JP2022141654A - アッセイデバイス及びその使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[0001] 本出願は、2017年8月31日に出願された米国仮出願第62/552,588号に対する利益及び優先権を主張する。この仮出願は全体が援用により本願に含まれる。
多機能チャンバ及び多機能チャンバに流体接続された第1の反応ゾーンを含む容器を提供することであって、容器は、サンプル調製、核酸回収、及び第1段階核酸増幅反応のための磁気粒子及び試薬を内部に含み、磁気粒子及び試薬は多機能チャンバ又は第1の反応ゾーン又はそれら双方に流体接続されている、ことと、
サンプルを多機能チャンバに導入することと、
多機能チャンバにおいて少なくとも2つのステップを実行することであって、ステップは、
(1)溶解前にサンプル及び磁気ビーズを接触させることと、
(2)磁気粒子の存在下で溶解物を発生させることと、
(3)磁気粒子と核酸を結合することと、
(4)溶解物から磁気粒子を隔離することと、
(5)溶解物から隔離した磁気粒子に対して少なくとも1回の洗浄を実行することと、
(6)第1段階核酸増幅反応において核酸を増幅させることと、
を含む、少なくとも2つのステップを実行することと、
を含む方法。
ステップ(1)及び(2)、
ステップ(1)、(2)、及び(3)、
ステップ(1)から(4)、
ステップ(2)及び(3)、並びに
ステップ(2)、(3)、及び(4)、
のグループから選択される、条項1又は2に記載の方法。
ステップ(3)及び(4)、
ステップ(3)、(4)、及び(5)、
ステップ(4)、(5)、及び(6)、並びに
ステップ(5)及び(6)、
のグループから選択される、条項1又は2に記載の方法。
ステップを実行することはステップ(5)を含み、ステップ(5)は第1の反応ゾーンにおいて実行され、洗浄は、第1の反応ゾーン内に洗浄緩衝剤を注入することと、洗浄緩衝剤に磁気ビーズを分散させることと、磁気ビーズを再捕捉することと、洗浄緩衝剤を放出することと、を含み、
ステップを実行することはステップ(6)を含み、ステップ(6)は第1の反応ゾーンにおいて実行される、ことを更に含む、条項1又は2に記載の方法。
ステップ(3)及び(4)は溶解物を廃棄物チャンバに放出することを更に含み、
ステップ(5)は多機能チャンバにおいて実行され、ステップ(5)は、多機能チャンバ内に洗浄緩衝剤を注入することと、洗浄緩衝材に磁気ビーズを分散させることと、磁気ビーズを再捕捉することと、洗浄緩衝剤を放出することとを含む、条項1から10のいずれかに記載の方法。
多機能チャンバを間に画定する第1の層及び第2の層を備え、容器には、サンプル調製、核酸回収、及び第1段階核酸増幅反応のための磁気粒子及び試薬が提供され、磁気粒子は、多機能チャンバに流体接続されているチャンバに提供されるか又は多機能チャンバに提供され、試薬は、多機能チャンバに流体接続されているチャンバに提供され、
容器は更に、
第1の層と第2の層との間に配置され、多機能チャンバに流体接続された第2段階反応ゾーンであって、第2段階反応ゾーンは複数の第2段階反応チャンバを含み、各第2段階反応チャンバはサンプルの更なる増幅のために構成された1対のプライマーを含み、第2段階反応ゾーンは複数の第2段階反応チャンバの全ての同時熱サイクリングのために構成されている、第2段階反応ゾーン、
を備える容器。
第2の反応ゾーンに流体接続された第1の反応ゾーンを備え、第2の反応ゾーンは、
第1の層、内部に複数の第2段階反応ウェルが形成されているカード層、及び第2の層を含み、
第1の層は複数の第2段階反応ウェルの第1の端部の上に配置されて第1の端部を密封し、第2の層は複数の第2段階反応ウェルの反対側の第2の側の上に配置されて第2の反対の側を密封し、
自己完結型反応容器は更に、
第1の反応ゾーンを第2の反応ゾーンの複数の第2段階反応ウェルに流体接続する充填チャネル、
を備え、充填チャネルは少なくとも部分的に第2の層とカード層との間の空間として形成され、充填チャネルは更に、第2段階反応ゾーンにおけるウェル間の流体連通を抑制するように複数の第2段階反応ウェルの各々への入り組んだ流路を形成する、自己完結型反応容器。
サンプル内に存在する細胞又は芽胞の溶解のために構成されたサンプル溶解ゾーンと、
サンプル溶解ゾーンに流体接続された第1の反応ゾーンであって、溶解させたサンプルから核酸を回収すると共に存在する核酸の第1段階増幅のために核酸構成された第1の反応ゾーンと、
第1の反応ゾーンに流体接続された第2段階反応ゾーンであって、第2段階反応ゾーンは複数の第2段階反応ウェルを含み、各第2段階反応ウェルはサンプルの更なる増幅のために構成された1対のプライマーを含み、第2段階反応ゾーンは複数の第2段階反応チャンバの全ての同時熱サイクリングのために構成されている、第2段階反応ゾーンと、
サンプル溶解ゾーン、第1の反応ゾーン、又は第2段階反応ゾーンのうち1つ以上に流体接続された複数の液体試薬ブリスタであって、製造時に液体試薬ブリスタ内に液体試薬が提供される、複数の液体試薬ブリスタと、
を備える自己完結型反応容器。
反応容器であって、
多機能チャンバを間に画定する第1の層及び第2の層であって、第2段階反応ゾーンが第1の層と第2の層との間に配置されると共に多機能チャンバに流体接続され、第2段階反応ゾーンは複数の第2段階反応チャンバを含み、各第2段階反応チャンバはサンプルの更なる増幅のために構成された1対のプライマーを含み、第2段階反応ゾーンは複数の第2段階反応チャンバの全ての同時熱サイクリングのために構成されている、第1の層及び第2の層と、
第1の層と第2の層との間で多機能チャンバ及び第2段階反応ゾーンと流体連通して形成された1つ以上の試薬ブリスタであって、多機能チャンバに流体接続されたブリスタ内に又は多機能チャンバ内に磁気粒子が提供されている、1つ以上の試薬ブリスタと、
を含む反応容器と、
熱サイクリング器具であって、
器具内に可撓性容器を位置決めするためのレセプタクルと、
器具内に位置決め可能であり、多機能チャンバ及び第2段階反応ゾーンのうち1つ以上を加熱及び/又は冷却するためのヒータ/クーラと、
反応容器において溶解物を発生させるために構成された細胞溶解成分と、
少なくとも1つ以上の試薬ブリスタ、多機能チャンバ、及び第2段階反応ゾーンの間で可撓性容器内の流体を移動させるために構成された流体移動コンポーネントと、
を含む熱サイクリング器具と、
を備えるシステム。
アレイ内に配置された複数のウェルと、
複数のウェルの各々と流体連通している流体充填チャネルと、
を備え、アレイのウェルのうち少なくとも1つは、第1の直径を有する反応ウェルと、第2のより小さい直径を有するアレイアセンブリの第1の表面よりも下方にくぼんだサブウェルと、を含み、くぼんだサブウェルは流体充填チャネルに流体接続されていない、アレイアセンブリ。
アレイ内に配置された複数のウェルを含むアレイアセンブリを提供することであって、アレイアセンブリ及び複数のウェルは複数のウェルに試薬及び/又は反応成分をスポットする前に裏当て層を含まない、ことと、
スポット装置において、アレイアセンブリのウェルに対応するアレイに配置された複数のカニューレを含むスポットアセンブリに対してアレイアセンブリを位置決めすることであって、各カニューレは流体試薬貯蔵部に流体接続されている、ことと、
各カニューレの端部に流体の液滴を送出することと、
液滴とアレイのウェルを接触させて液滴をアレイアセンブリに移動させることと、
液滴から流体を蒸発させて、ウェル内に乾燥試薬を有するアレイアセンブリを生成することと、
を含む方法。
接触させるステップは、カニューレを後退させて液滴とアレイのウェルを接触させて液滴をアレイアセンブリに移動させることを含む、条項72から75のいずれかに記載の方法。
接触させるステップは、カニューレに対してアレイアセンブリを後退させて液滴とアレイのウェルを接触させて液滴をアレイアセンブリに移動させることを含む、条項72から76のいずれかに記載の方法。
条項72から77に記載の方法又はこれらのうち1項に従ってスポットされたアレイアセンブリを提供することと、
2つ以上のフィルム層の間に前もって形成されたポケット内にアレイアセンブリを挿入することと、
フィルム層をアレイアセンブリに密封してフィルム層をアレイアセンブリの上面及び下面に密封することと、
前もって形成されたポケットを密封することと、
を含む方法。
反応容器を画定する第1の材料層及び少なくとも第2の材料層と、
第1及び第2の材料層の間に形成されたサンプル導入ブリスタ及び希釈ブリスタであって、希釈ブリスタはサンプル導入ブリスタに流体接続されている、サンプル導入ブリスタ及び希釈ブリスタと、
サンプル導入ブリスタに流体接続された1つ以上の反応ウェル及び希釈ブリスタに流体接続された1つ以上の反応ウェルと、
を含み、希釈ブリスタはサンプル導入ブリスタからのサンプルのアリコートの選択された希釈を行うように構成され、
1つ以上の反応ウェルはサンプルに対してアッセイを実行するための試薬を含む、反応容器。
アレイに配置された複数のウェルと、
複数のウェルの各々と流体連通している複数の分岐チャネルを含む流体充填チャネルと、
を備え、アレイのウェルのうち少なくとも1つは、同一の分岐チャネルに流体接続された2つ以上の同時充填可能サブウェルを備えた反応ウェルを含む、アレイアセンブリ。
サンプル受容チャンバ及びサンプル受容ゾーンに流体接続された第1の反応ゾーンを含む反応容器を提供することと、
細長い軸を含むサンプル収集スワブを提供することと、
スワブをサンプル受容チャンバ内に挿入することと、
スワブの細長い軸と交差するようにサンプル受容チャンバにシールを適用してサンプル受容チャンバを密封することと、
を含む方法。
[00246] 図5Aは、パウチ5000(本明細書では「科学カード」とも称する)の別の例示的な実施形態を示す。このパウチ5000は、様々な実施形態で使用することができ、又は、PCR、微生物試験、もしくは多種多様な他の試験向けに、本明細書に記載される様々な実施形態のため再構成することができる。パウチ5000は、援用により本願に含まれるPCT/US2017/18748号に記載されている器具、又は多種多様な他の器具における使用のために構成できる。図5Aの例示的なパウチ5000は、サンプル調製、核酸増幅、及び検出を実行できる多数のゾーン又はブリスタを含む。例示的なパウチ5000は、増幅及び分析対象の核酸を含むサンプルがパウチ5000内に導入されるサンプル調製ブリスタ5005と、第1段階PCRブリスタ5010と、第2段階PCRの前に第1段階PCRからの生成物の一部を測定するための体積希釈ウェル5015と、多数の個別反応ウェル5082を含む第2段階PCRアレイ5081と、を含む。体積ウェル5015はブリスタ5020及び5025に流体結合することができ、ここで第2段階PCR用の試薬が導入されて希釈ウェル5015の内容物と混合される。従って、第1段階核酸増幅反応(例えばPCR反応)の生成物の特定の体積(例えば1~5μl)を体積希釈ウェル5015に分注し、特定の体積の希釈剤(例えば100μl)と組み合わせることで、第2段階PCR反応のアレイを充填する前に第1段階PCR増幅のいっそう精密な希釈を達成できる。一例においては、ブリスタ5020と5025との間で体積ウェル5015の内容物と第2段階PCR用の試薬を繰り返し混合することにより、第2段階PCR用のサンプルを調製できる。第2段階アレイ5081は廃棄物容器5035に流体接続することができる。あるいは、ブリスタ5010をサンプル調製と第1段階PCRの双方のために使用し、ブリスタ5005を例えば1又は複数のサンプル調製廃棄物のための廃棄物容器として使用してもよい。他の構成も可能である。
[00375] 図24Aから図24Fは、アレイカード24081のウェル24082内に試薬及び/又は反応成分を適用する(すなわちスポットする)ための方法を示す。簡略化のため1つだけウェルが図示されているが、この方法を用いて2つ以上(例えば数十から数百)のウェルを同時にスポットできることは当業者には認められよう。一実施形態において、複数のウェルを同時にスポットすることには、援用により全体が本願に含まれる米国特許公報第2015/0283531号に記載されているスポット装置と同様の装置を使用すればよい。同様に、図24Aから図24Eに示されているウェル24082は図22Aを参照して記載されているウェルと同様であるが、これは単なる例示であり、スポットされる1又は複数のウェルが他の構成を有し得ることは当業者には認められよう。
[00381] 例えば図1、図5A、図7、図11A、図11B、図17A、図17B、図17C、又は図21Aを参照して本明細書に記載されているパウチは、図2に示されている器具と同様の器具で使用されるように構成できる。以下で、本明細書に記載されるパウチと共に使用され得る器具及び器具コンポーネントの代替的な実施形態について説明する。本明細書に記載されるパウチと共に使用され得る器具の追加の実施形態は、例えば、援用により全体が本願に含まれるPCT/US17/18748号で見ることができる。
[00407] 1つの実施例において、一般的な呼吸器系ウイルスのための標準的な市販用の免疫蛍光アッセイは7のウイルスを検出できることが知られている。すなわち、アデノウイルス、PIV1、PIV2、PIV3、RSV、インフルエンザA型、及びインフルエンザB型である。更に完全なパネルは、例えば、コロナウイルス、ヒトメタ肺炎ウイルス、ライノウイルス、及び非HRVエンテロウイルスを含む他のウイルス用のアッセイを含む。アデノウイルス又はHRVのような極めて変異性のウイルス(variable virus)では、ウイルス系統の全ての分枝を標的にするため、複数のプライマーを用いることが望ましい(例えば、それぞれ4の外側プライマーセット及び4の内側プライマーセット)。コロナウイルスのような他のウイルスでは、時期によって変動しない4の別々の系統(229E、NL63、OC43、HKU1)があるが、それらは、別個のプライマーセットを必要とするほど充分に分岐している。FilmArray(登録商標)呼吸器パネル(BioFire Diagnostics, LLC、ユタ州ソルトレークシティ)は、アデノウイルス、コロナウイルスHKU1、コロナウイルスNL63、コロナウイルス229E、コロナウイルスOC43、ヒトメタ肺炎ウイルス、ヒトライノウイルス/エンテロウイルス、インフルエンザA型、インフルエンザA/H1型、インフルエンザA/H3型、インフルエンザA/H1-2009型、インフルエンザB型、パラインフルエンザウイルス1型、パラインフルエンザウイルス2型、パラインフルエンザウイルス3型、パラインフルエンザウイルス4型、及び呼吸器合胞体ウイルスを含む。これらのウイルスに加えて、FilmArray(登録商標)呼吸器系パネルは3つの細菌、すなわち百日咳菌、肺炎クラミドフィラ(Chlamydophila pneumoniae)、マイコプラズマ肺炎を含む。高密度アレイ581は、そのようなパネルを単一のパウチ510内に収容できる。他のパネルもFilmArray(登録商標)で利用することができ、それぞれが少なくとも20の病原体をアッセイする。
[00409] 図25から図27Dのパウチ及びヒータ構成を用いたプロトタイプの器具を用いてDNAを増幅した。75μlのサンプルは、110bp合成DNA分子の10,000のコピーを含み、(すでに援用により本願に含めたUS2015-0118715号で教示されているような標準的なPCR濃度と比較して)10x倍高いプライマー(各プライマー5μM)及びDNAポリメラーゼ(2U/μL)濃度、並びに、0.45mMのdNTP及び5mMのMg++を用いた。検出には1XのLCGreenを使用した。反応混合物は単なる例示であることは理解されよう。サイクル時間に応じて、プライマー及びポリメラーゼ濃度の増大が有益であり得る。プライマー及びポリメラーゼ濃度の増大に関する更なる情報については、すでに援用により本願に含めた米国特許出願第2015-0118715号を参照のこと。例えば20秒未満のサイクル時間では、少なくとも0.5μMのポリメラーゼと、マルチプレックス反応における少なくとも1μMの各プライマー、又はシングルプレックス反応における2μMの各プライマーを有することが望ましい。ヒータ986を90℃に設定し、ヒータ987を57℃に設定した。この混合物をブリスタ549内に密封し、ワイパ989を10秒に1回転の速度で回転させて実行した。回転速度はサイクル時間に対応することは理解されよう。
[00413] 上記で検討したように、いくつかのPCRプロトコルは3つの温度を使用する。すなわち、アニーリングのための第1の温度、例示的に酵素活性に基づいて選択される伸長のための多少高い温度、及び変性のための第3の最も高い温度である。これら3つの温度のために1つのヒータを熱サイクルさせることが通例であるが、いくつかの実施形態では、より大きい体積を迅速に熱サイクルさせることが望ましい場合がある。例えば、第1段階PCRを3つの温度に熱サイクルさせることが望ましいことがあるが、この場合、ヒータアセンブリ988のようなヒータは望まれるほど迅速にブリスタ564の内容物を加熱及び冷却しない可能性がある。
[00420] 図25から図27Dのものと同様のパウチ及びヒータ構成を用いたプロトタイプの器具を、サンプルにおけるDNAのマルチプレックス増幅のために用いた。テンプレートは天然及び合成のテンプレートの混合物であった。テンプレートは、長さが105bpの合成アンプリコン(「メフィスト(mephisto)」と呼ぶ)、長さが164bpの合成アンプリコン(「バール3(Baal3)」と呼ぶ)、S.セレヴィシエ配列(天然の、長さが364bpのアンプリコンであり、内部で「ビール(beer)」と呼ぶ)、M13(天然の、長さが264bpのアンプリコン)、及びMS2(天然の、長さが309bpのアンプリコン)であった。各テンプレートの1000のコピー、各テンプレートに特有のフォワード及びリバースプライマー(各プライマー5μM)、DNAポリメラーゼ(2U/μL)、0.45mMのdNTP、及び5mMのMg++を含む、150μl及び75μlのサンプルを調製した。検出には1XのLCGreenを使用した。反応混合物は単なる例示であり、他の混合物を使用できることは理解されよう。これらの混合物の150μl及び75μlのアリコートをブリスタ(例えばブリスタ549)内に密封した。150μl反応では、第1のヒータ(例えばヒータ986)を103℃に設定し、第2のヒータ(例えばヒータ987)を55℃に設定した。75μl反応では、第1のヒータ(例えばヒータ986)を102℃に設定し、第2のヒータ(例えばヒータ987)を55℃に設定した。これらの反応物を、例えば図25から図27Dに記載されている手順に従って熱サイクルさせた。1又は複数のワイパブレード949をブリスタに接触させ、ワイパヘッド989を8秒に1回転の速度で回転させた(例えば、180度回転させ、4秒間ホールドし、180度回転させ、4秒間ホールドする等、又は、90度回転させ、2秒間ホールドし、90度回転させ、2秒間ホールドする等のサイクル。回転時間は無視できる)。回転速度はサイクル時間に相当し、1回転は1サイクルを表すことは理解されよう。また、この例では各4分の1回転の後のホールドを用いるが、これは単なる例示であり、連続的な回転も想定される。第1段階PCRの後、Roche LC480リアルタイムPCR器具において、これらの反応をネスト化第2段階PCR反応内で100倍に希釈し増幅した。
[00423] この実施例では、標準的なPCRプロトコルに従って、LC480器具において合成DNAテンプレート(メフィスト)を第1段階PCRのために増幅した。第1段階反応からの増幅生成物を、第2段階増幅混合物(例えば特有のフォワード及びリバースプライマー(各プライマー5μM)、DNAポリメラーゼ(2U/μL)、0.45mMのdNTP、5mMのMg++、及び検出用の1XのLC Green)を用いて1:100に希釈し、図5Aのアレイ5081又は図6Aのアレイ6000と同様の5ウェルアレイに注入した。アレイの各ウェルの体積は約0.5μLである。図28Aから図28Bに示されている器具と同様のプロトタイプの器具において、サンプルを第2段階PCRのために熱サイクルさせた。ヒータアセンブリ1270と同様の2要素ヒータを使用し、第1のヒータを96℃に設定すると共に第2のヒータを60℃に設定して、アレイを熱サイクルさせた。アレイが第1のヒータの制御下に置かれ、第2のヒータの制御下に置かれ、再び第1のヒータの制御下に置かれるようにヒータを平行移動させることによって、アレイに第2段階PCRを実行した。第2段階PCRサンプルを含むアレイを、8秒/サイクル(96℃で4秒、60℃で4秒等)で、40サイクル熱サイクルさせた。
[00426] この実施例では、図5Aに示されているパウチ5000と同様の反応容器において、合成DNAテンプレート(メフィスト)を第1段階PCR及び第2段階PCRのために増幅させた。第1段階PCRでは、テンプレートDNAの~75,000のコピー、テンプレートに特有のフォワード及びリバースプライマー(各プライマー5μM)、DNAポリメラーゼ(2U/μL)、0.45mMのdNTP、及び5mMのMg++を組み合わせ、第1段階PCR反応用のブリスタ(例えばブリスタ5010)に75μLを注入して密封した。この反応容器を、PCR増幅のため器具1200と同様の器具に配置した。
[00432] 次に図39から図42を参照すると、アレイ5081又はアレイ6000と同様のアレイの1又は複数のウェルにおける流体の温度応答を試験するように設計された一連の実験の結果が示されている。これらの実験では、小さい熱電対をアレイの1つ以上のウェルに挿入し、フィルム層の間に密封した。熱サイクリングのため、アレイに水性PCR緩衝剤を充填し、器具1200と同様の器具に挿入し、ヒータアセンブリを平行運動で往復させて、アレイを第1のヒータの温度制御下に置き、第2のヒータの温度制御下に置き、再び第1のヒータの温度制御下に置く等とすることで、熱サイクリングを実行した。これらの実験では、器具内の透明な可撓性の袋をアレイ上で約20PSIに膨張させた。これらの実験は、高温度ヒータ及び低温ヒータにおける異なる休止時間によるアレイ内の流体の温度応答を示す。説明されている実施例の休止時間にかかわらず、ヒータの(例えば高温から低温へ、又は低温から高温への)遷移時間は休止時間に対して迅速である。これらのデータ及び図示されていない他のデータを用いて、ヒータの設定点、各温度における休止時間、及びアレイと内部の流体の熱応答を含む温度モデルを開発し、これによってユーザは、様々なプライマーセットを用いた様々なテンプレートの熱サイクリング及び増幅のためにアレイ内の流体の高ターゲット温度と低ターゲット温度を信頼性高く設定することが可能となる。
[00438] ここで図45Aから図47Bを参照すると、一連の実験の結果が示されている。これらの実験は、PCR増幅が、PCR反応物におけるシリカでコーティングされた磁気ビーズ(すなわち核酸捕捉ビーズ)の存在と矛盾しないこと、予想外であったが、負に荷電されたケイ酸ジルコニウムビーズが明らかに核酸と結合すること、及び、シリカでコーティングされた磁気ビーズの存在下で溶解を実行することによって核酸捕捉効率が大幅に向上し得ることを示すために設計されたものである。
[00449] ここで図48から図50を参照すると、援用によりすでに全体を本願に含めた米国特許第9,586,208号に記載されている器具と同様の器具における一連の実験の結果が示されている。米国特許第9,586,208号の一実施形態では、2つのヒータ間で流体充填ブリスタの内容物(例えば150~300μl)を往復させて圧縮することにより、熱サイクリングを達成する。一方のヒータは例えば変性のため高い温度に設定し、第2のヒータは例えばアニーリングのため低い温度に設定する。典型的なサーモサイクラーは通常、3つ温度を使用する1つのヒータから構成され、より大きいサンプル体積を使用する。
Claims (99)
- サンプル内の核酸を増幅するための方法であって、
多機能チャンバ及び前記多機能チャンバに流体接続された第1の反応ゾーンを含む容器を提供することであって、前記容器は、サンプル調製、核酸回収、及び第1段階核酸増幅反応のための磁気粒子及び試薬を内部に含み、前記磁気粒子及び前記試薬は前記多機能チャンバ又は前記第1の反応ゾーン又はそれら双方に流体接続されていることと、
前記サンプルを前記多機能チャンバに導入することと、
前記多機能チャンバにおいて少なくとも2つのステップを実行することであって、前記ステップは、
(1)溶解前に前記サンプル及び前記磁気ビーズを接触させることと、
(2)前記磁気粒子の存在下で溶解物を発生させることと、
(3)前記磁気粒子と核酸を結合することと、
(4)前記溶解物から前記磁気粒子を隔離することと、
(5)前記溶解物から隔離した前記磁気粒子に対して少なくとも1回の洗浄を実行することと、
(6)第1段階核酸増幅反応において核酸を増幅させることと、
を含むことと、
を含む、方法。 - 前記多機能チャンバに溶解粒子が提供されている、請求項1に記載の方法。
- 前記多機能チャンバにおいて実行される前記ステップは、
ステップ(1)及び(2)、
ステップ(1)、(2)及び(3)、
ステップ(1)から(4)、
ステップ(2)及び(3)、並びに
ステップ(2)、(3)及び(4)、
のグループから選択される、請求項1又は2に記載の方法。 - 前記多機能チャンバにおいて実行される前記ステップは、
ステップ(3)及び(4)、
ステップ(3)、(4)及び(5)、
ステップ(4)、(5)及び(6)、並びに
ステップ(5)及び(6)、
のグループから選択される、請求項1又は2に記載の方法。 - 前記ステップを実行することは、ステップ(3)を含み、
ステップ(3)は更に、前記溶解物を発生させると共に前記サンプルに熱を加えることを含む、請求項1に記載の方法。 - 前記ステップを実行することは、ステップ(2)を含み、
前記溶解物は、前記核酸を前記磁気粒子に結合させるための条件下で発生される、請求項1に記載の方法。 - 前記ステップを実行することは、ステップ(2)を含み、
前記溶解物は、溶解温度で発生され、
前記核酸は、制御された温度で前記溶解物から回収され、
前記溶解温度は、40から100℃、好ましくは50から100℃、又はより好ましくは70から100℃の範囲内であり、
前記制御された温度は、前記溶解温度より低く、0から60℃、好ましくは0から50℃、又はより好ましくは0から40℃の範囲内である、請求項1に記載の方法。 - 前記ステップを実行することは、ステップ(3)及び(4)を含み、
ステップ(4)は、前記磁気粒子を前記多機能チャンバから前記第1の反応ゾーンへ移動させることを更に含み、
前記ステップを実行することは、ステップ(5)を含み、
ステップ(5)は、前記第1の反応ゾーンにおいて実行され、
前記洗浄は、前記第1の反応ゾーン内に洗浄緩衝剤を注入することと、前記洗浄緩衝剤に前記磁気ビーズを分散させることと、前記磁気ビーズを再捕捉することと、前記洗浄緩衝剤を放出することと、を含み、
前記ステップを実行することは、ステップ(6)を含み、
ステップ(6)は、前記第1の反応ゾーンにおいて実行されることを更に含む、請求項1又は2に記載の方法。 - ステップ(3)及び(4)の実行後に、前記溶解粒子は前記多機能チャンバ内に残っている、請求項8に記載の方法。
- ステップ(5)の後に、前記第1の反応ゾーンに核酸増幅試薬を加えることを更に含み、
ステップ(6)の前に溶出ステップは存在しない、請求項8に記載の方法。 - 前記ステップを実行することは、ステップ(3)、(4)、及び(5)を含み、
ステップ(3)及び(4)は、前記溶解物を廃棄物チャンバに放出することを更に含み、
ステップ(5)は、前記多機能チャンバにおいて実行され、
ステップ(5)は、前記多機能チャンバ内に洗浄緩衝剤を注入することと、前記洗浄緩衝材に前記磁気ビーズを分散させることと、前記磁気ビーズを再捕捉することと、前記洗浄緩衝剤を放出することと、を含む、請求項1に記載の方法。 - ステップ(6)は、前記多機能チャンバにおける第1段階マルチプレックス核酸増幅反応であり、前記増幅ステップの前に溶出ステップは存在しない、請求項11に記載の方法。
- 前記容器は、前記多機能チャンバに流体接続された第2段階反応ゾーンを更に含み、
前記第2段階反応ゾーンは、複数の第2段階反応ウェルを含み、
各第2段階反応ウェルは、前記サンプルの更なる増幅のために構成された1対のプライマーを含み、
前記第2段階反応ゾーンは、前記複数の第2段階反応チャンバの全ての同時熱サイクリングのために構成されている、請求項1に記載の方法。 - 前記第2段階反応ゾーンは、前記第1の反応ゾーンを介して前記多機能チャンバに流体接続されている、請求項13に記載の方法。
- 前記ステップを実行することは、ステップ(6)を含み、更に、前記第1段階核酸増幅反応の一部を第2段階核酸増幅反応用の試薬と組み合わせて第2段階核酸増幅混合物を形成することと、前記第2段階反応ウェルの各々に前記第2段階核酸増幅混合物を充填することと、前記第2段階反応ゾーンの複数の第2段階反応ウェルにおいて第2段階核酸増幅反応を実行して1つ以上のアンプリコンを発生させることと、を含む、請求項14に記載の方法。
- 前記1つ以上のアンプリコンを用いて、1つ以上の微生物が前記サンプル内に存在する場合はこれを同定することを更に含む、請求項16に記載の方法。
- 前記可撓性容器は、前記多機能チャンバと流体連通しているサンプル受容チャンバを更に含む、請求項1に記載の方法。
- サンプルスワブを用いてサンプルを収集することと、前記スワブを前記サンプル受容チャンバ内に挿入することと、前記スワブが内部に入っている前記サンプル受容チャンバを密封することと、前記サンプル受容チャンバ内に注入されたサンプル溶解緩衝剤で前記サンプル受容チャンバ内の前記サンプルを分散させることと、前記サンプル及び前記サンプル溶解緩衝剤を前記多機能チャンバ内に移すことと、を更に含む、請求項17に記載の方法。
- サンプル調製、核酸回収、及び第1段階核酸増幅のための前記磁気粒子及び試薬は、1つ以上の流体充填試薬ブリスタに、1つ以上の乾燥試薬ブリスタに、又は、それらの組み合わせに、提供される、請求項1に記載の方法。
- 前記ステップを実行することは、ステップ(2)を含み、更に、ステップ(2)の後に前記多機能チャンバ内の前記溶解粒子を前記溶解物から隔絶することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記ステップを実行することは、ステップ(3)を含み、更に、ステップ(3)の後に前記多機能チャンバ内の前記磁気粒子を隔絶することを含む、請求項1に記載の方法。
- 閉鎖系においてサンプルに対する核酸増幅を実行するための容器であって、
多機能チャンバを間に画定する第1の層及び第2の層を備え、
前記容器には、サンプル調製、核酸回収、及び第1段階核酸増幅反応のための磁気粒子及び試薬が提供され、
前記磁気粒子は、前記多機能チャンバに流体接続されているチャンバに提供されるか又は前記多機能チャンバに提供され、
前記試薬は、前記多機能チャンバに流体接続されているチャンバに提供され、
前記容器は更に、
前記第1の層と前記第2の層との間に配置され、前記多機能チャンバに流体接続された第2段階反応ゾーンであって、前記第2段階反応ゾーンは複数の第2段階反応チャンバを含み、各第2段階反応チャンバは前記サンプルの更なる増幅のために構成された1対のプライマーを含み、前記第2段階反応ゾーンは前記複数の第2段階反応チャンバの全ての同時熱サイクリングのために構成されている、第2段階反応ゾーン
を備える、容器。 - 前記多機能チャンバに細胞溶解成分及び前記磁気粒子が提供されている、請求項22に記載の容器。
- 前記細胞溶解成分は、溶解粒子又は溶解粒子を含む、請求項23に記載の容器。
- 前記容器は、前記多機能チャンバと流体連通しているサンプル溶解チャンバを更に含み、
前記サンプル溶解チャンバに細胞溶解成分及び前記磁気粒子が提供され、
前記多機能チャンバに磁気ビーズ洗浄成分及び第1段階核酸増幅成分が提供されている、請求項22に記載の容器。 - 前記サンプル溶解チャンバと前記多機能チャンバとの間に位置決めされたフィルタを更に備える、請求項25に記載の容器。
- 前記フィルタは、前記溶解粒子を保留すると共に前記磁気ビーズを通過させるような大きさの多孔度を有する、請求項26に記載の容器。
- チャネルが前記サンプル溶解チャンバと前記多機能チャンバを接続し、
前記フィルタは、前記第1の層と前記第2の層との間で前記チャネルと交差するように位置決めされている、請求項26に記載の容器。 - 前記フィルタは、前記チャネルよりも幅が広い、請求項28に記載の容器。
- チャネルが前記サンプル溶解チャンバと前記多機能チャンバとの間に延出し、
前記フィルタは、前記サンプル溶解チャンバにおいて前記チャネルに隣接して位置付けられている、請求項26に記載の容器。 - 前記チャネルは、前記サンプル溶解チャンバよりも小さく、
前記フィルタは、前記チャネルよりも幅が広い、請求項30に記載の容器。 - 前記磁気粒子は、核酸結合磁気粒子である、請求項22に記載の容器。
- 前記多機能チャンバと流体連通しているサンプル受容チャンバを更に含む、請求項22に記載の容器。
- 前記サンプル受容チャンバは、サンプル収集スワブを含む、請求項33に記載の容器。
- 前記サンプル収集スワブは、細長い軸を含み、
前記サンプル受容チャンバ及び前記スワブの前記細長い軸は、熱シールによって少なくとも部分的に融合させることができる化学的にコンパチブルな材料から製造される、請求項34に記載の容器。 - 前記磁気粒子及び前記試薬は、前記多機能チャンバと流体連通している1つ以上の試薬ブリスタに提供されている、請求項22に記載の容器。
- 前記試薬ブリスタのうち1つ以上は、流体充填試薬ブリスタであり、前記容器の製造時に充填される、請求項36に記載の容器。
- 前記試薬ブリスタのうち1つ以上は、前記試薬ブリスタ内に配置された乾燥試薬を含む、請求項36に記載の容器。
- 前記試薬ブリスタと前記多機能チャンバとの間に開放可能シールを更に含む、請求項36に記載の容器。
- 前記開放可能シールは、破裂可能シールである、請求項39に記載の容器。
- 前記開放可能シールは、連結させたフィルムによるシールである、請求項39に記載の容器。
- 自己完結型反応容器であって、
第2の反応ゾーンに流体接続された第1の反応ゾーンを備え、
前記第2の反応ゾーンは、第1の層、内部に複数の第2段階反応ウェルが形成されているカード層、及び第2の層を含み、
前記第1の層は、前記複数の第2段階反応ウェルの第1の端部の上に配置されて前記第1の端部を密封し、
前記第2の層は、前記複数の第2段階反応ウェルの反対側の第2の側の上に配置されて前記第2の反対の側を密封し、
自己完結型反応容器は更に、
前記第1の反応ゾーンを前記第2の反応ゾーンの前記複数の第2段階反応ウェルに流体接続する充填チャネルを備え、
前記充填チャネルは、少なくとも部分的に前記第2の層と前記カード層との間の空間として形成され、
前記充填チャネルは更に、前記第2段階反応ゾーンにおけるウェル間の流体連通を抑制するように前記複数の第2段階反応ウェルの各々への入り組んだ流路を形成する、自己完結型反応容器。 - 前記充填チャネルは、前記カード層、前記第2の層、又は前記カード層と前記第2の層との組み合わせに形成されたチャネルを含み、
前記充填チャネルは、前記第2段階反応ウェルの全てを前記第1段階反応ゾーンに個別に流体接続する、請求項42に記載の自己完結型反応容器。 - 前記第2の層に接合された第3の層を更に備え、
前記第2の層は、前記複数の第2段階反応ウェルに流体接続された複数の穿孔を有する穿孔層を含み、
前記充填チャネルは、前記第2及び第3の層の間の空間として形成されている、請求項42に記載の自己完結型反応容器。 - 各第2段階反応ウェルのための前記入り組んだ流路は、前記第2段階反応ウェルに隣接しているが位置合わせされていない前記カード層における切り欠きと流体連通している、第2段階反応ウェルに隣接しているが位置合わせされていない前記第2の層における開口を含む、請求項44に記載の自己完結型反応容器。
- 各第2段階反応ウェルのための前記入り組んだ流路は、第2段階反応ウェルに隣接しているが位置合わせされていない前記第2の層における開口を含み、
前記開口は、前記第2のフィルム層から前記第1の層に隣接した前記カード層における実質的に水平方向の切り欠きまで第2段階反応ウェルに隣接して延出している前記カード層における実質的に垂直方向の切り欠きと流体連通しており、前記開口から前記実質的に垂直方向の切り欠きへの、更に前記第2段階反応ウェル内への流体導管を生成する、請求項44に記載の自己完結型反応容器。 - 前記充填チャネルは、熱シール可能である、請求項42に記載の自己完結型反応容器。
- 単一の熱シールが、充填チャネルから複数の第2段階反応ウェルまでの流れを密封すると共に前記第2段階反応ウェルを相互に密封する、請求項47に記載の自己完結型反応容器。
- 前記充填チャネルは、前記第1及び第2の反応ゾーンの間の前記充填チャネル内の希釈ウェルを含む希釈ゾーンを更に含み、
前記希釈ウェルは、前記第1の反応ゾーンからの反応生成物の体積部分を受容し、前記体積部分を希釈媒質と組み合わせて組み合わせ体積部分を形成し、前記第2の反応ゾーンの前記複数の第2段階反応ウェルに前記組み合わせ体積部分を充填するように構成されている、請求項42に記載の自己完結型反応容器。 - 前記希釈ゾーンは、前記希釈ウェルと流体連通している希釈ブリスタを更に含み、
前記希釈ブリスタは、前記希釈媒質を受容し、前記希釈媒質と前記体積部分を組み合わせ、前記第2の反応ゾーンの前記複数の第2段階反応ウェルを充填するように構成されている、請求項49に記載の自己完結型反応容器。 - サンプル内に存在する細胞又は芽胞の溶解のために構成されたサンプル溶解ゾーンと、
前記サンプル溶解ゾーンに流体接続された第1の反応ゾーンであって、溶解させたサンプルから核酸を回収すると共に存在する核酸の第1段階増幅のために核酸構成された、第1の反応ゾーンと、
前記第1の反応ゾーンに流体接続された第2段階反応ゾーンであって、前記第2段階反応ゾーンは複数の第2段階反応ウェルを含み、各第2段階反応ウェルは前記サンプルの更なる増幅のために構成された1対のプライマーを含み、前記第2段階反応ゾーンは前記複数の第2段階反応チャンバの全ての同時熱サイクリングのために構成されている、第2段階反応ゾーンと、
前記サンプル溶解ゾーン、前記第1の反応ゾーン、又は前記第2段階反応ゾーンのうち1つ以上に流体接続された複数の液体試薬ブリスタであって、製造時に前記液体試薬ブリスタ内に液体試薬が提供される、複数の液体試薬ブリスタと、
を備える、自己完結型反応容器。 - 前記サンプル溶解ゾーンに、前記サンプル内に位置する細胞又は芽胞を溶解するために構成された溶解粒子と、溶解物から核酸を回収するために構成された磁気ビーズと、が提供されている、請求項51に記載の自己完結型反応容器。
- 前記サンプル溶解ゾーンに流体接続されている前記液体試薬ブリスタのうち1つ以上に、前記溶解粒子、磁気ビーズ、及び溶解緩衝剤が提供されている、請求項52に記載の自己完結型反応容器。
- 前記液体試薬ブリスタのうち1つの内部の液体試薬パックに、前記液体試薬のうち1つが提供されている、請求項51に記載の自己完結型反応容器。
- 前記液体試薬パックは、第1の層と第2の層との間に密封されたある体積の液体を含む、請求項54に記載の自己完結型反応容器。
- 前記第1の層又は前記第2の層のうち少なくとも1つは、バリアフィルムを含む、請求項55に記載の自己完結型反応容器。
- 前記液体試薬ブリスタ内に配置された前記液体試薬と、前記サンプル溶解ゾーン、前記第1の反応ゾーン、又は前記第2段階反応ゾーンのうち1つ以上と、の間に開放可能シールを更に含む、請求項51に記載の自己完結型反応容器。
- 前記開放可能シールは、破裂可能シールである、請求項57に記載の自己完結型反応容器。
- 前記開放可能シールは、連結させたフィルムによるシールである、請求項57に記載の自己完結型反応容器。
- サンプルに対して核酸増幅を実行するためのシステムであって、
反応容器であって、
多機能チャンバを間に画定する第1の層及び第2の層であって、第2段階反応ゾーンが前記第1の層と前記第2の層との間に配置されると共に前記多機能チャンバに流体接続され、前記第2段階反応ゾーンは複数の第2段階反応チャンバを含み、各第2段階反応チャンバは前記サンプルの更なる増幅のために構成された1対のプライマーを含み、前記第2段階反応ゾーンは前記複数の第2段階反応チャンバの全ての同時熱サイクリングのために構成されている、第1の層及び第2の層と、
前記第1の層と前記第2の層との間で前記多機能チャンバ及び前記第2段階反応ゾーンと流体連通して形成された1つ以上の試薬ブリスタであって、前記多機能チャンバに流体接続されたブリスタ内に又は前記多機能チャンバ内に磁気粒子が提供されている、1つ以上の試薬ブリスタと、
を含む反応容器と、
熱サイクリング器具であって、
前記器具内に前記可撓性容器を位置決めするためのレセプタクルと、
前記器具内に位置決め可能であり、前記多機能チャンバ及び前記第2段階反応ゾーンのうち1つ以上を加熱及び/又は冷却するためのヒータ/クーラと、
前記反応容器において溶解物を発生させるために構成された細胞溶解成分と、
少なくとも前記1つ以上の試薬ブリスタ、前記多機能チャンバ、及び前記第2段階反応ゾーンの間で前記可撓性容器内の流体を移動させるために構成された流体移動コンポーネントと、
を含む熱サイクリング器具と、
を備える、システム。 - 前記多機能チャンバに細胞溶解成分及び前記磁気粒子が提供されている、請求項60に記載のシステム。
- 前記容器は、前記多機能チャンバと流体連通しているサンプル溶解チャンバを更に含み、
前記サンプル溶解チャンバに細胞溶解成分及び前記磁気粒子が提供され、前記多機能チャンバに磁気ビーズ洗浄成分及び第1段階核酸増幅成分が提供されている、請求項60に記載のシステム。 - 前記器具は、前記多機能チャンバの一部において前記磁気ビーズを隔離するための、前記器具において展開可能な磁石を更に含む、請求項60又は62に記載のシステム。
- 前記ヒータ/クーラは、サンプルの第1の部分を第1の温度に調整するための前記多機能チャンバの第1の部分に隣接した第1のヒータと、サンプルの第2の部分を第2の温度に調整するための前記多機能チャンバの第2の部分に隣接した第2のヒータと、を含み、前記第2の温度は、前記第1の温度とは異なる、請求項60に記載のシステム。
- 前記ヒータ/クーラは、前記サンプルの各部分が同時に前記ヒータの各々の制御下にくるように、前記サンプルの前記第2の部分を前記多機能チャンバの前記第1の部分に移動させながら前記サンプルの前記第1の部分を前記多機能チャンバの前記第2の部分に移動させるワイパ要素に機械的に関連付けられている、請求項64に記載のシステム。
- 前記ワイパ要素は、前記サンプルの各部分を前記多機能チャンバの反対部分に繰り返し移動させて前記サンプルを熱サイクルさせる、請求項65に記載のシステム。
- 前記器具は、更に平行移動機を含み、
前記平行移動機は、前記レセプタクル、前記可撓性容器、又は前記ヒータ/クーラのうち少なくとも1つに機械的に結合されて、前記多機能チャンバ、前記第2段階反応ゾーン、又はこれら双方のうち少なくとも一部を、前記ヒータ/クーラの前記第1及び第2のヒータ要素に対して横方向に位置合わせすることで、前記多機能チャンバ又は前記第2段階反応ゾーンの前記少なくとも一部が前記第1又は前記第2のヒータ要素のうち少なくとも1つの温度制御下にくるようにする、請求項64に記載のシステム。 - 前記器具は、前記少なくとも一部における流体サンプルを熱サイクルさせるため、前記少なくとも一部を前記第1のヒータ要素と、次いで前記第2のヒータ要素と、繰り返し位置合わせするように構成されている、請求項67に記載のシステム。
- アレイアセンブリであって、
アレイ内に配置された複数のウェルと、
前記複数のウェルの各々と流体連通している流体充填チャネルと、を備え、
前記アレイの前記ウェルのうち少なくとも1つは、第1の直径を有する反応ウェルと、第2のより小さい直径を有する前記アレイアセンブリの第1の表面よりも下方にくぼんだサブウェルと、を含み、
前記くぼんだサブウェルは、前記流体充填チャネルに流体接続されていない、アレイアセンブリ。 - 前記流体充填チャネルは、前記複数のウェルの各々と流体連通している複数の分岐チャネルを含み、
前記くぼんだサブウェルは、その分岐チャネルに流体接続されていない、請求項69に記載のアレイ。 - 前記サブウェルは、前記アレイの第2の表面よりも下方にくぼんでおり、
前記アレイの前記第2の表面は、前記第1の表面の反対側である、請求項69に記載のアレイ。 - アレイをスポットするための方法であって、
アレイ内に配置された複数のウェルを含むアレイアセンブリを提供することであって、前記アレイアセンブリ及び前記複数のウェルは前記複数のウェルに試薬及び/又は反応成分をスポットする前に裏当て層を含まないことと、
スポット装置において、前記アレイアセンブリの前記ウェルに対応するアレイに配置された複数のカニューレを含むスポットアセンブリに対して前記アレイアセンブリを位置決めすることであって、各カニューレは流体試薬貯蔵部に流体接続されていることと、
各カニューレの端部に流体の液滴を送出することと、
前記液滴と前記アレイの前記ウェルを接触させて前記液滴を前記アレイアセンブリに移動させることと、
前記液滴から流体を蒸発させて、前記ウェル内に乾燥試薬を有するアレイアセンブリを生成することと、
を含む、方法。 - 前記スポット装置は、前記カニューレに対して前記アレイアセンブリを位置合わせするように位置決めされた位置合わせピン、止め具、フレーム、又はそれらの組み合わせを含む、請求項72に記載の方法。
- 2つ以上のカニューレが同一の流体試薬貯蔵部に流体接続されている、請求項72に記載の方法。
- 各カニューレが異なる流体試薬貯蔵部に流体接続されている、請求項72に記載の方法。
- 前記送出するステップの前に、前記アレイアセンブリの前記ウェルに前記カニューレを貫通させることを更に含み、
前記接触させるステップは、前記カニューレを後退させて前記液滴と前記アレイの前記ウェルを接触させて前記液滴を前記アレイアセンブリに移動させることを含む、請求項72に記載の方法。 - 前記送出するステップの前に、前記カニューレに対して前記アレイアセンブリを移動させて前記アレイアセンブリの前記ウェルに前記カニューレを貫通させることを更に含み、
前記接触させるステップは、前記カニューレに対して前記アレイアセンブリを後退させて前記液滴と前記アレイの前記ウェルを接触させて前記液滴を前記アレイアセンブリに移動させることを含む、請求項72に記載の方法。 - 反応パウチを作製する方法であって、
請求項72から77に記載の方法又はこれらのうち1項に従ってスポットされたアレイアセンブリを提供することと、
2つ以上のフィルム層の間に前もって形成されたポケット内に前記アレイアセンブリを挿入することと、
前記フィルム層を前記アレイアセンブリに密封して前記フィルム層を前記アレイアセンブリの上面及び下面に密封することと、
前記前もって形成されたポケットを密封することと、
を含む、方法。 - 前記2つ以上のフィルム層は、前記フィルム層の間に前記アレイを位置決めする前に積層され熱成形されて、1つ以上の反応ブリスタ、1つ以上の試薬ブリスタ、及び1つ以上のポケットから成る群から選択された画定エリアを画定する、請求項78に記載の方法。
- 前記2つ以上のフィルム層は、前記フィルム層の間に前記アレイを位置決めした後に積層され熱成形されて、1つ以上の反応ブリスタ、1つ以上の試薬ブリスタ、及び1つ以上のポケットから成る群から選択された画定エリアを画定する、請求項78に記載の方法。
- 前記アレイを流体であふれさせることができるように、前記アレイポケットは1つ以上の上流の流体ブリスタに流体接続されている、請求項78に記載の方法。
- 前記アレイアセンブリは、前記アレイアセンブリの各ウェルに流体接続された流体チャネルシステム及び真空チャネルシステムを含む、請求項78に記載の方法。
- 反応容器であって、
前記反応容器を画定する第1の材料層及び少なくとも第2の材料層と、
前記第1及び第2の材料層の間に形成されたサンプル導入ブリスタ及び希釈ブリスタであって、前記希釈ブリスタは前記サンプル導入ブリスタに流体接続されている、サンプル導入ブリスタ及び希釈ブリスタと、
前記サンプル導入ブリスタに流体接続された1つ以上の反応ウェル及び前記希釈ブリスタに流体接続された1つ以上の反応ウェルと、を含み、
前記希釈ブリスタは、前記サンプル導入ブリスタからのサンプルのアリコートの選択された希釈を行うように構成され、
前記1つ以上の反応ウェルは、前記サンプルに対してアッセイを実行するための試薬を含む、反応容器。 - 前記希釈ブリスタに、前記サンプル導入ブリスタに加えられた前記サンプルの選択された希釈を実行するように選択された体積の流体が提供されている、請求項83に記載の反応容器。
- ブリスタから選択された体積の流体を受容すると共にこれを選択された体積の希釈剤と組み合わせて希釈サンプルを作製するような大きさ及び寸法の体積希釈ウェルを更に含む、請求項83に記載の反応容器。
- ブリスタから選択された体積の流体を受容すると共にこれを選択された体積の希釈剤と組み合わせて希釈サンプルを作製するような大きさ及び寸法のチャネルを更に含む、請求項83に記載の反応容器。
- 前記1つ以上の反応ウェルは、同一の試薬を含む、請求項83に記載の反応容器。
- 前記1つ以上の反応ウェルは、異なる試薬を含む、請求項83に記載の反応容器。
- 前記反応ウェルのうち少なくとも1つは、同一のサンプルブリスタに流体接続された2つ以上の同時充填可能サブウェルを備えた反応ウェルを含む、請求項83に記載の反応容器。
- 前記サンプル導入ブリスタ及び前記希釈ブリスタ内の前記サンプルに基準を提供するための標準溶液に対するアッセイを実行するための試薬を含む1つ以上の反応ウェルに流体接続された既知の標準溶液ブリスタを更に備える、請求項83に記載の反応容器。
- アレイに配置された複数のウェルと、
前記複数のウェルの各々と流体連通している複数の分岐チャネルを含む流体充填チャネルと、を備え、
前記アレイの前記ウェルのうち少なくとも1つは、同一の分岐チャネルに流体接続された2つ以上の同時充填可能サブウェルを備えた反応ウェルを含む、
アレイアセンブリ。 - 前記2つ以上のサブウェルの各々は、別個の試薬を含む、請求項91に記載のアレイアセンブリ。
- 前記サブウェル内の前記別個の試薬は、前記反応ウェルに流体が充填された場合に結合可能である、請求項92に記載のアレイアセンブリ。
- 前記複数のウェルが内部に形成されたカード層を更に備える、請求項91に記載のアレイアセンブリ。
- 反応容器を密封するための方法であって、
サンプル受容チャンバ及び前記サンプル受容ゾーンに流体接続された第1の反応ゾーンを含む反応容器を提供することと、
細長い軸を含むサンプル収集スワブを提供することと、
前記スワブを前記サンプル受容チャンバ内に挿入することと、
前記スワブの前記細長い軸と交差するように前記サンプル受容チャンバにシールを適用して前記サンプル受容チャンバを密封することと、
を含む、方法。 - 前記シールは、前記サンプル受容チャンバ及び前記サンプル収集スワブの前記細長い軸を前記シールにおいて少なくとも部分的に融合させる熱シールである、請求項95に記載の方法。
- 前記軸は、非円形の断面を有する、請求項95に記載の方法。
- 前記細長い軸と交差するように追加のシールを適用して、前記サンプル受容チャンバを前記第1の反応ゾーンに流体接続された複数のチャンバに分割することを更に含む、請求項95に記載の方法。
- 前記サンプル受容チャンバ及び前記スワブの前記細長い軸は、熱シールによって少なくとも部分的に融合させることができる化学的にコンパチブルな材料から製造される、請求項95に記載の方法。
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