JP2022500004A - 抗ｃｄ４０抗体及びその使用 - Google Patents

Abstract

本開示は、抗ＣＤ４０（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５）抗体、抗原結合断片、及びその使用に関する。

Description

本開示は、抗ＣＤ４０（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５）抗体及びその使用に関する。

癌は、現在のところヒト死亡率が最も高い疾患の一つである。世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）の統計データによれば、２０１２年、全世界の癌発生及び死亡症例数は、それぞれ１４００万例及び８２０万例に達した。中国では、新たに診断された癌症例は３０７万例であり、死亡者数は２２０万例である。

近年の抗癌抗体の臨床的及び商業的成功により、抗体ベースの治療薬に多大な関心が寄せられている。癌の治療に様々な抗体ベースの治療薬で使用するための抗癌抗体の開発が必要とされている。

本開示は、抗ＣＤ４０抗体、その抗原結合断片、及びその使用に関する。

一態様において、本開示は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、ＶＨ ＣＤＲ１領域が選択のＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２領域が選択のＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、及びＶＨ ＣＤＲ３領域が選択のＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含むＶＨと；ＣＤＲ１、２、及び３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＶＬ ＣＤＲ１領域が選択のＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２領域が選択のＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、及びＶＬ ＣＤＲ３領域が選択のＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含むＶＬとを含み、選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、及び３アミノ酸配列及び選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、及び３アミノ酸配列が、以下：
（１）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１、２、３に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号４、５、６に示される；
（２）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号７、８、９に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１０、１１、１２に示される；
（３）選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１３、１４、１５に示され、選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１６、１７、１８に示される
のうちの１つである、ＣＤ４０（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５）に結合する抗体又はその抗原結合断片に関する。

一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号１、２、３にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含み、ＶＬは、配列番号４、５、６にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含む。

一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号７、８、９にそれぞれ示されるアミノ酸配
列のＣＤＲ１、２、３を含み、ＶＬは、配列番号１０、１１、１２にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含む。

一部の実施形態において、ＶＨは、配列番号１３、１４、１５にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含み、ＶＬは、配列番号１６、１７、１８にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含む。

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＣＤ４０に特異的に結合する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒト化抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は単鎖可変断片（ｓｃＦＶ）である。

別の態様において、本開示は、
（１）配列番号１、２、及び３にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号３３、３４、３５、３６、又は５３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と対になるとＣＤ４０に結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（２）配列番号４、５、及び６にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号３０、３１、３２、又は５２に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になるとＣＤ４０に結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（３）配列番号７、８、及び９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号４１、４２、４３、又は５５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と対になるとＣＤ４０に結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（４）配列番号１０、１１、及び１２にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号３７、３８、３９、４０、又は５４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になるとＣＤ４０に結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
（５）配列番号１３、１４、１５にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号４８、４９、５０、５１、又は５７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と対になるとＣＤ４０に結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
（６）配列番号１６、１７、及び１８にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号４４、４５、４６、４７、又は５６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になるとＣＤ４０に結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片
を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸に関する。

一部の実施形態において、核酸は、配列番号１、２、３にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、核酸は、配列番号４、５、６にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、核酸は、配列番号７、８、９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、核酸は、配列番号１０、１１、１２にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、核酸は、配列番号１３、１４、１５にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、核酸は、配列番号１６、１７、１８にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、ＶＨは、ＶＬと対になるとヒトＣＤ４０に特異的に結合し、又はＶＬは、ＶＨと対になるとヒトＣＤ４０に特異的に結合する。

一部の実施形態において、免疫グロブリン重鎖又はその断片はヒト化免疫グロブリン重鎖又はその断片であり、免疫グロブリン軽鎖又はその断片はヒト化免疫グロブリン軽鎖又はその断片である。

一部の実施形態において、核酸は単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をコードする。一部の実施形態において、核酸はｃＤＮＡである。

一態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの核酸のうちの１つ以上を含むベクターに関する。一部の実施形態において、ベクターは、ＣＤ４０に一緒になって結合するＶＬ領域及びＶＨ領域をコードする。

一態様において、本開示は、各ベクターが本明細書に記載されるとおりの核酸のうちの１つを含む一対のベクターを提供し、ここで一緒になって一対のベクターは、ＣＤ４０に一緒になって結合するＶＬ領域及びＶＨ領域をコードする。

別の態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりのベクター、又は本明細書に記載されるとおりの一対のベクターを含む細胞に関する。一部の実施形態において、細胞はＣＨＯ細胞である。

一態様において、本開示はまた、本明細書に記載されるとおりの核酸のうちの１つ以上を含む細胞も提供する。

別の態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの核酸のうちの２つを含む細胞を提供する。一部の実施形態において、２つの核酸は一緒になって、ＣＤ４０に一緒になって結合するＶＬ領域及びＶＨ領域をコードする。

別の態様において、本開示は、抗体又はその抗原結合断片の作製方法に関する。本方法は、
（ａ）細胞が抗体又は抗原結合断片を産生するのに十分な条件下で本明細書に記載されるとおりの細胞を培養するステップ；及び
（ｂ）細胞によって産生された抗体又は抗原結合断片を収集するステップ
を含む。

一態様において、本開示は、選択のＶＨ配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を
含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、選択のＶＬ配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、選択のＶＨ配列及び選択のＶＬ配列が、以下：
（１）選択のＶＨ配列が配列番号３０、３１、３２、又は５２であり、選択のＶＬ配列が配列番号３３、３４、３５、３６、又は５３である；
（２）選択のＶＨ配列が配列番号３７、３８、３９、４０、又は５４であり、選択のＶＬ配列が配列番号４１、４２、４３、又は５５である；
（３）選択のＶＨ配列が配列番号４４、４５、４６、４７、又は５６であり、選択のＶＬ配列が配列番号４８、４９、５０、５１、又は５７である
のうちの１つである、ＣＤ４０に結合する抗体又はその抗原結合断片に関する。

一部の実施形態において、ＶＨは配列番号４０の配列を含み、ＶＬは配列番号４２の配列を含む。

一部の実施形態において、ＶＨは配列番号３９の配列を含み、ＶＬは配列番号４３の配列を含む。

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＣＤ４０に特異的に結合する。

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒト化抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は単鎖可変断片（ｓｃＦＶ）である。

一態様において、本開示は、治療剤に共有結合的に結合した本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片を含む抗体−薬物コンジュゲートに関する。一部の実施形態において、治療剤は細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤である。

別の態様において、本開示は、癌を有する対象を治療する方法に関する。本方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片、又は本明細書に記載されるとおりの抗体−薬物コンジュゲートを含む組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含む。

一部の実施形態において、対象は固形腫瘍（例えば、進行固形腫瘍）を有する。一部の実施形態において、癌は切除不能黒色腫又は転移性黒色腫である。一部の実施形態において、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、頭頸部癌、腎細胞癌（ＲＣＣ）、黒色腫、膀胱癌、胃癌、尿路上皮癌、メルケル細胞癌、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、又は結腸直腸癌である。

一部の実施形態において、癌は、黒色腫、膵癌、中皮腫、又は血液学的悪性腫瘍（例えば、非ホジキンリンパ腫、リンパ腫、又は慢性リンパ球性白血病）である。

一態様において、本開示は、腫瘍成長速度を低下させる方法に関する。本方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片、又は本明細書に記載されるとおりの抗体−薬物コンジュゲートを含む組成物の有効量を腫瘍細胞に接触させるステップを含む。

別の態様において、本開示は、腫瘍細胞を死滅させる方法に関する。本方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片、又は本明細書に記載されるとおりの抗体−薬物コンジュゲートを含む組成物の有効量を腫瘍細胞に接触させるステップを含む。

一態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。

別の態様において、本開示はまた、本明細書に記載されるとおりの抗体薬物コンジュゲートと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物も提供する。

本明細書で使用されるとき、用語「癌」は、自律的増殖能を有する細胞を指す。かかる細胞の例としては、急速に増殖する細胞成長によって特徴付けられる異常な状態又は条件を有する細胞が挙げられる。この用語には、病理組織型又は侵襲性のステージに関わらず、癌性成長、例えば、腫瘍；発癌過程、転移性組織、及び悪性形質転換細胞、組織、又は器官が含まれることが意図される。また、呼吸器系、心血管系、腎臓系、生殖器系、血液系、神経系、肝臓系、胃腸系、及び内分泌系などの様々な器官系の悪性腫瘍；並びに多くの結腸癌、腎細胞癌、前立腺癌及び／又は精巣腫瘍、非肺小細胞癌、及び小腸癌などの悪性腫瘍を含む腺癌も含まれる。「自然発生する」癌には、対象に癌細胞を移植することによって実験的に誘発されたのでない任意の癌が含まれ、例えば、自発的に発生する癌、患者が１つ又は複数の発癌物質に曝露することによって引き起こされる癌、トランスジェニック癌遺伝子の挿入又は腫瘍抑制遺伝子のノックアウトによって生じる癌、及び感染、例えばウイルス感染によって引き起こされる癌が挙げられる。用語「癌腫」は当該技術分野で認められており、上皮又は内分泌組織の悪性腫瘍を指す。この用語にはまた癌肉腫も含まれ、これは、癌腫性及び肉腫性組織で構成される悪性腫瘍を含む。「腺癌」は、腺組織に由来する癌腫、又は腫瘍細胞が認識可能な腺状構造を形成する癌腫を指す。用語「肉腫」は当該技術分野で認められており、間葉性由来の悪性腫瘍を指す。用語「造血新生物障害」は、造血起源の過形成性／新生物性細胞が関わる疾患を含む。造血新生物障害は、骨髄、リンパ球又は赤血球系統、又はその前駆細胞から生じ得る。

本明細書で使用されるとき、用語「抗体」は、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、又は６つ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、免疫グロブリン軽鎖からの３つのＣＤＲのいずれか又は免疫グロブリン重鎖からの３つのＣＤＲのいずれか）を含み、且つエピトープへの特異的結合能を有する任意の抗原結合分子を指す。抗体の非限定的な例としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、単鎖抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、及びヒト化抗体が挙げられる。一部の実施形態において、抗体は、ヒト抗体のＦｃ領域を含むことができる。用語の抗体にはまた、誘導体、例えば、抗体断片で形成される二重特異性抗体、単鎖抗体、ダイアボディ、線状抗体、及び多重特異性抗体も含まれる。

本明細書で使用されるとき、用語「抗原結合断片」は完全長抗体の一部分を指し、ここで抗体のこの一部分は、抗原への特異的結合能を有する。一部の実施形態において、抗原結合断片は少なくとも１つの可変ドメイン（例えば、重鎖の可変ドメイン又は軽鎖の可変ドメイン）を含む。抗体断片の非限定的な例としては、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片が挙げられる。

本明細書で使用されるとき、用語「ヒト抗体」は、ヒトに存在する内因性核酸（例えば、再配列されたヒト免疫グロブリン重鎖又は軽鎖遺伝子座）によってコードされる抗体を指す。一部の実施形態において、ヒト抗体はヒトから採取されるか、又はヒト細胞培養物（例えば、ヒトハイブリドーマ細胞）中で産生される。一部の実施形態において、ヒト抗体は非ヒト細胞（例えば、マウス又はハムスター細胞株）で産生される。一部の実施形態において、ヒト抗体は細菌又は酵母細胞で産生される。一部の実施形態において、ヒト抗体は、再配列されていない又は再配列されたヒト免疫グロブリン遺伝子座（例えば、重鎖又は軽鎖ヒト免疫グロブリン遺伝子座）を含むトランスジェニック非ヒト動物（例えば、ウシ）で産生される。

本明細書で使用されるとき、用語「キメラ抗体」は、少なくとも２つの異なる抗体（例えば、ヒト及びマウス抗体など、２つの異なる哺乳類種由来の抗体）に存在する配列を含む抗体を指す。キメラ抗体の非限定的な例は、非ヒト（例えば、マウス）抗体の可変ドメイン配列（例えば、軽鎖及び／又は重鎖可変ドメイン配列の全て又は一部）と、ヒト抗体の定常ドメインとを含む抗体である。キメラ抗体の更なる例は本明細書に記載され、当該技術分野において公知である。

本明細書で使用されるとき、用語「ヒト化抗体」は、非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含み、且つヒト免疫グロブリンに由来する配列を含む非ヒト抗体を指す。非限定的な例において、ヒト化抗体は、受容抗体の超可変（例えば、ＣＤＲ）領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト抗体（例えば、供与抗体）、例えば、マウス、ラット、又はウサギ抗体由来の超可変（例えば、ＣＤＲ）領域残基に置き換えられているヒト抗体（受容抗体）である。一部の実施形態では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリン残基によって置き換えられる。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、受容抗体に見られない又は供与抗体に見られない残基を含み得る。こうした修飾は、抗体性能を更に精緻化するために行われ得る。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、超可変ループ（ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリンのものに対応し、且つフレームワーク領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリンのものである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含み得る。ヒト化抗体は、当該技術分野において公知の分子生物学方法を用いて作製することができる。ヒト化抗体の作成方法の非限定的な例は、本明細書に記載される。

本明細書で使用されるとき、用語「単鎖抗体」は、抗原への特異的結合能を有する少なくとも２つの免疫グロブリン可変ドメイン（例えば、哺乳類免疫グロブリン重鎖又は軽鎖の可変ドメイン）を含む単一のポリペプチドを指す。単鎖抗体の非限定的な例は、本明細書に記載される。

本明細書で使用されるとき、用語「多量体抗体」は、４つ以上の（例えば、６、８、又は１０個の）免疫グロブリン可変ドメインを含む抗体を指す。一部の実施形態において、多量体抗体は、１つの標的分子（例えば、ＣＤ４０）を哺乳類細胞（例えば、ヒトＴ細胞）の表面上にある少なくとも１つの第２の標的分子（例えば、ＣＴＬＡ−４）に架橋することが可能である。

本明細書で使用されるとき、用語「対象」及び「患者」は、本明細書全体を通じて同義的に使用され、本発明の方法による治療が提供される動物、ヒト又は非ヒトを言い表す。本発明によれば、獣医学的及び非獣医学的適用が企図される。ヒト患者は、成人しているヒト又は若年のヒト（例えば、１８歳未満のヒト）であり得る。ヒトに加えて、患者には、限定はされないが、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、フェレット、ネコ、イヌ、及び霊長類が含まれる。例えば、非ヒト霊長類（例えば、サル、チンパンジー、ゴリラなど）、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、スナネズミ、ハムスター、フェレット、ウサギ）、ウサギ類、ブタ類（例えば、ブタ、ミニブタ）、ウマ類、イヌ類、ネコ類、ウシ類、及び他の家庭内、畜産、及び動物園動物が挙げられる。

本明細書で使用されるとき、抗体に言及する場合に、語句「特異的に結合している」及び「〜に特異的に結合する」は、その相互作用が標的分子上の特定の構造（即ち、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存するため、他の分子と比べてその標的分子（例えば、
ＣＤ４０）と好んで相互作用する抗体を意味する；換言すれば、この試薬は、全般的にあらゆる分子というよりむしろ、特異的な構造を含む分子を認識してそれに結合するものである。標的分子に特異的に結合する抗体は、標的特異抗体と称されてもよい。例えば、ＣＤ４０分子に特異的に結合する抗体は、ＣＤ４０特異抗体又は抗ＣＤ４０抗体と称されてもよい。

本明細書で使用されるとき、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、少なくとも２アミノ酸の任意の長さのアミノ酸のポリマーを指して同義的に使用される。

本明細書で使用されるとき、用語「ポリヌクレオチド」、「核酸分子」、及び「核酸配列」は、本明細書では、少なくとも２ヌクレオチドの任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指して同義的に使用され、限定なしに、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、及びその修飾体が挙げられる。

特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。本発明における使用のため、方法及び材料が本明細書に記載される；その他の、当該技術分野において公知の好適な方法及び材料もまた用いることができる。材料、方法、及び例は例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。本明細書において言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、及び他の参考文献は、全体として参照により援用される。矛盾が生じる場合、定義を含め、本明細書が優先するものとする。

本発明の他の特徴及び利点が以下の詳細な説明及び図から、並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。

抗ｈＣＤ４０抗体の例示的作製プロトコルの第１部を示すフローチャートである。 抗ｈＣＤ４０抗体の例示的作製プロトコルの第２部を示すフローチャートである。 抗ｈＣＤ４０抗体がｈＣＤ４０とｈＣＤ４０リガンドとの間の結合を遮断することを示す一組のフローサイトメトリーグラフである。 サルＣＤ４０（ｒｍＣＤ４０）、マウスＣＤ４０（ｍＣＤ４０）、及びヒト−マウスキメラＣＤ４０（ｃｈｉＣＤ４０）との抗ｈＣＤ４０抗体の交差反応性を分析したフローサイトメトリー結果を示す一組のグラフである。ＮＣは陰性対照を意味する。 キメラ抗ｈＣＤ４０抗体６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ４及びヒトＣＤ４０を使用した表面プラズマ共鳴（ＳＰＲ）の結果を示すグラフである。 ヒト化抗ｈＣＤ４０抗体６Ａ７−Ｈ１Ｋ１−ＩｇＧ４及びヒトＣＤ４０を使用した表面プラズマ共鳴（ＳＰＲ）の結果を示すグラフである。 マウス抗ｈＣＤ４０抗体で治療したＭＣ−３８腫瘍細胞を有するヒト化ＣＤ４０マウス（Ｂ−ｈＣＤ４０）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。ＰＳは生理食塩水（対照）を意味する。 マウス抗ｈＣＤ４０抗体で治療したＭＣ−３８腫瘍細胞を有するヒト化ＣＤ４０マウス（Ｂ−ｈＣＤ４０）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。ＰＳは生理食塩水（対照）を意味する。 マウス抗ｈＣＤ４０抗体で治療したＭＣ−３８腫瘍細胞を有するヒト化ＣＤ４０マウス（Ｂ−ｈＣＤ４０）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。ＰＳは生理食塩水（対照）を意味する。 キメラ抗ｈＣＤ４０抗体で治療したＭＣ−３８腫瘍細胞を有するヒト化ＣＤ４０マウス（Ｂ−ｈＣＤ４０）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。ＰＳは生理食塩水（対照）を意味する。 キメラ抗ｈＣＤ４０抗体で治療したＭＣ−３８腫瘍細胞を有するヒト化ＣＤ４０マウス（Ｂ−ｈＣＤ４０）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。ＰＳは生理食塩水（対照）を意味する。 キメラ抗ｈＣＤ４０抗体で治療したＭＣ−３８腫瘍細胞を有するヒト化ＣＤ４０マウス（Ｂ−ｈＣＤ４０）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。ＰＳは生理食塩水（対照）を意味する。 ヒト化抗ｈＣＤ４０抗体で治療したＭＣ−３８腫瘍細胞を有するヒト化ＣＤ４０マウス（Ｂ−ｈＣＤ４０）の時間の経過に伴う体重を示すグラフである。ＰＳは生理食塩水（対照）を意味する。 ヒト化抗ｈＣＤ４０抗体で治療したＭＣ−３８腫瘍細胞を有するヒト化ＣＤ４０マウス（Ｂ−ｈＣＤ４０）の時間の経過に伴う体重変化率を示すグラフである。ＰＳは生理食塩水（対照）を意味する。 ヒト化抗ｈＣＤ４０抗体で治療したＭＣ−３８腫瘍細胞を有するヒト化ＣＤ４０マウス（Ｂ−ｈＣＤ４０）における時間の経過に伴う腫瘍サイズを示すグラフである。ＰＳは生理食塩水（対照）を意味する。 Ｋａｂａｔの付番により定義されるとおりのマウス抗ｈＣＤ４０抗体（０３−７Ｆ１０、０６−６Ａ７、及び０７−４Ｈ６）のＣＤＲ配列及びそのヒト化抗ｈＣＤ４０抗体のＣＤＲ配列を一覧にする。 Ｃｈｏｔｈｉａの付番により定義されるとおりのマウス抗ｈＣＤ４０抗体（０３−７Ｆ１０、０６−６Ａ７、及び０７−４Ｈ６）のＣＤＲ配列及びそのヒト化抗ｈＣＤ４０抗体のＣＤＲ配列を一覧にする。 ヒトＣＤ４０（ｈＣＤ４０）、マウスＣＤ４０（ｍＣＤ４０）、サルＣＤ４０（ｒｍＣＤ４０）、及びキメラＣＤ４０（ｃｈｉＣＤ４０）のアミノ酸配列を一覧にする。 ７Ｆ１０をベースとするヒト化抗ｈＣＤ４０抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 ６Ａ７をベースとするヒト化抗ｈＣＤ４０抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 ４Ｈ６をベースとするヒト化抗ｈＣＤ４０抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。 マウス抗ｈＣＤ４０抗体０３−７Ｆ１０、０６−６Ａ７、及び０７−４Ｈ６の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を一覧にする。

本開示は、ＣＤ４０（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５）に結合する抗体、その抗原結合断片の例を提供する。

ＣＤ４０及び癌
免疫系は、体内の正常細胞と、生体が「外来性」と見る細胞との間を区別することができ、これにより免疫系は、正常細胞をそのままにしておきつつ外来細胞を攻撃することが可能になる。この機構には時に、免疫チェックポイントと呼ばれるタンパク質が関わる。免疫チェックポイントは、シグナルを強めることも（共刺激分子）、シグナルを弱めることもある免疫系内の分子である。

チェックポイント阻害因子は、免疫系が正常組織を攻撃するのを防ぎ、それにより自己免疫疾患を防ぐことができる。多くの腫瘍細胞もまた、チェックポイント阻害因子を発現する。これらの腫瘍細胞は、特に腫瘍抗原に特異的なＴ細胞における特定の免疫チェックポイント経路を利用することにより免疫監視機構を逃れる（Ｃｒｅｅｌａｎ，Ｂｅｎｊａ
ｍｉｎ Ｃ．「肺癌における免疫チェックポイント阻害薬の最新情報（Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）」．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ ２１．１（２０１４）：８０−８９）。多くの免疫チェックポイントはリガンド−受容体相互作用によって惹起されるため、リガンド及び／又はその受容体に対する抗体によって容易に遮断することができる。

ＣＤ４０（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５又はＴＮＦＲＳＦ５としても知られる）は、樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、Ｂ細胞、及び単球などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）並びに多くの非免疫細胞及び多種多様な腫瘍に発現する腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーである。活性化Ｔヘルパー細胞上のその三量体リガンドＣＤ１５４（ＣＤ４０リガンド又はＣＤ４０Ｌとしても知られる）と相互作用するとＡＰＣが活性化され、適応免疫の誘導につながる。

生理学的には、ＡＰＣ上のＣＤ４０を介したシグナル伝達はＴ細胞ヘルプの主要な構成要素と考えられ、ヘルパーＴ細胞がＡＰＣにライセンスを与える能力の大部分を媒介する。例えば、ＤＣ上のＣＤ４０のライゲーションは、共刺激及びＭＨＣ分子の表面発現の増加、炎症誘発性サイトカインの産生、及びＴ細胞惹起の亢進を誘導する。静止Ｂ細胞上のＣＤ４０ライゲーションは、抗原提示機能及び増殖を増加させる。

前臨床モデルでは、ラット抗マウスＣＤ４０ ｍＡｂがＣＤ４０＋ Ｂ細胞リンパ腫の治療において顕著な治療活性を示し（８０〜１００％のマウスが治癒し、再チャレンジに対してＣＤ８ Ｔ細胞依存的な免疫がある）、様々なＣＤ４０陰性腫瘍においてもまた有効である。これらのｍＡｂは、終末期に近い疾患のマウスからバルク腫瘍を取り除くことができる。ＣＤ４０ ｍＡｂは臨床試験で研究されており、黒色腫、膵癌、中皮腫、血液学的悪性腫瘍、特に、非ホジキンリンパ腫、リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、及び進行固形腫瘍の治療に用いられている。

治療用抗ＣＤ４０抗体は、強力なアゴニスト作用からアンタゴニスト作用にまで及ぶ多様な活性を示す。現在のところ、この異質混在性に関する満足な説明はない。アゴニストＣＤ４０ ｍＡｂについて引き合いに出される主な機構上の理論的根拠は、患者において臨床的に有意味な抗腫瘍Ｔ細胞応答を誘導するため宿主ＡＰＣを活性化させるというものである。これには、腫瘍退縮のＴ細胞非依存的だがマクロファージ依存的な惹起が含まれる。ＣＤ４０活性化マクロファージは殺腫瘍性になることができ、最小限膵癌においては腫瘍間質の枯渇も促進し得るため、インビボで腫瘍の崩壊が誘導される。重要なことに、こうした機構に腫瘍によるＣＤ４０の発現は必要なく、これは臨床試験の多くで幅広い腫瘍を有する患者を組み入れることの正当な理由となっている。これらの戦略がＤＣ、マクロファージ、又は両方を活性化することを目指す限りにおいて、目標は必ずしもＣＤ４０
ｍＡｂがその結合する細胞を例えば補体媒介性細胞傷害（ＣＭＣ）又は抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）によって死滅させることではない。従って、意図的に、強力なアゴニスト抗体はＣＭＣ又はＡＤＣＣを媒介しない。

対照的に、他のヒトＣＤ４０ ｍＡｂは、ほぼ全てのＢ細胞悪性腫瘍、一部の黒色腫、及びある種の癌腫など、ＣＤ４０＋腫瘍に対するＣＭＣ及びＡＤＣＣを媒介することができる。最後に、腫瘍細胞上のＣＤ４０のライゲーションがアポトーシスを増進させること、及びそれがいかなる免疫エフェクター経路も関与することなく達成され得ることのエビデンスが幾つかある。これは、ＣＤ４０＋ Ｂ細胞悪性腫瘍並びにＣＤ４０＋癌腫及び黒色腫などのある種の固形腫瘍について示されている。

ＣＤ４０及びその機能の詳細な説明については、例えば、Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ ｅ
ｔ ａｌ．，「アゴニストＣＤ４０抗体及び癌療法（Ａｇｏｎｉｓｔｉｃ ＣＤ４０ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ）」．（２０１３）：１０３５−１０４３；Ｂｅａｔｔｙ，ｅｔ ａｌ．「ＣＤ４０アゴニストは腫瘍間質を変化させ、マウス及びヒトの膵癌に対して有効性を示す（ＣＤ４０ ａｇｏｎｉｓｔｓ ａｌｔｅｒ ｔｕｍｏｒ ｓｔｒｏｍａ ａｎｄ ｓｈｏｗ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｇａｉｎｓｔ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎｓ）」．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３１．６０２４（２０１１）：１６１２−１６１６；Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ，ｅｔ ａｌ．「新規ＣＤ４０アゴニストモノクローナル抗体、ＣＰ−８７０，８９３で治療した癌患者における臨床活性及び免疫調節（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｅ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＣＰ−８７０，８９３，ａ ｎｏｖｅｌ
ＣＤ４０ ａｇｏｎｉｓｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２５．７（２００７）：８７６−８８３（これらの各々は、全体として参照により援用される）を参照することができる。

本開示は、幾つかの抗ＣＤ４０抗体、その抗原結合断片、並びにこれらの抗ＣＤ４０抗体及び抗原結合断片を使用して腫瘍成長を阻害し、癌を治療する方法を提供する。

抗体及び抗原結合断片
本開示は、抗ＣＤ４０抗体及びその抗原結合断片を提供する。一般に、抗体（免疫グロブリンとも称される）は、２つのクラスのポリペプチド鎖、軽鎖と重鎖とで構成される。本開示の非限定的な抗体は、２つの重鎖と２つの軽鎖とを含むインタクトな４本免疫グロブリン鎖抗体であってもよい。抗体の重鎖は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、若しくはＩｇＤを含む任意のアイソタイプ、又はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ１、ＩｇＥ２等を含むサブアイソタイプであってもよい。軽鎖は、κ軽鎖又はλ軽鎖であってもよい。抗体は、軽鎖の２つの同一のコピー及び重鎖の２つの同一のコピーを含んでもよい。重鎖は、各々が１つの可変ドメイン（又は可変領域、Ｖ_Ｈ）と複数の定常ドメイン（又は定常領域）とを含むものであり、その定常ドメイン内でジスルフィド結合によって互いに結合して抗体の「ステム」を形成する。軽鎖は、各々が１つの可変ドメイン（又は可変領域、Ｖ_Ｌ）と１つの定常ドメイン（又は定常領域）とを含むものであり、各々がジスルフィド結合によって１つの重鎖に結合する。各軽鎖の可変領域は、それが結合する重鎖の可変領域と整列する。軽鎖及び重鎖のいずれの可変領域も、保存性がより高いフレームワーク領域（ＦＲ）の間に挟まれた３つの超可変領域を含む。

これらの超可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）として知られ、抗体の主要な（ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）抗原結合表面を含むループを形成する。４つのフレームワーク領域は主にβシートのコンホメーションをとり、ＣＤＲが、それらのβシート構造をつなぐ、及び場合によってはその一部を形成するループを形成する。各鎖のＣＤＲはフレームワーク領域によってごく近接して保持され、他の鎖のＣＤＲと共に抗原結合領域の形成に寄与する。

抗体のアミノ酸配列を分析することによる抗体のＣＤＲ領域の同定方法は周知であり、ＣＤＲの幾つもの定義が一般に用いられている。Ｋａｂａｔの定義は配列の可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａの定義は構造上のループ領域の位置に基づく。これらの方法及び定義は、例えば、Ｍａｒｔｉｎ，「抗体可変ドメインのタンパク質配列及び構造分析（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ）」，Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，２００１．４２２−４３９；Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ，ｅｔ ａｌ．「抗体可変ドメインのＫａｂａ
ｔ及び構造的に正しい付番の分析及び改良（Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ ｔｏ Ｋａｂａｔ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ ｃｏｒｒｅｃｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ）」，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４５．１４（２００８）：３８３２−３８３９；Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．（１９７０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１３２：２１１−２５０；Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０３：１２１−５３（１９９１）；Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ
Ｃｈｅｍ．６８（１−３）：９−１６（Ｏｃｔ．１９９７）；Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２７５（２）：２６９−９４（Ｊａｎ．１９９８）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２（６２５２）：８７７−８３（Ｄｅｃ．１９８９）；Ｐｏｎｏｍａｒｅｎｋｏ ａｎｄ Ｂｏｕｒｎｅ，ＢＭＣ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ７：６４（２００７）（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されている。本開示に具体的に指示されない限り、本開示では既定としてＫａｂａｔの付番を用いる。

ＣＤＲは抗原のエピトープの認識に重要である。本明細書で使用されるとき、「エピトープ」は、抗体の抗原結合ドメインによって特異的に結合される能力を有する標的分子中の最も小さい部分である。エピトープの最小限の大きさは約３、４、５、６、又は７アミノ酸であり得るが、エピトープは抗原の二次及び三次構造に基づく抗原の三次元配置に依存し得るため、これらのアミノ酸が連続的な線状配列の抗原一次構造である必要はない。

一部の実施形態において、抗体は、インタクトな免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ）である。ＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）は高度に保存されており、その定常領域、特にそのヒンジ及び上側のＣＨ２ドメインが異なる。ＩｇＧサブクラスの配列及び差異は当該技術分野において公知であり、例えば、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ，ｅｔ ａｌ，「ＩｇＧサブクラス及びアロタイプ：構造からエフェクター機能まで（ＩｇＧ
ｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ ａｎｄ ａｌｌｏｔｙｐｅｓ：ｆｒｏｍ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｔｏ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ）」．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（２０１４）；Ｉｒａｎｉ，ｅｔ ａｌ．「ヒトＩｇＧサブクラスの分子特性及び感染性疾患に対する治療用モノクローナル抗体の設計におけるその意味（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ）」．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７．２（２０１５）：１７１−１８２；Ｓｈａｋｉｂ，Ｆａｒｏｕｋ，ｅｄ．ヒトＩｇＧサブクラス：構造、機能及び調節の分子解析（Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２０１６（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されている。

抗体はまた、任意の種（例えば、ヒト、げっ歯類、マウス、ラクダ科動物）に由来する免疫グロブリン分子であってもよい。本明細書に開示される抗体としてはまた、限定はされないが、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異性、多特異性抗体、及び別のポリペプチドに融合した免疫グロブリン結合ドメインを含むキメラ抗体も挙げられる。用語「抗原結合ドメイン」又は「抗原結合断片」は、インタクトな抗体の特異的結合活性を保持している抗体の一部分、即ち、インタクトな抗体の標的分子上のエピトープへの特異的結合能を有する抗体の任意の一部分である。これには、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びこれらの断片の変異体が含まれる。従って、一部の実施形態において、抗
体又はその抗原結合断片は、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、二重特異性抗体、二重特異性ｓｃＦｖ、ダイアボディ、線状抗体、単鎖抗体分子、抗体断片で形成される多重特異性抗体、及び抗体結合ドメインであるか、又はそれと相同である結合ドメインを含む任意のポリペプチドであってもよい。抗原結合ドメインの非限定的な例としては、例えば、インタクトな抗体の重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲ、インタクトな抗体の重鎖及び／又は軽鎖可変領域、インタクトな抗体の完全長重鎖又は軽鎖、又はインタクトな抗体の重鎖又は軽鎖のいずれかの個々のＣＤＲが挙げられる。

一部の実施形態において、抗原結合断片は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の一部を形成することができる。一部の実施形態において、キメラ抗原受容体は、本明細書に記載されるとおりの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）がＣＤ３−ζ膜貫通ドメイン及びエンドドメインに融合した融合体である。一部の実施形態において、キメラ抗原受容体はまた、様々な共刺激タンパク質受容体（例えば、ＣＤ２８、４１ＢＢ、ＩＣＯＳ）由来の細胞内シグナル伝達ドメインも含む。一部の実施形態において、キメラ抗原受容体は、効力を増加させるため複数のシグナル伝達ドメインを含む（例えば、ＣＤ３ｚ−ＣＤ２８−４１ＢＢ又はＣＤ３ｚ−ＣＤ２８−ＯＸ４０）。従って、一態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりのキメラ抗原受容体を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）を更に提供する。

一部の実施形態において、ｓｃＦＶは、１つの重鎖可変ドメインと、１つの軽鎖可変ドメインとを有する。一部の実施形態において、ｓｃＦＶは、２つの重鎖可変ドメインと、２つの軽鎖可変ドメインとを有する。

抗ＣＤ４０抗体及び抗原結合断片
本開示は、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を提供する。本明細書に記載される抗体及び抗原結合断片は、ＣＤ４０への結合能を有する。本抗体はアゴニスト又はアンタゴニストであり得る。一部の実施形態において、本抗体は、ＣＤ４０シグナル伝達経路を増進させて、ひいては免疫応答を増加させることができる。一部の実施形態において、本抗体はＣＭＣ又はＡＤＣＣを惹起することができる。

本開示は、例えば、マウス抗ＣＤ４０抗体０３−７Ｆ１０（「７Ｆ１０」）、０６−６Ａ７（「６Ａ７」）、及び０７−４Ｈ６（「４Ｈ６」）、そのキメラ抗体、及びそのヒト化抗体（例えば、表１に示されるとおりの抗体の一部）を提供する。

７Ｆ１０、及び７Ｆ１０由来抗体（例えば、ヒト化抗体）のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔの付番により定義されるとき、重鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号１〜３、及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号４〜６を含む。ＣＤＲはまた、Ｃｈｏｔｈｉａ方式によって定義されてもよい。Ｃｈｏｔｈｉａの付番に基づけば、重鎖可変ドメインのＣＤＲ配列は配列番号１９、２０、３に示され、軽鎖可変ドメインのＣＤＲ配列は配列番号４、２１、６に示される。

同様に、６Ａ７、及び６Ａ７由来抗体のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔの付番により定義されるとき、重鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号７〜９、及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号１０〜１２を含む。Ｃｈｏｔｈｉａの付番に基づけば、重鎖可変ドメインのＣＤＲ配列は配列番号２２、２３、９に示され、軽鎖可変ドメインのＣＤＲは配列番号１０〜１２に示される。

４Ｈ６、及び４Ｈ６由来抗体のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔの付番により定義されるとき、重鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号１３、１４、１５、及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ、配列番号１６、１７、１８を含む。Ｃｈｏｔｈｉａの付番に基づけば、重鎖可変ドメインのＣＤＲ配列は配列番号２４、２５、１５に示され、軽鎖可変ドメインのＣＤＲは配
列番号１６、１７、１８に示される。

ヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖（ｌｉｇｈｔ）可変領域のアミノ酸配列もまた提供される。マウス抗体をヒト化する方法は種々存在するため（例えば、種々のアミノ酸置換で配列を修飾することができる）、抗体の重鎖及び軽鎖には２種類以上のバージョンのヒト化配列があり得る。ヒト化７Ｆ１０抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号３０〜３２に示される。ヒト化７Ｆ１０抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号３３〜３６に示される。これらの重鎖可変領域配列（配列番号３０〜３２）のいずれかが、これらの軽鎖可変領域配列（配列番号３３〜３６）のいずれかと対になることができる。

同様に、ヒト化６Ａ７抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号３７〜４０に示される。ヒト化６Ａ７抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号４１〜４３に示される。これらの重鎖可変領域配列（配列番号３７〜４０）のいずれかが、これらの軽鎖可変領域配列（配列番号４１〜４３）のいずれかと対になることができる。

ヒト化４Ｈ６抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号４４〜４７に示される。ヒト化４Ｈ６抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号４８〜５１に示される。これらの重鎖可変領域配列（配列番号４４〜４７）のいずれかが、これらの軽鎖可変領域配列（配列番号４８〜５１）のいずれかと対になることができる。

７Ｆ１０、６Ａ７、及び４Ｈ６をベースとする一部のキメラ抗体及びヒト化抗体を表１及び表４に示す。

ヒト化率とは、国際免疫遺伝学情報システム（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ：ＩＭＧＴ）データベースにあるヒト抗体配列と比較したときの重鎖又は軽鎖可変領域配列の同一率を意味する。トップヒットとは、重鎖又は軽鎖可変領域配列が他の種と比べて特定の種に一層近いことを意味する。例えば、ヒトとのトップヒットとは、配列が他の種と比べてヒトに一層近いことを意味する。ヒト及びカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）とのトップヒットとは、配列がヒト配列及びカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）配列に対して同じ同一率であり、他の種の配列と比較したときこれらの同一率が最も高いことを意味する。一部の実施形態において、ヒト化率は、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、又は９５％より高い。ヒト化率の決定方法及びトップヒットの決定方法に関する詳細な説明は当該技術分野において公知であり、例えば、Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．「抗体非専売名のＩＮＮ及びアウト（Ｔｈｅ ＩＮＮｓ ａｎｄ ｏｕｔｓ
ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ）」．ＭＡｂｓ．Ｖｏｌ．８．Ｎｏ．１．Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ，２０１６（これは全体として参照により本明細書に援用される）に記載されている。高いヒト化率には様々な利点があることが多く、例えば、ヒトにおける安全性がより高いとともに有効性がより高く、ヒト対象に忍容される可能性がより高く、及び／又は副作用を生じる可能性がより低い。

更には、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片はまた、配列番号１〜３、配列番号７〜９、配列番号１３〜１５、配列番号１９、２０、３、配列番号２２、２３、９、及び配列番号２４、２５、１５の群から選択される１、２、又は３つの重鎖可変領域ＣＤＲ；及び／又は配列番号４〜６、配列番号１０〜１２、配列番号１６〜１８、及び配列番号４、２１、６の群から選択される１、２、又は３つの軽鎖可変領域ＣＤＲを含んでもよい。

一部の実施形態において、抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、ＣＤＲ１領域が選択のＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＣＤＲ２領域が選択のＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、及びＣＤＲ３領域が選択のＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＶＨと、ＣＤＲ１、２、３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＣＤＲ１領域が選択のＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＣＤＲ２領域が選択のＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、及びＣＤＲ３領域が選択のＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＶＬとを有し得る。選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列及び選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列は図１６（Ｋａｂａｔ ＣＤＲ）及び図１７（Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ）に示す。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号２；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号３のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む重鎖可変ドメインを含み得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号７；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号８；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号９のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む重鎖可変ドメインを含み得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１３；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１４；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１５のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む重鎖可変ドメインを含み得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１９；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号２０；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号３のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む重鎖可変ドメインを含み得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号２２；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号２３；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号９のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む重鎖可変ドメインを含み得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号２４；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号２５；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又
は置換を有する配列番号１５のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む重鎖可変ドメインを含み得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号４；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号５；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号６のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む軽鎖可変ドメインを含み得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１０；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１１；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１２のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む軽鎖可変ドメインを含み得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１６；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１７；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号１８のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む軽鎖可変ドメインを含み得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は、０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号４；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号２１；０、１又は２個のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を有する配列番号６のＣＤＲのうちの１、２、又は３つを含む軽鎖可変ドメインを含み得る。

挿入、欠失、及び置換はＣＤＲ配列の範囲内にあってもよく、又はＣＤＲ配列の終端側末端の一方又は両方にあってもよい。

本開示はまた、ＣＤ４０に結合する抗体又はその抗原結合断片も提供する。抗体又はその抗原結合断片は、選択のＶＨ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含む又はそれからなる重鎖可変領域（ＶＨ）と、選択のＶＬ配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％同一のアミノ酸配列を含む又はそれからなる軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。一部の実施形態において、選択のＶＨ配列は配列番号３０、３１、３２、又は５２であり、選択のＶＬ配列は配列番号３３、３４、３５、３６、又は５３である。一部の実施形態において、選択のＶＨ配列は配列番号３７、３８、３９、４０、又は５４であり、選択のＶＬ配列は配列番号４１、４２、４３、又は５５である。一部の実施形態において、選択のＶＨ配列は配列番号４４、４５、４６、４７、又は５６であり、選択のＶＬ配列は配列番号４８、４９、５０、５１、又は５７である。

２つのアミノ酸配列、又は２つの核酸配列の同一率を決定するには、それらの配列が最適比較を目的としてアラインメントされる（例えば、最適アラインメントのため第１及び第２のアミノ酸又は核酸配列の一方又は両方にギャップを導入することができ、比較目的で非相同配列を無視することができる）。比較目的でアラインメントされる参照配列の長さは参照配列の長さの少なくとも８０％であり、一部の実施形態では少なくとも９０％、９５％、又は１００％である。次に対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置のアミノ酸残基又はヌクレオチドが比較される。第１の配列中のある位置が第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占められているとき、それらの分子は当該位置において同一である。２つの配列間の同一率は、２つの配列の最適アラインメ
ントのため導入する必要のあるギャップの数、及び各ギャップの長さを考慮に入れた、配列によって共有される同一位置の数の関数である。本開示の目的上、配列の比較及び２つの配列間の同一率の決定は、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリング行列を用いて、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、及びフレームシフトギャップペナルティ５として達成することができる。

本開示はまた、免疫グロブリン重鎖又は免疫グロブリン軽鎖を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸も提供する。免疫グロブリン重鎖又は免疫グロブリン軽鎖は、図１６又は図１７に示されるとおりのＣＤＲを含むか、又は図１９〜図２２に示されるとおりの配列を有する。このポリペプチドが対応するポリペプチド（例えば、対応する重鎖可変領域又は対応する軽鎖可変領域）と対になると、対になったポリペプチドはＣＤ４０（例えば、ヒトＣＤ４０）に結合する。

抗ＣＤ４０抗体及び抗原結合断片はまた、抗体又は抗体断片の抗体変異体（誘導体及びコンジュゲートを含む）及び多重特異性（例えば、二重特異性）抗体又は抗体断片であってもよい。本明細書に提供される更なる抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性（多量体、例えば二重特異性）ヒト抗体、キメラ抗体（例えば、ヒト−マウスキメラ）、単鎖抗体、細胞内で作られる抗体（即ち、イントラボディ）、及びこれらの抗原結合断片である。抗体又はその抗原結合断片は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであってもよい。一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片はＩｇＧ抗体又はその抗原結合断片である。

抗体の断片は、それが完全長抗体の所望の親和性及び特異性を保持している限り、提供される方法における使用に好適である。従って、ＣＤ４０に結合する抗体の断片は、ＣＤ４０に結合する能力を保持していることになる。Ｆｖ断片は、完全な抗原認識及び結合部位を含む抗体断片である。この領域は、例えばｓｃＦｖにおける共有結合的性質であってもよい緊密な会合状態にある１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。この配置にあることで、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位を定義する。まとめると、６つのＣＤＲ又はその一部が抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、抗原を認識してそれと結合する能力を有することができ、但し、通常は結合部位全体と比べると親和性は低い。

単鎖Ｆｖ又は（ｓｃＦｖ）抗体断片は抗体のＶＨ及びＶＬドメイン（又は領域）を含み、ここでこれらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。概して、ｓｃＦｖポリペプチドはＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それによりｓｃＦｖは抗原結合に望ましい構造を形成することが可能になる。

Ｆａｂ断片は、軽鎖の可変及び定常ドメインと重鎖の可変ドメイン及び第１定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、概してそのカルボキシ末端の近傍でそれらの間のヒンジシステインによって共有結合的に連結された一対のＦａｂ断片を含む。抗体断片の他の化学的カップリングもまた当該技術分野において公知である。

ダイアボディは、２つの抗原結合部位を有する小型抗体断片であり、この断片は、同じポリペプチド鎖中のＶＬにつながったＶＨ（ＶＨ及びＶＬ）を含む。同じ鎖上のこれらの２つのドメイン間で対を成すことができないほど短いリンカーを使用することにより、これらのドメインは強制的に別の鎖の相補的ドメインと対になり、２つの抗原結合部位を作り出す。

線状抗体は、相補的な軽鎖ポリペプチドと一緒になって一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。線状抗体は二重特異性又は単一特異性であってもよい。

本開示の抗体及び抗体断片は、所望のエフェクター機能又は血清半減期がもたらされるようにＦｃ領域で修飾することができる。

抗体の多量体化は、抗体の自然の凝集によるか、又は当該技術分野において公知の化学的若しくは組換え連結技法によって達成し得る。例えば、一部の精製抗体製剤（例えば、精製ＩｇＧ_１分子）は、抗体ホモ二量体及び他の高次抗体多量体を含有するタンパク質凝集体を自発的に形成する。

或いは、抗体ホモ二量体は、当該技術分野において公知の化学的連結技法によって形成されてもよい。例えば、限定はされないが、ＳＭＣＣ（４−（マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸スクシンイミジル）及びＳＡＴＡ（Ｓ−アセチルチオ酢酸Ｎ−スクシンイミジル）を含めたヘテロ二官能性架橋剤を使用して抗体多量体を形成することができる。抗体ホモ二量体の形成についての例示的プロトコルは、Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：７５０９−７５１４，１９９７）に記載されている。抗体ホモ二量体は、ペプシンによる消化によってＦａｂ’_２ホモ二量体に変換することができる。抗体ホモ二量体を形成する別の方法は、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：３９６−４０４，２００２）に記載される自己親和性（ａｕｔｏｐｈｉｌｉｃ）Ｔ１５ペプチドを用いるものである。

一部の実施形態において、多重特異性抗体は二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の割合が最大となるように一対の抗体分子の間の接合部分をエンジニアリングすることにより作製されてもよい。例えば、接合部分は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含み得る。この方法では、第１の抗体分子の接合部分にある１つ以上の小さいアミノ酸側鎖が、より大きい側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）に置き換えられる。第２の抗体分子の接合部分には、より大きいアミノ酸側鎖をより小さいもの（例えば、アラニン又はスレオニン）に置き換えることにより、より大きい１つ又は複数の側鎖と同一又は同様のサイズの代償的な「空洞」が作り出される。これは、ホモ二量体などの他の望ましくない最終産物と比べてヘテロ二量体の収率を増加させる機構を提供する。この方法については、例えば、国際公開第９６／２７０１１号パンフレット（これはその全体が参照により援用される）に記載されている。

二重特異性抗体には、架橋された抗体又は「ヘテロコンジュゲート」抗体が含まれる。例えば、ヘテロコンジュゲート中の抗体のうちの一方がアビジンに、他方がビオチンにカップリングすることができる。ヘテロコンジュゲート抗体はまた、任意の好都合な架橋結合方法を用いて作製することもできる。好適な架橋剤及び架橋結合技法は当該技術分野において周知であり、米国特許第４，６７６，９８０号明細書（これは全体として参照により本明細書に援用される）に開示されている。

抗体断片からの二重特異性抗体の作成方法もまた、当該技術分野において公知である。例えば、二重特異性抗体は、化学的連結を用いて調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎ
ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１，１９８５）は、インタクトな抗体をタンパク質分解によって切断してＦ（ａｂ’）_２断片を作成する手順を記載している。このような断片は、ジチオール錯化剤である亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元されると、隣接ジチオールが安定化し、分子間ジスルフィド形成が防止される。作成されたＦａｂ’断片は、次にチオニトロ安息香酸（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次にＦａｂ’ＴＮＢ誘導体
のうちの１つがメルカプトエチルアミンによる還元によってＦａｂ’チオールに再び変換され、等モル量の別のＦａｂ’ＴＮＢ誘導体と混合することにより二重特異性抗体が形成される。

本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片はいずれも、安定化分子（例えば、対象体内又は溶液中での抗体又はその抗原結合断片の半減期を増加させる分子）にコンジュゲートし得る。安定化分子の非限定的な例としては、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）又はタンパク質（例えば、ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミン）が挙げられる。安定化分子をコンジュゲートすると、インビトロ（例えば、組織培養下、又は医薬組成物としての保存時）又はインビボ（例えば、ヒト体内）での抗体又は抗原結合断片の半減期が増加し、又は生物学的活性が延長し得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片は治療剤にコンジュゲートすることができる。抗体又はその抗原結合断片を含む抗体−薬物コンジュゲートは、治療剤に共有結合的又は非共有結合的に結合させることができる。一部の実施形態において、治療剤は細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤（例えば、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ）、ＤＭ−１及びＤＭ−４などのメイタンシノイド類、ジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、エピルビシン、及びシクロホスファミド及び類似体）である。

抗体特性
本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ４０とＣＤ４０リガンド（例えば、ＣＤ１５４）との間の結合を遮断することができる。

本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ４０アゴニスト又はアンタゴニストであってもよい。一部の実施形態において、ＣＤ４０に結合することにより、抗体はＣＤ４０シグナル伝達経路を阻害することができる。一部の実施形態において、抗体は免疫応答を上方制御し、又は免疫応答を下方制御することができる。

一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、マクロファージ、抗原提示細胞）の免疫応答、活性又は数を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、又は２０倍増加させることができる。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、マクロファージ、抗原提示細胞）の活性又は数を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、又は２０倍減少させることができる。

一部の実施態様では、抗体（又はその抗原結合断片）はＣＤ４０（例えば、ヒトＣＤ４０、サルＣＤ４０（例えば、アカゲザル、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））、マウスＣＤ４０、及び／又はキメラＣＤ４０）に０．１ｓ^−１未満、０．０１ｓ^−１未満、０．００１ｓ^−１未満、０．０００１ｓ^−１未満、又は０．００００１ｓ^−１未満の解離速度（ｋｏｆｆ）で特異的に結合する。一部の実施形態において、解離速度（ｋｏｆｆ）は、０．０１ｓ^−１超、０．００１ｓ^−１超、０．０００１ｓ^−１超、０．００００１ｓ^−１超、又は０．０００００１ｓ^−１超である。

一部の実施形態において、動的会合速度（ｋｏｎ）は、１×１０^２／Ｍｓ超、１×１０^３／Ｍｓ超、１×１０^４／Ｍｓ超、１×１０^５／Ｍｓ超、又は１×１０^６／Ｍｓ超である。一部の実施形態において、動的会合速度（ｋｏｎ）は、１×１０^５／Ｍｓ未満、１×１０^６／Ｍｓ未満、又は１×１０^７／Ｍｓ未満である。

親和性は、動的速度定数の商（ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）から推定することができる。一部の実施形態において、ＫＤは、１×１０^−６Ｍ未満、１×１０^−７Ｍ未満、１×１０^−８Ｍ未満、１×１０^−９Ｍ未満、又は１×１０^−１０Ｍ未満である。一部の実施形態において、ＫＤは、５０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、又は１ｎＭ未満である。一部の実施形態において、ＫＤは、１×１０^−７Ｍ超、１×１０^−８Ｍ超、１×１０^−９Ｍ超、１×１０^−１０Ｍ超、１×１０^−１１Ｍ超、又は１×１０^−１２Ｍ超である。一部の実施形態において、抗体はヒトＣＤ４０に約６ｎＭ以下のＫＤで結合する。

抗原に対する抗体の親和性を測定する一般的な技法としては、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、及び表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）が挙げられる。一部の実施形態において、抗体は、ヒトＣＤ４０（配列番号２６）、サルＣＤ４０（例えば、アカゲザルＣＤ４０、配列番号２８）、キメラＣＤ４０（配列番号２９）、及び／又はマウスＣＤ４０（配列番号２７）に結合する。一部の実施形態において、抗体は、ヒトＣＤ４０（配列番号２６）、サルＣＤ４０（例えば、アカゲザルＣＤ４０、配列番号２８；カニクイザルＣＤ４０）、キメラＣＤ４０（配列番号２９）、及び／又はマウスＣＤ４０（配列番号２７）に結合しない。

一部の実施形態において、熱安定性が決定される。本明細書に記載されるとおりの抗体又は抗原結合断片は、Ｔｍが６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５℃より高くてもよい。一部の実施形態において、Ｔｍは、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５℃より低い。

一部の実施形態において、抗体は腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ％）が１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、又は２００％より高い。一部の実施形態において、抗体は腫瘍成長阻害率が６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、又は２００％より低い。ＴＧＩ％は、例えば、治療開始から３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０日後、又は治療開始から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２ヵ月後に決定することができる。本明細書で使用されるとき、腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ％）は以下の式を用いて計算される：
ＴＧＩ（％）＝［１−（Ｔｉ−Ｔ０）／（Ｖｉ−Ｖ０）］×１００
Ｔｉは、ｉ日目における治療群の平均腫瘍容積である。Ｔ０は、０日目における治療群の平均腫瘍容積である。Ｖｉは、ｉ日目における対照群の平均腫瘍容積である。Ｖ０は、０日目における対照群の平均腫瘍容積である。

一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗体又はその抗原結合断片は
ＣＤ４０アンタゴニストである。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＣＤ４０を発現する標的細胞のＣＤ４０シグナル伝達を低下させる。

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＡＰＣ（例えば、ＤＣ細胞）機能を亢進させることができ、例えば、共刺激及びＭＨＣ分子の表面発現を誘導し、炎症誘発性サイトカインの産生を誘導し、及び／又はＴ細胞惹起機能を亢進させることができる。

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＣＤ４０を発現する腫瘍細胞に結合することができる。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、補体媒介性細胞傷害（ＣＭＣ）及び／又は抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）を誘導し、腫瘍細胞を死滅させることができる。

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は機能性Ｆｃ領域を有する。一部の実施形態において、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能は抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。一部の実施形態において、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能は食作用である。一部の実施形態において、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能はＡＤＣＣ及び食作用である。

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は補体媒介性細胞傷害（ＣＭＣ）を誘導することができる。

一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、又はヒトＩｇＧ４である。

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は機能性Ｆｃ領域を有しない。例えば、抗体又は抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片である。一部の実施形態において、Ｆｃ領域はＬＡＬＡ突然変異（ＥＵ付番でＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異）、又はＬＡＬＡ−ＰＧ突然変異（ＥＵ付番でＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ突然変異）を有する。

抗ＣＤ４０抗体の作製方法
ヒトＣＤ４０の単離された断片を免疫原として使用して、標準的なポリクローナル及びモノクローナル抗体調製技法を用いて抗体を作成することができる。ポリクローナル抗体は、動物において抗原ペプチド又はタンパク質を複数回注射（例えば、皮下又は腹腔内注射）することにより産生され得る。一部の実施形態において、抗原ペプチド又はタンパク質は少なくとも１つのアジュバントと共に注射される。一部の実施形態において、抗原ペプチド又はタンパク質は、免疫しようとする種において免疫原性の薬剤にコンジュゲートすることができる。動物には抗原ペプチド又はタンパク質を２回以上（例えば、２回、３回、又は４回）注射することができる。

免疫原としては、完全長ポリペプチド又はタンパク質が使用されてもよく、或いは、その抗原ペプチド断片が使用されてもよい。タンパク質の抗原ペプチドは、ＣＤ４０のアミノ酸配列の少なくとも８（例えば、少なくとも１０、１５、２０、又は３０）アミノ酸残基を含み、ペプチドに対して産生される抗体がタンパク質と特異的免疫複合体を形成するようにタンパク質のエピトープを包含する。上記に記載したとおり、ヒトＣＤ４０の完全長配列は当該技術分野において公知である（配列番号２６）。

好適な対象（例えば、少なくとも１つのヒト免疫グロブリン遺伝子座を発現するヒト又はトランスジェニック動物）を免疫することによる抗体の調製には、典型的には免疫原が
使用される。適切な免疫原性製剤は、例えば、組換え発現させた又は化学合成したポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ４０の断片）を含有し得る。この製剤は、フロイント完全又は不完全アジュバントなどのアジュバント、又は同様の免疫賦活剤を更に含むことができる。

ポリクローナル抗体は、上記に記載したとおり、好適な対象を免疫原としてのＣＤ４０ポリペプチド、又はその抗原ペプチド（例えば、ＣＤ４０の一部）で免疫することにより調製し得る。固定化したＣＤ４０ポリペプチド又はペプチドを用いる酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によるなど、標準的な技法により、免疫した対象の時間の経過に伴う抗体力価をモニタすることができる。必要であれば、抗体分子を哺乳類から（例えば、血液から）単離し、プロテインＡ又はプロテインＧクロマトグラフィーによってＩｇＧ画分を入手するなど、周知の技法によって更に精製することができる。免疫化後の適切な時点で、例えば、特異抗体価が最も高くなったとき、対象から抗体産生細胞を入手して、当初はＫｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７，１９７５）によって記載されたハイブリドーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（Ｋｏｚｂｏｒ
ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ４：７２，１９８３）、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技法（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６，１９８５）、又はトリオーマ技法など、標準的な技法によるモノクローナル抗体の調製に使用することができる。ハイブリドーマの作製技術は周知である（概して、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９４，Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと）。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、目的のポリペプチド又はエピトープに結合する抗体に関してハイブリドーマ培養上清を例えば標準的なＥＬＩＳＡアッセイを用いてスクリーニングすることにより検出される。

本明細書に記載されるヒト、ヒト化、又はキメラ抗体、又はその抗原結合断片をコードするＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することによるか、又はペプチド合成により、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片の変異体が調製されてもよい。かかる変異体は、例えば、抗体又は抗原結合ドメインの抗原結合部位を構成するアミノ酸配列内の残基の欠失、挿入、又は置換を含む。かかる変異体の集団では、一部の抗体又は抗原結合断片が、標的タンパク質、例えばＣＤ４０に対する親和性の増加を示すことになる。欠失、挿入、及び／又は組み合わせの任意の組み合わせを作製して、標的に対する結合親和性が増加した抗体又はその抗原結合断片に至らせることができる。抗体又は抗原結合断片に導入されるアミノ酸変化はまた、グリコシル化部位の数を変化させる（例えば、増加又は減少させる）、グリコシル化部位のタイプを変化させる（例えば、細胞に存在する酵素が異なる糖を結び付けるようにアミノ酸配列を変化させる）、又は新規グリコシル化部位を導入するなど、抗体又は抗原結合断片に新規翻訳後修飾も改変及び導入することができる。

本明細書に開示される抗体は、哺乳類を含めた任意の動物種に由来することができる。天然抗体の非限定的な例には、ヒト、霊長類、例えば、サル及び類人猿、雌ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ラクダ科動物（例えば、ラクダ及びラマ）、ニワトリ、ヤギ、及びヒト抗体を産生するように遺伝子操作されたトランスジェニックげっ歯類を含むげっ歯類（例えば、ラット、マウス、ハムスター及びウサギ）に由来する抗体が含まれる。

ヒト及びヒト化抗体には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する（又はそれに由来するものと同じアミノ酸配列を有する）可変領域及び定常領域を有する抗体が含まれる。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダム又は部位特異的突然変異誘発によって導入された
突然変異、又はインビボでの体細胞突然変異）を例えばＣＤＲに含み得る。

ヒト化抗体は、典型的には、非ヒトＣＤＲがグラフトされたヒトフレームワーク（ＦＲ）を有する。従って、ヒト化抗体は、ヒト以外の供給源からそれに導入された１つ以上のアミノ酸配列を有する。このような非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合に「移入」残基と称され、これは典型的には「移入」可変ドメインから取られている。ヒト化は本質的には、例えば、げっ歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列の代わりに置換することによって実施し得る。これらの方法は、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８）（これらの各々は、参照により全体として本明細書に援用される）に記載される。従って、「ヒト化」抗体は、実質的にインタクトに満たないヒトＶドメインが非ヒト種からの対応する配列によって置換されているキメラ抗体である。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、一部のＣＤＲ残基及び一部のＦＲ残基がヒト抗体における類似部位の残基によって置換されているマウス抗体である。

ヒト化抗体の作製に使用するヒトＶＨ及びＶＬドメインの選択は、免疫原性を低下させるために極めて重要である。いわゆる「最良適合」法によれば、マウス抗体のＶドメインの配列が既知のヒトドメイン配列のライブラリ全体に対してスクリーニングされる。次にマウスの配列に最も近いヒト配列が、ヒト化抗体用のヒトＦＲとして受け入れられる（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７））。

抗体が抗原に対する高い特異性及び親和性並びに他の有利な生物学的特性を保持しながらヒト化されることが更に重要である。この目標を実現するため、親配列及び様々な概念上のヒト化産物を親配列及びヒト化配列の三次元モデルを用いて分析するプロセスによってヒト化抗体を調製することができる。三次元免疫グロブリンモデルは一般に入手可能であり、当業者は精通している。コンピュータプログラムが利用可能であり、これは、選択された候補免疫グロブリン配列の確率の高い三次元コンホメーション構造を図解及び表示する。これらの表示を調べることにより、候補免疫グロブリン配列が機能する上でのその残基の可能性のある役割の分析、即ち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、１つ又は複数の標的抗原に対する親和性の増加など、所望の抗体特性が実現するようにＦＲ残基を選択し、受容配列及び移入配列から組み合わせることができる。

通常、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗ＣＤ４０抗体のアミノ酸配列変異体は、元の抗体の軽鎖又は重鎖に存在する配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一率を有するアミノ酸配列を含むことになる。

元の配列を基準とした同一性又は相同性とは、通常は、それらの配列をアラインメントし、及び必要であればギャップを導入して最大限の配列同一率を実現した後に、及びいかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮することなく、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗ＣＤ４０抗体又は断片内に存在する配列と同一である候補配列内に存在するアミノ酸残基の割合である。

抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片に対する更なる修飾を作ることができる。例えば、１つ又は複数のシステイン残基をＦｃ領域に導入し、それによりこの領域における鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にすることができる。このように作成されたホモ二量体抗体は、インビトロ及び／又はインビボ半減期がいくらか増加していてもよい。インビトロ及び
／又はインビボ半減期が増加したホモ二量体抗体はまた、例えば、Ｗｏｌｆｆ ｅｔ ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２５６０−２５６５，１９９３）に記載されるとおり、ヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製することもできる。或いは、二重Ｆｃ領域を有する抗体をエンジニアリングすることができる（例えば、Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ３：２１９−２３０，１９８９を参照のこと）。

一部の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片に共有結合修飾を作ることができる。こうした共有結合修飾は、化学的若しくは酵素的合成によるか、又は酵素的若しくは化学的切断によって作ることができる。抗体又は断片の標的化したアミノ酸残基と、選択の側鎖又はＮ末端若しくはＣ末端残基に反応能を有する有機誘導体化剤とを反応させることにより、抗体又は抗体断片の他の種類の共有結合修飾が分子に導入される。

一部の実施形態において、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）結び付いたフコースを欠いている炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％又は２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えば国際公開第２００８／０７７５４６号パンフレットに記載されるとおり、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定したときのＡｓｎ２９７に結び付いた全ての糖鎖構造（例えば複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７の糖鎖内の平均フコース量を計算することにより決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番；又はＫａｂａｔ付番における３１４位）に位置するアスパラギン残基を指す；しかしながら、Ａｓｎ２９７はまた、抗体のマイナーな配列変異に起因して、２９７位の約±３アミノ酸上流又は下流、即ち２９４位〜３００位の間にも位置し得る。かかるフコシル化変異体は、ＡＤＣＣ機能が向上したものであり得る。一部の実施形態において、グリカン不均一性を低減するため、抗体のＦｃ領域は、２９７位のアスパラギンがアラニンに置き換わる（Ｎ２９７Ａ）ように更にエンジニアリングすることができる。

一部の実施形態では、Ｆａｂアーム交換を回避することにより作製効率を促進するため、ＩｇＧ４の２２８位（ＥＵ付番）のセリンがプロリンに置き換わる（Ｓ２２８Ｐ）ように抗体のＦｃ領域を更にエンジニアリングした。Ｓ２２８突然変異に関する詳細な説明は、例えば、Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ．「新規定量的イムノアッセイと生理学的マトリックス調製との組み合わせを用いて実証されるとおり、Ｓ２２８Ｐ突然変異はインビボ及びインビトロＩｇＧ４ Ｆａｂアーム交換を防止する（Ｔｈｅ Ｓ２２８Ｐ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＩｇＧ４ Ｆａｂ−ａｒｍ ｅｘｃｈａｎｇｅ ａｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）」．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２９０．９（２０１５）：５４６２−５４６９（これはその全体が参照により援用される）に記載されている。

組換えベクター
本開示はまた、本明細書に開示される単離ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に開示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）を含む組換えベクター（例えば、発現ベクター）、組換えベクターが導入される宿主細胞（即ち、宿主細胞がポリヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチドを含むベクターを含有することになる）、及び組換え技術による組換え抗体ポリペプチド又はその断片の作製も提供する。

本明細書で使用されるとき、「ベクター」は、宿主細胞へのベクターの導入時に１つ以
上の目的のポリヌクレオチドを宿主細胞に送達する能力を有する任意の構築物である。「発現ベクター」は、発現ベクターが導入されている宿主細胞において１つ以上の目的のポリヌクレオチドをコードされたポリペプチドとして送達し及び発現させる能力を有する。従って、発現ベクター中では、目的のポリヌクレオチドは、その発現ベクターを導入された宿主細胞中で目的のポリヌクレオチドが翻訳されることになるように、ベクターの範囲内又は宿主細胞のゲノム内のいずれかにおいて目的のポリヌクレオチドの組込み部位で、又はその近傍で、又はそれに隣接してプロモーター、エンハンサー、及び／又はポリＡテールなどの調節エレメントと作動可能に連結されているという点で、ベクターにおいて発現のための位置にある。

ベクターは、当該技術分野において公知の方法、例えば、電気穿孔、化学的トランスフェクション（例えば、ＤＥＡＥ−デキストラン）、形質転換、トランスフェクション、及び感染及び／又は形質導入（例えば、組換えウイルスによる）によって宿主細胞に導入することができる。従って、ベクターの非限定的な例には、ウイルスベクター（これは組換えウイルスの作成に使用することができる）、ネイキッドＤＮＡ又はＲＮＡ、プラスミド、コスミド、ファージベクター、及びカチオン性縮合剤に関連するＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクターが含まれる。

一部の実施態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチド（例えば、本明細書に開示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）は、ウイルス発現システム（例えば、ワクシニア又は他のポックスウイルス、レトロウイルス、又はアデノウイルス）を使用して導入され、これは、非病原性（欠損）の複製コンピテントウイルスの使用を伴い得るか、又は複製欠損ウイルスを使用し得る。後者の場合、概してウイルスの伝播は、補完的なウイルスパッケージング細胞においてのみ起こることになる。好適なシステムは、例えば、Ｆｉｓｈｅｒ−Ｈｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：３１７−３２１；Ｆｌｅｘｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．５６９：８６−１０３；Ｆｌｅｘｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖａｃｃｉｎｅ，８：１７−２１；米国特許第４，６０３，１１２号明細書、同第４，７６９，３３０号明細書、及び同第５，０１７，４８７号明細書；国際公開第８９／０１９７３号パンフレット；米国特許第４，７７７，１２７号明細書；英国特許第２，２００，６５１号明細書；欧州特許第０，３４５，２４２号明細書；国際公開第９１／０２８０５号パンフレット；Ｂｅｒｋｎｅｒ−Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，６：６１６−６２７，１９８８；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５２：４３１−４３４；Ｋｏｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：２１５−２１９；Ｋａｓｓ−Ｅｉｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：１１４９８−１１５０２；Ｇｕｚｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，８８：２８３８−２８４８；及びＧｕｚｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｉｒ．Ｒｅｓ．，７３：１２０２−１２０７に開示されている。ＤＮＡをかかる発現システムに取り入れる技法は当業者に周知である。ＤＮＡはまた、例えば、Ｕｌｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：１７４５−１７４９、及びＣｏｈｅｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：１６９１−１６９２に記載されるとおり、「ネイキッド」であってもよい。ネイキッドＤＮＡの取込みは、細胞内へと効率的に輸送される生分解性ビーズにＤＮＡをコーティングすることにより増加し得る。

発現のため、本明細書に開示される抗体コード又はポリペプチドコードポリヌクレオチドを含むＤＮＡインサートは、いくつか例を挙げれば、λファージＰＬプロモーター、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｌａｃ、ｔｒｐ及びｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期及び後期プロモーター並びにレトロウイルスＬＴＲのプロモーターなど、適切なプロモーター（例えば、異種プロモーター）に作動可能に連結することができる。他の好適なプロモーターが
当業者に公知である。発現構築物は、転写開始、終結部位、及び転写領域における翻訳のためのリボソーム結合部位を更に含むことができる。構築物によって発現される成熟転写物のコード部分は、翻訳されるポリペプチドの始まりに翻訳開始コドン及びその終わりに適切な位置にある終止コドン（ＵＡＡ、ＵＧＡ、又はＵＡＧ）を含み得る。

指示されるとおり、発現ベクターは少なくとも１つの選択可能なマーカーを含み得る。かかるマーカーには、真核細胞培養用のジヒドロ葉酸レダクターゼ又はネオマイシン耐性並びに大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及び他の細菌における培養用にテトラサイクリン又はアンピシリン耐性遺伝子が含まれる。適切な宿主の代表的な例としては、限定はされないが、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、及びネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）細胞などの細菌細胞；酵母細胞などの真菌細胞；ショウジョウバエＳ２及びスポドプテラＳｆ９細胞などの昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳ、Ｂｏｗｅｓ黒色腫、及びＨＫ２９３細胞などの動物細胞；及び植物細胞が挙げられる。本明細書に記載される宿主細胞に適切な培養培地及び条件は当該技術分野において公知である。

細菌での使用のための非限定的なベクターとしては、Ｑｉａｇｅｎから入手可能なｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０及びｐＱＥ−９；Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能なｐＢＳベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ；及びＰｈａｒｍａｃｉａから入手可能なｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５が挙げられる。非限定的な真核生物ベクターとしては、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能なｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１及びｐＳＧ；及びＰｈａｒｍａｃｉａから入手可能なｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ及びｐＳＶＬが挙げられる。他の好適なベクターは、当業者には容易に明らかであろう。

使用に好適な非限定的な細菌プロモーターとしては、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｌａｃＩ及びｌａｃＺプロモーター、Ｔ３及びＴ７プロモーター、ｇｐｔプロモーター、λＰＲ及びＰＬプロモーター並びにｔｒｐプロモーターが挙げられる。好適な真核生物プロモーターとしては、ＣＭＶ前初期プロモーター、ＨＳＶチミジンキナーゼプロモーター、初期及び後期ＳＶ４０プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）のものなど、レトロウイルスＬＴＲのプロモーター、及びマウスメタロチオネイン−Ｉプロモーターなど、メタロチオネインプロモーターが挙げられる。

酵母サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）においては、α因子、アルコールオキシダーゼ、及びＰＧＨなど、構成的又は誘導性プロモーターを含む幾つものベクターが使用されてもよい。レビューについては、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ，ａｎｄ Ｇｒａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５３：５１６−５４４（１９９７）を参照のこと。

宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性トランスフェクション、カチオン性脂質媒介性トランスフェクション、電気穿孔、形質導入、感染又は他の方法によって達成することができる。かかる方法は、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８６）（これは全体として参照により本明細書に援用される）など、多くの標準的な実験マニュアルに記載されている。

高等真核生物による本開示の抗体をコードするＤＮＡの転写は、ベクターにエンハンサ
ー配列を挿入することにより増加し得る。エンハンサーは、通常は約１０〜３００ｂｐの、所与の宿主細胞型におけるプロモーターの転写活性を増加させるように働くＤＮＡのシス作用エレメントである。エンハンサーの例としては、塩基対１００〜２７０において複製起点の後期側に位置するＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側にあるポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。

翻訳されたタンパク質を小胞体の管腔内、細胞膜周辺腔内又は細胞外環境内へと分泌させるため、発現させるポリペプチドに適切な分泌シグナルを取り入れてもよい。こうしたシグナルはポリペプチドにとって内因性であってもよく、又はそれは異種シグナルであってもよい。

ポリペプチド（例えば、抗体）は、融合タンパク質（例えば、ＧＳＴ融合体）又はヒスチジンタグ付加など、修飾された形態で発現させることができ、分泌シグナルのみならず、更なる異種機能性領域もまた含み得る。例えば、ポリペプチドのＮ末端に、更なるアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域を付加してもよく、それにより宿主細胞内での、精製中の、又は続くハンドリング及び保存中の安定性及び持続性が向上し得る。また、ポリペプチドにペプチド部分を付加して精製を促進することができる。かかる領域は、ポリペプチドの最終調製前に取り除くことができる。ポリペプチドにペプチド部分を付加して、とりわけ、分泌又は排出を生じさせ、安定性を向上させ、及び精製を促進することは、当該技術分野では熟知されているルーチンの技法である。

治療方法
本開示の抗体又はその抗原結合断片は、様々な治療目的に使用することができる。

一態様において、本開示は、対象における癌の治療方法、対象における時間の経過に伴う腫瘍容積の増加速度を低減する方法、転移の発生リスクを低減する方法、又は対象における更なる転移の発生リスクを低減する方法を提供する。一部の実施形態において、治療は、癌の進行を食い止め、減速させ、遅らせ、又は阻害することができる。一部の実施形態において、治療の結果、対象における癌の１つ以上の症状の数、重症度、及び／又は持続期間を低減することができる。

一態様において、本開示は、本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を、それを必要としている対象（例えば、癌を有する、又は有すると同定若しくは診断された対象）（例えば、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌）、カルチノイド癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、神経膠腫、頭頸部癌、肝癌、肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫、黒色腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、腎癌、結腸直腸癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、膀胱癌、尿道癌、又は血液学的悪性腫瘍）に投与することを含む方法を特徴とする。一部の実施形態において、癌は、切除不能黒色腫又は転移性黒色腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、膀胱癌、又は転移性ホルモン不応性前立腺癌である。一部の実施形態において、対象は固形腫瘍を有する。一部の実施形態において、癌は、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、腎細胞癌（ＲＣＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、又は結腸直腸癌である。一部の実施形態において、対象はホジキンリンパ腫を有する。一部の実施形態において、対象は、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、胃癌、尿路上皮癌、メルケル細胞癌、又は頭頸部癌を有する。一部の実施形態において、癌は、黒色腫、膵癌、中皮腫、血液学的悪性腫瘍、特に、非ホジキンリンパ腫、リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、又は進行固形腫瘍である。

一部の実施形態において、本明細書に開示される組成物及び方法は、癌のリスクがある患者の治療に使用することができる。癌を有する患者は、当該技術分野において公知の様
々な方法で同定することができる。

一態様において、本開示は、例えば、ＡＰＣ細胞の機能特性に影響を及ぼすことにより（例えば、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの間の相互作用を遮断することにより）、異常な又は望ましくない免疫応答、例えば自己免疫障害に関連する障害を治療し、予防し、又はその発症リスクを低減する方法を提供する。これらの自己免疫障害としては、限定はされないが、円形脱毛症、ループス、強直性脊椎炎、メニエール病、抗リン脂質症候群、混合結合組織病、自己免疫性アジソン病、多発性硬化症、自己免疫性溶血性貧血、重症筋無力症、自己免疫性肝炎、尋常性天疱瘡、ベーチェット病、悪性貧血、水疱性類天疱瘡、結節性多発性関節炎（ｐｏｌｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｎｏｄｏｓａ）、心筋症、多発性軟骨炎、セリアックスプルー皮膚炎、多腺性症候群、慢性疲労症候群（ＣＦＩＤＳ）、リウマチ性多発筋痛症、慢性炎症性脱髄性多発筋炎・皮膚筋炎、慢性炎症性多発ニューロパチー、原発性無ガンマグロブリン血症、チャーグ・シュトラウス症候群、原発性胆汁性肝硬変、瘢痕性類天疱瘡、乾癬、クレスト症候群、レイノー現象、寒冷凝集素症、ライター症候群、クローン病、リウマチ熱、円板状ループス、関節リウマチ、クリオグロブリン血症 サルコイドーシス、線維筋痛症、強皮症、グレーブス病、シェーグレン症候群、ギラン・バレー、スティフマン症候群、橋本甲状腺炎、高安動脈炎、特発性肺線維症、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、潰瘍性大腸炎、ＩｇＡ腎症、ぶどう膜炎、糖尿病（例えば、Ｉ型）、脈管炎、扁平苔癬、及び白斑が挙げられる。抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片はまた、対象に投与することにより、細胞、組織又は臓器移植、例えば、腎臓、肝臓、及び心臓移植に関連する異常な又は望ましくない免疫応答に関連する障害、例えば移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療し、予防し、又はその発症リスクを低減することができ、又は同種移植片拒絶を予防することができる。一部の実施形態において、対象は、クローン病、潰瘍性大腸炎又は１型糖尿病を有する。

本明細書で使用されるとき、「有効量」とは、疾患、例えば自己免疫疾患又は癌の進行を食い止め、減速させ、遅らせ、又は阻害することを含めた有益な又は所望の結果を生じさせるのに十分な量又は投薬量を意味する。有効量は、例えば、抗体、抗原結合断片、抗体コードポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクター、及び／又はその組成物が投与される対象の年齢及び体重、症状の重症度及び投与経路に応じて異なることになり、従って投与は個別に決定されてもよい。

有効量は、１回以上の投与で投与することができる。例として、抗体又は抗原結合断片の有効量は、患者における自己免疫疾患又は癌の進行を改善し、止め、安定化させ、逆転させ、阻害し、減速及び／又は遅延させるのに十分な量であるか、又はインビトロで細胞（例えば、生検細胞、本明細書に記載される癌細胞のいずれか、又は細胞株（例えば、癌細胞株））の増殖を改善し、止め、安定化させ、逆転させ、減速及び／又は遅延させるのに十分な量である。当該技術分野において理解されるとおり、抗体又は抗原結合断片の有効量は、とりわけ、患者病歴並びに使用される抗体のタイプ（及び／又は投薬量）などの他の要因に応じて異なり得る。

本明細書に開示される抗体、抗体コードポリヌクレオチド、及び／又は組成物の有効量及び投与スケジュールは実験的に決定されてもよく、かかる決定を行うことは、当該技術分野における技能の範囲内である。当業者は、投与しなければならない投薬量が、例えば、本明細書に開示される抗体、抗体コードポリヌクレオチド、及び／又は組成物の投与を受けることになる哺乳類、投与経路、使用される本明細書に開示される抗体、抗体コードポリヌクレオチド、抗原結合断片、及び／又は組成物の詳細なタイプ並びに哺乳類に投与されている他の薬物に応じて異なり得ることを理解しているであろう。抗体又は抗原結合断片に適切な用量の選択における手引きについては、抗体及び抗原結合断片の治療使用に関連する文献、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ，Ｆｅｒｒｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｎｏｇｅｓ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｒｋ Ｒｉｄｇｅ，Ｎ．Ｊ．，１９８５，ｃｈ．２２ ａｎｄ ｐｐ．３０３−３５７；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｈａｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７７，ｐｐ．３６５−３８９を参照することができる。

有効量の抗体の典型的な１日投薬量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、投薬量は、１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇより低くてもよい。一部の実施形態において、投薬量は、１０ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、又は０．０１ｍｇ／ｋｇより高くてもよい。一部の実施形態において、投薬量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇである。

本明細書に記載される方法のいずれにおいても、少なくとも１つの抗体、その抗原結合断片、又は医薬組成物（例えば、本明細書に記載される抗体、抗原結合断片、又は医薬組成物のいずれか）、及び任意選択で、少なくとも１つの追加的な治療剤は、対象に少なくとも週１回（例えば、週１回、週２回、週３回、週４回、１日１回、１日２回、又は１日３回）投与することができる。一部の実施形態において、少なくとも２つの異なる抗体及び／又は抗原結合断片が同じ組成物（例えば、液体組成物）で投与される。一部の実施形態において、少なくとも１つの抗体又は抗原結合断片と少なくとも１つの追加的な治療剤とが同じ組成物（例えば、液体組成物）で投与される。一部の実施形態において、少なくとも１つの抗体又は抗原結合断片と少なくとも１つの追加的な治療剤とは２つの異なる組成物（例えば、少なくとも１つの抗体又は抗原結合断片を含有する液体組成物と少なくとも１つの追加的な治療剤を含有する固体経口組成物）で投与される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加的な治療剤は、丸薬、錠剤、又はカプセルとして投与される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加的な治療剤は、徐放性経口製剤で投与される。

一部の実施形態において、１つ以上の追加的な治療剤は、少なくとも１つの抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物（例えば、本明細書に記載される抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物のいずれか）の投与前、又は投与後に対象に投与することができる。一部の実施形態において、１つ以上の追加的な治療剤と、少なくとも１つの抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物（例えば、本明細書に記載される抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物のいずれか）とは、対象において１つ以上の追加的な治療剤と少なくとも１つの抗体又は抗原結合断片（例えば、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれか）との生物活性期間に重複があるように対象に投与される。

一部の実施形態において、対象は、少なくとも１つの抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物（例えば、本明細書に記載される抗体、抗原結合抗体断片、又は医薬組成物のいずれか）を長期間にわたり（例えば、少なくとも１週間、２週間、３週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、９ヵ月、１０ヵ月、１１ヵ月、１２ヵ月、１年、２年、３年、４年、又は５年の期間にわたり）投与されてもよい。当業者である医療専門家は、本明細書に記載される方法のいずれかを診断に用いて、又は治療
の有効性（例えば、癌の少なくとも１つの症状の観察）に従い、治療期間の長さを決定し得る。本明細書に記載されるとおり、当業者である医療専門家はまた、対象に投与される抗体又は抗原結合抗体断片（及び／又は１つ以上の追加的な治療剤）のアイデンティティ及び数を変更する（例えば、増加又は低下させる）こともでき、また、少なくとも１つの抗体又は抗原結合抗体断片（及び／又は１つ以上の追加的な治療剤）の対象への投与について、治療の有効性の評価に基づき（例えば、本明細書に記載される及び当該技術分野において公知の方法のいずれかを用いて）投薬量又は頻度を調整する（例えば、増加又は低下させる）こともできる。

一部の実施形態において、対象に１つ以上の追加的な治療剤を投与することができる。追加的な治療剤は、Ｂ−Ｒａｆの阻害薬、ＥＧＦＲ阻害薬、ＭＥＫの阻害薬、ＥＲＫの阻害薬、Ｋ−Ｒａｓの阻害薬、ｃ−Ｍｅｔの阻害薬、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）の阻害薬、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の阻害薬、Ａｋｔの阻害薬、ｍＴＯＲの阻害薬、二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）の阻害薬、及びイソクエン酸デヒドロゲナーゼ１（ＩＤＨ１）及び／又はイソクエン酸デヒドロゲナーゼ２（ＩＤＨ２）の阻害薬からなる群から選択される１つ以上の阻害薬を含むことができる。一部の実施形態において、追加的な治療剤は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ−１）（ＩＤＯ１）の阻害薬（例えば、エパカドスタット）である。

一部の実施形態において、追加的な治療剤は、ＨＥＲ３の阻害薬、ＬＳＤ１の阻害薬、ＭＤＭ２の阻害薬、ＢＣＬ２の阻害薬、ＣＨＫ１の阻害薬、活性化ヘッジホッグシグナル伝達経路の阻害薬、及びエストロゲン受容体を選択的に分解する薬剤からなる群から選択される１つ以上の阻害薬を含むことができる。

一部の実施形態において、追加的な治療剤は、トラベクテジン、ｎａｂ−パクリタキセル、トレバナニブ、パゾパニブ、セジラニブ、パルボシクリブ、エベロリムス、フルオロピリミジン、ＩＦＬ、レゴラフェニブ、レオリジン（Ｒｅｏｌｙｓｉｎ）、アリムタ（Ａｌｉｍｔａ）、ジカディア（Ｚｙｋａｄｉａ）、スーテント（Ｓｕｔｅｎｔ）、テムシロリムス、アキシチニブ、エベロリムス、ソラフェニブ、ヴォトリエント（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ）、パゾパニブ、ＩＭＡ−９０１、ＡＧＳ−００３、カボザンチニブ、ビンフルニン、Ｈｓｐ９０阻害薬、Ａｄ−ＧＭ−ＣＳＦ、テモゾロミド（Ｔｅｍａｚｏｌｏｍｉｄｅ）、ＩＬ−２、ＩＦＮａ、ビンブラスチン、サロミド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ）、ダカルバジン、シクロホスファミド、レナリドマイド、アザシチジン、レナリドマイド、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｄ）、アムルビシン（ａｍｒｕｂｉｃｉｎｅ）、カルフィルゾミブ、プララトレキサート、及びエンザスタウリンからなる群から選択される１つ以上の治療剤を含むことができる。

一部の実施形態において、追加的な治療剤は、アジュバント、ＴＬＲアゴニスト、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、ＩＬ−１、ＨＭＧＢ１、ＩＬ−１０アンタゴニスト、ＩＬ−４アンタゴニスト、ＩＬ−１３アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＨＶＥＭアンタゴニスト、ＩＣＯＳアゴニスト、治療ターゲティングＣＸ３ＣＬ１、治療ターゲティングＣＸＣＬ９、治療ターゲティングＣＸＣＬ１０、治療ターゲティングＣＣＬ５、ＬＦＡ−１アゴニスト、ＩＣＡＭ１アゴニスト、及びセレクチンアゴニストからなる群から選択される１つ以上の治療剤を含むことができる。

一部の実施形態において、カルボプラチン、ｎａｂ−パクリタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、ペメトレキセド、ゲムシタビン、ＦＯＬＦＯＸ、又はＦＯＬＦＩＲＩが対象に投与される。

一部の実施形態において、追加的な治療剤は、抗ＯＸ４０抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、又は抗ＧＩＴＲ抗体である。

医薬組成物及び投与経路
また、本明細書には、本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、又は４つ）を含む医薬組成物も提供される。本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれかの２つ以上（例えば、２、３、又は４つ）が任意の組み合わせで医薬組成物中に存在することができる。本医薬組成物は、当該技術分野において公知の任意の方法で製剤化され得る。

本医薬組成物は、その意図される投与経路（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、又は腹腔内）と適合性があるように製剤化される。本組成物は、滅菌希釈剤（例えば、滅菌水又は生理食塩水）、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒、抗細菌剤又は抗真菌剤、例えば、ベンジルアルコール又はメチルパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなど、キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸など、緩衝液、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩など、及び等張剤、例えば、糖類（例えば、デキストロース）、多価アルコール類（例えば、マンニトール又はソルビトール）、又は塩（例えば、塩化ナトリウム）など、又はこれらの任意の組み合わせを含むことができる。リポソーム懸濁液もまた、薬学的に許容可能な担体として使用することができる（例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書を参照のこと）。本組成物の調製物は、製剤化し、アンプル、使い捨てシリンジ、又は頻回投与バイアルに封入することができる。必要に応じて（例えば注射用製剤の場合のように）、例えば、レシチンなどのコーティング、又は界面活性剤の使用によって適切な流動性を維持することができる。抗体又はその抗原結合断片の吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン）を含めることにより延長させることができる。或いは、制御放出は、インプラント及びマイクロカプセル化デリバリーシステムによって実現することができ、これらは、生分解性生体適合性ポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル類、及びポリ乳酸；Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）を含み得る。

本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれかの１つ以上を含む組成物は、非経口（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、又は腹腔内）投与用に投薬量単位形態（即ち、投与の容易さ及び投薬量の均一性のため所定分量の活性化合物を含有する物理的に個別の単位）で製剤化することができる。

組成物の毒性及び治療有効性は、細胞培養物又は実験動物（例えば、サル）において標準的な薬学的手順により決定することができる。例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）：ＬＤ５０：ＥＤ５０の比である治療指数を決定することができる。高い治療指数を呈する薬剤が好ましい。薬剤が望ましくない副作用を呈する場合、潜在的損傷を最小限に抑える（即ち、望ましくない副作用を低減する）ように注意しなければならない。毒性及び治療有効性は、他の標準的な薬学的手順により決定することができる。

対象（例えば、ヒト）に用いるいずれか所与の薬剤の適切な投薬量の製剤化においては、細胞培養アッセイ及び動物試験から得られるデータを用いることができる。１つ以上（例えば、１、２、３、又は４つ）の抗体又はその抗原結合断片（例えば、本明細書に記載される抗体又は抗体断片のいずれか）の治療有効量とは、対象（例えば、癌を有すると同
定されたヒト対象）、又は疾患を発症するリスクがあると同定された対象（例えば、過去に癌を発症したことがあるが、現在は治癒している対象）において対象の疾患を治療する（例えば、癌細胞を死滅させる）、対象（例えば、ヒト）における疾患の１つ以上の症状の重症度、頻度、及び／又は持続期間を低下させる量ということになる。本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれかの有効性及び用量は、医療専門家又は獣医学専門家が当該技術分野において公知の方法を用いて、並びに対象（例えば、ヒト）における疾患の１つ以上の症状の観察により決定することができる。対象を有効に治療するために必要な投薬量及びタイミングには、特定の要因が影響を与え得る（例えば、疾患又は障害の重症度、治療歴、対象の全般的な健康及び／又は年齢、及び他の疾患の有無）。

例示的用量は、対象の体重１キログラム当たりの本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれかのミリグラム又はマイクログラム量を含む（例えば、約１μｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ；約１００μｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ；約１００μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ；約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ；約１０μｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ；又は約１μｇ／ｋｇ〜約５０μｇ／ｋｇ）。これらの用量は広い範囲を網羅するが、当業者は、抗体及びその抗原結合断片を含めた治療剤がその効力の点で異なり、有効量は当該技術分野において公知の方法により決定し得ることを理解するであろう。典型的には、初めは比較的低い用量が投与され、担当の医療専門家又は獣医学専門家（治療適用の場合）又は研究者（未だ開発段階で作業中のとき）が続いて適切な反応が得られるまで用量を徐々に増加させることができる。加えて、任意の特定の対象についての具体的な用量レベルは、用いられる具体的な化合物の活性、対象の年齢、体重、全般的な健康、性別、及び食事、投与時間、投与経路、排泄速度、及び抗体又は抗体断片のインビボ半減期を含めた種々の要因に依存するであろうことが理解される。

本医薬組成物は、容器、パック、又はディスペンサーに投与説明書と共に封入することができる。本開示はまた、本明細書に記載されるとおりの様々な使用のための抗体又はその抗原結合断片の製造方法も提供する。

本発明は以下の実施例に更に記載され、実施例は特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。

実施例１．マウス抗ｈＣＤ４０抗体の作成
ヒトＣＤ４０（ｈＣＤ４０；配列番号２６）に対するマウス抗体を作成するため、６〜８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをヒトＣＤ４０で免疫した。以下に記載し、図１及び図２に図示するとおりの方法により、抗ｈＣＤ４０抗体を採取した。

マウスの免疫化
６〜８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを１００μｇ／ｍｌの濃度のＨｉｓタグ付加ヒトＣＤ４０タンパク質によって２０μｇ／マウスで免疫した。Ｈｉｓタグ付加ヒトＣＤ４０タンパク質はアジュバントで乳化させて、マウスの背中の４つの位置に注射した。１回目の皮下（ｓ．ｃ．）注射については、抗原希釈液を等容積の完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）で乳化させた。続く皮下注射では、タンパク質を等容積の不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）で乳化させた。３回目の注射又はブースター免疫の３日後、血液（血清）を採取し、抗体力価に関してＥＬＩＳＡを用いて分析した。

別の実験では、ヒトＣＤ４０をコードする発現プラスミドをマウスに注射することによって６〜８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫した。抗原をコードするプラスミドは、遺伝子銃を使用することによりマウスの前脛骨筋（筋肉内注射；ｉ．ｍ．注射）に１０００μｇ／ｕｌの濃度で各マウスにつき６０μｇを注射した。少なくとも４回の注射を実施し、
２つの注射間は少なくとも１４日空けた。最終回の免疫化から７日後に血液（血清）を採取し、血清の抗体力価をＥＬＩＳＡによって試験した。

前回の免疫化から少なくとも１４日後に、免疫化を亢進させるための手順もまた（プラスミドの注射によるか、又はタンパク質の注射によるかのいずれかで）実施した。表面上にＣＤ４０抗原を発現するＣＨＯ細胞をマウスの尾静脈に静脈内注射した。次に注射の４日後に脾臓を採取した。

ＳＰ２／０細胞と脾臓細胞との融合
脾臓組織を粉砕した。初めにＣＤ３εマイクロビーズ及び抗マウスＩｇＭマイクロビーズによって脾臓細胞を選択し、次にＳＰ２／０細胞と融合した。次にこの細胞をヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地が入った９６ウェルプレートにプレーティングした。

ハイブリドーマの一次スクリーニング
標準的手順に従い蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて９６ウェルプレート内のハイブリドーマ上清の一次スクリーニングを実施した。９６ウェルプレートにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を加え（２×１０^４細胞／ウェル）、その後スクリーニングした。５０μｌの上清を使用した。実験に使用した抗体は、
（１）フルオレセイン（ＦＩＴＣ）コンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ）_２断片ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆｃγ断片特異的、及び
（２）Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７コンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ）_２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ断片特異的
であった。

サブクローニング
ＣｌｏｎｅＰｉｘ２を使用してサブクローニングを実施した。手短に言えば、一次スクリーニングで同定された陽性ウェルを半流動培地に移し、ＩｇＧ陽性クローンを同定して試験した。ＦＩＴＣ抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体を使用した。

腹水抗体
１×１０^６個の陽性ハイブリドーマ細胞をＢ−ＮＤＧ（商標）マウス（Ｂｅｉｊｉｎｇ
Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ、中国北京市；カタログ番号Ｂ−ＣＭ−００２）に腹腔内注射した。マウスの腹膜腔内でハイブリドーマ細胞を成長させることにより、モノクローナル抗体を産生した。ハイブリドーマ細胞が増大し、マウスの腹部に腹水が生じた。この水には、回収して後に使用し得る高濃度の抗体が含まれた。

抗体の精製
ＧＥ ＡＫＴＡタンパク質クロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、米国イリノイ州）を使用して腹水中の抗体を精製した。上記に記載される方法によって作製したマウス抗体の中には、０３−７Ｆ１０（「７Ｆ１０」）、０６−６Ａ７（「６Ａ７」）、０７−４Ｈ６（「４Ｈ６」）、０３−９Ｄ７（「９Ｄ７」）、０３−２Ａ７（「２Ａ７」）、及び０３−９Ｅ１１（「９Ｅ１１」）があった。

抗体のＶＨ、ＶＬ及びＣＤＲ領域を決定した。７Ｆ１０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、配列番号１〜６（Ｋａｂａｔの付番）又は配列番号１９、２０、３、４、２１、６（Ｃｈｏｔｈｉａの付番）に示す。

６Ａ７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣ
ＤＲ３アミノ酸配列は、配列番号７〜１２（Ｋａｂａｔの付番）又は配列番号２２、２３、９、１０、１１、１２（Ｃｈｏｔｈｉａの付番）に示す。

４Ｈ６の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、配列番号１３〜１８（Ｋａｂａｔの付番）又は配列番号２４、２５、１５、１６、１７、１８（Ｃｈｏｔｈｉａの付番）に示す。

実施例２．マウス抗体のヒト化
ヒト化の出発点は、マウス抗体（例えば、７Ｆ１０、６Ａ７、及び４Ｈ６）であった。これらのマウス抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を決定した。

７Ｆ１０について、異なる修飾又は置換を含む３つのヒト化重鎖可変領域変異体（配列番号３０〜３２）及び４つのヒト化軽鎖可変領域変異体（配列番号３３〜３６）を構築した。

６Ａ７について、異なる修飾又は置換を含む４つのヒト化重鎖可変領域変異体（配列番号３７〜４０）及び３つのヒト化軽鎖可変領域変異体（配列番号４１〜４３）を構築した。

４Ｈ６について、異なる修飾又は置換を含む４つのヒト化重鎖可変領域変異体（配列番号４４〜４７）及び４つのヒト化軽鎖可変領域変異体（配列番号４８〜５１）を構築した。

これらのヒト化重鎖可変領域変異体は、同じマウス抗体をベースとする軽鎖可変領域変異体のいずれかと組み合わせることができる。例えば、６Ａ７−Ｈ４（配列番号４０）は、同じマウス抗体６Ａ７をベースとする任意のヒト化軽鎖可変領域変異体（例えば、６Ａ７−Ｋ２（配列番号４２））と組み合わせることができ、その抗体には、それに従った抗体名が付与される（例えば、６Ａ７−Ｈ４Ｋ２）。

実施例３．マウス抗ｈＣＤ４０抗体のインビトロ試験：ヒトＣＤ４０（ｈＣＤ４０）とヒトＣＤ４０リガンド（ｈＣＤ４０Ｌ）との結合を遮断する
抗ｈＣＤ４０抗体がｈＣＤ４０とそのリガンドｈＣＤ４０Ｌとの間の結合を遮断できるかどうかを決定するため、遮断アッセイを実施した。

マウス腹水から抗ｈＣＤ４０抗体を採取し、クロマトグラフィーによって精製した。ヒトＣＤ４０を一過性にトランスフェクトした２５μｌ ＣＨＯ細胞をプレートの各ウェルに加えた。精製抗体は、５０、５、０．５、０．０５、及び０．００５μｇ／ｍｌの終濃度に用量調整した。用量調整後の抗体を４℃で各ウェルに２５μｌ／ウェルで加え、３０分間インキュベートした。

ｈＣＤ４０リガンド−ｈＦｃをＨ２９３Ｔ細胞によって発現させた。各ウェルに５０μｌのｈＣＤ４０Ｌ−ｈＦｃを加えた（１：５００）。細胞をｈＣＤ４０Ｌ−ｈＦｃ及び抗体と共に４℃で１５分間インキュベートした。

リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した後、各ウェルに１：５００希釈の５０μｌのＰＥ標識抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体（抗ｍＩｇＧ Ｆｃ−ＰＥ）及び１：１００希釈のＦＩＴＣ標識抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（抗ｈＩｇＧ Ｆｃ−ＦＩＴＣ）を加え、４℃で３０分間インキュベートし、続いてＰＢＳ洗浄した。フローサイトメトリーによりＦＩＴＣ及びＰＥのシグナルを決定した。

図３に示されるとおり、マウス抗ｈＣＤ４０抗体０３−７Ｆ１０、０６−６Ａ７、及び０７−４Ｈ６の濃度が増加すると、ｈＣＤ４０Ｌに結合する細胞のシグナルは低下し（ｙ軸）、一方でマウス抗ｈＣＤ４０抗体に結合する細胞のシグナルは増加したことから、ヒトＣＤ４０とヒトＣＤ４０Ｌとの間の結合が抗ｈＣＤ４０抗体によって遮断されたことが示唆される。

実施例４．サル、マウス、及びヒト−マウスキメラＣＤ４０に対する抗ｈＣＤ４０抗体の交差反応性
いずれの実験においても、ＣＨＯ細胞にマウスＣＤ４０（ｍＣＤ４０、配列番号２７）、サル（アカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅ））ＣＤ４０（ｒｍＣＤ４０、配列番号２８）、又はキメラ（マウス及びヒト）ＣＤ４０（ｃｈｉＣＤ４０、配列番号２９）をトランスフェクトした。

各ウェルに２５μｌ ＣＨＯ細胞を加えた。各ウェルに２５μｌの精製抗ｈＣＤ４０抗体（１μｇ／ｍｌ）（７Ｆ１０、６Ａ７、又は４Ｈ６）を加え、４℃で３０分間インキュベートした。

ＰＢＳで２回洗浄（１２００ｒｍｐ、５分）した後、各ウェルに５０μｌのＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体（抗ｍＩｇＧ Ｆｃ−ＦＩＴＣ）を１：１００希釈で加え、続いて４℃で３０分間インキュベートし、次にＰＢＳ洗浄（１２００ｒｍｐ、５分）した。フローサイトメトリーによりＦＩＴＣのシグナルを検出した。

図４に示されるとおり、７Ｆ１０、６Ａ７、及び４Ｈ６はマウスＣＤ４０と交差反応しなかったが、ｒｍＣＤ４０及びキメラＣＤ４０とは強い交差反応性があった。図４では、ＮＣは陰性対照を意味する。

実施例５．抗ｈＣＤ４０抗体の結合親和性
予め固定化されたプロテインＡセンサーチップを備えたＢｉａｃｏｒｅ（Ｂｉａｃｏｒｅ、ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ Ｎ．Ｊ．）Ｔ２００バイオセンサーを使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて抗ｈＣＤ４０抗体の結合親和性を測定した。

ＣＨＯ−Ｓ細胞をトランスフェクトすることにより抗ｈＣＤ４０抗体を採取し、次に精製した。抗体（１μｇ／ｍＬ）をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００バイオセンサーに１０μＬ／分で約２４〜３３秒間注入して所望のタンパク質密度（約４４〜５７反応単位（ＲＵ））を得た。次に、８００、２００、５０、１２．５、３．１２５、０．７８１２５ｎＭの濃度のヒスチジンタグ付加ヒトＣＤ４０タンパク質（ｈＣＤ４０−Ｈｉｓ）を３０μＬ／分で３００秒間注入した。解離を３００秒間モニタした。各調整濃度の最後の注入後に、グリシン（ｐＨ２．０、３０μＬ／分で１２秒間）でチップを再生した。６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ４の結果を図５に示す。

Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア３．０を用いてデータを１：１ラングミュア結合モデルに大域的に当てはめることにより、動的会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を同時に求めた（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．Ｒｏｏｓ，Ｈ．Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．，１９９４．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ６．９９−１１０）。動的速度定数の商から親和性を推定した（ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）。

当業者であれば理解するであろうとおり、試験した各抗体について、パラメータ（例えば、抗体濃度）を適宜調整しつつ同じ方法を実施した。例えば、６Ａ７−Ｈ１Ｋ１−ＩｇＧ４の結果を示すグラフを図６に示す。試験した抗体の結果を以下の表にまとめる。比較
のため、ダセツズマブの結果も含める。

試験したこれらの抗体のうち、６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ４、４Ｈ６−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ１、及び７Ｆ１０−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ１−Ｎ２９７Ａはキメラ抗ｈＣＤ４０抗体である。キメラ抗体は、対応するマウス抗ｈＣＤ４０抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインをヒト抗体の定常ドメイン（例えば、ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインを含む）と共に有する。用語ｍＨｖＫｖは、マウス重鎖可変領域及びマウス軽鎖可変領域を指示している。

試験した抗体にはまた、ヒト化抗体も含まれる。これらの試験したヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ４抗体定常ドメイン（例えば、ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインを含む
）を有する。重鎖のヒト化可変ドメインは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３等と番号が付与される；及び軽鎖のヒト化可変ドメインは、Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３等と番号が付与される。ヒト化可変ドメインの配列は図１９〜図２１にまとめる。例えば、７Ｆ１０−Ｈ１Ｋ１−ＩｇＧ４はマウス抗体７Ｆ１０をベースとし、ヒト化重鎖可変ドメインＨ１（配列番号３０）及びヒト化軽鎖可変ドメインＫ１（配列番号３３）を有する。同様に、６Ａ７−Ｈ３Ｋ２−ＩｇＧ４はマウス抗体６Ａ７をベースとし、ヒト化重鎖可変ドメインＨ３（配列番号３９）及びヒト化６Ａ７軽鎖可変ドメインＫ２（配列番号４２）を有する。

キメラ抗ＣＤ４０抗体及びヒト化抗ＣＤ４０抗体の抗体名及び配列を表１にまとめる。試験した抗体の少数がＦｃ領域にＮ２９７Ａ突然変異（ＥＵ付番）を有する。Ｎ２９７Ａ突然変異は、Ｎ２９７におけるグリコシル化の欠損、ひいてはエフェクター機能の欠如につながり得る。

実施例６．ｍｆＣＤ４０との抗ｈＣＤ４０抗体の結合親和性
予め固定化されたプロテインＡセンサーチップを備えたＢｉａｃｏｒｅ（Ｂｉａｃｏｒｅ、ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ Ｎ．Ｊ．）Ｔ２００バイオセンサーを使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いてｍｆＣＤ４０（カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））との抗ｈＣＤ４０抗体の結合親和性を測定した。

抗ｈＣＤ４０抗体を精製した。抗体（０．５μｇ／ｍＬ）をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００バイオセンサーに１０μＬ／分で約１８〜２６秒間注入して所望のタンパク質密度（約４４〜５８反応単位（ＲＵ））を得た。次に、２００、５０、１２．５、３．１２５ｎＭの濃度のヒスチジンタグ付加ｍｆＣＤ４０タンパク質（ｍｆＣＤ４０−Ｈｉｓ）（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号：ＣＤ０−Ｃ５２Ｈ６）を３０μＬ／分で１８０秒間注入した。解離を３００〜６００秒間モニタした。各調整濃度の最後の注入後に、グリシン（ｐＨ２．０、３０μＬ／分で１２秒間）でチップを再生した。

Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア３．０を用いてデータを１：１ラングミュア結合モデルに大域的に当てはめることにより、動的会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を同時に求めた。動的速度定数の商から親和性を推定した（ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）。

試験した抗体の結果を以下の表にまとめる。

実施例７．抗ｈＣＤ４０抗体の熱安定性
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ（商標）Ｄｙｅキット（Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ（商標）５リアルタイムＰＣＲシステム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してＴｈｅｒｍｏｆｌｕｏｒアッセイを実施した。このアッセイは、タンパク質アンフォールドとして露出した疎水性パッチに結合する蛍光色素を用いて熱安定性を測定するものであった。

この実験は製造者のプロトコルに従い実施した。ステップ１では、試料を１．６℃／秒で２５℃に加熱した。ステップ２では、試料を０．０５℃／秒で９９℃に加熱した。

以下の表に、試験したヒト化抗ｈＣＤ４０抗体のＴｍをまとめる。比較のため、ダセツズマブ（ｄａｃｅｒｕｚｕｍａｂ）の結果も含めた。

実施例８．マウス及びキメラ抗ｈＣＤ４０抗体のインビボ試験
抗ｈＣＤ４０抗体をインビボで試験し、ヒトにおけるこれらの抗体の効果を予測するため、ヒト化ＣＤ４０マウスモデルを作成した。このヒト化ＣＤ４０マウスモデルはキメラＣＤ４０タンパク質（配列番号２９）を発現するようにエンジニアリングしたもので、マウスＣＤ４０タンパク質の細胞外領域の一部を対応するヒトＣＤ４０細胞外領域に置き換えた。マウスＣＤ４０（配列番号２７）のアミノ酸残基２０〜１９２をヒトＣＤ４０（配列番号２６）のアミノ酸残基２０〜１９２によって置き換えた。ヒト化マウスモデル（Ｂ−ｈＣＤ４０マウス）は、ヒトとマウスＣＤ４０を発現する普通のマウスとの間の臨床転帰の違いを大幅に減らすことにより、臨床セッティングで新規の治療処置を試験する新規ツールを提供する。ヒト化ＣＤ４０マウスモデルに関する詳細な説明は、ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０９１８４５号明細書（全体として参照により本明細書に援用される）を参照することができる。

抗ｈＣＤ４０抗体がインビボで腫瘍成長に及ぼすその効果に関して結腸癌モデルで試験した。ＭＣ−３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）をＢ−ｈＣＤ４０マウスに皮下注射した。マウスの腫瘍が１００〜１５０ｍｍ^３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分けた（各群５匹のマウス）。

次にマウスに生理食塩水（ＰＳ）及び抗ｈＣＤ４０抗体を腹腔内投与によって注射した。抗体は各週の１日目及び４日目に３週間にわたって与えた（合計６回の注射）。

注射量はマウスの体重に基づき３ｍｇ／ｋｇで計算した。腫瘍の長軸及び短軸の長さを測定し、腫瘍の容積を０．５×（長軸）×（短軸）^２として計算した。マウスの体重はまた、注射前、マウスを異なる群に分けたとき（初回抗体注射の前）、抗体注射期間中週２回、及び安楽死前にも測定した。

以下の式：ＴＧＩ（％）＝［１−（Ｔｉ−Ｔ０）／（Ｖｉ−Ｖ０）］×１００を用いて腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ％）を計算した。Ｔｉは、ｉ日目における治療群の平均腫瘍容積である。Ｔ０は、０日目における治療群の平均腫瘍容積である。Ｖｉは、ｉ日目における対照群の平均腫瘍容積である。Ｖ０は、０日目における対照群の平均腫瘍容積である。

統計的分析にはｔ検定を実施した。６０％より高いＴＧＩ％は、腫瘍成長の有意な抑制を示している。Ｐ＜０．０５が、有意差を示す閾値である。

マウス抗ｈＣＤ４０抗体のインビボ結果
７群（Ｇ１〜Ｇ７）の各々において、Ｂ−ｈＣＤ４０マウスに、対照としての生理食塩水（ＰＳ）（Ｇ１）、マウス抗ｈＣＤ４０抗体０３−９Ｄ７（Ｇ２；３ｍｇ／ｋｇ）、マウス抗ｈＣＤ４０抗体０３−２Ａ７（Ｇ３；３ｍｇ／ｋｇ）、マウス抗ｈＣＤ４０抗体０３−９Ｅ１１（Ｇ４；３ｍｇ／ｋｇ）、マウス抗ｈＣＤ４０抗体０６−６Ａ７（Ｇ５；３ｍｇ／ｋｇ）、マウス抗ｈＣＤ４０抗体０７−４Ｈ６（Ｇ６；３ｍｇ／ｋｇ）、又はマウス抗ｈＣＤ４０抗体０３−７Ｆ１０（Ｇ７；３ｍｇ／ｋｇ）を注射した。

全治療期間を通じてマウスの体重をモニタした（図７、及び図８）。これらの群間に大きい体重差は認められなかった。これらの結果から、０３−７Ｆ１０、０６−６Ａ７、及び０７−４Ｈ６がマウスに良好に忍容され、毒性はないことが示された。

０３−７Ｆ１０、０６−６Ａ７、及び０７−４Ｈ６で治療した群の腫瘍サイズは、対照群（図９）及び他の抗体治療群と比較して増加の程度が低かった。

以下の表に示されるとおり、２５日目（群分け後２５日）におけるＴＧＩ％もまた計算した。

キメラ抗ｈＣＤ４０抗体のインビボ結果
キメラ抗ｈＣＤ４０抗体６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ１（Ｇ２）、６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ２（Ｇ３）、６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ４（Ｇ４）、６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ１−Ｎ２９７Ａ（Ｇ５）及び６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ１−ＬＡＬＡ（Ｇ６）をＢ−ｈＣＤ４０マウス（ヒト化ＣＤ４０マウス）に腹腔内投与によって投与した。対照として生理食塩水を注射した（群１、Ｇ１）。比較のため、ダセツズマブ（ヒト化抗ＣＤ４０モノクローナル抗体、これは血液学的悪性腫瘍の治療用に設計されている）もまた含めた（Ｇ７）。

抗体の注射量はマウスの体重に基づき３ｍｇ／ｋｇで計算した。抗体は、各週の１日目及び４日目に与えた（合計６回の注射）。

全治療期間を通じてマウスの体重をモニタした。異なる群のマウスの体重が全て増加した（図１０、及び図１１）。異なる群間での明らかな体重差は認められなかった。これらの結果から、抗ｈＣＤ４０抗体がマウスに良好に忍容され、毒性はないことが示された。

腫瘍サイズは、特定のキメラ抗体で治療した群において対照群と比較して有意差を示した（図１２）。

各治療群の２１日目（群分け後２１日）におけるＴＧＩ％は、以下の表に示すとおり計算された。

これらの結果から、キメラ抗体６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ２が腫瘍成長を有意に阻害することが示された。これらの抗体の中では、６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ４（Ｇ４）及び６Ａ７−ｍＨｖＫｖ−ＩｇＧ１−ＬＡＬＡ（Ｇ６）もまた腫瘍阻害効果を有する。

実施例９．ヒト化抗ｈＣＤ４０抗体のインビボ試験
ＣＤ４０ヒト化マウス（Ｂ−ｈＣＤ４０）においてヒト化抗ｈＣＤ４０抗体を試験して、インビボでの腫瘍成長に及ぼすその効果を実証した。

ＭＣ−３８癌腫瘍細胞（結腸腺癌細胞）をＢ−ｈＣＤ４０マウスに皮下注射した。マウスの腫瘍が１５０±５０ｍｍ^３の容積に達したところで、マウスを腫瘍の容積に基づき異なる群に無作為に分けた（各群５匹のマウス）。

次にマウスに、対照としての生理食塩水（Ｇ１）、ヒト化抗ＣＤ４０抗体６Ａ７−Ｈ３Ｋ３−ＩｇＧ２（Ｇ２）、ヒト化抗ＣＤ４０抗体６Ａ７−Ｈ４Ｋ２−ＩｇＧ２（Ｇ３）、ヒト化抗ＣＤ４０抗体６Ａ７−Ｈ３Ｋ３−ＩｇＧ４（Ｇ４）、又はヒト化抗ＣＤ４０抗体６Ａ７−Ｈ４Ｋ２−ＩｇＧ４（Ｇ５）を注射した。

抗体は各週の２日目及び５日目に腹腔内注射によって３ｍｇ／ｋｇで３週間にわたって与えた（合計６回の注射）。

全治療期間を通じてマウスの体重をモニタした。異なる群のマウスの体重が全て増加した（図１３、及び図１４）。これらの結果から、抗ｈＣＤ４０抗体がマウスに良好に忍容され、毒性はないことが示された。

腫瘍サイズは、抗ｈＣＤ４０抗体で治療した群において有意差を示した（図１５）。特に、Ｇ３の腫瘍サイズはＧ１よりも小さい（Ｐ＝０．１５）。

各治療群の２１日目（群分け後２１日）におけるＴＧＩ％はまた、以下の表に示すとおり計算された。

上記の結果は、一部のヒト化抗ｈＣＤ４０抗体が腫瘍成長を阻害し得ることを示している。それらの中でも、６Ａ７−Ｈ４Ｋ２−ＩｇＧ２（Ｇ３）は腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ％）が最も高かった。

他の実施形態
本発明はその詳細な説明と併せて説明されているが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではなく、例示することが意図されると理解されるべきである。他の態様、利点、及び変形例が、以下の特許請求の範囲内にある。

Claims (43)

1. 相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＶＨ ＣＤＲ１領域が選択のＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨ ＣＤＲ２領域が選択のＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３領域が選択のＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含むＶＨと、
   ＣＤＲ１、２、及び３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、前記ＶＬ ＣＤＲ１領域が選択のＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬ ＣＤＲ２領域が選択のＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、及び前記ＶＬ ＣＤＲ３領域が選択のＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含むＶＬと
   を含み、
   前記選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、及び３アミノ酸配列及び前記選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、及び３アミノ酸配列が、以下：
   （１）前記選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１、２、３に示され、前記選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号４、５、６に示される；
   （２）前記選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号７、８、９に示され、前記選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１０、１１、１２に示される；
   （３）前記選択のＶＨ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１３、１４、１５に示され、前記選択のＶＬ ＣＤＲ１、２、３アミノ酸配列が、それぞれ配列番号１６、１７、１８に示される
   のうちの１つである、ＣＤ４０（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５）に結合する抗体又はその抗原結合断片。
2. 前記ＶＨが、配列番号１、２、及び３にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含み、前記ＶＬが、配列番号４、５、及び６にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
3. 前記ＶＨが、配列番号７、８、及び９にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含み、前記ＶＬが、配列番号１０、１１、及び１２にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
4. 前記ＶＨが、配列番号１３、１４、及び１５にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含み、前記ＶＬが、配列番号１６、１７、及び１８にそれぞれ示されるアミノ酸配列のＣＤＲ１、２、３を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
5. ヒトＣＤ４０に特異的に結合する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
6. ヒト化抗体又はその抗原結合断片である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
7. 単鎖可変断片（ｓｃＦＶ）である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
8. （１）配列番号１、２、及び３にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号３３、３４、
   ３５、３６、又は５３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と対になるとＣＤ４０に結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
   （２）配列番号４、５、及び６にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号３０、３１、３２、又は５２に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になるとＣＤ４０に結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
   （３）配列番号７、８、及び９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号４１、４２、４３、又は５５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と対になるとＣＤ４０に結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
   （４）配列番号１０、１１、及び１２にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号３７、３８、３９、４０、又は５４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になるとＣＤ４０に結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片；
   （５）配列番号１３、１４、１５にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、配列番号４８、４９、５０、５１、又は５７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と対になるとＣＤ４０に結合するＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片；
   （６）配列番号１６、１７、及び１８にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬであって、配列番号４４、４５、４６、４７、又は５６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと対になるとＣＤ４０に結合するＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片
   を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸。
9. 配列番号１、２、及び３にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項８に記載の核酸。
10. 配列番号４、５、及び６にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項８に記載の核酸。
11. 配列番号７、８、及び９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項８に記載の核酸。
12. 配列番号１０、１１、及び１２にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項８に記載の核酸。
13. 配列番号１３、１４、及び１５にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＨを含む免疫グロブリン重鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項８に記載の核酸。
14. 配列番号１６、１７、及び１８にそれぞれ示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２、及び３を含むＶＬを含む免疫グロブリン軽鎖又はその断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項８に記載の核酸。
15. 前記ＶＨが、ＶＬと対になるとヒトＣＤ４０に特異的に結合し、又は前記ＶＬが、ＶＨと対になるとヒトＣＤ４０に特異的に結合する、請求項８〜１４のいずれか一項に記載の
    核酸。
16. 前記免疫グロブリン重鎖又は前記その断片がヒト化免疫グロブリン重鎖又はその断片であり、前記免疫グロブリン軽鎖又は前記その断片がヒト化免疫グロブリン軽鎖又はその断片である、請求項８〜１５のいずれか一項に記載の核酸。
17. 単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をコードする、請求項８〜１６のいずれか一項に記載の核酸。
18. ｃＤＮＡである、請求項８〜１７のいずれか一項に記載の核酸。
19. 請求項８〜１８のいずれか一項に記載の核酸のうちの１つ以上を含むベクター。
20. 請求項８〜１８のいずれか一項に記載の核酸のうちの２つを含むベクターであって、ＣＤ４０に一緒になって結合する前記ＶＬ領域及び前記ＶＨ領域をコードするベクター。
21. 各ベクターが請求項８〜１８のいずれか一項に記載の核酸のうちの１つを含む一対のベクターであって、一緒になって、ＣＤ４０に一緒になって結合する前記ＶＬ領域及び前記ＶＨ領域をコードする一対のベクター。
22. 請求項１９又は２０に記載のベクター、又は請求項２１に記載の一対のベクターを含む細胞。
23. ＣＨＯ細胞である、請求項２２に記載の細胞。
24. 請求項８〜１８のいずれか一項に記載の核酸のうちの１つ以上を含む細胞。
25. 請求項８〜１８のいずれか一項に記載の核酸のうちの２つを含む細胞。
26. 前記２つの核酸が一緒になって、ＣＤ４０に一緒になって結合する前記ＶＬ領域及び前記ＶＨ領域をコードする、請求項２５に記載の細胞。
27. 抗体又はその抗原結合断片の作製方法であって、
    （ａ）請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の細胞を、前記細胞が前記抗体又は前記抗原結合断片を産生するのに十分な条件下で培養するステップ；及び
    （ｂ）前記細胞によって産生された前記抗体又は前記抗原結合断片を収集するステップを含む方法。
28. 選択のＶＨ配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、選択のＶＬ配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記選択のＶＨ配列及び前記選択のＶＬ配列が、以下：
    （１）前記選択のＶＨ配列が配列番号３０、３１、３２、又は５２であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号３３、３４、３５、３６、又は５３である；
    （２）前記選択のＶＨ配列が配列番号３７、３８、３９、４０、又は５４であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号４１、４２、４３、又は５５である；
    （３）前記選択のＶＨ配列が配列番号４４、４５、４６、４７、又は５６であり、前記選択のＶＬ配列が配列番号４８、４９、５０、５１、又は５７である
    のうちの１つである、ＣＤ４０に結合する抗体又はその抗原結合断片。
29. 前記ＶＨが配列番号４０の配列を含み、前記ＶＬが配列番号４２の配列を含む、請求項
    ２８に記載の抗体又はその抗原結合断片。
30. 前記ＶＨが配列番号３９の配列を含み、前記ＶＬが配列番号４３の配列を含む、請求項２８に記載の抗体又はその抗原結合断片。
31. ヒトＣＤ４０に特異的に結合する、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
32. ヒト化抗体又はその抗原結合断片である、請求項２８〜３２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
33. 単鎖可変断片（ｓｃＦＶ）である、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
34. 治療剤に共有結合的に結合した請求項１〜７及び２８〜３３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片を含む抗体−薬物コンジュゲート。
35. 前記治療剤が細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤である、請求項３４に記載の抗体薬物コンジュゲート。
36. 癌を有する対象を治療する方法であって、請求項１〜７及び２８〜３３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片、又は請求項３４又は３５の抗体−薬物コンジュゲートを含む組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む方法。
37. 前記対象が固形腫瘍を有する、請求項３６に記載の方法。
38. 前記癌が、黒色腫、膵癌、中皮腫、又は血液学的悪性腫瘍である、請求項３６に記載の方法。
39. 前記癌が、非ホジキンリンパ腫、リンパ腫、又は慢性リンパ球性白血病である、請求項３６に記載の方法。
40. 腫瘍成長速度を低下させる方法であって、請求項１〜７及び２８〜３３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片、又は請求項３４又は３５の抗体−薬物コンジュゲートを含む組成物の有効量を腫瘍細胞に接触させることを含む方法。
41. 腫瘍細胞を死滅させる方法であって、
    請求項１〜７及び２８〜３３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片、又は請求項３４又は３５の抗体−薬物コンジュゲートを含む組成物の有効量を腫瘍細胞に接触させること
    を含む方法。
42. 請求項１〜７及び２８〜３３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
43. 請求項３４又は３５に記載の抗体薬物コンジュゲートと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
    

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