JP2022529782A - シュタルガルト病（ａｂｃａ４）の遺伝子治療 - Google Patents
シュタルガルト病（ａｂｃａ４）の遺伝子治療 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022529782A JP2022529782A JP2021562000A JP2021562000A JP2022529782A JP 2022529782 A JP2022529782 A JP 2022529782A JP 2021562000 A JP2021562000 A JP 2021562000A JP 2021562000 A JP2021562000 A JP 2021562000A JP 2022529782 A JP2022529782 A JP 2022529782A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- isolated nucleic
- vector
- raav
- promoter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 101000801643 Homo sapiens Retinal-specific phospholipid-transporting ATPase ABCA4 Proteins 0.000 title claims abstract description 38
- 102100033617 Retinal-specific phospholipid-transporting ATPase ABCA4 Human genes 0.000 title claims abstract description 37
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 36
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 33
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 title abstract description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 84
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 65
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 65
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 57
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 54
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 34
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 16
- 101150039555 ABCA4 gene Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 84
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 claims description 36
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 36
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 36
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 36
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims description 32
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims description 22
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims description 22
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 20
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 17
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims description 14
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 14
- 108091008695 photoreceptors Proteins 0.000 claims description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 12
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 claims description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 9
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 claims description 8
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 4
- 210000000608 photoreceptor cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003583 retinal pigment epithelium Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 2
- 230000010415 tropism Effects 0.000 claims description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 37
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 19
- 239000013608 rAAV vector Substances 0.000 description 11
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 9
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- -1 disferlin Proteins 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 6
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 description 5
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 description 5
- 101000834253 Gallus gallus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 5
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- 241001164823 Adeno-associated virus - 7 Species 0.000 description 4
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 4
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 4
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000649045 Adeno-associated virus 10 Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 3
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 3
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 description 2
- 241000649046 Adeno-associated virus 11 Species 0.000 description 2
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 2
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 2
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 2
- 101150044789 Cap gene Proteins 0.000 description 2
- 101710177611 DNA polymerase II large subunit Proteins 0.000 description 2
- 101710184669 DNA polymerase II small subunit Proteins 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 108091004242 G-Protein-Coupled Receptor Kinase 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000004437 G-Protein-Coupled Receptor Kinase 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N Propyl gallate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108090000799 Rhodopsin kinases Proteins 0.000 description 2
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical compound O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 241001492404 Woodchuck hepatitis virus Species 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CBOQJANXLMLOSS-UHFFFAOYSA-N ethyl vanillin Chemical compound CCOC1=CC(C=O)=CC=C1O CBOQJANXLMLOSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 108010079892 phosphoglycerol kinase Proteins 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 2
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 2
- 102200112003 rs1800553 Human genes 0.000 description 2
- 102200112051 rs1800555 Human genes 0.000 description 2
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 2
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 2
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 2
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N tetracycline Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- NCYCYZXNIZJOKI-IOUUIBBYSA-N 11-cis-retinal Chemical compound O=C/C=C(\C)/C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C NCYCYZXNIZJOKI-IOUUIBBYSA-N 0.000 description 1
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 4-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1 WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 241000202702 Adeno-associated virus - 3 Species 0.000 description 1
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100507655 Canis lupus familiaris HSPA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 1
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000018932 HSP70 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010027992 HSP70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100161494 Homo sapiens ABCA4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000829506 Homo sapiens Rhodopsin kinase GRK1 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 1
- 241000713821 Mason-Pfizer monkey virus Species 0.000 description 1
- FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M Methylprednisolone sodium succinate Chemical compound [Na+].C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)CC[C@H]21 FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000010175 Opsin Human genes 0.000 description 1
- 108050001704 Opsin Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 1
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 1
- 102000014450 RNA Polymerase III Human genes 0.000 description 1
- 108010078067 RNA Polymerase III Proteins 0.000 description 1
- 101710137010 Retinol-binding protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100038247 Retinol-binding protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 102000004330 Rhodopsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000820 Rhodopsin Proteins 0.000 description 1
- 102100023742 Rhodopsin kinase GRK1 Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000269821 Scombridae Species 0.000 description 1
- 101001010097 Shigella phage SfV Bactoprenol-linked glucose translocase Proteins 0.000 description 1
- 208000027073 Stargardt disease Diseases 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010047513 Vision blurred Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 239000012637 allosteric effector Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000001494 anti-thymocyte effect Effects 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 201000009310 astigmatism Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000004456 color vision Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N cyclandelate Chemical class C1C(C)(C)CC(C)CC1OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229940073505 ethyl vanillin Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000051503 human ABCA4 Human genes 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 229910021506 iron(II) hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L iron(ii) hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Fe+2] NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 108010074774 long-wavelength opsin Proteins 0.000 description 1
- 235000020640 mackerel Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 description 1
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940090668 parachlorophenol Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920000771 poly (alkylcyanoacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 description 1
- 229940075579 propyl gallate Drugs 0.000 description 1
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 description 1
- 210000002763 pyramidal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000003439 radiotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000029219 regulation of pH Effects 0.000 description 1
- 101150066583 rep gene Proteins 0.000 description 1
- 230000000979 retarding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000790 retinal pigment Substances 0.000 description 1
- 102000029752 retinol binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000053 retinol binding Proteins 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 108010038379 sargramostim Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 108010079094 short-wavelength opsin Proteins 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229940044609 sulfur dioxide Drugs 0.000 description 1
- 235000010269 sulphur dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000011882 ultra-fine particle Substances 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
- A61K48/0058—Nucleic acids adapted for tissue specific expression, e.g. having tissue specific promoters as part of a contruct
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0075—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the delivery route, e.g. oral, subcutaneous
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本開示の局面は、ミニ遺伝子を被験体に送達するために有用な組成物および方法に関する。よって、本開示は、部分的に、治療用遺伝子生成物（例えば、タンパク質またはペプチド）をコードする１またはこれより多くの遺伝子フラグメント（例えば、ミニ遺伝子）を含む単離された核酸および遺伝子治療ベクター（例えば、ウイルス（例えば、ｒＡＡＶ）ベクター）に基づく。いくつかの実施形態において、本開示は、ＡＢＣＡ４タンパク質（例えば、ＡＢＣＡ４遺伝子の遺伝子生成物）またはその一部をコードする遺伝子治療ベクターに関する。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される組成物は、ＡＢＣＡ４遺伝子における変異と関連する疾患（例えば、シュタルガルト病）を処置するために有用である。
Description
関連出願
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１９年４月１９日出願の米国仮特許出願第６２／８３６，４９３号（発明の名称「ＧＥＮＥ ＴＨＥＲＡＰＩＥＳ ＦＯＲ ＳＴＡＲＧＡＲＤＴ ＤＩＳＥＡＳＥ （ＡＢＣＡ４）」。その全内容は、本明細書に参考として援用される）の出願日の利益を主張する。
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１９年４月１９日出願の米国仮特許出願第６２／８３６，４９３号（発明の名称「ＧＥＮＥ ＴＨＥＲＡＰＩＥＳ ＦＯＲ ＳＴＡＲＧＡＲＤＴ ＤＩＳＥＡＳＥ （ＡＢＣＡ４）」。その全内容は、本明細書に参考として援用される）の出願日の利益を主張する。
背景
シュタルガルト病は、常染色体劣性黄斑変性の最も一般的なタイプである。この疾患は、ＡＢＣＡ４遺伝子における変異によって引きおこされる。ヒトＡＢＣＡ４遺伝子は、約７ｋｂ長であり、これは、遺伝子送達のための従来のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターへとパッケージするには限界を超えている。
シュタルガルト病は、常染色体劣性黄斑変性の最も一般的なタイプである。この疾患は、ＡＢＣＡ４遺伝子における変異によって引きおこされる。ヒトＡＢＣＡ４遺伝子は、約７ｋｂ長であり、これは、遺伝子送達のための従来のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターへとパッケージするには限界を超えている。
要旨
本開示の局面は、ミニ遺伝子を被験体に送達するために有用な組成物および方法に関する。よって、本開示は、部分的に、治療用遺伝子生成物（例えば、タンパク質またはペプチド）をコードする１またはこれより多くの遺伝子フラグメント（例えば、ミニ遺伝子）を含む単離された核酸および遺伝子治療ベクター（例えば、ウイルス（例えば、ｒＡＡＶ）ベクター）に基づく。いくつかの実施形態において、本開示は、ＡＢＣＡ４タンパク質（例えば、ＡＢＣＡ４の遺伝子生成物）またはその一部をコードする遺伝子治療ベクターに関する。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される組成物は、ＡＢＣＡ４遺伝子における変異と関連する疾患（例えば、シュタルガルト病）を処置するために有用である。
本開示の局面は、ミニ遺伝子を被験体に送達するために有用な組成物および方法に関する。よって、本開示は、部分的に、治療用遺伝子生成物（例えば、タンパク質またはペプチド）をコードする１またはこれより多くの遺伝子フラグメント（例えば、ミニ遺伝子）を含む単離された核酸および遺伝子治療ベクター（例えば、ウイルス（例えば、ｒＡＡＶ）ベクター）に基づく。いくつかの実施形態において、本開示は、ＡＢＣＡ４タンパク質（例えば、ＡＢＣＡ４の遺伝子生成物）またはその一部をコードする遺伝子治療ベクターに関する。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される組成物は、ＡＢＣＡ４遺伝子における変異と関連する疾患（例えば、シュタルガルト病）を処置するために有用である。
よって、いくつかの局面において、本開示は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列を有するＡＢＣＡ４ミニ遺伝子をコードする導入遺伝子を含む単離された核酸を提供する。
いくつかの局面において、本開示は、ＡＢＣＡ４タンパク質をコードする核酸配列を有する導入遺伝子を含む単離された核酸であって、ここで上記ＡＢＣＡ４タンパク質は、配列番号９～１４および２０～２４のうちのいずれか１つに示されるとおりのアミノ酸配列を含む、単離された核酸を提供する。
いくつかの実施形態において、導入遺伝子は、ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子をコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む。いくつかの実施形態において、プロモーターは、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターである。いくつかの実施形態において、上記プロモーターは、ニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）プロモーターを含む。いくつかの実施形態において、組織特異的プロモーターは、光受容体特異的プロモーターである。いくつかの実施形態において、光受容体特異的プロモーターは、ロドプシンキナーゼプロモーター（例えば、ヒトＧＲＫプロモーター）を含む。
いくつかの実施形態において、導入遺伝子は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）によって隣接される。いくつかの実施形態において、導入遺伝子に隣接する上記ＩＴＲのうちの少なくとも一つは、ＡＡＶ２ ＩＴＲである。いくつかの実施形態において、導入遺伝子に隣接する少なくとも一つのＩＴＲは、末端分離部位（ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｓｉｔｅ）を欠く（例えば、ΔＩＴＲ）。
いくつかの局面において、本開示は、本明細書で記載されるとおりの単離された核酸を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態において、ベクターは、プラスミドＤＮＡ、または末端が閉じたＤＮＡ（ｃｌｏｓｅｄ－ｅｎｄｅｄ ＤＮＡ）、または脂質／ＤＮＡナノ粒子、またはウイルスベクターである。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルス（Ａｄ）ベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、またはバキュロウイルスベクターである。
いくつかの局面において、本開示は、本明細書で記載されるとおりの単離された核酸またはベクターを含む宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態において、細胞は、哺乳動物（ヒト）細胞、細菌細胞、酵母細胞、または昆虫細胞である。
いくつかの局面において、本開示は、本明細書で記載されるとおりの単離された核酸；およびＡＡＶカプシドタンパク質を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を提供する。
いくつかの実施形態において、カプシドタンパク質は、眼の細胞に対する向性を有する。いくつかの実施形態において、カプシドタンパク質は、ＡＡＶ８カプシドタンパク質である。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶは、眼への送達のために製剤化される。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶは、光受容細胞または網膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ）（ＲＰＥ）への送達のために製剤化される。
いくつかの局面において、本開示は、本明細書で記載されるとおりの単離された核酸またはｒＡＡＶ、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む組成物を提供する。
いくつかの局面において、本開示は、細胞に導入遺伝子を送達するための方法であって、上記方法は、本明細書で記載されるとおりの単離された核酸またはｒＡＡＶを細胞に投与する工程を包含する方法を提供する。
いくつかの実施形態において、細胞は、被験体の中にある。いくつかの実施形態において、被験体は、哺乳動物被験体（例えば、ヒト被験体）である。いくつかの実施形態において、細胞は、眼の細胞である。いくつかの実施形態において、眼の細胞は、光受容細胞または網膜色素上皮（ＲＰＥ）である。
いくつかの局面において、本開示は、それを必要とする被験体においてシュタルガルト病を処置するための方法であって、上記方法は、本明細書で記載されるとおりの単離された核酸またはｒＡＡＶを上記被験体に投与する工程を包含する方法を提供する。
いくつかの実施形態において、被験体は哺乳動物である。いくつかの実施形態において、被験体はヒトである。
いくつかの実施形態において、被験体は、ＡＢＣＡ４遺伝子において１またはこれより多くの変異を有することによって特徴づけられる。いくつかの実施形態において、被験体は、野生型ＡＢＣＡ４タンパク質（例えば、配列番号２に示されるアミノ酸配列）に対応するＧ１９６１ＥおよびＤ２１７７Ｎから選択されるアミノ酸置換を生じる１またはこれより多くの変異を有する。
いくつかの実施形態において、投与は、注射を介するものである。いくつかの実施形態において、上記注射は、網膜下注射または硝子体内注射または上脈絡膜注射である。
いくつかの実施形態において、投与は、被験体の眼への局所投与である。
詳細な説明
いくつかの局面において、本開示は、ある特定の遺伝的疾患（例えば、シュタルガルト病）を処置するために有用な組成物および方法に関する。本開示は、部分的に、治療用遺伝子生成物（例えば、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質（例えば、ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子の遺伝子生成物））をコードする１またはこれより多くの遺伝子フラグメントを含む単離された核酸および遺伝子治療ベクター（例えば、ウイルス（例えば、ｒＡＡＶ）ベクター）に基づく。
いくつかの局面において、本開示は、ある特定の遺伝的疾患（例えば、シュタルガルト病）を処置するために有用な組成物および方法に関する。本開示は、部分的に、治療用遺伝子生成物（例えば、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質（例えば、ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子の遺伝子生成物））をコードする１またはこれより多くの遺伝子フラグメントを含む単離された核酸および遺伝子治療ベクター（例えば、ウイルス（例えば、ｒＡＡＶ）ベクター）に基づく。
「核酸」配列とは、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列に言及する。いくつかの実施形態において、本開示のタンパク質および核酸は、単離される。本明細書で使用される場合、用語「単離された」とは、人工的に生成されることを意味する。核酸に関して本明細書で使用される場合、用語「単離された」とは、（ｉ）例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってインビトロで増幅される；（ｉｉ）クローニングによって組換え生成される；（ｉｉｉ）切断およびゲル分離によるように、精製される；または（ｉｖ）例えば、化学合成によって合成される、を意味する。単離された核酸は、当該分野で周知の組換えＤＮＡ技術によって容易に操作可能であるものである。従って、ベクターに含まれるヌクレオチド配列であって、５’制限部位および３’制限部位が既知であるか、またはこれに関するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマー配列が開示されているヌクレオチド配列は、単離されているとみなされるが、その天然の宿主の中にその天然の状態で存在する核酸配列は、そうではない。単離された核酸は、実質的に精製されていてもよいが、必ずしも必要とはされない。例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター内で単離される核酸は、その核酸が存在する細胞中の物質のごくわずかなパーセンテージを構成し得るに過ぎないという点で、純粋ではない。しかし、このような核酸は、その用語が本明細書で使用されるように、当業者に公知の標準的な技術によって容易に操作可能であることから、単離されている。タンパク質またはペプチドに関して本明細書で使用される場合、用語「単離される」とは、その天然の環境から単離されているかまたは人工的に生成されている（例えば、化学合成によって、組換えＤＮＡ技術によってなど）タンパク質またはペプチドに言及する。いくつかの実施形態において、単離された核酸は、ＡＢＣＡ４タンパク質（例えば、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質（例えば、ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子のようなＡＢＣＡ４遺伝子またはその一部）から発現される遺伝子生成物）をコードする。
ヒトにおいて、ＡＢＣＡ４遺伝子（ＳＴＧＤともいわれる）は、ＡＴＰ結合カセット、サブファミリーＡ（ＡＢＣ１）、メンバー４タンパク質をコードし、これは、杆体および錐体の外節円板縁部に局在し、内向きのフリッパーゼとして機能し得る。ＡＢＣＡ４遺伝子における変異は、黄斑変性の一形態であるシュタルガルト病を引きおこすことが観察されている。いくつかの実施形態において、ＡＢＣＡ４遺伝子は、ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿０００３５０．３に示される核酸配列（配列番号１）を含む。いくつかの実施形態において、ＡＢＣＡ４遺伝子は、ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ ＮＰ＿０００３４１．２に示されるアミノ酸配列（配列番号２）を有するタンパク質をコードする。
本明細書で使用される場合、「ミニ遺伝子（ｍｉｎｉｇｅｎｅ）」とは、天然に存在するペプチドまたはタンパク質をコードする相当する遺伝子のうちの１またはこれより多くの非必須エレメントが除去される場合、および上記ミニ遺伝子によってコードされるペプチドまたはタンパク質が、その相当する天然に存在するペプチドまたはタンパク質の機能を保持する場合に、組換えペプチドまたはタンパク質をコードする単離された核酸配列に言及する。「治療用ミニ遺伝子（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｉｎｉｇｅｎｅ）」とは、遺伝的疾患の処置のために有用なペプチドまたはタンパク質（例えば、ジストロフィン、ジスフェルリン、第ＶＩＩＩ因子、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、チロシナーゼ（Ｔｙｒ）など）をコードするミニ遺伝子に言及する。ミニ遺伝子は、当該分野で公知であり、例えば、Ｋａｒｐａｔｉ ａｎｄ Ａｃｓａｄｉ （１９９４） Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ Ｍｅｄ １７（５）：４９９－５０９； Ｐｌａｎｔｉｅｒら （２００１） Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ． ８６（２）：５９６－６０３；およびＸｉａｏら （２００７） Ｗｏｒｌｄ Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． １３（２）：２４４－９によって記載される。いくつかの実施形態において、ミニ遺伝子は、その相当する天然に存在するペプチドまたはタンパク質の配列を含まない。
いくつかの局面において、本開示は、ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子をコードする単離された核酸に言及する。一般に、ミニ遺伝子（例えば、治療用ミニ遺伝子（例えば、ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子））をコードする単離された核酸は、その相当する天然に存在する野生型タンパク質をコードする核酸配列（例えば、配列番号１）に関して約１０％～約９９％の間（例えば、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約４０％ 約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９９％など）が短縮される。短縮は、連続的であってもよいし（例えば、１個または連続するアミノ酸残基の短縮）、不連続的（例えば、アミノ酸の２もしくはこれより多くの短縮、例えば、１もしくはこれより多くのペプチドによって分離される２もしくはこれより多くのドメインの短縮）であり得る。例えば、いくつかの実施形態において、Ｍｉｎｉ ＡＢＣＡ４タンパク質をコードするミニ遺伝子は、野生型ＡＢＣＡ４遺伝子（例えば、配列番号１）と比較して、約６１％～短縮の間である（例えば、核酸配列の約５０％を含む）。いくつかの実施形態において、ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される核酸配列を含む（またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子は、配列番号９～１４および２０～２４のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む（またはそれからなる）タンパク質（ＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質といわれる）をコードする。いくつかの実施形態において、ＡＢＣＡ４タンパク質（例えば、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質）をコードする核酸は、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質をコードする核酸配列の前に、開始コドン（例えば、核酸配列ＡＴＧ）を含む。いくつかの実施形態において、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質をコードする核酸配列は、コドン最適化されている。
ＡＢＣＡ４タンパク質をコードする単離された核酸配列は、プロモーターに作動可能に連結されていてもよい。「プロモーター」とは、遺伝子の特異的転写を開始するために必要とされる、細胞の合成機構、または導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列に言及する。語句「作動可能に配置される」、「制御下」または「転写制御下」とは、プロモーターが、ＲＮＡポリメラーゼ開始および遺伝子の発現を制御するために、核酸に対して正しい位置および配向にあることを意味する。プロモーターは、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターであり得る。
構成的プロモーターの例としては、レトロウイルスのラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ） ＬＴＲプロモーター（必要に応じてＲＳＶエンハンサーとともに）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（必要に応じてＣＭＶエンハンサーとともに）［例えば、Ｂｏｓｈａｒｔら， Ｃｅｌｌ， ４１：５２１－５３０ （１９８５）を参照のこと］、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼプロモーター、β－アクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、およびＥＦ１αプロモーター［Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、プロモーターは、ニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）プロモーターを含む。いくつかの実施形態において、プロモーターは、増強型ニワトリβ－アクチンプロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、Ｕ６プロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、ニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）プロモーターである。
誘導性プロモーターは、遺伝子発現の調節を可能にし、外因的に供給される化合物、環境的因子（例えば、温度）、または特異的な生理学的状態（例えば、急性相の存在、細胞の特定の分化状態、または複製している細胞においてのみ）によって調節され得る。誘導性プロモーターおよび誘導システムは、種々の商業的供給元（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣｌｏｎｔｅｃｈおよびＡｒｉａｄが挙げられるが、これらに限定されない）から入手可能である。多くの他のシステムが、記載されており、当業者によって容易に選択され得る。外因的に供給されるプロモーターによって調節される誘導性プロモーターの例としては、亜鉛誘導性ヒツジメタロチオネイン（ｓｈｅｅｐ ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）（ＭＴ）プロモーター、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）誘導性マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターシステム（ＷＯ ９８／１００８８）；エクジソン昆虫プロモーター（Ｎｏら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９３：３３４６－３３５１ （１９９６））、テトラサイクリン抑制性システム（Ｇｏｓｓｅｎら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８９：５５４７－５５５１ （１９９２））、テトラサイクリン誘導性システム（Ｇｏｓｓｅｎら， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２６８：１７６６－１７６９ （１９９５）、Ｈａｒｖｅｙら， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ．， ２：５１２－５１８ （１９９８）も参照のこと）、ＲＵ４８６誘導性システム（Ｗａｎｇら， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ．， １５：２３９－２４３ （１９９７）およびＷａｎｇら， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．， ４：４３２－４４１ （１９９７））およびラパマイシン誘導性システム（Ｍａｇａｒｉら， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．， １００：２８６５－２８７２ （１９９７））が挙げられる。この文脈において有用であり得る誘導性プロモーターのさらに他のタイプは、特異的な生理学的状態（例えば、温度、急性相、細胞の特定の分化状態、または複製している細胞においてのみ）によって調節されるものである。
いくつかの実施形態において、調節配列は、組織特異的遺伝子発現能力を付与する。いくつかの場合には、上記組織特異的調節配列は、組織特異的様式において転写を誘導する組織特異的転写因子を結合する。このような組織特異的調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）は、当該分野で周知である。いくつかの実施形態において、上記組織特異的プロモーターは、眼特異的プロモーターである。眼特異的プロモーターの例としては、レチノスキシン（ｒｅｔｉｎｏｓｃｈｉｓｉｎ）プロモーター、Ｋ１２プロモーター、ロドプシンプロモーター、杆体特異的プロモーター、錐体特異的プロモーター、ロドプシンキナーゼプロモーター、ＧＲＫ１プロモーター、光受容体間レチノイド結合タンパク質近位（ＩＲＢＰ）プロモーター、およびオプシンプロモーター（例えば、赤オプシンプロモーター、青オプシンプロモーターなど）が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ（ｐｏｌ ＩＩＩ）プロモーターである。ｐｏｌ ＩＩＩプロモーターの非限定的な例としては、Ｕ６およびＨ１プロモーター配列が挙げられる。いくつかの実施形態において、プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ｐｏｌ ＩＩ）プロモーターである。ｐｏｌ ＩＩプロモーターの非限定的な例としては、Ｔ７、Ｔ３、ＳＰ６、ＲＳＶ、およびサイトメガロウイルスプロモーター配列が挙げられる。
本開示の局面は、本明細書で記載されるとおりの単離された核酸を含む遺伝子治療ベクターに関する。遺伝子治療ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、アデノウイルス（Ａｄ）ベクターなど）、プラスミド、末端が閉じたＤＮＡ（例えば、ｃｅＤＮＡ）、脂質／ＤＮＡナノ粒子などであり得る。いくつかの実施形態において、遺伝子治療ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態において、ミニ遺伝子をコードする発現カセットは、１またはこれより多くのウイルス複製配列、例えば、レンチウイルス長末端反復（ＬＴＲ）またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）によって隣接される。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、バキュロウイルスベクターである。
本明細書で記載される単離された核酸はまた、望ましくは、プロモーター／エンハンサー配列と導入遺伝子との間に位置したイントロンを含み得る。いくつかの実施形態において、イントロンは、合成または人工（例えば、異種）イントロンである。合成イントロンの例としては、ＳＶ－４０に由来するイントロン配列（ＳＶ－４０ Ｔイントロン配列といわれる）およびニワトリβ－アクチン遺伝子に由来するイントロン配列が挙げられる。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される導入遺伝子は、１個またはこれより多くの（１個、２個、３個、４個、５個、またはより多くの）人工イントロンを含む。いくつかの実施形態において、上記１個またはこれより多くの人工イントロンは、プロモーターと導入遺伝子をコードする核酸配列との間に配置される。
いくつかの実施形態において、上記ｒＡＡＶは、転写後応答エレメントを含む。本明細書で使用される場合、用語「転写後応答エレメント」とは、転写された場合に、遺伝子の発現を増強する三次構造をとる核酸配列に言及する。転写後応答エレメントの例としては、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後応答エレメント（ＷＰＲＥ）、マウスＲＮＡ輸送エレメント（ＲＴＥ）、シミアンレトロウイルス１型（ＳＲＶ－１）の構成的輸送エレメント（ＣＴＥ）、Ｍａｓｏｎ－Ｐｆｉｚｅｒサルウイルス（ＭＰＭＶ）に由来するＣＴＥ、およびヒト熱ショックタンパク質７０の５’非翻訳領域（Ｈｓｐ７０ ５’ＵＴＲ）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、上記ｒＡＡＶベクターは、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後応答エレメント（ＷＰＲＥ）を含む。
いくつかの実施形態において、上記ベクターは、上記ベクターでトランスフェクトしたかまたは本開示によって生成されるウイルスに感染させた細胞において、その転写、翻訳および／または発現を可能にする様式で、上記導入遺伝子のエレメントと作動可能に連結された従来の制御エレメントをさらに含む。本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」配列は、目的の遺伝子と連続している発現制御配列および目的の遺伝子を制御するためにトランスでまたは一定の距離において作用する発現制御配列の両方を含む。発現制御配列は、適切な転写開始、終結、プロモーターおよびエンハンサー配列；効率的ＲＮＡプロセシングシグナル（例えば、スプライシングおよびポリアデニル化（ポリＡ）シグナル）；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を増強する配列（例えば、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）；タンパク質安定性を増強する配列；および望ましい場合には、コードされた生成物の分泌を増強する配列を含む。多くの発現制御配列は、天然の、構成的な、誘導性のおよび／または組織特異的であるプロモーターを含め、当該分野で公知であり、利用され得る。
ポリアデニル化配列は、一般に、導入遺伝子配列の後ろに、および必要に応じて３’ ＡＡＶ ＩＴＲ配列の前に挿入される。本開示において有用なｒＡＡＶ構築物はまた、望ましくは、上記プロモーター／エンハンサー配列と上記導入遺伝子との間に位置したイントロンを含み得る。１つの考えられるイントロン配列は、ＳＶ－４０に由来し、ＳＶ－４０ Ｔイントロン配列といわれる。使用され得る別のベクターエレメントは、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）である。ＩＲＥＳ配列は、１つの遺伝子転写物から１つより多くのポリペプチドを生成するために使用される。ＩＲＥＳ配列は、１つより多くのポリペプチド鎖を含むタンパク質を生成するために使用される。これらおよび他の一般的なベクターエレメントの選択は、従来どおりであり、多くのこのような配列は、入手可能である［例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ならびに例えば、３．１８ ３．２６および１６．１７ １６．２７頁においてその中で引用される参考文献、ならびにＡｕｓｕｂｅｌら， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８９を参照のこと］。
本開示の単離された核酸は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（ｒＡＡＶベクター）であり得る。いくつかの実施形態において、本開示によって記載されるとおりの単離された核酸は、第１のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）、またはその改変体を含む領域（例えば、第１の領域）を含む。上記単離された核酸（例えば、上記組換えＡＡＶベクター）は、カプシドタンパク質にパッケージングされ得、被験体に投与され得る、および／または選択された標的細胞に送達され得る。「組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクター」は、代表的には、最小限で、導入遺伝子およびその調節配列、ならびに５’および３’ ＡＡＶ逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）から構成される。上記導入遺伝子は、本明細書中の他の箇所で開示されるように、１またはこれより多くのタンパク質（例えば、ヒトＡＢＣＡ４、またはそのフラグメント）をコードする１またはこれより多くの領域を含み得る。上記導入遺伝子はまた、例えば、ｍｉＲＮＡ結合部位をコードする領域、および／または発現制御配列（例えば、ポリＡテール）を含み得る。
一般に、ＩＴＲ配列は、長さ約１４５ｂｐである。好ましくは、実質的にＩＴＲをコードする配列全体が、分子において使用されるが、これらの配列のある程度の小さな改変は許容される。これらのＩＴＲ配列を改変する能力は、当該分野の技術範囲内である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら， 「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ． Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」， 第２版， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８９）；およびＫ． Ｆｉｓｈｅｒら， Ｊ Ｖｉｒｏｌ．， ７０：５２０ ５３２ （１９９６）のようなテキストを参照のこと）。本発明において使用されるこのような分子の例は、上記導入遺伝子を含む「シス作用性」プラスミドであり、ここでその選択された導入遺伝子配列および関連付けられた調節エレメントは、５’および３’ ＡＡＶ ＩＴＲ配列によって隣接される。上記ＡＡＶ ＩＴＲ配列は、任意の公知のＡＡＶ（現在同定されている哺乳動物ＡＡＶタイプを含む）から得られ得る。いくつかの実施形態において、上記単離された核酸（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびこれらの改変体から選択される血清型を有する少なくとも１つのＩＴＲを含む。いくつかの実施形態において、上記単離された核酸は、ＡＡＶ２ ＩＴＲをコードする領域（例えば、第１の領域）を含む。
いくつかの実施形態において、上記単離された核酸は、第２のＡＡＶ ＩＴＲを含む領域（例えば、第２の領域、第３の領域、第４の領域など）をさらに含む。いくつかの実施形態において、上記第２のＡＡＶ ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびこれらの改変体から選択される血清型を有する。いくつかの実施形態において、上記第２のＡＡＶ ＩＴＲは、ＡＡＶ２ ＩＴＲである。いくつかの実施形態において、上記第２のＩＴＲは、機能的な末端分離部位（ＴＲＳ）を欠く変異ＩＴＲである。用語「末端分離部位を欠く」とは、ＩＴＲの末端分離部位（ＴＲＳ）の機能を抑止する変異（例えば、非同義変異のようなセンス変異、もしくはミスセンス変異）を含むＡＡＶ ＩＴＲ、または機能的なＴＲＳをコードする核酸配列を欠く短縮されたＡＡＶ ＩＴＲ（例えば、ΔＴＲＳ ＩＴＲ、またはΔＩＴＲ）に言及し得る。いかなる特定の理論によっても拘束されることは望まないが、機能的ＴＲＳを欠くＩＴＲを含むｒＡＡＶベクターは、例えば、ＭｃＣａｒｔｈｙ （２００８） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １６（１０）：１６４８－１６５６によって記載されるように、自己相補的ｒＡＡＶベクターを生成する。
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）
いくつかの局面において、本開示は、単離されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を提供する。ＡＡＶに関して本明細書で使用される場合、用語「単離された」とは、人工的に生成されたかまたは得られたＡＡＶに言及する。単離されたＡＡＶは、組換え法を使用して生成され得る。このようなＡＡＶは、「組換えＡＡＶ」として本明細書で言及される。組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）は、好ましくは、ヌクレアーゼおよび／または上記ｒＡＡＶの導入遺伝子が、１またはこれより多くの所定の組織に特異的に送達されるように、組織特異的標的化能力を有する。上記ＡＡＶカプシドは、これらの組織特異的標的化能力を決定するにあたって重要なエレメントである。従って、標的化されている組織に適したカプシドを有するｒＡＡＶが、選択され得る。
いくつかの局面において、本開示は、単離されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を提供する。ＡＡＶに関して本明細書で使用される場合、用語「単離された」とは、人工的に生成されたかまたは得られたＡＡＶに言及する。単離されたＡＡＶは、組換え法を使用して生成され得る。このようなＡＡＶは、「組換えＡＡＶ」として本明細書で言及される。組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）は、好ましくは、ヌクレアーゼおよび／または上記ｒＡＡＶの導入遺伝子が、１またはこれより多くの所定の組織に特異的に送達されるように、組織特異的標的化能力を有する。上記ＡＡＶカプシドは、これらの組織特異的標的化能力を決定するにあたって重要なエレメントである。従って、標的化されている組織に適したカプシドを有するｒＡＡＶが、選択され得る。
所望のカプシドタンパク質を有する組換えＡＡＶを得るための方法は、当該分野で周知である（例えば、ＵＳ ２００３／０１３８７７２（その内容は、それらの全体において本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。代表的には、上記方法は、ＡＡＶカプシドタンパク質をコードする核酸配列；機能的ｒｅｐ遺伝子；ＡＡＶ逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）および導入遺伝子から構成される組換えＡＡＶベクター；ならびに上記ＡＡＶカプシドタンパク質への上記組換えＡＡＶベクターのパッケージングを許容するために十分なヘルパー機能を含む宿主細胞を培養する工程を包含する。いくつかの実施形態において、カプシドタンパク質は、ＡＡＶのｃａｐ遺伝子によってコードされる構造タンパク質である。ＡＡＶは、３種のカプシドタンパク質、ビリオンタンパク質１～３（ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３と称される）を含み、これらは全て、選択的スプライシングを介して単一のｃａｐ遺伝子から転写される。いくつかの実施形態において、ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３の分子量は、それぞれ、約８７ｋＤａ、約７２ｋＤａおよび約６２ｋＤａである。いくつかの実施形態において、翻訳の際に、カプシドタンパク質は、ウイルスゲノムの周りに球状の６０マータンパク質シェルを形成する。いくつかの実施形態において、上記カプシドタンパク質の機能は、ウイルスゲノムを保護し、そのゲノムを送達し、宿主と相互作用することである。いくつかの局面において、カプシドタンパク質は、組織特異的様式において宿主へとウイルスゲノムを送達する。
いくつかの実施形態において、ＡＡＶカプシドタンパク質は、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶ９、およびＡＡＶ１０からなる群より選択されるＡＡＶ血清型のものである。いくつかの実施形態において、ＡＡＶカプシドタンパク質は、非ヒト霊長類に由来する血清型、例えば、ＡＡＶｒｈ８血清型のものである。いくつかの実施形態において、上記ＡＡＶカプシドタンパク質は、被験体の眼に対する向性を有する血清型（例えば、他のＡＡＶカプシドタンパク質より効率的に被験体の眼の細胞を形質導入するＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ．８、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶｒｈ．３９およびＡＡＶｒｈ．４３））のものである。いくつかの実施形態において、ＡＡＶカプシドタンパク質は、ＡＡＶ８血清型のものである。
ＡＡＶカプシドの中にｒＡＡＶベクターをパッケージするために宿主細胞において培養されるべき構成要素は、宿主細胞にトランスで提供され得る。あるいは、その必要とされる構成要素（例えば、組換えＡＡＶベクター、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、および／またはヘルパー機能）のうちのいずれか１またはこれより多くが、当業者に公知の方法を使用してその必要とされる構成要素のうちの１またはこれより多くを含むように操作された安定な宿主細胞によって提供され得る。最も適切なことには、このような安定な宿主細胞は、誘導性プロモーターの制御下でその必要とされる構成要素を含む。しかし、その必要とされる構成要素は、構成的プロモーターの制御下にあってもよい。適切な誘導性および構成的プロモーターの例は、本明細書中で、導入遺伝子とともに使用するために適した調節エレメントの考察の中で提供される。さらに別の代替法において、選択される安定な宿主細胞は、構成的プロモーターの制御下で選択された構成要素を、および１またはこれより多くの誘導性プロモーターの制御下で他の選択された構成要素を含み得る。例えば、２９３細胞（これは構成的プロモーターの制御下でＥ１ヘルパー機能を含む）に由来するが、誘導性プロモーターの制御下でｒｅｐおよび／またはｃａｐタンパク質を含む安定な宿主細胞が、生成され得る。さらに他の安定な宿主細胞は、当業者によって生成され得る。
いくつかの実施形態において、本開示は、タンパク質（例えば、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質）をコードするコード配列を含む核酸を含む宿主細胞に関する。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）または昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）である。いくつかの実施形態において、本開示は、上記で記載される宿主細胞を含む組成物に関する。いくつかの実施形態において、上記の宿主細胞を含む組成物は、凍結保存剤をさらに含む。
上記組換えＡＡＶベクター、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、および本開示のｒＡＡＶを生成するために必要とされるヘルパー機能は、任意の適切な遺伝的エレメント（ベクター）を使用して、パッケージを行う宿主細胞に送達され得る。その選択した遺伝的エレメントは、任意の適切な方法（本明細書で記載されるものを含む）によって送達され得る。本開示の任意の実施形態を構築するために使用される方法は、核酸操作の当業者に公知であり、遺伝子操作、組換え操作、および合成技術を含む。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．を参照のこと。同様に、ｒＡＡＶビリオンを生成する方法は、周知であり、適切な方法の選択は、本開示に対する限定ではない。例えば、Ｋ． Ｆｉｓｈｅｒら， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ７０：５２０－５３２ （１９９３）および米国特許第５，４７８，７４５号を参照のこと。
いくつかの実施形態において、組換えＡＡＶは、三重トランスフェクション法を使用して生成され得る（米国特許第６，００１，６５０号に詳細に記載される）。代表的には、上記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ粒子、ＡＡＶヘルパー機能ベクター、およびアクセサリー機能ベクターにパッケージされるように、宿主細胞を組換えＡＡＶベクター（導入遺伝子を含む）でトランスフェクトすることによって生成される。ＡＡＶヘルパー機能ベクターは、生産的なＡＡＶ複製およびカプシド形成のためにトランスで機能する「ＡＡＶヘルパー機能（ＡＡＶ ｈｅｌｐｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）」配列（すなわち、ｒｅｐおよびｃａｐ）をコードする。好ましくは、上記ＡＡＶヘルパー機能ベクターは、いかなる検出可能な野生型ＡＡＶビリオン（すなわち、機能的ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子を含むＡＡＶビリオン）をも生成することなく、効率的なＡＡＶベクター生成を支援する。本開示とともに使用するために適したベクターの非限定的な例としては、ｐＨＬＰ１９（米国特許第６，００１，６５０号に記載される）およびｐＲｅｐ６ｃａｐ６ベクター（米国特許第６，１５６，３０３号に記載される）（両方の全体が、本明細書に参考として援用される）が挙げられる。上記アクセサリー機能ベクターは、ＡＡＶが複製のために依存する非ＡＡＶ由来ウイルスおよび／または細胞の機能（すなわち、「アクセサリー機能（ａｃｃｅｓｓｏｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ）」のためのヌクレオチド配列をコードする。上記アクセサリー機能としては、ＡＡＶ複製のために必要とされる機能（ＡＡＶ遺伝子転写の活性化、ステージ特異的ＡＡＶ ｍＲＮＡスプライシング、ＡＡＶ ＤＮＡ複製、ｃａｐ発現生成物の合成、およびＡＡＶカプシドアセンブリに関与する部分が挙げられるが、これらに限定されない）が挙げられる。ウイルスベースのアクセサリー機能は、公知のヘルパーウイルス（例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス１型以外）、およびワクシニアウイルス）のうちのいずれかに由来し得る。
いくつかの局面において、本開示は、トランスフェクトされた宿主細胞を提供する。用語「トランスフェクション」は、細胞による外来ＤＮＡの取り込みに言及するために使用され、細胞は、外因性ＤＮＡが細胞膜の内部に導入されている場合に「トランスフェクトされて」いる。多くのトランスフェクション技術が、当該分野で概して公知である。例えば、Ｇｒａｈａｍら （１９７３） Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ５２：４５６、Ｓａｍｂｒｏｏｋら （１９８９） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｄａｖｉｓら （１９８６） Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、およびＣｈｕら （１９８１） Ｇｅｎｅ １３：１９７を参照のこと。このような技術は、１またはこれより多くの外因性核酸（例えば、ヌクレオチド組み込みベクターおよび他の核酸分子）を適切な宿主細胞に導入するために使用され得る。
「宿主細胞」とは、目的の物質を有するかまたは有し得る任意の細胞に言及する。しばしば宿主細胞は、哺乳動物細胞である。宿主細胞は、ＡＡＶヘルパー構築物、ＡＡＶミニ遺伝子プラスミド、アクセサリー機能ベクター、または組換えＡＡＶの生成と関連する他のトランスファーＤＮＡのレシピエントとして使用され得る。その用語は、トランスフェクトされている元の細胞の子孫を含む。従って、「宿主細胞」は、本明細書で使用される場合、外因性ＤＮＡ配列でトランスフェクトされている細胞に言及し得る。単一の親細胞の子孫が、天然の、偶発的な、または計画的な変異に起因して、元の親と、形態またはゲノムもしくは全ＤＮＡ含量（ｔｏｔａｌ ＤＮＡ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）において必ずしも完全に同じである必要はないことは、理解される。
本明細書で使用される場合、用語「細胞株」とは、インビトロでの連続したまたは長期間の増殖および分裂の能力がある細胞の集団に言及する。しばしば、細胞株は、単一の前駆細胞に由来するクローン集団である。自発的なまたは誘導性の変化が、このようなクローン集団の貯蔵または移入の間に、核型において起こり得ることは、当該分野でさらに公知である。従って、言及される細胞株に由来する細胞は、祖先の細胞または培養物、およびこのような改変体を含むように言及される細胞株と正確に同一でなくてもよい。
本明細書で使用される場合、用語「組換え細胞」とは、外因性ＤＮＡセグメント（例えば、生物学的に活性ナポリペプチドの転写または生物学的に活性な核酸（例えば、ＲＮＡ）の生成をもたらすＤＮＡセグメント）が導入されている細胞に言及する。
本明細書で使用される場合、用語「ベクター」とは、適切な制御エレメントと会合する場合に複製し得る、および細胞間で遺伝子配列を移動させ得る任意の遺伝的エレメント（例えば、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、染色体、人工染色体、ウイルス、ビリオンなど）を含む。従って、その用語は、クローニングおよび発現ビヒクル、ならびにウイルスベクターを含む。
方法
導入遺伝子を、被験体の眼の（例えば、杆体細胞または錐体細胞のような光受容体、網膜細胞など）組織または耳に送達するための方法は、本明細書で提供される。上記方法は、代表的には、被験体において導入遺伝子（例えば、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質）を発現するための核酸を含む有効量のｒＡＡＶを、被験体に投与する工程を包含する。ｒＡＡＶの「有効量」は、被験体における標的組織の細胞の十分な数に感染させるために十分な量である。いくつかの実施形態において、標的組織は、眼（例えば、光受容体、網膜など）の組織である。いくつかの実施形態において、導入遺伝子は、光受容細胞または網膜色素上皮（ＲＰＥ）に送達される。
導入遺伝子を、被験体の眼の（例えば、杆体細胞または錐体細胞のような光受容体、網膜細胞など）組織または耳に送達するための方法は、本明細書で提供される。上記方法は、代表的には、被験体において導入遺伝子（例えば、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質）を発現するための核酸を含む有効量のｒＡＡＶを、被験体に投与する工程を包含する。ｒＡＡＶの「有効量」は、被験体における標的組織の細胞の十分な数に感染させるために十分な量である。いくつかの実施形態において、標的組織は、眼（例えば、光受容体、網膜など）の組織である。いくつかの実施形態において、導入遺伝子は、光受容細胞または網膜色素上皮（ＲＰＥ）に送達される。
ｒＡＡＶの有効量は、被験体における治療上の利益を有するために、例えば、上記被験体において、疾患の１またはこれより多くの症状（例えば、シュタルガルト病（例えば、ＡＢＣＡ４遺伝子の欠失または変異と関連する疾患）の症状）を改善するために十分な量であり得る。ＡＢＣＡ４遺伝子における変異の例としては、ＡＢＣＡ４タンパク質においてアミノ酸置換Ｇ１９６１ＥおよびＤ２１７７Ｎを生じる変異を含む。上記有効量は、例えば、被験体の種、年齢、体重、健康状態、ならびに標的化されるべき眼の組織のような種々の因子に依存し、従って、被験体および組織の間で変動し得る。有効量は、使用されるｒＡＡＶにも依存し得る。
ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶの有効量は、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、または１０１４ ゲノムコピー／ｋｇである。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶの有効量は、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、１０１４、または１０１５ ゲノムコピー／被験体である。
本開示の局面は、それを必要とする被験体においてシュタルガルト病を処置するための方法に関する。いくつかの実施形態において、被験体は、哺乳動物、例えば、ヒト、マウス、ラット、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類などである。いくつかの実施形態において、被験体はヒトである。
本明細書で使用される場合、用語「処置すること」とは、組成物（例えば、本明細書で記載されるとおりの単離された核酸またはｒＡＡＶ）を、シュタルガルト病の１またはこれより多くの徴候または症状（例えば、霧視または乱視、暗所での視力低下、色覚の喪失、ＡＢＣＡ４遺伝子における１またはこれより多くの変異など）を示す被験体への、上記障害、上記疾患の症状、またはシュタルガルト病に対する素因を治癒する（ｃｕｒｅ）、治癒する（ｈｅａｌ）、緩和する（ａｌｌｅｖｉａｔｅ）、軽減する（ｒｅｌｉｅｖｅ）、変化させる、治す（ｒｅｍｅｄｙ）、好転させる（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、改善する（ｉｍｐｒｏｖｅ）、または影響を及ぼす目的での適用または投与に言及する。
シュタルガルト病の緩和としては、上記疾患の発生もしくは進行を遅らせるか、または疾患の重篤度の低減が挙げられる。上記疾患の緩和は、治癒的な結果を必ずしも必要としない。そこで使用される場合、シュタルガルト病の発生を「遅らせること（ｄｅｌａｙｉｎｇ）」とは、上記疾患の進行を延期する（ｄｅｆｅｒ）、妨げる（ｈｉｎｄｅｒ）、減速させる（ｓｌｏｗ）、遅らせる（ｒｅｔａｒｄ）、安定化する（ｓｔａｂｉｌｉｚｅ）、および／または延期する（ｐｏｓｔｐｏｎｅ）ことを意味する。この遅れは、処置されている疾患および／または個体の履歴に依存して、時間の長さを変動させるものであり得る。疾患の発生を「遅らせる」もしくは緩和する、または疾患の発症（ｏｎｓｅｔ）を遅らせる方法は、その方法を使用しないことと比較した場合に、所定の時間枠において上記疾患の１もしくはこれより多くの症状を発生させる確率を低減する、および／または所定の時間枠において上記症状の程度を低減する方法である。このような比較は、代表的には、統計学的に有意な結果を与えるために十分な数の被験体を使用する臨床研究に基づく。
疾患の「発生（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）」または「進行（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）」は、その疾患の最初の症状発現および／または続く進行を意味する。上記疾患の発生は、当該分野で周知のとおりの標準的な臨床技術を使用して検出可能かつ評価され得る。しかし、発生は、検出不能であり得る進行にも言及する。本開示の目的のために、発生または進行は、上記症状の生物学的過程に言及する。「発生」は、出現、再発、および発症を含む。
有効量は、投与様式にも依存し得る。例えば、基質内投与（ｉｎｔｒａｓｔｒｏｍａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）または皮下注射によって眼（例えば、光受容体、網膜など）の組織を標的化することは、いくつかの場合には、別の方法（例えば、全身投与、局所投与）によって眼（例えば、光受容体、網膜など）の組織を標的化するものとは異なる（例えば、より高いかまたはより低い）用量を必要とし得る。いくつかの実施形態において、ある特定の血清型（例えば、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ．８、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶｒｈ．３９、およびＡＡＶｒｈ．４３）を有するｒＡＡＶの基質内注射（ＩＳ）は、眼（例えば、角膜、光受容体、網膜など）の細胞の効率的な形質導入を媒介する。従って、いくつかの実施形態において、上記注射は、基質内注射（ＩＳ）である。いくつかの実施形態において、上記投与は、注射、必要に応じて網膜下注射または硝子体内注射または上脈絡膜注射を介する。いくつかの実施形態において、上記注射は、局所投与（例えば、眼への局所投与）である。いくつかの場合には、複数用量のｒＡＡＶが投与される。
上記ｒＡＡＶは、当該分野で公知の任意の適切な方法に従って組成物において被験体に投与され得る。上記ｒＡＡＶは、好ましくは、生理学的に適合性のキャリアの中に（すなわち、組成物の中に）懸濁され、被験体、すなわち、宿主動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ヒツジ、ウサギ、ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、モルモット、ハムスター、ニワトリ、シチメンチョウ、または非ヒト霊長類（例えば、マカク））に投与され得る。いくつかの実施形態において、宿主動物は、ヒトを含まない。
哺乳動物被験体への上記ｒＡＡＶの送達は、例えば、眼内注射または局所投与（例えば、点眼剤）によるものであり得る。いくつかの実施形態において、眼内注射は、基質内注射、結膜下注射、または硝子体内注射を含む。いくつかの実施形態において、上記注射は、局所投与でない。投与方法の組み合わせ（例えば、局所投与および基質内注射）がまた、使用され得る。
本開示の組成物は、ｒＡＡＶを、単独で、または１またはこれより多くの他のウイルス（例えば、１またはこれより多くの異なる導入遺伝子（例えば、異なるＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質をコードする導入遺伝子）を有する第２のｒＡＡＶ）と組み合わせて、含み得る。いくつかの実施形態において、組成物は、各々１またはこれより多くの異なる導入遺伝子を有する１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、またはこれより多くの異なるｒＡＡＶを含む。
いくつかの実施形態において、組成物はさらに、薬学的に受容可能なキャリアを含む。適切なキャリアは、上記ｒＡＡＶが指向される適応症に鑑みて、当業者によって容易に選択され得る。例えば、１つの適切なキャリアは、生理食塩水を含み、これは、種々の緩衝化溶液（例えば、リン酸緩衝化生理食塩水）とともに製剤化され得る。
他の例示的なキャリアとしては、滅菌生理食塩水、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、ゼラチン、デキストラン、アガー、ペクチン、ラッカセイ油、ゴマ油、および水が挙げられる。上記キャリアの選択は、本開示の限定ではない。
必要に応じて、本開示の組成物は、上記ｒＡＡＶおよびキャリアに加えて、他の薬学的成分（例えば、保存剤、または化学的安定化剤）を含み得る。適切な例示的保存剤としては、クロロブタノール、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸、二酸化イオウ、没食子酸プロピル、パラベン、エチルバニリン、グリセリン、フェノール、およびパラクロロフェノールが挙げられる。適切な化学的安定化剤としては、ゼラチンおよびアルブミンが挙げられる。
上記ｒＡＡＶは、所望の組織（例えば、眼の組織（例えば、光受容体、網膜などの組織））の細胞をトランスフェクトし、過度の有害作用なしに遺伝子移入および発現の十分なレベルを提供するために、十分な量で投与される。薬学的に受容可能な投与経路の例としては、選択した器官への直接送達（例えば、眼への網膜下送達）、経口、吸入（鼻内送達および気管内送達を含む）、眼内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腫瘍内、および他の非経口投与経路が挙げられるが、これらに限定されない。投与経路は、所望であれば、組み合わされ得る。
特定の「治療効果」を達成するために必要とされるｒＡＡＶビリオンの用量、例えば、ゲノムコピー／体重１ｋｇ（ＧＣ／ｋｇ）の用量単位は、ｒＡＡＶビリオンの投与経路、治療効果を達成するために必要とされる遺伝子もしくはＲＮＡ発現のレベル、処置されている特定の疾患または障害、および遺伝子またはＲＮＡ生成物の安定性が挙げられるが、これらに限定されないいくつかの因子に基づいて変動する。当業者は、前述の因子および他の因子に基づいて、特定の疾患または障害を有する患者を処置するために、ｒＡＡＶビリオン用量範囲を容易に決定し得る。
ｒＡＡＶの有効量は、動物の感染を標的化する、所望の組織を標的化するために十分な量である。上記有効量は、被験体の種、年齢、体重、健康状態、および標的化される組織のような因子に主に依存し、従って、動物および組織の間で変動し得る。例えば、上記ｒＡＡＶの有効量は、一般に、約１０９～１０１６ ゲノムコピーを含む約１ｍｌ～約１００ｍｌの溶液の範囲にある。いくつかの場合には、約１０１１～１０１３の間のｒＡＡＶゲノムコピーの投与量が、適切である。ある特定の実施形態において、１０９ ｒＡＡＶゲノムコピーが、眼の組織（例えば、角膜組織）を標的化するために有効である。
いくつかの実施形態において、１０９ ｒＡＡＶゲノムコピーよりも濃縮された用量は、被験体の眼に投与される場合には毒性である。いくつかの実施形態において、有効量は、ｒＡＡＶの複数の用量によって生成される。いくつかの実施形態において、被験体は、ｒＡＡＶを投与する前に、１またはこれより多くの免疫抑制剤（例えば、コルチコステロイド、メトトレキサート、シクロスポリンＡ、ミコフェノール酸モフェチル、タクロリムス、リツキシマブ、シロリムス、メチルプレドニゾロン、ＣＴＬＡ４Ｉｇ、非枯渇（ｎｏｎ－ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ）ＣＤ４ Ａｂ、およびＴ細胞枯渇抗胸腺細胞γグロブリン（Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ ａｎｔｉ－ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ ｇａｍｍａ－ｇｌｏｂｕｌｉｎ）（ＡＴＧ）など）を投与される。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶの用量は、暦日（例えば、２４時間の期間）あたり１回以下で被験体に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶの用量は、２暦日、３暦日、４暦日、５暦日、６暦日、または７暦日あたり、１回以下で被験体に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶの用量は、歴週（例えば、７暦日）あたり１回以下で被験体に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶの用量は、２週間に１回（例えば、２歴週の期間に１回）以下で被験体に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶの用量は、歴月に１回（例えば、３０暦日に１回）以下で被験体に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶの用量は、６歴月あたり１回以下で被験体に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶの用量は、１暦年（例えば、３６５日または閏年では３６６日）あたり１回以下で被験体に投与される。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶ組成物は、特に、高ｒＡＡＶ濃度が存在する（例えば、～１０１３ ＧＣ／ｍｌまたはこれより高い）場合、上記組成物中のＡＡＶ粒子の凝集を低減するように製剤化される。凝集を低減させるために適した方法が使用され得、例えば、界面活性剤の添加、ｐＨ調節、塩濃度調節などが挙げられる（例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ＦＲ，ら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ （２００５） １２， １７１－１７８（その全体において本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。
薬学的に受容可能な賦形剤およびキャリア溶液の製剤は、種々の処置レジメンにおいて本明細書で記載される特定の組成物を使用するための適切な投与および処置レジメンの開発と同様に、当業者に周知である。代表的には、これらの製剤は、少なくとも約０．１％の活性化合物またはこれより多くを含み得るが、活性成分のパーセンテージは、当然のことながら変動し得、便宜上、製剤の全体の重量または容積の約１もしくは２％～約７０％または８０％の間またはより多くてもよい。当然に、各治療上有用な組成物中の活性化合物の量は、適切な投与量がその化合物の任意の所定の単位用量において得られるような方法で調製され得る。溶解度、バイオアベイラビリティー、生物学的半減期、投与経路、製品の貯蔵寿命のような因子、ならびに他の薬理学的考慮事項は、このような薬学的製剤を調製する当業者によって企図され、よって、種々の投与量および処置レジメンが、望ましい可能性がある。
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される適切に製剤化された薬学的組成物中のｒＡＡＶは、標的組織に直接、例えば、眼の組織（例えば、光受容体、網膜などの組織）に直接送達される。しかし、ある特定の状況では、別個に、またはさらにｒＡＡＶベースの治療構築物を、別の経路を介して、例えば、皮下に、膵臓内に、鼻内に、非経口的に、静脈内に、筋肉内に、髄腔内に、もしくは経口的に、腹腔内に、または吸入によって送達することは、望ましいことであり得る。いくつかの実施形態において、米国特許第５，５４３，１５８号；同第５，６４１，５１５号および同第５，３９９，３６３号（各々具体的に、その全体において本明細書に参考として援用される）に記載されるとおりの投与モダリティーが、ｒＡＡＶを送達するために使用され得る。いくつかの実施形態において、好ましい投与様式は、硝子体内注射または網膜下注射によるものである。
注射可能な使用に適した薬学的形態としては、滅菌水性液剤または分散物、および滅菌注射用液剤又は分散物の即時の調製のための滅菌散剤が挙げられる。分散物はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびこれらの混合物中、ならびに油中で調製され得る。貯蔵および使用の通常の条件下では、これらの調製物は、微生物の増殖を防止するために保存剤を含む。多くの場合、その形態は無菌であり、容易な注射針通過性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度まで流動性である。それは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、微生物（例えば、細菌および真菌）の汚染作用から保護されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、および／または植物油を含む、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、コーティング（例えば、レシチン）の使用によって、分散物の場合には、必要とされる粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗細菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）によってもたらされ得る。多くの場合、等張性剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含めることは好ましい。注射用組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる作用物質（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の組成物中での使用によってもたらされ得る。
注射用水性液剤の投与に関しては、例えば、その液剤は、必要であれば、適切に緩衝化されていてもよく、液体希釈剤は先ず、十分な食塩水またはグルコースで等張性にされ得る。これらの特定の水性液剤は、静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内投与に特に適している。この関連において、適切な滅菌水性媒体が使用され得る。例えば、１投与量は、１ｍｌの等張性ＮａＣｌ溶液中に溶解され得、１０００ｍｌの皮下注入流体に添加されるか、または提唱される注入部位において注射されるかのいずれかであり得る（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」 第１５版， 第１０３５～１０３８頁および第１５７０～１５８０頁を参照のこと）。投与量におけるいくつかのバリエーションは、宿主の状態に依存して必然的に起こる。投与に責任のある人物は、いずれにしても、個々の宿主に適切な用量を決定する。
滅菌注射用液剤は、その活性なｒＡＡＶを、必要とされる場合、本明細書で列挙される種々の他の成分とともに適切な溶媒中で必要とされる量で組み込み、続いて、濾過滅菌することによって調製される。一般に、分散物は、種々の無菌の活性成分を、基本的な分散媒および上記で列挙されたものからの必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルの中に組み込むことによって調製される。滅菌注射用液剤の調製のための滅菌散剤の場合には、好ましい調製方法は、事前に滅菌濾過したその液剤からその活性成分＋任意のさらなる所望の成分の散剤を生じる、真空乾燥および凍結乾燥技術である。
本明細書で開示されるｒＡＡＶ組成物はまた、中性または塩基形態で製剤化され得る。薬学的に受容可能な塩としては、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基と形成される）が挙げられ、そしてこれは、例えば、塩酸もしくはリン酸のような無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などのような有機酸と形成される。遊離カルボキシル基と形成される塩はまた、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、または水酸化鉄（ＩＩ）のような無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどのような有機塩基から得られ得る。製剤化されると、液剤は、投与製剤と適合する様式でおよび治療上有効であるような量で投与される。その製剤は、注射用液剤、薬物放出カプセル剤などのような種々の投与形態で容易に投与される。
本明細書で使用される場合、「キャリア」とは、任意のおよび全ての溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗細菌剤および抗真菌剤、等張性剤および吸収遅延剤、緩衝液、キャリア溶液、懸濁物、コロイドなどを含む。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および作用物質の使用は、当該分野で周知である。補助的な活性成分はまた、組成物の中に組み込まれ得る。語句「薬学的に受容可能な」とは、宿主に投与される場合に、アレルギー反応または類似の有害な反応を生じない分子実体および組成物に言及する。
送達ビヒクル（例えば、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、マイクロスフェア、脂質粒子、小胞など）は、本開示の組成物を適切な宿主細胞に導入するために使用され得る。特に、ｒＡＡＶベクターが送達する導入遺伝子は、脂質粒子、リポソーム、小胞、ナノスフェア、またはナノ粒子などのいずれかに被包される送達のために製剤化され得る。
このような製剤は、本明細書で開示される核酸またはｒＡＡＶ構築物の薬学的に受容可能な製剤の導入のために好適であり得る。リポソームの形成および使用は、当業者に概して公知である。近年になって、改善された血清安定性および循環半減期を有するリポソームが、開発された（米国特許第５，７４１，５１６号）。さらに、潜在的薬物キャリアとしてのリポソームおよびリポソーム様調製物の種々の方法が、記載されている（米国特許第５，５６７，４３４号；同第５，５５２，１５７号；同第５，５６５，２１３号；同第５，７３８，８６８号および同第５，７９５，５８７号）。
リポソームは、他の手順によるトランスフェクションに通常は抵抗性である多くの細胞タイプで成功裡に使用されている。さらに、リポソームは、ウイルスベースの送達システムに代表的なＤＮＡの長さ制限がない。リポソームは、遺伝子、薬物、放射性治療剤、ウイルス、転写因子およびアロステリックエフェクターを種々の培養細胞株および動物に導入するために効果的に使用されている。さらに、リポソーム媒介性薬物送達の効果を試験するいくつかの成功した治験が、完了している。
リポソームは、水性媒体中に分散され、多層状同心性二重層小胞（多層状小胞（ＭＬＶ）ともいわれる）を自発的に形成するリン脂質から形成される。ＭＬＶは一般に、２５ｎｍ～４μｍの直径を有する。ＭＬＶの超音波処理は、２００～５００Åの範囲の直径を有し、コアの中に水性液剤を含む小さな単層小胞（ＳＵＶ）の形成を生じる。
あるいは、ｒＡＡＶのナノカプセル製剤が使用され得る。ナノカプセルは、一般に、安定かつ再現可能な方法で物質を捕捉し得る。細胞内のポリマー過負荷に起因する副作用を回避するために、このような超微粒子（およそ０．１μｍのサイズ）は、インビボで分解され得るポリマーを使用して設計されるべきである。これらの要件を満たす生分解性ポリアルキル－シアノアクリレートナノ粒子は、使用に関して企図される。
実施例１： ｍｉｎｉＡＢＣ４遺伝子構築物ＭＧ－１～ＭＧ－６
本実施例は、光受容体において機能（例えば、部分的なＡＢＣＡ４機能）を保持するＡＢＣＡ４の１またはこれより多くのドメイン（例えば、ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子およびその遺伝子生成物、「ＭｉｎｉＡＢＣＡ４」）を有するＡＡＶベクター（およびｒＡＡＶ）の同定および生成を記載する。ｍｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質の発現および安定性を、培養したＨＥＫ２９３細胞におけるタンパク質のＭＹＣタグ付きバージョンとしてそれらを発現させることによって試験する。最適な発現および安定性を示すバージョンを、インビボでＡｂｃａ４－／－ マウスへと注射する。ウイルス粒子を偽型化し（例えば、ＡＡＶ２／８）、発現を、光受容体を主に標的化するプロモーターによって駆動する。ＭｉｎｉＡＢＣＡ４構築物を、網膜下注射を使用して投与する。図１および配列番号３～８は、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４構築物ＭＧ－１～ＭＧ－６の実施形態を示す。配列番号９～１４は、ＭＧ－１～ＭＧ－６のＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質の実施形態を示す。
本実施例は、光受容体において機能（例えば、部分的なＡＢＣＡ４機能）を保持するＡＢＣＡ４の１またはこれより多くのドメイン（例えば、ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子およびその遺伝子生成物、「ＭｉｎｉＡＢＣＡ４」）を有するＡＡＶベクター（およびｒＡＡＶ）の同定および生成を記載する。ｍｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質の発現および安定性を、培養したＨＥＫ２９３細胞におけるタンパク質のＭＹＣタグ付きバージョンとしてそれらを発現させることによって試験する。最適な発現および安定性を示すバージョンを、インビボでＡｂｃａ４－／－ マウスへと注射する。ウイルス粒子を偽型化し（例えば、ＡＡＶ２／８）、発現を、光受容体を主に標的化するプロモーターによって駆動する。ＭｉｎｉＡＢＣＡ４構築物を、網膜下注射を使用して投与する。図１および配列番号３～８は、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４構築物ＭＧ－１～ＭＧ－６の実施形態を示す。配列番号９～１４は、ＭＧ－１～ＭＧ－６のＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質の実施形態を示す。
網膜色素上皮（ＲＰＥ）バックグラウンド自家蛍光の低減を、ｍｉｎｉＡＢＣＡ４候補の有効性を試験するために代理アッセイとして使用した。Ａｂｃａ４－／－ マウスに、生後３０日でＡｂｃａ４－１（ＭＧ－１）構築物を注射し、ＲＰＥ自家蛍光を、蛍光顕微鏡法によって測定した。そのＲＰＥ細胞を、マーカーＺＯ－１で染色した。代表的なデータを図２に示す。野生型コントロールと比較した場合、上記Ａｂｃａ４－／－ マウスは、４ヶ月齢で４８８ｎＭ 波長においてより高いＲＰＥ自家蛍光を示した。ｍｉｎｉＡＢＣＡ４－１の注射は、４８８ｎＭ 波長において自家蛍光の有意な減少を生じた。これは、ｍｉｎｉＡＢＣＡ４－１が影響をレスキューしたことを示す。
他のＡＢＣＡ４ミニ遺伝子構築物を、ＲＰＥ自家蛍光アッセイを使用して試験し、その結果を図３において定量化した。Ａｂｃａ４－／－ マウスに、ｍｉｎｉＡＢＣＡ４－１（ＭＧ－１）、ｍｉｎｉＡＢＣＡ４－２（ＭＧ－２）、ｍｉｎｉＡＢＣＡ４－４（ＭＧ－４）、またはｍｉｎｉＡＢＣＡ４－５（ＭＧ－５）を注射した。その注射を、生後１０日または生後３０日（Ｐ１０またはＰ３０）のいずれかで行い、ＲＰＥ自家蛍光を、グラフ上に示した年齢時に測定した。データは、いくつかのｍｉｎｉＡＢＣＡ４構築物が、注射を受けなかったＡｂｃａ４－／－ マウスと比較して、ＲＰＥ自家蛍光を有意に低減し、Ｐ３０での注射が、Ｐ１０での注射と比較して、ＲＰＥ自家蛍光のより良好な改善を生じたことを示す。
実施例２： ｍｉｎｉＡＢＣ４遺伝子構築物ＭＧ－７～ＭＧ－１１
本実施例は、さらなるＡＢＣＡ４ミニ遺伝子設計（ＭＧ－７～ＭＧ－１１といわれる）、およびこれらＡＢＣＡ４ミニ遺伝子を発現するＡＡＶベクター（およびｒＡＡＶ）の生成を記載する。ｍｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質の発現および安定性を、培養したＨＥＫ２９３細胞におけるタンパク質のＭＹＣタグ付きバージョンとしてそれらを発現させることによって試験した（図５）。チューブリンを、ローディングコントロールとして使用した。図４および配列番号１５～１９は、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４構築物ＭＧ－７～ＭＧ－１１の実施形態を示す。配列番号２０～２４は、ＭＧ－７～ＭＧ－１１のＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質の実施形態を示す。
本実施例は、さらなるＡＢＣＡ４ミニ遺伝子設計（ＭＧ－７～ＭＧ－１１といわれる）、およびこれらＡＢＣＡ４ミニ遺伝子を発現するＡＡＶベクター（およびｒＡＡＶ）の生成を記載する。ｍｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質の発現および安定性を、培養したＨＥＫ２９３細胞におけるタンパク質のＭＹＣタグ付きバージョンとしてそれらを発現させることによって試験した（図５）。チューブリンを、ローディングコントロールとして使用した。図４および配列番号１５～１９は、ＭｉｎｉＡＢＣＡ４構築物ＭＧ－７～ＭＧ－１１の実施形態を示す。配列番号２０～２４は、ＭＧ－７～ＭＧ－１１のＭｉｎｉＡＢＣＡ４タンパク質の実施形態を示す。
配列
いくつかの実施形態において、本開示によって記載される単離された核酸またはベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される単離された核酸またはベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列に相補的（例えば、その相補体）である配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される単離された核酸またはベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列の逆相補体（ｒｅｖｅｒｓｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）である配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される単離された核酸またはベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列の一部を含むかまたはそれからなる。一部は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列のうちの少なくとも２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％を含み得る。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される核酸配列は、核酸センス鎖（例えば、５’→３’鎖）であるか、またはウイルス配列の文脈では、プラス（＋）鎖である。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される核酸配列は、核酸アンチセンス鎖（例えば、３’→５’鎖）であるか、またはウイルス配列の文脈では、マイナス（－）鎖である。
いくつかの実施形態において、本開示によって記載される単離された核酸またはベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される単離された核酸またはベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列に相補的（例えば、その相補体）である配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される単離された核酸またはベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列の逆相補体（ｒｅｖｅｒｓｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）である配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される単離された核酸またはベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列の一部を含むかまたはそれからなる。一部は、配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列のうちの少なくとも２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％を含み得る。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される核酸配列は、核酸センス鎖（例えば、５’→３’鎖）であるか、またはウイルス配列の文脈では、プラス（＋）鎖である。いくつかの実施形態において、本開示によって記載される核酸配列は、核酸アンチセンス鎖（例えば、３’→５’鎖）であるか、またはウイルス配列の文脈では、マイナス（－）鎖である。
均等物
いくつかの本発明の実施形態が、本明細書で記載および例証されてきたが、当業者は、その機能を果たすならびに／または結果および／もしくは本明細書で記載される利点のうちの１もしくはこれより多くを得るために、種々の他の手段および／または構造を容易に想定し、このようなバリエーションおよび／または改変の各々は、本発明の範囲内であるとみなされる。より一般的には、当業者は、本明細書で記載される全てのパラメーター、寸法、材料、および構成は例示であることが意味され、実際のパラメーター、寸法、材料、および／または構成は、本発明の教示が使用される具体的適用に依存することを容易に認識する。当業者は、慣用的な実験のみを使用して、本明細書で記載される具体的な発明の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または確認し得る。従って、前述の実施形態が、例示によって示されるに過ぎず、添付の特許請求の範囲およびその均等物の範囲内で、本発明が、具体的に記載され、特許請求されるとおり以外の別の方法で実施され得ることは、理解されるべきである。本発明は、本明細書で記載される各個々の特徴、システム、物品、材料、および／または方法に関する。さらに、２またはこれより多くのこのような特徴、システム、物品、材料、および／または方法の任意の組み合わせは、このような特徴、システム、物品、材料、および／または方法が互いに矛盾しなければ、本発明の範囲内に含まれる。
いくつかの本発明の実施形態が、本明細書で記載および例証されてきたが、当業者は、その機能を果たすならびに／または結果および／もしくは本明細書で記載される利点のうちの１もしくはこれより多くを得るために、種々の他の手段および／または構造を容易に想定し、このようなバリエーションおよび／または改変の各々は、本発明の範囲内であるとみなされる。より一般的には、当業者は、本明細書で記載される全てのパラメーター、寸法、材料、および構成は例示であることが意味され、実際のパラメーター、寸法、材料、および／または構成は、本発明の教示が使用される具体的適用に依存することを容易に認識する。当業者は、慣用的な実験のみを使用して、本明細書で記載される具体的な発明の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または確認し得る。従って、前述の実施形態が、例示によって示されるに過ぎず、添付の特許請求の範囲およびその均等物の範囲内で、本発明が、具体的に記載され、特許請求されるとおり以外の別の方法で実施され得ることは、理解されるべきである。本発明は、本明細書で記載される各個々の特徴、システム、物品、材料、および／または方法に関する。さらに、２またはこれより多くのこのような特徴、システム、物品、材料、および／または方法の任意の組み合わせは、このような特徴、システム、物品、材料、および／または方法が互いに矛盾しなければ、本発明の範囲内に含まれる。
不定冠詞「１つの、ある（ａ）」および「１つの、ある（ａｎ）」は、本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、明らかに逆に示されなければ、「少なくとも１（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」を意味することが理解されるべきである。
語句「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」は、本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、そのように結合された要素の「いずれかまたは両方（ｅｉｔｈｅｒ ｏｒ ｂｏｔｈ）」、すなわち、いくらかの場合には接続的に示され、他の場合には離節的に示される要素を意味することが理解されるべきである。他の要素は、「および／または」の文節によって具体的に特定される要素以外に、それらの具体的に特定される要素に関連しようが関連しまいが、明確に逆に示されなければ、必要に応じて存在し得る。従って、非限定的な例として、「Ａおよび／またはＢ」への言及は、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような制限のない文言とともに使用される場合、１つの実施形態では、ＢなしでＡ（必要に応じて、Ｂ以外の要素を含む）に；別の実施形態では、ＡなしでＢ（必要に応じて、Ａ以外の要素を含む）に；さらに別の実施形態では、ＡおよびＢの両方（必要に応じて、他の要素を含む）に；他に言及し得る。
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、「または（ｏｒ）」は、上記で定義されるとおりの「および／または」と同じ意味を有することが理解されるべきである。例えば、リストの中の項目を分離する場合、「または」または「および／または」は、包括的、すなわち、多くの要素または要素のリスト、および必要に応じて、さらなる列挙されない項目のうちの少なくとも１を含むが、１より多くをも含むとして解釈されるものとする。「のうちの１つのみ（ｏｎｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」もしくは「のうちの正確に１つ（ｅｘａｃｔｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」、または特許請求の範囲の中で使用される場合、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」のような、逆を明らかに示す用語のみが、多くの要素または要素のリストのうちの正確に１つの要素を含むことに言及する。概して、用語「または」は、本明細書で使用される場合、「いずれか（ｅｉｔｈｅｒ）」、「のうちの１つ（ｏｎｅ ｏｆ）」、」「のうちの１つのみ」または「のうちの正確に１つ」のような排他性の用語が先立つ場合、排他的な代替物（すなわち、「一方または他方であるが、両方ではない（ｏｎｅ ｏｒ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｂｕｔ ｎｏｔ ｂｏｔｈ）」）を示すとして解釈されるに過ぎないものとする。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、特許請求の範囲の中で使用される場合、特許法の分野で使用されるとおりのその通常の意味を有するものとする。
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、語句「少なくとも１」は、１またはこれより多くの要素のリストに言及して、要素のリストの中の要素のうちのいずれか１つまたはこれより多くから選択される少なくとも１つの要素を意味するが、要素のリスト内に具体的に列挙される各々および全ての要素のうちの少なくとも１つを必ずしも含むわけではなく、要素のリストの中の要素の任意の組み合わせを排除しないことを意味することが理解されるべきである。この定義はまた、語句「少なくとも１」が言及する要素のリスト内で具体的に特定される要素以外の要素が、それら具体的に特定される要素に関連しようが関連しまいが、必要に応じて存在し得ることを可能にする。従って、非限定的な例として、「ＡおよびＢのうちの少なくとも１つ」（または等しくは、「ＡまたはＢのうちの少なくとも１つ」、または等しくは、「Ａおよび／またはＢのうちの少なくとも１つ」）は、１つの実施形態において、少なくとも１つの（必要に応じて、１より多くを含む）Ａ、Ｂは存在しない（および必要に応じて、Ｂ以外の要素を含む）に；別の実施形態において、少なくとも１つの（必要に応じて、１より多くを含む）Ｂ、Ａは存在しない（および必要に応じて、Ａ以外の要素を含む）に；さらに別の実施形態において、少なくとも１つの（必要に応じて、１より多くを含む）Ａおよび少なくとも１つの（必要に応じて、１より多くを含む）Ｂ（必要に応じて、他の要素を含む）に；他に言及し得る。
特許請求の範囲、および上記の明細書において、全ての移行句（例えば、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「包含する、関わる（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「保持する（ｈｏｌｄｉｎｇ）」、など）は、制限がない、すなわち、が挙げられるが、これらに限定されない、を意味すると理解されるべきである。移行句「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」のみが、それぞれ、米国特許商標庁の特許審査基準、セクション２１１１．０３に示されるとおり、制限のまたは半制限の移行句であるものとする。
「第１の（ｆｉｒｓｔ）」、「第２の（ｓｅｃｏｎｄ）」、「第３の（ｔｈｉｒｄ）」などのような序数を示す用語の使用は、請求項の要素を改変するために特許請求の範囲において、それだけで、１の要素または方法の行為が行われる時間的な順序に対して、別の請求項の要素のいかなる優先順位、先立つこと、または順序をも暗示しないが、ある特定の名称を有する１つの請求項の要素を、（その序数を示す用語の使用を除いて）同じ名称を有する別の請求項の要素から区別して、その請求項の要素を区別するために、表示として使用されるに過ぎない。
数値の前にある用語「約（ａｂｏｕｔ）」および「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、その記載される数値の±１０％を表す。
Claims (31)
- 配列番号３～８および１５～１９のうちのいずれか１つに示される配列を有するＡＢＣＡ４ミニ遺伝子をコードする導入遺伝子を含む、単離された核酸。
- 前記導入遺伝子は、前記ＡＢＣＡ４ミニ遺伝子配列に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項１に記載の単離された核酸。
- 前記プロモーターは、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターであり、必要に応じて、ここで前記組織特異的プロモーターは、光受容体特異的プロモーターである、請求項２に記載の単離された核酸。
- 前記導入遺伝子は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）によって隣接される、請求項１～３のいずれか１項に記載の単離された核酸。
- 前記ＩＴＲのうちの少なくとも一つは、ＡＡＶ２ ＩＴＲである、請求項４に記載の単離された核酸。
- 少なくとも一つのＩＴＲは、末端分離部位を欠き、必要に応じてここで前記ＩＴＲは、ΔＩＴＲである、請求項４または５に記載の単離された核酸。
- ＡＢＣＡ４タンパク質をコードする核酸配列を有する導入遺伝子を含む単離された核酸であって、ここで前記ＡＢＣＡ４タンパク質は、配列番号９～１４および２０～２４のうちのいずれか１つに示されるとおりのアミノ酸配列を含む、単離された核酸。
- 前記導入遺伝子は、前記ＡＢＣＡ４タンパク質をコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項７に記載の単離された核酸。
- 前記プロモーターは、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターであり、必要に応じてここで前記組織特異的プロモーターは、光受容体特異的プロモーターである、請求項８に記載の単離された核酸。
- 前記導入遺伝子は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）によって隣接される、請求項７～９のいずれか１項に記載の単離された核酸。
- 前記ＩＴＲのうちの少なくとも一つは、ＡＡＶ２ ＩＴＲである、請求項１０に記載の単離された核酸。
- 少なくとも一つのＩＴＲは、末端分離部位を欠き、必要に応じてここで前記ＩＴＲは、ΔＩＴＲである、請求項１０または１１に記載の単離された核酸。
- 請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離された核酸を含むベクター。
- 前記ベクターは、プラスミドＤＮＡ、または末端が閉じたＤＮＡ、または脂質／ＤＮＡナノ粒子、またはウイルスベクターである、請求項１３に記載のベクター。
- 前記ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルス（Ａｄ）ベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、またはバキュロウイルスベクターである、請求項１４に記載のベクター。
- 請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離された核酸、または請求項１３～１５のいずれか１項に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 前記細胞は、哺乳動物（ヒト）細胞、細菌細胞、酵母細胞、または昆虫細胞である、請求項１６に記載の宿主細胞。
- 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）であって、
（ｉ）請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離された核酸；および
（ｉｉ）ＡＡＶカプシドタンパク質、
を含むｒＡＡＶ。 - 前記カプシドタンパク質は、眼の細胞に対する向性を有する、請求項１８に記載のｒＡＡＶ。
- 前記カプシドタンパク質は、ＡＡＶ８カプシドタンパク質である、請求項１８または１９に記載のｒＡＡＶ。
- 前記ｒＡＡＶは、眼への送達のために製剤化され、必要に応じてここで前記ｒＡＡＶは、光受容細胞または網膜色素上皮（ＲＰＥ）への送達のために製剤化される、請求項１８～２０のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
- 請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離された核酸、または請求項１８～２１のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、組成物。
- 細胞に導入遺伝子を送達するための方法であって、前記方法は、請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離された核酸、または請求項１８～２１のいずれか１項に記載のｒＡＡＶを細胞に投与する工程を包含する、方法。
- 前記細胞は、被験体、必要に応じて哺乳動物（ヒト）被験体の中にある、請求項２３に記載の方法。
- 前記細胞は、眼の細胞である、請求項２３または２４に記載の方法。
- 前記眼の細胞は、光受容細胞または網膜色素上皮（ＲＰＥ）である、請求項２５に記載の方法。
- シュタルガルト病の処置を必要とする被験体においてシュタルガルト病を処置するための方法であって、前記方法は、請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離された核酸、または請求項１８～２１のいずれか１項に記載のｒＡＡＶを前記被験体に投与する工程を包含する、方法。
- 前記被験体は、哺乳動物であり、必要に応じてここで前記被験体は、ヒトである、請求項２７に記載の方法。
- 前記被験体は、ＡＢＣＡ４遺伝子において１またはこれより多くの変異を有することによって特徴づけられる、請求項２７または２８に記載の方法。
- 前記投与は、注射、必要に応じて網膜下注射または硝子体内注射または上脈絡膜注射を介するものである、請求項２７～２９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記投与は、前記被験体の眼への局所投与である、請求項２７～２９のいずれか１項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201962836493P | 2019-04-19 | 2019-04-19 | |
| US62/836,493 | 2019-04-19 | ||
| PCT/US2020/028504 WO2020214809A2 (en) | 2019-04-19 | 2020-04-16 | Gene therapies for stargardt disease (abca4) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2022529782A true JP2022529782A (ja) | 2022-06-24 |
| JPWO2020214809A5 JPWO2020214809A5 (ja) | 2023-04-25 |
Family
ID=72838359
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021562000A Pending JP2022529782A (ja) | 2019-04-19 | 2020-04-16 | シュタルガルト病（ａｂｃａ４）の遺伝子治療 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220177539A1 (ja) |
| EP (1) | EP3955973A4 (ja) |
| JP (1) | JP2022529782A (ja) |
| CN (1) | CN114126665A (ja) |
| AU (1) | AU2020257392A1 (ja) |
| CA (1) | CA3137135A1 (ja) |
| WO (1) | WO2020214809A2 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW202124722A (zh) | 2019-09-18 | 2021-07-01 | 美商英特佳樂帝克醫療公司 | 合成dna載體及其使用方法 |
| JP2023535632A (ja) | 2020-07-27 | 2023-08-18 | アンジャリウム バイオサイエンシズ エージー | Ｄｎａ分子の組成物、その作製方法、及びその使用方法 |
| CA3205822A1 (en) * | 2021-01-22 | 2022-07-28 | Marcelo M. NOCIARI | Compositions and methods for the identification of compounds that protect against lipofuscin cytotoxicity |
| CA3211687A1 (en) * | 2021-03-19 | 2022-09-22 | Ozan ALKAN | Non-viral dna vectors and uses thereof for expressing pfic therapeutics |
| EP4330409A1 (en) * | 2021-04-26 | 2024-03-06 | University of Massachusetts | Gene therapies for stargardt disease (abca4) |
| CA3218195A1 (en) * | 2021-05-07 | 2022-11-10 | Robin Ali | Abca4 genome editing |
| CN115074369B (zh) * | 2022-06-24 | 2023-10-20 | 成都金唯科生物科技有限公司 | 表达全长abca4基因的腺相关病毒载体及应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7943374B2 (en) * | 2005-08-21 | 2011-05-17 | Markus Hildinger | Super-size adeno-associated viral vector harboring a recombinant genome larger than 5.7 kb |
| US20110172107A1 (en) * | 2008-04-30 | 2011-07-14 | Fox Chase Cancer Center | Assay for identifying agents that modulate epigenetic silencing, and agents identified thereby |
| CA2942776C (en) * | 2014-03-17 | 2023-01-24 | Adverum Biotechnologies, Inc. | Polyneucleotide cassette and expression vector for expression of a gene in cone cells using truncated m-opsin promoter |
| EP3555291A1 (en) * | 2016-12-13 | 2019-10-23 | Stichting Katholieke Universiteit | Antisense oligonucleotides for the treatment of stargardt disease |
-
2020
- 2020-04-16 EP EP20791568.7A patent/EP3955973A4/en active Pending
- 2020-04-16 AU AU2020257392A patent/AU2020257392A1/en active Pending
- 2020-04-16 US US17/604,556 patent/US20220177539A1/en active Pending
- 2020-04-16 JP JP2021562000A patent/JP2022529782A/ja active Pending
- 2020-04-16 CA CA3137135A patent/CA3137135A1/en active Pending
- 2020-04-16 CN CN202080044221.2A patent/CN114126665A/zh active Pending
- 2020-04-16 WO PCT/US2020/028504 patent/WO2020214809A2/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3955973A2 (en) | 2022-02-23 |
| WO2020214809A2 (en) | 2020-10-22 |
| WO2020214809A3 (en) | 2020-11-19 |
| CN114126665A (zh) | 2022-03-01 |
| CA3137135A1 (en) | 2020-10-22 |
| US20220177539A1 (en) | 2022-06-09 |
| AU2020257392A1 (en) | 2021-11-18 |
| EP3955973A4 (en) | 2023-01-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2022529782A (ja) | シュタルガルト病（ａｂｃａ４）の遺伝子治療 | |
| US20180214576A1 (en) | Transgenic expression of dnasei in vivo delivered by an adeno-associated virus vector | |
| ES2836258T3 (es) | Construcciones de vectores virales adenoasociados de GLUT1 recombinante y métodos relacionados para restaurar la expresión de GLUT1 | |
| CN110709095B (zh) | 小基因治疗 | |
| KR20160026841A (ko) | 스터퍼/필러 폴리누클레오티드 서열을 포함하는 벡터 및 사용 방법 | |
| JP2022084594A (ja) | 緑内障における神経保護療法としてのｓＦａｓＬのＡＡＶ２媒介遺伝子送達 | |
| US20220202959A1 (en) | Gene therapies for usher syndrome (ush2a) | |
| JP2020535804A (ja) | Ｓｏｄ１二重発現ベクターおよびその使用 | |
| US20220175967A1 (en) | Gene therapies for usher syndrome (ush1b) | |
| US20220162641A1 (en) | Factor h vectors and uses thereof | |
| JP2022528010A (ja) | メープルシロップ尿症（ｍｓｕｄ）のａａｖ媒介遺伝子治療 | |
| JP2021520811A (ja) | ヘキソサミニダーゼアルファおよびベータサブユニットをコードしているバイシストロニックａａｖベクターならびにその使用 | |
| JP2024515974A (ja) | シュタルガルト病（ａｂｃａ４）の遺伝子治療 | |
| WO2022232002A1 (en) | Aav encoding hermansky-pudlak syndrome 1 (hps1) protein and uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230414 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230414 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240314 |