JP2022058341A - クレブシエラ・ニューモニエのガラクタンベースのo抗原をターゲティングする抗体 - Google Patents
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Description
異的に認識するモノクローナル抗体に関する。
部分をもつ:i)リピドA,それはエンドトキシンとしても知られている、ii)コア-オリゴ糖、およびiii)O抗原,それはオリゴ糖ブロックの反復単位で構築されている。
ー、すなわちガラクタンから構成されている。O2抗原(後記のO2acと区別するために、O2aまたはO2abとしても知られる)は、いわゆるガラクタン-I 二糖のリピートで構成されている(参照:図3)。これに対し、O1およびO2ac抗原は、ガラクタン-Iのほかに下記のように別個の追加構造を含む:LPSコア近接部分はガラクタン-Iのリピートで構成され、それにガラクタン-II(O1の場合、異なるガラクトースホモポリマー)または非ガラクタン反復単位(O2acの場合)がキャッピングしている。
含む7.3kbの長さであると記載されている。クレブシエラ・ニューモニエO1、大腸菌(E. coli)K-12またはチフス菌(Salmonella enterica serovar Typhimurium)のラフ型変異体(rough mutant)にクローン化rfb遺伝子座を補充すると、ガラクタン-I O抗原リピートからなるスムーズLPS(smooth LPS)の産生を回復した。これは、ガラクタン-I O抗原側鎖の産生にはこれら6つの遺伝子が必須かつ十分であることを示唆する(3)。種々のO2クレブシエラ属(Klebsiella)菌株におけるD-ガラクタン-Iの構造修
飾がKellyらにより公表された(5)。それにもかかわらず、これらの修飾の遺伝学的バックグラウンドは依然として解明されないままである。ガラクタン-II反復単位(すなわち、ガラクタン-Iまたは本明細書に提示するガラクタン-IIIをキャッピングしているもの)をコードする遺伝学的決定因子が最近記載された(4)。重要な点は、これらの遺伝
子は、ガラクタン-Iユニットをガラクタン-IIIに変換するのに関与する遺伝学的決定因子とは無関係なことである。したがって、O1血清型の菌株は、血清型を決定する表面存在ガラクタン-II反復単位を発現するほかに、リピドA-コアとガラクタン-IIリピートとを架橋するガラクタン-Iまたはガラクタン-IIIのいずれかの反復単位を発現する可能性がある。
本発明によれば、クレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)のリポ多糖(
LPS) O抗原構造体のガラクタン-IIIエピトープを特異的に認識する単離された抗体であって、エピトープはガラクタン-III反復単位に内包されており、そのガラクタン-III反復単位が式(I)
具体的には、ガラクタン-IIIエピトープは少なくとも2、または少なくとも3、4もしくは5つのgal-III反復単位を含むO抗原構造体に内包されている。
たとえば、本発明の抗体は、gal-III抗原を含むO抗原構造体を特異的に認識または結合するgal-III特異的抗体である。代表的抗体、またはそのような抗体のバリアントを、図1および2に挙げる。バリアントを提示する目的のために、それらの抗体を本明細書中で親抗体と呼び、それらのCDRまたはフレームワーク配列を本明細書中で親CDRまたは親フレームワーク配列と呼ぶ。
l-III抗原を優先的に結合するKd差は、イムノアッセイ、好ましくはイムノブロッティング、ELISAまたは他の免疫学的方法により判定して、少なくとも0.5もしくは1 log、またはさらには少なくとも2 log、もしくは少なくとも3 logの差である。
も交差反応しないことを特徴とし、および/または抗体は他のいずれかのクレブシエラ・ニューモニエ抗原に、より低い親和性で結合する;たとえば、その際、他のクレブシエラ・ニューモニエ抗原(gal-IIIまたはgal-I抗原以外のもの)よりgal-III抗原を優先的に結合するKd差は、少なくとも2 log、好ましくは少なくとも3
logである。
a)SEQ ID 10のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 11のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 12のアミノ酸配列からなるCDR3;および
d)SEQ ID 19のアミノ酸配列からなるCDR4;および
e)SEQ ID 17のアミノ酸配列からなるCDR5;および
f)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6。
そのようなCDR配列はKabatのナンバリングシステムに従って表示されている。
発明および特許請求の範囲が、同じ抗体およびCDRであるけれども異なるナンバリングおよび表示をもつCDR領域、すなわち、IMGTシステム(The international ImMunoGeneTics, Lefranc et al., 1999, Nucleic Acids Res. 27: 209-212)に従って定義されたCDR領域をも包含するはずであることは十分に理解される。
特定の態様は、完全長モノクローナル抗体、その抗体フラグメントであって結合部位を内包する少なくとも1つの抗体ドメインを含むもの、または結合部位を内包する少なくとも1つの抗体ドメインを含む融合タンパク質のいずれかである抗体について述べる;具体的には、その際、抗体はランダム化または人工アミノ酸配列を含む非天然抗体である。
特定の態様によれば、抗体は少なくとも、表1に挙げるCDR1~CDR3配列を特徴とする抗体重鎖可変領域またはドメイン(VH)(それらはKabatのナンバリングシステムに従って表示されている)のいずれか、またはその機能活性CDRバリアントを含む。
い。これらのバリアント抗体はターゲット抗原に結合し、よって機能活性であるとみなされる。たとえばそれぞれのFRまたはCDR配列中に修飾をもつバリアントVHまたはVLドメインであって、機能活性であるもの、たとえば親抗体と同じエピトープに結合し、または同じ結合部位を含み、または同じ結合特性をもつものを使用できる。本明細書に記載する抗体のあるFRまたはCDR配列を、他の抗体、たとえば表1に挙げた抗体のものと交換することもできる。
A)グループメンバーi)~iv)からなるグループから選択される抗体
i)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 1のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 2のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 3のアミノ酸配列からなるCDR3;
ii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 4のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 5のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 6のアミノ酸配列からなるCDR3;
iii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 7のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 8のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 9のアミノ酸配列からなるCDR3;
iv)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 10のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 11のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 12のアミノ酸配列からなるCDR3;
または
B)Aのグループメンバーのいずれかである親抗体の機能活性バリアントであって、親抗体のCDR1、CDR2またはCDR3のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む抗体。
特定の態様によれば、抗体はさらに、抗体軽鎖可変領域またはドメイン(VL)を含み、それは表1に挙げるCDR4~CDR6配列(それらはKabatのナンバリングシステムに従って表示されている)のいずれか、またはその機能活性CDRバリアントを含む。
i)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 13のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 14のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 15のアミノ酸配列からなるCDR6;
ii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 16のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 17のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
iii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 19のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 20のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
iv)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 19のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 17のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
または
B)Aのグループメンバーのいずれかである親抗体の機能活性バリアントであって、親抗体のCDR4、CDR5またはCDR6のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む抗体。
a)SEQ ID 19のアミノ酸配列からなるCDR4、またはそのCDR4の機能活性CDRバリアント;および
b)SEQ ID 20のアミノ酸配列からなるCDR5、またはそのCDR5の機能活性CDRバリアント;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6、またはそのCDR6の機能活性CDRバリアント;
を、好ましくは本明細書に記載するいずれかのVH配列との組合わせで含む。
具体的には、抗体はVHおよびVLの両方のアミノ酸配列、ならびに場合によりさらに完全長抗体または抗体フラグメント、特に完全長抗体またはFabフラグメントのいずれかのフレームワーク配列を含む。
a)表1に挙げるいずれかの抗体のCDR1~CDR6配列;または
b)図2に示すいずれかの抗体のVHおよびVL配列;または
c)a)~c)の配列を特徴とする親抗体の機能活性バリアント:
好ましくは、その際、
i.機能活性バリアントは、親抗体のCDR1~CDR6のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む;および/または
ii.機能活性バリアントは、VHおよびVL配列のいずれかのフレームワーク領域に少なくとも1つの点変異を含む;
さらに
iii.機能活性バリアントは、親抗体と同じエピトープを結合する特異性を有する;および/または
iv.機能活性バリアントは、親抗体のヒト、ヒト化、キメラもしくはネズミおよび/または親和性成熟バリアントである。
a)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 1のCDR1配列;および
b.SEQ ID 2のCDR2配列;および
c.SEQ ID 3のCDR3配列;および
d.SEQ ID 13のCDR4配列;および
e.SEQ ID 14のCDR5配列;および
f.SEQ ID 15のCDR6配列;
b)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 4のCDR1配列;および
b.SEQ ID 5のCDR2配列;および
c.SEQ ID 6のCDR3配列;および
d.SEQ ID 16のCDR4配列;および
e.SEQ ID 17のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
c)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 7のCDR1配列;および
b.SEQ ID 8のCDR2配列;および
c.SEQ ID 9のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 20のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
d)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 10のCDR1配列;および
b.SEQ ID 11のCDR2配列;および
c.SEQ ID 12のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 17のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
e)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 4のCDR1配列;および
b.SEQ ID 5のCDR2配列;および
c.SEQ ID 6のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 20のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
f)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 10のCDR1配列;および
b.SEQ ID 11のCDR2配列;および
c.SEQ ID 12のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 20のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
または以上のいずれかの機能活性CDRバリアントであって、gal-III抗原を10-8M未満、好ましくは10-9M未満、好ましくは10-10M未満、好ましくは10-11M未満のKdで結合する親和性を備えたもの、たとえばピコモル濃度範囲の親和性を備えたもの。
a)親CDR配列における1、2もしくは3つの点変異;および/または
b)親CDR配列の4つのC末端もしくは4つのN末端もしくは4つの中心アミノ酸位置のいずれかにおける1もしくは2つの点変異;および/または
c)親CDR配列との少なくとも60%の配列同一性;
好ましくは、機能活性CDRバリアントは4または5個のアミノ酸からなるいずれかのCDR配列中に1または2つの点変異を含む。
具体的には、機能活性バリアントはアミノ酸配列中の、好ましくはCDR中の、少なくとも1つの点変異において親抗体と異なり、その際、各CDRアミノ酸配列中の点変異の数は0、1、2または3である。
とえばIgG1、IgG2、IgG3もしくはIgG4サブタイプのもの、またはIgA1、IgA2、IgD、IgEもしくはIgM抗体のものである。
特定の側面によれば、本発明の抗体は図1(表1)に挙げるCDR組合わせを含むが、ただし、その抗体はなお機能活性である。
i.抗体G3-77は、抗体9H9-H7のVH-CDR配列(CDR1、2および3);および抗体5A4-A7のVL-CDR配列(CDR4、5および6)を含む;
ii.抗体G3-78は、抗体9H9-H7のVH-CDR配列(CDR1、2および
3);および抗体5A4-A7のVL-CDR配列(CDR4、5および6)を含む;
iii.抗体G3-97は、抗体2D8-A10のVH-CDR配列(CDR1、2および3);および抗体5A4-A7のVL-CDR配列(CDR4、5および6)を含む。
本発明において特に、CDR1、2および3とナンバリングされたCDRはVHドメインの結合領域を表わし、CDR4、5および6はVLドメインの結合領域を表わすと解釈される。
特定の側面によれば、図2の配列はそれぞれ定常領域において末端が伸長または欠失していてもよい;たとえば、1個以上のC末端アミノ酸の欠失。
本発明はさらに、本発明のいずれかの抗体、たとえば表1に挙げる抗体、または図2に示すいずれかのVHまたはVLアミノ酸配列の組合わせを含む抗体、またはそのようなVHおよびVLアミノ酸配列の組合わせにより形成される結合部位を含む抗体である親抗体の機能活性抗体バリアントを製造する方法を提供し、その方法は、いずれかのフレームワ
ーク領域(FR)または定常ドメインまたは相補性決定領域(CDR1~CDR6)において少なくとも1つの点変異を工学的に形成してバリアント抗体を得ること、および具体的にはgal-IIIエピトープを10-6M未満、好ましくは10-7M未満、または10-8M未満、または10-9M、さらには10-10M未満、または10-11M未満のKdで、たとえばピコモル濃度範囲の親和性で結合する親和性によりバリアント抗体の機能活性を判定することを含む。機能活性を判定すると、さらなる使用のために、および場合により組換え体製造方法による製造のために、機能活性バリアントを選択する。
さらなる特定の側面によれば、バリアント抗体は親抗体と同じ結合部位を含む。
機能活性バリアント抗体は、VHまたはVL配列のいずれかにおいて異なるか、あるいは共通のVHおよびVL配列を共有し、それぞれのFRに修飾を含む可能性がある。親抗体から変異形成により誘導されるバリアント抗体は、当技術分野で周知の方法により製造できる。
前記抗体は、具体的には、補体仲介殺菌によりgal-III Oタイプのクレブシエラ・ニューモニエに対して有効な可能性があり、たとえばインビトロ血清殺細菌アッセイ(serum bactericidal assay)(SBA)により判定して、たとえば対照試料(抗体無添加または無関係な対照mAbを添加)より少なくとも20%高い殺細菌を伴う。
菌血症、肺炎、尿路感染症、肝膿瘍、腹膜炎または髄膜炎のいずれかのモデルにおいて発病を阻害する。
本発明はさらに、診断の目的のための、具体的には対象におけるクレブシエラ・ニューモニエ(特にST258)の感染もしくは定着、または関連疾患、たとえば原発性および続発性の菌血症、肺炎、尿路感染症、肝膿瘍、腹膜炎もしくは髄膜炎の診断のための、本
発明の抗体の使用を提供する。
具体的には、抗体は本発明に従って対象の生体試料を抗体と接触させることによりその対象におけるgal-III Oタイプのクレブシエラ・ニューモニエの感染または定着をエクスビボで判定するのに使用するために提供され、その際、抗体の特異的な免疫反応が感染または定着を決定する。
生物学的検体を培養する工程が含まれる。細菌をCFU拡大のために種々の培地(標準培地および/または化学的に規定した培地;高栄養素、低栄養素、限定増殖培地組成)で継代培養して、病原因子(virulence factor)の発現を増大させることができる。細菌懸濁液を調製し、標準緩衝液中で洗浄して、潜在的なマトリックス効果を排除することができる。
a)抗体;および
b)さらなる診断試薬;
c)ならびに場合により、抗体および診断試薬のうち少なくとも1つを固定化するための固相
を含む、組成物またはキット状パーツ中に抗体およびさらなる診断試薬を含む、本発明の抗体の診断用製剤を提供する。
診断キットは、好ましくは生体試料におけるgal-III発現を判定するための必須成分をすべて含み、場合により一般的または非特異的的な物質または成分、たとえば水、緩衝液または賦形剤を含まない。貯蔵安定キットは、好ましくは少なくとも6か月間、より好ましくは少なくとも1または2年間、貯蔵できる。それは乾燥した(たとえば、凍結乾燥した)成分から構成されてもよく、および/または保存剤を含有してもよい。
2,4-ジニトロベンゼン、ヒ酸フェニル、ssDNA、dsDNAなど)によって検出できる分子が含まれる。
a)本発明による抗体を用意し、そして
b)その抗体が被験対象の生体試料中のガラクタン-IIIエピトープと特異的に免疫反応するかどうかを検出し、それによりクレブシエラ・ニューモニエの感染または定着を診断する
ことを含む、対象においてクレブシエラ・ニューモニエ株により起きたクレブシエラ・ニューモニエの感染または定着を診断する方法を提供する。
本発明はさらに、本発明の抗体のVHおよび/またはVLを含むタンパク質を発現するコード配列を含む、発現カセットまたはプラスミドを提供する。
本発明はさらに、本発明の抗体を製造する方法であって、その抗体を産生する条件下で本発明の宿主細胞を培養または維持する方法を提供する。
- 抗体軽鎖を発現するコード配列を内包する本発明のプラスミドまたは発現カセット;および
- 抗体重鎖を発現するコード配列を内包する本発明のプラスミドまたは発現カセットを含む、宿主細胞およびそのような宿主細胞を用いる製造方法である。
a)非ヒト動物をクレブシエラ・ニューモニエのgal-III抗原で免疫化し、そして抗体を産生するB細胞を分離し;
b)分離したB細胞から不死化細胞系を形成し;
c)それらの細胞系をスクリーニングして、gal-III抗原および場合により(たとえば、gal-Iと比較してgal-IIIに対する優先的結合を判定する場合には)gal-I抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する細胞を同定し;そして
d)モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体と同じエピトープ結合特異性を備えたヒト化抗体もしくはヒト型抗体、またはその誘導体を製造する
ことを含む方法を提供する。
a)抗体または抗体産生細胞を含有する試料を用意し;そして
b)試料中の抗体または試料により産生された抗体とガラクタン-IIIエピトープとの結合を査定し、その際、抗体とエピトープの陽性反応によりその抗体を候補抗体と同定する
ことを含む、候補抗体を同定する方法を提供する。
a)抗体または抗体産生細胞を含有する試料を用意し;そして
b)試料中の抗体または試料により産生された抗体とガラクタン-IIIエピトープとの結合を査定し、その際、ガラクタン-Iエピトープと対比した、抗体とガラクタン-IIIエピトープの特異的な陽性反応により、その抗体を候補抗体と同定する
ことを含む、候補抗体を同定する方法を提供する。
a)本発明に従って同定した候補抗体を用意し;
b)候補抗体と同じエピトープ結合特異性を備えた、モノクローナル抗体、またはヒト化もしくはヒト型の候補抗体、またはその誘導体を製造する
ことを含む、本発明の抗体を製造する方法を提供する。
抗体ドメイン、たとえばVH、VLもしくはVHHのCDR結合部位;あるいは可変抗体ドメイン対、たとえばVL/VH対、VL/VHドメイン対と定常抗体ドメインを含む抗体、たとえばFab、F(ab’)、(Fab)2、scFv、Fv、または完全長抗体の結合部位。
抗体に関して用いる用語“キメラ”は、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列それぞれの一部が特定の種に由来するかまたは特定のクラスに属する抗体中の対応する配列に対して相同であり、これに対しその鎖の残りのセグメントは他の種またはクラスにおける対応する配列に対して相同である抗体を表わす。一般に、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は哺乳類のある種に由来する抗体の可変領域を模倣し、これに対し定常部は他の種に由来する抗体の配列と相同である。たとえば、非ヒト宿主生物由来の容易に入手できるB細胞またはハイブリドーマを用いて現在既知の供給源から可変領域を誘導し、たとえばヒト細胞製剤に由来する定常領域と組み合わせることができる。
抗体に関して用いる用語“ヒト化”は、実質的に非ヒト種の免疫グロブリンに由来する抗原結合部位をもち、その分子の残りの免疫グロブリン構造はヒト免疫グロブリンの構造および/または配列をベースとする分子を表わす。抗原結合部位は、定常ドメインに融合した完全可変ドメイン、または相補性決定領域(CDR)のみが可変ドメイン中の適宜なフレームワーク領域にグラフトしたもののいずれを含むこともできる。抗原結合部位は、野生型、またはたとえば1以上のアミノ酸置換により修飾されたもの、好ましくはヒト免疫グロブリンにいっそう近似するように修飾されたものであってもよい。ある形態のヒト化抗体はすべてのCDR配列を保存している(たとえば、マウス抗体由来の6つのCDRすべてを含むヒト化マウス抗体)。他の形態は元の抗体に対して変異した1以上のCDRをもつ。
抗体に関して用いる用語“ヒト”は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域をもつ抗体を含むと解釈される。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基(たとえば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的変異形成により、またはインビボでの体細胞変異により、導入された変異)を、たとえばCDR中に含むことができる。ヒト抗体には、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または1以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックな動物から単離された抗体が含まれる。
誘導体化または合成により得られた変異体またはバリアントであると解釈される。
具体的には、本発明の抗体から誘導される抗体は少なくとも1つまたはそれ以上のCDR領域またはそのCDRバリアント、たとえば重鎖可変領域の少なくとも3つのCDRおよび/または軽鎖可変領域の少なくとも3つのCDRを含み、CDRもしくはFR領域のうち少なくとも1つまたはHCもしくはLCの定常領域に少なくとも1つの点変異をもち、機能活性であり、たとえばgal-III抗原を特異的に結合することができる。
が含まれる。
本明細書中で用いる、CDR配列の“機能活性バリアント”という用語は、“機能活性CDRバリアント”であると解釈され、本明細書中で用いる、抗体の“機能活性バリアント”という用語は、“機能活性抗体バリアント”であると解釈される。機能活性バリアントは、この配列(親抗体または親配列)を1以上のアミノ酸の挿入、欠失または置換により修飾することから得られる配列、あるいはアミノ酸配列中の1以上のアミノ酸残基またはヌクレオチド配列内のヌクレオチドを、すなわち配列の一端または両端の、たとえばCDR配列においてN末端および/またはC末端の1、2、3または4個のアミノ酸、および/または中心の1、2、3または4個のアミノ酸(すなわち、CDR配列の中央)を化学的に誘導体化することから得られる配列であって、その修飾がこの配列の活性に影響しないもの、特に損なわないものを意味する。選択したターゲット抗原に対する特異性をもつ結合部位の場合、これが変化する可能性、たとえば特定のエピトープに対する微細な特異性、親和性(アフィニティー)、アビディティー、KonまたはKoff速度などが変化する可能性はあるけれども、抗体の機能活性バリアントはなお前決定した結合特異性をもつであろう。たとえば、具体的には親和性成熟抗体は機能活性バリアント抗体であると解釈される。したがって、親和性成熟抗体における修飾されたCDR配列は機能活性CDRバリアントであると解釈される。
l-III抗原を結合する効力および他の抗原と対比してgal-III抗原に優先的に結合する特異性または選択性をもち、たとえばクレブシエラ・ニューモニエのgal-IIIに結合し、gal-I抗原には結合しないか、またはgal-I抗原を有意には結合せず、および/またはクレブシエラ・ニューモニエの他の抗原には結合しない。
a)親抗体の生物活性フラグメントであり、そのフラグメントは親分子の配列の少なくとも50%、好ましくは少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、または少なくとも95%、最も好ましくは97%、98%または99%を
含む;
b)親抗体から少なくとも1個のアミノ酸の置換、付加および/または欠失により誘導され、その機能活性バリアントは親分子またはそれの一部に対して配列同一性をもつ;たとえば少なくとも50%、好ましくは少なくとも60%、より好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、よりさらに好ましくは少なくとも90%、よりいっそう好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは少なくとも97%、98%または99%の配列同一性をもつ抗体;および/または
c)親抗体またはその機能活性バリアント、およびさらにそのポリペプチドまたはヌクレオチド配列に対してヘテロロガス(非相同)である少なくとも1個のアミノ酸またはヌクレオチドからなる。
してアミノ酸は64のトリプレットコドンによりコードされる20種類の天然アミノ酸を表わす。これら20種類のアミノ酸は、中性電荷、正電荷および負電荷をもつものに分類できる:
“中性”アミノ酸をそれらのそれぞれの3文字および1文字コードならびに極性と共に以下に示す:
アラニン:(Ala,A) 非極性,中性;
アスパラギン:(Asn,N) 極性,中性;
システイン:(Cys,C) 非極性,中性;
グルタミン:(Gln,Q) 極性,中性;
グリシン:(Gly,G) 非極性,中性;
イソロイシン:(Ile,I) 非極性,中性;
ロイシン:(Leu,L) 非極性,中性;
メチオニン:(Met,M) 非極性,中性;
フェニルアラニン:(Phe,F) 非極性,中性;
プロリン:(Pro,P) 非極性,中性;
セリン:(Ser,S) 極性,中性;
トレオニン:(Thr,T) 極性,中性;
トリプトファン:(Trp,W) 非極性,中性;
チロシン:(Tyr,Y) 極性,中性;
バリン:(Val,V) 非極性,中性;および
ヒスチジン:(His,H) 極性,正(10%) 中性(90%)
“正”に荷電したアミノ酸は下記のものである:
アルギニン:(Arg,R) 極性,正;および
リジン:(Lys,K) 極性,正
“負”に荷電したアミノ酸は下記のものである:
アスパラギン酸:(Asp,D) 極性,負;および
グルタミン酸:(Glu,E) 極性,負。
は、Fcエフェクター機能を増大させる修飾、特にADCCおよび/またはCDC活性を増強する修飾を取り込むように工学操作されていてもよい。
コシル化もしくは糖鎖工学操作された抗体または脱グリコシル抗体であってもよい。
抗原”は、ターゲット分子全体、またはそのような分子の、抗体の結合部位により認識されるフラグメントを表わすものとする。具体的には、一般に“エピトープ”、たとえばB細胞エピトープまたはT細胞エピトープと呼ばれる、抗原の免疫関連性である下部構造、たとえばポリペプチドまたは炭水化物構造を、そのような結合部位が認識できる。gal-IIIまたはgal-I抗原のような特定の抗原は炭水化物構造体であり、場合により人工的キャリヤー上に付与した単離された抗原として、あるいはそれらの抗原を発現するクレブシエラ・ニューモニエ細胞の形態またはその細胞画分の形態で提供できる。
に必要な、DNA配列と定義される。
クターは、しばしばコーディングDNAおよびプロモーターDNAを含み、かつ外来DNAの挿入に適した1以上の制限部位をもつ。具体的には、用語“ベクター”または“プラスミド”は、DNAまたはRNA配列(たとえば、外来遺伝子)を宿主細胞に導入し、それによりその宿主を形質転換し、導入された配列の発現(たとえば、転写および翻訳)を促進することができるビヒクルを表わす。
な最適化または工学操作により、抗体はその抗体に関して自然界ではみられない1以上の合成配列または特徴を含む。
する中和または防御抗体は、病原体により誘発される疾患の症状、副作用または進行を阻止し、改善し、治療し、または少なくとも部分的に停止する療法目的のために、たとえば予防または治療のために使用できる。具体的には、防御抗体は、療法適用に伴って、たとえば血清殺細菌活性またはオプソニン食作用活性を誘導することによりクレブシエラ・ニューモニエ生細胞を死滅させ、またはその複製を妨害し、あるいは細菌細胞全体またはそのLPS分子を無菌身体部位から排除する(すなわち、樹立した感染症に投与した場合)ことができる。あるいは、予防的に適用された防御抗体は、上記または他のメカニズムのひとつにより、感染の樹立(すなわち、非無菌部位から無菌の身体コンパートメント内へのクレブシエラ・ニューモニエの拡散)を阻害する。
(MLST)を含む標準的な遺伝関係/系統発生についてのタイピング、またはパルスフィールドゲル電気泳動(Pulsed Field Gel Electrophoresis)(PFGE)が含まれる。
、クレブシエラ・ニューモニエのLPS O抗原の炭水化物構造体を表わすものとする。そのような反復単位は分枝ガラクトースポリマーを含む;図5を参照。この構造はgal-I抗原のものと類似するが、明らかに異なるものである。Gal-IIIは、本明細書中でgal-I抗原の存在およびgal-III構造体の非存在を特徴とするO2a血清型と類似するけれども明らかに異なる新規な血清型決定因子であると解釈される。
ogの差と解釈される)、より好ましくは少なくとも1000倍(少なくとも3 logの差と解釈される)である。
親和性成熟は、ターゲット抗原に対する親和性が増大した抗体を製造する方法である。当技術分野で利用できる親和性成熟ライブラリーを調製および/または使用するいずれか1以上の方法を、本明細書に開示する発明の種々の態様に従って親和性成熟抗体を作製するために採用できる。代表的なそのような親和性成熟の方法および使用、たとえばランダム変異形成、細菌ミューテーター(mutator)株の継代、部位特異的変異形成、変異ホット
スポットターゲティング(mutational hotspots targeting)、倹約変異形成(parsimonious
mutagenesis)、抗体シャフリング(shuffling)、軽鎖シャフリング、重鎖シャフリング、CDR1および/またはCDR1変異形成、ならびに本明細書に開示する本発明の種々の態様に従った方法および使用を実施できる親和性成熟ライブラリーを調製および使用する方法には、たとえば下記に開示されたものが含まれる: Prassler et al. (2009); Immunotherapy, Vol. 1(4), pp. 571-583; Sheedy et al. (2007), Biotechnol. Adv., Vol. 25(4), pp. 333-352; WO2012/009568; WO2009/036379; WO2010/105256; US2002/0177170; WO2003/074679。
する”の使用は、同等のモノクローナル抗体が同じ、または本質的に同じ、すなわち類似の免疫反応(結合)特性を示し、前選択したターゲット結合配列への結合に対して競合することを示す。特定のターゲットに対する抗体分子の相対的特異性は、競合アッセイ、たとえば Harlow, et al., ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988)に記載されたものにより相対的に決定できる。
くとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%もしくはさらには少なくとも100%の相対的阻害が検出される基準を設定することができる。
これらの部位における無制御な細菌複製は炎症を誘発し、それは大部分がクレブシエラ・ニューモニエから放出されるエンドトキシン(すなわち、LPS)分子により仲介される。菌血症の場合、エンドトキシン分子は敗血症性ショックの引き金となる可能性がある。
、発現、作製または単離された抗体。そのような組換え抗体には、たとえば抗体成熟に際して起きる再配列および変異形成を含むように遺伝子工学操作された抗体が含まれる。本発明によれば、当業者がなしうる範囲の一般的な分子生物学、微生物学および組換えDNA手法を採用できる。そのような手法は文献に十分に説明されている。たとえば、Maniatis, Fritsch & Sambrook, “Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, (1982)を参照。
異形成(directed mutagenesis)を含む1以上の最適化方策を施すことができる。
具体的には、その処置はその状態の原因物質としてのクレブシエラ・ニューモニエの病的発生を妨害することによるものであってもよい。
めに用いられる。
クタン-IIIに対して特異的なmAbを初めて提供する。このmAbが生存O2 gtr+クレブシエラ分離株(ST258株を含む)の表面に結合する能力を観察した。ガラクタン-III特異的mAbの防御効果が菌血症および内毒素血症のネズミモデルでみられたことは意外であった。防御作用の推定様式はエンドトキシンの中和であり、それはインビトロ機能アッセイにより確認された。
鎖および軽鎖を同時に単一ベクターから、または2つの別個のベクターから、単一の細胞において発現させている。Wibbenmeyer et al., (1999, Biochim Biophys Acta 1430(2):191 -202)およびLee and Kwak (2003, J. Biotechnology 101:189-198)には、プラスミドを用いて別個の宿主細胞培養物中で発現させて別個に製造した重鎖および軽鎖からモノクローナル抗体を製造することが記載されている。抗体の製造に関する他の種々の手法が、たとえばHarlow, et al., ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1988)に提示されている。
、そのポリヌクレオチド配列を次いで発現または増幅のためにベクター中へクローニングすることができる。抗体をコードする配列を宿主細胞においてベクター内に維持し、その宿主細胞を次いで増殖させ、将来の使用のために凍結することができる。細胞培養における組換えモノクローナル抗体の製造は、当技術分野で既知の手段によるB細胞からの抗体遺伝子のクローニングにより実施できる。
抗体をコードする核酸は、いずれか適切な特性をもち、いずれか適切な特徴またはその組合わせを含むことができる。よって、たとえば抗体をコードする核酸はDNA、RNA、またはそのハイブリッドの形態であってもよく、非天然塩基、修飾されたバックボーン、たとえば核酸の安定性を増強するホスホロチオエートバックボーン、または両方を含むことができる。核酸は有利には、ターゲット宿主細胞(単数または複数)における希望する発現、複製および/または選択を増強する特徴を含む本発明の発現カセット、ベクターまたはプラスミドに収容されていてもよい。そのような特徴の例には、複製起点構成要素、選択遺伝子構成要素、プロモーター構成要素、エンハンサーエレメント構成要素、ポリアデニル化配列構成要素、終止構成要素などが含まれ、その多数の適切な例が知られている。
ーマ法(Kozbor, 1984, J. Immunol. 133:3001; およびBrodeur et al., 1987, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, (Marcel Dekker, Inc., New York), pp. 51-63)が含まれる。
より行なうことができる(たとえば、ファージ、細菌、酵母もしくは哺乳類の細胞;または核酸情報をそれぞれの(ポリ)ペプチドに翻訳するインビトロディスプレーシステムを使用)。ELISA、ウェスタンブロット法、またはフローサイトメトリーを伴う表面染色に基づいて、たとえば標準アッセイを用いて、反応性を査定することができる。
たとえば、本発明は具体的にはgal-III特異的抗体を提供し、それらはgal-III抗原を結合する特異性を備えた抗体を同定する方法により、たとえば特異的なディカバリーセレクションスキームにより得られる。したがって、gal-IIIターゲットとの反応性を示す抗体を含む抗体ライブラリーをターゲットとの反応性について選択することができる。
濁液剤であってもよく、賦形剤、たとえば懸濁化剤、可溶化剤、界面活性剤、保存剤およびキレート化剤を含有することができる。
ともできる。
1態様において、本発明の抗体は、たとえば疾患の改変または防止用の単剤療法として対象に投与する唯一の療法有効薬剤である。
本発明の抗体またはそれぞれの医薬製剤の生物学的性質を、エクスビボで細胞、組織および生物全身実験において解明することができる。当技術分野で知られているように、疾患もしくは疾患モデルに対する処置についての薬物の有効性を測定するために、または薬物の薬物動態、薬力学、毒性および他の特性を測定するために、薬物をしばしばインビボで、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ブタ、およびサルを含めた動物において試験する。それらの動物を疾患モデルと呼ぶことができる。療法薬はしばしばマウスにおいて試験され、それにはヌードマウス、SCIDマウス、異種移植マウス、およびトランスジェニックマウス(ノックインおよびノックアウトを含む)が含まれるが、これらに限定されない。そのような実験により、適宜な半減期、エフェクター機能、(交差-)中和活性、および/または能動もしくは受動免疫療法に際しての免疫応答性を備えた治療薬または予防薬として用いる抗体の力価を決定するための有意義なデータを得ることができる。いずれかの生物、好ましくは哺乳類を試験に使用できる。たとえば、霊長類であるサルはヒトに対するそれらの遺伝学的類似性のため適切な療法モデルとなることができ、よって被験薬または組成物の有効性、毒性、薬物動態、薬力学、半減期、または他の特性を試験するために使用できる。薬物として承認されるためにはヒトにおける試験が最終的には要求されるので、もちろんこれらの実験も考慮する。よって、本発明の抗体およびそれぞれの療法用組成物をヒトにおいて試験して、それらの治療または予防効果、毒性、免疫原性、薬物動態、および/または臨床特性を判定することができる。
1. エピトープがガラクタン-III反復単位に内包されており、そのガラクタン-III反復単位が式(I)
認識する、単離された抗体。
3. ガラクタン-IIIエピトープが多剤耐性(MDR)クレブシエラ・ニューモニエ、特にMDRクローンST258のものである、定義1または2に記載の抗体。
6. ガラクタン-IIIエピトープを発現しているクレブシエラ・ニューモニエ株のエンドトキシンを中和し、その際、中和力価が少なくとも、Kabatの命名法に従った
a.SEQ ID 10のCDR1配列;および
b.SEQ ID 11のCDR2配列;および
c.SEQ ID 12のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 17のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
を含む基準抗体の力価である、定義1~5のいずれか1つに記載の抗体。
8. MDRクレブシエラ・ニューモニエ クローンST258を認識する、定義5~7のいずれか1つに記載の抗体。
11. モノクローナル抗体である、定義1~10のいずれか1つに記載の抗体。
A)グループメンバーi)~iv)からなるグループから選択される抗体
i)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 1のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 2のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 3のアミノ酸配列からなるCDR3;
ii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 4のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 5のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 6のアミノ酸配列からなるCDR3;
iii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 7のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 8のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 9のアミノ酸配列からなるCDR3;
iv)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 10のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 11のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 12のアミノ酸配列からなるCDR3;
または
B)Aのグループメンバーのいずれかである親抗体の機能活性バリアントであって、親抗体のCDR1、CDR2またはCDR3のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む抗体
である、定義12に記載の抗体。
15. さらに、Kabatのナンバリングシステムに従って表示された表1に挙げるCDR4~CDR6配列のいずれかまたはその機能活性CDRバリアントを含む抗体軽鎖可変領域(VL)を含む、定義12~14のいずれか1つに記載の抗体。
A)グループメンバーi)~iv)からなるグループから選択される抗体
i)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 13のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 14のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 15のアミノ酸配列からなるCDR6;
ii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 16のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 17のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
iii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 19のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 20のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
iv)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 19のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 17のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
または
B)Aのグループメンバーのいずれかである親抗体の機能活性バリアントであって、親抗体のCDR4、CDR5またはCDR6のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む抗体
である、定義15に記載の抗体。
18.
a)表1に挙げるいずれかの抗体のCDR1~CDR6配列;または
b)図2に示すいずれかの抗体のVHおよびVL配列
を含み、あるいは
c)a)~c)の配列を特徴とする親抗体の機能活性バリアントであり、
好ましくは、その際、
i.機能活性バリアントは、親抗体のCDR1~CDR6のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む;および/または
ii.機能活性バリアントは、VHおよびVL配列のいずれかのフレームワーク領域に少なくとも1つの点変異を含む;
ならびに、さらに
iii.機能活性バリアントは、親抗体と同じエピトープを結合する特異性を有する;および/または
iv.機能活性バリアントは、親抗体のヒト、ヒト化、キメラもしくはネズミおよび/または親和性成熟バリアントである;
定義12~17のいずれか1つに記載の抗体。
a)親CDR配列中に1、2または3つの点変異を含む;および/または
b)親CDR配列の4つのC末端または4つのN末端または4つの中心アミノ酸位置のいずれかに1または2つの点変異を含む;および/または
c)親CDR配列との少なくとも60%の配列同一性を含む;
好ましくは、機能活性CDRバリアントは4または5個未満のアミノ酸からなるいずれかのCDR配列中に1または2つの点変異を含む、
定義1~18のいずれか1つに記載の抗体。
療または予防するための、定義1~19のいずれか1つに記載の抗体。
24. 下記の構成要素
a)抗体;および
b)さらなる診断試薬;
c)ならびに場合により、抗体および診断試薬のうち少なくとも1つを固定化するための固相
を含む、組成物またはキット状パーツ中に抗体およびさらなる診断試薬を含む、定義1~19のいずれか1つに記載の抗体の診断用製剤。
a)定義1~19のいずれか1つに記載の抗体を用意し、そして
b)その抗体が被験対象の生体試料中のガラクタン-IIIエピトープと特異的に免疫反応するかどうかを検出し、それによりクレブシエラ・ニューモニエの感染または定着を診断する
ことを含む、対象においてクレブシエラ・ニューモニエ株により起きたクレブシエラ・ニューモニエの感染または定着を診断する方法。
29. 定義1~19のいずれか1つに記載の抗体のVHおよび/またはVLを含むタンパク質構築体またはタンパク質を発現するコード配列を含む、発現カセットまたはプラスミド。
31. 定義30に記載の宿主細胞をその抗体を産生する条件下で培養または維持する、定義1~19のいずれか1つに記載の抗体を製造する方法。
a)抗体または抗体産生細胞を含有する試料を用意し;そして
b)試料中の抗体または試料により産生された抗体と定義1に定めたガラクタン-IIIエピトープとの結合を査定し、その際、抗体とエピトープの陽性反応によりその抗体を
候補抗体と同定する
ことを含む、候補抗体を同定する方法。
a)抗体または抗体産生細胞を含有する試料を用意し;そして
b)試料中の抗体または試料により産生された抗体と定義1に定めたガラクタン-IIIエピトープとの結合を査定し、その際、ガラクタン-Iエピトープと対比した、ガラクタン-III抗体とエピトープの特異的な陽性反応により、その抗体を候補抗体と同定する
ことを含む、候補抗体を同定する方法。
a)定義32または33に従って同定した候補抗体を用意し;そして
b)候補抗体と同じエピトープ結合特異性を備えた、モノクローナル抗体、またはヒト化もしくはヒト型の候補抗体、またはその誘導体を製造する
ことを含む、定義1~19のいずれか1つに記載の抗体を製造する方法。
ガラクタン-I特異的rfb(wbとしても知られる)クラスターの最初の記載(3)以
来、幾つかの完全ゲノム配列が得られるようになった。rfbクラスターは常に2つの保存された遺伝子(ugeおよびhisI)の間に組み込まれているので、rfb遺伝子座の厳密なサイズを決定できた。インシリコ分析により2つの異なる長さのrfbオペロンが明らかになった(図4A)。これらの配列の詳細な分析(図4B)により、rfbクラスター内にClarkeら(3)が同定していない追加遺伝子があることが明らかになった。
の遺伝子はガラクタン-I発現に必ずしも必要ではないと思われる。
るいは株内および株間での表現型多様性を増大させると考えられる。興味深いことに、クレブシエラ・オキシトカ(Klebsiella oxytoca)の場合、同一のgtrクラスターがrfbクラスターと連結していない染色体部位に見出された(未発表所見)。したがって、あるクレブシエラ・ニューモニエ株がこのクラスターをクレブシエラ・オキシトカから水平伝達により獲得した可能性がある。
rans-complemented)短いオペロンを保有するO2株の構造解析により、1-4結合での分枝ガラクトースの付加はgtr遺伝子によりコードされることが分かった(後記の実施例3を参照)。
れどもガラクタン-I反復単位のこの修飾は必ずしも完全に化学量論的ではないことが生化学分析により示された。それにもかかわらず、修飾の化学量論は菌株依存性でありかつ発現調節の影響下にある可能性があり、したがってさらなる調査が必要である。
クレブシエラ・ニューモニエの臨床分離株におけるrfbクラスター内のgtr様遺伝子を検出するために、保存されたwbbOおよびhisI遺伝子(図4Bを参照)にアニールするプライマーを設計した(下記の表2)。
バースプライマーならびに0.2μlの精製gDNAを含む20μl混合物中に設定した。PCRをTProfessional TRIOサーモサイクラー(Biometra)において下記のプログラムで実施した:
からスクリーニングした。O1分離株内には分離された27(60%)のgtr-および18(40%)のgtr+分離株が分離され、O2株内には同定された15(32%)のgtr-および32(68%)のgtr+株が同定された。
ラ・ニューモニエ カルバペネマーゼ))産生-固有クローン(endemic clone)ST258
に属する大部分の菌株が、ガラクタン-IIIをコードするオペロン(すなわち、gtr遺伝子を内包する長いrfbgal-I遺伝子座)を保有することが見出された。27のST258分離株をPCRにより分析し、さらにデータベースにおいて得られる224のゲノム配列をインシリコ分析した。これらの菌株のうち合計210(83.6%)が、gtr遺伝子を内包する無傷rfbオペロン(すなわち、ガラクタン-III抗原を発現すると予想されるもの)を保有していた。残りの菌株の多くのゲノムがgtr遺伝子の少なくとも一部を含んでいたが、欠失またはトランスポゾン挿入のため無傷ガラクタン-IIIを発現するとは期待されなかった。
と2株をゲノム配列の分析のみにより識別できた。しかし、これらのO1特異的決定因子を保有するST258分離株はなかった。さらに、入手したST258株はいずれもガラクタン-II特異的mAbに反応せず、これらの分離株がO2血清グループのものであることが確認された。
ネズミモノクローナルmAbを標準的なハイブリドーマ法により、gtr+ O2(すなわち、gal-III発現性)菌株で免疫化したマウスを用いて作製した。ガラクタン-III抗原に対して特異性を示した4種類のmAbを選択した。これらのmAbの結合がガラクタン-I分子のgtr仲介修飾により影響を受けるかどうかを調べるために、gtr-およびgtr+ O1およびO2株から精製したLPS分子のパネルを、イムノブロット法により調べた。抗体を1μg/ml濃度に希釈し、抗マウスIgG二次抗体を1:20,000に希釈した。
抗体結合特性をバイオレイヤー干渉法(biolayer interferometry)(BLI)により調
べた。ビオチニル化D-ガラクタン III多糖抗原(O2 gtr+クレブシエラ・ニューモニエ株から精製)をストレプトアビジンセンサー(ForteBio,Pall Life Sciences)に固定化し、前装填したセンサーへのキメラmAb(10μg/mL)の会合を、1%ウシ血清アルブミン(BSA)および0.05% Tween-20を含有するDPBS中で10分間モニターし、続いて同じ緩衝液中で解離させる(1時間)ことにより、抗体結合を測定した。Data Analysis 7ソフトウェア(ForteBio,Pall Life Sciences)を用いてKd、konおよびkoff値を決定した。0.05nm未満の応答値を陰性とみなした。
異なるOタイプをもつ幾つかのクレプシエラ属臨床分離株に対する1つの代表的なmAb(9H9-H7)の表面結合をフローサイトメトリーで調べた(表4)。
マウス可変領域(重鎖および軽鎖についてそれぞれVHおよびVL)をヒトIgG1およびカッパ定常領域に遺伝子融合させたキメラmAbを作製した。種々の機能アッセイにおいてインビトロおよびインビボで試験した(下記を参照)後、最良のキメラmAbをヒト化処理した。ヒト化は、ネズミフレームワーク領域から重鎖および軽鎖両方のCDR配列を対応する(インシリコ推定)ヒトフレームワーク内へグラフトさせることにより達成された。その結果、これらのヒト化mAbにおいて唯一のマウス由来配列はCDR領域であり、mAbの残部はヒト配列で構成されている。
マウス5匹のグループを、キメラ(図10A)またはヒト化(図10B)ガラクタン-
III特異的mAbまたは対照としてのアイソタイプマッチした無関係なmAbで腹腔内受動免疫化した。24時間後、マウスを20mgのGalNの腹腔内投与によりエンドトキシンに感作させ、同時に致死量のクレブシエラ・ニューモニエ株#79で攻撃した。死亡率を毎日観察した。
クレブシエラ・ニューモニエO2株の高い血清感受性を考慮して、本発明者らは、前記の防御(実施例7)について殺細菌活性ではなくエンドトキシン中和が主な作用様式の可能性があると提唱した。これを実験で確証するために、ガラクタン-III特異的mAbのエンドトキシン中和力価をインビトロで調べた。
lue(商標)細胞懸濁液を添加した(約50,000個の細胞/ウェル)。プレートをアルミニウム箔に包み、37℃、5% CO2で一夜(16~18時間)インキュベートした。翌日、630nmで光学濃度を測定し、モック(mock)を上回るレポータータンパク質レベル(分泌型胚性アルカリホスファターゼ(secreted embryonic alkaline phosphatase)-SEAP)を計算した。無抗体対照に対比したSEAP誘導の阻害パーセントを種
々のmAb濃度において計算し、プロットした。GraphPad Prism 5.0でlog(阻害薬)対 応答-可変勾配非線形回帰分析を用いて50%阻害濃度(IC50)を計算した。陽性対照としてポリミキシンB(硫酸PMB,FLUKA カタログ#81334)を被験mAbと同様に用いた。陰性対照として、無関係なmAbを含めた。
参考文献
(1) Hansen DS, Mestre F, Alberti S, et al. Klebsiella pneumoniae lipopolysaccharide O typing: revision of prototype strains and O-group distribution among clinical isolates from different sources and countries. J Clin Microbiol 1999 Jan;37(1):56-62.
(2) Trautmann M, Ruhnke M, Rukavina T, et al. O-antigen seroepidemiology of Klebsiella clinical isolates and implications for immunoprophylaxis of Klebsiella infections. Clin Diagn Lab Immunol 1997 Sep;4(5):550-5.
(3) Clarke BR, Whitfield C. Molecular cloning of the rfb region of Klebsiella pneumoniae serotype O1:K20: the rfb gene cluster is responsible for synthesis of the D-galactan I O polysaccharide. J Bacteriol 1992 Jul;174(14):4614-21.
(4) Hsieh PF, Wu MC, Yang FL, et al. D-galactan II is an immunodominant antigen in O1 lipopolysaccharide and affects virulence in Klebsiella pneumoniae: implication in vaccine design. Front Microbiol 2014;5:608.
(5) R.F.Kelly, M.B.Perry, L.L.MacLean, C.Whitfield. Structures of the O-antigens
of Klebsiella serotypes 02 (2a,2e), 02 (2a,2e,2h), and 02 (2a,2f,2g) members of
a family of related D-galactan O-antigens in Klebsiella spp. Journal of Endotoxin Research 1995;2:131-40.
(6) Allison GE, Verma NK. Serotype-converting bacteriophages and O-antigen modification in Shigella flexneri. Trends Microbiol 2000 Jan;8(1):17-23.
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(5) R.F.Kelly, M.B.Perry, L.L.MacLean, C.Whitfield. Structures of the O-antigens of Klebsiella serotypes 02 (2a,2e), 02 (2a,2e,2h), and 02 (2a,2f,2g) members of a family of related D-galactan O-antigens in Klebsiella spp. Journal of Endotoxin Research 1995;2:131-40.
(6) Allison GE, Verma NK. Serotype-converting bacteriophages and O-antigen modification in Shigella flexneri. Trends Microbiol 2000 Jan;8(1):17-23.
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
[態様1]クレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)のリポ多糖(LPS) O抗原構造体のガラクタン-IIIエピトープを特異的に認識する単離された抗体であって、エピトープはガラクタン-III反復単位に内包されており、該ガラクタン-III反復単位が式(I)
[態様2]ガラクタン-Iエピトープに対比してガラクタン-IIIエピトープに優先的に結合するか、あるいはガラクタン-Iエピトープと交差反応せず、ここで、該ガラクタン-Iエピトープはクレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)のLPS O2a抗原構造体のガラクタン-I反復単位に内包されており、該ガラクタン-I反復単位が式(II)
[態様3]ガラクタン-IIIエピトープが多剤耐性(MDR)クレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)、特にMDRクローンST258のものである、態様1または2に記載の抗体。
[態様4]ガラクタン-IIIエピトープを発現しているクレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)株のエンドトキシンを中和し、10-7M未満、好ましくは10-8M未満、よりいっそう好ましくは10-9M未満のKdでガラクタン-IIIエピトープを結合する親和性を有する、態様1~3のいずれか1に記載の抗体。
[態様5]完全長モノクローナル抗体、その抗体フラグメントであって結合部位を内包する少なくとも1つの抗体ドメインを含むもの、または結合部位を内包する少なくとも1つの抗体ドメインを含む融合タンパク質であり、特に抗体がランダム化または人工アミノ酸配列を含む非天然抗体である、態様1~4のいずれか1に記載の抗体。
[態様6]少なくとも、Kabatのナンバリングシステムに従って表示された表1に挙げるCDR1~CDR3配列のいずれかまたはその機能活性CDRバリアントを特徴とする抗体重鎖可変領域(VH)を含む、態様1~5のいずれか1に記載の抗体。
[態様7]A)グループメンバーi)~iv)からなるグループから選択される抗体
i)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 1のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 2のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 3のアミノ酸配列からなるCDR3;
ii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 4のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 5のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 6のアミノ酸配列からなるCDR3;
iii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 7のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 8のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 9のアミノ酸配列からなるCDR3;
iv)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 10のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 11のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 12のアミノ酸配列からなるCDR3;
または
B)Aのグループメンバーのいずれかである親抗体の機能活性バリアントであって、親抗体のCDR1、CDR2またはCDR3のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む抗体
である、態様6に記載の抗体。
[態様8]図2に示すVH配列のいずれかから選択されるVHアミノ酸配列を含む、態様6または7に記載の抗体。
[態様9]さらに、Kabatのナンバリングシステムに従って表示された表1に挙げるCDR4~CDR6配列のいずれかまたはその機能活性CDRバリアントを含む抗体軽鎖可変領域(VL)を含む、態様6~8のいずれか1に記載の抗体。
[態様10]A)グループメンバーi)~iv)からなるグループから選択される抗体
i)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 13のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 14のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 15のアミノ酸配列からなるCDR6;
ii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 16のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 17のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
iii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 19のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 20のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
iv)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 19のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 17のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
または
B)Aのグループメンバーのいずれかである親抗体の機能活性バリアントであって、親抗体のCDR4、CDR5またはCDR6のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む抗体
である、態様9に記載の抗体。
[態様11]図2に示すVL配列のいずれかから選択されるVLアミノ酸配列を含む、態様10に記載の抗体。
[態様12]a)表1に挙げるいずれかの抗体のCDR1~CDR6配列;または
b)図2に示すいずれかの抗体のVHおよびVL配列
を含み、あるいは
c)a)~c)の配列を特徴とする親抗体の機能活性バリアントであり、
好ましくは、その際、
i.機能活性バリアントは、親抗体のCDR1~CDR6のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む;および/または
ii.機能活性バリアントは、VHおよびVL配列のいずれかのフレームワーク領域に少なくとも1つの点変異を含む;
ならびに、さらに
iii.機能活性バリアントは、親抗体と同じエピトープを結合する特異性を有する;および/または
iv.機能活性バリアントは、親抗体のヒト、ヒト化、キメラもしくはネズミおよび/または親和性成熟バリアントである;
態様6~11のいずれか1に記載の抗体。
[態様13]表1に挙げるいずれかのCDR配列の機能活性CDRバリアントを含み、機能活性CDRバリアントが下記のうちの少なくとも1つであり:
a)親CDR配列中に1、2または3つの点変異を含む;および/または
b)親CDR配列の4つのC末端または4つのN末端または4つの中心アミノ酸位置のいずれかに1または2つの点変異を含む;および/または
c)親CDR配列との少なくとも60%の配列同一性を有する;
好ましくは、機能活性CDRバリアントは4または5個未満のアミノ酸からなるいずれかのCDR配列中に1または2つの点変異を含む、
態様1~12のいずれか1に記載の抗体。
[態様14]a)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 1のCDR1配列;および
b.SEQ ID 2のCDR2配列;および
c.SEQ ID 3のCDR3配列;および
d.SEQ ID 13のCDR4配列;および
e.SEQ ID 14のCDR5配列;および
f.SEQ ID 15のCDR6配列;
b)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 4のCDR1配列;および
b.SEQ ID 5のCDR2配列;および
c.SEQ ID 6のCDR3配列;および
d.SEQ ID 16のCDR4配列;および
e.SEQ ID 17のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
c)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 7のCDR1配列;および
b.SEQ ID 8のCDR2配列;および
c.SEQ ID 9のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 20のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
d)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 10のCDR1配列;および
b.SEQ ID 11のCDR2配列;および
c.SEQ ID 12のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 17のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
e)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 4のCDR1配列;および
b.SEQ ID 5のCDR2配列;および
c.SEQ ID 6のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 20のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
f)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 10のCDR1配列;および
b.SEQ ID 11のCDR2配列;および
c.SEQ ID 12のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 20のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
または以上のいずれかの機能活性CDRバリアントであって、gal-III抗原を10-8M未満のKdで結合する親和性を有するもの、
からなる群から選択される、態様1~12のいずれか1に記載の抗体。
[態様15]対象における感染を制限するかまたはその感染から生じる病状を軽減するのに有効な量の抗体を対象に投与することを含む、クレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)の感染または定着のリスクをもつかまたはそれを伴う対象の処置に使用するための、好ましくは原発性および続発性の菌血症、肺炎、尿路感染症、肝膿瘍、腹膜炎または髄膜炎のいずれかを治療または予防するための、態様1~14のいずれか1に記載の抗体。
[態様16]態様1~14のいずれか1に記載の抗体を含み、場合により医薬的に許容できるキャリヤーまたは賦形剤を含有する、好ましくは非経口または粘膜用の配合物を含む医薬製剤。
[態様17]対象においてクレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)の感染もしくは定着、または原発性および続発性の菌血症、肺炎、尿路感染症、肝膿瘍、腹膜炎もしくは髄膜炎などの関連疾患を診断するための、態様1~14のいずれか1に記載の抗体の使用。
[態様18]対象が免疫無防備状態もしくは免疫抑制状態の患者またはその接触者である、態様17に記載の使用。
[態様19]下記の構成要素
a)抗体;および
b)さらなる診断試薬;
c)ならびに場合により、抗体および診断試薬のうち少なくとも1つを固定化するための固相
を含む、組成物またはキット状パーツ中に抗体およびさらなる診断試薬を含む、態様1~14のいずれか1に記載の抗体の診断用製剤。
[態様20]さらなる診断試薬が、抗体と、および/または抗体がそれの抗原に結合した反応生成物と、特異的に反応する診断用の標識または試薬である、態様19に記載の診断用製剤。
[態様21]a)態様1~14のいずれか1に記載の抗体を用意し、そして
b)その抗体が被験対象の生体試料中のガラクタン-IIIエピトープと特異的に免疫反応するかどうかを検出し、それによりクレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)の感染または定着を診断する
ことを含む、対象においてクレブシエラ・ニューモニエ株により起きたクレブシエラ・ニューモニエの感染または定着を診断する方法。
[態様22]生体試料が、体液または組織試料、好ましくは血液試料、糞便試料、皮膚試料、尿試料、脳脊髄液、および呼吸器検体、たとえば気管内吸引物、胸膜液、肺穿刺液、鼻スワブもしくは喀痰、または以上のいずれかに由来するクレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)分離株からなる群から選択される試料である、態様21に記載の方法。
[態様23]態様1~14のいずれか1に記載の抗体をコードする、単離された核酸。
[態様24]態様1~14のいずれか1に記載の抗体のVHおよび/またはVLを含むタンパク質を発現するコード配列を含む、発現カセットまたはプラスミド。
[態様25]態様24に記載の発現カセットまたはプラスミドを含む宿主細胞。
[態様26]態様25に記載の宿主細胞をその抗体を産生する条件下で培養または維持する、態様1~14のいずれか1に記載の抗体を製造する方法。
[態様27]a)抗体または抗体産生細胞を含有する試料を用意し;そして
b)試料中の抗体または試料により産生された抗体と態様1に定めたガラクタン-IIIエピトープとの結合を査定し、その際、抗体とエピトープの陽性反応によりその抗体を候補抗体と同定する
ことを含む、候補抗体を同定する方法。
[態様28]a)抗体または抗体産生細胞を含有する試料を用意し;そして
b)試料中の抗体または試料により産生された抗体と態様1に定めたガラクタン-IIIエピトープとの結合を査定し、その際、ガラクタン-Iエピトープと対比して、ガラクタン-III抗体とエピトープの特異的な陽性反応により、その抗体を候補抗体と同定する
ことを含む、候補抗体を同定する方法。
[態様29]a)態様27または28に従って同定した候補抗体を用意し;そして
b)候補抗体と同じエピトープ結合特異性を備えた、モノクローナル抗体、またはヒト化もしくはヒト型の候補抗体、またはその誘導体を製造する
ことを含む、態様1~14のいずれか1に記載の抗体を製造する方法。
Claims (29)
- ガラクタン-IIIエピトープが多剤耐性(MDR)クレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)、特にMDRクローンST258のものである、請求項1または2
に記載の抗体。 - ガラクタン-IIIエピトープを発現しているクレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)株のエンドトキシンを中和し、10-7M未満、好ましくは10-8M未
満、よりいっそう好ましくは10-9M未満のKdでガラクタン-IIIエピトープを結合する親和性を有する、請求項1~3のいずれか1項に記載の抗体。 - 完全長モノクローナル抗体、その抗体フラグメントであって結合部位を内包する少なくとも1つの抗体ドメインを含むもの、または結合部位を内包する少なくとも1つの抗体ドメインを含む融合タンパク質であり、特に抗体がランダム化または人工アミノ酸配列を含む非天然抗体である、請求項1~4のいずれか1項に記載の抗体。
- 少なくとも、Kabatのナンバリングシステムに従って表示された表1に挙げるCDR1~CDR3配列のいずれかまたはその機能活性CDRバリアントを特徴とする抗体重鎖可変領域(VH)を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載の抗体。
- A)グループメンバーi)~iv)からなるグループから選択される抗体
i)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 1のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 2のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 3のアミノ酸配列からなるCDR3;
ii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 4のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 5のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 6のアミノ酸配列からなるCDR3;
iii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 7のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 8のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 9のアミノ酸配列からなるCDR3;
iv)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 10のアミノ酸配列からなるCDR1;および
b)SEQ ID 11のアミノ酸配列からなるCDR2;および
c)SEQ ID 12のアミノ酸配列からなるCDR3;
または
B)Aのグループメンバーのいずれかである親抗体の機能活性バリアントであって、親抗体のCDR1、CDR2またはCDR3のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む抗体
である、請求項6に記載の抗体。 - 図2に示すVH配列のいずれかから選択されるVHアミノ酸配列を含む、請求項6または7に記載の抗体。
- さらに、Kabatのナンバリングシステムに従って表示された表1に挙げるCDR4~CDR6配列のいずれかまたはその機能活性CDRバリアントを含む抗体軽鎖可変領域(VL)を含む、請求項6~8のいずれか1項に記載の抗体。
- A)グループメンバーi)~iv)からなるグループから選択される抗体
i)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 13のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 14のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 15のアミノ酸配列からなるCDR6;
ii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 16のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 17のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
iii)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 19のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 20のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
iv)下記のものを含む抗体
a)SEQ ID 19のアミノ酸配列からなるCDR4;および
b)SEQ ID 17のアミノ酸配列からなるCDR5;および
c)SEQ ID 18のアミノ酸配列からなるCDR6;
または
B)Aのグループメンバーのいずれかである親抗体の機能活性バリアントであって、親抗体のCDR4、CDR5またはCDR6のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む抗体
である、請求項9に記載の抗体。 - 図2に示すVL配列のいずれかから選択されるVLアミノ酸配列を含む、請求項10に記載の抗体。
- a)表1に挙げるいずれかの抗体のCDR1~CDR6配列;または
b)図2に示すいずれかの抗体のVHおよびVL配列
を含み、あるいは
c)a)~c)の配列を特徴とする親抗体の機能活性バリアントであり、
好ましくは、その際、
i.機能活性バリアントは、親抗体のCDR1~CDR6のいずれかの少なくとも1つの機能活性CDRバリアントを含む;および/または
ii.機能活性バリアントは、VHおよびVL配列のいずれかのフレームワーク領域に少なくとも1つの点変異を含む;
ならびに、さらに
iii.機能活性バリアントは、親抗体と同じエピトープを結合する特異性を有する;および/または
iv.機能活性バリアントは、親抗体のヒト、ヒト化、キメラもしくはネズミおよび/または親和性成熟バリアントである;
請求項6~11のいずれか1項に記載の抗体。 - 表1に挙げるいずれかのCDR配列の機能活性CDRバリアントを含み、機能活性CDRバリアントが下記のうちの少なくとも1つであり:
a)親CDR配列中に1、2または3つの点変異を含む;および/または
b)親CDR配列の4つのC末端または4つのN末端または4つの中心アミノ酸位置のいずれかに1または2つの点変異を含む;および/または
c)親CDR配列との少なくとも60%の配列同一性を有する;
好ましくは、機能活性CDRバリアントは4または5個未満のアミノ酸からなるいずれかのCDR配列中に1または2つの点変異を含む、
請求項1~12のいずれか1項に記載の抗体。 - a)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 1のCDR1配列;および
b.SEQ ID 2のCDR2配列;および
c.SEQ ID 3のCDR3配列;および
d.SEQ ID 13のCDR4配列;および
e.SEQ ID 14のCDR5配列;および
f.SEQ ID 15のCDR6配列;
b)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 4のCDR1配列;および
b.SEQ ID 5のCDR2配列;および
c.SEQ ID 6のCDR3配列;および
d.SEQ ID 16のCDR4配列;および
e.SEQ ID 17のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
c)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 7のCDR1配列;および
b.SEQ ID 8のCDR2配列;および
c.SEQ ID 9のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 20のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
d)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 10のCDR1配列;および
b.SEQ ID 11のCDR2配列;および
c.SEQ ID 12のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 17のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
e)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 4のCDR1配列;および
b.SEQ ID 5のCDR2配列;および
c.SEQ ID 6のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 20のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
f)下記のものを含む抗体:
a.SEQ ID 10のCDR1配列;および
b.SEQ ID 11のCDR2配列;および
c.SEQ ID 12のCDR3配列;および
d.SEQ ID 19のCDR4配列;および
e.SEQ ID 20のCDR5配列;および
f.SEQ ID 18のCDR6配列;
または以上のいずれかの機能活性CDRバリアントであって、gal-III抗原を10-8M未満のKdで結合する親和性を有するもの、
からなる群から選択される、請求項1~12のいずれか1項に記載の抗体。 - 対象における感染を制限するかまたはその感染から生じる病状を軽減するのに有効な量の抗体を対象に投与することを含む、クレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)の感染または定着のリスクをもつかまたはそれを伴う対象の処置に使用するための、
好ましくは原発性および続発性の菌血症、肺炎、尿路感染症、肝膿瘍、腹膜炎または髄膜炎のいずれかを治療または予防するための、請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体。 - 請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体を含み、場合により医薬的に許容できるキャリヤーまたは賦形剤を含有する、好ましくは非経口または粘膜用の配合物を含む医薬製剤。
- 対象においてクレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)の感染もしくは定
着、または原発性および続発性の菌血症、肺炎、尿路感染症、肝膿瘍、腹膜炎もしくは髄膜炎などの関連疾患を診断するための、請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体の使用。 - 対象が免疫無防備状態もしくは免疫抑制状態の患者またはその接触者である、請求項17に記載の使用。
- 下記の構成要素
a)抗体;および
b)さらなる診断試薬;
c)ならびに場合により、抗体および診断試薬のうち少なくとも1つを固定化するための固相
を含む、組成物またはキット状パーツ中に抗体およびさらなる診断試薬を含む、請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体の診断用製剤。 - さらなる診断試薬が、抗体と、および/または抗体がそれの抗原に結合した反応生成物
と、特異的に反応する診断用の標識または試薬である、請求項19に記載の診断用製剤。 - a)請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体を用意し、そして
b)その抗体が被験対象の生体試料中のガラクタン-IIIエピトープと特異的に免疫反応するかどうかを検出し、それによりクレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)の感染または定着を診断する
ことを含む、対象においてクレブシエラ・ニューモニエ株により起きたクレブシエラ・ニューモニエの感染または定着を診断する方法。 - 生体試料が、体液または組織試料、好ましくは血液試料、糞便試料、皮膚試料、尿試料、脳脊髄液、および呼吸器検体、たとえば気管内吸引物、胸膜液、肺穿刺液、鼻スワブもしくは喀痰、または以上のいずれかに由来するクレブシエラ・ニューモニエ(Klebsiella pneumoniae)分離株からなる群から選択される試料である、請求項21に記載の方法。
- 請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体をコードする、単離された核酸。
- 請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体のVHおよび/またはVLを含むタンパク質を発現するコード配列を含む、発現カセットまたはプラスミド。
- 請求項24に記載の発現カセットまたはプラスミドを含む宿主細胞。
- 請求項25に記載の宿主細胞をその抗体を産生する条件下で培養または維持する、請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体を製造する方法。
- a)抗体または抗体産生細胞を含有する試料を用意し;そして
b)試料中の抗体または試料により産生された抗体と請求項1に定めたガラクタン-IIIエピトープとの結合を査定し、その際、抗体とエピトープの陽性反応によりその抗体を候補抗体と同定する
ことを含む、候補抗体を同定する方法。 - a)抗体または抗体産生細胞を含有する試料を用意し;そして
b)試料中の抗体または試料により産生された抗体と請求項1に定めたガラクタン-IIIエピトープとの結合を査定し、その際、ガラクタン-Iエピトープと対比して、ガラクタン-III抗体とエピトープの特異的な陽性反応により、その抗体を候補抗体と同定する
ことを含む、候補抗体を同定する方法。 - a)請求項27または28に従って同定した候補抗体を用意し;そして
b)候補抗体と同じエピトープ結合特異性を備えた、モノクローナル抗体、またはヒト化もしくはヒト型の候補抗体、またはその誘導体を製造する
ことを含む、請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体を製造する方法。
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