JP2022531444A - 腫瘍細胞に対するｔ細胞を介した細胞傷害効果が増大したｃｈｉ３ｌ１およびｐｄ１に対する二重特異性抗体 - Google Patents

腫瘍細胞に対するｔ細胞を介した細胞傷害効果が増大したｃｈｉ３ｌ１およびｐｄ１に対する二重特異性抗体 Download PDF

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Abstract

本明細書には、ＣＨＩ３Ｌ１と免疫チェックポイント分子ＰＤ－１の両方を同時に標的化する二重特異性抗体が記載される。これらの抗体は、単独でまたは組み合わせて、個々のＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１抗体の効果と比較して、増大した相乗的な細胞傷害効果を示す。本明細書に記載される二重特異性抗体を投与することによってがんを治療する方法もまた提供される。

Description

本発明の実施形態は、ＣＨＩ３Ｌ１と免疫チェックポイント分子ＰＤ－１の両方を同時に標的化する二重特異性抗体に関する。これらの二重特異性抗体は、単独でまたは組み合わせて、個々のＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１抗体の効果よりも大きい増大した相乗的な細胞傷害効果を示す。
連邦資金による研究または開発に関する陳述
本発明は、国立衛生研究所から授与されたＮＩＨ ＣＡＤＥＴ助成金ＵＨ２ ＨＬ１２３８７６により開発された。政府は、本発明に関して一定の権利を有する。
現在、個々の免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＰＩ）分子に対する免疫療法は、肺がんおよびグリア芽腫を含む様々な悪性腫瘍の患者に効果的に適用されている。例としては、プログラム死受容体１（ＰＤ－１）のような部分に対する抗体が挙げられる。しかしながら、一部の患者のみがこれらの治療に応答する。加えて、見られる応答は、しばしば持続的ではない。結果として、ＰＤ－１を含む免疫チェックポイント分子に対する抗体を用いたＩＣＰＩ免疫療法の有効性を増大させる方法を開発するために、世界中で徹底した努力がなされている。
したがって、ＰＤ－１などの個々の免疫チェックポイント阻害剤分子に対してより効果的な免疫療法が必要である。
以前の研究は、キチナーゼ３様－１（ＣＨＩ３Ｌ１）が種々のがんの病因において重要な役割を果たすことを実証した。さらに、本発明者らは、抗ＣＨＩ３Ｌ１抗体と抗ＰＤ－１抗体の組み合わせが、がんの治療において相乗効果をもたらすことを以前に実証した。これらの知見に基づき、本発明者らは、ＣＨＩ３Ｌ１とＰＤ－１の同時標的化が追加の相乗的および／または相加的な抗腫瘍効果を有する可能性があると仮定した。これらの可能性に検討するために、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１と同時に反応する二重特異性抗体を開発した。
本発明の実施形態は、ＣＨＩ３Ｌ１と免疫チェックポイント阻害剤ＰＤ－１の両方を同時に検出および中和するヒト化二重特異性抗体を提供する。二重特異性抗体は、抗ヒトＰＤ－１抗体の抗原結合部分および抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の抗原結合部分を含む。
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の骨格に結合した抗ヒトＰＤ－１一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ－ＰＤ１）を含む。ＳｃＦｖ－ＰＤ１は、ＣＨＩ３Ｌ１抗体重鎖（ＣＨＩ３Ｌ１－ＨＣ－ＰＤ１）またはＣＨＩ３Ｌ１抗体軽鎖（ＣＨＩ３Ｌ１－ＬＣ－ＰＤ１）のいずれかに結合させることができる。
代替の実施形態では、二重特異性抗体は、抗ヒトＰＤ－１抗体の骨格に結合した抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ－ＣＨＩ３Ｌ１）を含む。ＳｃＦｖ－ＣＨＩ３Ｌ１は、ＰＤ－１抗体重鎖（ＰＤ－１－ＨＣ－ＣＨＩ３Ｌ１）またはＰＤ－１抗体軽鎖（ＰＤ－１－ＬＣ－ＣＨＩ３Ｌ１）のいずれかに結合させることができる。
一実施形態では、抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の抗原結合部分は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の抗原結合部分は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖配列を含む。一実施形態では、抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の抗原結合部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ヒトＰＤ－１抗体の抗原結合部分は配列番号３５のアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載されるように、本発明の二重特異性抗体は、顕著な抗腫瘍効果を有した。これらの二重特異性抗体は、単独でまたは組み合わせて、個々のＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１抗体の効果と比較して、増大した相乗的な細胞傷害効果を示した。本発明の二重特異性抗体は、（ｉ）Ｕ８７細胞へのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の付着を増大させ；（ｉｉ）Ｕ８７細胞における細胞傷害性応答／アポトーシス応答を誘導するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の能力を増大させ；（ｉｉｉ）Ｕ８７細胞と共培養しているＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞におけるグランザイムおよびパーフォリンの蓄積を増大させ、および／または（ｉｖ）Ｕ８７細胞における乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）放出および細胞傷害性応答を誘導するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の能力を増大させる。
本発明の実施形態はまた、本発明の二重特異性抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、医薬組成物は化学療法剤をさらに含む。
本発明の実施形態はまた、本発明の二重特異性抗体または医薬組成物の治療有効量を投与することによって、対象におけるがんを治療する方法を提供する。一実施形態では、がんは悪性がんである。一実施形態では、がんは原発性がんまたは転移性がんである。一実施形態では、がんは、前立腺がん、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、グリア芽腫、黒色腫、悪性黒色腫、または肺がんのうちの１つである。一実施形態では、対象は、上昇したレベルのＣＨＩ３Ｌ１を有すると決定された対象である。一実施形態では、上昇したＣＨＩ３Ｌ１レベルは循環ＣＨＩ３Ｌ１である。一実施形態では、がんはＰＤ－Ｌ１を発現する。
本発明の二重特異性抗体は、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１を標的とし、単独でまたは組み合わせて、抗ＣＨＩ３Ｌ１および抗ＰＤ－１抗体の効果を超える抗腫瘍細胞傷害効果を有する。
他の実施形態も、本明細書に記載され、列挙される。
例示の目的で、本発明の特定の実施形態は、以下に記載される図面に示される。図面中の同様の数字は、全体を通して同様の要素を示す。しかしながら、本発明は、示された正確な配置、寸法、および器具に限定されるものではないことを理解されたい。
ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１二重特異性抗体構造の概略図を提供する図である。二重特異性抗体を生成するために使用されるプラットフォームを図１Ａ：ＣＨＩ３Ｌ１－ＬＣ×ＳｃＦｖ－ＨＣ－ＰＤ１－ＳｃＦｖ－ＬＣ－ＰＤ１（ＣＨＩ３Ｌ１－ＬＣ－ＰＤ１）および図１Ｂ：ＣＨＩ３Ｌ１－ＨＣ×ＳｃＦｖ－ＨＣ－ＰＤ１－ＳｃＦｖ－ＬＣ－ＰＤ１（ＣＨＩ３Ｌ１－ＨＣ－ＰＤ１）に例示する。 ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１二重特異性抗体の結合親和性を示す図である。ＣＨＩ３Ｌ１－ＬＣ－ＰＤ１抗体の親和性を競合ＥＬＩＳＡアッセイにより評価した：図２Ａは、組換えヒト（ｒｈ）ＣＨＩ３Ｌ１に対する評価を示す；図２Ｂは、ｒｈＰＤ１に対する評価を示す；および図２Ｃは、ｒｈＣＨＩ３Ｌ１およびｒｈＰＤ１混合物に対する評価を示す。ＣＨＩ３Ｌ１－ＬＣ－ＰＤ１抗体とＣＨＩ３Ｌ１－ＨＣ－ＰＤ１抗体の間で、ｒｈＣＨＩ３Ｌ１またはｒｈＰＤ１に対する結合親和性において差はなかった。 二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体が共培養系においてＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞のＵ８７グリア芽腫細胞への付着を顕著に増大させることを示す図である。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を抗ヒトＣＤ３／ＣＤ２８処理（各５μｇ／ｍｌ、５％ＣＯ２および大気中、３７℃で２時間インキュベーション）により活性化し、次に、Ｕ８７神経グリア芽腫細胞と共培養した。アイソタイプ対照抗体、ならびにＰＤ－１、ＣＨＩ３Ｌ１、ＣＨＩ３ｌＬ１＋ＰＤ－１に特異的な抗体およびＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ－１に二重特異性を示す抗体とともに培養を行った。図３Ａでは、Ｕ８７（赤色）およびＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞（緑色）の蛍光標識にはＣｅｌｌＢｒｉｔｅ細胞質膜色素を用いた。図３Ｂは、ＩｇＧ対照抗体および指示された抗体（各５ｍｇ／ｍｌ）を伴うインキュベーションの６時間後に撮像された位相差画像を示す。アイソタイプ、ＩｇＧ対照抗体；ＰＤ１、ａ－ヒトＰＤ１抗体；ＣＨＩ３Ｌ１、ａ－ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体；ＣＨＩ３Ｌ１＋ＰＤ１、ａ－ＣＨＩ３Ｌ１抗体＋ａ－ＰＤ１抗体とともに；ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１、二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１－ＰＤ１抗体。図３Ｃは、計数された蛍光顕微鏡を介して評価された各Ｕ８７細胞に付着したＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の数を示す（元の倍率の２０倍；この評価には１０の無作為に選択した領域を含めた）。値は平均±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１、ｔ検定による。 ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１二重特異性抗体処理が、Ｕ８７－ＪｕｒｋａｔＴ細胞共培養においてＵ８７グリア芽腫細胞死応答を増大させたことを示す図である。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を抗ＣＤ３／ＣＤ２８処理（各５μｇ／ｍｌ、５％ＣＯ２および大気中、３７℃で２時間のインキュベーション）により活性化し、次に、Ｕ８７グリア芽腫細胞と共培養した。アイソタイプ対照抗体、ならびにＰＤ－１、ＣＨＩ３Ｌ１、ＣＨＩ３ｌＬ１＋ＰＤ－１に特異的な抗体およびＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ－１に二重特異性を示す抗体とともに培養を行った。図４Ａ－Ｂでは、生細胞（緑色）の蛍光標識にはＣｅｌｌＢｒｉｔｅ細胞質膜色素を用い、および死細胞（赤色）にはヨウ化プロピジウム染色を用いた。インキュベーションの６時間後、細胞をビヒクルのみ（図４Ａ）、およびＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照または指示された抗体（各５ｍｇ／ｍｌ）（図４Ｂ）で処理し、蛍光画像を撮像した。図４Ｃでは、ＴＵＮＥＬ染色および画像を明視野顕微鏡下で撮像した。図４Ｄは、ＴＵＮＥＬ陽性アポトーシスＵ８７細胞の定量を示す。ＴＵＮＥＬ陽性アポトーシス細胞を光学顕微鏡下で計数し（元の倍率の２０倍）、評価された全細胞の％として表した（１０の顕微鏡視野を無作為に選択し、この評価に使用した）。値は平均±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１、ｔ検定による。 二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体処理が、Ｕ８７グリア芽腫細胞との共培養においてＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞におけるグランザイムの蓄積を増大させたことを示す図である。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を抗ヒトＣＤ３／ＣＤ２８処理（各５μｇ／ｍｌ、２時間のインキュベーション、５％ＣＯ２および大気、３７℃にて）により活性化し、次に、Ｕ８７グリア芽腫細胞と共培養した。アイソタイプ対照抗体、ならびにＰＤ－１、ＣＨＩ３Ｌ１、ＣＨＩ３ｌＬ１＋ＰＤ－１に特異的な抗体およびＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ－１に二重特異性を示す抗体とともに培養を行った。ＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照および指示された抗体（各５ｍｇ／ｍｌ）とのインキュベーションの６時間後、蛍光画像を撮像した（図５Ａ）。細胞の二重免疫組織化学染色をａ－グランザイムおよびａ－ファロイジン抗体を用いて行った。図５Ｂは、グランザイム＋細胞の定量を示す。グランザイム＋細胞の数は、蛍光顕微鏡下で計数した（元の倍率の２０倍；無作為に選択した１０領域をこの評価に含めた）。値は平均±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５、ｔ検定による。 ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１二重特異性抗体処理が、Ｕ８７グリア芽腫細胞との共培養においてＪｕｒｋａｔＴ細胞におけるパーフォリンの蓄積を増大させたことを示す図である。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を抗ヒトａ－ＣＤ３／ａ－ＣＤ２８処理（各５μｇ／ｍｌ、５％ＣＯ２および大気中、３７℃で２時間のインキュベーション）により活性化した。アイソタイプ対照抗体、ならびにＰＤ－１、ＣＨＩ３Ｌ１、ＣＨＩ３ｌＬ１＋ＰＤ－１に特異的な抗体およびＨＩ３Ｌ１×ＰＤ－１に二重特異性を示す抗体とともに培養を行った。ＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照および指示された抗体（各５ｍｇ／ｍｌ）とのインキュベートの６時間後、画像を撮像した（図６Ａ）。細胞の二重免疫組織化学染色を抗パーフォリンおよび抗ファロイジン抗体を用いて行った。図６Ｂは、パーフォリン陽性（＋）細胞の定量を示す。顕微鏡視野あたりのパーフォリン＋細胞の平均数を計数した（元の倍率の２０倍）。アイソタイプ、ＩｇＧ２ｂ対照抗体；ＰＤ１、抗ヒトＰＤ１抗体；ＣＨＩ３Ｌ１、抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体；ＣＨＩ３Ｌ１＋ＰＤ１、抗ＣＨＩ３Ｌ１抗体＋抗ＰＤ１抗体とともに；ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１、二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体。元の倍率の２０倍。値は平均±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１、ｔ検定による。 二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体処理が、Ｊｕｒｋａｔ－Ｕ８７共培養物におけるＵ８７細胞ＬＤＨ放出を増大させたことを示す図である。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を抗ヒトＣＤ３／ＣＤ２８処理（各５μｇ／ｍｌ、２時間のインキュベーション、５％ＣＯ２および大気、３７℃にて）により活性化した。アイソタイプ対照抗体、ならびにＰＤ－１、ＣＨＩ３Ｌ１、ＣＨＩ３ｌＬ１＋ＰＤ－１に特異的な抗体およびＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ－１に二重特異性を示す抗体とともに培養を行った。ＩｇＧ対照および指示された抗体（各５ｍｇ／ｍｌ）とのインキュベーションの６時間後、ＬＤＨ活性をアッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ ＬＤＨ細胞傷害性アッセイキット）により測定した。ｎｓ、有意ではない、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｔ検定による。共培養におけるＵ８７細胞によって放出されたＬＤＨを、Ｕ８７細胞単独（－ｖｅ対照）、溶解緩衝液で処理されたＵ８７における総ＬＤＨ（＋ｖｅ対照）および溶解緩衝液で処理されたＪｕｒｋａｔ細胞によって放出されたＬＤＨ（Ｊｕｒｋａｔ）におけるレベルと比較した。 二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体処理が、相乗的なＣＴＬ媒介腫瘍細胞死応答および腫瘍細胞ＰＴＥＮ発現を誘導したことを示す図である。（Ａ列）インサイチュでの細胞検出キット－フルオレセインｄＵＴＰを用いたアポトーシス腫瘍細胞死の代表的な実証および定量。ＴＵＮＥＬ（＋）細胞は緑色に染色する。（Ｂ～Ｄ列）ＣＤ８（Ｂ列）、パーフォリン（Ｃ列）およびグランザイム（Ｄ列）のＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞発現の代表的な実証および定量化。腫瘍細胞は緑色であり、陽性染色のＪｕｒｋａｔ細胞は黄橙色である。（Ｅ列）腫瘍細胞ＰＴＥＮの代表的な実証および定量化。腫瘍細胞は緑色であり、ＰＴＥＮは黄橙色である。（Ｆ行）Ａ～Ｅ列における評価の定量化。ＴＵＮＥＬ＋腫瘍細胞の％（Ａ列）、ＣＤ８（Ｂ列）、パーフォリン（Ｃ列）、グランザイム（Ｄ列）を発現するＪｕｒｋａｔ細胞の％、およびＰＴＥＮを発現する腫瘍細胞の％（Ｅ列）を例示する。これらの評価は、蛍光顕微鏡（元の倍率の２０倍）を用いて行われた。これらの定量において、１０の無作為に選択された視野を評価した。パネルＦにおける値は、注目された４つの評価の平均値±ＳＥＭである。＊＊Ｐ＜０．０１。＊＊＊Ｐ＜０．００１。スケールバー＝１０μｍ、Ａ～Ｅの全てのサブパネルに適用する。
本発明の実質的な理解を図るために、本発明の特定の態様、様式、実施形態、変形、および特徴は、以下に様々なレベルで詳細に説明されていることが理解されるべきである。
定義
便宜上、明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲において使用されるいくつかの用語および語句の意味を以下に提供する。別段の記載がない限り、または文脈から暗黙的でない限り、以下の用語および語句は、以下に提供される意味を含む。定義は、特定の実施形態を説明する際の助けとなるように提供され、本発明の範囲が請求項によってのみ限定されるため、請求される発明を限定することを意図しない。別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。当該技術分野における用語の使用と本明細書に提供されるその定義との間に明らかな相違がある場合は、本明細書に提供される定義が優先されるものとする。
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容が明確に別段の指示をしない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「細胞」への言及は、２つ以上の細胞の組み合わせなどを含む。
本明細書で使用される場合、用語「または」は、「および／または」を意味する。「Ａおよび／またはＢ」などの語句で使用される用語「および／または」は、ＡとＢの両方；ＡまたはＢ；Ａ（単独）；およびＢ（単独）を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句で使用される用語「および／または」は、以下の実施形態：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）の各々を包含することを意図する。
略語「例えば（ｅ．ｇ．）」は、ラテン語のｅｘｅｍｐｌｉ ｇｒａｔｉａに由来し、本明細書では、非限定的な例を示すために使用される。したがって、略語「例えば（ｅ．ｇ．）」は、用語「例えば（ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）」と同義である。
本明細書で使用される場合、値またはパラメータに関して用語「ほぼ」または「約」は、一般的に、特に断りのない限り、または文脈から明らかである場合（このような数が可能な値の０％未満であるかまたは１００％を超える場合を除く）、数のいずれかの方向（より大きいかまたはより小さい）において５％、１０％、１５％、または２０％の範囲内に入る数を含むと解釈される。本明細書で使用される場合、「ほぼ」または「約」の値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータへ向けられる実施形態を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」の記載を含む。
本明細書で使用される場合、用語「含む」とは、提示される定義された要素に加えて、他の要素もまた存在し得ることを意味する。「含む」の使用は、限定ではなく包含を示す。
用語「からなる」とは、本明細書に記載される組成物、方法、およびそれらの各構成要素を指し、実施形態のその記載に記述されていない任意の要素を排除する。
本明細書で使用される場合、用語「から本質的になる」とは、所与の実施形態に必要な要素を指す。この用語は、本発明のその実施形態の基本的および新規のまたは機能的特徴（単数または複数）に実質的に影響を及ぼさない追加の要素の存在を可能にする。
「統計的に有意な」または「有意に」という用語は、統計的有意性を指し、一般的に、２つの標準偏差（２ＳＤ）以上の差を意味する。
本明細書で使用される場合、語句「治療的に有効な量」、「有効量」または「有効用量量」とは、腫瘍または悪性腫瘍の処置、予防または管理において治療上または審美上の利益を提供する量、例えば、腫瘍または悪性腫瘍の少なくとも１つの症状、徴候またはマーカーの統計的に有意な減少を提供する量を指す。所与の用途に対する有効量を決定するために多くの方法が当該技術分野において公知であることが理解される。例えば、投薬量決定のための薬理学的方法は、治療的状況において使用され得る。治療的または予防的適用の文脈において、対象に投与される組成物の量は、疾患のタイプおよび重症度、ならびに一般的な健康、年齢、性別、体重および薬物に対する耐性などの個人の特性に依存する。それはまた、疾患の程度、重症度およびタイプにも依存する。当業者は、これらおよび他の要因に応じて適切な投薬量を決定することができる。組成物はまた、１つ以上のさらなる治療化合物と組み合わせて投与することもできる。
本明細書で使用される場合、用語「処置する」、「処置」、「処置すること」、または「改善」とは、疾患、障害または医学的状態に関して使用される場合、対象が症状または状態の進行または重症度を逆行させ、軽減し、緩和し、阻害し、減速しまたは停止することである状態に対する治療的処置を指す。用語「処置すること」は、状態の少なくとも１つの有害作用または症状を低下または軽減することを含む。１つ以上の症状または臨床マーカーが低下した場合、処置は一般的に「有効」である。あるいは、状態の進行が低下または中断された場合、治療は「有効」である。すなわち、「処置」には、症状またはマーカーの改善だけでなく、処置を行わない場合に予想される症状の進行または悪化を停止または少なくとも減速させることも含まれる。有益なまたは所望の臨床結果には、限定されないが、処置を行わない場合に予想されるものと比較した場合、１つ以上の症状（単数または複数）の軽減、欠損の程度の減少、腫瘍または悪性腫瘍の安定した（すなわち、悪化しない）状態、腫瘍成長および／または転移の遅延または減速、および寿命の延長が挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「投与する」とは、所望の部位で薬物の少なくとも部分的な送達をもたらす方法または経路によって、対象内に、本明細書に開示される二重特異性抗体を配置することを指す。本明細書に開示される化合物を含む医薬組成物は、対象において効果的な治療をもたらす任意の適切な経路によって投与することができる。
本明細書で使用される場合、用語「長期」投与は、治療剤または薬物が少なくとも１２週間投与されることを意味する。これは、治療剤または薬物が、少なくとも１２週の期間にわたってまたは少なくとも１２週の期間、有効であるように投与されることを含み、例えば、徐放性組成物または長時間作用性治療剤もしくは薬物が使用される場合、投与自体が１２週間行われることを必ずしも意味しない。したがって、対象は少なくとも１２週の期間処置される。多くの場合、長期投与は、少なくとも４、５、６、７、８、９ヵ月以上、または少なくとも１、２、３、５、７、１０年以上である。
本明細書において企図される組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、経口摂取、輸血、移植（ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）または移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）を含む任意の好都合な方法で行うことができる。好ましい実施形態では、組成物は非経口的に投与される。語句「非経口投与」および「非経口的に投与される」とは、本明細書で使用される場合、経腸および局所投与以外の、通常は注射による投与様式を指し、限定されないが、血管内、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、被膜内、眼窩内、腫瘍内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内および胸骨内注射ならびに注入が含まれる。一実施形態では、本明細書で企図される組成物は、腫瘍、リンパ節、または感染部位への直接注射によって対象に投与される。
本明細書で使用される場合、用語「がん」は、一般的に、異常な細胞が制御なしに分裂し、近くの組織に侵入し得る疾患または状態のクラスに関する。がん細胞はまた、血液およびリンパ系を介して生体の他の部位に分散することがある。がんには主にいくつかのタイプがある。がん腫は、皮膚、または内臓を埋め尽くすかもしくは覆っている組織に発生するがんである。肉腫は、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、または他の結合組織もしくは支持組織から発生するがんである。白血病は、骨髄などの造血組織から発生し、多数の異常な血液細胞を産生して血液中に入るようになるがんである。リンパ腫および多発性骨髄腫は、免疫系の細胞から発生するがんである。中枢神経系がんは、脳および脊髄の組織から発生するがんである。
態様のいずれかのうちの一部の実施形態では、がんは原発がんである。態様のいずれかのうちの一部の実施形態では、がんは悪性がんである。本明細書で使用される場合、用語「悪性」とは、腫瘍細胞のグループが、制御されていない増殖（すなわち、正常限界を超える分裂）、浸潤（すなわち、隣接組織の侵入および破壊）、および転移（すなわち、リンパまたは血液を介して体内の他の部位に分散する）のうちの１つ以上を提示するがんを指す。本明細書で使用される場合、用語「転移する」とは、生体のある部分から別の部分へのがんの分散を指す。分散した細胞によって形成される腫瘍は、「転移性腫瘍」または「転移」と呼ばれる。転移性腫瘍には、元の（原発性）腫瘍に似た細胞が含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「良性」または「非悪性」とは、より大きく増殖し得るが、生体の他の部分には分散しない腫瘍を指す。良性腫瘍は自己限定性であり、典型的には浸潤も転移もしない。
「がん細胞」または「腫瘍細胞」とは、がん性増殖または組織の個々の細胞を指す。腫瘍は、一般的に、細胞の異常な増殖によって形成される腫脹または病変を指し、良性、前悪性、または悪性であり得る。ほとんどのがん細胞は腫瘍を形成するが、白血病などの一部は必ずしも腫瘍を形成しない。腫瘍を形成するがん細胞について、がん（細胞）と腫瘍（細胞）という用語は互換的に使用される。
がんまたは腫瘍を有する対象は、対象の生体に存在する客観的に測定可能ながん細胞を有する対象である。この定義には、悪性で活発な増殖性がん、ならびに潜在的に休眠腫瘍または微小転移が含まれる。元の位置から移動し、他の重要な臓器に撒かれるがんは、最終的には、罹患した臓器の機能的悪化を通して対象の死亡をもたらす可能性がある。白血病などの造血器がんは、対象における正常な造血コンパートメントを競合により圧倒することができ、それによって造血不全（貧血、血小板減少および好中球減少の形態で）を引き起こし、最終的には死に至る。
がんの例には、限定されないが、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、白血病、基底細胞がん、胆道がん；膀胱がん；骨がん；脳およびＣＮＳがん；乳がん；腹膜のがん；子宮頸がん；絨毛がん；結腸および直腸がん；結合組織がん；消化器系のがん；子宮内膜がん；食道がん；目のがん；頭頸部のがん；胃がん（例えば、胃腸がん）；グリア芽腫（ＧＢＭ）；肝細胞がん腫；肝細胞がん；上皮内新生物；腎臓がんまたは腎がん；喉頭がん；白血病；肝臓がん；肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん、および肺の扁平上皮がん）；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫；黒色腫；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔がん（例えば、唇、舌、口、および咽頭）；卵巣がん；膵臓がん；前立腺がん；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸がん；呼吸器系のがん；唾液腺がん；肉腫；皮膚ガン；扁平上皮がん；胃がん；精巣腫瘍；甲状腺がん；子宮がんまたは子宮内膜がん；泌尿器系のがん；外陰がん；ならびに他のがん腫や肉腫；ならびにＢ細胞リンパ腫（例えば、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中等度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小非切断型細胞ＮＨＬ；かさばる疾患ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫； ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびにｐｈａｋｏｍａｔｏｓｅｓに関連する異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するものなど）、およびＭｅｉｇｓ症候群が挙げられる。
「がん細胞」は、インビボ、エクスビボ、または組織培養のいずれかで、必ずしも新しい遺伝物質の取り込みを伴わない自然発生的または誘導された表現型変化を有するがん性、前がん性、または形質転換細胞である。形質転換は、形質転換ウイルスによる感染および新たなゲノム核酸の組み込み、または外因性核酸の取り込みから起こり得るが、自然発生的に、または発がん物質への曝露後に起こり、それによって内因性遺伝子を突然変異させることもできる。形質転換／がんは、例えば、形態学的変化、細胞の不死化、異常な増殖制御、病巣形成、足場非依存性、悪性、接触阻害の喪失および増殖の密度制限、増殖因子または血清非依存性、腫瘍特異的マーカー、浸潤性または転移、ならびにヌードマウスなどの適切な動物宿主における腫瘍成長と関連付けられる。
対象は、処置を必要とする状態（例えば、がん）またはこのような状態に関連する１つ以上の合併症を有すると以前に診断されたか、またはそれに苦しんでいるかもしくはそれを有すると同定されているが、場合により、状態またはその状態に関連する１つ以上の合併症に対する処置をまだ受ける必要はない者であり得る。あるいは、対象は、処置を必要とする状態またはこのような状態に関連する１つ以上の合併症を有すると以前に診断されたことがない者であり得る。例えば、対象は、１つの状態に関する１つ以上のリスク因子、もしくは１つの状態に関連する１つ以上の合併症を示す者、またはリスク因子を示さない対象であり得る。特定の状態についての処置を「必要とする対象」は、その状態を有するか、その状態を有すると診断されたか、またはその状態を発症する危険性リスクがある対象であり得る。本明細書においてさらに説明されるように、一部の実施形態では、対象は、上昇したレベルのＣＨＩ３Ｌ１を有すると決定された対象である。一部の実施態様では、ＣＨＩ３Ｌ１は循環ＣＨＩ３Ｌ１である。一部の実施形態では、対象は、ＰＤ－Ｌ１を発現するがんに罹患する。
用語「減少する」、「低下する」、「低下」、または「阻害する」は全て、統計的に有意な量だけ減少することを意味するために、本明細書で使用される。一部の実施形態では、「低下する」、「低下」または「減少する」または「阻害する」は、典型的には、参照レベル（例えば所与の処置または薬剤の非存在）と比較して、少なくとも１０％減少することを意味し、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、またはそれ以上の減少を含むことができる。本明細書で使用される場合、「低下」または「阻害」は、参照レベルと比較して、完全な阻害または減少を包含しない。「完全な阻害」とは、参照レベルと比較して１００％の阻害である。減少は、好ましくは、所与の障害がない個体について、正常範囲内として容認されるレベルまで下げることができる。
用語「増加した」、「増加」、「増大する」、または「活性化する」は全て、静的に有意な量だけ増加することを意味するために、本明細書において使用される。一部の実施形態では、用語「増加した」、「増加する」、「増大する」、または「活性化する」は、参照レベルと比較して少なくとも１０％の増加、例えば、参照レベルと比較して、少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、もしくは最大１００％および１００％を含む増加、または１０～１００％の間の任意の増加、あるいは参照レベルと比較して少なくとも約２倍、もしくは少なくとも約３倍、もしくは少なくとも約４倍、もしくは少なくとも約５倍、もしくは少なくとも約１０倍以上の増加、または２倍～１０倍もしくはそれ以上の間の任意の増加を意味することができる。マーカーまたは症状という文脈において、「増加する」は、このようなレベルにおける統計的に有意な増加である。
本明細書で使用される場合、用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は、隣接残基のアルファ－アミノ基とカルボキシ基の間のペプチド結合によって互いに連結された一連のアミノ酸残基を示すために、本明細書において互換的に使用される。用語「タンパク質」および「ポリペプチド」とは、そのサイズまたは機能にかかわらず、修飾されたアミノ酸（例えば、リン酸化された、糖化された、グリコシル化されたなど）およびアミノ酸類似体を含むアミノ酸のポリマーを指す。「タンパク質」および「ポリペプチド」は、しばしば、比較的大きなポリペプチドに関して使用され、一方、用語「ペプチド」は、しばしば、小さなポリペプチドに関して使用されるが、これらの用語の当該技術分野における使用は重なり合っている。用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は、遺伝子産物およびそれらの断片を参照する場合、本明細書において互換的に使用される。したがって、例示的なポリペプチドまたはタンパク質には、遺伝子産物、天然に存在するタンパク質、ホモログ、オルソログ、パラログ、断片、ならびに前述の他の同等物、バリアント、断片、および類似体が含まれる。
本明細書に記載される種々の実施形態では、さらに、記載される特定のポリペプチドのいずれかのバリアント（天然に存在するかまたはそうでない）、対立遺伝子、相同体、保存的に修飾されたバリアント、および／または保存的置換バリアントを包含することが企図される。アミノ酸配列に関して、当業者は、コードされた配列中の単一のアミノ酸もしくは少量のアミノ酸を改変する核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、欠失または付加は、「保存的に修飾されたバリアント」であり、その改変は、アミノ酸の化学的に類似したアミノ酸による置換をもたらし、ポリペプチドの所望の活性を保持することを認識する。このような保存的に修飾されたバリアントは、本開示と一致する多型バリアント、種間相同体、および対立遺伝子に加えられ、除外されない。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチド（またはこのようなポリペプチドをコードする核酸）は、本明細書に記載されるアミノ酸配列の１つの機能性断片であり得る。本明細書で使用される場合、「機能性断片」は、本明細書において以下に記載されるアッセイによる野生型参照ポリペプチドの活性の少なくとも５０％を保持するペプチドの断片またはセグメントである。機能性断片は、本明細書に開示される配列の保存的置換を含むことができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドは、本明細書に記載される配列のバリアントであり得る。一部の実施形態では、バリアントは、保存的に修飾されたバリアントである。保存的置換バリアントは、例えば、天然ヌクレオチド配列の突然変異によって得ることができる。本明細書において言及される「バリアント」は、天然または参照ポリペプチドと実質的に相同であるが、１つもしくは複数の欠失、挿入または置換のために天然または参照ポリペプチドのものとは異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。バリアントポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、天然または参照ＤＮＡ配列と比較した場合、ヌクレオチドの１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、活性を保持するバリアントタンパク質またはその断片をコードする配列を包含する。多種多様なＰＣＲベースの部位特異的突然変異誘発アプローチは当該技術分野において公知であり、当業者によって適用され得る。
本明細書で使用される場合、用語「核酸」または「核酸配列」とは、リボ核酸、デオキシリボ核酸またはその類似体の単位を取り込む任意の分子、好ましくはポリマー分子を指す。核酸は、一本鎖または二本鎖のいずれかであり得る。一本鎖核酸は、変性された二本鎖ＤＮＡの１本の核酸鎖であり得る。あるいは、それは、任意の二本鎖ＤＮＡにも由来しない一本鎖核酸であり得る。一態様では、核酸はＤＮＡであり得る。別の態様では、核酸はＲＮＡであり得る。適切なＤＮＡは、例えば、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを含むことができる。適切なＲＮＡは、例えば、ｍＲＮＡを含むことができる。
態様のいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチド、核酸、または細胞を操作することができる。本明細書で使用される場合、「操作された」とは、ヒトの手で操られた態様を指す。例えば、ポリペプチドの少なくとも１つの態様、例えば、その配列が、天然に存在する態様とは異なるようにヒトの手によって操られた場合、ポリペプチドは「操作された」と考えられる。一般的な慣行であり、当業者に理解されるように、操作された細胞の子孫は、実際の操作が先行する実体に対して行われたにもかかわらず、典型的にはなおも「操作された」と呼ばれる。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチド（例えば、抗体または抗体試薬）をコードする核酸は、ベクターにより含まれる。本明細書に記載される態様のいくつかにおいて、本明細書に記載される所定のポリペプチドをコードする核酸配列、またはそれらの任意のモジュールは、ベクターに作動可能に連結される。ベクターには、限定されないが、クローニングベクター、発現ベクター、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、染色体、ウイルス、ビリオンなどが挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「発現ベクター」は、ベクター上の転写調節配列に連結された配列からＲＮＡまたはポリペプチドの発現を指示するベクターを指す。発現される配列は、しばしば、必ずしもそうではないが、細胞に対して異種である。発現ベクターは、さらなる要素を含むことができ、例えば、発現ベクターは、２つの複製系を有することができ、したがって、２つの生物、例えば、発現のためにヒト細胞において、ならびにクローニングおよび増幅のために原核生物宿主において、それを維持することを可能にする。用語「発現」は、ＲＮＡおよびタンパク質の生産、および必要に応じて、タンパク質の分泌に関与する細胞プロセスを指し、該当する場合には、限定されないが、例えば、転写、転写プロセシング、翻訳およびタンパク質の折りたたみ、修飾および処理を含む。「発現産物」には、遺伝子から転写されたＲＮＡ、および遺伝子から転写されたｍＲＮＡの翻訳によって得られたポリペプチドが含まれる。用語「遺伝子」は、適切な調節配列に作動可能に連結された場合にインビトロまたはインビボでＲＮＡに転写される核酸配列（ＤＮＡ）を意味する。遺伝子は、コード領域の前後の領域、例えば、５’非翻訳（５’ＵＴＲ）または「リーダー」配列および３’ＵＴＲまたは「トレーラー」配列、ならびに個々のコードセグメント（エキソン）間の介在配列（イントロン）を含む場合があり、または含まない場合がある。
「単離された」または「部分的に精製された」という用語は、本明細書で使用される場合、核酸またはポリペプチドの場合、その天然源に見出される核酸もしくはポリペプチドとともに存在する、および／または細胞により発現される場合に核酸もしくはポリペプチドとともに存在する、または分泌されたポリペプチドの場合に分泌される、少なくとも１つの他の構成要素（例えば、核酸またはポリペプチド）から分離された核酸またはポリペプチドを指す。化学的に合成された核酸もしくはポリペプチドまたはインビトロ転写／翻訳を用いて合成されたものは、「単離された」とみなされる。「精製された」または「実質的に精製された」という用語は、対象核酸またはポリペプチドの少なくとも９５重量％である単離された核酸またはポリペプチドを指し、例えば少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体、その抗原結合部分、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は単離される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、精製される。
本明細書で使用される場合、「操作された」とは、ヒトの手で操られた態様を指す。例えば、抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、ＣＡＲまたは二重特異性抗体は、その抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、ＣＡＲまたは二重特異性抗体の配列が、天然に存在する抗体の配列とは異なるようにヒトの手で操られた場合、「操作された」と考えられる。一般的な慣行であり、当業者に理解されるように、操作されたポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドの子孫およびコピーは、実際の操作が先行する実体に対して行われたにもかかわらず、典型的にはなおも「操作された」と呼ばれる。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、隣接するアミノ酸からのポリペプチド、またはタンパク質の三次折り畳みによって隣接する非隣接アミノ酸からのポリペプチド上に形成され得る。隣接するアミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒に曝露されると保持されるが、三次折り畳みによって形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒で処理されると失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間的立体配座において、少なくとも３個、より通常は、少なくとも５個、約９個、または約８～１０個のアミノ酸を含む。「エピトープ」は、免疫グロブリンＶＨ／ＶＬ対によって通常結合される構造の単位を含む。エピトープは抗体の最小結合部位を定義し、したがって抗体の特異性の標的を表す。単一ドメイン抗体の場合、エピトープは、単離された可変ドメインによって結合された構造の単位を表す。用語「抗原決定基」および「エピトープ」はまた、本明細書において互換的に使用することができる。特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面グループ化を含み、特定の実施形態では、特定の３次元構造特性、および／または特定の電荷特性を有することができる。
本明細書で使用される場合、用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指す。用語はまた、２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖、ならびにそれらの全長抗体および抗原結合部分を含む種々の形態で構成される抗体を指し、例えば、免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、多重特異性抗体、二重特異性抗体、抗イディオタイプ抗体、二重特異性抗体、その機能的に活性なエピトープ結合部分、および／または二機能性ハイブリッド抗体を含む。
各重鎖は、上記重鎖の可変領域（ここでは、ＨＣＶＲまたはＶＨと略称する）および上記重鎖の定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。各軽鎖は、上記軽鎖の可変領域（ここでは、ＬＣＶＲまたはＶＬと略称する）および上記軽鎖の定常領域で構成される。軽鎖定常領域はＣＬドメインからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに分割され、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる保存領域が間に散在する。したがって、各ＶＨおよびＶＬ領域は、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなり、Ｎ末端からＣ末端に、以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で整列される。この構造は、当業者に周知である。
本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれには３つのＣＤＲがあり、それぞれの可変領域についてＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称される。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムによって異なるように定義されている。Ｋａｂａｔら（１９８７年）および（１９９１年）によって記載されたシステムは、抗体の任意の可変領域に適用可能な明確な残基番号付けシステムを提供するだけでなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと呼ぶ場合がある。Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎら（１９９５年）、ＭａｃＣａｌｌｕｍら（１９９６年）、およびＣｈｏｔｈｉａら（１９８７年）と（１９８９年）によって記載されている。さらに、他のＣＤＲ境界定義は、上記のシステムのいずれかに厳密に従う必要はないが、それにもかかわらず、特定の残基もしくは残基群またはさらに全体のＣＤＲが抗原結合に有意に影響しないという予測または実験的知見に照らしてそれらは短縮または延長され得るがＫａｂａｔ ＣＤＲと重複する。本明細書で使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されたＣＤＲを利用することができるが、好ましい実施形態は、Ｋａｂａｔで定義されたＣＤＲを使用する。
抗体の用語「抗原結合部分」とは、本明細書に記載される抗体の１つ以上の部分を指し、上記部分は、本明細書において上記で定義されるように依然として結合親和性を有する。完全な抗体の一部は、抗体の抗原結合機能を行うことができることが示されている。抗体の用語「抗原結合部分」に従って、結合部分の例は、（ｉ）Ｆａｂ部分、すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインで構成される一価部分；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２部分、すなわち、ジスルフィド架橋を介してヒンジ領域において互いに連結された２つのＦａｂ部分を含む二価部分；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインで構成されるＦｄ部分；（ｉｖ）抗体の単一アームのＦＬおよびＶＨドメインで構成されるＦｖ部分；ならびに（ｖ）ＶＨドメイン、またはＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＤＨ３もしくはＶＨ、ＣＨ２、ＣＨ３からなるｄＡｂ部分（ｄＡｂ、またはＶＬドメインのみを含む単一ドメイン抗体はまた標的エピトープに特異的に結合することが示されている）を含む。Ｆｖ部分の２つのドメイン、すなわち、ＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、合成リンカー、例えば、ポリＧ４Ｓアミノ酸配列（米国特許第１０，２５３，１１１号において配列番号２９として開示される「Ｇ４Ｓ」）、および組換え法を用いて互いにさらに連結され得、該組換え法は、ＶＬとＶＨ領域が組み合わさって、一価分子（一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）として公知である）を形成する単一タンパク質鎖として調製することを可能にする。抗体の用語「抗原結合部分」はまた、このような一本鎖抗体を含むことも意図される。「ダイアボディ」などの一本鎖抗体の他の形態も同様に本明細書に含まれる。ダイアボディは、ＶＨおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現される二価の二重特異性抗体であるが、２つのドメインが同じ鎖上で組み合わさることができるには短すぎるリンカーを使用し、それによって、上記ドメインは、異なる鎖の相補的ドメインと対合し、２つの抗原結合部位を形成することを強制する。免疫グロブリン定常ドメインとは、重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は、当該技術分野において公知である。
本明細書で使用される場合、用語「抗体試薬」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメインまたは免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、所与の抗原に特異的に結合するポリペプチドを指す。抗体試薬は、抗体または抗体の抗原結合ドメインを含むポリペプチドを含み得る。一部の実施形態では、抗体試薬は、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体の抗原結合ドメインを含むポリペプチドを含み得る。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略称する）、および軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略称する）を含むことができる。別の例では、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域および２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。用語「抗体試薬」は、抗体（例えば、一本鎖抗体、ＦａｂおよびｓＦａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、およびドメイン抗体（ｄＡｂ）断片、ならびに完全抗体）の抗原結合断片を包含する。
抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（ならびにそのサブタイプおよび組み合わせ）の構造的特徴を有することができる。抗体は、マウス、ウサギ、ブタ、ラット、および霊長類（ヒトおよび非ヒト霊長類）を含む任意の供給源由来であり得、および霊長類化抗体であり得る。抗体はまた、ミジボディ、ヒト化抗体、キメラ抗体などを含む。
さらに、本明細書に記載される抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、上記抗体または抗体部分と、１つ以上のさらなるタンパク質またはペプチドとの共有結合または非共有結合により形成される、より大きな免疫接着分子の一部であり得る。このような免疫接着分子に関連するものは、四量体ｓｃＦｖ分子を調製するためのストレプトアビジンコア領域の使用、ならびに二価およびビオチン化ｓｃＦｖ分子を生成するための、システイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒスチジニル、例えば、ヘキサヒスチジニルタグ（米国特許第１０，２５３，１１１号に配列番号３０として開示される「ヘキサヒスチジニルタグ」）の使用である。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、多重特異性抗体、二重特異性抗体、抗イディオタイプ抗体、二重特異性抗体、およびそれらの機能的に活性なエピトープ結合部分であり得る。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、完全ヒト抗体である。一部の実施形態では、抗体、その抗原結合部分は、ヒト化抗体または抗体試薬である。一部の実施形態では、抗体、その抗原結合部分は、完全にヒト化された抗体または抗体試薬である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、キメラ抗体または抗体試薬である。一部の実施形態では、抗体、その抗原結合部分は、組換えポリペプチドである。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＨＩ３Ｌ１に結合する細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ヒト化抗体もしくはキメラ抗体またはその抗原結合部分を含む。
用語「ヒト抗体」とは、その可変領域および定常領域が、例えば、Ｋａｂａｔら（１９９１年）により記載されるように、ヒト生殖細胞株の免疫グロブリン配列に対応するか、またはそれに由来する抗体を指す。しかしながら、ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系の免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によって、またはインビボでの体細胞突然変異によって導入された突然変異）を、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３において含むことができる。本明細書に記載される組換えヒト抗体は、可変領域を有し、ヒト生殖細胞系の免疫グロブリン配列に由来する定常領域も含み得る。Ｋａｂａｔら（１９９１年）を参照されたい。しかしながら、特定の実施形態によれば、このような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に起因してトランスジェニックである動物が使用される場合は、体細胞性インビボ突然変異誘発）に供され、その結果、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系のＶＨおよびＶＬ配列に関連するかまたはそれに由来するが、ヒト抗体生殖細胞系レパートリ内でインビボで自然に存在しない配列である。特定の実施形態によれば、この種の組換え抗体は、選択的な突然変異誘発もしくは逆突然変異、またはその両方の結果である。好ましくは、突然変異誘発は、親抗体のそれよりも大きい標的に対する親和性、および／または親抗体のそれよりも小さい非標的構造に対する親和性をもたらす。本明細書に提供される配列および情報からヒト化抗体を作製することは、過度の実験を行うことなく当業者によって実施することができる。１つのアプローチにおいて、モノクローナル抗体をヒト化するために使用される４つの一般的な工程があり、例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、同第６，８３５，８２３号、同第６，８２４，９８９号を参照されたい。これらは、（１）出発抗体軽鎖および重鎖可変ドメインのヌクレオチドおよび予測アミノ酸配列を決定すること；（２）ヒト化抗体を設計すること、すなわち、ヒト化プロセス中にどの抗体フレームワーク領域を使用するかを決定すること；（３）実際のヒト化方法／技術；および（４）ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現である。
一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、および／またはＣＡＲは、本明細書に記載される配列のバリアント、例えば、抗体ポリペプチドの保存的置換バリアントであり得る。一部の実施形態では、バリアントは、保存的に修飾されたバリアントである。保存的置換バリアントは、例えば、天然ヌクレオチド配列の突然変異によって得ることができる。本明細書において言及される「バリアント」は、天然または参照ポリペプチドと実質的に相同であるが、１つもしくは複数の欠失、挿入または置換のために天然または参照ポリペプチドのものとは異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。バリアントポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、天然または参照ＤＮＡ配列と比較した場合、ヌクレオチドの１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、活性、例えば、関連する標的ポリペプチド、例えば、ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１に対する抗原特異的結合活性を保持するバリアントタンパク質またはその一部をコードする配列を包含する。多種多様なＰＣＲベースの部位特異的突然変異誘発アプローチもまた当該技術分野において公知であり、当業者によって適用することができる。
通常、ヒト化抗体およびヒト抗体バリアント中のＣＤＲ領域は、それらが由来したマウスまたはヒト抗体中の対応するＣＤＲ領域と実質的に同一であり、より通常は同一である。一部の実施形態では、得られたヒト化免疫グロブリンまたはヒト抗体バリアントの結合親和性に顕著に影響することなく、ＣＤＲ残基の１つ以上の保存的アミノ酸置換を作製することが可能である。一部の実施形態では、ＣＤＲ領域の置換は、結合親和性を増大させることができる。
用語「キメラ抗体」とは、ある種由来の重鎖および軽鎖の可変領域に対する配列、ならびにヒト定常領域に連結されたマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体などの別の種由来の定常領域配列を含む抗体を指す。ヒト化抗体は、実質的にヒト抗体（アクセプター抗体と呼ばれる）からの可変領域フレームワーク残基、および実質的に非ヒト抗体、例えばマウス抗体（ドナー免疫グロブリンと呼ばれる）からの相補性決定領域を有する。また、定常領域（単数または複数）は、存在する場合、実質的にまたは完全にヒト免疫グロブリン由来である。ヒト可変ドメインは、通常、そのフレームワーク配列が、ＣＤＲが誘導された（マウス）可変領域ドメインと高程度の配列同一性を示すヒト抗体から選択される。重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク残基は、同一または異なるヒト抗体配列の領域と実質的に類似し得る。ヒト抗体配列は、天然に存在するヒト抗体の配列であり得るか、またはいくつかのヒト抗体のコンセンサス配列であり得る。
さらに、マウスまたは他の種からの遺伝子、適切な抗原特異性を有する抗体分子、および適切な生物学的活性を有するヒト抗体分子からの遺伝子をスプライシングすることによって、「キメラ抗体」を作製するために開発された技術を用いることができる。キメラ抗体の可変セグメントは、典型的には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものと連結される。ヒト定常領域ＤＮＡ配列は、不死化されたＢ細胞などの種々のヒト細胞から周知の手順に従って単離することができる。抗体は、軽鎖と重鎖定常領域の両方を含有することができる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、および、時にはＣＨ４領域を含むことができる。治療目的では、ＣＨ２ドメインを欠失または省略することができる。
さらに、本明細書に記載されるように、組換えヒト化抗体は、ヒトにおける治療のために、機能的活性を維持しながら、潜在的な免疫原性を減少させるためにさらに最適化され得る。この点に関して、機能的活性は、本明細書に記載される組換え抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲに関連する１以上の公知の機能的活性を提示することができるポリペプチドを意味する。このような機能的活性には、がん細胞への結合および／または抗がん活性が含まれる。さらに、機能的活性を有するポリペプチドとは、ポリペプチドが、本明細書に記載される参照抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲの活性と類似するが、必ずしも同一ではない活性を示すことを意味し、用量依存性の有無にかかわらず、例えば生物学的アッセイなどの特定のアッセイで測定される成熟型が含まれる。用量依存性が存在する場合、それは、参照抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲのそれと同一である必要はないが、むしろ本明細書に記載される参照抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲと比較して、所与の活性における用量依存性に実質的に類似している（すなわち、候補ポリペプチドは、本明細書に記載される抗体、抗原結合部分、および／またはＣＡＲに対して、より大きな活性を示すか、または約２５分の１以下、約１０分の１以下、もしくは約３分の１以下の活性を示す）。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体試薬（例えば、抗体またはＣＡＲ）は、天然に存在する生体分子ではない。例えば、ヒト起源の抗原に対して生じたマウス抗体は、ヒトの介入および操作、例えば、ヒトによって実施される製造工程がなければ、天然において生じない。キメラ抗体はまた、例えば、キメラ抗体が、複数の種から得られ、組換え分子に組み立てられた配列を含むという点で、天然に存在する生体分子ではない。特定の実施形態では、本明細書に記載されるヒト抗体試薬は、天然に存在する生体分子ではなく、例えば、ヒト抗原に対して指向される完全にヒトの抗体は、天然において負の選択を受け、ヒトの体内において天然には見出されない。
一部の実施形態では、抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、および／またはＣＡＲは、単離されたポリペプチドである。一部の実施形態では、抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、および／またはＣＡＲは、精製されたポリペプチドである。一部の実施形態では、抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、および／またはＣＡＲは、操作されたポリペプチドである。
「結合活性」は、抗原結合分子（本明細書に記載される抗体またはその抗原結合部分など）と関連抗原の間の結合の強度の尺度である。結合活性は、抗原決定基と抗原結合分子上のその抗原結合部位の親和性と、抗原結合分子上に存在する適切な結合部位の数の両方に関連する。典型的には、抗原結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される抗体または抗体の一部）は、解離定数（１０－５～１０－１２モル／リットル以下のＫＤ、例えば、１０－７～１０－１２モル／リットル以下、または１０－８１０－８～１０－１２モル／リットル）（すなわち、１０５～１０１２リットル／モル以上の会合定数（ＫＡ）、例えば、１０７～１０１２リットル／モルまたは１０８～１０１２リットル／モル）でそれらの同族または特異的抗原に結合する。１０－４モル／リットルより大きい任意のＫＤ値（または１０４Ｍ－１より低い任意のＫＡ値）は、一般的に、非特異的結合を示すと考えられる。意味のある（例えば、特異的である）と考えられる生物学的相互作用のためのＫＤは、典型的には、１０－１０Ｍ（０．１ｎＭ）～１０－５Ｍ（１００００ｎＭ）の範囲内である。相互作用が強ければ強いほど、そのＫＤは低くなる。例えば、本明細書に記載される抗体またはその一部上の結合部位は、５００ｎＭ未満、例えば２００ｎＭ未満、または１０ｎＭ未満、例えば５００ｐＭ未満の親和性で所望の抗原に結合する。抗原結合タンパク質の抗原または抗原決定基への特異的結合は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）およびサンドイッチ競合アッセイなどのスキャッチャード分析および／または競合結合アッセイ、当該技術分野においてそれ自体が公知であるその異なるバリアント、ならびに本明細書に言及される他の技術を含む、それ自体が公知である任意の適切な方法で決定することができる。
したがって、本明細書で使用される場合、「選択的に結合する」または「特異的に結合する」とは、本明細書に記載されるペプチド（例えば、抗体、ＣＡＲ、二重特異性抗体またはその一部）が、ＫＤ１０－５Ｍ（１００００ｎＭ）以下、例えば、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍまたはそれ以下で、がん細胞の細胞表面に存在する抗原などの標的に結合する能力を指す。特異的結合は、例えば、ポリペプチド剤の親和性および結合活性、ならびにポリペプチド剤の濃度によって影響され得る。当業者は、適切な細胞結合アッセイにおけるポリペプチド剤の滴定などの任意の適切な方法を用いて、本明細書に記載されるポリペプチド剤が標的に選択的に結合する適切な条件を決定することができる。標的に特異的に結合したポリペプチドは、非類似の競合体によって置換されない。特定の実施形態では、抗体、その抗原結合部分、ＣＡＲまたは二重特異性抗体は、それがタンパク質および／または高分子の複合混合物中でその標的抗原を優先的に認識する場合、抗原に特異的に結合すると言われる。
一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、１０－５Ｍ（１００００ｎＭ）以下、例えば、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、またはそれ未満の解離定数（ＫＤ）でＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、約１０－５Ｍ～１０－６Ｍの解離定数（ＫＤ）でＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、約１０－６Ｍ～１０－７Ｍの解離定数（ＫＤ）でＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、約１０－７Ｍ～１０－８Ｍの解離定数（ＫＤ）でＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、約１０－８Ｍ～１０－９Ｍの解離定数（ＫＤ）でＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、約１０－９Ｍ～１０－１０Ｍの解離定数（ＫＤ）でＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、約１０－１０Ｍ～１０－１１Ｍの解離定数（ＫＤ）でＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、約１０－１１Ｍ～１０－１２Ｍの解離定数（ＫＤ）でＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、１０－１２Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）でＣＨＩ３Ｌ１および／またはＰＤ－１に結合する。
本明細書に開示される本発明の代替の要素または実施形態のグループ化は、限定として解釈されるべきではない。各グループメンバーは、個々に、または本明細書に見られるグループの他のメンバーもしくは他の要素との任意の組み合わせで参照され、請求され得る。グループの１つ以上のメンバーは、便宜性および／または特許性の理由で、グループに含まれ得るか、またはグループから削除され得る。このような任意の包含または欠失が生じる場合、本明細書は、本明細書において、修飾されたグループを含み、したがって、添付の特許請求の範囲において使用される全てのマーカッシュグループの書面による説明を満たすとみなされる。
本明細書に別段の定義がない限り、本出願に関連して使用される科学用語および技術用語は、本開示が属する技術分野の当業者に一般的に理解される意味を有するものとする。本発明は、本明細書に記載される特定の方法、プロトコル、および試薬などに限定されず、それ自体変化し得ることが理解されるべきである。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを記載する目的で使用され、特許請求の範囲によってのみ定義される本発明の範囲を限定することを意図しない。免疫学および分子生物学における一般用語の定義は、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、第１９版（２０１１年）；Ｔｈｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（１９９９～２０１２年）；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（１９９５年）；Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００６年）；Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（２０１４年）；Ｌｅｗｉｎ’ｓ Ｇｅｎｅｓ ＸＩ（２０１４年）；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第４版（２０１２年）；Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１２年）；Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：ＤＮＡ（２０１３年）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＣＰＭＢ）（２０１４年）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＣＰＰＳ）（２００５年）；およびＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（ＣＰＩ）（２００３年）に見出すことができ、それらの内容は、全体が参照により全て本明細書に組み込まれる。
当業者は、使用する化学療法剤を容易に同定することができる。例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｄｒｕｇ Ｍａｎｕａｌ（２０１４年）；Ｃｈａｐｔｅｒ ８５ ｉｎ Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１８版（２０１１年）；２８～２９章、ｉｎ Ａｂｅｌｏｆｆｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、第５版（２０１３年）；Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第４版（２００３年）を参照されたい。
態様のいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される開示は、ヒトをクローニングするプロセス、ヒトの生殖細胞系の遺伝的同一性を修飾するプロセス、工業的もしくは商業的目的のためのヒト胚の使用、またはヒトもしくは動物にいずれもの実質的な医学的利益なしに苦しめる可能性のある動物の遺伝的同一性を修飾するプロセス、およびまたこのような方法から生じる動物に関するものではない。
他の用語は、本発明の種々の態様の説明の範囲内で本明細書において定義される。
本発明の二重特異性抗体
抗プログラム死－１（ＰＤ－１）または抗ＰＤ－１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）抗体を用いた免疫療法は、印象的な持続的反応のためにいくつかのがんの処置に対して承認されているが、全体として、ＰＤ－１遮断療法単独から現在恩恵を受ける患者はごく僅かな割合である（Ｔｏｐａｌｉａｎら、２０１２年；Ｈｅｒｂｓｔら、２０１４年；Ｐｏｗｌｅｓら、２０１４年；Ａｎｓｅｌｌら、２０１５年；Ｇａｒｏｎら、２０１５年；Ｐｏｓｔｏｗら、２０１５年；Ｒｏｂｅｒｔら、２０１５年ａ，ｂ；Ｗｅｂｅｒら、２０１５年；Ｎｇｈｉｅｍら、２０１６年；Ｒｉｂａｓら、２０１６年）。抗ＰＤ－１／Ｌ１抗体と他の免疫調節剤との組み合わせはより活性であるように考えられるが、それは有意な毒性を追加する（Ｗｏｌｃｈｏｋら、２０１３年；Ｌａｒｋｉｎら、２０１５年；Ｐｏｓｔｏｗら、２０１５年）。
本発明者らの以前の研究では、（ａ）ＣＨＩ３Ｌ１および／またはＣＨＩ３Ｌ１シグナル伝達の阻害、および（ｂ）ＰＤ－１などの少なくとも１つの免疫チェックポイントタンパク質の阻害が、がん、例えば肺がんの処置において相乗効果を提供することを示した。例えば、米国出願公開第２０１９／００６２４５７号を参照されたい。抗ＣＨＩ３Ｌ１抗体であるＦＲＧを抗ＰＤ－１抗体と組み合わせて投与した場合、相乗作用が観察され、この組み合わせはＢ１６Ｆ１０転移の低下において改善された効力を示し、それによって、ＣＨＩ３Ｌ１阻害とチェックポイントタンパク質の阻害の組み合わせは、がんの治療において相乗効果を提供することを示唆した。米国出願公開第２０１９／００６２４５７号の実施例２を参照されたい。ＣＨＩ３Ｌ１ポリペプチドとＰＤ－１ポリペプチドの両方に特異的に結合し、同時にＣＨＩ３Ｌ１と免疫チェックポイント阻害剤ＰＤ－１の両方を検出および中和する二重特異性抗体は、がんの処置において改善された相乗効果を示すことができると仮定された。
本明細書には、ＣＨＩ３Ｌ１ポリペプチドとＰＤ－１ポリペプチドの両方に特異的に結合し、同時にＣＨＩ３Ｌ１と免疫チェックポイント阻害剤ＰＤ－１の両方を検出および中和する二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合断片、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が記載される。このような二重特異性抗体、その抗原結合部分などは、例えば、がんの診断、予後、および／または処置を可能にすることができる。一部の実施形態では、本明細書に記載される技術は、がんのためのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＣＡＲ－Ｔ療法に関する。一部の実施形態では、本明細書に記載される技術は、がんに対するモノクローナル抗体療法に関する。一部の実施形態では、本明細書に記載される技術は、がんの治療のための抗体－薬物コンジュゲートに関する。
本明細書には、二重特異性抗ＣＨＩ３Ｌ１抗体および抗ＰＤ－１抗体、抗体試薬、ならびにその抗原結合断片に関連する方法および組成物が記載され、エクスビボおよびインビボで優れた特性、例えば、高感受性、高特異性、高結合親和性、中和活性を示す。本明細書に記載される化合物を投与することによる、処置の方法、例えば、がんを処置する方法もまた提供される。
本発明の二重特異性抗体は、抗ヒトＰＤ－１抗体の抗原結合部分、および抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の抗原結合部分を含む。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の骨格に結合した抗ヒトＰＤ－１一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ－ＰＤ１）を含む。代替の実施形態では、二重特異性抗体は、抗ヒトＰＤ－１抗体の骨格に結合した抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ－ＣＨＩ３Ｌ１）を含む。
当業者は、コードされた配列中の単一のアミノ酸または僅かな割合のアミノ酸を改変する、核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、欠失または付加が、「保存的に修飾されたバリアント」であり、その変更は、アミノ酸を化学的に類似したアミノ酸で置換し、標的抗原（例えば、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１）に特異的に結合する能力を保持することを認識する。このような保存的に修飾されたバリアントは、本開示と一致する多型バリアント、種間相同体、および対立遺伝子に加えられ、除外されない。
置換バリアントの例としては、ＣＤＲの配列を変更させない、例えば、ＶＨまたはＶＬドメインにおけるアミノ酸の保存的置換が挙げられる。ＣＤＲに含まれない配列中の保存的置換は、野生型または天然に存在する配列、例えば、ヒトもしくはマウスのフレームワークおよび／または抗体配列の定常領域に対する置換であり得る。
所与のアミノ酸は、類似の物理化学的特性を有する残基で置換され得、例えば、１つの脂肪族残基を別のもの（例えば、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＡｌａを互いに置換すること）、または１つの極性残基を別のもの（例えば、ＬｙｓとＡｒｇの間；ＧｌｕとＡｓｐの間；またはＧｌｎとＡｓｎの間）に置換する。他のこのような保存的置換、例えば、類似の疎水性特性を有する全領域の置換は、周知である。保存的アミノ酸置換を含むポリペプチドは、本明細書に記載されるアッセイのいずれか１つにおいて試験することができ、所望の活性、例えば、天然または参照ポリペプチドの抗原結合活性および特異性が保持されていることを確認することができる。
アミノ酸は、それらの側鎖の性質における類似性に従って分類することができる（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版（１９７５年）７３～７５頁）：（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）；（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）；（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）；（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。あるいは、天然に存在する残基は、共通の側鎖の性質に基づいてグループに分けることができる：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを必要とする。特定の保存的置換には、例えば、ＡｌａからＧｌｙへもしくはＳｅｒへ；ＡｒｇからＬｙｓへ；ＡｓｎからＧｌｎへもしくはＨへ；ＡｓｐからＧｌｕへ；ＣｙｓからＳｅｒへ；ＧｌｎからＡｓｎへ；ＧｌｕからＡｓｐへ；ＧｌｙからＡｌａへもしくはＰｒｏへ；ＨｉｓからＡｓｎへもしくはＧｌｎへ；ＩｌｅからＬｅｕへもしくはＶａｌへ；ＬｅｕからＩｌｅへもしくはＶａｌへ；ＬｙｓからＡｒｇへ、ＧｌｎへもしくはＧｌｕへ；ＭｅｔからＬｅｕへ、ＴｙｒへもしくはＩｌｅへ；ＰｈｅからＭｅｔへ、ＬｅｕへもしくはＴｙｒへ；ＳｅｒからＴｈｒへ；ＴｈｒからＳｅｒへ；ＴｒｐからＴｙｒへ；ＴｙｒからＴｒｐへ；および／またはＰｈｅからＶａｌへ、ＩｌｅへもしくはＬｅｕへの置換が含まれる。
バリアントアミノ酸配列またはＤＮＡ配列は、好ましくは、天然配列または参照配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれ以上同一である。天然配列と突然変異配列の間の相同性の程度（同一性パーセント）は、例えば、この目的のために、ワールド・ワイド・ウェブで一般的に使用される自由に利用可能なコンピュータプログラム（例えば、デフォルト設定のＢＬＡＳＴｐまたはＢＬＡＳＴｎ）を用いて２つの配列を比較することによって決定することができる。
天然アミノ酸配列の改変は、当業者に公知である多数の技術のいずれかによって達成することができる。突然変異は、例えば、天然配列の断片へのライゲーションを可能にする制限部位に隣接する突然変異配列を含むオリゴヌクレオチドを合成することによって、特定の遺伝子座に導入することができる。ライゲーション後、得られた再構築配列は、所望のアミノ酸挿入、置換、または欠失を有する類似体をコードする。あるいは、必要とされる置換、欠失、または挿入に従って改変された特定のコドンを有する改変されたヌクレオチド配列を提供するために、オリゴヌクレオチド指向部位特異的突然変異誘発法を用いることができる。
ポリペプチドの適切な立体構造の維持に関与しないいずれものシステイン残基は、分子の酸化的安定性を改善し、異常な架橋を防止するために、一般的にセリンで置換することもできる。逆に、システイン結合（単数または複数）をポリペプチドに付加して、その安定性を改善し、またはオリゴマー化を促進することができる。
本明細書に記載される抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲが、本明細書に提供されるＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１ＣＤＲの配列と同一ではない少なくとも１つのＣＤＲを含む特定の実施形態では、その少なくとも１つのＣＤＲのアミノ酸配列は、当業者に周知である方法によって選択することができる。例えば、Ｆｕｊｉｉ、２００４年、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｒａｎｄｏｍ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ」 Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ２４８巻：３４５～３４９頁（全体が参照により本明細書に組み込まれる）、特に図２および３．３章は、目的の任意のＣＤＲのライブラリーを作製する方法を記載する。これにより、当業者は、本明細書に記載される特異的ＣＤＲ配列の保存的置換バリアントを含む代替のＣＤＲを同定することができ、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合部分に存在する場合、がん細胞表面抗原に結合する抗原またはその抗原結合部分をもたらす。また、Ｆｕｊｉｉらに記載される方法は、当業者に、公知の重鎖断片と組み合わせた場合に所望の結合挙動を与える軽鎖配列をスクリーニングすることを可能にし、その逆も可能である。
一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＨＩ３Ｌ１ポリペプチドの１つ以上のエピトープに結合する抗ＣＨＩ３Ｌ１抗体またはその抗原結合部分を含む細胞外ドメイン；膜貫通ドメイン、１つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、および一次シグナル伝達ドメインを含む。例示的な抗ＣＨＩ３Ｌ１および抗ＰＤ－１抗体ならびにその抗原結合部分、さらに例示的なエピトープは、本明細書の他の箇所に記載される。
本明細書で使用される場合、「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、抗原結合ドメイン（例えば、抗体の抗原結合部分（例えば、ｓｃＦｖ））、膜貫通ドメイン、ならびにＴ細胞シグナル伝達および／またはＴ細胞活性化ドメインを含む、人工的に構築されたハイブリッドポリペプチドを指す。ＣＡＲは、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用して、選択された標的に対するＴ細胞特異性および反応性を非ＭＨＣ制限的に再方向付けする能力を有する。非ＭＨＣ制限性抗原認識は、ＣＡＲを発現するＴ細胞に、抗原処理に依存しない抗原を認識する能力を与え、したがって、腫瘍逃避の主要なメカニズムをバイパスする。さらに、Ｔ細胞において発現される場合、ＣＡＲは、有利には、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ鎖およびベータ鎖と二量体化しない。最も一般的には、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、マウスまたはヒト化モノクローナル抗体の可変重鎖および軽鎖領域を融合することに由来する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）で構成される。あるいは、種々の実施形態では、ｓｃＦｖは、（例えば、Ｆａｂライブラリーから得られる抗体の代わりに）Ｆａｂに由来するｓｃＦｖを使用することができ、このｓｃＦｖは、膜貫通ドメインに、次に細胞内シグナル伝達ドメインに融合される。「第１世代」ＣＡＲは、抗原結合時にＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）シグナルを単独で提供するものを含み、「第２世代」ＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８またはＣＤ１３７）と活性化（ＣＤ３ζ）の両方を提供するものを含む。「第３世代」ＣＡＲは、複数の共刺激性（例えば、ＣＤ２８およびＣＤ１３７）ドメインおよび活性化ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を提供するものを含む。種々の実施形態では、ＣＡＲは、抗原に対して高い親和性または結合活性を有するように選択される。ＣＡＲのさらなる検討は、例えば、Ｍａｕｓら（２０１４年）；Ｒｅａｒｄｏｎら（２０１４年）； Ｈｏｙｏｓら（２０１２年）；Ｂｙｒｄら（２０１４年）；ＭａｈｅｒおよびＷｉｌｋｉｅ（２００９年）；Ｔａｍａｄａら（２０１２年）に見出すことができ、その各々は全体が参照により本明細書に組み込まれる。
態様のいずれかの一部の実施形態では、ＣＡＲは、ヒト化ＣＨＩ３Ｌ１特異的またはヒト化ＰＤ－１特異的な結合ドメイン；膜貫通ドメイン；１つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；および一次シグナル伝達ドメインを含む細胞外結合ドメインを含む。本明細書で使用される場合、用語「結合ドメイン」、「細胞外ドメイン」、「細胞外結合ドメイン」、「抗原特異的結合ドメイン」、および「細胞外抗原特異的結合ドメイン」は、互換的に使用され、目的の標的抗原、例えば、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１に特異的に結合する能力を有するＣＡＲを提供する。結合ドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来することができる。
一部の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、種々のドメイン間のリンカー残基を含むことができ、例えば、分子の適切な間隔および立体配座のために添加され得る。特定の実施形態では、リンカーは、可変領域連結配列である。「可変領域連結配列」は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを接続し、得られたポリペプチドが同じ軽鎖および重鎖可変領域を含む抗体と同じ標的分子に対する特異的結合親和性を保持するように、２つのサブ結合ドメインの相互作用に適合するスペーサー機能を提供するアミノ酸配列である。本明細書で企図されるＣＡＲは、１、２、３、４、もしくは５またはそれ以上のリンカーを含むことができる。特定の実施形態では、リンカーの長さは、約１～約２５のアミノ酸、約５～約２０のアミノ酸、または約１０～約２０のアミノ酸、または任意の介在するアミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、またはそれを超えるアミノ酸長である。
特定の実施形態では、ＣＡＲの結合ドメインの後に、１つ以上の「スペーサードメイン」が続き、これは、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離れて移動させ、適切な細胞／細胞接触、抗原結合および活性化を可能にする領域を指す。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来することができる。特定の実施形態では、スペーサードメインは、限定されないが、１つ以上の重鎖定常領域、例えば、ＣＨ２およびＣＨ３を含む免疫グロブリンの一部である。スペーサードメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または改変された免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含むことができる。
ＣＡＲの結合ドメインの後には、一般的に、１つ以上の「ヒンジドメイン」が続き、これは、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離れた位置に配置し、適切な細胞／細胞接触、抗原結合および活性化を可能にする役割を果たす。ＣＡＲは、一般的に、結合ドメインと膜貫通ドメイン（ＴＭ）の間に１つ以上のヒンジドメインを含む。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来することができる。ヒンジドメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または改変された免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含むことができる。本明細書に記載されるＣＡＲでの使用に適した例示的なヒンジドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７などの１型膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域を含み、これらの分子からの野生型ヒンジ領域であり得るかまたは改変され得る。別の実施形態では、ヒンジドメインはＣＤ８αヒンジ領域を含む。
「膜貫通ドメイン」は、細胞外結合部分および細胞内シグナル伝達ドメインを融合し、ＣＡＲを免疫エフェクター細胞の細胞膜に固定するＣＡＲの一部である。ＴＭドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来することができる。ＴＭドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータまたはゼータ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、およびＰＤ１から誘導され得る（すなわち、少なくともその膜貫通領域（単数または複数）を含み得る）。
一部の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、標的抗原への有効なＣＡＲ結合のメッセージを免疫エフェクター細胞の内部に形質導入し、エフェクター細胞機能、例えば、活性化、サイトカイン産生、増殖および細胞傷害活性、例えば、ＣＡＲ結合標的細胞への細胞傷害性因子の放出、または細胞外ＣＡＲドメインへの抗原結合によって誘発される他の細胞応答に関与するＣＡＲの部分をいう。一部の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、１つ以上の「共刺激性シグナル伝達ドメイン」および「一次シグナル伝達ドメイン」を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激的にまたは阻害的に調節する。刺激様式で作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含有し得る。本発明において特に使用される一次シグナル伝達ドメインを含むＩＴＡＭの例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「共刺激シグナル伝達ドメイン」または「共刺激ドメイン」は、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを指す。共刺激分子は、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子であり、抗原に結合するとＴリンパ球の効率的な活性化および機能に必要な第２のシグナルを提供する。このような共刺激分子の例としては、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０が含まれる。一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、およびＣＤ１３４、ならびにＣＤ３ζの一次シグナル伝達ドメインからなる群から選択される１つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。
一部の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートが提供される。特定の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に記載されるように、抗体、抗体試薬、またはその抗原結合部分を含む。薬物は、例えば、本明細書の他の箇所に記載されるような化学療法分子であり得る。一部の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、抗体またはその抗原結合部分に直接コンジュゲートされたおよび／またはそれに結合された化学療法剤を含む。一部の実施形態では、結合は、非共有結合、例えば、水素結合、静電相互作用、またはファン・デル・ワールス相互作用であり得るが、しかしながら、結合は共有結合でもあり得る。「コンジュゲートされた」とは、少なくとも２つの分子の共有結合を意味する。一部の実施形態では、組成物は、抗体－薬物結合体であり得る。
一部の実施形態では、抗体、抗体試薬、またはその抗原結合部分は、複数の化学療法分子に結合および／またはコンジュゲートされ得る。一部の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、複数の化学療法分子に結合および／またはコンジュゲートされ得る。一部の実施形態では、所与の化学療法分子と抗体またはその抗原結合部分の比は、約１：１～約１，０００：１であり得、例えば、単一抗体試薬分子は、約１～約１，０００個の個々の化学療法分子に連結され、コンジュゲートされ得るなどである。
一部の実施形態では、抗体、またはその抗原結合部分、および化学療法剤は、足場材料中に存在し得る。治療用組成物に使用するのに適した足場材料は、当該技術分野において公知であり、限定されないが、ナノ粒子；マトリックス；ヒドロゲル；および生体材料、生体適合性および／または生分解性足場材料を含み得る。本明細書で使用される場合、用語「ナノ粒子」とは、約１０－９または１メートルの１０億分の１から数十億分の１のオーダーの粒子を指す。用語「ナノ粒子」は、ナノスフェア、ナノロッド、ナノシェル、およびナノプリズムを含み、これらのナノ粒子はナノネットワークの一部であり得る。
用語「ナノ粒子」はまた、ナノ粒子のサイズを有するリポソームおよび脂質粒子を包含する。本明細書で使用される場合、用語「マトリックス」とは、本明細書に記載される組成物の構成要素（例えば、抗体またはその抗原結合部分）を含む３次元構造を指す。マトリックス構造の非限定的な例には、発泡体；ヒドロゲル；電気紡糸繊維；ゲル；繊維マット；スポンジ；３次元足場；不織マット；織布材料；ニット材料；繊維束；および繊維、ならびに他の材料フォーマットが挙げられる。例えば、各々が参照により全体が本明細書に組み込まれるＲｏｃｋｗｏｏｄら（２０１１年）、米国特許出願公開第２０１１／０１６７６０２号；同第２０１１／０００９９６０号；同第２０１２／０２９６３５２号；米国特許第８，１７２，９０１号を参照されたい。マトリックスの構造は、組成物の意図された用途に応じて当業者によって選択することができ、例えば、電気紡糸マトリックスは、発泡体よりも大きな表面積を有することができる。
一部の実施形態では、足場はヒドロゲルである。本明細書で使用される場合、用語「ヒドロゲル」とは、水に不溶であるが、大量の水を吸収および保持して、安定であり、しばしば軟らかく、柔軟な構造を形成することができる３次元ポリマー構造を指す。一部の実施形態では、水は、ポリマーネットワークのポリマー鎖間に浸透し、その後、膨潤およびヒドロゲルの形成を引き起こすことができる。一般的に、ヒドロゲルは高吸収性である。ヒドロゲルは、生物医学的用途に多くの望ましい特性を有する。例えば、それらは、毒性がなく、組織に適合するようにすることができ、水、イオン、および小分子に対して高い透過性を有する。ヒドロゲルは、高吸収性（９９％を超える水を含有することができる）であり、天然（例えば、絹）または合成ポリマー、例えば、ＰＥＧで構成され得る。
本明細書で使用される場合、「生体材料」とは、生体適合性であり、生分解性である材料を指す。本明細書で使用される場合、用語「生体適合性」は、細胞に対して毒性でない物質を指す。一部の実施形態では、物質は、インビトロでの細胞へのその添加が、約２０％未満の細胞死をもたらす場合、「生体適合性」であると考えられる。一部の実施形態では、物質は、インビボでの細胞へのその添加がインビボで炎症および／または他の有害作用を誘発しない場合、「生体適合性」であると考えられる。本明細書で使用される場合、用語「生分解性」とは、生理学的条件下で分解される物質を指す。一部の実施形態では、生分解性物質は、細胞装置によって分解される物質である。一部の実施形態では、生分解性物質は、化学的プロセスによって分解される物質である。
本明細書で使用される場合、用語「核酸」または「核酸配列」とは、リボ核酸、デオキシリボ核酸またはその類似体の単位を組み込むポリマー分子を指す。核酸は、一本鎖または二本鎖のいずれかであり得る。一本鎖核酸は、変性二本鎖ＤＮＡの一本鎖核酸であり得る。一部の実施形態では、核酸は、ｃＤＮＡ、例えば、イントロンを欠く核酸であり得る。
抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当該技術分野において公知である種々の方法によって調製される。これらの方法には、限定されないが、オリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、および以前に調製されたバリアントまたは抗体の非バリアントバージョンのカセット突然変異誘発による調製が含まれる。本明細書に記載される少なくとも１つの抗体、部分またはポリペプチドをコードする核酸配列は、従来の技術に従ってベクターＤＮＡを用いて組換えられ得、ライゲーションのための平滑末端または互い違いの末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じて付着末端のフィルイン、望ましくない接続を回避するためのアルカリホスファターゼ処理、および適切なリガーゼとのライゲーションを含む。このような操作のための技術を使用して、モノクローナル抗体分子、抗体試薬、その抗原結合領域、またはＣＡＲをコードする核酸配列を構築することができる。
ＤＮＡなどの核酸分子は、それが転写および翻訳調節情報を含むヌクレオチド配列を含み、このような配列がポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に「作動可能に連結」されている場合、ポリペプチドを「発現することができる」と言われる。作動可能な連結とは、調節ＤＮＡ配列および発現されることが求められるＤＮＡ配列が、回収可能な量でペプチドまたは抗体部分としての遺伝子発現を可能にするような方法で接続される連結である。遺伝子発現に必要な調節領域の正確な性質は、類似の技術分野において周知であるように、生物によって異なる場合がある。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲをコードする核酸は、ベクターによって構成される。本明細書に記載される態様の一部では、本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲをコードする核酸配列、またはそのいずれかのモジュールは、ベクターに作動可能に連結される。用語「ベクター」とは、本明細書で使用される場合、宿主細胞への送達、または異なる宿主細胞間での移入のために設計された核酸構築物を指す。本明細書で使用される場合、ベクターは、ウイルス性または非ウイルス性であり得る。用語「ベクター」は、適切な制御要素と結合した場合に複製することができ、遺伝子配列を細胞に移入することができる任意の遺伝要素を包含する。ベクターには、限定されないが、クローニングベクター、発現ベクター、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、染色体、ウイルス、ビリオンなどが含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「発現ベクター」とは、ベクター上の転写調節配列に連結された配列からＲＮＡまたはポリペプチドの発現を指示するベクターを指す。発現される配列は、しばしば、必ずしもそうではないが、細胞に対して異種である。発現ベクターは、さらなる要素を含むことができ、例えば、発現ベクターは、２つの複製系を有することができ、したがって、２つの生物、例えば、発現のためにヒト細胞において、およびクローニングおよび増幅のために原核生物宿主において、それを維持することを可能にする。用語「発現」とは、ＲＮＡおよびタンパク質の産生、ならびに必要に応じて、タンパク質の分泌に関与する細胞プロセスを指し、適用可能な場合、限定されないが、例えば、転写、転写物プロセシング、翻訳およびタンパク質フォールディング、修飾および処理を含む。「発現産物」には、遺伝子から転写されたＲＮＡ、および遺伝子から転写されたｍＲＮＡの翻訳によって得られたポリペプチドが含まれる。用語「遺伝子」とは、適切な調節配列に作動可能に連結された場合に、インビトロまたはインビボで（ＤＮＡが）ＲＮＡに転写される核酸配列を意味する。遺伝子は、コード領域の前後に、例えば、５’非翻訳（５’ＵＴＲ）または「リーダー」配列および３’ＵＴＲまたは「トレーラー」配列、ならびに個々のコードセグメント（エキソン）間の介在配列（イントロン）を含み得るかまたは含み得ない。
本明細書で使用される場合、用語「ウイルスベクター」とは、ウイルス起源の少なくとも１つの要素を含み、ウイルスベクター粒子中にパッケージされる能力を有する核酸ベクター構築物を指す。ウイルスベクターは、非必須ウイルス遺伝子の代わりに、本明細書に記載される抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲをコードする核酸を含有することができる。ベクターおよび／または粒子は、いずれかの核酸をインビトロまたはインビボのいずれかで細胞内に移入する目的で使用することができる。多数の形態のウイルスベクターが当該技術分野において公知である。
「組換えベクター」とは、インビボで発現することができる異種核酸配列、または「導入遺伝子」を含むベクターを意味する。本明細書に記載されるベクターは、一部の実施形態では、他の適切な組成物および治療と組み合わせることができることが理解されるべきである。一部の実施形態では、ベクターはエピソームである。適切なエピソームベクターの使用は、目的のヌクレオチドを対象において高コピー数の余分な染色体ＤＮＡに維持する手段を提供し、それによって染色体組み込みの潜在的な効果を排除する。
実施形態のいずれかの一態様では、本明細書には、本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲ、またはこのような抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲをコードする核酸を含む細胞が記載される。
本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲの発現は、原核細胞または真核細胞のいずれにおいても起こり得る。適切な宿主には、インビボまたはインサイチュのいずれかで酵母、昆虫、真菌、鳥類および哺乳類細胞を含む細菌または真核生物宿主、または哺乳動物、昆虫、鳥類もしくは酵母起源の宿主細胞が挙げられる。哺乳動物細胞または組織は、ヒト、霊長類、ハムスター、ウサギ、げっ歯類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ヤギ、イヌまたはネコ由来であり得るが、任意の他の哺乳動物細胞を使用することができる。さらに、例えば、酵母ユビキチンヒドロラーゼ系を使用することによって、ユビキチン－膜貫通ポリペプチド融合タンパク質のインビボ合成を達成することができる。このように産生された融合タンパク質は、インビボで処理されるかまたはインビトロで精製および処理され得、特定のアミノ末端配列を有する、本明細書に記載される抗体またはその一部の合成を可能にする。さらに、酵母（または細菌）の直接発現における開始コドン由来のメチオニン残基の保持に関連する問題が回避され得る。グルコースに富んだ培地中で酵母を増殖させた場合に、大量に産生される解糖酵素をコードする能動的に発現された遺伝子からプロモーターおよび終止要素を組み込んだ一連の酵母遺伝子発現系のいずれも、本明細書に記載される組換え抗体またはその抗原結合部分を得るために利用することができる。公知の解糖遺伝子はまた、非常に効率的な転写制御シグナルを提供することができる。例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子のプロモーターおよびターミネーターシグナルを利用することができる。
昆虫において本明細書に記載される抗体またはその抗原結合部分の産生を達成することができる。例えば、当業者に公知である方法によって膜貫通ポリペプチドを発現するように操作されたバキュロウイルスを昆虫宿主に感染させることによる。
一部の実施形態では、導入されたヌクレオチド配列は、レシピエント宿主において自律的複製が可能なプラスミドまたはウイルスベクターに組み込まれる。この目的のために、広範な種々のベクターのいずれも使用することができ、当業者に公知であり、利用可能である。特定のプラスミドまたはウイルスベクターを選択する際に重要な因子には、ベクターを含有するレシピエント細胞が認識され、ベクターを含有しないレシピエント細胞から選択され得る容易さ；特定の宿主において望ましいベクターのコピー数；および異なる種の宿主細胞間でベクターを「シャトル」し得ることが望ましいかどうかが含まれる。
当該技術分野において公知である原核生物ベクターの例には、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で複製可能なプラスミドなどのプラスミドが含まれる。抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲをコードするｃＤＮＡの発現に有用な他の遺伝子発現要素には、限定されないが、（ａ）ウイルス転写プロモーターおよびそれらのエンハンサー要素、例えば、ＳＶ４０初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ、およびモロニーマウス白血病ウイルス；（ｂ）スプライス領域およびＳＶ４０後期領域由来のものなどのポリアデニル化部位；ならびに（ｃ）ＳＶ４０におけるものなどのポリアデニル化部位が含まれる。免疫グロブリンｃＤＮＡ遺伝子は、例えば、発現要素として、ＳＶ４０初期プロモーターおよびそのエンハンサー、マウス免疫グロブリンＨ鎖プロモーターエンハンサー、ＳＶ４０後期領域ｍＲＮＡスプライシング、ウサギＳ－グロビン介在配列、免疫グロブリンおよびウサギＳ－グロビンポリアデニル化部位、およびＳＶ４０ポリアデニル化要素を使用して発現され得る。
一部のｃＤＮＡ、一部のゲノムＤＮＡで構成される免疫グロブリン遺伝子では、転写プロモーターはヒトサイトメガロウイルスであり得、プロモーターエンハンサーはサイトメガロウイルスおよびマウス／ヒト免疫グロブリンであり得、ｍＲＮＡスプライシングおよびポリアデニル化領域は天然の染色体免疫グロブリン配列であり得る。
一部の実施形態では、げっ歯類細胞におけるｃＤＮＡ遺伝子の発現では、転写プロモーターは、ウイルスＬＴＲ配列であり、転写プロモーターエンハンサーは、いずれかまたは両方のマウス免疫グロブリン重鎖エンハンサーおよびウイルスＬＴＲエンハンサーであり、スプライス領域は、３１ｂｐを超えるイントロンを含み、ポリアデニル化および転写終結領域は、合成される免疫グロブリン鎖に対応する天然の染色体配列に由来する。他の実施形態では、他のタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列を上記発現要素と組み合わせて、哺乳動物細胞におけるタンパク質の発現を達成する。
遺伝子は、発現ベクターにアセンブルされるかまたはその内に挿入される。次に、キメラ免疫グロブリン鎖遺伝子産物を発現することができるレシピエント細胞に、抗体、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲ、またはキメラＨ鎖もしくはキメラＬ鎖コード遺伝子を単独でトランスフェクトするか、あるいはキメラＨ鎖およびキメラＬ鎖遺伝子をコトランスフェクトする。トランスフェクトされたレシピエント細胞を、取り込まれた遺伝子の発現を可能にする条件下で培養し、発現された免疫グロブリン鎖または無傷の抗体もしくは断片を培養物から回収する。
一部の実施形態では、抗体、その抗原結合部分、ＣＡＲ、またはキメラＨ鎖およびＬ鎖をコードする遺伝子、またはそれらの部分は、別々の発現ベクターにアセンブルされ、次に、それを使用してレシピエント細胞にコトランスフェクトする。各ベクターは、２つの選択可能な遺伝子、細菌系において選択するために設計された第１の選択可能な遺伝子、および真核生物系において選択するために設計された第２の選択可能な遺伝子を含むことができ、各ベクターは異なる遺伝子対を有する。この戦略は、まず、細菌系における遺伝子の産生を指示し、増幅を可能にするベクターをもたらす。このようにして産生され、細菌宿主中で増幅された遺伝子は、その後、これらを用いて、真核細胞にコトランスフェクトされ、所望のトランスフェクトされた遺伝子を有するコトランスフェクトされた細胞の選択を可能にする。細菌系で使用するための選択可能な遺伝子の非限定的な例は、アンピシリンに対する耐性を付与する遺伝子、およびクロラムフェニコールに対する耐性を付与する遺伝子である。真核生物のトランスフェクタントに使用するための選択可能な遺伝子には、キサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子（ｇｐｔと称される）およびＴｎ５由来のホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｎｅｏと称される）が含まれる。あるいは、遺伝子を同じ発現ベクターにアセンブルすることができる。
発現ベクターのトランスフェクション、および本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲの産生では、レシピエント細胞株は骨髄腫細胞であり得る。骨髄腫細胞は、トランスフェクトされた免疫グロブリン遺伝子によってコードされる免疫グロブリンを合成し、アセンブルしおよび分泌することができ、免疫グロブリンのグリコシル化のメカニズムを有する。例えば、一部の実施形態では、レシピエント細胞は、組換えＩｇ産生骨髄腫細胞ＳＰ２／０（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ ８２８７）である。ＳＰ２／０細胞は、トランスフェクションされた遺伝子によってコードされる免疫グロブリンのみを産生する。骨髄腫細胞は、培養またはマウスの腹腔内で増殖させることができ、分泌された免疫グロブリンを腹水から得ることができる。他の適切なレシピエント細胞は、ヒトもしくは非ヒト起源のＢリンパ球、ヒトもしくは非ヒト起源のハイブリドーマ細胞、または種間ヘテロハイブリドーマ細胞などのリンパ系細胞を含む。
本明細書に記載されるキメラ、ヒト化、または複合ヒト抗体構築物、抗体、その抗原結合部分、および／またはＣＡＲを有する発現ベクターは、形質転換、トランスフェクション、コンジュゲーション、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、およびジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）デキストランなどのポリカチオンとの適用などの生化学的手段、ならびに当業者に公知であるエレクトロポレーション、直接マイクロインジェクション、およびマイクロプロジェクタイル衝撃などの機械的手段を含む、種々の適切な手段のいずれかによって、適切な宿主細胞に導入することができる。
伝統的に、モノクローナル抗体は、マウスハイブリドーマ系において天然分子として産生させてきた。その技術に加えて、本明細書に記載される方法および組成物は、モノクローナル抗体の組換えＤＮＡ発現を提供する。これにより、選択される宿主種において、ヒト化抗体、ならびに抗体誘導体および融合タンパク質のスペクトルの産生が可能となる。細菌、酵母、トランスジェニック動物およびニワトリ卵における抗体の産生もまた、ハイブリドーマに基づく産生系の代替である。トランスジェニック動物の主な利点は、再生可能供給源からの潜在的な高収率である。
一態様では、本明細書に記載される単離された抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲを含む細胞が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、細胞表面上に発現される。一部の実施形態では、細胞は、本明細書に記載される単離された抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲをコードする核酸を含む。
一部の実施形態では、細胞は免疫細胞である。本明細書で使用される場合、「免疫細胞」とは、免疫応答において役割を果たす細胞を指す。免疫細胞は造血系由来であり、Ｂ細胞およびＴ細胞などのリンパ球；ナチュラルキラー細胞；単球、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、好塩基球および顆粒球などの骨髄細胞を含む。一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞；ＮＫ細胞；ＮＫＴ細胞；Ｂ細胞およびＴ細胞などのリンパ球；ならびに単球、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、好塩基球および顆粒球のような骨髄細胞である。
特定の実施形態では、細胞（例えば、免疫細胞）は、ＣＡＲをコードするレトロウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクターで形質導入される。例えば、免疫エフェクター細胞は、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、Ｏｘ４０、またはそれらの任意の組み合わせの細胞内シグナル伝達ドメインを有する、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１ポリペプチドに結合する抗ＣＨＩ３Ｌ１／抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合部分を含むＣＡＲをコードするベクターで形質導入される。このように、これらの形質導入された細胞は、ＣＡＲ媒介性の細胞傷害性応答を誘発することができる。
レトロウイルスは、遺伝子送達のための一般的なツールである。特定の実施形態において、レトロウイルスは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを細胞に送達するために使用される。本明細書で使用される場合、用語「レトロウイルス」とは、そのゲノムＲＮＡを線状二本鎖ＤＮＡコピーに逆転写し、その後、そのゲノムＤＮＡを宿主ゲノムに共有結合的に統合するＲＮＡウイルスを指す。ウイルスが宿主ゲノムに組み込まれると、「プロウイルス」と呼ばれる。プロウイルスは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩの鋳型として機能し、新しいウイルス粒子を産生するのに必要な構造タンパク質および酵素をコードするＲＮＡ分子の発現を指示する。
特定の実施形態での使用に適した例示的なレトロウイルスは、限定されないが、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍ－ＭｕＬＶ）、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、ギボンアペ白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、スプーマウイルス、フレンドマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ならびにレンチウイルスを含む。
本明細書で使用される場合、用語「レンチウイルス」とは、複合レトロウイルスの群（または属）を指す。例示的なレンチウイルスには、限定されないが、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス；ＨＩＶ１型およびＨＩＶ２型を含む）；ビスナマエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス；ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）；ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）；ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）；およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が含まれる。一実施形態では、ＨＩＶベースのベクター骨格（すなわち、ＨＩＶシス作用配列要素）が好ましい。特定の実施形態では、レンチウイルスを使用して、ＣＡＲを含むポリヌクレオチドを細胞に送達する。
レトロウイルスベクター、より詳細にはレンチウイルスベクターを本発明の特定の実施形態を実施する際に使用することができる。したがって、用語「レトロウイルス」または「レトロウイルスベクター」とは、本明細書で使用される場合、それぞれ「レンチウイルス」および「レンチウイルスベクター」を含むことを意味する。
ＣＨＩ３Ｌ１抗原結合部分
本明細書で使用される場合、「ＣＨＩ３Ｌ１」、「キンチナーゼ－３様タンパク質１」、または「ＹＫＬ－４０」とは、少なくともマクロファージ、軟骨細胞、好中球、滑膜細胞、およびいくつかのがん細胞によって分泌される約４０ｋＤａの糖タンパク質を指す。ＣＨＩ３Ｌ１は、キチナーゼ活性を持たず、Ｔｈ２促進サイトカインであり、ＡＫＴ抗アポトーシスシグナル伝達経路に関連しており、星状細胞の遊走を誘導する。ＣＨＩ３Ｌ１発現産物の配列は、多くの種で公知であり、例えば、ヒトＣＨＩ３Ｌ１（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号１１１６）ｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ：ＮＭ＿００１２７６．１およびＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ：ＮＭ＿００１２７６．２）およびポリペプチド（ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ：ＮＰ＿００１２６７．１およびＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ：ＮＰ＿００１２６７．２）が挙げられる。
一部の実施形態では、本発明の二重特異性抗体のＣＨＩ３Ｌ１抗原結合部分は、米国特許第１０，２５３，１１１号に開示され、以下の表１に転載される配列番号１～３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲの１つ以上、および／または配列番号４～６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む。
Figure 2022531444000002
態様のいずれかの一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１ポリペプチドに特異的に結合する二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、米国特許第１０，２５３，１１１号に開示される配列番号１３～２４から選択されるエピトープに特異的に結合する。態様のいずれかの一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１ポリペプチドに特異的に結合する二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲは、米国特許第１０，２５３，１１１号に開示される配列番号１３のエピトープに特異的に結合する。
実施態様の一部では、抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の骨格は、米国特許第１０，２５３，１１１号に開示される配列番号３６のアミノ酸配列を有する重鎖配列、または配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖配列に対して保存的置換を含み、保存的置換は、ＣＤＲに含まれない配列中にある。代替の実施形態では、抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の骨格は、米国特許第１０，２５３，１１１号に開示される配列番号３６のアミノ酸配列を有するＦＲＧ抗体の重鎖配列、または配列番号３８のアミノ酸配列を有するＦＲＧ抗体の軽鎖配列を含み、それぞれ、配列番号１３および配列番号として下に提供される。
Figure 2022531444000003
他の代替実施形態では、本発明の二重特異性抗体のＣＨＩ３Ｌ１抗原結合部分は、表３に開示される配列番号１～１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲのうちの１つ以上、および／または配列番号１３～２０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲのうち１つ以上を含む。例えば、国際公開出願第２０１９０６０６７５号を参照されたい。
Figure 2022531444000004
Figure 2022531444000005
ＰＤ－１抗原結合部分
抗ＰＤ－１抗体の例は、米国特許第１０，３４４，０９０号（Ｙｕａｎら）；同第１０，３２３，０９１号（ｖａｎ Ｄｉｊｋら）；同第１０，３１６，０８９号（Ｂａｒｕａｈら）；同第１０，２８０，２２４号（Ｗａｎｇら）；同第１０，２３９，９４２号（Ａｍｉｒｉｎａら）；同第１０，２２１，２４４号（Ｗｏｎｇら）；同第１０，１５５，０３７号（Ａｂｄｉｃｈｅら）；米国特許出願公開第２０１１／０１２３５５０号（Ｓｈｉｂａｙａｍａら）；同第２０１６／０３７６３６７号（Ｙｕａｎら）；同第２０１７／０２１０８０６号（Ｌｉｕ）に開示される。
任意の抗ＰＤ－１抗体の抗原結合部分は、本発明の二重特異性抗体において使用することができる。一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ１を検出および中和する二重特異性抗体は、ＰＤ－１一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ－ＰＤ１）およびリンカー（太字、下線で示す）を含み、表４に提供される。
Figure 2022531444000006
医薬組成物
実施形態のいずれかの一態様では、本明細書には、本明細書に記載される二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲ、または本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲをコードする核酸、または本明細書に記載される細胞を含む組成物が記載される。一部の実施形態では、組成物は医薬組成物である。本明細書で使用される場合、用語「医薬組成物」とは、医薬産業において使用するために許容される薬学的に許容される担体と組み合わせた活性剤を指す。「薬学的に許容される」という語句は、本明細書では、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適し、合理的な利益／リスク比に相応する化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために使用される。
組成物の中に溶解または分散された活性成分を含有する薬理学的組成物の調製は、当該技術分野において十分に理解され、処方に基づいて限定される必要はない。典型的には、このような組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして注射用として調製されるが、しかしながら、使用前に液体中で溶液または懸濁液に適した固体形態もまた調製することができる。調製物はまた、乳化され得るか、またはリポソーム組成物として提供され得る。活性成分は、薬学的に許容され、活性成分と適合性であり、本明細書に記載される治療方法における使用に適した量の賦形剤と混合することができる。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、およびそれらの組み合わせである。さらに、所望であれば、組成物は、活性成分の有効性を増大または維持する湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤などの少量の補助物質を含有することができる。本明細書に記載される治療組成物は、その中に構成要素の薬学的に許容される塩を含むことができる。薬学的に許容される塩には、例えば、塩酸もしくはリン酸などの無機酸、または酢酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸で形成される酸付加塩（ポリペプチドの遊離アミノ基で形成される）が含まれる。遊離カルボキシル基で形成された塩はまた、無機塩基、例えば、水酸化ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウムまたは水酸化第二鉄、および有機塩基、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導することができる。生理学的に許容可能な担当は、当該技術分野において周知である。例示的な液体担体は、活性成分および水に加えて物質を含有しない、または生理的ｐＨ値でリン酸ナトリウムなどの緩衝液、生理食塩水、またはリン酸緩衝生理食塩水などのその両方を含有する無菌水溶液である。なおさらに、水性担体は、１を超える緩衝塩、ならびに塩、例えば塩化ナトリウムおよび塩化カリウム、デキストロース、ポリエチレングリコールおよび他の溶質を含有することができる。液体組成物はまた、水に加えて、および水を排除することに加えて、液相を含有することができる。このような追加の液相の例は、グリセリン、綿実油などの植物油、および水－油エマルジョンである。特定の障害または状態の処置に有効な本発明において使用される活性剤の量は、障害または状態の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定することができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲ、または本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲをコードする核酸を含む組成物は凍結乾燥物であり得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載される技術は、本明細書に記載される組成物の治療有効量を含む、注射器またはカテーテル、例えば、臓器特異的カテーテル（例えば、腎臓カテーテル、胆道カテーテル、心臓カテーテルなど）に関する。
一態様では、本明細書には、ＣＨＩ３Ｌ１＋／ＰＤ－１＋細胞を阻害するかまたは殺傷する方法が記載され、細胞を、本明細書に記載される単離された二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲ、このようなポリペプチドをコードする核酸、このようなポリペプチドもしくは核酸を含む細胞、またはこのようなポリペプチドもしくは核酸を含む組成物と接触させることを含む。ＣＨＩ３Ｌ１＋／ＰＤ－１＋細胞を阻害することは、細胞の代謝活性、転移、および／または増殖を阻害することを含むことができる。代謝活性、転移（例えば、遊走アッセイ）および増殖を測定するアッセイは、当該技術分野において周知である。同様に、ＣＨＩ３Ｌ１＋／ＰＤ－１＋細胞の殺傷を測定するアッセイ、例えば、細胞生存アッセイは、当該技術分野において周知である。
本明細書で使用される場合、「ＣＨＩ３Ｌ１＋／ＰＤ－１＋」細胞は、例えば、同じタイプの健常細胞、または同じタイプの健常細胞に見られるＣＨＩ３Ｌ１＋／ＰＤ－１＋の平均レベルと比較して、増加したレベルのＣＨＩ３Ｌ１＋およびＰＤ－１＋を発現する細胞である。
本明細書に記載される態様のいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物を投与された対象は、ＣＨＩ３Ｌ１の上昇したレベル、またはその対象におけるレベルの事前評価と比較して増加したＣＨＩ３Ｌ１のレベルを有すると決定された対象であり得る。態様のいずれかの一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１の上昇したレベルは、循環ＣＨＩ３Ｌ１のレベルである。本明細書に記載される態様のいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物を投与された対象は、ＣＨＩ３Ｌ１＋であるがん細胞を有すると決定された対象であり得る。
本明細書に記載される態様のいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物を投与することを含む方法は、上昇したレベルのＣＨＩ３Ｌ１を有する対象を同定する第１の工程をさらに含むことができる。態様のいずれかの一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１の上昇したレベルは、循環ＣＨＩ３Ｌ１のレベルである。本明細書に記載される態様のいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物を投与することを含む方法は、ＣＨＩ３Ｌ１＋であるがん細胞を有する対象を同定する第１の工程をさらに含むことができる。
本明細書で使用される場合、「ＣＨＩ３Ｌ１＋」細胞は、例えば、同じタイプの健常細胞または同じタイプの健常細胞に見られるＣＨＩ３Ｌ１の平均レベルと比較して、増加したレベルのＣＨＩ３Ｌ１＋を発現する細胞である。態様のいずれもの一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１の増加したレベルは、参照において見られるレベルの少なくとも１．５倍であり、例えば、参照レベルより１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍またはそれよりも高いレベルであり得る。
一態様では、本明細書に記載される技術は、本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲ、または本明細書に記載される抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲをコードする核酸を対象に投与することを含む方法に関する。一部の実施形態では、対象は、がんおよび／または悪性腫瘍の処置を必要とする。一部の実施形態では、対象は、前立腺がん、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、グリア芽腫、黒色腫、悪性黒色腫、および肺がんに対する処置を必要とする。一部の実施形態では、方法は、対象を処置する方法である。一部の実施形態では、方法は、対象におけるがんを処置する方法である。
一態様では、本明細書に記載される技術は、本明細書に記載される二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲ、または本明細書に記載される二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＡＲをコードする核酸を対象に投与することを含む方法に関する。
一態様では、本明細書には、必要とする対象においてがんを処置する方法が記載され、方法は、本明細書に記載される細胞、例えば、本明細書に記載される二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲを含む細胞を投与することを含む。一部の実施形態では、細胞は免疫細胞である。
一実施形態では、本明細書には、必要とする対象においてがんを処置する方法が記載され、方法は、本明細書に記載される核酸、または核酸を含む免疫細胞を対象に投与することを含み、対象の免疫細胞は、核酸によってコードされるポリペプチドを発現させられる。一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。核酸は、例えば、所望の細胞型に選択的に結合する細胞型特異的プロモーターおよび／または組成物の使用により、特定の細胞型を標的化することができる。例えば、核酸のアプタマーへのコンジュゲーションは、標的化送達を可能にすることができる。例えば、ＭｃＮａｍａｒａら（２００６年）を参照されたい。代替の実施形態では、核酸は、ナノ粒子、デンドリマー、ポリマー、リポソーム、またはカチオン性送達系などの薬物送達系を用いて送達することができる。正に帯電したカチオン性イオン送達系は、核酸分子（負に帯電した）の結合を促進し、また、負に帯電した細胞膜における相互作用を増大させ、細胞による核酸の効率的な取り込みを可能にする。カチオン性脂質、デンドリマー、またはポリマーは、核酸に結合され得るか、または核酸を収容する小胞またはミセルを形成するように誘導され得る（例えば、Ｋｉｍら（２００８年）を参照されたい）。小胞またはミセルの形成は、全身的に投与された場合、核酸の分解をさらに妨げる。カチオン性－阻害性核酸複合体を作製および投与する方法は、当業者の能力の範囲内にある。核酸の全身送達に有用な薬物送達系のいくつかの非限定的な例としては、ＤＯＴＡＰオリゴフェクタミン、「固体核酸脂質粒子」、カルジオリピン、ポリエチレンイミン、Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）ペプチド、およびポリアミドアミンが挙げられる。一部の実施形態では、核酸は、全身投与のためにシクロデキストリンと複合体を形成する。核酸およびシクロデキストリンの投与方法および医薬組成物は、全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，４２７，６０５号に見出すことができる。核酸の標的化送達は、例えば、ＩｋｅｄａおよびＴａｉｒａ（２００６年）；Ｓｏｕｔｓｃｈｅｋら（２００４年）；Ｌｏｒｅｎｚｅら（２００４年）に記載され、その各々が参照により全体が本明細書に組み込まれる。一例として、核酸は、免疫細胞上に発現される受容体のリガンド、例えば、ＴＣＲを含むリポソーム中に阻害剤をカプセル化することによって、免疫細胞を標的とすることができる。一部の実施形態では、リポソームは、免疫細胞に特異的なアプタマーを含むことができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法に関する。ＣＡＲ－Ｔ細胞および関連する治療は、対象を処置するために標的細胞型（例えば、がん細胞）に特異的に結合するＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の養子細胞移入に関する。一部の実施形態では、治療の一部として投与される細胞は、対象に対して自家であり得る。一部の実施形態では、治療の一部として投与される細胞は、対象に対して自家ではない。一部の実施形態では、細胞は、ＣＡＲを発現するように操作され、および／または遺伝子修飾される。ＣＡＲ－Ｔ療法のさらなる検討は、例えば、各々が参照により全体が本明細書組み込まれるＭａｕｓら（２０１４年）；Ｒｅａｒｄｏｎら、Ｎｅｕｒｏ－Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１４年、１６巻：１４４１～１４５８頁；Ｈｏｙｏｓら（２０１２年）；Ｂｙｒｄら（２０１４年）；ＭａｈｅｒおよびＷｉｌｋｉｅ（２００９年）；Ｔａｍａｄａら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１２年、１８巻：６４３６～６４４５頁に見出すことができる。
一般的に、本明細書に記載される細胞、例えば、Ｔ細胞または免疫細胞を含む医薬組成物は、範囲内の全ての整数値を含む、１０２～１０１０細胞／ｋｇ体重、好ましくは１０５～１０６細胞／ｋｇ体重の投薬量で投与することができることが記述され得る。細胞の数は、組成物がその中に含まれる細胞のタイプと同様に意図される最終的な用途に依存する。本明細書に提供される使用について、細胞は、一般的に、１リットル以下の容積であり、５００ｍＬ以下、さらには２５０ｍＬまたは１００ｍＬ以下であり得る。したがって、所望の細胞の密度は、典型的には、１０６細胞／ｍＬより大きく、一般的に１０７細胞／ｍＬより大きく、一般的に１０８細胞／ｍＬ以上である。臨床的に関連する免疫細胞の数は、累積的に１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、または１０１２細胞と等しいかまたはそれを超える複数の注入に分配することができる。本発明の一部の実施形態では、特に、注入された全ての細胞が特定の標的抗原に向け直されるため、より少ない数の細胞が、１０６／キログラム（患者あたり１０６～１０１１）の範囲で投与され得る。ＣＡＲを発現する細胞組成物は、これらの範囲内の投薬量で複数回投与することができる。細胞は、治療を受ける患者に対して、同種、同系、異種、または自家であり得る。所望であれば、処置はまた、免疫応答の誘導を増大させるために、本明細書に記載されるマイトジェン（例えば、ＰＨＡ）またはリンホカイン、サイトカイン、および／またはケモカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－アルファ、ＩＬ－１８、およびＴＮＦ－ベータ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、Ｆｌｔ３－Ｌ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１αなど）の投与を含むことができる。一部の実施形態では、投薬量は、体重ｋｇあたり約１×１０５細胞から約１×１０８細胞までであり得る。一部の実施形態では、投薬量は、体重ｋｇあたり約１×１０６細胞から約１×１０７細胞までであり得る。一部の実施形態では、投薬量は、体重ｋｇあたり約１×１０６細胞であり得る。一部の実施形態では、１用量の細胞を投与することができる。一部の実施形態では、細胞の用量は、例えば、１回、２回、またはそれ以上反復され得る。一部の実施形態では、細胞の用量は、例えば、１日１回、週１回、または月１回をベースに投与することができる。
薬剤の投薬量範囲は、効力に依存し、所望の効果、例えば、腫瘍成長の減速または腫瘍サイズの低下を生じさせるのに十分な大きさを包含する。投薬量は、許容できない副作用を引き起こすほど大きくすべきではない。一般的に、投薬量は、患者の年齢、状態、および性別に応じて変化し、当業者によって決定することができる。また、合併症が生じた場合には、個々の医師が用量を調節することができる。一部の実施形態では、投薬量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ体重から０．５ｍｇ／ｋｇ体重までの範囲である。一部の実施形態では、用量範囲は、５μｇ／ｋｇ体重から１００μｇ／ｋｇ体重までである。あるいは、用量範囲は、血清レベルを１μｇ／ｍＬ～１０００μｇ／ｍＬの間に維持するように調節することができる。全身投与について、対象は、治療量、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上で投与され得る。
上述の用量の投与を繰り返すことができる。一部の実施形態では、用量は、１日１回、または１日に複数回、例えば、限定されないが、１日に３回投与される。一部の実施形態では、上述の用量は、数週間または数ヵ月間、毎日投与される。処置期間は、対象の臨床的進行および治療に対する応答性に依存する。
一部の実施形態では、用量は、約２ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約２ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約４ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約５ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約６ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約８ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約１０ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約１５ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約１００ｍｇ／ｍ２～約７００ｍｇ／ｍ２であり得る。一部の実施形態では、用量は、約２５０ｍｇ／ｍ２であり得る。一部の実施形態では、用量は、約３７５ｍｇ／ｍ２であり得る。一部の実施形態では、用量は、約４００ｍｇ／ｍ２であり得る。一部の実施形態では、用量は、約５００ｍｇ／ｍ２であり得る。
一部の実施形態では、用量は、静脈内投与することができる。一部の実施形態では、静脈内投与は、約１０分～約３時間の期間にわたって生じさせる注入であり得る。一部の実施形態では、静脈内投与は、約３０分～約９０分の期間にわたって生じさせる注入であり得る。
一部の実施形態では、用量は、週に約１回投与され得る。一部の実施形態では、用量は、週１回投与され得る。一部の実施形態では、用量は、約１２週間～約１８週間、週１回投与され得る。一部の実施形態では、用量は、約２週間ごとに投与され得る。一部の実施形態では、用量は、約３週間ごとに投与され得る。一部の実施形態では、用量は、約２ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇを約２週間ごとに投与することができる。一部の実施形態では、用量は、約２ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇを約３週間ごとに投与することができる。一部の実施形態では、用量は、約２ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇを約２週間ごとに静脈内投与することができる。一部の実施形態では、用量は、約２ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇを約３週間ごとに静脈内投与することができる。一部の実施形態では、用量は、約２００ｍｇ／ｍ２～約４００ｍｇ／ｍ２を約１週間ごとに静脈内投与することができる。一部の実施形態では、用量は、約２００ｍｇ／ｍ２～約４００ｍｇ／ｍ２を約２週間ごとに静脈内投与することができる。一部の実施形態では、用量は、約２００ｍｇ／ｍ２～約４００ｍｇ／ｍ２を約３週間ごとに静脈内投与することができる。一部の実施形態では、合計約２～約１０用量が投与される。一部の実施形態では、合計４用量が投与される。一部の実施形態では、合計５用量が投与される。一部の実施形態では、合計６用量が投与される。一部の実施形態では、合計７用量が投与される。一部の実施形態では、合計８用量が投与される。一部の実施形態では、投与は、合計約４週間～約１２週間行われる。一部の実施形態では、投与は、合計約６週間行われる。一部の実施形態では、投与は、合計約８週間行われる。一部の実施形態では、投与は、合計約１２週間行われる。一部の実施形態では、初期用量は、次の用量よりも約１．５～約２．５倍多い場合がある。
一部の実施形態では、用量は、約１ｍｇ～約２０００ｍｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約３ｍｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約１０ｍｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約３０ｍｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約１０００ｍｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、約２０００ｍｇであり得る。一部の実施形態では、用量は、毎日、約３ｍｇを静脈内注入によって与えることができる。一部の実施形態では、用量は、毎日、約１０ｍｇを静脈内注入によって与えることができる。一部の実施形態では、用量は、週３回、約３０ｍｇを静脈内注入によって与えることができる。
治療有効量は、腫瘍サイズ、腫瘍成長などにおいて統計的に有意であり、測定可能な変化を生じるのに十分な量の薬剤である（有効性の測定値は、本明細書では以下に記載される）。このような有効量は、動物実験と同様に臨床試験でも測定することができる。
薬剤は、注射によって、または経時的に徐々に注入することによって、静脈内投与することができる。所与の経路のための適切な製剤が与えられると、例えば、本明細書に記載される方法および組成物に有用な薬剤は、静脈内、鼻腔内、吸入、腹腔内、筋肉内、皮下、腔内に投与することができ、望ましい場合には蠕動手段によって、または当業者に公知である他の手段によって送達することができる。本明細書で使用される化合物は、がんを有する患者に経口、静脈内または筋肉内投与されることが好ましい。腫瘍塊への直接的な局所投与もまた、特に意図される。
少なくとも１つの薬剤を含有する治療組成物は、例えば、通常、単位用量で投与され得る。用語「単位用量」とは、治療組成物に関して使用される場合、対象のための単回投薬量として適切な物理的に離散した単位を指し、各単位は、必要とされる生理学的に許容される希釈剤、すなわち、担体またはビヒクルと関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性物質を含有する。
組成物は、投薬処方と適合する方法であり、治療的に有効な量で投与される。投与される量およびタイミングは、治療される対象、活性成分を利用する対象のシステムの能力、および所望される治療効果の程度に依存する。
投与に必要な活性成分の正確な量は、医師の判断に依存し、各個人に特有である。しかしながら、全身投与に適した投薬量範囲は、本明細書に開示され、投与経路に依存する。投与に適したレジメンはまた様々であるが、最初の投与と、それに続く注射または他の投与によって１時間以上の間隔で反復投与により代表される。あるいは、インビボ治療のために指定された範囲で血液中の濃度を維持するのに十分な持続静脈内注入が企図される。
一部の実施形態では、方法は、組み合わせ療法の一部として、本明細書に記載される医薬組成物を、１つ以上の追加の化学療法剤、生物学的製剤、薬物、または処置とともに投与することをさらに含む。一部のこのような実施形態では、化学療法剤、生物学的製剤、薬物、または処置は、放射線療法、外科手術、抗体試薬、および／または小分子からなる群から選択される。
本明細書に記載される方法の一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載される医薬組成物を投与される対象に、１種以上の化学療法剤を投与することをさらに含む。化学療法剤の非限定的な例には、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド；アルキルスルホン酸塩、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボクオン、メチュレドーパ、およびウレドパ；エチレンイミンおよびメチルアメラミン、例えば、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチルロメラミン；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコディクチン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロスレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１ＩおよびカリケアマイシンオメガＩ１；ダイネミシン、例えば、ダイネミシンＡ；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（例えば、モルフォリノ－ドキソルビシン、シアノモルフォリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン；ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えば、フロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミド配糖体；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）クレモフォアフリー、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌ）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ－１１）（例えば、５－ＦＵおよびロイコボリンによるイリノテカンの治療レジメン）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン、例えば、オキサリプラチン処置レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））；細胞増殖を低下するＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば：エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））およびＶＥＧＦ－Ａの阻害剤、および上記のいずれか１つの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が含まれ得る。
用語「細胞傷害性剤」とは、本明細書で使用される場合、細胞の機能を阻害もしくは防止し、および／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。用語は、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２およびＬｕの放射性同位元素）、化学療法剤、および毒素、例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素、それらの断片および／またはバリアントなどを含むことを意図する。
本明細書で使用される場合、用語「化学療法」または「化学療法剤」とは、異常な細胞増殖によって特徴付けられる疾患の処置において治療的有用性を有する任意の化学剤を指す。このような疾患には、腫瘍、新生物およびがん、ならびに過形成性増殖によって特徴付けられる疾患が含まれる。本明細書で使用される化学療法剤は、化学剤と生物学剤の両方を包含する。これらの薬剤は、がん細胞が生存を維持するために依存する細胞活性を阻害するように機能する。化学療法剤のカテゴリーには、アルキル化剤／アルカロイド剤、代謝拮抗剤、ホルモンまたはホルモン類似体、および他の抗腫瘍剤が含まれる。これらの薬物のほとんどは、全てではないにしても、がん細胞に対して直接毒性を示し、免疫刺激を必要としない。一実施形態では、化学療法剤は、固形腫瘍などの新生物を処置する際に使用される薬物である。一実施形態では、化学療法剤は放射性分子である。当業者は、使用する化学療法剤を容易に同定することができる（例えば、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１４版（２００１年）の第８６章；Ａｂｅｌｏｆｆ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、第２版（２０００年）の第１７章）。本明細書に記載される二重特異性および多特異的ポリペプチド剤は、さらなる化学療法剤とともに使用することができる。
「放射線療法」とは、細胞が正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊する能力を制限するように、細胞に十分な損傷を誘導するために、指向性ガンマ線またはベータ線を使用することを意味する。処置の投薬量および期間を決定するために当該技術分野において公知である多くの方法が存在することが理解される。典型的な処置は、１回限りの投与として与えられ、典型的な投薬量は、一日あたり１０～２００単位（グレイ）の範囲である。
一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、さらなる免疫療法を対象に投与することをさらに含むことができる。本明細書で使用される場合、「免疫療法」とは、患者自身の免疫系を腫瘍と戦うように誘導するように設計された多様な一連の治療戦略を指し、限定されないが、表在性膀胱がんに対する膀胱内ＢＣＧ免疫療法、悪性黒色腫および腎細胞がん腫に対するなどの特異的免疫応答を生成するワクチン、前立腺由来細胞に対する特異的免疫応答を誘導するために患者由来の樹状細胞に前立腺酸ホスファターゼペプチドを負荷する、前立腺がんに対するシプリューセル－Ｔの使用、１つ以上の免疫細胞タイプを刺激する、サイトカイン、増殖因子および／またはシグナル伝達分子（例えば、インターロイキン）の投与、患者への再導入前に腫瘍抗原に特異的なリンパ球および／または樹状細胞のエクスビボ拡大および／または刺激、イミキモド、養子細胞移入、および／または、例えば、国際公開第２００３／０６３７９２号および米国特許第８，３２９，６６０号に記載される方法が含まれる。一部の実施形態では、免疫療法はＮＫ応答を刺激する。他の実施形態では、免疫療法は、養子細胞移入アプローチ、すなわち、養子免疫療法である。
一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、さらなる抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲを含むＴ細胞を対象に投与することをさらに含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、対象にサイトカインを投与することをさらに含むことができる。抗体およびサイトカインに基づく治療は、当該技術分野において公知であり、非限定的な例として、アレムツズマブ；ベバシズマブ；ブレンツキシマブベドチン；セツキシマブ；ゲムツズマブ；イブリツモマブチウキセタン；イピリムマブ；オファツムマブ；パンチブムマブ；リツキシマブ；トシツモマブ；トラスツズマブ；インターロイキン－２、およびインターフェロン－アルファを含むことができる。
例えば、がんに対する所与の処置の有効性は、熟練した臨床医によって決定され得る。しかしながら、処置は、例えば、腫瘍の徴候または症状のいずれか１つのもしくは全てが有益な方法で変化するか、あるいは他の臨床的に認められた症状が、本明細書に記載の薬剤による治療後に、例えば、少なくとも１０％向上されるか、または改善さえされる場合、本明細書で使用される用語として「有効な処置」とみなされる。有効性はまた、入院または医学的介入の必要性（すなわち、疾患の進行が停止する）によって評価されるように、個人が悪化しないことによって測定することができる。これらの指標を測定する方法は、当業者に公知であり、および／または本明細書に記載される。
疾患の治療のための有効量とは、それを必要とする哺乳動物に投与された場合に、その用語が本明細書で定義されるように、その疾患に対して効果的な処置をもたらすのに十分な量を意味する。薬剤の有効性は、例えばがん、例えば腫瘍サイズ、腫瘍体積、腫瘍密度、血管新生、腫瘍成長速度などの物理的指標を評価することによって決定することができる。
対象におけるＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１レベル
一態様では、本明細書には、がんを検出し、予後予測し、および／または診断する方法が記載され、方法は、試料を、本明細書に記載される、二重特異性抗体、抗体試薬またはその抗原結合部分と接触させることによって、対象から得られた試料中のＣＨＩ３Ｌ１および／またはＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１のレベルを検出するかまたは測定することを含み、参照レベルに対するＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１のレベルの増加は、対象ががんを有し、がんを発症するリスクが増加していることを示す。
最近の報告では、がんを有する患者におけるＰＤ－１などの免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）に対するバイオマーカーとしてのＰＤ－Ｌ１発現の感受性が中等度であり、治療転帰はＰＤ－Ｌ１発現レベルが低いかまたはない患者において観察されることが示されている（Ｐａｚ－Ａｒｅｓら、２０１８年；Ｈｅｌｌｍａｎｎら、２０１９年；Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄら、２０２０年）。したがって、別の態様では、がんを検出し、予後予測し、および／または診断する方法であって、方法は、試料を、本明細書に記載される、二重特異性抗体、抗体試薬またはその抗原結合部分と接触させることによって、対象から得られた試料中のＣＨＩ３Ｌ１のレベルを検出するかまたは測定することを含み、参照レベルに対するＣＨＩ３Ｌ１レベルの増加は、対象ががんを有し、がんを発症するリスクが増加していることを示す。
本明細書に記載される態様のいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物を投与される対象は、上昇したレベルのＣＨＩ３Ｌ１および／またはＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１を有すると決定された対象であり得る。一部の実施態様では、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の上昇したレベルは、循環ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１のレベルである。本明細書に記載される任意の態様の一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物を投与される対象は、ＣＨＩ３Ｌ１＋／ＰＤ－１＋であるがん細胞を有すると決定された対象であり得る。
本明細書に記載される態様のいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物を投与することを含む方法は、上昇したレベルのＣＨＩ３Ｌ１および／またはＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１を有する対象を同定する第１の工程をさらに含むことができる。一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１および／もしくはＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の上昇したレベルは、循環ＣＨＩ３Ｌ１および／またはＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１のレベルである。本明細書に記載される態様のいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物を投与することを含む方法は、ＣＨＩ３Ｌ１＋／ＰＤ－１＋またはＣＨＩ３Ｌ１＋／ＰＤ－Ｌ１＋であるがん細胞を有する対象を同定する第１の工程をさらに含むことができる。
一態様では、本明細書には、対象から得られた試験試料を、本明細書に記載される、抗体、抗体試薬、またはその抗原結合部分と接触させ、および試料中のＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１の存在またはレベルを示すシグナルの存在または強度を検出することを含むアッセイが記載され、参照レベルに対するＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１レベルの増加は、対象ががんを有するかまたは発症するリスクがより高いことを示す。
一態様では、本明細書には、がんの治療を必要とする対象を同定する方法が記載され、方法は、対象から得られた試験試料を、本明細書に記載される、二重特異性抗体、抗体試薬、またはその抗原結合部分と接触させ、試料中のＣＨＩ３Ｌ１および／またはＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１の存在またはレベルを示すシグナルの存在または強度を検出し；ならびにＣＨＩ３Ｌ１および／またはＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１の発現レベルが参照レベルに対して増加する場合に、がんの処置が必要であるとして対象を同定することを含む。
一態様では、本明細書には、対象が、抗ＣＨＩ３Ｌ１／抗ＰＤ－１療法、例えば、抗ＣＨＩ３Ｌ１／抗ＰＤ－１二重特異性抗体、抗体試薬、もしくはその抗原結合部分、またはＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１に結合する二重特異性ＣＡＲを含むＴ細胞による処置に応答する可能性があるかどうかを決定する方法が記載され、方法は、対象から得られた試験試料を、本明細書に記載される抗体、抗体試薬、またはその抗原結合部分と接触させ、試料中のＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の存在もしくはレベルを示すシグナルの存在または強度を検出し；ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１のレベルが参照レベルに対して増加した場合に、抗ＣＨＩ３Ｌ１／抗ＰＤ－１療法による処置に応答する可能性が高いことを決定し；ならびにＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１のレベルが参照レベルに対して増加しない場合に、抗ＣＨＩ３Ｌ１／抗ＰＤ－１による処置に応答する可能性が低いことを決定することを含む。
一態様では、本明細書には、がんを処置する方法が記載され、対象から得られた試験試料を、本明細書に記載される抗体、抗体試薬、またはその抗原結合部分と接触させ；試料中のＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１の存在またはレベルを示すシグナルの存在または強度を検出し；ならびにＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルが参照レベルに対して増加する場合に、抗ＣＨＩ３Ｌ１／抗ＰＤ－１二重特異性抗体療法により対象を処置することを含む。一態様では、本明細書には、がんを処置する方法が記載され、治療的に有効な量の抗ＣＨＩ３Ｌ１／抗ＰＤ－１二重特異性抗体療法を、がんの処置が必要であると決定され、さらに参照レベルに対して増加したＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルを有することが決定された対象に投与することを含み、抗ＣＨＩ３Ｌ１／抗ＰＤ－１療法は、本明細書に記載される、抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、もしくはＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１を認識する二重特異性ＣＡＲを含むＴ細胞；核酸；細胞；または組成物を含む。
一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１の発現レベルは、ＣＨＩ３Ｌ１遺伝子の発現産物、例えば、ＣＨＩ３Ｌ １ＲＮＡ転写物またはＣＨＩ３Ｌ１ポリペプチドのレベルを決定することによって測定することができ、ＰＤ－１の発現レベルは、ＰＤ－１遺伝子の発現産物、例えば、ＰＤ－１ＲＮＡ転写物またはＰＤ－１ポリペプチドのレベルを決定することによって測定することができる。このような分子は、生体試料、例えば、生体液から単離し、誘導し、または増幅することができる。一部の実施形態では、検出可能なシグナルは、ＣＨＩ３Ｌ１分子またはＰＤ－１分子が存在する場合に、抗体またはその抗原結合部分によって生成される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、検出可能に標識されるかまたは検出可能なシグナルを生成することができる。一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１のレベルは、ウエスタンブロット；免疫沈降；酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）；放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）；サンドイッチアッセイ；蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）；免疫組織学的染色；ラジオイムノメトリックアッセイ；免疫蛍光アッセイ；質量分析；ＦＡＣＳ；および免疫電気泳動アッセイからなる群から選択される方法を用いて決定される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、検出可能に標識されるかまたは検出可能なシグナルを生成する。一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１の発現レベルは、１つ以上の参照遺伝子または参照タンパク質の発現レベルに対して正規化される。一部の実施態様では、ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１の参照レベルは、対象から得られた以前の試料中のＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１の発現レベルである。
一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１のレベルは、ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１ポリペプチドのレベルであり得る。ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１ポリペプチドの検出は、当該技術分野において公知の任意の方法に従うことができる。本技術によるＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１ポリペプチドを検出するための免疫学的方法には、限定されないが、抗体技術、例えば、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、イムノブロット、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、および本明細書に記載される抗体試薬を使用する誘導技術が含まれる。
免疫化学的方法は、標的分子（例えば、抗原、または本明細書に記載される実施形態においてはＣＨＩ３Ｌ１もしくはＰＤ－１ポリペプチド）に特異的な抗体試薬の使用を必要とする。一部の実施形態では、本明細書に記載されるアッセイ、方法、および／またはシステムは、抗ＣＨＩ３Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体試薬を含むことができる。一部の実施形態では、抗体試薬は、検出可能に標識され得る。一部の実施形態では、抗体試薬は、固体支持体に付着され（例えば、固体支持体に結合され）得る。一部の実施形態では、固体支持体は、粒子（限定されないが、アガロースまたはラテックスビーズまたは粒子または磁性粒子を含む）、ビーズ、ナノ粒子、ポリマー、基質、スライド、カバースリップ、プレート、ディッシュ、ウェル、膜、および／または回折格子を含むことができる。固体支持体は、限定されないが、ポリマー、プラスチック、レジン、多糖、シリコンまたはシリカベースの材料、炭素、金属、無機ガラス、および膜を含む多くの異なる材料を含むことができる。
一実施形態では、本明細書に記載されるアッセイ、方法、および／またはシステムは、ＥＬＩＳＡを含むことができる。例示的な実施形態では、第１の抗体試薬は、固体支持体（通常、ポリスチレンマイクロタイタープレート）上に固定化され得る。固体支持体は、対象から得られた試料と接触させることができ、抗体試薬は、それが特異的である抗原（例えば、ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１）と結合する（「捕捉する」）。次に、固体支持体を第２の標識された抗体試薬（例えば、検出抗体試薬）と接触させることができる。検出抗体試薬は、例えば、検出可能なシグナルを含み、酵素に共有結合的に連結され得るか、またはそれ自体、バイオコンジュゲーションを介して酵素に連結された二次抗体によって検出され得る。シグナルの存在は、支持体上に固定化された第１の抗体試薬と第２の「検出」抗体試薬の両方が抗原に結合したこと、すなわち、シグナルの存在は、ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１分子の存在を示したことを示す。各工程間、プレートは、典型的には、穏やかな界面活性剤溶液で洗浄され、特異的に結合していないいずれのタンパク質または抗体を除去する。最終洗浄工程後、プレートは、酵素基質を添加して可視シグナルを生成することによって発色され、試料中のＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１ポリペプチドの量を示す。より古いＥＬＩＳＡは発色基質を利用するが、より新しいアッセイは非常に高い感度で蛍光基質を使用する。当業者に周知である他の異なる形態のＥＬＩＳＡがある。
一実施形態では、本明細書に記載されるアッセイ、システム、および方法は、イムノクロマトグラフィーアッセイとしても公知であるラテラルフローイムノアッセイ（ＬＦＩＡ）、または試料中のＣＨＩ３Ｌ１もしくはＰＤ－１ポリペプチドのレベルを測定または決定するためのストリップ試験を含むことができる。ＬＦＩＡは、試料中のＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１の存在（または非存在）を検出することを意図した簡単なデバイスである。現在、自宅での試験、ポイントオブケア試験、または研究室での使用のいずれかのために、医学的診断に使用される多くのＬＦＩＡ試験がある。ＬＦＩＡ試験は、試験試料がキャピラリー作用を介して固体基質に沿って流れるイムノアッセイの形態である。試料を試験ストリップに適用した後、試料と混合する着色抗体試薬に遭遇し、試料の一部に結合した場合、第２の抗体試薬で前処理されたラインまたはゾーンに遭遇する基質を通過させる。試料中に存在するＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１のレベルに依存して、着色抗体試薬は、試験ラインまたはゾーンで結合するようになることができる。ＬＦＩＡは、本質的には、試験ストリップフォーマットまたはディップスティックフォーマットに適合するように単一軸に沿って動作するように適合されたイムノアッセイである。ストリップ試験は極めて汎用性が高く、尿、血液、水試料などの液体試料から膨大な範囲の抗原を検出するために当業者によって容易に修飾することができる。ストリップ試験はまた、ディップスティック試験としても公知であり、試験される液体試料中に試験ストリップを「浸漬する」という文字通りの作用から生まれた名前である。ＬＦＩＡストリップ試験は使いやすく、最小限のトレーニングを必要とし、現場で使用するポイントオブケア試験（ＰＯＣＴ）診断の構成要素として容易に含めることができる。ＬＦＩＡ試験は、競合アッセイまたはサンドイッチアッセイのいずれかとして操作することができる。サンドイッチＬＦＩＡは、サンドイッチＥＬＩＳＡと類似する。試料は、最初に、標的に特異的な抗体試薬（例えば、ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１特異的抗体試薬）で標識された着色粒子に遭遇する。試験ラインはまた、抗体試薬（例えば、ＣＨＩ３Ｌ１－またはＰＤ－１特異的抗体試薬）を含む。試験ラインは、陽性試料の着色バンドとして示す。一部の実施形態では、ラテラルフローイムノアッセイは、二重抗体サンドイッチアッセイ、競合アッセイ、定量アッセイまたはそれらのバリエーションであり得る。ラテラルフロー技術には多くのバリエーションがある。多重試験を作製するために複数の捕捉ゾーンを適用することも可能である。
典型的な試験ストリップは、以下の構成要素：（１）試験試料が適用される吸収性パッド（すなわち、マトリックスまたは材料）を含む試料塗布領域；（２）コンジュゲートまたは試薬パッド－これは、着色粒子（通常、コロイド金粒子またはラテックスマイクロスフェア）にコンジュゲートされ得る標的に特異的な抗体試薬（単数または複数）を含む；（３）反応膜－典型的には、抗体試薬が捕捉ゾーンまたは試験ラインとして膜を横切るラインに固定された疎水性ニトロセルロースまたはセルロースアセテート膜を含む試験結果領域（対照ゾーンもまた存在することができ、粒子またはマイクロスフェアにコンジュゲートされた抗体試薬に特異的な抗体を含有する）；ならびに（４）任意選択のウィックまたは廃棄リザーバー－キャピラリー作用により反応膜を横切って試料を引き、それを回収するように設計されたさらなる吸収パッドからなる。ストリップの構成要素は、通常、不活性バッキング材料に固定され、単純なディップスティックフォーマットで、または、捕捉および制御ゾーンを示す試料ポートおよび反応ウィンドウを備えたプラスチックケーシング内に提供され得る。厳密には必要ではないが、ほとんどの試験は、試験が正しく作動したことを確認するために、遊離ラテックス／金を回収する抗体を含む二次ラインを組み込む。
「ディップスティック」またはＬＦＩＡ試験ストリップおよび他の固体支持体の使用は、多くの抗原バイオマーカーについての免疫アッセイの文脈で当該技術分野において記載されている。全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，９４３，５２２号；同第６，４８５，９８２号；同第６，１８７，５９８号；同第５，７７０，４６０号；同第５，６２２，８７１号；同第６，５６５，８０８号、米国特許出願第１０／２７８，６７６号；同第０９／５７９，６７３号および同第１０／７１７，０８２号は、このような横方向流れ試験装置の非限定的な例である。３つの米国特許（Ｈ．Ｔｏｍにより発行された米国特許第４，４４４，８８０号；Ｒ．Ｎ．Ｐｉａｓｉｏにより発行された米国特許第４，３０５，９２４号；およびＪ．Ｔ．Ｓｈｅｎにより発行された米国特許第４，１３５，８８４号は、免疫化学的アッセイを介して可溶性抗原を検出するための「ディップスティック」技術の使用を記載する。これら３つの特許の装置および方法は、スティック上の構成要素－抗原複合体の検出に先立って、「ディップスティック」上に固定された構成要素に結合する可溶性抗原を含有する溶液に曝露される「ディップスティック」上の固体表面に固定された第１の構成要素を広く記載する。ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１ポリペプチドの検出に必要であるように、これらの「ディップスティック」技術の教示を修飾することは、当業者の範囲内である。一部の実施態様では、ディップスティック（またはＬＦＩＡ）は、尿試料との使用に適している場合がある。一部の実施態様では、ディップスティックは、血液試料との使用に適している場合がある。
免疫化学は、特異的抗体の使用に基づく技術のファミリーであり、抗体は、細胞の内部または表面上の分子を特異的に標的化するために使用される。一部の実施形態では、免疫組織化学（「ＩＨＣ」）および免疫細胞化学（「ＩＣＣ」）技術を使用して、ＣＨＩ３Ｌ１またはＰＤ－１ポリペプチドのレベルを検出または測定することができる。ＩＨＣは組織切片への免疫化学の応用であり、一方、ＩＣＣは、例えば、液体ベースの調製物などの特異的な細胞学的調製物を受けた後の細胞または組織インプリントへの免疫化学の応用である。場合によっては、シグナル増幅を特定のプロトコルに組み込むことができ、標識を含む二次抗体が、血小板または白血球に特異的な抗体試薬の適用に続く。典型的には、免疫組織化学のために、対象から得られ、アルコール、アセトン、およびパラホルムアルデヒドなどの適切な固定剤によって固定された組織を切片化し、抗体と反応させる。免疫組織化学のための従来の方法は、全体が参照により本明細書に組み込まれるＢｕｃｈｗａｌｏｗおよびＢｏｃｋｅｒ（編集）「Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｂａｓｉｃｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２０１０年）：ＬｉｎおよびＰｒｉｃｈａｒｄ「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２０１１年）に記載される。一部の実施形態では、免疫細胞化学は、一般的に、対象から得られた組織または細胞が、アルコール、アセトン、およびパラホルムアルデヒドなどの適切な固定剤によって固定され、それに抗体が反応される場合に利用され得る。ヒト試料の免疫細胞学的染色方法は、当業者に公知であり、例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれるＩｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００９年）に記載される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される１つ以上の抗体試薬は、検出可能な標識を含むことができ、および／または検出可能なシグナルを生成する能力（例えば、化合物を検出可能な生成物に変換する反応を触媒することによって）を含むことができる。検出可能な標識は、例えば、光吸収性色素、蛍光色素、または放射性標識を含むことができる。検出可能な標識、それらを検出する方法、およびそれらを抗体試薬に取り込む方法は、当該技術分野において周知である。
一部の実施形態では、検出可能な標識は、分光、光化学、生化学、免疫化学、電磁、放射化学、または化学的手段によって、例えば、蛍光、化学蛍光、または化学発光、または任意の他の適切な手段によって検出され得る標識を含むことができる。本明細書に記載される方法で使用される検出可能な標識は、一次標識（標識が直接的に検出可能である部分、または直接的に検出可能な部分を生成する部分を含む場合）または二次標識（例えば、二次抗体および三次抗体を用いた免疫学的標識において一般的であるように、検出可能な標識が別の部分に結合して、検出可能なシグナルを生成する場合）であり得る。検出可能な標識は、共有結合または非共有結合手段によって抗体試薬に連結することができる。あるいは、検出可能な標識は、例えば、リガンド－受容体結合対配列または他のこのような特異的認識分子を介して抗体試薬への結合を達成する分子を直接標識することによって連結することができる。検出可能な標識には、限定されないが、放射性同位体、生物発光化合物、発色団、抗体、化学発光化合物、蛍光化合物、金属キレート、および酵素を含むことができる。
他の実施形態では、検出抗体は、蛍光化合物で標識される。蛍光標識された抗体を適切な波長の光に曝露した場合、蛍光によりその存在を検出することができる。一部の実施形態では、検出可能な標識は、蛍光色素分子、またはフルオロフォアであり得、限定されないが、フルオレセイン、フィコエリトリン、フィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド、フルオレサミン、Ｃｙ３（商標）、Ｃｙ５（商標）、アロフィコシアニン、テキサスレッド、ペリデニンクロロフィル、シアニン、タンデムコンジュゲート、例えば、フィコエリトリン－Ｃｙ（商標）、緑色蛍光タンパク質、ローダミン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）およびオレゴングリーン（商標）、ローダミンおよび誘導体（例えば、テキサスレッドおよびテトラロジミンイソチオシネート（ＴＲＩＴＣ））、ビオチン、フィコエリトリン、ＡＭＣＡ、ＣｙＤｙｅｓ（商標）、６－カルボキシフィオレセイン（一般的にＦＡＭおよびＦの略語で公知である）、６－カルボキシ－２’，４’，７’，４，７－ヘキサクロロフルオロセイン（ＨＥＸ）、６－カルボキシ－４’，５’－ジクロロ－２’，７’－ジメトキシフルオロセイン（ＪＯＥまたはＪ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－６カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡまたはＴ）、６－カルボキシ－Ｘ－ローダミン（ＲＯＸまたはＲ）、５－カルボキシローダミン－６Ｇ（Ｒ６Ｇ５またはＧ５）、６－カルボキシローダミン－６Ｇ（Ｒ６Ｇ６またはＧ６）、およびローダミン１１０；シアニン色素、例えば、Ｃｙ３、Ｃｙ５およびＣｙ７色素；クマリン、例えば、ウンベリフェロン；ベンズイミド色素、例えば、ヘキスト３３２５８；フェナントリジン色素、例えば、テキサスレッド；エチジウム色素；アクリジン色素；カルバゾール色素；フェノキサジン色素；ポルフィリン色素；ポリメチン色素、例えば、シアニン色素、例えば、Ｃｙ３、Ｃｙ５など；ＢＯＤＩＰＹ色素およびキノリン色素が含まれる。
一部の実施形態では、検出可能な標識は、限定されないが、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３２Ｐ、および３３Ｐを含む放射性標識であり得る。
一部の実施形態では、検出可能な標識は、限定されないが、西洋ワサビペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼを含む酵素であり得る。酵素標識は、例えば、化学発光シグナル、カラーシグナル、または蛍光シグナルを生成することができる。抗体試薬を検出可能に標識するために使用することが意図される酵素には、限定されないが、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ－Ｖ－ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ－グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－ＶＩ－リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼが含まれる。
一部の実施形態では、検出可能な標識は、限定されないが、ルシゲニン、ルミノール、ルシフェリン、イソルミノール、セロマチックアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩およびシュウ酸エステルを含む化学発光標識である。
一部の実施形態では、検出可能な標識は、限定されないが、コロイド状金または着色ガラスまたはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレンおよびラテックス）ビーズを含むスペクトル比色標識であり得る。
一部の実施形態では、抗体はまた、ｃ－Ｍｙｃ、ＨＡ、ＶＳＶ－Ｇ、ＨＳＶ、ＦＬＡＧ、Ｖ５、ＨＩＳ、またはビオチンなどの検出可能なタグで標識され得る。他の検出システム、例えば、ビオチン－ストレプトアビジンシステムを使用することもできる。このシステムでは、目的のバイオマーカーと免疫反応性（すなわち、特異的）である抗体はビオチン化される。バイオマーカーに結合したビオチン化抗体の量は、ストレプトアビジン－ペルオキシダーゼコンジュゲートおよびクロマゲン基質を用いて決定される。このようなストレプトアビジンペルオキシダーゼ検出キットは、例えば、ＤＡＫＯ；Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ、ＣＡから市販されている。
抗体試薬はまた、蛍光発光金属、例えば、１５２Ｅｕ、またはランタニド系列の他のものを用いて検出可能に標識することができる。これらの金属は、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの金属キレート化基を用いて抗体試薬に結合させることができる。
本明細書に記載されるアッセイおよび方法は、対象が、参照レベルに対してＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルが増加しているかどうかを決定することに関連し得る。一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１の参照レベルは、例えば、がんを有していない、または有すると診断されていない健康な対象におけるＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルであり得る。一部の実施形態では、参照レベルは、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルが決定されるべき試料としての、類似の細胞型、試料タイプ、試料処理の試料におけるレベル、および／またはＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルが決定されるべき対象としての、同年齢、性別、および他の人口統計学的パラメータの対象から得られるレベルであり得る。一部の実施形態では、試験試料および対照参照試料は、同じタイプのもの、すなわち、同じ生物学的供給源から得られ、同じ組成物、例えば、同じ数およびタイプの細胞および／またはタイプの試料材料を含むものである。したがって、一部の実施形態では、増加したＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルは、年齢、性別、遺伝子型、環境因子、および個々の病歴などの人口統計学的因子が変化するにつれて変化し得る。一部の実施形態では、参照レベルは、例えば、がんのいずれもの徴候または症状を示さない対象から採取された同じタイプの試料中のＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１（例えば、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１ポリペプチド）のレベルを含むことができる。一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１の参照発現レベルは、対象から得られた以前の試料におけるＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１の発現レベルであり得る。これにより、その個体におけるレベルの変化を直接分析することができる。
一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルが参照レベルの少なくとも１．２５倍、例えば、参照レベルの少なくとも１．２５倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、またはそれ以上である場合、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルは、参照レベルに対して増加している可能性がある。一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１の発現レベルは、１つ以上の参照遺伝子または参照タンパク質の発現レベルに対して正規化することができる。一部の実施形態では、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１の発現レベルは、参照値に対して正規化することができる。
一部の実施形態では、２０個以下の他の遺伝子の発現レベルが決定される。一部の実施形態では、１０個以下の他の遺伝子の発現レベルが決定される。
用語「試料」または「試験試料」とは、本明細書で使用される場合、生物、例えば、対象からの尿試料から採取または単離された試料を示す。例示的な生体試料は、限定されないが、生体液試料；血清；血漿；尿；唾液；および／または腫瘍試料などを含む。この用語はまた、上記試料の混合物を含む。また、用語「試験試料」とは、未処理または前処理（ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ）（または前処理（ｐｒｅ－ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ））された生体試料を含む。一部の実施形態では、試験試料は、対象由来の細胞を含むことができる。本明細書で使用される場合、用語「生体液」とは、生物学的供給源から得られる任意の流体を指し、限定されないが、血液、尿、および分液を含む。
試料は、対象から試料を除去することによって得ることができるが、以前に単離された試料（例えば、以前の時点で単離され、同じ人または別の人によって単離された）を使用することによっても達成することができる。さらに、試験試料は、新たに回収されるか、または以前に収集された試料であり得る。
一部の実施形態では、試験試料は、未処理の試験試料であり得る。本明細書で使用される場合、語句「未処理の試験試料」は、溶液中の希釈および／または懸濁を除き、いずれの以前の試料の前処理を有していない試験試料を指す。試験試料を処理するための例示的方法は、限定されないが、遠心分離、濾過、超音波処理、均質化、加熱、凍結および解凍、およびそれらの組み合わせを含む。一部の実施形態では、試験試料は、凍結試験試料、例えば、凍結組織であり得る。凍結試料は、本明細書に記載される方法、アッセイおよびシステムを使用する前に解凍することができる。解凍後、凍結試料を遠心分離し、その後、本明細書に記載の方法、アッセイおよびシステムに供することができる。一部の実施形態では、試験試料は、例えば、清澄化された試験試料を含む上清の遠心分離および回収によって調製された清澄化された試験試料である。一部の実施形態では、試験試料は、遠心分離、濾過、解凍、精製、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される処理から得られる、前処理された試験試料、例えば、上清または濾液であり得る。一部の実施形態では、試験試料は、化学試薬および／または生物学的試薬で処理することができる。化学試薬および／または生物学的試薬は、処理の間、そこでの試料、例えば、生体分子（例えば、核酸およびタンパク質）の安定性を保護および／または維持するために使用することができる。１つの例示的な試薬はプロテアーゼ阻害剤であり、処理の間、タンパク質の安定性を保護または維持するために一般的に使用される。当業者は、本明細書に記載されるように、ＣＨＩ３Ｌ１のレベルの決定に必要な生体試料の前処理に適した方法およびプロセスをよく知っている。
一部の実施形態では、本明細書に記載される方法、アッセイ、およびシステムは、対象から試験試料を得る工程をさらに含むことができる。一部の実施形態では、対象はヒト対象であり得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載される方法、アッセイ、およびシステムは、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルに基づいて報告書を作成することを含むことができる。一部の実施態様では、報告は、試験試料中のＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１の生の値（プラス、場合により、参照試料中のＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベル）を示すか、または参照レベルと比較してＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルのパーセンテージまたは倍数増加を示すか、および／または対象ががんを有するリスクがあるかまたは有していないことを示すシグナルを提供する。
本明細書で使用される場合「有するリスクがある」とは、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１のレベルの上昇および／または増加、例えば、２倍、または２．５倍、または３倍、または４倍、またはそれ以上のリスクを有さなかった対象と比較して、特定の状態を有する少なくとも２倍高い可能性を指す。
一部の実施形態では、アッセイまたは方法は、抗ＣＨＩ３Ｌ１／抗ＰＤ－１療法を投与する工程をさらに含むことができる。一部の実施形態では、抗ＣＨＩ３Ｌ１／抗ＰＤ－１療法は、単離された二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲもしくはＣＡＲ Ｔ細胞；核酸；細胞；または本明細書に記載される組成物を含む。
実施形態のいずれかの一態様では、本明細書には、検出可能な標識にコンジュゲートされたかまたは結合された、本明細書に記載される抗体、抗体試薬、またはその抗原結合部分が記載される。
実施形態のいずれかの一態様では、本明細書には、本明細書に記載される、二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合断片を含む固体支持体が記載される。態様のいずれかの一部の実施形態では、二重特異性抗体、抗体試薬またはその抗原結合断片は検出可能に標識される。いずれかの態様の一部の実施形態では、固体支持体は、粒子、ビーズ、ポリマー、または基質を含む。
実施形態のいずれかの一態様では、本明細書には、ＣＨＩ３Ｌ１ポリペプチドおよびＰＤ－１ポリペプチドに結合した、少なくとも１つの本明細書に記載される二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合断片、またはＣＡＲを含む分子複合体が記載される。
一態様では、本明細書には、本明細書に記載される組成物、例えば、本明細書に記載される二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、またはＣＡＲを含む組成物を含むキットが記載される。キットは、少なくとも１つの試薬、例えば、二重特異性抗体を含む任意の製造物（例えば、パッケージまたは容器）であり、製造物は、本明細書に記載される方法を実施するためのユニットとして、促進され、流通され、または販売される。態様のいずれかの一部の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗体、抗体試薬、その抗原結合断片は、固体支持体上に固定化される。態様のいずれかの一部の実施形態では、固体支持体は、粒子、ビーズ、ポリマー、または基質を含む。態様のいずれかの一部の実施形態では、抗体、抗体試薬またはその抗原結合断片は、検出可能に標識される。
本明細書に記載されるキットは、場合により、本明細書に記載される方法を実施するのに有用な追加の構成要素を含むことができる。一例として、キットは、本明細書に記載される二重特異性抗体、その抗原結合部分、またはＣＡＲを含む組成物に適した流体（例えば、緩衝液）、本明細書に記載される方法の性能を記載する取扱説明書などを含むことができる。キットは、本明細書に記載される組成物の送達のためのデバイスおよび／または試薬をさらに含むことができる。加えて、キットは、取扱リーフレットを含むことができ、および／または得られた結果の関連性に関する情報を提供することができる。
本開示の実施形態の記載は、網羅的であること、または開示を開示された正確な形態に限定することを意図するものではない。本開示の特定の実施形態および実施例は、例示の目的で本明細書に記載されているが、当業者が理解するように、本開示の範囲内で、様々な均等の修飾が可能である。例えば、方法ステップまたは機能が所与の順序で示されているが、代替の実施形態は、異なる順序で機能を実行することができ、または機能は、実質的に同時に実行することができる。本明細書に提供される開示の教示は、適宜、他の手順または方法に適用することができる。本明細書に記載される様々な実施形態は、さらなる実施形態を提供するために組み合わせることができる。開示の態様は、必要に応じて、上記参照事項および適用の組成、機能および概念を使用して、開示のさらに他の実施形態を提供するように修飾することができる。さらに、生物学的機能的均等性を考慮することにより、種類または量の生物学的または化学的作用に影響を及ぼすことなく、タンパク質構造にいつくかの変化を与えることができる。これらおよび他の変化は、詳細な説明に照らして開示に対して行うことができる。このような修飾は全て、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。
前述の実施形態のいずれかの特定の要素は、他の実施形態において、要素について組み合わせまたは置換することができる。さらに、本開示の特定の実施形態に関連する利点は、これらの実施形態の文脈で記載されているが、他の実施形態もまた、このような利点を示すことができ、必ずしも全ての実施形態が、本開示の範囲内に入るためにこのような利点を示す必要があるわけではない。
本明細書に記載される技術は、以下の実施例によってさらに例示され、これらの実施例は、さらに限定的であると解釈されるべきではない。本開示の実施または試験において、本明細書に記載されたものと類似または均等の方法および材料を使用することができるが、適切な方法および材料を以下に記載する。
ここで、本発明を一般的に説明すると、本発明の特定の態様および実施形態を例示する目的のためにのみ含まれ、本発明を限定することを意図しない以下の実施例を参照することによって、本発明をより容易に理解する。
ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１二重特異性抗体（ＦＲＧ×ＰＤ１－ＳｃＦｖ）の生成および特徴付け
ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ１を検出および中和する二重特異性抗体を生成するために、本発明者らは、本発明者らの研究室で最近開発され、米国特許第１０，２５３，１１１号に記載された抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体（「ＦＲＧ」と呼ばれる）の骨格を使用した。ＰＤ１一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ－ＰＤ１）は、軽微な修飾とともに、パブリックドメインから得られた配列情報に基づいて生成された。ＳｃＦｖ－ＰＤ１は、図１に例示されるように、リンカーを用いてＣＨＩ３Ｌ１抗体の軽鎖または重鎖のいずれかに結合された。ＳｃＦｖ－ＰＤ１およびリンカーのアミノ酸配列を表２に示す。二価ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体の構築物をＤＮＡ配列分析により確認した。
ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１構築物をＨＥＫ－２９３Ｔ接着細胞に個別にトランスフェクションした。ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１に対する二重特異性抗体の結合親和性を競合ＥＬＩＳＡにより評価し、個々の抗体部分の結合と比較した。
図２に示されるように、上清中の分泌された二重特異性抗体は、組換えヒト（ｒｈ）ＣＨＩ３Ｌ１とｒｈＰＤ１の両方を検出することができた。これらの研究は、二重特異性抗体および個々の抗体部分が、ｒｈＣＨＩ３Ｌ１およびｒｈＰＤ１に対して同程度の親和性（ＫＤ≒１×１０－９Ｍ）を有し、同様の検出限界（ＬＯＤ；２ｎｇ／ｍｌ）を有することを実証した。プロテインＡカラムをさらなる抗体精製のために使用した。
要約すると、本発明者らは、ｒｈＣＨＩ３Ｌ１とｒｈＰＤ１の両方に高親和性で反応する二重特異性抗体の生成および特徴付けに成功した（図１および図２を参照されたい）。図１に例示されるように、２つの異なるアプローチを用いて、これらの二重特異性抗体を生成した。これらのプラットフォームを用いて、ＣＨＩ３Ｌ１－ＬＣ－ＰＤ１およびＣＨＩ３Ｌ１－ＨＣ－ＰＤ二重特異性（二価）抗体を生成し、各々はヒトＣＨＩ３Ｌ１とヒトＰＤ１の両方を検出した。ｒｈＣＨＩ３ｌ１とｒｈＰＤ１の両方に対するＣＨＩ３Ｌ１－ＬＣ－ＰＤ１抗体の親和性（競合ＥＬＩＳＡアッセイにより評価される）は、ＫＤ≒１×１０－９Ｍであると推定され、検出限界（ＬＯＤ）は２ｎｇ／ｍｌである。ＣＨＩ３Ｌ１－ＬＣ－ＰＤ１抗体とＣＨＩ３Ｌ１－ＨＣ－ＰＤ１抗体の間で、ｒｈＣＨＩ３Ｌ１またはｒｈＰＤ１に対する結合親和性において有意差はなかった（図２およびデータを示していない）。
二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体のＴ細胞－Ｕ８７結合および抗腫瘍細胞傷害活性の特徴付け
Ｕ８７グリア芽腫細胞（ＡＴＣＣ ＃ＨＴＢ－１４）およびＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞（ＡＴＣＣ ＃ＴＩＢ１５２）を含んだインビトロ共培養系を用いて、Ｊｕｒｋａｔ細胞のＵ８７細胞に結合する能力および二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体の抗腫瘍細胞傷害活性を評価した。ヒトグリア芽腫（Ｕ８７）細胞を完全ＤＭＥＭ培地中で増殖させた。Ｊｕｒｋａｔ（Ｔ細胞）は、５％ＣＯ２および大気中のＲＰＭＩ完全培地でα－ＣＤ３／α－ＣＤ２８抗体（５μｇ／ｍｌ）で２時間刺激することにより活性化した。次に、Ｊｕｒｋａｔ細胞を遠心分離し、洗浄し、新鮮な完全ＲＰＭＩ培地で再懸濁した。Ｕ８７およびＪｕｒｋａｔ細胞を完全ＲＰＭＩ培地中で１：６の比率で培養した。
これらの共培養物中の反応を、ＩｇＧアイソタイプ対照、抗ＰＤ１単独、抗ＣＨＩ３Ｌ１単独、抗ＣＨＩ３ｌ１および抗ＰＤ－１の組み合わせ（各々５μｇ／ｍｌ）または上述の二重特異性抗体の存在下で評価した。全体として、５つの処置群：（ｉ）アイソタイプＩｇＧ対照、（ｉｉ）α－ＰＤ１、（ｉｉｉ）α－ＣＨＩ３Ｌ１、（ｉｖ）α－ＣＨＩ３Ｌ１＋α－ＰＤ１、および（ｖ）二重特異性－ＣＨＩ３Ｌ１ｘＰＤ１であった。共培養された細胞を５％ＣＯ２および空気中で６～１２時間インキュベートした。Ｔ細胞－Ｕ８７細胞結合を顕微鏡により評価し、細胞死をＴＵＮＥＬ染色および以下に記載されるＬＤＨ放出細胞傷害性アッセイを用いて評価した。
Ａ．Ｕ８７細胞へのＪｕｒｋａｔ細胞付着の定量
Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を抗－（α）－ヒトＣＤ３およびα－ＣＤ２８抗体（５μｇ／ｍｌ、各々５％ＣＯ２および大気中で３７℃にて２時間インキュベートした）で活性化し、Ｕ８７グリア芽腫細胞と、上記のアイソタイプ対照または他の抗体と共培養した。ＣｅｌｌＢｒｉｔｅ細胞質膜色素をＵ８７（赤色）およびＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞（緑色）の蛍光標識に使用した。Ｕ８７細胞あたりのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞数は、蛍光顕微鏡（元の倍率の２０倍）を用いて計数し、無作為に選ばれた１０の顕微鏡視野で平均した。
図３に示されるように、二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体による処理は、Ｕ８７細胞へのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞付着を顕著に増大させた。重要なことに、二重特異性抗体の効果は、α－ＣＨＩ３Ｌ１もしくはα－ＰＤ１による個別の処置またはα－ＣＨＩ３Ｌ１およびα－ＰＤ１の組み合わせによる処置の効果よりも有意に顕著であった。
Ｂ．アポトーシスＵ８７細胞死のＴＵＮＥＬアッセイ定量
細胞死のインサイチュ評価のための末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼを媒介したｄＵＴＰニック末端標識を２つの異なる方法で行った：
（ｉ）異なるチャンバー中で共培養処理された細胞を固定し、パーマライズし、フルオレセインヨウ化プロピジウム（赤色色素）およびＣｙｔｏ（緑色色素）で染色した。赤色の蛍光を発する細胞は死細胞であり、緑色は生細胞である。生きたＵ８７細胞および死んだＵ８７細胞の数を蛍光顕微鏡（元の倍率の２０倍）を用いて計数し、無作為に選ばれた１０の顕微鏡視野で平均した。
（ｉｉ）細胞死のインサイチュ評価のための末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼを媒介したｄＵＴＰニック末端標識。選択された研究では、ＴＵＮＥＬ陽性染色を明視野顕微鏡を用いて評価した。死んだ細胞またはアポトーシス細胞は青色に染色され、生きた細胞は核ファーストレッドで染色された。生きているＵ８７細胞および死んだＵ８７細胞の数を蛍光顕微鏡および通常の顕微鏡（元の倍率の２０倍）を用いて計数し、無作為に選ばれた１０の顕微鏡視野で平均した。
図４に示されるように、二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体による処理は、Ｕ８７細胞においてＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の細胞傷害性／アポトーシス応答を誘導する能力を顕著に増大させた。重要なことに、二重特異性抗体の効果は、α－ＣＨＩ３Ｌ１もしくはα－ＰＤ１による個別の処理、またはα－ＣＨＩ３Ｌ１およびα－ＰＤ１の組み合わせによる処置の効果よりも有意に顕著であった。
Ｃ．グランザイムの定量およびパーフォリンの蓄積
グランザイムおよびパーフォリンは、Ｊｕｒｋａｔ細胞を含む種々の活性化された細胞傷害性Ｔ細胞によって分泌される主要な細胞傷害性酵素である。これらの細胞傷害性酵素の発現レベルを、グランザイム（図５）またはパーフォリン（図６）（赤色）に対する抗体、およびファロイジンアクチンフィラメント（緑色）を用いた二重標識免疫組織化学を用いて共培養細胞で測定した。グランザイム＋またはパーフォリン＋細胞の数は、蛍光顕微鏡（元の倍率の２０倍）を用いて計数し、無作為に選ばれた１０の顕微鏡視野で平均した。
図５および図６に示されるように、二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体による処理は、Ｕ８７細胞と共培養しているＪｕｒｋａｔＴ細胞におけるグランザイムおよびパーフォリンの蓄積を顕著に増大させた。重要なことに、二重特異性抗体の効果は、α－ＣＨＩ３Ｌ１もしくはα－ＰＤ１による個別の処置、またはα－ＣＨＩ３Ｌ１およびα－ＰＤ１の組み合わせによる処置の効果よりも有意に顕著であった。
これらの結果は、二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体が相乗的にＴ細胞の細胞傷害効果を増大させることを示唆する。
Ｄ．ＬＤＨ放出細胞傷害性アッセイ
乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）は、細胞傷害性損傷により膜の完全性が失われた後、培地中に放出される。このように、ＬＤＨ放出は細胞死の指標として使用された。これは、結合された二段階反応を用いて評価された。反応の第１工程では、ＬＤＨは、乳酸をピルビン酸に酸化することによって、ＮＡＤＨとＨ＋へのＮＡＤ＋の還元を触媒する。第２工程では、ジアホラーゼは、新しく形成されたＮＡＤＨとＨ＋を用いてテトラゾリウム塩（ＩＮＴ）の４９０～５２０ｎｍで強く吸収する色の濃いホルマザンへの還元を触媒する。
細胞傷害性レベル％は、市販のアッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ ＬＤＨ細胞傷害性アッセイキット）を用いて、製造業者が提供するプロトコルを用いて決定された。これらの実験において、細胞は、上記の抗体の存在下および非存在下で共培養された。培地中のＬＤＨを一晩インキュベートした後に評価した。これらの値を以下の対照と比較した：（ａ）培地補給に用いた血清中に存在するＬＤＨバックグラウンド活性を決定するための細胞を含まない完全培地対照；（ｂ）無血清培地；（ｃ）ＬＤＨ活性対照（水）；および（ｄ）溶解緩衝液で処理された細胞により放出された最大ＬＤＨ活性。これらのアッセイにおいて、細胞傷害性％を下記のように計算した。
Figure 2022531444000007
図７に示されるように、二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体による処理は、Ｕ８７細胞においてＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞のＬＤＨ放出および細胞傷害性応答を誘導する能力を顕著に増大させた。重要なことに、二重特異性抗体の効果は、α－ＣＨＩ３Ｌ１もしくはα－ＰＤ１による個別の処置、またはα－ＣＨＩ３Ｌ１およびα－ＰＤ１の組み合わせによる処置の効果よりも有意に顕著であった。
二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体の相乗効果は、図８にさらに例示される。ＦＲＧ×ＰＤ－１二重特異性抗体の抗腫瘍効果をＪｕｒｋａｔ細胞およびＡ３７５ヒト黒色腫細胞を含む共培養系で評価した。Ｊｕｒｋａｔ細胞は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８（各々１μｇ／ｍＬ、および５％ＣＯ２および大気中、３７℃にて２時間インキュベートした）による前処理によって活性化された。次に、Ｊｕｒｋａｔ細胞を２４時間、Ａ３５７ヒト黒色腫細胞と共培養した。これらの共培養は、以下の抗体：アイソタイプ対照抗体（５μｇ／ｍＬ）、抗ＰＤ－１もしくは抗ＣＨＩ３Ｌ１（ＦＲＧ）単独（５μｇ／ｍＬ）または組み合わせ（各々２．５μｇ／ｍＬ）、および二重特異性ＦＲＧ×ＰＤ－１抗体（５μｇ／ｍＬ）の存在下で行われた。Ａ列は、インサイチュ細胞検出キット－フルオレセインｄＵＴＰを用いたアポトーシス腫瘍細胞死の代表的な実証および定量化を提供する。ＴＵＮＥＬ（＋）細胞は緑色に染色される。Ｂ～Ｄ列は、ＣＤ８（Ｂ列）、パーフォリン（Ｃ列）およびグランザイム（Ｄ列）のＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞発現の代表的な実証および定量化を提供する。腫瘍細胞は緑色であり、染色陽性のＪｕｒｋａｔ細胞は黄橙色である。Ｅ列は、腫瘍細胞ＰＴＥＮの代表的な実証および定量化を提供する。腫瘍細胞は緑色であり、ＰＴＥＮは黄橙色である。Ｆ列は、Ａ～Ｅ列における評価の定量化を提供する。ＴＵＮＥＬ＋腫瘍細胞％（Ａ列）、ＣＤ８（Ｂ列）、パーフォリン（Ｃ列）およびグランザイム（Ｄ列）を発現するＪｕｒｋａｔ細胞％、およびＰＴＥＮを発現する腫瘍細胞％（Ｅ列）が例示される。これらの評価は、蛍光顕微鏡（元の倍率の２０倍）を用いて行われた。これらの定量において、１０の無作為に選ばれた視野を評価した。図８におけるデータは、二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体処理が、相乗的ＣＴＬ媒介腫瘍細胞死応答および腫瘍細胞ＰＴＥＮ発現を誘導することを示す。
要約すると、新たに開発された二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体は、α－ＣＨＩ３Ｌ１およびα－ＰＤ１抗体治療単独または組み合わせと比較して、Ｔ細胞およびＵ８７細胞結合が増大しており、Ｕ８７腫瘍細胞に対する細胞傷害効果を増大させた。これらの結果は、本発明の二重特異性ＣＨＩ３Ｌ１×ＰＤ１抗体が、α－ＣＨＩ３Ｌ１もしくはα－ＰＤ１抗体の単独または組み合わせよりも、ＣＨＩ３Ｌ１およびその受容体ならびにＰＤ１およびそのリガンド（ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２）が調節不全である腫瘍の治療において効果的な治療法であることを示唆する。
上述の明細書は、当業者が本態様および実施形態を実施することを可能にするのに十分であると考えられる。本態様および実施形態は、提供される実施例によって範囲が限定されるものではない。これは、実施例が、１つの態様の単一の例示として意図され、他の機能的に均等な実施形態は、本開示の範囲内にあるからである。本明細書に示され、記載されるものに加えて、種々の変更が、前述の説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲の範囲内に入る。本明細書に記載される利点および目的は、必ずしも各実施形態に包含されない。当業者は、本明細書に記載される特定の実施形態に対する多くの均等物を、たかが日常的な実験を用いて認識するかまたは確認することができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
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全ての特許および他の刊行物；参照文献、発行された特許、公開された特許出願、および同時係属中の特許出願を含む；本出願全体を通して引用されたものは、本明細書に記載された技術に関連して使用され得る、例えば、このような刊行物に記載された方法を記載および開示する目的で、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。これらの刊行物は、本出願の出願日前のそれらの開示のためにのみ提供される。この点に関するいかなる規定も、発明者らが先発明によりまたは任意の他の理由によりこのような開示に先行する権利を有していないことを認めるものと解釈されるべきではない。これらの書類の内容に関する日付または表示に関する全ての陳述は、出願人が入手し得る情報に基づいており、これらの書類の日付または内容の正確性に関する自白を構成するものではない。

Claims (22)

  1. 抗ヒトプログラム死受容体１（ＰＤ－１）抗体の抗原結合部分および抗ヒトキチナーゼ３様－１（ＣＨＩ３Ｌ１）抗体の抗原結合部分を含む、ＣＨＩ３Ｌ１およびＰＤ－１を検出および中和する二重特異性抗体。
  2. 抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の骨格に結合した抗ヒトＰＤ－１一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ－ＰＤ１）を含む、請求項１に記載の二重特異性抗体。
  3. 抗ヒトＰＤ－１抗体の骨格に結合した抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ－ＣＨＩ３Ｌ１）を含む、請求項１に記載の二重特異性抗体。
  4. 前記ＳｃＦｖ－ＰＤ１が前記ＣＨＩ３Ｌ１抗体の重鎖に結合している（ＣＨＩ３Ｌ１－ＨＣ－ＰＤ１）、請求項２に記載の二重特異性抗体。
  5. 前記ＳｃＦｖ－ＰＤ１が前記ＣＨＩ３Ｌ１抗体の軽鎖に結合している（ＣＨＩ３Ｌ１－ＬＣ－ＰＤ１）、請求項２に記載の二重特異性抗体。
  6. 前記抗ヒトＣＨＩ３Ｌ１抗体の前記抗原結合部分が、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
  7. 前記ＣＨＩ３Ｌ１抗体の重鎖が配列番号１３のアミノ酸配列を有する、請求項４に記載の二重特異性抗体。
  8. 前記ＣＨＩ３Ｌ１抗体の軽鎖が配列番号１４のアミノ酸配列を有する、請求項５に記載の二重特異性抗体。
  9. 前記抗ヒトＰＤ－１抗体の前記抗原結合部分が配列番号３５のアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
  10. Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞のＵ８７細胞への付着を増大させる、請求項１～９のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
  11. Ｕ８７細胞において細胞傷害性／アポトーシス応答を誘導するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の能力を増大させる、請求項１０に記載の二重特異性抗体。
  12. Ｕ８７細胞と共培養されているＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞におけるグランザイムおよびパーフォリンの蓄積を増大させる、請求項１０に記載の二重特異性抗体。
  13. Ｕ８７細胞における乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の放出および細胞傷害性の応答を誘導するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の能力を増大させる、請求項１０に記載の二重特異性抗体。
  14. 請求項１～１３のいずれか１項に記載の二重特異性抗体、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  15. 化学療法剤をさらに含む、請求項１４記載の医薬組成物。
  16. それを必要とする対象におけるがんを治療する方法であって、請求項１～１３のいずれか１項に記載の二重特異性抗体、または請求項１４もしくは１５に記載の医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
  17. 前記がんが悪性がんである、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記がんが原発性がんまたは転移性がんである、請求項１６に記載の方法。
  19. 前記がんが、前立腺がん、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、グリア芽腫、黒色腫、悪性黒色腫、および肺がんからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
  20. 前記対象が、上昇したレベルのＣＨＩ３Ｌ１を有すると決定される、請求項１６～１９のいずれか１項に記載の方法。
  21. 前記ＣＨＩ３Ｌ１のレベルが循環ＣＨＩ３Ｌ１である、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記がんがＰＤ－Ｌ１を発現している、請求項１６～２１のいずれか１項に記載の方法。
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