JP2017216999A - Low-glucide beer-taste fermented alcoholic beverage, and method for producing the same - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とする低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料とその製造方法に関する。 The present invention relates to a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage using malt and / or ungerminated barley as a raw material and a method for producing the same.
ビールテイスト発酵アルコール飲料にコクや味の厚みを付与する技術としては、カルボキシメチルリジンを含むペプチドをコク付与物質として用いる技術(特許文献1)が知られている。しかし、ビールテイスト発酵アルコール飲料、特に低糖質ビールの香味、特に柔らかくスムーズなテクスチャーの付与や味の持続性や余韻の付与などについては依然として改善の余地があった。また同様に、柔らかくスムーズなテクスチャーの付与や味の持続性などの観点から、低糖質のビールの香味の改良を試みた例は発明者らが知る限り報告されていない。 As a technique for imparting richness and taste thickness to a beer-taste fermented alcoholic beverage, a technique using a peptide containing carboxymethyllysine as a rich imparting substance (Patent Document 1) is known. However, there is still room for improvement with respect to the flavor of beer-taste fermented alcoholic beverages, particularly low-sugar beer, particularly the provision of a soft and smooth texture, the sustainability of the taste, and the reverberation. Similarly, no examples of attempts to improve the flavor of low-sugar beer from the viewpoint of imparting a soft and smooth texture and sustaining taste have been reported.
ビールは、発泡酒や新ジャンルと比べて柔らかでスムーズなテクスチャーを有し、ボディ感が強いなどの好ましい味の特徴がある。本発明者らは、この違いに基づき、低糖質ビールにおいてビールの特徴をさらに強化する技術開発が実現すれば、これまでにない香味特徴のある低糖質ビールの製造を実現できると考えた。 Beer has a soft and smooth texture compared to Happoshu and the new genre, and has favorable taste characteristics such as a strong body feeling. Based on this difference, the present inventors considered that if a technical development that further enhances the characteristics of beer in a low-sugar beer is realized, the production of a low-sugar beer with an unprecedented flavor characteristic can be realized.
本発明は、ビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーがあり、味の持続性が認められる、新しい香味を有する低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料とその製造方法を提供することを目的とする。本発明はまた、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善剤と風味改善方法を提供することも目的とする。 An object of the present invention is to provide a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage having a new flavor that has a soft and smooth texture like beer and has a sustained taste, and a method for producing the same. Another object of the present invention is to provide a flavor improving agent and a flavor improving method for a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage.
本発明者らは、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料において、特定分子量のペプチドがビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーの付与や味の持続性に寄与することを見出した。本発明者らはまた、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料において、特定分子量のペプチドの比率を特定範囲内にすることで、よりビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーや味の持続性が実現できることを見出した。本発明者らはさらに、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善に寄与するペプチドを具体的に特定した。本発明はこれらの知見に基づくものである。 The present inventors have found that, in a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, a peptide having a specific molecular weight contributes to imparting a soft and smooth texture like beer and sustaining taste. The present inventors have also found that, in a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, by making the ratio of peptides having a specific molecular weight within a specific range, it is possible to realize a softer and smoother texture and taste sustainability like beer. The present inventors further specifically identified peptides that contribute to the flavor improvement of low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverages. The present invention is based on these findings.
本発明によれば以下の発明が提供される。
[1]麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とする低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料であって、全タンパク量に対する分子量10〜20kDa(HPLCゲル濾過法)のペプチド量の比率(以下、単に「ペプチド比率」ということがある)が2.5%より大きい、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料。
[2]麦芽使用比率が50%以上である、上記[1]に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料。
[3]分子量10〜20kDa(HPLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチドを配合する工程を含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[4]前記ペプチドが、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する、上記[3]に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[5]分子量10〜20kDaのペプチド(HPLCゲル濾過法)が飲料中の全タンパク量に対して2.5%以上の比率となるよう配合される、上記[3]または[4]に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[6]前記ペプチドを含む原料から該ペプチドを調製する工程をさらに含んでなる、上記[3]〜[5]のいずれかに記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[7]限外濾過法および硫安沈殿法により前記ペプチドを調製する、上記[6]に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[8]前記ペプチドを含む原料が、麦芽および/または未発芽の麦類あるいはその加工品である、上記[6]または[7]に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[9]前記ペプチドを含む原料が、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料である、上記[6]〜[8]のいずれかに記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
[10]分子量10〜20kDa(HPLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチドを有効成分として含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善剤。
[11]前記ペプチドが、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来するものである、上記[10]に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善剤。
[12]分子量10〜20kDa(HPLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチドを添加する工程を含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善方法。
[13]前記ペプチドが、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来するものである、上記[12]に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善方法。
According to the present invention, the following inventions are provided.
[1] A low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage that uses malt and / or ungerminated wheat as at least a part of the raw material, and the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method) to the total protein amount A low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage (hereinafter, simply referred to as “peptide ratio”) greater than 2.5%.
[2] The beer-taste fermented alcoholic beverage according to the above [1], wherein the malt use ratio is 50% or more.
[3] A method for producing a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage comprising a step of blending one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method).
[4] The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to the above [3], wherein the peptide is derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage using malt and / or ungerminated wheat as at least a part of the raw material.
[5] The above-mentioned [3] or [4], wherein the peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method) is blended so as to have a ratio of 2.5% or more with respect to the total protein amount in the beverage. A method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage.
[6] The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to any one of [3] to [5], further comprising a step of preparing the peptide from a raw material containing the peptide.
[7] The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to [6] above, wherein the peptide is prepared by an ultrafiltration method and an ammonium sulfate precipitation method.
[8] The method for producing a beer-taste fermented alcoholic beverage according to [6] or [7] above, wherein the raw material containing the peptide is malt and / or ungerminated wheat or a processed product thereof.
[9] The beer according to any one of the above [6] to [8], wherein the raw material containing the peptide is a beer-taste fermented alcoholic beverage using malt and / or ungerminated wheat as at least a part of the raw material. A method for producing a taste fermented alcoholic beverage.
[10] A flavor improving agent for a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, comprising one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method) as an active ingredient.
[11] The flavor of the beer-taste fermented alcoholic beverage according to the above [10], wherein the peptide is derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage that uses malt and / or ungerminated wheat as a raw material. Improver.
[12] A method for improving the flavor of a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, comprising a step of adding one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method).
[13] The flavor of a beer-taste fermented alcoholic beverage according to the above [12], wherein the peptide is derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage made from malt and / or ungerminated wheat as a raw material. How to improve.
本発明によれば、分子量10〜20kDaのペプチドを配合するか、該ペプチドの比率を所定値の範囲内にすることによって、ビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーがあり、味の持続性が認められる低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料を提供することができる。特に、麦芽使用比率50%以上のビールでは、ビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーと味の持続性が増強され、新しい香味特徴の低糖質ビールを提供できることになり、消費者の多様な嗜好ニーズに応えることが出来る点で有利である。 According to the present invention, a low carbohydrate that has a soft and smooth texture like beer and has a sustained taste by blending a peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa or making the ratio of the peptide within a predetermined range. A beer-taste fermented alcoholic beverage can be provided. In particular, beer with a malt use ratio of 50% or more will enhance the soft and smooth texture of beer and the sustainability of taste, and will be able to provide low-sugar beer with new flavor characteristics to meet the diverse taste needs of consumers. This is advantageous in that
本発明において「ビールテイスト」とは通常にビールを製造した場合、すなわち、酵母等による発酵に基づいてビールを製造した場合に得られるビール特有の味わい、香りを意味する。 In the present invention, “beer taste” means a taste and aroma peculiar to beer obtained when beer is usually produced, that is, when beer is produced based on fermentation by yeast or the like.
本発明において「ビールテイスト発酵アルコール飲料」は、炭素源、窒素源および水などを原料として酵母により発酵させた飲料を意味し、ビール、発泡酒および原料として麦芽を使用するビールや発泡酒にアルコールを添加してなる飲料(例えば、酒税法上、「リキュール(発泡性)(1)」に分類されるリキュール系新ジャンル飲料)が挙げられる。 In the present invention, “beer-taste fermented alcoholic beverage” means a beverage fermented by yeast using a carbon source, a nitrogen source, water, and the like as raw materials. Alcohol is used for beer and happoshu and beer and happoshu using malt as a raw material. (For example, a liqueur-based new genre drink classified as “liqueur (foaming) (1)” in the liquor tax law).
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料は麦由来の原料として少なくとも麦芽を使用するものとすることができ、その場合、麦芽使用比率は、例えば、50%以上とすることができ、好ましくは60%以上である。ここで、「麦芽使用比率」とは、醸造用水を除く全原料の質量に対する麦芽質量の割合をいう。 The beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention can use at least malt as a raw material derived from wheat. In that case, the malt use ratio can be, for example, 50% or more, preferably 60% or more. It is. Here, “malt use ratio” refers to the ratio of malt mass to the mass of all raw materials excluding brewing water.
本発明において「低糖質」のビールテイスト発酵アルコール飲料とは、糖質の量(糖質濃度)が通常の製法で作られた同等の比較対象の飲料に対して40%以上削減されたもの(すなわち、糖質オフ表示がなされた飲料)、あるいは糖質の量が0.5g/100mL未満(すなわち、糖質ゼロ表示がなされた飲料)であるものを意味する。このうち前者(糖質オフ表示がなされた飲料)の糖質濃度は、2.1g/100mL以下とすることができ、好ましくは0.5〜2.1g/100mLの範囲である。ここで、糖質の量の測定は公知の方法に従って行うことができ、当該試料の質量から、水分、タンパク質、脂質、灰分および食物繊維量を除いて算出する方法(栄養表示基準(平成21年12月16日 消費者庁告示第9号 一部改正)参照)に従って測定することができる。 In the present invention, “low sugar” beer-taste fermented alcoholic beverages are those in which the amount of sugar (sugar concentration) is reduced by 40% or more compared to an equivalent comparative beverage made by a normal production method ( That is, it means a beverage with a sugar off display) or a sugar amount of less than 0.5 g / 100 mL (that is, a beverage with zero sugar display). Among these, the sugar concentration of the former (beverage with a sugar-off indication) can be set to 2.1 g / 100 mL or less, preferably 0.5 to 2.1 g / 100 mL. Here, the amount of carbohydrate can be measured according to a known method, and is calculated from the mass of the sample excluding the amount of water, protein, lipid, ash and dietary fiber (Nutrition Labeling Standard (2009 Dec. 16, Consumer Affairs Agency Notification No. 9 (Partially revised)))) can be measured.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料では、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率(ペプチド比率)(好ましくは、ビールテイスト発酵アルコール飲料の原料に由来する分子量10〜20kDaのペプチド比率)が特定値以上であることを特徴とする。ここで、ペプチド比率の算出に当たっては、飲料中のタンパク濃度(mg/mL)を全タンパク量とし、飲料中の分子量10〜20kDaのペプチド濃度(mg/mL)を分子量10〜20kDaのペプチド量とすることができる。また、本明細書において「ペプチド比率」の算出の元になるペプチド量は10〜20kDaの分子量を有する1種または2種以上のペプチドの含有量を合計して算出されるものである。また本明細書においてペプチドの「分子量」はHPLCゲル濾過法により測定されるものであり、測定の具体例は後記実施例1に示される通りである。ペプチドおよびタンパクの定量はローリー法(Lowry法)により実施することができる。 In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the ratio of peptide amount with a molecular weight of 10-20 kDa to the total protein amount (peptide ratio) (preferably, the peptide ratio with a molecular weight of 10-20 kDa derived from the raw material of the beer-taste fermented alcoholic beverage ) Is a specific value or more. Here, in calculating the peptide ratio, the protein concentration (mg / mL) in the beverage is defined as the total protein amount, and the peptide concentration (mg / mL) in the beverage with a molecular weight of 10 to 20 kDa is defined as the peptide amount with a molecular weight of 10 to 20 kDa. can do. In the present specification, the peptide amount used as the basis for calculating the “peptide ratio” is calculated by adding the contents of one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa. In this specification, the “molecular weight” of a peptide is measured by HPLC gel filtration, and a specific example of the measurement is as shown in Example 1 described later. Peptides and proteins can be quantified by the Lowry method (Lowry method).
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料は、低糖質であるにも関わらず、新しい香味を有すること、すなわち、味のスムーズさと味の持続性が増強されたことを特徴とする。低糖質のビールテイスト発酵アルコール飲料(特に、低糖質のビールおよび発泡酒)は後味が弱く、飲み応えがないという特徴があり、それゆえにオフフレーバーが目立つという課題があった。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料では味のスムーズさと味の持続性が付与されることにより、低糖質のビールテイスト発酵アルコール飲料の香味上の課題を解決することができる。ここで、「味のスムーズさ」とは、舌で味を感じる時の口当たりの柔らかさの度合いを意味する。また、「味の持続性」とは、溜飲後に持続する味の余韻の度合いを意味する。 The low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention is characterized by having a new flavor despite the low sugar content, that is, the smoothness of taste and the sustainability of taste. Low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverages (especially low-sugar beer and sparkling liquor) have a feature that they have a weak aftertaste and do not respond to drinks, and thus there is a problem that off-flavor is conspicuous. In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, smoothness of taste and sustainability of taste are imparted, so that the problem of flavor of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage can be solved. Here, “smooth taste” means the degree of softness of the mouth when the taste is felt with the tongue. Further, “taste persistence” means the degree of lingering taste that persists after drinking.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料では、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率を2.5%より大きい比率にすることができ、好ましくは3.7%以上である。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料ではまた、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率を2.5%より大きくし、かつ、重合度5〜10のα−グルカン濃度を4.0mg/mL以下にすることができる。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料ではまた、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率を2.5%より大きくし、かつ、重合度5〜10のα−グルカン濃度を1.8〜4.0mg/mLにすることができ、あるいは、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率を2.5%より大きくし、かつ、重合度5〜10のα−グルカン濃度を1.8mg/mL以下にすることができる。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料では好ましくは、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率を3.7%以上にし、かつ、重合度5〜10のα−グルカン濃度を4.0mg/mL以下にすることができる。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料ではまた、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率を3.7%以上にし、かつ、重合度5〜10のα−グルカン濃度を1.8〜4.0mg/mLにすることができ、あるいは、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率を3.7%以上にし、かつ、重合度5〜10のα−グルカン濃度を1.8mg/mL以下にすることができる。全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率は味の調和の観点から上限を設けることができ、例えば、8.0%を上限とすることができる。 In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount can be set to a ratio of more than 2.5%, preferably 3.7% or more. In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is more than 2.5%, and the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 is 4. It can be 0 mg / mL or less. In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is more than 2.5%, and the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 is 1. The ratio of the amount of peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa with respect to the total amount of protein is larger than 2.5%, and the concentration of α-glucan having a degree of polymerization of 5 to 10 is increased. It can be 1.8 mg / mL or less. In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is preferably 3.7% or more, and the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 is 4. It can be 0 mg / mL or less. In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10-20 kDa to the total protein amount is 3.7% or more, and the α-glucan concentration having a polymerization degree of 5-10 is 1.8. The ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10-20 kDa to the total protein amount is 3.7% or more, and the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5-10 is 1. It can be 8 mg / mL or less. The ratio of the amount of peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa with respect to the total amount of protein can provide an upper limit from the viewpoint of harmony of taste, and for example, the upper limit can be 8.0%.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料ではまた、α−グルカンの濃度を所定値にすることができ、例えば、重合度5〜10のα−グルカンの濃度を4.0mg/mL以下に設定することができる。本明細書において、「α−グルカン濃度」は重合度5〜10の1種または2種以上のα−グルカンの含有量を合計して算出されるものである。また本明細書において「α−グルカン」とは複数のグルコース分子がα−1,4−グルコシド結合により結合して構成された直鎖状または分岐状のグルカン(例えば、α−1,4−グルコシド結合およびα−1,6−グルコシド結合で構成された分岐状のグルカン)を意味する。さらに、本明細書においてα−グルカンの「重合度」はグルカンを構成するグルコース残基の個数を意味し、直鎖状グルカンを構成するグルコース残基の個数のみならず、分岐構造を構成するグルコース残基の個数を含む。α−グルカンの重合度と含有量の測定は、例えば、コロナCAD検出器を用いたHPLC分析により実施することができ、測定の具体例は後記実施例1に示される通りである。なお、本明細書および図面において重合度は単に「G」と表記されることがある。 In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, the concentration of α-glucan can be set to a predetermined value. For example, the concentration of α-glucan having a polymerization degree of 5 to 10 is set to 4.0 mg / mL or less. be able to. In the present specification, the “α-glucan concentration” is calculated by summing the contents of one or more α-glucans having a degree of polymerization of 5 to 10. In the present specification, “α-glucan” means a linear or branched glucan (for example, α-1,4-glucoside, for example) formed by binding a plurality of glucose molecules by α-1,4-glucoside bonds. A branched glucan composed of a bond and an α-1,6-glucoside bond). Furthermore, in this specification, “degree of polymerization” of α-glucan means the number of glucose residues constituting glucan, and not only the number of glucose residues constituting linear glucan but also glucose constituting a branched structure. Contains the number of residues. The degree of polymerization and content of α-glucan can be measured by, for example, HPLC analysis using a corona CAD detector, and a specific example of the measurement is as shown in Example 1 described later. In the present specification and drawings, the degree of polymerization may be simply expressed as “G”.
なお、重合度5〜10のα−グルカン濃度と栄養表示基準に基づく糖質濃度には相関関係が見られる。実施例1.Dに示されるとおり、例えば、重合度5〜10のα−グルカン濃度4.0mg/mL以下の場合、栄養表示基準1.4g/100mL以下に相当すると考えられる。 There is a correlation between the concentration of α-glucan having a degree of polymerization of 5 to 10 and the carbohydrate concentration based on the nutrition labeling standard. Example 1. As shown in D, for example, when the α-glucan concentration at a polymerization degree of 5 to 10 is 4.0 mg / mL or less, it is considered to correspond to a nutrition labeling standard of 1.4 g / 100 mL or less.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料は分子量10〜20kDaのペプチド比率と、場合によっては重合度5〜10のα−グルカン濃度が所定値の範囲内に調整される限り、通常の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造手順に従って製造することができる。例えば、麦芽、ホップ、副原料、醸造用水等の醸造原料から調製された麦汁に発酵用ビール酵母を添加して発酵を行い、発酵液を醸成させて、発酵麦芽飲料を製造することができる。得られた低糖質ビールテイストの発酵アルコール飲料は、低温にて貯蔵した後、濾過工程により酵母を除去することができる。なお、ビールテイスト発酵アルコール飲料のうちオールモルトビールは、麦芽、ホップ、水から製造できることはいうまでもない。 The low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention is a normal low-sugar beer as long as the peptide ratio of the molecular weight of 10 to 20 kDa and, in some cases, the α-glucan concentration of the degree of polymerization of 5 to 10 are adjusted within the predetermined range. It can be manufactured according to the manufacturing procedure of a taste fermented alcoholic beverage. For example, fermented malt beverages can be produced by adding fermentation beer yeast to wort prepared from brewing raw materials such as malt, hops, auxiliary raw materials, brewing water, etc. . The obtained low-alcohol beer-taste fermented alcoholic beverage can be stored at a low temperature, and then the yeast can be removed by a filtration step. Needless to say, all-malt beer among beer-taste fermented alcoholic beverages can be produced from malt, hops and water.
上記製造手順において麦汁の作製は常法に従って行うことができる。例えば、醸造原料と醸造用水の混合物を糖化し、濾過して、麦汁を得、その麦汁にホップを添加した後、煮沸し、煮沸した麦汁を冷却することにより麦汁を調製することができる。また、麦汁は、糖化工程中に市販の酵素製剤を添加して作製することもできる。例えば、タンパク分解のためにプロテアーゼ製剤を、糖質分解のためにα−アミラーゼ製剤、β−アミラーゼ製剤、グルコアミラーゼ製剤、プルラナーゼ製剤等を、繊維素分解のためにβ−グルカナーゼ製剤、繊維素分解酵素製剤(例えば、ヘミセルラーゼ製剤)等をそれぞれ用いることができ、あるいはこれらの混合製剤を用いることもできる。 In the above production procedure, wort can be produced according to a conventional method. For example, saccharifying a mixture of brewing raw materials and brewing water, filtering to obtain wort, adding hops to the wort, boiling, and preparing the wort by cooling the boiled wort Can do. Moreover, wort can also be produced by adding a commercially available enzyme preparation during the saccharification step. For example, protease preparation for proteolysis, α-amylase preparation, β-amylase preparation, glucoamylase preparation, pullulanase preparation, etc. for carbohydrate decomposition, β-glucanase preparation, fibrinolysis for fibrinolysis An enzyme preparation (for example, hemicellulase preparation) or the like can be used, respectively, or a mixed preparation thereof can also be used.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造では、麦芽以外に、未発芽の麦類(例えば、未発芽大麦(エキス化したものを含む)、未発芽小麦(エキス化したものを含む));米、とうもろこし、こうりゃん、馬鈴薯、でんぷん、糖類(例えば、液糖)等の酒税法で定める副原料;タンパク質分解物や酵母エキス等の窒素源;香料、色素、起泡・泡持ち向上剤、水質調整剤、発酵助成剤等のその他の添加物を醸造原料として使用することができる。本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料は、醸造用水以外の使用原料を少なくとも麦芽およびホップとすることができ、場合によっては更に糖類、米、とうもろこし、でんぷん等を使用原料とすることができる。 In the production of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, in addition to malt, ungerminated barley (for example, ungerminated barley (including extracted), ungerminated wheat (including extracted)) Secondary ingredients specified in liquor tax law such as rice, corn, corn, potato, starch, saccharides (eg, liquid sugar); nitrogen sources such as protein degradation products and yeast extract; fragrances, pigments, foaming and foam retention agents Other additives such as a water quality adjusting agent and a fermentation aid can be used as the brewing raw material. In the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, raw materials other than brewing water can be used at least as malt and hops. In some cases, sugars, rice, corn, starch and the like can be used as raw materials.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製法において製造飲料中の分子量10〜20kDaのペプチド比率を所定値の範囲内に調整するためには、例えば、原料である麦芽および/または未発芽の麦類の仕込み・糖化工程におけるタンパク分解を抑制することや、原料である麦芽の製麦工程におけるタンパク分解度を抑制することなどにより、調整することができる。なお、タンパク分解としては、麦芽や未発芽の麦類に内在するプロテアーゼ、あるいは外から添加するプロテアーゼ製剤によるものが挙げられる。分解の抑制は、プロテアーゼ製剤の添加量を減じる、タンパク分解の作用温度における処理時間を減じる、作用pHを至適条件から変更するなどにより行うことができる。 In order to adjust the peptide ratio with a molecular weight of 10 to 20 kDa in the produced beverage in the production method of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention within a predetermined range, for example, malt and / or ungerminated wheat It can be adjusted by suppressing proteolysis in the saccharification and saccharification process, or by suppressing the degree of proteolysis in the malting process of the malt as a raw material. Examples of the proteolysis include proteases inherent in malt and ungerminated wheat, or protease preparations added from the outside. Degradation can be suppressed by reducing the amount of protease preparation added, reducing the treatment time at the proteolytic action temperature, or changing the working pH from the optimum condition.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製法において製造飲料中の栄養表示基準による糖質濃度やα−グルカンの濃度を所定値の範囲内に調整するためには、例えば、原料である麦芽および/または未発芽の麦類等の仕込みや糖化工程における糖質分解を促進すること、原料である麦芽の製麦工程における糖質分解を促進すること、それにより麦芽および/または未発芽の麦類等に由来する糖質が酵母に資化できる糖(資化性糖)まで充分に分解すること、あるいは糖質が酵母に資化できる糖まで充分分解された液糖を用いることなどにより、調整することができ、さらには発酵・貯蔵工程において、これらの資化性糖が酵母に十分に資化され、本発明の所定の糖質濃度以下に低下するまで酵母発酵を行うことなどにより、調整することもできる。なお、糖質分解としては、麦芽や未発芽の麦類に内在するαアミラーゼやβアミラーゼ等、あるいは外から添加するαアミラーゼ製剤、βアミラーゼ製剤、グルコアミラーゼ製剤、プルラナーゼ製剤等によるものが挙げられる。分解の促進は、αアミラーゼ製剤、βアミラーゼ製剤、グルコアミラーゼ製剤、プルラナーゼ製剤等の添加量を増加させること、糖質分解の作用温度における処理時間を延長すること、作用pHを至適条件に合わせることなどにより行うことができる。 In order to adjust the sugar concentration and α-glucan concentration according to the nutrition labeling standard in the manufactured beverage in the production method of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention within a predetermined range, for example, malt as a raw material and // Promoting saccharide decomposition in the saccharification process and preparation of ungerminated wheat, etc., accelerating saccharide decomposition in the malting process of malt as a raw material, thereby malt and / or ungerminated wheat Can be prepared by sufficiently degrading the sugars derived from the sugar to the sugar that can be assimilated to the yeast (assimilable sugar), or using the liquid sugar that has been sufficiently decomposed to the sugar that can be assimilated to the yeast by the sugar. Furthermore, in fermentation and storage processes, these assimilating sugars are sufficiently assimilated to yeast and adjusted by performing yeast fermentation until the concentration of sugars falls below the predetermined sugar concentration of the present invention. Rukoto can also. Examples of carbohydrate degradation include α-amylase, β-amylase and the like inherent in malt and ungerminated wheat, or α-amylase preparation, β-amylase preparation, glucoamylase preparation, pullulanase preparation and the like added from the outside. . Degradation is promoted by increasing the amount of α-amylase preparation, β-amylase preparation, glucoamylase preparation, pullulanase preparation, etc., extending the treatment time at the action temperature of carbohydrate decomposition, and adjusting the working pH to the optimum conditions. It can be done by things.
本発明においてはまた、分子量10〜20kDaのペプチドを含む原料から、該ペプチドを含む画分を調製し、該画分をビールテイスト発酵アルコール飲料に添加することによって、分子量10〜20kDaのペプチド比率が所定値の範囲内に調整されたビールテイスト発酵アルコール飲料を製造することができる。典型的には、実施例1の記載に従って、ビールテイスト発酵アルコール飲料から分子量10〜20kDaのペプチドが含まれる画分を調製し、該画分を低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料に添加することによって、分子量10〜20kDaのペプチド比率が所定値の範囲内に調整された低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料を製造することができる。 In the present invention, by preparing a fraction containing the peptide from a raw material containing a peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa, and adding the fraction to a beer-taste fermented alcoholic beverage, the peptide ratio having a molecular weight of 10 to 20 kDa is achieved. A beer-taste fermented alcoholic beverage adjusted within a predetermined value range can be produced. Typically, by preparing a fraction containing a peptide having a molecular weight of 10-20 kDa from a beer-taste fermented alcoholic beverage as described in Example 1, and adding the fraction to a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, A low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage in which the peptide ratio with a molecular weight of 10 to 20 kDa is adjusted within a predetermined range can be produced.
すなわち、本発明によれば、分子量10〜20kDaの1種または2種以上のペプチド(好ましくは、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する分子量10〜20kDaの1種または2種以上のペプチド)を配合してなる低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料が提供され、該飲料は本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の一部である。該ペプチドが配合されてなる飲料は、低糖質であるにも関わらずビールテイスト発酵アルコール飲料としての風味が改善あるいは向上されており、具体的には、味のスムーズさと味の持続性が増強された飲料である。 That is, according to the present invention, one or two or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (preferably derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage using malt and / or ungerminated wheat as at least a part of the raw material. A low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage obtained by blending one or two or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa is provided, and the beverage is a part of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention. The beverage containing the peptide has improved or improved flavor as a beer-taste fermented alcoholic beverage despite its low sugar content. Specifically, the smoothness of the taste and the sustainability of the taste are enhanced. Beverage.
本発明の飲料への該ペプチドの配合量は、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率が2.5%より大きくなるよう配合することができ、好ましくは3.7%以上である。本発明の飲料への該ペプチドの配合量はまた、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率が2.5%より大きくなるように配合することができ、この場合、重合度5〜10のα−グルカン濃度は4.0mg/mL以下にすることができる。本発明の飲料への該ペプチドの配合量はまた、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率が2.5%より大きくなるように配合することができ、この場合、重合度5〜10のα−グルカン濃度は1.8〜4.0mg/mL、あるいは、1.8mg/ml以下にすることができる。本発明の飲料への該ペプチドの配合量は好ましくは、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率が3.7%以上になるように配合することができ、この場合、重合度5〜10のα−グルカン濃度は4.0mg/mL以下にすることができる。本発明の飲料への該ペプチドの配合量はまた、全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率が3.7%以上になるように配合することができ、この場合、重合度5〜10のα−グルカン濃度は1.8〜4.0mg/mL、あるいは、1.8mg/ml以下にすることができる。全タンパク量に対する分子量10〜20kDaのペプチド量の比率は味の調和の観点から上限を設けることができ、例えば、8.0%を上限とすることができる。 The blending amount of the peptide in the beverage of the present invention can be blended so that the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is larger than 2.5%, preferably 3.7% or more. . The blending amount of the peptide in the beverage of the present invention can also be blended so that the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa with respect to the total protein amount is greater than 2.5%. The α-glucan concentration of 10 can be 4.0 mg / mL or less. The blending amount of the peptide in the beverage of the present invention can also be blended so that the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa with respect to the total protein amount is greater than 2.5%. The α-glucan concentration of 10 can be 1.8 to 4.0 mg / mL, or 1.8 mg / ml or less. The blending amount of the peptide in the beverage of the present invention can be preferably blended so that the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is 3.7% or more. In this case, the degree of polymerization is 5 The α-glucan concentration of -10 can be 4.0 mg / mL or less. The blending amount of the peptide in the beverage of the present invention can also be blended so that the ratio of the peptide amount having a molecular weight of 10 to 20 kDa to the total protein amount is 3.7% or more. The α-glucan concentration of 10 can be 1.8 to 4.0 mg / mL, or 1.8 mg / ml or less. The ratio of the amount of peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa with respect to the total amount of protein can provide an upper limit from the viewpoint of harmony of taste, and for example, the upper limit can be 8.0%.
分子量10〜20kDaの1種または2種以上のペプチド(特に、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する分子量10〜20kDaの1種または2種以上のペプチド)の例としては、α−アミラーゼ/トリプシンインヒビター、トリプシンインヒビター、α−アミラーゼ・インヒビター(BDAI−1)、非特異的脂質転移タンパク1(non-specific lipid-transfer protein 1)あるいはアベニン・ライクa1が挙げられ、好ましくは、これらのタンパク質およびペプチドは大麦由来、一部は小麦由来のものである。α−アミラーゼ/トリプシンインヒビター、トリプシンインヒビター、α−アミラーゼ・インヒビター(BDAI−1)、非特異的脂質転移タンパク1あるいはアベニン・ライクa1をビールテイスト発酵アルコール飲料に配合するときは、これらのペプチドあるいはタンパク質は麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料から調製したもの以外のペプチドあるいはタンパク質であってもよい。
One or two or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (particularly one or two having a molecular weight of 10 to 20 kDa derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage made from malt and / or ungerminated wheat as a raw material) Examples of peptides of more than species include α-amylase / trypsin inhibitor, trypsin inhibitor, α-amylase inhibitor (BDAI-1), non-specific lipid-
ビールテイスト発酵アルコール飲料に配合される分子量10〜20kDaの1種または2種以上のペプチドは、該ペプチドを含む原料から調製することができる。分子量10〜20kDaの1種または2種以上のペプチドを含む原料としては、麦芽および/または未発芽の麦類並びにその加工品、穀物タンパク分解物(例えば、大豆タンパク分解物、コーンタンパク分解物)が挙げられる。麦芽および/または未発芽の麦類の加工品としては、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とする麦汁、未発芽麦類のエキス、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料が挙げられ、好ましくは、麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料、より好ましくは麦芽を麦由来の原料の一部または全部とするビールテイスト発酵アルコール飲料である。原料からの分子量10〜20kDaの1種または2種以上のペプチドの調製手段としては、限外濾過法および硫安沈殿法の組み合わせや、ゲル濾過分画および固相抽出カラムの組み合わせが挙げられ、工業的生産の観点からは限外濾過法および硫安沈殿法の組み合わせが好ましい。なお、限外濾過法および硫安沈殿法の組み合わせにより分子量10〜20kDaの1種または2種以上のペプチドを調製するときには、限外濾過法を実施し、次いで、硫安沈殿法を実施することができる。 The 1 type, or 2 or more types of peptide of molecular weight 10-20kDa mix | blended with a beer taste fermented alcoholic beverage can be prepared from the raw material containing this peptide. Examples of the raw material containing one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa include malt and / or ungerminated wheat and processed products thereof, grain protein degradation products (for example, soybean protein degradation products, corn protein degradation products) Is mentioned. Processed products of malt and / or ungerminated wheat include wort, ungerminated wheat extract, malt and / or ungerminated wheat that are malt and / or ungerminated wheat. Beer-taste fermented alcoholic beverages comprising at least part of the raw material, preferably beer-taste fermented alcoholic beverages comprising malt and / or ungerminated wheat as at least part of the raw material, more preferably malt to wheat It is a beer-taste fermented alcoholic beverage that is part or all of the raw material derived from it. Examples of means for preparing one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa from raw materials include a combination of ultrafiltration method and ammonium sulfate precipitation method, and a combination of gel filtration fractionation and solid phase extraction column. From the viewpoint of industrial production, a combination of ultrafiltration and ammonium sulfate precipitation is preferred. When preparing one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa by a combination of the ultrafiltration method and the ammonium sulfate precipitation method, the ultrafiltration method can be carried out, and then the ammonium sulfate precipitation method can be carried out. .
低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料に配合される分子量10〜20kDaの1種または2種以上のペプチドは、好ましくは麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料(より好ましくは麦由来の原料として少なくとも麦芽を使用するビールテイスト発酵アルコール飲料、特に好ましくはオールモルトビール)から調製することができる。例えば、ビールテイスト発酵アルコール飲料を製造し、ゲル濾過分画や固相抽出カラムを用いて該飲料から分子量10〜20kDaのペプチドが含まれる画分を調製することができる。分子量10〜20kDaのペプチドは必ずしも単離・精製されている必要はなく、ビールテイスト発酵アルコール飲料から分画処理されて得られたペプチド画分を低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料へ配合することができる。 The one or two or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa blended in the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage are preferably beer-taste fermented alcoholic beverages that are at least part of malt and / or ungerminated wheat. (More preferably beer-taste fermented alcoholic beverages using at least malt as a raw material derived from wheat, particularly preferably all-malt beer). For example, a beer-taste fermented alcoholic beverage can be produced, and a fraction containing a peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa can be prepared from the beverage using a gel filtration fraction or a solid phase extraction column. The peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa does not necessarily need to be isolated and purified, and a peptide fraction obtained by fractionating from a beer-taste fermented alcoholic beverage can be blended into a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage. .
低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料への分子量10〜20kDaのペプチドは、発酵前の発酵前液、発酵中の発酵液、あるいは発酵後の発酵液への添加により行うことができる。例えば、ビールテイスト発酵アルコール飲料を製造し、該飲料から分子量10〜20kDaのペプチドが含まれる画分を調製し、該画分を発酵後の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料に添加することによって、分子量10〜20kDaのペプチドが配合された低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料を製造することができる。 A peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa to a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage can be performed by addition to a pre-fermentation solution before fermentation, a fermentation solution during fermentation, or a fermentation solution after fermentation. For example, by producing a beer-taste fermented alcoholic beverage, preparing a fraction containing a peptide having a molecular weight of 10 to 20 kDa from the beverage, and adding the fraction to the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage after fermentation, A low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage blended with a 10-20 kDa peptide can be produced.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料は分子量10〜20kDaのペプチド比率または濃度が所定値の範囲内で配合されること以外は、通常の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造手順に従って製造することができる。例えば、麦芽、ホップ、副原料、醸造用水等の醸造原料から調製された麦汁に発酵用ビール酵母を添加して発酵を行い、発酵麦芽飲料を醸成させることができる。得られた低糖質ビールテイストの発酵アルコール飲料は、低温にて貯蔵した後、ろ過工程により酵母を除去することができる。 The low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention is manufactured according to the procedure for manufacturing a normal low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, except that the peptide ratio or concentration with a molecular weight of 10 to 20 kDa is blended within a predetermined range. Can do. For example, fermented brewer's yeast can be added to wort prepared from brewing raw materials such as malt, hops, auxiliary raw materials, and brewing water for fermentation, and a fermented malt beverage can be brewed. The obtained low-alcohol beer-taste fermented alcoholic beverage can be removed at the low temperature and then removed by the filtration process.
上記製造手順において麦汁の作製は常法に従って行うことができる。例えば、醸造原料と醸造用水の混合物を糖化し、濾過して、麦汁を得、その麦汁にホップを添加した後、煮沸し、煮沸した麦汁を冷却することにより麦汁を調製することができる。 In the above production procedure, wort can be produced according to a conventional method. For example, saccharifying a mixture of brewing raw materials and brewing water, filtering to obtain wort, adding hops to the wort, boiling, and preparing the wort by cooling the boiled wort Can do.
本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造では麦芽以外の原料を使用でき、具体的には、本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料に関する記載に従って麦芽以外の原料を使用できる。 In the production of the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention, raw materials other than malt can be used. Specifically, raw materials other than malt can be used according to the description relating to the low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention.
本発明の別の面によれば、分子量10〜20kDa(HPLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチドを有効成分として含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善剤が提供される。本発明のさらに別の面によれば、分子量10〜20kDa(HPLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチドを添加する工程を含んでなる、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善方法が提供される。本明細書において「低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善」とは、味のスムーズさと味の持続性が増強されることを意味するものとする。また、分子量10〜20kDa(HPLCゲル濾過法)の1種または2種以上のペプチドは、好ましくは麦芽および/または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来するものである。本発明の風味改善剤と風味改善方法は本発明の低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料および該飲料の製造方法についての記載に従って実施することができる。 According to another aspect of the present invention, there is provided a flavor improving agent for a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, comprising one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method) as an active ingredient. Is done. According to still another aspect of the present invention, there is provided a method for improving the flavor of a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage comprising the step of adding one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method). Is provided. In the present specification, “flavor improvement of a low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage” means that the smoothness of the taste and the sustainability of the taste are enhanced. In addition, one or more peptides having a molecular weight of 10 to 20 kDa (HPLC gel filtration method) are preferably derived from a beer-taste fermented alcoholic beverage that uses malt and / or ungerminated wheat as at least part of the raw material. Is. The flavor improving agent and flavor improving method of the present invention can be carried out according to the description of the low sugar beer-taste fermented alcoholic beverage of the present invention and the method for producing the beverage.
以下の例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。なお、以下の例において割合(%)は特に断りがない限り質量%を表す。 The present invention will be described more specifically based on the following examples, but the present invention is not limited to these examples. In the following examples, the percentage (%) represents mass% unless otherwise specified.
参考例1:ビールテイスト発酵アルコール飲料に好ましい香味を付与するペプチド画分の特定
(1)ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造
大麦麦芽、ホップ、酵素製剤を用いて、インフュージョン法にてビールテイスト発酵アルコール飲料を製造した。
Reference Example 1: Identification of peptide fraction that imparts a preferred flavor to beer-taste fermented alcoholic beverages (1) Production of beer-taste fermented alcoholic beverages Beer-taste fermented alcohols using barley malt, hops, and enzyme preparations by the infusion method A beverage was produced.
試験区1は、50℃の湯300mLに大麦麦芽100gを入れ、酵素製剤を添加して60分保持後、65℃に昇温して60分保持し、さらに78℃に昇温して5分保持後、濾過して麦汁を得た。試験区2は、50℃工程を行わず、酵素製剤を添加しない以外は同様に麦汁を得た。続いて、ホップを0.8g/L投入して100℃で90分煮沸したのち、濾過して発酵前液を得た。
In
その後、常法に従ってビール酵母により発酵を行い、発酵液の香味確認を行った。8名のパネルにより、「味の柔らかさ」、すなわち雑味が抑制され、ビールらしく柔らかくスムーズなテクスチャーがあり、調和のとれた味わいがあることを指標に、最低は1点、最高は5点として五段階で官能評価を行い、平均点を算出した。結果は表1に示される通りであった。 Then, it fermented with the brewer's yeast according to the conventional method, and the flavor check of the fermented liquid was performed. The panel of 8 people, "softness of taste", that is, miscellaneous taste is suppressed, there is a soft and smooth texture like beer, a harmonious taste, the minimum is 1 point, the maximum is 5 points As a result, sensory evaluation was performed in five stages and an average score was calculated. The results were as shown in Table 1.
表1の通り、試験区1よりも試験区2の方が官能評価のスコア(味の柔らかさ)が良好であり、香味の印象も好ましかった
As shown in Table 1, the
(2)ゲル濾過分画
上記(1)で得られた発酵液を0.45μmフィルターで濾過し、濾過済み発酵液を計量して凍結乾燥した。乾燥物を100mM NaCl溶液で溶解して5倍濃縮液を調製し、分画用サンプルとした。サンプルは、以下の条件にてゲル濾過分画を行った。
(2) Gel filtration fraction The fermentation broth obtained in (1) above was filtered through a 0.45 μm filter, and the filtered fermentation broth was weighed and freeze-dried. The dried product was dissolved in 100 mM NaCl solution to prepare a 5-fold concentrated solution, which was used as a fractionation sample. The sample was subjected to gel filtration fractionation under the following conditions.
カラム:Hiload Superdex 30pg 26/600(GEヘルスケア社製)
サンプル注入量:5mL
溶離液組成:100mM NaCl
流速:2.5mL/分(流速一定)
検出波長:215nm
分取:0.29cv(カラム・ボリューム)から19.1mL(フラクション0)、その後0.35cvから5mLずつ分画(フラクション1〜51)
Column: Hiload Superdex 30pg 26/600 (manufactured by GE Healthcare)
Sample injection volume: 5 mL
Eluent composition: 100 mM NaCl
Flow rate: 2.5 mL / min (constant flow rate)
Detection wavelength: 215 nm
Fractionation: fractionation from 0.29 cv (column volume) to 19.1 mL (fraction 0) and then from 0.35 cv to 5 mL (
分画物の官能評価により、香味の特徴の違いによって、表2のようにフラクションをプレ画分、A1、A2、B、C、D、E、F、Gの9つのグループに分けた。 According to the sensory evaluation of the fractions, the fractions were divided into nine groups of pre-fractions, A1, A2, B, C, D, E, F, and G, as shown in Table 2, depending on the flavor characteristics.
(3)ペプチド画分の精製
上記(2)で得られた各画分は、固相抽出カラム(画分A1、A2、Bは、Bond Elute C18 EWP、画分C、D、E、F、GはBond Elute C18を使用、Agilent technologies社製)にて吸着処理を行い、脱塩水で洗浄した後、50%エタノール水溶液にて溶出して、濃縮乾固を行い、これを脱塩水にて復水し、濃縮液とした。これをペプチド画分とした。
(3) Purification of peptide fractions Each of the fractions obtained in (2) above is obtained from a solid phase extraction column (fractions A1, A2, and B are Bond Elute C18 EWP, fractions C, D, E, F, G uses Bond Elute C18, manufactured by Agilent Technologies), washed with demineralized water, eluted with 50% ethanol aqueous solution, concentrated to dryness, and reconstituted with demineralized water. Water and concentrate. This was used as a peptide fraction.
(4)ローリー法によるタンパク定量
上記(3)のゲル濾過分画によって得られたペプチド画分のタンパク定量は市販のキット(DCプロテインアッセイ、Bio−Rad社製)を用いたLowry法で行った。まず、上記分画液を50μL採って遠心乾固し、超純水10μLを加えて再溶解して分析サンプルとした。そこにA液を50μL加えて撹拌し、続いてB液を400μL加えて攪拌した。室温で15分発色反応を行った後、96ウェルプレートに350μL移して750nmの吸光度を測定した。得られた吸光度と予め作成した検量線に基づき、ペプチド量を算出した。なお、検量線はBSA(ウシ血清アルブミン)を用いて作成した。
(4) Protein quantification by the Lowry method The protein quantification of the peptide fraction obtained by the gel filtration fraction of (3) above was performed by the Lowry method using a commercially available kit (DC protein assay, manufactured by Bio-Rad). . First, 50 μL of the above fraction solution was taken and centrifuged to dryness, and 10 μL of ultrapure water was added and redissolved to obtain an analysis sample. Thereto, 50 μL of solution A was added and stirred, and then 400 μL of solution B was added and stirred. After a color development reaction at room temperature for 15 minutes, 350 μL was transferred to a 96-well plate and the absorbance at 750 nm was measured. The amount of peptide was calculated based on the obtained absorbance and a calibration curve prepared in advance. The calibration curve was prepared using BSA (bovine serum albumin).
(5)官能評価
これらの分画・精製サンプルを、大麦と大麦麦芽を使用した市販の麦芽使用比率49%未満のビール系アルコール飲料に、その飲料に含まれる各画分量の50%上乗せとなるよう添加し(図1参照)、5名のパネルにより官能評価を行った。
(5) Sensory evaluation These fractionated / purified samples are added to a commercial beer-based alcoholic beverage using barley and barley malt with a malt use ratio of less than 49%, and 50% of each fraction contained in the beverage. (See FIG. 1), sensory evaluation was performed by a panel of five people.
官能評価の指標は、「旨み、甘味、厚み、ボディ、およびオフフレーバーとしての渋み・味の不調和」の総合評価として、1〜5点の五段階スコアで評価した。無添加のコントロールをスコア2.5とした。官能評価スコアの平均値は図2に、官能評価コメントは表3に示される通りであった。 The index of sensory evaluation was evaluated with a five-point score of 1 to 5 points as a comprehensive evaluation of “umami, sweetness, thickness, body, and astringency / taste dissonance as an off-flavor”. The additive-free control was scored 2.5. The average value of the sensory evaluation score is shown in FIG. 2, and the sensory evaluation comments are shown in Table 3.
ペプチド分画物は、プレ画分からDにかけて、試験区2の官能評価スコア(図2)が高く、分画前の発酵液の官能評価結果と一致した。また、試験区2の画分A1およびA2において、スコアが高く、柔らかさ、雑味低下との官能評価コメントだった(表3)。試験区2のプレ画分では、スコアは同等に高いが、柔らかいが味自体は少ないとの官能評価コメントだった。画分B〜Dは、スコアは同等に高いが、官能評価コメントでは厚み、ボディ、旨味の寄与がより強いと評価された。すなわち、プレ画分、A1、A2、B、C、Dで、試験区2の評価は高いが、それぞれ味質が異なっており、画分A1、A2は、ビールらしい柔らかさ、雑味低下等の効果があることがわかった。
The peptide fraction had a high sensory evaluation score (Fig. 2) in
ペプチド分画物は、実施例1に記載の、Superdex 75 10/300カラムにて分析を行い、分子量を推定したところ、画分A1のペプチドが分子量約10〜20kDaに分布し、SDS−PAGE電気泳動上でも、画分A1〜A2において、同様の分子量約10〜20kDaのペプチドが分布していることが確認された(データ示さず)。また、香味上優れていた試験区2では、そのペプチド量が多くなっていることが確認された(図1)。
The peptide fraction was analyzed with a Superdex 75 10/300 column described in Example 1 and the molecular weight was estimated. As a result, the peptide of fraction A1 was distributed in a molecular weight of about 10 to 20 kDa, and SDS-PAGE Also on the electrophoresis, it was confirmed that similar peptides having a molecular weight of about 10 to 20 kDa were distributed in the fractions A1 to A2 (data not shown). Moreover, it was confirmed that the peptide amount was increasing in the
以上の結果より、分画・精製した分子量約10〜20kDaのペプチド画分A1およびA2は、雑味が抑制され調和のとれたビールらしい味わいをビール系飲料に付与できることが明らかとなった。 From the above results, it was clarified that the fractionated and purified peptide fractions A1 and A2 having a molecular weight of about 10 to 20 kDa can impart a beer-like taste with reduced taste and a harmonious beer.
実施例1:低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造および該飲料へのペプチド添加と官能評価
A:低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造
ビールテイスト発酵アルコール飲料においては、主原料として、大麦麦芽を使用し、副原料として、とうもろこしおよび液糖のいずれかまたは両方を使用した。糖化に際しては酵素製剤を用い、糖化の温度、時間を調整し、濾過することで、異なる組成の麦汁を得た。すなわち、糖化の温度帯は60℃、62℃、64℃、65℃など、60℃〜65℃の中で選択した。糖化の時間は、それぞれの温度工程において、5分〜120分の間で調整した。また、原料の熱処理温度は70℃〜120℃の間で選択した。具体的には以下のようにして麦汁を得た。
Example 1: Production of low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage, peptide addition to the beverage, and sensory evaluation
A: Production of low-sugar beer-taste fermented alcoholic beverage In the beer-taste fermented alcoholic beverage, barley malt was used as the main ingredient, and either or both of corn and liquid sugar were used as the auxiliary ingredient. In the saccharification, an enzyme preparation was used, and the temperature and time of saccharification were adjusted and filtered to obtain worts having different compositions. That is, the temperature range of saccharification was selected from 60 ° C to 65 ° C such as 60 ° C, 62 ° C, 64 ° C, 65 ° C. The saccharification time was adjusted between 5 minutes and 120 minutes in each temperature step. Moreover, the heat processing temperature of the raw material was selected between 70 degreeC-120 degreeC. Specifically, wort was obtained as follows.
(ア)サンプル番号1および2の糖化条件
64℃の湯100質量部に対して、大麦麦芽33.6質量部、酵素製剤を投入して100分保持後、78℃に昇温して5分保持した後、濾過して麦汁を得た。
(A) Saccharification conditions of
(イ)サンプル番号3の糖化条件
60℃の湯100質量部に対して、大麦麦芽33.3質量部、グルコアミラーゼを主体とする酵素製剤を投入して20分保持後、65℃に昇温して100分保持したものを醪Aとした。同時に、50℃の湯100に対してとうもろこし11.3質量部および資化性糖を主体とする液糖8.3質量部を投入して、50℃で20分、65℃で15分の順に保持し、その後煮沸したものを醪Bとした。糖化の終了した醪Aと煮沸の終了した醪Bを直ちに混合させたのち、78℃に昇温して5分保持した後、濾過して麦汁を得た。
(A) Saccharification condition of
(ウ)サンプル番号4の糖化条件
65℃の湯100質量部に対して、大麦麦芽16.7質量部、グルコアミラーゼを主体とする酵素製剤を投入して120分保持後、78℃に昇温して5分保持した後、濾過して麦汁を得た。
(C) Saccharification conditions of sample No. 4 With respect to 100 parts by mass of 65 ° C. hot water, 16.7 parts by mass of barley malt and an enzyme preparation mainly composed of glucoamylase are added and maintained for 120 minutes, and then heated to 78 ° C. And held for 5 minutes, followed by filtration to obtain wort.
上記の麦汁調製工程(ア)〜(ウ)に続いて、得られたそれぞれの麦汁にホップおよび一部の麦汁(サンプル番号4)では資化性糖を主体とした液糖を投入して100℃で90分間煮沸した後、麦汁静置を行ない、トリューブを分離した後、冷却して発酵前液を得た。一部の発酵前液(サンプル番号1および2)ではグルコアミラーゼを主体とする酵素製剤を添加した。その後、発酵前液に下面発酵酵母を添加し、常法に従って主発酵および後発酵を行なった。続いて、後発酵後の発酵液を、より低温で保持することにより貯蔵を行ない、濾過して、清澄なビールテイスト発酵アルコール飲料(試醸品)(サンプル番号1〜4)を得た。
Following the above wort preparation steps (a) to (c), hops and some worts (sample number 4) are charged with liquid sugars mainly composed of assimilating sugars. Then, after boiling at 100 ° C. for 90 minutes, the wort was allowed to stand to separate the trube and then cooled to obtain a pre-fermentation solution. In some pre-fermentation solutions (
B:ビールテイスト発酵アルコール飲料のα−グルカン量の定量
(ア)HPLC分析用のサンプル調製
サンプル番号1〜4は、固相抽出カラムを用いて分離し、分画用サンプルを得た。具体的には、製品液を固相抽出カラム(Bond Elute C18、Agilent technologies社製)にて吸着処理を行って素通り画分を回収し、回収液をさらにBond Elute C18 EWP(Agilent technologies社製)に吸着させ、素通り画分を回収した。回収した素通り画分は、さらにイオン交換樹脂Sep Pak QMAおよびSep PakCM(いずれもWaters社)で順に処理した。得られた液を遠心濃縮させ、乾燥物を復水して分画用サンプルとした。
B: Determination of α-glucan content of beer-taste fermented alcoholic beverage (a) Sample preparation for HPLC
(イ)HPLCによる糖分析
MCI−gel CK02ASカラム(20×250mm)およびコロナCAD検出器により、サンプルに含まれるα−グルカンの鎖長分布状況を評価した。具体的には、以下の条件のようにして重合度(鎖長)を分析した。G5〜G10マルトオリゴ糖を標準品とした検量線で組成を分析した。G5はマルトペンタオース(Maltopentaose)、G6はマルトヘキサオース(Maltohexaose)、G7はマルトヘプタオース(Maltoheptaose)、G8はマルトオクタオース(Maltooctaose)、G9はマルトノナオース(Maltononaose)、G10はマルトデカオース(Maltodecaose)である。マルトペンタオース(Maltopentaose)、マルトヘキサオース(Maltohexaose)およびマルトヘプタオース(Maltoheptaose)については東京化成社より標準品を購入し、マルトオクタオース(Maltooctaose)、マルトノナオース(Maltononaose)およびマルトデカオース(Maltodecaose)についてはElicityl SA社より標準品を購入し、質量分析器条件を設定した。
(A) Sugar analysis by HPLC The chain length distribution state of α-glucan contained in the sample was evaluated using an MCI-gel CK02AS column (20 × 250 mm) and a corona CAD detector. Specifically, the degree of polymerization (chain length) was analyzed under the following conditions. The composition was analyzed with a calibration curve using G5 to G10 maltooligosaccharides as standard. G5 is maltopentaose, G6 is maltohexaose, G7 is maltoheptaose, G8 is maltooctaose, G9 is maltononaose, G10 is maltodecaose (Maltodecaose). For Maltoopentaose, Maltohexaose and Maltoheptaose, standard products were purchased from Tokyo Kasei Co., Ltd., and Maltooctaose, Maltononaose and Maltodeose ( For Maltodecaose), a standard product was purchased from Elicityl SA, and mass spectrometer conditions were set.
<HPLC分析条件>
カラム:MCI−gel CK02ASカラム(20×250mm、三菱化学社製)
移動相:MQ水
流速:1.0mL/分
カラム温度:85℃
検出器:コロナCAD検出器
<HPLC analysis conditions>
Column: MCI-gel CK02AS column (20 × 250 mm, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation)
Mobile phase: MQ water flow rate: 1.0 mL / min Column temperature: 85 ° C
Detector: Corona CAD detector
上記(イ)で設定した分析条件のもとでサンプル番号1〜4の分析を行った結果は表4に示される通りである。
Table 4 shows the results of analysis of
C:栄養表示基準に基づく糖質濃度の分析
栄養表示基準に基づく糖質濃度の測定は公知の五訂日本食品標準成分表分析マニュアルに記載の方法に従って行った。すなわち、当該試料の質量から、水分(減圧加熱・乾燥助剤添加法)、タンパク質(自動分析装置による方法)、脂質(ソックスレー抽出法(3))、灰分(マッフル炉による燃焼法)および食物繊維量(プロスキー酵素重量法)を除いて算出する方法にて測定した。サンプル番号1〜4について測定した結果は表4に示される通りであった。
C: Analysis of carbohydrate concentration based on nutrition labeling standards The measurement of the sugar concentration based on the nutrition labeling standards was performed according to the method described in the well-known 5th edition Japanese food standard ingredient table analysis manual. That is, from the mass of the sample, moisture (pressure reduction heating / drying assistant addition method), protein (method using automatic analyzer), lipid (Soxhlet extraction method (3)), ash (combustion method using muffle furnace) and dietary fiber It was measured by the method of calculating except the amount (Prosky enzyme weight method). The results measured for
表4において、重合度5〜10のα−グルカン濃度と、栄養表示基準に基づく糖質濃度との相関関係を図3に示した。近似直線における相関係数は、R2=0.6282である。従って、例えば、重合度5〜10のα−グルカン濃度が4.0mg/mL以下の場合、栄養表示基準に基づく糖質濃度は1.4g/100mL以下に相当すると考えられる。 In Table 4, the correlation between the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 and the carbohydrate concentration based on the nutrition labeling standard is shown in FIG. The correlation coefficient in the approximate straight line is R2 = 0.6282. Therefore, for example, when the α-glucan concentration having a degree of polymerization of 5 to 10 is 4.0 mg / mL or less, the carbohydrate concentration based on the nutrition labeling standard is considered to correspond to 1.4 g / 100 mL or less.
D:タンパク定量
(ア)ゲル濾過分画用のサンプル調製
サンプル番号1〜4(試醸品)を計量した後、凍結乾燥した。乾燥物を50mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0、150mM NaCl含む)で溶解して2.5倍濃縮液を調製し、分画用サンプルとした。
D: Protein quantification (a) Sample preparation for gel filtration
(イ)HPLCゲル濾過法
HPLCゲル濾過法の条件は以下の通りであった。
<HPLCゲル濾過法分析条件>
カラム:Superdex 75 10/300(GEヘルスケア社製)
サンプル注入量:100μL
溶離液組成:50mMリン酸ナトリウム(pH7.0)、20%(v/v)アセトニトリル、150mM NaCl
流速:0.5mL/分(流速一定)
検出波長:215nm
分画プログラム:
(A) HPLC gel filtration method The conditions of the HPLC gel filtration method were as follows.
<HPLC gel filtration analysis conditions>
Column: Superdex 75 10/300 (manufactured by GE Healthcare)
Sample injection volume: 100 μL
Eluent composition: 50 mM sodium phosphate (pH 7.0), 20% (v / v) acetonitrile, 150 mM NaCl
Flow rate: 0.5 mL / min (constant flow rate)
Detection wavelength: 215 nm
Fractionation program:
(ウ)分画範囲の設定
上記(イ)のHPLCゲル濾過法条件記載のカラム、溶離液、流速、検出波長において、分子量既知のペプチドを0.1〜5mg/mLで適宜超純水に溶解したものを50μL注入してHPLC分析を行い、保持時間を確認した(表6)。その保持時間、分子量から検量線(図4)を作成し、分子量範囲と分画範囲を決定した。
(C) Fractionation range setting The peptide, eluent, flow rate, and detection wavelength described in the HPLC gel filtration conditions described in (a) above are appropriately dissolved in ultrapure water at 0.1 to 5 mg / mL. 50 μL of the sample was injected and subjected to HPLC analysis to confirm the retention time (Table 6). A calibration curve (FIG. 4) was created from the retention time and molecular weight, and the molecular weight range and fractional range were determined.
(エ)分画液のLowry法によるタンパク定量
タンパク定量は、参考例1に記載のLowry法により行った。なお、得られた吸光度とBSA濃度から検量線を作成し、分画液のペプチド量(BSA換算)を計算し、分画液量、濃縮倍率から、当該画分の製品相当ペプチド濃度(mg/mL)を算出した。
(D) Protein quantification of the fraction by the Lowry method Protein quantification was performed by the Lowry method described in Reference Example 1. A calibration curve was prepared from the obtained absorbance and BSA concentration, the peptide amount of the fraction solution (BSA conversion) was calculated, and the product equivalent peptide concentration (mg / mg) of the fraction was calculated from the fraction solution amount and the concentration ratio. mL) was calculated.
(オ)10〜20kDaペプチドの定量
10〜20kDaペプチド濃度は、上記HPLCゲル濾過法における、検量線から決定した分子量10〜20kDaの範囲である画分3に含まれるタンパク濃度を、製品相当ペプチド濃度(mg/mL)に換算して求めた。また、10〜20kDaペプチド量が全タンパク量の中に占める比率、すなわち10〜20kDaのペプチド比率は、以下の算出式にて求めた。
E:官能評価
サンプル番号1〜4(試醸品)に関して、7名の訓練されたパネラーによって官能評価を実施した。評価項目の指標は、「味のスムーズさ」および「味の持続性」の2項目とし、それぞれ、1(弱い)〜9(強い)点の9段階スコアで評価した。各サンプルの官能評価結果は表7に示される通りであった。また、この結果を図5および図6に示した。
E: Sensory evaluation Sensory evaluation was carried out by seven trained panelists on
表7並びに図5および図6に示される通り、10〜20kDaのペプチド比率を2.5%より高くした試験醸造品において、「味のスムーズさ」と「味の持続性」が向上することが確認された。 As shown in Table 7 and FIGS. 5 and 6, in the test brewed product in which the peptide ratio of 10 to 20 kDa was higher than 2.5%, “taste smoothness” and “taste sustainability” were improved. confirmed.
なお、上記結果は、実施例1に記載した方法で分析した時の結果、すなわち、コロナCAD検出器(コロナ荷電化粒子検出器)を用いて得られた分析値である。本検出器は、物質の化学構造に依存せず、同一の分析条件下で、一貫した物質重量依存の応答性が得られる特徴がある(Thermofisher scientific社による)。 In addition, the said result is a result at the time of analyzing by the method described in Example 1, ie, the analytical value obtained using the corona CAD detector (corona charged particle detector). This detector is independent of the chemical structure of the substance and is characterized by consistent substance weight-dependent responsiveness under the same analytical conditions (by Thermofisher scientific).
実施例2:ペプチドのビールテイスト発酵アルコール飲料への添加と官能評価
A:ペプチド画分の調製
(ア)ゲル濾過分画
市販品(オールモルトビール)をガス抜きしたうえで凍結乾燥した。凍結乾燥物を100mMNaCl溶液に溶解して5倍濃縮液を調製し、分画用サンプルとしたサンプルは、以下の条件にてゲル濾過分画を行った。
Example 2: Addition of peptide to beer-taste fermented alcoholic beverage and sensory evaluation
A: Preparation of peptide fraction (a) Gel filtration fraction A commercially available product (all malt beer) was degassed and then freeze-dried. The lyophilized product was dissolved in a 100 mM NaCl solution to prepare a 5-fold concentrated solution, and the sample used as a fractionation sample was subjected to gel filtration fractionation under the following conditions.
<ゲル濾過分画条件>
カラム:Hiload Superdex 30pg 26/600(GEヘルスケア社)
サンプル注入量:5mL
溶離液組成:100mM NaCl
流速:2.5mL/分(流速一定)
検出波長:215nm
分取:0.29CV(カラム・ボリューム)から19.1mL(フラクション0)、その後0.35CVから5mLずつ画分(フラクション1〜51)
<Gel filtration fractionation conditions>
Column: Hiload Superdex 30pg 26/600 (GE Healthcare)
Sample injection volume: 5 mL
Eluent composition: 100 mM NaCl
Flow rate: 2.5 mL / min (constant flow rate)
Detection wavelength: 215 nm
Fractionation: fractions from 0.29 CV (column volume) to 19.1 mL (fraction 0) and then from 0.35 CV to 5 mL fractions (
分画物の官能評価により、香味の特徴の違いによって、前記表2のようにフラクションをプレ画分、A1、A2、B、C、D、E、F、Gの9つのグループに分けた。 According to the sensory evaluation of the fractions, the fractions were divided into nine groups of pre-fractions, A1, A2, B, C, D, E, F, and G, as shown in Table 2, depending on the difference in flavor characteristics.
なお、ゲル濾過分画に付した市販品のペプチド比率および濃度並びにα−グルカン濃度(実施例1に従って測定)は表8に示される通りであった。
(イ)ペプチド画分の精製
上記(ア)で得られた画分のうち、A1画分(フラクション番号:F1〜12)について固相抽出カラム(Bond Elute C18 EWP)にて吸着処理を行い、脱塩水で洗浄した後、50%エタノール水溶液にて抽出して、濃縮乾固させて脱塩水で復水し、濃縮液とした。これをペプチド画分とした。
(I) Purification of peptide fraction Among the fractions obtained in (a) above, the A1 fraction (fraction number: F1-12) is subjected to an adsorption treatment with a solid phase extraction column (Bond Elute C18 EWP), After washing with demineralized water, the mixture was extracted with 50% ethanol aqueous solution, concentrated to dryness, and condensed with demineralized water to obtain a concentrated solution. This was used as a peptide fraction.
(ウ)Lowry法によるタンパク定量
上記(イ)のゲル濾過分画によって得られたペプチド画分のタンパク定量は市販キット(DCプロテインアッセイ、Bio−Rad社)を用いたLowry法で行った。まず、上記ペプチド画分溶液を対製品で10倍希釈および40倍希釈となるように濃度調整し、サンプル5μLに対し、A液25μLを加えて撹拌し、続けてB液200μLを加えて撹拌した。室温で15分間発色反応を行った後、750nmの吸光度を測定した。得られた吸光度と予め作成した検量線に基づき、ペプチド量を算出した。なお、検量線はBSA(ウシ血清アルブミン)を用いて作成した。
(C) Protein quantification by the Lowry method The protein quantification of the peptide fraction obtained by the gel filtration fraction of (i) above was performed by the Lowry method using a commercially available kit (DC protein assay, Bio-Rad). First, the concentration of the peptide fraction solution was adjusted to 10-fold dilution and 40-fold dilution with the product, and 25 μL of solution A was added to 5 μL of sample and stirred, and then 200 μL of solution B was added and stirred. . After a color development reaction at room temperature for 15 minutes, the absorbance at 750 nm was measured. The amount of peptide was calculated based on the obtained absorbance and a calibration curve prepared in advance. The calibration curve was prepared using BSA (bovine serum albumin).
B:試飲サンプルの調製
サンプル番号2(試醸品)に上記Aで得られたペプチド画分を添加し、サンプル番号5および6(添加品)を調製した。具体的には、10〜20kDaのペプチド量が0.24mg/mLおよび0.29mg/mL、ペプチド比率が5.2%および5.7%となるようにペプチド画分を添加した。試飲サンプルと、ペプチド比率および濃度並びにα−グルカン濃度の対応関係は表9に示される通りであった。
B: Preparation of tasting sample The peptide fraction obtained in A above was added to sample number 2 (sample brew) to prepare
C:官能評価
無添加のサンプル番号2(試醸品)と、前記Bで得られたサンプル番号5および6(添加品)について、7名の訓練されたパネラーによって官能評価を実施した。評価項目の指標は、「味のスムーズさ」、「味の持続性」の2項目とし、評価は実施例1.Eに記載の方法に準じて実施した。各サンプルの官能評価結果は表9に示される通りであった。また、各サンプルの官能評価結果は、先述の実施例1.Eの結果と合わせて、図5および図6に図示した。
C: Sensory evaluation sensory evaluation was performed by 7 trained panelists on sample number 2 (sample) without addition of sensory evaluation and
表9並びに図5および図6に示される通り、10〜20kDaのペプチド比率を高めると、「味のスムーズさ」と「味の持続性」が向上することが確認された。 As shown in Table 9 and FIGS. 5 and 6, it was confirmed that when the peptide ratio of 10 to 20 kDa was increased, “taste smoothness” and “taste persistence” were improved.
実施例3:タンパク画分の分子種同定
本実施例では2D−PAGEおよび四重極-飛行時間型質量分析装置により、ビールらしく柔らかいスムーズなテクスチャーがあり、調和のとれた味わいに寄与するタンパク質の同定を試みた。
Example 3: Molecular species identification of protein fractions In this example, 2D-PAGE and quadrupole-time-of-flight mass spectrometers provide a soft and smooth texture of beer-like proteins that contribute to a harmonious taste. Attempted identification.
参考例1で得られたゲル濾過分画と固相抽出精製によるペプチド画分A1、A2の等量混合液200μLをTCAアセトン沈殿によってタンパク質を精製し、2D−PAGEによる電気泳動後、銀染色を行った。香味に違いの見られた試験区1と試験区2のサンプルの間では、分子量40kDa付近の太いバンドの量には違いがあまりなく、10〜20kDaに分布するバンドにおいて量的な差があることがわかった(データ示さず)。
The protein is purified by TCA acetone precipitation in 200 μL of the equimolar mixture of peptide fractions A1 and A2 obtained by the gel filtration fraction obtained in Reference Example 1 and solid phase extraction purification. After electrophoresis by 2D-PAGE, silver staining is performed. went. There is not much difference in the amount of the thick band around the molecular weight of 40 kDa between the samples of the
次に、試験区2の2D−PAGEゲルから、図7で示す矢印のバンドを切り出し、トリプシン(ProteaseMAX(商標) Surfactant, Trypsin Enhancer、プロメガ社製)を用いてタンパク質を消化した。得られたトリプシン消化ペプチド溶液を四重極-飛行時間型質量分析装置(SCIEX社製)を用いてMS/MSスペクトルを取得し、SWISS−PROTに登録されているデータベースを用いてタンパク質の同定を行った。
Next, the band indicated by the arrow in FIG. 7 was cut out from the 2D-PAGE gel in
四重極-飛行時間型質量分析装置によるタンパク質同定の結果は表10に示される通りであった。
ゲル濾過画分(画分A1〜A2)中のタンパク質としては、α−アミラーゼ/トリプシンインヒビターCMa、α−アミラーゼ/トリプシンインヒビターCMb、α−アミラーゼ/トリプシンインヒビターCMd、トリプシンインヒビターCMe、α−アミラーゼ・インヒビター(BDAI-1)、非特異的脂質転移タンパク1(non-specific lipid-transfer protein 1)およびアベニン・ライクa1が同定された。なお、同定されたタンパク質はオオムギ(Hordeum vulgare)由来、および一部、小麦(Triticum aestivum)由来のタンパク質として同定された。α−アミラーゼ/トリプシンインヒビターCMa、α−アミラーゼ/トリプシンインヒビターCMb、α−アミラーゼ/トリプシンインヒビターCMd、トリプシンインヒビターCMeは、プロテアーゼ阻害タンパク質として知られており、α−アミラーゼ・インヒビター(BDAI-1)はαアミラーゼ阻害蛋白質として知られる。また、non-specific lipid-transfer protein 1は、脂質転移タンパク質として知られている。
Proteins in the gel filtration fraction (fractions A1 to A2) include α-amylase / trypsin inhibitor CMa, α-amylase / trypsin inhibitor CMb, α-amylase / trypsin inhibitor CMd, trypsin inhibitor CMe, α-amylase inhibitor (BDAI-1), non-specific lipid-
実施例4:限外濾過および硫安沈殿により調製されたペプチドのビールテイスト発酵アルコール飲料への添加と官能評価
本実施例では大規模生産に適したペプチドの調製方法と官能評価に及ぼす影響について検討した。
Example 4: Addition of peptides prepared by ultrafiltration and ammonium sulfate precipitation to beer-taste fermented alcoholic beverages and sensory evaluation In this example, the preparation method of peptides suitable for large-scale production and the effect on sensory evaluation were examined. .
A:ペプチド画分の調製
(A−1)限外濾過による分画
市販品(オールモルトビール)をガス抜きしたうえで、限外濾過膜(分画分子量;6000、AIP−1013D、旭化成社製)によりペプチドの濃縮および分画を行った。具体的には、オールモルトビールを約4倍濃縮して濃縮液を回収し、凍結乾燥した。次いで、乾燥物を市販品の6倍濃度となるように超純水で復水した後、分画分子量6000〜8000の透析膜Spectra/Por1(Spectrum Laboratories社製、以下同様)により透析した。
A: Preparation of peptide fraction (A-1) Fractionation by ultrafiltration After degassing a commercial product (all malt beer), ultrafiltration membrane (fractional molecular weight; 6000, AIP-1013D, manufactured by Asahi Kasei Co., Ltd.) ) To concentrate and fractionate the peptides. Specifically, all-malt beer was concentrated about 4 times, and the concentrated solution was collected and lyophilized. Next, the dried product was condensed with ultrapure water so that the concentration was 6 times that of a commercially available product, and then dialyzed with a dialysis membrane Spectra / Por1 (manufactured by Spectrum Laboratories, the same applies below) having a molecular weight cut off of 6000 to 8000.
(A−2)硫安沈殿によるペプチドの分離
上記(A−1)で得られた溶液について40%飽和硫安沈殿を行うことにより、0〜40%飽和硫安沈殿物を得た。沈殿物を超純水に溶解し、透析膜Spectra/Por1により透析し塩を十分に除去した。次いで、凍結乾燥を行い超純水に溶解してペプチドの濃縮液を得た。濃縮液について、10〜20kDaのペプチドが主成分となっていることをSDS−PAGE電気泳動の染色画像により確認した(データ示さず)。
(A-2) Separation of peptides by ammonium sulfate precipitation The solution obtained in (A-1) above was subjected to 40% saturated ammonium sulfate precipitation to obtain 0 to 40% saturated ammonium sulfate precipitate. The precipitate was dissolved in ultrapure water and dialyzed with a dialysis membrane Spectra / Por1 to sufficiently remove salts. Subsequently, freeze-drying was performed, and the concentrate was dissolved in ultrapure water to obtain a peptide concentrate. About the concentrate, it confirmed that the peptide of 10-20 kDa became a main component by the staining image of SDS-PAGE electrophoresis (data not shown).
B:試飲サンプルの調製
サンプル番号2(試醸品)に実施例2.Aに記載された方法を用いて市販のオールモルトビールから精製した10〜20kDaペプチド画分を添加し、サンプル番号7(添加品3)を調製した。また、サンプル番号2(試醸品)に上記Aで得られた10〜20kDaペプチド画分を添加し、サンプル番号8(添加品4)を調製した。具体的には、添加品3および4の10〜20kDaペプチド比率が5.5%となるように各ペプチド画分を添加した。試飲サンプルと、ペプチドの量および比率並びにα−グルカンの量の対応関係は表11に記載した。
B: Preparation of tasting sample Example 2. Sample No. 7 (Additive 3) was prepared by adding a 10-20 kDa peptide fraction purified from commercially available all malt beer using the method described in A. Moreover, the 10-20 kDa peptide fraction obtained by said A was added to the sample number 2 (trial product), and the sample number 8 (added product 4) was prepared. Specifically, each peptide fraction was added so that the 10-20 kDa peptide ratio of
C:官能評価
サンプル番号2および上記Bで得られたサンプル番号7および8(添加品)について、4名の訓練されたパネラーによって実施例1.Eの記載に従って官能評価を実施した。各サンプルの官能評価結果は表11に示される通りであった。
C: For sensory
表11に示される通り、10〜20kDaペプチドを添加していない飲料(サンプル番号2)と比べ、限外濾過と硫安沈殿を組み合わせて得られた10〜20kDaペプチドを添加した飲料(サンプル番号8)では、ゲル濾過分画と固相抽出により得られた10〜20kDaペプチドを添加した飲料(サンプル番号7)と同様に、「味のスムーズさ」および「味の持続性」が向上することが確認された。 As shown in Table 11, compared with a beverage not added with 10-20 kDa peptide (sample number 2), a beverage added with 10-20 kDa peptide obtained by combining ultrafiltration and ammonium sulfate precipitation (sample number 8) Confirms that “taste smoothness” and “taste sustainability” are improved in the same manner as the beverage (sample number 7) to which the 10-20 kDa peptide obtained by gel filtration fractionation and solid phase extraction was added. It was done.
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