JP2022511882A - 獣医学的使用のためのエリスロポエチンアナログ - Google Patents
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Abstract
１つ若しくは複数の追加のグリコシル化部位及び／又は追加のシステイン残基を有するエリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチドアナログ、並びにコンパニオンアニマルの貧血を治療するためにそれらを生成及び使用する方法に関する様々な実施態様が提供される。また、ＥＰＯ受容体の細胞外ドメインを含むポリペプチドに関する様々な実施態様、及び哺乳動物における赤血球増加症を治療するためにそれを使用する方法も提供される。【選択図】図１Ａ
Description
関連出願への相互参照
本出願は、２０１８年１２月１２日に出願された米国仮出願第６２／７７８，８４９号；２０１８年１２月１３日に出願された第６２／７７９，３３２号；及び、２０１８年１２月２７日に出願された第６２／７８５，６９１号に対する優先権の利益を主張し、これらのそれぞれは、任意の目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１８年１２月１２日に出願された米国仮出願第６２／７７８，８４９号；２０１８年１２月１３日に出願された第６２／７７９，３３２号；及び、２０１８年１２月２７日に出願された第６２／７８５，６９１号に対する優先権の利益を主張し、これらのそれぞれは、任意の目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
分野
本開示は、例えば、イヌ、ネコ、ウマなどのコンパニオンアニマルにおける貧血又は慢性腎臓病（ＣＤＫ）などの低酸素関連症状を治療するための、向上した薬物動態を有するエリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチドアナログ、並びにそれらを生成及び使用する方法に関する。本開示は、ＥＰＯポリペプチドをコードする核酸、ベクター、及び発現系、並びにそれらを使用する方法（例えば、遺伝子治療法）、例えば、ＥＰＯポリペプチドの制御された又は誘導された発現に関する。本開示はさらに、本明細書に記載のＥＰＯポリペプチドのための製剤に関する。本開示はまた、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）の細胞外ドメインを含むポリペプチドと、例えば、コンパニオンアニマルにおけるＥＰＯの過剰産生を治療するためにそれを使用する方法とに関する。
本開示は、例えば、イヌ、ネコ、ウマなどのコンパニオンアニマルにおける貧血又は慢性腎臓病（ＣＤＫ）などの低酸素関連症状を治療するための、向上した薬物動態を有するエリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチドアナログ、並びにそれらを生成及び使用する方法に関する。本開示は、ＥＰＯポリペプチドをコードする核酸、ベクター、及び発現系、並びにそれらを使用する方法（例えば、遺伝子治療法）、例えば、ＥＰＯポリペプチドの制御された又は誘導された発現に関する。本開示はさらに、本明細書に記載のＥＰＯポリペプチドのための製剤に関する。本開示はまた、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）の細胞外ドメインを含むポリペプチドと、例えば、コンパニオンアニマルにおけるＥＰＯの過剰産生を治療するためにそれを使用する方法とに関する。
背景
エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、ヘマトポエチン又はヘモポエチンとしても知られ、赤血球生成（すなわち、赤血球産生）を刺激することができる糖タンパク質ホルモンである。ＥＰＯは、慢性腎臓病、炎症性腸疾患（クローン病及び潰瘍性大腸炎）に起因する貧血、化学療法及び放射線療法に起因する脊髄形成異常症の治療のために使用される。これらのヒトの疾患は、時として組換えＥＰＯ分子（例えば、ダルベポエチン（ＡｒａｎｅｓｐＴＭ及びＥｐｏｇｅｎＴＭ、Ａｍｇｅｎ）及びＤｙｎｅｐｏＴＭ（Ｓｈｉｒｅ））で治療される。
エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、ヘマトポエチン又はヘモポエチンとしても知られ、赤血球生成（すなわち、赤血球産生）を刺激することができる糖タンパク質ホルモンである。ＥＰＯは、慢性腎臓病、炎症性腸疾患（クローン病及び潰瘍性大腸炎）に起因する貧血、化学療法及び放射線療法に起因する脊髄形成異常症の治療のために使用される。これらのヒトの疾患は、時として組換えＥＰＯ分子（例えば、ダルベポエチン（ＡｒａｎｅｓｐＴＭ及びＥｐｏｇｅｎＴＭ、Ａｍｇｅｎ）及びＤｙｎｅｐｏＴＭ（Ｓｈｉｒｅ））で治療される。
コンパニオンアニマルは、自己免疫疾患及びがんを含む、ヒト疾患に類似する多くの疾患に罹患している。ヒト蛋白質はコンパニオンアニマル疾患を治療するために使用されてきたが、有意なヒト由来アミノ酸配列含有量を有するタンパク質は、治療された動物に対して免疫原性であり得ることが理解されている。ヒト用の薬物がコンパニオンアニマルで免疫応答を誘発する場合、それは効果的ではない場合がある。Mauldin et al., Aug. 2010, 21(4):373-382を参照。
コンパニオンアニマルの貧血は、現在、ＥｐｏｇｅｎＴＭ又はＡｒａｎｅｓｐＴＭなどのヒトエリスロポエチン薬物を投与することにより治療されている。しかしながら、ヒトＥＰＯ薬物をコンパニオンアニマルに投与した場合、免疫原性反応を引き起こす可能性がある。さらに、ヒトＥＰＯ薬物は、コンパニオンアニマルにおいて、ヒトの場合と同様に有益な治療効果をもたらす様式ではコンパニオンアニマルＥＰＯ受容体と結合しない可能性がある。
したがって、ネコ、イヌ、及びウマを含むコンパニオンアニマルにおける貧血（例えば、非難治性貧血）を治療するために使用できる方法及び化合物については、未だ満たされていない必要性が存在する。理想的には、その化合物はＥＰＯ受容体に特異的に結合し、治療に実用的であるのに十分長い血漿中の半減期を有するが、種特異的であり、高度に免疫原性ではないものであろう。コンパニオンアニマルにおける貧血の治療のための、向上した薬物動態を有するＥＰＯポリペプチド、及びそれらのＥＰＯポリペプチド又はそれらのＥＰＯポリペプチドをコードする核酸を投与する方法が本明細書に記載されている。
ＥＰＯの過剰産生も問題である。例えば、赤血球増加症は、腫瘍（例えば、腎腫瘍）からのＥＰＯの過剰産生及び／若しくは分泌、ＪＡＫ２における非活性化突然変異、又はＥＰＯの過剰産生をもたらす遺伝的に受け継がれた調節不全によって引き起こされ得る。ＥＰＯＲの細胞外ドメインを含むポリペプチド、及びそれらのポリペプチド又はそれらのＥＰＯＲポリペプチドをコードする核酸をコンパニオンアニマルにおける赤血球増加症の治療のために投与する方法。
概要
実施態様１． 配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８に存在しない少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位の存在を除いた、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含むエリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチドであって、ここで、Ｎ結合型グリコシル化部位は、アスパラギン－ｘａａ－セリン又はアスパラギン－ｘａａ－スレオニンの配列を含み、ｘａａはプロリンを除く任意のアミノ酸であり、１つのＮ結合型グリコシル化部位は別のＮ結合型グリコシル化部位と重複しない、エリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチド。
実施態様２． 少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位のそれぞれが、
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４７～４９、５５～５７、５６～５８、６０～６２、６１～６３、７９～８１、８１～８３、８２～８４、９１～９３、９２～９４、９７～９９、９８～１００、９９～１０１、１１２～１１４、１１３～１１５、１１４～１１６、１１５～１１７、１１６～１１８、１３７～１３９、１３８～１４０、１４０～１４２、１４１～１４３、１４２～１４４、１４３～１４５、１４４～１４６、１４５～１４７、１４６～１４８、１４７～１４９、１４８～１５０、１４９～１５１、１５０～１５２、１６１～１６３、１６２～１６４、１８４～１８６、及び１８６～１８８位から選択される位置；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２１～２３、２９～３１、３０～３２、３４～３６、３５～３７、５３～５５、５５～５７、５６～５８、６５～６７、６６～６８、７１～７３、７２～７４、７３～７５、８６～８８、８７～８９、８８～９０、８９～９１、９０～９２、１１１～１１３、１１２～１１４、１１４～１１６、１１５～１１７、１１６～１１８、１１７～１１９、１１８～１２０、１１９～１２１、１２０～１２２、１２１～１２３、１２２～１２４、１２３～１２５、１２４～１２６、１３５～１３７、１３６～１３８、１５８～１６０、及び１６２～１６４位から選択される位置
に存在する、実施態様１に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３． 配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位若しくは１４８位に対応する位置、又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位若しくは１２２位に対応する位置にプロリンを除くアミノ酸を含む、実施態様１又は実施態様２に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４． 配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位若しくは１４８位に対応する位置、又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位若しくは１２２位に対応する位置にバリン又はグルタミン酸を含む、実施態様１から３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様６．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様７．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様８．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様９．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、若しくは配列番号３、若しくは配列番号７の６３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１０．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の７９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１１．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１２．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１３．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号８の９３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１４．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１５．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１６．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１００位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１７．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１００位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１０１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１８．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１９．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２０．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン、及び任意選択的に、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン、及び任意選択的に、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸
を含む、実施態様１から１９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２１．
ａ）配列番号１、配列番号３、配列番号７の１１５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２２．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２３．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、若しくは配列番号３、若しくは配列番号７の１３９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２４．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２５．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２６．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２７．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２８．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２９．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３０．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３１．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３２．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３３．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３４．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３５．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３６．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３７．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３８．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１５８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１５９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３９．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４０． 配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、又は配列番号１２１のアミノ酸配列を含む、実施態様１から３９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４１． 配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８に存在しない少なくとも１つのシステインの存在を除いて、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチド。
実施態様４２．
ａ）配列番号１、配列番号３、又は配列番号７の４５、４８、４９、６８、８６、９０、９２、１２０、１４３、１４４、及び／若しくは１７２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、又は配列番号８の１９、２２、２３、４２、６０、６４、６６、９４、１１７、１１８、及び／若しくは１４６位にシステイン
を含む、実施態様１から４１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４３．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４５位及び１７２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１９位及び１４６位にシステイン
を含む、実施態様４１又は実施態様４２に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４４．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４８位及び１２０位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２２位及び９４位にシステイン
を含む、実施態様４１から４３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４５．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４９位及び１７２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２３位及び１４６位にシステイン
を含む、実施態様４１から４４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４６．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６８位及び９２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の４２位及び６６位にシステイン
を含む、実施態様４１から４５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４７．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９０位及び１４４位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６４位及び１１８位にシステイン
を含む、実施態様４１から４６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４８．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８６位及び１４３位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６０位及び１１７位にシステイン
を含む、実施態様４１から４７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４９． 配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施態様１から４８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５０． 配列番号７の１６５位に対応する位置又は配列番号８の１３９位に対応する位置にシステイン以外のアミノ酸を含む、請求項１から４９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５１． 配列番号７の１６５位又は配列番号８の１３９位におけるシステイン以外のアミノ酸の存在を除く、配列番号７又は配列番号８のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチド。
実施態様５２． システイン以外のアミノ酸がスレオニン、セリン、又はアラニンである、請求項５０又は５１に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５３． Ｎ結合型グリコシル化部位がアミノ酸誘導体を含む、実施態様１から５２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５４． アミノ酸誘導体がアスパラギン誘導体、セリン誘導体、又はスレオニン誘導体である、実施態様５３に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５５． ＥＰＯポリペプチドがグリコシル化されている、実施態様１から５４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５６． Ｎ結合型グリコシル化部位に結合した少なくとも１つのグリカン部分を含む、実施態様１から５５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５７． ＥＰＯポリペプチドがＰＥＧ化されている、実施態様１から５６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５８． ＥＰＯポリペプチドがグリカンでＰＥＧ化されている、実施態様１から５７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５９． ＥＰＯポリペプチドが一級アミンでＰＥＧ化されている、実施態様１から５８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様６０． ＥＰＯポリペプチドがＮ末端のアルファアミンでＰＥＧ化されている、実施態様１から５９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様６１． 連続したポリペプチドがＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む、実施態様１から６０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドを含む連続したポリペプチド。
実施態様６２． ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様６１に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６３． ＩｇＧ ＦｃポリペプチドがバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様６２に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６４． ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して増加したプロテインＡへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；
ｂ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣ１ｑへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；及び／又は
ｃ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣＤ１６への結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾
を含むバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様６０から６３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６５． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ超、１×１０－５Ｍ超、５×１０－５Ｍ超、１×１０－４Ｍ超、５×１０－４Ｍ超、又は１×１０－３Ｍ超の解離定数（Ｋｄ）でＣ１ｑ及び／又はＣＤ１６に結合する、実施態様６０から６４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６６． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、又は１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でプロテインＡに結合する、実施態様６０から６５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６７． コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ又はウマである、実施態様６０から６６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６８． 野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）イヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ；
ｂ）ウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、ＩｇＧ６ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ７ Ｆｃ；又は
ｃ）ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ、ＩｇＧ１ｂ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ２ Ｆｃ
である、実施態様６０から６７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６９． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位に対応する位置でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位及び／若しくは２０２位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から６８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７０． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位、及び／若しくは２０２位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から６９のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７１． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、２０５位に対応する位置にアラニン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、及び／若しくは２４位に対応する位置にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位に対応する位置にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位に対応する位置にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位に対応する位置にロイシン及び／若しくは２００位に対応する位置にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位に対応する位置にロイシン、２００位に対応する位置にヒスチジン、２０１位に対応する位置にアスパラギン、及び／若しくは２０２位に対応する位置にヒスチジン
を含む、実施態様６０から７０のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７２． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、２０５位にアラニン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、及び／若しくは２４位にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位にロイシン及び／若しくは２００位にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位にロイシン、２００位にヒスチジン、２０１位にアスパラギン、及び／若しくは２０２位にヒスチジン
を含む、実施態様６０から７１のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７３． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から７２のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７４． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から７３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７５． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置にアラニン
を含む、実施態様６０から７４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７６． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位にアラニン
を含む、実施態様６０から７５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７７． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から７６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７８． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から７７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７９． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置にイソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置イソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン
を含む、実施態様６０から７８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様８０． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン
を含む、実施態様６０から７９のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様８１． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含む、実施態様６０から８０のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様８２． 等電点電気泳動法により決定される、約１から約３．５、約１．５から約３．５、約２から約３．５、約２．５から約３．５、約３から約３．５、約３．５以下、又は約３以下の等電点の範囲を有する実施態様１から８１のいずれか一項に記載の複数のＥＰＯポリペプチドを含む組成物。
実施態様８３． 等電点電気泳動法により決定される、約３．５から約６、約４から約６、約４．５から約６、約５から約６、約５．５から約６、約３．５から約５、約４から約５、約４．５から約５、約３．５以上、約４以上、又は約４．５以上の範囲の等電点を有する実施態様１から８１のいずれか一項に記載の複数のＥＰＯポリペプチドを含む組成物。
実施態様８４． 実施態様８２に記載の組成物及び実施態様８３に記載の組成物を含む組み合わせ。
実施態様８５． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする単離された核酸。
実施態様８６． 核酸が調節配列を含む、実施態様８５に記載の核酸。
実施態様８７． 調節配列が構成的プロモーター；テトラサイクリン応答エレメント若しくは低酸素誘導性プロモーターなどの誘導性調節配列；組織特異的プロモーター；エンハンサー；サイレンサーである；又はマイクロＲＮＡ若しくは転写因子をコードする、実施態様８６に記載の核酸。
実施態様８８． 配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチドをコードする単離された核酸；及び異種調節配列が構成的プロモーターではない、異種調節配列。
実施態様８９． 異種調節配列が、テトラサイクリン応答エレメント若しくは低酸素誘導性プロモーターなどの誘導性調節配列；組織特異的プロモーター；エンハンサー；サイレンサーである；又はマイクロＲＮＡ若しくは転写因子をコードする、実施態様８８に記載の核酸。
実施態様９０． 実施態様８６から８９のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
実施態様９１． ベクターがウイルスベクター又は細菌ベクターである、実施態様９０に記載のベクター。
実施態様９２． ベクターがレトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、又はポックスウイルスベクターである、実施態様９０又は実施態様９１に記載のベクター。
実施態様９３． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸を含む第１のベクター；及び調節配列を含む第２のベクターを含む発現系。
実施態様９４． 配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチドをコードする核酸を含む第１のベクター；及び調節配列を含む第２のベクターを含む発現系。
実施態様９５． 調節配列がマイクロＲＮＡ又は転写因子をコードする、実施態様９３又は実施態様９４に記載の発現系。
実施態様９６． 第１のベクター及び／又は第２のベクターがウイルスベクター又は細菌ベクターである、実施態様９３から９５のいずれか一項に記載の発現系。
実施態様９７． 第１のベクター及び／又は第２のベクターが、レトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、又はポックスウイルスベクターである、実施態様９３から９６のいずれか一項に記載の発現系。
実施態様９８． 実施態様８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、実施態様９０から９２のいずれか一項に記載のベクター、又は実施態様９４から９７のいずれか一項に記載の発現系を含む宿主細胞。
実施態様９９． 実施態様９８に記載の宿主細胞を培養することと、ＥＰＯポリペプチドを単離することとを含む、ＥＰＯポリペプチドを含む組成物を生成する方法。
実施態様１００． ＥＰＯポリペプチドがカラムクロマトグラフィーによって単離される、実施態様９９に記載の方法。
実施態様１０１． ＥＰＯポリペプチドがイオン交換カラムクロマトグラフィーによって単離される、実施態様９９又は実施態様１００に記載の方法。
実施態様１０２． ＥＰＯポリペプチドがＣａｐｔｏ Ｂｕｔｙｌカラムクロマトグラフィー、陽イオン交換カラムクロマトグラフィー、又は陰イオン交換カラムクロマトグラフィーによって単離される、実施態様９９から１０１のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０３． ＥＰＯポリペプチドが混合モードカラムクロマトグラフィーによって単離される、実施態様９９から１０２のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０４． ＥＰＯポリペプチドが疎水性相互作用カラムクロマトグラフィーによって単離される、実施態様９９から１０３のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０５． ＥＰＯポリペプチドがクロマトグラフィーカラムの組み合わせによって単離される、実施態様９９から１０４のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０６． ウイルスを不活化すること及び／又は除去することをさらに含む、実施態様９９から１０５のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０７． ＥＰＯポリペプチドが、等電点電気泳動法によって決定される、約１から約３．５、約１．５から約３．５、約２から約３．５、約２．５から約３．５、約３から約３．５、約３．５以下、又は約３以下の等電点の範囲を有する、実施態様９９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０８． ＥＰＯポリペプチドが、等電点電気泳動法により決定される、約３．５から約６、約４から約６、約４．５から約６、約５から約６、約５．５から約６、約３．５から約５、約４から約５、約４．５から約５、約３．５以上、約４以上、又は約４．５以上の範囲の等電点を有する、実施態様９９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０９． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、実施態様８４に記載の組み合わせ、実施態様８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、実施態様９０から９２のいずれか一項に記載のベクター、又は実施態様９３から９７のいずれか一項に記載の発現系と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物。
実施態様１１０． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、又は実施態様８４に記載の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、ここで、薬学的に許容される担体が、ａ）リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０；ｂ）リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート２０；ｃ）クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０；又はｄ）クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート２０を含む、薬学的組成物。
実施態様１１１． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、又は実施態様８４に記載の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、ここで、薬学的に許容される担体が、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０、及びｍ－クレゾールを含む、薬学的組成物。
実施態様１１２． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、又は実施態様８４に記載の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、ここで、薬学的に許容される担体が、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ポリソルベート２０、及びベンジルアルコールを含む、薬学的組成物。
実施態様１１３． 塩化ナトリウムの濃度が約１４０ｍＭである、実施態様１１０から１１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１４． リン酸ナトリウム又はクエン酸ナトリウムの濃度が約２０ｍＭである、実施態様１１０から１１３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１５． ポリソルベート２０又はポリソルベート８０の濃度が約６５０ｎＭである、実施態様１１０から１１４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１６． ｍ－クレゾールの濃度が約０．２％である、実施態様１１１、又は１１３から１１５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１７． ベンジルアルコールの濃度が約１％である、実施態様１１２から１１６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１８． 薬学的に許容される担体が、
ａ）約２０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、約１４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート８０、又は
ｂ）約２０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、約１４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート２０
を含む、実施態様１１０から１１７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１９． 薬学的に許容される担体が、約２０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、約１４０ｎＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート８０、及び約０．２％の濃度のｍ－クレゾールを含む、実施態様１１０から１１８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１２０． 薬学的に許容される担体が、約２０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、約１４０ｎＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート２０、及び約１％の濃度のベンジルアルコールを含む、実施態様１１０から１１９のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１２１． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、実施態様８４に記載の組み合わせ、又は実施態様１０９から１２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物を非経口的に投与することを含む、ＥＰＯポリペプチドをコンパニオンアニマル種に送達する方法。
実施態様１２２． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、実施態様８４に記載の組み合わせ、又は実施態様１０９から１２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物を、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄腔内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路、又は吸入経路により投与することを含む、ＥＰＯポリペプチドをコンパニオンアニマル種に送達する方法。
実施態様１２３． 実施態様８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、実施態様９０から９１のいずれか一項に記載のベクター、又は実施態様９３から９７のいずれか一項に記載の発現系を非経口的に投与することを含む、ＥＰＯポリペプチドをコードする単離核酸をコンパニオンアニマル種に送達する方法。
実施態様１２４． 治療的有効量の、実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは８３に記載の組成物、実施態様８４に記載の組み合わせ、又は実施態様１０９から１２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物をコンパニオンアニマル種に投与することを含む、貧血を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法。
実施態様１２５． 貧血を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法であって、治療的有効量の、実施態様８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、実施態様９０から９２のいずれか一項に記載のベクター、又は実施態様９３から９７のいずれか一項に記載の発現系をコンパニオンアニマル種に投与することを含む、方法。
実施態様１２６． ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物が非経口的に投与される、実施態様１２４又は実施態様１２５に記載の方法。
実施態様１２７． ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路、又は吸入経路により投与される、実施態様１２４から１２６のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１２８． コンパニオンアニマル種がネコ、イヌ、又はウマである、実施態様１２１から１２７のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１２９． 貧血が慢性腎臓病、炎症性腸疾患、又は骨髄異形成によって引き起こされる、実施態様１２４から１２８のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３０． ＥＰＯポリペプチドが、約１μｇ／ｋｇ体重から約１０μｇ／ｋｇ体重、又は約１μｇ／ｋｇ体重から約５μｇ／ｋｇ体重、又は約１μｇ／ｋｇ体重、又は約３μｇ／ｋｇ体重、又は約５μｇ／ｋｇ体重、又は約１０μｇ／ｋｇ体重の量で投与される、実施態様１２１から１２９のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３１． ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物が７から１０日ごとに投与される、実施態様１２１から１３０のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３２． 方法が、鉄デキストランを投与することを含む、実施態様１２１から１３１のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３３． コンパニオンアニマル種が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与前に、約１５％から約３０％、約１５％から約２５％、約２０％から約２５％、約２５％から約３０％、約１５％未満、約１８％未満、約２０％未満、約２５％未満、約２９％未満、又は約３０％未満のベースラインヘマトクリット百分率を有する、実施態様１２１から１３２のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３４． コンパニオンアニマル種のヘマトクリット百分率が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与後に、少なくとも２５％、又は少なくとも２６％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも２８％、又は少なくとも２９％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも３８％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４２％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも４８％に増加する、実施態様１２１から１３３のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３５． コンパニオンアニマル種のヘマトクリット百分率が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の最初の投与後、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又は６週間で、少なくとも２５％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３５％に増加する、実施態様１３４に記載の方法。
実施態様１３６． コンパニオンアニマル種の体重が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与後、ベースラインと比較して維持又は増加される、実施態様１２１から１３５のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３７． コンパニオンアニマル種の体重が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の最初の投与後、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又は６週間で維持又は増加される、実施態様１３６に記載の方法。
実施態様１３８． 対称性ジメチルアルギニン又は血清クレアチン腎バイオマーカーのレベルが、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与後、ベースラインと比較して減少する、実施態様１２１から１３７のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３９． 標的細胞中でＥＰＯポリペプチドを発現させる方法において、
ａ）核酸、ベクター、又は発現系を標的細胞に移入することであって、
ここで、核酸、ベクター、又は発現系は、
ｉ）実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸、及び
ｉｉ）調節配列
を含む、移入すること；及び
ｂ）ＥＰＯポリペプチドの発現を支援する条件下で細胞を培養すること
を含む、方法。
実施態様１４０． 標的細胞中でＥＰＯポリペプチドを発現させる方法において、
ａ）核酸、ベクター、又は発現系を標的細胞に移入することであって、
ここで、核酸、ベクター、又は発現系は、
ｉ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を有するＥＰＯポリペプチドをコードする核酸、及び
ｉｉ）構成的プロモーターではない、調節配列
を含む、移入すること；及び
ｂ）ＥＰＯポリペプチドの発現を支援する条件下で細胞を培養すること
を含む、方法。
実施態様１４１． 調節配列が、テトラサイクリン応答エレメント若しくは低酸素誘導性プロモーターなどの誘導性調節配列；組織特異的プロモーター；エンハンサー；サイレンサーである；又はマイクロＲＮＡ若しくは転写因子をコードする、実施態様１３９又は実施態様１４０に記載の方法。
実施態様１４２． ベクターがウイルスベクター又は細菌ベクターである、実施態様１３９から１４１のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４３． ベクターがレトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、又はポックスウイルスベクターである、実施態様１３９から１４２のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４４． 細胞がコンパニオンアニマル種の細胞である、実施態様１３９から１４３のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４５． 細胞が生きているコンパニオンアニマル種に存在する、実施態様１３９から１４４のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４６． コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ、又はウマである、実施態様１４４又は実施態様１４４に記載の方法。
実施態様１４７． イヌ、ウマ、又はネコのエリスロポエチン受容体（ＥＰＯＲ）ポリペプチドの細胞外ドメインを含むポリペプチドであって、イヌ、ウマ、又はネコのＥＰＯＲポリペプチドが、配列番号３３、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、又は配列番号５０のアミノ酸配列；及び異種ポリペプチド配列を含む、ポリペプチド。
実施態様１４８． 配列番号３４、配列番号３５、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、又は配列番号５２のアミノ酸配列；及び異種ポリペプチド配列を含むポリペプチド。
実施態様１４９． 連続したポリペプチドがＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む、実施態様１４７又は実施態様１４８に記載のポリペプチドを含む、連続したポリペプチド。
実施態様１５０． ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様１４９に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５１． ＩｇＧ ＦｃポリペプチドがバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様１４９に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５２． ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して増加したプロテインＡへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；
ｂ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣ１ｑへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；及び／又は
ｃ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣＤ１６への結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾
を含むバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様１４９から１５１のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５３． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ超、１×１０－５Ｍ超、５×１０－５Ｍ超、１×１０－４Ｍ超、５×１０－４Ｍ超、又は１×１０－３Ｍ超の解離定数（Ｋｄ）でＣ１ｑ及び／又はＣＤ１６に結合する、実施態様１４９から１５２のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５４． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、又は１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でプロテインＡに結合する、実施態様１４９から１５３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５５． コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ又はウマである、実施態様１４９から１５４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５６． 野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）イヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ；
ｂ）ウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、ＩｇＧ６ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ７ Ｆｃ；又は
ｃ）ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ、ＩｇＧ１ｂ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ２ Ｆｃ
である、実施態様１４９から１５５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５７． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位に対応する位置でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位及び／若しくは２０２位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１５６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５８． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位、及び／若しくは２０２位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１５７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５９． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、２０５位に対応する位置にアラニン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、及び／若しくは２４位に対応する位置にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位に対応する位置にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位に対応する位置にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位に対応する位置にロイシン及び／若しくは２００位に対応する位置にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位に対応する位置にロイシン、２００位に対応する位置にヒスチジン、２０１位に対応する位置にアスパラギン、及び／若しくは２０２位に対応する位置にヒスチジン
を含む、実施態様１４９から１５８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６０． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、２０５位にアラニン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、及び／若しくは２４位にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位にロイシン及び／若しくは２００位にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位にロイシン、２００位にヒスチジン、２０１位にアスパラギン、及び／若しくは２０２位にヒスチジン
を含む、実施態様１４９から１５９のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６１． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１６０のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６２． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１６１のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６３． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置にアラニン
を含む、実施態様１４９から１６２のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６４． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位にアラニン
を含む、実施態様１４９から１６３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６５． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１６４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６６． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１６５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６７． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置にイソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置イソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン
を含む、実施態様１４９から１６６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６８． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン
を含む、実施態様１４９から１６７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６９． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含む、実施態様１４９から１６８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１７０． 実施態様１４７から１６９のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする単離された核酸。
実施態様１７１． 実施態様１７０に記載の核酸を含む宿主細胞。
実施態様１７２． 実施態様１７１に記載の宿主細胞を培養することと、ポリペプチドを単離することとを含む、ポリペプチドを生成する方法。
実施態様１７３． 実施態様１４７から１６９のいずれか一項に記載のポリペプチド及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
実施態様１７４． 赤血球増加症を有するコンパニオンアニマルを治療する方法であって、治療的有効量の、実施態様１４７から１６９のいずれか一項に記載のポリペプチド、実施態様１７０に記載の核酸、又は実施態様１７３に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含む、方法。
実施態様１７５． ポリペプチド、核酸、又は薬学的組成物が非経口的に投与される、実施態様１７４に記載の方法。
実施態様１７６． ポリペプチド、核酸、又は薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路、又は吸入経路によって投与される、実施態様１７４又は実施態様１７５に記載の方法。
実施態様１７７． コンパニオンアニマル種がネコ、イヌ、又はウマである、実施態様１７４から１７６のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１７８． 赤血球増加症が、ＪＡＫ２における突然変異、腫瘍からのＥＰＯの過剰産生及び／又は分泌によって引き起こされる、実施態様１７４から１７７のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１． 配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８に存在しない少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位の存在を除いた、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含むエリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチドであって、ここで、Ｎ結合型グリコシル化部位は、アスパラギン－ｘａａ－セリン又はアスパラギン－ｘａａ－スレオニンの配列を含み、ｘａａはプロリンを除く任意のアミノ酸であり、１つのＮ結合型グリコシル化部位は別のＮ結合型グリコシル化部位と重複しない、エリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチド。
実施態様２． 少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位のそれぞれが、
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４７～４９、５５～５７、５６～５８、６０～６２、６１～６３、７９～８１、８１～８３、８２～８４、９１～９３、９２～９４、９７～９９、９８～１００、９９～１０１、１１２～１１４、１１３～１１５、１１４～１１６、１１５～１１７、１１６～１１８、１３７～１３９、１３８～１４０、１４０～１４２、１４１～１４３、１４２～１４４、１４３～１４５、１４４～１４６、１４５～１４７、１４６～１４８、１４７～１４９、１４８～１５０、１４９～１５１、１５０～１５２、１６１～１６３、１６２～１６４、１８４～１８６、及び１８６～１８８位から選択される位置；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２１～２３、２９～３１、３０～３２、３４～３６、３５～３７、５３～５５、５５～５７、５６～５８、６５～６７、６６～６８、７１～７３、７２～７４、７３～７５、８６～８８、８７～８９、８８～９０、８９～９１、９０～９２、１１１～１１３、１１２～１１４、１１４～１１６、１１５～１１７、１１６～１１８、１１７～１１９、１１８～１２０、１１９～１２１、１２０～１２２、１２１～１２３、１２２～１２４、１２３～１２５、１２４～１２６、１３５～１３７、１３６～１３８、１５８～１６０、及び１６２～１６４位から選択される位置
に存在する、実施態様１に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３． 配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位若しくは１４８位に対応する位置、又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位若しくは１２２位に対応する位置にプロリンを除くアミノ酸を含む、実施態様１又は実施態様２に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４． 配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位若しくは１４８位に対応する位置、又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位若しくは１２２位に対応する位置にバリン又はグルタミン酸を含む、実施態様１から３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様６．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様７．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様８．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様９．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、若しくは配列番号３、若しくは配列番号７の６３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１０．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の７９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１１．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１２．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１３．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号８の９３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１４．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１５．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１６．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１００位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１７．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１００位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１０１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１８．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様１９．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から１８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２０．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン、及び任意選択的に、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン、及び任意選択的に、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸
を含む、実施態様１から１９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２１．
ａ）配列番号１、配列番号３、配列番号７の１１５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２２．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２３．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、若しくは配列番号３、若しくは配列番号７の１３９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２４．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２５．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２６．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２７．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２８．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様２９．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３０．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から２９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３１．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３２．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３３．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３４．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３５．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３６．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３７．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３８．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１５８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１５９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様３９．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、実施態様１から３８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４０． 配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、又は配列番号１２１のアミノ酸配列を含む、実施態様１から３９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４１． 配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８に存在しない少なくとも１つのシステインの存在を除いて、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチド。
実施態様４２．
ａ）配列番号１、配列番号３、又は配列番号７の４５、４８、４９、６８、８６、９０、９２、１２０、１４３、１４４、及び／若しくは１７２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、又は配列番号８の１９、２２、２３、４２、６０、６４、６６、９４、１１７、１１８、及び／若しくは１４６位にシステイン
を含む、実施態様１から４１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４３．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４５位及び１７２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１９位及び１４６位にシステイン
を含む、実施態様４１又は実施態様４２に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４４．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４８位及び１２０位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２２位及び９４位にシステイン
を含む、実施態様４１から４３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４５．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４９位及び１７２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２３位及び１４６位にシステイン
を含む、実施態様４１から４４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４６．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６８位及び９２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の４２位及び６６位にシステイン
を含む、実施態様４１から４５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４７．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９０位及び１４４位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６４位及び１１８位にシステイン
を含む、実施態様４１から４６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４８．
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８６位及び１４３位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６０位及び１１７位にシステイン
を含む、実施態様４１から４７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様４９． 配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２のアミノ酸配列を含む、実施態様１から４８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５０． 配列番号７の１６５位に対応する位置又は配列番号８の１３９位に対応する位置にシステイン以外のアミノ酸を含む、請求項１から４９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５１． 配列番号７の１６５位又は配列番号８の１３９位におけるシステイン以外のアミノ酸の存在を除く、配列番号７又は配列番号８のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチド。
実施態様５２． システイン以外のアミノ酸がスレオニン、セリン、又はアラニンである、請求項５０又は５１に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５３． Ｎ結合型グリコシル化部位がアミノ酸誘導体を含む、実施態様１から５２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５４． アミノ酸誘導体がアスパラギン誘導体、セリン誘導体、又はスレオニン誘導体である、実施態様５３に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５５． ＥＰＯポリペプチドがグリコシル化されている、実施態様１から５４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５６． Ｎ結合型グリコシル化部位に結合した少なくとも１つのグリカン部分を含む、実施態様１から５５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５７． ＥＰＯポリペプチドがＰＥＧ化されている、実施態様１から５６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５８． ＥＰＯポリペプチドがグリカンでＰＥＧ化されている、実施態様１から５７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様５９． ＥＰＯポリペプチドが一級アミンでＰＥＧ化されている、実施態様１から５８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様６０． ＥＰＯポリペプチドがＮ末端のアルファアミンでＰＥＧ化されている、実施態様１から５９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
実施態様６１． 連続したポリペプチドがＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む、実施態様１から６０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドを含む連続したポリペプチド。
実施態様６２． ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様６１に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６３． ＩｇＧ ＦｃポリペプチドがバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様６２に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６４． ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して増加したプロテインＡへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；
ｂ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣ１ｑへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；及び／又は
ｃ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣＤ１６への結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾
を含むバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様６０から６３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６５． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ超、１×１０－５Ｍ超、５×１０－５Ｍ超、１×１０－４Ｍ超、５×１０－４Ｍ超、又は１×１０－３Ｍ超の解離定数（Ｋｄ）でＣ１ｑ及び／又はＣＤ１６に結合する、実施態様６０から６４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６６． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、又は１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でプロテインＡに結合する、実施態様６０から６５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６７． コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ又はウマである、実施態様６０から６６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６８． 野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）イヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ；
ｂ）ウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、ＩｇＧ６ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ７ Ｆｃ；又は
ｃ）ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ、ＩｇＧ１ｂ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ２ Ｆｃ
である、実施態様６０から６７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様６９． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位に対応する位置でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位及び／若しくは２０２位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から６８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７０． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位、及び／若しくは２０２位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から６９のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７１． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、２０５位に対応する位置にアラニン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、及び／若しくは２４位に対応する位置にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位に対応する位置にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位に対応する位置にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位に対応する位置にロイシン及び／若しくは２００位に対応する位置にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位に対応する位置にロイシン、２００位に対応する位置にヒスチジン、２０１位に対応する位置にアスパラギン、及び／若しくは２０２位に対応する位置にヒスチジン
を含む、実施態様６０から７０のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７２． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、２０５位にアラニン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、及び／若しくは２４位にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位にロイシン及び／若しくは２００位にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位にロイシン、２００位にヒスチジン、２０１位にアスパラギン、及び／若しくは２０２位にヒスチジン
を含む、実施態様６０から７１のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７３． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から７２のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７４． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から７３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７５． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置にアラニン
を含む、実施態様６０から７４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７６． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位にアラニン
を含む、実施態様６０から７５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７７． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から７６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７８． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様６０から７７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様７９． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置にイソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置イソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン
を含む、実施態様６０から７８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様８０． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン
を含む、実施態様６０から７９のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様８１． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含む、実施態様６０から８０のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様８２． 等電点電気泳動法により決定される、約１から約３．５、約１．５から約３．５、約２から約３．５、約２．５から約３．５、約３から約３．５、約３．５以下、又は約３以下の等電点の範囲を有する実施態様１から８１のいずれか一項に記載の複数のＥＰＯポリペプチドを含む組成物。
実施態様８３． 等電点電気泳動法により決定される、約３．５から約６、約４から約６、約４．５から約６、約５から約６、約５．５から約６、約３．５から約５、約４から約５、約４．５から約５、約３．５以上、約４以上、又は約４．５以上の範囲の等電点を有する実施態様１から８１のいずれか一項に記載の複数のＥＰＯポリペプチドを含む組成物。
実施態様８４． 実施態様８２に記載の組成物及び実施態様８３に記載の組成物を含む組み合わせ。
実施態様８５． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする単離された核酸。
実施態様８６． 核酸が調節配列を含む、実施態様８５に記載の核酸。
実施態様８７． 調節配列が構成的プロモーター；テトラサイクリン応答エレメント若しくは低酸素誘導性プロモーターなどの誘導性調節配列；組織特異的プロモーター；エンハンサー；サイレンサーである；又はマイクロＲＮＡ若しくは転写因子をコードする、実施態様８６に記載の核酸。
実施態様８８． 配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチドをコードする単離された核酸；及び異種調節配列が構成的プロモーターではない、異種調節配列。
実施態様８９． 異種調節配列が、テトラサイクリン応答エレメント若しくは低酸素誘導性プロモーターなどの誘導性調節配列；組織特異的プロモーター；エンハンサー；サイレンサーである；又はマイクロＲＮＡ若しくは転写因子をコードする、実施態様８８に記載の核酸。
実施態様９０． 実施態様８６から８９のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
実施態様９１． ベクターがウイルスベクター又は細菌ベクターである、実施態様９０に記載のベクター。
実施態様９２． ベクターがレトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、又はポックスウイルスベクターである、実施態様９０又は実施態様９１に記載のベクター。
実施態様９３． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸を含む第１のベクター；及び調節配列を含む第２のベクターを含む発現系。
実施態様９４． 配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチドをコードする核酸を含む第１のベクター；及び調節配列を含む第２のベクターを含む発現系。
実施態様９５． 調節配列がマイクロＲＮＡ又は転写因子をコードする、実施態様９３又は実施態様９４に記載の発現系。
実施態様９６． 第１のベクター及び／又は第２のベクターがウイルスベクター又は細菌ベクターである、実施態様９３から９５のいずれか一項に記載の発現系。
実施態様９７． 第１のベクター及び／又は第２のベクターが、レトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、又はポックスウイルスベクターである、実施態様９３から９６のいずれか一項に記載の発現系。
実施態様９８． 実施態様８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、実施態様９０から９２のいずれか一項に記載のベクター、又は実施態様９４から９７のいずれか一項に記載の発現系を含む宿主細胞。
実施態様９９． 実施態様９８に記載の宿主細胞を培養することと、ＥＰＯポリペプチドを単離することとを含む、ＥＰＯポリペプチドを含む組成物を生成する方法。
実施態様１００． ＥＰＯポリペプチドがカラムクロマトグラフィーによって単離される、実施態様９９に記載の方法。
実施態様１０１． ＥＰＯポリペプチドがイオン交換カラムクロマトグラフィーによって単離される、実施態様９９又は実施態様１００に記載の方法。
実施態様１０２． ＥＰＯポリペプチドがＣａｐｔｏ Ｂｕｔｙｌカラムクロマトグラフィー、陽イオン交換カラムクロマトグラフィー、又は陰イオン交換カラムクロマトグラフィーによって単離される、実施態様９９から１０１のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０３． ＥＰＯポリペプチドが混合モードカラムクロマトグラフィーによって単離される、実施態様９９から１０２のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０４． ＥＰＯポリペプチドが疎水性相互作用カラムクロマトグラフィーによって単離される、実施態様９９から１０３のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０５． ＥＰＯポリペプチドがクロマトグラフィーカラムの組み合わせによって単離される、実施態様９９から１０４のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０６． ウイルスを不活化すること及び／又は除去することをさらに含む、実施態様９９から１０５のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０７． ＥＰＯポリペプチドが、等電点電気泳動法によって決定される、約１から約３．５、約１．５から約３．５、約２から約３．５、約２．５から約３．５、約３から約３．５、約３．５以下、又は約３以下の等電点の範囲を有する、実施態様９９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０８． ＥＰＯポリペプチドが、等電点電気泳動法により決定される、約３．５から約６、約４から約６、約４．５から約６、約５から約６、約５．５から約６、約３．５から約５、約４から約５、約４．５から約５、約３．５以上、約４以上、又は約４．５以上の範囲の等電点を有する、実施態様９９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１０９． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、実施態様８４に記載の組み合わせ、実施態様８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、実施態様９０から９２のいずれか一項に記載のベクター、又は実施態様９３から９７のいずれか一項に記載の発現系と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物。
実施態様１１０． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、又は実施態様８４に記載の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、ここで、薬学的に許容される担体が、ａ）リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０；ｂ）リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート２０；ｃ）クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０；又はｄ）クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート２０を含む、薬学的組成物。
実施態様１１１． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、又は実施態様８４に記載の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、ここで、薬学的に許容される担体が、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０、及びｍ－クレゾールを含む、薬学的組成物。
実施態様１１２． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、又は実施態様８４に記載の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、ここで、薬学的に許容される担体が、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ポリソルベート２０、及びベンジルアルコールを含む、薬学的組成物。
実施態様１１３． 塩化ナトリウムの濃度が約１４０ｍＭである、実施態様１１０から１１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１４． リン酸ナトリウム又はクエン酸ナトリウムの濃度が約２０ｍＭである、実施態様１１０から１１３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１５． ポリソルベート２０又はポリソルベート８０の濃度が約６５０ｎＭである、実施態様１１０から１１４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１６． ｍ－クレゾールの濃度が約０．２％である、実施態様１１１、又は１１３から１１５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１７． ベンジルアルコールの濃度が約１％である、実施態様１１２から１１６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１８． 薬学的に許容される担体が、
ａ）約２０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、約１４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート８０、又は
ｂ）約２０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、約１４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート２０
を含む、実施態様１１０から１１７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１１９． 薬学的に許容される担体が、約２０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、約１４０ｎＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート８０、及び約０．２％の濃度のｍ－クレゾールを含む、実施態様１１０から１１８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１２０． 薬学的に許容される担体が、約２０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、約１４０ｎＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート２０、及び約１％の濃度のベンジルアルコールを含む、実施態様１１０から１１９のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
実施態様１２１． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、実施態様８４に記載の組み合わせ、又は実施態様１０９から１２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物を非経口的に投与することを含む、ＥＰＯポリペプチドをコンパニオンアニマル種に送達する方法。
実施態様１２２． 実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは実施態様８３に記載の組成物、実施態様８４に記載の組み合わせ、又は実施態様１０９から１２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物を、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄腔内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路、又は吸入経路により投与することを含む、ＥＰＯポリペプチドをコンパニオンアニマル種に送達する方法。
実施態様１２３． 実施態様８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、実施態様９０から９１のいずれか一項に記載のベクター、又は実施態様９３から９７のいずれか一項に記載の発現系を非経口的に投与することを含む、ＥＰＯポリペプチドをコードする単離核酸をコンパニオンアニマル種に送達する方法。
実施態様１２４． 治療的有効量の、実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、実施態様８２若しくは８３に記載の組成物、実施態様８４に記載の組み合わせ、又は実施態様１０９から１２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物をコンパニオンアニマル種に投与することを含む、貧血を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法。
実施態様１２５． 貧血を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法であって、治療的有効量の、実施態様８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、実施態様９０から９２のいずれか一項に記載のベクター、又は実施態様９３から９７のいずれか一項に記載の発現系をコンパニオンアニマル種に投与することを含む、方法。
実施態様１２６． ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物が非経口的に投与される、実施態様１２４又は実施態様１２５に記載の方法。
実施態様１２７． ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路、又は吸入経路により投与される、実施態様１２４から１２６のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１２８． コンパニオンアニマル種がネコ、イヌ、又はウマである、実施態様１２１から１２７のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１２９． 貧血が慢性腎臓病、炎症性腸疾患、又は骨髄異形成によって引き起こされる、実施態様１２４から１２８のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３０． ＥＰＯポリペプチドが、約１μｇ／ｋｇ体重から約１０μｇ／ｋｇ体重、又は約１μｇ／ｋｇ体重から約５μｇ／ｋｇ体重、又は約１μｇ／ｋｇ体重、又は約３μｇ／ｋｇ体重、又は約５μｇ／ｋｇ体重、又は約１０μｇ／ｋｇ体重の量で投与される、実施態様１２１から１２９のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３１． ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物が７から１０日ごとに投与される、実施態様１２１から１３０のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３２． 方法が、鉄デキストランを投与することを含む、実施態様１２１から１３１のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３３． コンパニオンアニマル種が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与前に、約１５％から約３０％、約１５％から約２５％、約２０％から約２５％、約２５％から約３０％、約１５％未満、約１８％未満、約２０％未満、約２５％未満、約２９％未満、又は約３０％未満のベースラインヘマトクリット百分率を有する、実施態様１２１から１３２のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３４． コンパニオンアニマル種のヘマトクリット百分率が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与後に、少なくとも２５％、又は少なくとも２６％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも２８％、又は少なくとも２９％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも３８％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４２％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも４８％に増加する、実施態様１２１から１３３のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３５． コンパニオンアニマル種のヘマトクリット百分率が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の最初の投与後、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又は６週間で、少なくとも２５％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３５％に増加する、実施態様１３４に記載の方法。
実施態様１３６． コンパニオンアニマル種の体重が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与後、ベースラインと比較して維持又は増加される、実施態様１２１から１３５のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３７． コンパニオンアニマル種の体重が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の最初の投与後、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又は６週間で維持又は増加される、実施態様１３６に記載の方法。
実施態様１３８． 対称性ジメチルアルギニン又は血清クレアチン腎バイオマーカーのレベルが、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与後、ベースラインと比較して減少する、実施態様１２１から１３７のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３９． 標的細胞中でＥＰＯポリペプチドを発現させる方法において、
ａ）核酸、ベクター、又は発現系を標的細胞に移入することであって、
ここで、核酸、ベクター、又は発現系は、
ｉ）実施態様１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸、及び
ｉｉ）調節配列
を含む、移入すること；及び
ｂ）ＥＰＯポリペプチドの発現を支援する条件下で細胞を培養すること
を含む、方法。
実施態様１４０． 標的細胞中でＥＰＯポリペプチドを発現させる方法において、
ａ）核酸、ベクター、又は発現系を標的細胞に移入することであって、
ここで、核酸、ベクター、又は発現系は、
ｉ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を有するＥＰＯポリペプチドをコードする核酸、及び
ｉｉ）構成的プロモーターではない、調節配列
を含む、移入すること；及び
ｂ）ＥＰＯポリペプチドの発現を支援する条件下で細胞を培養すること
を含む、方法。
実施態様１４１． 調節配列が、テトラサイクリン応答エレメント若しくは低酸素誘導性プロモーターなどの誘導性調節配列；組織特異的プロモーター；エンハンサー；サイレンサーである；又はマイクロＲＮＡ若しくは転写因子をコードする、実施態様１３９又は実施態様１４０に記載の方法。
実施態様１４２． ベクターがウイルスベクター又は細菌ベクターである、実施態様１３９から１４１のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４３． ベクターがレトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、又はポックスウイルスベクターである、実施態様１３９から１４２のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４４． 細胞がコンパニオンアニマル種の細胞である、実施態様１３９から１４３のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４５． 細胞が生きているコンパニオンアニマル種に存在する、実施態様１３９から１４４のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４６． コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ、又はウマである、実施態様１４４又は実施態様１４４に記載の方法。
実施態様１４７． イヌ、ウマ、又はネコのエリスロポエチン受容体（ＥＰＯＲ）ポリペプチドの細胞外ドメインを含むポリペプチドであって、イヌ、ウマ、又はネコのＥＰＯＲポリペプチドが、配列番号３３、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、又は配列番号５０のアミノ酸配列；及び異種ポリペプチド配列を含む、ポリペプチド。
実施態様１４８． 配列番号３４、配列番号３５、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、又は配列番号５２のアミノ酸配列；及び異種ポリペプチド配列を含むポリペプチド。
実施態様１４９． 連続したポリペプチドがＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む、実施態様１４７又は実施態様１４８に記載のポリペプチドを含む、連続したポリペプチド。
実施態様１５０． ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様１４９に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５１． ＩｇＧ ＦｃポリペプチドがバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様１４９に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５２． ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して増加したプロテインＡへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；
ｂ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣ１ｑへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；及び／又は
ｃ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣＤ１６への結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾
を含むバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、実施態様１４９から１５１のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５３． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ超、１×１０－５Ｍ超、５×１０－５Ｍ超、１×１０－４Ｍ超、５×１０－４Ｍ超、又は１×１０－３Ｍ超の解離定数（Ｋｄ）でＣ１ｑ及び／又はＣＤ１６に結合する、実施態様１４９から１５２のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５４． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、又は１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でプロテインＡに結合する、実施態様１４９から１５３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５５． コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ又はウマである、実施態様１４９から１５４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５６． 野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）イヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ；
ｂ）ウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、ＩｇＧ６ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ７ Ｆｃ；又は
ｃ）ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ、ＩｇＧ１ｂ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ２ Ｆｃ
である、実施態様１４９から１５５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５７． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位に対応する位置でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位及び／若しくは２０２位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１５６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５８． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位、及び／若しくは２０２位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１５７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１５９． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、２０５位に対応する位置にアラニン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、及び／若しくは２４位に対応する位置にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位に対応する位置にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位に対応する位置にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位に対応する位置にロイシン及び／若しくは２００位に対応する位置にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位に対応する位置にロイシン、２００位に対応する位置にヒスチジン、２０１位に対応する位置にアスパラギン、及び／若しくは２０２位に対応する位置にヒスチジン
を含む、実施態様１４９から１５８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６０． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、２０５位にアラニン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、及び／若しくは２４位にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位にロイシン及び／若しくは２００位にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位にロイシン、２００位にヒスチジン、２０１位にアスパラギン、及び／若しくは２０２位にヒスチジン
を含む、実施態様１４９から１５９のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６１． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１６０のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６２． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１６１のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６３． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置にアラニン
を含む、実施態様１４９から１６２のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６４． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位にアラニン
を含む、実施態様１４９から１６３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６５． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１６４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６６． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換
を含む、実施態様１４９から１６５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６７． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置にイソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置イソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン
を含む、実施態様１４９から１６６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６８． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン
を含む、実施態様１４９から１６７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１６９． バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含む、実施態様１４９から１６８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
実施態様１７０． 実施態様１４７から１６９のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする単離された核酸。
実施態様１７１． 実施態様１７０に記載の核酸を含む宿主細胞。
実施態様１７２． 実施態様１７１に記載の宿主細胞を培養することと、ポリペプチドを単離することとを含む、ポリペプチドを生成する方法。
実施態様１７３． 実施態様１４７から１６９のいずれか一項に記載のポリペプチド及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
実施態様１７４． 赤血球増加症を有するコンパニオンアニマルを治療する方法であって、治療的有効量の、実施態様１４７から１６９のいずれか一項に記載のポリペプチド、実施態様１７０に記載の核酸、又は実施態様１７３に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含む、方法。
実施態様１７５． ポリペプチド、核酸、又は薬学的組成物が非経口的に投与される、実施態様１７４に記載の方法。
実施態様１７６． ポリペプチド、核酸、又は薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路、又は吸入経路によって投与される、実施態様１７４又は実施態様１７５に記載の方法。
実施態様１７７． コンパニオンアニマル種がネコ、イヌ、又はウマである、実施態様１７４から１７６のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１７８． 赤血球増加症が、ＪＡＫ２における突然変異、腫瘍からのＥＰＯの過剰産生及び／又は分泌によって引き起こされる、実施態様１７４から１７７のいずれか一項に記載の方法。
これら及び他の態様、及び様々な実施態様は、以下により完全に記述される。
特定の配列の記述
表１は、本明細書中で参照される特定の配列の一覧を提供する。
表１は、本明細書中で参照される特定の配列の一覧を提供する。
発明の詳細な説明
本開示は、１つ若しくは複数の追加のグリコシル化部位及び／又は１つ若しくは複数の追加のシステイン残基を有する、野生型イヌＥＰＯポリペプチド（配列番号１：前駆体形態；配列番号２：成熟形態）、野生型ウマＥＰＯポリペプチド（配列番号３：前駆体形態；配列番号４：成熟形態）、及び野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４前駆体（配列番号７、ここでＥ４４は成熟ＥＰＯにおけるＥ１８に対応する）及び野生型ネコＥＰＯ Ｅ１８成熟（配列番号８）ポリペプチドのアナログを提供する。
本開示は、１つ若しくは複数の追加のグリコシル化部位及び／又は１つ若しくは複数の追加のシステイン残基を有する、野生型イヌＥＰＯポリペプチド（配列番号１：前駆体形態；配列番号２：成熟形態）、野生型ウマＥＰＯポリペプチド（配列番号３：前駆体形態；配列番号４：成熟形態）、及び野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４前駆体（配列番号７、ここでＥ４４は成熟ＥＰＯにおけるＥ１８に対応する）及び野生型ネコＥＰＯ Ｅ１８成熟（配列番号８）ポリペプチドのアナログを提供する。
例えば、追加のＮ結合型グリコシル化部位を（単独で又は任意の組み合わせで）導入するのに適したＥＰＯポリペプチドのアミノ酸位置が提供される。ＥＰＯポリペプチドの酸性及び塩基性画分を含むＥＰＯポリペプチドを生成又は精製する方法も、ＥＰＯポリペプチドを使用する治療方法と同様に提供される。ＥＰＯポリペプチドの単回投与及び／又は複数回投与の薬学的組成物のための製剤も記載されている。ＥＰＯポリペプチドをコードする核酸、ベクター、発現系と、遺伝子治療法による制御された発現を含むそれらのポリペプチドを発現する方法とが記載されている。
また、本明細書には、ＥＰＯ受容体の細胞外ドメインを含むポリペプチド、及びコンパニオンアニマルにおける赤血球増加症の治療のためにそれらのＥＰＯＲポリペプチド又はそれらのＥＰＯＲポリペプチドをコードする核酸を投与する方法が記載されている。
読者の便宜のために、本明細書で使用される用語の以下の定義が提供される。
本明細書で使用される場合、Ｋｄなどの数値用語は、科学的測定に基づいて計算されるため、適切な測定誤差の影響を受ける。場合によっては、数値用語は、最も近い有効数字に丸められた数値が含まれてもよい。
本明細書で使用される場合、「ａ」又は「ａｎ」は、特に明記しない限り、「少なくとも１つ」又は「１つ又は複数」を意味する。本明細書で使用される場合、用語「又は」とは、特に明記しない限り、「及び／又は」を意味する。多数項従属請求項の文脈では、他の請求項を参照する際の「又は」の使用は、それらの請求項を代替としてのみ参照する。
例示的なＥＰＯポリペプチド
新規ＥＰＯポリペプチドが提供され、例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号１３に存在しない少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位の存在を除いて、配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチドが提供される。他の例は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、又は配列番号８に存在しない少なくとも１つのシステインの存在を除いて、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチドを含む。
新規ＥＰＯポリペプチドが提供され、例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号１３に存在しない少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位の存在を除いて、配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチドが提供される。他の例は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、又は配列番号８に存在しない少なくとも１つのシステインの存在を除いて、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチドを含む。
「アミノ酸配列」は、タンパク質中のアミノ酸の配列を意味し、配列の１つ又は複数のアミノ酸が化学的に修飾された側鎖を有するアミノ酸の配列、並びに既知の配列と比較して、ＥＰＯ受容体に結合する能力などの所望の特性を排除することなく、１つ又は複数のアミノ酸が置換、挿入又は欠失されたアミノ酸の配列を含む。アミノ酸配列は、ペプチド、オリゴペプチド、又はタンパク質とも呼ばれることがある。
本明細書で使用される「エリスロポエチン」、「ＥＰＯ」、又は「ＥＰＯポリペプチド」は、ＥＰＯの全体又は断片を含むポリペプチドである。
例えば、「ＥＰＯ」は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）、及びコンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、及びウマ）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来のＥＰＯポリペプチドを意味する。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、又は配列番号１２３のアミノ酸配列を含む。
本明細書中で使用される「エリスロポエチン受容体」、「ＥＰＯ受容体」、又は「ＥＰＯＲ」は、ＥＰＯポリペプチドに結合するＥＰＯ受容体の全体又は一部を含むポリペプチドである。
例えば、「ＥＰＯＲ」は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）、及びコンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、及びウマ）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来のＥＰＯＲポリペプチドを意味する。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯＲは、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、又は配列番号５２のアミノ酸配列を含む。
用語「コンパニオンアニマル種」又は「コンパニオンアニマル」は、人間のコンパニオンになるのに適した動物を指す。いくつかの実施態様では、コンパニオンアニマルは、イヌ、ネコ、又はウマである。いくつかの実施態様では、コンパニオンアニマルは、ウサギ、フェレット、モルモット、又はげっ歯類などである。いくつかの実施態様では、コンパニオンアニマルは、ウシ又はブタである。
「細胞外ドメイン」（「ＥＣＤ」）は、膜貫通ドメインを越えて細胞外空間に伸びるポリペプチドの部分である。本明細書中で使用される用語「細胞外ドメイン」は、完全な細胞外ドメインを含み得るか、又はそのリガンドに結合する、１つ又は複数のアミノ酸を欠く切断された細胞外ドメインを含み得る。細胞外ドメインの構成は、どのアミノ酸が膜内にあるかを決定するために使用されるアルゴリズムに依存し得る。異なるアルゴリズムは所与のタンパク質の異なる細胞外ドメインを予測する可能性があり、異なるシステムが所与のタンパク質の異なる細胞外ドメインを発現する可能性がある。
ＥＰＯＲポリペプチドの細胞外ドメインは、ＥＰＯと結合するＥＰＯＲの完全な細胞外ドメイン又は切断された細胞外ドメインを含み得る。いくつかの実施態様では、ＥＰＯＲポリペプチドの細胞外ドメインは、コンパニオンアニマル種に由来するＥＰＯＲポリペプチドの細胞外ドメインである。例えば、いくつかの実施態様では、ＥＰＯＲポリペプチドの細胞外ドメインは、イヌＥＰＯＲ、ネコＥＰＯＲ、ウマＥＰＯＲ、又はヒトＥＰＯＲに由来する。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯＲポリペプチドの細胞外ドメインは、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、又は配列番号５２のアミノ酸配列を含む。
「野生型」は、天然に生じるポリペプチドの非変異バージョン、又はその断片を指す。野生型ポリペプチドは、組換えにより産生されてもよい。
「生物学的に活性な」実体、又は「生物学的活性」を有する実体は、代謝又は生理学的プロセスに関連する又は付随する任意の機能を有する、且つ／又は天然に存在する分子の構造的、調節的、又は生化学的機能を有する実体である。生物学的に活性なポリペプチド又はその断片は、リガンド－受容体相互作用又は抗原－抗体結合を含むが、これらに限定されない生物学的反応に関与することができるものを含む。生物学的活性には、改善された所望の活性、又は減少した望ましくない活性が含まれ得る。実体は、他の分子との分子相互作用に関与する場合、疾患状態を緩和する上で治療的価値を有する場合、免疫応答を誘導する上で予防的価値を有する場合、分子の存在を決定する上で診断的及び／又は予後的価値を有する場合に、生物学的活性を示し得る。
「アナログ」又は「バリアント」は、参照ポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を実質的に保持する単一又は複数のアミノ酸置換、欠失、及び／又は付加によって参照ポリペプチドとは異なるポリペプチドを指すために交換可能に使用される。
本明細書で使用される場合、ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」及び「相同性」は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して、最大のパーセント配列同一性を達成した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない場合の、特定のペプチド又はポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭＥＧＡＬＩＮＥＴＭ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。
いくつかの実施態様では、アナログ又はバリアントは、野生型又は参照配列ポリペプチドと、少なくとも約５０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約６０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約６５％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約７０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約７５％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有する。
本明細書中で使用される場合、「ｎ位に対応する位置」（ここで、ｎは任意の数である）は、対象及び参照ポリペプチドのアミノ酸配列を整列させ、ギャップを導入した後に、参照ポリペプチドのｎ位と整列する対象ポリペプチドのアミノ酸位置を指す。対象ポリペプチドの位置が参照ポリペプチドのｎ位に対応するどうかの目的のためのアラインメントは、当技術分野の技術の範囲内にある様々な方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＣＬＵＳＴＡＬ ＯＭＥＧＡ、ＡＬＩＧＮ又はＭＥＧＡＬＩＧＮＴＭ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して得ることができる。当業者であれば、比較する２つの配列の全長にわたって最大のアライメントを得るのに必要な任意のパラメーターを含む、アラインメントのための適切なパラメーターを決定することができる。いくつかの実施態様では、対象ポリペプチド及び参照ポリペプチドは、異なる長さのものである。
「点突然変異」は、単一のアミノ酸残基が関与する突然変異である。突然変異は、アミノ酸の欠失、１つのアミノ酸残基の別のアミノ酸残基への置換、又は追加のアミノ酸残基の挿入であり得る。
「アミノ酸置換」は、ポリペプチド中の１つのアミノ酸の別のアミノ酸による置換を指す。いくつかの実施態様では、アミノ酸置換は、保存的置換である。非限定的な例示的置換を表２に示す。アミノ酸置換を目的の分子に導入し、その生成物を所望の活性、例えば、保持された／改善された受容体結合、減少した免疫原性、又は改善された薬物動態についてスクリーニングすることができる。
表２
アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ化することができる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを必要とするであろう。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、又は配列番号８に存在しない少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位の存在を除いて、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位は配列アスパラギン－ｘａａ－セリンを含み、ここでｘａａはプロリンを除く任意のアミノ酸である。いくつかの実施態様では、少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位は配列アスパラギン－ｘａａ－スレオニンを含み、ここでｘａａはプロリンを除く任意のアミノ酸である。いくつかの実施態様では、少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位は、別のＮ結合型グリコシル化部位と重複しない。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、又は配列番号７の４７～４９、５５～５７、５６～５８、６０～６２、６１～６３、７９～８１、８１～８３、８２～８４、９１～９３、９２～９４、９７～９９、９８～１００、９９～１０１、１１２～１１４、１１３～１１５、１１４～１１６、１１５～１１７、１１６～１１８、１３７～１３９、１３８～１４０、１４０～１４２、１４１～１４３、１４２～１４４、１４３～１４５、１４４～１４６、１４５～１４７、１４６～１４８、１４７～１４９、１４８～１５０、１４９～１５１、１５０～１５２、１６１～１６３、１６２～１６４、１８４～１８６、及び／又は１８６～１８８のアミノ酸位置にＮ結合型グリコシル化部位を含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、又は配列番号８の２１～２３、２９～３１、３０～３２、３４～３６、３５～３７、５３～５５、５５～５７、５６～５８、６５～６７、６６～６８、７１～７３、７２～７４、７３～７５、８６～８８、８７～８９、８８～９０、８９～９１、９０～９２、１１１～１１３、１１２～１１４、１１４～１１６、１１５～１１７、１１６～１１８、１１７～１１９、１１８～１２０、１１９～１２１、１２０～１２２、１２１～１２３、１２２～１２４、１２３～１２５、１２４～１２６、１３５～１３７、１３６～１３８、１５８～１６０、及び／又は１６２～１６４のアミノ酸位置にＮ結合型グリコシル化部位を含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、又は配列番号７の１１３位又は１４８位に対応するアミノ酸位置にプロリン以外のアミノ酸を含む。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、又は配列番号８の８７位又は１２２位に対応するアミノ酸位置にプロリン以外のアミノ酸を含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、又は配列番号７の１１３位又は１４８位に対応するアミノ酸位置にバリン又はグルタミン酸を含む。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、又は配列番号８の８７位又は１２２位に対応するアミノ酸位置にバリン又はグルタミン酸を含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号４４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、又は配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、以下の表３、表４、又は表５に記載された１つ又は複数のアミノ酸修飾を含む。
表３
表４
表５
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８に存在しない少なくとも１つのシステインの存在を除いて、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、又は配列番号７の４５、４８、４９、６８、８６、９０、９２、１２０、１４３、１４４、及び／若しくは１７２位にシステインを含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、又は配列番号８の１９、２２、２３、４２、６０、６４、６６、９４、１１７、１１８、及び／若しくは１４６位にシステインを含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４５位にシステイン及び１７２位にシステイン；又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１９位にシステイン及び１４６位にシステインを含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４８位にシステイン及び１２０位にシステイン；又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２２位にシステイン及び９４位にシステインを含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４９位にシステイン及び１７２位にシステイン；又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２３位にシステイン及び１４６位にシステインを含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６８位にシステイン及び９２位にシステイン；又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の４２位にシステイン及び６６位にシステインを含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９０位にシステイン及び１４４位にシステイン；又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６４位にシステイン及び１１８位にシステインを含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８６位にシステイン及び１４３位にシステイン；又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６０位にシステイン及び１１７位にシステインを含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号７の１６５位に対応する位置又は配列番号８の１３９位に対応する位置にシステイン以外のアミノ酸を含む。いくつかの実施態様では、システイン以外のアミノ酸は、スレオニン、セリン、又はアラニンである。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号７の１６５位又は配列番号８の１３９位におけるシステイン以外のアミノ酸の存在を除く、配列番号７又は配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、システイン以外のアミノ酸は、スレオニン、セリン、又はアラニンである。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、配列番号１２２又は配列番号１２３のアミノ酸配列を含み、ここで、Ｘは、スレオニン、セリン、又はアラニンなどのシステイン以外のアミノ酸である。
本明細書で使用される「アミノ酸誘導体」は、ヒトに見いだされる２０種類の一般的な天然アミノ酸のうちの１つではない、任意のアミノ酸、修飾アミノ酸、及び／又はアミノ酸アナログを指す。例示的なアミノ酸誘導体には、ヒトには見いだされない天然アミノ酸（例えば、いくつかの微生物に見いだされ得るセレノシステイン及びピロリジン）及び非天然アミノ酸が含まれる。例示的なアミノ酸誘導体には、限定されるものではないが、化学製品製造業者を通じて市販されているアミノ酸誘導体が含まれる（例えば、２０１７年５月６日にアクセスされ、参照により本明細書に組み込まれるｓｉｇｍａａｌｄｒｉｃｈ．ｃｏｍ／ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ／ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ－ｐｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍｌ？ＴａｂｌｅＰａｇｅ＝１６２７４９６５）。宿主細胞、真正細菌合成酵素に由来する直交アミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素、直交ｔＲＮＡ、及びアミノ酸誘導体を利用する翻訳系を使用して、１つ又は複数のアミノ酸誘導体を特定の位置でポリペプチドに組み込むことができる。さらなる説明は、例えば、米国特許第９６２４４８５号を参照のこと。
いくつかの実施様態では、本明細書に記載のＥＰＯポリペプチド又は他のポリペプチドは、アミノ酸誘導体によるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、アミノ酸誘導体は、アスパラギン誘導体、セリン誘導体、スレオニン誘導体、システイン、又はアラニン誘導体である。
本明細書で使用される「グリコシル化」は、１つ又は複数のグリカン部分が共有結合しているポリペプチドを指す。
本明細書で使用される「グリカン」又は「グリカン部分」とは、グリコシド結合した単糖類を指す。
グリカンはいくつかの方法で糖ペプチドに結合しているが、そのうちアスパラギンへのＮ－結合型、セリン及びスレオニンへのＯ－結合型は、組換え治療用糖タンパク質にとって最も重要である。Ｎ結合型グリコシル化は、コンセンサス配列Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒで起こり、ここでＸａａはプロリンを除く任意のアミノ酸であり得る。
本明細書で使用される「シアル酸付加（Ｓｉａｌｙｌａｔｅｄ）」とは、１つ又は複数のシアル酸（ｓｉａｌｙｉｃ ａｃｉｄ）部分が共有結合しているポリペプチドを指す。
グリコシル化及びシアル酸付加タンパク質を産生するための様々なアプローチが開発されている。例えば、Savinova, et al., Applied Biochem & Microbiol. 51(8):827-33 (2015)を参照。
本明細書で使用される「ＰＥＧ化」とは、１つ又は複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分が結合しているか、共有結合又は非共有結合しているポリペプチドを指す。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、グリコシル化されている。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、Ｎ結合型グリコシル化部位に結合した少なくとも１つのグリカン部分を含む。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドはシアル酸付加されている。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドはＰＥＧ化されている。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、グリカンでＰＥＧ化されている。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、一級アミンでＰＥＧ化されている。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、Ｎ末端のアルファアミンでＰＥＧ化されている。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、グリコシル化、シアル酸付加、及び／又はＰＥＧ化されている。
例示的なバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド
新規なバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド、例えば、増加したプロテインＡへの結合、減少したＣ１ｑへの結合、減少したＣＤ１６への結合、増加した安定性、及び／又は増加した組換え産生のためのバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが提供される。
新規なバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド、例えば、増加したプロテインＡへの結合、減少したＣ１ｑへの結合、減少したＣＤ１６への結合、増加した安定性、及び／又は増加した組換え産生のためのバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが提供される。
「断片結晶化可能ポリペプチド」又は「Ｆｃポリペプチド」は、エフェクター分子及び細胞と相互作用する抗体分子の部分である。それは、免疫グロブリン重鎖のＣ末端部分を含む。本明細書で使用される場合、Ｆｃポリペプチドは、Ｆｃポリペプチド全体の１つ又は複数の生物学的活性を有するＦｃドメインの断片を含む。いくつかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、ＦｃＲｎに結合する能力である。いくつかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、Ｃ１ｑに結合する能力である。いくつかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、ＣＤ１６に結合する能力である。いくつかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、プロテインＡに結合する能力である。Ｆｃポリペプチドの「エフェクター機能」は、刺激に応答して任意の抗体によって全体的又は部分的に遂行される作用又は活性であり、補体結合及び／又はＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）誘導を含み得る。
「ＩｇＸ Ｆｃ」は、特定の抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭなど）に由来するＦｃポリペプチドを指し、ここで「Ｘ」は抗体アイソタイプを示す。したがって、「ＩｇＧ Ｆｃ」は、Ｆｃポリペプチドがγ鎖に由来することを示し、「ＩｇＡ Ｆｃ」は、Ｆｃポリペプチドがα鎖に由来することを示し、「ＩｇＤ Ｆｃ」は、Ｆｃポリペプチドがδ鎖に由来することを示し、「ＩｇＥ Ｆｃ」は、Ｆｃポリペプチドがε鎖に由来することを示し、「ＩｇＭ Ｆｃ」は、Ｆｃポリペプチドがμ鎖に由来することを示す。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むが、ＣＨ１又はＣＬは含まない。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、ＣＨ２及びＣＨ３を含むが、ＣＨ１、ヒンジ又はＣＬは含まない。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、ＣＬを伴う又は伴わない、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３を含む。「ＩｇＸ－Ｎ Ｆｃ」又は「ＩｇＧＸＮ Ｆｃ」は、Ｆｃポリペプチドが、抗体アイソタイプの特定のサブクラス（イヌＩｇＧサブクラスＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－Ｃ、若しくはＩｇＧ－Ｄ；ネコＩｇＧサブクラスＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂ、若しくはＩｇＧ２；又はウマＩｇＧサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６、若しくはＩｇＧ７など）に由来することを意味し、ここで「Ｎ」はサブクラスを意味する。
いくつかの実施態様では、ＩｇＸ Ｆｃポリペプチド又はＩｇＸ－Ｎ－Ｆｃポリペプチドは、イヌ、ネコ、又はウマなどのコンパニオンアニマルに由来する。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｂ、ＩｇＧ－Ｃ又はＩｇＧ－Ｄなどのイヌγ重鎖から単離される。場合によっては、ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂ、又はＩｇＧ２などのネコγ重鎖から単離される。他の例では、ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６、又はＩｇＧ７などのウマγ重鎖から単離される。
用語「ＩｇＸ Ｆｃ」及び「ＩｇＸ Ｆｃポリペプチド」には、特に明記しない限り、野生型ＩｇＸ Ｆｃポリペプチド及びバリアントＩｇＸ Ｆｃポリペプチドが含まれる。
「野生型」は、天然に生じるポリペプチドの非変異バージョン、又はその断片を指す。野生型ポリペプチドは、組換えにより産生されてもよい。
いくつかの実施態様では、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５３、５４、５５、５６、５７、５８、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、１０３、１０４、１０５、１０６、又は１０７のアミノ酸配列を含む。
本明細書で使用される「バリアントＩｇＧ Ｆｃ」は、単一又は複数のアミノ酸置換、欠失、及び／又は付加により参照ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドとは異なり、参照ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドの少なくとも１つの生物活性を実質的に保持するＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを指す。いくつかの実施態様では、バリアント（例えば、バリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、バリアントイヌＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、バリアントイヌＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ、バリアントウマＩｇＧ２ Ｆｃ、バリアントウマＩｇＧ５ Ｆｃ、バリアントウマＩｇＧ６ Ｆｃ）は、参照ポリペプチドが実質的に欠いている活性を有する。例えば、いくつかの実施態様では、バリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、バリアントイヌＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、バリアントイヌＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ、バリアントウマＩｇＧ２ Ｆｃ、バリアントウマＩｇＧ５ Ｆｃ、又はバリアントウマＩｇＧ６ Ｆｃは、プロテインＡに結合する。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。
プロテインＡ結合が改変された例示的なバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、改変されたプロテインＡ結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、増加したプロテインＡへの結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して精製され得る。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、改変されたプロテインＡ結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、増加したプロテインＡへの結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して精製され得る。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５４の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／又は２０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の２１位、２３位、及び／又は２４位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／又は２０７位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号８８の１５位、及び／又は２０３位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９２の１９９位、及び／又は２００位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位、及び／又は２０２位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５４の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／又は２０７位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の２１位、２３位、及び／又は２４位にアミノ酸置換を含むいくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／又は２０７位にアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号８８の１５位、及び／又は２０３位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９２の１９９位、及び／又は２００位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位、及び／又は２０２位にアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５３の２１位に対応する位置にスレオニン、配列番号５３の２３位に対応する位置にロイシン、配列番号５３の２５位に対応する位置にアラニン、配列番号５３の８０位に対応する位置にグリシン、配列番号５３の２０５位に対応する位置にアラニン、及び／又は配列番号５３の２０７位に対応する位置にヒスチジンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の２１位に対応する位置にスレオニン、配列番号５６の２３位に対応する位置にロイシン、及び／又は配列番号５６の２４位に対応する位置にイソロイシンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５８の２１位に対応する位置にスレオニン、配列番号５８の２３位に対応する位置にロイシン、配列番号５８の２５位に対応する位置にアラニン、配列番号５３の８０位に対応する位置にグリシン、及び／又は配列番号５８の２０７位に対応する位置にヒスチジンを含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号８８の１５位に対応する位置にスレオニン若しくはバリン、及び／又は配列番号８８の２０３位に対応する位置にチロシン若しくはバリンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９２の１９９位に対応する位置にロイシン、及び／又は配列番号９２の２００位に対応する位置にヒスチジンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９３の１９９位に対応する位置にイソロイシン、配列番号９３の２００位に対応する位置にヒスチジン、配列番号９３の２０１位に対応する位置にアスパラギン、及び／又は配列番号９３の２０２位に対応する位置にヒスチジンを含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５３の２１位にスレオニン、配列番号５３の２３位にロイシン、配列番号５３の２５位にアラニン、配列番号５３の８０位にグリシン、配列番号５３の２０５位にアラニン、及び／又は配列番号５３の２０７位にヒスチジンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の２１位にスレオニン、配列番号５６の２３位にロイシン、及び／又は配列番号５６の２４位にイソロイシンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５８の２１位にスレオニン、配列番号５８の２３位にロイシン、配列番号５８の２５位にアラニン、配列番号５８の８０位にグリシン、及び／又は配列番号５８の２０７位にヒスチジンを含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号８８の１５位にスレオニン若しくはバリン、及び／又は配列番号８８の２０３位にチロシン若しくはバリンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９２の１９９位にロイシン、及び／又は配列番号９２の２００位にヒスチジンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９３の１９９位にイソロイシン、配列番号９３の２００位にヒスチジン、配列番号９３の２０１位にアスパラギン、及び／又は配列番号９３の２０２位にヒスチジンを含む。
ＣＤ１６結合が改変された例示的なバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、改変されたＣＤ１６結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、ＣＤ１６への減少した結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、低減したＡＤＣＣ免疫応答を有し得る。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、改変されたＣＤ１６結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、ＣＤ１６への減少した結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、低減したＡＤＣＣ免疫応答を有し得る。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／又は９８位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／又は９８位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／又は９８位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／又は９８位にアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５４の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置にイソロイシン、及び／又は９８位に対応する位置にグリシンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置にイソロイシン、及び／又は９８位に対応する位置にグリシンを含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５４の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／又は９８位にグリシンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／又は９８位にグリシンを含む。
Ｃ１ｑ結合が改変された例示的なバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチド
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、改変されたＣ１ｑ結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、Ｃ１ｑへの低減した結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、低減した補体結合を有し得る。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、低減した補体媒介性免疫応答を有し得る。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、改変されたＣ１ｑ結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、Ｃ１ｑへの低減した結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、低減した補体結合を有し得る。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃは、低減した補体媒介性免疫応答を有し得る。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５４の９３位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の９３位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号８７の８７位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８７位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９１の８７位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９４の８７位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、又は配列番号１０６の１９８位に対応する位置にアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５４の９３位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の９３位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号８７の８７位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８７位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９１の８７位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９４の８７位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、又は配列番号１０６の１９８位にアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５４の９３位に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の９３位に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号８７の８７位に対応する位置にセリンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８７位に対応する位置にセリン置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９１の８７位に対応する位置にセリンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９４の８７位に対応する位置にセリンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、又は配列番号１０６の１９８位に対応する位置にアラニンを含む。
いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５４の９３位にアルギニンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号５６の９３位にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号８７の８７位にセリンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９０の８７位にセリンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９１の８７位にセリンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号９４の８７位にセリンを含む。いくつかの実施態様では、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドは、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、又は配列番号１０６の１９８位にアラニンを含む。
例示的なＥＰＯ及びＥＰＯＲポリペプチドの発現及び生成
シグナル配列を伴う又は伴わないＥＰＯポリペプチドの全部又は一部をコードするポリヌクレオチド配列が提供される。相同シグナル配列（すなわち、野生型ＥＰＯのシグナル配列）が核酸分子の構築に使用されない場合、別のシグナル配列、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ０６／０２９５１に記載されているシグナル配列のいずれか１つを使用することができる。
シグナル配列を伴う又は伴わないＥＰＯポリペプチドの全部又は一部をコードするポリヌクレオチド配列が提供される。相同シグナル配列（すなわち、野生型ＥＰＯのシグナル配列）が核酸分子の構築に使用されない場合、別のシグナル配列、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ０６／０２９５１に記載されているシグナル配列のいずれか１つを使用することができる。
典型的には、ＥＰＯポリペプチド又は本明細書に記載の別のポリペプチドなどの目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、選択された宿主細胞における発現に適した発現ベクター中に挿入される。
用語「ベクター」は、クローン化ポリヌクレオチド又は宿主細胞内で増殖することができるポリヌクレオチドを含むように操作することができるポリヌクレオチドを記述するために使用される。ベクターは、以下の要素のうちの１つ以上を含むことができる：複製起点、目的のポリペプチドの発現を調節する１つ又は複数の調節配列（例えば、プロモーター又はエンハンサーなど）、あるいは１つ又は複数の選択可能なマーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子及び比色分析において使用され得る遺伝子、例えば、β－ガラクトシダーゼなど）。用語「発現ベクター」は、宿主細胞において目的のポリペプチドを発現するために使用されるベクターを指す。
ベクターは、非ウイルス法（例えば、裸のＤＮＡ、製剤化されたＤＮＡ、若しくはリポソーム）を介して、又はウイルス法を介して送達可能なＤＮＡプラスミドであり得る。いくつかの実施態様では、ベクターは、レトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、又はポックスウイルスベクターなどのウイルスベクターである。ベクターは細菌ベクターであり得る。
本明細書で使用される用語「発現系」は、発現ベクターと少なくとも１つの追加のベクターとの組み合わせを指す。組み合わせは、非ウイルス性又はウイルス性の方法を介して送達され得る。
いくつかの実施態様では、発現系は、発現ベクター及び調節配列（例えば、転写因子又はマイクロＲＮＡをコードする核酸配列）を含むベクターを含む。
本明細書に記載のＥＰＯ又はＥＰＯＲポリペプチドの発現は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＥＰＯ又はＥＰＯＲの過剰な産生を防止するように調節され得る。制御された発現は、免疫原性、赤血球増加症（赤血球の過剰産生）、又はその他の負の作用を低減し得る。テトラサイクリン応答系、マイクロＲＮＡ調節系、又は低酸素誘導系（例えば、低酸素誘導性プロモーター又はエンハンサーを活性化するためのプロリルヒドロキシラーゼの使用）など、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで遺伝子調節を制御する多くの既知の方法がある。
用語「調節配列」（「調節領域」又は「調節エレメント」とも呼ばれる）は、直接的又は間接的に、遺伝子発現及び／又はタンパク質発現を促進及び／又は制御する核酸配列を指す。調節配列は、プロモーター、エンハンサー、サイレンサー、又はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）若しくは転写因子をコードする核酸配列であり得る。調節配列は、遺伝子発現及び／又はタンパク質発現を増加又は減少させ得る。
いくつかの実施態様では、調節配列は、遺伝子発現及び／又はタンパク質発現を制御するために、転写因子などの調節タンパク質に結合する。いくつかの実施態様では、調節配列は、遺伝子発現及び／又はタンパク質発現を制御する転写因子をコードする。いくつかの実施態様では、調節配列は、タンパク質発現を制御するために標的ｍＲＮＡに結合するｍｉＲＮＡをコードする。
いくつかの実施態様では、調節配列は制御可能な調節配列である。いくつかの実施態様では、調節配列は、構成的プロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）などの制御不可能な調節配列である。いくつかの実施態様では、調節配列は、プロモーターなどの正の調節配列である。いくつかの実施態様では、調節配列は、サイレンサーなどの負の調節配列である。いくつかの実施態様では、調節配列は、一過性、誘導性（例えば、テトラサイクリン応答性プロモーター、又は低酸素誘導性プロモーター）、及び／又は組織特異的遺伝子発現及び／又はタンパク質発現を提供する。
いくつかの実施態様では、調節配列は、本開示のＥＰＯポリペプチド（コード配列）をコードする核酸に作動可能に連結されている。調節配列は、コードされたポリペプチドの発現を指示するために機能する限り、コード配列と隣接する必要はない。したがって、例えば、介在する非翻訳ではあるが転写される配列が、プロモーター配列とコード配列との間に存在してもよく、プロモーター配列はなおコード配列と「作動可能に連結されている」と考えてもよい。
いくつかの実施態様では、調節配列は、本開示のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されていない。例えば、調節配列は、ＥＰＯポリペプチドをコードする核酸と同じベクター又は異なるベクターから発現されるマイクロＲＮＡ配列又は転写因子であり得る。
「宿主細胞」は、ベクター又は単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであり得るか、又はレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞でも真核細胞でもよい。例示的な真核細胞には、例えば霊長類又は非霊長類動物細胞などの哺乳動物細胞；酵母などの真菌細胞；植物細胞；及び昆虫細胞が含まれる。非限定的且つ例示的な哺乳動物細胞には、限定されるものではないが、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、２９３細胞及びＣＨＯ細胞、並びにこれらの誘導体、例えば２９３－６Ｅ、ＤＧ－４４、ＣＨＯ－Ｓ及びＣＨＯ－Ｋ細胞が含まれる。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、自然、偶発的又は意図的な突然変異により、子孫は元の親と（形態又はゲノムＤＮＡ相補体が）必ずしも完全に同じではない。宿主細胞には、本明細書で提供されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドをｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞が含まれる。
本明細書で使用される用語「単離された」とは、天然で通常見出されるか又は生成される成分の少なくとも一部から分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の成分の少なくとも一部から分離されている場合、「単離された」という。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、ポリペプチドを含む上清を、それを産生した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離すること」と見なされる。同様に、ポリヌクレオチドが、天然で通常見出されるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡなど）の一部ではない場合、又は、例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合、それが産生された細胞の成分の少なくとも一部から分離されている場合、「単離された」という。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、「単離された」といわれる場合がある。
いくつかの実施態様では、本明細書に記載のＥＰＯポリペプチド又は別のポリペプチドは、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、プロテインＡカラムクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ＣＨＴクロマトグラフィー、及び／又は合成分子結合樹脂クロマトグラフィー（例えば、Ｈｉｓタグアフィニティーカラムクロマトグラフィー）などのクロマトグラフィーを使用して単離される。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のＥＰＯポリペプチド又は別のポリペプチドは、Ｃａｐｔｏ Ｂｕｔｙｌカラムクロマトグラフィー、陽イオン交換カラムクロマトグラフィー、陰イオン交換カラムクロマトグラフィー、及び／又は混合モードカラムクロマトグラフィーを使用して単離される。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のＥＰＯポリペプチド又は別のポリペプチドは、クロマトグラフィー法及び／又はカラムの組み合わせを使用して単離される。
いくつかの実施態様では、生成又は単離の方法は、任意のウイルスを不活化又は除去することをさらに含む。
本明細書で使用される用語「等電点」又は「ｐＩ」とは、等電点電気泳動によって決定される、分子が正味の電荷を持たず、且つ／又は電場内をさらに移動しないｐＨを指す。
本明細書で使用される用語「等電点の範囲」とは、等電点電気泳動によって決定される、複数の分子が正味の電荷を持たず、且つ／又は電場内をさらに移動しないｐＨの範囲を指す。
いくつかの実施態様では、組成物は、等電点電気泳動によって決定される、約１から約３．５、約１．５から約３．５、約２から約３．５、約２．５から約３．５、約３から約３．５、約３．５以下、又は約３以下の等電点の範囲を有するＥＰＯポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、組成物は、等電点電気泳動によって決定される、約１から約３．５、約１．５から約３．５、約２から約３．５、約２．５から約３．５、約３から約３．５、約３．５以下、又は約３以下の等電点の範囲を有するＥＰＯポリペプチドの酸性画分を含む。いくつかの実施態様では、組成物は、等電点電気泳動によって決定される、約１から約３．５、約１．５から約３．５、約２から約３．５、約２．５から約３．５、約３から約３．５、約３．５以下、又は約３以下の等電点の範囲を有するＥＰＯポリペプチドの高シアル酸付加画分を含む。
いくつかの実施態様では、組成物は、等電点電気泳動によって決定される、約３．５から約６、約４から約６、約４．５から約６、約５から約６、約５．５から約６、約３．５から約５、約４から約５、約４．５から約５、約３．５以上、約４以上、又は約４．５以上の範囲の等電点を有するＥＰＯポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、組成物は、等電点電気泳動によって決定される、約３．５から約６、約４から約６、約４．５から約６、約５から約６、約５．５から約６、約３．５から約５、約４から約５、約４．５から約５、約３．５以上、約４以上、又は約４．５以上の範囲の等電点を有するＥＰＯポリペプチドの塩基性画分を含む。いくつかの実施態様では、組成物は、等電点電気泳動によって決定される、約３．５から約６、約４から約６、約４．５から約６、約５から約６、約５．５から約６、約３．５から約５、約４から約５、約４．５から約５、約３．５以上、約４以上、又は約４．５以上の範囲の等電点を有するＥＰＯポリペプチドの低シアル酸付加画分を含む。
ＥＰＯＲに対する例示的ＥＰＯポリペプチド親和性
用語「親和性」は、分子の単一の結合部位（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の総和の強度を意味する。通常、分子ＸのそのパートナーＹへの親和性は、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、例えば、免疫ブロット、ＥＬＩＳＡ ＫＤ、ＫｉｎＥｘ Ａ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、又は表面プラズモン共鳴装置などの当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。
用語「親和性」は、分子の単一の結合部位（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の総和の強度を意味する。通常、分子ＸのそのパートナーＹへの親和性は、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、例えば、免疫ブロット、ＥＬＩＳＡ ＫＤ、ＫｉｎＥｘ Ａ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、又は表面プラズモン共鳴装置などの当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。
用語「ＫＤ」、「Ｋｄ」、「Ｋｄ」又は「Ｋｄ値」は、抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すために交換可能に使用される。いくつかの実施態様では、抗体のＫｄは、オクテット（登録商標）システム（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＬＬＣ、カリフォルニア州フレモント）などのバイオセンサーを供給業者の指示書に従って使用するバイオレイヤー干渉法を使用することによって測定される。簡潔には、ビオチン化抗原をセンサーチップに結合させ、抗体の会合を９０秒間モニターし、解離を６００秒間モニターする。希釈及び結合ステップ用のバッファーは、２０ｍＭリン酸、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．２である。ドリフトを補正するために、バッファーのみのブランク曲線を差し引く。データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェアを使用して２：１の結合モデルにフィッティングさせ、会合速度定数（ｋｏｎ）、解離速度定数（ｋｏｆｆ）及びＫｄを決定する。平衡解離定数（ＫＤ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算される。用語「ｋｏｎ」は、抗体の抗原への会合の速度定数を指し、用語「ｋｏｆｆ」は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離の速度定数を指す。
リガンド又は受容体に「結合」するという用語は、当技術分野でよく理解されている用語であり、そのような結合を決定する方法も当技術分野でよく知られている。分子は、それが特定の細胞又は物質と反応するか、会合するか、又は親和性を有し、反応、会合、又は親和性が、例えば免疫ブロット、ＥＬＩＳＡ ＫＤ、ＫｉｎＥｘ Ａ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、表面プラズモン共鳴装置などの当技術分野で知られている１つ又は複数の方法によって検出可能である場合、「結合」を示すといわれる。
「表面プラズモン共鳴」とは、例えばＢＩＡｃｏｒｅＴＭシステム（ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、スウェーデンのウプサラ及びニュージャージー州ピスカタウェイ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することにより、リアルタイムの生体分子特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を意味する。さらなる説明については、Jonsson et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51: 19-26を参照。
「バイオレイヤー干渉法」とは、バイオセンサーチップ上の固定化タンパク質のレイヤーと内部リファレンスレイヤーから反射された光の干渉パターンを分析する光学分析技術を指す。バイオセンサーチップに結合した分子の数の変化は、リアルタイムで測定できる干渉パターンの変化を引き起こす。バイオレイヤー干渉法のための非限定的で例示的な装置は、オクテット（登録商標）システム（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＬＬＣ）である。例えば、Abdiche et al., 2008, Anal. Biochem. 377: 209-277を参照。
「低減させる（ｒｅｄｕｃｅ）」又は「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」ことは、参照と比較して、活性、機能又は量を減少させる、低減させる又は抑制することを意味する。いくつかの実施態様では、「低減させる」又は「阻害する」とは、２０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施態様では、「低減させる」又は「阻害する」とは、５０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施態様では、「低減させる」又は「阻害する」とは、７５％、８５％、９０％、９５％又はそれ以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施態様では、上記の量は、ある期間にわたって、その同じ期間の対照用量（プラセボなど）と比較して、抑制又は減少される。
「増加させる」又は「刺激する」とは、参照と比較して、活性、機能、又は量を増加、改善、又は増大させることを意味する。いくつかの実施態様では、「低減させる」又は「阻害する」とは、２０％以上の全体的な増加を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施態様では、「増加させる」又は「刺激する」とは、５０％以上の全体的な増加を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施態様では、「増加させる」又は「刺激する」とは、７５％、８５％、９０％、９５％、又はそれ以上の全体的な増加を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施態様では、上記の量は、ある期間にわたって、その同じ期間の対照用量（プラセボなど）と比較して、刺激又は増加される。
本明細書で使用される「参照」とは、比較目的のために使用される任意の試料、標準、又はレベルを指す。参照は、健常又は非罹患試料から得ることができる。いくつかの例では、参照は、コンパニオンアニマルの非罹患又は無処置試料から得られる。いくつかの例では、参照は、試験又は治療されている動物ではない、特定の種の１つ又は複数の健常動物から得られる。
いくつかの実施態様では、本発明のＥＰＯポリペプチド又は核酸の投与は、ヘマトクリット百分率の増加をもたらし、少なくとも２５％、又は少なくとも２６％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも２８％、又は少なくとも２９％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも３８％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４２％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも４８％まで増加させ得る。
例示的な薬学的組成物
用語「薬学的製剤」及び「薬学的組成物」は、有効成分の生物活性を効果的にするような形態であり、製剤が投与される対象にとって許容できないほど毒性である追加の成分を含まない調製物を指す。
用語「薬学的製剤」及び「薬学的組成物」は、有効成分の生物活性を効果的にするような形態であり、製剤が投与される対象にとって許容できないほど毒性である追加の成分を含まない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」とは、対象への投与のための「薬学的組成物」を構成する、非毒性の固体、半固体若しくは液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤補助剤、又は治療剤とともに使用するための当技術分野で一般的な担体を指す。薬学的に許容される担体は、用いられる用量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、製剤の他の成分と適合性がある。薬学的に許容される担体は、用いられる製剤に適している。薬学的に許容される担体の例には、アルミナ；ステアリン酸アルミニウム；レシチン；ヒト血清アルブミン、イヌ又は他の動物アルブミンなどの血清タンパク質；リン酸、クエン酸、トロメタミン又はＨＥＰＥＳバッファー等のバッファー；グリシン；ソルビン酸；ソルビン酸カリウム；飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物；水；塩又は電解質、例えばプロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ若しくは三ケイ酸マグネシウムなど；ポリビニルピロリドン、セルロース系物質；ポリエチレングリコール；スクロース；マンニトール；又はアルギニンを含むがこれに限定されないアミノ酸が含まれる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、約６．２から約７、約６から約７．２、約６．４から約６．８、約６、又は約７のｐＨを有し、リン酸ナトリウム及び塩化ナトリウムを含む。いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、約６．２から約７、約６から約７．２、約６、約６．４から約６．８、又は約７のｐＨを有し、クエン酸ナトリウム及び塩化ナトリウムを含む。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０を含む。いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート２０を含む。いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート２０を含む。いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０を含む。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、約１００ｎＭから約１８０ｎＭ、約１１０ｎＭから約１７０ｎＭ、約１２０ｎＭから約１６０ｎＭ、約１３０ｎＭから約１５０ｎＭ、約１４０ｎＭ、約１３０ｎＭから約１６０ｎＭ、約１２０ｎＭから約１５０ｎＭ、約１００ｎＭ、約１１０ｎＭ、約１２０ｎＭ、約１３０ｎＭ、約１４０ｎＭ、約１５０ｎＭ、約１６０ｎＭ、約１７０ｎＭ、又は約１８０ｎＭの濃度の塩化ナトリウムを含む。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、約１００ｎＭから約１８０ｎＭ、約１１０ｎＭから約１７０ｎＭ、約１２０ｎＭから約１６０ｎＭ、約１３０ｎＭから約１５０ｎＭ、約１４０ｎＭ、約１３０ｎＭから約１６０ｎＭ、約１２０ｎＭから約１５０ｎＭ、約１００ｎＭ、約１１０ｎＭ、約１２０ｎＭ、約１３０ｎＭ、約１４０ｎＭ、約１５０ｎＭ、約１６０ｎＭ、約１７０ｎＭ、又は約１８０ｎＭの濃度のリン酸ナトリウムを含む。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、約５５０ｎＭから約７５０ｎＭ、約５７０ｎＭから約７３０ｎＭ、約５９０ｎＭから約７２０ｎＭ、約６００ｎＭから約７００ｎＭ、約６２０ｎＭから約６８０ｎＭ、約６４０ｎＭから約６６０ｎＭ、約６５０ｎＭ、約５７０ｎＭから約６７０ｎＭ、約５５０ｎＭから約６５０ｎＭ、約６５０ｎＭから約７５０ｎＭ、約６３０ｎｍから約７００ｎＭ、又は約６７０ｎＭから約６００ｎＭの濃度のポリソルベートを含む。いくつかの実施態様では、ポリソルベートはポリソルベート８０である。いくつかの実施態様では、ポリソルベートはポリソルベート２０である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、ｍ－クレゾール又はベンジルアルコールを含む。いくつかの実施態様では、ｍ－クレゾールの濃度は、約０．２％、約０．１％から約０．３％、約０．０８％から約０．２５％、又は約０．０５％から約０．２５％である。いくつかの実施態様では、ベンジルアルコールの濃度は、約１％、約０．５％から約２％、約０．２％から約２．５％、約１％から約５％、約０．５％から約５％、又は約１％から約３％である。
薬学的組成物は、凍結乾燥形態で保存することができ；したがって、いくつかの実施態様では、調製プロセスは、凍結乾燥工程を含む。次いで、凍結乾燥された組成物は、コンパニオンアニマルへの投与前に、典型的には非経口投与に適した水性組成物として再構成される。他の実施態様では、特にタンパク質が熱変性及び酸化変性に対して非常に安定である場合、薬学的組成物は、液体として、すなわち水性組成物として保存することができ、これはイヌ、ネコ、若しくはウマに直接投与できるか又は適切に希釈して投与することができる。これは注射用滅菌水（ＷＦＩ）で再構成することができ、ベンジルアルコールなどの静菌試薬が含まれてもよい。したがって、本発明は、固体及び液体の両方の形態の薬学的組成物を提供する。
薬学的組成物のｐＨは、例えば、約６、約６．２、約６．４、約６．６、約６．８、約７、約７．２を投与した場合、典型的には、約ｐＨ６からｐＨ８の範囲であろう。本発明の製剤は、治療目的で使用する場合には無菌である。無菌状態は、滅菌濾過膜（例えば、０．２ミクロン膜）による濾過を含む、当技術分野で公知のいくつかの手段のいずれかによって得ることができる。無菌状態は、抗菌剤の有無にかかわらず維持され得る。
本発明の薬学的製剤は、本発明の方法において、ネコなどのコンパニオンアニマルの貧血関連状態を治療するのに有用である。例えば、本明細書に記載の方法は、治療的有効量の本開示の核酸又はポリペプチドをコンパニオンアニマルに投与することを含む。多くの実施態様では、治療的有効量は、非経口的に、例えば、皮下投与、静脈内注入、静脈内ボーラス注射、又は筋肉内注射によって投与される。
したがって、本発明の方法に従って、本発明のＥＰＯポリペプチド若しくは核酸、他のポリペプチド若しくは核酸、又は薬学的組成物は、治療的有効量でネコ、イヌ、ウマ、又はヒトに投与される。
いくつかの実施態様では、治療的有効用量は、少なくとも２週間又は３週間連続して週に１回投与され、いくつかの実施態様では、この治療サイクルは、２回以上繰り返され、任意選択で、１週間以上の無治療が組み入れられる。他の実施態様では、治療的有効量は、２から５日間連続して１日１回投与され、いくつかの実施態様では、この治療サイクルは、２回以上繰り返され、任意選択で、１日以上又は数週間の無治療が組み入れられる。
ＥＰＯ及びＥＰＯＲ ＥＣＤポリペプチドの例示的な使用
本明細書に開示される１つ若しくは複数の追加のＮ－グリコシル化部位若しくはシステイン残基を含むＥＰＯポリペプチド、又はＥＰＯポリペプチドを含む薬学的組成物は、非再生性貧血の治療に有用であり得る。非再生性貧血状態は、イヌ、ネコ、又はウマを含むがこれらに限定されないコンパニオンアニマルにおいて示され得る。
本明細書に開示される１つ若しくは複数の追加のＮ－グリコシル化部位若しくはシステイン残基を含むＥＰＯポリペプチド、又はＥＰＯポリペプチドを含む薬学的組成物は、非再生性貧血の治療に有用であり得る。非再生性貧血状態は、イヌ、ネコ、又はウマを含むがこれらに限定されないコンパニオンアニマルにおいて示され得る。
本明細書に開示されるＥＰＯＲの細胞外ドメインを含むポリペプチド又はＥＰＯＲ ＥＣＤポリペプチドを含む薬学的組成物は、赤血球増加症の治療に有用であり得る。
本明細書で使用される場合、「治療」は、有益な又は所望の臨床結果を得るための手法である。本明細書で使用される「治療」は、コンパニオンアニマルを含む哺乳動物における疾患の治療薬の投与又は適用を包含する。本開示の目的のために、有益な又は所望の臨床結果には、１つ又は複数の症状の緩和、疾患の程度の軽減、疾患の伝播の予防又は遅延、疾患の再発の予防又は遅延、疾患の進行の遅延又は減速、病状の改善、疾患又は疾患の進行の抑制、疾患又はその進行の抑制又は減速、その発生の阻止、及び（部分又は完全）寛解のいずれか１つ又は複数を含むがこれらに限定されない。また、「治療」には、増殖性疾患の病理学的帰結の軽減が含まれる。本明細書で提供される方法は、治療のこれらの側面のいずれか１つ又は複数を企図している。上記のように、治療という用語は、障害の全ての側面を１００％除去することを必要としない。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯ欠損又はＥＰＯ非感受性誘導状態を治療するために、ＥＰＯポリペプチド、核酸、ベクター、発現系、又はそれを含む薬学的組成物を、本明細書の方法に従って利用することができる。いくつかの実施態様では、ＥＰＯ欠損又はＥＰＯ非感受性誘導状態を治療するために、ＥＰＯポリペプチド、核酸、ベクター、発現系又は薬学的組成物が、イヌ、ネコ、又はウマなどのコンパニオンアニマルに投与される。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチド、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物は、貧血を治療するために、イヌ、ネコ、又はウマなどのコンパニオンアニマルに投与される。
物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの「治療的有効量」は、治療する疾患の種類、病状、疾患の重症度及び経過、治療目的の種類、以前の治療、病歴、以前の治療に対する応答、担当獣医の裁量、動物の年齢、性別及び体重、並びに物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの動物における望ましい応答を誘発する能力等の要因によって異なる。また、治療的有効量とは、物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの毒性又は有害作用よりも治療的に有益な作用が上回る量である。治療的有効量は、１つ又は複数の投与において送達され得る。治療的有効量は、必要な用量及び期間で所望の治療的又は予防的結果を得るのに有効な量を指す。
いくつかの実施態様では、ＥＰＯ若しくはＥＰＯＲポリペプチド、核酸、ベクター、又は発現系又は薬学的組成物は、皮下投与、静脈内注入、又は筋肉内注射によって非経口的に投与される。いくつかの実施態様では、ＥＰＯ若しくはＥＰＯＲポリペプチド、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物は、ボーラス注射として、又は一定期間にわたる持続注入によって投与される。いくつかの実施態様では、ＥＰＯ若しくはＥＰＯＲポリペプチド、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物は、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、動脈内、滑膜内、髄腔内、又は吸入経路によって投与される。
本明細書に記載のＥＰＯ又はＥＰＯＲポリペプチドは、用量あたり０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、ＥＰＯ又はＥＰＯＲポリペプチドは、用量あたり０．０００５ｍｇ／ｋｇ体重から５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、ＥＰＯポリペプチドは、用量あたり０．００１ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、ＥＰＯ又はＥＰＯＲポリペプチドは、約１μｇ／ｋｇ体重から約１０μｇ／ｋｇ体重、又は約１μｇ／ｋｇ体重から約５μｇ／ｋｇ体重、又は約１μｇ／ｋｇ体重、又は約３μｇ／ｋｇ体重、又は約５μｇ／ｋｇ体重、又は約１０μｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。
ＥＰＯ若しくはＥＰＯＲポリペプチド、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物は、一度に又は一連の治療にわたってコンパニオンアニマルに投与することができる。例えば、ＥＰＯ若しくはＥＰＯＲポリペプチド、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物を少なくとも１回、複数回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、又は少なくとも５回、又は長期間投与することができる。
いくつかの実施態様では、用量は、少なくとも２週間又は３週間連続して週に１回投与され、いくつかの実施態様では、この治療サイクルは、２回以上繰り返され、任意選択で、１週間以上の無治療が組み入れられる。他の実施態様では、治療的有効量は、２から５日間連続して１日１回投与され、いくつかの実施態様では、この治療サイクルは、２回以上繰り返され、任意選択で、１日以上又は数週間の無治療が組み入れられる。
１種以上のさらなる治療剤「と組み合わせた」投与には、同時（併用）及び任意の順序での連続的又は逐次的な投与が含まれる。用語「同時に」とは、本明細書では、投与の少なくとも一部が時間的に重複するか又は一方の治療剤の投与が他方の治療剤の投与と比較して短期間内にある、２種以上の治療剤の投与を指すのに使用される。例えば、２種以上の治療剤は、およそ指定された分数以下の時間間隔で投与される。用語「逐次的に」とは、本明細書では、１種以上の薬剤の投与が１種以上の他の薬剤の投与の中止後にも継続するか、又は１種以上の薬剤の投与が１種以上の他の薬剤の投与の前に開始される、２種以上の治療剤の投与を指すのに使用される。例えば、２種以上の治療剤の投与は、およそ指定された分数を超えた時間間隔で投与される。本明細書において使用される場合、「～と組み合わせて（ｉｎ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）」とは、一つの治療様式に別の治療様式を加えた投与を指す。すなわち、「～と組み合わせて」は、動物に対し、他の治療様式の投与前、投与中又は投与後の、一つの治療様式の投与を指す。
本明細書で提供されるのは、貧血状態の検出、診断及びモニタリングのためにＥＰＯポリペプチド及びポリヌクレオチドを使用する方法である。例えば、貧血は、標準的な方法を使用してヘマトクリット百分率（ＨＣＴ％）を測定することによって検出、診断、又はモニタリングされ得る。本明細書で提供されるのは、コンパニオンアニマルがＥＰＯポリペプチドに応答するかどうかを決定する方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、ＥＰＯポリペプチドを使用して、動物がＥＰＯＲを発現する細胞を有するかどうかを検出することを含む。いくつかの実施態様では、検出の方法は、試料をＥＰＯポリペプチド又はポリヌクレオチドと接触させ、結合のレベルが参照又は比較試料（対照など）のレベルと異なるかどうかを決定することを含む。いくつかの実施態様では、本方法は、本明細書に記載の抗体又はポリペプチドが対象動物に対して適切な治療であるかどうかを決定するために有用であり得る。
いくつかの実施態様では、試料は生物学的試料である。用語「生物学的試料」は、生物又は以前に生物であったものからの物質の量を意味する。いくつかの実施態様では、生物学的試料は、細胞又は細胞／組織溶解物である。いくつかの実施態様では、生物学的試料は、限定されるものではないが、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、滑液、及び上皮細胞を含む。
特異的なリガンド－受容体結合を検出するための当技術分野で知られている様々な方法を使用することができる。実施することができる例示的な免疫測定法には、蛍光偏光免疫測定法（ＦＰＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、比濁阻害免疫測定法（ＮＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、及び放射性免疫測定法（ＲＩＡ）が含まれる。指標部分又は標識基は、対照抗体に結合させることができ、アッセイ装置及び適合性のある免疫測定法手順の利用可能性によってしばしば決定される方法の様々な使用の必要性を満たすように選択される。適切な標識には、限定されるものではないが、放射性核種（例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、又は３２Ｐ）、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、又はβ－ガラクトシダーゼ）、蛍光部分又はタンパク質（例えば、フルオレセイン、ローダミン、フィコエリトリン、ＧＦＰ、又はＢＦＰ）、又は発光部分（例えば、カリフォルニア州パロアルトのＱｕａｎｔｕｍ Ｄｏｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって供給されたＱｄｏｔＴＭナノ粒子）が含まれる。上記の様々な免疫測定法を実施する際に使用される一般的な技術は、当業者に知られている。
診断のために、ＥＰＯ又はＥＰＯＲを含むポリペプチドを、放射性同位元素、蛍光標識、及び当技術分野で知られている種々の酵素－基質標識を含むが、これらに限定されない検出可能な部分で標識することができる。標識をタンパク質にコンジュゲートさせる方法は、当技術分野で知られている。
以下の例は、本開示の特定の態様を説明するものであり、本開示を限定することを意図したものではない。
実施例１
イヌＥＰＯのＮ結合型グリコシル化部位の同定
長時間作用型イヌＥＰＯポリペプチドを生成するための１つのアプローチは、追加のグリコシル化部位を導入することによる。野生型イヌＥＰＯは、野生型イヌＥＰＯ前駆体形態のアミノ酸位置５０～５２、６４～６６、及び１０９～１１１に３つのＮ結合型グリコシル化部位を有する（配列番号１又は「野生型イヌＥＰＯ」）。
イヌＥＰＯのＮ結合型グリコシル化部位の同定
長時間作用型イヌＥＰＯポリペプチドを生成するための１つのアプローチは、追加のグリコシル化部位を導入することによる。野生型イヌＥＰＯは、野生型イヌＥＰＯ前駆体形態のアミノ酸位置５０～５２、６４～６６、及び１０９～１１１に３つのＮ結合型グリコシル化部位を有する（配列番号１又は「野生型イヌＥＰＯ」）。
追加のＮ結合型グリコシル化部位が、野生型イヌＥＰＯアミノ酸配列に導入され得る。例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの追加のＮ結合型グリコシル化部位が、野生型イヌＥＰＯアミノ酸配列に導入され得る。Ｎ結合型グリコシル化部位は、Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒのコンセンサス配列を有し得、ここで、Ｘａａはプロリンを除く任意のアミノ酸である。１つ又は複数のグリコシル化部位の追加は、イヌＥＰＯ分子の分子サイズを増加させ、より多くのシアル酸付加部位を提供し、ペグ化などの糖鎖結合のための部位を提供し、且つ／又は動物の血清中の分子の半減期を改善し得る。
表６は、１つ又は複数の追加のＮ結合型グリコシル化部位を生成するために使用され得る野生型イヌＥＰＯのアミノ酸置換を記載する。
表６
実施例２
ウマＥＰＯのＮ結合型グリコシル化部位の同定
長時間作用型ウマＥＰＯポリペプチドは、追加のグリコシル化部位を導入することによっても調製され得る。野生型ウマＥＰＯは、野生型ウマＥＰＯ前駆体形態のアミノ酸位置５０～５２、６４～６６、及び１０９～１１１に３つのＮ結合型グリコシル化部位を有する（配列番号３）。
ウマＥＰＯのＮ結合型グリコシル化部位の同定
長時間作用型ウマＥＰＯポリペプチドは、追加のグリコシル化部位を導入することによっても調製され得る。野生型ウマＥＰＯは、野生型ウマＥＰＯ前駆体形態のアミノ酸位置５０～５２、６４～６６、及び１０９～１１１に３つのＮ結合型グリコシル化部位を有する（配列番号３）。
追加のＮ結合型グリコシル化部位が、野生型ウマＥＰＯアミノ酸配列に導入され得る。例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの追加のＮ結合型グリコシル化部位が、野生型ウマＥＰＯアミノ酸配列に導入され得る。Ｎ結合型グリコシル化部位は、Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒのコンセンサス配列を有し得、ここで、Ｘａａはプロリンを除く任意のアミノ酸である。１つ又は複数のグリコシル化部位の追加は、ウマＥＰＯ分子の分子サイズを増加させ、より多くのシアル酸付加部位を提供し、ペグ化などの糖鎖結合のための部位を提供し、且つ／又は動物の血清中の分子の半減期を改善し得る。
表７は、１つ又は複数の追加のＮ結合型グリコシル化部位を生成するために使用され得る野生型ウマＥＰＯのアミノ酸置換を記載する。
表７
表７
実施例３
追加のＮ結合型グリコシル化部位を有するＥＰＯの発現
追加のＮ結合型グリコシル化部位を有するＥＰＯポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を発現ベクターに挿入し、ＣＨＯ宿主細胞にトランスフェクトすることができる。ＣＨＯ細胞は、例えば、当技術分野で知られているように、発現ベクター上にＤＨＦＲ遺伝子を使用し、メトトレキサート媒介遺伝子増幅を行うことにより、ＥＰＯポリペプチドの発現が高収率で安定するように選択される。
追加のＮ結合型グリコシル化部位を有するＥＰＯの発現
追加のＮ結合型グリコシル化部位を有するＥＰＯポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を発現ベクターに挿入し、ＣＨＯ宿主細胞にトランスフェクトすることができる。ＣＨＯ細胞は、例えば、当技術分野で知られているように、発現ベクター上にＤＨＦＲ遺伝子を使用し、メトトレキサート媒介遺伝子増幅を行うことにより、ＥＰＯポリペプチドの発現が高収率で安定するように選択される。
例えば、野生型イヌＥＰＯと比較して１つ又は複数の追加のＮ結合型グリコシル化部位を有する様々なイヌＥＰＯアナログをコードするヌクレオチド配列を化学的に合成した。表８（下記）に記載されている野生型イヌＥＰＯ及び例示的なイヌＥＰＯアナログを、ＨＥＫ２９３細胞中で一過性に発現させ、抗ヒトＥＰＯＮ－１９抗体を使用したウエスタンブロットによって可視化した（図１Ａ及び１Ｂ、レーン１（野生型イヌＥＰＯ；配列番号２）及びレーン２～７（イヌＥＰＯアナログ；配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０））。
表８
実施例４
ＥＰＯ分子内ジスルフィド
野生型イヌＥＰＯは、ジスルフィド結合を形成するための２つのシステイン対を有する。ＥＰＯポリペプチドの安定性をさらに増加させるために、追加の分子内ジスルフィド結合に適した位置を、３次元タンパク質モデリングと解析によって同定した。追加のジスルフィド結合は、ＥＰＯのアンフォールディングを防ぎ、プロテアーゼ耐性を高め、製品の有効期間の安定性を高め、ｉｎ ｖｉｖｏでの薬物動態を向上させる可能性がある。
ＥＰＯ分子内ジスルフィド
野生型イヌＥＰＯは、ジスルフィド結合を形成するための２つのシステイン対を有する。ＥＰＯポリペプチドの安定性をさらに増加させるために、追加の分子内ジスルフィド結合に適した位置を、３次元タンパク質モデリングと解析によって同定した。追加のジスルフィド結合は、ＥＰＯのアンフォールディングを防ぎ、プロテアーゼ耐性を高め、製品の有効期間の安定性を高め、ｉｎ ｖｉｖｏでの薬物動態を向上させる可能性がある。
追加のシステインは、前駆体ＥＰＯ配列（配列番号１、配列番号３、又は配列番号７）の４５、４８、４９、６８、８６、９０、９２、１２０、１４３、１４４、及び／又は１７２位に対応する、成熟ＥＰＯ配列の１９、２２、２３、４２、６０、６４、６６、９４、１１７、１１８、及び／又は１４６位で、イヌ、ウマ、及びネコのＥＰＯポリペプチドに組み込まれ得る。
追加のシステインは、前駆体ＥＰＯ配列（配列番号１、配列番号３、及び配列番号７）の４５位と１７２位、４８位と１２０位、４９位と１７２位、６８位と９２位、９０位と１４４位、並びに８６位と１４３位に対応する、成熟ＥＰＯ配列（配列番号２、配列番号４、及び配列番号８）の１９位と１４６位、２２位と９４位、２３位と１４６位、４２位と６６位、６０位と１１７位、並びに６４位と１１８位での１つ以上の対として、イヌ、ウマ、及びネコのＥＰＯポリペプチドに組み込まれ得る。
例えば、野生型イヌＥＰＯと比較して追加のシステイン対を有する種々のイヌＥＰＯアナログをコードするヌクレオチド配列を化学的に合成した。表９（下記）に記載されている野生型イヌＥＰＯ及び例示的なイヌＥＰＯアナログを、ＨＥＫ２９３細胞中で一過性に発現させ、抗ヒトＥＰＯＮ－１９抗体を使用したウエスタンブロットによって可視化した（図１Ａ及び１Ｂ、レーン１（野生型イヌＥＰＯ；配列番号２）及びレーン８～１２及び１４（イヌＥＰＯアナログ；配列番号２２、２４、２６、２８、３０、及び３２）。
表９
実施例５
ＥＰＯポリペプチドの単離
ＥＰＯポリペプチドを発現する細胞株は、十分な量のＥＰＯポリペプチドが産生されるまで培養され得る。ポリペプチドは、Ｃａｐｔｏ Ｂｕｔｙｌカラムクロマトグラフィー、陽イオン交換（ＣＥＸ）カラムクロマトグラフィー、陰イオン交換（ＡＥＸ）カラムクロマトグラフィー、又は他のクロマトグラフィー法を含む、１つ又は複数の様々な工程によって単離することができる。他のクロマトグラフィー法には、イオン交換カラムクロマトグラフィー、疎水性相互作用カラムクロマトグラフィー、混合モードカラムクロマトグラフィー（例えば、ＣＨＴ及び／又はＣａｐｔｏＭＭＣなどのマルチモーダルモードカラムクロマトグラフィー）が含まれ得る。低ｐＨ又は他のウイルス不活化及びウイルス除去工程を適用してもよい。単離されたＥＰＯポリペプチドを添加物と混合し、濾過により滅菌して本発明の薬学的組成物を調製することができる。該薬学的組成物を、造血活性を刺激するのに十分な用量で、貧血を有するコンパニオンアニマルに投与することができる。
ＥＰＯポリペプチドの単離
ＥＰＯポリペプチドを発現する細胞株は、十分な量のＥＰＯポリペプチドが産生されるまで培養され得る。ポリペプチドは、Ｃａｐｔｏ Ｂｕｔｙｌカラムクロマトグラフィー、陽イオン交換（ＣＥＸ）カラムクロマトグラフィー、陰イオン交換（ＡＥＸ）カラムクロマトグラフィー、又は他のクロマトグラフィー法を含む、１つ又は複数の様々な工程によって単離することができる。他のクロマトグラフィー法には、イオン交換カラムクロマトグラフィー、疎水性相互作用カラムクロマトグラフィー、混合モードカラムクロマトグラフィー（例えば、ＣＨＴ及び／又はＣａｐｔｏＭＭＣなどのマルチモーダルモードカラムクロマトグラフィー）が含まれ得る。低ｐＨ又は他のウイルス不活化及びウイルス除去工程を適用してもよい。単離されたＥＰＯポリペプチドを添加物と混合し、濾過により滅菌して本発明の薬学的組成物を調製することができる。該薬学的組成物を、造血活性を刺激するのに十分な用量で、貧血を有するコンパニオンアニマルに投与することができる。
細胞生存率が９５％を下回った場合、馴化培地を清澄化することにより上清を回収することができる。例えば、クロマトグラフィー工程の組み合わせを使用して、ＥＰＯポリペプチドを精製することができる。ＥＰＯポリペプチドを発現するＣＨＯ細胞からの培地を収集し、ＥＰＯポリペプチドが疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によってＣａｐｔｏ Ｂｕｔｙｌカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に結合することができるように、培地が１ＭのＮａＣｌを超えるＮａＣｌ濃度を有するように、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）の添加により調整することができる。ＥＰＯは、約１から約２．５ＭのＮａＣｌを用いて、約５．７５から約８．５のｐＨでＣａｐｔｏ Ｂｕｔｙｌカラムに結合すると理解されている。馴化培地は、遠心分離と濾過によって清澄化され、ＣａｐｔｏＢｕｔｙｌカラムにロードされ得る。結合したＥＰＯポリペプチドは、約５．６のｐＨで３０％イソプロパノールでカラムから溶出され得る。
離れて分画された宿主細胞タンパク質は、ＣＨＯ宿主細胞タンパク質分析ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＣＭ０１５；Ｃｙｇｎｕｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して分析することができる。この精製法により、少なくとも約９５％の宿主細胞タンパク質をＥＰＯタンパク質から離して分画することができる。
Ｃａｐｔｏ Ｂｕｔｙｌカラムからの溶出液は、サブトラクションクロマトグラフィーの工程としてＳＰカチオン交換（ＣＥＸ）カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に直接ロードすることができる。約５．６のｐＨで２０～４０％イソプロパノールのこの負荷条件下では、ＥＰＯポリペプチドはＳＰ ＣＥＸカラムを流れるが、宿主細胞タンパク質は結合するはずである。
ＳＰ ＣＥＸカラムからのフロースルーは、Ｃａｐｔｏ Ｑ陰イオン交換（ＡＥＸ）カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に直接ロードすることができ、これは約５．６±０．５のｐＨで３０％イソプロパノール中のＥＰＯポリペプチドと結合する。酸性ＥＰＯポリペプチドの画分が固相に残る間に、ｐＨ４洗浄を加えて塩基性ＥＰＯポリペプチドの画分を除去することができる。ＥＰＯポリペプチド酸性画分をｐＨ４で０．１５ＭのＮａＣｌで溶出し、溶出液を周囲温度で９０分以上ｐＨ４に保ち、ウイルスを不活化することができる。この工程は、ＥＰＯポリペプチド酸性画分の濃度も増加させる。
ＥＰＯポリペプチド酸性画分を含む溶出液をＳＰ ＣＥＸカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に直接ロードして、ＥＰＯポリペプチド酸性画分をさらに濃縮するとともに、残留エンドトキシン及び塩基性ＥＰＯポリペプチド画分を分画することができる。ＥＰＯポリペプチド酸性画分をｐＨ４で０．５ＭのＮａＣｌで溶出し、溶出液を周囲温度で９０分以上ｐＨ４に保ち、ウイルスを不活化することができる。
タンジェント流濾過（ＴＦＦ）を使用して、酸性画分と塩基性画分のＥＰＯポリペプチド画分を濃縮することができる。Ｓｐｅｒｄｅｘ２００を使用するゲル濾過工程を、任意の凝集体を除去し、所望のバッファー（例えば、以下に記載されるような製剤バッファー）へのバッファー交換として実施することができる。ナノ濾過工程を、残存するウイルス汚染物質を除去するために実施することができる。
実施例６
ＥＰＯバッファー製剤
様々なバッファー製剤中のネコＥＰＯの熱安定性を分析した。ｐＨ６．２及びｐＨ７で２０ｍＭクエン酸ナトリウム又は２０ｍＭリン酸ナトリウムを含むバッファーを検討した。最終濃度１４０ｍＭの塩化ナトリウムを全てのバッファーで使用した。ポリソルベート８０と２０を比較した。静菌性試薬ベンジルアルコールとｍ‐クレゾールも比較した。各バッファー中の濃度６μｇ／μＬのネコＥＰＯアナログの融解温度（Ｔｍ）を２０℃から９５℃までの示差走査蛍光技術により測定した。表１０は、試験した様々なバッファー中のネコＥＰＯアナログのＴｍ値を列挙したものである。様々なバッファー中の他のＥＰＯポリペプチドの熱安定性を同様に分析することができる。
ＥＰＯバッファー製剤
様々なバッファー製剤中のネコＥＰＯの熱安定性を分析した。ｐＨ６．２及びｐＨ７で２０ｍＭクエン酸ナトリウム又は２０ｍＭリン酸ナトリウムを含むバッファーを検討した。最終濃度１４０ｍＭの塩化ナトリウムを全てのバッファーで使用した。ポリソルベート８０と２０を比較した。静菌性試薬ベンジルアルコールとｍ‐クレゾールも比較した。各バッファー中の濃度６μｇ／μＬのネコＥＰＯアナログの融解温度（Ｔｍ）を２０℃から９５℃までの示差走査蛍光技術により測定した。表１０は、試験した様々なバッファー中のネコＥＰＯアナログのＴｍ値を列挙したものである。様々なバッファー中の他のＥＰＯポリペプチドの熱安定性を同様に分析することができる。
表１０
抗菌剤を含まず、５０℃以上のＴｍを有する製剤Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｃ１、Ｃ２、及びＣ３は、単回投与用により望ましい可能性がある。抗菌剤を含む製剤の中で、５０℃のＴｍを有する製剤Ａ５及びＣ６は、複数回投与用により望ましいと思われる。
実施例７
ＥＰＯポリペプチドの特徴づけ
タンパク質上のシアル酸付加グリコシル化は、そのｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態を向上させ得る。全ての脊椎動物の糖鎖上で末端単位として発現される一般的なシアル酸には、典型的にはＮ－グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ）とＮ－アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）が含まれる。ＥＰＯポリペプチドの塩基性画分及び／又は酸性画分のシアル酸付加特性は、等電点電気泳動（ＩＥＦ）又はドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって可視化することができる。
ＥＰＯポリペプチドの特徴づけ
タンパク質上のシアル酸付加グリコシル化は、そのｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態を向上させ得る。全ての脊椎動物の糖鎖上で末端単位として発現される一般的なシアル酸には、典型的にはＮ－グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ）とＮ－アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）が含まれる。ＥＰＯポリペプチドの塩基性画分及び／又は酸性画分のシアル酸付加特性は、等電点電気泳動（ＩＥＦ）又はドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって可視化することができる。
例えば、ＥＰＯポリペプチドの酸性画分を８０oＣの２Ｍ酢酸で３時間処理することができ、その後真空遠心分離で酢酸が除去される。処理したＥＰＯ試料を３Ｋスピンフィルターユニットを通して濾過し、加水分解されていないタンパク質を除去する。フロースルー試料をＤＭＢ試薬と反応させる。Ｃ１８カラムと蛍光検出器を使用した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により生成物をプロファイリングすることができる。
例えば、ＥＰＯポリペプチドのシアル酸含量は、以下のように決定され得る。シアル酸は、氷酢酸と混合することにより、ＥＰＯポリペプチドから放出される。混合物を８０℃で２時間インキュベートする。遊離シアル酸を蛍光色素１，２‐ジアミノ‐４，５‐メチレンオキシベンゼン（ＤＭＢ）で標識する。蛍光標識は、２０μＬのＤＭＢ－チオナイト溶液を５μＬの遊離シアル酸試料と混合することによって実施される。混合物を５０℃で３時間インキュベートする。７５μＬの蒸留脱イオン水を加えて反応を停止する。ＤＭＢ標識シアル酸は、Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８カラム（５μ、４．６ｘ１５０ｍｍ）又はＥｘｔｅｎｄ Ｃ１８カラム（５μ、４．６ｘ１５０ｍｍ）（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のいずれかを使用し、７％メタノール、９％アセトニトリル、及び８４％水を含むアイソクラティック移動相を用いたＨＰＬＣにより分析される。全てのノイラミン酸、例えば、Ｎｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）；Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）；Ｎｅｕ５，７Ａｃ２；Ｎｅｕ５，Ｇｃ９Ａｃ；Ｎｅｕ５，９Ａｃ２；及びＮｅｕ５，７（８），９Ａｃは、３０分でベースライン分離される。
ＥＰＯポリペプチドのＮ末端配列は、エドマン配列決定によって確認することができる。
単離されたＥＰＯポリペプチドは、Ｎ－グリカナーゼ（登録商標）（ＰＮＧａｓｅ Ｆ）（カタログ番号ＧＫＥ－５００６Ａ、ＰｒｏＺｙｍｅ、ＣＡ）を用い、その製造業者の指示を使用してＮ結合型グリカンを除去することができる。脱グリコシル化プロセスは、１９ｋＤのバンドが可視化され、ポリペプチドが脱グリコシル化されたことを示すまで、ＳＤＳ－ＰＡＧＥでモニターすることができる。脱グリコシル化されたＥＰＯポリペプチドの断片の配列は、タンデム質量分析を使用して分析することができる。
実施例８
ＥＰＯポリペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性
ＥＰＯポリペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性は、ＴＦ－１細胞増殖アッセイによって分析することができる。ＴＦ－１細胞は因子依存性のヒト赤白血病細胞である。ＥＰＯはＴＦ‐１細胞増殖を促進する因子の一つである。
ＥＰＯポリペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性
ＥＰＯポリペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性は、ＴＦ－１細胞増殖アッセイによって分析することができる。ＴＦ－１細胞は因子依存性のヒト赤白血病細胞である。ＥＰＯはＴＦ‐１細胞増殖を促進する因子の一つである。
増殖アッセイのために、ＴＦ－１細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２００３）を、１０％（ｖ／ｖ）のウシ胎児血清、２ｍＭのＬ－グルタミン、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び２ｎｇ／ｍＬのｒｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ カタログ番号２１５－ＧＭ）を添加したＲＰＭＩ １６４０（Ｉｒｖｉｎｅ カタログ番号９１６０）中で培養することができる。ＥＰＯポリペプチドで処理する前に、ＴＦ－１細胞を９６－フラットウェルプレートに１ｍＬあたり２ｘ１０５細胞で播種し、一晩付着させる。翌朝、細胞を異なる濃度のＥＰＯポリペプチドの酸性画分及び／又は塩基性画分で処理する。４８時間のインキュベーション後、ＭＴＴ試薬（カタログ番号：ＣＧＤ１、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を、製造業者の指示に従って、さらに４８～７２時間細胞に添加する。次に、不溶性の紫色の反応生成物をイソプロパノールで溶解し、プレートを５７０及び６９０ｎｍで読み取る。増殖強度は、バックグラウンドを補正した５７０ｎｍと６９０ｎｍの間の光学濃度の差（ΔＯＤ）として測定する。最大応答の半分（ＥＣ５０）を与えるＥＰＯポリペプチドの濃度は、各増殖曲線について決定することができる。ＥＰＯポリペプチドの高酸性画分は、グリコシル化の遮蔽効果のために、細胞ベースの機能アッセイにおいて塩基性画分よりも低い効力を示す可能性がある。それにもかかわらず、活性のレベルは、グリコシル化の位置に依存し得る。
実施例９
ＥＰＯ受容体の発現
ヒトＦｃに融合したネコ、イヌ、又はウマＥＰＯ受容体ポリペプチドの可溶性細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をコードするヌクレオチド配列を合成し、哺乳動物発現ベクターにクローニングし、ＣＨＯ細胞で発現させることができる。細胞ペレットからの上清は、発現を確認するために、プローブとして抗Ｆｃ抗体を使用して、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びウエスタンブロットによって分析され得る。
ＥＰＯ受容体の発現
ヒトＦｃに融合したネコ、イヌ、又はウマＥＰＯ受容体ポリペプチドの可溶性細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をコードするヌクレオチド配列を合成し、哺乳動物発現ベクターにクローニングし、ＣＨＯ細胞で発現させることができる。細胞ペレットからの上清は、発現を確認するために、プローブとして抗Ｆｃ抗体を使用して、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びウエスタンブロットによって分析され得る。
例えば、イヌ及びウマのＥＰＯＲタンパク質のアミノ酸配列は、それぞれＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）データベース：配列番号３３（ＮＰ ００１０４１５７６．１）及び配列番号３７（ＸＰ＿０２３５０１１３７．１）から入手した。イヌ及びウマのＥＰＯＲの例示的なＥＣＤが同定された（配列番号：３４、３５、３８、及び３９）。本明細書に開示されるイヌ及びウマのＥＰＯＲ ＥＣＤポリペプチドは、ヒトＦｃに融合され得る（例えば、それぞれ、配列番号３６及び４０）。
ネコＥＰＯＲの例示的なＥＣＤは、配列番号４２、４３、４５、４６、４８、４９、５１、及び５２として示される。
実施例１０
ＥＰＯポリペプチド結合アッセイ
ＥＰＯポリペプチド結合分析は、以下のように実施され得る。簡潔には、ヒトＦｃに融合したＥＰＯ受容体ＥＣＤは、ＥＺ－Ｌｉｎｋ ＮＨＳ－ＬＣ－ビオチン（カタログ番号２１３３６、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してビオチン化される。遊離した未反応のビオチンは透析によって除去される。ビオチン化生成物は、ストレプトアビジンセンサーチップ（カタログ番号１８－５０９、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）に捕捉される。
ＥＰＯポリペプチド結合アッセイ
ＥＰＯポリペプチド結合分析は、以下のように実施され得る。簡潔には、ヒトＦｃに融合したＥＰＯ受容体ＥＣＤは、ＥＺ－Ｌｉｎｋ ＮＨＳ－ＬＣ－ビオチン（カタログ番号２１３３６、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してビオチン化される。遊離した未反応のビオチンは透析によって除去される。ビオチン化生成物は、ストレプトアビジンセンサーチップ（カタログ番号１８－５０９、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）に捕捉される。
異なる濃度（例えば、１５０、５０、１７、５．６、及び１．９ｎＭ）のＥＰＯポリペプチドの会合を、９０秒などの一定時間にわたってモニターすることができる。次に、解離を６００秒などの一定時間にわたってモニターする。ドリフトを補正するために、バッファーのみのブランク曲線が差し引かれる。データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏＴＭデータ解析ソフトウェアを使用して１：１の結合モデルにフィッティングさせ、ｋｏｎ（会合速度定数）、ｋｏｆｆ（解離速度定数）及びＫｄ（解離定数）を決定する。
実施例１１
ＥＰＯＲに対するＥＰＯポリペプチドの結合のＥＬＩＳＡアッセイ
ＥＰＯポリペプチドのＥＰＯ受容体への結合は、ＥＬＩＳＡによって試験することができる。例えば、９６ウェルプレートをマウス抗ＥＰＯ特異的抗体（カタログ番号ＭＡＢ２８７、クローン９Ｃ２１Ｄ１１、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）でコーティングしてＥＰＯポリペプチドを捕捉することができる。ＥＰＯ結合ウェルを、例えば２００ｎｇ／ｍＬの濃度でヒトＥＰＯＲ－Ｆｃ（カタログ番号９６３－ＥＲ－０５０、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）とインキュベートし、結合したＥＰＯＲを抗ヒトＦｃ ＨＲＰ結合抗体によって検出する。
ＥＰＯＲに対するＥＰＯポリペプチドの結合のＥＬＩＳＡアッセイ
ＥＰＯポリペプチドのＥＰＯ受容体への結合は、ＥＬＩＳＡによって試験することができる。例えば、９６ウェルプレートをマウス抗ＥＰＯ特異的抗体（カタログ番号ＭＡＢ２８７、クローン９Ｃ２１Ｄ１１、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）でコーティングしてＥＰＯポリペプチドを捕捉することができる。ＥＰＯ結合ウェルを、例えば２００ｎｇ／ｍＬの濃度でヒトＥＰＯＲ－Ｆｃ（カタログ番号９６３－ＥＲ－０５０、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）とインキュベートし、結合したＥＰＯＲを抗ヒトＦｃ ＨＲＰ結合抗体によって検出する。
別の例として、ＭａｘｉＳｏｒｐ ９６ウェルプレートを、冷蔵温度（２～８℃）で抗ヒトＥＰＯ抗体（４μｇ／ｍＬ）で一晩コーティングし、室温で１時間ＰＢＳ中の５％ＢＳＡでブロックすることができる。ＥＰＯポリペプチド試料は、１％のＢＳＡ－ＰＢＳＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０）バッファー中で５００ｎｇ／ｍＬの濃度で開始する２倍段階希釈液で調製することができる。ＥＰＯポリペプチド希釈液を各ウェルに移し、室温で２時間インキュベートする。ヒトＦｃに融合したＥＰＯ受容体ＥＣＤ（例えば、１％のＢＳＡ－ＰＢＳＴバッファー中２００ｎｇ／ｍＬ）を各ウェルに加え、結合を室温で１時間進行させる。ウサギ抗ヒトＦｃ抗体と西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート（例えば、０．２μｇ／ｍＬ）を検出のために使用し、室温で１時間ウェル内に放置する。３，３，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）をＨＲＰ基質としてウェルに塗布し、シグナル発生のためにウェル内に５～７分間保持する。ＥＰＯポリペプチドとヒトＦｃに融合したＥＰＯ受容体ＥＣＤとの間の結合が決定される。平均検出シグナルをＥＰＯポリペプチド濃度に対してプロットし、曲線適合解析を行うことができる。
実施例１２
コンパニオンアニマルへのＥＰＯポリペプチドの投与
本明細書に記載のＥＰＯポリペプチドのいずれかの単回投与は、対照と比較して、１μｇ／ｋｇ、３μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、又は１０μｇ／ｋｇ超の皮下投与後に、正常又は貧血のコンパニオンアニマル、例えばネコ、イヌ、及び／又はウマにおいて評価され得る。用量漸増は、薬物動態、薬力学、安全性及び／又は有効性プロファイルを決定又は比較するために使用することができる。ＥＰＯの生物活性の指標として、絶対網状赤血球百分率を測定してもよい。簡潔には、ＥＰＯは赤血球細胞上のＥＰＯ受容体に結合し、受容体の二量体化はＪＡＫ２経路と赤血球生成のシグナル伝達を活性化する。赤血球細胞は網状赤血球に分化し、次に赤血球に分化する。このように、ＥＰＯの生物活性と赤血球生成の増加は、絶対網状赤血球の百分率の増加によって証明される。
コンパニオンアニマルへのＥＰＯポリペプチドの投与
本明細書に記載のＥＰＯポリペプチドのいずれかの単回投与は、対照と比較して、１μｇ／ｋｇ、３μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、又は１０μｇ／ｋｇ超の皮下投与後に、正常又は貧血のコンパニオンアニマル、例えばネコ、イヌ、及び／又はウマにおいて評価され得る。用量漸増は、薬物動態、薬力学、安全性及び／又は有効性プロファイルを決定又は比較するために使用することができる。ＥＰＯの生物活性の指標として、絶対網状赤血球百分率を測定してもよい。簡潔には、ＥＰＯは赤血球細胞上のＥＰＯ受容体に結合し、受容体の二量体化はＪＡＫ２経路と赤血球生成のシグナル伝達を活性化する。赤血球細胞は網状赤血球に分化し、次に赤血球に分化する。このように、ＥＰＯの生物活性と赤血球生成の増加は、絶対網状赤血球の百分率の増加によって証明される。
実施例１３
貧血コンパニオンアニマルにおけるＥＰＯポリペプチドの有効性試験
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｎａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＩＲＩＳ）ステージ３の慢性腎臓病（ＣＫＤ）及び貧血を有する顧客所有のコンパニオンアニマルにおいて、赤血球（ＲＢＣ）、網状赤血球、及びＱｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ（ＱｏＬ）に関する本明細書に記載のＥＰＯポリペプチドのいずれかの有効性を評価するために、非盲検の歴史的対照（コンパニオンアニマルの治療後及び治療前データと比較）、パイロット有効性試験を実施することができる。安全性は、有害事象（ＡＥ）と中和抗体の存在の照合によって評価することもできる。
貧血コンパニオンアニマルにおけるＥＰＯポリペプチドの有効性試験
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｎａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＩＲＩＳ）ステージ３の慢性腎臓病（ＣＫＤ）及び貧血を有する顧客所有のコンパニオンアニマルにおいて、赤血球（ＲＢＣ）、網状赤血球、及びＱｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ（ＱｏＬ）に関する本明細書に記載のＥＰＯポリペプチドのいずれかの有効性を評価するために、非盲検の歴史的対照（コンパニオンアニマルの治療後及び治療前データと比較）、パイロット有効性試験を実施することができる。安全性は、有害事象（ＡＥ）と中和抗体の存在の照合によって評価することもできる。
組み入れ基準には以下が含まれ得る：
コンパニオンアニマル：
１． 管理可能であり、試験手順と協調的である
２． ２回の連続した評価の間に空腹時血清クレアチニンが２５％増加する急速に進行性のＣＫＤを有する
３． ０日目で１歳以上であり、性別を問わず；無処置又は去勢されている；妊娠していない、授乳していない；任意の品種及び任意の体重
４． ＩＲＩＳステージ３のＣＫＤを有し、次のように定義される：
ａ）スクリーニング訪問時空腹時血清クレアチニン値２．９～５．０ｍｇ／ｄＬ、０日目から６ヵ月以内の血清クレアチニン値２．９～５．０ｍｇ／ｄＬ（空腹時又は非空腹時）の以前の病歴；及び
ｂ）尿比重（ＵＳＧ）＜１．０３５
５． 非再生性貧血及び１５～３０％のＨＣＴ
６． ＣＫＤの標準治療を受けている
コンパニオンアニマル：
１． 管理可能であり、試験手順と協調的である
２． ２回の連続した評価の間に空腹時血清クレアチニンが２５％増加する急速に進行性のＣＫＤを有する
３． ０日目で１歳以上であり、性別を問わず；無処置又は去勢されている；妊娠していない、授乳していない；任意の品種及び任意の体重
４． ＩＲＩＳステージ３のＣＫＤを有し、次のように定義される：
ａ）スクリーニング訪問時空腹時血清クレアチニン値２．９～５．０ｍｇ／ｄＬ、０日目から６ヵ月以内の血清クレアチニン値２．９～５．０ｍｇ／ｄＬ（空腹時又は非空腹時）の以前の病歴；及び
ｂ）尿比重（ＵＳＧ）＜１．０３５
５． 非再生性貧血及び１５～３０％のＨＣＴ
６． ＣＫＤの標準治療を受けている
除外基準には以下が含まれ得る：
コンパニオンアニマル：
１． ほとんど屋外に住んでいる（毎日の＞６０％は屋外で過ごす）
２． ２回の連続した評価の間に空腹時血清クレアチニンが２５％増加する急速に進行性のＣＫＤを有する
３． エリスロポエチン刺激剤による治療を受けたことがある
４． ０日目から６週間以内に全赤血球又は濃厚赤血球が投与されている；
５． 尿路感染症（ＵＴＩ）を有する。但し次の例外を除く：ＵＴＩのコンパニオンアニマルは、適切な抗生物質療法（培養／感受性に基づく）による３週間の治療後に登録され、培養陰性を繰り返し得る
６． 以下の疾患／状態のいずれかを有する：
・新生物
・肝疾患
・ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）
・ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）
・糖尿病（ＤＭ）
・甲状腺機能亢進症
・ヘマトクリット＜１５％
・全身血圧＞１６０ｍｍＨｇ
７． ０日目の２週間前にＣＫＤに対する新たな処方又は既存の併用薬若しくは治療法への処方変更（用量又は投与回数）が必要である。
コンパニオンアニマル：
１． ほとんど屋外に住んでいる（毎日の＞６０％は屋外で過ごす）
２． ２回の連続した評価の間に空腹時血清クレアチニンが２５％増加する急速に進行性のＣＫＤを有する
３． エリスロポエチン刺激剤による治療を受けたことがある
４． ０日目から６週間以内に全赤血球又は濃厚赤血球が投与されている；
５． 尿路感染症（ＵＴＩ）を有する。但し次の例外を除く：ＵＴＩのコンパニオンアニマルは、適切な抗生物質療法（培養／感受性に基づく）による３週間の治療後に登録され、培養陰性を繰り返し得る
６． 以下の疾患／状態のいずれかを有する：
・新生物
・肝疾患
・ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）
・ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）
・糖尿病（ＤＭ）
・甲状腺機能亢進症
・ヘマトクリット＜１５％
・全身血圧＞１６０ｍｍＨｇ
７． ０日目の２週間前にＣＫＤに対する新たな処方又は既存の併用薬若しくは治療法への処方変更（用量又は投与回数）が必要である。
コンパニオンアニマルは、ＥＰＯポリペプチドを約７～１０日の間隔をおいて開始用量で２回皮下投与され、６週間追跡され得る。コンパニオンアニマルは、鉄デキストランを同時に投与され得る。
以下のデータを全ての訪問（予定又は予定外）で収集及び／又は評価することができる：病歴を含む身体診察、生活の質（活力、快適さ、及び精神的安定）、食欲、活動（首輪に装着したベトラックス活動センサ）、血圧、及び観察された事象の所有者日誌。初回スクリーニング時及び第６週の訪問時に、血液学的検査、生化学的検査、尿タンパクとクレアチニンの比を用いた尿検査、及びＳＤＭＡ評価が実施され得る。尿培養±感度は、ベースライン時及び必要に応じて研究全体を通して評価され得る。ヘマトクリットは、予定されている訪問と予定されていない訪問の全てにおいて社内で評価され得る。
ベースラインのヘマトクリット値、体重、ＳＤＭＡ、血清クレアチニン腎バイオマーカー、又は他の測定値の変化が決定され得る。
実施例１４
増加したプロテインＡ結合及び／又は減少した補体結合及び／又は減少したＣＤ１６結合のためのバリアントイヌＩｇＧ Ｆｃポリペプチド
プロテインＡ親和性を使用した抗体の精製は、十分に開発されたプロセスである。しかしながら、イヌＩｇＧの４つのサブタイプの中で、ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ（例えば、配列番号５４又は配列番号５５）のみがプロテインＡ結合親和性を有する。イヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ（例えば、配列番号５３）、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ（例えば、配列番号５６又は配列番号５７）、及びＩｇＧ－ＤＦｃ（例えば、配列番号５８）は、プロテインＡ結合親和性が弱いか、測定できない。バリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、及びＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチドは、改変されたプロテインＡ結合のために設計された。
増加したプロテインＡ結合及び／又は減少した補体結合及び／又は減少したＣＤ１６結合のためのバリアントイヌＩｇＧ Ｆｃポリペプチド
プロテインＡ親和性を使用した抗体の精製は、十分に開発されたプロセスである。しかしながら、イヌＩｇＧの４つのサブタイプの中で、ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ（例えば、配列番号５４又は配列番号５５）のみがプロテインＡ結合親和性を有する。イヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ（例えば、配列番号５３）、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ（例えば、配列番号５６又は配列番号５７）、及びＩｇＧ－ＤＦｃ（例えば、配列番号５８）は、プロテインＡ結合親和性が弱いか、測定できない。バリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、及びＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチドは、改変されたプロテインＡ結合のために設計された。
さらに、イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｃ Ｆｃは補体活性を有し、Ｃ１ｑに結合するが、イヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｄ Ｆｃは、Ｃ１ｑに対する結合親和性が弱いか、測定できない。Ｃ１ｑ結合を潜在的に低減させ、且つ／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｃ Ｆｃポリペプチドを設計した。
さらに、イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｃ Ｆｃは、ＣＤ１６結合活性を有する。ＣＤ１６のＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｃ Ｆｃへの結合を潜在的に低減させるため、且つ／又はＡＤＣＣを潜在的に低減させるために、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｃ Ｆｃポリペプチドを設計した。
以下の表１１は、イヌＩｇＧ ＦｃサブタイプのプロテインＡ及びＣ１ｑ結合特性をまとめたものである。注目すべきは、野生型イヌＩｇＧ Ｆｃサブタイプのうち、Ｃ１ｑ結合を欠き、且つプロテインＡに結合するものがないことである。
表１１
三次元タンパク質モデリングとタンパク質配列分析を使用して、プロテインＡと接触している可能性が高いイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃの配列を同定した。２つのアプローチを使用して、増加したプロテインＡ結合のためのバリアントイヌＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｃ、及びＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチドを設計した。第１のアプローチでは、バリアントイヌＩｇＧ－Ａ、ＩｇＧ－Ｃ、及びＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチドは、イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃと同じプロテインＡ結合モチーフ配列を有するように設計された（例えば、それぞれ、配列番号５９、配列番号６０、及び配列番号６１）。第２のアプローチでは、バリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ Ｉ（２１）Ｔ／Ｑ（２０７）Ｈ（配列番号６２）、バリアントイヌＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ Ｉ（２１）Ｔ（配列番号６３）、及びバリアントイヌＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ Ｉ（２１）Ｔ／Ｑ（２０７）Ｈ（配列番号６４）は、イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ配列に対応するプロテインＡ結合領域に１つ又は２つのアミノ酸置換を含めて設計された。
さらに、表１２に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換を有する、プロテインＡ結合が増加したバリアントイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、及びＩｇＧ－Ｄ Ｆｃポリペプチドを調製することができる。
表１２
Ｃ１ｑのイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｃ Ｆｃへの結合を潜在的に低減させ、且つ／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、配列番号５４又は配列番号５６のそれぞれの９３位に対応するアミノ酸位置に、Ｌｙｓを除く任意のアミノ酸によるＬｙｓのアミノ酸置換を有するバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｃ Ｆｃポリペプチドを調製することができる。これらのアミノ酸置換は、補体活性を示さないと理解されているイヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｄ Ｆｃと比較した、イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｃ Ｆｃのタンパク質配列及び３Ｄ構造モデリングの解析後に同定された。例えば、バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ Ｋ（９３）Ｒ（配列番号６５）及びバリアントイヌＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ Ｋ（９３）Ｒ（配列番号６６）を調製することができる。野生型イヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃを含む融合タンパク質と比較した場合、ヒトＣ１ｑとバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ Ｋ（９３）Ｒを含む融合タンパク質との間の結合の低減が観察された。
ＣＤ１６のＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｃ Ｆｃへの結合を潜在的に低減させ、且つ／又はＡＤＣＣを潜在的に低減させるために、表１３に記載されたアミノ酸置換の１つ又は複数を有するバリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ及びＩｇＧ－Ｃ Ｆｃポリペプチドを調製することができる（例えば、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、及び／又は配列番号８１）。アミノ酸置換は、ＡＤＣＣ活性を示さないと理解されているＩｇＧ－Ａ及びＩｇＧ－Ｄと比較した、イヌＩｇＧ－Ｂ及びＩｇＧ－Ｃのタンパク質配列及び３Ｄ構造モデリングの解析後に同定された。
表１３
野生型イヌＩｇＧ－Ｃ ＦｃはプロテインＡ結合を欠き、Ｃ１ｑ結合を有するため、プロテインＡに結合し、低減したＣ１ｑへの結合を有する二重バリアントイヌＩｇＧ－Ｃ Ｆｃは、表１２に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換をＫ（９３）Ｒ置換又はＫ（９３）Ｘ置換［ここで、ＸはＬｙｓを除く任意のアミノ酸である］と組み合わせることによって調製することができる（例えば、配列番号８２）。Ｃ１ｑへの結合が低減し、ＣＤ１６への結合が低減した二重バリアントイヌＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ又は二重バリアントイヌＩｇＧ－Ｃ Ｆｃは、表１３に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換をＫ（９３）Ｒ置換又はＫ（９３）Ｘ置換［ここで、ＸはＬｙｓを除く任意のアミノ酸である］と組み合わせることによって調製することができる（例えば、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、及び／又は配列番号８６）。プロテインＡに結合し、Ｃ１ｑ及びＣＤ１６への結合が低減した三重バリアントイヌ－ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃは、表１２に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換及び表１３に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換を、Ｋ（９３）Ｒ置換又はＫ（９３）Ｘ置換［ここで、ＸはＬｙｓを除く任意のアミノ酸である］と組み合わせることによって調製することができる。
任意のバリアントイヌＩｇＧ ＦｃのプロテインＡ、ＣＤ１６、及び／又はＣ１ｑへの結合を決定し、別のＩｇＧ Ｆｃ（例えば、対応する野生型イヌＩｇＧ Ｆｃ、別の野生型若しくはバリアントイヌＩｇＧ Ｆｃ、又は別のコンパニオンアニマルの野生型若しくはバリアントＩｇＧ Ｆｃなど）のプロテインＡ、ＣＤ１６、及び／又はＣ１ｑへの結合と比較することができる。
結合解析は、オクテットバイオセンサーを使用して行うことができる。簡潔には、標的分子（例えば、プロテインＡ、Ｃ１ｑ、ＣＤ１６など）が、ビオチン化され、遊離の未反応ビオチンが（例えば、透析によって）除去され得る。ビオチン化標的分子は、ストレプトアビジンセンサーの先端上に捕捉される。標的分子と様々な濃度（例えば、１０μｇ／ｍＬ）のＩｇＧ Ｆｃポリペプチドとの会合を、指定された時間、又は定常状態に達するまでモニターする。解離を、指定された時間、又は定常状態に達するまでモニターする。ドリフトを補正するために、バッファーのみのブランク曲線を差し引くことができる。データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏＴＭデータ解析ソフトウェアを使用して１：１の結合モデルにフィッティングさせ、ｋｏｎ、ｋｏｆｆ、及びＫｄを決定する。
実施例１５
増加したプロテインＡ結合及び／又は減少した補体結合のためのバリアントウマＩｇＧ Ｆｃポリペプチド
増加したプロテインＡ結合及び／又は減少した補体結合のためのバリアントウマＩｇＧ Ｆｃポリペプチド
ウマＩｇＧの７つのサブタイプのうち、ＩｇＧ１ Ｆｃ（例えば、配列番号８７）、ＩｇＧ３ Ｆｃ（例えば、配列番号９０）、ＩｇＧ４ Ｆｃ（例えば、配列番号９１）、ＩｇＧ７ Ｆｃ（例えば、配列番号ＩＤ ＮＯ：９４）は、プロテインＡ結合親和性を有する。ウマＩｇＧ２Ｆｃ（例えば、配列番号８８、配列番号８９）、ＩｇＧ５ Ｆｃ（例えば、配列番号９２）、及びＩｇＧ６ Ｆｃ（例えば、配列番号９３）は、プロテインＡ結合親和性が弱いか、測定できない。バリアントウマＩｇＧ２Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、及びＩｇＧ６ Ｆｃポリペプチドは、改変されたプロテインＡ結合のために設計された。
さらに、ウマＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、及びＩｇＧ６ Ｆｃは、Ｃ１ｑに対する結合親和性が弱いか測定できないが、一方、ウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、及びＩｇＧ７ ＦｃはＣ１ｑに結合する。Ｃ１ｑ結合を潜在的に低減させるため、且つ／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、バリアントウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、及びＩｇＧ７ Ｆｃポリペプチドを設計した。
以下の表１４は、ウマＩｇＧ ＦｃサブタイプのプロテインＡ及びＣ１ｑ結合特性をまとめたものである。注目すべきは、野生型ウマＩｇＧ Ｆｃサブタイプのうち、Ｃ１ｑ結合を欠き、且つプロテインＡに結合するものがないことである。
表１４
三次元タンパク質モデリングとタンパク質配列分析を使用して、プロテインＡと接触している可能性が高いウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、及びＩｇＧ７ Ｆｃの配列を同定した。さらに、表１５に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換を有する、プロテインＡ結合が増加したバリアントウマＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、及びＩｇＧ６ Ｆｃポリペプチドを調製することができる。
表１５
例えば、バリアントウマＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、及びＩｇＧ６ Ｆｃポリペプチドは、プロテインＡに結合する野生型ウマＩｇＧ Ｆｃの配列に対応するプロテインＡ結合領域に１つ又は複数のアミノ酸置換を含めて設計された。プロテインＡ結合が増加したバリアントウマＩｇＧ２ Ｆｃ Ｆ（２０３）Ｙ（配列番号９５）；バリアントウマＩｇＧ２ Ｆｃ Ａ（１５）Ｔ／Ｆ（２０３）Ｙ（配列番号９６）；バリアントウマＩｇＧ５ Ｆｃ Ｖ（１９９）Ｌ／Ｅ（２００）Ｙ（配列番号９７）；及びバリアントウマＩｇＧ６ Ｆｃ Ｉ（１９９）Ｌ／Ｒ（２００）Ｈ／２０１）Ｎ／Ｔ（２０２）Ｈ（配列番号９８）を調製することができる。
Ｃ１ｑのウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、及びＩｇＧ７ Ｆｃへの結合を潜在的に低減させ、且つ／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、配列番号９７、配列番号９０、配列番号９１又は配列番号９４のそれぞれの８７位に対応するアミノ酸位置に、Ｌｙｓを除く任意のアミノ酸によるＬｙｓのアミノ酸置換を有するバリアントイヌＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、及びＩｇＧ７ Ｆｃポリペプチドを調製することができる。これらのアミノ酸置換は、補体活性を示さないと理解されているウマＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、及びＩｇＧ６ Ｆｃと比較して、ウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、及びＩｇＧ７ Ｆｃのタンパク質配列及び３－Ｄ構造モデリングの解析後に同定された。例えば、バリアントウマＩｇＧ１ Ｆｃ Ｋ（８７）Ｓ（配列番号９９）、バリアントウマＩｇＧ３ Ｆｃ Ｋ（８７）Ｓ（配列番号１００）、バリアントウマＩｇＧ４ Ｆｃ Ｋ（８７）Ｓ（配列番号：１０１）、及びバリアントウマＩｇＧ７ Ｆｃ Ｋ（８７）Ｓ（配列番号１０２）を調製することができる。
任意のバリアントウマＩｇＧ ＦｃのプロテインＡ及び／又はＣ１ｑへの結合を決定し、別のＩｇＧ Ｆｃ（例えば、対応する野生型ウマＩｇＧ Ｆｃ、別の野生型若しくはバリアントウマＩｇＧ Ｆｃ、又は別のコンパニオンアニマルの野生型若しくはバリアントＩｇＧ Ｆｃなど）のプロテインＡ及び／又はＣ１ｑへの結合と比較することができる。実施例１４に記載されている結合アッセイを使用することができる。
実施例１６
減少した補体結合のためのバリアントネコＩｇＧ Ｆｃポリペプチド
ネコＩｇＧの３つのサブタイプ、ＩｇＧ１ａ Ｆｃ（配列番号１０３又は配列番号１０４）、ＩｇＧ１ｂ Ｆｃ（配列番号１０５又は配列番号１０６）、及びＩｇＧ２ Ｆｃ（配列番号１０７）のそれぞれは、プロテインＡ結合親和性を有する。ただし、ネコＩｇＧ２ ＦｃのみがＣ１ｑへの結合親和性が弱いか測定できないが、一方、ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ、ＩｇＧ１ｂ ＦｃはＣ１ｑに結合する。Ｃ１ｑ結合を潜在的に低減させるため、及び／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、バリアントネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ及びＩｇＧ１ｂ Ｆｃポリペプチドが設計された。
減少した補体結合のためのバリアントネコＩｇＧ Ｆｃポリペプチド
ネコＩｇＧの３つのサブタイプ、ＩｇＧ１ａ Ｆｃ（配列番号１０３又は配列番号１０４）、ＩｇＧ１ｂ Ｆｃ（配列番号１０５又は配列番号１０６）、及びＩｇＧ２ Ｆｃ（配列番号１０７）のそれぞれは、プロテインＡ結合親和性を有する。ただし、ネコＩｇＧ２ ＦｃのみがＣ１ｑへの結合親和性が弱いか測定できないが、一方、ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ、ＩｇＧ１ｂ ＦｃはＣ１ｑに結合する。Ｃ１ｑ結合を潜在的に低減させるため、及び／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、バリアントネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ及びＩｇＧ１ｂ Ｆｃポリペプチドが設計された。
以下の表１６は、ネコＩｇＧ ＦｃサブタイプのプロテインＡ及びＣ１ｑ結合特性をまとめたものである。注目すべきは、野生型ウマＩｇＧ Ｆｃサブタイプのうち、Ｃ１ｑ結合を欠き、且つプロテインＡに結合するものがないことである。
表１６
Ｃ１ｑのネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ及びＩｇＧ１ｂ Ｆｃへの結合を潜在的に低減させ、且つ／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５又は配列番号１０６の１９８位に対応するアミノ酸位置に、Ｐｒｏを除く任意のアミノ酸によるＰｒｏのアミノ酸置換を有するバリアントネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ及びＩｇＧ１ｂ Ｆｃポリペプチドを調製することができる。これらのアミノ酸置換は、補体活性を示さないと理解されているネコＩｇＧ２ Ｆｃと比較した、ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ及びＩｇＧ１ｂ Ｆｃのタンパク質配列及び３Ｄ構造モデリングの解析後に同定された。例えば、バリアントネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ Ｐ（１９８）Ａ（例えば、配列番号１０８又は配列番号１０９）及びバリアントネコＩｇＧ１ｂ Ｆｃ Ｐ（１９８）Ａ（例えば、配列番号１１０又は配列番号１１１）を調製することができる。
任意のバリアントネコＩｇＧ ＦｃのＣ１ｑへの結合を決定し、別のＩｇＧ Ｆｃ（例えば、対応する野生型ネコＩｇＧ Ｆｃ、別の野生型若しくはバリアントネコＩｇＧ Ｆｃ、又は別のコンパニオンアニマルの野生型若しくはバリアントＩｇＧ Ｆｃなど）のＣ１ｑへの結合と比較することができる。実施例１４に記載されている結合アッセイを使用することができる。
実施例１７
ネコＥＰＯ Ｅ４４のＮ結合型グリコシル化部位
野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４前駆体形態（配列番号７又は「野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４」）は、アミノ酸位置５０～５２、６４～６６、及び１０９～１１１に３つのＮ結合型グリコシル化部位を有し、これらは野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４成熟形態（配列番号８又は「野生型ネコＥＰＯ Ｅ１８」）のアミノ酸位置２４～２６、３８～４０、及び８３～８５に対応する。
ネコＥＰＯ Ｅ４４のＮ結合型グリコシル化部位
野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４前駆体形態（配列番号７又は「野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４」）は、アミノ酸位置５０～５２、６４～６６、及び１０９～１１１に３つのＮ結合型グリコシル化部位を有し、これらは野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４成熟形態（配列番号８又は「野生型ネコＥＰＯ Ｅ１８」）のアミノ酸位置２４～２６、３８～４０、及び８３～８５に対応する。
追加のＮ結合型グリコシル化部位も、野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４及び野生型ネコＥＰＯ Ｅ１８アミノ酸配列に導入され得る。例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの追加のＮ結合型グリコシル化部位が、野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４／Ｅ１８アミノ酸配列に導入され得る。Ｎ結合型グリコシル化部位は、Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒのコンセンサス配列を有し得、ここで、Ｘａａはプロリンを除く任意のアミノ酸である。１つ又は複数のグリコシル化部位の追加は、ネコＥＰＯ分子の分子サイズを増加させ、より多くのシアル酸付加部位を提供し、且つ／又は動物の血清中の分子の半減期を改善し得る。
表１７は、１つ又は複数の追加のＮ結合型グリコシル化部位を生成するために使用され得る野生型ネコＥＰＯ Ｅ４４及びＥ１８のアミノ酸置換を列挙する。少なくとも１つの追加のＮ結合型グリコシル化部位を有するネコＥＰＯポリペプチドの例示的なアミノ酸配列には、配列番号１１２～１１９が含まれる。
表１７
実施例１８
ネコＥＰＯの不対システインの同定と除去
不対システインは、ジスルフィドスクランブリング（不正確なジスルフィド結合形成）や分子間共有結合ジスルフィド結合などの望ましくない作用を引き起こすことがある。野生型ネコＥＰＯは、２つのシステイン対と、前駆体ネコＥＰＯ配列（配列番号７）の１６５位に対応する成熟ネコＥＰＯ配列（配列番号８）の１３９位に１つの不対システインを有することが決定された。成熟配列の１３９位のシステインは、スレオニン、セリン、又はアラニンなどの任意の他のアミノ酸と置換され得る（例えば、配列番号１２２及び１２３を参照）。
ネコＥＰＯの不対システインの同定と除去
不対システインは、ジスルフィドスクランブリング（不正確なジスルフィド結合形成）や分子間共有結合ジスルフィド結合などの望ましくない作用を引き起こすことがある。野生型ネコＥＰＯは、２つのシステイン対と、前駆体ネコＥＰＯ配列（配列番号７）の１６５位に対応する成熟ネコＥＰＯ配列（配列番号８）の１３９位に１つの不対システインを有することが決定された。成熟配列の１３９位のシステインは、スレオニン、セリン、又はアラニンなどの任意の他のアミノ酸と置換され得る（例えば、配列番号１２２及び１２３を参照）。
Claims (178)
- 配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８に存在しない少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位の存在を除いた、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含むエリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチドであって、ここで、Ｎ結合型グリコシル化部位は、アスパラギン－ｘａａ－セリン又はアスパラギン－ｘａａ－スレオニンの配列を含み、ｘａａはプロリンを除く任意のアミノ酸であり、１つのＮ結合型グリコシル化部位は別のＮ結合型グリコシル化部位と重複しない、エリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチド。
- 少なくとも１つのＮ結合型グリコシル化部位のそれぞれが、
ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４７～４９、５５～５７、５６～５８、６０～６２、６１～６３、７９～８１、８１～８３、８２～８４、９１～９３、９２～９４、９７～９９、９８～１００、９９～１０１、１１２～１１４、１１３～１１５、１１４～１１６、１１５～１１７、１１６～１１８、１３７～１３９、１３８～１４０、１４０～１４２、１４１～１４３、１４２～１４４、１４３～１４５、１４４～１４６、１４５～１４７、１４６～１４８、１４７～１４９、１４８～１５０、１４９～１５１、１５０～１５２、１６１～１６３、１６２～１６４、１８４～１８６、及び１８６～１８８位から選択される位置；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２１～２３、２９～３１、３０～３２、３４～３６、３５～３７、５３～５５、５５～５７、５６～５８、６５～６７、６６～６８、７１～７３、７２～７４、７３～７５、８６～８８、８７～８９、８８～９０、８９～９１、９０～９２、１１１～１１３、１１２～１１４、１１４～１１６、１１５～１１７、１１６～１１８、１１７～１１９、１１８～１２０、１１９～１２１、１２０～１２２、１２１～１２３、１２２～１２４、１２３～１２５、１２４～１２６、１３５～１３７、１３６～１３８、１５８～１６０、及び１６２～１６４位から選択される位置
に存在する、請求項１に記載のＥＰＯポリペプチド。 - 配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位若しくは１４８位に対応する位置、又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位若しくは１２２位に対応する位置にプロリンを除くアミノ酸を含む、請求項１又は請求項２に記載のＥＰＯポリペプチド。
- 配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位若しくは１４８位に対応する位置、又は配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位若しくは１２２位に対応する位置にバリン又はグルタミン酸を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の５８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、若しくは配列番号３、若しくは配列番号７の６３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の３７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の７９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の５８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号８の９３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１００位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１００位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１０１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の７５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン、及び任意選択的に、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン、及び任意選択的に、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸
を含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、配列番号７の１１５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の８９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１１８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の９２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、若しくは配列番号３、若しくは配列番号７の１３９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１３９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から２６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１１９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から２９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から３０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４７位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４８位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４９位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から３１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から３２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１４９位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５０位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５１位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２３位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２４位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２５位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５０位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５１位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１５２位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１２６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から３４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６１位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６２位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６３位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３５位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３６位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３７位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から３５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１６４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１３８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から３６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８４位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８５位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８６位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１５８位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１５９位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６０位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から３７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８６位に対応する位置にアスパラギン、配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８７位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の１８８位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６２位に対応する位置にアスパラギン、配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６３位に対応する位置にプロリンを除く任意のアミノ酸、及び配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１６４位に対応する位置にセリン若しくはスレオニン
を含む、請求項１から３８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - 配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、又は配列番号１２１のアミノ酸配列を含む、請求項１から３９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- 配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８に存在しない少なくとも１つのシステインの存在を除いて、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチド。
- ａ）配列番号１、配列番号３、又は配列番号７の４５、４８、４９、６８、８６、９０、９２、１２０、１４３、１４４、及び／若しくは１７２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、又は配列番号８の１９、２２、２３、４２、６０、６４、６６、９４、１１７、１１８、及び／若しくは１４６位にシステイン
を含む、請求項１から４１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４５位及び１７２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の１９位及び１４６位にシステイン
を含む、請求項４１又は請求項４２に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４８位及び１２０位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２２位及び９４位にシステイン
を含む、請求項４１から４３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の４９位及び１７２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の２３位及び１４６位にシステイン
を含む、請求項４１から４４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の６８位及び９２位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の４２位及び６６位にシステイン
を含む、請求項４１から４５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の９０位及び１４４位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６４位及び１１８位にシステイン
を含む、請求項４１から４６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - ａ）配列番号１、配列番号３、若しくは配列番号７の８６位及び１４３位にシステイン；又は
ｂ）配列番号２、配列番号４、若しくは配列番号８の６０位及び１１７位にシステイン
を含む、請求項４１から４７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。 - 配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２のアミノ酸配列を含む、請求項１から４８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- 配列番号７の１６５位に対応する位置又は配列番号８の１３９位に対応する位置にシステイン以外のアミノ酸を含む、請求項１から４９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- 配列番号７の１６５位又は配列番号８の１３９位におけるシステイン以外のアミノ酸の存在を除く、配列番号７又は配列番号８のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチド。
- システイン以外のアミノ酸がスレオニン、セリン、又はアラニンである、請求項５０又は５１に記載のＥＰＯポリペプチド。
- Ｎ結合型グリコシル化部位がアミノ酸誘導体を含む、請求項１から５２のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- アミノ酸誘導体がアスパラギン誘導体、セリン誘導体、又はスレオニン誘導体である、請求項５３に記載のＥＰＯポリペプチド。
- ＥＰＯポリペプチドがグリコシル化されている、請求項１から５４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- Ｎ結合型グリコシル化部位に結合した少なくとも１つのグリカン部分を含む、請求項１から５５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- ＥＰＯポリペプチドがＰＥＧ化されている、請求項１から５６のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- ＥＰＯポリペプチドがグリカンでＰＥＧ化されている、請求項１から５７のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- ＥＰＯポリペプチドが一級アミンでＰＥＧ化されている、請求項１から５８のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- ＥＰＯポリペプチドがＮ末端のアルファアミンでＰＥＧ化されている、請求項１から５９のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
- 連続したポリペプチドがＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む、請求項１から６０のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドを含む連続したポリペプチド。
- ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、請求項６１に記載の連続したポリペプチド。
- ＩｇＧ ＦｃポリペプチドがバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、請求項６１に記載の連続したポリペプチド。
- ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して増加したプロテインＡへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；
ｂ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣ１ｑへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；及び／又は
ｃ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣＤ１６への結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾
を含むバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、請求項６０から６３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ超、１×１０－５Ｍ超、５×１０－５Ｍ超、１×１０－４Ｍ超、５×１０－４Ｍ超、又は１×１０－３Ｍ超の解離定数（Ｋｄ）でＣ１ｑ及び／又はＣＤ１６に結合する、請求項６０から６４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
- バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、又は１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でプロテインＡに結合する、請求項６０から６５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
- コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ又はウマである、請求項６０から６６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
- 野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）イヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ；
ｂ）ウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、ＩｇＧ６ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ７ Ｆｃ；又は
ｃ）ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ、ＩｇＧ１ｂ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ２ Ｆｃ
である、請求項６０から６７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位に対応する位置でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位及び／若しくは２０２位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、請求項６０から６８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位、及び／若しくは２０２位でのアミノ酸置換
を含む、請求項６０から６９のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、２０５位に対応する位置にアラニン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、及び／若しくは２４位に対応する位置にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位に対応する位置にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位に対応する位置にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位に対応する位置にロイシン及び／若しくは２００位に対応する位置にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位に対応する位置にロイシン、２００位に対応する位置にヒスチジン、２０１位に対応する位置にアスパラギン、及び／若しくは２０２位に対応する位置にヒスチジン
を含む、請求項６０から７０のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、２０５位にアラニン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、及び／若しくは２４位にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位にロイシン及び／若しくは２００位にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位にロイシン、２００位にヒスチジン、２０１位にアスパラギン、及び／若しくは２０２位にヒスチジン
を含む、請求項６０から７１のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、請求項６０から７２のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位でのアミノ酸置換
を含む、請求項６０から７３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置にアラニン
を含む、請求項６０から７４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位にアラニン
を含む、請求項６０から７５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、請求項６０から７６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換
を含む、請求項６０から７７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置にイソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置イソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン
を含む、請求項６０から７８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン
を含む、請求項６０から８０のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含む、請求項６０から８１のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
- 等電点電気泳動法により決定される、約１から約３．５、約１．５から約３．５、約２から約３．５、約２．５から約３．５、約３から約３．５、約３．５以下、又は約３以下の等電点の範囲を有する請求項１から８１のいずれか一項に記載の複数のＥＰＯポリペプチドを含む組成物。
- 等電点電気泳動法により決定される、約３．５から約６、約４から約６、約４．５から約６、約５から約６、約５．５から約６、約３．５から約５、約４から約５、約４．５から約５、約３．５以上、約４以上、又は約４．５以上の範囲の等電点を有する請求項１から８１のいずれか一項に記載の複数のＥＰＯポリペプチドを含む組成物。
- 請求項８２に記載の組成物及び請求項８３に記載の組成物を含む組み合わせ。
- 請求項１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする単離された核酸。
- 核酸が調節配列を含む、請求項８５に記載の核酸。
- 調節配列が構成的プロモーター；テトラサイクリン応答エレメント若しくは低酸素誘導性プロモーターなどの誘導性調節配列；組織特異的プロモーター；エンハンサー；サイレンサーである；又はマイクロＲＮＡ若しくは転写因子をコードする、請求項８６に記載の核酸。
- 配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチドをコードする単離された核酸；及び異種調節配列が構成的プロモーターではない、異種調節配列。
- 異種調節配列が、テトラサイクリン応答エレメント若しくは低酸素誘導性プロモーターなどの誘導性調節配列；組織特異的プロモーター；エンハンサー；サイレンサーである；又はマイクロＲＮＡ若しくは転写因子をコードする、請求項６４に記載の核酸。
- 請求項８６から８９のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
- ベクターがウイルスベクター又は細菌ベクターである、請求項９０に記載のベクター。
- ベクターがレトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、又はポックスウイルスベクターである、請求項９０又は請求項９１に記載のベクター。
- 請求項１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸を含む第１のベクター；及び調節配列を含む第２のベクターを含む発現系。
- 配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を含むＥＰＯポリペプチドをコードする核酸を含む第１のベクター；及び調節配列を含む第２のベクターを含む発現系。
- 調節配列がマイクロＲＮＡ又は転写因子をコードする、請求項９３又は請求項９４に記載の発現系。
- 第１のベクター及び／又は第２のベクターがウイルスベクター又は細菌ベクターである、請求項９３から９５のいずれか一項に記載の発現系。
- 第１のベクター及び／又は第２のベクターが、レトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、又はポックスウイルスベクターである、請求項９３から９６のいずれか一項に記載の発現系。
- 請求項８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、請求項９０から９２のいずれか一項に記載のベクター、又は請求項９３から９７のいずれか一項に記載の発現系を含む宿主細胞。
- 請求項９８に記載の宿主細胞を培養することと、ＥＰＯポリペプチドを単離することとを含む、ＥＰＯポリペプチドを含む組成物を生成する方法。
- ＥＰＯポリペプチドがカラムクロマトグラフィーによって単離される、請求項９９に記載の方法。
- ＥＰＯポリペプチドがイオン交換カラムクロマトグラフィーによって単離される、請求項９９又は請求項１００に記載の方法。
- ＥＰＯポリペプチドがＣａｐｔｏ Ｂｕｔｙｌカラムクロマトグラフィー、陽イオン交換カラムクロマトグラフィー、又は陰イオン交換カラムクロマトグラフィーによって単離される、請求項９９から１０１のいずれか一項に記載の方法。
- ＥＰＯポリペプチドが混合モードカラムクロマトグラフィーによって単離される、請求項９９から１０２のいずれか一項に記載の方法。
- ＥＰＯポリペプチドが疎水性相互作用カラムクロマトグラフィーによって単離される、請求項９９から１０３のいずれか一項に記載の方法。
- ＥＰＯポリペプチドがクロマトグラフィーカラムの組み合わせによって単離される、請求項９９から１０４のいずれか一項に記載の方法。
- ウイルスを不活化すること及び／又は除去することをさらに含む、請求項９９から１０５のいずれか一項に記載の方法。
- ＥＰＯポリペプチドが、等電点電気泳動法によって決定される、約１から約３．５、約１．５から約３．５、約２から約３．５、約２．５から約３．５、約３から約３．５、約３．５以下、又は約３以下の等電点の範囲を有する、請求項９９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
- ＥＰＯポリペプチドが、等電点電気泳動法により決定される、約３．５から約６、約４から約６、約４．５から約６、約５から約６、約５．５から約６、約３．５から約５、約４から約５、約４．５から約５、約３．５以上、約４以上、又は約４．５以上の範囲の等電点を有する、請求項９９から１０６のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項８２若しくは請求項８３に記載の組成物、請求項８４に記載の組み合わせ、請求項８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、請求項９０から９２のいずれか一項に記載のベクター、又は請求項９３から９７のいずれか一項に記載の発現系と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物。
- 請求項１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項８２若しくは請求項８３に記載の組成物、又は請求項８４に記載の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、ここで、薬学的に許容される担体が、ａ）リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０；ｂ）リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート２０；ｃ）クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０；又はｄ）クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート２０を含む、薬学的組成物。
- 請求項１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項８２若しくは請求項８３に記載の組成物、又は請求項８４に記載の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、ここで、薬学的に許容される担体が、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０、及びｍ－クレゾールを含む、薬学的組成物。
- 請求項１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項８２若しくは請求項８３に記載の組成物、又は請求項８４に記載の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、ここで、薬学的に許容される担体が、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ポリソルベート２０、及びベンジルアルコールを含む、薬学的組成物。
- 塩化ナトリウムの濃度が約１４０ｍＭである、請求項１１０から１１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- リン酸ナトリウム又はクエン酸ナトリウムの濃度が約２０ｍＭである、請求項１１０から１１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- ポリソルベート２０又はポリソルベート８０の濃度が約６５０ｎＭである、請求項１１０から１１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- ｍ－クレゾールの濃度が約０．２％である、請求項１１１、又は１１３から１１５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- ベンジルアルコールの濃度が約１％である、請求項１１２から１１６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 薬学的に許容される担体が、
ａ）約２０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、約１４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート８０、又は
ｂ）約２０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、約１４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート２０
を含む、請求項１１０から１１７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。 - 薬学的に許容される担体が、約２０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、約１４０ｎＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート８０、及び約０．２％の濃度のｍ－クレゾールを含む、請求項１１０から１１８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 薬学的に許容される担体が、約２０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、約１４０ｎＭの濃度の塩化ナトリウム、約６５０ｎＭの濃度のポリソルベート２０、及び約１％の濃度のベンジルアルコールを含む、請求項１１０から１１９のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 請求項１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項８２若しくは請求項８３に記載の組成物、請求項８４に記載の組み合わせ、又は請求項１０９から１２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物を非経口的に投与することを含む、ＥＰＯポリペプチドをコンパニオンアニマル種に送達する方法。
- 請求項１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項８２若しくは請求項８３に記載の組成物、請求項８４に記載の組み合わせ、又は請求項１０９から１２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物を、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄腔内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路、又は吸入経路により投与することを含む、ＥＰＯポリペプチドをコンパニオンアニマル種に送達する方法。
- 請求項８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、請求項９０から９２のいずれか一項に記載のベクター、又は請求項９３から９７のいずれか一項に記載の発現系を非経口的に投与することを含む、ＥＰＯポリペプチドをコードする単離核酸をコンパニオンアニマル種に送達する方法。
- 治療的有効量の、請求項１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項８２若しくは８３に記載の組成物、請求項８４に記載の組み合わせ、又は請求項１０９から１２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物をコンパニオンアニマル種に投与することを含む、貧血を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法。
- 貧血を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法であって、治療的有効量の、請求項８５から８９のいずれか一項に記載の核酸、請求項９０から９２のいずれか一項に記載のベクター、又は請求項９３から９７のいずれか一項に記載の発現系をコンパニオンアニマル種に投与することを含む、方法。
- ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物が非経口的に投与される、請求項１２４又は請求項１２５に記載の方法。
- ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路、又は吸入経路により投与される、請求項１２４から１２６のいずれか一項に記載の方法。
- コンパニオンアニマル種がネコ、イヌ、又はウマである、請求項１２１から１２７のいずれか一項に記載の方法。
- 貧血が慢性腎臓病、炎症性腸疾患、又は骨髄異形成によって引き起こされる、請求項１２４から１２８のいずれか一項に記載の方法。
- ＥＰＯポリペプチドが、約１μｇ／ｋｇ体重から約１０μｇ／ｋｇ体重、又は約１μｇ／ｋｇ体重から約５μｇ／ｋｇ体重、又は約１μｇ／ｋｇ体重、又は約３μｇ／ｋｇ体重、又は約５μｇ／ｋｇ体重、又は約１０μｇ／ｋｇ体重の量で投与される、請求項１２１から１２９のいずれか一項に記載の方法。
- ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物が７から１０日ごとに投与される、請求項１２１から１３０のいずれか一項に記載の方法。
- 方法が、鉄デキストランを投与することを含む、請求項１２１から１３１のいずれか一項に記載の方法。
- コンパニオンアニマル種が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与前に、約１５％から約３０％、約１５％から約２５％、約２０％から約２５％、約２５％から約３０％、約１５％未満、約１８％未満、約２０％未満、約２５％未満、約２９％未満、又は約３０％未満のベースラインヘマトクリット百分率を有する、請求項１２１から１３２のいずれか一項に記載の方法。
- コンパニオンアニマル種のヘマトクリット百分率が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与後に、少なくとも２５％、又は少なくとも２６％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも２８％、又は少なくとも２９％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも３８％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４２％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも４８％に増加する、請求項１２１から１３３のいずれか一項に記載の方法。
- コンパニオンアニマル種のヘマトクリット百分率が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の最初の投与後、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又は６週間で、少なくとも２５％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３５％に増加する、請求項１３４に記載の方法。
- コンパニオンアニマル種の体重が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与後、ベースラインと比較して維持又は増加される、請求項１２１から１３５のいずれか一項に記載の方法。
- コンパニオンアニマル種の体重が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の最初の投与後、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又は６週間で維持又は増加される、請求項１３６に記載の方法。
- 対称性ジメチルアルギニン又は血清クレアチン腎バイオマーカーのレベルが、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、又は薬学的組成物の投与後、ベースラインと比較して減少する、請求項１２１から１３７のいずれか一項に記載の方法。
- 標的細胞中でＥＰＯポリペプチドを発現させる方法において、
ａ）核酸、ベクター、又は発現系を標的細胞に移入することであって、
ここで、核酸、ベクター、又は発現系は、
ｉ）請求項１から８１のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸、及び
ｉｉ）調節配列
を含む、移入すること；及び
ｂ）ＥＰＯポリペプチドの発現を支援する条件下で細胞を培養すること
を含む、方法。 - 標的細胞中でＥＰＯポリペプチドを発現させる方法において、
ａ）核酸、ベクター、又は発現系を標的細胞に移入することであって、
ここで、核酸、ベクター、又は発現系は、
ｉ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４のアミノ酸配列を有するＥＰＯポリペプチドをコードする核酸、及び
ｉｉ）構成的プロモーターではない、調節配列
を含む、移入すること；及び
ｂ）ＥＰＯポリペプチドの発現を支援する条件下で細胞を培養すること
を含む、方法。 - 調節配列が、テトラサイクリン応答エレメント若しくは低酸素誘導性プロモーターなどの誘導性調節配列；組織特異的プロモーター；エンハンサー；サイレンサーである；又はマイクロＲＮＡ若しくは転写因子をコードする、請求項１３９又は請求項１４０に記載の方法。
- ベクターがウイルスベクター又は細菌ベクターである、請求項１３９から１４１のいずれか一項に記載の方法。
- ベクターがレトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、又はポックスウイルスベクターである、請求項１３９から１４２のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞がコンパニオンアニマル種の細胞である、請求項１３９から１４３のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が生きているコンパニオンアニマル種に存在する、請求項１３９から１４４のいずれか一項に記載の方法。
- コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ、又はウマである、請求項１４４又は請求項１４５に記載の方法。
- イヌ、ウマ、又はネコのエリスロポエチン受容体（ＥＰＯＲ）ポリペプチドの細胞外ドメインを含むポリペプチドであって、イヌ、ウマ、又はネコのＥＰＯＲポリペプチドが、配列番号３３、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４４、配列番号４７、又は配列番号５０のアミノ酸配列；及び異種ポリペプチド配列を含む、ポリペプチド。
- 配列番号３４、配列番号３５、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５１、又は配列番号５２のアミノ酸配列；及び異種ポリペプチド配列を含むポリペプチド。
- 連続したポリペプチドがＩｇＧ Ｆｃポリペプチドを含む、請求項１４７又は請求項１４８に記載のポリペプチドを含む、連続したポリペプチド。
- ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、請求項１４９に記載の連続したポリペプチド。
- ＩｇＧ ＦｃポリペプチドがバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、請求項１４９に記載の連続したポリペプチド。
- ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して増加したプロテインＡへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；
ｂ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣ１ｑへの結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾；及び／又は
ｃ）コンパニオンアニマル種の野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾であって、バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドに対して低減したＣＤ１６への結合親和性を有する、少なくとも１つのアミノ酸修飾
を含むバリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドである、請求項１４９から１５１のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ超、１×１０－５Ｍ超、５×１０－５Ｍ超、１×１０－４Ｍ超、５×１０－４Ｍ超、又は１×１０－３Ｍ超の解離定数（Ｋｄ）でＣ１ｑ及び／又はＣＤ１６に結合する、請求項１４９から１５２のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
- バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、バイオレイヤー干渉法により測定して、５×１０－６Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、５×１０－１２Ｍ未満、又は１×１０－１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でプロテインＡに結合する、請求項１４９から１５３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
- コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ又はウマである、請求項１４９から１５４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
- 野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）イヌＩｇＧ－Ａ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｂ Ｆｃ、ＩｇＧ－Ｃ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ－Ｄ Ｆｃ；
ｂ）ウマＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ３ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、ＩｇＧ５ Ｆｃ、ＩｇＧ６ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ７ Ｆｃ；又は
ｃ）ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃ、ＩｇＧ１ｂ Ｆｃ、若しくはＩｇＧ２ Ｆｃ
である、請求項１４９から１５５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位に対応する位置でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位及び／若しくは２０２位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、請求項１４９から１５６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位、２３位、２５位、８０位、２０５位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号５６の２１位、２３位、及び／若しくは２４位でのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号５８の２１位、２３位、２５位、８０位、及び／若しくは２０７位でのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号８８の１５位及び／若しくは２０３位でのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号９２の１９９位及び／若しくは２００位でのアミノ酸置換；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位、２００位、２０１位、及び／若しくは２０２位でのアミノ酸置換
を含む、請求項１４９から１５７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、２０５位に対応する位置にアラニン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、及び／若しくは２４位に対応する位置にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位に対応する位置にスレオニン、２３位に対応する位置にロイシン、２５位に対応する位置にアラニン、８０位に対応する位置にグリシン、及び／若しくは２０７位に対応する位置にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位に対応する位置にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位に対応する位置にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位に対応する位置にロイシン及び／若しくは２００位に対応する位置にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位に対応する位置にロイシン、２００位に対応する位置にヒスチジン、２０１位に対応する位置にアスパラギン、及び／若しくは２０２位に対応する位置にヒスチジン
を含む、請求項１４９から１５８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５３の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、２０５位にアラニン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｂ）配列番号５６の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、及び／若しくは２４位にイソロイシン；
ｃ）配列番号５８の２１位にスレオニン、２３位にロイシン、２５位にアラニン、８０位にグリシン、及び／若しくは２０７位にヒスチジン；
ｄ）配列番号８８の１５位にスレオニン若しくはバリン、及び／若しくは２０３位にチロシン若しくはバリン；
ｅ）配列番号９２の１９９位にロイシン及び／若しくは２００位にヒスチジン；並びに／又は
ｆ）配列番号９３の１９９位にロイシン、２００位にヒスチジン、２０１位にアスパラギン、及び／若しくは２０２位にヒスチジン
を含む、請求項１４９から１５９のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、請求項１４９から１６０のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位でのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位でのアミノ酸置換；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位でのアミノ酸置換
を含む、請求項１４９から１６１のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位に対応する位置にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位に対応する位置にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位に対応する位置にアラニン
を含む、請求項１４９から１６２のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４若しくは配列番号５６の９３位にアルギニン；
ｂ）配列番号８７、配列番号９０、配列番号９１、若しくは配列番号９４の８７位にセリン；又は
ｃ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、若しくは配列番号１０６の１９８位にアラニン
を含む、請求項１４９から１６３のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位に対応する位置でのアミノ酸置換
を含む、請求項１４９から１６４のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号５６の５位、３８位、３９位、９７位、及び／若しくは９８位でのアミノ酸置換
を含む、請求項１４９から１６５のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置にイソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位に対応する位置にプロリン、３８位に対応する位置にグリシン、３９位に対応する位置にアルギニン、９７位に対応する位置イソロイシン、及び／若しくは９８位に対応する位置にグリシン
を含む、請求項１４９から１６６のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号５４の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン；又は
ｂ）配列番号５６の５位にプロリン、３８位にグリシン、３９位にアルギニン、９７位にイソロイシン、及び／若しくは９８位にグリシン
を含む、請求項１４９から１６７のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。 - バリアントＩｇＧ Ｆｃポリペプチドが、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含む、請求項１４９から１６８のいずれか一項に記載の連続したポリペプチド。
- 請求項１４７から１６９のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする単離された核酸。
- 請求項１７０に記載の核酸を含む宿主細胞。
- 請求項１７１に記載の宿主細胞を培養することと、ポリペプチドを単離することとを含む、ポリペプチドを生成する方法。
- 請求項１４７から１６９のいずれか一項に記載のポリペプチド及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
- 赤血球増加症を有するコンパニオンアニマルを治療する方法であって、治療的有効量の、請求項１４７から１６９のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１７０に記載の核酸、又は請求項１７３に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含む、方法。
- ポリペプチド、核酸、又は薬学的組成物が非経口的に投与される、請求項１７４に記載の方法。
- ポリペプチド、核酸、又は薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路、又は吸入経路によって投与される、請求項１７４又は請求項１７５に記載の方法。
- コンパニオンアニマル種がネコ、イヌ、又はウマである、請求項１７４から１７６のいずれか一項に記載の方法。
- 赤血球増加症が、ＪＡＫ２における突然変異、腫瘍からのＥＰＯの過剰産生及び／又は分泌によって引き起こされる、請求項１７４から１７７のいずれか一項に記載の方法。
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