域を意味する。５つの主な抗体クラスが存在し（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ）、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けられうる。免疫グロブリンの異なるクラスに相当する重鎖定常領域は、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
ある実施態様において、本明細書で供される抗体のアミノ酸配列変異型が含まれる。例えば、それは、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を向上させることが望まれうる。抗体のアミノ酸配列変異型は、適切な改変を、抗体をコードするヌクレオチド配列に導入することによって、またはペプチド合成によって調製されうる。このような改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／または当該残基への挿入、および／または当該残基の置換が含まれる。欠失、挿入、および置換のいずれも組み合わせも、最終的な構築物が所望される特徴、例えば、抗原結合を有する限り最終的な構築物に作成することができる。
ある実施態様において、１つまたはそれ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異型が提供される。置換変異誘導のための目的の部位には、ＣＤＲおよびＦＲが含まれる。保存的置換は、「好ましい置換」の項目で表１に示されている。より多くの変化が「典型的な置換」の項目で表２において供され、アミノ酸側鎖クラスに関して下記でさらに記載される。アミノ酸置換が目的の抗体に導入され、その生成物を所望の活性、例えば、抗原結合の維持／改善、免疫原性の減少、またはＡＤＣＣまたはＣＤＣの向上についてスクリーニングされうる。
表１
Figure 2022533432000001
アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ化されうる：
（1）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向性に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスに変化させることを伴う。
置換変異型の１つのタイプは、親抗体の１つまたはそれ以上の超可変領域残基を置換することに関する（例えば、ヒト化またはヒト抗体）。一般に、さらなる研究のために選択される生じた変異型は、親抗体と比較して一定の生物学的特性（例えば、高い親和性、低い免疫原性）における改変（例えば、改良）を有するか、および／または親抗体の実質的に維持された一定の生物学的特性を有する。典型的な置換変異型は、例えば、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技術（例えば、本明細書に記載される技術）を用いて、利便的に作成されうる親和性成熟抗体である。簡単に説明すると、１つまたはそれ以上のＣＤＲ残基に変異を入れ、その変異型抗体をファージ上に提示し、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。
変換（例えば、置換）は、例えば、抗体の親和性を向上させるために、ＣＤＲにおいてなされてもよい。このような変換は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程の間に高頻度で変異が入るコドンによってコードされる残基（例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照のこと）、および／またはＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）においてなされ、同時に、生じた変異型ＶＨまたはＶＬを結合親和性について試験されてもよい。二次ライブラリーから構築し、再選択することによる親和性成熟は、例えば、Methods in Molecular Biology 178:1-37（O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001).）に記載されている。親和性成熟のある実施態様において、多様性は、様々な方法のいずれか（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング法（chain shuffling）、またはオリゴヌクレオチド指定変異誘発）によって成熟について選択される可変遺伝子に導入される。そして、二次ライブラリーが作成される。続いて、前記ライブラリーをスクリーニングして、所望される親和性を有する抗体変異型のいずれかを同定する。多様性を導入するための別の方法は、数個のＣＤＲ残基（例えば、１回に４～６残基）がランダム化されるＣＤＲ指定方法に関する。抗原結合に関するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャンニング変異誘発またはモデリングを用いて具体的に同定されうる。ＣＤＲ－Ｈ３およびＣＤＲ－Ｌ３は、特に標的とされることが多い。
ある実施態様において、置換、挿入、または欠失は、このような変換が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り１つまたはそれのＣＤＲ内で生じうる。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変換（例えば、本明細書で供される保存的置換）は、ＣＤＲでなされてもよい。このような変換は、ＣＤＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側であってもよい。上記で供される変異型ＶＨおよびＶＬ配列のある実施態様において、各ＣＤＲは、変換されないか、または１つ、２つ、または３つ以下のアミノ酸置換を含みうる。
変異誘発について標的とされうる抗体の残基または領域の同定に有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244: 1081-1085に記載されるように「アラニンスキャンニング変異誘発」と呼ばれる。この方法において、残基または標的残基の群（例えば、荷電した残基、例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＧｌｕ）は、抗体の抗原との相互作用が影響されるかどうかを決定するために、同定され、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）により置換される。さらなる置換が最初の置換に対して機能的な感受性を示すアミノ酸位置に導入されうる。代替的に、または加えて、抗原抗体複合体の結晶構造が抗体と抗原との間の接触点を同定するために用いられる。このような接触している残基と隣接する残基は、置換のための候補として標的とされるか、排除されうる。変異型は、所望される特性を有するかどうかを調べるためにスクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列の挿入には、１残基から１００またはそれ以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異型には、抗体のＮまたはＣ末端への、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ）またはポリペプチドの融合が含まれる。
ある実施態様において、本明細書で供される抗体は、抗体が糖化される程度を増加するか、または減少するように変換される。抗体への糖化部位の付加または欠失は、アミノ酸配列を１つまたはそれ以上の糖化部位を作り出すか、または取り除くように変換することによって利便的に行われうる。
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合している糖鎖が変換されてもよい。哺乳類細胞によって生成される内在性抗体は、典型的に、Ｆｃ領域のＣＨ２領域のＡｓｎ２９７へのＮ末端結合によって結合されている二分岐のオリゴ糖を含む。例えば、Wright et al., TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照のこと。前記オリゴ糖には、様々な糖鎖、例えば、マンノール、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐のオリゴ糖構造の「幹」においてＧｌｃＮＡｃに結合するフコースが含まれうる。ある実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変は、一定の向上した特性を有する抗体変異型を作り出すためになされうる。
１の実施態様において、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）結合するフコースを欠如する糖鎖構造を有する抗体変異型が提供される。例えば、このような抗体におけるフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％、または２０％～４０％でありうる。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、Ａｓｎ２９７に結合している全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を算出することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング；Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969)を参照のこと）に位置するアスパラギン残基を意味するが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小さな配列変化により２９７位の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位および３００位の間に位置しうる。このようなフコシル化変異型は、向上したＡＤＣＣ機能を有しうる。例えば、ＵＳ特許公開番号ＵＳ２００３／０１５７１０８（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照のこと。「脱フコシル化」または「フコース欠失」抗体変異型に関する文献の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；Ｗ０２００５／０５３７４２；Ｗ０２００２／０３１１４０；Okazaki et al., J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が挙げられる。脱フコシル化抗体を生成することができる細胞株の例として、タンパク質フコシル化を欠失するＬｅｃ １３ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；ＵＳ特許出願番号２００３／０１５７１０８Ａｌ（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）；およびＷＯ２００４／０５６３１２Ａｌ（Ａｄａｍｓら）、特に実施例１１）、およびノックアウト細胞株、例えば、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Bioteeh. Bioeng. 87: 614 (2004)；Kanda, Y. et al., Bioteehnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；およびＷ０２００３／０８５ｌ０７を参照のこと）が挙げられる。例えば、抗体のＦｃ領域に結合する二分岐のオリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分されたオリゴ糖を有する抗体変異型がさらに提供される。このような抗体変異型は、フコシル化の減少および／またはＡＤＣＣ機能の向上を示しうる。このような抗体変異型の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；およびＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合するオリゴ糖において少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異型もまた提供される。このような抗体変異型は、ＣＤＣ機能の向上を示しうる。このような抗体変異型は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）；ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；およびＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ある実施態様において、１つまたはそれ以上のアミノ酸の改変は、本明細書で供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによりＦｃ領域の変異型が作成されていてもよい。前記Ｆｃ領域の変異型は、１つまたはそれ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸の改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒト、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含みうる。
ある実施態様において、本発明は、ある程度ではあるが全てではないエフェクター機能を有する抗体変異型を意図しており、このことは、インビボでの抗体の半減期は重要であるが、一定のエフェクター機能（例えば、補体活性化およびＡＤＣＣ）は不要であるか、または有害である適用のための望ましい候補とする。インビトロおよび／またはインビボ細胞傷害性アッセイは、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の減少／喪失を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合（これによりＡＤＣＣ活性を欠失しうること）を欠失するが、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣを介在するための初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方、単球およびミクログリアは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３にまとめられている。目的分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例が米国特許第５５００３６２号に記載されている（例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) and Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；5,821,337（Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照のこと）を参照のこと）。
あるいは、非放射性アッセイ法が用いられてもよい（例えば、フローサイトメトリー用ＡＣＴＩ（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，カリフォルニア州のマウンテンビュー）；およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，ウィスコンシン州のマディソン）。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。
代替的に、または加えて、目的分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、モデル動物、例えば、Clynes et al., Proc. Nat'l Acad. sci. USA 95:652-656 (1998)に開示されるものにおいて、インビボで評価されうる。
Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体がＣｌｑに結合できず、それゆえ、ＣＤＣ活性を欠如することを確認するために行われてもよい。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２におけるＣｌｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが行われてもよい（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003);およびCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合およびインビボクリアランス／半減期の測定もまた、当該技術分野で公知の方法を用いて行うことができる（例えば、Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照のこと）。
減少したエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９のうちの１つまたはそれ以上の置換を有する抗体が含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。このようなＦｃ変異には、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、および３２７のうちの２つまたはそれ以上における置換を有するＦｃ変異（いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異（残基２６５および２９7のアラニンへの置換を有する）を含む）が含まれる（米国特許第７３３２５８１号）。あるいは、減少したエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域の残基２３４、２３５、および３２９のうちの１つまたはそれ以上の置換を有する抗体（いわゆる「ＰＧ－ＬＡＬＡ」Ｆｃ変異（残基２３４および２３５のアラニンへおよび３２９のグリシンへの置換を有する））が含まれる（Lo, M. et al., Journal of Biochemistry, 292, 3900-3908）。
ＦｃＲへの向上し、または低下した結合を有する一定の抗体変異型が記載されている（例えば、米国特許第６７３７０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２、およびShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照のこと）。
ある実施態様において、抗体変異型は、ＡＤＣＣを向上する１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、および／または３３４位における置換（残基のＥＵナンバリング）を有するＦｃ領域を含む。
ある実施態様において、変換は、例えば、米国特許第６１９４５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、およびIdusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に記載されるように、変化した（すなわち、向上し、または低下した）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じるＦｃ領域でなされる。
増加した半減期および向上した新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）（母性ＩｇＧから胎児への移行に関連する）への結合を有する抗体（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kirn et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａｌ（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を向上させる１つまたはそれ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異型には、hＦｃ領域の残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つまたはそれ以上の置換、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換を有するものが含まれる（米国特許第７３７１８２６号）。Ｆｃ領域の変異型の他の例については、Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)；米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；およびＷＯ９４／２９３５１も参照のこと。
ある実施態様において、システインで改変された抗体、例えば、抗体の１つまたはそれ以上の残基がシステイン残基で置換されている「チオＭＡｂ」を作成することが所望されうる。特定の実施態様において、残基の置換は、抗体の受容可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することにより、本明細書にさらに記載されるように、反応性チオール基を抗体の受容可能な部位に配置し、抗体を他の部分（例えば、薬物部分またはリンカー薬物部分）に抱合させて免疫コンジュゲートを作成させるために用いられてもよい。ある実施態様において、以下の残基のいずれか１つまたはそれ以上がシステインで置換されてもよい：軽鎖のＶ２０５（カバットナンバリング）；重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）；および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システインで改変された抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載されるように作成されてもよい。
ある実施態様において、本明細書で供される抗体は、当該技術分野で公知であり、容易に利用可能であるさらなる非タンパク質部分を含むようにさらに改変されてもよい。抗体の誘導体化に適する部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、以下に限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ１、３－ジオキソラン、ポリ１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびこれらの混合物質が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性により製造時に有効でありうる。前記ポリマーは、いずれの分子量のものであってもよく、分岐していてもよく、分岐していなくてもよい。抗体に結合されるポリマー数は、変動しうるものであり、１つ以上のポリマーが結合する場合、それらは同一のまたは異なる分子でありうる。一般に、誘導体化に用いられるポリマーの数および／またはタイプは、以下に限定されないが、改善されるべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が特定条件下で治療に用いられるかどうかなどを含む検討事項に基づいて決定することができる。
別の実施態様において、放射線への曝露により選択的に加熱されうる抗体および非タンパク質部分の抱合体が提供される。１の実施態様において、前記非タンパク質部分は、カーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)）。前記放射線は、いずれの波長のものであってもよく、以下に限定されないが、通常の細胞に害を及ぼさないが、非タンパク質部分を抗体－非タンパク質部分の近位にある細胞が死滅される温度まで加熱する波長が含まれる。
抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されるような、組み換え方法および組成物を用いて生成されうる。１の実施態様において、本明細書に記載の抗ミスフォールドＴＤＰ－４３抗体をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードしうる。さらなる実施態様において、このような核酸を含む１つまたはそれ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施態様において、このような核酸を含む宿主細胞が提供される。１のこのような実施態様において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列およびＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクターおよび抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、形質転換される）。１の実施態様において、前記宿主細胞は、真核生物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ球系細胞（例えば、ＹＯ、ＮＳＯ、Ｓｐ２０）である。１の実施態様において、抗ミスフォールドＴＤＰ－４３抗体を生成するための方法であって、上記で供されるような、前記抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、前記抗体の発現に適する条件下において培養し、必要に応じて、前記抗体を前記宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することを含む方法が提供される。
抗ミスフォールドＴＤＰ－４３抗体の組み換え生成のために、例えば、上記に記載されるような抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞または無細胞発現系におけるさらなるクローン化および／または発現のための１つまたはそれ以上のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離され、従来の方法を用いて（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることより）、配列決定されうる。
抗体をコードするベクターのクローン化または発現のために適する宿主細胞には、本明細書に記載の原核生物または真核生物の細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に、糖化化およびＦｃエフェクター機能が必要とされていない場合、細菌中で生成されてもよい。細菌中の抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７、５７８９１９９、および５８４０５２３号を参照。（Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現を開示するCharlton, Methods in Molecular Biology, Val. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254も参照のこと）。発現後、前記抗体は、可溶性フラクション中の細菌細胞ペーストから単離され、さらに精製されうる。
原核生物に加え、真核生物の微生物、例えば、糸状菌または酵母は、真菌および酵母株（これらの糖化経路は、部分的または全部のヒト糖化パターンを有する抗体の生成を生じる「ヒト化」される）を含む、抗体をコードするベクターのために適するクローン化または発現宿主である。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), and Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照のこと。
糖化された抗体の発現に適切な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）に由来する。無脊椎物の細胞の例には、植物および昆虫細胞が含まれる。特に、スポドプテラ・フルギペルダ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて用いられうる多くのバキュロウイルス株が同定されている。
植物細胞の培養物は、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７、６０４０４９８、６４２０５４８、７１２５９７８、および６４１７４２９号（トランスジェニック植物において抗体を生成するためのＰＬ抗体（登録商標）技術を記載する）を参照のこと。
脊椎動物の細胞もまた、宿主として用いられてもよい。例えば、浮遊で増殖させるために用いられる哺乳類動物の細胞株が有用でありうる。有用な哺乳類の宿主細胞株の他の例として、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたマカク腎臓ＣＶｌ株；ヒト胚性腎臓株（Graham et al., J. Gen Viral. 36:59 (1977)に記載される２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）；マカク腎臓細胞（ＣＶｌ）；アフリカグリーンモンキー腎臓細胞（ＶＥＲ０－７６）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨｅＬａ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗｌ３８）；ヒト肝臓細胞（ＨｅｐＧ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えば、Mather et al., Annals N. Y Aead. Sei. 383:44-68 (1982)に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞細部には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＤＨＦＲ ＣＨＯ細胞を含む）（Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. cii. USA 77:4216 (1980)）；ならびにミエローマ細胞株、例えば、ＹＯ、ＮＳＯ、およびＳｐ２／０が含まれる。抗体生成に適する一定の哺乳類宿主細胞株の総説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Val. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照のこと。
本発明のＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体を生成するための方法は、
ａ．結合分子、特に抗体を生成するのに適した条件下において、適した宿主細胞または無細胞発現系を培養し；次いで
ｂ．結合分子、特に抗体を単離すること
工程を含んでいてもよい。適切な培養および単離技術は、当業者が利用することができる。
本明細書で供される抗ＴＤＰ－４３抗体は、当該技術分野公知の様々なアッセイによって、それらの物理学／化学的特性および／または生物学的活性について同定され、スクリーニングされ、または特徴付けられてもよい。
１の態様において、本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＦＡＣＳ、免疫蛍光法、または免疫組織化学などの公知の方法によって、その抗原結合活性について試験される。
別の態様において、競合アッセイは、ミスフォールドされたＴＤＰ－４３への結合について本明細書に記載の抗体のいずれかと競合する抗体を同定するために用いられうる。ある実施態様において、このような競合する抗体は、本明細書に記載の抗体によって結合されるエピトープと同一のエピトープ（例えば、線状または立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な典型的な方法は、Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，ニュージャージー州トトワ)で供される。
典型的な競合アッセイにおいて、固定化されたＴＤＰ－４３は、ＴＤＰ－４３（例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか）に結合する第１の標識された抗体および第２の標識されていない抗体を含む溶液中でインキュベートされ、ＴＤＰ－４３への結合について前記第１の抗体と競合するその能力を試験される。コントロールとして、固定化されたＴＤＰ－４３は、前記第１の標識された抗体を含むが、前記第２の標識されていない抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。前記第１の抗体のＴＤＰ－４３への結合を可能にする条件下でのインキュベート後、過剰の結合していない抗体を除去し、固定化されたＴＤＰ－４３に結合した標識の量を測定する。固定化されたＴＤＰ－４３に結合した標識の量が、コントロール試料と比較して試験試料において実質的に減少している場合、前記第２の抗体が、ＴＤＰ－４３への結合について前記第１の抗体と競合することを示す。Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照のこと。
本発明はまた、１つまたはそれ以上の治療剤、例えば、化学療法剤または薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク毒素、酵素学的に活性な毒素（細菌、真菌、植物、もしくは動物由来）、またはこれらの断片）、放射性同位体（すなわち、放射性コンジュゲート）、血液脳関門通過部分、または検出可能な標識に抱合された、本明細書で供される抗ＴＤＰ－４３抗体を含む免疫コンジュゲートを提供する。
本発明の別の態様において、上記に記載されるＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害、異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の治療、予防、および／または診断に有用な材料を含む製品が提供される。前記製品は、容器および前記容器上もしくは添付のラベルまたは添付文書を含む。適する容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静脈注射（ＩＶ）用溶液バッグなどが挙げられる。前記容器は、様々な原料、例えば、ガラスまたはプラスチックから形成されていてもよい。前記容器は、それ自体の組成物、または疾患を治療し、予防し、および／または診断するために有効な別の組成物と合わせた組成物を含有し、滅菌した開閉口を備えていてもよい（例えば、前記容器は、皮下注射ニードルによって突き刺し可能なストッパーを備える静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。前記組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体である。前記ラベルまたは添付文書は、その組成物が適切な疾患を治療するために使用されることを表示する。さらに、前記製品は、（ａ）そこに含まれる組成物を有する第１の容器（前記組成物は本発明の抗体を含む）；ならびに（ｂ）そこに含まれる組成物を有する第２の容器（前記組成物はさらなる治療剤を含む）第２の容器を含みうる。本発明のこの実施態様における製品は、前記組成物が特定の疾患を治療するために使用できることを示す添付文書をさらに含んでいてもよい。代替的に、または加えて、前記製品は、医薬的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、およびデキストロース溶液を含む第２（または第３）の容器をさらに含んでいてもよい。他の緩衝液、希釈液、フィルター、ニードル、およびシリンジを含む商業的におよび使用者の立場から望まれる他の材料がさらに含まれてもよい。
上記製品のいずれもが、抗ＴＤＰ－４３抗体の代わりに、または加えて本発明の免疫コンジュゲートを含んでいてもよいことが理解される。
例示的なＴＤＰ－４３特異的結合分子または抗体
本発明のある実施態様において、抗体は：
ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｇ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
ｊ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；あるいは
ｋ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む。
ある実施態様において、抗体は：
ａ．配列番号１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｂ．配列番号２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｃ．配列番号３０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｄ．配列番号４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｅ．配列番号６０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号６４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｆ．配列番号７０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｇ．配列番号８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号８４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｈ．配列番号１００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１０４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｉ．配列番号１２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｊ．配列番号１４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｋ．配列番号１５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
ある実施態様において、抗体は：
ａ．配列番号１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｂ．配列番号２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｃ．配列番号３０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｄ．配列番号４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｅ．配列番号６０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号６４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｆ．配列番号７０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｇ．配列番号８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号８４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｈ．配列番号１００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１０４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｉ．配列番号１２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
ｊ．配列番号１４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；あるいは
ｋ．配列番号１５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
ある実施態様において、本発明は、本明細書でさらに記載されるように、ハイブリドーマクローン６３１Ｂ２Ａ２、６３３Ｂ１２Ｃ８、６３４Ｈ１０Ｈ７、６３６Ｅ５Ｂ８、６４１Ｈ１Ｅ７、６４２Ａ１０Ｂ１１、６４２Ｄ１２Ｂ４、６４６Ｂ７Ｆ７、７１２Ａ６Ｂ１０、８０９Ｄ９Ｃ２、または８０９Ｆ１２Ｄ８に由来する抗体に関する。
ある実施態様において、本発明は、本明細書でさらに記載されるように、ＡＣＩ－７０６９－６３１Ｂ２－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６３４Ｈ１０－Ａｂ２、ＡＣＩ－７０６９－６３６Ｅ５－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６４１Ｈ１－Ａｂ２、ＡＣＩ－７０６９－６４２Ａ１０－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６４６Ｂ７－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０７１－７１２Ａ６－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０７１－８０９Ｄ９－Ａｂ２、およびＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１から選択される抗体に関する。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、本明細書に記載の抗体をコードする。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１９を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２９を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３９を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号４８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号４９を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号６８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号６９を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号７８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号７９を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号８８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号８９を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１０８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１０９を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１２８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１２９を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１４８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１４９を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１５８を含む。
いくつかの実施態様において、（単離された）核酸が提供されるものであって、前記（単離された）核酸は、抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１５９を含む。
ＸＩＩ．組成物および方法
ある実施態様において、免疫コンジュゲートが提供され、前記免疫コンジュゲートは、本明細書に記載の（単離された）抗体および治療剤を含む。ある実施態様において、本明細書に記載の抗体および検出可能な標識を含む標識された抗体が提供される。
ある実施態様において、本明細書に記載の（単離された）抗体および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
ある実施態様において、本発明のＴＤＰ－４３特異的結合分子は、検出可能な標識に結合されている。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している免疫コンジュゲートの一部である。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子またはこれを含む免疫コンジュゲートは、ＴＤＰ－４３特異的結合分子およびＴＤＰ－４３アゴニストおよび同種分子、またはこれらのアンタゴニストを含む組成物として存在する。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、ＴＤＰ－４３特異的結合分子または免疫コンジュゲート（前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している）を含む医薬組成物、あるいはＴＤＰ－４３特異的結合分子およびＴＤＰ－４３アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを、医薬的に許容される担体と組み合わせて含む組成物の一部である。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、ＴＤＰ－４３特異的結合分子または免疫コンジュゲート（前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している）を含む検出および／または診断キット、あるいはＴＤＰ－４３特異的結合分子およびＴＤＰ－４３アゴニストおよび同種分子、またはこれらのアンタゴニストを含む組成物の一部である。
本発明の結合分子を含むキットもまた提供される。特に、このようなキットは、本発明の診断方法（分類、モニター、および治療選択方法を含む）を行うために有用でありうる。よって、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の診断のためのキット、または本発明のＴＤＰ－４３特異的結合分子を含む本発明の方法で使用するためのキットが提供される。このようなキットは、本明細書で提供される方法を行うために必要な全ての構成要素を含んでいてもよい。典型的には、各構成要素は、１つの全体のパッケージに別々に保管される。キットに含まれる適切なさらなる構成要素は、例えば、緩衝液、検出可能な色素、実験装置、反応容器、説明書などである。使用説明書は、キットが使用される特定の方法に合わせて調整されうる。本発明の適切に標識されたＴＤＰ－４３結合分子もまた提供され、これはこのようなキットに含まれうる。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、ＴＤＰ－４３タンパク質症の予防、診断または治療における使用のための免疫診断方法で用いられる。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、ＴＤＰ－４３タンパク質症の予防または治療のための免疫療法であって、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子、または免疫コンジュゲート（前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している）、あるいはＴＤＰ－４３特異的結合分子およびＴＤＰ－４３アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物の有効量がそれを必要とする対象に投与される免疫療法の一部である。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子または免疫コンジュゲート（前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子が、別の適当な治療剤に共有結合している）、あるいはＴＤＰ－４３特異的結合分子およびＴＤＰ－４３アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物は、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）を含むが、これらに限定されない、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断し、予防し、軽減し、または治療するためにそれを必要とする対象に投与される。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子または免疫コンジュゲート（前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子が、別の適当な治療剤に共有結合している）、あるいはＴＤＰ－４３特異的結合分子およびＴＤＰ－４３アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物は、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）（例えば、孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うか、または伴わず、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異を有し、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を有し、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異を有し、染色体９ｐに関連するもの、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒病、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢変異性原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）など）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例えば、孤発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異を有する）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ）（散発性および家族性のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３；マシャド・ジョセフ病としても公知））、海馬硬化症認知症およびミオパチー（孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異を有する封入体ミオパチー（骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う））、眼咽頭筋型筋ジストロフィー（縁取り空胞を伴う）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択されるＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断し、またはモニターするための方法に使用するためにそれを必要とする対象に投与される。
他の実施態様において、本発明は、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、および大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）から選択される、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を検出し、診断し、またはモニターするための方法に関する。
好ましくは、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、および前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）から選択される。より好ましくは、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。より好ましくは、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症は、アルツハイマー病（ＡＤ）である。より好ましくは、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症は、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）である。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、発症前の疾患を診断するため、または疾患の進行および治療の有効性をモニターするため、または応答性を予測するため、またはＴＤＰ－４３特異的結合分子による治療に応答する可能性が高い対象を選択するための方法で用いられる。前記方法は、好ましくは、ヒトの血液または尿の試料を用いて行われる。最も好ましくは、前記方法は、ＥＬＩＳＡに基づくアッセイまたは表面適合アッセイを含む。
ある実施態様において、ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、本発明のＴＤＰ－４３特異的結合分子を試料（例えば、血液、脳脊髄液、または脳組織）と接触させることにより、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）（例えば、孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うか、または伴わず、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異を有し、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を有し、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異を有し、染色体９ｐに関連するもの、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒病、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢変異性原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）など）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例えば、孤発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異を有する）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ）（散発性および家族性ＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３；マシャド・ジョセフ病としても公知））、海馬硬化症認知症およびミオパチー（孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異を有する封入体ミオパチー（骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う））、眼咽頭筋型筋ジストロフィー（縁取り空胞を伴う）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択される疾患を検出し、診断し、またはモニターするための方法で用いられる。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子または免疫コンジュゲート（前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している）、あるいはＴＤＰ－４３特異的結合分子およびＴＤＰ－４３アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物は、それを必要とする対象に投与され、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、または前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性のＡＤを含む）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、および／またはパーキンソン病（ＰＤ）を予防し、軽減し、または治療するために用いられる。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子または免疫コンジュゲート（前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している）、あるいはＴＤＰ－４３特異的結合分子およびＴＤＰ－４３アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物は、それを必要とする対象に投与され、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）（例えば、孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うか、または伴わず、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異を有し、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を有し、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異を有し、染色体９ｐに関連するもの、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒病、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢変異性原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）など）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例えば、孤発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異を有する）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ）（散発性および家族性ＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３；マシャド・ジョセフ病としても公知））、海馬硬化症認知症およびミオパチー（孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異を有する封入体ミオパチー（骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う））、眼咽頭筋型筋ジストロフィー（縁取り空胞を伴う）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択される疾患を治療するために用いられる。好ましくは、前記疾患治療は、精神的な認識を保持し、または上昇させることを補助し、および／または脳内のＴＤＰ－４３凝集体のレベルを低下させる。
ある実施態様において、前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子または免疫コンジュゲート（前記ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している）、あるいはＴＤＰ－４３特異的結合分子およびＴＤＰ－４３アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物は、それを必要とする対象に投与され、それを必要とする対象に投与され、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク症、または前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性のＡＤを含む）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、および／またはパーキンソン病（ＰＤ）の治療剤を製造するために用いられる。
本明細書に記載される抗ＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートの医薬製剤は、このような抗体または免疫コンジュゲート（望ましい純度を有する）を、凍結乾燥製剤または水溶液の形態において、１つまたはそれ以上の任意の医薬的に許容される担体（Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. （1980））と混合することによって調製される。医薬的に許容される担体は、用いられる用量および濃度でレシピエントに対して一般的に非毒性であり、以下に限定されないが、緩衝液（例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸）；抗酸化剤（アスコルビン酸およびメチオニンを含む）；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル（octadecyldimethylbenzyl）塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン（例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基以下）ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン）；単糖類、二糖類、および他の糖類（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖類（例えば、ショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚｎタンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））が挙げられる。本明細書に記載の典型的な医薬的に許容される担体には、介在性（interstitial）薬物分散剤、例えば、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標），Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ）がさらに含まれる。一定の典型的なＨＡＳＥＧおよび使用方法（ｒＨｕＰＨ２０を含む）は、ＵＳ特許公開第２００５／０２６０１８６および２００６／０１０４９６８号に記載されている。１の態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つまたはそれ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼ（glycosaminoglycanase）（例えば、コンドロイチナーゼ）と組み合わされる。
典型的な凍結乾燥された抗体または免疫コンジュゲート製剤が米国特許第６２６７９５８号に開示されている。水性抗体または免疫コンジュゲート製剤には、米国特許第６１７１５８６号およびＷ０２００６／０４４９０８に記載されるものが含まれ、後者の製剤には、ヒスチジン酢酸緩衝液が含まれる。
本明細書に記載の製剤はまた、治療される特定の効能のために必要に応じて１つ以上の活性成分、好ましくは、相互に有害な効果を生じない相補的な活性を有するものが含まれてもよい。
活性成分は、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョンにおいて、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル中にそれぞれ封入されていてもよい。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. （1980）に開示されている。
徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性製剤の適する例には、前記抗体または免疫コンジュゲートを含む固形疎水性ポリマーの半浸透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、成形された製品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。インビボ投与に用いられる製剤は、一般に、無菌である。無菌は、例えば、滅菌ろ過膜による濾過により容易に行われうる。
本明細書で供される抗原結合分子、抗ＴＤＰ－４３抗体、または免疫コンジュゲートのいずれもが方法、例えば、治療方法で用いられてもよい。
別の態様において、医薬として使用するための抗ＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートが提供される。さらなる態様において、治療方法における使用のための抗ミスフォールドＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートが提供される。ある実施態様において、ＴＤＰ－４３タンパク質症の予防、診断、および／または治療における使用のための抗ＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートが提供される。本発明の好ましい実施態様において、抗ＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートは、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、および／または大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）を含むが、これらに限定されないＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の予防、診断、および／または治療における使用のために提供される。
さらなる態様において、本発明は、医薬の製造または調製における抗ＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートの使用を提供する。１のこのような実施態様において、前記方法は、少なくとも１つのさらなる治療剤（例えば、下記に記載のもの）の有効量を前記個体に投与することをさらに含む。
上記実施態様のいずれかによる「対象」または「個体」は、動物、哺乳類、好ましくは、ヒトでありうる。
さらなる態様において、本発明は、例えば、上記治療方法のいずれかで使用するための、本明細書で供される抗ＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートのいずれかを含む医薬製剤を提供する。１の実施態様において、医薬製剤は、本明細書で供される抗ＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートのいずれかおよび医薬的に許容される担体を含む。別の実施態様において、医薬製剤は、本明細書で供される抗ＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートのいずれかおよび少なくとも１つのさらなる治療剤（例えば、下記に記載のもの）を含む。
本発明の抗体または免疫コンジュゲートは、治療において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて用いることができる。例えば、本発明の抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートは、少なくとも１つのさらなる治療剤と共投与されてもよい。
上記に記載されるこのような併用療法には、合わせた投与（２つまたはそれ以上の治療剤が同一または別の製剤に含まれる）および別々の投与が含まれ、別々の投与の場合、本発明の抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートの投与は、さらなる治療剤および／またはアジュバントの投与前、投与と同時、および／または投与後に行うことができる。本発明の抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートはまた、放射線治療と組み合わせて用いることもできる。
本発明の抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲート（およびさらなる治療剤）は、非経口、肺内、および鼻腔内、必要に応じて、局所療法、病巣内投与、子宮内、または膀胱内投与を含むいずれかの適する方法によって投与することができる。非経口吸入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、いずれかの適する経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射によって、投薬が短期または慢性であるどうかに一部応じて行われうる。様々な投薬スケジュール（様々な時点における単回もしくは複数回投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含むが、これらに限定されない）が本明細書で意図される。
本発明の抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートは、適切な医療行為に相当する形で製剤化され、投薬され、投与されうる。本発明で考慮する因子としては、治療されるＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する特定の疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症、治療される特定の哺乳類動物、各対象の臨床的状態、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の病因、薬剤の送達部位、投与方法、投薬スケジュール、および医療従事者に公知の他の因子が挙げられる。前記抗体または免疫コンジュゲートは、問題となるＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を予防し、または治療するために現在用いられている１つまたはそれ以上の薬剤を必要としないが、適宜製剤化されてもよい。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体または免疫コンジュゲートの量、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症、あるいは治療のタイプ、および上記に記載の他の因子に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されるものと同一用量と投与経路、あるいは本明細書に記載される用量の約１～９９％、あるいは適切であると経験的／臨床的に決定されるいずれかの用量といずれかの経路で用いられる。
疾患の予防または治療において、（単独で、または１つもしくはそれ以上の他のさらなる治療剤と組み合わせて用いられる場合の）本発明の抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートの適当な用量は、治療されるべき疾患のタイプ、抗体または免疫コンジュゲートのタイプ、疾患の重症度と経過、抗体または免疫コンジュゲートが予防もしくは治療目的で投与されるかどうか、過去の治療歴、対象の病歴と抗体または免疫コンジュゲートに対する応答性、ならびに治療者の判断に依存する。抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートは、一度に、または一連の治療期間をかけて対象に適切に投与される。疾患のタイプおよび重症度に応じて、抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートの約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）は、１回またはそれ以上の別々の投与または持続注入による対象への投与のための最初の候補用量でありうる。１の典型的な１日用量は、上記に記載の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲でありうる。数日間またはそれ以上にわたる繰り返し投与については、その状態に応じて、治療は、一般に、疾患の所望される抑制が生じるまで持続される。抗体または免疫コンジュゲートの１の典型的な用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。よって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはこれらのいずれかの組み合わせ）の１回またはそれ以上の用量が対象に投与されてもよい。このような用量は、例えば、（例えば、対象が抗体の約２回～約２０回分または例えば、約３回分の用量を受容するように）毎週または３週間に１回、断続的に投与されてもよい。最初の高い投与用量、続いて１回またはそれ以上の低用量が投与されてもよい。しかしながら、他の投薬計画も有用でありうる。この治療の過程は、従来技術およびアッセイによって容易にモニターされる。
上記製剤または治療方法のいずれもが本発明の免疫コンジュゲートおよび抗ＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）の両方を用いて行われてもよいことが理解される。
本発明の別の態様において、上記に記載のＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の治療、予防、および／または診断に有用な材料を含む製品が提供される。前記製品は、容器および前記容器上もしくは添付のラベルまたは添付文書を含む。適する容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静脈注射（ＩＶ）用溶液バッグなどが挙げられる。前記容器は、様々な原料、例えば、ガラスまたはプラスチックから形成されていてもよい。前記容器は、それ自体の組成物、またはＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を治療し、予防し、および／または診断するために有効な別の組成物と合わせた組成物を含有し、滅菌した開閉口を備えていてもよい（例えば、前記容器は、皮下注射ニードルによって突き刺し可能なストッパーを備える静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。前記組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体である。前記ラベルまたは添付文書は、その組成物が適切な疾患を治療するために使用されることを表示する。
さらに、前記製品は、（ａ）そこに含まれる組成物を有する第１の容器（前記組成物は本発明の抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましいタイプ）または免疫コンジュゲートを含む）；ならびに（ｂ）そこに含まれる組成物を有する第２の容器（前記組成物はさらなる治療剤を含む）第２の容器を含みうる。本発明のこの実施態様における製品は、前記組成物が特定の疾患を治療するために使用できることを示すをさらに含んでいてもよい。代替的に、または加えて、前記製品は、医薬的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、およびデキストロース溶液を含む第２（または第３）の容器をさらに含んでいてもよい。他の緩衝液、希釈液、フィルター、ニードル、およびシリンジを含む商業的におよび使用者の立場から望まれる他の材料がさらに含まれてもよい。
さらなる実施態様において、本発明は、対象において、認知記憶能力、運動、および言語機能を維持し、または増加させ、あるいは認知記憶能力、運動、および言語機能の減退を予防し、および／または遅延させる方法であって、本発明の結合分子、本発明の免疫コンジュゲート、本発明の組成物、または本発明の医薬組成物を投与することを特徴とする方法に関する。
さらなる実施態様において、本発明は、ＴＤＰ－４３のレベルを減少させる方法であって、本発明の結合分子、本発明の免疫コンジュゲート、本発明の組成物、または本発明の医薬組成物を投与することを含む方法に関する。
本発明の方法は、少なくとも１つのさらなる治療を投与すること含んでいてもよく、前記さらなる治療は、以下に限定されないが、神経薬、抗Ａベータ抗体、抗タウ抗体、タウ凝集阻害因子、ベータアミロイド凝集阻害因子、抗ＢＡＣＥ１抗体、およびＢＡＣＥ１阻害因子から選択される。
本発明は、さらに、ＴＤＰ－４３を検出する方法であって、試料を本発明の結合分子と接触させることを含み、好ましくは、前記試料は、脳試料、脳脊髄液試料、尿試料、または血液試料である方法に関する。
実施例１：ＴＤＰ－４３ワクチン組成物の調製
リポソームを基にしたワクチンを、ＷＯ２０１２／０５５９３３で公開されたプロトコルに従って調製した。全長ＴＤＰ－４３（ＦＬ ＴＤＰ－４３）タンパク質を抗原として含むワクチン（表２、配列番号１）を抗体生成に用いた。

表２：ＴＤＰ－４３タンパク質およびペプチド抗原の記載
Figure 2022533432000002
実施例２：抗ＴＤＰ－４３抗体の生成
Ａ．マウスの免疫化
雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊ ＯｌａＨｓｄ（Ｃ５７ＢＬ／６）およびＢＡＬＢ／ｃ ＯｌａＨｓｄ（ＢＡＬＢ／ｃ）野生型マウス（Ｈａｒｌａｎ，ＵＳＡ）の９週齢に投与した。ワクチン接種を１０週目で開始した。マウスに、アジュバントとしてモノホスホリルヘキサアシルリピドＡ，３－デアシル（合成）（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））の存在下でリポソームの表面上に提示させた全長ＴＤＰ－４３タンパク質をワクチン接種した。
マウスに、皮下注射（ｓｃ）によって０、４、８、２１、３５、および６０日目にワクチン接種した。マウスから採血し、免疫化の７日前（免疫前血漿）、ならびに最初の免疫化後１４、２８、４２、８１、および１２１日目にヘパリン化血漿を調製した。骨髄腫融合に使用したマウスを、アジュバントなしの腹腔内注射によりＴＤＰ－４３タンパク質の３回の１日１回の追加免疫注射でさらにワクチン接種した。
ワクチン反応をマウス血漿において測定した。免疫化したマウスからの血漿由来抗体の固定化された組換え全長（ＦＬ）ＴＤＰ－４３への結合は、ＴＤＰ－４３に対する抗体の高い力価を示した。
Ｂ．ハイブリドーマの生成とサブクローニングの選択
マウスを安楽死させ、骨髄腫細胞との融合を、４匹の各マウスからの脾細胞を用いて行った。融合に成功したハイブリドーマ細胞株からの抗体のスクリーニングを、以下のように実施した。希釈した（１：３２）細胞培養上澄み物を、Ｌｕｍｉｎｅｘビーズに基づくｍｕｌｔｉｐｌｅｘアッセイ（Ｌｕｍｉｎｅｘ，オランダ）を用いて分析した。ＬｕｍｉｎｅｘビーズをＦＬ ＴＤＰ－４３に結合させ、ＩｇＧを、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ、およびＩｇＧ３サブクラスに特異的な抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，ＵＳＡ）を用いて捕捉した。ＦＬ ＴＤＰ－４３に結合させたビーズへの結合により、ＦＬＴＤＰ－４３リポソームワクチンで免疫したマウスに由来する３８６個のヒットを同定した。
生存するハイブリドーマを、血清を含む選択培地を用いて増殖させた。ヒトＦＴＤ脳内のＴＤＰ－４３封入体に優先的に結合するクローン、およびＴＤＰ－４３のＣ末端に結合するクローンをさらにサブクローニングするために選択した。限界希釈後、クローンハイブリドーマを低免疫グロブリン含有培地で増殖させ、安定なコロニーを、抗体のスクリーニングおよび選択のために選択した。表３に示す抗体をこのスクリーニングから同定した。
実施例３：結合効率の決定（ＥＣ５０）
抗体の段階希釈を伴うＬｕｍｉｎｅｘアッセイを前記のように行い、抗体のＦＬ ＴＤＰ－４３への結合の最大有効濃度の半量（ＥＣ５０）を決定した。全てのＥＣ５０値を表３にまとめる。要約すると、全ての試験抗体は、全長ＴＤＰ－４３に高い親和性で結合する。

表３：Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイによって決定したＥＣ５０値
Figure 2022533432000003
実施例４：ヒトＦＬＴＤＰ－４３に結合する抗体
ｍｌのヒトＦＬ ＴＤＰ－４３に結合する抗体を、間接ＥＬＩＳＡを用いて決定した。１μｇ／ｍｌのヒトＦＬＴＤＰ－４３によるＥＬＩＳＡプレートのコーティングを、４℃にて炭酸緩衝液中で終夜行った。該プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄し、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ中の１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で３７℃にて１時間ブロッキングした。次に、ハイブリドーマ上澄み物から精製した抗体を、１μｇ／ｍｌから３倍段階希釈中に加え、３７℃で２時間インキュベートし、該プレートを洗浄した。ＡＰ結合抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，英国）を、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ中で１／１０００希釈にて３７℃で１時間加えた。最終洗浄後、プレートをｐＮＰＰ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，スイス）ホスファターゼ基質溶液とインキュベートし、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ，スイス）を用いて４０５ｎｍで読み取った。全ての試験したクローンは、全長ＴＤＰ－４３に対して１０～１５６７ｎｇ／ｍｌの範囲の様々なＥＣ５０値で結合する（表４）。

表４：ＥＬＩＳＡによるＥＣ５０値
Figure 2022533432000004
実施例５：ＥＬＩＳＡおよびペプチドアレイによるエピトープマッピング
無血清ハイブリドーマ上澄み物から精製した抗体を、間接ＥＬＩＳＡアッセイによりスクリーニングして、４０～６６ａａの線状ペプチド、またはＮ末端がビオチン化され、ＴＤＰ－４３の全配列を９ａａオフセットと６ａａオーバーラップでカバーする１５ｍｅｒペプチドのライブラリーを用い、結合領域を決定した。ペプチド配列を表５に示す。
９６ウェルプレートを５μｇ／ｍｌの非ビオチン化ペプチドで４℃にて炭酸緩衝液で終夜コーティングした。該プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄し、次いで０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ中の１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で３７℃にて１時間ブロッキングした。次に、ハイブリドーマ上澄み物から精製した抗体を１μｇ／ｍｌで加え、３７℃で２時間インキュベートし、プレートを洗浄した。ＡＰ結合抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，英国）を、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで１／１０００希釈にて３７℃で１時間加えた。最終洗浄後、該プレートをｐＮＰＰ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，スイス）ホスファターゼ基質溶液とインキュベートし、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ，スイス）を用いて４０５ｎｍで読み取った。
ビオチン化ペプチドの場合、９６ウェルのストレプトアビジンでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを、５μｇ／ｍＬのビオチン化させた１５ｍｅｒペプチドとインキュベートした。該プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで３回洗浄し、次いで０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ中の１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で３７℃にて１時間ブロッキングした。次に、ハイブリドーマ上澄み物から精製した抗体を、１μｇ／ｍｌで加え、３７℃で２時間インキュベートし、プレートを洗浄した。ＡＰ結合抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，英国）を、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで１／１０００希釈にて３７℃で１時間加えた。最終洗浄後、プレートを、ＡＰ基質溶液であるｐＮＰＰ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，スイス）とインキュベートし、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ）を用いて４０５ｎｍで読み取った。決定した結合領域を表６に示す。試験抗体は、以下のペプチド：ＴＰ－２１、ＴＰ－２３、ＴＰ－３５、ＴＰ－４０、ＴＰ－４８、ＴＤＰ－６（それぞれ配列番号１の領域１８１－１９５、１９９－２１３、３０７－３２１、３５２－３６６、３８９－４１１、１４０－２００に対応）に結合することが見出された。
より正確な線状エピトープを、固体支持体上で直接合成し、１ａａオフセットおよび１４ａａオーバーラップ（Ｐｅｐｓｃａｎ，オランダ）を有する配列番号１によるＴＤＰ－４３の全配列をカバーする１５ｍｅｒペプチドのライブラリーを用いてマッピングした。ペプチドアレイを馬の血清および卵白アルブミンでブロックし、０．７５～５μｇ／ｍｌの濃度の精製抗体溶液と４℃で終夜インキュベートした。洗浄後、該ペプチドアレイ物をウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰコンジュゲート（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＵＳＡ）の１／１０００希釈液と２５℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’－アジノ－ジ－３－エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）および２０μｌ／ｍｌの３％のＨ２Ｏ２を加えた。１時間後、電荷結合装置（ＣＤＤ）（カメラおよび画像処理システム）を用いて発色を定量化した。これらの結合領域は、エピトープマッピングにより確認し、以下のエピトープ（表６に提供）を同定した：配列番号１のａａ１８３～１８８、２０３～２１３、２０４～２０８、２０４～２１１、２０５～２１０、３１６～３２３、３５８～３６１、４００～４０５、４００～４０６、４００～４１２。

表５：ＥＬＩＳＡによる結合領域の決定に用いたペプチド
Figure 2022533432000005
表６：試験した抗体の結合領域とエピトープ
Figure 2022533432000006
実施例６：免疫組織化学によるＦＴＤ／ＡＬＳ対象からの脳組織におけるＴＤＰ－４３の検出
標的の関与を、ＦＴＤ対象の脳からの組織の免疫組織化学実験で評価した。ヒトＦＴＤ脳組織は、アムステルダムのオランダ神経科学研究所のオランダ脳バンク（オープンアクセス：www.brainbank.nl）および神経障害のクイーンスクエア脳バンク（ＵＣＬ）から入手した。全ての材料は、研究目的のための脳の剖検および材料と臨床情報の使用に関する書面によるインフォームドコンセントが前記脳バンクによって取得されたドナーから収集した。免疫組織化学を、検出のために蛍光標識された二次抗体を用いて、厚さ１０μｍの凍結切片で行った。以下の抗体をコントロールとして用いた：病変封入体および生理学的核ＴＤＰ－４３を検出するためのウサギポリクローナル汎ＴＤＰ－４３抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ，１０７８２－２－ＡＰ）；病変の凝集されリン酸化されたＴＤＰ－４３を検出するためのウサギモノクローナルホスホＴＤＰ－４３ｐ４０９／４１０抗体（Ｃｏｓｍｏｂｉｏ，ＴＩＰ－ＰＴＤ－Ｐ０２）；および非特異的バックグラウンドを検出するための一次抗体を含まない二次抗体（Ｎｏ１ Ａｂ）。
本発明の全ての抗体は、核、非凝集、ならびに凝集ＴＤＰ－４３に結合する。本発明のいくつかの抗体は、Ａ型病変における細胞質内の凝集されたＴＤＰ－４３に優先的に結合する（図１）。結合特徴の詳細な評価を表７にまとめる。

表７：ＦＴＤ対象からの脳組織におけるＴＤＰ－４３の検出
Figure 2022533432000007
 ＮＡ 利用可能なデータなし；－ なし；＋／－ 明確ではない；＋ 弱い；＋＋ 中間；＋＋＋ 強い
実施例７：ウエスタンブロットによるＦＴＤ／ＡＬＳ対象からの脳組織におけるＴＤＰ－４３の検出
脳組織の領域（前頭皮質）を、ＣＫミックスホモジナイゼーションチューブ（Ｌａｂｇｅｎｅ，ＢＥＲ００９２）を用いて、プリセリーズを使用して４℃でホモジナイゼーション可溶化緩衝液（ＨＳ緩衝液）中にて１：４（ｗ／ｖ）比でホモジナイズした。以下の手順をホモジナイズに用いた：５０００ｒｐｍで３０秒を３サイクル（各サイクルの間に１５秒の休止あり）。ホモジナイズした試料を分注し、１．５ｍｌの低タンパク質結合チューブ（Ａｘｙｇｅｎ ＭＣＴ－１７５－Ｌ－Ｃ）中に－８０℃で保存した。
・ＨＳ緩衝液－１０ｍＭ トリスＨＣｌ ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、コンプリートＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ，３２５２４３００）およびＰｈｏｓＳＴＯＰホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ，４９０６８３７００１）。
脳ホモジネート物を氷上で融解し、ＨＳ緩衝液中に再懸濁して、２％のサルコシル、１ユニット／μＬのベンゾナーゼ、および１ｍＭ ＭｇＣｌ２の最終濃度を得た。次いで、試料をサーモミキサーで６００ｒｐｍにて一定に振盪しながら３７℃で４５分間インキュベートした。上澄み物を新しいチューブに収集した。該沈殿物を１０００μｌのミエリン浮遊緩衝液に再懸濁し、ベンチトップ遠心分離機において２０，０００ｇで４℃にて６０分間遠心分離した。該上澄み物を慎重に除去して、全ての浮遊脂質を除去した。全ての脂質が１回のステップで除去できなかった場合、このステップを繰り返した。続いて、該沈殿物をＰＢＳで洗浄し、ベンチトップ遠心分離機で４℃にて３０分間遠心分離した。最終沈殿物を２００μｌのＰＢＳに再懸濁し、－８０℃で保存した。該試料を、変性条件下における免疫ブロッティングによって分析した。
・ＨＳ緩衝液（サルコシル、ベンゾナーゼおよびＭｇＣｌ２を含む）－１０ｍＭ トリスＨＣｌ ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、４％のサルコシル、１ユニット／μＬのベンゾナーゼ（Ｎｏｖａｇｅｎ ７０７４６－４）、４ｍＭ ＭｇＣｌ２、コンプリートＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）およびＰｈｏｓＳＴＯＰホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）。
・ミエリン浮遊緩衝液－１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００および３０％のスクロースを含むＨＳ緩衝液。
ウエスタンブロットを、ＭＥＳ ＳＤＳ流動緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）を用いて、Ｂｏｌｔ １２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ Ｐｌｕｓ ゲル １．０ｍｍ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）で行った。試料（３０μｌ／試料）を、ＰＢＳで希釈してからゲルにロードした（１００ｍＭのＤＴＴを含むローディング緩衝液（１ｘ，Ｌｉｃｏｒ，９２８－４０００４））。タンパク質を１００Ｖの定電圧下で１時間分離した。電気泳動後、タンパク質を、ｉＢＬＯＴ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，ＩＢ２１００１）を２０ボルトで７分間使用して、ニトロセルロースメンブレン（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，ＩＢ２３００１）に移行させた。タンパク質を移行させた後、該メンブレンを、ＰＢＳで１：３に希釈したＬｉｃｏｒブロッキング緩衝液（Ｏｄｙｓｓｅｙ ブロッキング緩衝液９２７－４００００）で１時間ブロッキングした。該メンブレンを以下の一次抗体とともに終夜インキュベートした：総ＴＤＰ－４３（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ，６００１９－２－Ｉｇまたは１０７８２－２－ＡＰ）、ｐＴＤＰ－４３（Ｃｏｓｍｏｂｉｏ，ＴＩＰ－ＰＴＤ－Ｍ０１）。一次抗体について、ブロッキング緩衝液をＰＢＳ－Ｔ（０．４％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）で１：１に希釈した。ＰＢＳ－Ｔ（０．１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）で４回洗浄し、該メンブレンをＬＩＣＯＲ色素と結合させた二次抗体とともにインキュベートした。二次抗体（ロバ抗マウス（カタログ番号９２６－６８０７２）またはヤギ抗ウサギ（カタログ番号９２６－３２２１１））を、ＰＢＳ－Ｔ（０．４％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）で１：１に希釈したＬｉｃｏｒブロッキング緩衝液で１：１００００に希釈して室温で１時間使用した。該メンブレンをＰＢＳ－Ｔ（０．１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）で再度４回洗浄し、ＬＩＣＯＲシステムを用いてスキャンした。図２は、全てのｍＡｂが全長ＴＤＰ－４３を特異的に認識することを示す。さらに、一部のｍＡｂ（Ｋ、Ｍ、Ｎ）は、不溶性画分のＣ末端フラグメントや高分子量凝集体などの病態の病理学的特徴を認識する。
実施例８Ａ：ＳＰＲを用いた結合活性測定
可溶性または凝集ＦＬＴＤＰ－４３への結合活性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて解離定数（ＫＤ）を調べることによって評価した。組換えヒト可溶性または凝集ＦＬＴＤＰ－４３を、アミンカップリングによってＣＭ５シリーズＳセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に固定化した。可溶性ＴＤＰ－４３は、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中に５μｇ／ｍｌの濃度で、５μｌ／分の流速で４２０秒間固定化させて、１５０ＲＵの固定化レベルとなった。凝集されたＴＤＰ－４３は、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中に５０μｇ／ｍｌの濃度で、５μｌ／分の流速で８４０秒間固定化させて、１１０ＲＵの固定化レベルとなった。ビオチン化ＴＰ－７３ペプチド（配列番号１のａａ１８１～１９０）は、シリーズＳセンサーチップＳＡ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）にＰＢＳ－Ｐ＋中に５μｇ／ｍｌの濃度で、５μｌ／分の流速で３０秒間固定化させて、４００ＲＵの固定化レベルとなった。ＫＤ値を評価するために、精製抗体およびコントロール抗体（２Ｅ２－Ｄ３）を、ＰＢＳ－Ｐ＋で３３３ｎＭから開始して０．１５ｎＭまで３倍ずつ希釈して注入した。該抗体を５０μｌ／分の流速で９０秒間の接触時間と７００秒間の解離フェーズで注入し、１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ（ｐＨ１．７）で３回再生した。最適化したＳＰＲプロトコルでは、該抗体を３００ｎＭから開始して１．２ｎＭまで３倍ずつ希釈し、３０μｌ／分で３００秒間注入し、６００秒間解離させた。該表面を、１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ（ｐＨ１．７）を１回注入することで再生させた。結合反応速度から得た結果を、ブランクフローセルとバッファーサイクルを用いて二重参照（double-referenced）し、ＲＩを用いてグローバル１：１適合モデルで評価した。１１個の抗体と２個のＦａｂフラグメントの結合活性を表８に示す。本発明の抗体は、凝集されたＴＤＰ－４３に０．６２ｎＭから４．６４ｎＭの範囲のＫＤで結合する。さらに、いくつかの抗体は、可溶性ＴＤＰ－４３と比較して、凝集されたＴＤＰ－４３に優先的に結合することを示す。２個のＦａｂフラグメントは、可溶性ＴＤＰ－４３に２．８ｎＭから２１．８ｎＭの範囲のＫＤで結合し、凝集されたＴＤＰ－４３に対して同様のＫＤを示す。２個の抗体（＊でマーク）は、特に解離速度が遅延した抗体に対してより正確なＫＤ測定を可能にするより長い結合および解離フェーズを用いた最適化ＳＰＲプロトコルを使用して再分析した。前記２個の抗体は、可溶性ＴＤＰ－４３に０．２２ｎＭから３．９ｎＭの範囲のＫＤ、凝集したＴＤＰ－４３に０．１８ｎＭから０．６９ｎＭの範囲のＫＤで結合する。抗体ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１は、ＴＰ－７３ペプチドに３．６ｎＭのＫＤで結合する。

表８：ＳＰＲによる結合特性
Figure 2022533432000008
 ＮＡ、適合に使用できる曲線が３個未満であるため、適用できない
＊組換え生産されたＩｇＧ２ａアイソタイプ抗体で最適化ＳＰＲプロトコルを使用した結合特性評価。
実施例８Ｂ：ＳＰＲを用いた親和性測定
可溶性ＦＬＴＤＰ－４３への結合親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて解離定数（ＫＤ）を決定することによって評価した。ヤギ抗マウス捕捉抗体を、アミンカップリングによってＣＭ５シリーズＳセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に固定化した。抗体は、ＰＢＳ－Ｐ＋（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）中に２～５μｇ／ｍｌの濃度で、１０μｌ／分の流速で１２０秒間捕捉させて、３５０～１０００ＲＵの捕捉レベルとなった。ＫＤ値を評価するために、ＦＬ ＴＤＰ－４３またはＴＰ－５１ペプチド（配列番号１のａａ３５２～４１４）を、ＰＢＳ－Ｐ＋を１．２ｎＭから開始して１００ｎＭまで３倍希釈して、３０μｌ／分の流速で、１サイクルの反応速度において３００秒の接触時間で注入した。解離を１時間記録し、１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ（ｐＨ１．７）で１回再生させた。結合反応速度から得た結果を、ブランクフローセルとバッファーサイクルを用いて二重参照（double-referenced）し、ＲＩを用いてグローバル１：１適合モデルで評価した。３個の抗体のオンレート（ｋａ）、オフレート（ｋｄ）、および親和性（ＫＤ）を、１２回（ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１）、２回（ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１）または３回（ＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１）の反復の平均値±ＳＤとして表９に示す。抗体ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１およびＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１は、可溶性ＴＤＰ－４３に対して、それぞれ１５～１３５ｐＭ、２２６～２７２ｐＭおよび３８９～４５７ｐＭの範囲の親和性で結合する。抗体ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１は、ＴＰ－５１ペプチドに１１８４～１３１６ｐＭの範囲の親和性で結合する。

表９：ＳＰＲによる可溶性ＦＬ ＴＤＰ－４３およびＴＰ－５１ペプチドの親和性
Figure 2022533432000009
実施例９：抗体の配列決定
クローンハイブリドーマ細胞溶解物を、可変領域の遺伝子配列決定のために使用した。マウスハイブリドーマを回収し、グアニジニウム塩を含む溶解緩衝液を用いて溶解して、ＲＮアーゼを不活性化した。次いで、ゲノムＤＮＡを、ＲＮアーゼを含まないＤＮアーゼで除去し、ＲＮＡをシリカに基づくアフィニティーカラムで複数回洗浄して精製し、ＲＮアーゼを含まない水を用いてカラムから溶出した。ＲＮＡを抽出したら、その純度と濃度を分光光度法で測定した。ＲＮＡの完全性を、変性アガロースゲルで評価し、ＲＮＡを、逆転写酵素（ＲＴ）を用いてｃＤＮＡに逆転写した。前記ＲＮＡをその二次構造を破壊するために７０℃で１０分間加熱し、該ＲＴ反応混合物を加えた。該ＲＴ産物をＰＣＲ増幅にそのまま使用した。前記ｃＤＮＡの高忠実度ＰＣＲ増幅のために、抗体をコードする異なる遺伝子ファミリーに対応する可変領域プライマーのそれぞれを、５０μｌの合計反応容量において、ＶＨおよびＶＬについて別々に、定常プライマーとそれぞれ混合した。まず、縮重された第１のプールを用い（ＶＨのために１２個、ＶＬのために１２個）、その結果に応じて、第２のプールを用いて、ＰＣＲ産物を取得した。ＰＣＲ反応後、前記産物を、臭化エチジウムで染色した２％のアガロースゲルによるゲル電気泳動により分析した。該ＶＬおよびＶＨのＰＣＲ産物をそれぞれ、トリス－アセテート－ＥＤＴＡ（ＴＡＥ）を用いてアガロースゲルで精製した。ゲルから切り出した精製したフラグメントを、ＰＣＲに用いたプライマーと同一のものを用いてダイターミネーター配列決定法を使用して配列決定した。配列決定を両方向で行い、両末端で重複させた。該配列を、マルチプルシークエンスアラインメント（Ｃｌｕｓｔａｌツール）を用いて分析し、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 91-3242 (1991)に記載されるＫａｂａｔのアルゴリズムを用いて注釈を付けた。重鎖および軽鎖可変ドメイン（ＶＨおよびＶＬ）のヌクレオチド配列を表１０に示す。選択した重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）可変ドメインの翻訳したタンパク質配列、およびそれらの相補性決定領域（ＣＤＲ）を表１１に示す。

表１０：重鎖および軽鎖可変ドメイン（ＶＨおよびＶＬ）のヌクレオチド配列
Figure 2022533432000010
Figure 2022533432000011
Figure 2022533432000012
Figure 2022533432000013
Figure 2022533432000014
表１１：重鎖および軽鎖可変ドメイン（ＶＨおよびＶＬ）のアミノ酸配列およびそれらのＣＤＲ
Figure 2022533432000015
Figure 2022533432000016
Figure 2022533432000017
Figure 2022533432000018
Figure 2022533432000019
実施例１０：ＴＤＰ－４３タンパク質症のトランスジェニックマウスモデルにおけるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）のインビボ有効性
インビボでのＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）の有効性を評価するために、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）がＮＥＦＨ－ｔＴＡ ｘ ｈＴＤＰ－４３ΔＮＬＳバイジェニックマウスのＴＤＰ－４３病変を軽減する能力（ｒＮＬＳ８マウス、Walker et al, 2015）を試験した。前記ｒＮＬＳ８マウスに、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）（ｎ＝３０）またはベヒクル（ｎ＝３０）を毎週注射し、投与最終時にリン酸化および／または総不溶性ＴＤＰ－４３などの分子病理学的マーカーを分析した。
１０．１．動物
研究の開始前に、十分な健康を確保し、実験操作に関連する非特異的ストレスを最小限に抑えるために、全ての動物を環境に順応させ、検査し、取り扱い、および体重を測定した。マウスは、繁殖期間および８週齢までドキシサイクリン（２００ｍｇ／ｋｇ）を含む固形飼料で飼育した。８週齢において、導入遺伝子の発現を可能にするために、食餌を、ドキシサイクリン（ＤＯＸ）を含まない固形飼料に変更した。研究を通して、明暗サイクル（１２／１２）、室温（２０～２３℃）および相対湿度（約５０％）を一定に保った。固形飼料と水は、実験期間中自由に与えた。マウスが動きに困難を示し始めた場合、食餌をケージの床上の湿った飼料とヒドロゲルに変更した。全ての行動試験は動物の光サイクル段階で実施した。
１０．２．化合物投与
注射の日において、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）（６０ｍｇ／ｋｇ）およびベヒクルを新たに調製し、実験を通して毎週の投薬計画に従って腹腔内に投与した。
１０．３．脳の採取
脳を２つの半球に分けた。左半球を解剖して皮質脳領域を採取した。マウスの皮質および残りの脳組織は、さらなる生化学的分析のために瞬間凍結させた。残りの右半球は、室温で３時間灌流した後そのまま浸漬固定し、４％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を含む新たに調製した１ｘＰＢＳ中に採取した。
１０．４．免疫組織化学
液浸固定した右脳半球を、Ｌｅｉｃａ ＣＭ１９５０クリオスタット（cryotome）を用いて、均一で等間隔無作為（systematic random）プロトコルにおいて１０ミクロンの切片の厚さで矢状方向に切断した。１匹のマウスあたりの矢状切片の等間隔無作為セット（脳のレベル２、３、４、６、８、１０、および１１からの７個の切片）をＴＤＰ－４３およびリン酸化ＴＤＰ－４３について免疫染色した。Ｉｂａ１染色を行い、脳内のミクログリアの数と形態を定量化した。抗体結合を、蛍光標識された二次抗体を用いて視覚化した。標準的なネガティブコントロールとして、野生型の脳切片および一次抗体を用いていないトランスジェニック動物の切片を含めた。
１０．５．免疫反応性の画像化と測定
包埋した切片は、ＬＥＤ（Ｃｏｌｉｂｒｉ２）照明と高感度のＯｒｃａ Ｆｌａｓｈ ４．０単色カメラを使用して、ＺＥＮソフトウェアによって作動するＡｘｉｏ．Ｓｃａｎ Ｚ１スライドスキャナーを用いて１０倍の倍率で全体として画像化した。脳の大きさは、大脳皮質と背側線条体における目的領域の別々の画像を用いて調べた。対象密度（object density）（ＯＤ）（１ｍｍ２あたりの対象の数）は、全てのマーカー、標識した面積割合、および組織アーチファクト（組織の折り畳みなど）を除く第２の画像の目的サイズの領域について調べた。
１０．６．大脳皮質からのタンパク質試料の調製：
組織を氷上で融解し、１ｍＭのＰＭＳＦおよびプロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を含む５Ｘ ｖ／ｗ 放射性免疫沈降アッセイ緩衝液（ＲＩＰＡ）（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＩＧＥＰＡＬ ＣＡ６３０、５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５％ デオキシコール酸ナトリウムおよび０．１％ ＳＤＳ、ｐＨ８．０）中で超音波処理した。試料を１００，０００ｇで４℃にて３０分間遠心分離し、該上澄み物を可溶性画分とした。該沈殿物をＲＩＰＡとともに超音波処理することにより洗浄し、上澄み物を捨てた。該ＲＩＰＡ不溶性沈殿物を２Ｘ ｖ／ｗ 尿素緩衝液（７Ｍ 尿素、２Ｍ チオ尿素、４％ ＣＨＡＰＳ、および３０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．５）で超音波処理し、１００，０００ｇで２２℃にて３０分間遠心分離した。この上澄み物を、ＲＩＰＡ不溶性／尿素可溶性画分とした。該ＲＩＰＡ可溶性画分のタンパク質濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて調べた。
１０．７．不溶性ＴＤＰ－４３の定量化
前記ＲＩＰＡ不溶性画分の総ＴＤＰ－４３レベルは、市販のヒトＴＤＰ－４３ ＡｌｐｈａＬＩＳＡキット（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，ＡＬ３８７ＨＶ）によって分析した。
１０．８．統計分析
ＩＨＣおよびＡｌｐｈａＬＩＳＡデータを平均±ＳＥＭとして表す。ベヒクルとＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）で処理した動物の統計学的差異は、ウェルチのｔ検定によって分析し、それぞれのバーの上にアスタリスクで示す（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。組織学的測定の異常値は、グループまたはレベルのグラブス外れ値（単一の測定値）であるか、技術的な理由（画像アーチファクト、組織の折り畳みなど）のために除外した。
１０．９．結果
ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）による治療は、ｒＮＬＳ８マウスにおけるリン酸化ＴＤＰ－４３と不溶性ＴＤＰ－４３を減少させる
Ｋ８２Ａ／Ｒ８３Ａ／Ｋ８４Ａ変異型ヒトＴＤＰ－４３のＤＯＸ抑制型（ｈＴＤＰ－４３ΔＮＬＳ）の過剰発現は、ｒＮＬＳ８マウスモデルにおける神経の細胞質においてＴＤＰ－４３の顕著な蓄積と凝集を引き起こす。このモデルの病理学的特徴は、不溶性およびリン酸化ＴＤＰ－４３封入体（ｐＴＤＰ－４３）の沈着である。これらの小さな球状の細胞質封入体は、トランスジェニック動物にのみ存在し、ＷＴまたは単一遺伝子のトランスジェニックｔＴＡコントロールマウスには一切存在しない。さらに、ｐＴＤＰ－４３は、ＤＯＸ不存在の最初の１週間では広範囲に存在せず、３～４週間のＤＯＸ除去中に急激に進行して蓄積する（Walker et al., 2015）。ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）治療により、ベヒクルで処理したマウスと比較して線条体と大脳皮質の両方でリン酸化ＴＤＰ－４３の密度が統計学的に有意に減少し（図３Ａ－Ｂ）、このことは、ＴＤＰ－４３病変の減少におけるその機能的な有効性を示す。線条体および大脳皮質を、これらの領域で導入遺伝子が高発現しているため、定量化のために選択した。
１０．１０．ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）による治療は、ｒＮＬＳ８マウスにおける不溶性ＴＤＰ－４３を減少させる
免疫組織化学の読み取りで観察されたＴＤＰ－４３病変の減少を確認するために、生化学的分画後に、脳における総不溶性／凝集ＴＤＰ－４３の量を定量化した。ＲＩＰＡ不溶性画分を、不溶性／凝集ＴＤＰ－４３を含む左脳半球の皮質から調製した。ベヒクルで処理した動物と比較して、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）で処理したマウスでは、不溶性ＴＤＰ－４３の量の顕著な減少が観察された（図３Ｃ）。分子ＴＤＰ－４３病変のこの減少は、免疫組織化学によって観察された結果と一致しており、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）による治療の有効性が確認された。発明者の知る限り、末梢抗体投与によりＴＤＰ－４３タンパク質症のインビボモデルにおいてＴＤＰ－４３病変の形成を改善したのはこれが初めてである。
１０．１１．ｒＮＬＳ８マウスにおけるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）治療は、ミクログリア免疫反応領域を増加させる
導入遺伝子発現の抑制後のｒＮＬＳ８マウスの機能回復には、ミクログリア活性の増加が関連する。ミクログリア細胞体の領域は、この段階で増加し、ＴＤＰ－４３病変の排除および運動障害の機能回復を生じ、このことはｒＮＬＳ８マウスモデルにおける治療の実例を示す（Spiller KJ et al., Nature Neuroscience, 2018）。
ｒＮＬＳ８マウスにおいてＴＤＰ－４３病変を軽減するＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１の作用機序を評価するために、ミクログリアの活性化に対するその効果を評価した。Ｉｂａ１染色を免疫組織化学によって行い、マウス大脳皮質におけるミクログリアの数と状態を定量化した。ミクログリオーシスが末期（Ｄｏｘ除去５週間）のｒＮＬＳ８マウスで見出された。ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１処理は、ベヒクル処理コントロールと比較して、皮質におけるＩｂａ１陽性免疫反応領域を著しく増加させた（図５Ａ）。この増加は、ミクログリア細胞数の増加またはミクログリアの形態の変化のいずれかから生じた可能性がある。このため、まず、皮質におけるＩｂａ１陽性細胞の密度を評価した。ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１処理により、ベヒクル処理コントロールと比較して、細胞数を表すミクログリア細胞密度に影響がなかった。
次いで、ミクログリアの形態におけるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１の効果を評価した。Ｉｂａ１免疫反応領域の増加と、形態を表すミクログリア活性化状態の変化との相関関係を示すために、ミクログリアをそれらの大きさと形態に基づいて３つの状態に分類した（大きな肥大型、小さな分岐型、および分岐した静止型）。ベヒクルで処理したコントロールと比較して、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）処理では、大きな肥大型ミクログリアについての平均細胞サイズの顕著な増加が見られた（図５Ｂ）。活性化の低い状態を表す他の２つのクラスのミクログリアではあまり差異が見られなかった（図５Ｃ－Ｄ）。この分析は、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１治療コホートで観察された総Ｉｂａ１陽性免疫反応領域の増加が、ミクログリア細胞のサイズと活性化状態の増加で反映される形態の変化から生じることを示す。このことは、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）が、少なくとも一部はミクログリアの動員との活性化を介して、この動物モデルにおけるＴＤＰ－４３病変を軽減することを示す。
実施例１１：組換えＴＤＰ－４３凝集アッセイにおけるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）のインビトロ機能
インビトロでのＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）の機能を評価するために、ＴＤＰ－４３凝集を阻害するＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）の能力を試験した。ＦＬ ＴＤＰ－４３を、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼ切断部位によって切断され、組換えにより生成したマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）にＣ末端で融合させた。２．５μＭのＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）またはＴＤＰに結合しないアイソタイプコントロールの存在下において、３０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４中の２．５μＭ ＴＤＰ－４３－ＴＥＶ－ＭＢＰ融合タンパク質の凝集を、ＴＥＶプロテアーゼ（ＡｃＴＥＶ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を加えることにより誘導し、吸光度をマイクロクリア９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）にて６００ｎｍで３０時間モニターした。評価のために、エンドポイントをアイソタイプコントロールに対して正規化し、凝集されたＴＤＰ－４３のパーセンテージを、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１について算出した。抗体ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１は、アイソタイプコントロールと比較してＴＤＰ－４３凝集を９８％まで顕著に阻害する（図４）。
実施例１２：ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）およびＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）による生体液中のＴＤＰ－４３の検出および定量化
方法：ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのビーズに基づくＡｌｐｈａＬＩＳＡ免疫アッセイを、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）およびＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａバリアント）を用いて確立した。ＣＳＦ試料について、希釈線形（dilution linearity）を添加回収試験（spike recovery experiment）で確認した。次に、ＴＤＰ－４３の濃度を希釈したＣＳＦ試料で測定した。試料は、白いｏｐｔｉｐｌａｔｅ（登録商標）３８４マイクロプレートで調製し、６１５ｎｍでの発光をそのままのＡｌｐｈａＬＩＳＡカウントとして測定した。
結果：健常なコントロールおよびＦＴＬＤ－ＴＤＰ（意味性認知症、Ｃ９ｏｒｆ７２またはＧＲＮ）患者からの脳脊髄液（ＣＳＦ）試料中の総ＴＤＰ－４３を、この免疫アッセイで定量化した（図６）。ＧＲＮ変異を有するＦＴＬＤ－ＴＤＰ患者からの様々な患者のＣＳＦ試料による相対的なＴＤＰ－４３の定量化により、３つの独立した実験において健常なコントロールと比較して顕著に高いＴＤＰ－４３レベルが示された（図６）。Ｃ９ｏｒｆ７２変異および意味性認知症のＦＴＬＤ－ＴＤＰ患者からの様々な患者のＣＳＦ試料による相対的なＴＤＰ－４３の定量化によっても、３つの独立した実験において健常なコントロールと比較して顕著に高いＴＤＰ－４３レベルが示された（図６）。
実施例１３：ＦＴＤ脳抽出物における免疫枯渇によって評価した病変ＴＤＰ－４３への結合
天然状態でＴＤＰ－４３凝集体に特異的に結合する抗体の有効性を評価するために、病変ＴＤＰ－４３が豊富な脳抽出物で免疫枯渇実験を行った。
方法：Ａ型ＦＴＤ（ＦＴＤ－Ａ）の死後脳からの不溶性画分を、実施例７に記載されるように調製した。免疫枯渇は、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）磁気ビーズ、プロテインＧ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ １０００３Ｄ）を用いて行った。チューブ内で再懸濁し、次いで１３０μｌのビーズを１．５ｍｌの低結合チューブに移した。ビーズを、磁石を用いて０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０を添加したＰＢＳで２回すすいで上澄み物を除去した。ビーズを３つの異なる低結合チューブに均等に分配した。抗体（ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａアイソタイプ）、ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａアイソタイプ）、マウスＩｇＧ２ａコントロール）を１００μｇ／ｍｌに希釈し、上澄み物を（磁石を用いて）除去した後、１００μｌを各チューブに加えた。抗体－ビーズ混合物を室温で１時間インキュベートした。該ビーズ－抗体複合体を、５００μｌのＰＢＳ（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０）で１回、ＰＢＳで１回洗浄し、続いて２５０μｌのＰＢＳに再懸濁した。抗体－ビーズを２つの新しいチューブに分注した（１チューブあたり１２０μｌ）。不溶性画分を氷上で融解し、氷上で振幅３０にて３０秒間超音波処理した。上澄み物を除去した後、３０マイクログラムの脳物質を各抗体－ビーズチューブに加え、絶えず回転させながら４℃で終夜インキュベートした。チューブを磁石上に置き、該上澄み物を免疫枯渇画分として収集した。入力および免疫枯渇物質を、ウエスタンブロットによってさらに分析した。ウエスタンブロットを、実施例７に記載されるように行った。２０μｌの試料を１レーンごとにロードした。免疫ブロッティングは、以下の抗体を用いて行った：総ＴＤＰ－４３（ＤｙＬｉｇｈｔ６８０に結合させたＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１）、ｐＴＤＰ－４３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，８２９９０１）（それぞれ１：２０００および１：１０００の希釈で使用）。ヤギ抗ラット二次抗体（カタログ番号９２５－３２２１９）を１：１００００の希釈で使用した。
結果：ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１およびＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１は、アイソタイプコントロール抗体と比較して、Ａ型ＦＴＤの脳組織から得たサルコシル不溶性画分からのＴＤＰ－４３およびｐＴＤＰ－４３に特異的に結合し、枯渇させることができた（図７）。このデータは、これらの抗体がヒト患者の前記標的に関与する特性を示す。
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Claims (57)

  1. ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および凝集されていない生理学的ＴＤＰ－４３に結合する、ＴＤＰ－４３結合分子。
  2. ミスフォールドされた凝集ヒトＴＤＰ－４３および凝集されていない生理学的ヒトＴＤＰ－４３に結合する、請求項１に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  3. 下記の特徴：
    ａ）ＴＤＰ－４３タンパク質またはそのフラグメントの凝集を阻害すること、
    ｂ）ＴＤＰ－４３の細胞間伝播をブロックすること、
    ｃ）ＴＤＰ－４３凝集物を分解すること、ならびに
    ｄ）ＴＤＰ－４３播種をブロックすること
    のうちの１つまたはそれ以上の全てまでを示す、請求項１または２に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  4. インビボでＴＤＰ－４３病変を低減する、請求項１～３のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  5. インビボで凝集ＴＤＰ－４３および／またはリン酸化ＴＤＰ－４３のレベルを低下させる、請求項１～４のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  6. ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８１～１９５、１９９～２１３、３０７～３２１、３５２～３６６、３８９～４１１、３９７～４１１または１４０～２００内のエピトープ、あるいは非ヒトＴＤＰ－４３の同等のエピトープに結合する、請求項１～５のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  7. ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８３～１８８、２０３～２１３、２０４～２０８、２０４～２１１、２０５～２１０、３１６～３２３、３５８～３６１、４００～４０５、４００～４０６または４００～４１２内のエピトープ、あるいは非ヒトＴＤＰ－４３の同等のエピトープに結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  8. ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基４００～４０５、４００～４０６または４００～４１２内のエピトープ、あるいは非ヒトＴＤＰ－４３の同等のエピトープに結合する、請求項１～７のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  9. 抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１～８のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  10. ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
    ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
    ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
    ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
    ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
    ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；アミノ酸配列７３を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
    ｇ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
    ｈ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
    ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；
    ｊ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；あるいは
    ｋ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
    を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  11. ａ．配列番号１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）あるいは配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｂ．配列番号２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）あるいは配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｃ．配列番号３０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）あるいは配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｄ．配列番号４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｅ．配列番号６０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号６４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）あるいは配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｆ．配列番号７０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）あるいは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｇ．配列番号８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号８４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）あるいは配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｈ．配列番号１００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１０４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）あるいは配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｉ．配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）あるいは配列番号１２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｊ．配列番号１４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号１４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；あるいは
    ｋ．配列番号１５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）あるいは配列番号１５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）あるいは配列番号１５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  12. ａ．配列番号１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｂ．配列番号２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｃ．配列番号３０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｄ．配列番号４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｅ．配列番号６０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号６４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｆ．配列番号７０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｇ．配列番号８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号８４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｈ．配列番号１００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１０４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｉ．配列番号１２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    ｊ．配列番号１４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；あるいは
    ｋ．配列番号１５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  13. 配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  14. 配列番号２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  15. 配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；および配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  16. 配列番号８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号８４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１～１２および１５のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  17. モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１～１６のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  18. マウス、キメラ、ヒト化またはヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントである、請求項１～１７のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  19. ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体もしくはその抗原結合フラグメントである、請求項１～１８のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  20. ヒトまたは動物の治療および／または診断における使用のための、請求項１～１９のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  21. 前記ＴＤＰ－４３結合分子が、診断または治療ツールである、ヒトまたは動物の治療および／または診断における使用のための請求項１～２０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  22. 特に分析ツールまたは参照分子としての研究使用のための、請求項１～１９のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  23. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常の予防、緩和、治療および／または診断における使用のための、請求項１～２２のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  24. ＴＤＰ－４３タンパク質症の予防、緩和、治療および／または診断における使用のための、請求項１～２３のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子。
  25. ＴＤＰ－４３タンパク質症をモニターする診断ツールとしての使用のための、請求項２１における使用のためのＴＤＰ－４３結合分子。
  26. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）（例えば、孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うか、または伴わず、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異を有し、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を有し、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異を有し、染色体９ｐに関連するもの、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒病、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢変異性原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）など）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例えば、孤発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異を有する）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ）（散発性および家族性ＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３；マシャド・ジョセフ病としても公知））、海馬硬化症認知症およびミオパチー（孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異を有する封入体ミオパチー（骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う））、眼咽頭筋型筋ジストロフィー（縁取り空胞を伴う）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、またはパーキンソン病（ＰＤ）である、請求項２３～２５のいずれか１項に記載の使用のためのＴＤＰ－４３結合分子。
  27. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、または大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）である、請求項２６に記載の使用のためのＴＤＰ－４３結合分子。
  28. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である、請求項２６または２７に記載の使用のためのＴＤＰ－４３結合分子。
  29. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、アルツハイマー病（ＡＤ）である、請求項２６または２７に記載の使用のためのＴＤＰ－４３結合分子。
  30. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）である、請求項２６または２７に記載の使用のためのＴＤＰ－４３結合分子。
  31. 請求項１～３０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子、ならびに医薬的に許容される担体および／または賦形剤を含む、医薬組成物。
  32. 請求項１～３１のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子をコードする、核酸分子。
  33. ａ．配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号１９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列；
    ｂ．配列番号２８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号２９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列；
    ｃ．配列番号３８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号３９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列；
    ｄ．配列番号４８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号４９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列；
    ｅ．配列番号６８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号６９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列；
    ｆ．配列番号７８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号７９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列；
    ｇ．配列番号８８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号８９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列；
    ｈ．配列番号１０８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号１０９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列；
    ｉ．配列番号１２８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号１２９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列；
    ｊ．配列番号１４８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号１４９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列；または
    ｋ．配列番号１５８の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列および配列番号１５９の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列
    で示される核酸配列を含む核酸分子。
  34. 請求項３２または３３に記載の核酸を含む、組換えベクター。
  35. 請求項３２または３３に記載の核酸および／または請求項３４に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  36. 請求項１～３０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子を発現する、宿主細胞。
  37. 請求項３２または３３に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
  38. 請求項３７に記載の発現ベクターを含む、無細胞発現系。
  39. ＴＤＰ－４３結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントを生成するための方法であって、
    ａ）結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントを生成するのに適した条件下において、請求項３５もしくは３６に記載の宿主細胞または請求項３８に記載の無細胞発現系を培養し；次いで
    ｂ）結合分子、特に抗体またはその抗原結合フラグメントを単離する
    工程を含む、方法。
  40. 対象から得られた試料中のＴＤＰ－４３を定量化するための方法であって、前記試料を請求項１～３０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子と接触させ、次いで前記試料中のＴＤＰ－４３レベルをコントロール試料と比較することを含む、方法。
  41. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断するための方法であって、健常な対象に基づくコントロールレベルと比較して試料中のＴＤＰ－４３の高いレベルが、前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を示す請求項４０に記載の方法を行うことを含む、方法。
  42. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断するための方法であって、疾患のあるコントロールと比較して試料中のＴＤＰ－４３の同様のまたは高いレベルが、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を示す請求項４０または４１に記載の方法を行うことを含む、方法。
  43. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常を分類するためか、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類するための方法であって、
    ａ．請求項４１および／または４２に記載の方法を行い、
    ｂ．適宜、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異、Ｃ９ｏｒｆ７２変異、ＴＡＲＤＢＰ変異、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異、ＴＡＲＤＢＰ変異、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異、またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を含むが、これらに限定されない試料中の変異を同定し、次いで
    ｃ．ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類すること
    を含む方法。
  44. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常を分類するためか、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類するための方法であって、
    ａ．ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の対象から得られた試料において請求項４２に記載の方法を行うことであって、前記疾患のあるコントロールとの比較が、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の異なるタイプまたはサブタイプの対象からの複数のコントロール試料に基づくものであり、次いで
    ｂ．前記比較に基づいて、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類すること
    を含む方法。
  45. 対象からの試料を用いて２つまたはそれ以上の時点において、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常をモニターするためか、またはＴＤＰ－４３タンパク質症をモニターするための方法であって、前記試料を、請求項１～３０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子と接触させることを含むものであって、１つまたはそれ以上の先の試料と比較して後の試料におけるＴＤＰ－４３の高いレベルが、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の進行を示す、方法。
  46. 対象からの試料を用いて２つまたはそれ以上の時点において、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常をモニターするためか、またはＴＤＰ－４３タンパク質症をモニターするための方法であって、前記試料を、請求項１～３０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子と接触させることを含むものであって、１つまたはそれ以上の先の試料と比較して後の試料におけるＴＤＰ－４３の低いレベルが、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の退縮を示す、方法。
  47. 特定の治療法で治療した対象からの試料を用いて２つまたはそれ以上の時点において、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常の治療をモニターするためか、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の治療をモニターするための方法であって、前記試料を、請求項１～３０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子と接触させることを含むものであって、１つまたはそれ以上の先の試料と比較して後の試料におけるＴＤＰ－４３の低いレベルが、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の治療の成功を示す、方法。
  48. 第１の時点が治療法による治療前であり、第２の時点が治療法による治療後である、請求項４５～４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常の治療のための治療法を選択し、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の治療のための治療法を選択するための方法であって、前記治療法による治療前および治療後に採取された試料を、請求項１～３０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子と接触させることであって、治療前に採取された試料と比較して治療後に採取された試料中のＴＤＰ－４３の低いレベルが、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク症の治療の成功を示し、それにより前記治療法が治療のために選択されることを含む、方法。
  50. 前記治療法が、請求項１～３０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子または請求項３１に記載の医薬組成物を含む、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記試料が、血液、ＣＳＦ、ＩＳＦ、または尿サンプルを含む、請求項４０～５０のいずれか１項に記載の方法。
  52. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）（例えば、孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うか、または伴わず、プログラニュリン（ＧＲＮ）変異を有し、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を有し、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）変異を有し、染色体９ｐに関連するもの、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒病、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動障害型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢変異性原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）など）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例えば、孤発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰ変異を有し、アンジオゲニン（ＡＮＧ）変異を有する）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ）（散発性および家族性ＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３；マシャド・ジョセフ病としても公知））、海馬硬化症認知症およびミオパチー（孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の変異を有する封入体ミオパチー（骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う））、眼咽頭筋型筋ジストロフィー（縁取り空胞を伴う）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、またはパーキンソン病（ＰＤ）である、請求項４０～５０のいずれか１項に記載の方法。
  53. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、または大脳辺縁系優位型老年期ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）である、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である、請求項５２に記載の方法。
  55. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、アルツハイマー病（ＡＤ）である、請求項５２に記載の方法。
  56. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、前頭側頭葉型認知症（ＦＴＤ）である、請求項５２に記載の方法。
  57. 前記ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断するためか、または請求項４０～５６のいずれか１項に記載の方法で使用するためのキットであって、請求項１～３０のいずれか１項に記載のＴＤＰ－４３結合分子を含む、キット。
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