JP2022161209A - Immunochromato kit - Google Patents
Immunochromato kit Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022161209A JP2022161209A JP2021065834A JP2021065834A JP2022161209A JP 2022161209 A JP2022161209 A JP 2022161209A JP 2021065834 A JP2021065834 A JP 2021065834A JP 2021065834 A JP2021065834 A JP 2021065834A JP 2022161209 A JP2022161209 A JP 2022161209A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gold
- specific binding
- test
- binding substance
- substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 150
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 148
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims abstract description 146
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 142
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims abstract description 142
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 110
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims abstract description 64
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 claims abstract description 58
- 239000004332 silver Substances 0.000 claims abstract description 58
- 239000002055 nanoplate Substances 0.000 claims abstract description 55
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 45
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 34
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 34
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 34
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 31
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 21
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 15
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 11
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims description 10
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 claims description 8
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 7
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 6
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 5
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 claims description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract description 12
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 64
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 15
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 15
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 15
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 8
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 7
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 6
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 6
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 108010079855 Peptide Aptamers Proteins 0.000 description 4
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 4
- 238000000731 high angular annular dark-field scanning transmission electron microscopy Methods 0.000 description 4
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 108091008104 nucleic acid aptamers Proteins 0.000 description 3
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 3
- 239000000275 Adrenocorticotropic Hormone Substances 0.000 description 2
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 2
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 2
- 102000003930 C-Type Lectins Human genes 0.000 description 2
- 108090000342 C-Type Lectins Proteins 0.000 description 2
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 102400000739 Corticotropin Human genes 0.000 description 2
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 102000007563 Galectins Human genes 0.000 description 2
- 108010046569 Galectins Proteins 0.000 description 2
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-proline amide Natural products NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 2
- 239000000637 Melanocyte-Stimulating Hormone Substances 0.000 description 2
- 108010007013 Melanocyte-Stimulating Hormones Proteins 0.000 description 2
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 2
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 2
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 2
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 2
- 239000000627 Thyrotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 2
- 102400000336 Thyrotropin-releasing hormone Human genes 0.000 description 2
- 101800004623 Thyrotropin-releasing hormone Proteins 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- 241000607272 Vibrio parahaemolyticus Species 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 2
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- -1 gold ion Chemical class 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 229920000172 poly(styrenesulfonic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 229940005642 polystyrene sulfonic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229940034199 thyrotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZHSOTLOTTDYIIK-ZDUSSCGKSA-N (2S)-2-amino-3-[4-(4-hydroxyphenoxy)-3,5-diiodophenyl]propanoic acid Chemical compound IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C=C1 ZHSOTLOTTDYIIK-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 description 1
- XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N Aflatoxin G Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1C1C=COC1O2 XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002695 AgAu Inorganic materials 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 description 1
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 1
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 239000003154 D dimer Substances 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091008102 DNA aptamers Proteins 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 1
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 1
- 108010000196 Factor XIIIa Proteins 0.000 description 1
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 1
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 1
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010058861 Fibrin Fibrinogen Degradation Products Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 101100540311 Human papillomavirus type 16 E6 gene Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 101000735344 Lymantria dispar Pheromone-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000007298 Mucin-1 Human genes 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000052651 Pancreatic hormone Human genes 0.000 description 1
- 108700020479 Pancreatic hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 1
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 108700020474 Penicillin-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710202686 Penicillin-sensitive transpeptidase Proteins 0.000 description 1
- 108010047320 Pepsinogen A Proteins 0.000 description 1
- 102000006877 Pituitary Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010047386 Pituitary Hormones Proteins 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 101710150344 Protein Rev Proteins 0.000 description 1
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 1
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000531795 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi A Species 0.000 description 1
- 108010017898 Shiga Toxins Proteins 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical compound IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 102000011409 Transcobalamins Human genes 0.000 description 1
- 108010023603 Transcobalamins Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 description 1
- 102400000015 Vasoactive intestinal peptide Human genes 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- 102000050760 Vitamin D-binding protein Human genes 0.000 description 1
- 108700021020 Vitamin D-binding protein Proteins 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 230000001780 adrenocortical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001548 androgenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 230000003913 calcium metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 description 1
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N dodecyl benzenesulfonate;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCOS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000000208 fibrin degradation product Substances 0.000 description 1
- 108010052295 fibrin fragment D Proteins 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000003629 gastrointestinal hormone Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 229940117432 influenza b virus antigen Drugs 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002073 nanorod Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010525 oxidative degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 239000004025 pancreas hormone Substances 0.000 description 1
- 229940032957 pancreatic hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229910001112 rose gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 1
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940080264 sodium dodecylbenzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 108010075210 streptolysin O Proteins 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 229940035722 triiodothyronine Drugs 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 108091009357 vitamin binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000028728 vitamin binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 229910001097 yellow gold Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
Description
本発明は、イムノクロマトキットに関しており、特に金被覆銀ナノプレートを使用したイムノクロマトキットに関している。 The present invention relates to an immunochromatographic kit, particularly to an immunochromatographic kit using gold-coated silver nanoplates.
銀ナノプレートは、光との相互作用（局在表面プラズモン共鳴：ＬＳＰＲ）により光を吸収するため、その懸濁液はナノプレートの形状に応じて色を示すことが知られている。そして、銀ナノプレートの大きさや形状を制御することにより、吸収する光を変化させること、すなわち色を変化させることができることも知られている。一方、銀ナノプレートは酸化により溶解してその形状が変化する。この酸化による銀ナノプレートの形状変化は、意図していた色の変化を引き起こし得る。 It is known that silver nanoplates absorb light by interacting with light (localized surface plasmon resonance: LSPR), so that the suspension exhibits a color depending on the shape of the nanoplates. It is also known that by controlling the size and shape of the silver nanoplates, it is possible to change the absorbed light, that is, change the color. On the other hand, silver nanoplates are dissolved by oxidation and their shape is changed. The shape change of the silver nanoplates due to this oxidation can cause the intended color change.
そこで、銀ナノプレートを酸化に対して安定化するため、銀ナノプレートの表面を金で被覆することが行われている。特許文献１には、金被覆銀ナノプレートは安定であり、イムノクロマトグラフィー試験に好適に利用できる旨が記載されている。また、特許文献２には、水溶性高分子の濃度とｐＨを調整することで、金被覆銀ナノプレートを安定な懸濁液の形態で調製し、被験物質の検出試薬の標識（例えば、目的タンパク質の検出に用いられる抗体の標識）として利用して、種々の被験物質を高い感度で検出するために応用することが記載されている。 Therefore, in order to stabilize the silver nanoplates against oxidation, the surface of the silver nanoplates is coated with gold. Patent Document 1 describes that gold-coated silver nanoplates are stable and can be suitably used for immunochromatographic tests. In Patent Document 2, by adjusting the concentration and pH of a water-soluble polymer, a gold-coated silver nanoplate is prepared in the form of a stable suspension, and a detection reagent for a test substance is labeled (for example, the purpose It is described that the labeling of antibodies used for protein detection) is used to detect various test substances with high sensitivity.
イムノクロマトグラフィー試験に用いるテストストリップとしては、メンブレンと吸収パッドで構成される「ハーフストリップ」や、それに加えてサンプルパッド及びコンジュゲートパッドを備える「フルストリップ」が知られており、市販品としては「フルストリップ」が広く販売されている。ハーフストリップでは、被験物質の検出試薬を展開液として使用するが、フルストリップでは、被験物質の検出試薬をコンジュゲートパッドに含浸させ、乾燥させているため、被験物質を含む試料をサンプルパッドに適用するだけで使用できる。 Known test strips used in immunochromatographic tests include a "half strip" consisting of a membrane and an absorbent pad, and a "full strip" including a sample pad and a conjugate pad in addition to them. "Full strip" is widely available. In the half-strip, the test substance detection reagent is used as a developing solution, but in the full-strip, the conjugate pad is impregnated with the test substance detection reagent and dried, so the sample containing the test substance is applied to the sample pad. It can be used just by
従来の金被覆銀ナノプレートにおいては、ハーフストリップでは好適に使用できるが、フルストリップでは、発色性が低下する場合があった。原因としては、金被覆銀ナノプレートを含む被験物質の検出試薬をコンジュゲートパッドに含浸させ、乾燥させることにより、当該金被覆銀ナノプレートが酸化により劣化していることが考えられた。従来の金被覆銀ナノプレートにおいては、コアの銀ナノプレートの大きさに対して薄い被膜しか形成することができず、酸化耐性が不十分であったため、イムノクロマトグラフィー試験の検出感度も十分ではなかった。そこで、本発明は、酸化耐性の高い金被覆銀ナノプレートを使用したイムノクロマトキットを提供することを目的としている。 Conventional gold-coated silver nanoplates can be suitably used in half-strips, but in some cases, the full-strips have poor color development properties. The reason for this is thought to be that the conjugate pad is impregnated with a test substance detection reagent containing gold-coated silver nanoplates and then dried, which causes the gold-coated silver nanoplates to deteriorate due to oxidation. In conventional gold-coated silver nanoplates, only a thin coating can be formed relative to the size of the core silver nanoplates, and the oxidation resistance is insufficient, so the detection sensitivity of immunochromatographic tests is not sufficient. rice field. Accordingly, an object of the present invention is to provide an immunochromatographic kit using gold-coated silver nanoplates with high oxidation resistance.
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、厚い金層を有する金被覆銀ナノプレートを使用することで、フルストリップにおいても高い検出感度が得られることを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、以下に示すイムノクロマトキットを提供するものである。
〔１〕メンブレンを含むテストストリップと、
コアとしての銀ナノプレートと、前記銀ナノプレートを被覆する金層とを有する金被覆銀ナノプレートと、
を含む、試料中の被験物質を検出するためのイムノクロマトキットであって、
前記メンブレン上に、前記被験物質の捕捉用特異的結合物質が固定されており、
前記金層の平均厚みが、１．０ｎｍ超であり、前記金被覆銀ナノプレートが、前記被験物質の検出用特異的結合物質を担持している、イムノクロマトキット。
〔２〕前記金層の平均厚みが、１．５ｎｍ～１０．０ｎｍである、前記〔１〕に記載のイムノクロマトキット。
〔３〕前記金被覆銀ナノプレートが、乾燥状態で含まれている、前記〔１〕又は〔２〕に記載のイムノクロマトキット。
〔４〕前記テストストリップが、前記金被覆銀ナノプレートを含むコンジュゲートパットを含む、前記〔１〕～〔３〕のいずれか１項に記載のイムノクロマトキット。
〔５〕前記金層が、前記銀ナノプレートの主平面及び端面に形成されており、
前記銀ナノプレートの平均粒子径（Ｄ）に対する前記端面での前記金層の平均厚み（Ｔ）の比率（Ｔ／Ｄ）が０．０５以上である、前記〔１〕～〔４〕のいずれか１項に記載のイムノクロマトキット。
〔６〕前記コアとしての銀ナノプレートの平均粒子径が、５５ｎｍ以下である、前記〔１〕～〔５〕のいずれか１項に記載のイムノクロマトキット。
〔７〕前記金被覆銀ナノプレートが、可視光領域に極大吸収波長を有し、前記金被覆銀ナノプレートの波長９００ｎｍにおける消光度（Ｅ900）に対する前記極大吸収波長における消光度（Ｅmax）の比率（Ｅmax／Ｅ900）が５以上である、前記〔１〕～〔６〕のいずれか１項に記載のイムノクロマトキット。
〔８〕前記捕捉用特異的結合物質及び／又は前記検出用特異的結合物質が、抗体を含む、前記〔１〕～〔７〕のいずれか１項に記載のイムノクロマトキット。
〔９〕前記試料が、複数種類の被験物質を含んでおり、
前記メンブレン上に、前記複数種類の被験物質それぞれに対する捕捉用特異的結合物質が固定されており、
前記金被覆銀ナノプレートが、前記複数種類の被験物質それぞれに対する検出用特異的結合物質を担持している、前記〔１〕～〔８〕のいずれか１項に記載のイムノクロマトキット。
〔１０〕前記捕捉用特異的結合物質が、結合する被験物質の種類ごとに異なる部位に固定されている、前記〔９〕に記載のイムノクロマトキット。
〔１１〕前記検出用特異的結合物質が、結合する被験物質の種類ごとに異なる極大吸収波長の金被覆銀ナノプレートに担持されている、前記〔９〕又は〔１０〕に記載のイムノクロマトキット。
〔１２〕前記メンブレンが、イムノクロマトグラフィー試験の成否を判定するコントロール部位をさらに備えている、前記〔１〕～〔１１〕の何れか１項に記載のイムノクロマトキット。
〔１３〕前記コントロール部位に特異的に結合するコントロール特異的結合物質をさらに含み、
前記コントロール特異的結合物質が抗体を含み、かつ前記捕捉用特異的結合物質が抗体を含む場合に、前記コントロール特異的結合物質の抗体は、前記捕捉用特異的結合物質の抗体とは異なる宿主動物に由来している、前記〔１２〕に記載のイムノクロマトキット。
〔１４〕前記金被覆銀ナノプレート以外のナノ粒子をさらに含む、前記〔１〕～〔１３〕のいずれか１項に記載のイムノクロマトキット。
〔１５〕前記被験物質が、インフルエンザウイルス抗原及びコロナウイルス抗原からなる群から選択される少なくとも１種を含む、前記〔１〕～〔１４〕のいずれか１項に記載のイムノクロマトキット。
As a result of intensive studies aimed at solving the above problems, the present inventors have found that high detection sensitivity can be obtained even in full strips by using gold-coated silver nanoplates having a thick gold layer, and have completed the present invention. completed. That is, the present invention provides an immunochromatographic kit shown below.
[1] a test strip containing a membrane;
a gold-coated silver nanoplate having a silver nanoplate as a core and a gold layer coating the silver nanoplate;
An immunochromatographic kit for detecting a test substance in a sample, comprising
a specific binding substance for capturing the test substance is immobilized on the membrane;
An immunochromatographic kit, wherein the gold layer has an average thickness of more than 1.0 nm, and the gold-coated silver nanoplate carries a specific binding substance for detection of the test substance.
[2] The immunochromatographic kit according to [1] above, wherein the gold layer has an average thickness of 1.5 nm to 10.0 nm.
[3] The immunochromatographic kit according to [1] or [2] above, wherein the gold-coated silver nanoplates are contained in a dry state.
[4] The immunochromatographic kit according to any one of [1] to [3], wherein the test strip comprises a conjugate pad containing the gold-coated silver nanoplate.
[5] The gold layer is formed on the main plane and the end face of the silver nanoplate,
Any of the above [1] to [4], wherein the ratio (T/D) of the average thickness (T) of the gold layer at the end face to the average particle diameter (D) of the silver nanoplate is 0.05 or more. or the immunochromatographic kit according to item 1.
[6] The immunochromatographic kit according to any one of [1] to [5] above, wherein the average particle size of the silver nanoplates as the core is 55 nm or less.
[7] The gold-coated silver nanoplates have a maximum absorption wavelength in the visible light region, and the extinction degree (E max ) at the maximum absorption wavelength with respect to the extinction degree (E 900 ) of the gold-coated silver nanoplates at a wavelength of 900 nm The immunochromatographic kit according to any one of [1] to [6], wherein the ratio (E max /E 900 ) of is 5 or more.
[8] The immunochromatographic kit according to any one of [1] to [7] above, wherein the specific binding substance for capture and/or the specific binding substance for detection comprises an antibody.
[9] the sample contains a plurality of test substances,
a capture specific binding substance for each of the plurality of types of test substances is immobilized on the membrane;
The immunochromatographic kit according to any one of [1] to [8] above, wherein the gold-coated silver nanoplate carries a detection specific binding substance for each of the plurality of test substances.
[10] The immunochromatographic kit according to [9] above, wherein the specific binding substance for capture is immobilized at a different site for each type of test substance to which it binds.
[11] The immunochromatographic kit of [9] or [10] above, wherein the specific binding substance for detection is supported on a gold-coated silver nanoplate having a different maximum absorption wavelength for each type of test substance to which it binds.
[12] The immunochromatographic kit according to any one of [1] to [11] above, wherein the membrane further comprises a control site for determining the success or failure of an immunochromatographic test.
[13] further comprising a control specific binding substance that specifically binds to the control site;
When the control specific binding substance comprises an antibody and the capture specific binding substance comprises an antibody, the antibody of the control specific binding substance is a host animal different from the antibody of the capture specific binding substance The immunochromatographic kit according to [12] above, which is derived from.
[14] The immunochromatographic kit according to any one of [1] to [13], further comprising nanoparticles other than the gold-coated silver nanoplates.
[15] The immunochromatographic kit of any one of [1] to [14] above, wherein the test substance contains at least one selected from the group consisting of influenza virus antigens and coronavirus antigens.
本発明に従えば、厚い金層を有する金被覆銀ナノプレートを使用することにより、たとえ酸化による劣化のリスクの高いフルストリップを用いてイムノクロマトグラフィー試験を行っても、高い検出感度が得られる。 According to the present invention, the use of gold-coated silver nanoplates with a thick gold layer provides high detection sensitivity even when immunochromatographic tests are performed using full strips, which have a high risk of oxidative degradation.
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
本発明は、試料中の被験物質を検出するためのイムノクロマトキットに関しており、当該イムノクロマトキットは、
前記被験物質の捕捉用特異的結合物質が固定されているメンブレンを含むテストストリップと、
コアとしての銀ナノプレートと、前記銀ナノプレートを被覆する金層とを有し、かつ前記被験物質の検出用特異的結合物質を担持する金被覆銀ナノプレートと、
を含んでいる。
The present invention will now be described in more detail.
The present invention relates to an immunochromatographic kit for detecting a test substance in a sample, and the immunochromatographic kit comprises
a test strip comprising a membrane on which a specific binding substance for capturing the test substance is immobilized;
a gold-coated silver nanoplate having a silver nanoplate as a core and a gold layer covering the silver nanoplate, and carrying a specific binding substance for detecting the test substance;
contains.
本明細書に記載の「銀ナノプレート」とは、銀から製造されたナノメートル（ｎｍ）オーダーの大きさを持つプレート（板）状粒子のことをいい、主平面となる上面及び下面、並びに、当該上面及び下面の間の端面（側面）を備えており、この端面は平面であっても曲面であってもよく、角が丸まっていてもよい。前記銀ナノプレートの上面と下面の形状は、特に制限されないが、例えば、三角形、四角形、五角形、六角形などの多角形（角が丸みを帯びた形状を含む）又は円形などであってもよい。前記金被覆銀ナノプレートにおいては、前記銀ナノプレートの主平面及び端面に前記金層が形成されており、いわゆる銀ナノプレートと金層のコアシェル構造が形成されている。 The term “silver nanoplates” as used herein refers to plate-shaped particles having a nanometer (nm) order size made of silver, and the top and bottom surfaces serving as main planes, and , an end surface (side surface) between the upper and lower surfaces, which may be flat or curved and may have rounded corners. The shape of the upper surface and the lower surface of the silver nanoplate is not particularly limited, but may be, for example, a polygonal shape such as a triangle, a square, a pentagon, a hexagon (including a shape with rounded corners), or a circle. . In the gold-coated silver nanoplates, the gold layers are formed on the main planes and end faces of the silver nanoplates, forming a so-called core-shell structure of the silver nanoplates and the gold layers.
前記銀ナノプレートの主平面の最大長径を粒子径といい、これは、例えば円形の場合は直径に相当し、三角形の場合は最大辺の長さに相当する。前記銀ナノプレートの上面と下面で最大長径が異なる場合には、長い方をその銀ナノプレートの最大長径とする。本発明の懸濁液に使用される銀ナノプレートの平均粒子径の上限値は、特に制限されないが、例えば、約５５ｎｍ以下であってもよく、好ましくは約５０ｎｍ以下、約４０ｎｍ以下、又は約３０ｎｍ以下である。前記銀ナノプレートの平均粒子径の下限値も、特に制限されないが、例えば、約１ｎｍ以上であってもよく、好ましくは約１０ｎｍ以上である。また、前記銀ナノプレートの平均厚さは、特に制限されないが、例えば、約２０ｎｍ以下であってもよく、好ましくは約３～約１５ｎｍである。なお、前記銀ナノプレートの粒子径及び厚さは、例えば、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察、走査透過電子顕微鏡（ＳＴＥＭ）観察、又は透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）観察を行って計測してもよく、粒子径に関しては動的光散乱式粒度分布測定装置（ＤＬＳ）で測定してもよい。ＳＥＭ観察写真、ＳＴＥＭ観察写真、又はＴＥＭ観察写真を用いて前記銀ナノプレートの粒子径を計測する場合には、任意の銀ナノプレート１００個の粒子径を計測した合計１００点のデータから、上下１０％を除いた８０点のデータを用意し、それらの平均値を求めることによって平均粒子径を算出してもよい。 The maximum major axis of the principal plane of the silver nanoplate is referred to as the particle diameter, which corresponds to, for example, the diameter in the case of a circle and the length of the maximum side in the case of a triangle. When the maximum length is different between the top surface and the bottom surface of the silver nanoplate, the longer one is taken as the maximum length of the silver nanoplate. The upper limit of the average particle size of the silver nanoplates used in the suspension of the present invention is not particularly limited. 30 nm or less. The lower limit of the average particle size of the silver nanoplates is also not particularly limited, but may be, for example, about 1 nm or more, preferably about 10 nm or more. The average thickness of the silver nanoplates is not particularly limited, but may be, for example, about 20 nm or less, preferably about 3 to about 15 nm. The particle size and thickness of the silver nanoplates may be measured by, for example, scanning electron microscope (SEM) observation, scanning transmission electron microscope (STEM) observation, or transmission electron microscope (TEM) observation. , the particle size may be measured with a dynamic light scattering particle size distribution analyzer (DLS). When measuring the particle diameter of the silver nanoplates using SEM observation photographs, STEM observation photographs, or TEM observation photographs, from a total of 100 points of data obtained by measuring the particle diameters of 100 arbitrary silver nanoplates, the upper and lower The average particle size may be calculated by preparing 80 points of data excluding 10% and calculating the average value thereof.
最大長径対それを含む面に直交する軸の幅の比、すなわち「最大長径／厚さ」で定義される指数を「アスペクト比」といい、これはナノプレートの形状を表すための指標の１つとして用いることができる。銀ナノプレートの形状が変わると、その極大吸収波長の位置も変化するので、銀ナノプレートのアスペクトは、極大吸収波長の指標ともいえる。本発明の懸濁液においては、前記銀ナノプレートのアスペクト比は、特に制限されないが、例えば、約１より大きくてもよく、好ましくは約１．５～約１０である。アスペクト比がこのような範囲にあると、水懸濁液中における表面プラズモン共鳴による極大吸収波長を可視光領域に調節しやすい。 The ratio of the maximum major axis to the width of the axis perpendicular to the plane containing it, that is, the index defined by "maximum major axis/thickness" is called the "aspect ratio", which is one of the indices for expressing the shape of the nanoplate. can be used as one Since the position of the maximum absorption wavelength also changes when the shape of the silver nanoplate changes, the aspect of the silver nanoplate can also be said to be an index of the maximum absorption wavelength. In the suspension of the present invention, the aspect ratio of the silver nanoplates is not particularly limited, but may be greater than about 1, preferably about 1.5 to about 10. When the aspect ratio is within this range, it is easy to adjust the maximum absorption wavelength due to surface plasmon resonance in the water suspension to the visible light region.
本発明のイムノクロマトキットにおいて、前記金被覆銀ナノプレートの金層の平均厚みは、従来のイムノクロマトキットに使用されていたものよりも厚く、特に端面において約１．０ｎｍ超である。金層の厚い金被覆銀ナノプレートは、酸化耐性が高いため保存安定性が高く、調製後にすぐに使用しないイムノクロマトキットの形態としても、被験物質を良好な感度で検出することができる。ある態様では、前記金被覆銀ナノプレートの金層の平均厚みは、約１．５ｎｍ～約１０．０ｎｍである。前記金層の厚さがこのような範囲であると、前記銀ナノプレートの光学特性を維持しつつ、当該銀ナノプレートの酸化をより効果的に抑制することができる。 In the immunochromatography kit of the present invention, the average thickness of the gold layer of the gold-coated silver nanoplates is thicker than that used in conventional immunochromatography kits, especially greater than about 1.0 nm at the end faces. Gold-coated silver nanoplates with a thick gold layer are highly resistant to oxidation and have high storage stability. Even in the form of immunochromatographic kits that are not used immediately after preparation, test substances can be detected with good sensitivity. In one aspect, the average thickness of the gold layer of the gold-coated silver nanoplates is from about 1.5 nm to about 10.0 nm. When the thickness of the gold layer is within this range, it is possible to more effectively suppress oxidation of the silver nanoplates while maintaining the optical properties of the silver nanoplates.
前記端面での前記金層の厚みは、高角散乱環状暗視野走査透過顕微鏡（ＨＡＡＤＦ－ＳＴＥＭ）を用いて測定することができる。具体的には、ＨＡＡＤＦ－ＳＴＥＭ観察写真から選択した任意の粒子１０個について、各粒子の任意の端部１０点で金の厚さを測定した合計１００点のデータから、上下１０％を除いた８０点のデータを用意し、それらの平均値を求めることによって平均厚み（Ｔ）を算出してもよい。 The thickness of the gold layer at the edge can be measured using a high angle scattering annular dark field scanning transmission microscope (HAADF-STEM). Specifically, for 10 arbitrary particles selected from the HAADF-STEM observation photograph, the thickness of gold was measured at 10 arbitrary end points of each particle. The average thickness (T) may be calculated by preparing 80 points of data and calculating the average value thereof.
また、前記端面での前記金層の厚みは、透過走査顕微鏡を用いて測定した金被覆前後の銀ナノプレートの大きさから算出することもできる。例えば、銀ナノプレートの主平面の形状が円形状の場合には、金被覆前の平均粒子径（ａ）及び金被覆後の平均粒子径（ｂ）を測定し、以下の式：
Ｔ＝（ｂ－ａ）／２
によって平均厚み（Ｔ）を算出することができる。銀ナノプレートの主平面の形状が正三角形状の場合には、金被覆前の正三角形の平均高さ（ｃ）及び金被覆後の正三角形の平均高さ（ｄ）を測定し、以下の式：
Ｔ＝（ｄ－ｃ）／３
によって平均厚み（Ｔ）を算出することができる。
In addition, the thickness of the gold layer on the end face can also be calculated from the size of the silver nanoplate before and after coating with gold measured using a transmission scanning microscope. For example, when the shape of the main plane of the silver nanoplate is circular, the average particle size (a) before gold coating and the average particle size (b) after gold coating are measured, and the following formula:
T=(ba)/2
The average thickness (T) can be calculated by When the shape of the main plane of the silver nanoplate is an equilateral triangle, the average height (c) of the equilateral triangles before the gold coating and the average height (d) of the equilateral triangles after the gold coating are measured, and the following formula:
T=(dc)/3
The average thickness (T) can be calculated by
本発明の懸濁液が呈する色調は、コアとなる銀ナノプレートの大きさ及び／又は形状と金層の厚さを調整し、前記金被覆銀ナノプレートの極大吸収波長を変化させることによって調整することが可能である。すなわち、前記銀ナノプレートの大きさ及び形状は、その後の金被覆による極大吸収波長の変化を考慮し、本発明の懸濁液が可視光領域に極大吸収波長を有するように調整されている。ある態様では、前記極大吸収波長は、約４００ｎｍ～約６８０ｎｍに存在している。 The color tone exhibited by the suspension of the present invention can be adjusted by adjusting the size and/or shape of the core silver nanoplates and the thickness of the gold layer to change the maximum absorption wavelength of the gold-coated silver nanoplates. It is possible to That is, the size and shape of the silver nanoplates are adjusted so that the suspension of the present invention has a maximum absorption wavelength in the visible light region, considering the subsequent change in the maximum absorption wavelength due to gold coating. In one aspect, the maximum absorption wavelength is between about 400 nm and about 680 nm.
ある態様では、本発明のイムノクロマトキットにおいて、前記金被覆銀ナノプレートは、乾燥状態で含まれている。前記金被覆銀ナノプレートを乾燥する方法は、特に制限されないが、例えば、前記金被覆銀ナノプレートを常温減圧下で乾燥させてもいいし、凍結乾燥によって乾燥させてもよい。本発明で用いられる金被覆銀ナノプレートは、金層が厚く酸化耐性が高いため、このような形態とすることが可能となる。 In one aspect, in the immunochromatography kit of the present invention, the gold-coated silver nanoplates are contained in a dry state. The method for drying the gold-coated silver nanoplates is not particularly limited. For example, the gold-coated silver nanoplates may be dried under normal temperature and reduced pressure, or may be dried by freeze-drying. Since the gold-coated silver nanoplates used in the present invention have a thick gold layer and high resistance to oxidation, such a form is possible.
ある態様では、前記銀ナノプレートの平均粒子径（Ｄ）に対する前記端面での前記金層の平均厚み（Ｔ）の比率（Ｔ／Ｄ）が、約０．０５以上、好ましくは約０．１以上であり、さらに好ましくは約０．１６以上となるように形成されている。すなわち、前記金被覆銀ナノプレートは、粒子径が小さい割に厚い金層を有するものであってもよい。粒子径が小さい金被覆銀ナノプレートは可視光領域に極大吸収波長を有するため、イムノクロマトグラフィーなどの目視判定を必要とする被験物質の検出方法のマルチカラー化を図ることができる。ある態様では、Ｔ／Ｄは、約０．５以下、約０．４以下、又は約０．３以下であってもよい。 In one aspect, the ratio (T/D) of the average thickness (T) of the gold layer at the end face to the average particle diameter (D) of the silver nanoplates is about 0.05 or more, preferably about 0.1. or more, and more preferably about 0.16 or more. That is, the gold-coated silver nanoplates may have a thick gold layer for a small particle size. Since gold-coated silver nanoplates with small particle sizes have maximum absorption wavelengths in the visible light region, multi-color detection methods for test substances that require visual judgment, such as immunochromatography, can be achieved. In some aspects, T/D may be less than or equal to about 0.5, less than or equal to about 0.4, or less than or equal to about 0.3.
ある態様では、前記金被覆銀ナノプレートは、可視光領域に極大吸収波長を有し、前記金被覆銀ナノプレートの波長９００ｎｍにおける消光度（Ｅ900）に対する前記極大吸収波長における消光度（Ｅmax）の比率（Ｅmax／Ｅ900）は、約５以上であってもよく、好ましくは約１０以上である。すなわち、前記金被覆銀ナノプレートは、シャープな分光スペクトルを示すが、これは粒子径の均一性が高いためである。そのため、前記金被覆銀ナノプレートの色彩は鮮やかであり、彩度が高い。 In one aspect, the gold-coated silver nanoplates have a maximum absorption wavelength in the visible light region, and the extinction at the maximum absorption wavelength (E max ) ratio (E max /E 900 ) may be about 5 or more, preferably about 10 or more. That is, the gold-coated silver nanoplates exhibit a sharp spectral spectrum, which is due to the high uniformity of particle size. Therefore, the colors of the gold-coated silver nanoplates are vivid and highly saturated.
本発明のイムノクロマトキット中の金被覆銀ナノプレートを調製するための銀ナノプレートとしては、当技術分野で通常使用されるものを特に制限されることなく採用することができ、例えば、市販品を用いてもよく、公知の製造方法や後述の実施例に記載の方法に従って製造したものを用いてもよい。なお、上記特定の態様で言及した粒子径が小さい割に厚い金層を有する金被覆銀ナノプレートを製造する場合には、コアの銀ナノプレートからの銀の溶出や当該銀ナノプレートの酸化、及び成長した金層による凝集塊の形成などに注意する。例えば、前記金層を形成する際に使用する被覆混合液（前記銀ナノプレート、金含有水溶性化合物、及び金イオンの錯化剤を含む）において、銀濃度（ＣAg）が約０．２５ｍＭ以下であり、金濃度（ＣAu）が約０．１ｍＭ以上であり、かつＣAgに対するＣAuの比率（ＣAu／ＣAg）が約０．５０以上となるように銀濃度及び金濃度を調整して、当該被覆混合液を所定の時間静置すれば、粒子径が小さい割に厚い金層を有する金被覆銀ナノプレートを効率よく安定に作製することができる。より詳細には特願２０２０－１４９０８７号の明細書を参照されたい。 As the silver nanoplates for preparing the gold-coated silver nanoplates in the immunochromatography kit of the present invention, those commonly used in the art can be employed without particular limitation. You may use what was manufactured according to the well-known manufacturing method or the method described in the Example mentioned later. In addition, in the case of producing gold-coated silver nanoplates having a thick gold layer with a small particle size mentioned in the above specific embodiment, elution of silver from the core silver nanoplates, oxidation of the silver nanoplates, Also, pay attention to the formation of agglomerates due to the grown gold layer. For example, the coating mixture (containing the silver nanoplates, the gold-containing water-soluble compound, and the gold ion complexing agent) used to form the gold layer has a silver concentration (C Ag ) of about 0.25 mM. The silver concentration and the gold concentration are adjusted so that the gold concentration (C Au ) is about 0.1 mM or more and the ratio of C Au to C Ag (C Au /C Ag ) is about 0.50 or more. By adjusting and allowing the coating mixed solution to stand still for a predetermined time, it is possible to efficiently and stably produce a gold-coated silver nanoplate having a thick gold layer in spite of its small particle size. For more details, please refer to the specification of Japanese Patent Application No. 2020-149087.
本発明のイムノクロマトキット中の金被覆銀ナノプレートは、前記被験物質の検出用特異的結合物質を担持している。本明細書に記載の「担持」とは、共有結合若しくは非共有結合又は直接的若しくは間接的な結合などの様式にかかわらず、前記金被覆銀ナノプレートと前記検出用特異的結合物質とが結合して複合体を形成していることを意味している。担持の方法としては、通常の担持方法を特に制限なく用いることができ、物理吸着、化学吸着（表面への共有結合）、化学結合（共有結合、配位結合、イオン結合又は金属結合）等を利用して、前記金被覆銀ナノプレートと前記検出用特異的結合物質とを直接的に結合させる方法や、前記金被覆銀ナノプレートの表面に水溶性高分子の一部を結合させて、その水溶性高分子の末端又は主鎖若しくは側鎖に、直接的又は間接的に前記検出用特異的結合物質を結合させる方法を採用することができる。例えば、前記検出用特異的結合物質が抗体である場合には、前記金被覆銀ナノプレートと抗体の溶液とを混合し、振盪し、遠心分離することで、抗体を担持した金被覆銀ナノプレート（標識された検出試薬）を沈殿物として得ることができる。また、前記金被覆銀ナノプレートと抗体とを静電吸着により担持させる場合、マイナス電荷を有するポリスチレンスルホン酸で前記金被覆銀ナノプレート表面を被覆すると、前記抗体の担持効率が向上し得る。 The gold-coated silver nanoplate in the immunochromatographic kit of the present invention carries a specific binding substance for detection of the test substance. The term “support” as used herein means that the gold-coated silver nanoplate and the specific binding substance for detection bind to each other, regardless of the manner of covalent binding or non-covalent binding or direct or indirect binding. It means that a complex is formed by As a method for supporting, a normal supporting method can be used without particular limitation, and physical adsorption, chemical adsorption (covalent bond to the surface), chemical bond (covalent bond, coordinate bond, ionic bond or metal bond), etc. can be used. A method of directly binding the gold-coated silver nanoplates and the specific binding substance for detection using A method of binding the specific binding substance for detection directly or indirectly to the end, main chain, or side chain of the water-soluble polymer can be employed. For example, when the specific binding substance for detection is an antibody, the gold-coated silver nanoplate and the antibody solution are mixed, shaken, and centrifuged to obtain an antibody-supporting gold-coated silver nanoplate. (labeled detection reagent) can be obtained as a precipitate. In addition, when the gold-coated silver nanoplate and the antibody are supported by electrostatic adsorption, the efficiency of supporting the antibody can be improved by coating the surface of the gold-coated silver nanoplate with polystyrene sulfonic acid having a negative charge.
前記捕捉用特異的結合物質又は前記検出用特異的結合物質（総称して「被験物質に対する特異的結合物質」などということもある。）としては、検出の対象である被験物質と複合体を形成できるものであって、前記金被覆銀ナノプレートを標識として利用することができるものであれば、特に制限なく用いることができる。被験物質と被験物質に対する特異的結合物質との組み合わせの具体例としては、抗原とそれに結合する抗体、抗体とそれに結合する抗原、糖鎖又は複合糖質とそれに結合するレクチン、レクチンとそれに結合する糖鎖又は複合糖質、ホルモン又はサイトカインとそれに結合する受容体、受容体とそれに結合するホルモン又はサイトカイン、タンパク質とそれに結合する核酸アプタマー若しくはペプチドアプタマー、酵素とそれに結合する基質、基質とそれに結合する酵素、ビオチンとアビジン又はストレプトアビジン、アビジン又はストレプトアビジンとビオチン、ＩｇＧとプロテインＡ又はプロテインＧ、プロテインＡ又はプロテインＧとＩｇＧ、T細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子４（Ｔｉｍ４）とホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＰＳとＴｉｍ４、あるいは、第１の核酸とそれに結合する（ハイブリダイズする）第２の核酸等があげられる。前記第２の核酸は、前記第１の核酸と相補的な配列を含む核酸であってもよい。 The specific binding substance for capture or the specific binding substance for detection (generally referred to as "a specific binding substance for the test substance") is a Any label can be used without any particular limitation as long as the gold-coated silver nanoplate can be used as a label. Specific examples of the combination of a test substance and a substance that specifically binds to the test substance include an antigen and an antibody that binds thereto, an antibody that binds to an antigen, a sugar chain or complex carbohydrate that binds to a lectin, and a lectin that binds to it. sugar chain or glycoconjugate, hormone or cytokine and receptor binding thereto, receptor and hormone or cytokine binding thereto, protein and nucleic acid aptamer or peptide aptamer binding thereto, enzyme and substrate binding thereto, substrate binding thereto Enzymes, biotin and avidin or streptavidin, avidin or streptavidin and biotin, IgG and protein A or protein G, protein A or protein G and IgG, T-cell immunoglobulin mucin domain-containing molecule 4 (Tim4) and phosphatidylserine (PS ), PS and Tim4, or a first nucleic acid and a second nucleic acid that binds (hybridizes) thereto. The second nucleic acid may be a nucleic acid containing a sequence complementary to the first nucleic acid.
被験物質が抗原である場合には、該抗原に対する特異的結合物質は抗体であってもよい。前記抗体は、前記抗原に対して特異的に結合するポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体又はそれらの断片であってもよく、該断片は、Ｆ（ａｂ）フラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント又はＦ（ｖ）フラグメントであってもよい。被験物質としての抗原は、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、麦芽アグルチニン及びリシンなどのレクチンであってもよく、インフルエンザウイルス、コロナウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、ロタウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス及びＢ型肝炎ウイルス、ジカウイルス、デングウイルスなどのウイルス又はそれらが有する物質（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス抗原（ＨＢｓ抗原）又はインフルエンザウイルスのヘマグルチニン）であってもよく、アスペルギルス・フラバス、クラミジア、梅毒トレポネーマ、溶連菌、炭疽菌、黄色ブドウ球菌、赤痢菌、大腸菌、サルモネラ菌、ネズミチフス菌、パラチフス菌、緑膿菌及び腸炎ビブリオ菌などの病原性微生物又はそれらが有する物質（例えば、アスペルギルス・フラバスのアフラトキシン（Ｂ１、Ｂ２、Ｇ１、Ｇ２又はＭ１など）、腸管出血性大腸菌のベロ毒素又は溶連菌のストレプトリジンＯ）であってもよく、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、リウマチ因子及びＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）などの血中タンパク質であってもよく、ムチンなどの糖タンパク質であってもよく、インスリン、下垂体ホルモン（例えば、成長ホルモン（ＧＨ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、プロラクチン、又はメラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ））、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、甲状腺ホルモン（例えば、ジヨードサイロニン又はトリヨードサイロニン）、絨毛性ゴナドトロピン、カルシウム代謝調節ホルモン（例えば、カルシトニン又はパラトルモン）、膵ホルモン、消化管ホルモン、血管作動性腸管ペプチド、卵胞ホルモン（例えば、エストロン）、天然又は合成黄体ホルモン（例えば、プロゲステロン）、男性ホルモン（例えば、テストステロン）、及び副腎皮質ホルモン（例えば、コルチゾール）などのホルモンであってもよく、セロトニン、ウロキナーゼ、フェリチン、サブスタンＰ、プロスタグランジン及びコレステロールなどのその他生体内物質であってもよく、前立腺性酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、アルカリ性フォスファターゼ、トランスアミナーゼ、トリプシン、ペプシノーゲン、α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）及び癌胎児性抗原（ＣＥＡ）などの腫瘍マーカーであってもよく、血液型抗原などの糖鎖抗原であってもよく、ヘモグロビン及びトランスフェリンなどの便潜血の検出に用いられるマーカーであってもよく、血液凝固・線溶系において活性型第ＸＩＩＩ因子作用によりクロスリンクを受けた安定化フィブリンがプラスミンによって分解されたフィブリン分解産物の一種であるＤダイマーであってもよく、細胞外小胞が有するタンパク質や核酸であってもよい。そして、被験物質である抗原がホルモン又はサイトカインなどの生体内物質である場合には、該生体内物質に対する特異的結合物質は、抗体だけでなく受容体であってもよく、被験物質である抗原が糖鎖又は糖鎖を有する複合糖質である場合には、該糖鎖又は糖鎖を有する複合糖質に対する特異的結合物質は、抗体だけでなくレクチンであってもよい。また、被験物質としての抗原は、ペニシリン及びカドミウムなどのハプテンであってもよい。 When the test substance is an antigen, the specific binding substance for the antigen may be an antibody. The antibody may be a polyclonal antibody, a monoclonal antibody, a single-chain antibody, or a fragment thereof that specifically binds to the antigen, and the fragment is an F(ab) fragment, an F(ab') fragment, It may be an F(ab') 2 fragment or an F(v) fragment. Antigens as test substances may be lectins such as concanavalin A (ConA), malt agglutinin and ricin, influenza virus, coronavirus, adenovirus, respiratory syncytial virus, rotavirus, human papillomavirus, human immunodeficiency virus and B Viruses such as hepatitis virus, Zika virus, dengue virus, or substances possessed by them (for example, hepatitis B virus antigen (HBs antigen) or influenza virus hemagglutinin), Aspergillus flavus, Chlamydia, Treponema pallidum, Streptococcus , Anthrax, Staphylococcus aureus, Shigella, Escherichia coli, Salmonella, Salmonella, Salmonella, Salmonella typhimurium, Paratyphi, Pseudomonas aeruginosa and Vibrio parahaemolyticus, or substances possessed by them (e.g., Aspergillus flavus aflatoxin (B1, B2 , G1, G2 or M1), verotoxin of enterohemorrhagic Escherichia coli or streptolysin O of strep throat); It may be a protein, it may be a glycoprotein such as mucin, insulin, pituitary hormones (e.g. growth hormone (GH), adrenocorticotropic hormone (ACTH), thyroid stimulating hormone (TSH), follicle stimulating hormone). (FSH), luteinizing hormone (LH), prolactin, or melanocyte-stimulating hormone (MSH)), thyrotropin-releasing hormone (TRH), thyroid hormones (e.g., diiodothyronine or triiodothyronine), chorionic Gonadotropins, calcium metabolism regulating hormones (e.g. calcitonin or parathormone), pancreatic hormones, gastrointestinal hormones, vasoactive intestinal peptides, follicular hormones (e.g. estrone), natural or synthetic progestins (e.g. progesterone), androgenic hormones (e.g. , testosterone), and adrenocortical hormones (e.g., cortisol); other biosubstances such as serotonin, urokinase, ferritin, substance P, prostaglandins and cholesterol; Tumor markers such as acid phosphatase (PAP), prostate specific antigen (PSA), alkaline phosphatase, transaminase, trypsin, pepsinogen, α-fetoprotein (AFP) and carcinoembryonic antigen (CEA), blood It may be a sugar chain antigen such as a liquid antigen, or a marker used for detecting fecal occult blood such as hemoglobin and transferrin, which is cross-linked by the action of activated factor XIII in the blood coagulation/fibrinolysis system. The stabilized fibrin may be a D-dimer, which is a kind of fibrin degradation product degraded by plasmin, or may be a protein or nucleic acid possessed by extracellular vesicles. When the test substance antigen is an in vivo substance such as a hormone or cytokine, the specific binding substance for the in vivo substance may be not only an antibody but also a receptor. When is a sugar chain or a glycoconjugate having a sugar chain, the specific binding substance for the sugar chain or a glycoconjugate having a sugar chain may be not only an antibody but also a lectin. Antigens as test substances may also be haptens such as penicillin and cadmium.
被験物質が抗体である場合には、該抗体に対する特異的結合物質は抗原であってもよい。前記抗原は、前記抗体に対して特異的に結合する抗原全体又はその断片であってもよく、それらを他の担体と結合した融合物質であってもよい。被験物質としての抗体は、抗環状シトルリン化ペプチド（ＣＣＰ）抗体又は抗リン脂質抗体などの自己抗体であってもよく、抗クラミジア抗体、抗ＨＩＶ抗体又は抗ＨＣＶ抗体などの外来抗原に対する抗体であってもよい。 When the test substance is an antibody, the specific binding substance for the antibody may be an antigen. The antigen may be a whole antigen that specifically binds to the antibody, a fragment thereof, or a fusion substance in which they are bound to another carrier. An antibody as a test substance may be an autoantibody such as an anti-cyclic citrullinated peptide (CCP) antibody or an anti-phospholipid antibody, or an antibody against a foreign antigen such as an anti-Chlamydia antibody, an anti-HIV antibody or an anti-HCV antibody. may
被験物質が糖鎖である場合には、該糖鎖に対する特異的結合物質はレクチンであってもよい。前記レクチンは、前記糖鎖に特異的に結合するガレクチン、Ｃ型レクチン、マメ科レクチン又はそれらの断片であってもよい。被験物質としての糖鎖は、単糖又は多糖であってもよく、それらがタンパク質又は脂質に結合した複合糖質であってもよい。例えば、被験物質がマンノースを含む糖鎖である場合には、該糖鎖に対する特異的結合物質としてマメ科レクチンのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を使用することができる。 When the test substance is a sugar chain, the substance that specifically binds to the sugar chain may be a lectin. The lectin may be a galectin, a C-type lectin, a legume lectin, or a fragment thereof that specifically binds to the sugar chain. A sugar chain as a test substance may be a monosaccharide or a polysaccharide, or a glycoconjugate in which they are bound to a protein or lipid. For example, when the test substance is a sugar chain containing mannose, concanavalin A (ConA), a legume lectin, can be used as a specific binding substance for the sugar chain.
被験物質がレクチンである場合には、該レクチンに対する特異的結合物質は糖鎖であってもよい。前記糖鎖は、前記レクチンに特異的に結合する単糖、多糖、複合糖質又はそれらが他の担体と結合した融合物質であってもよい。被験物質としてのレクチンは、ガレクチン、Ｃ型レクチン又はマメ科レクチンであってもよい。例えば、被験物質がマメ科レクチンのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）である場合には、該レクチンに対する特異的結合物質としてマンノースを含む糖鎖を使用することができる。 When the test substance is a lectin, the substance that specifically binds to the lectin may be a sugar chain. The sugar chain may be a monosaccharide, polysaccharide, glycoconjugate that specifically binds to the lectin, or a fusion substance in which these are bound to another carrier. A lectin as a test substance may be a galectin, a C-type lectin or a legume lectin. For example, when the test substance is concanavalin A (ConA), a leguminous lectin, a sugar chain containing mannose can be used as a specific binding substance for the lectin.
被験物質と被験物質に対する特異的結合物質との組み合わせが、タンパク質とそれに結合する核酸アプタマー若しくはペプチドアプタマーである場合には、核酸アプタマーは、例えば、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、Ｄ群赤痢菌・ソンネ赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、溶連菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、パラチフス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ａ）、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ Ｂ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、腸炎ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）等の細菌、ムチン１等の上皮の細胞表面に表れる腫瘍マーカー、若しくはβ－ガラクトシダーゼやトロンビン等の酵素等と結合するＤＮＡアプタマー、又は、ヒト免疫不全ウイルスのＴａｔタンパク質やＲｅｖタンパク質と結合するＲＮＡアプタマーであってもよく、ペプチドアプタマーは、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）の腫瘍性タンパク質ＨＰＶ１６ Ｅ６と結合するペプチドアプタマーであってもよい。 When the combination of the test substance and the specific binding substance for the test substance is a protein and a nucleic acid aptamer or peptide aptamer that binds thereto, the nucleic acid aptamer is, for example, Bacillus anthracis, Staphylococcus aureus ）、Ｄ群赤痢菌・ソンネ赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、溶連菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、パラチフス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ａ）、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ Ｂ） , Pseudomonas aeruginosa, bacteria such as Vibrio parahaemolyticus, tumor markers appearing on the cell surface of the epithelium such as mucin 1, or DNA aptamers that bind to enzymes such as β-galactosidase and thrombin, or It may be an RNA aptamer that binds to Tat protein or Rev protein of human immunodeficiency virus, and a peptide aptamer may be, for example, a peptide aptamer that binds to oncoprotein HPV16 E6 of human papillomavirus (HPV).
被験物質がビタミン類である場合には、該ビタミン類に対する特異的結合物質は、ビタミンＤと結合するトランスカルシフェリン及びビタミンＢ１２と結合するトランスコバラミンなどのビタミン結合タンパク質であってもよい。被験物質が抗生物質である場合には、該抗生物質に対する特異的結合物質は、ペニシリンに結合するＰＢＰ１及びＰＢＰ２などのペニシリン結合タンパクであってもよい。 When the test substance is a vitamin, the specific binding substance for the vitamin may be a vitamin-binding protein such as transcalciferin that binds to vitamin D and transcobalamin that binds to vitamin B12. When the test substance is an antibiotic, the specific binding substance for the antibiotic may be penicillin-binding proteins such as PBP1 and PBP2 that bind to penicillin.
被験物質又は被験物質に結合する物質としての核酸は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、又は、それらの増幅物であってもよい。 Nucleic acids as test substances or substances that bind to test substances may be, for example, DNA, RNA, oligonucleotides, polynucleotides, or amplified products thereof.
ある態様では、前記試料が、複数種類の被験物質を含んでおり、
前記メンブレン上に、前記複数種類の被験物質それぞれに対する捕捉用特異的結合物質が固定されており、
前記金被覆銀ナノプレートが、前記複数種類の被験物質それぞれに対する検出用特異的結合物質を担持している。すなわち、本発明のイムノクロマトキットによって、複数種類の被験物質を同時に検出することが可能である。この場合、前記捕捉用特異的結合物質は、結合する被験物質の種類ごとに異なる部位に固定されていてよい。また、前記検出用特異的結合物質は、結合する被験物質の種類ごとに異なる極大吸収波長の金被覆銀ナノプレートに担持されていてもよい。このようにすると、検出する被験物質ごとに異なる場所で又は異なる色で着色が観察されるため、前記被験物質の検出が容易になる。
In one embodiment, the sample contains multiple types of test substances,
a capture specific binding substance for each of the plurality of types of test substances is immobilized on the membrane;
The gold-coated silver nanoplates carry detection specific binding substances for each of the plurality of types of test substances. In other words, the immunochromatographic kit of the present invention enables simultaneous detection of multiple types of test substances. In this case, the specific binding substance for capture may be immobilized at different sites depending on the type of test substance to which it binds. Moreover, the specific binding substance for detection may be carried on a gold-coated silver nanoplate having a different maximum absorption wavelength for each type of test substance to which it binds. In this way, coloration is observed at different locations or with different colors depending on the test substance to be detected, thereby facilitating the detection of the test substance.
特定の態様では、前記被験物質が、インフルエンザウイルス抗原及びコロナウイルス抗原からなる群から選択される少なくとも１種を含む。前記インフルエンザウイルス抗原は、特に限定されないが、例えば、Ａ型インフルエンザウイルス抗原及び／又はＢ型インフルエンザウイルス抗原を含んでもよい。前記コロナウイルス抗原は、特に限定されないが、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原を含んでもよい。 In a specific aspect, the test substance contains at least one selected from the group consisting of influenza virus antigens and coronavirus antigens. The influenza virus antigen is not particularly limited, but may include, for example, an influenza A virus antigen and/or an influenza B virus antigen. The coronavirus antigens may include, but are not limited to, SARS-CoV antigens and/or SARS-CoV-2 antigens, for example.
ある態様では、前記テストストリップが、前記金被覆銀ナノプレートを含むコンジュゲートパットを含んでいる。本明細書に記載の「コンジュゲートパッド」とは、前記金被覆銀ナノプレートが含侵している部位であり、ここへ前記試料を添加すると、前記金被覆銀ナノプレートが溶出し、前記メンブレン上での展開（流動）を開始するように構成されている。前記コンジュゲートパッドは、当技術分野で通常使用される任意の方法によって作製することができる。 In one aspect, the test strip comprises a conjugate pad comprising the gold-coated silver nanoplates. The “conjugate pad” described in this specification is a site impregnated with the gold-coated silver nanoplates, and when the sample is added thereto, the gold-coated silver nanoplates are eluted, and on the membrane is configured to initiate deployment (flow) at The conjugate pad can be made by any method commonly used in the art.
ある態様では、前記メンブレンが、イムノクロマトグラフィー試験の成否を判定するコントロール部位をさらに備えている。前記コントロール部位は、特に限定されないが、例えば、前記検出用特異的結合物質を捕捉することのできる抗体などの物質を固定したコントロールラインであってもよい。特定の態様では、本発明のイムノクロマトキットは、前記コントロール部位に特異的に結合するコントロール特異的結合物質をさらに含んでいる。前記コントロール特異的結合物質は、前記金被覆銀ナノプレートと一緒に、前記コンジュゲートパッドに含まれていてもよい。また、ブロッキング溶液又は洗浄溶液への浸漬中又はこれらの溶液の展開中や、前記試料の展開中に、前記捕捉用特異的結合物質が前記メンブレンから流出し、前記コントロール部位に到達することがあることを考慮すると、前記コントロール部位における判定を妨げないようにするためには、前記コントロール特異的結合物質は、前記検出用特異的結合物質だけでなく前記捕捉用特異的結合物質とも前記コントロール部位において競合しないものであることが好ましい。例えば、前記コントロール特異的結合物質が抗体を含み、かつ前記捕捉用特異的結合物質が抗体を含む場合には、前記コントロール特異的結合物質の抗体としては、前記捕捉用特異的結合物質の抗体とは異なる宿主動物に由来しているものを採用してもよい。 In one aspect, the membrane further comprises a control site for determining the success or failure of an immunochromatography test. The control site is not particularly limited, but may be, for example, a control line on which a substance such as an antibody capable of capturing the specific binding substance for detection is immobilized. In certain aspects, the immunochromatographic kit of the present invention further comprises a control specific binding substance that specifically binds to the control site. The control specific binding substance may be included in the conjugate pad along with the gold-coated silver nanoplates. In addition, during immersion in a blocking solution or washing solution, during development of these solutions, or during development of the sample, the specific binding substance for capture may flow out of the membrane and reach the control site. Considering that, in order not to interfere with the determination at the control site, the control specific binding substance should be used not only with the detection specific binding substance but also with the capture specific binding substance at the control site. It is preferably non-competitive. For example, when the control specific binding substance contains an antibody and the capture specific binding substance contains an antibody, the antibody of the control specific binding substance includes the antibody of the capture specific binding substance. may be derived from different host animals.
ある態様では、本発明のイムノクロマトキットは、前記金被覆銀ナノプレート以外のナノ粒子をさらに含む。特に、前記ナノ粒子として前記金被覆銀ナノプレートとは異なる色を呈するものを採用することにより、検出部位及び／又はコントロール部位において着色できる色の選択肢を広げることができる。前記ナノ粒子としては、イムノクロマトグラフィー試験に使用することができる限り特に制限されないが、例えば、金ナノ粒子及びパラジウム被覆金ナノ粒子などであってもよい。 In one aspect, the immunochromatographic kit of the present invention further comprises nanoparticles other than the gold-coated silver nanoplates. In particular, by employing nanoparticles exhibiting colors different from those of the gold-coated silver nanoplates, it is possible to expand the options of colors that can be colored at the detection site and/or the control site. The nanoparticles are not particularly limited as long as they can be used in immunochromatographic tests, and may be, for example, gold nanoparticles and palladium-coated gold nanoparticles.
本発明のイムノクロマトキットは、本発明の目的を損なわない限り、当技術分野で通常使用される任意の構成をさらに備えてもよい。例えば、前記イムノクロマトキットは、被験物質の標準品、緩衝液、又は、使用方法を記載した取扱説明書などをさらに含んでもよい。 The immunochromatographic kit of the present invention may further comprise any configuration commonly used in the art, as long as it does not impair the purpose of the present invention. For example, the immunochromatography kit may further include a standard product of the test substance, a buffer solution, or an instruction manual describing the method of use.
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明の範囲はこれら実施例に限定されるものではない。 EXAMPLES The present invention will be specifically described below with reference to Examples, but the scope of the present invention is not limited to these Examples.
１．調製例１
（１）銀ナノプレートの種粒子の調製
２．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム水溶液２００ｍＬに、０．５ｇ／Ｌのポリスチレンスルホン酸（分子量７０，０００）水溶液１０ｍＬと、１０ｍＭの水素化ほう素ナトリウム水溶液１１．５ｍＬとを撹拌しながら添加し、次いで、０．７４ｍＭの硝酸銀水溶液２００ｍＬを８６ｍＬ／分で添加した。撹拌停止後、得られた溶液をインキュベーター（３０℃）中に６０分間静置し、銀ナノプレート種粒子の水分散液（シード懸濁液）を作製した。
1. Preparation example 1
(1) Preparation of seed particles for silver nanoplates In 200 mL of 2.5 mM trisodium citrate aqueous solution, 10 mL of 0.5 g/L polystyrene sulfonic acid (molecular weight 70,000) aqueous solution and 10 mM sodium borohydride aqueous solution were added. 11.5 mL was added with stirring, followed by 200 mL of 0.74 mM aqueous silver nitrate solution at 86 mL/min. After stopping the stirring, the obtained solution was allowed to stand in an incubator (30° C.) for 60 minutes to prepare an aqueous dispersion (seed suspension) of silver nanoplate seed particles.
（２）銀ナノプレート水分散液の調製
蒸留水２０００ｍＬに、１０ｍＭのアスコルビン酸水溶液４５ｍＬと、上記シード懸濁液３００ｍＬを撹拌しながら添加した。次いで、７．４ｍＭの硝酸銀水溶液１２０ｍＬを２６ｍＬ／分で添加した。得られた溶液に、２５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム水溶液２０ｍＬを添加し、撹拌を停止した。得られた溶液を大気雰囲気下のインキュベーター（２３℃）中に２０時間静置し、銀ナノプレート水分散液１（ＡｇＰＬ懸濁液１）を調製した。また、上記シード懸濁液の使用量を４２ｍＬ又は１００ｍＬに代えた以外はＡｇＰＬ懸濁液１と同様にして、ＡｇＰＬ懸濁液２及び３を調製した。
(2) Preparation of Silver Nanoplate Aqueous Dispersion To 2000 mL of distilled water, 45 mL of a 10 mM ascorbic acid aqueous solution and 300 mL of the above seed suspension were added while stirring. Then, 120 mL of 7.4 mM silver nitrate aqueous solution was added at 26 mL/min. To the resulting solution, 20 mL of 250 mM trisodium citrate aqueous solution was added and stirring was stopped. The resulting solution was allowed to stand in an incubator (23° C.) under an air atmosphere for 20 hours to prepare a silver nanoplate aqueous dispersion 1 (AgPL suspension 1). Further, AgPL suspensions 2 and 3 were prepared in the same manner as AgPL suspension 1 except that the amount of seed suspension used was changed to 42 mL or 100 mL.
各ＡｇＰＬ懸濁液中の銀ナノプレートを走査透過電子顕微鏡（ＳＴＥＭ）で観察し、任意の銀ナノプレート１００個の最大長径を計測した合計１００点のデータから上下１０％を除いた８０点のデータの平均値を求めることによって、平均粒子径を算出した。ＡｇＰＬ懸濁液１、２、及び３中の銀ナノプレートの平均粒子径は、それぞれ１３．２ｎｍ、３２．８ｎｍ、及び２０．２ｎｍだった。 The silver nanoplates in each AgPL suspension were observed with a scanning transmission electron microscope (STEM), and the maximum length of 100 arbitrary silver nanoplates was measured. The average particle size was calculated by averaging the data. The average particle sizes of silver nanoplates in AgPL suspensions 1, 2, and 3 were 13.2 nm, 32.8 nm, and 20.2 nm, respectively.
（３）銀ナノプレートの金被覆処理
蒸留水１５０ｍＬに、２４ｍＭの塩化金酸水溶液を１４ｍＬ、２００ｍＭの水酸化ナトリウム水溶液を８ｍＬ、１０ｍＭの亜硫酸ナトリウム水溶液を１０３ｍＬ混合して、成長溶液１を調製した。そして、蒸留水３１２ｍＬに、ＡｇＰＬ懸濁液１を３１２ｍＬ、５質量％のポリビニルピロリドン水溶液を６９ｍＬ、５００ｍＭのアスコルビン酸水溶液を１４ｍＬ、５００ｍＭの水酸化ナトリウム水溶液を１４ｍＬ、１００ｍＭの亜硫酸ナトリウム水溶液を３ｍＬ、成長溶液１を２．９倍希釈したものを２７５ｍＬ混合して室温で２４時間静置し、金被覆銀ナノプレートの水分散液１（Ａｇ＠Ａｕ懸濁液１）（黄色調）を調製した。そして、上記と同様の方法で、ＡｇＰＬ懸濁液２に成長溶液１を１．４倍に希釈したものを使用してＡｇ＠Ａｕ懸濁液２（青色調）を、また、ＡｇＰＬ懸濁液３に成長溶液１を１．７倍に希釈したものを使用してＡｇ＠Ａｕ懸濁液３（赤色調）をそれぞれ調製した。Ａｇ＠Ａｕ懸濁液１～３を適宜希釈し、分光光度計Ｖ－７７０（日本分光株式会社製）により測定した分光スペクトルを図１に示す。また、Ａｇ＠Ａｕ懸濁液２中の金被覆銀ナノプレートの高角散乱環状暗視野走査透過顕微鏡（ＨＡＡＤＦ－ＳＴＥＭ）観察写真を図２に示す。
(3) Gold coating treatment of silver nanoplates Growth solution 1 was prepared by mixing 150 mL of distilled water with 14 mL of 24 mM chloroauric acid aqueous solution, 8 mL of 200 mM sodium hydroxide aqueous solution, and 103 mL of 10 mM sodium sulfite aqueous solution. . Then, 312 mL of distilled water, 312 mL of AgPL suspension 1, 69 mL of 5% by mass polyvinylpyrrolidone aqueous solution, 14 mL of 500 mM ascorbic acid aqueous solution, 14 mL of 500 mM sodium hydroxide aqueous solution, 3 mL of 100 mM sodium sulfite aqueous solution, 275 mL of growth solution 1 diluted 2.9 times was mixed and allowed to stand at room temperature for 24 hours to prepare aqueous dispersion 1 of gold-coated silver nanoplates (Ag@Au suspension 1) (yellowish). . Then, in the same manner as above, Ag@Au suspension 2 (blue tone) was prepared using a 1.4-fold dilution of growth solution 1 in AgPL suspension 2, and AgPL suspension A 1.7-fold dilution of growth solution 1 in 3 was used to prepare Ag@Au suspension 3 (reddish), respectively. FIG. 1 shows the spectra obtained by appropriately diluting Ag@Au suspensions 1 to 3 and measuring them with a spectrophotometer V-770 (manufactured by JASCO Corporation). Also, a high-angle scattering annular dark-field scanning transmission microscope (HAADF-STEM) observation photograph of the gold-coated silver nanoplates in Ag@Au suspension 2 is shown in FIG.
（４）金被覆銀ナノプレートの特性
Ａｇ＠Ａｕ懸濁液１～３をＳＴＥＭで観察し、各懸濁液中の金被覆銀ナノプレートの端面における金層の平均厚みを算出した。具体的には、計算の便宜のため形状が円形状の金被覆銀ナノプレートを選定して平均粒子径を測定し、金被覆前に測定していた平均粒子径との差を２で割って、端面における金層の平均厚みを算出した。以下の表１に、金被覆操作時の混合液の銀濃度及び金濃度、コアの銀ナノプレートの平均粒子径及び端面における金層の平均厚み、金被覆銀ナノプレートの極大吸収波長、並びに、当該極大吸収波長における消光度及び９００ｎｍにおける消光度をまとめて示す。
(4) Properties of gold-coated silver nanoplates Ag@Au suspensions 1 to 3 were observed by STEM, and the average thickness of the gold layer on the end faces of the gold-coated silver nanoplates in each suspension was calculated. Specifically, for convenience of calculation, circular-shaped gold-coated silver nanoplates were selected, the average particle size was measured, and the difference from the average particle size measured before gold coating was divided by 2. , the average thickness of the gold layer on the end face was calculated. Table 1 below shows the silver concentration and gold concentration of the mixed solution during the gold coating operation, the average particle size of the silver nanoplates in the core and the average thickness of the gold layer on the end face, the maximum absorption wavelength of the gold-coated silver nanoplates, and The extinction degree at the maximum absorption wavelength and the extinction degree at 900 nm are collectively shown.
（５）従来の金被覆銀ナノプレートの調製
特許文献１（特許第６４４０１６６号）の実施例に記載の金属微粒子Ａ、Ｂ及びＣの調製方法に従って、金被覆銀ナノプレートの懸濁液、すなわちＡｇ＠Ａｕ懸濁液４（黄色調）、５（赤色調）、及び６（青色調）を調製した。Ａｇ＠Ａｕ懸濁液４～６を適宜希釈し、分光光度計Ｖ－７７０（日本分光株式会社製）により測定した分光スペクトルを図３に示す。また、上記（４）に記載の方法に従って測定したＡｇ＠Ａｕ懸濁液４～６中の金被覆銀ナノプレートの端面における金層の平均厚みは、それぞれ０．１４ｎｍ、０．２１ｎｍ、及び０．３１ｎｍであり、いずれも１．０ｎｍより薄かった。
(5) Preparation of conventional gold-coated silver nanoplates A suspension of gold-coated silver nanoplates, i.e., a Ag@Au suspensions 4 (yellow tone), 5 (red tone), and 6 (blue tone) were prepared. FIG. 3 shows the spectra obtained by appropriately diluting the Ag@Au suspensions 4 to 6 and measuring them with a spectrophotometer V-770 (manufactured by JASCO Corporation). In addition, the average thickness of the gold layer on the end faces of the gold-coated silver nanoplates in Ag@Au suspensions 4 to 6 measured according to the method described in (4) above was 0.14 nm, 0.21 nm, and 0.21 nm, respectively. .31 nm, and all were thinner than 1.0 nm.
（６）金被覆銀ナノプレートへの抗体の担持
Ａｇ＠Ａｕ懸濁液１中の金被覆銀ナノプレートを遠心分離で沈殿させ、上清を除去後、０．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム水溶液を添加し、沈殿した金被覆銀ナノプレートを分散させた。同様の操作を二回繰り返し、最終的に極大吸収波長における消光度が２．０になるように、Ａｇ＠Ａｕ懸濁液の濃度を調整した。この懸濁液１ｍＬを、５ｍＭのホウ酸緩衝液（ｐＨ７．５）で５０μｇ／ｍＬの濃度に希釈した抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）抗体（宿主動物：マウス）の溶液０．１ｍＬと混合して、得られた混合液を室温下で６０分間静置した。次いで、０．５ｍＭのウシ血清アルブミン溶液（５ｍＭのホウ酸緩衝液中）を０．１００ｍＬ添加し、得られた懸濁液を室温下で６０分間静置した。これを遠心分離して前記抗体と金被覆銀ナノプレートとの複合体を沈殿させ、上澄み液を除去した。その後、前記複合体に５０μＬの２０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（０．０５％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（Ｍｗ：２０，０００）、０．２５ｍＭのＢＳＡ、及び１５０ｍＭのＮａＣｌを含む）を添加して再分散し、抗ｈＣＧ抗体を担持したＡｇ＠Ａｕの懸濁液１（抗ｈＣＧ抗体／Ａｇ＠Ａｕ懸濁液１）を作製した。また、同様にして、ＡｇＡｕ懸濁液２～６から、抗ｈＣＧ抗体を担持したＡｇ＠Ａｕの懸濁液２～６（抗ｈＣＧ抗体／Ａｇ＠Ａｕ懸濁液２～６）をそれぞれ作製した。
(6) Antibody support on gold-coated silver nanoplate The gold-coated silver nanoplate in Ag@Au suspension 1 is precipitated by centrifugation, and after removing the supernatant, a 0.5 mM trisodium citrate aqueous solution is added. added to disperse the precipitated gold-coated silver nanoplates. The same operation was repeated twice, and the concentration of the Ag@Au suspension was finally adjusted so that the extinction at the maximum absorption wavelength was 2.0. 1 mL of this suspension was mixed with 0.1 mL of a solution of anti-human chorionic gonadotropin (hCG) antibody (host animal: mouse) diluted to a concentration of 50 μg/mL with 5 mM borate buffer (pH 7.5). Then, the resulting mixture was allowed to stand at room temperature for 60 minutes. Then, 0.100 mL of 0.5 mM bovine serum albumin solution (in 5 mM borate buffer) was added, and the resulting suspension was allowed to stand at room temperature for 60 minutes. This was centrifuged to precipitate the complex of the antibody and the gold-coated silver nanoplate, and the supernatant was removed. Then, 50 μL of 20 mM Tris-HCl buffer (containing 0.05% polyethylene glycol (PEG) (Mw: 20,000), 0.25 mM BSA, and 150 mM NaCl) was added to the complex. It was redispersed to prepare Ag@Au suspension 1 carrying anti-hCG antibody (anti-hCG antibody/Ag@Au suspension 1). Similarly, Ag@Au suspensions 2 to 6 carrying anti-hCG antibody (anti-hCG antibody/Ag@Au suspensions 2 to 6) were prepared from AgAu suspensions 2 to 6, respectively. .
（７）コンジュゲートパッドの作製
２０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．２；０．０５％のポリエチレングリコール（Ｍｗ：２０，０００）及び４％のスクロースを含む）９００μＬを、３００μＬの抗ｈＣＧ抗体／Ａｇ＠Ａｕ懸濁液１と混合した。この混合液を、縦８ｍｍ×横３００ｍｍのグラスファイバーパッド（ＧＲＡＤＥ ８９６４、ＡＨＬＳＴＲＯＭ製）の全面に、４０μＬ／ｃｍの量で均一に塗布した後、真空デシケーター（アズワン製）に入れ、減圧ポンプ（ベルト駆動型油回転真空ポンプＴＳＷ－５０Ｎ、佐藤真空株式会社製）で一晩乾燥して、抗ｈＣＧ抗体を担持したＡｇ＠Ａｕを含むコンジュゲートパッド１を作製した。また、同様にして、抗ｈＣＧ抗体／Ａｇ＠Ａｕ懸濁液２～６から、抗ｈＣＧ抗体を担持したＡｇ＠Ａｕを含むコンジュゲートパッド２～６をそれぞれ作製した。
(7) Preparation of
（８）イムノクロマトグラフィー用テストストリップの作製
ニトロセルロース製のメンブレンの検出部位に、０．５ｍｇ／ｍＬの抗ｈＣＧ抗体（宿主動物：マウス）を含む５０ｍＭリン酸緩衝液を、１μＬ／ｃｍの量で均一に直線状に塗布し、当該検出部位の上端側のコントロール部位に、０．５ｍｇ／ｍＬの抗マウスＩｇＧ抗体（宿主動物：ラビット）を含む５０ｍＭリン酸緩衝液を、１μＬ／ｃｍの量で均一に直線状に塗布して、これらの抗体をメンブレン上に固定した。このメンブレンを、５０ｍＭのホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）（０．５％のカゼイン含む）でブロッキングした。ブロッキングしたメンブレンを、５０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．６）（０．５％のスクロース、０．０１％のドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムを含む）に浸して洗浄し、乾燥させた。
(8) Preparation of immunochromatographic test strip A 50 mM phosphate buffer solution containing 0.5 mg/mL anti-hCG antibody (host animal: mouse) was added to the detection site of the nitrocellulose membrane in an amount of 1 µL/cm. Uniformly linearly applied, 50 mM phosphate buffer containing 0.5 mg / mL anti-mouse IgG antibody (host animal: rabbit) is applied to the control site on the upper end side of the detection site in an amount of 1 μL / cm These antibodies were immobilized on the membrane by uniform linear application. The membrane was blocked with 50 mM borate buffer (pH 8.5) (containing 0.5% casein). The blocked membrane was immersed in 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.6) (containing 0.5% sucrose and 0.01% sodium dodecylbenzenesulfonate), washed, and dried.
乾燥後のメンブレンを、縦４０ｍｍ×横６０ｍｍのバッキングシート（ＧＬ－５７８８８、Ｌｏｈｍａｎｎ製）の粘着テープ部に貼り付けて、当該メンブレンの下端側に２ｍｍ重なるように、抗ｈＣＧ抗体を担持したＡｇ＠Ａｕを含むコンジュゲートパッド１～６のいずれかを貼り付けた。次いで、２５ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．２）を含浸させた縦１７ｍｍ×横６０ｍｍのサンプルパッド（ＧＲＡＤＥ０３１９、Ａｈｌｓｔｒｏｍ製）を、前記コンジュゲートパッドの前記メンブレンと反対側に、それと４ｍｍ重なるように貼り付けた。そして、前記メンブレンの上端側に５ｍｍ重なるように、縦２０ｍｍ×横６０ｍｍの吸水パッド（ＧＲＡＤＥ０２７０、Ａｈｌｓｔｒｏｍ製）を貼り付けた。最後に、メンブレン、コンジュゲートパッド、サンプルパッド、及び吸水パッドを備えたバッキングシートを、縦６０ｍｍ、横５ｍｍの短冊状にロールカッターでカットし、これをハウジングケース（Ｔｙｐｅ―Ｔハウジングケース、トラストメディカル製）に設置することでテストストリップ［ｈＣＧ＋Ｍ］を作製した。 The dried membrane was attached to the adhesive tape portion of a backing sheet (GL-57888, manufactured by Lohmann) of 40 mm long x 60 mm wide, and Ag@ carrying an anti-hCG antibody was attached so that it overlapped with the lower end of the membrane by 2 mm. Any of the Au-containing conjugate pads 1-6 were applied. Next, a sample pad (GRADE0319, manufactured by Ahlstrom) having a length of 17 mm and a width of 60 mm impregnated with 25 mM Tris-HCl buffer (pH 8.2) is placed on the opposite side of the conjugate pad from the membrane so that it overlaps with it by 4 mm. pasted. Then, a water absorbing pad (GRADE0270, manufactured by Ahlstrom) of 20 mm long×60 mm wide was attached so as to overlap the upper end of the membrane by 5 mm. Finally, the backing sheet with the membrane, conjugate pad, sample pad, and water absorption pad was cut into strips of 60 mm long and 5 mm wide with a roll cutter, and this was used as a housing case (Type-T housing case, Trust Medical A test strip [hCG+M] was prepared by placing it on
２．イムノクロマトグラフィー試験１
上記項目１（８）で作製したテストストリップ［ｈＣＧ＋Ｍ］のサンプルパッドに、ｈＣＧを２５０ｍＩＵ／ｍＬの濃度で含む１０ｍＭリン酸緩衝生理食塩水（０．２５ｍＭのＢＳＡを含む）又はｈＣＧを含まない同リン酸緩衝生理食塩水（ブランク）を１００μＬ滴下し、メンブレン上に展開させた。そして、検出部位及びコントロール部位の着色を、目視によって以下の基準で評価し、ｈＣＧを含む被験サンプルを展開したときには輝度解析も行った。
（目視判定の基準）
＋＋：鮮明な着色あり
＋ ：着色あり
－ ：着色なし
2. Immunochromatography test 1
10 mM phosphate-buffered saline containing hCG at a concentration of 250 mIU/mL (containing 0.25 mM BSA) or hCG-free 100 μL of phosphate-buffered saline (blank) was dropped and spread on the membrane. The coloration of the detection site and the control site was visually evaluated according to the following criteria, and brightness analysis was also performed when the test sample containing hCG was developed.
(Criteria for visual judgment)
++: Clear coloring +: Coloring -: No coloring
輝度解析では、被験サンプルを展開した後のテストストリップをスキャナー（装置名：ＣａｎｏＳｃａｎ ＬｉＤＥ５００Ｆ、製造元：キヤノン株式会社）によりスキャニングし、検出部位、コントロール部位、及びこれら以外の部位（対照領域）の最低輝度（着色すると低くなる）を、画像解析ソフトＩｍａｇｅ－Ｊ（アメリカ国立衛生研究所でＷａｙｎｅ Ｒａｓｂａｎｄが開発したオープン・ソースで公有の画像処理ソフトウェア；ｈｔｔｐ：／／ｉｍａｇｅｊ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／）を用いて数値化した。より具体的には、各部分の最低輝度をそれぞれ５回ずつ測定し、得られた数値の中央値を検出部位、コントロール部位、又は対照領域の最低輝度として採用した。そして、対照領域の最低輝度から検出部位又はコントロール部位の最低輝度を引いて、輝度差を求めた。結果を表２及び表３に示す。 In the brightness analysis, the test strip after developing the test sample is scanned by a scanner (device name: CanoScan LiDE500F, manufacturer: Canon Inc.), and the detection site, control site, and other sites (control area) minimum brightness Image analysis software Image-J (open source and public image processing software developed by Wayne Rasband at the National Institutes of Health; http://imagej.nih.gov/ij/) digitized using More specifically, the minimum brightness of each part was measured five times, and the median value of the obtained values was adopted as the minimum brightness of the detection site, control site, or control area. The brightness difference was then obtained by subtracting the lowest brightness of the detection site or the control site from the lowest brightness of the control region. The results are shown in Tables 2 and 3.
金層の平均厚みが１．０ｎｍよりも大きい金被覆銀ナノプレート（Ａｇ＠Ａｕ懸濁液１～３）を使用したイムノクロマトグラフィー試験においては、ｈＣＧを含まない被験サンプルを展開したときにコントロール部位の着色だけが観察され、試験系として成立していることが確認されたが、金層の平均厚みが１．０ｎｍよりも小さい金被覆銀ナノプレート（Ａｇ＠Ａｕ懸濁液４～６）を使用したイムノクロマトグラフィー試験においては、コントロール部位の着色が観察できず、試験系として機能していなかった（表２）。これは、金被覆銀ナノプレートが酸化によって劣化したからであると考えられる。また、Ａｇ＠Ａｕ懸濁液１～３を使用したイムノクロマトグラフィー試験において、ｈＣＧを含む被験サンプルを展開すると、検出部位においてｈＣＧを良好に検出することができた（表３）。 In immunochromatographic studies using gold-coated silver nanoplates (Ag@Au suspensions 1-3) with an average gold layer thickness greater than 1.0 nm, control sites Only coloration was observed, confirming that it was established as a test system. In the immunochromatographic test used, no coloration could be observed at the control site, and the test system did not function (Table 2). This is believed to be due to the deterioration of the gold-coated silver nanoplates due to oxidation. Further, in the immunochromatographic test using Ag@Au suspensions 1 to 3, when the test sample containing hCG was developed, hCG could be successfully detected at the detection site (Table 3).
３．調製例２
（１）金被覆銀ナノプレートへの抗体の担持
抗体の溶液として、Ａｇ＠Ａｕ懸濁液１に対しては５ｍＭのホウ酸緩衝液（ｐＨ８．３）で５０μｇ／ｍＬの濃度に希釈した抗Ｂ型インフルエンザウイルス（Ｆｌｕ－Ｂ）抗体（宿主動物：マウス）、Ａｇ＠Ａｕ懸濁液２に対しては同様に希釈した抗Ａ型インフルエンザウイルス（Ｆｌｕ－Ａ）抗体（宿主動物：マウス）、Ａｇ＠Ａｕ懸濁液３に対しては同様に希釈した抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＣｏＶ２）抗体（宿主動物：マウス）を使用したことと、２０ｍＭのトリス塩酸緩衝液に０．０５ｗｔ％のＬｉｐｉｄｕｒｅ ＢＬ８０２（日油株式会社）を含むことと、ＰＥＧを含まないこと以外は上記項目１（６）と同様にして、抗Ｆｌｕ－Ｂ抗体を担持したＡｇ＠Ａｕの懸濁液（懸濁液Ａ）、抗Ｆｌｕ－Ａ抗体を担持したＡｇ＠Ａｕの懸濁液（懸濁液Ｂ）、及び抗ＣｏＶ２抗体を担持したＡｇ＠Ａｕの懸濁液（懸濁液Ｃ）をそれぞれ作製した。
3. Preparation example 2
(1) Antibody support on gold-coated silver nanoplate As the antibody solution, for Ag@Au suspension 1, an antibody diluted to a concentration of 50 μg/mL with 5 mM borate buffer (pH 8.3) was used. Influenza virus type B (Flu-B) antibody (host animal: mouse), similarly diluted anti-influenza virus type A (Flu-A) antibody (host animal: mouse) for Ag@Au suspension 2, Similarly diluted anti-SARS-CoV-2 (CoV2) antibody (host animal: mouse) was used for Ag@Au Suspension 3, and 0.05 wt% Lipidure was added to 20 mM Tris-HCl buffer. Anti-Flu-B antibody-carrying Ag@Au suspension (suspension A ), a suspension of Ag@Au carrying anti-Flu-A antibody (suspension B), and a suspension of Ag@Au carrying anti-CoV2 antibody (suspension C), respectively.
（２）コントロール用抗体の調製
特許第６７１７７３２号の実施例に記載の「懸濁液Ｅ」の調製方法に従って、表面処理パラジウム被覆金ナノロッドを含む黒色の水分散液（Ａｕ＠Ｐｄ懸濁液）を調製した。そして、懸濁液としてＡｕ＠Ｐｄ懸濁液を使用し、抗体の溶液として５ｍＭのホウ酸緩衝液（ｐＨ８．０）で５０μｇ／ｍＬの濃度に希釈したラビットＩｇＧを使用したことと、２０ｍＭのトリス塩酸緩衝液に０．０５ｗｔ％のＬｉｐｉｄｕｒｅ ＢＬ８０２（日油株式会社）を含むこと以外は上記項目１（６）と同様にして、ラビットＩｇＧを担持したＡｕ＠Ｐｄの懸濁液（懸濁液Ｒ）を作製した。
(2) Preparation of Control Antibody A black aqueous dispersion containing surface-treated palladium-coated gold nanorods (Au@Pd suspension) according to the preparation method of "suspension E" described in the examples of Japanese Patent No. 6717732. was prepared. Then, an Au@Pd suspension was used as the suspension, and rabbit IgG diluted to a concentration of 50 μg/mL with 5 mM borate buffer (pH 8.0) was used as the antibody solution. Rabbit IgG-supported Au@Pd suspension (suspension R) was prepared.
（３）コンジュゲートパッドの作製
抗ｈＣＧ抗体を担持したＡｇ＠Ａｕの懸濁液１に代えて懸濁液Ａ～Ｃの混合液又は懸濁液Ａ～Ｃ及びＲの混合液を使用したことと、２０ｍＭのトリス塩酸緩衝液に０．０５ｗｔ％のＬｉｐｉｄｕｒｅ ＢＬ８０２（日油株式会社）を含むことと、ＰＥＧを含まないこと以外は上記項目１（７）と同様にして、コンジュゲートパッド［ＡＢＣ］及びコンジュゲートパッド［ＡＢＣ＋Ｒ］を作製した。
(3) Preparation of conjugate pad A mixture of suspensions A to C or a mixture of suspensions A to C and R was used instead of suspension 1 of Ag@Au carrying anti-hCG antibody. Conjugate pad [ABC ] and conjugate pads [ABC+R] were prepared.
（４）イムノクロマトグラフィー用テストストリップの作製
ニトロセルロース製のメンブレンの検出部位に、当該メンブレンの下端から上端に向かって順に０．２５ｍｇ／ｍＬの抗ＣｏＶ２抗体を含む５０ｍＭホウ酸緩衝液（１０％のスクロースを含む）、０．２５ｍｇ／ｍＬの抗Ｆｌｕ－Ａ抗体を含む５０ｍＭホウ酸緩衝液（１０％のスクロースを含む）、及び０．２５ｍｇ／ｍＬの抗Ｆｌｕ－Ｂ抗体を含む５０ｍＭホウ酸緩衝液（１０％のスクロースを含む）を、それぞれ直線状に塗布し、かつ当該検出部位の上端側のコントロール部位に、２．１ｍｇ／ｍＬの抗マウスＩｇＧ抗体（宿主動物：ラビット）を塗布し、かつコンジュゲートパッドとしてコンジュゲートパッド［ＡＢＣ］を使用した以外は上記項目１（８）と同様にして、テストストリップ［ＡＢＣ＋Ｍ］を作製した。また、検出部位に塗布する抗体溶液の濃度を１．０ｍｇ／ｍＬに変更し、かつコントロール部位に塗布する抗体溶液を０．３ｍｇ／ｍＬの抗ラビットＩｇＧ抗体（宿主動物：ゴート）に変更して、さらにコンジュゲートパッドとしてコンジュゲートパッド［ＡＢＣ＋Ｒ］を使用した以外はテストストリップ［ＡＢＣ＋Ｍ］と同様にして、テストストリップ［ＡＢＣ＋Ｒ］を作製した。
(4) Preparation of immunochromatographic test strip 50 mM borate buffer containing 0.25 mg/mL anti-CoV2 antibody (10% sucrose), 50 mM borate buffer containing 0.25 mg/mL anti-Flu-A antibody (containing 10% sucrose), and 50 mM borate buffer containing 0.25 mg/mL anti-Flu-B antibody A liquid (containing 10% sucrose) is applied linearly, and 2.1 mg/mL anti-mouse IgG antibody (host animal: rabbit) is applied to a control site on the upper end side of the detection site, A test strip [ABC+M] was prepared in the same manner as in item 1(8) above, except that the conjugate pad [ABC] was used as the conjugate pad. In addition, the concentration of the antibody solution applied to the detection site was changed to 1.0 mg/mL, and the antibody solution applied to the control site was changed to 0.3 mg/mL anti-rabbit IgG antibody (host animal: goat). Furthermore, a test strip [ABC+R] was prepared in the same manner as the test strip [ABC+M], except that the conjugate pad [ABC+R] was used as the conjugate pad.
４．イムノクロマトグラフィー試験例２
上記項目３（４）で作製したテストストリップ［ＡＢＣ＋Ｍ］又はテストストリップ［ＡＢＣ＋Ｒ］のサンプルパッドに、以下の被験サンプル（ａ）～（ｅ）を含む１０ｍＭリン酸緩衝生理食塩水（０．２５ｍＭのＢＳＡを含む）を１００μＬ滴下し、メンブレン上に展開させた。そして、上記項目２に記載の方法に従って、検出部位及びコントロール部位の着色を評価した。結果を表４及び５に示す。
（ａ）ブランク（抗原なし）
（ｂ）Ｆｌｕ－Ａ抗原（１．５μｇ／ｍＬ）
（ｃ）Ｆｌｕ－Ｂ抗原（５．０μｇ／ｍＬ）
（ｄ）ＣｏＶ２抗原（３．０μｇ／ｍＬ）
（ｅ）Ｆｌｕ－Ａ抗原（１．５μｇ／ｍＬ）＋Ｆｌｕ－Ｂ抗原（５．０μｇ／ｍＬ）＋
ＣｏＶ２抗原（３．０μｇ／ｍＬ）
4. Immunochromatography Test Example 2
10 mM phosphate-buffered saline containing the following test samples (a) to (e) (0.25 mM containing BSA) was dropped and spread on the membrane. Then, according to the method described in item 2 above, the coloration of the detection site and the control site was evaluated. Results are shown in Tables 4 and 5.
(a) blank (no antigen)
(b) Flu-A antigen (1.5 μg/mL)
(c) Flu-B antigen (5.0 μg/mL)
(d) CoV2 antigen (3.0 μg/mL)
(e) Flu-A antigen (1.5 μg/mL) + Flu-B antigen (5.0 μg/mL) +
CoV2 antigen (3.0 μg/mL)
テストストリップ［ＡＢＣ＋Ｍ］及びテストストリップ［ＡＢＣ＋Ｒ］のいずれを使用した場合でも、Ｆｌｕ－Ａは青色、Ｆｌｕ－Ｂは黄色、ＣｏＶ２は赤色で検出されたが、テストストリップ［ＡＢＣ＋Ｒ］を使用したときの方が大きい輝度差で検出された。また、コントロール部位の色について、テストストリップ［ＡＢＣ＋Ｍ］においては、青色、黄色、及び赤色の金被覆銀ナノプレートが混ざった混色として黒色を呈しており、テストストリップ［ＡＢＣ＋Ｒ］においては、パラジウム被覆金ナノロッドの色調として黒色を呈していた。 When using either test strip [ABC + M] or test strip [ABC + R], Flu-A was detected in blue, Flu-B in yellow, and CoV2 in red, but when using test strip [ABC + R] was detected with a larger luminance difference. Regarding the color of the control site, the test strip [ABC+M] exhibited black as a mixture of blue, yellow, and red gold-coated silver nanoplates, and the test strip [ABC+R] exhibited palladium-coated gold. The color tone of the nanorods was black.
なお、テストストリップ［ＡＢＣ＋Ｍ］において、検出部位に固定する抗体の濃度を１．０ｍｇ／ｍＬとすると、コントロール部位の黒色が消失してしまった。これは、固定していた抗体が、ブロッキング溶液又は洗浄溶液への浸漬中又はこれらの溶液の展開中や、被験サンプルの展開中にメンブレンの上端側に流出し、コントロール部位の抗マウスＩｇＧ抗体に対して、金被覆銀ナノプレートに担持された抗体と競合的に結合したためであると考えられる。すなわち、被験物質の捕捉用特異的結合物質が、コントロール部位に結合する物質と競合する場合には、前記捕捉用特異的物質の固定量を増やして検出感度を高めようとすると、コントロールの判定ができなくなるというリスクがある。他方、テストストリップ［ＡＢＣ＋Ｒ］のように、被験物質の捕捉用特異的結合物質が、コントロール部位に結合する物質と競合しない場合には、前記捕捉用特異的物質の固定量を増やすことにより、コントロールの判定に悪影響を与えることなく検出感度を高めることが可能となる。 In the test strip [ABC+M], when the concentration of the antibody immobilized on the detection site was 1.0 mg/mL, the black color of the control site disappeared. This is because the immobilized antibody flows out to the upper end side of the membrane during immersion in the blocking solution or washing solution, development of these solutions, and development of the test sample, and the anti-mouse IgG antibody at the control site flows out. On the other hand, it is considered that this is due to competitive binding with the antibody supported on the gold-coated silver nanoplate. In other words, when the specific binding substance for capture of the test substance competes with the substance that binds to the control site, if the amount of immobilized specific substance for capture is increased to increase the detection sensitivity, the determination of the control will not be possible. There is a risk that it will not work. On the other hand, when the capture specific binding substance of the test substance does not compete with the substance that binds to the control site, as in the test strip [ABC+R], increasing the immobilized amount of the capture specific substance will It is possible to increase the detection sensitivity without adversely affecting the determination of.
以上より、厚い金層を有する金被覆銀ナノプレートを使用することにより、イムノクロマトグラフィー試験の検出感度を高めることができ、マルチカラー解析も可能になることが分かった。したがって、微量の被験物質もイムノクロマトグラフィー試験により簡便に検出することが可能となる。 From the above, it was found that the use of gold-coated silver nanoplates having a thick gold layer can increase the detection sensitivity of immunochromatographic tests and enable multi-color analysis. Therefore, it becomes possible to easily detect even a very small amount of test substance by an immunochromatographic test.
Claims (15)
コアとしての銀ナノプレートと、前記銀ナノプレートを被覆する金層とを有する金被覆銀ナノプレートと、
を含む、試料中の被験物質を検出するためのイムノクロマトキットであって、
前記メンブレン上に、前記被験物質の捕捉用特異的結合物質が固定されており、
前記金層の平均厚みが、１．０ｎｍ超であり、前記金被覆銀ナノプレートが、前記被験物質の検出用特異的結合物質を担持している、イムノクロマトキット。 a test strip containing a membrane;
a gold-coated silver nanoplate having a silver nanoplate as a core and a gold layer coating the silver nanoplate;
An immunochromatographic kit for detecting a test substance in a sample, comprising
a specific binding substance for capturing the test substance is immobilized on the membrane;
An immunochromatographic kit, wherein the gold layer has an average thickness of more than 1.0 nm, and the gold-coated silver nanoplate carries a specific binding substance for detection of the test substance.
前記銀ナノプレートの平均粒子径（Ｄ）に対する前記端面での前記金層の平均厚み（Ｔ）の比率（Ｔ／Ｄ）が０．０５以上である、請求項１～４のいずれか１項に記載のイムノクロマトキット。 The gold layer is formed on the main plane and the end face of the silver nanoplate,
5. Any one of claims 1 to 4, wherein the ratio (T/D) of the average thickness (T) of the gold layer at the end face to the average particle diameter (D) of the silver nanoplate is 0.05 or more. immunochromatographic kit described in .
前記メンブレン上に、前記複数種類の被験物質それぞれに対する捕捉用特異的結合物質が固定されており、
前記金被覆銀ナノプレートが、前記複数種類の被験物質それぞれに対する検出用特異的結合物質を担持している、請求項１～８のいずれか１項に記載のイムノクロマトキット。 The sample contains multiple types of test substances,
a capture specific binding substance for each of the plurality of types of test substances is immobilized on the membrane;
The immunochromatographic kit according to any one of claims 1 to 8, wherein the gold-coated silver nanoplate carries a detection specific binding substance for each of the plurality of test substances.
前記コントロール特異的結合物質が抗体を含み、かつ前記捕捉用特異的結合物質が抗体を含む場合に、前記コントロール特異的結合物質の抗体は、前記捕捉用特異的結合物質の抗体とは異なる宿主動物に由来している、請求項１２に記載のイムノクロマトキット。 further comprising a control specific binding substance that specifically binds to the control site;
When the control specific binding substance comprises an antibody and the capture specific binding substance comprises an antibody, the antibody of the control specific binding substance is a host animal different from the antibody of the capture specific binding substance The immunochromatographic kit according to claim 12, which is derived from.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2021065834A JP2022161209A (en) | 2021-04-08 | 2021-04-08 | Immunochromato kit |
| PCT/JP2021/017978 WO2021230267A1 (en) | 2020-05-12 | 2021-05-12 | Suspension of gold-coated silver nano-plates, use thereof and production method therefor, and immunochromatography kit |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2021065834A JP2022161209A (en) | 2021-04-08 | 2021-04-08 | Immunochromato kit |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2022161209A true JP2022161209A (en) | 2022-10-21 |
Family
ID=83658484
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021065834A Pending JP2022161209A (en) | 2020-05-12 | 2021-04-08 | Immunochromato kit |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2022161209A (en) |
-
2021
- 2021-04-08 JP JP2021065834A patent/JP2022161209A/en active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhang et al. | Effect of different-sized gold nanoflowers on the detection performance of immunochromatographic assay for human chorionic gonadotropin detection | |
| AU2016216707B2 (en) | Blue-colored gold nanoparticles for immunological measurement, process for production of same, and measurement method using same | |
| JP5567932B2 (en) | Reagent composition for immunochromatography and measuring method using the same | |
| JP5960374B2 (en) | Suspension of gold-coated silver nanoplate | |
| US20160069875A1 (en) | Labelled Silica Nanoparticles for Immunochromatographic Reagent, Immunochromatographic Test Strip Using the Same, and Immunochromomatographic Fluorescence-Detecting System or Radiation-Detecting System | |
| JP6440166B2 (en) | Immunochromatography kit | |
| US20150079608A1 (en) | Method for detecting or quantifying analyte, kit for detecting or quantifying analyte, and test strip for lateral flow type chromatography method for detecting or quantifying analyte | |
| JP6987939B2 (en) | Suspension of gold-coated silver nanoplates and their uses and manufacturing methods | |
| CN110779905A (en) | Gold nano-labeled test strip based on surface-enhanced Raman scattering, preparation method and use method | |
| JP5006459B1 (en) | Composite particles for labeling | |
| WO2021230267A1 (en) | Suspension of gold-coated silver nano-plates, use thereof and production method therefor, and immunochromatography kit | |
| JP4980944B2 (en) | Immunological measurement method | |
| CN113447647A (en) | Method for detecting 8-hydroxy-2' -deoxyguanosine by using immunochromatographic test paper based on gold nanoparticles | |
| JP2022161209A (en) | Immunochromato kit | |
| JP2012215494A (en) | Immuno-chromatographic measuring method, and kit and system used for the same | |
| JP2017095744A (en) | Composition for detecting test substance containing gold nanorod and usage thereof | |
| JP4219491B2 (en) | Dry analysis method and dry analysis element | |
| JP6294574B2 (en) | Composition for detecting test substance containing gold nanoplate and use thereof | |
| WO2020166698A1 (en) | Immunochromatographic test piece, and measurement method using same | |
| WO2020166699A1 (en) | Immunochromatographic test piece, and measurement method using same | |
| JP6716632B2 (en) | Composition for detecting test substance containing palladium-coated anisotropic gold nanoparticles and use thereof | |
| WO2002006837A1 (en) | Particle-labeled protein and immuno-chromatograph using the same | |
| JP6595215B2 (en) | Immunochromatographic analyzer, manufacturing method thereof, and immunochromatographic analysis method | |
| JP2002328129A (en) | Testing piece for immunological measurement method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20240222 |