JP2022527293A - 複数の呼吸器ウイルス抗原に特異的なｔ細胞及びその作製方法及び治療での使用方法 - Google Patents

Abstract

本開示の実施形態は、複数の呼吸器ウイルスに特異的なＴ細胞株及びそれを使用してウイルス感染を処置及び予防する方法に関する。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願の相互参照

本願は、２０１９年３月２５日出願の米国仮出願第６２／８２３，４４６号明細書の優先権を主張し、この出願は、その全体において参照により本明細書中に組み込まれる。

本開示の実施形態は、少なくとも細胞生物学、分子生物学、免疫学及び医学の分野に関する。

ウイルス感染は、様々な障害に対する治療選択肢である同種間造血幹細胞移植（アロ－ＨＳＣＴ）後の病的状態及び死亡の深刻な原因である。しかし、移植後、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、原発性疾患の再発及びウイルス感染が依然として病的状態及び死亡の主な原因となっている。呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ、パラインフルエンザウイルス及びヒトメタニューモウイルスを含む、市中感染する呼吸器ウイルスによる気道感染は、肺炎及び細気管支炎を含む重度の症状を引き起こし、同種異系造血幹細胞移植レシピエントの最大４０％で検出され、致死的となり得る。アデノウイルス（ＡｄＶ）、ライノウイルス及び、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶを含むコロナウイルス株を含む他の呼吸器ウイルス並びに一般に免疫無防備状態の患者が罹患する流行性ＣｏＶもまた、特に免疫無防備状態の個体において重度の症状を引き起こし得、最近のＳＡＲＳ－ＣｏＶ２パンデミックは、このような感染を処置及び予防するために我々がいかに準備不足であるかを明らかにした。有効な抗ウイルス薬がないこと、及び養子移入されたエクスビボ増殖ウイルス特異的Ｔ細胞が潜在性（エプスタイン・バー・ウイルス、サイトメガロウイルス、ＢＫウイルス、ヒトヘルペスウイルス６）及び溶菌性（アデノウイルス）ウイルスの両方の処置に臨床的に有益であり得ることを実証する発明者らのグループからのデータを考慮して、発明者らは、この免疫療法アプローチを呼吸器ウイルスに拡張する可能性を調べた。抗ウイルス薬は、一部のウイルスには利用可能であるが、必ずしも有効ではなく、新規治療の必要性が強調される。これらのウイルス感染症を処置するための１つの戦略は、養子Ｔ細胞移入によるものであり、それにより、ウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）を、エクスビボで健康なドナーの末梢血から増殖させ、次いで、ウイルス感染がある個体、例えば幹細胞移植レシピエントに注入する。

Ａｄｖ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＢＫ、ＨＨＶ６を標的とするインビトロで増殖させたドナー由来及び第三者のウイルス特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染が起こっている幹細胞移植患者に養子移入した場合に安全であることが示されている。ウイルス特異的Ｔ細胞は、Ａｄｖ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＢＫ及びＨＨＶ６に対する抗ウイルス免疫を再構成し、疾患の排除に有効であり、インビボでかなりの増殖を示した。養子移入されたインビトロ増殖ウイルス特異的Ｔ細胞はまた、患者に養子移入された場合に安全であり、臨床的利益を伴うことが示されている。

本開示の実施形態は、ウイルス感染を制御し、１つ以上の疾患症状を改善／排除するために、エクスビボ増殖させた非遺伝子改変ウイルス特異的Ｔ細胞を投与することによる特定のウイルスに対する治療を提供することによって、当技術分野における長年の必要性を満たす。

いくつかの実施形態では、本開示は、複数のウイルス抗原を認識するウイルス特異的Ｔリンパ球（ＶＳＴ）のポリクローナル集団を含む組成物を提供し、この複数のウイルス抗原は、ＰＩＶ由来の少なくとも１つの第１の抗原と、１つ以上の第２のウイルス由来の少なくとも１つの第２の抗原と、を含む。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を複数のペプミックスライブラリと接触させることによって作製され、各ペプミックスライブラリは、ウイルス抗原の少なくとも一部にまたがる複数の重複ペプチドを含有し、複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つは、ＰＩＶ－３由来の第１の抗原にまたがり、複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つのさらなるペプミックスライブラリは、各第２の抗原にまたがる。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、Ｔ細胞を複数のペプミックスライブラリで刺激した樹状細胞（ＤＣ）と接触させることによって作製され、各ペプミックスライブラリは、ウイルス抗原の少なくとも一部にまたがる複数の重複ペプチドを含有し、複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つは、ＰＩＶ－３由来の第１の抗原にまたがり、複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つのさらなるペプミックスライブラリは、各第２の抗原にまたがる。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、ＰＩＶ－３抗原をコードする少なくとも１つのＤＮＡプラスミド及び各第２の抗原をコードする少なくとも１つのＤＮＡプラスミドでヌクレオフェクトされた樹状細胞（ＤＣ）とＴ細胞を接触させることによって作製される。いくつかの実施形態では、プラスミドは、少なくとも１つのＰＩＶ－３抗原及び少なくとも１つの第２の抗原をコードする。いくつかの実施形態では、ＶＳＴはＣＤ４＋Ｔリンパ球及びＣＤ８＋Ｔリンパ球を含む。いくつかの実施形態では、ＶＳＴはαβＴ細胞受容体を発現する。いくつかの実施形態では、ＶＳＴはＭＨＣ拘束性Ｔリンパ球を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のウイルスは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ、ヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のウイルスは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ、ヒトメタニューモウイルス及びそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のウイルスは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ、ヒトメタニューモウイルス及びそれらの組み合わせからなる。いくつかの実施形態では、本組成物は、１、２、３又は４つの第１の抗原を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＰＩＶ－３抗原Ｍ、ＰＩＶ－３抗原ＨＮ、ＰＩＶ－３抗原Ｎ、ＰＩＶ－３抗原Ｆ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、４つの第１の抗原は以下の通りである：ＰＩＶ－３抗原Ｍ、ＰＩＶ－３抗原ＨＮ、ＰＩＶ－３抗原Ｎ及びＰＩＶ－３抗原Ｆ。いくつかの実施形態では、本組成物は、２又は３つの第２のウイルスを含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、３つの第２のウイルスを含む。いくつかの実施形態では、この３つの第２のウイルスは、インフルエンザ、ＲＳＶ及びｈＭＰＶである。いくつかの実施形態では、本組成物は、各第２のウイルスあたり少なくとも２つの第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、１、２、３、４、５、６、７又は８個の第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｎ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１又は両方を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ又はその両方を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｎ及びそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｎのそれぞれを含む。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、ＰＩＶ－３抗原Ｍ、ＰＩＶ－３抗原ＨＮ、ＰＩＶ－３抗原Ｎ、ＰＩＶ－３抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎを含む。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、ＰＩＶ－３抗原Ｍ、ＰＩＶ－３抗原ＨＮ、ＰＩＶ－３抗原Ｎ、ＰＩＶ－３抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎからなるか又は基本的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、ＩＬ－７及びＩＬ－４の両方の存在下でエクスビボで培養される。いくつかの実施形態では、複数ウイルスＶＳＴは、対象への投与のための準備ができるように、培養の９～１８日以内に十分に増殖している。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、（ａ）無視できるアロ反応性；（ｂ）対象から回収された抗原特異的Ｔ細胞の活性化誘導細胞死が、同じ対象から回収されたがＩＬ－７及びＩＬ－４の両方の存在下で培養されなかった対応する抗原特異的Ｔ細胞よりも少ないこと；及び（ｃ）７０％を超える生存率から選択される１つ以上の特性を示す。いくつかの実施形態では、本組成物は、培養下で少なくとも７日間、細菌及び真菌に対して陰性であり；５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示し、マイコプラズマについて陰性である。いくつかの実施形態では、ペプミックスは化学合成されたものであり、任意選択的に＞９０％の純度である。いくつかの実施形態では、ＶＳＴはＴｈ１極性化されている。いくつかの実施形態では、ＶＳＴはウイルス抗原発現標的細胞を溶解することが可能である。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、非感染自己又は同種異系標的細胞を顕著に溶解させない。

本開示はまた、静脈内送達用に処方された、本明細書中で開示される組成物の何れか１つを含む医薬組成物を提供し、この組成物は、培養下で少なくとも７日間細菌及び真菌に対して陰性であり；５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示し、マイコプラズマについて陰性である。例えばいくつかの実施形態では、本開示は、複数のウイルス抗原を認識するウイルス特異的Ｔリンパ球（ＶＳＴ）のポリクローナル集団を含む医薬組成物を提供し、この複数のウイルス抗原は、ＰＩＶ由来の少なくとも１つの第１の抗原と、１つ以上の第２のウイルス由来の少なくとも１つの第２の抗原と、を含む。いくつかの実施形態では、第２のウイルスは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスを含む。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を複数のペプミックスライブラリと接触させることによって作製され、各ペプミックスライブラリは、ウイルス抗原の少なくとも一部にまたがる複数の重複ペプチドを含有し、複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つはＰＩＶ－３由来の第１の抗原にまたがり、複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つのさらなるペプミックスライブラリは各第２の抗原にまたがり、医薬組成物は静脈内送達用に処方され、この組成物は培養下で少なくとも７日間細菌及び真菌に対して陰性であり；５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示し、マイコプラズマについて陰性である。

本開示はまた、本明細書中で開示される組成物又は医薬組成物の何れか１つ以上で標的細胞を溶解させる方法も提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、複数のウイルス抗原を認識するウイルス特異的Ｔリンパ球（ＶＳＴ）のポリクローナル集団と標的細胞を接触させることを含む、標的細胞を溶解させる方法を提供し、複数のウイルス抗原は、ＰＩＶ由来の少なくとも１つの第１の抗原と、１つ以上の第２のウイルス由来の少なくとも１つの第２の抗原と、を含む。いくつかの実施形態では、第２のウイルスは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスを含む。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を複数のペプミックスライブラリと接触させることによって作製され、各ペプミックスライブラリは、ウイルス抗原の少なくとも一部にまたがる複数の重複ペプチドを含有し、複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つは、ＰＩＶ－３由来の第１の抗原にまたがり、複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つのさらなるペプミックスライブラリは、各第２の抗原にまたがる。いくつかの実施形態では、接触は、対象においてインビボで行われる。いくつかの実施形態では、接触は、対象へのＶＳＴの投与を介してインビボで行われる。

本開示はまた、ウイルス感染の処置又は予防を必要とする対象に、本明細書中で開示される組成物又は医薬組成物の何れか１つ以上を投与することを含む、ウイルス感染を処置又は予防する方法を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、ウイルス感染の処置又は予防を必要とする対象に、複数のウイルス抗原を認識するウイルス特異的Ｔリンパ球（ＶＳＴ）のポリクローナル集団を投与することを含み、この複数のウイルス抗原が、ＰＩＶ由来の少なくとも１つの第１の抗原と、１つ以上の第２のウイルス由来の少なくとも１つの第２の抗原と、を含む、ウイルス感染を処置又は予防する方法を提供する。いくつかの実施形態では、第２のウイルスは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスを含む。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を複数のペプミックスライブラリと接触させることによって作製され、各ペプミックスライブラリは、ウイルス抗原の少なくとも一部にまたがる複数の重複ペプチドを含有し、複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つは、ＰＩＶ－３由来の第１の抗原にまたがり、複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つのさらなるペプミックスライブラリは、各第２の抗原にまたがる。いくつかの実施形態では、対象にＶＳＴ ５ｘ１０^６～５ｘ１０^７個／ｍ^２を投与する。いくつかの実施形態では、対象にＶＳＴを複数回投与する。一実施形態では、対象にＶＳＴを投与し、次いで対象のウイルス量を監視し、ウイルス量が増加する場合、対象にＶＳＴの２回目の投与を行う。いくつかの実施形態では、対象は免疫無防備状態である。いくつかの実施形態では、対象は急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病又は慢性肉芽腫性疾患を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ＶＳＴを受ける前に、（ａ）強度軽減前処置を伴う適合血縁ドナー移植；（ｂ）骨髄破壊的前処置を伴う適合非血縁ドナー移植；（ｃ）強度軽減前処置を伴うハプロ一致移植；又は（ｄ）骨髄破壊的前処置を伴う適合血縁ドナー移植を受けた。いくつかの実施形態では、対象は、（ａ）固形臓器移植を受けたことがある；（ｂ）化学療法を受けたことがある；（ｃ）ＨＩＶ感染を有する；（ｄ）遺伝的免疫不全を有する；及び／又は（ｅ）同種異系幹細胞移植を受けたことがある。いくつかの実施形態では、本組成物は、対象に複数回投与される。いくつかの実施形態では、本組成物の投与は、対象におけるウイルス感染を効果的に処置又は予防し、ウイルス感染症は、パラインフルエンザウイルス３型、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ、ヒトメタニューモウイルス及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

本開示はまた、複数のウイルス抗原を認識するＶＳＴのポリクローナル集団を含む組成物を提供し、この複数のウイルス抗原は、パラインフルエンザウイルス３型（ＰＩＶ－３）、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ、ヒトメタニューモウイルス及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの抗原を含む。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、複数のウイルス抗原を認識し、この複数のウイルス抗原は、パラインフルエンザウイルス３型、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスのそれぞれに由来する少なくとも１つの抗原を含む。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、複数のウイルス抗原を認識し、この複数のウイルス抗原は、パラインフルエンザウイルス３型、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスのそれぞれに由来する少なくとも２つの抗原を含む。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、ＰＩＶ－３抗原Ｍ、ＰＩＶ－３抗原ＨＮ、ＰＩＶ－３抗原Ｎ、ＰＩＶ－３抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎを含むか、それらからなるか又は基本的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、本組成物は、静脈内送達用に処方される医薬組成物である。いくつかの実施形態では、本組成物は、培養下で少なくとも７日間、細菌及び真菌に対して陰性であり；５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示し、マイコプラズマについて陰性である。

本開示はまた、複数のウイルス抗原を認識するＶＳＴのポリクローナル集団を含む組成物と標的細胞を接触させることを含み、この複数のウイルス抗原が、パラインフルエンザウイルス３型（ＰＩＶ－３）、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスから選択される少なくとも１つの抗原を含む、標的抗原を溶解させる方法も提供する。いくつかの実施形態では、本組成物は医薬組成物である。いくつかの実施形態では、接触は、対象においてインビボで行われる。いくつかの実施形態では、接触は、対象へのＶＳＴの投与を介してインビボで行われる。

本開示はまた、ウイルス感染症の処置又は予防を必要とする対象の細胞に、複数のウイルス抗原を認識するＶＳＴのポリクローナル集団を含む組成物を投与することを含み、この複数のウイルス抗原が、パラインフルエンザウイルス３型（ＰＩＶ－３）、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスから選択される少なくとも１つの抗原を含む、ウイルス感染症を処置又は予防する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本組成物は医薬組成物である。いくつかの実施形態では、本組成物は、対象に複数回投与される。いくつかの実施形態では、本組成物の投与は、対象におけるウイルス感染症を効果的に処置又は予防し、このウイルス感染は、パラインフルエンザウイルス３型、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

健康なドナーからのポリクローナルの複数呼吸器ウイルス特異的Ｔ細胞（マルチ－Ｒ－ＶＳＴ）の作製。図１Ａは、マルチＲ－ＶＳＴ作製プロトコールの概略図を示す。図１Ｂは、トリパンブルー排除を用いた細胞計数に基づく、１０日間にわたって達成された増殖倍率を示す（ｎ＝１２）。製造の実行は、約１０～１８日間の範囲であり得る。図１Ｃ及び図１Ｄは、増殖細胞の表現型を示す（平均±ＳＥＭ、ｎ＝１２）。図１Ｅは、増殖したＣＤ４＋Ｔ細胞集団内のＴｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋）の最小検出を示す（平均±ＳＥＭ、ｎ＝８）。

マルチＲ－ＶＳＴの特異性及び富化。図２Ａは、各標的ウイルス由来の個々の刺激抗原への曝露後の増殖Ｔ細胞株内のウイルス反応性Ｔ細胞の特異性を示す。データは、平均±ＳＥＭ ＳＦＣ／２ｘ１０^５（ｎ＝１２）として提示する。図２Ｂは、特異性の富化倍率を示す（ＰＢＭＣ対マルチＲ－ＶＳＴ；ｎ＝１２）。図２Ｃは、１人の代表的なドナーにおけるウイルス刺激後のＣＤ４ヘルパー（上）及びＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞（下）からのＩＣＳによって評価される場合の、ＩＦＮγ産生を示し（ドットプロットはＣＤ３＋細胞でゲーティングした）、一方、図２Ｄは、スクリーニングされた９名のドナーについての結果の要約を示す（平均±ＳＥＭ）。図２Ｅは、個々の刺激抗原に応答するドナー由来ＶＳＴ株の数を示す。図２Ｆは、各標的ウイルス由来のプールした刺激抗原の滴定濃度に曝露した後の、増殖Ｔ細胞株内のウイルス反応性Ｔ細胞の特異性を示す。データは、平均±ＳＥＭ ＳＦＣ／２ｘ１０^５（ｎ＝７）として提示する。図２Ｇは、各標的ウイルス由来の個々の刺激抗原への曝露後の、健康なドナーの末梢血中のＣＡＲＶ特異的Ｔ細胞の頻度を示す。データは、平均±ＳＥＭ ＳＦＣ／５ｘ１０^５（ｎ＝１２）として提示する。

マルチＲ－ＶＳＴはポリクローナル性であり、多機能性である。図３Ａは、１人の代表的なドナーにおけるＩＣＳによって評価される場合の、ＣＤ３＋Ｔ細胞からのＩＦＮγ及びＴＮＦαの二重産生を示し、一方、図３Ｂは、スクリーニングした９名のドナーからの結果の要約を示す（平均±ＳＥＭ）。図３Ｃは、マルチプレックスビーズアレイによって測定した場合の、マルチＲ－ＶＳＴのサイトカインプロファイルを示し、一方、図３Ｄは、ＥＬＩｓｐｏｔアッセイによってグランザイムＢの産生を評価する。結果をＳＦＣ／２ｘ１０^５投与量ＶＳＴとして報告する（平均±ＳＥＭ、ｎ＝９）。

マルチ－Ｒ－ＶＳＴはウイルス感染標的に対して反応性がある。図４Ａは、無負荷ＰＨＡ芽球を対照として用い、自己ペプミックスを適用したＰＨＡ芽球を標的として使用した（Ｅ：Ｔ ４０：１；ｎ＝８）、標準的な４時間Ｃｒ５１放出アッセイによって評価したマルチＲ－ＶＳＴの細胞溶解能を示す。結果は、特異的溶解のパーセンテージ（平均±ＳＥＭ）として示す。図４Ｂは、マルチ－Ｒ－ＶＳＴが示す活性が、Ｃｒ５１放出アッセイによって評価した場合に、非感染自己又は同種異系ＰＨＡ芽球の何れに対しても無視できるものであることを明らかにする。図４Ｃは、無負荷ＰＨＡ芽球を対照として用い、自己ペプミックスを適用したＰＨＡ芽球を標的として使用して（Ｅ：Ｔ ４０：１、２０：１、１０：１、５：１）、標準的な４時間Ｃｒ５１放出アッセイによって評価した、マルチＲ－ＶＳＴの細胞傷害性の活性を示す。結果は、特異的溶解のパーセンテージ（平均±ＳＥＭ、ｎ＝８）として示す。

ＨＳＣＴレシピエントの末梢血中の呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及びヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）特異的Ｔ細胞の検出。ＩＦＮγ ＥＬＩｓｐｏｔを読み出し情報として使用して、感染ウイルスに対する特異性について、３回感染した２名のＨＳＣＴレシピエントから単離したＰＢＭＣを試験した。図５Ａ及び図５Ｂは、内因性ＲＳＶ特異的Ｔ細胞の検出可能な増加と一致した、制御されたＲＳＶ関連ＵＲＴＩを有する２名の患者からの結果を示し、一方で図５Ｃは、内因性ｈＭＰＶ特異的Ｔ細胞の増殖とともに、ｈＭＰＶ－ＬＲＴＩのクリアランスを示す。ＡＬＣ：絶対リンパ球数。

ＨＳＣＴレシピエントの末梢血中のＲＳＶ及びパラインフルエンザ（ＰＩＶ－３）特異的Ｔ細胞の検出。ＩＦＮγ ＥＬＩｓｐｏｔを読み出情報しとして使用して、感染ウイルスに対する特異性について、３回感染した３名のＨＳＣＴレシピエントから単離したＰＢＭＣを試験した。図６Ａ及び図６Ｂは、内因性ウイルス特異的Ｔ細胞の検出可能な増加と一致した、制御されたＲＳＶ及びＰＩＶ関連ＵＲＴＩ並びにＬＲＴＩを有する２名の患者からの結果を示す。図６Ｃは、ウイルスに対するＴ細胞応答を開始することができなかった、進行中のＰＩＶ関連重度ＵＲＴＩを有する患者からの結果を示す。ＡＬＣ：絶対リンパ球数。

ＲＳＶゲノムの構造及び形態。

ＲＳＶ－ＶＳＴ作製プロトコールの概略図。

ＲＳＶ－ＶＳＴの特性評価。図９Ａは、トリパンブルー排除を用いた細胞計数に基づく、１０日間にわたって達成された増殖倍率を示す。図９Ｂ及び図９Ｃは、増殖した細胞の表現型を示す。

ＲＳＶ－ＶＳＴは多機能である。図１０Ａは、ＥｌｉＳｐｏｔアッセイによって評価した場合のＣＤ３＋Ｔ細胞からのＩＦＮγ産生を示す。図１０Ｂは、ＥＬＩｓｐｏｔアッセイによるグランザイムＢの産生を示す。結果はＳＦＣ／２ｘ１０^５投与量ＶＳＴとして報告する（平均±ＳＥＭ、ｎ＝９）。

マルチプレックスビーズアレイによって測定した場合のＲＳＶ－ＶＳＴのサイトカインプロファイル。

発明の詳細な説明

（定義）
本明細書で使用される場合、特許請求の範囲及び／又は明細書中で「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と組み合わせて使用される場合の「ａ」又は「ａｎ」という単語の使用は、「１つ」を意味し得るが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」及び「１つ又は複数」の意味とも一致する。本発明の一部の実施形態は、本発明の１つ以上の要素、方法段階及び／又は方法からなり得るか又は本質的にそれらからなり得る。本明細書中に記載のあらゆる方法又は組成物が本明細書中に記載のあらゆる他の方法又は組成物に関して実行され得ることが企図される。

数値の直前の「約」という用語は、数値の±０％～１０％、±０％～１０％、±０％～９％、±０％～８％、±０％～７％、±０％～６％、±０％～５％、±０％～４％、±０％～３％、±０％～２％、±０％～１％、±０％～１％未満、又はその中の値の何れかの他の値若しくは値の範囲を意味する。例えば、「約４０」は、４０の±０％～１０％（即ち３６～４４）を意味する。

特許請求の範囲における「又は」という用語の使用は、選択すべき状況のみを指すように明示的に示されない限り、又は選択肢が相互に排他的でない限り、「及び／又は」を意味するために使用されるが、本開示は、選択すべき状況のみ及び「及び／又は」を指す定義を支持する。

本明細書で使用される場合、「ウイルス抗原」という用語は、本質的にタンパク質性である抗原を指す。特定の実施形態では、ウイルス抗原はコートタンパク質である。ウイルス抗原の具体例としては、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＡｄＶ、ＢＫ、ＪＣウイルス、ＨＨＶ６、ＲＳＶ、インフルエンザ、パラインフルエンザ、ボカウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ＬＣＭＶ、流行性耳下腺炎、麻疹、ｈＭＰＶ、パルボウイルスＢ、ロタウイルス、メルケル細胞ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ＨＰＶ、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ１、ＨＨＶ８、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎、ＨＴＬＶ １、単純ヘルペスウイルス、ウエストナイルウイルス、ジカウイルス及びエボラから選択される少なくとも１つのウイルス由来の抗原が挙げられる。

「抗原特異的Ｔ細胞株」又は「ウイルス特異的Ｔ細胞」又は「ウイルス特異的Ｔ細胞株」という用語は、関心のある１つ又は複数のウイルスに対する特異性及び効力を有するポリクローナルＴ細胞株を指すために本明細書中で交換可能に使用される。本明細書中に記載のように、１つ又は複数のウイルス抗原は、末梢血単核細胞中のネイティブＴ細胞に提示され、ネイティブＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞集団は、前記ウイルス抗原に応答して増殖する。例えば、抗原特異的Ｔ細胞株又はＥＢＶのウイルス特異的Ｔ細胞は、ＥＢＶを認識し得、それによってＥＢＶに特異的なＴ細胞を増殖させる。別の例では、アデノウイルス及びＢＫに対する抗原特異的Ｔ細胞株又はウイルス特異的Ｔ細胞は、ＡｄＶとＢＫの両方を認識し得、それによってアデノウイルス及びＢＫに特異的なＴ細胞を増殖させる。

本明細書中で使用される場合、「患者」又は「対象」又は「個体」という用語は、ヒト、飼育動物、家畜並びに動物園、スポーツ及びペット動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、並びにウシ、ヒツジ、ブタ及びヤギを含む農業用動物を含む何らかの哺乳動物を指すために本明細書中で交換可能に使用される。１つの特定の哺乳動物は、成人、小児及び高齢者を含むヒトである。対象はまた、イヌ、ネコ及びウマを含むペット動物でもあり得る。家畜動物の例としては、ブタ、ウシ、ヒツジ及びヤギが挙げられる。

本明細書中で使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などの用語は、別段の指定がない限り、このような用語が適用される疾患、障害若しくは状態、又はこのような疾患、障害若しくは状態の１つ以上の症状を、逆転させる、緩和する、そのプロセスを阻害する、又は予防することを指し、症状若しくは合併症の発症を予防するための、又は症状若しくは合併症を緩和するための、又は疾患、状態若しくは障害を排除するための、本明細書中に記載される組成物、医薬組成物若しくは剤形の何れかの投与を含む。一部の例では、処置は治癒的又は改善的である。

本明細書中で使用される「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」、「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」などの用語は、治療薬を、このような治療薬による処置を必要とする対象に、移送、送達、導入又は輸送する何らかの方式を指す。このような方式には、眼内、経口、局所、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、鼻腔内及び皮下投与が含まれるが限定されない。

本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含むことｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「特徴とする（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）」又はそれらの何らかの他の変形物は、そうでないことが明示的に示されるあらゆる限定を条件として、列挙される構成要素を非排他的に含むことを包含することを意図する。例えば、要素のリスト（例えば、構成要素又は特徴又は段階）を「含む」組成物及び／又は方法は、必ずしもそれらの要素（又は構成要素若しくは特性惜しくは段階）のみに限定されないが、明示的に列挙されていないか又は組成物及び／又は方法に固有である他の要素（又は構成要素若しくは特性若しくは段階）を含み得る。

本明細書中で使用される場合、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」及び「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という句は、示されていない何らかの要素、段階又は構成要素を除外する。例えば、特許請求の範囲で使用される「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」又は「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、通常それに付随する不純物（即ち所与の構成要素内の不純物）を除き、特許請求の範囲に具体的に列挙される構成要素、材料又は工程に特許請求の範囲を限定する。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という語句が、プリアンブルの直後ではなく、請求項の本体の節に現れる場合、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」又は「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という語句は、その節に記載されている要素（又は構成要素又は段階）のみに限定し；他の要素（又は構成要素）は、全体として特許請求の範囲から除外されない。

本発明の他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、本発明の精神及び範囲内の様々な変更及び修正がこの詳細な説明から当業者に明らかになるので、詳細な説明及び特定の例は、本発明の特定の実施形態を示しているが、単なる例示として与えられていることを理解されたい。

以下の考察は、本発明の様々な実施形態に関する。「発明」という用語は、いかなる特定の実施形態を指すことも、又はそうでなければ本開示の範囲を限定することも意図するものではない。これらの実施形態のうちの１つ以上を使用し得るが、開示される実施形態は、特許請求の範囲を含む本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではい、又はそうでなければ使用されるべきではない。さらに、当業者は、以下の説明が広範な適用を有し、何れかの実施形態の考察が、その実施形態の例示のみを意図し、特許請求の範囲を含む開示の範囲がその実施形態に限定されることを明確にすることを意図しないことを理解するであろう。
概要

様々な実施形態では、本開示は、ウイルス感染症（例えば呼吸器ウイルス感染症）及び関連疾患を処置又は予防するための組成物及び方法を提供する。本開示は、ウイルス感染を制御し、症状を排除するための、エクスビボで増殖させた、遺伝子改変がない、ウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）の投与による、そのような感染の予防又は処置に関する。いかなる理論にも束縛されることを望むものではないが、ＶＳＴは、ウイルス由来ペプチドを提示する標的細胞上で発現される主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合するそれらのネイティブＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を介してウイルス感染細胞を認識し、死滅させる。

呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ、パラインフルエンザウイルス（ＰＩＶ）及びヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）を含む、市中感染する呼吸器ウイルス（ＣＡＲＶ）による呼吸器ウイルス感染は、同種異系造血幹細胞移植（アロＨＳＣＴ）レシピエントの最大４０％で検出され、これらのレシピエントは、致命的となり得る細気管支炎及び肺炎などの重度の疾患を引き起こし得る。ＲＳＶ誘発性細気管支炎は、１歳未満の小児の入院の最も多い理由であるが、Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＣＤＣ）は、毎年インフルエンザの発症が世界中で最大３５６０万件、入院は１４０，０００～７１０，０００件にのぼり、米国だけで疾患管理にかかる費用は年間およそ８７１億ドルであり、１２，０００～５６，０００人が死亡していると推定している。

従って、ＣＡＲＶは世界中で罹患及び死亡の主な原因となっており、免疫系がナイーブ（例えば幼児）であるか又は易感染性である個体が最も脆弱である。例えば、同種異系造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）レシピエントでは、ＣＡＲＶ関連呼吸器ウイルス疾患の発生率が４０％と高い（５）。殆どの患者が最初は鼻漏、咳及び発熱を呈する一方、症例のおよそ５０％で感染症が下気道に進行し、肺炎及び細気管支炎を含む重度の症状が見られ、死亡率が２３～５０％であることを特徴とする（６～９）。ｈＭＰＶ（１０）及びＰＩＶ（１１）については承認された予防ワクチンも抗ウイルス薬もなく、インフルエンザについては、患者がＨＳＣＴの少なくとも６ヶ月後でないと予防ワクチンは適応とされない（１２）。エアロゾル化リバビリン（ＲＢＶ）はＲＳＶの処置についてＦＤＡの承認を得ているが、非常に高額であり（５日間コース＝１４９，７５６ドル）、投与が物流上困難であり、患者を取り囲むエアロゾルテントに接続する特殊な噴霧装置を必要とする（１３～１６）。従って、臨床的問題が多いＣＡＲＶに対する承認済みの抗ウイルス剤がなく、エアロゾル化ＲＢＶの投与が高コストであり、複雑であることから、代替処置ストラテジーの必要性が強調される。

アデノウイルス（ＡｄＶ）、ライノウイルス及びコロナウイルス株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ並びに免疫適格患者及び免疫無防備状態の患者の両方に罹患する流行性ＣｏＶを含む他の呼吸器ウイルス。これらは、特に免疫無防備状態の個体において重度の症状を引き起こし得、２０２０年のＳＡＲＳ－ＣｏＶ２パンデミックは、不用意なヒトが、この感染及び関連疾患をどのようにして処置及び予防すべきかを明らかにした。この恐ろしいパンデミックの結果、既に世界中で何千人もが死亡し、医療崩壊及び数十年間見られなかった世界的な経済の崩壊がもたらされた。従って、これらのウイルスを処置するための新しい治療法が緊急に必要とされていることは明らかである。本開示は、そのような治療を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、健康な予備スクリーニング済みの血清陽性ドナーから得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から作製されたＶＳＴを提供し、これは部分的にＨＬＡが一致した「即納」製品として入手可能である。従って、本開示は、１つ以上のウイルスに対する特異性を有するＶＳＴを含むＶＳＴ製品及びウイルス感染を処置又は予防するためにそのようなＶＳＴを使用する方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のＶＳＴは、１つ以上のウイルス（例えば１つ以上の呼吸器ウイルス）又はより具体的にはウイルスによって発現される１つ以上の抗原に応答する（又は「それに特異的である」）。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のＶＳＴは、１つのウイルスのみに応答する。例えば、一実施形態では、本開示は、１つ以上のＲＳＶ抗原に対する特異性を有するＶＳＴのポリクローナル集団を提供する。いくつかの例では、このようなＲＳＶ特異的ＶＳＴは、複数のＲＳＶ抗原に対する特異性を有するＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、本開示はまた、このようなＲＳＶ特異的ＶＳＴを投与することによって、対象におけるＲＳＶ感染を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示はまた、このようなＲＳＶ特異的ＶＳＴを投与することによって、対象におけるＲＳＶ感染を予防する方法を提供する。このような実務は、ＲＳＶ以外のあらゆる単一のウイルスに適用され得る。

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のＶＳＴは複数のウイルス（例えば本明細書中で開示される何れかの１つ以上のウイルス）に応答する。特定の実施形態では、本開示は、複数の呼吸器ウイルス（例えば本明細書中で開示される呼吸器ウイルスの何れか１つ以上）に応答する複数の呼吸器ウイルス特異的Ｔ細胞（マルチ－Ｒ－ＶＳＴ）を提供する。特定の態様では、マルチＲ－ＶＳＴは、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ、ＰＩＶ及びそれらの組み合わせから選択されるウイルスによって発現される１つ以上の呼吸器ウイルス抗原に対する特異性を有する。特定の実施形態では、マルチＲ－ＶＳＴは、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びＰＩＶのそれぞれによって発現される抗原に対する特異性を有する。特定の態様では、マルチＲ－ＶＳＴは、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ、ＰＩＶ３及びそれらの組み合わせから選択されるウイルスによって発現される１つ以上の呼吸器ウイルス抗原に対する特異性を有する。特定の実施形態では、マルチＲ－ＶＳＴは、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びＰＩＶ３のそれぞれによって発現される抗原に対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、インフルエンザ抗原は、インフルエンザＡ抗原ＮＰ１である。いくつかの実施形態では、インフルエンザ抗原は、インフルエンザＡ抗原ＭＰ１である。いくつかの実施形態では、インフルエンザ抗原は、ＮＰ１及びＭＰ１の組み合わせである。いくつかの実施形態では、ＲＳＶ抗原はＲＳＶ Ｎである。いくつかの実施形態では、ＲＳＶ抗原はＲＳＶ Ｆである。いくつかの実施形態では、ＲＳＶ抗原は、ＲＳＶ Ｎ及びＦの組み合わせである。いくつかの実施形態では、ｈＭＰＶ抗原はＦである。いくつかの実施形態では、ｈＭＰＶ抗原はＮである。いくつかの実施形態では、ｈＭＰＶ抗原はＭ２－１である。いくつかの実施形態では、ｈＭＰＶ抗原はＭである。いくつかの実施形態では、ｈＭＰＶ抗原は、Ｆ、Ｎ、Ｍ２－１及びＭの組み合わせである。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ抗原はＭである。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ抗原はＨＮである。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ抗原はＮである。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ抗原はＦである。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ抗原は、Ｍ、ＨＮ、Ｎ及びＦの組み合わせである。いくつかの実施形態では、本開示はまた、対象にこのようなマルチ－Ｒ－ＶＳＴを投与することによって、対象におけるＰＩＶ、インフルエンザ、ＲＳＶ及び／又はｈＭＰＶ感染を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示はまた、対象にこのようなマルチ－Ｒ－ＶＳＴを投与することによって、対象におけるＰＩＶ、インフルエンザ、ＲＳＶ及び／又はｈＭＰＶ感染を予防する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ３抗原はＭである。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ３抗原はＨＮである。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ３抗原はＮである。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ３抗原はＦである。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ３抗原は、Ｍ、ＨＮ、Ｎ及びＦの組み合わせである。いくつかの実施形態では、本開示はまた、対象にこのようなマルチ－Ｒ－ＶＳＴを投与することによって、対象におけるＰＩＶ３、インフルエンザ、ＲＳＶ及び／又はｈＭＰＶ感染を処置する方法も提供する。いくつかの実施形態では、本開示はまた、対象にこのようなマルチ－Ｒ－ＶＳＴを投与することによって、対象におけるＰＩＶ３、インフルエンザ、ＲＳＶ及び／又はｈＭＰＶ感染を予防する方法も提供する。このような実務は、あらゆる複数のウイルスに適用され得る。

特定の一実施形態では、本開示は、ＰＩＶ抗原Ｍ、ＰＩＶ抗原ＨＮ、ＰＩＶ抗原Ｎ、ＰＩＶ抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎのそれぞれに特異性を有するマルチＲ－ＶＳＴのポリクローナル集団を含む組成物を提供する。ポリクローナル集団は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＶＳＴの両方を含み得る。ポリクローナル集団が対象に投与され得る。対象は、ＰＩＶ、インフルエンザ、ＲＳＶ及び／又はｈＭＰＶ感染を有し得る。対象においてＰＩＶ、インフルエンザ、ＲＳＶ及び／又はｈＭＰＶ感染を処置する方法は、対象にマルチＲ－ＶＳＴのポリクローナル集団を投与することを含み得る。対象においてＰＩＶ、インフルエンザ、ＲＳＶ及び／又はｈＭＰＶ感染を予防する方法は、対象にマルチＲ－ＶＳＴのポリクローナル集団を投与することを含み得る。

特定の一実施形態では、本開示は、ＰＩＶ３抗原Ｍ、ＰＩＶ３抗原ＨＮ、ＰＩＶ３抗原Ｎ、ＰＩＶ３抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎのそれぞれに特異性を有するマルチＲ－ＶＳＴのポリクローナル集団を含む組成物を提供する。ポリクローナル集団は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＶＳＴの両方を含み得る。ポリクローナル集団が対象に投与され得る。対象は、ＰＩＶ３、インフルエンザ、ＲＳＶ及び／又はｈＭＰＶ感染を有し得る。対象においてＰＩＶ３、インフルエンザ、ＲＳＶ及び／又はｈＭＰＶ感染を処置する方法は、対象にマルチＲ－ＶＳＴのポリクローナル集団を投与することを含み得る。対象においてＰＩＶ３、インフルエンザ、ＲＳＶ及び／又はｈＭＰＶ感染を予防する方法は、対象にマルチＲ－ＶＳＴのポリクローナル集団を投与することを含み得る。

いくつかの実施形態では、本開示は、複数のウイルス抗原を認識するＶＳＴのポリクローナル集団を含む組成物を提供し、この複数のウイルス抗原は、ＰＩＶ由来の少なくとも１つの第１の抗原及び１つ以上のさらなるウイルス由来の少なくとも１つの第２の抗原を含む。いくつかの特定の実施形態では、本開示は、複数のウイルス抗原を認識するＶＳＴのポリクローナル集団を含む組成物を提供し、この複数のウイルス抗原は、ＰＩＶ３由来の少なくとも１つの第１の抗原と、１つ以上のさらなるウイルス由来の少なくとも１つの第２の抗原と、を含む。さらなるウイルスは、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ、ＡｄＶ、コロナウイルス又はそれらの組み合わせを含み得る。ＶＳＴは、１つ以上のさらなるウイルスによって発現されるさらなる抗原を認識し得、このさらなる抗原は、ＰＩＶ抗原Ｍ（例えばＰＩＶ３抗原Ｍ）、ＰＩＶ抗原ＨＮ（例えばＰＩＶ３抗原ＨＮ）、ＰＩＶ抗原Ｎ（例えばＰＩＶ３抗原Ｎ）、ＰＩＶ抗原Ｆ（例えばＰＩＶ３抗原Ｆ）、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｎ及びＡｄＶ抗原Ｈｅｘｏｎ、ＡｄＶ抗原Ｐｅｎｔｏｎ及びそれらの組み合わせからなる群のうち１つ以上又は全てを含み得る。さらなる抗原は、いくつかの実施形態では、１つ以上のコロナウイルス抗原を含み得る。例えば、さらなる抗原は、１つ以上のコロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、コロナウイルス抗原は、ｎｓｐ１；ｎｓｐ３；ｎｓｐ４；ｎｓｐ５；ｎｓｐ６；ｎｓｐ１０；ｎｓｐ１２；ｎｓｐ１３；ｎｓｐ１４；ｎｓｐ１５；ｎｓｐ１６；スパイク（Ｓ）；エンベロープタンパク質（Ｅ）；マトリクスタンパク質（Ｍ）；ヌクレオカプシドタンパク質（Ｎ）からなる群から選択される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ２抗原を含む。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＡＰ３Ａ）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＮＳ７）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＮＳ８）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＯＲＦ１０）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＯＲＦ９Ｂ）；及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｙ１４）からなる群から選択される１つ以上の抗原をさらに含む。

さらなる抗原は、いくつかの実施形態では、さらに又は代替的に、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＡｄＶ、ＢＫ、ＪＣウイルス、ＨＨＶ６、ＲＳＶ、インフルエンザ、パラインフルエンザ、ボカウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、ＬＣＭＶ、流行性耳下腺炎、麻疹、ヒトメタニューモウイルス、パルボウイルスＢ、ロタウイルス、メルケル細胞ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ＨＰＶ、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ１、ＨＨＶ８、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎、ＨＴＬＶ１及びウエストナイルウイルス、ジカウイルス、エボラから選択されるウイルス由来であり得る。いくつかの実施形態では、ＥＢＶ抗原は、ＬＭＰ２、ＥＢＮＡ１、ＢＺＬＦ１及びそれらの組み合わせ由来である。いくつかの実施形態では、ＣＭＶ抗原は、ＩＥ１、ｐｐ６５及びそれらの組み合わせ由来である。いくつかの実施形態では、アデノウイルス抗原は、Ｈｅｘｏｎ、Ｐｅｎｔｏｎ及びそれらの組み合わせ由来である。いくつかの実施形態では、ＢＫウイルス抗原は、ＶＰ１、ラージＴ及びそれらの組み合わせ由来である。いくつかの実施形態では、ＨＨＶ６抗原は、Ｕ９０、Ｕ１１、Ｕ１４及びそれらの組み合わせ由来である。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのペプミックスは、ＲＳＶ、インフルエンザ、ＰＩＶ又はｈＭＰＶ由来の抗原（又は抗原の一部）をカバーする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのペプミックスは、ＲＳＶ、インフルエンザ、ＰＩＶ、ｈＭＰＶ、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）又はそれらの組み合わせに由来する抗原（又は抗原の一部）をカバーする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのペプミックスは、ＲＳＶ、インフルエンザ、ＰＩＶ３、ｈＭＰＶ又はそれらの組み合わせ由来の抗原（又は抗原の一部）をカバーする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのペプミックスは、ＲＳＶ、インフルエンザ、ＰＩＶ３、ｈＭＰＶ、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）又はそれらの組み合わせ由来の抗原（又は抗原の一部）をカバーする。

いくつかの実施形態では、第１の抗原はＰＩＶ抗原である。例えば、いくつかの実施形態では、第１の抗原はＰＩＶ抗原Ｍであり得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原はＰＩＶ抗原ＨＮであり得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原はＰＩＶ抗原Ｎであり得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原はＰＩＶ抗原Ｆであり得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＰＩＶ抗原Ｍ、ＰＩＶ抗原ＨＮ、ＰＩＶ抗原Ｎ及びＰＩＶ抗原Ｆの何らかの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、本組成物は１つの第１の抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、本組成物は２つの第１の抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、本組成物は３つの第１の抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、本組成物は４つの第１の抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、４つの第１の抗原は、ＰＩＶ抗原Ｍ、ＰＩＶ抗原ＨＮ、ＰＩＶ抗原Ｎ及びＰＩＶ抗原Ｆを含み得る。

いくつかの実施形態では、第１の抗原はＰＩＶ３抗原である。例えば、いくつかの実施形態では、第１の抗原はＰＩＶ３抗原Ｍであり得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原はＰＩＶ３抗原ＨＮであり得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原はＰＩＶ３抗原Ｎであり得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原はＰＩＶ３抗原Ｆであり得る。いくつかの実施形態では、第１の抗原は、ＰＩＶ３抗原Ｍ、ＰＩＶ３抗原ＨＮ、ＰＩＶ３抗原Ｎ及びＰＩＶ３抗原Ｆの何らかの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、本組成物は１つの第１の抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、本組成物は２つの第１の抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、本組成物は３つの第１の抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、本組成物は４つの第１の抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、４つの第１の抗原は、ＰＩＶ３抗原Ｍ、ＰＩＶ３抗原ＨＮ、ＰＩＶ３抗原Ｎ及びＰＩＶ３抗原Ｆを含み得る。

いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のウイルスはＲＳＶであり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のウイルスはインフルエンザであり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のウイルスはｈＭＰＶであり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のウイルスは、ＲＳＶ、インフルエンザ及びｈＭＰＶを含み得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のウイルスは、ＲＳＶ、インフルエンザ及びｈＭＰＶからなり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のウイルスは、本明細書中に記載のような何れかの適切なウイルスから選択され得る。

いくつかの実施形態では、本組成物は、２又は３つの第２のウイルスを含み得る。いくつかの実施形態では、本組成物は、３つの第２のウイルスを含み得る。いくつかの実施形態では、この３つの第２のウイルスは、インフルエンザ、ＲＳＶ及びｈＭＰＶを含み得る。いくつかの実施形態では、本組成物は、各第２のウイルスあたり少なくとも２つの第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、１つの第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は２つの第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は３つの第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は４つの第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は５つの第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は６つの第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は７つの第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は８個の第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は９個の第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は１０個の第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は１１個の第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は１２個の第２の抗原を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、本明細書中に記載のような本組成物に適した何れかの数の第２の抗原を含む。

いくつかの実施形態では、第２の抗原はインフルエンザ抗原ＮＰ１であり得る。いくつかの実施形態では、第２の抗原はインフルエンザ抗原ＭＰ１であり得る。一部の実施形態では、第２の抗原はＲＳＶ抗原Ｎであり得る。一部の実施形態では、第２の抗原はＲＳＶ抗原Ｆであり得る。一部の実施形態では、第２の抗原はｈＭＰＶ抗原Ｍであり得る。一部の実施形態では、第２の抗原はｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１であり得る。いくつかの実施形態では、第２抗原は、ｈＭＰＶ抗原Ｆであり得る。いくつかの実施形態では、第２抗原は、ｈＭＰＶ抗原Ｎであり得る。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎの何れかの組み合わせであり得る。

いくつかの実施形態では、第２の抗原はインフルエンザ抗原ＮＰ１を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原はインフルエンザ抗原ＭＰ１を含む。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、第２の抗原は、インフルエンザ抗原ＮＰ１及びインフルエンザ抗原ＭＰ１の両方を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原はＲＳＶ抗原Ｎを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原はＲＳＶ抗原Ｆを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、ＲＳＶ抗原Ｎ及びＲＳＶ抗原Ｆの両方を含む。

いくつかの実施形態では、第２の抗原はｈＭＰＶ抗原Ｍを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原はｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原はｈＭＰＶ抗原Ｆを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原はｈＭＰＶ抗原Ｎを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎの組み合わせを含む。

いくつかの実施形態では、第２の抗原は、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎのそれぞれを含む。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、ＰＩＶ抗原Ｍ、ＰＩＶ抗原ＨＮ、ＰＩＶ抗原Ｎ、ＰＩＶ抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎを含む。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、ＰＩＶ抗原Ｍ、ＰＩＶ抗原ＨＮ、ＰＩＶ抗原Ｎ、ＰＩＶ抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎからなる。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、基本的に、ＰＩＶ抗原Ｍ、ＰＩＶ抗原ＨＮ、ＰＩＶ抗原Ｎ、ＰＩＶ抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎからなる。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、本明細書中に記載のような組成物に対する何らかの適切な抗原を含み得る。

いくつかの実施形態では、第２の抗原は、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎのそれぞれを含む。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、ＰＩＶ３抗原Ｍ、ＰＩＶ３抗原ＨＮ、ＰＩＶ３抗原Ｎ、ＰＩＶ３抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎを含む。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、ＰＩＶ３抗原Ｍ、ＰＩＶ３抗原ＨＮ、ＰＩＶ３抗原Ｎ、ＰＩＶ３抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎからなる。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、基本的に、ＰＩＶ３抗原Ｍ、ＰＩＶ３抗原ＨＮ、ＰＩＶ３抗原Ｎ、ＰＩＶ３抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎからなる。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、本明細書中に記載のような組成物に対する何らかの適切な抗原を含み得る。

いくつかの実施形態では、本明細書で開示される組成物中のＶＳＴは、ＰＢＭＣを複数のペプミックスライブラリと接触させることによって作製される。いくつかの実施形態では、各ペプミックスライブラリは、ウイルス抗原の少なくとも一部にまたがる複数の重複ペプチドを含有する。いくつかの実施形態では、複数のペプミックスライブラリの少なくとも１つは、ＰＩＶ由来の第１の抗原にまたがる。いくつかの実施形態では、複数のペプミックスライブラリの少なくとも１つは、ＰＩＶ３由来の第１の抗原にまたがる。いくつかの実施形態では、複数のペプミックスライブラリのうちの少なくとも１つのさらなるペプミックスライブラリは、各第２抗原にまたがる。

いくつかの実施形態では、本明細書中で開示されるＶＳＴは、少なくとも１つのＤＮＡプラスミドでヌクレオフェクトされた樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）とＴ細胞を接触させることによって作製される。いくつかの実施形態では、ＤＮＡプラスミドは、１つの抗原の少なくとも一部をコードし得る。いくつかの実施形態では、ＤＮＡプラスミドはＰＩＶ抗原（例えばＰＩＶ３抗原）をコードし得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＤＮＡプラスミドは、各第２の抗原をコードする。いくつかの実施形態では、プラスミドは、少なくとも１つのＰＩＶ抗原及び少なくとも１つの第２抗原をコードする。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の組成物は、ＣＤ４＋Ｔリンパ球及びＣＤ８＋Ｔリンパ球を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、αβＴ細胞受容体を発現するＶＳＴを含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、ＭＨＣ拘束性ＶＳＴを含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ、ＰＩＶ及び１つ以上のさらなるウイルスから選択される１つ以上の呼吸器ウイルスに対する特異性がある複数の呼吸器ウイルスに特異的なＴ細胞（マルチ－Ｒ－ＶＳＴ）を提供する。ＰＩＶ抗原はＰＩＶ３由来であり得る。例えば、いくつかの例において、さらなるウイルスは、コロナウイルスを含む。コロナウイルスは、アルファコロナウイルスであり得る。例えば、特定の実施形態では、アルファコロナウイルスは、ＨＣｏＶ－Ｅ２２９、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３及びそれらの組み合わせから選択される。特定の実施形態では、アルファコロナウイルスは、ＨＣｏＶ－Ｅ２２９及びＨＣｏＶ－ＮＬ６３のそれぞれを含む。コロナウイルスはベータコロナウイルスであり得る。例えば、特定の実施形態では、ベータコロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３及びそれらの組み合わせから選択される。特定の実施形態では、ベータコロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３のそれぞれ及びそれらの組み合わせを含む。いくつかの例では、さらなるウイルスはアデノウイルスを含む。いくつかの例では、さらなるウイルスは、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＡｄＶ、ＢＫ、ＪＣウイルス、ＨＨＶ６、ボカウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、ＬＣＭＶ、流行性耳下腺炎、麻疹、パルボウイルスＢ、ロタウイルス、メルケル細胞ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ＨＰＶ、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ１、ＨＨＶ８、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎、ＨＴＬＶ１、ウエストナイルウイルス、ジカウイルス、エボラ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

一実施形態では、本開示は、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ、ＰＩＶ及びコロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）に対する特異性を有するマルチＲ－ＶＳＴを提供する。一実施形態では、本開示は、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ、ＰＩＶ、１つ以上のＡｄＶ及びコロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）に対する特異性を有するマルチＲ－ＶＳＴを提供する。一実施形態では、本開示は、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ、ＰＩＶ３及びコロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）に対する特異性を有するマルチＲ－ＶＳＴを提供する。一実施形態では、本開示は、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ、ＰＩＶ３、１つ以上のＡｄＶ及びコロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）に対する特異性を有するマルチＲ－ＶＳＴを提供する。

いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、ＩＬ－７及びＩＬ－４の両方の存在下でエクスビボで培養し得る。いくつかの実施形態では、マルチウイルスＶＳＴは、患者への投与のための準備ができるように、培養の９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間（その間の全ての範囲及び部分範囲を含む）以内に十分に増殖した。典型的な製造実行（上記条件での培養／増殖）は、１０～１８日間、より典型的には１４～１６日間である。いくつかの実施形態では、マルチウイルスＶＳＴは、本明細書中に記載のような組成物に適した何れかの日数内に十分に増殖した。

本開示は、無視できるアロ反応性を示すＶＳＴを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本組成物は、患者から回収された抗原特異的Ｔ細胞の活性化誘導細胞死が、同じ患者から回収された対応する抗原特異的Ｔ細胞よりも少ないＶＳＴを含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、ＩＬ－７及びＩＬ－４の両方の存在下で培養されない。いくつかの実施形態では、ＶＳＴを含む組成物は、７０％を超える生存率を示す。

いくつかの実施形態では、本組成物は、培養下で少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、細菌及び真菌に対して陰性である。いくつかの実施形態では、本組成物は、培養中少なくとも７日間、細菌及び真菌に対して陰性である。いくつかの実施形態では、本組成物は、１ＥＵ／ｍｌ未満、２ＥＵ／ｍｌ未満、３ＥＵ／ｍｌ未満、４ＥＵ／ｍｌ未満、５ＥＵ／ｍｌ未満、６ＥＵ／ｍｌ未満、７ＥＵ／ｍｌ未満、８ＥＵ／ｍｌ未満、９ＥＵ／ｍｌ未満、１０ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示す。いくつかの実施形態では、本組成物は、５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示す。いくつかの実施形態では、本組成物はマイコプラズマに対して陰性である。

いくつかの実施形態では、ＶＳＴのポリクローナルを構築するために使用されるペプミックスは化学合成される。いくつかの実施形態では、ペプミックスは、任意選択的に、＞１０％、＞２０％、＞３０％、＞４０％、＞５０％、＞６０％、＞７０％、＞８０％又は＞９０％（これらの間の全ての範囲及び部分範囲を含む）の純度である。いくつかの実施形態では、ペプミックスは、任意選択的に＞９０％の純度である。

いくつかの実施形態では、ＶＳＴはＴｈ１極性化されている。いくつかの実施形態では、ＶＳＴはウイルス抗原発現標的細胞を溶解させることが可能である。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、他の適切なタイプの抗原発現標的細胞を溶解させることが可能である。いくつかの実施形態では、本組成物中のＶＳＴは、非感染自己標的細胞を顕著に溶解させない。いくつかの実施形態では、本組成物中のＶＳＴは、非感染自己同種異系標的細胞を顕著に溶解させない。

本開示は、静脈内送達のために処方される何らかの組成物を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本組成物は、培養中、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、細菌に対して陰性である。いくつかの実施形態では、本組成物は、培養中少なくとも７日間、細菌に対して陰性である。いくつかの実施形態では、本組成物は、培養中、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、真菌に対して陰性である。いくつかの実施形態では、本組成物は、培養中少なくとも７日間、真菌に対して陰性である。

いくつかの実施形態では、本医薬組成物は、１ＥＵ／ｍｌ未満、２ＥＵ／ｍｌ未満、３ＥＵ／ｍｌ未満、４ＥＵ／ｍｌ未満、５ＥＵ／ｍｌ未満、６ＥＵ／ｍｌ未満、７ＥＵ／ｍｌ未満、８ＥＵ／ｍｌ未満、９ＥＵ／ｍｌ未満、１０ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示す。一部の実施形態では、本医薬組成物はマイコプラズマに対して陰性である。

本開示はまた、本明細書中で開示されるＶＳＴ（例えば、ＰＩＶ、インフルエンザ、ＲＳＶ及びｈＭＰＶに対する特異性を有する本明細書中で開示されるマルチＲ－ＶＳＴなど）の１つ以上の有効量を対象に投与することを含む、ウイルス感染を処置又は予防する方法も提供する。本開示はまた、本明細書中で開示されるＶＳＴの何れか（例えば、ＰＩＶ、インフルエンザ、ＲＳＶ及びｈＭＰＶに対する特異性を有する本明細書中で開示されるマルチＲ－ＶＳＴなど）を含む組成物（例えば医薬組成物）及び本明細書中で開示されるＶＳＴを含むそのような医薬組成物の１つ以上の有効用量を対象に投与することを含む、ウイルス感染を処置又は予防する方法も提供する。
ペプミックスライブラリの作製

本開示のいくつかの実施形態では、ペプチドのライブラリをＰＢＭＣに提供して、最終的にＶＳＴを作製する。ライブラリは、特定の場合には、同じ抗原の一部又は全部に及ぶペプチドの混合物（「ペプミックス」）を含む。本開示で利用されるペプミックスは、特定の態様では、１５アミノ酸長であり、互いに１１アミノ酸重複するペプチドを含む市販のペプチドライブラリからのものであり得る。一部の場合では、それらは合成により作製され得る。例としては、ＪＰＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ）又はＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ（Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）からのものが挙げられる。特定の実施形態では、ペプチドは、例えば、少なくとも７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５以上のアミノ酸長であり、特定の実施形態では、例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４アミノ酸長の重複がある。

いくつかの実施形態では、ペプミックスで使用されるアミノ酸は、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９、少なくとも９９．９％（それらの間の全ての範囲及び部分範囲を含む）の純度を有する。いくつかの実施形態では、ペプミックス中でここで使用されるアミノ酸は、少なくとも７０％の純度を有する。

異なるペプチドの混合物は、異なるペプチドの何れかの比を含み得るが、いくつかの実施形態では、各特定のペプチドは、別の特定のペプチドと実質的に同じ数で混合物中に存在する。広範な特異性を有するマルチウイルス細胞傷害性Ｔ細胞のためのペプミックスを調製及び産生する方法は、その全体において参照により組み込まれる米国特許出願公開第２０１８／０１８７１５２号明細書に記載されている。
ＶＳＴの作製

いくつかの実施形態では、ＶＳＴを作製する方法は、ドナーから得られた血液から、単核細胞（ＭＮＣ）を単離するか、又は単離されたＭＮＣを有することを含む。いくつかの実施形態では、ＭＮＣはＰＢＭＣである。ＭＮＣ及びＰＢＭＣは、当業者に公知の方法を使用することによって単離される。例として、ＰＢＭＣを単離するために密度遠心分離（勾配）（Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ）を使用し得る。他の例では、新たに採取した血液を含む細胞調製チューブ（ＣＰＴ）及びＳｅｐＭａｔｅチューブをＰＢＭＣの単離に使用し得る。

いくつかの実施形態では、ＭＮＣはＰＢＭＣである。例として、ＰＢＭＣは、リンパ球、単球及び樹状細胞を含み得る。例として、リンパ球は、Ｔ細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書中で使用される場合のＭＮＣは、培養されるか又は凍結保存される。いくつかの実施形態では、細胞を培養又は凍結保存する工程は、抗原特異的Ｔ細胞を刺激し、増殖させるために、適切な培養条件下で培養中の細胞を１つ（又はその一部）又は複数の抗原と接触させることを含み得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原は１つ以上のウイルス抗原を含み得る。

いくつかの実施形態では、細胞を培養又は凍結保存する工程は、適切な培養条件下で培養中の細胞を１つ以上の抗原からの１つ以上のエピトープと接触させることを含み得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原、又は１つ以上の抗原からの１つ以上のエピトープとＭＮＣ又はＰＢＭＣを接触させることは、個々のドナーのＭＮＣ又はＰＭＢＣのそれぞれに由来する抗原特異的Ｔ細胞のポリクローナル集団を刺激し、増殖させる。いくつかの実施形態では、抗原特異的Ｔ細胞株は凍結保存され得る。

いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原は、タンパク質全体の形態であり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原は、各抗原の配列の一部又は全部にまたがる一連の重複ペプチドを含むペプミックスであり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原は、タンパク質全体及び、各抗原の配列の一部又は全部にまたがる一連の重複ペプチドを含むペプミックスとの組み合わせであり得る。

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣ又はＭＮＣの培養は、ガス透過性培養表面を含む容器中で行われる。一実施形態では、容器は、ガス透過性部分を有する注入バッグ又は剛性容器である。一実施形態では、容器はＧ－Ｒｅｘ（登録商標）バイオリアクターである。一実施形態では、容器は、本明細書中に記載のようなＰＢＭＣ又はＭＮＣを培養するのに適切である何らかの容器、バイオリアクターなどであり得る。

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣ又はＭＮＣは、１つ以上のサイトカインの存在下で培養される。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ４である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ７である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ４及びＩＬ７である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ４及びＩＬ７を含むが、ＩＬ２を含まない。いくつかの実施形態では、サイトカインは、本明細書中に記載のＰＢＭＣ又はＭＮＣの培養に適切であるサイトカインの何らかの組み合わせであり得る。

いくつかの実施形態では、ＭＮＣ又はＰＢＭＣの培養は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれを超える異なるペプミックスの存在下であり得る。複数のペプチドであるペプミックスは、抗原の配列の一部又は全体に及ぶ一連の重複ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＭＮＣ又はＰＢＭＣは、複数のペプミックスの存在下で培養され得る。この場合、各ペプミックスは、複数のペプミックス中の他のペプミックスのそれぞれによってカバーされる抗原とは異なる少なくとも１つの抗原をカバーする。いくつかの実施形態では、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれを超える抗原が、複数のペプミックスによってカバーされる。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの異なるウイルス由来の少なくとも１つの抗原が、複数のペプミックスによってカバーされる。

いくつかの実施形態では、ペプミックスは１５ｍｅｒのペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ペプミックスは、本明細書中に記載の方法に適切であるペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗原にまたがるペプミックス中のペプチドは、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸の配列で重複する。いくつかの実施形態では、抗原にまたがるペプミックス中のペプチドは、配列が１１アミノ酸重複する。

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣ又はＭＮＣは、インフルエンザＡ抗原ＮＰ１及びインフルエンザＡ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ及びＦ、ｈＭＰＶ抗原Ｆ、Ｎ、Ｍ２－１及びＭ並びにＰＩＶ抗原Ｍ、ＨＮ、Ｎ及びＦにまたがるペプミックスの存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣ又はＭＮＣは、インフルエンザＡ抗原ＮＰ１及びインフルエンザＡ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ及びＦ、ｈＭＰＶ抗原Ｆ、Ｎ、Ｍ２－１及びＭ及びＰＩＶ抗原Ｍ、ＨＮ、Ｎ及びＦ、及び本明細書中で開示される１つ以上のコロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）抗原にまたがるペプミックスの存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣ又はＭＮＣは、ＥＢＶ抗原ＬＭＰ２、ＥＢＮＡ１、及びＢＺＬＦ１、ＣＭＶ抗原ＩＥ１及びｐｐ６５、アデノウイルス抗原Ｈｅｘｏｎ及びＰｅｎｔｏｎ、ＢＫウイルス抗原ＶＰ１及びラージＴ及びＨＨＶ６抗原Ｕ９０、Ｕ１１及びＵ１４にまたがるペプミックスの存在下で培養される。いくつかの実施形態では、抗原特異的Ｔ細胞は、抗原特異的細胞傷害性について試験される。

本開示は、標的細胞を本明細書中に記載の組成物又は医薬組成物と接触させることを含む、標的細胞を溶解させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞と組成物又は医薬組成物との間の接触は、対象においてインビボで行われる。いくつかの実施形態では、標的細胞と組成物又は医薬組成物との間の接触は、対象へのＶＳＴの投与を介してインビボで行われる。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

本開示は、ウイルス感染の処置又は予防を必要とする対象に、本明細書中に記載の組成物又は医薬組成物を投与することを含む、ウイルス感染を処置又は予防する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、５ｘ１０^３～５ｘ１０^９ＶＳＴ／ｍ^２、５ｘ１０^４～５ｘ１０^８ＶＳＴ／ｍ^２、５ｘ１０^５～５ｘ１０^７ＶＳＴ／ｍ^２、５ｘ１０^４～５ｘ１０^８ＶＳＴ／ｍ^２、５ｘ１０^６～５ｘ１０^９ＶＳＴ／ｍ^２（その間の全ての範囲及び部分範囲を含む）で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象は免疫無防備状態である。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ感染を有する対象に、ＰＩＶ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びインフルエンザに特異的な本明細書中で開示されるマルチＲ－ＶＳＴを投与する。いくつかの実施形態では、マルチＲ－ＶＳＴは、それらが作製されるウイルスとは異なるウイルス感染に対して有効であるような交差特異性を有する。例えば、例により限定されるものではないが、いくつかの実施形態では、マルチＲ－ＶＳＴ中のＰＩＶ特異的ＶＳＴは、ＰＩＶ３抗原に対して作製される。いくつかの実施形態では、処置されるＰＩＶ感染はＰＩＶ３である。いくつかの実施形態では、処置されるＰＩＶ感染は、ＰＩＶ３以外の血清型である。いくつかの実施形態では、ＲＳＶ感染を有する対象に、ＰＩＶ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びインフルエンザに特異的な本明細書中で開示されるマルチＲ－ＶＳＴを投与する。いくつかの実施形態では、ｈＭＰＶ感染を有する対象に、ＰＩＶ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びインフルエンザに特異的な本明細書中で開示されるマルチＲ－ＶＳＴを投与する。いくつかの実施形態では、インフルエンザ感染を有する対象に、ＰＩＶ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びインフルエンザに特異的な本明細書中で開示されるマルチＲ－ＶＳＴを投与する。いくつかの実施形態では、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）感染を有する対象に、ＰＩＶ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ、インフルエンザ及びコロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）に特異的な本明細書中で開示されるマルチＲ－ＶＳＴを投与する。

いくつかの実施形態では、対象は、１つ以上の医学的状態を有し得る。いくつかの実施形態では、対象は、ＶＳＴを受ける前に、強度軽減前処理を行って、適合血縁ドナー移植を受ける。いくつかの実施形態では、対象は、ＶＳＴを受ける前に骨髄破壊的前処置を行って、適合非血縁ドナー移植を受ける。いくつかの実施形態では、対象は、ＶＳＴを受ける前に強度軽減前処置を行って、ハプロ一致移植を受ける。いくつかの実施形態では、対象は、ＶＳＴを受ける前に骨髄破壊的前処置を行って、適合血縁ドナー移植を受ける。いくつかの実施形態では、対象は固形臓器移植を受けたことがある。いくつかの実施形態では、対象は化学療法を受けたことがある。いくつかの実施形態では、対象はＨＩＶ感染を有する。いくつかの実施形態では、対象は遺伝的免疫不全を有する。いくつかの実施形態では、対象は同種異系幹細胞移植を受けたことがある。いくつかの実施形態では、対象は、よりウイルス感染し易くなる、及び／又はウイルス感染後に顕著な有害転帰を有するようになる既存の状態を有する。例えば、いくつかの実施形態では、対象は心血管系疾患を有する。いくつかの実施形態では、対象は糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、対象は慢性呼吸器疾患を有する。いくつかの実施形態では、対象は高血圧を有する。いくつかの実施形態では、対象は癌を有する。いくつかの実施形態では、対象は肥満である。いくつかの実施形態では、対象は高齢者である。いくつかの実施形態では、対象は、この段落に記載されるような複数の医学的状態を有する。いくつかの実施形態では、対象は、この段落に記載されるような全ての医学的状態を有する。いくつかの実施形態では、患者は、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）に感染している。いくつかの実施形態では、患者はＣＯＶＩＤ－１９と診断されている。いくつかの実施形態では、患者は免疫無防備状態である。本明細書中で使用される場合、免疫無防備状態とは、免疫系が減弱していることを意味する。例えば、免疫無防備状態の患者は、感染症及び他の疾患と戦う能力が低下している。いくつかの実施形態では、患者は、その疾患もしくは状態又は別の疾患もしくは状態を処置するために患者が受けた処置に起因して免疫無防備状態にある。いくつかの実施形態では、免疫無防備状態の原因は年齢によるものである。一実施形態では、免疫無防備状態の原因は、若齢であることに起因する。一実施形態では、免疫無防備状態の原因は、高齢であることに起因する。いくつかの実施形態では、患者は移植療法を必要としている。いくつかの実施形態では、対象は、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）による感染以外の他の医学的状態を有しない。いくつかの実施形態では、対象は急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病又は慢性肉芽腫性疾患を有する。

いくつかの実施形態では、治療有効性は、ＶＳＴ細胞株の投与後に測定される。他の実施形態では、治療有効性は、感染のウイルス血症回復に基づいて測定される。他の実施形態では、治療有効性は、感染のビルリック（ｖｉｒｕｒｉｃ）回復に基づいて測定される。他の実施形態では、治療有効性は、患者からの試料中のウイルス量の消散に基づいて測定される。他の実施形態では、治療有効性は、肺における疾患の回復を追跡するための胸部画像を介して測定される。いくつかの実施形態では、試料は鼻腔スワブに由来する。他の実施形態では、治療有効性は、感染のウイルス血症回復、感染のビルリック（ｖｉｒｕｒｉｃ）回復及び患者からの試料中のウイルス量の消散に基づいて測定される。いくつかの実施形態では、治療有効性は、患者の末梢血中で検出可能なウイルス量を監視することによって測定される。いくつかの実施形態では、治療有効性は、肉眼的血尿の解消を含む。いくつかの実施形態では、治療有効性は、患者及び／又は臨床医によって報告される転帰を調べるＣＴＣＡＥ－ＰＲＯ又は同様の評価ツールによって測定される場合の出血性膀胱炎の症状の軽減を含む。

いくつかの実施形態では、試料は、患者由来の組織試料から選択される。いくつかの実施形態では、試料は、患者由来の体液試料から選択される。いくつかの実施形態では、試料は、患者由来の脳脊髄液（ＣＳＦ）から選択される。いくつかの実施形態では、試料は、患者由来のＢＡＬから選択される。いくつかの実施形態では、試料は、患者由来の糞便から選択される。

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、対象に複数回投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、対象に１回を超えて投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、２回を超えて対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、３回を超えて対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、４回を超えて対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、５回を超えて対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、６回を超えて対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、７回を超えて対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、８回を超えて対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、対象に９回を超えて投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、対象に１０回を超えて投与される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、対象にとって適切な回数、対象に投与される。組成物の複数回投与が個体に提供される場合、投与間の期間は、１～２４時間、１～７日、１～４週間、１～１２ヶ月、又はそれより長く、それらの間の全ての範囲及び部分範囲を含め、何れかの適切な長さであり得る。

いくつかの実施形態では、ＶＳＴのポリクローナル集団（例えばマルチＲ－ＶＳＴ）を含む本明細書中に記載の２つ以上の組成物を組み合わせて対象に投与する。２つ以上の組成物を連続的に又は同時に対象に投与し得る。２つ以上の組成物をプールし、単一の組成物として投与し得る。２つ以上の組成物を別々の組成物として別々の時点で投与し得る。一実施形態では、ＰＩＶ、インフルエンザ、ＲＳＶ及びｈＭＰＶに特異性を有するＶＳＴのポリクローナル集団を含む第１のマルチＲ－ＶＳＴ組成物を対象に投与し、別のウイルスに特異性を有するＶＳＴのポリクローナル集団を含む第２の別個のＶＳＴ組成物も対象に投与する。特定の実施形態では、他のウイルスは、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）である。いくつかの実施形態では、ＰＩＶ、インフルエンザ、ＲＳＶ、及びｈＭＰＶに特異性を有するＶＳＴのポリクローナル集団を含む第１のマルチＲ－ＶＳＴ組成物のプールと、別のウイルスに特異性を有するＶＳＴのポリクローナル集団を含む第２のＶＳＴ組成物と、を含む単一の組成物を対象に投与する。特定の実施形態では、他のウイルスは、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）である。いくつかの実施形態では、他のウイルスは、ＢＶ、ＣＭＶ、ＡｄＶ、ＢＫ、ＪＣウイルス、ＨＨＶ６、ＲＳＶ、インフルエンザ、パラインフルエンザ、ボカウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、ＬＣＭＶ、流行性耳下腺炎、麻疹、ｈＭＰＶ、パルボウイルスＢ、ロタウイルス、メルケル細胞ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ＨＰＶ、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ１、ＨＨＶ８、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎、ＨＴＬＶ １、単純ヘルペスウイルス、ウエストナイルウイルス、ジカウイルス及びエボラから選択される。

いくつかの実施形態では、本組成物の投与は、対象におけるウイルス感染を効果的に処置又は予防する。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はＰＩＶである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はＰＩＶ３である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はＲＳＶである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はインフルエンザである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はｈＭＰＶである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はＳＡＲＳ－ＣｏＶである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はＭＥＲＳ－ＣｏＶである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はＨＣｏＶ－ＨＫＵ１である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はＨＣｏＶ－Ｅ２２９である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はＨＣｏＶ－ＮＬ６３である。

本開示は、複数のウイルス抗原を認識するＶＳＴのポリクローナル集団を含む組成物を提供する。本開示は、複数のウイルス抗原が少なくとも１つの抗原を含むことを提供する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２）であり得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、ＰＩＶ由来であり得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、ＲＳＶ抗原であり得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、インフルエンザ由来であり得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、ｈＭＰＶ由来であり得る。

いくつかの実施形態では、本開示は、ＰＩＶ、ＲＳＶ、インフルエンザ及びｈＭＰＶのそれぞれからの少なくとも１つの抗原を含む複数のウイルス抗原を認識するＶＳＴのポリクローナル集団を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＰＩＶ、ＲＳＶ、インフルエンザ及びｈＭＰＶのそれぞれからの少なくとも２つの抗原を含む複数のウイルス抗原を含む複数のウイルス抗原を認識するＶＳＴのポリクローナル集団を提供する。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、ＰＩＶ抗原Ｍ、ＰＩＶ抗原ＨＮ、ＰＩＶ抗原Ｎ、ＰＩＶ抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎを含む。いくつかの実施形態では、複数の抗原は、ＰＩＶ抗原Ｍ、ＰＩＶ抗原ＨＮ、ＰＩＶ抗原Ｎ、ＰＩＶ抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎの何れかから選択され得る。いくつかの態様では、ＶＳＴのポリクローナル集団は、インフルエンザ、ＲＳＶ、ＰＩＶ及び／又はｈＭＰＶに感染した患者に投与される。

本開示の少なくともいくつかの方法では、作製されたＶＳＴを個体、例えば免疫無防備状態の個体に投与する。いくつかの場合、個体は、同種異系幹細胞移植を受けたことがあるか、又は有していることになる。特定の実施形態では、細胞は、例えば静脈内、筋肉内、皮内、皮下、腹腔内注射などの注射によって投与される。いくつかの実施形態では、個体はリンパ腫又は白血病を有する。いくつかの実施形態では、ＶＳＴは、ポリクローナルＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＶＳＴとしてさらに定義される。ＰＢＭＣは、個体に対して同種異系であってもよいし、又は個体に対して自己であってもよい。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、細胞分裂を刺激する１つ以上の組成物、例えばフィトヘマグルチニンなどにＶＳＴを曝露する段階をさらに含み；いくつかの態様では、この化合物はマイトジェンである。

いくつかの実施形態では、本開示は、静脈内送達のために処方される本明細書中に記載のような組成物を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書中で開示されるＶＳＴの集団と、１つ以上の担体、賦形剤、希釈剤、緩衝剤及び／又は送達ビヒクルと、を含む医薬組成物を提供する。いくつかの特定の実施形態では、本開示は、静脈内送達のために処方される本明細書中に記載の１つ以上のＶＳＴ組成物を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、静脈内送達のために処方される組成物は、それらの培養培地中で懸濁又は再懸濁される本明細書中で開示される増殖ＶＳＴの１つ以上を含み得る。静脈内送達のために処方される組成物は、追加的又は代替的に、適切な担体、賦形剤、希釈剤、緩衝剤及び／又は送達ビヒクル中で再懸濁される１つ又は増殖ＶＳＴを含み得る。特定の実施形態では、静脈内送達のために処方される組成物は、生理食塩水中で再懸濁される本明細書で開示される増殖ＶＳＴの１つ以上を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、細菌に対して陰性である。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、真菌に対して陰性である。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、培養下で、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、細菌又は真菌に対して陰性である。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のような組成物は、培養下で少なくとも７日間、細菌又は真菌に対して陰性である。

いくつかの実施形態では、静脈送達のために処方される医薬組成物は、１ＥＵ／ｍｌ未満、２ＥＵ／ｍｌ未満、３ＥＵ／ｍｌ未満、４ＥＵ／ｍｌ未満、５ＥＵ／ｍｌ未満、６ＥＵ／ｍｌ未満、７ＥＵ／ｍｌ未満、８ＥＵ／ｍｌ未満、９ＥＵ／ｍｌ未満、１０ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示す。いくつかの実施形態では、静脈内送達用に処方される医薬組成物は、マイコプラズマに対して陰性である。

実施例１
方法
別段の指示がない限り、以下に提供される実施例は、以下の材料及び方法を利用した。
フローサイトメトリー
免疫表現型検査

ＣＤ３、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）［Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（ＢＤ），Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ］、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６９（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣＡ）及びＣＤ３６６（ＴＩＭ－３）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に対するモノクローナル抗体でマルチ－Ｒ－ＶＳＴを表面染色した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中でペレット化し、次いで、抗体を飽和量（５μｌ）で添加し、続いて４℃で１５分間温置した。その後、細胞を洗浄し、３００μｌのＰＢＳ中で再懸濁し、少なくとも２０，０００個の生細胞をＧａｌｌｉｏｓ（商標）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ上で取得し、Ｋａｌｕｚａ（登録商標）Ｆｌｏｗ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で分析した。
細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）

マルチ－Ｒ－ＶＳＴを回収し、ＶＳＴ培地中で再懸濁し（２ｘ１０６／ｍｌ）、９６ウェルプレートのウェルあたり２００μｌを添加した。ブレフェルジンＡ（１μｇ／ｍｌ）、モネンシン（１μｇ／ｍｌ）、ＣＤ２８及びＣＤ４９ｄ（１μｇ／ｍｌ）（ＢＤ）と一緒に２００ｎｇの個々の試験又は対照（無関係な非ウイルス性、例えばＳＵＲＶＩＶＩＮ，ＷＴ１））ペプミックスとともに一晩細胞を温置した。次に、ＶＳＴをＰＢＳで洗浄し、ペレット化し、ＣＤ８及びＣＤ３（５μｌ／抗体／チューブ）で４℃にて１５分間表面染色し、次いで、洗浄し、ペレット化し、固定し、Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ溶液（ＢＤ）で暗所において４℃で２０分間透過処理した。Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ）で洗浄した後、細胞を１０μｌのＩＦＮγ及びＴＮＦα抗体（ＢＤ）と４℃にて暗所で３０分間、温置した。次いで、細胞をＰｅｒｍ／Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで２回洗浄し、少なくとも５０，０００個の生細胞をＧａｌｌｉｏｓ（商標）フローサイトメーターで取得し、Ｋａｌｕｚａ（登録商標）Ｆｌｏｗ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅで分析した。
ＦｏｘＰ３染色

製造者の説明書に従ってｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＦｏｘＰ３キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用してＦｏｘＰ３染色を行った。簡単に述べると、１ｘ１０６個の細胞をＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ２５抗体で表面染色し、次いで洗浄し、１ｍｌの固定／透過処理緩衝液中で再懸濁し、暗所にて４℃で１時間、温置した。ＰＢＳで洗浄した後、細胞を透過処理緩衝液中で再懸濁し、５μｌのアイソタイプ又はＦｏｘＰ３抗体（クローンＰＣＨ１０１）とともに４℃で３０分間、温置し、次いで洗浄し、Ｇａｌｌｉｏｓ（商標）フローサイトメーター上で取得し、続いてＫａｌｕｚａ（登録商標）Ｆｌｏｗ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅで分析した。
機能研究
酵素結合免疫スポット（ＥＬＩｓｐｏｔ）

ＥＬＩｓｐｏｔ分析を使用して、ＩＦＮγ及びグランザイムＢ分泌細胞の頻度を定量した。簡潔に述べると、ＰＢＭＣ及びマルチＲ－ＶＳＴをそれぞれ５ｘ１０６及び２ｘ１０６個細胞／ｍｌでＶＳＴ培地中で再懸濁し、１００μｌの細胞を各ＥＬＩｓｐｏｔウェルに添加した。個々の刺激［ＮＰ１、ＭＰ１（インフルエンザ）；Ｎ、Ｆ（ＲＳＶ）；Ｆ、Ｎ、Ｍ２－１、Ｍ（ｈＭＰＶ）；Ｍ、ＨＮ、Ｎ、Ｆ（ＰＩＶ）］又は対照ペプミックス（Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＷＴ１）での直接刺激（５００ｎｇ／ペプチド／ｍｌ）後に抗原特異的活性を測定した。ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）（１μｇ／ｍｌ）及びＰＨＡ（１μｇ／ｍｌ）をそれぞれＰＢＭＣ及びＶＳＴに対する陽性対照として使用した。２０時間の温置後、プレートを前述のように発色させ、室温で一晩乾燥させ、次いで、定量化のためにＺｅｌｌｎｅｔ Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ（ニューヨーク）に送った。スポット形成細胞（ＳＦＣ）及び投入細胞数をプロットし、ＶＳＴに対する特異性閾値を≧３０ ＳＦＣ／２ｘ１０５個投入細胞と定義した。
マルチプレックス

ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ Ｈｉｇｈ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｐａｎｅｌ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）を用いて、マルチ－Ｒ－ＶＳＴサイトカインプロファイルを評価した。２ｘ１０５個のＶＳＴをｐｅｐｍｉｘ（ＮＰ１、ＭＰ１、

Ｎ、Ｆ、Ｆ、Ｎ、Ｍ２－１、Ｍ、Ｍ、ＨＮ、Ｎ及びＦ）（１μｇ／ｍｌ）で一晩刺激した。その後、上清を回収し、２連のウェルにプレーティングし、抗体固定化ビーズとともに４℃で一晩温置し、次いで洗浄し、ビオチン化検出抗体とともに室温で１時間播種した。最後に、ストレプトアビジン－フィコエリスリンを室温で３０分間添加した。試料を洗浄し、ｘＰＯＮＥＮＴソフトウェアを使用してＬｕｍｉｎｅｘ ２００（ＸＭＡＰ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）上で分析した。
クロム放出アッセイ

標準的な４時間クロム（Ｃｒ５１）放出アッセイを使用して、標的として自己抗原負荷ＰＨＡ芽球（２０ｎｇ／ペプミックス／１ｘ１０６標的細胞）を用いてマルチＲ－ＶＳＴの特異的な細胞溶解活性を測定した。４０：１、２０：１、１０：１及び５：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比を使用して、特異的溶解を分析した。特異的溶解のパーセンテージを［（実験的放出－自発的放出）／（最大放出－自発的放出）］ｘ１００で計算した。マルチＲ－ＶＳＴ株の自己反応及びアロ反応の可能性を測定するために、自己及び同種異系ＰＨＡ芽球のみを標的として使用した。
実施例２
健常ドナーからのポリクローナルマルチＲ－ＶＳＴの作製

本研究では、発明者らは、エクスビボで増殖させたＴ細胞を使用して、複数の臨床的に問題のある呼吸器ウイルスを標的化する可能性を調査した。具体的には、発明者らは、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びＰＩＶに対する特異性を有するＶＳＴを作製し、活動性感染を首尾よく制御した移植レシピエントにおける臨床的有効性を実証した。
背景

ＣＡＲＶ関連の急性の上及び下ＲＴＩは、公衆衛生の大きな問題であり、幼児、高齢者及び免疫系が抑制されているか又は損なわれている者が最も脆弱である（１～３）。これらの感染は、咳、呼吸困難及び喘鳴を含む症状を付随し、二重／複数の共存感染が一般的であり、５歳未満の小児では４０％を超え得る頻度であり、罹患及び入院のリスク上昇を伴う（２２～２６）。免疫無防備状態の同種異系ＨＳＣＴレシピエントの中で、最大４０％が、軽度（鼻漏、咳及び発熱を含む関連症状）～重度（細気管支炎及び肺炎）の範囲に及び得るＣＡＲＶ感染を経験し、関連する死亡率はＬＲＴＩ患者で５０％もの高さである（５～９）。治療選択肢は限られている。ｈＭＰＶ及びＰＩＶについては、現在承認されている予防ワクチンも治療用抗ウイルス薬もないが、ヌクレオシド類似体ＲＢＶの適応外使用及びＤＡＳ－１８１（組換えシアリダーゼ融合タンパク質）の研究使用は臨床的な効果が限定的であった（１０、１１、２７、２８）。予防のための年１回のインフルエンザワクチンは、同種異系ＨＳＣＴレシピエントに対しては移植後少なくとも６ヶ月まで推奨されず（そして、強化化学療法又は抗Ｂ細胞抗体のレシピエントでは除外される）、一方でノイラミニダーゼ阻害剤は、活動性感染症の処置に常に有効であるとは限らない（１２）。ＲＳＶの場合、エアロゾル化ＲＢＶは、乳児及び小児における重度の細気管支炎の処置についてＦＤＡから承認されており、ＨＳＣＴレシピエントにおける上又は下ＲＴＩの予防及びＲＳＶ肺炎の処置のためにも適応外使用される（１３、１５、１６）。しかし、薬物送達のために面倒な噴霧装置及び人工呼吸システムが必要であること並びに関連コストが高額になることによって、その広範な使用が限られる。例えば、２０１５年では、エアロゾル化ＲＢＶのコストは１日当たり２９，９５３ドルであり、典型的な治療コースは５日間である（１４）。従って、抗ウイルス剤のコストが高いことと合わせて、承認された処置がないことから、発明者らは、この患者集団でのＣＡＲＶ感染予防及び／又は処置のための養子移入Ｔ細胞の使用に対する可能性を探ることとした。

ＣＡＲＶのウイルス制御に介在する際の機能的Ｔ細胞免疫の極めて重要な役割は、最近になってようやく注目を集めるようになった。例えば、ＲＳＶ ＵＲＴＩを有する１８１名のＨＳＣＴ患者の後ろ向き研究から、感染がＬＲＴＩに進行する患者を同定する際の重要な決定因子としてリンパ球減少症（ＡＬＣ≦１００／ｍｍ３と定義される）が報告されたが、一方でＲＳＶ中和抗体レベルは疾患進行と顕著な関連はなかった（２９）。さらに、ＲＳＶ ＬＲＴＩについて処置されたＨＳＣＴを有するか又は有しない血液悪性腫瘍の１５４名の成人患者の最近の後ろ向き分析では、リンパ球減少症はより高い死亡率と有意に関連していた（３０）。これらの研究は両方とも、インビボでの防御免疫への介在における細胞性免疫の重要性を示唆している。
ドナー及び細胞株

Ｂａｙｌｏｒ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ＩＲＢ承認プロトコール（Ｈ－７６３４、Ｈ－７６６６）を使用して、インフォームドコンセントがある健康なボランティア及びＨＳＣＴレシピエントから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得て、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）芽球及びマルチＲ－ＶＳＴを作製するために使用した。ＰＨＡ芽球を以前に報告されたように生成させ（２０）、インターロイキン２（ＩＬ２）（１００Ｕ／ｍＬ；ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）（２日ごとに補充）を添加したＶＳＴ培地［４５％ＲＰＭＩ １６４０（ＨｙＣｌｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）、４５％Ｃｌｉｃｋ’ｓ培地（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎｔａ Ａｎａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ ＴＭ－Ｉ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）及び１０％ヒトＡＢ血清（Ｖａｌｌｅｙ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｗｉｎｃｈｅｓｔｅｒ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）］中で培養した。ＶＳＴ生成
複数の呼吸器ウイルスに特異的なＴ細胞の作製及び表現型の特徴評価

発明者らは、以下の方法によって、インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びＰＩＶに対して反応性がある細胞のサブ集団を含有するウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）Ｔ細胞株を作製した：

ＰＢＭＣ（２．５ｘ１０^７）を上記のように回収し、次いで、ＩＬ７（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ４（８００Ｕ／ｍｌ）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）及びペプミックス（２ｎｇ／ペプチド／ｍｌ）を添加した１００ｍｌのＶＳＴ培地を含むＧ－Ｒｅｘ １０（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）に移し、３７℃、５％ＣＯ２で１０～１３日間培養した（図１Ａ）。

ペプミックスは、インフルエンザＡ抗原（ＮＰ１、ＭＰ１）、ＲＳＶ抗原（Ｎ、Ｆ）、ｈＭＰＶ抗原（Ｆ、Ｎ、Ｍ２－１、Ｍ）（ＪＰＴ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）及び抗原ＰＩＶ抗原（Ｍ、ＨＮ、Ｎ、Ｆ）（Ｇｅｎｅｍｅｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓａｎ Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸを参照）にまたがるペプチドライブラリ（１５ｍｅｒ、１１ａａ重複）であった。凍結乾燥ペプミックスをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中で再構成し、使用するまで－８０℃で保存した。
結果

１０～１３日間にわたって、発明者らは、細胞の平均８．５倍の増加を達成した（図１Ｂ）［ＰＢＭＣ ０．２５ｘ１０^７個／ｃｍ^２から平均細胞１．９±０．２ｘ１０^７個／ｃｍ^２に増加（中央値：２．０５ｘ１０^７、範囲：細胞０．６～２．８２ｘ１０^７個／ｃｍ^２；ｎ＝１２）。発明者らは、フローサイトメトリーを使用して、上記のように増殖させた細胞の免疫表現型を解析した。増殖した細胞は、ほぼ排他的にＣＤ３＋Ｔ細胞（９６．２±０．６％；平均±ＳＥＭ）から構成され、ＣＤ４／ＣＤ２５／ＦｏｘＰ３＋染色によって評価した場合、制御Ｔ細胞増殖の証拠はなく、細胞傷害性（ＣＤ ８＋；１８．１±１．３％）Ｔ細胞及びヘルパー（ＣＤ４＋；７４．４±１．７％）Ｔ細胞の混合物［図１Ｃ］を伴っていた［図１Ｅ］。さらに、増殖させた細胞は、活性化マーカーＣＤ２５（５０．２±３．８％）、ＣＤ６９（５２．８±６．３％）、ＣＤ２８（８５．８±２％）の上方制御並びにセントラル（ＣＤ４５ ＲＯ＋／ＣＤ６２Ｌ＋：６１．４±３％）及びエフェクターメモリマーカー（ＣＤ４５ ＲＯ＋／ＣＤ６２Ｌ－：２０．３±２．３％）の発現によって証明されるように、エフェクター機能及び長期記憶と一致する表現型を示し、最小限のＰＤ１（６．９±１．４％）又はＴｉｍ３（１３．５±２．３％）の表面発現があった［図１Ｃ～１Ｄ］。

従って、本明細書中で開示される方法は、消耗の兆候なく活性化細胞傷害性及びヘルパーＴ細胞のポリクローナル集団の急速な増殖をもたらし、このことから、呼吸器ウイルス抗原に対する特異性を有するＶＳＴの増殖が示唆される。
実施例３
マルチＲ－ＶＳＴの抗ウイルス特異性の特徴評価

次に、増殖した集団が抗原特異的であったか否かを決定するために、発明者らは、個々の刺激抗原のそれぞれを免疫原として使用して、ＩＦＮγ及びグランザイムＢ分泌細胞ＥＬＩｓｐｏｔアッセイを行った。ＥＬＩｓｐｏｔ分析を上記のように行った。作製した１２の系統は全て、標的ウイルスの全てに対して反応性があることが証明された［表１、図２Ｅ］。

図２Ａは、各刺激抗原に対する活性の大きさをまとめており、一方で図２Ｆは、ウイルス抗原の滴定濃度に対する発明者らの増殖ＶＳＴの応答を示す。注目すべきことに、培養１０～１３日間にわたって、発明者らは、１４．６±４．３倍（ＰＩＶ－ＨＮ）～５０．４±９．９倍（ＲＳＶ－Ｎ）のウイルス特異的Ｔ細胞の富化を達成した［図２Ｂ；ドナーＰＢＭＣ内のＣＡＲＶ反応性Ｔ細胞の前駆体頻度を図２Ｇで要約する］。まとめると、これらのデータから、呼吸器ウイルス特異的Ｔ細胞がメモリープール内に存在し、ＧＭＰに準拠した製造法を使用してエクスビボで容易に増幅され得ることが示唆される。

次に、ウイルス特異性がＣＤ４＋又はＣＤ８＋又は両方のＴ細胞サブセットとともに含有されたか否かを評価するために、発明者らは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＩＦＮγ産生細胞においてゲーティングして、ＩＣＳを実施した。図２Ｃは、両方のＴ細胞区画［（ＣＤ４＋：インフルエンザ－５．２８％；ＲＳＶ－１１％；ｈＭＰＶ－６．５７％；ＰＩＶ－３．３７％）、（ＣＤ８＋：インフルエンザ－２．２６％；ＲＳＶ－４．３６％；ｈＭＰＶ－２．６９％；ＰＩＶ－２．１６％）］で検出された４つ全てのウイルスに対する活性を有する１名のドナーからの代表的な結果を示し、一方で図２Ｄは、スクリーニングした９名のドナーについての結果の要約を示し、発明者らのマルチＲ－ＶＳＴがポリクローナル及び多特異性であることを確認した。

従って、これらのデータから、これらの方法が、ポリクローナルであり、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方を含むマルチＲ－ＶＳＴを生成させることが確認される。
実施例４
マルチＲ－ＶＳＴのインビトロ有効性の評価

複数の炎症促進性サイトカインの産生及びエフェクター分子の発現は、細胞溶解機能の増強及びインビボＴ細胞活性の向上と相関することが示されている。従って、発明者らは次に、抗原曝露後の発明者らのマルチＲ－ＶＳＴのサイトカインプロファイルを調べた。図３で示されるように、ＩＦＮγ産生細胞の大部分はまた、プロトタイプのＴｈ２／抑制性サイトカインのベースラインレベル［図３Ｃ－右パネル］でＬｕｍｉｎｅｘアレイによって測定されるように［図３Ｃ－左パネル］、ＧＭ－ＣＳＦに加えてＴＮＦαも産生した［図３Ａ－１名のドナーからの詳細なＩＣＳの結果；９名のドナーに対する結果の要約；図３Ｂ］。さらに、抗原刺激時に、発明者らの細胞はエフェクター分子グランザイムＢを産生し、これらの増殖細胞の細胞溶解能が示唆された［図３Ｄ、ｎ＝９］。まとめると、このデータから、発明者らのマルチＲ－ＶＳＴのＴｈ１極性化及び多機能特性が明らかになる。

インビトロでのこれらの増殖細胞の細胞溶解能を調べるために、マルチ－Ｒ－ＶＳＴを自己Ｃｒ５１標識ＰＨＡ芽球と共培養し、ウイルスペプミックスを負荷し、非負荷ＰＨＡ芽球を対照とした。図４Ａ及び図４Ｃで示されるように、ウイルス抗原が負荷された標的は、発明者らの増殖マルチ－Ｒ－ＶＳＴ（４０：１ Ｅ：Ｔ－インフルエンザ：１３±５％、ＲＳＶ：３６±８％、ｈＭＰＶ：２６±７％、ＰＩＶ：２２±５％、ｎ＝８）によって特異的に認識され溶解された。最後に、これらのＶＳＴは単一の刺激のみを受けたにもかかわらず、ＨＬＡミスマッチＰＨＡ芽球を標的として使用した場合、非感染自己標的に対する活性の証拠も、同種反応性（移植片対宿主の可能性）の証拠もなかった［図４Ｂ］。これらの細胞が同種異系ＨＳＣＴレシピエントに投与されるべきである場合、これは重要な検討事項である。

従って、マルチ－Ｒ－ＶＳＴはインビトロ有効性を有し、安全である。
実施例５
マルチＲ－ＶＳＴのインビボ有効性の評価

マルチＲ－ＶＳＴの潜在的な臨床的関連性を評価するために、発明者らは、活動性の／最近のＣＡＲＶ感染を有する同種異系ＨＳＣＴレシピエントが、活動性ウイルスエピソード中／その後に高レベルの反応性Ｔ細胞を示したか否かを調べた。図５Ａは、強度軽減前処置を伴う適合血縁ドナー（ＭＲＤ）移植を受けた急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の６４歳男性である患者＃１の結果を示す。患者は、ＨＳＣＴの９ヶ月後に重度のＵＲＴＩを発症し、ＰＣＲ分析によってＲＳＶ関連であることが確認された。患者は感染時には免疫抑制ではなかったが、肺の炎症を制御するために感染診断日にプレドニゾンを投与された。４週間以内に、その患者の症状は特異的抗ウイルス処置なしで回復した。Ｔ細胞免疫がウイルスクリアランスに寄与したか否かを評価するために、発明者らは、その患者の感染の過程にわたってＲＳＶ特異的Ｔ細胞の循環頻度を分析した。感染の直前に、この患者はＲＳＶ抗原Ｎ及びＦ（６．５ＳＦＣ／５ｘ１０^５ＰＢＭＣ）に対して非常に弱い応答を示した。しかし、ウイルス曝露の１ヶ月以内に、ＲＳＶ特異的Ｔ細胞はインビボで増殖し（５２７ ＳＦＣ／５ｘ１０^５ ＰＢＭＣ）、図５Ａで見られるように、反応性細胞の８１倍の増加を表し、その後低下し、ウイルスクリアランスと一致していた。注目すべきことに、観察されたＲＳＶ特異的応答はリンパ球／ＣＤ４＋数の全体的な増加に従わず、従ってＴ細胞増殖がウイルス主導であり、一般的な免疫再構成に起因しないことを示した。同様に、骨髄破壊的前処置を伴う適合非血縁ドナー（ＭＵＤ）移植を受けた急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の２３歳男性である患者＃２は、タクロリムスの漸減投与中、ＨＳＣＴの５ヶ月後に重度のＲＳＶ関連ＵＲＴＩを発症した。その患者の感染は、リバビリンの投与と一致して、１週間以内に症状が回復した。内因性免疫がウイルスクリアランスにも寄与するか否かを調べるために、発明者らは反応性Ｔ細胞数を経時的に監視した。図５Ｂで見られるように、ウイルスクリアランスは、ＲＳＶ特異的Ｔ細胞の循環頻度の増加（ピーク９３ ＳＦＣ／５ｘ１０^５ ＰＢＭＣ）と関連し、その後ベースラインレベルに戻った。同じ患者が、続発する肺炎球菌性肺炎のために移植後７ヶ月で入院し、同時に痰中でｈＭＰＶが検出された（ＰＣＲによる）。その患者の肺炎を抗生物質で処置し、その後の疾患からの回復及びウイルスクリアランスは、ｈＭＰＶ特異的Ｔ細胞（Ｆ、Ｎ、Ｍ２－１及びＭに対して反応性）の顕著な増殖と一致し、４ＳＦＣから７０ＳＦＣのピークまで増加し、その後ベースラインレベルまで低下した［図５Ｃ］。再び、観察されたＲＳＶ及びｈＭＰＶ特異的応答は、リンパ球／ＣＤ４＋数の全体的な増加とは無関係であった。図６は、ＣＡＲＶ感染を発症した３名のさらなるＨＳＣＴレシピエントの結果を示す。患者＃３は、強度軽減前処置を伴うハプロ一致移植を受けたＡＭＬの１５歳女性であり、移植の５週間後に、タクロリムス投与中、ＲＳＶ誘発性ＵＲＴＩ及びＬＲＴＩを発症した。患者にリバビリンを投与し、感染は４週間以内に消散した。発明者らは、ＲＳＶ反応性Ｔ細胞を経時的に監視し、図６Ａで見られ得るように、ウイルスクリアランスは、ＲＳＶ特異的Ｔ細胞の頻度の著しい上昇（０から５０６ＳＦＣ／５ｘ１０^５ ＰＢＭＣ）と一致した。同様に、骨髄破壊的前処置を伴うＭＵＤ移植を受けたＡＬＬの１０歳男性患者である患者＃４は、タクロリムス投与中、ＨＳＣＴの１ヶ月後にＰＩＶ３関連ＵＲＴＩ及びＬＲＴＩを発症した。その患者の感染は、リバビリンの投与と一致して、５週間以内に症状が消散した。内因性免疫がウイルスクリアランスにも寄与するか否かを調べるために、発明者らはＰＩＶ３反応性Ｔ細胞数を経時的に監視した。図６Ｂで見られるように、ウイルスクリアランスは、ＰＩＶ３抗原Ｍ、ＨＮ、Ｎ及びＦに特異的なＴ細胞の循環頻度の上昇（ピーク３８ＳＦＣ／５ｘ１０^５ ＰＢＭＣ）を伴い、その後低下した。最後に、発明者らは、骨髄破壊的前処置を伴うＭＲＤ移植を受け、シクロスポリン投与中、ＨＳＣＴの４ヶ月後に重度のＰＩＶ３関連ＵＲＴＩを発症した慢性肉芽腫性疾患の３歳男性である患者＃５を示す。患者にはリバビリンを投与されたが、（最後の評価時点で）疾患症状を示し続け、ＰＩＶ３特異的Ｔ細胞を実証することができなかった（図６Ｃ）。まとめると、これらのデータから、免疫無防備状態の患者でのウイルス感染の制御におけるＣＡＲＶ特異的Ｔ細胞のインビボでの関連性が示唆される。
結論

呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ、パラインフルエンザウイルス（ＰＩＶ）及びヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）を含む、市中感染する呼吸器ウイルス（ＣＡＲＶ）による呼吸器ウイルス感染は、同種異系造血幹細胞移植（アロＨＳＣＴ）レシピエントの最大４０％で検出され、これらのレシピエントは、致命的となり得る細気管支炎及び肺炎などの重度の疾患を引き起こし得る。これらのＣＡＲＶのための承認された抗ウイルス剤及び養子移入されたエクスビボ増殖ウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）が、アロ－ＨＳＣＴのレシピエントにおける潜伏［エプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ＢＫウイルス（ＢＫＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）］ウイルス及び溶菌性［アデノウイルス（ＡｄＶ）］ウイルスの両方の処置のために臨床的に有益であり得ることを実証するデータがないことを考えると、このアプローチを少なくともインフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びＰＩＶ３に拡大する可能性を探求することが考えられた。

従って、発明者らは、健康なドナー由来のＰＢＭＣを、特定の標的ウイルス［インフルエンザ－ＮＰ１及びＭＰ１；ＲＳＶ－Ｎ及びＦ；ｈＭＰＶ－Ｆ、Ｎ、Ｍ２－１及びＭ；ＰＩＶ３－Ｍ、ＨＮ、Ｎ及びＦ］由来の免疫原性抗原にまたがるペプミックスのカクテル（重複するペプチドライブラリ）に曝露し、続いてＧ－Ｒｅｘ中で活性化サイトカインの存在下で増殖させた。１０～１３日間にわたって、発明者らは平均８．５倍の増殖を達成した（０．２５ｘ１０７ ＰＢＭＣ／ｃｍ２から平均１．９±０．２ｘ１０７細胞／ｃｍ２まで増加；ｎ＝１２）。培養物は、ＣＤ３＋Ｔ細胞（９６．２±０．６％；平均±ＳＥＭ）、細胞傷害性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞及びヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞の混合物をほぼ排他的に含み、活性化マーカーＣＤ２５、ＣＤ６９及びＣＤ２８の上方制御並びにセントラル（ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ６２Ｌ＋）及びエフェクターメモリマーカー（ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ６２Ｌｉ）の発現が上方制御され、ＰＤ１又はＴｉｍ３が最小限であることによって証明されるように、表現型は即時エフェクター機能及び長期持続性と一致していた。個々の刺激抗原のそれぞれを免疫原として使用してＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイでマルチ呼吸ＶＳＴの抗ウイルス特異性を試験した。スクリーニングした１２種類の系統は全て、各標的ウイルスに対して反応性があった［インフルエンザ：平均７３５±７５．６ ＳＦＣ／２ｘ１０５、ＲＳＶ：７５８±６９．８、ｈＭＰＶ：５２６±１００．８、ＰＩＶ３：３９１±９３．７］。増殖させたＶＳＴは、ＴＮＦａ、ＧＭ－ＣＳＦ及びグランザイムＢの産生によって証明されるように、Ｔｈ１極性化エフェクター細胞であり、Ｔｈ２／抑制性サイトカインはベースラインレベルのみであった。

細胞を標準的なＣｒ５１放出アッセイで試験し、この細胞は、ウイルスペプミックスを負荷した自己ＰＨＡ芽球を溶解させることが可能であり（４０：１ Ｅ：Ｔ－インフルエンザ：１３±５％、ＲＳＶ：３６±８％、ｈＭＰＶ：２６±７％、ＰＩＶ：２２±５％、ｎ＝８）、自己反応性又は同種反応性の証拠はなく、これにより、ＨＳＣＴレシピエントにおける臨床使用のためのそれらの選択性及びそれらの安全性の両方が証明された。

最後に、これらの所見の臨床的意義を評価するために、発明者らは、活動性ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びＰＩＶ３感染を有する５名の同種異系ＨＳＣＴレシピエントの末梢血を調べた。これらの患者のうち４名は、内因性反応性Ｔ細胞の増幅及びその後のウイルス排除時のベースラインレベルへの復帰と一致して、１～５週間以内にウイルスを制御することに成功したが、一方で１名の患者は感染ウイルスに対する免疫応答を開始することができず、これまで感染を同様に排除することができなかった。このデータは、エクスビボ増殖細胞の養子移入が、自身の細胞性免疫が欠如している患者において臨床的に有益であるはずであることを示唆する。

結論として、発明者らは、ＧＭＰに準拠した製造法を使用して、４つの標的ウイルス：インフルエンザ、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ及びＰＩＶ３に由来する１２種類の免疫優性抗原に対する特異性を有するポリクローナル（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋）複数呼吸器（マルチ－Ｒ）－ＶＳＴの単一調製物を迅速に作製することが実現可能であることを示した。増殖した細胞は、Ｔｈ１に極性化され、多機能性であり、非感染自己又は同種異系標的に対する活性を伴わずにウイルス抗原発現標的細胞に反応して死滅させることが選択的に可能であり、ウイルス標的に対するそれらの選択性及び臨床使用に対するそれらの安全性の両方が証明される。様々な実施形態では、このような複数の呼吸器ウイルスを標的とした細胞（マルチＲ－ＶＳＴ）は、免疫無防備状態の個体におけるものを含む、制御されていないＣＡＲＶ感染を有する免疫無防備状態の個体に対して広範囲の利益を提供する。
実施例６
健康なドナーからのポリクローナルＲＳＶ特異的ＶＳＴの作製

ＲＳＶは、特に危険な呼吸器疾患である。これにより、米国で毎年５７，０００人を超える幼児（＜５歳）が入院し、米国においては成人（＞６５歳）で毎年１７７，０００人が入院し、１４，０００人が死亡している（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）。ＲＳＶは、肺炎などの疾患を引き起こす下気道感染症に進行することが多いが、これは致死的であり得（Ｐａｕｌｓｅｎ ａｎｄ Ｄａｎｚｉｇｅｒ－Ｉｓａｋｏｖ，Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｓｔ Ｍｅｄ ３８（２０１７））、同種異系造血幹細胞移植又は固形臓器移植を受けた患者を含む免疫無防備状態の個体における疾患の主な原因である。さらに、リバビリンは、ＲＳＶによって引き起こされる重度の肺炎を有する小児を処置することについてＦＤＡに承認されているものの、この処置は費用が高額であり、投与が難しく、毒性の問題を付随しており、他の患者群に対しては承認されていない。従って、効果的なＲＳＶ処置が当技術分野で大いに必要とされている。

図７で示されるように、上記の実施例に記載のマルチ－Ｒ－ＶＳＴに含まれていたＲＳＶ抗原Ｎ及びＦに加えて、ＲＳＶゲノムには他の抗原：Ｇ、Ｍ２－１、Ｍ、ＮＳ１、ＮＳ２、Ｍ２－２、Ｐ、Ｌ及びＳＨも含まれる（図７）。ペプミックスＲＳＶ抗原Ｎ及びＦのみを用いて作製されたにもかかわらず、ＲＳＶ感染症を処置するための発明者らのマルチＲ－ＶＳＴの有効性が実証されたので、発明者らは、より広範囲のＲＳＶ抗原に対する特異性を有するＶＳＴを発明者らが作製し得るか否かを調べることを目指した。

その目的のために、ＰＢＭＣを実施例１に記載されるように単離し、図８で示されるように、２．５ｘ１０^６個／ｃｍ^２のＰＢＭＣを、実施例１及び２に記載されるように１０～１５日間、ＩＬ４、ＩＬ７及び上記ＲＳＶ抗原の全てをカバーするペプミックスとともに培養した。
結果

１０日間にわたって、発明者らは平均およそ５倍の細胞増加を達成した（図９Ａ）。発明者らは、フローサイトメトリーを使用して、上記のように増殖させた細胞の免疫表現型を解析した。増殖した細胞には、細胞傷害性（ＣＤ８＋；約３３％）Ｔ細胞及びヘルパー（ＣＤ４＋；約６６％）Ｔ細胞の混合物ととともに、ほぼ排他的にＣＤ３＋Ｔ細胞が含まれていた ［図９Ｂ］。さらに、増殖させた細胞は、活性化マーカーＣＤ２５、ＣＤ６９及びＣＤ２８の上方制御及び最小限のＰＤ１又はＴｉｍ３表面発現によって証明されるように、エフェクター機能及び長期記憶と一致する表現型を示した［図９Ｃ］。

発明者らは、抗原曝露後の発明者らのＲＳＶ－ＶＳＴのサイトカインプロファイルを調べた。図１０Ａで示されるように、ＶＳＴは、ＲＳＶ抗原Ｎ、Ｆ、及びＧに応答して大量のＩＦＮγ産生し、他のＲＳＶ抗原の添加によって誘導された応答は弱かった。ペプミックス刺激後にグランザイムＢ産生の同様のプロファイルが見られ、これらの増殖細胞の細胞溶解能が示唆された［図１０Ｂ］。さらに、Ｔｈ１サイトカインＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ及びＴＮＦα（図１１Ａ）並びにＴｈ ２サイトカインＩＬ－５、ＩＬ－６及びＩＬ－１０（図１１Ｂ）の分析から、ＲＳＶ特異的ＶＳＴがＴｈ１に傾斜することが明確に示された。まとめると、これらのデータから、発明者らのマルチＲ－ＶＳＴのＴｈ１極性化及び多機能特性が明らかになる。

従って、本明細書中で開示される方法により、枯渇の兆候なく、活性化細胞傷害性Ｔ細胞及びヘルパーＴ細胞のポリクローナル集団の急速な増殖が起こり、ＲＳＶ抗原に対する特異性を有するＶＳＴの増殖が示唆される。

上述した様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供し得る。本明細書中で言及され、及び／又は出願データシートに列挙される米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願及び非特許刊行物は全て、その全体において参照により本明細書に組み込まれる。実施形態の態様は、必要に応じて、またさらなる実施形態を提供するために様々な特許、出願及び刊行物の概念を使用するために修正され得る。

上記の詳細な説明に照らして、これら及び他の変更が実施形態に対して行われ得る。一般に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、特許請求の範囲を明細書及び特許請求の範囲で開示される特定の実施形態に限定すると解釈されるべきではなく、このような特許請求の範囲が権利を有する同等物の全範囲とともに全ての可能な実施形態を含むと解釈されるべきである。従って、特許請求の範囲は本開示によって限定されない。

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Claims (60)

1. 複数のウイルス抗原を認識する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）のポリクローナル集団を含む組成物であって、前記複数のウイルス抗原が、ＰＩＶ由来の少なくとも１つの第１の抗原と、１つ以上の第２のウイルス由来の少なくとも１つの第２の抗原と、を含む、組成物。
2. 前記ＣＴＬが、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を複数のペプミックスライブラリと接触させることによって作製され、各ペプミックスライブラリが、ウイルス抗原の少なくとも一部にまたがる複数の重複ペプチドを含み、前記複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つが、ＰＩＶ－３由来の第１の抗原にまたがり、前記複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つのさらなるペプミックスライブラリが、各第２の抗原にまたがる、請求項１に記載の組成物。
3. 前記ＣＴＬが、Ｔ細胞を複数のペプミックスライブラリで刺激した樹状細胞（ＤＣ）と接触させることによって作製され、各ペプミックスライブラリが、ウイルス抗原の少なくとも一部にまたがる複数の重複ペプチドを含み、前記複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つが、ＰＩＶ－３由来の第１の抗原にまたがり、前記複数のペプミックスライブラリのうち少なくとも１つのさらなるペプミックスライブラリが、各第２の抗原にまたがる、請求項１に記載の組成物。
4. 前記ＣＴＬが、前記ＰＩＶ－３抗原をコードする少なくとも１つのＤＮＡプラスミド及び各第２の抗原をコードする少なくとも１つのＤＮＡプラスミドでヌクレオフェクトされた樹状細胞（ＤＣ）とＴ細胞を接触させることによって作製される、請求項１に記載の組成物。
5. 前記プラスミドが、少なくとも１つのＰＩＶ－３抗原及び前記第２の抗原のうち少なくとも１つをコードする、請求項４に記載の組成物。
6. ＣＤ４＋Ｔリンパ球及びＣＤ８＋Ｔリンパ球を含む、請求項１から５の何れか一項に記載の組成物。
7. αβＴ細胞受容体を発現するＣＴＬを含む、請求項１から６の何れか一項に記載の組成物。
8. ＭＨＣ拘束性ＣＴＬを含む、請求項１から７の何れか一項に記載の組成物。
9. 前記１つ以上の第２のウイルスが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ、ヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１から８の何れか一項に記載の組成物。
10. 前記１つ以上の第２のウイルスが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ、ヒトメタニューモウイルス又はそれらの組み合わせを含む、請求項１から９の何れか一項に記載の組成物。
11. 前記１つ以上の第２のウイルスが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザ、ヒトメタニューモウイルス又はそれらの組み合わせからなる、請求項１から９の何れか一項に記載の組成物。
12. １、２、３又は４つの第１の抗原を含む、請求項１から１１の何れか一項に記載の組成物。
13. 前記第１の抗原が、ＰＩＶ－３抗原Ｍ、ＰＩＶ－３抗原ＨＮ、ＰＩＶ－３抗原Ｎ、ＰＩＶ－３抗原Ｆ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
14. 以下の４つの第１の抗原：ＰＩＶ－３抗原Ｍ、ＰＩＶ－３抗原ＨＮ、ＰＩＶ－３抗原Ｎ、及びＰＩＶ－３抗原Ｆを含む、請求項１２に記載の組成物。
15. ２つ又は３つの第２のウイルスを含む、請求項１から１４の何れか一項に記載の組成物。
16. ３つの第２のウイルスを含む、請求項１から１５の何れか一項に記載の組成物。
17. 前記３つの第２のウイルスがインフルエンザ、ＲＳＶ及びｈＭＰＶである、請求項１６に記載の組成物。
18. 各第２のウイルスあたり少なくとも２つの第２の抗原を含む、請求項１から１７の何れか一項に記載の組成物。
19. １、２、３、４、５、６、７又は８個の第２の抗原を含む、請求項１から１７の何れか一項に記載の組成物。
20. 前記第２の抗原が、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｎ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１から１９の何れか一項に記載の組成物。
21. 前記第２の抗原が、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１又はその両方を含む、請求項１９に記載の組成物。
22. 前記第２の抗原が、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ又はその両方を含む、請求項１９に記載の組成物。
23. 前記第２の抗原が、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｎ及びそれらの組み合わせを含む、請求項１９に記載の組成物。
24. 前記第２の抗原が、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎのそれぞれを含む、請求項１９に記載の組成物。
25. 前記複数の抗原が、ＰＩＶ－３抗原Ｍ、ＰＩＶ－３抗原ＨＮ、ＰＩＶ－３抗原Ｎ、ＰＩＶ－３抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎを含む、請求項１から８の何れか一項に記載の組成物。
26. 前記複数の抗原が、ＰＩＶ－３抗原Ｍ、ＰＩＶ－３抗原ＨＮ、ＰＩＶ－３抗原Ｎ、ＰＩＶ－３抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎからなるか又は基本的にそれらからなる、請求項１から８の何れか一項に記載の組成物。
27. 前記ＣＴＬが、ＩＬ－７及びＩＬ－４の両方の存在下でエクスビボで培養される、請求項１から２６の何れか一項に記載の組成物。
28. マルチウイルスＣＴＬが、患者への投与のための準備が整うように、培養の９～１８日以内に十分に増殖している、請求項１から２７の何れか一項に記載の組成物。
29. 前記ＣＴＬが、
    ａ．無視できるアロ反応性；
    ｂ．患者から回収された抗原特異的Ｔ細胞の活性化誘導細胞死が、同じ患者から回収されたがＩＬ－７及びＩＬ－４の両方の存在下で培養されなかった対応する抗原特異的Ｔ細胞よりも少ないこと；及び
    ｃ．７０％を超える生存率
    から選択される１つ以上の特性を示す、請求項１から２８の何れか一項に記載の組成物。
30. 前記組成物が、培養下で少なくとも７日間、細菌及び真菌に対して陰性であり；５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示し、マイコプラズマについて陰性である、請求項１から２９の何れか一項に記載の組成物。
31. 前記ペプミックスが化学合成されたものであり、任意選択的に＞９０％である純度である、請求項１から３０の何れか一項に記載の組成物。
32. 前記ＣＴＬがＴｈ１極性化される、請求項１から３１の何れか一項に記載の組成物。
33. 前記ＣＴＬがウイルス抗原発現標的細胞を溶解可能である、請求項１から３２の何れか一項に記載の組成物。
34. 前記ＣＴＬが非感染自己又は同種異系標的細胞を顕著に溶解させない、請求項１から３３の何れか一項に記載の組成物。
35. 前記組成物が、培養下で少なくとも７日間細菌及び真菌に対して陰性であり；５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示し、マイコプラズマについて陰性である、静脈内送達用に処方される請求項１から３４の何れか一項に記載の組成物を含む医薬組成物。
36. 前記標的細胞を請求項１から３４の何れか一項に記載の組成物又は請求項３５に記載の医薬組成物と接触させることを含む、標的細胞を溶解させる方法。
37. 前記接触させることが、対象においてインビボで行われる、請求項３６に記載の方法。
38. 前記接触させることが、対象への前記ＣＴＬの投与を介してインビボで行われる、請求項３６又は３７に記載の方法。
39. ウイルス感染の処置又は予防を必要とする対象に請求項１から３４の何れか一項に記載の組成物又は請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、ウイルス感染を処置又は予防する方法。
40. ５ｘ１０^６～５ｘ１０^７ＣＴＬ／ｍ^２が前記対象に投与される、請求項３８又は３９に記載の方法。
41. 前記対象が免疫無防備状態である、請求項３８から４０の何れか一項に記載の方法。
42. 前記対象が、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病又は慢性肉芽腫性疾患を有する、請求項３８から４１の何れか一項に記載の方法。
43. 前記対象が、前記ＣＴＬを受ける前に、
    ａ．強度軽減前処置を伴う適合血縁ドナー移植；
    ｂ．骨髄破壊的前処置を伴う適合非血縁ドナー移植；
    ｃ．強度軽減前処置を伴うハプロ一致移植；又は
    ｄ．骨髄破壊的前処置を伴う適合血縁ドナー移植
    を受けた、請求項３８から４２の何れか一項に記載の方法。
44. 前記対象が、
    ａ．固形臓器移植を受けたことがある；
    ｂ．化学療法を受けたことがある；
    ｃ．ＨＩＶ感染症を有する；
    ｄ．遺伝的免疫不全を有する；及び／又は
    ｅ．同種異系幹細胞移植を受けたことがある、
    請求項３８から４０の何れか一項に記載の方法。
45. 前記組成物が前記対象に複数回投与される、請求項３８から４４の何れか一項に記載の方法。
46. 前記組成物の投与が、前記対象におけるウイルス感染症を効果的に処置又は予防し、前記ウイルス感染が、パラインフルエンザウイルス３型、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスからなる群から選択される、請求項３８から４５の何れか一項に記載の方法。
47. 前記対象がヒトである、請求項３８から４６の何れか一項に記載の方法。
48. 複数のウイルス抗原を認識する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）のポリクローナル集団を含む組成物であって、前記複数のウイルス抗原が、パラインフルエンザウイルス３型（ＰＩＶ－３）、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスから選択される少なくとも１つの抗原を含む、組成物。
49. 複数のウイルス抗原を認識する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）のポリクローナル集団を含み、前記複数のウイルス抗原が、パラインフルエンザウイルス３型、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスのそれぞれからの少なくとも１つの抗原を含む、請求項４８に記載の組成物。
50. 複数のウイルス抗原を認識する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）のポリクローナル集団を含み、前記複数のウイルス抗原が、パラインフルエンザウイルス３型、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスのそれぞれからの少なくとも２つの抗原を含む、請求項４８に記載の組成物。
51. 前記複数の抗原が、ＰＩＶ－３抗原Ｍ、ＰＩＶ－３抗原ＨＮ、ＰＩＶ－３抗原Ｎ、ＰＩＶ－３抗原Ｆ、インフルエンザ抗原ＮＰ１、インフルエンザ抗原ＭＰ１、ＲＳＶ抗原Ｎ、ＲＳＶ抗原Ｆ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ、ｈＭＰＶ抗原Ｍ２－１、ｈＭＰＶ抗原Ｆ及びｈＭＰＶ抗原Ｎを含むか、それらからなるか又は基本的にそれらからなる、請求項４８から５０の何れか一項に記載の組成物。
52. 静脈内送達用に処方された、請求項４８から５１の何れか一項に記載の組成物を含む、医薬組成物。
53. 培養下で少なくとも７日間、細菌及び真菌に対して陰性であり、５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンを示し、マイコプラズマについて陰性である、請求項５２に記載の医薬組成物。
54. 標的細胞を溶解する方法であって、前記標的細胞を請求項４８から５１の何れか一項に記載の組成物又は請求項５２に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。
55. 前記接触させることが、対象においてインビボで行われる、請求項５４に記載の方法。
56. 前記接触させることが、対象への前記ＣＴＬの投与を介してインビボで行われる、請求項３６又は３７に記載の方法。
57. ウイルス感染の処置又は予防を必要とする対象に請求項４８から５１の何れか一項に記載の組成物又は請求項５２に記載の医薬組成物を投与することを含む、ウイルス感染を処置又は予防する方法。
58. 前記組成物が前記対象に複数回投与される、請求項３８から４４の何れか一項に記載の方法。
59. 前記組成物の投与が、前記対象におけるウイルス感染症を効果的に処置又は予防し、前記ウイルス感染が、パラインフルエンザウイルス３型、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ及びヒトメタニューモウイルスからなる群から選択される、請求項５４から５８の何れか一項に記載の方法。
60. 前記対象がヒトである、請求項５４から５９の何れか一項に記載の方法。

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