JP2022506683A - 膵臓移植のファシリテーターとして繊維芽細胞を用いる１型糖尿病の治療方法および組成物 - Google Patents

Abstract

本開示の実施形態は、インスリン産生細胞の置換による糖尿病の治療に関する。特定の実施形態において、本開示は、インスリン産生細胞の生存、生着及び、寛容生成を増強するための細胞アジュバントの使用を含む。場合によっては、本開示が同種インスリン産生細胞の統合を可能にするために、増強されたレベルで免疫学的寛容を促進するための肝微小環境の操作に関する。特定の実施形態は、生着時のインスリン産生細胞に対する免疫学的寛容を増強するために線維芽細胞を使用する。【選択図】図１

Description

本出願は、２０１８年１１月４日に出願された米国仮特許出願第６２／７５５，５２３号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

（技術分野）
本開示の実施形態は、少なくとも細胞生物学、分子生物学、生理学、及び、糖尿病医学を含む医学の分野に関するものである。

１型糖尿病は、生涯にわたるインスリン療法又は膵臓移植によって伝統的に治療されてきた自己免疫状態である。しかしながら、低血糖の頻発エピソードは生涯にわたるインスリン療法を受けている患者では一般的であり、全膵臓移植は重大なリスクを伴う侵襲的な外科的処置である。ランゲルハンス島細胞移植は、１型糖尿病の従来の治療法に代わる魅力的な代替法である。しかしながら、臨床的に膵島細胞移植の広範な使用における主要な制限因子の２つは、十分な数の膵島が使用可能であること、及び、移植された膵島を長期間保護するための現在の免疫抑制治療が不可能であることである。それにもかかわらず、膵島移植は一部の患者で「治癒」が得られているという意味で、１型糖尿病の治療に革命をもたらした［１］。膵島移植の欠点としては、複数のドナーが必要であること［２］、安定した生着が得られないこと（５年で依然として１０％しか移植片がない）［３］、継続的な免疫抑制が必要であること［４］があげられる。生着を増強するために様々な戦略が用いられているが、大きな臨床的成功は見られていない。これまで膵島細胞移植で用いられてきた多くの免疫抑制プロトコルは、膵β細胞機能及び、インスリン感受性に負の影響を及ぼすことが示されているカルシニューリン阻害薬に依存している。したがって、宿主の免疫攻撃からの防御を提供するにもかかわらず、これらの薬剤自体が移植片機能を低下させ、移植された膵島の機能不全の一因となる可能性がある。さらに、膵島移植片のレシピエントは最初にそれらの疾患をもたらし、それによって移植された膵島の機能に長期的に影響する糖尿病発症の自己免疫効果を依然として実証する。

本開示は、糖尿病治療のための当技術分野において長い間感じられてきた必要性を満たす。

本開示の実施形態は、少なくとも細胞移植及び、同種移植片治療を含む、細胞治療に関連する方法及び、組成物を含む。特定の局面において、この方法及び、組成物は移植される特定の型の細胞（例えば、糖尿病の処置に有益である少なくとも細胞を含む）の移植を容易にする。少なくともいくつかの場合では、異なる細胞型の併用療法が別の型の細胞の受容及び、免疫寛容を容易にする。特定の実施形態では線維芽細胞（単独で、又は他の細胞と組み合わせて）は膵島細胞の有効な移植を容易にする。

特に開示されているのは、例えば、（１）同種内皮前駆細胞（ＥＰＣ）、及び、／又は（２）同種線維芽細胞の同時投与を介して、肝微小環境における膵島同種移植片の生着、生存性及び、機能を増強する手段である。本開示の１つの実施形態において、肝微小環境はＥＰＣ（及び、／又はＥＰＣによって分泌される上清）の投与、続いて、線維芽細胞の投与の間、又はその後によってプライミングされ；このようなプライミングは少なくとも初期の炎症又は「危険」シグナルを抑制し、そして寛容発生及び、膵島同種移植片の組み込みを可能にするために、肝微小環境の調節を容易にする。同種ＥＰＣの投与は、膵島の移植又は膵島細胞の移植、並びに線維芽細胞投与と併せて行うことができる。１つの実施形態において、同種異系線維芽細胞は同種異系ＥＰＣの移植を支持するために、ＥＰＣ投与の後、間、及び、／又は前に（例えば、門脈内に）投与され、これは、最終的に、内因性ＥＰＣが同種異系島移植片を取り囲むことを可能にし、したがって、移植に必要とされるドナー材料の量の減少を可能にする。特定の実施形態では場合によっては同種ＥＰＣが移植され、場合によっては島細胞（又は島）が移植されるか、又はその両方である。

本開示の実施形態は個体における同種又は自己インスリン産生細胞の移植の前、同時、及び、／又は後に、有効量の内皮前駆細胞（ＥＰＣ）及び、／又は線維芽細胞を投与する工程を含む、個体における同種又は自己インスリン産生細胞の生存を増強する方法を含む。特定の場合、線維芽細胞及び、／又はＥＰＣは、個人に対して同種である。同種インスリン産生細胞は、膵臓ドナーに由来し得る。同種異系インスリン産生細胞は、島細胞塊から構成され得る。同種インスリン産生細胞は、前駆細胞の集団からのインビトロ分化に由来し得る。特定の場合において、ＥＰＣは、ａ）ｆｌｋ－１；ｂ）ＣＤ３１；ｃ）ＣＤ３４；ｄ）ＣＤ１３３；ｆ）ＰＤＧＦ－Ｒ；ｇ）ｈＴＥＲＴ；及び、ｈ）それらの組み合わせからなる群より選択されるマーカーを発現する。ＥＰＣは（ｉ）哺乳動物細胞集団を単離する工程；（ｉｉ）ＣＤ４５^－表現型プロファイルを発現する工程（ｉ）の細胞の亜集団を濃縮する工程；（ｉｉｉ）ＣＤ３４^＋表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉ）に由来するＣＤ４５^－細胞の亜集団を濃縮する工程；及び、（ｉｖ）ＣＤ３１^ｌｏ／－表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉｉ）に由来するＣＤ３４^＋細胞の亜集団を単離し、それによって内皮前駆細胞を単離する工程を含む方法によって誘導され得る。ＥＰＣは、胎盤組織、骨髄、脂肪組織、大網、又はそれらの組合せに由来することができる。胎盤由来ＥＰＣは胎児由来である可能性がある。線維芽細胞は、軟骨細胞系統に分化することができる。特定の場合には、線維芽細胞がａ）ＮＡＮＯＧ；ｂ）ＯＣＴ－４；ｃ）ＳＳＥＡ－４；ｄ）幹細胞因子受容体；及び、ｅ）それらの組合せからなる群より選択される１以上のマーカーを発現する。具体的な場合には、線維芽細胞が（ｉ）哺乳動物細胞集団を単離する工程；（ｉｉ）ＣＤ４５^－表現型プロファイルを発現する工程（ｉ）の細胞の亜集団を濃縮する工程；及び、（ａ）ＣＤ３４^＋表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉ）に由来するＣＤ４５^－細胞の亜集団を濃縮する工程、及び、前記ＣＤ３４^＋細胞の亜集団を単離し、それによって再生特性を有する線維芽細胞を単離する工程を含む方法によって単離される。本開示の方法において使用される線維芽細胞は、ａ）包皮；ｂ）タミータック；ｃ）胎盤；ｄ）耳たぶ；ｅ）脂肪組織；ｆ）網；ｇ）ウォートンゼリー；及び、ｈ）それらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上の組織供給源に由来し得る。使用する場合、胎盤線維芽細胞は、胎盤の胎児側に由来してもよい。特定の実施形態では、ＣＤ４５陰性線維芽細胞は胎児由来である。線維芽細胞は、ａ）磁気活性化細胞選別；ｂ）フローサイトメトリー選別；ｃ）細胞パニング；ｄ）再生能力の細胞を選択的に選択するためのアフィニティーベースの手段；ｅ）再生能力を有する細胞を選択するための大きさベースの手段；及び、ｆ）それらの組合せからなる群より選択される方法を使用して、再生能力の１つ以上のマーカーの発現のために精製され得る。

一実施形態において、インスリン産生細胞に関連する１つ以上の抗原に対する寛容原性免疫応答を個体において刺激する方法であって、有効量の同種異系インスリン産生細胞、同種異系ＥＰＣ、及び、同種異系線維芽細胞を投与する工程を含む方法が存在する。別の場合では、インシュリン産生細胞、ＥＰＣ、及び、線維芽細胞の１つ又はそれ以上が個体に対して自己である。特定の実施形態において、寛容原性応答は、抗原特異的Ｔ調節細胞の刺激を含む。Ｔ調節細胞は、インスリン産生細胞の活性を殺傷又は抑制する細胞を阻害する能力を有している可能性がある。特定の実施形態において、Ｔ調節細胞は、転写因子ＦｏｘＰ３を発現する。特定の実施形態において、寛容原性応答は抗原特異的Ｂ調節細胞（例えば、ＣＤ１０を発現するＢ調節細胞）の刺激を含む。Ｂ調節細胞は、プロプラズマ芽球であってもよい。

上記は以下の詳細な説明がより良く理解され得るように、本開示の特徴及び、技術的利点をかなり広く概説した。本明細書の特許請求の範囲の主題を形成する追加の特徴及び、利点を以下に説明する。開示された概念及び、特定の実施形態は本設計の同じ目的を実行するために他の構造を修正又は設計するための基礎として容易に使用され得ることが、当業者によって理解されるべきである。また、そのような同等の構成は、添付の特許請求の範囲に記載される精神及び、範囲から逸脱しないことが当業者によって理解されるべきである。本明細書に開示される設計の特徴であると考えられる新規な特徴はさらなる目的及び、利点とともに、動作の構成及び、方法の両方に関して、添付の図面と関連して考慮される場合、以下の説明からより良く理解される。しかしながら、各図は、例示及び、説明の目的のためだけに提供され、本開示の限定の定義として意図されないことが明確に理解されるべきである。

本開示をより完全に理解するために、添付の図面と併せて以下の説明を参照する。

図１は、ストレプトゾシン（対照）；ストレプトゾシン（Ｓ）；ストレプトゾシン＋骨髄間葉系幹細胞（Ｓ＋ＭＳＣ）及び、ＣＤ７３（Ｓ＋線維芽細胞）について選択されたストレプトゾシン＋線維芽細胞（左から右へ）の存在下における血中グルコースレベルを示す。

発明の詳細な説明

本明細書で使用されるとき、「ａ」又は「ａｎ」は１つ又は複数を意味することができ、本明細書で使用されるとき、「含む」という語と併せて使用されるとき、「ａ」又は「ａｎ」という語は１つ又は複数を意味することができ、本明細書で使用されるとき、「別の」は少なくとも２つ又は複数を意味することができ、特定の実施形態では、本発明の態様が、例えば、本発明の１つ又は複数の配列から「本質的になる」又は「からなる」。本発明のいくつかの実施形態は、本発明の１つ以上の要素、方法ステップ、及び、／又は方法から構成されてもよく、又は本質的にそれらから構成されてもよい。本明細書中に記載されるいずれの方法又は組成物も、本明細書中に記載される任意の他の方法又は組成物に関して使用され得ることが意図される。

長年の特許法条約に従い、「ａ」および「ａｎ」という語は特許請求の範囲を含む、本明細書中で使用される場合、「１つまたは複数の」ことを意味し、開示の一部の実施形態は、開示の１つまたは複数の要素、方法ステップ、および／または方法から成るか、または本質的に成ることができる。本明細書に記載される任意の方法または組成物は、開示される本明細書に記載される任意の他の方法または組成物に関して実施され得、それでもなお、開示の精神および範囲から逸脱することなく、類似のまたは類似の結果を得ることが企図される。特許請求の範囲における「または」という用語の使用は代替のみを指すことが明示的に示されない限り、「および／または」を意味するために使用されるか、または代替は相互に排他的であるが、開示は代替および「および／または」のみを指す定義をサポートする。

本明細書全体にわたって、文脈がそわないことを必要とする場合を除いて、単語は「含む」、「含む」、「構成する」とは規定されたステップ又は要素群の包含を意味するが、他のステップ又は要素又は要素群の排除を意味しないと理解されるのであろう。ステップ又は要素又は要素群の除外を意味するわけではない。「構成する」とは以下の「から成る」ことを意味する。従って、「から成る」とは列挙された要素が必要又は必須であることを示し、他の要素が存在する可能性があることを示す。「から成る」とは表現後に列挙された任意の要素を含み、他の要素が存在する可能性があることを意味する。「本質的に構成する」とは列挙された要素の活性又は作用に影響を及ぼすか否かに応じて、列挙された要素が必要又は必須であるが、他の要素が任意であり。

本明細書全体を通して、「一実施形態」、「実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「特定の実施形態」、「追加の実施形態」、又は「さらなる実施形態」、又はそれらの組み合わせへの言及は、実施形態に関連して記載された特定の機能、構成、又は特徴が本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを手段する。したがって、本明細書全体の様々な箇所における前述の語句の出現は、必ずしもすべてが同じ実施形態を参照しているわけではない。さらに、特別な特徴、構造又は特質は１以上の実施形態において任意の適当な方法で組み合わせられ得る。

本明細書で使用されるように、「又は」及び、／又は「及び、」又は「及び、／又は」という用語は、複数の構成要素を互いに組み合わせ又は排他的に説明するために使用され、例えば、「ｘ、ｙ、及び、／又はｚ」は「ｘ」単独、「ｙ」単独、「ｚ」単独、「ｘ、ｙ、及び、ｚ」、「（ｘ及び、ｙ）又はｚ」、「（ｘ又は（ｙ及び、ｚ）」又は「ｘ又はｙ又はｚ」を意味することができ、具体的には、ｘ、ｙ、又はｚが実施形態から具体的に除外されてもよいことが具体的に企図されている。

本出願を通して、用語「約」は、値が値を決定するために使用されるデバイス又は方法についての誤差の標準偏差を含むことを示すために、細胞及び、分子生物学の分野におけるその単純かつ通常の意味に従って使用される。

「対象」及び、「被験者」及び、「個体」は、霊長類、哺乳類、及び、脊椎動物等のヒト又は非ヒトのいずれかを意味する。特定の実施形態では、対象がヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ等である。

疾患又は状態の「処置する」又は処置は、疾患の少なくとも１つの徴候又は症状を軽減するために、１つ以上の薬物又は治療（細胞を含む）を患者に投与することを含み得るプロトコールを実行することをいう。治療の望ましくなる効果としては、疾患の進行速度を低下させること、病態を改善又は緩和すること、少なくとも１つの症状の発現を遅らせること、及び、寛解又は予後を改善することがあげられる。軽減は、疾患又は症状が現れる前、並びにその出現後、又はその両方に生じ得る。したがって、「治療する」又は「治療する」は疾患又は望ましくない状態の「予防する」又は「予防する」ことを含むことができ、さらに、「治療する」又は「治療する」は１つ又は複数の徴候又は症状の完全な緩和を必要とせず、治癒を必要とせず、具体的には患者にわずかな影響しか及ぼさないプロトコールを含む。

本明細書で使用される場合、「予防する」、及び、「予防する」、「予防する」等の類似語は、疾患又は状態の発生又は再発の可能性を予防、阻害、又は低減するためのアプローチを示し、例えば、癌、疾患又は状態の発生又は再発を遅延させる、又は疾患又は状態の症状の発生又は再発を遅延させる、又は本明細書で使用される場合、「予防する」及び、類似語は、疾患又は状態の発症又は再発前の疾患又は状態の強度、効果、症状及び、／又は負荷を低減することも含む。

本明細書中で使用される用語「薬学的に」又は「薬理学的に許容される」は、動物又はヒトに投与された場合に、有害な、アレルギー性の、又は他の不都合な反応を生じない分子実体及び、組成物をいう。

本明細書中で使用される用語「薬学的に受容可能なキャリア」は、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び、液体ポリエチレングリコール等）、それらの適切な混合物、並びに植物油、コーティング、等張性及び、吸収遅延剤、リポソーム、商業的に入手可能な洗浄剤等を含むが、これらに限定されない、任意の及び、全ての溶媒、又は分散媒体を含む。補助的な生物活性成分もまた、このようなキャリアに組み込まれ得る。
Ｉ．

定義例

細胞培養は一般に、生体から採取され、制御された条件下（「培養」又は「培養」）で増殖される細胞を指す。初代培養細胞とは、最初の継代培養の前に生物から直接採取した細胞、組織、又は器官の培養である。細胞は、細胞の増殖及び、／又は分裂を容易にする条件下で増殖培地中に置かれる場合、培養物中で増殖され、細胞のより大きな集団を生じる。細胞を培養で増殖させる場合、細胞増殖速度は、細胞が倍加時間と呼ばれる数を倍加するのに必要な時間の量によって測定されることがある。

細胞株は、初代細胞培養物の１つ以上の継代培養によって形成される細胞の集団である。継代培養の各ラウンドは継代と呼ばれる。細胞が継代培養される場合、それらは継代されたものと呼ばれる。特定の細胞集団、又は細胞株は時に、それが継代された回数に言及されるか、又は特徴付けられる。例えば、１０回継代された培養細胞集団は、Ｐ１０培養物と呼ぶことができる。初代培養、すなわち組織から細胞を単離した後の最初の培養をＰ０とする。最初の継代培養に続いて、細胞を二次培養（Ｐ１又は継代１）として記載する。２回目の継代培養後、細胞は三次培養（Ｐ２又は継代２）になり、以下同様である。継代の期間中に多くの集団倍加があり得ること；したがって、培養物の集団倍加の数は継代数よりも多いことが、当業者によって理解される。継代間の期間中の細胞の増殖（すなわち、集団倍加の数）は、播種密度、基質、培地、増殖条件、及び、継代間の時間を含むがこれらに限定されない多くの因子に依存する。

条件培地は、特定の細胞又は細胞集団が培養され、次いで除去された培地である。細胞を培地で培養すると、他の細胞に栄養支持を提供できる細胞因子を分泌することがある。このような栄養因子にはホルモン、サイトカイン、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）、タンパク質、小胞、抗体、及び、顆粒が含まれるが、これらに限定されない。細胞因子を含有する培地は、ならし培地である。いくつかの実施形態において、本発明は、寛容形成を促進するための、ならし培地、又は濃縮ならし培地、又はＥＰＣもしくは線維芽細胞のならし培地から単離されたエキソソームの使用を教示する。

本明細書中で使用される場合、用語「増殖培地」は一般に、臍由来細胞の培養に十分な培地をいう。特に、本明細書中の本発明の細胞の培養のための１つの特定の培地は、ダルベッコの改変必須培地（本明細書中でＤＭＥＭとも略される）を含む。特に好ましいのは、ＤＭＥＭ－低グルコース（本明細書中ではＤＭＥＭ－ＬＧも）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）である。ＤＭＥＭ低グルコースは好ましくは１５％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（例えば、規定ウシ胎仔血清、Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ Ｕｔａｈ）、抗生物質／抗真菌薬（好ましくは、ペニシリン（１００単位／ミリリットル）、ストレプトマイシン（１００ミリグラム／ミリリットル）、及び、アンホテリシンＢ（０．２５マイクログラム／ミリリットル）、（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、並びに０．００１％（ｖ／ｖ）２－メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ Ｍｏ）で補充される。いくつかの場合において、異なる増殖培地が使用されるか、又は異なる補充物が提供され、そしてこれらは、通常、増殖培地への補充物として本文中に示される。

また、本発明に関連して、本明細書で使用される「標準増殖条件」という語は、５％のＣＯ_２を含む標準大気中で３７℃で細胞を培養することを指す。相対湿度を約１００％に維持する。前述の条件は培養に有益であるが、このような条件は細胞を培養するために当業者が使用可能な選択肢、例えば、体温、ＣＯ_２、相対湿度、酸素、増殖培地等を変化させることによって変化させることができることを理解されたい。

いくつかの実施形態における「線維芽細胞」は（１）プラスチックに接着し、（２）ＣＤ７３、ＣＤ９０、及び、ＣＤ１０５抗原を発現し、一方、ＣＤ１４、ＣＤ３４、ＣＤ４５、及び、ＨＬＡ－ＤＲ陰性であり、（３）以下の３つの系統のうち少なくとも１つに分化する能力を有する細胞を指す：骨形成性、軟骨形成性及び、脂肪形成性の系統線維芽細胞様の特性を有する他の細胞は「線維芽細胞」の定義の中に含まれ、細胞が以下の（少なくともいくつかの場合において）少なくとも１つを有する状態：ａ）再生活性；ｂ）成長因子の産生；ｃ）直接的に、又は内因性宿主修復機構の誘発を介して、治癒反応を誘導する能力を有する。線維芽細胞は例えば、骨髄、脂肪組織、羊水、子宮内膜、栄養膜由来組織、臍帯血、Ｗｈａｒｔｏｎゼリー、胎盤、羊膜組織を含むが、これらに限定されない任意の組織に由来することができる。「線維芽細胞」のいくつかの定義では細胞が組織からの最初の単離時にＣＤ３４陽性であるが、表現型及び、機能的に記載された細胞と類似している細胞を含む。本明細書で使用される場合、「線維芽細胞」は次のリストから選択される細胞表面マーカーを用いて組織から単離される細胞を含み得る：ＮＧＦ－Ｒ、ＰＤＧＦ－Ｒ、ＥＧＦ－Ｒ、ＩＧＦ－Ｒ、ＣＤ２９、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６３、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４６、ＣＤ２７１、ＭＳＣＡ－１、ＳＳＥＡ４、ＳＴＲＯ－１及び、／又はＳＴＲＯ－３、又はそれらの任意の組み合わせ。
ＩＩ．

一般的な実施形態

本開示の実施態様は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ等を含む哺乳動物個体に対する細胞移植（同種細胞移植を含む）の改善を含む。改善には、少なくとも、個体に投与された移植細胞集団に対してインビボでより大きな免疫寛容を有する能力が含まれる。特定の実施形態において、同種又は自己内皮前駆細胞（ＥＰＣ）及び、／又は同種又は自己線維芽細胞は、改善された同種膵島移植を可能にする。特定の実施形態では、胎盤由来ＥＰＣ等の同種内皮前駆細胞（ＥＰＣ）を、即時拒絶なしに（例えば、門脈内に）投与することができ、ＥＰＣ細胞は単独で、又は線維芽細胞と一緒に肝微小環境を調節して、同種膵島移植の増強を可能にする。

ＥＰＣはこれまで膵島の生着を支持するために自己由来の方法で使用されてきたが［５］、これらは動物実験のみであり、実際にはＥＰＣは自己由来の方法、特に基礎病態の結果としてＥＰＣが損なわれている糖尿病患者では使用が困難である［６、７］。したがって、本発明は、膵島移植の促進剤としてＥＰＣ（胎盤由来を含む）及び、線維芽細胞を使用する手段を提供する。１つの実施形態において、ＥＰＣ細胞及び、／又は膵島及び、／又は膵島細胞は局所的又は全身的に（注射によって、及び、場合によっては門脈内を含む）投与されて、門脈内寛容発生の天然に生じる機構を使用し、これは、以前に、門脈内に免疫原性起源の種々の細胞を投与することによって実証されている［８］。本開示の１つの実施形態において、ＥＰＣ及び、線維芽細胞は両方とも同種異系であり、そして同じドナー起源である。特定の実施形態において、線維芽細胞は寛容原性事象を刺激するために最初に（例えば、門脈内に）投与され、続いてＥＰＣの投与されるが、線維芽細胞はまた、ＥＰＣの投与と共に、及び、／又はＥＰＣの投与の後に送達されてもよく、又はその代わりに送達されてもよい。
ＩＩＩ．

使用方法

本開示の実施形態は、それを必要とする個体における島の生着を増強するために線維芽細胞を使用する方法を含む。膵島移植を増強するための線維芽細胞の使用は任意の手段によってなし得るが、特定の実施形態において、線維芽細胞は膵島移植に対する有害な免疫系反応を抑制する。免疫反応の抑制又は減少は、特定の実施形態において、肝臓において生じる。特定の実施形態において、ＥＰＣは肝臓の一部をプライミングして、膵島移植片の生存率及び、機能を増強するために、線維芽細胞と組み合わせて使用され；このような効果は、ＥＰＣの血管新生効果及び、／又は寛容原性抗原提示細胞として作用するそれらの能力のために生じ得る。本明細書中で使用される場合、「膵島移植片」は、ランゲルハンス細胞の任意の種類の膵島の任意の集合体をいう。

現在の本開示の範囲内では、線維芽細胞は、その使用が線維芽細胞に類似したもののためであり得るような免疫調節の観点から、間葉系幹細胞に類似した特性を有するという考察がある。したがって、本開示の方法を実施するものを提供するためのＭＳＣの既知の特性は、本明細書において、ＭＳＣから線維芽細胞に外挿される。ＭＳＣの免疫抑制作用のいくつかは、局所炎症の存在によって誘導可能であると思われる。例えば、最近の研究では、ＭＳＣ上のＴＬＲ活性化がＤＣ成熟の遮断を介してＭＳＣのＴ細胞活性化を抑制する能力を増大させることが示された［１７］。他の研究では、ＩＬ－１ベータ等の炎症性メディエーターによるＭＳＣの治療が実際にはＤＣ成熟を阻止するＩＬ－１０等のサイトカインの産生を刺激することが示されている。ＩＬ－１処理ＭＳＣはＤＳＳ誘発大腸炎等の炎症性疾患を抑制する優れインビボ能力を有する［１８］。また、炎症性サイトカインの前投与によるＭＳＣの抗炎症活性の同様の増強がＩＦＮ－γによる治療によっても報告されている［１９～２１］。細胞レベルでは、ＭＳＣを単球と共培養すると、一部はＩＬ－１を産生した単球を介してＭＳＣの免疫抑制活性が亢進することが報告されている［２２］。ＭＳＣによるＴ細胞反応性の阻害は広く記載されている。これを支持する最初の発表の１つは、ヒのＭＳＣが同種リンパ球から増殖反応を誘発し、進行中の同種反応を阻害し、強力なＴ細胞マイトジェンに対する増殖反応を阻害する能力について、インビトロでヒヒのＭＳＣを評価した。ＭＳＣは同種リンパ球から増殖反応を誘発できないことが分かった。０日目又は３日目のいずれかの混合リンパ球反応に加えたＭＳＣ、又はマイトジェン刺激リンパ球に加えたＭＳＣは、増殖活性の５０％を超える減少をもたらした。この効果は、ＭＳＣの用量を増加させることによって最大化され得、そして外因性ＩＬ－２の添加によって減少され得る。ＭＳＣのインビボ投与は、対照動物と比較した場合、皮膚移植片の生存期間の延長につながった［２３、２４］。Ｔ細胞増殖の抑制は、共刺激やＭＳＣをＩＦＮ－γで前処理しても回復できなかった［２５］。このことは前述した先行研究でＩＬ－２がＭＳＣを介した抑制を克服できることが示されたことを考えると興味深い。ヒト化マウスを用いたインビボ試験では、ヒトＭＳＣはインビボでヒトＴ細胞応答を抑制することが可能であり、同種異系応答と抗原特異的応答の両方が可能であることが実証された［２６］。Ｔ細胞活性の抑制は増殖に限らず、ＣＤ８ Ｔ細胞の細胞傷害活性の抑制も含まれることが実証された［２７、２８］。ＩＬ－２受容体α（ＣＤ２５）の阻害［２９］、分裂停止の誘導［３０、３１］、Ｔ細胞アネルギーの直接的な誘導［３２］又は未成熟ＤＣを介した誘導［３３］、ＩＬ－２シグナル伝達の遮断及び、ＰＧＥ２産生の誘導［３６－４１］、ＴＧＦ－β［４２］の誘導、セリンプロテアーゼ阻害剤６［４４］の発現、一酸化窒素放出の刺激［４５－４７］、ＣＤ３９及び、ＣＤ７３等のアデノシン生成外酵素の発現［５２、５３］、ガレクチン発現［５４、５７］、ＰＤ１経路の活性化［５４、５８－６０］、Ｆａｓリガンド発現等、いくつかの機序が報告されている［６１］ＣＤ２００発現［６３］、Ｔｈ２偏位［６４－６６］、Ｔｈ１７の阻害分化［６７－７１］、ＴＳＧ－６発現［７２］、ＮＯＴＣＨ－１発現［７３］、Ｔｒｅｇ細胞生成刺激［７４－８１］。

したがって、特定の実施形態では、複数の線維芽細胞及び、複数のＥＰＣが膵島移植の対象である個体に使用される。線維芽細胞及び、／又はＥＰＣを受領する個体は糖尿病性、前糖尿病性、又は糖尿病のリスク（例えば、家族歴又は個人歴）を有し得る。線維芽細胞とＥＰＣとの組み合わせの使用は、移植片が個体において成功する改善された能力を提供する。線維芽細胞及び、ＥＰＣは任意の経路及び、任意の場所に投与され得るが、特定の場合には線維芽細胞及び、ＥＰＣの両方が膵島生着の位置又は膵島生着の最終的な位置を含む、同じ位置に投与される。いくつかの場合において、投与の位置は、本質的に前寛容原性である。

すでに寛容性を促進している環境（例えば、門脈内）で投与された線維芽細胞の組合せは寛容性を増強するが、寛容性の増大の開示の実践のためには直接的な血管新生支持を提供するだけでなく、寛容性抗原提示細胞としても作用する同種ＥＰＣの投与によって支持され得る。ＥＰＣは、代替の実施形態において、線維芽細胞の代替であり得る。本開示の方法の実施のために、以下は本開示の方法の実施者が当該分野で公知の手段を使用し得るように、線維芽細胞が免疫系を調節する種々の方法である。例えば、線維芽細胞は樹状細胞活性を調節する。樹状細胞（ＤＣ）は免疫応答の主要な標識と考えられており、Ｔ制御細胞の刺激と免疫の抑制に対して、生産的な免疫が保証されるかどうかを決定する上で重要な役割を果たしている［９、１０］。ＤＣにはさまざまなサブタイプが存在し、さまざまな特殊な機能をもつが、共通するテーマの１つは未熟な骨髄型ＤＣが末梢で未熟な状態に存在することであると思われる。未熟な骨髄型ＤＣは抗原を飲み込み、リンパ節のＴ細胞に寛容原性の様式で存在する。これは、自己許容性が維持されるメカニズムの１つである。具体的には、少数の自己反応性Ｔ細胞が胸腺選択過程を逃れるが、これらのＴ細胞は、未熟な樹状細胞が自己反応性Ｔ細胞に自己抗原を提示した結果、生成されたＴ制御細胞によって、活性化されるか、または活性が抑制される。一方、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストのような「危険」なシグナルが存在すると、未熟な樹状細胞は、コスティミュレーター分子の高発現を特徴とする成熟した表現型をとり、その後、Ｔ細胞の活性化を誘導する［１１－１３］。Ｔ１Ｄに関しては、糖尿病の原因となる自己抗原を未熟なＤＣにターゲティングすることで、病気の予防につながることが実証されています［１４］。１０人のＴ１Ｄ患者に未熟なＤＣを投与したところ、Ｃ－ペプチドレベルが上昇し、免疫調整作用があることが示唆された［１５］。

本開示のいくつかの実施形態において、線維芽細胞と同時移植された膵島によってグルコース制御を増強する方法が存在する。特定の場合には、線維芽細胞を、それを必要とする個体に膵島細胞（同種又は自家）を投与する。線維芽細胞は、例えばＣＤ７３のような１つ以上の特異的マーカーを有していても、有していなくてもよい。

本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞は、ＤＣを未成熟状態に維持するために使用される。具体的には、ＤＣとともに線維芽細胞を投与すると、寛容形成が亢進する。免疫対寛容の制御におけるＤＣの役割を考えると、線維芽細胞によるＤＣ成熟の操作は、線維芽細胞の免疫調節的役割を強く支持するのであろう。初期の研究では線維芽細胞はインビトロ系を用いてＤＣのＣＤ４及び、ＣＤ８細胞刺激能を阻害する可能性が示唆されたが、線維芽細胞もＴ細胞活性化を直接阻害することが実証された［１６］。

特定の実施形態では、個体における同種異系インスリン産生細胞（膵臓ドナーに由来し得るか、又は前駆細胞の集団からのインビトロ分化に由来し得るか、及び、／又は膵島細胞塊から構成される）の生存を増強する方法が存在し、これは同種異系ＥＰＣ及び、同種異系線維芽細胞の有効量を個体に提供する工程を含む。本開示の１つの実施形態において、以下のステップを含む個体における同種インスリン産生細胞の生存を増強する方法（膵臓ドナーに由来するか、又は前駆細胞集団からのインビトロ分化に由来する可能性があり、及び、／又は膵島細胞集団を含む）がある：ａ）同種内皮前駆細胞（ＥＰＣ）の集団を得る；ｂ）同種線維芽細胞の集団を得る；及び、ｃ）同種ＥＰＣ及び、同種線維芽細胞を同種インスリン産生細胞の移植前、及び、／又は移植と同時に、及び、／又はその後に投与する。同種ＥＰＣは、ａ）ｆｌｋ－１；ｂ）ＣＤ３１；ｃ）ＣＤ３４；ｄ）ＣＤ１３３；ｆ）ＰＤＧＦ－Ｒ；ｇ）ｈＴＥＲＴ；及び、ｈ）それらの組み合わせからなる群より選択されるマーカーを発現してもしなくてもよい。同種ＥＰＣは（ｉ）哺乳動物細胞集団を単離する工程；（ｉｉ）ＣＤ４５^－表現型プロファイルを発現する工程（ｉ）の細胞の亜集団を濃縮する工程；（ｉｉｉ）ＣＤ３４^＋表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉ）に由来するＣＤ４５^－細胞の亜集団を濃縮する工程；及び、（ｉｖ）ＣＤ３１^ｌｏ／－表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉｉ）に由来するＣＤ３４^＋細胞の亜集団を単離し、それによって内皮前駆細胞を単離する工程を含む方法によって誘導され得る。同種ＥＰＣは、胎盤組織；骨髄；脂肪組織；大網、又は胎盤由来ＥＰＣに由来することができる。

一実施形態では、インスリン産生細胞に関連する抗原に対する寛容原性免疫応答を刺激する方法であって、同種異系ＥＰＣ及び、同種異系線維芽細胞と共に有効量の同種異系インスリン産生細胞を投与する工程を含む方法がある。寛容原性応答は抗原特異的Ｔ調節細胞の刺激を含み得、そしてＴ調節細胞はインスリン産生細胞の活性を殺すか又は抑制する細胞を阻害する能力を有し得る。Ｔ調節細胞は、転写因子ＦｏｘＰ３を発現する場合としない場合がある。特定の実施形態では寛容原性応答が抗原特異的Ｂ調節細胞の刺激を含み、Ｂ調節細胞はＣＤ１０を発現してもしなくてもよく、プロプラズマ芽細胞であってもなくてもよい。

本開示の一実施形態では、ドナー特異的寛容原性事象を誘導するために、膵臓同種移植片と同じドナーの線維芽細胞を個体に投与する（例えば、門脈内及び、／又は全身に）。別の実施形態において、線維芽細胞は、ドナーから得られ、及び、／又は生成され、免疫隔離チャンバーに配置され、寛容発生を誘導する。別の実施形態では、ドナー特異的線維芽細胞及び、／又は樹状細胞（ＤＣ）が個体において一緒に投与される。ＤＣが投与される場合、ＤＣは、共刺激分子の活性化又はアップレギュレーションを防止する様式で処置され得る。１つは、ＩＬ－１０、アスピリン、ＮＦ－カッパＢ阻害剤、及び、ｔｏｌｌ様受容体及び、ＴＬＲの下流シグナル伝達の阻害剤等の樹状細胞成熟の阻害剤で治療することができる。線維芽細胞及び、／又はＤＣは骨髄、末梢血、死体骨髄を含む任意の供給源に由来してもよく、又は、例えば、ｉＰＳテクノロジーの手段によって生成されてもよい。

有効量の線維芽細胞及び、ＥＰＣがインスリン産生細胞（膵島細胞であり得る）の生着を増強するために個体に投与される場合、異なる細胞が個体に投与される順序は、任意の種類であり得る。ある場合には、線維芽細胞はＥＰＣの前に投与されるが、他の場合には線維芽細胞はＥＰＣの後に投与される。線維芽細胞は、ＥＰＣと同時に投与され得る。ある場合には膵島細胞の生着が線維芽細胞及び、／又はＥＰＣの投与前に起こり、一方、他の場合には膵島細胞の生着が線維芽細胞及び、／又はＥＰＣの投与後に起こる。線維芽細胞の投与経路は、ＥＰＣと同じであってもなくてもよい。

線維芽細胞の有効量は、任意の種類であり得、臨床医によって決定され得るが、具体的な実施形態では、その量が投与あたり１０^４～１０^８線維芽細胞／ｋｇレシピエント塊の範囲内である。いくつかの実施形態において、投与当たりの最適投与量は、１０^５～１０^７線維芽細胞／ｋｇである。多くの実施形態において、投与当たりの最適投与量は、５×１０^５～５×１０^６線維芽細胞／ｋｇであろう。ＥＰＣの有効量は、任意の種類であってもよく、臨床医によって決定されてもよい。いくつかの場合において、ＥＰＣに対する線維芽細胞の特定の比率が、異なる細胞の投与において使用される。一例として、ＥＰＣに対する線維芽細胞の比は、１：１；１：２；１：１０；１：２５；１：５０；１：１００；１：１０００等であり得る。別の例として、ＥＰＣ対線維芽細胞の比は、１：１；１：２；１：１０；１：２５；１：５０；１：１００；１：１０００等であり得る。

いくつかの実施形態において、線維芽細胞は、１回の用量で主題に投与される。他のものでは、線維芽細胞を、連続して２回又はそれ以上の用量で被験体に投与する。線維芽細胞が、単回用量、２回用量、及び、／又は３回以上用量で投与されるいくつかの他の実施形態において、用量は同じであっても異なっていてもよく、それらはそれらの間で等しい間隔で、又は等しくない間隔で投与されてもよい。

線維芽細胞及び、／又はＥＰＣは、広範囲の時間にわたって多くの頻度で投与され得る。いくつかの実施形態において、線維芽細胞及び、／又はＥＰＣは、１日未満の期間にわたって投与される。他の実施形態において、それらは、２、３、４、５、又は６日間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、線維芽細胞及び、／又はＥＰＣが場合によっては数週間にわたる期間を含めて、１週間に１回以上投与される。他の実施形態において、それらは、１～数ヶ月間、数週間の期間にわたって投与される。種々の実施形態において、それらは、数ヶ月の期間にわたって投与され得る。他の実施形態では、それらは１年以上の期間にわたって投与されてもよい。一般に、治療の長さは、疾患プロセスの長さ、適用される治療の有効性、並びに治療される対象の状態及び、応答に比例する。細胞の単一用量は、一度に全て、部分的に、又はある期間にわたって連続的に送達され得ることが理解されるべきである。用量全体はまた、単一の位置に送達され得るか、又はいくつかの位置にわたって部分的に広がり得る。最初の投与及び、その後の投与のための、又は連続投与のための適切なレジメンは、全て同じであり得るか、又は可変であり得る。適切なレジメンは、当業者によって、この本開示、本明細書中に引用される文書、及び、当技術分野における知識から確認され得る。

種々の実施形態において、線維芽細胞及び、／又はＥＰＣは、初期用量で投与され得、その後、線維芽細胞及び、／又はＥＰＣのさらなる投与によって維持され得る。線維芽細胞及び、／又はＥＰＣは、最初に１つの方法によって投与され得、その後、同じ方法又は１つ以上の異なる方法によって投与され得る。被験者の線維芽細胞レベルは、進行中の細胞の投与によって維持することができる。様々な実施形態は線維芽細胞の最初の投与、又は対象における線維芽細胞のレベルを維持するための投与、又はその両方を含み、特定の例では、それは静脈内注射によるものであってもよい。様々な実施形態において、個体の状態及び、本明細書の他の箇所で議論される他の因子に依存して、他の投与形態が使用される。

ヒトの被験者は一般に実験動物よりも長い治療を受けるが、治療は一般に疾患過程の長さと治療の有効性に比例する長さを有することが注目される。当業者はヒト及び、／又はラット、マウス、非ヒト霊長類等の動物において実施される他の手順の結果を使用して、ヒトのための適切な用量を決定する際に、これを考慮する。このような決定はこれらの考察に基づき、そして本開示及び、先行技術によって提供されるガイダンスを考慮に入れて、当業者が過度の実験なしにそうすることを可能にする。

治療の用量、頻度、及び、／又は期間は、疾患の性質、被験体、及び、投与され得る他の治療法を含む因子に依存し得る。したがって、線維芽細胞及び、／又はＥＰＣを投与するために、多種多様なレジメンを使用することができる。一実施形態では、本方法が単離された哺乳動物内皮前駆細胞を使用し、本方法は（ｉ）哺乳動物細胞集団を単離するステップと、（ｉｉ）ＣＤ４５^－表現型プロファイルを発現するステップ（ｉ）の細胞の亜集団を濃縮するステップと、（ｉｉｉ）ＣＤ３４^＋表現型プロファイルを発現するステップ（ｉｉ）に由来するＣＤ４５^－細胞の亜集団を濃縮するステップと、（ｉｖ）ＣＤ３１^ｌｏ／－表現型プロファイルを発現するステップ（ｉｉｉ）に由来するＣＤ３４^＋細胞の亜集団を単離し、それによって内皮前駆細胞を単離するステップとを含む。内皮前駆細胞は投与（少なくとも門脈内を含む）、膵島移植の前、及び、／又は同時、及び、／又はその後に、同種の様式で使用され得る。別の局面において、膵島移植で使用される哺乳動物内皮前駆細胞を単離する方法であって、（ｉ）哺乳動物細胞集団を単離する工程；（ｉｉ）ＣＤ４５^－表現型プロファイルを発現する工程（ｉ）の細胞の亜集団を濃縮する工程；（ｉｉｉ）ＣＤ３４^＋表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉ）に由来するＣＤ４５^－細胞の亜集団を濃縮する工程；及び、（ｉｖ）ＣＤ３１^ｌｏ／－表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉｉ）に由来するＣＤ３４^＋細胞の亜集団を単離し、それによって内皮前駆細胞を単離する工程；の連続工程を含む方法が提供される。
ＩＶ．

線維芽細胞

線維芽細胞は、肝臓位置への移植を含む、移植のための同種細胞の耐性を増強するために、本明細書中で使用される。線維芽細胞は、生着を受けているか又は受けているのであろう個体に関して同種であってもよく、そわなくてもよい。線維芽細胞は、任意の種類のものであり得る。線維芽細胞は、個体への送達の前等、それらの使用の前に改変されてもされなくてもよい。このような修飾は例えば、出発集団として線維芽細胞によって発現されなかった１つ以上のマーカーを発現するように修飾されることを含む、任意の種類のものであり得る。

線維芽細胞は、軟骨細胞系統に分化することができる。それらは、ａ）ＮＡＮＯＧ；ｂ）ＯＣＴ－４；ｃ）ＳＳＥＡ－４；ｄ）幹細胞因子受容体；及び、ｅ）それらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上のマーカーを発現してもしなくてもよい。具体的な場合において、線維芽細胞は（ｉ）哺乳動物細胞集団を単離する工程；（ｉｉ）ＣＤ４５^－表現型プロファイルを発現する工程（ｉ）の細胞の亜集団を濃縮する工程；及び、（ａ）ＣＤ３４^＋表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉ）に由来するＣＤ４５^－細胞の亜集団を濃縮する工程、及び、前記ＣＤ３４^＋細胞の亜集団を単離し、それによって再生特性を有する線維芽細胞を単離する工程を含む方法によって単離され得る。線維芽細胞は、ａ）包皮；ｂ）タミータック；ｃ）胎盤；ｄ）耳垂；ｅ）脂肪組織；ｆ）大網；及び、／又はｇ）ウォートンゼリーから選択される一群の組織源に由来し得る。特定の実施形態では、胎盤線維芽細胞が使用され、それらは胎盤の胎児側に由来し得る。特定の局面において、胎児由来であるＣＤ４５陰性線維芽細胞が使用される。線維芽細胞は、ａ）磁気活性化細胞選別；ｂ）フローサイトメトリー選別；ｃ）細胞パニング；ｄ）再生能力の細胞を選択的に選択するための親和性に基づく手段；及び、／又はｅ）再生能力を有する細胞を選択するためのサイズに基づく手段から選択される方法を使用して、再生能力のマーカーの発現のために精製され得る。

本開示のいくつかの実施形態において、線維芽細胞は、ＯＣＴ－４の胎盤発現のために選択される。他の実施形態において、ＯＣＴ－４発現は、種々の培養条件下への曝露後の培養及び、増殖のための細胞を同定する手段として使用される。Ｏｃｔ－４（ヒトのｏｃｔ－３）は、胞胚前期胚、初期卵割期胚、胚盤胞の内部細胞塊の細胞、及び、胚性癌（”ＥＣ”）細胞に発現する転写因子であり（Ｎｉｃｈｏｌｓ、Ｊ．ら．（１９９８）Ｃｅｌｌ ９５：３７９－９１）、細胞が分化誘導されるとダウンレギュレートされる。ｏｃｔ－４遺伝子（ヒトではｏｃｔ－３）は、ヒトでは少なくとも２つのスプライスバリアントであるｏｃｔ－３Ａとｏｃｔ－３Ｂに転写される。ｏｃｔ－３Ｂスプライスバリアントは多くの分化細胞に見出されるが、ｏｃｔ－３Ａスプライスバリアント（以前にｏｃｔ－３／４とも呼ばれた）は未分化胚性幹細胞に特異的であることが報告されている。Ｓｈｉｍｏｚａｋｉら（２００３）Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １３０：２５０５－１２を参照のこと。ｏｃｔ－３／４の発現は、胚発生及び、分化の初期段階を決定するのに重要な役割を果たす。Ｏｃｔ－３／４は、ｒｏｘ－１と組み合わせて、未分化状態でＥＳ細胞を維持するためにも必要とされるＺｎフィンガータンパク質ｒｅｘ－１の転写活性化を引き起こす（Ｒｏｓｆｊｏｒｄ、Ｅ．及び、Ｒｉｚｚｉｎｏ、Ａ．（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２０３：１７９５－８０２；Ｂｅｎ－Ｓｈｕｓｈａｎ、Ｅ．ら（１９９８）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １８：１８６６－７８）。

本開示の種々の実施形態に従って使用するのに適切な線維芽細胞の用量は、多数の因子に依存する。それは、異なる状況に対してかなり変化し得る。一次及び、補助療法のために投与される胎盤線維芽細胞の最適用量を決定するパラメータは、一般的に、以下のいくつか又は全てを含もう：治療される疾患及び、その病期；被験体の種、その健康、性別、年齢、体重、及び、代謝速度；被験体の免疫能；投与される他の治療法；被験体の病歴又は遺伝子型から予想される合併症。パラメーターはまた、胎盤線維芽細胞が同系、自家、同種、又は異種のいずれであるか；それらの効力（比活性）；線維芽細胞が有効であるために標的化されなければならない部位及び、／又は分布；及び、線維芽細胞へのアクセス及び、／又は線維芽細胞の生着のような部位のそのような特徴を含み得る。その他のパラメータには、他の因子（成長因子及び、サイトカイン等）の線維芽細胞との同時投与が含まれる。所与の状況における最適用量はまた、細胞が処方される様式、それらが投与される様式、及び、細胞が投与後に標的部位に局在化される程度を考慮する。最後に、至適用量の決定は必然的に、最大有益効果の閾値を下回ることもなく、線維芽細胞の用量に関連する有害作用が増量した用量の利点を上回る閾値を上回る有効用量を提供するのであろう。

いくつかの実施形態についての線維芽細胞（場合によっては胎盤）の最適用量は、自己単核骨髄移植に使用される用量の範囲内である。胎盤線維芽細胞のかなり純粋な調製物については、種々の実施形態における最適用量が投与あたり１０^４～１０^８の胎盤線維芽細胞／ｋｇのレシピエント塊であろう。いくつかの実施形態において、投与当たりの最適投与量は、１０^５～１０^７胎盤線維芽細胞／ｋｇである。多くの実施形態において、管理当たりの最適管理量は、５×１０^５～５×１０^６胎盤線維芽細胞／ｋｇであろう。参考にすると、上記のより高い線量は、自家単核骨髄移植に用いられる有核細胞の線量と類似している。低用量のいくつかは、自家単核骨髄移植で使用されるＣＤ３４^＋細胞数／ｋｇに類似している。

特定の実施形態では線維芽細胞が実質的な均質性を有するように単離され、特定の実施形態では、胎児起源である。

分化（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）とは特定化されていない（”コミットメントされていない”）細胞、あるいはそれほど特殊化していない細胞が例えば神経細胞や筋細胞のような特殊化した細胞の特徴を獲得する過程である。分化した細胞は細胞の系譜の中でより特殊化した（”コミットされた”）位置をとったものである。運命拘束された用語は分化の過程に適用される場合、分化経路において、正常な状況下では特定の細胞型又は細胞型のサブセットに分化し続け、正常な状況下では異なる細胞型に分化するか、又はより分化していない細胞型に戻すことができない点まで進んだ細胞を意味する。脱分化とは、細胞が細胞株内のあまり特殊化されていない（又は確定されていない）位置に戻るプロセスをいう。本明細書で使用されるように、細胞の系統は細胞の遺伝性、すなわち、細胞がどんな細胞から来たか、及び、細胞がどんな細胞を生じさせることができるかを定義する。細胞の系譜によって、細胞は開発と分化の遺伝的図式の中に配置される。

現在の本開示の文脈の中で、胎児由来の線維芽細胞は胎盤治療効果を有するように、部分的には、主として胎児組織起源の幹細胞を選択することによって、抽出されるか、単離される。

本明細書中で使用されるように、フレーズは中胚葉系列、外胚葉系列又は内胚葉系列に分化し、それぞれ、特定の中胚葉系列、外胚葉系列又は内胚葉系列に運命拘束されるようになる細胞を指す。中胚葉系列に分化する、又は特定の中胚葉細胞を生じる細胞の例としては脂肪生成細胞、軟骨形成細胞、心原性細胞、皮膚形成細胞、造血細胞、血管新生細胞、筋原性細胞、腎原性細胞、泌尿器原性細胞、骨原性細胞、心膜原性細胞、又は間質細胞があげられるが、これらに限定されない。外胚葉系列に分化する細胞の例としては表皮細胞、神経原性細胞、及び、神経膠原性細胞があげられるが、これらに限定されない。内胚葉系列に分化する細胞の例としては限定されるわけではないが、胸膜形成細胞、肝臓形成細胞、腸の内層を生じる細胞、及び、膵臓形成細胞及び、内臓形成細胞を生じる細胞があげられる。
Ｖ．

細胞の獲得、産生及び、／又は操作

特定の実施形態において、細胞は、操作及び、／又は使用の前に組織及び、／又は器官から単離される；細胞は、線維芽細胞、ＥＰＣ、又はインスリン産生細胞（例えば、島細胞）であり得る。特定の場合において、単離手順は酵素消化プロセスを使用する。酵素は組織を解離して細胞集団を抽出するために使用され、その後、胎児由来線維芽細胞の単離のために収集され、そして増殖される。多くの酵素が培養物中での増殖を容易にするために、複雑な組織マトリックスから個々の細胞を単離するために有用であることが、当該分野で公知である。組織からの細胞単離において使用するための広範囲の消化酵素は弱消化性（例えば、デオキシリボヌクレアーゼ及び、中性プロテアーゼ、ディスパーゼ）から強消化性（例えば、パパイン及び、トリプシン）までの範囲で当業者に使用可能であり、そしてこのような酵素は、商業的に使用可能である。本明細書と適合する酵素の非網羅的なリストには、粘液溶解酵素活性、メタロプロテアーゼ、中性プロテアーゼ、セリンプロテアーゼ（トリプシン、キモトリプシン、又はエラスターゼ等）、及び、デオキシリボヌクレアーゼが含まれる。特定の場合は、メタロプロテアーゼ、中性プロテアーゼ及び、粘液溶解活性から選択される酵素活性である。例えば、コラゲナーゼは、組織から種々の細胞を単離するために有用であることが知られている。デオキシリボヌクレアーゼは、一本鎖ＤＮＡを消化することができ、単離中の細胞凝集を最小限にすることができる。酵素は、単独で、又は組み合わせて使用することができる。セリンプロテアーゼは、使用される他の酵素を分解し得るので、好ましくは他の酵素の使用に続いて、配列で使用される。セリンプロテアーゼとの接触の温度及び、時間をモニターしなければならない。セリンプロテアーゼは、血清中のα２ミクログロブリンで阻害することができ、したがって、消化に使用される培地は、好ましくは無血清である。ＥＤＴＡ及び、ＤＮａｓｅが一般に使用され、収率又は効率を改善することができる。好ましい方法は、例えば、コラゲナーゼ及び、ディスパーゼ、又はコラゲナーゼ、ディスパーゼ、及び、ヒアルロニダーゼによる酵素処理を含み、このような方法が提供され、特定の好ましい実施形態において、コラゲナーゼ及び、中性プロテアーゼディスパーゼの混合物が、解離工程において使用される。より好ましいのは、ヒストリチクム菌由来の少なくとも１つのコラゲナーゼ、並びにプロテアーゼ活性、ディスパーゼ及び、サーモリシンのいずれかの存在下での消化を用いる方法である。さらに、より好ましいのは、コラゲナーゼ及び、ディスパーゼ酵素活性の両方による消化を用いる方法である。コラゲナーゼ及び、ディスパーゼ活性に加えてヒアルロニダーゼ活性による消化を含む方法も好ましい。当業者は、種々の組織供給源から細胞を単離するための多くのこのような酵素処理が当該分野で公知であることを理解する。例えば、リベラーズブレンドザイム（ＬＩＢＥＲＡＳＥ ＢＬＥＮＤＺＹＭＥ）（Ｒｏｃｈｅ）シリーズのコラゲナーゼ及び、中性プロテアーゼの酵素組み合わせは、非常に有用であり、本方法において使用され得る。他の酵素源が知られており、当業者はまた、そのような酵素をその天然源から直接得ることができる。当業者はまた、本発明の細胞を単離する際のそれらの有用性について、新規の、又は追加の酵素又は酵素の組み合わせを評価するために十分に装備されている。特定の酵素処理は、０．５、１、１．５、又は２時間以上である。他の好ましい態様において、組織は、解離工程の酵素処理中に３７℃でインキュベートされる。消化物を希釈することはまた、細胞が粘性消化物内に捕捉され得るので、細胞の収率を改善し得る。

酵素活性の使用が利用され得るが、本明細書中に提供されるような単離方法には必要とされない。機械的分離のみに基づく方法は上記のように、臍から本細胞を単離するのに成功し得る。

細胞は、組織が本明細書中で上記したような任意の培養培地に解離された後、再懸濁され得る。細胞は遠心分離工程の後に再懸濁されて、細胞を組織又は他の破片から分離し、試験することができる。再懸濁は、細胞への培養培地の再懸濁及び、／又は単純な添加の機械的方法を含み得る。

適切な増殖条件を提供することは、培養培地、サプリメント、大気条件、及び、細胞の相対湿度に関する広範囲の選択肢を可能にする。特定の温度は３７℃であるが、温度は他の培養条件及び、細胞又は培養物の所望の使用に応じて、約３５℃～３９℃の範囲であり得る。

いくつかの実施形態では、増殖培地と共に提供される補足血清中で使用可能であることを除いて、外因性増殖因子を必要としない細胞を提供する方法がある。特定の増殖因子の非存在下で増殖することができる臍細胞を誘導する方法もまた、本明細書中に提供される。この方法は上記の方法と同様であるが、これらは細胞が最終的に再懸濁され、そして増殖される培養培地中に、特定の増殖因子（このために、細胞は必要とされない）が存在しないことを必要とする。この意味で、この方法は、特定の増殖因子の非存在下で分裂することができる細胞に対して選択的である。特定の細胞は、いくつかの実施形態において、血清を添加しない化学的に規定された増殖培地中で増殖及び、増殖することができる。このような場合、細胞は、細胞を支持及び、維持するために培地に添加され得る特定の増殖因子を必要とし得る。無血清培地上又は中での増殖のために添加される特定の因子には、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＩＧＦ、及び、ＰＤＧＦのうちの１つ以上が含まれる。より特定の実施形態では、２つ、３つ、又は４つ全ての因子が無血清培地又は化学的に規定された培地に添加される。他の実施形態において、ＬＩＦは、細胞の増殖を支持又は改善するために無血清培地に添加される。

また、細胞が、それらの雰囲気中で約５％～約２０％の酸素の存在下で膨張し得る方法も提供される。Ｌ－バリンを必要とする細胞を得るための方法は、細胞をＬ－バリンの存在下で培養することを必要とする。細胞が得られた後、Ｌ－バリンの必要性を試験し、Ｌ－異性体を欠くＤ－バリン含有培地上で増殖させることによって確認することができる。

老化状態に達する前に、細胞が少なくとも２５、３０、３５、又は４０回の倍加を受けることができる方法が提供される。１０^１４以上の細胞に達するように倍加することができる細胞を誘導するための方法が提供される。特定の方法は、少なくとも約１０^１４、１０^１５、１０^１６、又は１０^１７以上のセルを、文化において約１０^３から約１０^６セル／ｃｍ^２までシードしたときに生成するのに十分に倍にできるセルを導出する方法である。特に、これらの細胞数は、８０、７０、又は６０日以内に産生される。一実施形態では、組織線維芽細胞を単離し、増殖させ、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１４１、ＰＤＧＦｒ－α、ＨＬＡ－Ａ、Ｂ、Ｃ、及び、それらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上のマーカーを有する。さらに、細胞は、特定の症例において、ＣＤ３１、ＣＤ４５、ＣＤ１１７、ＣＤ１４１、又はＨＬＡ－ＤＲ、ＤＰ、ＤＱの１つ以上を産生することも、産生しないこともある。
ＶＩ．

膵臓の膵島細胞

本開示の方法において医師を補助するために、膵島細胞を単離する方法が提供され、そして参照により組み込まれる。一実施形態では、米国特許出願第２００６／０１８２７２２号に記載されている方法が提供される：膵臓が男性又は女性のドナーから入手することができ、肝臓及び、膵臓の十二指腸の調達を組み合わせるために開発された技術である（Ｍａｒｓｈら、Ｓｕｒｇ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｂｓｔｅｔ．１９８９；１６８：２５４－２５８）。ドナーは、典型的には１５～５０歳の年齢の範囲である。一般的な除外基準には、例えば、全身性細菌感染症、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ細胞リンパ栄養ウイルス（ＨＴＬＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス、又はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）等のウイルス、糖尿病の既往、頭蓋外腫瘍、及び、ＡＩＤＳの危険因子が含まれる。ドナー膵臓は膵組織アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）含量を改善し、貯蔵膵臓から単離された膵島の収率を増加させ、膵島単離及び、移植のためのマージナルドナー膵臓の使用を可能にし、膵島単離成功率を改善し、単離された膵島の完全性を保存する（例えば、単離された膵島が糖尿病を逆転させることができるように）２層膵臓保存法を用いて保存することができる。一般に、低温ウィスコンシン大学（ＵＷ）溶液（ＶｉａＳｐａｎ（登録商標）、ＤｕＰｏｎｔ Ｐｈａｒｍａ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）（米国特許第４，７９８，８２４号及び、第４，８７９，２８３号を参照のこと）又は改変ＵＷ溶液を、等容量の低温ペルフルオロデカリン（ＦｌｕｏｒｏＭｅｄ、Ｌ．Ｐ、Ｒｏｕｎｄ Ｒｏｃｋ、ＴＸ）の上に注ぐことができる。典型的には、２層保存方法は、例えば、ステンレス鋼メッシュプレートが取り付けられた取り外し可能な蓋と、入口及び、出口ポートとを有する臓器輸送容器内で実施される。例えば、米国特許６，４９０，８８０の臓器輸送容器を参照されたい。ペルフルオロデカリンの比重はＶｉａＳｐａｎ（登録商標）及び、改質－ＵＷ溶液よりも大きいので、ＶｉａＳｐａｎ（登録商標）又は改質ＵＷ溶液をペルフルオロデカリンに添加した後、２つの層が形成される。改質ＵＷ溶液は、０．３５～０．４５ｇ／Ｌの水酸化カリウム、３．００～４．００ｇ／Ｌの一リン酸ナトリウム一水和物、０．０５～１．００ｇ／Ｌの塩化カルシウム二水和物、１．１０～１．３０ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム七水和物、３３．００～３８．００ｇ／Ｌのラクトビオン酸、４．００～５．００ｇ／Ｌのヒスチジン、１５．００～２０．００ｇ／Ｌのラフィノース、４．００～５．００ｇ／Ｌの水酸化ナトリウム、１５．００～２５．００ｇ／Ｌのペンタデンプン、１．００～１．５０ｇ／Ｌのアデノシン、及び、０．７５～１．５０ｇのグルタチオンを含む。特に、改質ＵＷ溶液は、０．３９ｇ／Ｌの水酸化カリウム、３．４５ｇ／Ｌの一リン酸ナトリウム一水和物、０．０７４ｇ／Ｌの塩化カルシウム二水和物、１．２３ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム七水和物、３５．８３ｇ／Ｌのラクトビオン酸、４．６６ｇ／Ｌのヒスチジン、１７．８４ｇ／Ｌのラフィノース、４．６０ｇ／Ｌの水酸化ナトリウム、２０．００ｇ／Ｌのペンタデンプン、１．３４ｇ／Ｌのアデノシン、及び、０．９２ｇ／Ｌのグルタチオンをを含み得る。典型的には、ペルフルオロデカリンが３０～７０分間（例えば、４０～６０分間）酸素化される。例えば、医療グレードの酸素は、０．２ｍｍフィルター（Ｇｅｌｍａｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）及び、輸送容器の入口ポートを通して２．５Ｌ／分の速度で濾過することができる。好ましくは、ドナー膵臓の冷蔵時間が１２時間未満（例えば、１０、８、６、４、又は２時間未満）である。ドナー膵臓を受け取ると、出荷コンテナの完全性は、目視検査によって検証することができる。膵臓を取り出し、８．００～１０．００ｇ／Ｌのマンニトール、３．００～６．００ｇ／Ｌのヒスチジン、１８．００～２１．００ｇ／Ｌのグルコン酸、０．５０～２．００ｇ／Ｌの水酸化カリウム、０．０１～０．０５ｇ／Ｌの塩化カルシウム、０．５０～２．００ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム、０．４０～０．８０ｇ／Ｌのニコチンアミド、０．３０～０．７０ｇ／Ｌのピルビン酸、及び、１．５０～３．５０ｇ／Ｌのリン酸カリウム一塩基性物質を含有する低温輸送溶液ですすぐことができる。例えば、低温輸送溶液は、８．５０～９．５０ｇ／Ｌ（例えば、９．１１ｇ／Ｌ）のＤ－マンニトール、４．００～５．００ｇ／Ｌ（例えば、４．６７ｇ／Ｌ）のＬ－ヒスチジン、１８．５０～２０．５０ｇ／Ｌ（例えば、１９．６３ｇ／Ｌ）のＤ－グルコン酸ナトリウム塩、０．８０～１．４０ｇ／Ｌ（例えば、１．１２ｇ／Ｌ）の水酸化カリウム、０．０２５～０．０４５ｇ／Ｌ（例えば、０．０３７ｇ／Ｌ）の塩化カルシウム二水和物、１．００～１．５０ｇ／Ｌ（例えば、１．２３ｇ／Ｌ）の硫酸マグネシウム七水和物、０．５５～０．６５ｇ／Ｌ（例えば、０．６１ｇ／Ｌ ピルビン酸ナトリウム０．６０ｇ／Ｌ（例えば、０．５５ｇ／Ｌ）、リン酸カリウム１塩基２．５０～３．２５ｇ／Ｌ（例えば、２．７２ｇ／Ｌ）を含み得る。膵島は、膵臓組織解離の自動化された方法を使用して、ドナー膵臓から単離され得る。例えば、Ｒｉｃｏｒｄｉら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ １９８８；３７：４１３－４２０を参照のこと。この方法は、１）解離；２）膨張；３）解離；及び、４）収集の一般的な工程を含む。膵臓の解離は、外来脂肪（膨張中の漏出を最小限にするためにいくらかの脂肪を保持しながら）及び、非膵臓組織を除去することを含み得る。典型的には、脂肪の約８０％～約９５％が除去される。解剖された膵臓は、例えば、ゲンタマイシン（Ｅｌｋｉｎｓ－Ｓｉｎｎ社）、セファゾリン（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）、及び、アンホテリシン－Ｂ（Ａｐｏｔｈｅｃｏｎ（登録商標））を冷輸送溶液中に含有する局所抗生物質溶液中でインキュベートされ得、次いで、フェノールレッドフリーハンクス平衡塩類溶液（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ社、Ｈｅｒｎｄｏｎ、Ｖａ）中で連続的にリンスされ得る。膵臓は頸部で「体と尾」と「頭」に分けることができ、以下のステップが各部分で行われる。一般に、血管カテーテル（１６～２０ゲージ）を用いて膵管にカニューレを挿入し、初期圧８０ｍｍＨｇに続いて拡張手技の残りの部分の圧力を１８０ｍｍＨｇに上昇させる等、制御された条件下で膵臓を潅流することができる。第Ｉ相溶液は、膵臓を潅流するために使用することができる。第Ｉ相溶液は、５．００～６．００ｇ／Ｌのマンニトール、０．５０～０．７０ｇ／Ｌの水酸化ナトリウム、５．００～７．００ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、０．２５～０．４０ｇ／Ｌの水酸化カリウム、０．０５～０．１５ｇ／Ｌの塩化カルシウム、０．１５～０．２５ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム、及び、３．００～４．００ｇ／Ｌのリン酸一塩基性ナトリウムを含む。例えば、第Ｉ相溶液は、５．４７ｇ／ＬのＤ－マンニトール、０．６０ｇ／Ｌの水酸化ナトリウム、６．１４ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、０．３３ｇ／Ｌの水酸化カリウム、０．１１ｇ／Ｌの塩化カルシウム二水和物、０．２０ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム七水和物、及び、３．４５ｇ／Ｌのリン酸ナトリウムを含み得る。典型的には、第Ｉ相溶液は、コラゲナーゼの１，０００～３，６００ Ｗｕｎｓｃｈ単位（コラゲナーゼ活性）又は２８，０００～１２８，５００カゼイナーゼ単位（タンパク質分解活性）を含有する。例えば、第Ｉ相溶液は、１５００～３０００（例えば、１，５６２～２，９５４又は２，０８２～２，３６３）Ｗｕｎｓｃｈ単位、又は４２，０００～１０８，０００（例えば、４２，３２８～１０７，０６４又は５６，４３７～８５，６５１）カゼイナーゼ単位のコラゲナーゼを含み得る。適切なコラゲナーゼには、ヒト膵島の分離手順用に特別に配合されたＬｉｂｅｒａｓｅ．ＴＭ．ＨＩ（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄ．）が含まれる。Ｌｉｎｅｔｓｋｙら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ １９９７；４６：１１２０－１１２３を参照のこと。好ましくは、粉末状のＬｉｂｅｒａｓｅ．ＴＭ．ＨＩは、第Ｉ相溶液に添加する少なくとも２０分前から２時間以内に再構成される。第Ｉ相溶液はまた、プロテアーゼ阻害剤（例えば、４－（２－アミノエチル）－ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩（Ｐｅｆａｂｌｏｃ（登録商標）ＳＣ ＰＬＵＳ）、ＴＬＣＫ（１－クロロ－３－トシルアミド－７－アミノ－２－ヘプタノン塩酸塩）、または大豆由来のトリプシン阻害剤などのトリプシン阻害剤）を含み得る。例えば、第Ｉ相溶液は、内因性プロテアーゼを特異的に阻害し、自己消化を減少させるＰｅｆａｂｌｏｃＳＣ ＰＬＵＳを０．０５～０．１５ｍｇ／ｍＬ含み得る。また、第Ｉ相溶液は、８～１２単位／ｍＬのヘパリン（例えば、Ｍｏｎｏｐａｒｉｎ（登録商標）、Ａｃｃｕｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を含み得る。例えば、第Ｉ相溶液は、１０単位／ｍＬのヘパリンを含み得る。

いくつかの実施形態では、第Ｉ相溶液が１，０００～３，６００Ｗｕｎｓｃｈ単位のコラゲナーゼ、０．０５～０．１５ｍｇ／ｍＬのトリプシン阻害剤、及び、１０単位／ｍＬのヘパリンを含有する。十分な期間、例えば、８～２０分間の冷潅流の後、膨張した膵臓は残りのカプセルをさらに切り取り、解離チャンバ（例えば、Ｒｉｃｏｒｄｉチャンバとしても知られる無菌ステンレス鋼チャンバ（Ｗａｈｏｆｆら、Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．１９９５；２２２：５６２－５７９））に入れることができる。膨張した膵臓から「漏れた」コラゲナーゼをチャンバーに添加することができる。典型的には、Ｒｉｃｏｒｄｉチャンバが熱交換コイル（例えば、ステンレス鋼コイル）、ポンプ、温度モニタ及び、センサ、装填フラスコ、流体収集フラスコ、サンプル収集フラスコ、並びに構成要素を流体接続するための管を含む循環システム内にある。流れ方向は、例えば、バルブ又はクランプを使用して制御することができる。熱交換コイルは、水浴中に配置することができる。Ｒｉｃｏｒｄｉチャンバーを収容する循環システムの一実施形態には、熱交換用のステンレススチール製コイル、小径の６つのチューブ（Ｍａｓｔｅｒ Ｆｌｅｘチューブ、サイズ１６）、大径の４つのチューブ（Ｍａｓｔｅｒ Ｆｌｅｘチューブ、サイズ１７）、サンプリング用のスチール製３方活栓、４つのプラスチッククランプ、２５０ｍＬの円錐チューブ、三方注入型使い捨てビーカー、１０００ｍＬ、ベル型プラスチックカバー、２つのＴ型コネクター、（１）ルアーロックポート付きのＴ型コネクター、及び、２つのアームを備えた１８インチスチール製リングスタンド、Ｉｓｍａｔｅｃポンプ、Ｍｏｎ－ａ－ｔｈｅｒｍ温度モニター及び、センサー、及び、水浴がある。この系を第Ｉ相溶液で満たし、空気を排気して消化段階を開始することができる。特に、第Ｉ相溶液は、ローディングフラスコからポンプ、熱交換コイル、及び、Ｒｉｃｏｒｄｉチャンバーを通って流体収集フラスコに流れることができる。第Ｉ相溶液の体積の１０％～３０％が流体収集フラスコに到達した後、第Ｉ相溶液がシステムを通って再循環されるように、すなわち、第Ｉ相溶液が流体収集フラスコからチャンバへ、及び、チャンバから流体収集フラスコへ流れるように、システムの流れを調節することができる。チャンバは、組織解離を補助するために流体が再循環されている間に撹拌され得る。流体の温度は２５℃～３７℃に維持することができ、収集段階は、一旦、チャンバから遊離される組織の量が増加すると開始することができ、膵島の大部分又は全ては周囲の腺房組織を含まず、無傷の膵島が観察され、腺房組織はより細かくなる（小細胞クラスター）。ジフェニルチオカルバゾン（ＤＴＺ）染色を用いて、島を非島組織から区別することができる。Ｌａｔｉｆら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １９８８；４５：８２７－８３０を参照のこと。ＤＴＺは、島β細胞顆粒中の亜鉛－インスリン複合体に選択的に結合し、島の赤色染色を生じる。ＤＴＺ染色は、腺房組織からの膵島の識別のための迅速な手段を提供し、陽性反応は、インスリン含有β細胞が存在することを示す。収集段階の間、システムの温度を約１０℃～約３０℃に下げることができ、流体収集フラスコ内の流体をポンプ及び、熱交換コイルを通してＲｉｃｏｒｄｉチャンバ内に流すことができ、第ＩＩ相溶液（ＲＰＭＩ １６４０、カタログ番号９９－５９５－ＣＭ、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ社、Ｈｅｒｎｄｏｎ、Ｖａ）をローディングフラスコに添加することができる。第ＩＩ相溶液は、コラゲナーゼを希釈し、そして組織を洗浄するために、循環系を通してポンプ輸送され得る。消化された物質は、第ＩＩ相溶液及び、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含むフラスコに収集することができ、収集された物質は、冷蔵溶液を使用して２～５回洗浄された。冷貯蔵液は、１６．００から２０．００ｇ／Ｌのラフィノース、４．００から６．００ｇ／Ｌのヒスチジン、４．００から５．００ｇ／Ｌの水酸化ナトリウム、３０．００から４０．００ｇ／Ｌのラクトビオン酸、０．３０から０．５０ｇ／Ｌの水酸化カリウム、０．０５から０．１０ｇ／Ｌの塩化カルシウム、１．００から１．５０ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム、３．００から４．００ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウム、１９．００から２１．００ｇ／Ｌのペンタスターチ、８．００から１２．００Ｕ／ｍＬのヘパリン、及び、８．００から１２．００μｇ／ｍＬのインシュリンを含み得る。例えば、冷貯蔵溶液は、１７．８４ｇ／ＬのＤ（＋）ラフィノース、４．６６ｇ／Ｌのヒスチジン、４．６０ｇ／Ｌの水酸化ナトリウム、３５．８３ｇ／Ｌのラクトビオン酸、０．３９ｇ／Ｌの水酸化カリウム、０．３９ｇ／Ｌの塩化カルシウム二水和物、１．２３ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム七水和物、３．４５ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウム、２％五澱粉、１０Ｕ／ｍＬのヘパリン、及び、１０μｇ／ｍＬのインスリンを含み得る。冷貯蔵溶液はＨ相ＩＩ溶液（８０体積％）を１０％ペンタデンプン（すなわち、１００ｇ／Ｌ）（２０体積％）と組み合わせ、８．００～１２．００Ｕ／ｍＬヘパリン、及び、８．００～１２．００μｇ／ｍＬインスリンを添加することによって作製することができる。Ｈ相溶液は、１６．００～２０．００ｇ／Ｌラフィノース、４．００～６．００ｇ／Ｌヒスチジン、４．００～５．００ｇ／Ｌ水酸化ナトリウム、３０．００～４０．００ｇ／Ｌラクトビオン酸、０．３０～０．５０ｇ／Ｌ水酸化カリウム、０．０５～０．１０ｇ／Ｌ塩化カルシウム、１．００～１．５０ｇ／Ｌ硫酸マグネシウム、３．００～４．００ｇ／Ｌリン酸一塩基ナトリウムを含む。Ｈ相ＩＩ溶液のｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムを用いて７．３～７．５のｐＨに調整することができる。Ｈ相ＩＩ溶液の密度は、典型的には１．０６３±０．００３である。例えば、Ｈ相ＩＩ溶液は、１７．８４ｇ／ＬのＤ（＋）ラフィノース、４．６６ｇ／Ｌのヒスチジン、４．６０ｇ／Ｌの水酸化ナトリウム、３５．８３ｇ／Ｌのラクトビオン酸、０．３９ｇ／Ｌの水酸化カリウム、０．３９ｇ／Ｌの塩化カルシウム二水和物、１．２３ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム七水和物、及び、３．４５ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウムを含み得る。洗浄した組織はキャッピング層溶液及び、ＨＳＡ（例えば、２５％ ＨＳＡ）に再懸濁することができ、キャッピング層溶液は、ｌ６．００～２０．００ｇ／Ｌラフィノース；４．００～６．００ｇ／Ｌヒスチジン；４．００～５．００ｇ／Ｌ水酸化ナトリウム；３０．００～４０．００ｇ／Ｌラクトビオン酸；０．３０～０．５０ｇ／Ｌ水酸化カリウム；０．０５～０．１０ｇ／Ｌ塩化カルシウム；１．００～１．５０ｇ／Ｌ硫酸マグネシウム；３．００～４．００ｇ／Ｌリン酸一塩基ナトリウム；及び、１９．００～２１．００ｇ／Ｌペンタスタッチを含み得る。例えば、キャップ層液は、１．０３５～１．０３６ｇ／ｃｍ^３の濃度を有することができ、１７．８４ｇ／ＬのＤ（＋）ラフィノース、４．６７ｇ／Ｌのヒスチジン、４．６ｇ／Ｌの水酸化ナトリウム、３５．８３ｇ／Ｌのラクトビオン酸、０．３９３ｇ／Ｌの水酸化カリウム、０．０７ｇ／Ｌの塩化カルシウム二水和物、１．２３ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム七水和物、３．４５ｇ／Ｌのリン酸ナトリウム一塩基性、及び、２％の五澱粉を含み得る。キャップ層溶液はＨ相ＩＩ溶液（８０体積％）を１０％ペンタデンプン（すなわち、１００ｇ／Ｌ）（２０体積％）と組み合わせることによって作製し得る。島は、連続密度勾配分離を用いて精製することができる。勾配は、イオジキサノール（ＯｐｔｉＰｒｅｐ（登録商標）、Ｎｙｃｏｍｅｄ、Ｒｏｓｋｉｌｄｅ、Ｄｅｎｍａｒｋ）（密度１．３２ｇ／ｃｍ^３）及び、キャップ層溶液、冷蔵溶液及び、／又は高密度（ＨＤ）原液を用いて調製することができる。ＨＤ原液は、１６．００～２０．００ｇ／Ｌのラフィノース；４．００～６．００ｇ／Ｌのヒスチジン；４．００～５．００ｇ／Ｌの水酸化ナトリウム；３０．００～４０．００ｇ／Ｌのラクトビオン酸；０．３０～０．５０ｇ／Ｌの水酸化カリウム；０．０５～０．１０ｇ／Ｌの塩化カルシウム；１．００～１．５０ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム；３．００～４．００ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウム；１５．００～２５．００ｇ／Ｌのペンタスターチ；及び、２００～３００ｍｌ。ＨＤ原液の密度は、典型的には１．１１２±０．００３ｇ／ｃｍ２・ｓｕｐ．３である。例えば、ＨＤ原液は、１７．８４ｇ／ＬのＤ（＋）ラフィノース、４．６７ｇ／Ｌのヒスチジン、４．６ｇ／Ｌの水酸化ナトリウム、３５．８３ｇ／Ｌのラクトビオン酸、０．３９ｇ／Ｌの水酸化カリウム、０．０７ｇ／Ｌの塩化カルシウム二水和物、１．２３ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム七水和物、３．４５ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウム、２０ｇ／Ｌのペンタデンプン、及び、２５０ｍＬ／Ｌのイオジキサノール（Ｏｐｔｉｐｒｅｐ^ＴＭ）を含み得る。いくつかの実施形態において、ＨＤストック溶液はまた、８．００～１２．００Ｕ／ｍＬのヘパリン及び、／又は８．００～１２．００μｇ／ｍＬのインスリンを含み得る。１．０８～１．１３ｇ／ｃｍ^３の範囲の密度を有する底部密度勾配溶液は、ＨＤ原液と冷貯蔵溶液とを混合することによって調製することができる。密度１．０５０～１．０８０ｇ／ｃｍ３の軽密度勾配溶液はイオジキサノールと低温貯蔵溶液を混合することによって作ることができ、一方、密度１．０６～１．１３ｇ／ｃｍ^３の重密度勾配溶液は、低温貯蔵溶液と高温貯蔵溶液とを混合することによって作り得る。

連続勾配は例えば、デュアルチャンバ勾配メーカーにおいて、軽密度勾配溶液と重密度勾配溶液とを組み合わせることによって作ることができる。底部密度勾配はＣｏｂｅ ２９９１セルセパレータ（Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＣＯ）等のセルセパレータ用のセル処理バッグに移すことができ、連続勾配を底部密度勾配上に重ねることができる。再懸濁された組織（上記のように）を連続勾配上に配置し、続いてキャッピング層溶液を配置し、次いで勾配を回転させて膵島を分離することができる。画分を収集し、そして以下に記載されるように、島の存在についてアッセイし得る。膵島純度（ＤＴＺ陽性細胞のパーセンテージ）＞１０％を有する画分を、培養のために合わせることができる。精製された膵島は、培養条件下でヒト膵島の生存率を維持するために有効である化学的に規定された培養培地を使用して培養され得る。典型的には島は２２℃又は３７℃で、９５％大気及び、５％ＣＯ_２の大気中で培養される。いくつかの実施形態では島は室内空気の雰囲気中で培養することができる。島の生存率は、トリパンブルー又は蛍光色素包接／排除アッセイを用いて評価することができる。例えば、Ｂａｒｎｅｔｔら、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、２００４；１３（５）：４８１－８を参照のこと。化学的に規定された培養培地は、インスリン、硫酸亜鉛、セレン、トランスフェリン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ（Ｎ－［２－ヒドロキシエチル］ピペラジン－Ｎ’［２－エタンスルホン酸］）、ＨＳＡ、及び、ヘパリンのうちの１つ以上を含み得る。例えば、化学的に規定された培養培地は５．５０～７．５０μｇ／ｍＬのインスリン、１５～１８μＭの硫酸亜鉛、５．５０～７．５０ｎｇ／ｍＬのセレン（例えば、亜セレン酸）、及び、５．５０～７．５０μｇ／ｍＬのトランスフェリン（例えば、ヒトトランスフェリン）を含み得る。このような培養培地は、以下の１つ以上をさらに含み得る：３～７ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２０～３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．５０～１．５０ｍｇ／ｍＬのＨＳＡ、８．００～１２．００ Ｕ／ｍＬのヘパリン、１～３ｍＭのＬ－アリニル－Ｌ－グルタミン、及び、４．５０～６．５０μｇ／ｍＬのリノール酸。典型的には、細胞が９５％の室内空気及び、５％のＣＯ．ｓｕｂ．２下で培養される場合、化学的に規定された培養培地は重炭酸塩（例えば、２．２ｇ／Ｌ等の１．７５～２．７５ｇ／Ｌ）を含む。細胞を１００％の室内空気中で培養すると、重炭酸塩濃度を低下させることができる。いくつかの実施形態において、化学的に規定された培養培地はまた、シプロフロキサシン（Ｂａｙｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）のような抗生物質を含む。一実施形態では、化学的に規定された培養培地が２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２ｍＭのＬ－アリニル－Ｌ－グルタミン、５ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、ＩＴＳ添加剤（６．２５μｇ／ｍＬのヒト組換えインスリン、６．２５μｇ／ｍＬのヒトトランスフェリン、６．２５ｎｇ／ｍＬの亜セレン酸、１．２５ｍｇ／ｍＬのＨＳＡ、５．３５μｇ／ｍＬのリノール酸）、１６．７μＭの硫酸亜鉛、２０μｇ／ｍＬのシプロフロキサシン（Ｂａｙｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、及び、０．５％の最終濃度の２５％ ＨＳＡを補充したＣＭＲＬ １０６６（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ社、Ｈｅｒｎｄｏｎ、Ｖａ）であり得る。ヒトインスリン様成長因子－Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ、ＧＲＯ ＰＥＰ Ｐｔｙ社、Ａｄｅｌａｉｄｅ、Ｓｏｕｔｈ Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を膵島培養物に添加することができる。例えば、９０～１１０ｎｇ／ｍＬ（例えば、１００ｎｇ／ｍＬ）のＩＧＦ－１を培養物に添加することができる。典型的には膵島を３７℃で一晩培養し、次いで２２℃でさらに１～３日間、膵島の移植前培養は有益な代謝及び、免疫学的効果を提供することができる。例えば、２日間の膵島の培養は、新たに単離された膵島と比較して、培養された膵島の代謝効力を改善することができる。移植前の膵島培養によって、移植前にレシピエントにおいてＴ細胞指向性免疫抑制が達成される時間も可能となる。特定の機構に拘束されることなく、Ｔ細胞指向性免疫抑制を達成することは、移植された膵島が直ちに露出される自己反応性でプライミングされたＴ細胞によって媒介される膵島指向性免疫応答を低下させる可能性がある。本明細書中に記載されるように、Ｔ細胞枯渇抗体による治療の開始後２日まで移植を遅延させることは、移植された膵島の、第１及び、第２の抗体注入に関連する種々の程度のサイトカイン放出への曝露を防止する。さらに、膵島の移植前培養は、組織の注入前に品質管理研究を実施することを可能にする。

精製された膵島細胞は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）もしくはエチレングリコール、又は凍結保存剤の混合物等の凍結保存剤中に細胞を懸濁することによって凍結保存することができる。例えば、Ｍｉｙａｍｏｔｏら、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２００１；１０（４－５）：３６３－７１；Ｅｖａｎｓら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １９９０；５０（２）：２０２－２０６；及び、Ｌａｋｅｙら、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １９９６；５（３）：３９５－４０４を参照のこと。膵島細胞は、精製又は培養後に凍結保存することができる。典型的には、凍結保存剤を段階的に添加し、島をゆっくりと－４０℃に冷却し、次いで－１９６℃で貯蔵し、島を急速に解凍し（例えば、３７℃の水浴中で）、使用前にアッセイすることができる。凍結保存は後の移植又は他の目的のために、これらの細胞の長期保存を可能にすることができる。膵島細胞の精製された集団の凍結保存コレクションは、膵島バンクを産生するために特に有用である。

本明細書中に記載される方法を使用して精製された同質遺伝子島細胞の調製は、典型的には、少なくとも５５％（例えば、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％）の患者において成功した移植を生じる。移植は、患者がインスリン非依存性、正常血糖、及び、単ドナー膵島移植後少なくとも１年間低血糖がない状態を維持した場合に成功とみなされる。

精製された膵島細胞の調製物は、膵島が移植されるのに十分な効力を有することを確認するためにアッセイされ得る。本明細書中で使用される場合、「移植効力」は膵島調製物が患者に首尾よく移植され得る確率の推定値を指し、以下のパラメーターの１つ以上に基づく：膵島調製物の安全性、膵島細胞数、膵島調製物の細胞組成、β細胞の数、インスリン含量、組織体積、生存率、ＡＴＰ含量、細胞培養後に回収された膵島当量のパーセント、壊死細胞及び、アポトーシス細胞のパーセント、グルコース刺激インスリン放出、並びに酸素消費速度（ＯＣＲ）。例えば、移植効力は、ＡＴＰ／ＤＮＡ比、ＯＣＲ／ＤＮＡ比、及び、β細胞数に基づいて推定することができる。成功した移植を構成する確率が少なくとも６０％である精製島の調製物が特に有用である。膵島調製物の安全性は公知の技術を使用して、好気性及び、嫌気性生物並びに真菌、マイコプラズマ、及び、他の外来性因子（例えば、ウイルス）の存在についてアッセイすることによって決定され得る。例えば、サンプルをグラム染色して細菌を検出することができる。移植に適した膵島細胞は、検出可能な生物を含まず、機能的に無菌である。安全性を評価することはまた、調製物中に存在するエンドトキシンを測定することを含み得る。移植に適した膵島細胞調製物は、１．７ＥＵ／ｍＬ（５ＥＵ／ｋｇレシピエント体重）以下のエンドトキシン含量を有する。島細胞数はＤＴＺで染色し、接眼マイクロメーターを用いた光学顕微鏡を用いて染色細胞のサイズ分布を定量することによって評価することができる。Ｒｉｃｏｒｄｉら、Ａｃｔａ Ｄｉａｂｅｔｏｌを参照のこと。Ｌａｔ．１９９０；２７：１８５－１９５。島体積は島が球形であるという仮定に基づいて計算することができ、島の数は島当量（ＩＥ）で表され、１つのＩＥは直径１５０μｍの島に等しい。少なくとも２．２ｘ１０^５ ＩＥ（例えば、２．７ｘ１０^５、３．５ｘ１０^５、４．５ｘ１０^５、５．５ｘ１０^５、７．０ｘ１０^５、９．０ｘ１０^５、１．１ｘ１０^６、又は１．４ｘ１０^６ ＩＥ）を含むｉｓｌｅｔの準備は、５，０００～２０，０００ ＩＥが移植可能／ｋｇ受信者体重として特に有用である。１つのＩＥは、約６００～約８６００個の細胞を含み得る。膵島調製物の細胞組成は、標準的なイムノアッセイ法を用いて評価することができる。インスリン、グルカゴン、ソマトスタチン、膵臓ポリペプチド、アミラーゼ、及び、サイトケラチン１９に対する結合親和性を有する抗体は、それぞれ、β細胞、α細胞、δ細胞、ｐｐ細胞、腺房細胞、及び、管細胞を同定するために使用され得る。このような抗体は例えば、ＤＡＫＯ、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ、ＣＡ又はＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏから市販されている。結合は特定のタンパク質（例えば、インスリン）に対する結合親和性を有する抗体、又はこのような抗体に結合する二次抗体を、直接的又は間接的のいずれかで標識することによって検出され得る。適当な標識としては限定されるものではないが、放射性核種（例えば、^１２５１、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、^３Ｈ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、又は^１４Ｃ）、放射性部分（例えば、フルオレセイン、ＦＩＴＣ、ＰｅｒＣＰ、ｒｈｏｄａｍｉｎｅ又はＰＥ）、ルミネセンス部分（例えば、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｄｏｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、パロアルト、カリフォルニア州、パロアルトによって供給されるＱｄｏｔ^ＴＭナノ物質）、定義されたスペクトルの光を吸収する物質、又はエンザイム（例えば、アルカタス又はホースラディッシュペロキシダズ）があげられる。抗体は、ビオチンとの結合によって間接的に標識され得、次いで、上記の分子で標識されたアビジン又はストレプトアビジンで検出され得る。標識を検出又は定量する方法は標識の性質に依存し、当技術分野で公知である。検出器の例としてはｘ線フィルム、放射能カウンター、シンチレーションカウンター、分光光度計、比色計、蛍光光度計、ルミノメーター、及び、濃度計があげられるが、これらに限定されない。免疫学的アッセイは、サンドイッチアッセイ、競合アッセイ（競合ＲＩＡ）、又はブリッジイムノアッセイを含む、種々の公知の形式で実施され得る。例えば、米国特許５，２９６，３４７；４，２３３，４０２；４，２３３，４０２、４，０９８，８７６、４，０３４，０７４を参照されたい。ベータ細胞の数は、細胞組成物試料中で同定されたベータ細胞の総ＤＮＡ含量及び、割合に基づいて計算することができる。１つのＩＥは、約１４５～４０００のベータ細胞を含み得る。少なくとも１×１０^６β細胞／ｋｇ体重のレシピエント（すなわち、４５ｋｇのレシピエントについては４．５×１０^７β細胞、５０ｋｇのレシピエントについては５×１０^７β細胞、５５ｋｇのレシピエントについては５．５×１０^７β細胞）を含有する膵島細胞の調製物を使用することができる。より多数のβ細胞（例えば、レシピエントの体重１ｋｇあたり少なくとも２×１０^６β細胞、レシピエントの体重１ｋｇあたり少なくとも３．５×１０^６β細胞、又はレシピエントの体重１ｋｇあたり少なくとも５．０×１０^６β細胞）を含む調製物が特に有効である。例えば、受領者の少なくとも３．５ｘ１０^６ベータセル／ｋｇ体重を含む製剤（すなわち、４５ｋｇ受領者の約１．５８ｘ１０^８ベータセル、５０ｋｇ受領者の約１．７５ｘ１０^８ベータセル、及び、５５ｋｇ受領者の約１．９ｘ１０^８ベータセル）は、少なくとも１年間はインスリンの独立性を維持できる。インスリン含量はイムノアッセイ、例えば、スウェーデン、Ｍｅｒｃｏｄｉａからのヒトインスリン酵素免疫測定法（ＥＩＡ）キットを用いて評価し、ＤＮＡ含量について補正することができる。Ｐｉｃｏ Ｇｒｅｅｎを用いてＤＮＡ含量を評価することができる。Ｐｉｃｏ Ｇｒｅｅｎ法では、膵島細胞を、水酸化アンモニウム及び、非イオン性界面活性剤を含有する溶液で溶解することができる。ピコグリーンを試料に添加し、暗所でインキュベートすることができる。検体を、４８０ｎｍの励起及び、５２０ｎｍの発光を有する蛍光光度計で読み取り、標準曲線と比較する。典型的には、１つのＩＥが約４～約６０ｎｇのＤＮＡを含み得る。調製物の組織体積は、移植前の膵島細胞ペレットの体積を指す。膵島細胞は予め秤量した組織培養フラスコに収集することができ、膵島は一定期間（例えば、５分間）にわたってフラスコの底部コーナーに沈降させることができる。培地をフラスコから除去し、質量を記録することができる。膵島細胞の適切な調製物は１０ｍＬ以下（例えば、８ｍＬ以下、７．０ｍＬ以下、５ｍＬ以下、３ｍＬ以下、又は２ｍＬ以下）の体積を有する。膵島細胞調製物のＡＴＰ含量は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、又はイムノアッセイ（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡからのＡＴＰ決定キット）を使用することによって評価され得る。いずれの方法においても、Ｍｉｃｈｅｌｉら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ａｃｔａ １９９３、２２０：１－１７（トリクロロ酢酸を用いてＡＴＰを抽出し、フレオン／アミン溶液を用いて試料を中和する）の方法を用いて試料を調製することができる。ＨＰＬＣで測定して少なくとも７６ｐｍｏｌ ＡＴＰ／μｇ ＤＮＡ（例えば、少なくとも８０、９０、１００、１１０、１５０、１７５、１９０、又は１９３）を有する膵島細胞の調製物は、移植に特に有用である。蛍光色素包接／排除アッセイを使用して、生存率を評価することができる。例えば、Ｌｏｎｄｏｎら、Ｈｏｒｍｏｎｅ ＆ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈを参照のこと 補遺１９９０；２５：８２－８７。例えば、フルオレセインジアセテート及び、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を使用して生存率を評価することができる。フルオレセインジアセテートは細胞内酵素によって遊離フルオレセインに解離され、これは、青色光励起（４９０ｎｍ）下で緑色に蛍光を発し、そして細胞が生きており、そして代謝的に活性であるという証拠を提供する。細胞膜が損傷を受けている場合、ＰＩは細胞に入り、核ＤＮＡに挿入され、緑色光励起（５４５ｎｍ）下で赤色蛍光を発することができる。緑色（生存可能）及び、赤色（死んだ）細胞の割合は、膵島調製物の生存能力の指標を与える。あるいは、ＳＹＴＯ－１３／臭化エチジウム（ＳＹＴＯ／ＥＢ）及び、カルセインＡＭ／エチジウムホモダイマー（Ｃ／ＥｔｈＤ）蛍光染色を使用して、生存率を評価し得る。例えば、Ｂａｒｎｅｔｔら、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔを参照のこと。２００４；１３（５）：４８１－８．少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９７％）の生存細胞を含む膵島の調製物は、移植に特に有用である。

培養後に回収されたＩＥのパーセントは、上記のようにＤＴＺを用いて決定することができる。ＩＥの少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％）が培養後に回収された膵島の調製物は、移植に特に有用である。壊死細胞及び、アポトーシス細胞のパーセントは、公知の方法を用いて評価することができる。例えば、アポトーシスは、ＤＮＡ断片化を試験することによって評価され得る。例えば、Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＥＬＩＳＡ．ｓｕｐである。Ｐｌｕｓ（Ｒｏｃｈｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）は、細胞質ヒストン関連ＤＮＡフラグメントを検出するために使用され得る。細胞の３０％以下（例えば、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、又はそれ以下）がアポトーシス性又は壊死性である島の調製物は、移植に有用である。グルコース刺激インスリン放出は、調製物の機能的能力の尺度である。静的インキュベーション及び、ＤＮＡ含量について補正されたインスリン放出の評価のための標準的な技術は、膵島の機能的能力を決定するために使用される。Ｒｉｃｏｒｄｉら、Ａｃｔａ Ｄｉａｂｅｔｏｌ．Ｌａｔ．１９９０；２７：１８５－１９５。刺激指数は、１６．７ｍＭグルコースでのインスリン放出を１．７ｍＭグルコースでのインスリン放出で割ることによって計算される。＞１（例えば、＞４、＞７、＞１０、＞１４、＞１７、又は＞２７）の刺激指数を有する膵島の調製物は、移植に特に有用である。ＯＣＲはＯＣＲチャンバ（例えば、Ｉｎｓｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ｐａから）を使用して測定することができる。例えば、Ｐａｐａｓら、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔを参照のこと。２００３；１２：１７７；Ｐａｐａｓら、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００３；１２：１７６；及び、Ｐａｐａｓら、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ． ２００１；１０：５１９．＞７５ｎｍｏｌ／分／ｍｇ ＤＮＡ（例えば、＞１００、＞１５０、＞２００、又は＞２３０ｎｍｏｌ／分／ｍｇ ＤＮＡ）のＯＣＲを有する膵島の調製物は、移植に特に有用である。膵島細胞は、例えば、小開腹術又は経皮経肝門脈カテーテル法のような外科技術を用いて患者の門脈に移植することができる。移植前に、患者は異なる治療レジメンを用いて導入免疫抑制を受けることができる。患者はまた、移植後免疫抑制レジメンを受けることができる。例えば、寛解導入療法には、ウサギ抗胸腺細胞グロブリン（ＲＡＴＧ）、ダクリズマブ、及び、エタネルセプト（すなわち、可溶性腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体）による治療を含めることができる。ＲＡＴＧは強力な誘導物質であり、走化性シグナルに対する白血球の応答も妨げ、強固な細胞接着に必要なインテグリンの発現を阻害する。移植周辺期におけるＴＮＦαの選択的阻害は、辺縁塊膵島移植後の糖尿病の逆転を促進できる可能性がある。移植後、移植後１カ月の時点でタクロリムスを補充又は最小限にすることにより、生着した膵島の機能が増強される可能性がある。誘導療法の別の例は、自己反応性の、プライミングされた、移植直後の膵島指向性Ｔ細胞を不活性化することができる抗ＣＤ３ ｍＡｂ ｈＯＫＴ３γ１（Ａｌａ－Ａｌａ）の使用を含み得る。抗ＣＤ３ ｍＡｂ、ｈＯＫＴ３γ１（Ａｌａ－Ａｌａ）はＯＫＴ３の結合領域を保持するが、マウスフレームワークをヒトアミノ酸で置換するヒト化抗体である。さらに、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）への結合を防止するために変異される。臨床的には、この遺伝子操作された抗体が新規発症１型糖尿病における残存β細胞機能の保存に有効であることが証明されている。加えて、ｈＯＫＴ３γ１（Ａｌａ‐Ａｌａ）は腎移植片拒絶を逆転させた。自己反応性及び、同種反応性Ｔ細胞応答の両方に対するこの二重活性は、親ＯＫＴ３抗体と比較して、副作用が著しく少なかった。

本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞は、同種膵島又は自己膵島の寛容を増強するために使用される。線維芽細胞は、操作されない様式で使用され得るか、又は培養条件によって操作され得るか、又は遺伝的に操作され得る。遺伝子操作には、免疫抑制／免疫調節面の増大、及び、／又は自己抗原によるトランスフェクションが含まれ得る。糖尿病の場合、前記自己抗原は、島自己抗原、例えばＧＡＤ、ＩＳＬＡ－１、インスリン、プロインスリン、ＮＲＰ、又はそれらのペプチドを含む。１つの実施形態において、線維芽細胞は、骨髄由来ＭＳＣを使用する患者の処置のために以前に使用されたプロトコールに従って生成される。いくつかの実施形態では、トランスフェクションはレンチウイルスベクターの使用によって達成され、レンチウイルス媒介トランスフェクションを行う前記手段は当技術分野で周知であり、以下の参考文献［８２～８８］で論じられている。接着細胞への遺伝子のトランスフェクションのいくつかの特定の例は幹細胞ホーミングを促進するためのＳＤＦ－１のトランスフェクション［８９］、又はＦＧＦ－１８［９１］、ＨＧＦ［９２］、ａｋｔ［９３］、ＴＲＡＩＬ［９４－９７］、遊走を増強するためのＮＵＲ７７［１００］、ＨＩＦ－１α［１０１］、ＣＣＬ２［１０２］、免疫抑制活性を増強するためのＨＬＡ－Ｇ［１０４］、シトシンデアミナーゼ［１０６］、老化を減少させるためのＯＣＴ－４［１０７、１０８］、ＴＧＦ発現を減少させるためのＢＡＭＢＩ［１０９］、抗アポトーシスのためのＨＯ－１［１１１］、血管形成を増強するためのｍｉＲ－１２６［１１２、１１３］、アポトーシスを防止するためのｂｃｌ－２を含む［１１４］テロメラーゼ及び、ミオカルジンは心臓形成を誘導し［１１５］、ＣＸＣＲ４は造血回復を促進し［１１６］、腎臓同種移植片拒絶を減少させる［１１７］ｗｎｔ１１［１１８］、膵臓分化を促進するためのＩｓｌｅｔ－１［１１９］、自己免疫疾患を減少させるためのＩＬ－２７［１２０］、敗血症を減少させるためのＡＣＥ－２［１２１］、肝不全を減少させるためのＣＸＣＲ４［１２２、１２３］、及び、癌を減少させるためのＨＧＦアンタゴニストＮＫ４［１２４］。

細胞培養は、毎週無菌性を、エンドトキシンはリムルス・アメボサイト溶解物試験で、マイコプラズマはＤＮＡ－フルオロクローム染色で検査される。

線維芽細胞培養物の質を決定するために、フローサイトメトリーを、ＳＨ－２、ＳＨ－３、ＳＨ－４ ＭＳＣマーカーの表面発現、及び、汚染ＣＤ１４陽性細胞及び、ＣＤ－４５陽性細胞の欠如について、すべての培養物について実施する。細胞を０．０５％トリプシン－ＥＤＴＡで分離し、ＤＰＢＳ ＋２％ウシアルブミンで洗浄し、１％パラホルムアルデヒド中で固定し、１０％血清中でブロックし、一次ＳＨ－２、ＳＨ－３及び、ＳＨ－４抗体、続いてＰＥ結合抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体と別々にインキュベートした。１７５ｃｍ^２フラスコ中のコンフルエントな線維芽細胞をタイロード塩溶液で洗浄し、培地１９９（Ｍ１９９）と共に６０分間インキュベートし、そして０．０５％トリプシン－ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ）で分離する。１０個のフラスコからの細胞を一度に分離し、線維芽細胞を４０ｍｌのＭ１９９＋１％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒｅｄ Ｃｒｏｓｓ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ、ＵＳＡ）に再懸濁した。各１０フラスコセットから採取した線維芽細胞を４℃で４時間まで保存し、採取の終わりに合わせた。全部で２～１０’１０^６線維芽細胞／ｋｇをＭ１９９ ＋ １％ ＨＳＡに再懸濁し、２０℃で１０分間４６０ｇで遠心分離した。細胞ペレットを新鮮なＭ１９９ ＋ １％ ＨＳＡ培地に再懸濁し、４６０ｇで１０分間、２０℃でさらに３回遠心分離した。全収穫時間は、フラスコ当たりのＭＳＣ収量及び、標的用量に基づいて２～４時間であった。回収した線維芽細胞を、１０％ ＤＭＳＯ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ、ＵＴ、ＵＳＡ）及び、５％ＨＳＡの最終濃度で速度制御フリーザーを使用して、Ｃｒｙｏｃｙｔｅ（Ｂａｘｔｅｒ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ、ＵＳＡ）フリーズバッグ中で凍結保存する。注入当日、凍結保存したユニットを３７℃の水浴中でベッドサイドで解凍し、５分以内に６０ｍｌのシリンジに移し、１０～１５分にわたって患者に静脈内注入した。患者には、アセトアミノフェン３２５～６５０ｍｇ及び、ジフェンヒドラミン１２．５～２５ｍｇを経口投与する前投薬を行う。血圧、脈拍、呼吸数、温度及び、酸素飽和度を、注入時及び、その後１５分ごとに３時間モニターし、続いて２時間ごとに６時間モニターする。

以下の実施例は、本開示の好ましい実施形態を実証するために含まれる。以下の実施例に開示される技術は本開示の実施において良好に機能することが本発明者によって発見された技術を表し、したがって、その実施のための好ましい形態を構成すると考えることができることを当業者は理解されたい。しかしながら、当業者は本開示に照らして、開示された特定の実施形態において多くの変更を行うことができ、それでも、本開示の精神及び、範囲から逸脱することなく、同様の又は類似の結果を得ることができることを理解すべきである。
実施例１
線維芽細胞と同時移植した膵島によるグルコース制御の増強

β細胞毒性抗生物質ストレプトゾシン（ＳＴＺ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｓｔ．Ｌｏｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）を使用して、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて糖尿病を誘導した（６５ｍｇ／ｋｇで５日間）。Ｃ５７／ＢＬ６マウスから、定常コラゲナーゼ消化及び、Ｆｉｃｏｌｌ密度精製、続いてハンドピッキングを用いて島を単離した。ＢＡＬＢ／ｃレシピエント（雌雄とも）は膵島移植前１～３週間糖尿病であった。

レシピエントをＡｖｅｒｔｉｎ（２，２，２，－トリブロモエタノール）で麻酔し、側腹部切開を行い、左腎を動員した。腎上極に小切開を加え、腎下面、前外側面に向けて微細なガラスプローブで被膜と腎実質を分離してパウチを作成した。新たに単離及び、精製した島（＞９５％純度）を、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０％ウシ胎仔血清、並びに１％ペニシリン及び、ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ－１６４０中の１０×３５ｍｍペトリ皿の中心にもたらし、次いで、付属のマイクロマニピュレーターシリンジを用いてＰＥ－５０カテーテル（内径０．７６ｍｍ、長さ３０ｃｍ）中に引き上げた。カテーテル先端を血液クリップで閉じ、シリンジ及び、カテーテル全体を３５０ｒｐｍで１５～２０秒間回転させて、先端で島をペレット化した。血液クリップを除去した後、先端を腎臓被膜の下に挿入し、膵島ペレットをパウチ内にゆっくりと前進させた。カテーテルを取り出し、入口を眼科焼灼器で密封した。非空腹時血糖が２～３日（１０）以内に正常（＜９．４ｍＭ）に戻った場合、移植は技術的に成功したとみなされた。膵島移植片機能を以下のように評価した。マウスに以下のいずれかを投与した：ａ）ストレプトゾシンなし；ｂ）ストレプトゾシン；ｃ）ストレプトゾシン＋骨髄間葉系幹細胞（１００，０００細胞）（ＡｌｌＣｅｌｌｓ社から購入）及び、ｄ）ストレプトゾシン＋ＣＤ７３に選択した線維芽細胞（１００，０００細胞）。

腹腔内ブドウ糖負荷試験（ＩＰＧＴＴ）は、以前に報告されたプロトコル（アンジオテンシンＩＩタイプ２受容体が膵島様細胞クラスターへのヒト胎児膵臓前駆細胞の発達とその移植の可能性に重要である。Ｌｅｕｎｇ ＫＫ、Ｌｉａｎｇ Ｊ、Ｍａ ＭＴ、Ｌｅｕｎｇ ＰＳ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ２０１２ Ｍａｒ；３０（３）：５２５－３６）に従って、移植後３０日に実施した。手短に言えば、全ての群は、６時間の絶食後に水溶性グルコース（１ｇ／ｋｇ体重）の腹腔内注射を受け、血中グルコースをグルコース注射の５０、１００、１５０分後にモニターした。図１は、血中グルコースレベルに基づいて、線維芽細胞と同時移植された膵島によるグルコース制御の増強を実証する。
参考文献

本明細書において言及される全ての特許及び、刊行物は、本発明が関係する当業者のレベルを示す。すべての特許及び、刊行物はあたかも各個々の刊行物が参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示されたかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
特許及び、特許出願

Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，０３４，０７４

Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，０９８，８７６

Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，２３３，４０２

Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，７９８，８２４

Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，８７９，２８３

Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，２９６，３４７

Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，４９０，８８０

Ｕ．Ｓ．ＰａｔｅｎｔＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ＵＳ ２００６／０１８２７２２
文献

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８．Ｈｅ、Ｆ．ら、Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｐｏｒｔａｌ ｖｅｎｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｓｕｒｇｅｒｙ、２００９．１４５（６）：ｐ．６６３－７４．

９．Ｓｔｅｉｎｍａｎ、Ｒ．Ｍ．、Ｄ．Ｈａｗｉｇｅｒ、ａｎｄ Ｍ．Ｃ．Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ、Ｔｏｌｅｒｏｇｅｎｉｃ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００３．２１：ｐ．６８５－７１１．

１０．Ａｄｅｍａ、Ｇ．Ｊ．、Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｂｅｎｃｈ ｔｏ ｂｅｄｓｉｄｅ ａｎｄ ｂａｃｋ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ、２００９．１２２（２）：ｐ．１２８－３０．

１１．Ｓｔｅｉｎｍａｎ、Ｒ．Ｍ．ａｎｄ Ｋ．Ｉｎａｂａ、Ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ、１９９９．６６（２）：ｐ．２０５－８．

１２．Ｓｔｅｉｎｍａｎ、Ｒ．Ｍ．、Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ：ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｍｔ Ｓｉｎａｉ Ｊ Ｍｅｄ、２００１．６８（３）：ｐ．１６０－６．

１３．Ｂｏｎｉｆａｚ、Ｌ．ら、Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＤＥＣ－２０５ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｅａｄｙ ｓｔａｔｅ ｌｅａｄｓ ｔｏ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｌａｓｓ Ｉ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ＣＤ８＋ Ｔ ｃｅｌｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ、２００２．１９６（１２）：ｐ．１６２７－３８．

１４．Ｍｕｋｈｏｐａｄｈａｙａ、Ａ．ら、Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｂｅｔａ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｔｏ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ａｕｔｏｒｅａｃｔｉｖｅ ＣＤ８＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＮＯＤ ｍｉｃｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ、２００８．１０５（１７）：ｐ．６３７４－９．

１５．Ｇｉａｎｎｏｕｋａｋｉｓ、Ｎ．ら、Ｐｈａｓｅ Ｉ （ｓａｆｅｔｙ） ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｔｏｌｅｒｏｇｅｎｉｃ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｙｐｅ １ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ、２０１１．３４（９）：ｐ．２０２６－３２．

１６．Ｋｒａｍｐｅｒａ、Ｍ．ら、Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｎａｉｖｅ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｔｈｅｉｒ ｃｏｇｎａｔｅ ｐｅｐｔｉｄｅ．Ｂｌｏｏｄ、２００３．１０１（９）：ｐ．３７２２－９．

１７．Ｏｐｉｔｚ、Ｃ．Ａ．ら、Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ－２，３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ－１ ｖｉａ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｂｅｔａ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｒ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ、２００９．２７（４）：ｐ．９０９－１９．

１８．Ｆａｎ、Ｈ．ら、Ｐｒｅ－ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ＩＬ－１ｂｅｔａ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＭＳＣ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ＤＳＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｏｌｉｔｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１２．９（６）：ｐ．４７３－８１．

１９．Ｄｕｉｊｖｅｓｔｅｉｎ、Ｍ．ら、Ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｃｏｌｉｔｉｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ、２０１１．２９（１０）：ｐ．１５４９－５８．

２０．Ｋｒａｍｐｅｒａ、Ｍ．ら、Ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ、２００６．２４（２）：ｐ．３８６－９８．

２１．Ｐｏｌｃｈｅｒｔ、Ｄ．ら、ＩＦＮ－ｇａｍｍａ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒａｆｔ ｖｅｒｓｕｓ ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００８．３８（６）：ｐ．１７４５－５５．

２２．Ｇｒｏｈ、Ｍ．Ｅ．ら、Ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｒｅｑｕｉｒｅ ｍｏｎｏｃｙｔｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ、２００５．３３（８）：ｐ．９２８－３４．

２３．Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｗ、Ａ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｐｒｏｌｏｎｇ ｓｋｉｎ ｇｒａｆｔ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ、２００２．３０（１）：ｐ．４２－８．

２４．Ｂｅｇｇｓ、Ｋ．Ｊ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ、ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｂａｂｏｏｎｓ．Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、２００６．１５（８－９）：ｐ．７１１－２１．

２５．Ｔｓｅ、Ｗ．Ｔ．ら、Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、２００３．７５（３）：ｐ．３８９－９７．

２６．Ｍａｉｔｒａ、Ｂ．ら、Ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｓｕｐｐｏｒｔ ｕｎｒｅｌａｔｅｄ ｄｏｎｏｒ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、２００４．３３（６）：ｐ．５９７－６０４．

２７．Ｒａｓｍｕｓｓｏｎ、Ｉ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ、ｂｕｔ ｎｏｔ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｏｒ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、２００３．７６（８）：ｐ．１２０８－１３．

２８．Ａｎｇｏｕｌｖａｎｔ、Ｄ．ら、Ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ａｌｌｏａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ、２００４．４１（３－４）：ｐ．４６９－７６．

２９．Ｌｅ Ｂｌａｎｃ、Ｋ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ２５ （ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ） ａｎｄ ＣＤ３８ ｏｎ ｐｈｙｔｏｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００４．６０（３）：ｐ．３０７－１５．

３０．Ｇｌｅｎｎｉｅ、Ｓ．ら、Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ａｒｒｅｓｔ ａｎｅｒｇｙ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ、２００５．１０５（７）：ｐ．２８２１－７．

３１．Ｋｉｍ、Ｊ．Ａ．ら、Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｕｓｅ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐ１６ＩＮＫ４Ａ－ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１／ｃｄｋ４ ａｎｄ ｐ２１ｗａｆ１、ｐ２７ｋｉｐ１－ｃｙｃｌｉｎ Ｅ／ｃｄｋ２ ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００７．２４５（１）：ｐ．１６－２３．

３２．Ｚａｐｐｉａ、Ｅ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｎｄｕｃｉｎｇ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｎｅｒｇｙ．Ｂｌｏｏｄ、２００５．１０６（５）：ｐ．１７５５－６１．

３３．Ｗａｎｇ、Ｑ．ら、Ｍｕｒｉｎｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｃａｕｓｅ ｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００８．６８（６）：ｐ．６０７－１５．

３４．Ｐｌｕｍａｓ、Ｊ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２００５．１９（９）：ｐ．１５９７－６０４．

３５．Ｌｉｍ、Ｊ．Ｈ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｌａｙｅｄ－ｔｙｐｅ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂｙｓｔａｎｄｅｒ Ｔ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｒａｉｎｉｎｇ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１０．１８５（７）：ｐ．４０２２－９．

３６．Ｒａｓｍｕｓｓｏｎ、Ｉ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｉｔｏｇｅｎｓ ａｎｄ ａｌｌｏａｎｔｉｇｅｎｓ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ、２００５．３０５（１）：ｐ．３３－４１．

３７．Ｘｕ、Ｇ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ、２００７．１７（３）：ｐ．２４０－８．

３８．Ｅｎｇｌｉｓｈ、Ｋ．ら、Ｃｅｌｌ ｃｏｎｔａｃｔ、ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ（２） ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｔａ １ ｐｌａｙ ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４＋ＣＤ２５（Ｈｉｇｈ） ｆｏｒｋｈｅａｄ ｂｏｘ Ｐ３＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００９．１５６（１）：ｐ．１４９－６０．

３９．Ｓｐａｇｇｉａｒｉ、Ｇ．Ｍ．ら、ＭＳＣｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｍｏｎｏｃｙｔｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ＤＣ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｙ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍａｔｕｒｅ ＤＣｓ：ｃｅｎｔｒａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ＭＳＣ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２．Ｂｌｏｏｄ、２００９．１１３（２６）：ｐ．６５７６－８３．

４０．Ｙａｎｅｚ、Ｒ．ら、Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｐｌａｙｓ ａ ｋｅｙ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａｄｉｐｏｓｅ ａｎｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｔｉｓｓｕｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ、２０１０．３１６（１９）：ｐ．３１０９－２３．

４１．Ｚａｆｒａｎｓｋａｙａ、Ｍ．ら、ＰＧＥ２ Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＭＳＣ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｎ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ Ａｎｔｉｇｅｎ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ＭＳ Ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１３．７８（５）：ｐ．４５５－６２．

４２．Ｎａｓｅｆ、Ａ．ら、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－１０ ａｎｄ ＴＧＦ－ｂｅｔａ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｃｅｌｌ ｃｏｎｔａｃｔ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒ、２００７．１３（４－５）：ｐ．２１７－２６．

４３．Ｍａｇａｔｔｉ、Ｍ．ら、Ｈｕｍａｎ ａｍｎｉｏｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍｅ ｈａｒｂｏｒｓ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｃａｐａｂｉｌｉｔｉｅｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ、２００８．２６（１）：ｐ．１８２－９２．

４４．Ｅｌ Ｈａｄｄａｄ、Ｎ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔｏ ｅｖａｄｅ ｔｈｅ ｈｏｓｔ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｂｌｏｏｄ、２０１１．１１７（４）：ｐ．１１７６－８３．

４５．Ｓａｔｏ、Ｋ．ら、Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｐｌａｙｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ、２００７．１０９（１）：ｐ．２２８－３４．

４６．Ｏｈ、Ｉ．ら、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ ａｎｄ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ ｍｅｄｉａｔｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ、２００７．３５５（４）：ｐ．９５６－６２．

４７．Ｒｅｎ、Ｇ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｃｃｕｒｓ ｖｉａ ｃｏｎｃｅｒｔｅｄ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ、２００８．２（２）：ｐ．１４１－５０．

４８．ＤｅｌａＲｏｓａ、Ｏ．ら、Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ＩＦＮ－ｇａｍｍａ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ ２，３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ Ｐａｒｔ Ａ、２００９．１５（１０）：ｐ．２７９５－８０６．

４９．Ｔｉｐｎｉｓ、Ｓ．、Ｃ．Ｖｉｓｗａｎａｔｈａｎ、ａｎｄ Ａ．Ｓ．Ｍａｊｕｍｄａｒ、Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ：ｒｏｌｅ ｏｆ Ｂ７－Ｈ１ ａｎｄ ＩＤＯ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、２０１０．８８（８）：ｐ．７９５－８０６．

５０．Ｇｅ、Ｗ．ら、Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｋｉｄｎｅｙ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ ２，３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、２０１０．９０（１２）：ｐ．１３１２－２０．

５１．Ｆｒａｎｃｏｉｓ、Ｍ．ら、Ｈｕｍａｎ ＭＳＣ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ ２，３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ ａｎｄ ｂｙｓｔａｎｄｅｒ Ｍ２ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ、２０１２．２０（１）：ｐ．１８７－９５．

５２．Ｓａｔｔｌｅｒ、Ｃ．ら、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｕｒｉｎｅ ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＣＤ３９ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、２０１１．２０（８）：ｐ．１２２１－３０．

５３．Ｓａｌｄａｎｈａ－Ａｒａｕｊｏ、Ｆ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅ ＣＤ３９ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ、２０１１．７（１）：ｐ．６６－７４．

５４．Ｘｕｅ、Ｑ．ら、Ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏ－ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂ７－ｈ４ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｉｔｓ Ｔ－ｃｅｌｌ ｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｖ、２０１０．１９（１）：ｐ．２７－３８．

５５．Ｇｉｅｓｅｋｅ、Ｆ．ら、Ｈｕｍａｎ ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｕｓｅ ｇａｌｅｃｔｉｎ－１ ｔｏ ｉｎｈｉｂｉｔ ｉｍｍｕｎｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ、２０１０．１１６（１９）：ｐ．３７７０－９．

５６．Ｃｈａｂａｎｎｅｓ、Ｄ．ら、Ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ－１ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｄｕｌｔ ｒａｔ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ、２００７．１１０（１０）：ｐ．３６９１－４．

５７．Ｍｏｕｇｉａｋａｋｏｓ、Ｄ．ら、Ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｌｉｃｅｎｓｉｎｇ ｏｎ ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ－１－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ、２０１１．１１７（１８）：ｐ．４８２６－３５．

５８．Ａｕｇｅｌｌｏ、Ａ．ら、Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ １ ｐａｔｈｗａｙ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００５．３５（５）：ｐ．１４８２－９０．

５９．Ｓｈｅｎｇ、Ｈ．ら、Ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ＩＦＮｇａｍｍａ ｉｎ ｐｒｉｍｉｎｇ ＭＳＣ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ７－Ｈ１．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ、２００８．１８（８）：ｐ．８４６－５７．

６０．Ｌｕｚ－Ｃｒａｗｆｏｒｄ、Ｐ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｒｅｐｒｅｓｓ Ｔｈ１７ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｇｒａｍ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＰＤ－１ ｐａｔｈｗａｙ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、２０１２．７（９）：ｐ．ｅ４５２７２．

６１．Ａｋｉｙａｍａ、Ｋ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ－ｓｔｅｍ－ｃｅｌｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ＦＡＳ－ｌｉｇａｎｄ－／ＦＡＳ－ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ、２０１２．１０（５）：ｐ．５４４－５５．

６２．Ｇｕ、Ｙ．Ｚ．ら、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ＰＤ－Ｌ１ ａｎｄ ＦａｓＬ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｐｌａｃｅｎｔａ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｈｕｍ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１３．７４（３）：ｐ．２６７－７６．

６３．Ｎａｊａｒ、Ｍ．ら、Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ２００－ＣＤ２００Ｒ ｓｙｓｔｅｍ ｄｕｒｉｎｇ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ、２０１２．１４６（１－２）：ｐ．５０－６．

６４．Ｂａｔｔｅｎ、Ｐ．ら、Ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅ Ｔ ｃｅｌｌ ａｎｅｒｇｙ ａｎｄ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅ Ｔ ｃｅｌｌ ａｌｌｏ－ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｖｉａ ｔｈｅ ＴＨ２ ｐａｔｈｗａｙ：ｒｅｌｅｖａｎｃｅ ｔｏ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｈｅａｒｔ ｖａｌｖｅｓ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ、２００６．１２（８）：ｐ．２２６３－７３．

６５．Ｌｕ、Ｘ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｆａｖｏｒｉｎｇ ｔｙｐｅ ２ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓ．Ｔｒａｎｓｐｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００９．２２（１－２）：ｐ．５５－６１．

６６．Ｚａｎｏｎｅ、Ｍ．Ｍ．ら、Ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｉｓｌｅｔ ａｎｔｉｇｅｎ ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ ｉｎ ｔｙｐｅ １ ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ、２０１０．９５（８）：ｐ．３７８８－９７．

６７．Ｋｏ、Ｅ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎｔｏ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１７－ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ａｃｔａ Ｈａｅｍａｔｏｌ、２００８．１２０（３）：ｐ．１６５－７．

６８．Ｒａｆｅｉ、Ｍ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ＣＤ４ Ｔｈ１７ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａ ＣＣ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｌｉｇａｎｄ ２－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００９．１８２（１０）：ｐ．５９９４－６００２．

６９．Ｔａｔａｒａ、Ｒ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎｈｉｂｉｔ Ｔｈ１７ ｂｕｔ ｎｏｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、２０１１．１３（６）：ｐ．６８６－９４．

７０．Ｄｕｆｆｙ、Ｍ．Ｍ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ－ｈｅｌｐｅｒ １７ ｃｅｌｌ－ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｓ ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｂｙ ｃｅｌｌ－ｃｅｌｌ ｃｏｎｔａｃｔ ａｎｄ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｖｉａ ｔｈｅ ＥＰ４ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１１．４１（１０）：ｐ．２８４０－５１．

７１．Ｌｕｚ－Ｃｒａｗｆｏｒｄ、Ｐ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｇｅｎｅｒａｔｅ ａ ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｔｈ１ ａｎｄ Ｔｈ１７ ｃｅｌｌｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ、２０１３．４（３）：ｐ．６５．

７２．Ｋｏｔａ、Ｄ．Ｊ．ら、ＴＳＧ－６ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈＭＳＣｓ ｄｅｌａｙｓ ｔｈｅ ｏｎｓｅｔ ｏｆ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｂｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｔｈ１ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｏｌｅｒｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２０１３．６２（６）：ｐ．２０４８－５８．

７３．Ｄｅｌ Ｐａｐａ、Ｂ．ら、Ｎｏｔｃｈ１ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１３．４３（１）：ｐ．１８２－７．

７４．Ｍａｃｃａｒｉｏ、Ｒ．ら、Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｃｅｌｌｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｌｌｏａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｆａｖｏｒｓ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４＋ Ｔ－ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ａ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ／ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ、２００５．９０（４）：ｐ．５１６－２５．

７５．Ｐｒｅｖｏｓｔｏ、Ｃ．ら、Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４＋ ｏｒ ＣＤ８＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｕｐｏｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ、２００７．９２（７）：ｐ．８８１－８．

７６．Ｄｉ Ｉａｎｎｉ、Ｍ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｒｅｃｒｕｉｔ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅ Ｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｃｅｌｌｓ．Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ、２００８．３６（３）：ｐ．３０９－１８．

７７．Ｃａｓｉｒａｇｈｉ、Ｆ．ら、Ｐｒｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｌｏｎｇｓ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ａ ｓｅｍｉａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｈｅａｒｔ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００８．１８１（６）：ｐ．３９３３－４６．

７８．Ｂｏｕｍａｚａ、Ｉ．ら、Ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｒａｔ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｍｏｔｅ ＰＤＸ－１ ａｎｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｉｓｌｅｔｓ、ａｌｔｅｒ Ｔ ｃｅｌｌ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐａｔｔｅｒｎ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｒｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒｙ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｎｏｒｍｏｇｌｙｃｅｍｉａ．Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ、２００９．３２（１）：ｐ．３３－４２．

７９．Ｙｅ、Ｚ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｔ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ：ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ Ｐａｎｃｒｅａｔ Ｄｉｓ Ｉｎｔ、２００８．７（６）：ｐ．６０８－１４．

８０．Ｍａｄｅｃ、Ａ．Ｍ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｔｅｃｔ ＮＯＤ ｍｉｃｅ ｆｒｏｍ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｂｙ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ、２００９．５２（７）：ｐ．１３９１－９．

８１．Ｍｅｌｉｅｆ、Ｓ．Ｍ．ら、Ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅ ｈｕｍａｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａ ｎｏｖｅｌ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ｓｋｅｗｉｎｇ ｏｆ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｔｏｗａｒｄ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ、２０１３．３１（９）：ｐ．１９８０－９１．

８２．Ｚｈａｎｇ、Ｘ．Ｙ．ら、Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ、２００２．５（５ Ｐｔ １）：ｐ．５５５－６５．

８３．Ｋｙｒｉａｋｏｕ、Ｃ．Ａ．ら、Ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ （ｈＭＳＣｓ） ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ｓｏｌｕｂｌｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ｔｓＦｌｋ－１） ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｈｉｂｉｔ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｉｎ ａ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌ．Ｊ Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ、２００６．８（３）：ｐ．２５３－６４．

８４．Ｗｏｒｓｈａｍ、Ｄ．Ｎ．ら、Ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ ａｄｕｌｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｕｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｉｃｅ ｂｙ ｉｎ ｓｉｔｕ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ、２００６．１４（４）：ｐ．５１４－２４．

８５．Ｒａｂｉｎ、Ｎ．ら、Ａ ｎｅｗ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｍｙｅｌｏｍａ ｂｏｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ ｂｙ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２００７．２１（１０）：ｐ．２１８１－９１．

８６．Ｋａｌｌｉｆａｔｉｄｉｓ、Ｇ．ら、Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ、２００８．１５（４）：ｐ．２３１－４０．

８７．Ｍｅｙｅｒｒｏｓｅ、Ｔ．Ｅ．ら、Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ－ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎ ａ ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ、２００８．２６（７）：ｐ．１７１３－２２．

８８．ＭｃＧｉｎｌｅｙ、Ｌ．ら、Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ＆ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｓｃｈａｅｍｉａ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ、２０１１．２（２）：ｐ．１２．

８９．Ｌｉａｎｇ、Ｘ．ら、Ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＳＤＦ－１ ｐｒｏｍｏｔｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｏｂｉｌｉｓｅｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ＣＤ３４＋ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｂｉｏｌ、２０１０．８６（３）：ｐ．２３０－７．

９０．Ｈａｍｉｄｏｕｃｈｅ、Ｚ．ら、Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １８ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ、２０１０．２２４（２）：ｐ．５０９－１５．

９１．Ｇｌａｖａｓｋｉ－Ｊｏｋｓｉｍｏｖｉｃ、Ａ．ら、Ｇｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ－ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｍｏｔｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ、２０１０．８８（１２）：ｐ．２６６９－８１．

９２．Ｌｉｕ、Ａ．Ｍ．ら、Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｆｏｒｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｅｎｈａｎｃｅ ｒｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｉｎ ａ ｒａｔ ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ ｍｏｄｅｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ、２０１０．６７（２）：ｐ．３５７－６５；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ３６５－６．

９３．Ｙｕ、Ｙ．Ｓ．ら、ＡＫＴ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｉｎｔｒａｃｏｒｏｎａｒｙ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｐｒｅｖｅｎｔ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ｓｗｉｎｅ ｉｎｆａｒｃｔｅｄ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ．Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊ （Ｅｎｇｌ）、２０１０．１２３（１３）：ｐ．１７０２－８．

９４．Ｍｕｅｌｌｅｒ、Ｌ．Ｐ．ら、ＴＲＡＩＬ－ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ （ＴＲＡＩＬ－ＭＳＣ） ｏｖｅｒｃｏｍｅ ＴＲＡＩＬ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ＣＲＣ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ、２０１１．１８（４）：ｐ．２２９－３９．

９５．Ｙａｎ、Ｃ．ら、Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃａｌｌｙ ｉｍｐｌａｎｔｅｄ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｙ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｓＴＲＡＩＬ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｒｉｖｅｎ ｂｙ ＡＦＰ ｐｒｏｍｏｔｅｒ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、２０１４．３５（９）：ｐ．３０３５－４３．

９６．Ｄｅｎｇ、Ｑ．ら、ＴＲＡＩＬ－ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｍｏｔｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｈｅａｔ－ｓｈｏｃｋ－ｔｒｅａｔｅｄ ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ、２０１４．２１（３）：ｐ．３１７－２７．

９７．Ｓａｇｅ、Ｅ．Ｋ．ら、Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｂｕｔ ｎｏｔ ｔｏｐｉｃａｌ ＴＲＡＩＬ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｒｅｄｕｃｅ ｔｕｍｏｕｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ．Ｔｈｏｒａｘ、２０１４．６９（７）：ｐ．６３８－４７．

９８．Ｌｉａｎ、Ｗ．Ｓ．ら、Ｉｎ ｖｉｖｏ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｉ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｇｅｎｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｃａｒｄｉａｃ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ、２０１１．８８（９－１０）：ｐ．４５５－６４．

９９．Ｍａｉｊｅｎｂｕｒｇ、Ｍ．Ｗ．ら、Ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ Ｎｕｒ７７ ａｎｄ Ｎｕｒｒ１ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｖ、２０１２．２１（２）：ｐ．２２８－３８．

１００．Ｈａｒｐｅｒ、Ｍ．Ｍ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＢＤＮＦ－ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃａｌｌｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔ ｅｙｅｓ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ、２０１１．５２（７）：ｐ．４５０６－１５．

１０１．Ｚｏｕ、Ｄ．ら、Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＨＩＦ－１ａｌｐｈａ－ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆ、２０１１．４４（３）：ｐ．２３４－４３．

１０２．Ｓａｉｔｏ、Ｓ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｓｔａｂｌｙ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｄｏｍｉｎａｎｔ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ＣＣＬ２ ｇｒｅａｔｌｙ ａｔｔｅｎｕａｔｅ ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｕｎｇ ｄａｍａｇｅ．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ、２０１１．１７９（３）：ｐ．１０８８－９４．

１０３．Ｓｅｏ、Ｋ．Ｗ．ら、Ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｂｅｔａ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｅｌａｎｏｍａ ｍｏｄｅｌ．Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、２０１１．１３（８）：ｐ．９４４－５５．

１０４．Ｙａｎｇ、Ｈ．Ｍ．ら、Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ＨＬＡ－Ｇ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、２０１２．１４（１）：ｐ．７０－９．

１０５．Ｌｉａｎｇ、Ｘ．Ｊ．ら、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｔｏ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ－ｌｉｋｅ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｈＴＥＲＴ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ Ｉｎｔ、２０１２．３６（２）：ｐ．２１５－２１．

１０６．Ｆｅｉ、Ｓ．ら、Ｔｈｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｉｎ ａ ｒａｔ ｇｌｉｏｍａ ｍｏｄｅｌ．Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ、２０１２．１３８（２）：ｐ．３４７－５７．

１０７．Ｊａｇａｎａｔｈａｎ、Ｂ．Ｇ．ａｎｄ Ｄ．Ｂｏｎｎｅｔ、Ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｓｅｎｅｓｃｅ ｗｉｔｈ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ＯＣＴ４．Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、２０１２．１４（９）：ｐ．１０５４－６３．

１０８．Ｈａｎ、Ｓ．Ｈ．ら、Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｃｔｏｐｉｃ ＯＣＴ４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｃａｎｉｎｅ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ Ｉｎｔ、２０１４．３８（１０）：ｐ．１１６３－７３．

１０９．Ｓｈａｎｇｇｕａｎ、Ｌ．ら、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦ－ｂｅｔａ／Ｓｍａｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ＢＡＭＢＩ ｂｌｏｃｋｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｃａｒｃｉｎｏｍａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ａｎｄ ａｂｏｌｉｓｈｅｓ ｔｈｅｉｒ ｐｒｏｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ、２０１２．３０（１２）：ｐ．２８１０－９．

１１０．Ｋｅａｒｎｓ－Ｊｏｎｋｅｒ、Ｍ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｄｏｎｏｒ Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ Ｈｅａｒｔ．Ｊ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ、２０１２．Ｓ１．

１１１．Ｍａ、Ｇ．Ｌ．ら、［Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ａｎｄ ｋｉｌｌｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ＬＩＧＨＴ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｏｎ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ］．Ｚｈｏｎｇｈｕａ Ｗｅｉ Ｃｈａｎｇ Ｗａｉ Ｋｅ Ｚａ Ｚｈｉ、２０１２．１５（１１）：ｐ．１１７８－８１．

１１２．Ｈｕａｎｇ、Ｆ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ｍｉＲ－１２６ ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｅ Ｎｏｔｃｈ ｌｉｇａｎｄ Ｄｅｌｔａ－ｌｉｋｅ－４，ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ、２０１３．３１（２）：ｐ．４８４－９２．

１１３．Ｈｕａｎｇ、Ｆ．ら、Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ－１２６ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｏｗａｒｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ ａｎｄ ＭＡＰＫ／ＥＲＫ ｐａｔｈｗａｙｓ ａｎｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｐａｒａｃｒｉｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、２０１３．３９４（９）：ｐ．１２２３－３３．

１１４．Ｆａｎｇ、Ｚ．ら、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＦＰ－Ｂｃｌ－２－ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｏｗａｒｄｓ ａ ｎｕｃｌｅｕｓ ｐｕｌｐｏｓｕｓ－ｌｉｋｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｕｎｄｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ、２０１３．４３２（３）：ｐ．４４４－５０．

１１５．Ｍａｄｏｎｎａ、Ｒ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ａｎｄ ｍｙｏｃａｒｄｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｒｅｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ａ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｉｎｄｌｉｍｂ ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ、２０１３．１１３（７）：ｐ．９０２－１４．

１１６．Ｚａｎｇ、Ｙ．ら、［Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ＣＸＣＲ４ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｏｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ ｍｉｃｅ］．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ Ｓｈｉ Ｙａｎ Ｘｕｅ Ｙｅ Ｘｕｅ Ｚａ Ｚｈｉ、２０１３．２１（５）：ｐ．１２６１－５．

１１７．Ｃａｏ、Ｚ．ら、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ＣＸＣＲ４ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｒａｔ ｒｅｎａｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｍｏｄｅｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、２０１３．８（１２）：ｐ．ｅ８２９４９．

１１８．Ｌｉｕ、Ｓ．ら、Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｗｎｔ１１ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ ｗｉｔｈ ＴＧＦ－ｂｅｔａ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ、２０１４．３９０（１－２）：ｐ．１２３－３１．

１１９．Ｙｉｎ、Ｎ．ら、Ｉｓｌｅｔ－１ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｈｅ ｃａｒｄｉａｃ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｓｔｏｎｅ ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ、２０１４．３３（５）：ｐ．１０７５－８２．

１２０．Ｈａｊｉｚａｄｅｈ－Ｓｉｋａｒｏｏｄｉ、Ｓ．ら、Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｍｅｄｉａｔｉｎｇ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ＩＬ－２７ ａｓ ａ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｃｅｌｌ Ｊ、２０１４．１６（３）：ｐ．２５５－６２．

１２１．Ｈｅ、Ｈ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ ２ Ｒｅｓｃｕｅ Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｌｕｎｇ Ｉｎｊｕｒｙ．Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、２０１４．

１２２．Ｍａ、Ｈ．Ｃ．ら、Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ＣＸＣＲ４ ｔｏ ａｃｕｔｅ ｆａｉｌｉｎｇ ｌｉｖｅｒ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｌｉｖｅｒ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ、２０１４．２０（４０）：ｐ．１４８８４－９４．

１２３．Ｙａｎｇ、Ｊ．Ｘ．ら、ＣＸＣＲ４ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、２０１５．２９０（４）：ｐ．１９９４－２００６．

１２４．Ｚｈｕ、Ｙ．ら、Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ＮＫ４ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ｂｅａｒｉｎｇ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ Ｄｅｖｅｌ Ｔｈｅｒ、２０１４．８：ｐ．２４４９－６２．
本開示及び、その利点を詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲によって定義される設計の精神及び、範囲から逸脱することなく、様々な変更、置換、及び、変更を本明細書で行うことができることを理解されたい。さらに、本出願の範囲は、本明細書に記載されたプロセス、機械、製造、組成物、手段、方法、及び、ステップの特定の実施形態に限定されることを意図していない。当業者であれば、本開示から容易に理解するように、本明細書で説明される対応する実施形態と実質的に同じ機能を実行するか、又は実質的に同じ結果を達成する、現在存在するか又は後に開発されるプロセス、機械、製造、物質の組成、手段、方法、又はステップを、本開示に従って使用することができる。したがって、添付の特許請求の範囲はその範囲内に、そのようなプロセス、機械、製造、組成物、手段、方法、又はステップを含むことが意図される。

Claims (23)

1. 個体における同種又は自己インスリン産生細胞の生存を増強する方法であって、個体における同種又は自己インスリン産生細胞の移植の前、同時、及び、／又は後に、有効量の内皮前駆細胞（ＥＰＣ）及び、／又は線維芽細胞を投与する工程を含む、方法。
2. 前記線維芽細胞及び、／又はＥＰＣは、個体に対して同種異系である、請求項１に記載の方法。
3. 前記同種異系インスリン産生細胞は、膵臓提供者に由来する、請求項１又は２に記載の方法。
4. 前記同種異系インスリン産生細胞は、島細胞塊からなる、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
5. 前記同種インシュリン産生細胞は、前駆細胞の集団からのインビトロ分化に由来する、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
6. 前記ＥＰＣは、ａ）ｆｌｋ－１；ｂ）ＣＤ３１；ｃ）ＣＤ３４；ｄ）ＣＤ１３３；ｆ）ＰＤＧＦ－Ｒ；ｇ）ｈＴＥＲＴ；及び、ｈ）それらの組合せからなる群より選択されるマーカーを発現する、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
7. 前記ＥＰＣは、（ｉ）哺乳動物細胞集団を単離する工程；（ｉｉ）ＣＤ４５^－表現型プロファイルを発現する工程（ｉ）の細胞の亜集団を濃縮する工程；（ｉｉｉ）ＣＤ３４^＋表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉ）に由来するＣＤ４５^－細胞の亜集団を濃縮する工程；及び、（ｉｖ）ＣＤ３１^ｌｏ／－表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉｉ）に由来するＣＤ３４^＋細胞の亜集団を単離し、それによって内皮前駆細胞を単離する工程を含む方法によって誘導される、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
8. 前記ＥＰＣは、胎盤組織、骨髄、脂肪組織、網、又はそれらの組合せに由来する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記胎盤由来ＥＰＣは、胎児起源である請求項８に記載の方法。
10. 前記線維芽細胞は、軟骨細胞系統に分化することができる、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記線維芽細胞は、ａ）ＮＡＮＯＧ；ｂ）ＯＣＴ－４；ｃ）ＳＳＥＡ－４；ｄ）幹細胞因子受容体；及び、ｅ）それらの組合せからなる群より選択される１つ以上のマーカーを発現する、請求項１０に記載の方法。
12. （ｉ）哺乳動物細胞集団を単離する工程、（ｉｉ）ＣＤ４５^－表現型プロファイルを発現する工程（ｉ）の細胞の亜集団を濃縮する工程、及び、（ａ）ＣＤ３４^＋表現型プロファイルを発現する工程（ｉｉ）由来のＣＤ４５^－細胞の亜集団を濃縮する工程、及び、それにより再生特性を有する線維芽細胞を単離するために前記ＣＤ３４^＋細胞の亜集団を単離する工程を含む方法により、前記線維芽細胞が単離される、請求項１～１１のいずれか一項記載の方法。
13. 前記線維芽細胞は、ａ）包皮；ｂ）タミータック；ｃ）胎盤；ｄ）耳たぶ；ｅ）脂肪組織；ｆ）網；ｇ）ウォートンゼリー；及び、ｈ）それらの組合せからなる群より選択される１つ以上の組織供給源に由来する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 前記胎盤線維芽細胞は、胎盤の胎児側部に由来する、請求項１３に記載の方法。
15. 前記ＣＤ４５^－線維芽細胞は、胎児由来である、請求項１２に記載の方法。
16. 前記線維芽細胞が、ａ）磁気活性化細胞選別；ｂ）フローサイトメトリー選別；ｃ）細胞パニング；ｄ）再生能力の細胞を選択的に選択するためのアフィニティーベースの手段；ｅ）再生能力を有する細胞を選択するための大きさベースの手段；及び、ｆ）それらの組合せからなる群より選択される方法を使用して、再生能力の１つ以上のマーカーの発現のために精製される、請求項１２に記載の方法。
17. インスリン産生細胞に関連する１つ以上の抗原に対する寛容原性免疫反応を個体において刺激する方法であって、有効量の同種異系インスリン産生細胞、同種異系ＥＰＣ、及び、同種異系線維芽細胞を投与する工程を含む、方法。
18. 前記寛容原性反応は、抗原特異的Ｔ調節細胞の刺激を含む、請求項１７に記載の方法。
19. 前記Ｔ調節細胞は、インシュリン産生細胞の活性を殺すか又は抑制する細胞を阻害する機能を有する、請求項１８に記載の方法。
20. 前記Ｔ調節細胞は、転写因子ＦｏｘＰ３を発現する、請求項１８又は１９に記載の方法。
21. 前記寛容原性反応は、抗原特異的Ｂ調節細胞の刺激を含む、請求項１７に記載の方法。
22. 前記Ｂ調節細胞は、ＣＤ１０を発現する、請求項２１に記載の方法。
23. 前記Ｂ調節細胞は、プロプラズマ芽細胞であるｍ請求項２１又は２２に記載の方法。
    

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