JP2022022357A - Low-glucide beer-taste fermented alcoholic beverage, and method for producing the same - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とする低糖質ビール
テイスト発酵アルコール飲料とその製造方法に関する。
The present invention relates to a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage using malt and / or ungerminated wheat as a raw material and a method for producing the same.
ビールテイスト発酵アルコール飲料にコクや味の厚みを付与する技術としては、カルボ
キシメチルリジンを含むペプチドをコク付与物質として用いる技術(特許文献1)が知ら
れている。しかし、ビールテイスト発酵アルコール飲料、特に低糖質ビールの香味、特に
柔らかくスムーズなテクスチャーの付与や味の持続性や余韻の付与などについては依然と
して改善の余地があった。また同様に、柔らかくスムーズなテクスチャーの付与や味の持
続性などの観点から、低糖質のビールの香味の改良を試みた例は発明者らが知る限り報告
されていない。
As a technique for imparting richness and thickness to a beer-taste fermented alcoholic beverage, a technique using a peptide containing carboxymethyl lysine as a richness-imparting substance (Patent Document 1) is known. However, there was still room for improvement in the flavor of beer-taste fermented alcoholic beverages, especially low-carbohydrate beer, especially in terms of imparting a soft and smooth texture, and imparting a long-lasting taste and a lingering finish. Similarly, as far as the inventors know, no example has been reported in which an attempt was made to improve the flavor of low-carbohydrate beer from the viewpoint of imparting a soft and smooth texture and sustaining the taste.
ビールは、発泡酒や新ジャンルと比べて柔らかでスムーズなテクスチャーを有し、ボデ
ィ感が強いなどの好ましい味の特徴がある。本発明者らは、この違いに基づき、低糖質ビ
ールにおいてビールの特徴をさらに強化する技術開発が実現すれば、これまでにない香味
特徴のある低糖質ビールの製造を実現できると考えた。
Beer has a soft and smooth texture compared to low-malt beer and new genres, and has favorable taste characteristics such as a strong body feeling. Based on this difference, the present inventors considered that if technological development for further enhancing the characteristics of beer in low-carbohydrate beer is realized, it will be possible to produce low-carbohydrate beer with unprecedented flavor characteristics.
本発明は、ビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーがあり、味の持続性が認めら
れる、新しい香味を有する低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料とその製造方法を提
供することを目的とする。本発明はまた、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風
味改善剤と風味改善方法を提供することも目的とする。
An object of the present invention is to provide a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage having a new flavor, which has a soft and smooth texture like beer and has a long-lasting taste, and a method for producing the same. It is also an object of the present invention to provide a flavor improving agent and a flavor improving method for a low-carbohydrate beer-taste fermented alcoholic beverage.
本発明者らは、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料において、特定分子量のペプ
チドがビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーの付与や味の持続性に寄与すること
を見出した。本発明者らはまた、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料において、特
定分子量のペプチドの比率を特定範囲内にすることで、よりビールらしい柔らかくスムー
ズなテクスチャーや味の持続性が実現できることを見出した。本発明者らはさらに、低糖
質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善に寄与するペプチドを具体的に特定した
。本発明はこれらの知見に基づくものである。
The present inventors have found that in a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, a peptide having a specific molecular weight contributes to imparting a soft and smooth texture like beer and sustaining the taste. The present inventors have also found that in a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, by setting the ratio of peptides having a specific molecular weight within a specific range, a softer and smoother texture and lasting taste that are more like beer can be realized. The present inventors have further specifically identified peptides that contribute to improving the flavor of low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverages. The present invention is based on these findings.
本発明によれば以下の発明が提供される。
[1]麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とする低糖質ビールテイ
スト発酵アルコール飲料であって、全タンパク量に対する分子量10~20kDa(HP
LCゲル濾過法)のペプチド量の比率(以下、単に「ペプチド比率」ということがある)
が2.5%より大きい、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料。
[2]麦芽使用比率が50%以上である、上記[1]に記載のビールテイスト発酵アルコ
ール飲料。
[3]分子量10~20kDa(HPLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチド
を配合する工程を含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[4]前記ペプチドが、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とする
ビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する、上記[3]に記載のビールテイスト発酵
アルコール飲料の製造方法。
[5]分子量10~20kDaのペプチド(HPLCゲル濾過法)が飲料中の全タンパク
量に対して2.5%以上の比率となるよう配合される、上記[3]または[4]に記載の
ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[6]前記ペプチドを含む原料から該ペプチドを調製する工程をさらに含んでなる、上記
[3]~[5]のいずれかに記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[7]限外濾過法および硫安沈殿法により前記ペプチドを調製する、上記[6]に記載の
ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[8]前記ペプチドを含む原料が、麦芽および/または未発芽の麦類あるいはその加工品
である、上記[6]または[7]に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法
。
[9]前記ペプチドを含む原料が、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも
一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料である、上記[6]~[8]のいずれかに
記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[10]分子量10~20kDa(HPLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチ
ドを有効成分として含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善剤
。
[11]前記ペプチドが、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とす
るビールテイスト発酵アルコール飲料に由来するものである、上記[10]に記載のビー
ルテイスト発酵アルコール飲料の風味改善剤。
[12]分子量10~20kDa(HPLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチ
ドを添加する工程を含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善方
法。
[13]前記ペプチドが、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とす
るビールテイスト発酵アルコール飲料に由来するものである、上記[12]に記載のビー
ルテイスト発酵アルコール飲料の風味改善方法。
According to the present invention, the following inventions are provided.
[1] A low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage made from malt and / or ungerminated wheat as a raw material, having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HP) with respect to the total protein content.
Ratio of peptide amount in LC gel filtration method (hereinafter, may be simply referred to as "peptide ratio").
A low-carbohydrate beer-taste fermented alcoholic beverage with a value greater than 2.5%.
[2] The beer-taste fermented alcoholic beverage according to the above [1], wherein the malt usage ratio is 50% or more.
[3] A method for producing a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, which comprises a step of blending one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method).
[4] The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to the above [3], wherein the peptide is derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage using malt and / or ungerminated wheat as a raw material.
[5] The above-mentioned [3] or [4], wherein the peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method) is blended so as to have a ratio of 2.5% or more with respect to the total amount of protein in the beverage. Beer taste How to make fermented alcoholic beverages.
[6] The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to any one of [3] to [5] above, further comprising a step of preparing the peptide from a raw material containing the peptide.
[7] The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to the above [6], wherein the peptide is prepared by an ultrafiltration method and an ammonium sulfate precipitation method.
[8] The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to the above [6] or [7], wherein the raw material containing the peptide is malt and / or ungerminated wheat or a processed product thereof.
[9] The beer according to any one of [6] to [8] above, wherein the raw material containing the peptide is a beer-taste fermented alcoholic beverage containing at least a part of malt and / or ungerminated wheat as a raw material. Taste Fermented alcoholic beverage manufacturing method.
[10] A flavor improving agent for a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage containing one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method) as an active ingredient.
[11] The flavor of the beer-taste fermented alcoholic beverage according to the above [10], wherein the peptide is derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage using malt and / or ungerminated wheat as a raw material. Improving agent.
[12] A method for improving the flavor of a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, which comprises a step of adding one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method).
[13] The flavor of the beer-taste fermented alcoholic beverage according to [12] above, wherein the peptide is derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage using malt and / or ungerminated wheat as a raw material. How to improve.
本発明によれば、分子量10~20kDaのペプチドを配合するか、該ペプチドの比率
を所定値の範囲内にすることによって、ビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーが
あり、味の持続性が認められる低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料を提供すること
ができる。特に、麦芽使用比率50%以上のビールでは、ビールらしい柔らかくスムーズ
なテクスチャーと味の持続性が増強され、新しい香味特徴の低糖質ビールを提供できるこ
とになり、消費者の多様な嗜好ニーズに応えることが出来る点で有利である。
According to the present invention, by blending a peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa or setting the ratio of the peptide within a predetermined value range, a low sugar having a soft and smooth texture like beer and having a long-lasting taste is recognized. Beer-taste fermented alcoholic beverages can be provided. In particular, for beer with a malt usage ratio of 50% or more, the soft and smooth texture and taste persistence that are typical of beer will be enhanced, and it will be possible to provide low-carbohydrate beer with new flavor characteristics to meet the diverse taste needs of consumers. It is advantageous in that it can be done.
本発明において「ビールテイスト」とは通常にビールを製造した場合、すなわち、酵母
等による発酵に基づいてビールを製造した場合に得られるビール特有の味わい、香りを意
味する。
In the present invention, the "beer taste" means the taste and aroma peculiar to beer obtained when beer is normally produced, that is, when beer is produced based on fermentation with yeast or the like.
本発明において「ビールテイスト発酵アルコール飲料」は、炭素源、窒素源および水な
どを原料として酵母により発酵させた飲料を意味し、ビール、発泡酒および原料として麦
芽を使用するビールや発泡酒にアルコールを添加してなる飲料(例えば、酒税法上、「リ
キュール(発泡性)(1)」に分類されるリキュール系新ジャンル飲料)が挙げられる。
In the present invention, the "beer taste fermented alcoholic beverage" means a beverage fermented with yeast using carbon sources, nitrogen sources, water and the like as raw materials, and alcohol is used for beer, sparkling liquor and beer and sparkling liquor using malt as a raw material. (For example, a liqueur-based new genre beverage classified as "liqueur (foaming) (1)" under the Liquor Tax Law).
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料は麦由来の原料として少なくとも麦芽を使
用するものとすることができ、その場合、麦芽使用比率は、例えば、50%以上とするこ
とができ、好ましくは60%以上である。ここで、「麦芽使用比率」とは、醸造用水を除
く全原料の質量に対する麦芽質量の割合をいう。
The beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention can use at least malt as a raw material derived from wheat, and in that case, the malt use ratio can be, for example, 50% or more, preferably 60% or more. Is. Here, the "malt use ratio" means the ratio of the malt mass to the mass of all raw materials excluding brewing water.
本発明において「低糖質」のビールテイスト発酵アルコール飲料とは、糖質の量(糖質
濃度)が通常の製法で作られた同等の比較対象の飲料に対して40%以上削減されたもの
(すなわち、糖質オフ表示がなされた飲料)、あるいは糖質の量が0.5g/100mL
未満(すなわち、糖質ゼロ表示がなされた飲料)であるものを意味する。このうち前者(
糖質オフ表示がなされた飲料)の糖質濃度は、2.1g/100mL以下とすることがで
き、好ましくは0.5~2.1g/100mLの範囲である。ここで、糖質の量の測定は
公知の方法に従って行うことができ、当該試料の質量から、水分、タンパク質、脂質、灰
分および食物繊維量を除いて算出する方法(栄養表示基準(平成21年12月16日 消
費者庁告示第9号 一部改正)参照)に従って測定することができる。
In the present invention, the "low-carbohydrate" beer-taste fermented alcoholic beverage is a beverage in which the amount of carbohydrate (sugar concentration) is reduced by 40% or more compared to the equivalent comparable beverage made by a usual manufacturing method ( That is, a beverage labeled with carbohydrate off), or the amount of carbohydrate is 0.5 g / 100 mL.
Less than (ie, beverages labeled as zero sugar). Of these, the former (
The sugar concentration of the beverage labeled as sugar-off) can be 2.1 g / 100 mL or less, preferably in the range of 0.5 to 2.1 g / 100 mL. Here, the amount of sugar can be measured according to a known method, and is calculated by excluding the amount of water, protein, lipid, ash and dietary fiber from the mass of the sample (Nutrition Labeling Standard (2009). It can be measured according to (December 16th, Consumer Agency Notification No. 9 Partial Amendment)).
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料では、全タンパク量に対する分子量
10~20kDaのペプチド量の比率(ペプチド比率)(好ましくは、ビールテイスト発
酵アルコール飲料の原料に由来する分子量10~20kDaのペプチド比率)が特定値以
上であることを特徴とする。ここで、ペプチド比率の算出に当たっては、飲料中のタンパ
ク濃度(mg/mL)を全タンパク量とし、飲料中の分子量10~20kDaのペプチド
濃度(mg/mL)を分子量10~20kDaのペプチド量とすることができる。また、
本明細書において「ペプチド比率」の算出の元になるペプチド量は10~20kDaの分
子量を有する1種または2種以上のペプチドの含有量を合計して算出されるものである。
また本明細書においてペプチドの「分子量」はHPLCゲル濾過法により測定されるもの
であり、測定の具体例は後記実施例1に示される通りである。ペプチドおよびタンパクの
定量はローリー法(Lowry法)により実施することができる。
In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount (peptide ratio) (preferably, the peptide ratio having a molecular weight of 10 to 20 kDa derived from the raw material of the beer-taste fermented alcoholic beverage. ) Is greater than or equal to a specific value. Here, in calculating the peptide ratio, the protein concentration (mg / mL) in the beverage is taken as the total protein amount, and the peptide concentration (mg / mL) having a molecular weight of 10 to 20 kDa in the beverage is defined as the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa. can do. again,
In the present specification, the peptide amount which is the basis for calculating the "peptide ratio" is calculated by summing up the contents of one or more kinds of peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa.
Further, in the present specification, the "molecular weight" of the peptide is measured by the HPLC gel filtration method, and specific examples of the measurement are as shown in Example 1 below. The quantification of peptides and proteins can be carried out by the Lowry method.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料は、低糖質であるにも関わらず、新
しい香味を有すること、すなわち、味のスムーズさと味の持続性が増強されたことを特徴
とする。低糖質のビールテイスト発酵アルコール飲料(特に、低糖質のビールおよび発泡
酒)は後味が弱く、飲み応えがないという特徴があり、それゆえにオフフレーバーが目立
つという課題があった。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料では味のスム
ーズさと味の持続性が付与されることにより、低糖質のビールテイスト発酵アルコール飲
料の香味上の課題を解決することができる。ここで、「味のスムーズさ」とは、舌で味を
感じる時の口当たりの柔らかさの度合いを意味する。また、「味の持続性」とは、溜飲後
に持続する味の余韻の度合いを意味する。
The low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention is characterized by having a new flavor in spite of being low-sugar, that is, the smoothness of the taste and the sustainability of the taste are enhanced. Low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverages (particularly low-sugar beer and low-malt beer) are characterized by a weak aftertaste and unresponsiveness, and therefore have the problem of conspicuous off-flavor. The low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention can solve the problem of flavor of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage by imparting smoothness and sustainability of the taste. Here, "smoothness of taste" means the degree of softness in the mouth when the taste is felt by the tongue. In addition, "taste persistence" means the degree of aftertaste of taste that is sustained after drinking.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料では、全タンパク量に対する分子量
10~20kDaのペプチド量の比率を2.5%より大きい比率にすることができ、好ま
しくは3.7%以上である。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料ではまた
、全タンパク量に対する分子量10~20kDaのペプチド量の比率を2.5%より大き
くし、かつ、重合度5~10のα-グルカン濃度を4.0mg/mL以下にすることがで
きる。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料ではまた、全タンパク量に対す
る分子量10~20kDaのペプチド量の比率を2.5%より大きくし、かつ、重合度5
~10のα-グルカン濃度を1.8~4.0mg/mLにすることができ、あるいは、全
タンパク量に対する分子量10~20kDaのペプチド量の比率を2.5%より大きくし
、かつ、重合度5~10のα-グルカン濃度を1.8mg/mL以下にすることができる
。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料では好ましくは、全タンパク量に対
する分子量10~20kDaのペプチド量の比率を3.7%以上にし、かつ、重合度5~
10のα-グルカン濃度を4.0mg/mL以下にすることができる。本発明の低糖質ビ
ールテイスト発酵アルコール飲料ではまた、全タンパク量に対する分子量10~20kD
aのペプチド量の比率を3.7%以上にし、かつ、重合度5~10のα-グルカン濃度を
1.8~4.0mg/mLにすることができ、あるいは、全タンパク量に対する分子量1
0~20kDaのペプチド量の比率を3.7%以上にし、かつ、重合度5~10のα-グ
ルカン濃度を1.8mg/mL以下にすることができる。全タンパク量に対する分子量1
0~20kDaのペプチド量の比率は味の調和の観点から上限を設けることができ、例え
ば、8.0%を上限とすることができる。
In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount can be set to a ratio larger than 2.5%, preferably 3.7% or more. In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is made larger than 2.5%, and the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 is 4. It can be 0 mg / mL or less. In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is made larger than 2.5%, and the degree of polymerization is 5.
The α-glucan concentration of ~ 10 can be set to 1.8 ~ 4.0 mg / mL, or the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is made larger than 2.5% and polymerized. The α-glucan concentration at
The α-glucan concentration of 10 can be 4.0 mg / mL or less. The low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention also has a molecular weight of 10 to 20 kD with respect to the total protein content.
The ratio of the peptide amount of a can be 3.7% or more, and the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 can be 1.8 to 4.0 mg / mL, or the molecular weight is 1 with respect to the total protein amount.
The ratio of the peptide amount of 0 to 20 kDa can be 3.7% or more, and the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 can be 1.8 mg / mL or less. Molecular weight with respect to
The ratio of the peptide amount of 0 to 20 kDa can be set to an upper limit from the viewpoint of taste harmony, and can be set to an upper limit of 8.0%, for example.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料ではまた、α-グルカンの濃度を所
定値にすることができ、例えば、重合度5~10のα-グルカンの濃度を4.0mg/m
L以下に設定することができる。本明細書において、「α-グルカン濃度」は重合度5~
10の1種または2種以上のα-グルカンの含有量を合計して算出されるものである。ま
た本明細書において「α-グルカン」とは複数のグルコース分子がα-1,4-グルコシ
ド結合により結合して構成された直鎖状または分岐状のグルカン(例えば、α-1,4-
グルコシド結合およびα-1,6-グルコシド結合で構成された分岐状のグルカン)を意
味する。さらに、本明細書においてα-グルカンの「重合度」はグルカンを構成するグル
コース残基の個数を意味し、直鎖状グルカンを構成するグルコース残基の個数のみならず
、分岐構造を構成するグルコース残基の個数を含む。α-グルカンの重合度と含有量の測
定は、例えば、コロナCAD検出器を用いたHPLC分析により実施することができ、測
定の具体例は後記実施例1に示される通りである。なお、本明細書および図面において重
合度は単に「G」と表記されることがある。
In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the concentration of α-glucan can also be set to a predetermined value, for example, the concentration of α-glucan having a degree of polymerization of 5 to 10 is 4.0 mg / m.
It can be set to L or less. In the present specification, "α-glucan concentration" has a degree of polymerization of 5 to 5.
It is calculated by summing up the contents of one or more of 10 α-glucans. Further, in the present specification, "α-glucan" is a linear or branched glucan (for example, α-1,4-) composed of a plurality of glucose molecules bonded by α-1,4-glucosidic bonds.
It means a branched glucan composed of a glucosidic bond and an α-1,6-glucoside bond). Further, in the present specification, the "degree of polymerization" of α-glucan means the number of glucose residues constituting the glucan, and not only the number of glucose residues constituting the linear glucan but also the glucose constituting the branched structure. Includes the number of residues. The degree of polymerization and content of α-glucan can be measured by, for example, HPLC analysis using a corona CAD detector, and specific examples of the measurement are as shown in Example 1 below. In addition, the degree of polymerization may be simply expressed as "G" in this specification and drawings.
なお、重合度5~10のα-グルカン濃度と栄養表示基準に基づく糖質濃度には相関関
係が見られる。実施例1.Dに示されるとおり、例えば、重合度5~10のα-グルカン
濃度4.0mg/mL以下の場合、栄養表示基準1.4g/100mL以下に相当すると
考えられる。
There is a correlation between the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 and the sugar concentration based on the nutrition labeling standard. Example 1. As shown in D, for example, when the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 is 4.0 mg / mL or less, it is considered to correspond to the nutrition labeling standard of 1.4 g / 100 mL or less.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料は分子量10~20kDaのペプチ
ド比率と、場合によっては重合度5~10のα-グルカン濃度が所定値の範囲内に調整さ
れる限り、通常の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造手順に従って製造する
ことができる。例えば、麦芽、ホップ、副原料、醸造用水等の醸造原料から調製された麦
汁に発酵用ビール酵母を添加して発酵を行い、発酵液を醸成させて、発酵麦芽飲料を製造
することができる。得られた低糖質ビールテイストの発酵アルコール飲料は、低温にて貯
蔵した後、濾過工程により酵母を除去することができる。なお、ビールテイスト発酵アル
コール飲料のうちオールモルトビールは、麦芽、ホップ、水から製造できることはいうま
でもない。
The low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention is a normal low-sugar beer as long as the peptide ratio having a molecular weight of 10 to 20 kDa and the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 are adjusted within a predetermined range. It can be produced according to the production procedure of the taste fermented alcoholic beverage. For example, fermented malt beverages can be produced by adding fermenting beer yeast to wort prepared from brewing raw materials such as malt, hops, auxiliary raw materials, and brewing water to ferment and brew a fermented liquid. .. The obtained fermented alcoholic beverage having a low sugar beer taste can be stored at a low temperature and then yeast can be removed by a filtration step. It goes without saying that among beer-taste fermented alcoholic beverages, all-malt beer can be produced from malt, hops, and water.
上記製造手順において麦汁の作製は常法に従って行うことができる。例えば、醸造原料
と醸造用水の混合物を糖化し、濾過して、麦汁を得、その麦汁にホップを添加した後、煮
沸し、煮沸した麦汁を冷却することにより麦汁を調製することができる。また、麦汁は、
糖化工程中に市販の酵素製剤を添加して作製することもできる。例えば、タンパク分解の
ためにプロテアーゼ製剤を、糖質分解のためにα-アミラーゼ製剤、β-アミラーゼ製剤
、グルコアミラーゼ製剤、プルラナーゼ製剤等を、繊維素分解のためにβ-グルカナーゼ
製剤、繊維素分解酵素製剤(例えば、ヘミセルラーゼ製剤)等をそれぞれ用いることがで
き、あるいはこれらの混合製剤を用いることもできる。
In the above production procedure, wort can be produced according to a conventional method. For example, a mixture of brewing raw materials and brewing water is saccharified and filtered to obtain wort, hops are added to the wort, and then the wort is boiled and the boiled wort is cooled to prepare the wort. Can be done. Also, wort
It can also be prepared by adding a commercially available enzyme preparation during the saccharification step. For example, a protease preparation for proteolysis, an α-amylase preparation, β-amylase preparation, glucoamylase preparation, plulanase preparation, etc. for glycolysis, β-glucanase preparation, fibrinolysis for fibrinolysis, etc. Enzyme preparations (for example, hemicellulase preparations) and the like can be used respectively, or mixed preparations thereof can also be used.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造では、麦芽以外に、未発芽の
麦類(例えば、未発芽大麦(エキス化したものを含む)、未発芽小麦(エキス化したもの
を含む));米、とうもろこし、こうりゃん、馬鈴薯、でんぷん、糖類(例えば、液糖)
等の酒税法で定める副原料;タンパク質分解物や酵母エキス等の窒素源;香料、色素、起
泡・泡持ち向上剤、水質調整剤、発酵助成剤等のその他の添加物を醸造原料として使用す
ることができる。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料は、醸造用水以外の
使用原料を少なくとも麦芽およびホップとすることができ、場合によっては更に糖類、米
、とうもろこし、でんぷん等を使用原料とすることができる。
In the production of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, in addition to malt, ungerminated barley (for example, ungerminated barley (including extracted), ungerminated wheat (including extracted)) Rice, corn, koryan, malt, starch, sugar (eg liquid sugar)
Auxiliary raw materials specified by the Liquor Tax Law such as; Nitrogen sources such as proteolytic products and yeast extract; can do. In the low-carbohydrate beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the raw materials used other than the water for brewing can be at least malt and hops, and in some cases, sugars, rice, corn, starch and the like can be used as raw materials.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製法において製造飲料中の分子量
10~20kDaのペプチド比率を所定値の範囲内に調整するためには、例えば、原料で
ある麦芽および/または未発芽の麦類の仕込み・糖化工程におけるタンパク分解を抑制す
ることや、原料である麦芽の製麦工程におけるタンパク分解度を抑制することなどにより
、調整することができる。なお、タンパク分解としては、麦芽や未発芽の麦類に内在する
プロテアーゼ、あるいは外から添加するプロテアーゼ製剤によるものが挙げられる。分解
の抑制は、プロテアーゼ製剤の添加量を減じる、タンパク分解の作用温度における処理時
間を減じる、作用pHを至適条件から変更するなどにより行うことができる。
In order to adjust the peptide ratio of the molecular weight of 10 to 20 kDa in the produced beverage in the method for producing a low-carbohydrate beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention within a predetermined range, for example, malt and / or ungerminated wheat as a raw material is used. It can be adjusted by suppressing the protein decomposition in the preparation / saccharification process of the beverage, or by suppressing the degree of protein decomposition in the malting process of the raw material malt. Examples of proteolysis include proteases inherent in malt and ungerminated wheat, and protease preparations added from the outside. Degradation can be suppressed by reducing the amount of the protease preparation added, reducing the treatment time at the action temperature of proteolysis, changing the action pH from the optimum conditions, and the like.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製法において製造飲料中の栄養表
示基準による糖質濃度やα-グルカンの濃度を所定値の範囲内に調整するためには、例え
ば、原料である麦芽および/または未発芽の麦類等の仕込みや糖化工程における糖質分解
を促進すること、原料である麦芽の製麦工程における糖質分解を促進すること、それによ
り麦芽および/または未発芽の麦類等に由来する糖質が酵母に資化できる糖(資化性糖)
まで充分に分解すること、あるいは糖質が酵母に資化できる糖まで充分分解された液糖を
用いることなどにより、調整することができ、さらには発酵・貯蔵工程において、これら
の資化性糖が酵母に十分に資化され、本発明の所定の糖質濃度以下に低下するまで酵母発
酵を行うことなどにより、調整することもできる。なお、糖質分解としては、麦芽や未発
芽の麦類に内在するαアミラーゼやβアミラーゼ等、あるいは外から添加するαアミラー
ゼ製剤、βアミラーゼ製剤、グルコアミラーゼ製剤、プルラナーゼ製剤等によるものが挙
げられる。分解の促進は、αアミラーゼ製剤、βアミラーゼ製剤、グルコアミラーゼ製剤
、プルラナーゼ製剤等の添加量を増加させること、糖質分解の作用温度における処理時間
を延長すること、作用pHを至適条件に合わせることなどにより行うことができる。
In the method for producing a low-carbohydrate beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, in order to adjust the sugar concentration and the α-glucan concentration according to the nutrition labeling standard in the manufactured beverage within a predetermined range, for example, malt as a raw material and / Or to promote the sugar decomposition in the preparation of ungerminated wheat and the like and the saccharification process, and to promote the sugar decomposition in the malting process of the raw material malt, thereby the malt and / or the ungerminated wheat. Carbohydrates derived from, etc. can be assimilated into yeast (assimilating sugar)
It can be adjusted by sufficiently decomposing up to, or by using liquid sugar that has been sufficiently decomposed to sugar that can be assimilated into yeast, and further, these assimilating sugars in the fermentation and storage process. Can also be adjusted by performing yeast fermentation until the sugar concentration is sufficiently assimilated into yeast and the sugar concentration drops below the predetermined sugar concentration of the present invention. Examples of the sugar decomposition include α-amylase and β-amylase inherent in malt and ungerminated wheat, or α-amylase preparation, β-amylase preparation, glucoamylase preparation, pullulanase preparation and the like added from the outside. .. To promote decomposition, increase the amount of α-amylase preparation, β-amylase preparation, glucoamylase preparation, pullulanase preparation, etc., prolong the treatment time at the action temperature of sugar decomposition, and adjust the action pH to the optimum conditions. It can be done by things such as.
本発明においてはまた、分子量10~20kDaのペプチドを含む原料から、該ペプチ
ドを含む画分を調製し、該画分をビールテイスト発酵アルコール飲料に添加することによ
って、分子量10~20kDaのペプチド比率が所定値の範囲内に調整されたビールテイ
スト発酵アルコール飲料を製造することができる。典型的には、実施例1の記載に従って
、ビールテイスト発酵アルコール飲料から分子量10~20kDaのペプチドが含まれる
画分を調製し、該画分を低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料に添加することによっ
て、分子量10~20kDaのペプチド比率が所定値の範囲内に調整された低糖質ビール
テイスト発酵アルコール飲料を製造することができる。
In the present invention, a fraction containing the peptide is prepared from a raw material containing a peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa, and the fraction is added to a beer-taste fermented alcoholic beverage to increase the peptide ratio having a molecular weight of 10 to 20 kDa. It is possible to produce a beer-taste fermented alcoholic beverage adjusted within a predetermined range. Typically, according to the description of Example 1, a fraction containing a peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa is prepared from a beer-taste fermented alcoholic beverage, and the fraction is added to a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage. It is possible to produce a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage in which the peptide ratio having a molecular weight of 10 to 20 kDa is adjusted within a predetermined range.
すなわち、本発明によれば、分子量10~20kDaの1種または2種以上のペプチド
(好ましくは、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテ
イスト発酵アルコール飲料に由来する分子量10~20kDaの1種または2種以上のペ
プチド)を配合してなる低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料が提供され、該飲料は
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の一部である。該ペプチドが配合され
てなる飲料は、低糖質であるにも関わらずビールテイスト発酵アルコール飲料としての風
味が改善あるいは向上されており、具体的には、味のスムーズさと味の持続性が増強され
た飲料である。
That is, according to the present invention, it is derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage using at least one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (preferably malt and / or ungerminated wheat as a raw material. A low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage comprising one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa is provided, and the beverage is a part of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention. The beverage containing the peptide has an improved or improved flavor as a beer-taste fermented alcoholic beverage despite its low sugar content, and specifically, the smoothness of the taste and the sustainability of the taste are enhanced. It is a beverage.
本発明の飲料への該ペプチドの配合量は、全タンパク量に対する分子量10~20kD
aのペプチド量の比率が2.5%より大きくなるよう配合することができ、好ましくは3
.7%以上である。本発明の飲料への該ペプチドの配合量はまた、全タンパク量に対する
分子量10~20kDaのペプチド量の比率が2.5%より大きくなるように配合するこ
とができ、この場合、重合度5~10のα-グルカン濃度は4.0mg/mL以下にする
ことができる。本発明の飲料への該ペプチドの配合量はまた、全タンパク量に対する分子
量10~20kDaのペプチド量の比率が2.5%より大きくなるように配合することが
でき、この場合、重合度5~10のα-グルカン濃度は1.8~4.0mg/mL、ある
いは、1.8mg/ml以下にすることができる。本発明の飲料への該ペプチドの配合量
は好ましくは、全タンパク量に対する分子量10~20kDaのペプチド量の比率が3.
7%以上になるように配合することができ、この場合、重合度5~10のα-グルカン濃
度は4.0mg/mL以下にすることができる。本発明の飲料への該ペプチドの配合量は
また、全タンパク量に対する分子量10~20kDaのペプチド量の比率が3.7%以上
になるように配合することができ、この場合、重合度5~10のα-グルカン濃度は1.
8~4.0mg/mL、あるいは、1.8mg/ml以下にすることができる。全タンパ
ク量に対する分子量10~20kDaのペプチド量の比率は味の調和の観点から上限を設
けることができ、例えば、8.0%を上限とすることができる。
The blending amount of the peptide in the beverage of the present invention has a molecular weight of 10 to 20 kD with respect to the total protein amount.
It can be blended so that the ratio of the peptide amount of a is larger than 2.5%, preferably 3
.. It is 7% or more. The blending amount of the peptide in the beverage of the present invention can also be blended so that the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is larger than 2.5%, and in this case, the degree of polymerization is 5 to 5 to. The α-glucan concentration of 10 can be 4.0 mg / mL or less. The amount of the peptide to be blended into the beverage of the present invention can also be blended so that the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is larger than 2.5%, and in this case, the degree of polymerization is 5 to 5 to. The α-glucan concentration of 10 can be 1.8 to 4.0 mg / mL or 1.8 mg / ml or less. The blending amount of the peptide in the beverage of the present invention is preferably 3. The ratio of the amount of the peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total amount of protein is 3.
It can be blended so as to be 7% or more, and in this case, the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 can be 4.0 mg / mL or less. The blending amount of the peptide in the beverage of the present invention can also be blended so that the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is 3.7% or more, and in this case, the degree of polymerization is 5 to 5 to. The α-glucan concentration of 10 is 1.
It can be 8 to 4.0 mg / mL or 1.8 mg / ml or less. The ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount can be set to an upper limit from the viewpoint of taste harmony, and can be set to an upper limit of, for example, 8.0%.
分子量10~20kDaの1種または2種以上のペプチド(特に、麦芽および/または
未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来す
る分子量10~20kDaの1種または2種以上のペプチド)の例としては、α-アミラ
ーゼ/トリプシンインヒビター、トリプシンインヒビター、α-アミラーゼ・インヒビタ
ー(BDAI-1)、非特異的脂質転移タンパク1(non-specific lipid-transfer prot
ein 1)あるいはアベニン・ライクa1が挙げられ、好ましくは、これらのタンパク質お
よびペプチドは大麦由来、一部は小麦由来のものである。α-アミラーゼ/トリプシンイ
ンヒビター、トリプシンインヒビター、α-アミラーゼ・インヒビター(BDAI-1)
、非特異的脂質転移タンパク1あるいはアベニン・ライクa1をビールテイスト発酵アル
コール飲料に配合するときは、これらのペプチドあるいはタンパク質は麦芽および/また
は未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料から調
製したもの以外のペプチドあるいはタンパク質であってもよい。
One or two peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (particularly, one or 2 having a molecular weight of 10 to 20 kDa derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage made from malt and / or ungerminated wheat as a raw material. Examples of peptides) are α-amylase / trypsin inhibitor, trypsin inhibitor, α-amylase inhibitor (BDAI-1), non-specific lipid-transfer prot.
Examples include ein 1) or avenin-like a1, preferably these proteins and peptides are derived from barley, some of which are derived from wheat. α-Amylase / Trypsin Inhibitor, Trypsin Inhibitor, α-Amylase Inhibitor (BDAI-1)
When a non-specific
ビールテイスト発酵アルコール飲料に配合される分子量10~20kDaの1種または
2種以上のペプチドは、該ペプチドを含む原料から調製することができる。分子量10~
20kDaの1種または2種以上のペプチドを含む原料としては、麦芽および/または未
発芽の麦類並びにその加工品、穀物タンパク分解物(例えば、大豆タンパク分解物、コー
ンタンパク分解物)が挙げられる。麦芽および/または未発芽の麦類の加工品としては、
麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とする麦汁、未発芽麦類のエキ
ス、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵
アルコール飲料が挙げられ、好ましくは、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少な
くとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料、より好ましくは麦芽を麦由来の原
料の一部または全部とするビールテイスト発酵アルコール飲料である。原料からの分子量
10~20kDaの1種または2種以上のペプチドの調製手段としては、限外濾過法およ
び硫安沈殿法の組み合わせや、ゲル濾過分画および固相抽出カラムの組み合わせが挙げら
れ、工業的生産の観点からは限外濾過法および硫安沈殿法の組み合わせが好ましい。なお
、限外濾過法および硫安沈殿法の組み合わせにより分子量10~20kDaの1種または
2種以上のペプチドを調製するときには、限外濾過法を実施し、次いで、硫安沈殿法を実
施することができる。
One or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa to be blended in a beer-taste fermented alcoholic beverage can be prepared from a raw material containing the peptide.
Raw materials containing one or more peptides of 20 kDa include malt and / or ungerminated wheat and processed products thereof, grain protein hydrolyzate (eg, soybean protein hydrolyzate, corn protein hydrolyzate). .. As a processed product of malt and / or ungerminated wheat,
Wort and / or ungerminated wheat-based wort, ungerminated wheat extract, malt and / or ungerminated wheat-based beer-taste fermented alcoholic beverages A beer-taste fermented alcoholic beverage containing at least a part of malt and / or ungerminated wheat as a raw material, and more preferably a beer-taste fermented alcoholic beverage containing malt as a part or all of a wheat-derived raw material. Is. Examples of means for preparing one or more kinds of peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa from a raw material include a combination of an ultrafiltration method and a sulfur precipitation method, and a combination of a gel filtration fraction and a solid-phase extraction column. From the viewpoint of commercial production, a combination of the ultrafiltration method and the sulfurized cheap precipitation method is preferable. When preparing one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa by a combination of the ultrafiltration method and the ammonium sulfate precipitation method, the ultrafiltration method can be carried out, and then the ammonium sulfate precipitation method can be carried out. ..
低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料に配合される分子量10~20kDaの1種
または2種以上のペプチドは、好ましくは麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少な
くとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料(より好ましくは麦由来の原料とし
て少なくとも麦芽を使用するビールテイスト発酵アルコール飲料、特に好ましくはオール
モルトビール)から調製することができる。例えば、ビールテイスト発酵アルコール飲料
を製造し、ゲル濾過分画や固相抽出カラムを用いて該飲料から分子量10~20kDaの
ペプチドが含まれる画分を調製することができる。分子量10~20kDaのペプチドは
必ずしも単離・精製されている必要はなく、ビールテイスト発酵アルコール飲料から分画
処理されて得られたペプチド画分を低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料へ配合する
ことができる。
One or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa contained in a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage are preferably beer-taste fermented alcoholic beverages made from malt and / or ungerminated wheat as a raw material. (More preferably, a beer-taste fermented alcoholic beverage using at least malt as a raw material derived from wheat, particularly preferably all-malt beer) can be prepared. For example, a beer-taste fermented alcoholic beverage can be produced, and a fraction containing a peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa can be prepared from the beverage using a gel filtration fraction or a solid-phase extraction column. Peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa do not necessarily have to be isolated and purified, and the peptide fraction obtained by fractionation treatment from a beer-taste fermented alcoholic beverage can be blended into a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage. ..
低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料への分子量10~20kDaのペプチドは、
発酵前の発酵前液、発酵中の発酵液、あるいは発酵後の発酵液への添加により行うことが
できる。例えば、ビールテイスト発酵アルコール飲料を製造し、該飲料から分子量10~
20kDaのペプチドが含まれる画分を調製し、該画分を発酵後の低糖質ビールテイスト
発酵アルコール飲料に添加することによって、分子量10~20kDaのペプチドが配合
された低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料を製造することができる。
Peptides with a molecular weight of 10 to 20 kDa in low-carbohydrate beer-taste fermented alcoholic beverages
This can be done by adding to the pre-fermentation liquid before fermentation, the fermented liquid during fermentation, or the fermented liquid after fermentation. For example, a beer-taste fermented alcoholic beverage is produced, and the molecular weight is 10 to 10 or higher from the beverage.
By preparing a fraction containing a 20 kDa peptide and adding the fraction to a fermented low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage containing a peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa is prepared. Can be manufactured.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料は分子量10~20kDaのペプチ
ド比率または濃度が所定値の範囲内で配合されること以外は、通常の低糖質ビールテイス
ト発酵アルコール飲料の製造手順に従って製造することができる。例えば、麦芽、ホップ
、副原料、醸造用水等の醸造原料から調製された麦汁に発酵用ビール酵母を添加して発酵
を行い、発酵麦芽飲料を醸成させることができる。得られた低糖質ビールテイストの発酵
アルコール飲料は、低温にて貯蔵した後、ろ過工程により酵母を除去することができる。
The low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention shall be produced according to the usual procedure for producing a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, except that the peptide ratio or concentration having a molecular weight of 10 to 20 kDa is blended within a predetermined range. Can be done. For example, fermented malt beverages can be brewed by adding fermenting beer yeast to wort prepared from brewing raw materials such as malt, hops, auxiliary raw materials, and brewing water. The obtained fermented alcoholic beverage having a low sugar beer taste can be stored at a low temperature and then yeast can be removed by a filtration step.
上記製造手順において麦汁の作製は常法に従って行うことができる。例えば、醸造原料
と醸造用水の混合物を糖化し、濾過して、麦汁を得、その麦汁にホップを添加した後、煮
沸し、煮沸した麦汁を冷却することにより麦汁を調製することができる。
In the above production procedure, wort can be produced according to a conventional method. For example, a mixture of brewing raw materials and brewing water is saccharified and filtered to obtain wort, hops are added to the wort, and then the wort is boiled and the boiled wort is cooled to prepare the wort. Can be done.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造では麦芽以外の原料を使用で
き、具体的には、本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料に関する記載に従っ
て麦芽以外の原料を使用できる。
In the production of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, raw materials other than malt can be used, and specifically, raw materials other than malt can be used according to the description of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention.
本発明の別の面によれば、分子量10~20kDa(HPLCゲル濾過法)の1種また
は2種以上のペプチドを有効成分として含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコー
ル飲料の風味改善剤が提供される。本発明のさらに別の面によれば、分子量10~20k
Da(HPLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチドを添加する工程を含んでな
る、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善方法が提供される。本明細書に
おいて「低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善」とは、味のスムーズさと
味の持続性が増強されることを意味するものとする。また、分子量10~20kDa(H
PLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチドは、好ましくは麦芽および/または
未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来す
るものである。本発明の風味改善剤と風味改善方法は本発明の低糖質ビールテイスト発酵
アルコール飲料および該飲料の製造方法についての記載に従って実施することができる。
According to another aspect of the present invention, there is provided a flavor improving agent for a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage containing one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method) as an active ingredient. Will be done. According to yet another aspect of the present invention, the molecular weight is 10 to 20 k.
Provided is a method for improving the flavor of a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, which comprises a step of adding one or more peptides of Da (HPLC gel filtration method). As used herein, "improving the flavor of a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage" means that the smoothness of the taste and the sustainability of the taste are enhanced. In addition, the molecular weight is 10 to 20 kDa (H).
The one or more peptides of the PLC gel filtration method) are preferably derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage made from malt and / or ungerminated wheat as at least a part of the raw material. The flavor improving agent and the flavor improving method of the present invention can be carried out according to the description of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention and the method for producing the beverage.
以下の例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定され
るものではない。なお、以下の例において割合(%)は特に断りがない限り質量%を表す
。
The present invention will be described in more detail based on the following examples, but the present invention is not limited to these examples. In the following examples, the ratio (%) represents mass% unless otherwise specified.
参考例1:ビールテイスト発酵アルコール飲料に好ましい香味を付与するペプチド画分の
特定
(1)ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造
大麦麦芽、ホップ、酵素製剤を用いて、インフュージョン法にてビールテイスト発酵ア
ルコール飲料を製造した。
Reference Example 1: Peptide fraction that imparts a favorable flavor to beer-taste fermented alcoholic beverages
Specific (1) Production of beer-taste fermented alcoholic beverage A beer-taste fermented alcoholic beverage was produced by an infusion method using barley malt, hops, and enzyme preparations.
試験区1は、50℃の湯300mLに大麦麦芽100gを入れ、酵素製剤を添加して6
0分保持後、65℃に昇温して60分保持し、さらに78℃に昇温して5分保持後、濾過
して麦汁を得た。試験区2は、50℃工程を行わず、酵素製剤を添加しない以外は同様に
麦汁を得た。続いて、ホップを0.8g/L投入して100℃で90分煮沸したのち、濾
過して発酵前液を得た。
In
After holding for 0 minutes, the temperature was raised to 65 ° C. and held for 60 minutes, further heated to 78 ° C. and held for 5 minutes, and then filtered to obtain wort. In the
その後、常法に従ってビール酵母により発酵を行い、発酵液の香味確認を行った。8名
のパネルにより、「味の柔らかさ」、すなわち雑味が抑制され、ビールらしく柔らかくス
ムーズなテクスチャーがあり、調和のとれた味わいがあることを指標に、最低は1点、最
高は5点として五段階で官能評価を行い、平均点を算出した。結果は表1に示される通り
であった。
Then, fermentation was carried out with brewer's yeast according to a conventional method, and the flavor of the fermented liquid was confirmed. The panel of 8 people has a minimum of 1 point and a maximum of 5 points, with the index of "softness of taste", that is, the soft and smooth texture like beer, and the harmonious taste. The sensory evaluation was performed in five stages, and the average score was calculated. The results were as shown in Table 1.
表1の通り、試験区1よりも試験区2の方が官能評価のスコア(味の柔らかさ)が良好
であり、香味の印象も好ましかった
As shown in Table 1, the sensory evaluation score (softness of taste) was better in
(2)ゲル濾過分画
上記(1)で得られた発酵液を0.45μmフィルターで濾過し、濾過済み発酵液を計
量して凍結乾燥した。乾燥物を100mM NaCl溶液で溶解して5倍濃縮液を調製し
、分画用サンプルとした。サンプルは、以下の条件にてゲル濾過分画を行った。
(2) Gel filtration fraction The fermented liquid obtained in (1) above was filtered with a 0.45 μm filter, the filtered fermented liquid was weighed, and freeze-dried. The dried product was dissolved in 100 mM NaCl solution to prepare a 5-fold concentrated solution, which was used as a sample for fractionation. The sample was subjected to gel filtration fraction under the following conditions.
カラム:Hiload Superdex 30pg 26/600(GEヘルスケア社
製)
サンプル注入量:5mL
溶離液組成:100mM NaCl
流速:2.5mL/分(流速一定)
検出波長:215nm
分取:0.29cv(カラム・ボリューム)から19.1mL(フラクション0)、その
後0.35cvから5mLずつ分画(フラクション1~51)
Column: Hiload Superdex 30pg 26/600 (manufactured by GE Healthcare)
Sample injection volume: 5 mL
Eluent composition: 100 mM NaCl
Flow rate: 2.5 mL / min (constant flow rate)
Detection wavelength: 215 nm
Fraction: 19.1 mL (fraction 0) from 0.29 cv (column volume), then 5 mL increments from 0.35 cv (fractions 1-51)
分画物の官能評価により、香味の特徴の違いによって、表2のようにフラクションをプ
レ画分、A1、A2、B、C、D、E、F、Gの9つのグループに分けた。
According to the sensory evaluation of the fractions, the fractions were divided into 9 groups of pre-fractions, A1, A2, B, C, D, E, F and G as shown in Table 2 according to the difference in flavor characteristics.
(3)ペプチド画分の精製
上記(2)で得られた各画分は、固相抽出カラム(画分A1、A2、Bは、Bond
Elute C18 EWP、画分C、D、E、F、GはBond Elute C18
を使用、Agilent technologies社製)にて吸着処理を行い、脱塩水で洗浄した後、50%
エタノール水溶液にて溶出して、濃縮乾固を行い、これを脱塩水にて復水し、濃縮液とし
た。これをペプチド画分とした。
(3) Purification of peptide fractions Each fraction obtained in (2) above is a solid-phase extraction column (fractions A1, A2 and B are Bonds.
Elute C18 EWP, fractions C, D, E, F, G are Bond Elute C18
(Manufactured by Agilent technologies), adsorbed, washed with desalinated water, and then 50%
It was eluted with an aqueous ethanol solution, concentrated to dryness, and condensed with desalinated water to prepare a concentrated solution. This was used as a peptide fraction.
(4)ローリー法によるタンパク定量
上記(3)のゲル濾過分画によって得られたペプチド画分のタンパク定量は市販のキッ
ト(DCプロテインアッセイ、Bio-Rad社製)を用いたLowry法で行った。ま
ず、上記分画液を50μL採って遠心乾固し、超純水10μLを加えて再溶解して分析サ
ンプルとした。そこにA液を50μL加えて撹拌し、続いてB液を400μL加えて攪拌
した。室温で15分発色反応を行った後、96ウェルプレートに350μL移して750
nmの吸光度を測定した。得られた吸光度と予め作成した検量線に基づき、ペプチド量を
算出した。なお、検量線はBSA(ウシ血清アルブミン)を用いて作成した。
(4) Protein quantification by the Lowry method The protein quantification of the peptide fraction obtained by the gel filtration fraction of the above (3) was performed by the Lowry method using a commercially available kit (DC protein assay, manufactured by Bio-Rad). .. First, 50 μL of the above fractionated solution was taken, centrifugally dried, and 10 μL of ultrapure water was added and redissolved to prepare an analytical sample. 50 μL of solution A was added thereto and stirred, and then 400 μL of solution B was added and stirred. After performing a color reaction at room temperature for 15 minutes, transfer 350 μL to a 96-well plate and transfer to 750.
The absorbance at nm was measured. The amount of peptide was calculated based on the obtained absorbance and the calibration curve prepared in advance. The calibration curve was prepared using BSA (bovine serum albumin).
(5)官能評価
これらの分画・精製サンプルを、大麦と大麦麦芽を使用した市販の麦芽使用比率49%
未満のビール系アルコール飲料に、その飲料に含まれる各画分量の50%上乗せとなるよ
う添加し(図1参照)、5名のパネルにより官能評価を行った。
(5) Sensory evaluation For these fractionated / refined samples, the ratio of commercially available malt using barley and barley malt is 49%.
To less than beer-based alcoholic beverages, 50% of each fraction contained in the beverage was added (see FIG. 1), and sensory evaluation was performed by a panel of 5 people.
官能評価の指標は、「旨み、甘味、厚み、ボディ、およびオフフレーバーとしての渋み
・味の不調和」の総合評価として、1~5点の五段階スコアで評価した。無添加のコント
ロールをスコア2.5とした。官能評価スコアの平均値は図2に、官能評価コメントは表
3に示される通りであった。
The index of sensory evaluation was evaluated on a five-point scale of 1 to 5 as a comprehensive evaluation of "umami, sweetness, thickness, body, and astringency / taste discord as an off-flavour". The additive-free control was given a score of 2.5. The average value of the sensory evaluation score is as shown in FIG. 2, and the sensory evaluation comment is as shown in Table 3.
ペプチド分画物は、プレ画分からDにかけて、試験区2の官能評価スコア(図2)が高
く、分画前の発酵液の官能評価結果と一致した。また、試験区2の画分A1およびA2に
おいて、スコアが高く、柔らかさ、雑味低下との官能評価コメントだった(表3)。試験
区2のプレ画分では、スコアは同等に高いが、柔らかいが味自体は少ないとの官能評価コ
メントだった。画分B~Dは、スコアは同等に高いが、官能評価コメントでは厚み、ボデ
ィ、旨味の寄与がより強いと評価された。すなわち、プレ画分、A1、A2、B、C、D
で、試験区2の評価は高いが、それぞれ味質が異なっており、画分A1、A2は、ビール
らしい柔らかさ、雑味低下等の効果があることがわかった。
The peptide fraction had a high sensory evaluation score (FIG. 2) in
Although the evaluation of
ペプチド分画物は、実施例1に記載の、Superdex 75 10/300カラム
にて分析を行い、分子量を推定したところ、画分A1のペプチドが分子量約10~20k
Daに分布し、SDS-PAGE電気泳動上でも、画分A1~A2において、同様の分子
量約10~20kDaのペプチドが分布していることが確認された(データ示さず)。ま
た、香味上優れていた試験区2では、そのペプチド量が多くなっていることが確認された
(図1)。
The peptide fraction was analyzed on the Superdex 75 10/300 column described in Example 1, and the molecular weight was estimated. As a result, the peptide of the fraction A1 had a molecular weight of about 10 to 20 k.
It was distributed on Da, and it was confirmed on SDS-PAGE electrophoresis that peptides with a similar molecular weight of about 10 to 20 kDa were distributed in the fractions A1 to A2 (data not shown). Further, it was confirmed that the amount of the peptide was increased in the
以上の結果より、分画・精製した分子量約10~20kDaのペプチド画分A1および
A2は、雑味が抑制され調和のとれたビールらしい味わいをビール系飲料に付与できるこ
とが明らかとなった。
From the above results, it was clarified that the fractionated and purified peptide fractions A1 and A2 having a molecular weight of about 10 to 20 kDa can impart a harmonious beer-like taste to beer-based beverages with suppressed unpleasant taste.
実施例1:低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造および該飲料へのペプチド添
加と官能評価
A:低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造
ビールテイスト発酵アルコール飲料においては、主原料として、大麦麦芽を使用し、副
原料として、とうもろこしおよび液糖のいずれかまたは両方を使用した。糖化に際しては
酵素製剤を用い、糖化の温度、時間を調整し、濾過することで、異なる組成の麦汁を得た
。すなわち、糖化の温度帯は60℃、62℃、64℃、65℃など、60℃~65℃の中
で選択した。糖化の時間は、それぞれの温度工程において、5分~120分の間で調整し
た。また、原料の熱処理温度は70℃~120℃の間で選択した。具体的には以下のよう
にして麦汁を得た。
Example 1: Production of a low-carbohydrate beer-taste fermented alcoholic beverage and addition of peptides to the beverage.
Addition and sensory evaluation
A: Production of low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverages In beer- taste fermented alcoholic beverages, barley malt was used as the main raw material, and either or both of corn and liquid sugar were used as the auxiliary raw materials. For saccharification, an enzyme preparation was used, the temperature and time of saccharification were adjusted, and filtration was performed to obtain worts having different compositions. That is, the temperature range for saccharification was selected from 60 ° C to 65 ° C, such as 60 ° C, 62 ° C, 64 ° C, and 65 ° C. The saccharification time was adjusted between 5 and 120 minutes in each temperature step. The heat treatment temperature of the raw material was selected from 70 ° C. to 120 ° C. Specifically, wort was obtained as follows.
(ア)サンプル番号1および2の糖化条件
64℃の湯100質量部に対して、大麦麦芽33.6質量部、酵素製剤を投入して10
0分保持後、78℃に昇温して5分保持した後、濾過して麦汁を得た。
(A) Saccharification conditions of
After holding for 0 minutes, the temperature was raised to 78 ° C. and holding for 5 minutes, and then filtration was performed to obtain wort.
(イ)サンプル番号3の糖化条件
60℃の湯100質量部に対して、大麦麦芽33.3質量部、グルコアミラーゼを主体
とする酵素製剤を投入して20分保持後、65℃に昇温して100分保持したものを醪A
とした。同時に、50℃の湯100に対してとうもろこし11.3質量部および資化性糖
を主体とする液糖8.3質量部を投入して、50℃で20分、65℃で15分の順に保持
し、その後煮沸したものを醪Bとした。糖化の終了した醪Aと煮沸の終了した醪Bを直ち
に混合させたのち、78℃に昇温して5分保持した後、濾過して麦汁を得た。
(B) Saccharification conditions of sample No. 3 Add 33.3 parts by mass of barley malt and an enzyme preparation mainly containing glucoamylase to 100 parts by mass of hot water at 60 ° C., hold for 20 minutes, and then raise the temperature to 65 ° C. And hold it for 100 minutes.
And said. At the same time, 11.3 parts by mass of corn and 8.3 parts by mass of liquid sugar mainly composed of assimilating sugar were added to 100 hot water at 50 ° C, and the temperature was 50 ° C for 20 minutes and 65 ° C for 15 minutes in that order. The product that was retained and then boiled was designated as mash B. The mashed mash A and the finished mash B were immediately mixed, then heated to 78 ° C. and held for 5 minutes, and then filtered to obtain wort.
(ウ)サンプル番号4の糖化条件
65℃の湯100質量部に対して、大麦麦芽16.7質量部、グルコアミラーゼを主体
とする酵素製剤を投入して120分保持後、78℃に昇温して5分保持した後、濾過して
麦汁を得た。
(C) Saccharification conditions of sample No. 4 Add 16.7 parts by mass of barley malt and an enzyme preparation mainly containing glucoamylase to 100 parts by mass of hot water at 65 ° C., hold for 120 minutes, and then raise the temperature to 78 ° C. After holding for 5 minutes, it was filtered to obtain wort.
上記の麦汁調製工程(ア)~(ウ)に続いて、得られたそれぞれの麦汁にホップおよび
一部の麦汁(サンプル番号4)では資化性糖を主体とした液糖を投入して100℃で90
分間煮沸した後、麦汁静置を行ない、トリューブを分離した後、冷却して発酵前液を得た
。一部の発酵前液(サンプル番号1および2)ではグルコアミラーゼを主体とする酵素製
剤を添加した。その後、発酵前液に下面発酵酵母を添加し、常法に従って主発酵および後
発酵を行なった。続いて、後発酵後の発酵液を、より低温で保持することにより貯蔵を行
ない、濾過して、清澄なビールテイスト発酵アルコール飲料(試醸品)(サンプル番号1
~4)を得た。
Following the above wort preparation steps (a) to (c), hops and liquid sugar mainly composed of assimilating sugar are added to each of the obtained worts (sample number 4). And 90 at 100 ° C
After boiling for a minute, the wort was allowed to stand, the trube was separated, and then cooled to obtain a pre-fermentation solution. For some pre-fermentation liquids (Sample Nos. 1 and 2), an enzyme preparation mainly composed of glucoamylase was added. Then, bottom fermentation yeast was added to the pre-fermentation liquid, and main fermentation and post-fermentation were carried out according to a conventional method. Subsequently, the fermented liquid after post-fermentation is stored at a lower temperature, filtered, and a clear beer-taste fermented alcoholic beverage (trial product) (sample number 1).
~ 4) was obtained.
B:ビールテイスト発酵アルコール飲料のα-グルカン量の定量
(ア)HPLC分析用のサンプル調製
サンプル番号1~4は、固相抽出カラムを用いて分離し、分画用サンプルを得た。具体
的には、製品液を固相抽出カラム(Bond Elute C18、Agilent technologi
es社製)にて吸着処理を行って素通り画分を回収し、回収液をさらにBond Elut
e C18 EWP(Agilent technologies社製)に吸着させ、素通り画分を回収した。
回収した素通り画分は、さらにイオン交換樹脂Sep Pak QMAおよびSep P
akCM(いずれもWaters社)で順に処理した。得られた液を遠心濃縮させ、乾燥物を復
水して分画用サンプルとした。
B: Quantification of the amount of α-glucan in a beer-taste fermented alcoholic beverage (a) Sample preparation for HPLC
(Manufactured by es) is adsorbed to collect the passing fraction, and the collected liquid is further added to Bond Elut.
e C18 EWP (manufactured by Agilent technologies) was adsorbed, and the passing fraction was recovered.
The recovered pass-through fractions are further ion exchange resins Sep Pak QMA and Sep P.
It was processed in order by akCM (both by Waters). The obtained liquid was centrifugally concentrated, and the dried product was condensed to prepare a sample for fractionation.
(イ)HPLCによる糖分析
MCI-gel CK02ASカラム(20×250mm)およびコロナCAD検出器
により、サンプルに含まれるα-グルカンの鎖長分布状況を評価した。具体的には、以下
の条件のようにして重合度(鎖長)を分析した。G5~G10マルトオリゴ糖を標準品と
した検量線で組成を分析した。G5はマルトペンタオース(Maltopentaose)、G6はマ
ルトヘキサオース(Maltohexaose)、G7はマルトヘプタオース(Maltoheptaose)、G
8はマルトオクタオース(Maltooctaose)、G9はマルトノナオース(Maltononaose)、
G10はマルトデカオース(Maltodecaose)である。マルトペンタオース(Maltopentaos
e)、マルトヘキサオース(Maltohexaose)およびマルトヘプタオース(Maltoheptaose)
については東京化成社より標準品を購入し、マルトオクタオース(Maltooctaose)、マル
トノナオース(Maltononaose)およびマルトデカオース(Maltodecaose)についてはElic
ityl SA社より標準品を購入し、質量分析器条件を設定した。
(A) Sugar analysis by HPLC The chain length distribution of α-glucan contained in the sample was evaluated by an MCI-gel CK02AS column (20 × 250 mm) and a corona CAD detector. Specifically, the degree of polymerization (chain length) was analyzed under the following conditions. The composition was analyzed by a calibration curve using G5 to G10 maltooligosaccharide as a standard product. G5 is Maltopentaose, G6 is Maltohexaose, G7 is Maltoheptaose, and G.
8 is Maltooctaose, G9 is Maltononaose,
G10 is Maltodecaose. Maltopentaos
e), Maltohexaose and Maltoheptaose
For, purchase standard products from Tokyo Kaseisha, and for Maltooctaose, Maltononaose, and Maltodecaose, Elic.
A standard product was purchased from ityl SA, and the conditions for the mass spectrometer were set.
<HPLC分析条件>
カラム:MCI-gel CK02ASカラム(20×250mm、三菱化学社製)
移動相:MQ水
流速:1.0mL/分
カラム温度:85℃
検出器:コロナCAD検出器
<HPLC analysis conditions>
Column: MCI-gel CK02AS column (20 x 250 mm, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation)
Mobile phase: MQ water flow rate: 1.0 mL / min Column temperature: 85 ° C
Detector: Corona CAD detector
上記(イ)で設定した分析条件のもとでサンプル番号1~4の分析を行った結果は表4
に示される通りである。
Table 4 shows the results of analysis of
As shown in.
C:栄養表示基準に基づく糖質濃度の分析
栄養表示基準に基づく糖質濃度の測定は公知の五訂日本食品標準成分表分析マニュアル
に記載の方法に従って行った。すなわち、当該試料の質量から、水分(減圧加熱・乾燥助
剤添加法)、タンパク質(自動分析装置による方法)、脂質(ソックスレー抽出法(3)
)、灰分(マッフル炉による燃焼法)および食物繊維量(プロスキー酵素重量法)を除い
て算出する方法にて測定した。サンプル番号1~4について測定した結果は表4に示され
る通りであった。
C: Analysis of carbohydrate concentration based on nutrition labeling standards The measurement of carbohydrate concentration based on nutrition labeling standards was performed according to the method described in the known 5th edition of the Standard Tables of Food Composition in Japan Analysis Manual. That is, from the mass of the sample, water (method using a vacuum heating / drying aid), protein (method using an automatic analyzer), and lipid (Soxhlet extraction method (3)).
), Ash content (combustion method by muffle furnace) and dietary fiber amount (Proski enzyme weight method) were excluded. The measurement results for
表4において、重合度5~10のα-グルカン濃度と、栄養表示基準に基づく糖質濃度
との相関関係を図3に示した。近似直線における相関係数は、R2=0.6282である
。従って、例えば、重合度5~10のα-グルカン濃度が4.0mg/mL以下の場合、
栄養表示基準に基づく糖質濃度は1.4g/100mL以下に相当すると考えられる。
In Table 4, the correlation between the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 and the sugar concentration based on the nutrition labeling standard is shown in FIG. The correlation coefficient in the approximate straight line is R2 = 0.6282. Therefore, for example, when the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 is 4.0 mg / mL or less,
The carbohydrate concentration based on the nutrition labeling standard is considered to correspond to 1.4 g / 100 mL or less.
D:タンパク定量
(ア)ゲル濾過分画用のサンプル調製
サンプル番号1~4(試醸品)を計量した後、凍結乾燥した。乾燥物を50mMリン酸
ナトリウム緩衝液(pH7.0、150mM NaCl含む)で溶解して2.5倍濃縮液
を調製し、分画用サンプルとした。
D: Protein quantification (a) Sample preparation for gel filtration
(イ)HPLCゲル濾過法
HPLCゲル濾過法の条件は以下の通りであった。
<HPLCゲル濾過法分析条件>
カラム:Superdex 75 10/300(GEヘルスケア社製)
サンプル注入量:100μL
溶離液組成:50mMリン酸ナトリウム(pH7.0)、20%(v/v)アセトニトリ
ル、150mM NaCl
流速:0.5mL/分(流速一定)
検出波長:215nm
分画プログラム:
(A) HPLC gel filtration method The conditions for the HPLC gel filtration method were as follows.
<Analysis conditions for HPLC gel filtration method>
Column: Superdex 75 10/300 (manufactured by GE Healthcare)
Sample injection volume: 100 μL
Eluent composition: 50 mM sodium phosphate (pH 7.0), 20% (v / v) acetonitrile, 150 mM NaCl
Flow rate: 0.5 mL / min (constant flow rate)
Detection wavelength: 215 nm
Fractionation program:
(ウ)分画範囲の設定
上記(イ)のHPLCゲル濾過法条件記載のカラム、溶離液、流速、検出波長において
、分子量既知のペプチドを0.1~5mg/mLで適宜超純水に溶解したものを50μL
注入してHPLC分析を行い、保持時間を確認した(表6)。その保持時間、分子量から
検量線(図4)を作成し、分子量範囲と分画範囲を決定した。
(C) Setting the fraction range In the column, eluent, flow velocity, and detection wavelength described in the HPLC gel filtration method conditions of (a) above, peptides with known molecular weights are appropriately dissolved in ultrapure water at 0.1 to 5 mg / mL. 50 μL
Injection was performed and HPLC analysis was performed to confirm the retention time (Table 6). A calibration curve (FIG. 4) was prepared from the holding time and molecular weight, and the molecular weight range and the fractionation range were determined.
(エ)分画液のLowry法によるタンパク定量
タンパク定量は、参考例1に記載のLowry法により行った。なお、得られた吸光度
とBSA濃度から検量線を作成し、分画液のペプチド量(BSA換算)を計算し、分画液
量、濃縮倍率から、当該画分の製品相当ペプチド濃度(mg/mL)を算出した。
(D) Protein quantification of fractionated liquid by Lowry method Protein quantification was performed by the Lowry method described in Reference Example 1. A calibration curve was created from the obtained absorbance and BSA concentration, the peptide amount of the fraction (BSA equivalent) was calculated, and the product-equivalent peptide concentration (mg / mg /) of the fraction was calculated from the fraction amount and concentration ratio. mL) was calculated.
(オ)10~20kDaペプチドの定量
10~20kDaペプチド濃度は、上記HPLCゲル濾過法における、検量線から決定
した分子量10~20kDaの範囲である画分3に含まれるタンパク濃度を、製品相当ペ
プチド濃度(mg/mL)に換算して求めた。また、10~20kDaペプチド量が全タ
ンパク量の中に占める比率、すなわち10~20kDaのペプチド比率は、以下の算出式
にて求めた。
E:官能評価
サンプル番号1~4(試醸品)に関して、7名の訓練されたパネラーによって官能評価
を実施した。評価項目の指標は、「味のスムーズさ」および「味の持続性」の2項目とし
、それぞれ、1(弱い)~9(強い)点の9段階スコアで評価した。各サンプルの官能評
価結果は表7に示される通りであった。また、この結果を図5および図6に示した。
E: Sensory
表7並びに図5および図6に示される通り、10~20kDaのペプチド比率を2.5
%より高くした試験醸造品において、「味のスムーズさ」と「味の持続性」が向上するこ
とが確認された。
As shown in Table 7 and FIGS. 5 and 6, the peptide ratio of 10 to 20 kDa was 2.5.
It was confirmed that "taste smoothness" and "taste persistence" were improved in the test brewed products having a value higher than%.
なお、上記結果は、実施例1に記載した方法で分析した時の結果、すなわち、コロナC
AD検出器(コロナ荷電化粒子検出器)を用いて得られた分析値である。本検出器は、物
質の化学構造に依存せず、同一の分析条件下で、一貫した物質重量依存の応答性が得られ
る特徴がある(Thermofisher scientific社による)。
The above result is the result when analyzed by the method described in Example 1, that is, Corona C.
It is an analysis value obtained by using an AD detector (corona charged particle detector). This detector is independent of the chemical structure of the substance and is characterized by consistent substance weight-dependent responsiveness under the same analytical conditions (according to Thermofisher scientific).
実施例2:ペプチドのビールテイスト発酵アルコール飲料への添加と官能評価
A:ペプチド画分の調製
(ア)ゲル濾過分画
市販品(オールモルトビール)をガス抜きしたうえで凍結乾燥した。凍結乾燥物を10
0mMNaCl溶液に溶解して5倍濃縮液を調製し、分画用サンプルとしたサンプルは、
以下の条件にてゲル濾過分画を行った。
Example 2: Addition of peptide to beer-taste fermented alcoholic beverage and sensory evaluation
A: Preparation of peptide fraction (a) Gel filtration fraction A commercially available product (all malt beer) was degassed and then freeze-dried. 10 freeze-dried products
The sample prepared by dissolving in 0 mM NaCl solution to prepare a 5-fold concentrated solution and used as a fractionation sample is
Gel filtration fractionation was performed under the following conditions.
<ゲル濾過分画条件>
カラム:Hiload Superdex 30pg 26/600(GEヘルスケア社
)
サンプル注入量:5mL
溶離液組成:100mM NaCl
流速:2.5mL/分(流速一定)
検出波長:215nm
分取:0.29CV(カラム・ボリューム)から19.1mL(フラクション0)、その
後0.35CVから5mLずつ画分(フラクション1~51)
<Gel filtration fractionation conditions>
Column: Hiload Superdex 30pg 26/600 (GE Healthcare)
Sample injection volume: 5 mL
Eluent composition: 100 mM NaCl
Flow rate: 2.5 mL / min (constant flow rate)
Detection wavelength: 215 nm
Fraction: 19.1 mL (fraction 0) from 0.29 CV (column volume), then 5 mL increments from 0.35 CV (fractions 1-51)
分画物の官能評価により、香味の特徴の違いによって、前記表2のようにフラクション
をプレ画分、A1、A2、B、C、D、E、F、Gの9つのグループに分けた。
By the sensory evaluation of the fractions, the fractions were divided into 9 groups of pre-fractions, A1, A2, B, C, D, E, F and G as shown in Table 2 above according to the difference in flavor characteristics.
なお、ゲル濾過分画に付した市販品のペプチド比率および濃度並びにα-グルカン濃度
(実施例1に従って測定)は表8に示される通りであった。
(イ)ペプチド画分の精製
上記(ア)で得られた画分のうち、A1画分(フラクション番号:F1~12)につい
て固相抽出カラム(Bond Elute C18 EWP)にて吸着処理を行い、脱塩
水で洗浄した後、50%エタノール水溶液にて抽出して、濃縮乾固させて脱塩水で復水し
、濃縮液とした。これをペプチド画分とした。
(B) Purification of peptide fraction Of the fractions obtained in (a) above, the A1 fraction (fraction numbers: F1 to 12) was adsorbed on a solid-phase extraction column (Bond Elute C18 EWP). After washing with demineralized water, the mixture was extracted with a 50% aqueous ethanol solution, concentrated to dryness, and reconstituted with demineralized water to prepare a concentrated solution. This was used as a peptide fraction.
(ウ)Lowry法によるタンパク定量
上記(イ)のゲル濾過分画によって得られたペプチド画分のタンパク定量は市販キット
(DCプロテインアッセイ、Bio-Rad社)を用いたLowry法で行った。まず、
上記ペプチド画分溶液を対製品で10倍希釈および40倍希釈となるように濃度調整し、
サンプル5μLに対し、A液25μLを加えて撹拌し、続けてB液200μLを加えて撹
拌した。室温で15分間発色反応を行った後、750nmの吸光度を測定した。得られた
吸光度と予め作成した検量線に基づき、ペプチド量を算出した。なお、検量線はBSA(
ウシ血清アルブミン)を用いて作成した。
(C) Protein quantification by Lowry method The protein quantification of the peptide fraction obtained by the gel filtration fraction of (a) above was performed by the Lowry method using a commercially available kit (DC protein assay, Bio-Rad). first,
The concentration of the above peptide fraction solution was adjusted to be 10-fold and 40-fold diluted with the product.
To 5 μL of the sample, 25 μL of solution A was added and stirred, and then 200 μL of solution B was added and stirred. After performing a color reaction at room temperature for 15 minutes, the absorbance at 750 nm was measured. The amount of peptide was calculated based on the obtained absorbance and the calibration curve prepared in advance. The calibration curve is BSA (
It was prepared using bovine serum albumin).
B:試飲サンプルの調製
サンプル番号2(試醸品)に上記Aで得られたペプチド画分を添加し、サンプル番号5
および6(添加品)を調製した。具体的には、10~20kDaのペプチド量が0.24
mg/mLおよび0.29mg/mL、ペプチド比率が5.2%および5.7%となるよ
うにペプチド画分を添加した。試飲サンプルと、ペプチド比率および濃度並びにα-グル
カン濃度の対応関係は表9に示される通りであった。
B: Preparation of tasting sample Add the peptide fraction obtained in A above to sample number 2 (tasting product), and
And 6 (additives) were prepared. Specifically, the amount of peptide of 10 to 20 kDa is 0.24.
Peptide fractions were added to mg / mL and 0.29 mg / mL, with peptide ratios of 5.2% and 5.7%. The correspondence between the tasting sample and the peptide ratio and concentration as well as the α-glucan concentration was as shown in Table 9.
C:官能評価
無添加のサンプル番号2(試醸品)と、前記Bで得られたサンプル番号5および6(添
加品)について、7名の訓練されたパネラーによって官能評価を実施した。評価項目の指
標は、「味のスムーズさ」、「味の持続性」の2項目とし、評価は実施例1.Eに記載の
方法に準じて実施した。各サンプルの官能評価結果は表9に示される通りであった。また
、各サンプルの官能評価結果は、先述の実施例1.Eの結果と合わせて、図5および図6
に図示した。
C: Sensory evaluation No additive-free sample No. 2 (trial product) and
Illustrated in.
表9並びに図5および図6に示される通り、10~20kDaのペプチド比率を高める
と、「味のスムーズさ」と「味の持続性」が向上することが確認された。
As shown in Table 9 and FIGS. 5 and 6, it was confirmed that increasing the peptide ratio of 10 to 20 kDa improved "taste smoothness" and "taste persistence".
実施例3:タンパク画分の分子種同定
本実施例では2D-PAGEおよび四重極-飛行時間型質量分析装置により、ビールら
しく柔らかいスムーズなテクスチャーがあり、調和のとれた味わいに寄与するタンパク質
の同定を試みた。
Example 3: Identification of molecular species of protein fraction In this example, a 2D-PAGE and a quadrupole-time-of-flight mass spectrometer have a soft and smooth texture like beer, and a protein that contributes to a harmonious taste. I tried to identify it.
参考例1で得られたゲル濾過分画と固相抽出精製によるペプチド画分A1、A2の等量
混合液200μLをTCAアセトン沈殿によってタンパク質を精製し、2D-PAGEに
よる電気泳動後、銀染色を行った。香味に違いの見られた試験区1と試験区2のサンプル
の間では、分子量40kDa付近の太いバンドの量には違いがあまりなく、10~20k
Daに分布するバンドにおいて量的な差があることがわかった(データ示さず)。
200 μL of an equal amount mixture of the gel filtration fraction obtained in Reference Example 1 and the peptide fractions A1 and A2 obtained by solid-phase extraction and purification was purified by TCA acetone precipitation, electrophoresed by 2D-PAGE, and then silver-stained. went. There was not much difference in the amount of the thick band around the molecular weight of 40 kDa between the samples of the
It was found that there was a quantitative difference in the bands distributed in Da (data not shown).
次に、試験区2の2D-PAGEゲルから、図7で示す矢印のバンドを切り出し、トリ
プシン(ProteaseMAX(商標) Surfactant, Trypsin Enhancer、プロメガ社製)を用いてタ
ンパク質を消化した。得られたトリプシン消化ペプチド溶液を四重極-飛行時間型質量分
析装置(SCIEX社製)を用いてMS/MSスペクトルを取得し、SWISS-PROTに登
録されているデータベースを用いてタンパク質の同定を行った。
Next, the band of the arrow shown in FIG. 7 was cut out from the 2D-PAGE gel of
四重極-飛行時間型質量分析装置によるタンパク質同定の結果は表10に示される通り
であった。
ゲル濾過画分(画分A1~A2)中のタンパク質としては、α-アミラーゼ/トリプシ
ンインヒビターCMa、α-アミラーゼ/トリプシンインヒビターCMb、α-アミラーゼ/ト
リプシンインヒビターCMd、トリプシンインヒビターCMe、α-アミラーゼ・インヒビター
(BDAI-1)、非特異的脂質転移タンパク1(non-specific lipid-transfer protein 1)
およびアベニン・ライクa1が同定された。なお、同定されたタンパク質はオオムギ(Ho
rdeum
vulgare)由来、および一部、小麦(Triticum
aestivum)由来のタンパク質として
同定された。α-アミラーゼ/トリプシンインヒビターCMa、α-アミラーゼ/トリプシ
ンインヒビターCMb、α-アミラーゼ/トリプシンインヒビターCMd、トリプシンインヒビ
ターCMeは、プロテアーゼ阻害タンパク質として知られており、α-アミラーゼ・インヒ
ビター(BDAI-1)はαアミラーゼ阻害蛋白質として知られる。また、non-specific lipid
-transfer protein 1は、脂質転移タンパク質として知られている。
The proteins in the gel filtration fraction (fractions A1 to A2) include α-amylase / trypsin inhibitor CMa, α-amylase / trypsin inhibitor CMb, α-amylase / trypsin inhibitor CMd, trypsin inhibitor CMe, α-amylase inhibitor. (BDAI-1), non-specific lipid-
And Avenin-like a1 were identified. The identified protein is barley ( Ho ).
It was identified as a protein from rdeum vulgare ) and, in part, from wheat ( Triticum aestivum ). α-amylase / trypsin inhibitor CMa, α-amylase / trypsin inhibitor CMb, α-amylase / trypsin inhibitor CMd, trypsin inhibitor CMe are known as protease inhibitor proteins, and α-amylase inhibitor (BDAI-1) is α. Known as an amylase inhibitor protein. Also, non-specific lipid
-
実施例4:限外濾過および硫安沈殿により調製されたペプチドのビールテイスト発酵アル
コール飲料への添加と官能評価
本実施例では大規模生産に適したペプチドの調製方法と官能評価に及ぼす影響について
検討した。
Example 4: Beer-taste fermented al of peptides prepared by ultrafiltration and ammonium sulfate precipitation
Addition to Cole Beverage and Sensory Evaluation In this example, a method for preparing a peptide suitable for large-scale production and its effect on sensory evaluation were investigated.
A:ペプチド画分の調製
(A-1)限外濾過による分画
市販品(オールモルトビール)をガス抜きしたうえで、限外濾過膜(分画分子量;60
00、AIP-1013D、旭化成社製)によりペプチドの濃縮および分画を行った。具
体的には、オールモルトビールを約4倍濃縮して濃縮液を回収し、凍結乾燥した。次いで
、乾燥物を市販品の6倍濃度となるように超純水で復水した後、分画分子量6000~8
000の透析膜Spectra/Por1(Spectrum Laboratorie
s社製、以下同様)により透析した。
A: Preparation of peptide fraction (A-1) Fractionation by ultrafiltration After degassing a commercially available product (all malt beer), an ultrafiltration membrane (molecular weight cut off; 60)
Peptide was concentrated and fractionated by 00, AIP-1013D, manufactured by Asahi Kasei Corporation). Specifically, all-malt beer was concentrated about 4 times to recover the concentrated solution, and freeze-dried. Next, the dried product is condensed with ultrapure water so that the concentration is 6 times that of the commercially available product, and then the molecular weight cut-off is 6000 to 8.
000 Dialysis Membrane Spectra / Por1 (Spectrum Laboratory Laboratorie)
Dialysis was performed by s company, the same applies hereinafter).
(A-2)硫安沈殿によるペプチドの分離
上記(A-1)で得られた溶液について40%飽和硫安沈殿を行うことにより、0~4
0%飽和硫安沈殿物を得た。沈殿物を超純水に溶解し、透析膜Spectra/Por1
により透析し塩を十分に除去した。次いで、凍結乾燥を行い超純水に溶解してペプチドの
濃縮液を得た。濃縮液について、10~20kDaのペプチドが主成分となっていること
をSDS-PAGE電気泳動の染色画像により確認した(データ示さず)。
(A-2) Separation of peptide by
A 0% saturated ammonium sulfate precipitate was obtained. The precipitate is dissolved in ultrapure water, and the dialysis membrane Spectra / Por1
The salt was sufficiently removed by dialysis. Then, it was freeze-dried and dissolved in ultrapure water to obtain a concentrated peptide. It was confirmed by the stained image of SDS-PAGE electrophoresis that the concentrated solution was mainly composed of a peptide of 10 to 20 kDa (data not shown).
B:試飲サンプルの調製
サンプル番号2(試醸品)に実施例2.Aに記載された方法を用いて市販のオールモル
トビールから精製した10~20kDaペプチド画分を添加し、サンプル番号7(添加品
3)を調製した。また、サンプル番号2(試醸品)に上記Aで得られた10~20kDa
ペプチド画分を添加し、サンプル番号8(添加品4)を調製した。具体的には、添加品3
および4の10~20kDaペプチド比率が5.5%となるように各ペプチド画分を添加
した。試飲サンプルと、ペプチドの量および比率並びにα-グルカンの量の対応関係は表
11に記載した。
B: Preparation of tasting sample Example 2 in sample number 2 (tasting product). A 10-20 kDa peptide fraction purified from a commercially available all-malt beer was added using the method described in A to prepare sample number 7 (additive 3). Further, in sample number 2 (trial brewed product), 10 to 20 kDa obtained in A above.
A peptide fraction was added to prepare sample number 8 (additive 4). Specifically,
And each peptide fraction was added so that the 10-20 kDa peptide ratio of 4 was 5.5%. The correspondence between the tasting sample and the amount and ratio of the peptide and the amount of α-glucan is shown in Table 11.
C:官能評価
サンプル番号2および上記Bで得られたサンプル番号7および8(添加品)について、
4名の訓練されたパネラーによって実施例1.Eの記載に従って官能評価を実施した。各
サンプルの官能評価結果は表11に示される通りであった。
C: With respect to the sensory evaluation sample No. 2 and the
Example 1. By four trained panelists. Sensory evaluation was performed according to the description of E. The sensory evaluation results of each sample were as shown in Table 11.
表11に示される通り、10~20kDaペプチドを添加していない飲料(サンプル番
号2)と比べ、限外濾過と硫安沈殿を組み合わせて得られた10~20kDaペプチドを
添加した飲料(サンプル番号8)では、ゲル濾過分画と固相抽出により得られた10~2
0kDaペプチドを添加した飲料(サンプル番号7)と同様に、「味のスムーズさ」およ
び「味の持続性」が向上することが確認された。
As shown in Table 11, compared to the beverage without the addition of 10 to 20 kDa peptide (Sample No. 2), the beverage with the addition of the 10 to 20 kDa peptide obtained by combining ultrafiltration and sulfur precipitation (Sample No. 8). Then, 10 to 2 obtained by gel filtration fraction and solid-phase extraction.
It was confirmed that "taste smoothness" and "taste persistence" were improved as in the beverage to which 0 kDa peptide was added (sample No. 7).
Claims (11)
発酵アルコール飲料であって、全タンパク量に対する分子量10~20kDa(HPLC
ゲル濾過法)のペプチド量の比率が2.5%より大きい、低糖質ビールテイスト発酵アル
コール飲料。 A low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage made from malt and / or ungerminated wheat as a raw material, having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC) with respect to the total protein content.
A low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage with a peptide content ratio of more than 2.5% (gel filtration method).
料。 The beer-taste fermented alcoholic beverage according to claim 1, wherein the malt usage ratio is 50% or more.
合する工程を含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。 A method for producing a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, which comprises a step of blending one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method).
ルテイスト発酵アルコール飲料に由来する、請求項3に記載のビールテイスト発酵アルコ
ール飲料の製造方法。 The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to claim 3, wherein the peptide is derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage using malt and / or ungerminated wheat as a raw material.
対して2.5%以上の比率となるよう配合される、請求項3または4に記載のビールテイ
スト発酵アルコール飲料の製造方法。 The beer-taste fermented alcoholic beverage according to claim 3 or 4, wherein the peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method) is blended so as to have a ratio of 2.5% or more with respect to the total amount of protein in the beverage. Production method.
~5のいずれか一項に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。 3. The third aspect of the present invention further comprises the step of preparing the peptide from the raw material containing the peptide.
The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to any one of 5 to 5.
テイスト発酵アルコール飲料の製造方法。 The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to claim 6, wherein the peptide is prepared by an ultrafiltration method and a sulfur precipitation method.
る、請求項6または7に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。 The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to claim 6 or 7, wherein the raw material containing the peptide is malt and / or ungerminated wheat or a processed product thereof.
とするビールテイスト発酵アルコール飲料である、請求項6~8のいずれか一項に記載の
ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。 The beer-taste fermented alcoholic beverage according to any one of claims 6 to 8, wherein the raw material containing the peptide is a beer-taste fermented alcoholic beverage containing at least a part of malt and / or ungerminated wheat as a raw material. Manufacturing method.
効成分として含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善剤。 A flavor improving agent for a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage containing one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method) as an active ingredient.
加する工程を含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善方法。 A method for improving the flavor of a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, which comprises a step of adding one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method).
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