JP2022100955A - 微生物マイクロカプセル及びその製造方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】高い内包率で疎水性成分を内包した微生物マイクロカプセル及びその製造方法の提供。【解決手段】２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）を微生物（Ｂ）に内包する微生物マイクロカプセルであって、次の式（１）で定義される内包率が５４質量％超である微生物マイクロカプセル。内包率=[疎水性成分（Ａ）の質量／(疎水性成分（Ａ）の質量＋微生物（Ｂ）の乾燥質量)]×１００ （１）【選択図】なし
Description
本発明は、微生物マイクロカプセル及びその製造方法に関する。
マイクロカプセルは、芯物質とそれを内包する膜剤から構成される、マイクロメータの大きさを持つ微小なカプセルである。有効成分の揮散抑制やデリバリー性向上などを目的に、高分子化合物を膜剤とするカプセルに香料や医薬品、農薬などを内包したマイクロカプセルが工業的に利用されている。
マイクロカプセルの代表的な製造方法としては、物理的手法としてスプレードライ法、物理化学的手法としてコアセルベーション法、化学的手法として界面重合法やｉｎ ｓｉｔｕ重合法などが知られている。
マイクロカプセルの代表的な製造方法としては、物理的手法としてスプレードライ法、物理化学的手法としてコアセルベーション法、化学的手法として界面重合法やｉｎ ｓｉｔｕ重合法などが知られている。
一方で、微生物自体を膜剤として利用した微生物マイクロカプセルが提案されている。微生物マイクロカプセルは、カプセルとしての基本性能に加えて、生分解性、高環境耐性、水分散性、単分散性、害虫の食性といったバイオ素材ならではの機能を有する。
微生物マイクロカプセルには酵母の細胞壁が多く利用されており、例えば、酵素処理した酵母菌体を酸性水溶液で処理し、次いで酵母菌体内にオレイン酸等の疎水性液体を内包させるマイクロカプセルの製造方法（特許文献１）、テルペンエマルションと酵母細胞壁粒子又は酵母グルカン粒子の懸濁液を混合、インキュベートしてテルペン成分を封入した粒子を製造する方法（特許文献２）などが報告されている。
微生物マイクロカプセルには酵母の細胞壁が多く利用されており、例えば、酵素処理した酵母菌体を酸性水溶液で処理し、次いで酵母菌体内にオレイン酸等の疎水性液体を内包させるマイクロカプセルの製造方法（特許文献１）、テルペンエマルションと酵母細胞壁粒子又は酵母グルカン粒子の懸濁液を混合、インキュベートしてテルペン成分を封入した粒子を製造する方法（特許文献２）などが報告されている。
しかしながら、前記従来技術に記載の方法においては、微生物内にそれぞれの疎水性成分が取り込まれにくく、得られる微生物マイクロカプセルの疎水性成分内包率は低いという問題があった。
従って、本発明の課題は、高い内包率で疎水性成分を内包した微生物マイクロカプセル及びその製造方法を提供することにある。
従って、本発明の課題は、高い内包率で疎水性成分を内包した微生物マイクロカプセル及びその製造方法を提供することにある。
本発明者は、微生物に内包する疎水性成分の表面張力に着目して鋭意研究した結果、一定以上の表面張力を有する疎水性成分は微生物内に取り込まれ易いこと、当該疎水性成分をカプセル化する際は、微生物と当該疎水性成分の混合比率を一定以上とすれば、従来にない高い内包率で疎水性成分を内包した微生物マイクロカプセルが得られることを見出した。
すなわち、本発明は、２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）を微生物（Ｂ）に内包する微生物マイクロカプセルであって、次の式（１）で定義される内包率が５４質量％超である微生物マイクロカプセルを提供するものである。
内包率（質量％）＝[疎水性成分（Ａ）の質量／(疎水性成分（Ａ）の質量＋微生物（Ｂ）の乾燥質量)]×１００ （１）
内包率（質量％）＝[疎水性成分（Ａ）の質量／(疎水性成分（Ａ）の質量＋微生物（Ｂ）の乾燥質量)]×１００ （１）
また、本発明は、２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）と微生物（Ｂ）を混合する工程を含み、前記混合を、微生物（Ｂ）の乾燥質量に対する疎水性成分（Ａ）の質量比［（Ａ）／（Ｂ）］が２超の条件で行う、微生物マイクロカプセルの製造方法を提供するものである。
本発明によれば、疎水性成分を多く内包する微生物マイクロカプセルを得ることができる。
〔微生物マイクロカプセル〕
本発明の微生物マイクロカプセルは、２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）を微生物（Ｂ）に内包するマイクロカプセルであって、次の式（１）で定義される内包率が５４質量％超である。当該内包率は疎水性成分（Ａ）の効率的利用の点から、高い程好ましい。内包率は、好ましくは５５質量％以上、より好ましくは５７質量％以上、更に好ましくは６０質量％以上、より更に６４質量％以上である。
内包率（質量％）＝[疎水性成分（Ａ）の質量／(疎水性成分（Ａ）の質量＋微生物（Ｂ）の乾燥質量)]×１００ （１）
疎水性成分の内包率を高くすることにより、その他の種々の疎水性の有効成分を高含有した微生物カプセルとすることが期待できる。
本発明の微生物マイクロカプセルは、２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）を微生物（Ｂ）に内包するマイクロカプセルであって、次の式（１）で定義される内包率が５４質量％超である。当該内包率は疎水性成分（Ａ）の効率的利用の点から、高い程好ましい。内包率は、好ましくは５５質量％以上、より好ましくは５７質量％以上、更に好ましくは６０質量％以上、より更に６４質量％以上である。
内包率（質量％）＝[疎水性成分（Ａ）の質量／(疎水性成分（Ａ）の質量＋微生物（Ｂ）の乾燥質量)]×１００ （１）
疎水性成分の内包率を高くすることにより、その他の種々の疎水性の有効成分を高含有した微生物カプセルとすることが期待できる。
本明細書において疎水性成分（Ａ）は、２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分である。疎水性成分（Ａ）は、微生物への内包のしやすさの点から、２５℃における表面張力が３５．１ｍＮ／ｍ以上、更には３６．３ｍＮ／ｍ以上の疎水性成分が好ましい。表面張力の上限は特に限定されないが、７２ｍＮ／ｍ以下（水の表面張力以下）、更に３８．５ｍＮ／ｍ以下であることが好ましい。
疎水性成分（Ａ）として、例えば、カルバクロール（３５．１ｍＮ／ｍ）、サリチル酸メチル（３６．３ｍＮ／ｍ）、ベンジルアルコール（３８．５ｍＮ／ｍ）などが挙げられる。なお、括弧内の数値は２５℃における表面張力である。
疎水性成分（Ａ）として、例えば、カルバクロール（３５．１ｍＮ／ｍ）、サリチル酸メチル（３６．３ｍＮ／ｍ）、ベンジルアルコール（３８．５ｍＮ／ｍ）などが挙げられる。なお、括弧内の数値は２５℃における表面張力である。
疎水性成分は、後述するカプセル化の際の温度で水と液－液相分離する成分であれば特に限定されないが、疎水性成分の内包率の点から、ｌｏｇＰ値が１．０以上のものが好ましく、１．４６以上のものがより好ましく、また同様の点から、３０以下のものが好ましく、２０以下のものがより好ましく、１０以下のものが更に好ましい。前述したサリチル酸メチル及びベンジルアルコールのｌｏｇＰ値は１．４６、カルバクロールのｌｏｇＰ値は３．３７である。
ｌｏｇＰ値は、１－オクタノール／水間の分配係数の常用対数をとった値で、有機化合物の疎水性を示す指標である。この値が正に大きい程疎水性が高いことを表す。疎水性成分のｌｏｇＰ値は、Ｃｈｅｍ Ｄｒａｗ １８．２を用いて計算したものであり、計算方法にはＭｏｌｅｃｕｌａｒ ＮｅｔｗｏｒｋｓのケモインフォマティクスプラットフォームＭＯＳＥＳに基づく計算モジュールが用いられている。ＭＯＳＥＳは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｎｅｔｗｏｒｋｓ ＧｍｂＨ（ドイツ 、エルランゲン）が開発、保守、所有している。
好ましい疎水性成分としては、医薬品や医薬部外品、化粧品、食品、農薬などに使用される成分が挙げられる。なかでも、微生物マイクロカプセルの害虫の食性を活用する観点から、衛生害虫用、農業害虫用の殺虫成分が好ましい。
ｌｏｇＰ値は、１－オクタノール／水間の分配係数の常用対数をとった値で、有機化合物の疎水性を示す指標である。この値が正に大きい程疎水性が高いことを表す。疎水性成分のｌｏｇＰ値は、Ｃｈｅｍ Ｄｒａｗ １８．２を用いて計算したものであり、計算方法にはＭｏｌｅｃｕｌａｒ ＮｅｔｗｏｒｋｓのケモインフォマティクスプラットフォームＭＯＳＥＳに基づく計算モジュールが用いられている。ＭＯＳＥＳは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｎｅｔｗｏｒｋｓ ＧｍｂＨ（ドイツ 、エルランゲン）が開発、保守、所有している。
好ましい疎水性成分としては、医薬品や医薬部外品、化粧品、食品、農薬などに使用される成分が挙げられる。なかでも、微生物マイクロカプセルの害虫の食性を活用する観点から、衛生害虫用、農業害虫用の殺虫成分が好ましい。
疎水性成分（Ａ）は、１種であっても、２種以上の混合物であってもよい。疎水性成分（Ａ）が２種以上の混合物である場合、疎水性成分（Ａ）の２５℃における表面張力は当該２種以上の混合物としての表面張力を意味する。従って、当該２種以上の混合物の２５℃における表面張力が前記範囲となる限り、それ自体では２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ以下の疎水性成分を組み合わせて用いてもよい。
本明細書において、疎水性成分（Ａ）の２５℃における表面張力は、後述する実施例に記載の方法で測定できる。
本明細書において、疎水性成分（Ａ）の２５℃における表面張力は、後述する実施例に記載の方法で測定できる。
本明細書において微生物（Ｂ）は、特に限定されないが、疎水性成分（Ａ）の内包しやすさの点から、好ましくは細胞壁を有する微生物であり、より好ましくは酵母、微細藻類、糸状菌であり、更に好ましくは酵母、微細藻類である。
酵母としては、例えば、サッカロミセス（Saccharomyces）属、カンジダ(Candida)属、ロドトルラ(Rhodotorula)属、ピキア(Pichia)属などの酵母が挙げられる。なかでも、好ましくはサッカロミセス（Saccharomyces）属の酵母であり、より好ましくはサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）である。
微細藻類としては、例えば、好ましくはユースチグマトス目（Eustigmatales）の藻類、より好ましくはナンノクロロプシス（Nannochloropsis）属の藻類が挙げられる。なかでも、好ましくは、ナンノクロロプシス・オキュラータ（Nannochloropsis oculata）、ナンノクロロプシス・オセアニカ（Nannochloropsis oceanica）、ナンノクロロプシス・ガディタナ（Nannochloropsis gaditana）、ナンノクロロプシス・サリナ（Nannochloropsis salina）、ナンノクロロプシス・アトムス（Nannochloropsis atomus）、ナンノクロロプシス・マキュラタ（Nannochloropsis maculata）、ナンノクロロプシス・グラニュラータ（Nannochloropsis granulata）、ナンノクロロプシス・エスピー（Nannochloropsis sp．）であり、より好ましくはナンノクロロプシス・エスピー（Nannochloropsis sp．）である。
微生物（Ｂ）は、膜剤として利用できればよく、生の状態、乾燥した状態、死滅した状態のいずれでもよい。
酵母としては、例えば、サッカロミセス（Saccharomyces）属、カンジダ(Candida)属、ロドトルラ(Rhodotorula)属、ピキア(Pichia)属などの酵母が挙げられる。なかでも、好ましくはサッカロミセス（Saccharomyces）属の酵母であり、より好ましくはサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）である。
微細藻類としては、例えば、好ましくはユースチグマトス目（Eustigmatales）の藻類、より好ましくはナンノクロロプシス（Nannochloropsis）属の藻類が挙げられる。なかでも、好ましくは、ナンノクロロプシス・オキュラータ（Nannochloropsis oculata）、ナンノクロロプシス・オセアニカ（Nannochloropsis oceanica）、ナンノクロロプシス・ガディタナ（Nannochloropsis gaditana）、ナンノクロロプシス・サリナ（Nannochloropsis salina）、ナンノクロロプシス・アトムス（Nannochloropsis atomus）、ナンノクロロプシス・マキュラタ（Nannochloropsis maculata）、ナンノクロロプシス・グラニュラータ（Nannochloropsis granulata）、ナンノクロロプシス・エスピー（Nannochloropsis sp．）であり、より好ましくはナンノクロロプシス・エスピー（Nannochloropsis sp．）である。
微生物（Ｂ）は、膜剤として利用できればよく、生の状態、乾燥した状態、死滅した状態のいずれでもよい。
微生物（Ｂ）の形態は、卵形、球形、レンズ形、楕円形などが挙げられるが、凝集性や粘性の点から、球形に近い形状であることが好ましい。同様の点から、微生物（Ｂ）の直径は好ましくは０．５～３０μｍ、より好ましくは１～２０μｍ、更に好ましくは２～１５μｍである。ここで、本明細書において、微生物（Ｂ）の直径とは、ＨＯＲＩＢＡ社製レーザー回折／散乱式粒子径分布測定装置（ＬＡ－９２０）によって測定されたメジアン径のことを指す。
微生物（Ｂ）は、疎水性成分（Ａ）の内包しやすさの点、及び疎水性成分（Ａ）の内包率の向上の点から、予め菌体内成分を溶出させたものを用いることが好ましい。菌体内成分を溶出させる処理としては、酵素処理などの公知の方法が挙げられる。酵素処理後、さらに酸処理などの処理を行ってもよい。
酵素処理に用いられる酵素は、微生物自体が保有している自己消化酵素、プロテアーゼ、グルカナーゼ、キチナーゼ及びマンナーゼから選ばれる少なくとも１種が好ましい。酵素処理の条件は特に限定されないが、処理温度は３０℃～６０℃、好ましくは４０℃～５０℃である。処理時間は１時間～４８時間、好ましくは１５時間～２４時間である。
酵素処理に用いられる酵素は、微生物自体が保有している自己消化酵素、プロテアーゼ、グルカナーゼ、キチナーゼ及びマンナーゼから選ばれる少なくとも１種が好ましい。酵素処理の条件は特に限定されないが、処理温度は３０℃～６０℃、好ましくは４０℃～５０℃である。処理時間は１時間～４８時間、好ましくは１５時間～２４時間である。
酸処理に用いられる酸としては、例えば、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸などの無機酸、クエン酸、乳酸、アスコルビン酸などの有機酸が挙げられる。酸処理の条件は特に限定されないが、酸添加によりｐＨは０～２、好ましくは１以下、より好ましくは０．５以下に調整する。処理温度は５０℃～１００℃、好ましくは８５℃～１００℃である。処理時間は５分～６０分、好ましくは１０分～３０分である。
本発明の微生物マイクロカプセルは、疎水性成分（Ａ）の他、本発明の効果を阻害しない範囲で、溶剤、界面活性剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、糖類、塩類、香料、色素などを適宜含有することができる。
〔微生物マイクロカプセルの製造方法〕
本発明の微生物マイクロカプセルは、２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）と微生物（Ｂ）を混合する工程を含み、前記混合を、微生物（Ｂ）の乾燥質量に対する疎水性成分（Ａ）の質量比［（Ａ）／（Ｂ）］が２超の条件で行う製造方法により得ることができる。微生物（Ｂ）の乾燥質量に対する疎水性成分（Ａ）の質量比［（Ａ）／（Ｂ）］を２より大きくすることで、高い内包率で疎水性成分（Ａ）を微生物（Ｂ）に内包させることができる。
以下、本明細書において、２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）と微生物（Ｂ）を混合する工程を混合工程ともいう。
本発明の微生物マイクロカプセルは、２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）と微生物（Ｂ）を混合する工程を含み、前記混合を、微生物（Ｂ）の乾燥質量に対する疎水性成分（Ａ）の質量比［（Ａ）／（Ｂ）］が２超の条件で行う製造方法により得ることができる。微生物（Ｂ）の乾燥質量に対する疎水性成分（Ａ）の質量比［（Ａ）／（Ｂ）］を２より大きくすることで、高い内包率で疎水性成分（Ａ）を微生物（Ｂ）に内包させることができる。
以下、本明細書において、２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）と微生物（Ｂ）を混合する工程を混合工程ともいう。
混合工程では、前述した疎水性成分（Ａ）と微生物（Ｂ）を水性溶媒へ分散させ、スラリー状態とした混合原料を調製し、混合を行うことが好ましい。
本明細書において、水性溶媒とは、水、又は水溶性有機溶媒を含む水溶液をいう。水としては、水道水、蒸留水、イオン交換水、精製水などが挙げられる。水溶性有機溶媒としては、例えば、エタノールなどの低級アルコールが挙げられる。
混合原料には、前述した微生物マイクロカプセルに含有し得る疎水性成分（Ａ）以外の成分を用いてもよい。
本明細書において、水性溶媒とは、水、又は水溶性有機溶媒を含む水溶液をいう。水としては、水道水、蒸留水、イオン交換水、精製水などが挙げられる。水溶性有機溶媒としては、例えば、エタノールなどの低級アルコールが挙げられる。
混合原料には、前述した微生物マイクロカプセルに含有し得る疎水性成分（Ａ）以外の成分を用いてもよい。
混合原料中の疎水性成分（Ａ）の含有量は、その種類によって異なるが、生産効率の点から、好ましくは１１質量％以上、より好ましくは１５質量％以上、更に好ましくは２０質量％以上であり、また、好ましくは８０質量％以下、より好ましくは７０質量％以下、更に好ましくは６０質量％以下である。
また、混合原料中の微生物（Ｂ）の含有量は、生産効率の点から、乾燥質量として、好ましくは５質量％以上、より好ましくは７質量％以上、更に好ましくは１０質量％以上であり、また、攪拌や分離操作等の作業効率の点から、好ましくは３０質量％以下、より好ましくは２５質量％以下、更に好ましくは２０質量％以下である。ここで、本明細書において、微生物（Ｂ）の乾燥質量は、微生物を１０５℃の乾燥機で１２時間乾燥して揮発物質を除いた残分を指す。
混合工程において、微生物（Ｂ）の乾燥質量に対する疎水性成分（Ａ）の質量比［（Ａ）／（Ｂ）］は２超であるが、疎水性成分（Ａ）の内包率の向上の点から、好ましくは２．５以上、より好ましくは３．０以上、更に好ましくは４以上、より更に好ましくは５以上であり、また、生産効率の点から、好ましくは８以下、より好ましくは７以下、更に好ましくは６以下である。
混合工程における温度は、疎水性成分（Ａ）の内包率の向上の点から、好ましくは２０～８０℃、より好ましくは２５～６０℃、更に好ましくは３０～６０℃、更に好ましくは３５～５０℃である。
混合時間は、疎水性成分（Ａ）の内包率の向上の点から、好ましくは３時間以上、より好ましくは５時間以上、更に好ましくは１０時間以上、更に好ましくは１５時間以上であり、また、生産効率の点から、好ましくは７２時間以内、より好ましくは４８時間以内、更に好ましくは２４時間以内である。
混合工程における撹拌条件は適宜調整することができるが、疎水性成分（Ａ）の内包率の向上の点から、好ましくは０ｒ／ｍｉｎより大きく、より好ましくは５０ｒ／ｍｉｎ以上、更に好ましくは１００ｒ／ｍｉｎ以上であり、また、好ましくは３００ｒ／ｍｉｎ以下、より好ましくは２５０ｒ／ｍｉｎ以下、更に好ましくは２００ｒ／ｍｉｎ以下である。ここで、本明細書において、攪拌条件は往復振盪した際の回転数を指す。
このような混合工程により、微生物（Ｂ）に疎水性成分（Ａ）を内包化させることができる。混合工程後は、遠心分離、濾過等の分離操作により微生物マイクロカプセルを分取することができる。分取した微生物マイクロカプセルは、必要に応じて洗浄、乾燥などを行ってもよい。
本発明の方法により得られる微生物マイクロカプセルは疎水性成分（Ａ）の内包率が高い。なお、好ましい疎水性成分（Ａ）の内包率は前述のとおりである。
そのため、本発明の疎水性成分（Ａ）を内包する微生物マイクロカプセルは、医薬品や医薬部外品、化粧品、食品、農薬などの様々な製品に利用可能である。とりわけ、その害虫の食性を活用して、例えば、衛生害虫や農業害虫に対する害虫防除剤に好適に利用することができる。
そのため、本発明の疎水性成分（Ａ）を内包する微生物マイクロカプセルは、医薬品や医薬部外品、化粧品、食品、農薬などの様々な製品に利用可能である。とりわけ、その害虫の食性を活用して、例えば、衛生害虫や農業害虫に対する害虫防除剤に好適に利用することができる。
＜疎水性成分（Ａ）の内包率の算出法＞
酵母マイクロカプセル又はナンノクロロプシスマイクロカプセルのスラリー１ｍＬから、遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ製ＣＦ１５ＲＸ，１５０００ｒ／ｍｉｎ，１ｍｉｎ）後、上清の水を除去した。ここに、メタノール０．５ｍＬ、クロロホルム０．２５ｍＬを添加して再懸濁させ、１０分間静置した後、さらにクロロホルム０．５ｍＬ、蒸留水０．２５ｍＬを添加混合し、カプセル内包物を抽出した。遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ製ＣＦ１５ＲＸ，１５０００ｒ／ｍｉｎ，１ｍｉｎ）後、下層の油層を回収し、ガスクロマトグラフィーあるいは高速液体クロマトグラフィー分析にて内包量（疎水性成分（Ａ）量）を算出した。疎水性成分（Ａ）の内包率は次式によって算出した。
内包率（質量％）＝[疎水性成分（Ａ）の質量／（疎水性成分（Ａ）の質量＋微生物（Ｂ）（酵母又はナンノクロロプシス）の乾燥質量）]×１００
酵母マイクロカプセル又はナンノクロロプシスマイクロカプセルのスラリー１ｍＬから、遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ製ＣＦ１５ＲＸ，１５０００ｒ／ｍｉｎ，１ｍｉｎ）後、上清の水を除去した。ここに、メタノール０．５ｍＬ、クロロホルム０．２５ｍＬを添加して再懸濁させ、１０分間静置した後、さらにクロロホルム０．５ｍＬ、蒸留水０．２５ｍＬを添加混合し、カプセル内包物を抽出した。遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ製ＣＦ１５ＲＸ，１５０００ｒ／ｍｉｎ，１ｍｉｎ）後、下層の油層を回収し、ガスクロマトグラフィーあるいは高速液体クロマトグラフィー分析にて内包量（疎水性成分（Ａ）量）を算出した。疎水性成分（Ａ）の内包率は次式によって算出した。
内包率（質量％）＝[疎水性成分（Ａ）の質量／（疎水性成分（Ａ）の質量＋微生物（Ｂ）（酵母又はナンノクロロプシス）の乾燥質量）]×１００
＜表面張力の測定法＞
表面計器製作所製ＤＧ－１を用い、２５℃、大気圧下で、毛細管上昇法により疎水性成分（Ａ）の表面張力を測定した。この液高さは水の密度基準で決定されているため、密度で補正する必要があり、密度は京都電子工業製のポータブル密度比重計ＤＡ－１３０Ｎにより測定した。
表面計器製作所製ＤＧ－１を用い、２５℃、大気圧下で、毛細管上昇法により疎水性成分（Ａ）の表面張力を測定した。この液高さは水の密度基準で決定されているため、密度で補正する必要があり、密度は京都電子工業製のポータブル密度比重計ＤＡ－１３０Ｎにより測定した。
実施例１～９及び比較例１～１８
本実施例において、酵母とはサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）を指す。酵母に対してその酵母内成分を溶出させる処理を行った残差（商品名：イーストラップ、三菱商事ライフサイエンス株式会社製)を乾燥質量換算で５質量％、表１に記載の疎水性成分を５～３０質量％となるようそれぞれ蒸留水に分散させて混合原料スラリーを得た。酵母の乾燥質量に対する疎水性成分の質量比（（Ａ）／（Ｂ））は表１のとおりである。
この混合原料スラリーを、温度４０℃で往復振盪機にて２００ｒ／ｍｉｎで１７時間振盪し、カプセル化酵母スラリーを得た。得られたカプセル化酵母スラリーから、遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ製ＣＦ１５ＲＸ，１５０００ｒ／ｍｉｎ，１ｍｉｎ）によってカプセル化酵母を沈殿させ、未利用の疎水性成分（Ａ）を含む上清を取り除き、同量の蒸留水で２回洗浄し、酵母マイクロカプセルを得た。酵母マイクロカプセルの疎水性成分（Ａ）の内包率を算出した。
実施例及び比較例の条件と疎水性成分（Ａ）の内包率を表１に示す。
本実施例において、酵母とはサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）を指す。酵母に対してその酵母内成分を溶出させる処理を行った残差（商品名：イーストラップ、三菱商事ライフサイエンス株式会社製)を乾燥質量換算で５質量％、表１に記載の疎水性成分を５～３０質量％となるようそれぞれ蒸留水に分散させて混合原料スラリーを得た。酵母の乾燥質量に対する疎水性成分の質量比（（Ａ）／（Ｂ））は表１のとおりである。
この混合原料スラリーを、温度４０℃で往復振盪機にて２００ｒ／ｍｉｎで１７時間振盪し、カプセル化酵母スラリーを得た。得られたカプセル化酵母スラリーから、遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ製ＣＦ１５ＲＸ，１５０００ｒ／ｍｉｎ，１ｍｉｎ）によってカプセル化酵母を沈殿させ、未利用の疎水性成分（Ａ）を含む上清を取り除き、同量の蒸留水で２回洗浄し、酵母マイクロカプセルを得た。酵母マイクロカプセルの疎水性成分（Ａ）の内包率を算出した。
実施例及び比較例の条件と疎水性成分（Ａ）の内包率を表１に示す。
実施例１０～１８及び比較例１９～３５
本実施例にて、ナンノクロロプシスとはナンノクロロプシス・エスピー（Nannochloropsis sp．を指す。ナンノクロロプシスを噴霧乾燥した製品（商品名：スメーブナンノＷ、スメーブジャパン株式会社製)を乾燥質量で５質量％、表２に記載の疎水性成分を５～３０質量％となるようそれぞれ蒸留水に分散させて混合原料スラリーを得た。ナンノクロロプシスの乾燥質量に対する疎水性成分の質量比（（Ａ）／（Ｂ））は表２のとおりである。
この混合原料スラリーを、温度４０℃で往復振盪機にて２００ｒ／ｍｉｎで１７時間振盪し、カプセル化ナンノクロロプシススラリーを得た。得られたカプセル化ナンノクロロプシススラリーから、遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ製ＣＦ１５ＲＸ，１５０００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ）によってカプセル化ナンノクロロプシスを沈殿させ、未利用の疎水性成分（Ａ）を含む上清を取り除き、同量の蒸留水で２回洗浄し、ナンノクロロプシスマイクロカプセルを得た。ナンノクロロプシスマイクロカプセルの疎水性成分（Ａ）の内包率を算出した。
実施例及び比較例の条件と疎水性成分（Ａ）の内包率を表２に示す。
本実施例にて、ナンノクロロプシスとはナンノクロロプシス・エスピー（Nannochloropsis sp．を指す。ナンノクロロプシスを噴霧乾燥した製品（商品名：スメーブナンノＷ、スメーブジャパン株式会社製)を乾燥質量で５質量％、表２に記載の疎水性成分を５～３０質量％となるようそれぞれ蒸留水に分散させて混合原料スラリーを得た。ナンノクロロプシスの乾燥質量に対する疎水性成分の質量比（（Ａ）／（Ｂ））は表２のとおりである。
この混合原料スラリーを、温度４０℃で往復振盪機にて２００ｒ／ｍｉｎで１７時間振盪し、カプセル化ナンノクロロプシススラリーを得た。得られたカプセル化ナンノクロロプシススラリーから、遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ製ＣＦ１５ＲＸ，１５０００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ）によってカプセル化ナンノクロロプシスを沈殿させ、未利用の疎水性成分（Ａ）を含む上清を取り除き、同量の蒸留水で２回洗浄し、ナンノクロロプシスマイクロカプセルを得た。ナンノクロロプシスマイクロカプセルの疎水性成分（Ａ）の内包率を算出した。
実施例及び比較例の条件と疎水性成分（Ａ）の内包率を表２に示す。
表１及び表２より明らかなように、２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分を用い、且つ微生物の乾燥質量に対する当該疎水性成分の質量比が２超となるように微生物と疎水性成分を混合することで、高い内包率で疎水性成分を内包した微生物マイクロカプセルが得られることが確認された。
Claims (11)
- ２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）を微生物（Ｂ）に内包する微生物マイクロカプセルであって、次の式（１）で定義される内包率が５４質量％超である微生物マイクロカプセル。
内包率（質量％）＝[疎水性成分（Ａ）の質量／(疎水性成分（Ａ）の質量＋微生物（Ｂ）の乾燥質量)]×１００ （１） - 前記疎水性成分（Ａ）が、ｌｏｇＰ値が１．０以上である疎水性成分である請求項１に記載の微生物マイクロカプセル。
- 前記微生物（Ｂ）が細胞壁を有する微生物である請求項１又は２に記載の微生物マイクロカプセル。
- 前記微生物（Ｂ）が酵母である請求項１又は２に記載の微生物マイクロカプセル。
- 前記微生物（Ｂ）が微細藻類である請求項１又は２に記載の微生物マイクロカプセル。
- ２５℃における表面張力が３３．６ｍＮ／ｍ超の疎水性成分（Ａ）と微生物（Ｂ）を混合する工程を含み、前記混合を、微生物（Ｂ）の乾燥質量に対する疎水性成分（Ａ）の質量比［（Ａ）／（Ｂ）］が２超の条件で行う、微生物マイクロカプセルの製造方法。
- 前記疎水性成分（Ａ）が、ｌｏｇＰ値が１．０以上である疎水性成分である請求項６に記載の微生物マイクロカプセルの製造方法。
- 前記混合を２０～８０℃で行う請求項６又は７に記載の微生物マイクロカプセルの製造方法。
- 前記微生物（Ｂ）が細胞壁を有する微生物である請求項６～８のいずれか１項に記載の微生物マイクロカプセルの製造方法。
- 前記微生物（Ｂ）が酵母である請求項６～８のいずれか１項に記載の微生物マイクロカプセルの製造方法。
- 前記微生物（Ｂ）が微細藻類である請求項６～８のいずれか１項に記載の微生物マイクロカプセルの製造方法。
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