JP2021512853A

JP2021512853A - ファーバー病を処置するための方法

Info

Publication number: JP2021512853A
Application number: JP2020539252A
Authority: JP
Inventors: ガウケル，エリック; サムピー，ブラント
Original assignee: エンジーヴァントセラピューティックスゲーエムベーハー
Priority date: 2018-02-02
Filing date: 2019-01-31
Publication date: 2021-05-20
Also published as: CA3088225A1; JP2023113809A; AU2019214519A1; IL276284A; BR112020015003A2; SG11202006506TA; CL2020001856A1; KR20200118011A; US20190240298A1; PH12020551146A1; WO2019150192A1; EP3746115A1; CN112703010A; RU2020118032A; US20230123505A1; MX2020007501A

Abstract

特定の用量および薬物動態プロファイルを使用してファーバー病を処置する方法を開示する。
【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年２月２日に提出された米国仮出願第６２／６２５，７６３号の利益と優先権を主張し、その主題は参照により本明細書に組み込まれる。

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１９年１月１７日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーの名称は、ＲＶＴ−８０１−００６ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔとであり、サイズは１１，３６３バイトである。

リソソーム蓄積障害（ＬＳＤ）であるファーバー病は、１９５２年に１４ヶ月の乳児で最初に記述された病態で、複数の関節に肉芽腫性病変があり、脂質蓄積の証拠が見られる。その後の１０年間にわたり、他の同様の症例が記述されたが、その全てが同様の病変を示し、喉頭に病変が存在するために特徴的な「かすれた」泣き声または声を示すことが多かった。これらの患者の一部には、肺、肝臓、脾臓、および中枢神経系（ＣＮＳ）を含む他の臓器系の関与も着目された。

以前は、ファーバー病患者の処置は対症療法であり、主に痛みを軽減することを目的としていた。造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）は限られた数の患者で行われており、移植手順自体が成功したとの条件において、全体として結果は良好である。移植に成功した患者は、痛みの大幅な軽減、運動性および可動性の増加を示し、いくつかの場合では、皮下結節の縮小および完全な解消を示す。しかしながら、移植を成功させるには組織適合性のドナー細胞が必要であり、患者を侵襲的かつ潜在的に危険な免疫抑制レジメンに曝露させる。ＨＳＣＴの１つの代替物は、自己ドナー細胞に、治療用タンパク質を発現するベクターを形質導入し、組織適合性ドナーの必要性を排除する遺伝子治療である。この手法は、ファーバー病のノックインマウスモデルで評価されており、組織セラミドの減少およびマクロファージの浸潤をもたらした。しかしながら、ファーバー病を処置するための改善された処置法が引き続き必要とされている。

重度のファーバー病のマウスモデルの以前の研究では、組換えヒト酸性セラミダーゼ（「ｒｈＡＣ」）の幅広い治療用量範囲が確立されており、蓄積した組織セラミドの減少および炎症性サイトカインの減少に基づき、効果が特徴付けられた。２０１８年１月１２日に提出された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１８／１３５０９号（２０１８年７月１８日にＷＯ２０１８／１３２６６７として公開）およびＨｅｅｔａｌ．，２０１７（Ｆｅｂ．），“ＥｎｚｙｍｅｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｔｈｅｒａｐｙｆｏｒＦａｒｂｅｒｄｉｓＰｒｏｏｆ−ｏｆ−ｃｏｎｃｅｐｔｓｔｕｄｉｅｓｉｎｃｅｌｌｓａｎｄｍｉｃｅ，”ＢＢＡＣｌｉｎ．１３（７）：８５−９６は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

しかしながら、これらの研究は曝露目標を確立しなかった。重度のファーバー病のマウスモデルでの非臨床試験中に決定された治療用量からヒト等価用量（ＨＥＤ）を予測するには、酵素の薬物動態（「ＰＫ」）および組織分布（「ＴＤ」）の理解が必要である。本主題は、本明細書で論じるようにそのようなニーズを満たす。

幼若で健康なＣＤ−１マウスは、ファーバーマウス（本説明および実施例で使用されるファーバー病マウスモデル）の親系統とみなされる。図３は、幼若ＣＤ−１マウスｒｈＡＣ（ＲＶＴ−８０１）の薬物動態プロファイルが、循環中のファーバーマウス実験ｒｈＡＣ活性プロファイルと同様であることを示している。これは、幼若ＣＤ−１マウスが、ファーバーマウスＰＫの適切な近似を提供することを示しており、したがって、ファーバーマウスは脆弱であり、交配が難しく、十分なＰＫ評価を行うのに十分な数がないので、ＲＶＴ−８０１のマウス薬物動態を特徴付けるためにＣＤ−１マウスを使用した。

したがって、少数のファーバーマウスに基づき、かつ、系統間の限られた重複データポイントを用いて、本明細書の説明および実施例で報告されるデータにより、ＣＤ−１マウスにおける全身ｒｈＡＣ（例えば、ＲＶＴ−８０１）曝露が、ファーバーマウスにおける曝露と近似しており、ＲＶＴ−８０１の単回用量を腹腔内投与した後にファーバーマウスにおけるｒｈＡＣの最小全身レベルを表し得ることが示唆される。

本説明および実施例には、組換えヒトＡＣ（例えば、ＲＶＴ−８０１）が、ファーバー病マウスモデル（例えば、肝臓、脾臓、および肺）においてセラミド蓄積に関連する組織に広く分布することが示されている。したがって、組換えヒトＡＣ（例えば、ＲＶＴ−８０１）の全身レベルの測定は、ファーバー病に罹患しているヒト対象の関連組織における曝露を過小評価し得る。したがって、非臨床種での用量をヒトに対してスケール調整する（ｓｃａｌｅ）ために単純なアロメトリーに依存することは、有効性を与えるための組織曝露を適切に推定することができない場合がある。

非臨床種とヒトとの間の投与量のスケール調整についての米国食品医薬品局（「ＦＤＡ」）のガイダンスに基づくヒト等価用量（ＨＥＤ）推定値は、体表面積（「ＢＳＡ」）に基づいており（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｒｕｇＥｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄＲｅｓｅａｒｃｈ（ＣＤＥＲ），２００５，“ＧｕｉｄａｎｃｅｆｏｒＩｎｄｕｓｔｒｙ．ＥｓｔｉｍａｔｉｎｇｔｈｅＭａｘｉｍｕｍＳａｆｅＳｔａｒｔｉｎｇＤｏｓｅｉｎＩｎｉｔｉａｌＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓｆｏｒＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｉｎＡｄｕｌｔＨｅａｌｔｈｙＶｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．”ｐｐ．１−３０）、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。しかしながら、本明細書に記載のＨＥＤ推定値手法は、血管系から組織への主要な除去メカニズムを含むがこれに限定されない、生理学的要因も考慮に入れる。

本明細書で報告されるマウスにおけるデータは、肝臓および脾臓が全身投与後のＲＶＴ−８０１の取り込みの主要な標的組織であることを示している。

ＨＥＤは、ＢＳＡスケール調整ならびにマウスおよびヒトにおける組織質量と体重（「ＢＷ」）との比率を組み合わせることによって導出されてもよい。このようにして、各種における組換えヒトＡＣ（ＲＶＴ−８０１）分布の各区画の相対的サイズを説明する、用量スケール調整係数（ｄｏｓｅｓｃａｌｉｎｇｆａｃｔｏｒ）を得ることが可能である。ＢＳＡおよび組織：ＢＷ戦略を使用した組み合わせのＨＥＤ推定値を表１に示す。

本説明および実施例に従い、一実施形態では、ファーバー病を有するヒト成人対象を処置する方法であって、約０．８ｍｇ／ｋｇの用量の組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）をヒト対象に投与することを含む、方法が提供される。

一実施形態では、ファーバー病を有するヒト小児を処置する方法であって、約１．２ｍｇ／ｋｇの用量の組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を小児に投与することを含む、方法がまた提供される。

一実施形態では、ファーバー病を有するヒト小児を処置する方法であって、約２ｍｇ／ｋｇの用量の組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を小児に投与することを含む、方法がまた提供される。

一実施形態では、ファーバー病を有するヒト小児を処置する方法であって、約５ｍｇ／ｋｇの用量の組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を小児に投与することを含む、方法がまた提供される。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量の組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）をヒト対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、本明細書に開示されるように、約０．２５〜１．０時間のＴ_ｍａｘ、約１．２３〜約２．１７μｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘ、または約１．３７時間＊μｇ／ｍＬ〜約１．４９時間＊μｇ／ｍＬ（または約１時間＊μｇ／ｍＬ〜約２時間＊μｇ／ｍＬ）の曲線下面積（ＡＵＣ）のうちの１つ以上を生じさせる。ファーバーマウスでの最大有効用量（ＭＥＤ）は、ボーラスＩＰ注射により送達された１０ｍｇ／ｋｇと決定された。同齢の野生型ＣＤ−１マウスへの１０ｍｇ／ｋｇの単回投与後に決定されるＡＵＣ_ｌａｓｔの値は、１．３７μｇ．ｈ／ｍＬであり、Ｃ_ｍａｘは１．２３μｇ／ｍＬであり得る。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、ＡＵＣ_肝臓：ＡＵＣ_血清、ＡＵＣ_脾臓：ＡＵＣ_血清、ＡＵＣ_肺：ＡＵＣ_血清、ＡＵＣ_腎臓：ＡＵＣ_血清、ＡＵＣ_心臓：ＡＵＣ_血清について１より大きい比率を生じさせる。理論に束縛されることなく、これらの組織へのｒｈＡＣ（ＲＶＴ−８０１）の分布は、薬物処置の全般的有効性に関して重要であると考えられる。ＲＶＴ−８０１のグリコシル化が、これらの疾患に罹患した組織への薬物の取り込みにおける役割を果たし、したがって、ｒｈＡＣ処置の有効性にプラスの影響を与える可能性がある。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、約９２．９のＡＵＣ_肝臓：ＡＵＣ_血清比、約４７．６のＡＵＣ_脾臓：ＡＵＣ_血清比、約５．６４のＡＵＣ_肺：ＡＵＣ_血清比、約１７．３のＡＵＣ_腎臓：ＡＵＣ_血清比、約２．６９のＡＵＣ_心臓：ＡＵＣ_血清比、約０．５７５のＡＵＣ_全血：ＡＵＣ_血清比、約０．０２８１のＡＵＣ_脳：ＡＵＣ_血清、または約０．０００１６５のＡＵＣ_ＢＡＬＦ：ＡＵＣ_血清比（ＢＡＬＦは気管支肺胞洗浄液である）のうちの１つ以上を生じさせる。いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、ＡＵＣ_肝臓：ＡＵＣ_血清、ＡＵＣ_脾臓：ＡＵＣ_血清、ＡＵＣ_肺：ＡＵＣ_血清、ＡＵＣ_腎臓：ＡＵＣ_血清、ＡＵＣ_心臓：ＡＵＣ_血清について１より大きい比率を生じさせる。

理論に束縛されることなく、これらの組織へのｒｈＡＣ（ＲＶＴ−８０１）の分布は、薬物処置の全般的有効性に関して重要であると考えられる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、約０．２５〜１．０時間のＴ_ｍａｘを生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、約１．２３μｇ／ｍＬ〜２．１７μｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘを生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、約１．３７〜１．４９＊μｇ／ｍＬのＡＵＣを生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣをヒト対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、図７に示されている値に従った、組織またはマトリックスでのＣ_ｍａｘまたはＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}もしくはＡＵＣ_組織／ＡＵＣ_血清を生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、肝臓組織での約１３８時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}を生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、肝臓組織での１３μｇ／ｍＬの薬物に対するＣ_ｍａｘを生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、脾臓組織での約７０．９時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}を生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、脾臓での約７．５８μｇ／ｍＬの薬物に対するＣ_ｍａｘを生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、腎臓組織での約２５．８時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}を生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量の（ｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、腎臓組織での約２．６１μｇ／ｍＬの薬物に対するＣ_ｍａｘを生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、心臓組織での約４．０１時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}を生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、心臓組織での約０．３６２μｇ／ｍＬの薬物に対するＣ_ｍａｘを生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、脳組織での約０．０４１９時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}を生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、脳での約０．１４７μｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘを生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、血液での約０．８５８時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}を生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、脳での約１．２３μｇ／ｍＬの薬物に対するＣ_ｍａｘを生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量の組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）をヒト対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、ＢＡＬＦでの約０．０００２４５時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}を提供する。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、ＢＡＬＦでの約０．００１９６μｇ／ｍＬの薬物に対するＣ_ｍａｘを生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、肺組織での約８．４時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}を生じさせる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣ（すなわち、ＲＶＴ−８０１）を腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られる薬物動態プロファイルに基づいて決定され得る、治療有効用量のｒｈＡＣを対象に投与することを含み得、ｒｈＡＣは、健康なＣＤ−１マウスにおいて、肺組織での約１．４２μｇ／ｍＬの薬物に対するＣ_ｍａｘを生じさせる。

追加の目的および利点は、一部は以下の説明に記載されており、一部は該説明から明らかであるか、または実施することによって知り得る。目的および利点は、添付の特許請求の範囲で特に指摘される構成要素および組み合わせによって実現および達成される。

前述の一般的な説明および以下の詳細な説明の両方は、例示および説明だけのものであり、特許請求の範囲を限定するものではないことを理解されたい。

本明細書に組み込まれ、その一部を構成する付随する図面は、１つ（いくつか）の実施形態（複数可）を例示し、本説明とともに、本明細書で記載される原理を説明するのに役立つ。

実施例１に従って、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇの用量のＲＶＴ−８０１を単回注射した後の、ＲＶＴ−８０１で処置されたファーバー病マウスと同齢の健康な幼若ＣＤ−１マウスにおける血清ＲＶＴ−８０１レベルの経時変化を示す。実施例１に従って、１、３および１０ｍｇ／ｋｇの用量でＲＶＴ−８０１の単回注射した後の健康な幼若ＣＤ−１マウスにおける血清ＲＶＴ−８０１の薬物動態測定基準を列挙する。実施例１に従って、１０ｍｇ／ｋｇの用量のＲＶＴ−８０１を単回注射した後の、健康な同齢のＣＤ−１マウス血清中のＲＶＴ−８０１濃度およびファーバー病マウスの血漿中のｒｈＡＣ活性を示し、ファーバーマウスと同齢の親ＣＤ−１系統マウスの薬物動態プロファイとの間で同等であることを示している。実施例２に従って、１０ｍｇ／ｋｇの用量の血清ＲＶＴ−８０１を単回注射した後の、健康な幼若ＣＤ−１マウスの血清および様々な組織（肝臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、および脳）におけるＲＶＴ−８０１濃度の経時変化を示す。実施例２に従って、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇの用量のＲＶＴ−８０１を単回注射した後の、健康な幼若ＣＤ−１マウスの肝臓組織におけるＲＶＴ−８０１濃度の時間経過を示す。実施例２に従って、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇの用量のＲＶＴ−８０１を単回注射した後の、健康な幼若ＣＤ−１マウスの脾臓組織におけるＲＶＴ−８０１濃度の時間経過を示す。実施例２に従って、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇの用量のＲＶＴ−８０１を単回注射した後の、健康な幼若ＣＤ−１マウスの血清、全血、肝臓組織抽出物、および脾臓組織におけるＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}を比較する。実施例２に従って、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇの用量のＲＶＴ−８０１を単回注射した後の、健康な幼若ＣＤ−１マウスの血清ならびに肝臓および脾臓組織におけるＲＶＴ−８０１濃度から計算されたＡＵＣ_組織／ＡＵＣ_血清ＡＵＣ比を示す。実施例２に従って、１０ｍｇ／ｋｇの用量のＲＶＴ−８０１を単回注射した後の、健康な幼若ＣＤ−１マウスの血清、全血、および様々な組織抽出物（肝臓、脾臓、腎臓、肺、心臓、脳、および気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）におけるＲＶＴ−８０１濃度から計算したＣ_ｍａｘ、ＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、およびＡＵＣ_組織／ＡＵＣ_血清を示す。実施例２に従って、１０ｍｇ／ｋｇの用量のＲＶＴ−８０１を単回注射した後の、健康な幼若ＣＤ−１マウスの様々な組織におけるＡＵＣ_組織／ＡＵＣ _血清の組織分布および比較を示す。実施例３に従って、ファーバーマウスの肝臓および脾臓における蓄積されたセラミドの減少に関する、１０ｍｇ／ｋｇのＭＥＤから推定される体表面積（ＢＳＡ）によってスケール調整された推定ヒト等価用量（ＨＥＤ）を示す。実施例３に従って、肝臓および脾臓における蓄積されたセラミドの減少に関して、ファーバーマウスでの１０ｍｇ／ｋｇのＭＥＤから推定される組織対体重比によりスケール調整された組織特異的ＨＥＤを示す。実施例３に従って、（１）ＢＳＡに基づくＨＥＤ計算、および（２）組織対体重比に基づくＨＥＤ計算の両方の結果を示す。本出願におけるＲＶＴ−８０１のＨＥＤの実施形態と承認された酵素補充療法（ＥＲＴ）の投与との比較を示す。ＲＶＴ−８０１を単回または毎週反復で１０ｍｇ／ｋｇ投与した後の、ファーバーマウスの肝臓、脾臓、および腎臓における平均ｒｈＡＣ濃度−時間データを示す。ＲＶＴ−８０１を単回１０ｍｇ／ｋｇ投与した後の、健康な同齢ＣＤ−１マウスにおけるｒｈＡＣ血清濃度およびファーバーマウスにおける酸性セラミダーゼ血漿活性に関するデータを示す。ＲＶＴ−８０１を単回１０ｍｇ／ｋｇ投与した後の、健康な幼若ＣＤ−１マウスにおける最終ｒｈＡＣ組織：血清ＡＵＣ比を示す。ＣＤ−１およびファーバーマウスにＲＶＴ−８０１の単回１０ｍｇ／ｋｇＩＰボーラス注射した後の循環中のｒｈＡＣを示す。ＣＤ−１およびファーバーマウスにＲＶＴ−８０１を単回１０ｍｇ／ｋｇボーラスＩＰ注射した後の循環中および主要組織におけるｒｈＡＣ濃度を示す。ＲＶＴ−８０１を単回１０ｍｇ／ｋｇボーラスＩＰ注射した後の、（ファーバー（白抜きの記号）および同齢ＣＤ−１（黒塗りの記号））マウスの肝臓（図１８Ａ）、脾臓（図１８Ｂ）、腎臓（図１８Ｃ）、肺（図１８Ｄ）、および心臓（図１８Ｅ）における、個々のｒｈＡＣ濃度−時間データを示す（１時点あたりｎ＝３）。実施例５に従って、ボーラスＩＰ注射により投与されたＲＶＴ−８０１の単回１０ｍｇ／ｋｇ投与後または１０ｍｇ／ｋｇ／投与での週１回の複数回投与後のいずれかのファーバーマウス（白抜きの記号）および同齢ＣＤ−１マウス（黒塗りの記号）の循環（図１９Ａ）、肝臓（図１９Ｂ）、脾臓（図１９Ｃ）、腎臓（図１９Ｄ）、心臓（図１９Ｅ）、肺（図１９Ｆ）、およびの脳（図１９Ｇ）組織における平均ｒｈＡＣ濃度を示す。それぞれ、ＲＶＴ−８０１−９０１３パートＢにおける幼若ＣＤ−１マウスへのＩＰ投与後の平均ｒｈＡＣ組織濃度−時間プロファイルを示す（線形図２０Ａおよび対数線形図２０Ｂ）。幼若ＣＤ−１マウスに１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１を単回投与した後の、ＡＵＣ_ｌａｓｔに基づくＢＡＬＦ、血液、脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、および脾臓におけるＲＶＴ−８０１組織：血清曝露比を示す。幼若ＣＤ−１マウスに１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇの用量のＲＶＴ−８０１をＩＰ投与した後の様々な組織について、投与レベルに対してプロットされた用量正規化ＡＵＣを示す。

配列の説明

本明細書で使用する場合「ａ」または「ａｎ」という用語は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、「少なくとも１つ」または「１つ以上」を意味する。

本明細書で使用する場合「約」という用語は、数値が概算であり、小さな変動が開示された実施形態の実施に大きな影響を及ぼさないことを意味する。数値の限定が使用される場合、文脈によってそうでないことが示されない限り、「約」は、数値が±１０％変動し、開示された実施形態の範囲内に留まり得ることを意味する。

本明細書で使用する場合「酸性スフィンゴミエリナーゼ活性」または「ＡＳＭ活性」は、ＡＣに強く結合し、該ＡＣと共精製する、関連する脂質ヒドロラーゼを指す（Ｂｅｒｎａｒｄｏ，Ｋ．，Ｒ．Ｈｕｒｗｉｔｚ，Ｔ．Ｚｅｎｋ，Ｒ．Ｊ．Ｄｅｓｎｉｃｋ，Ｋ．Ｆｅｒｌｉｎｚ，Ｅ．Ｈ．Ｓｃｈｕｃｈｍａｎ，ａｎｄＫ．Ｓａｎｄｈｏｆｆ，１９９５，“Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｈｕｍａｎａｃｉｄｃｅｒａｍｉｄａｓｅ，”ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２７０：１１０９８−１１１０２）。

本明細書で使用する場合「動物」という用語は、ヒト、ならびに野生動物、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｉｍａｌ）、および家畜（ｆａｒｍａｎｉｍａｌ）などの非ヒト脊椎動物を含むが、これらに限定されない。動物は「対象」とも称し得る。

本明細書で使用する場合「担体」という用語は、化合物と共に投与される希釈剤、補助剤（ａｄｊｕｖａｎｔ）、または賦形剤を意味する。薬学的担体は、水および油などの液体であり得、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの石油、動物、植物または合成起源のものを含む。薬学的担体はまた、生理食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイドシリカ、尿素などであり得る。さらに、補助剤（ａｕｘｉｌｉａｒｙ）、安定剤、増粘剤、潤滑剤、および着色剤を使用することができる。

本明細書で使用する場合「小児」とは、新生児から１８歳までの年齢を指す。

本明細書で使用する場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含まれる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」などの任意の形式の含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ））、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」（ならびに「有する（ｈａｖｅ）」および「有する（ｈａｓ）」などの任意の形式の有する（ｈａｖｉｎｇ））、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」や「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」などの任意の形式の含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ））、または「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」や「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」などの任意の形式の包む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ））は、包括的またはオープンエンドであり、追加の示されていない要素または方法工程を除外しない。さらに、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と併せて使用される用語は、「からなる」または「本質的にからなる」という用語と併せて使用できることが理解される。

本明細書で使用する場合「接触させる」という用語は、インビトロ系またはインビボ系において２つの要素を引き合わせることを意味する。例えば、個体、対象、または細胞へｒｈＡＣポリペプチドを「接触させる」ことは、ポリペプチドをヒトなどの個体または患者に投与すること、ならびに例えば、化合物をポリペプチドを含む細胞または精製された調製物を含む試料に導入することを含む。さらに、接触させることは、ポリペプチドをコードする核酸分子で細胞をトランスフェクトすることまたは感染させることを指し得る。

本明細書で使用する場合、「ファーバーマウス（Ｆａｒｂｅｒｍｏｕｓｅ）」、「ファーバーマウス（Ｆａｒｂｅｒｍｉｃｅ）」、「ファーバー病マウス（Ｆａｒｂｅｒｄｉｓｅａｓｅｍｉｃｅ）」、および「ファーバー病マウス（Ｆａｒｂｅｒｄｉｓｅａｓｅｍｏｕｓｅ）」は、重度のファーバー病マウスモデル（Ａｓａｈ１^{Ｐ３６１Ｒ／Ｐ３１Ｒ６}）を意味する。ファーバーマウスは、重度のファーバー病患者の遺伝子型に基づくマウスモデルである。前述されているようにして（Ａｌａｙｏｕｂｉ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｃ．Ｗａｎｇ，Ｂ．Ｃ．Ａｕ，Ｓ．Ｃａｒｐｅｎｔｉｅｒ，Ｖ．Ｇａｒｃｉａ，Ｓ．Ｄｗｏｒｓｋｉ，Ｓ．Ｅｌ−Ｇｈａｍｒａｓｎｉ，Ｋ．Ｎ．Ｋｉｒｏｕａｃ，Ｍ．Ｊ．Ｅｘｅｒｔｉｅｒ，Ｚ．Ｊ．Ｘｉｏｎｇ，Ｇ．Ｇ．Ｐｒｉｖｅ，Ｃ．Ｍ．Ｓｉｍｏｎａｒｏ，Ｊ．Ｃａｓａｓ，Ｇ．Ｆａｂｒｉａｓ，Ｅ．Ｈ．Ｓｃｈｕｃｈｍａｎ，Ｐ．Ｖ．Ｔｕｒｎｅｒ，Ｒ．Ｈａｋｅｍ，Ｔ．Ｌｅｖａｄｅ，ａｎｄＪ．Ａ．Ｍｅｄｉｎ，２０１３，Ｓｙｓｔｅｍｉｃｃｅｒａｍｉｄｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｌｅａｄｓｔｏｓｅｖｅｒｅａｎｄｖａｒｉｅｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ＥＭＢＯＭｏｌＭｅｄ，５：８２７−８４２）、重度のファーバー病患者の遺伝子型に基づき、単一ヌクレオチドＡｓａｈ１^{Ｐ３６１Ｒ／Ｐ３６１Ｒ}変異についてホモ接合であるノックインマウスは、重度のファーバー病のマウスモデルを確立するために混合した遺伝的背景のコロニー（Ｗ４／１２９Ｓｖ／ＣＤ−１）（「ＣＤ−１マウス」）から導出された。ファーバーマウスは、Ａｓａｈ１遺伝子での単一ヌクレオチド変異についてホモ接合であるノックインマウスで確立されている。ファーバー（Ａｓａｈ１^{Ｐ３６１Ｒ／Ｐ３１Ｒ６}）マウスは、セラミドをそれらのスフィンゴシンおよび脂肪酸成分に加水分解できない、変更されたＡＣを生成する。これらのファーバーマウスは、野生型（Ａｓａｈ１^{ＷＴ／ＷＴ}）またはヘテロ接合（Ａｓａｈ１^{ＷＴ／Ｐ３６１Ｒ}）同腹子と比較して有意に阻害された発育速度および短い寿命と共に、骨形成破壊および関節内組織の形態変化（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）、脂質担持マクロファージの存在、ならびに全身性炎症を含む、臨床的なファーバー病に特徴的な特性を示す。

対象に送達される酵素の「有効量」は、ファーバー病の臨床経過を改善するのに十分な量であり、臨床的改善は、当業者に周知の様々な定義されたパラメータのいずれかによって測定される。

本明細書で使用する場合、「対象」、「個体」、または「患者」という用語は、互換的に使用され、マウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、またはヒトなどの霊長類などの哺乳動物を含む、任意の動物を意味する。

本明細書で使用する場合「それを必要とする」という語句は、対象が特定の方法または処置を必要としていると同定されることを意味する。いくつかの実施形態では、同定は、任意の診断手段によるものであり得る。本明細書に記載の方法および処置のいずれかにおいて、対象はそれを必要とし得る。

本明細書で使用する場合「Ｘ〜Ｙの整数」という語句は、端点を含む任意の整数を意味する。例えば、「１〜５の整数」という語句は、１、２、３、４、または５を意味する。

本明細書で使用する場合「単離された」という用語は、本明細書に記載の化合物が、従来の技術などによって、（ａ）植物もしくは細胞などの天然供給源、または（ｂ）合成有機化学反応混合物のいずれかの他の成分から分離されることを意味する。

本明細書で使用する場合「哺乳動物」という用語は、げっ歯類（すなわち、マウス、ラット、またはモルモット）、サル、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、またはヒトを意味する。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。

本明細書で使用する場合「薬学的に許容される」という語句は、健全な医学的判断の範囲内で、ヒトおよび動物の組織との接触での使用に好適な化合物、材料、組成物、および／または剤形を意味する。いくつかの実施形態では、「薬学的に許容される」は、動物、より具体的にはヒトでの使用のために、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって承認されているか、または米国薬局方もしくは他の一般的に認められている薬局方に列挙されていることを意味する。

本明細書で使用する場合「血清」という用語は、「血清」、「血漿」、または「全血」を含むがこれらに限定されない、任意の血液由来のマトリックスを意味する。

本明細書で使用する場合「実質的に単離された」という語句は、化合物が形成または検出される環境から少なくとも部分的または実質的に分離されている化合物を意味する。

本明細書で使用する場合「治療有効量」という語句は、研究者、獣医、医師、または他の臨床医によって組織、系、動物、個体、またはヒトにおいて求められている生物学的または医学的応答を生じさせる活性化合物または医薬品の量を意味する。治療効果は、処置される障害または所望の生物学的効果に依存する。したがって、治療効果は、障害に関連する症状の重症度の低下および／もしくは障害の進行阻害（部分的もしくは完全）、または障害もしくは副作用効果の改善された処置、治癒、予防、もしくは排除であり得る。治療応答を生じさせるために必要な量は、対象の年齢、健康状態、サイズ、および性別に基づいて決定することができる。最適な量はまた、処置に対する対象の応答のモニタリングに基づいて決定することができる。

当業者に既知の任意の方法を使用して、疾患状態および治療の有効性をモニタリングしてもよい。疾患状態の臨床モニターには、セラミドレベル、体重、関節の長さ、炎症、またはファーバー病に関連することが既知である任意の他の臨床表現型が含まれてもよいが、これらに限定されない。

本明細書で使用される、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置された（ｔｒｅａｔｅｄ）」、または「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、目的が望ましくない生理学的状態、障害、もしくは疾患を抑制する（軽減する）か、または有益もしくは所望の臨床的結果を得ることである、治療的処置および予防的手段の両方を意味する。例えば、有益なまたは所望の臨床結果には、症状の緩和；状態、障害、もしくは疾患の程度の減少；状態、障害、もしくは疾患状態の安定（すなわち悪化していない）状態；状態、障害、もしくは疾患の進行の開始遅延または減速；検出可能かもしくは検出不能かに関わらず、状態、障害、もしくは疾患状態の緩和、または寛解（部分的または全体的のいずれでも）；必ずしも患者が認識できるとは限らない、少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善；あるいは状態、障害、もしくは疾患の改善増強または改善が含まれるが、これに限定されない。したがって、「ファーバー病の処置」または「ファーバー病を処置すること」は、ファーバー病または本明細書に記載の他の状態に関連する一次事象または二次症状のいずれかを緩和または改善する活動を意味する。

さらに、明確にするために別々の実施形態の文脈で記載されている本明細書に記載の特定の特徴は、組み合わせて単一の実施形態で提供することもできることを理解されたい。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で記載されている様々な特徴は、別々に、または任意の好適なサブコンビネーションで提供することもできる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を処置する方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象は、それを必要とする対象である。いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、ファーバー病と診断されている。いくつかの実施形態では、対象はまた、以下を有すると同定される：１）皮下結節、２）白血球、培養皮膚線維芽細胞、または対照値の３０％未満の他の生物学的供給源（例えば血漿）の酸性セラミダーゼ活性値、ならびに／または３）バイオインフォマティクス、遺伝子発現研究、および／または他の方法を介して、酸性セラミダーゼタンパク質の機能喪失の可能性を示す、酸性セラミダーゼ遺伝子（ＡＳＡＨ１）の両方の対立遺伝子内のヌクレオチド変化。いくつかの実施形態では、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するかまたは有している疑いのある対象において脂肪肉芽腫を軽減する方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象は、それを必要とする対象である。いくつかの実施形態では、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有しているかまたは有している疑いのある対象において絶対的または正規化脾臓重量を低下させる方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象は、それを必要とする対象である。いくつかの実施形態では、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するかまたは有している疑いのある対象においてセラミドレベルを低下させる方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象は、それを必要とする対象である。いくつかの実施形態では、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

セラミドの低下は、セラミドの減少、またはセラミドレベルの低下をもたらすセラミドの代謝の増加を指すこともできる。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有するかまたは有している疑いのある対象においてスフィンゴシンレベルを増加させる方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象は、それを必要とする対象である。いくつかの実施形態では、方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

本明細書には様々な医薬組成物が記載されており、患者および医師の好みに基づいて使用することができる。しかしながら、いくつかの実施形態では、医薬組成物は溶液である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ｒｈＡＣを含む細胞馴化培地を含む。本明細書で使用する場合「細胞馴化培地」という用語は、ｒｈＡＣを発現する細胞を培養するために使用される細胞培養培地を指し、タンパク質が培地に分泌され、次いでタンパク質が培地から単離または精製される。いくつかの実施形態では、対象を処置するために、培地が使用される。培地は、例えば、本明細書に記載の状態、症状、または障害のいずれかを処置するために対象の皮膚に適用することができる。

本明細書に記載の投与経路に加えて、いくつかの実施形態では、医薬組成物は、対象の皮膚に接触させることにより投与される。いくつかの実施形態では、投与は、非経口投与である。いくつかの実施形態では、投与は、医薬組成物を対象に注射することを含む。いくつかの実施形態では、投与は、腹腔内注射または静脈内注射である。いくつかの実施形態では、投与は、経口投与である。

いくつかの実施形態では、ファーバー病の処置を必要とする対象においてファーバー病を処置する方法が提供され、該方法は、組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を細胞中で発現させること、発現ｒｈＡＣを細胞から単離すること、および約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の単離された発現ｒｈＡＣを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有しているかまたは有している疑いのある対象において脂肪肉芽腫を低減させる方法が提供され、該方法は、組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を細胞中で発現させること、発現ｒｈＡＣを細胞から単離すること、および約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の単離された発現ｒｈＡＣを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有しているかまたは有している疑いのある対象において脂肪肉芽腫症（現在、ファーバー病）を処置することを含む方法が提供され、該方法は、組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を細胞中で発現させること、発現ｒｈＡＣを細胞から単離すること、および約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の単離された発現ｒｈＡＣを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、ファーバー病に有しているかまたは有している疑いのある対象において脾臓重量（絶対的または体重に対して正規化）を低下する方法が提供され、該方法は、組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を細胞中で発現させること、発現ｒｈＡＣを細胞から単離すること、および約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の単離された発現ｒｈＡＣを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、ファーバー病に有しているかまたは有している疑いのある対象においてセラミドを低下させる方法が提供され、該方法は、組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を細胞中で発現させること、発現ｒｈＡＣを細胞から単離すること、および約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の単離された発現ｒｈＡＣを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、ファーバー病を有しているかまたは有している疑いのある対象においてスフィンゴシンを増加させる方法であって、該方法は、組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を細胞中で発現させること、発現ｒｈＡＣを細胞から単離すること、および約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの有効量の単離された発現ｒｈＡＣを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約０．８ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト成人対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１．２ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物をヒト小児に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を細胞中で発現させることは、ｒｈＡＣをコードするベクターを細胞に移入することを含む。いくつかの実施形態では、ベクターは、ｒｈＡＣをコードする核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本明細書に記載の分子、または本明細書により詳細に記載されているｒｈＡＣポリペプチドもしくはそのホモログをコードする任意の他の核酸分子である。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。例えば、ベクターは、レトロウイルスベクター、またはアデノウイルス、ＡＡＶなどのＤＮＡウイルスベクターであり得る。いくつかの実施形態では、ベクターは、プラスミドである。いくつかの実施形態では、ベクターは、ｒｈＡＣに作動可能に連結されたプロモーターを含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＥＦ１αプロモーター、もしくはそれらの任意の組み合わせ、または哺乳動物細胞において活性である任意の他のプロモーターである。

いくつかの実施形態では、ベクターは、細胞にトランスフェクトするかまたは感染させる。ベクターを細胞に導入する方法は重要ではなく、細胞中でｒｈＡＣポリペプチドの十分な発現を提供するために任意の方法を使用することができる。

いくつかの実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はヒト細胞ではない。いくつかの実施形態では、細胞はハムスター細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、無血清または実質的に無血清環境で増殖させることができる。いくつかの実施形態では、細胞はＣＨＯ−Ｋ１細胞に由来する。いくつかの実施形態では、細胞はマウス細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はマウス骨髄腫細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はＮＳ０細胞である。いくつかの実施形態では、投与される有効量は、本明細書の上記および下記に記載される通りである。

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載のように投与される。例えば、いくつかの実施形態では、組成物は、対象に、経口、吸入、鼻腔内注入、局所、経皮、非経口、皮下、静脈内注射、動脈内注射、筋肉内注射、胸腔内、腹腔内、髄腔内、または粘膜への適用により投与される。

本明細書で使用する場合、「ｒｈＡＣ」または「ＡＣ」という用語は、ＡＳＡＨ１遺伝子（ＮＣＢＩＵｎｉＧｅｎｅＧｅｎｅＩＤＮｏ．４２７）によってコードされる組換えヒト酸性セラミダーゼを指す。ＡＣは、脂質セラミドのスフィンゴシンおよび脂肪酸部分を連結するアミド結合を加水分解する（Ｐａｒｋ，Ｊ．−Ｈ．，ＳｃｈｕｃｈｍａｎＥ．Ｈ．，２００６，“Ａｃｉｄｃｅｒａｍｉｄａｓｅａｎｄｈｕｍａｎｄｉｓｅａｓｅ，”Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１７５８（１２）：２１３３−２１３８；Ｎｉｋｏｌｏｖａ−Ｋａｒａｋａｓｈｉａｎｅｔａｌ．，２０００，“Ｃｅｒａｍｉｄａｓｅｓ，”ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．３１１：１９４−２０１（２０００）；Ｈａｓｓｌｅｒｅｔａｌ．，１９９３，“Ｃｅｒａｍｉｄａｓｅ：Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｏｌｅｓ，”Ａｄｖ．ＬｉｐｉｄＲｅｓ．２６：４９−５７）。両方のＡＳＡＨ１対立遺伝子の変異により、ファーバー病が生じ得る。

現在までに記述されているセラミダーゼには３つの型がある（Ｎｉｋｏｌｏｖａ−Ｋａｒａｋａｓｈｉａｎ、２０００）。これらは、酵素活性の最適ｐＨに従って、酸性、中性、およびアルカリ性セラミダーゼとして分類される。ＡＣは、ｐＨ＜５で最適な酵素活性を有する。ヒトＡＣは、クローン化された最初のセラミダーゼであった（Ｋｏｃｈｅｔａｌ．，１９９６，“ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａＦｕｌｌ−ｌｅｎｇｔｈＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙＤＮＡＥｎｃｏｄｉｎｇＨｕｍａｎＡｃｉｄＣｅｒａｍｉｄａｓｅ：ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＯｆＴｈｅＦｉｒｓｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＬｅｓｉｏｎＣａｕｓｉｎｇＦａｒｂｅｒＤｉｓｅａｓｅ，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：３３１１０−３３１１５）。これはリソソームに局在し、主にセラミドの異化に関与している。遺伝的欠陥に因るこの酵素の機能不全は、脂肪肉芽腫症またはファーバー病と呼ばれるスフィンゴ脂質症を生じさせる（Ｋｏｃｈｅｔａｌ．，１９９６，“ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａＦｕｌｌ−ｌｅｎｇｔｈＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙＤＮＡＥｎｃｏｄｉｎｇＨｕｍａｎＡｃｉｄＣｅｒａｍｉｄａｓｅ：ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＯｆＴｈｅＦｉｒｓｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＬｅｓｉｏｎＣａｕｓｉｎｇＦａｒｂｅｒＤｉｓｅａｓｅ，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：３３１１０−３３１１５，Ｙｏｕｎｇｅｔａｌ．，２０１３，“Ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ：ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｏｆｃｒｏｓｓｔａｌｋｂｅｔｗｅｅｎａｐｏｔｏｓｉｓａｎｄａｕｔｏｐｈａｇｙ，”Ｊ．Ｌｉｐｉｄ．Ｒｅｓ．５４：５−１９）。

ＡＣ（Ｎ−アシルスフィンゴシンデアシラーゼ、ＩＵＢＭＢ酵素番号ＥＣ３．５．１．２３）タンパク質は、いくつかの供給源から精製されており、ヒトおよびマウスｃＤＮＡおよび遺伝子が取得されている。Ｂｅｒｎａｒｄｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１１０９８−１０２（１９９５）；Ｋｏｃｈｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１１：３３１１０−５（１９９６）；Ｌｉｅｔａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ５０：２６７−７４（１９９８）；Ｌｉｅｔａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ６２：２２３−３１（１９９９）を参照のこと。これは、ＡＳＡＨ１遺伝子（ＮＣＢＩＵｎｉＧｅｎｅＧｅｎｅＩＤＮｏ．４２７）の産物であるＡＣ前駆体タンパク質の切断を介して生成される（Ｆｅｒｌｉｎｚｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（３８）：３５３５２−６０（２００１）を参照のこと）。ＡＣタンパク質［ホモサピエンス］（ＮＣＢＩアクセッション番号ＡＡＣ５０９０７）を配列番号１に示す。

ＡＣのαサブユニットは、２２位のアミノ酸で始まり、１４２位まで続く（配列表の配列番号１において太字で示されている）。ＡＣのβサブユニットは、１４３位のアミノ酸で始まり、３９５位まで続く（配列番号１において斜体で示されている）。

本明細書で使用する場合、「活性酸性セラミダーゼ」、「活性ＡＣ」または「活性化形態のＡＣ」、または同様の語句は、活性形態（α−およびβ−サブユニットからなる）への自己タンパク質分解切断を受けた、ＡＣ前駆体タンパク質を指す。ヒトＡＣの切断および活性化のメカニズムは、（Ｓｈｔｒａｉｚｅｎｔ，Ｎ．，Ｅ．Ｅｌｉｙａｈｕ，Ｊ．Ｈ．Ｐａｒｋ，Ｘ．Ｈｅ，Ｒ．ＳｈａｌｇｉａｎｄＥ．Ｈ．Ｓｃｈｕｃｈｍａｎ，２００８，“Ａｕｔｏｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｃｌｅａｖａｇｅａｎｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎａｃｉｄｃｅｒａｍｉｄａｓｅ，”ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２８３（１７）：１１２５３−１１２５９）で報告されている。活性化は、細胞内環境によっても促進され、種にわたってセラミダーゼ前駆体タンパク質の切断部位における高度に保存された配列に基づき、全てではないにしても、ほとんどの細胞型で発生すると予想される。

本明細書で使用する場合、「不活性酸性セラミダーゼ」、「不活性ＡＣ」、または「不活性酸性セラミダーゼ前駆体」、「不活性ＡＣ前駆体」、または（ＡＣプレタンパク質）は、活性型への自己タンパク質分解切断を受けていないＡＣ前駆体タンパク質を指す。本発明のこの態様および全ての態様の組換え酸性セラミダーゼでの使用に好適な不活性ＡＣ前駆体および活性ＡＣは、組織、細胞、および／または処置される対象に対して同種（すなわち、同じ種に由来する）または異種（すなわち、異なる種に由来する）であり得る。酸性セラミダーゼ（例えばＡＣ）前駆体タンパク質は、自己タンパク質分解により切断されて活性型（αサブユニットおよびβサブユニットからなる）となる。ヒトＡＣ切断および活性化のメカニズムは、（Ｓｈｔｒａｉｚｅｎｔ，２００８）で報告されている。活性化は、細胞内環境によっても促進され、種にわたってセラミダーゼ前駆体タンパク質の切断部位における高度に保存された配列に基づき、全てではないにしても、ほとんどの細胞型で発生すると予想される。したがって、本明細書で使用されるセラミダーゼは、活性セラミダーゼおよびセラミダーゼ前駆体タンパク質の両方を含み、セラミダーゼ前駆体タンパク質は、自己タンパク質分解切断によって活性セラミダーゼタンパク質に変換される。前駆体タンパク質が目的の細胞によって取り込まれ、それによって活性セラミダーゼに変換される実施形態、および前駆体タンパク質が異なる細胞または作用物質（例えば、培養物中に存在する）によって活性セラミダーゼに変換される実施形態の両方が企図される。

本発明のこの態様および全ての態様で使用することができる活性ＡＣおよび不活性ＡＣ前駆体タンパク質には、ＵＳ２０１６／００３８５７４の表１に記載されているものが含まれるが、それらに限定されず、その内容は参照により全体が本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ｒｈＡＣは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

「ＲＶＴ−８０１」は、ファーバー病の処置のための活性化形態の組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）である。活性化ｒｈＡＣのαおよびβサブユニットは、ジスルフィド結合によって結合される。この分子は、ｒｈＡＣを発現するＤＮＡプラスミドベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｍ細胞に由来する組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）である。ＲＶＴ−８０１は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢコード：Ｑ１３５１０に基づく。

ＲＶＴ−８０１ｒｈＡＣの治療効果は、重度のファーバー病のマウスモデルで確立されており（Ｈｅ，ｅｔａｌ，２０１７）、複数の研究で特徴付けられ、評価項目は、蓄積されたセラミドの減少を伴って、組織病理学的および免疫学的転帰に対するプラスの影響を記述している。

いくつかの実施形態では、ｒｈＡＣは、配列番号１のホモログであるタンパク質である。いくつかの実施形態では、ｒｈＡＣは、配列番号２の核酸分子によってコードされる。いくつかの実施形態では、ｒｈＡＣは、配列番号３の核酸分子によってコードされる。いくつかの実施形態では、ｒｈＡＣは、配列番号４の核酸分子によってコードされる。いくつかの実施形態では、配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿１７７９２４．３またはＮＭ＿１７７９２４．４で定義される通りであり、それらの各々は、その全体が参照により組み込まれる。タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２、配列番号３、または配列番号４に示される完全な配列であるか、または単に配列のコード領域であり得る。コード領域は、例えば、配列番号２のヌクレオチド３１３〜１５００、または配列番号３もしくは配列番号４に見出される対応するコード領域であり得る。しかしながら、当業者に周知のように、遺伝暗号は縮重し、したがって、開示されているものの範囲外になることなく、他のコドンを使用して同じタンパク質をコードすることができる。アミノ酸配列は既知であるため、アミノ酸配列をコードする任意のヌクレオチド配列が許容される。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列はシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号２のヌクレオチド３１３〜３７５によってコードされるアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、生成されるタンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基１〜２１のシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、生成されるタンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基１〜２１のシグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、酵素が異なるサブユニットに処理される翻訳後処理中に除去される。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列は、タンパク質が発現される細胞に対して最適化されたコドンである。いくつかの実施形態では、タンパク質は、αサブユニット、βサブユニットなどを含む。いくつかの実施形態では、生成されるタンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基２２〜１４２、４５〜１３９、１３４〜３７９、１４３〜３９５、または１〜３９５のペプチドを含む。ペプチドは、単一のタンパク質または酵素を形成するための異なる配列のポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、タンパク質はアミノ酸残基１〜２１を含まない。これらの領域は、単一のヌクレオチド配列もしくは別々のヌクレオチド配列またはヌクレオチド配列の組み合わせによってコードされ得る。本明細書で論じるように、タンパク質をコードする任意のヌクレオチド配列を使用することができ、配列番号２、配列番号３、または配列番号４として本明細書に記載されている配列に限定されない。

いくつかの実施形態では、ｒｈＡＣは、酸性セラミダーゼ（ＡＣ）活性を有するが、以下の実施例１および２で生成されるｒｈＡＣなどの検出可能な酸性スフィンゴミエリナーゼ活性を有しない。酸性スフィンゴミエリナーゼ活性は、例えば、熱不活化により除去してもよい。熱不活化により、ｒｈＡＣ調製物から他の汚染タンパク質が除去されてもよい。例えば、その全体が本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６００３８５７４号を参照のこと。

「ホモログ」という用語は、参照配列に対して８０％〜１００％の配列同一性を有するタンパク質配列を指す。２つのペプチド鎖間の同一性パーセントは、ＶｅｃｔｏｒＮＴＩｖ．９．０．０（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．，カールスバッド、カリフォルニア州）のＡｌｉｇｎＸモジュールのデフォルト設定を使用したペアワイズアラインメント（ｐａｉｒｗｉｓｅａｌｉｇｎｍｅｎｔ）によって決定することができる。いくつかの実施形態では、ホモログは、本明細書に記載の配列、例えば、配列番号１と、少なくとも８０、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％、または約８０、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％の同一性を有する。

いくつかの実施形態では、対象に送達されるタンパク質は、本明細書に記載の配列と比較して保存的置換。表３に示される非限定的な例示的保存的置換は、開示された主題の範囲内に含まれる。酵素の機能、例えば安定性または酵素活性を改善するために、置換してもよい。保存的置換により、そのような改変がなされる分子と同様の機能的および化学的特徴を有する分子が生成される。例示的なアミノ酸置換を以下の表３に示す。

本明細書で使用される場合「と組み合わせて」という用語は、記載された薬剤を、単一の薬剤として同時に、または任意の順序で単一の薬剤として逐次、混合物中で一緒に対象に投与することができることを意味する。

本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、タンパク質は細胞から生成される。いくつかの実施形態では、細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞である「ＣＨＯ細胞」である。本明細書に記載のタンパク質をコードする核酸配列は、本明細書に記載のタンパク質の少なくとも１つをコードするゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり得る。ｃＤＮＡの使用は、所望のタンパク質の合成を達成するために、宿主細胞に適切な遺伝子発現要素が遺伝子と組み合わされることを必要とする。ｃＤＮＡ配列は、適切なＲＮＡスプライシングシステムを欠く細菌中または他の宿主中で発現され得るという点で、ｃＤＮＡ配列の使用はゲノム配列（イントロンを含む）よりも有利であり得る。当業者は、タンパク質を発現するための最良のシステムを決定することができる。

いくつかの実施形態では、タンパク質は、その全体が参照により組み込まれる米国特許出願公開第２０１６００３８５７４号に従って生成される。

遺伝暗号は縮重するため、特定のアミノ酸をコードするために２つ以上のコドンを使用することができる。遺伝暗号を使用して、１つ以上の異なるオリゴヌクレオチドを同定することができ、それらの各々は、本明細書に記載のアミノ酸配列をコードすることができるであろう。

ファーバー病またはそれに関連する状態を処置するために対象に投与される酵素は、精製され得る。タンパク質に関して「精製された」という用語は、その自然環境において分子と関連する他の物質を実質的に含まないタンパク質を指す。例えば、精製されたタンパク質は、該タンパク質が由来する細胞または組織由来の細胞物質または他のタンパク質を実質的に含まない。この用語は、単離されたタンパク質が分析するのに十分な純度であるか、または少なくとも７０％〜８０％（ｗ／ｗ）の純度、少なくとも８０％〜９０％（ｗ／ｗ）の純度、９０〜９５％の純度、および少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％（ｗ／ｗ）の純度の調製物を指す。いくつかの実施形態では、タンパク質は、限定するものではないがＣＨＯ細胞などの細胞から精製される。

タンパク質を含む投与、組成物、およびキット
本明細書に記載のように、本明細書に提供される実施形態は、ファーバー病を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、治療または予防有効量の、本明細書に記載の１つ以上のタンパク質をファーバー病を有する患者またはファーバー病を有している疑いのある対象に投与することを含む。

対象の処置は、治療有効量の本明細書に記載のタンパク質の投与を含んでもよい。

タンパク質は、本明細書に記載のキットで提供され得る。

タンパク質は、単独で、または追加の治療剤と混合して使用または投与することができる。追加の治療剤の例には、酸性スフィンゴミエリナーゼ阻害剤（例えば、アミトリプチリン（Ｂｅｃｋｅｒｅｔａｌ．，｜２０１０，“ＡｃｉｄＳｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓＮｏｒｍａｌｉｚｅＰｕｌｍｏｎａｒｙＣｅｒａｍｉｄｅａｎｄＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎＣｙｓｔｉｃＦｉｂｒｏｓｉｓ，”Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４２：７１６−７２４、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）およびセラミドシンターゼ阻害剤（例えば、Ｓｈｉｆｆｍａｎｎ，Ｓ．，Ｈａｒｔｍａｎｎ，Ｄ．，Ｂｉｒｏｄ，Ｋ．，Ｆｅｒｒｅｉｒｏｓ，Ｎ．，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｙ．，Ｚｉｖｋｏｖｉｃ，Ａ．，Ｇｅｉｓｓｌｉｎｇｅｒ，Ｇ．，Ｇｒｏｓｃｈ，Ｓ．，ａｎｄＳｔａｒｋ，Ｈ．，２０１２，“ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＳｐｅｃｉｆｉｃＣｅｒａｍｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅｓ，”Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，９４（２）：５５８−５６５、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）が含まれるが、これらに限定されない。追加の治療剤は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６００３８５７４号に記載のセラミダーゼ混合物であり得る。

セラミド蓄積の低下を実証したファーバー病の本発明者らの現在の研究で示されているように、酵素補充療法（ＥＲＴ）は効果的であり得るが、薬物、すなわち、その効力を低下し得る補充酵素に対する抗体が生じ得る。ここで、本発明者らは、反復投与は忍容性が良好であることを示し、これは、疾患の症状の軽減をもたらす、補充酵素、特に本明細書および例えば米国特許出願公開第２０１６００３８５７４号に記載の方法に従って生成される酵素を反復投与する処置レジメンを支持する。

いくつかの実施形態では、ファーバー病の処置を必要とする対象においてファーバー病を処置する方法は、約１週間に１回間、２週間、３週間、もしくは４週に１回、または１ヶ月、約１０週間、約２０週間、もしくは約３０週間、１年、５年、１０年、または２５年、もしくは患者の寿命に１回の、有効量の組換えヒト酸性セラミダーゼを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

好適なビヒクルならびにその製剤化およびパッケージングは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ（２１ｓｔｅｄ．，Ｔｒｏｙ，Ｄ．ｅｄ．，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．２００５）Ｃｈａｐｔｅｒｓ４０ａｎｄ４１）に記載されている。作用の持続時間を制御するために、追加の薬学的方法を使用してもよい。制御放出製剤は、化合物を錯化または吸収するためのポリマーの使用により達成してもよい。制御放出製剤によって作用の持続時間を制御する別の可能な方法は、ポリエステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）、またはエチレン酢酸ビニルコポリマーなどのポリマー材料の粒子に、化合物を組み込むことである。あるいは、これらの薬剤をポリマー粒子に組み込む代わりに、これらの物質を、例えば界面重合で調製されたマイクロカプセル中に、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封入し、またはコロイド状薬剤送達システム中に、例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、およびナノカプセル、またはマクロエマルション中に封入することがきる。

一般に、全身用量のタンパク質を投与する場合、約１ｎｇｋｇ〜１００ｎｇ／ｋｇ、１００ｎｇ／ｋｇ〜５００ｎｇ／ｋｇ、５００ｎｇ／ｋｇ〜１μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ（レシピエントの体重）の範囲であるタンパク質の投与量をレシピエントに提供することが望ましいが、より低いまたはより高い投与量を投与してもよい。

いくつかの実施形態では、ヒト成人におけるｒｈＡＣの用量は、約０．８ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ヒト小児におけるｒｈＡＣの用量は、約１．２ｍｇ／ｋｇである。

いくつかの実施形態では、投与されるｒｈＡＣの有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量は、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量は、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量は、約４０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇである。

投与量は、１日に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、１週間に１回、１週間に２回、２週間に１回、または１ヶ月に１回投与され得る。いくつかの実施形態では、用量は１週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、用量は２週間に１回投与される。処置はまた、単回投与スケジュールで与えられてもよいし、または処置の主な経過が、１〜１０回の別々の投与を伴い、続いて、応答を維持および／または増強するために必要な後続の時間間隔で他の投与が与えられ、例えば、２回目の投与については１週間に１回、１〜４ヶ月間であり、必要に応じて数ヶ月後にその後の投与（複数可）とする、複数回投与スケジュールで与えられてもよい。好適な処置スケジュールの例には、（ｉ）０、１ヶ月、および６ヶ月、（ｉｉ）０、７日、および１ヶ月、（ｉｉｉ）０、および１ヶ月、（ｉｖ）０および６ヶ月、または疾患の症状を軽減するか、もしくは疾患の重症度を軽減することが予想される所望の応答を生じさせるのに十分な他のスケジュールが含まれる。上記のものなどであるがこれらに限定されない他の処置スケジュールも使用することができる。

本開示の特定の態様では、処置は、対象が新生児の場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０歳未満で、または１〜２、１〜３、１〜４、１〜５、１〜６、１〜７、１〜８、１〜９、１〜１０、１〜２５、１〜５０、１〜６０、１〜７０、もしくは１〜８０歳（例えば、１〜２歳、１〜３歳など）で開始される。いくつかの実施形態では、対象は１６〜６１歳である。いくつかの実施形態では、対象は１６歳で処置を開始する。いくつかの実施形態では、対象は１２〜６９歳である。いくつかの実施形態では、対象は１２歳で処置を開始する。いくつかの実施形態では、対象は１９〜７４歳である。いくつかの実施形態では、対象は１９歳で処置を開始する。いくつかの実施形態では、対象は４〜６２歳である。いくつかの実施形態では、対象は４歳で処置を開始する。いくつかの実施形態では、対象は７〜４２歳である。いくつかの実施形態では、対象は７歳で処置を開始する。いくつかの実施形態では、対象は新生児である。いくつかの実施形態では、対象は１〜６ヶ月である。いくつかの実施形態では、対象は、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、または６ヶ月で処置を開始する。いくつかの実施形態では、対象は６〜４３歳である。いくつかの実施形態では、対象は６歳で処置を開始する。いくつかの実施形態では、対象は５〜３１歳である。いくつかの実施形態では、対象は５歳で処置を開始する。いくつかの実施形態では、対象は５〜５７歳である。いくつかの実施形態では、対象は５〜２９歳である。いくつかの実施形態では、対象は１〜３歳である。いくつかの実施形態では、対象は１歳で処置を開始する。いくつかの実施形態では、対象は１０〜７０歳である。いくつかの実施形態では、対象は１０歳で処置を開始する。いくつかの実施形態では、対象は、５〜８０歳、１０〜７０歳、２０〜７５歳、５〜６０歳、または５〜３０歳である。

いくつかの実施形態では、ファーバー病と診断された対象に、２週間ごとに、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇのｒｈＡＣまたは約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇのｒｈＡＣを投与する。一実施形態では、投与量は、４週目に１ｍｇ／ｋｇまたは２ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇに増加させる。投与レベルが個々の対象によって忍容されない場合、その対象についての用量は、必要に応じて、２ｍｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇに減らすか、または５ｍｇ／ｋｇから２ｍｇ／ｋｇに減らしてもよい。ｒｈＡＣは、少なくとも１０、２０、もしくは３０週間または対象の生存期間中、２週間ごとに投与してもよい。一実施形態では、対象はファーバー病と診断され、以下を有するとして同定される：１）皮下結節、および／もしくは２）対照値の３０％未満である、白血球、培養皮膚線維芽細胞、または他の生物学的供給源（例えば、血漿）の酸性セラミダーゼ活性値、ならびに／または３）バイオインフォマティクス、遺伝子発現研究、および／または他の方法により、酸性セラミダーゼタンパク質の機能喪失の可能性を示す、酸性セラミダーゼ遺伝子（ＡＳＡＨ１）の両方の対立遺伝子内のヌクレオチド変化。いくつかの実施形態では、対象に、２週間ごとに２８週間、ｒｈＡＣを投与する。いくつかの実施形態では、ｒｈＡＣの送達は、静脈内注入（例えば、生理食塩水注入）による。いくつかの実施形態では、約１ｍｇ／ｋｇで開始し、約５ｍｇ／ｋｇのｒｈＡＣに増加させる（例えば、４週目で５ｍｇ／ｋｇに増加させる）。

いくつかの実施形態では、静脈内注入は、時間の経過とともに（一般的には３．５〜４時間）、３ｍＬ／時間であってもよい。いくつかの実施形態では、用量は、第１の時間で全容積の３％の割合で注入され、用量の残りは、その後の２．５時間にわたって注入してもよい（すなわち、第２の時間の注入は、用量が投与されるまで、１時間あたり約４０％の公称容積であってもよい）。個々の許容性にケースバイケースで対処できるようにするために、注入の最大時間を確立しない。注入は、インライン（ｉｎ−ｌｉｎｅ）の低タンパク質結合０．２ミクロンフィルターを介して投与される。用量は、前回の研究来院時に収集された体重に基づいて、各投与間隔で決定される体重（ｋｇ）に正規化される。

例えば、部位特異的投与は、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、脳内、脳室内、結腸内、子宮頸内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸内圧、子宮内、膀胱内、病変内、膣内、直腸、経口、口腔内、舌下、鼻腔内、または経皮の手段などの体の区画または腔に対するものであってもよい。

本明細書に記載の治療用組成物は、非経口（皮下、筋肉内、もしくは静脈内）、または特に液体溶液もしくは懸濁液の形態での任意の他の投与の使用のために調製することができる。製剤はまた、注射可能な製剤に好適であり得る。いくつかの実施形態では、注射可能な製剤は無菌である。いくつかの実施形態では、注射可能な製剤は発熱物質を含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、本明細書に記載の抗原以外の他の抗原に結合する他の抗体を含まない。

ファーバー病もしくはｒｈＡＣ活性に関連する他の状態を処置することができるｒｈＡＣのタンパク質またはｒｈＡに関連する病状を処置するための使用は、関連する症状または病状の軽減、解消、または改善に影響を与えるのに十分な量で対象に提供されることを意図している。そのような病状には、対象における本明細書に記載のファーバー病の症状が含まれる。薬剤の投与量、投与経路、および投与スケジュールがそのような応答に影響を与えるのに十分である場合、量は、症状の軽減に「影響を与える」のに十分または「治療有効量」であると言う。タンパク質に対する応答は、画像化技術または組織試料のエクスビボ分析などによる、対象の影響を受けた組織、臓器、または細胞の分析によって測定することができる。薬剤は、その存在がレシピエント患者の生理機能に検出可能な変化をもたらす場合、生理学的に重要である。いくつかの実施形態では、量は、対象が受けているファーバー病の症状を処置、改善、または抑制するために使用することができる量である場合、治療有効量である。そのような量の非限定的な例が本明細書に提供されているが、文脈が別の量を指示す場合、そのような量に限定されることは意図されていない。

いくつかの実施形態では、処置の有効性は、以下の手段のいずれかによって評価される：
●ｒｈＡＣによる２８週間の処置後の正味結節（≧５ｍｍ）数のベースラインからの変化率。
●正味結節（≧１０ｍｍ）数のベースラインからの変化率およびｒｈＡＣによる２８週間の処置後のプラセボとの比較。
●結節の総数（サイズに関係なく）のベースラインからの変化率、およびｒｈＡＣによる２８週間の処置後のプラセボとの比較。
●選択した関節の関節可動域のベースラインからの変化および変化率、ならびにｒｈＡＣによる２８週間の処置後のプラセボとの比較。
●６分間の歩行距離のベースラインからの変化および変化率、ならびにｒｈＡＣによる２８週間の処置後のプラセボとの比較。
●肺機能検査のベースラインからの変化および変化率、ならびにｒｈＡＣによる２８週間の処置後のプラセボとの比較。
●ＦＤＴスコアのベースラインからの変化および変化率、ならびにｒｈＡＣによる２８週間の処置後のプラセボとの比較。
●２８週間にわたるｒｈＡＣまたはプラセボによる処置中の年齢に対する体重および身長のＺスコアのベースラインからの変化および変化率。

いくつかの実施形態では、ファーバーマウスまたは健康なマウスに異なる用量で投与した後のＲＶＴ−８０１の薬物動態は、非コンパートメント法に基づいて評価される。非コンパートメント薬物動態法は、特に、当該技術分野で既知の以下の測定基準を用いて、濃度−時間グラフの曲線下の面積を推定することにより、薬物への曝露を推定する。

いくつかの実施形態では、処置の組織特異的有効性は、上記の非コンパートメント薬物動態法に基づいてＲＶＴ−８０１の組織特異的薬物動態を決定することによって評価される。

いくつかの実施形態では、ファーバー病マウスの有効用量に対応するＲＶＴ−８０１のヒト等価用量（ＨＥＤ）が推定される。本明細書でのＨＥＤの非臨床評価は２つの方法に基づく：１）体表面積（ＢＳＡ）による非臨床種とヒトとの間のスケール調整に関するＦＤＡガイダンス、および２）臓器：セラミド蓄積の主要組織としてのおよびＲＶＴ−８０１の取り込みが優勢な肝臓および脾臓についての種間の体重比。

体表面積によるスケール調整：ファーバーマウスＭＥＤ（最大有効用量）に対するベンチマークであり、ヒト成人または小児のＢＳＡおよび体重に基づく、ＨＥＤ（ここで、ＨＥＤ＝動物の用量＊（動物の体重／ヒト体重）^０．３３は、６０ｋｇの成人では約０．８１ｍｇ／ｋｇ、および１５ｋｇの小児では約１．２ｍｇ／ｋｇの用量であることを示す。

臓器：体重比によるスケール調整：ＰＫ研究により、血管系からのクリアランスメカニズムが組織への取り込みおよび／または分布に関連していることが示されたため、組織重量対体重比が用量に影響を及ぼし、ＢＳＡモデルがそれ自体では十分に予測できない場合がある。ＨＥＤ＝ＭＥＤ＊（組織_ヒト／ＢＷ_ヒト）／（組織_マウス／ＢＷ_マウス）を使用すると、マウスでの１０ｍｇ／ｋｇの用量は、ヒト成人および小児の肝臓および脾臓に基づき、ヒト成人での約３〜５ｍｇ／ｋｇの用量に相当し、または１５ｋｇの小児では約４〜５ｍｇ／ｋｇの用量に相当する。

いくつかの実施形態では、ＨＥＤは、上記の２つのスケール調整手法を組み合わせることによって決定してもよい。

タンパク質は、薬学的に有用な組成物を調製するために既知の方法に従って製剤化することができ、それにより、これらの材料またはそれらの機能的誘導体は、薬学的に許容される担体ビヒクルと混合して組み合わされる。

本明細書に記載の実施形態を実施するのに有用である、本明細書および以下に記載されるキットも提供される。いくつかの実施形態では、キットは、上記のポリペプチドを含むか、または該ポリペプチドに関連してパッケージ化された、第１の容器を含む。キットはまた、実施形態を実施するのに必要または便利な溶液を含むか、または該溶液に関連してパッケージ化された、別の容器を含んでもよい。容器はガラス、プラスチック、またはホイルで作ることができ、バイアル、ボトル、ポーチ、チューブ、バッグなどとすることができる。キットはまた、実施形態を実施するための手順などの書面の情報、または第１の容器手段に含まれる試薬量などの分析情報を含んでもよい。容器は、書面の情報と一緒に、別の容器装置、例えば箱または袋に入っていてもよい。

本明細書で提供されるさらに別の態様は、ファーバー病を処置するためのキットである。いくつかの実施形態では、キットは、ｒｈＡＣポリペプチドまたはこれをコードする核酸分子を含む少なくとも１つの容器を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ｒｈＡＣを発現するように構成された細胞を含む容器を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞である。いくつかの実施形態では、キットは、ｒｈＡＣを発現する細胞由来の馴化培地を含む。いくつかの実施形態では、馴化培地は、ＣＨＯ細胞に由来する。

次に、以下の実施例を参照して主題を説明する。これらの実施例は、例示のみを目的として提供され、特許請求の範囲は、これらの実施例に限定されると決して解釈されるべきではなく、本明細書で提供される教示の結果として明らかとなる全ての変形を包含すると解釈されるべきである。当業者は、本質的に同様の結果をもたらすために変更または改変され得る様々な重要でないパラメータを容易に認識するであろう。

本実施例は、後続の薬物動態学および組織分布モデリングを可能にするために、有効用量範囲にわたる投与後の重要な組織区画におけるｒｈＡＣの配置を提供し、有効用量および組織曝露に基づいて、体表面積または臓器重量：体重比によってスケール調整されたヒト等価用量（ＨＥＤ）の予測をさらに提供する。

実施例１
有効用量範囲の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によるＲＶＴ−８０１の投与後のｒｈＡＣ（ＲＶＴ−８０１）の血清薬物動態プロファイルを、健康な幼若野生型ＣＤ−１マウス（Ａｓａｈ１^{Ｐ３６１Ｒ／Ｐ３６１Ｒ}マウスの親系統、（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｅｅｔａｌ．，２０１７を参照のこと））で評価した。ｒｈＡＣ（ＲＶＴ−８０１）の生成および特性評価は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１８年９月２４日に提出されたＰＣＴ／２０１８／０５２４６３（まだ未公開である）に従って行った。

生存中のプロトコル
約３．５週齢（幼若）の雄ＣＤ−１マウスに、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇの単回ボーラスＩＰ注射としてＲＶＴ−８０１を投与した。薬物動態分析用の血液試料は、心臓穿刺または各マウスから最大容積の血液試料を生成するための他の承認された手段により、各投与群において時点ごとに（投与前、注射後０．５、１、２、３、４、６）、３匹の動物から収集された。ＥＬＩＳＡによるＲＶＴ−８０１濃度分析のために、各血液試料をその全体について直ちに処理して血清とした。

ＥＬＩＳＡによるＲＶＴ−８０１バイオ分析
サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）は、マウス血清中のＲＶＴ−８０１の定量に適している。この方法は、アフィニティ精製されたウサギ抗組換えヒトＡＣ（ｒｈＡＣ、ＲＶＴ−８０１）ポリクローナル抗体を捕捉用に使用し、アフィニティ精製された西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ウサギ抗ｒｈＡＣポリクローナル抗体を検出用に使用する。ＲＶＴ−８０１を使用して、標準曲線および制御範囲を確立する。生成されるシグナルは、アッセイの定義された範囲内の試料中のＲＶＴ−８０１の濃度に比例する。

詳細な２日間のアッセイ手順は次の通りである：１日目に、９６ウェルの透明なポリスチレンプレートを１００μＬのＣａｐｔｕｒｅＲｅａｇｅｎｔ（ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬウサギ抗ｒｈＡＣ）でコーティングし、２〜８℃で一晩インキュベートした。他の全てのステップは２日目に行った。２日目の全てのインキュベーションは、振とうしながら（約３００〜４００ｒｐｍ）、室温（ＲＴ）で行った。簡単に言えば、プレートを３００μＬの洗浄緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含む１×ＰＢＳ、ＰＢＳＴ）で３回洗浄し、最終洗浄後にペーパータオルで軽くたたいた。次に、プレートを１ウェルあたり３００μＬのアッセイ緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むカゼイン／ＴＢＳ）で少なくとも１時間ブロッキングし、上記のように洗浄した。洗浄後、ＭＲＤに希釈した（アッセイ緩衝液中で５０倍）１００μＬの校正標準、対照、および試料を各ウェルに添加し、プレートを約２時間インキュベートして、上記のように洗浄した。次に、１００μＬの検出試薬（アッセイ緩衝液中の０．２μｇ／ｍＬのＨＲＰ結合ウサギ抗ｒｈＡＣ）を各ウェルに添加し、プレートを約１時間インキュベートし、上記のように洗浄した。洗浄後、１００μＬの冷基質溶液を各ウェルに添加し、プレートを暗所で最大３０分間インキュベートした。６５０ｎｍ（Ａ６５０）での吸光度を測定することにより、発色をモ二タリングした。Ａ６５０が最高標準の０．９〜１．２になったとき、または必要に応じて、発色に基づいて反応を停止した。発色を停止するために、１００μＬの停止溶液を各ウェルに添加し、プレートを４５０ｎｍで読み取り、波長補正を６５０ｎｍに設定した。

非コンパートメント薬物動態分析
非コンパートメント薬物動態分析は、ＣｅｒｔａｒａＷｉｎＮｏｎｌｉｎＰｈｏｅｎｉｘバージョン７．０により行った。曝露比およびグラフは、ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌおよびＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍを使用して生成された。

結果
インビボでの酵素の薬物動態プロファイルを評価するために、健康な幼若ＣＤ−１マウスは、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇの用量のｒｈＡＣ（ＲＶＴ−８０１）単回注射を受け、注射後０．５、１、２、３、４、および６時間での血清中のＲＶＴ−８０１濃度を決定した（図１）。図２に示すように、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１の単回ＩＰ投与後、血清曝露（ＡＵＣ、Ｃ_ｍａｘ）は用量に比例して増加した。

ＲＶＴ−８０１についての幼若ＣＤ−１マウスＰＫデータを以下に論じる。１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１を投与した幼若ＣＤ−１マウスでの２つの研究を行った：
ＲＶＴ−８０１−９０１３Ａ−血清ＰＫの特徴付けに焦点を当てた。以下のＰＫパラメータが観察された。
ＡＵＣ１．３７時間＊μｇ／ｍＬ
Ｃ_ｍａｘ１．２３時間＊μｇ／ｍＬ
Ｔ_ｍａｘ１．０時間
ＲＶＴ−８０１−９０１３Ｂ−ＲＶＴ−８０１の組織分布および組織：血清曝露比に焦点を当てた。以下のＰＫパラメータが観察された。
ＡＵＣ１．４９時間＊μｇ／ｍＬ
Ｃ_ｍａｘ２．１７時間＊μｇ／ｍＬ
Ｔ_ｍａｘ０．２５時間

さらに、図３に示すように、野生型ＣＤ−１マウスの血清におけるＲＶＴ−８０１（腹腔内注射、１０ｍｇ／ｋｇ）曝露の期間は、ファーバー病マウスにおける全身酸性セラミダーゼ（ＡＣ）活性と密接に相関した（黒丸の実線；国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１８／１３５０９号（その開示は参照によりその全体が組み込まれる）から複製）。この発見に基づいて、ＲＶＴ−８０１薬物動態および組織特異的分布のさらなる評価を、有効性研究で使用した幼若ファーバーマウスと同齢の野生型ＣＤ−１マウスで行った。

実施例２
さらに、ＲＶＴ−８０１の薬物動態および組織特異的分布を、野生型ＣＤ−１マウスの様々な臓器組織で評価した。

分析前の組織処理
組織ホモジネートは、プロテアーゼ阻害剤カクテルを添加して、ＱｉａｇｅｎＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒＩＩ（３０Ｈｚの周波数で各３分の３サイクル）で試料を処理することにより、ＣＨＡＰＳ緩衝液中で調製した。ＥＬＩＳＡ検出の前に、組織ホモジネートを標準的な１ｍｇ／ｍＬ総タンパク質濃度に希釈した。タンパク質含有量が低いため、タンパク質濃度ではなく容積に基づき、検出用にＢＡＬＦ試料を処理した。

改変ＥＬＩＳＡによる組織抽出物中のＲＶＴ−８０１の定量
ＲＶＴ−８０１マウス血清の定量に適したＥＬＩＳＡ法を、マウス組織（血液、肝臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、および脳）での定量に適合させた。

改変された方法には、組織溶解物の調製、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイを使用した総タンパク質の定量、および溶解緩衝液のＲＶＴ−８０１標準曲線の調製が含まれた。適合方法では、マウス血清品質制御試料のみの場合の最小必要希釈率（ＭＲＤ）が５０倍であった。標準試料および研究試料にはＭＲＤを享受させなかった。生成された信号は、試料中のＲＶＴ−８０１の濃度に比例した。適合させたアッセイの定量化の下限および上限は、それぞれ０．４００ｎｇ／ｍＬおよび２４．５ｎｇ／ｍＬであった。測定されたＲＶＴ−８０１濃度は、必要に応じて、組織の均質化および溶解物希釈について補正した。

ＥＬＩＳＡを行う前に、実現可能性（ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ）研究を行った。実現可能性研究は以下を含んだ：１）ＲＩＰＡ緩衝液（１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、０．２５％（ｗ／ｖ）デオキシコール酸、１％（ｖ／ｖ）ＮＰ−４０）、ＣＨＡＰＳ緩衝液（１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２％（ｗ／ｖ）ＣＨＡＰＳ）、およびマウス血清で調製されたＲＶＴ−８０１標準曲線の比較、２）ＲＩＰＡおよびＣＨＡＰＳ緩衝液中で調製されたＲＶＴ−８０１標準曲線に対する、マウス血清対照試料の回収率の比較、３）異なる溶解緩衝液（ＰＢＳ、ＲＩＰＡ、およびＣＨＡＰＳ）を使用した異なる組織ホモジナイゼーション方法（氷上でのインキュベーション、３０Ｈｚでの３つのＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒサイクル、３０Ｈｚでの５つのＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒサイクル、および超音波処理）後の、酸性ホスファターゼアッセイキット（ＳｉｇｍａＣＳ０７４０）を使用した、リソソーム破壊の比較、４）ＣＨＡＰＳ緩衝液での均質化後の、β−ガラクトシダーゼキット（Ｐｉｅｒｃｅ７５７０５）を使用したリソソーム破壊の確認、および５）ＣＨＡＰＳ標準曲線に対する、異なる濃度レベルのＲＶＴ−８０１が入った組織溶解物の回収率の分析。均質化前に、ＡＭペレットを除く全ての固体試料をチューブ中で計量した。空のチューブを各バッチの開始時に計量し、この重量を使用して各チューブの組織の重量を計算した。マウス肝密度（ｈｅｐａｔｉｃｄｅｎｓｉｔｙ）は文献より既知であるため、肝臓組織の溶解補正係数の計算のために、この値（１．０５１ｇ／ｍＬ）を使用した。しかしながら、他の全ての組織は、１ｇ／ｍＬの密度であると推定された（図７を参照）。肺胞上皮粘液（ＥＬＦ）濃度は、尿素含有量に基づく補正係数を気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）データに適用して、洗浄および収集時に試料の希釈を補正することにより、決定することができる。

薬物動態分析
実施例１と同様に、ＣｅｒｔａｒａＷｉｎＮｏｎｌｉｎＰｈｏｅｎｉｘバージョン７．０を使用して、非コンパートメントＰＫ分析を行った。

結果
循環からのＲＶＴ−８０１の主なクリアランスメカニズムは、セラミド蓄積に関係する重要な組織への取り込みである。図４に示すように、ＲＶＴ−８０１は、様々な臓器組織（肝臓、脾臓、腎臓、肺、および心臓）にわたって広範囲に分布する。重要な組織におけるＲＶＴ−８０１の曝露は、血清よりも著しく高く、ＲＶＴ−８０１が全身循環中で測定不能になった後も長期間持続する。この発見は、血清曝露に基づいて示されるよりも少ない頻度投与を支持し得る。急性ＲＶＴ−８０１処置後の重要な臓器組織（肝臓、脾臓）での曝露期間の延長は、全身曝露の期間を超えて発生する組織セラミドの最大の減少と相関している。

肝臓および脾臓は、実施例１で上述したように、ファーバーマウスにおけるセラミド蓄積およびＲＶＴ−８０１取り込みの２つの重要な臓器である。図５Ａおよび図５Ｂは、肝臓および脾臓組織抽出物中のＲＶＴ−８０１用量応答の経時変化をそれぞれ示し、組織におけるＲＶＴ−８０１曝露が用量（１、３、および１０ｍｇ／ｋｇ）とともに増加したことを示している。ＲＶＴ−８０１の最高濃度は、投与後約４時間で肝臓で達成され、血清レベルが検出不能であった最終のサンプリング時点（２４時間）を超えても上昇したままであった。サンプリング時点間の変動は、おそらく幼若マウスの投与の複雑さ（約１６ｇの体重）が原因で観察された。

さらに、ＲＶＴ−８０１の薬物動態は、これら２つの重要臓器で評価された。図６Ａに示すように、血清および全血のＲＶＴ−８０１と比較して、ＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}は、各々の有効用量で肝臓および脾臓について増加した。図６Ｂに示すように、組織：血清比（ＡＵＣ_組織：ＡＵＣ_血清）は、有効用量範囲にわたる全身曝露に対して、臓器あたりの曝露が著しく高いことを示した。肝臓：血清比は図６Ｂに示す。

さらに、これら２つの臓器におけるＲＶＴ−８０１の薬物動態を、様々な他の臓器における薬物動態と比較して評価した。図７に示すように、ＲＶＴ−８０１は、実施例１で上述したように、ファーバーマウスにおけるセラミド蓄積に関連する組織に広範囲に分布する。他の組織にわたり、１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１によって、図８に示すような組織：血清比が達成された。

検討：これらの結果は、ｒｈＡＣＲＶＴ−８０１がファーバー病マウスでの組織セラミドの低下における最大の有効性評価項目を達成するために必要な血清および組織曝露の目標を確立する。セラミド蓄積に関連する重要な組織（肝臓、脾臓）において達成される著しく高くかつ長期にわたる曝露は、血清中の酵素の検出可能なレベルを上回る、ＲＶＴ−８０１による組織中のセラミド減少の期間延長を支持する。

実施例３
ＲＶＴ−８０１のヒトでの等価で治療上有意義な用量（ＨＥＤ：ヒト等価用量）を、体表面積または臓器組織重量：体重比を使用して上で論じたスケール調整戦略を適用することによって評価した。

図９に示すように、ＲＶＴ−８０１の１０ｍｇ／ｋｇ用量を体表面積（ＢＳＡ）によってスケール調整して、次式に基づいて種間の一般的な生理学的傾向を説明した：ＨＥＤ＝動物用量ｘ（動物の体重／ヒト体重）^０．３３（式中、動物用量は１０ｍｇ／ｋｇである）。１０ｍｇ／ｋｇのマウス用量に基づいて、成人のＨＥＤは約０．８ｍｇ／ｋｇであり、小児のＨＥＤは約１．２ｍｇ／ｋｇであった。

図１０および図１１に示すように、１０ｍｇ／ｋｇ用量のＲＶＴ−８０１を組織重量：体重比によってスケール調整して、次式を使用して、各々の種内のＲＶＴ−８０１分布の各区画についての相対サイズを説明した：ＨＥＤ＝動物用量ｘ（組織質量_ヒト／ＢＷ_ヒト）／（組織質量_マウス／ＢＷ_マウス）（式中、動物用量は１０ｍｇ／ｋｇである）。

図１２に示すように、体表面積および臓器対体重比に基づく２つのスケール調整係数を組み合わせることにより、１投与あたり約１〜５ｍｇ／ｋｇの保存的ヒト等価投与量（ＨＥＤ）範囲が提供される。このＨＥＤ範囲は、他の市販の酵素補充療法（ＥＲＴ）の承認された投与量と一致している。（図１２）。図１２の表に纏められている他のＥＲＴの全ての投薬情報は、製品のそれぞれのラベルからのものである。

実施例４
本研究の目的は、ボーラスＩＰ注射として投与された１、３、または１０ｍｇ／ｋｇの幼若雄ＣＤ−１マウスへの単回投与処置後のＲＶＴ−８０１の血清および組織薬物動態を決定することであった。

幼若マウスへのＩＰ投与後、平均血清ＲＶＴ−８０１濃度は、全ての投与群について用量投与後０．２５〜１時間で最も高く、そして急速に減少し、推定半減期は１時間であった。血清ＲＶＴ−８０１は、用量の増加に伴って増加し、Ｃ_ｍａｘおよびＡＵＣ_ｌａｓｔは、用量に関する比例を上回って増加した。Ｖｚ／Ｆ（血管外投与後の見かけの分布容積）は、体内全水分量を上回り、ＣＬ／Ｆ（血管外投与後の見かけのクリアランス）は、肝臓の血流を上回った。用量が３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇに増加すると、Ｖｚ／ＦおよびＣＬ／Ｆが低下する傾向があり、これは、組織の分布およびクリアランスが飽和していることを示唆している。

ファーバーマウスにおける最大有効用量（ＭＥＤ）は、ボーラスＩＰ注射により送達された１０ｍｇ／ｋｇであり、現在の研究と一致した。ＡＵＣ_ｌａｓｔ、Ｃ_ｍａｘ、およびＴ_ｍａｘの値は、同齢の野生型ＣＤ−１マウスへの１０ｍｇ／ｋｇの単回投与後に決定され、上記の通りであった：
ＲＶＴ−８０１−９０１３Ａ−血清ＰＫの特徴付けに焦点を当てた：
ＡＵＣ１．３７時間＊μｇ／ｍＬ
Ｃ_ｍａｘ１．２３時間＊μｇ／ｍＬ
Ｔ_ｍａｘ１．０時間
ＲＶＴ−８０１−９０１３Ｂ−ＲＶＴ−８０１の組織分布および組織：血清曝露比に焦点を当てた
ＡＵＣ１．４９時間＊μｇ／ｍＬ
Ｃ_ｍａｘ２．１７時間＊μｇ／ｍＬ
Ｔ_ｍａｘ０．２５時間

本研究は２つのパートで行った。本研究のパートＡの目的は、ボーラス腹腔内注射として投与された１、３、または１０ｍｇ／ｋｇの幼若雄ＣＤ−１マウスへの単回投与後のＲＶＴ−８０１の血清薬物動態を決定することであった。研究のパートＢの目的は、幼若雄ＣＤ−１マウスへのボーラス腹腔内注射として投与された１、３、または１０ｍｇ／ｋｇの単回投与後のファーバーマウスモデルにおけるセラミド蓄積に関与する重要な組織におけるＲＶＴ−８０１の配置を特徴付けることであった。

ＲＶＴ−８０１薬物原料７５３−０１−１６−００２を本研究で使用した。ＩＰ投与に使用したビヒクル製剤は、滅菌生理食塩水であった。

約３．５週齢の雄ＣＤ−１マウスにボーラス腹腔内注射により、ＲＶＴ−８０１を投与した。本研究のパートＡでは、合計１０８匹のマウスを使用し、本研究のパートＢでは、１０２匹のマウスを使用した。ＮｅｏＳｏｍｅは、動物の出荷および供給の日付を供給業者（ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と調整して、投与前に動物舎で子（ｐｕｐ）を十分に順化させた。

表５に従って、提供されたＲＶＴ−８０１のストック溶液を滅菌ＰＢＳで希釈することにより、投与物質を調製した。

個々の用量は、用量投与日に記録された体重に基づいて計算された。表６に詳述するように、ボーラスＩＰ注射により、動物にＲＶＴ−８０１を投与した。

薬物動態学的試料を表７に詳述されるスケジュールで収集し、全血を１投与群あたり、１時点あたり、３匹の動物から収集した。各動物から収集した全血の全容積を血清に処理した。

†完全に血清に処理された血液収集。

パートＢでは、提供されたＲＶＴ−８０１のストック溶液を表８に従って滅菌ＰＢＳで希釈することにより、投与物質を調製した。

薬物動態試料を表９に詳述されているスケジュールで収集した。

血液収集物を分け、各動物の全血および血清試料（示された場合）を提供した。

血清ＰＫ試料を約−７０℃で保存し、ドライアイス上で翌日配達便によりＢｉｏＡｇｉｌｙｔｉｘ（生物分析ベンダー）へ出荷され、ＲＶＴ−８０１濃度の決定をサンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって行った。

肝臓および脾臓は、適切な時点で血液収集の直後に、全ての投与群から収集した。組織を穏やかに吸い取って乾かし、事前にラベル付けした（事前に計量した）バイアルに入れた。組織を含む各バイアルの重量を記録し、試料を出荷まで−７０℃で保存した。緩衝液、防腐剤、または抗生物質を組織に添加せず、研究のどの段階でも組織灌流は行わなかった。１０ｍｇ／ｋｇの投与群では、脳、腎臓、心臓、および肺を収集し、肝臓および脾臓について記載したように処理した。さらに、適切な時点で血液収集した直後の１０ｍｇ／ｋｇの投与群から、０．５ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水を肺に注入する肺洗浄技術によって、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を収集し、その後に約０．３５ｍＬのＢＡＬＦを収集した。ＢＡＬＦ試料を好適な容器に入れ、遠心分離して上澄みおよび肺胞マクロファージペレットを生成した。上澄みを除去し、別々のバイアルに入れた。上澄みおよび細胞ペレットを出荷まで−７０℃で保存した。

薬物を含まないマトリックスを提供するために、さらに３匹のマウスを使用した。対照マトリックス試料を、各投与群についての投与前試料として使用した。試料の収集、処理、および保存は、上記のように行った。血清中のＲＶＴ−８０１の濃度を、適格なサンドイッチＥＬＩＳＡ法（ＢｉｏＡｇｉｌｙｔｉｘＢＡＬ−１７−３３３−０３６．０１−ＲＥＰ）を使用して決定した。血清アッセイのＬＬＯＱは２０ｎｇ／ｍＬであり、アッセイのＵＬＯＱは１２２４ｎｇ／ｍＬであった。

血清方法を、血液、肝臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、および脳での定量化のために適合させた。改変された方法には、組織溶解物の調製、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイを使用した総タンパク質の定量、および溶解緩衝液中１ｍｇ／ｍＬの総タンパク質濃度への希釈、ならびに溶解緩衝液中のＲＶＴ−８０１標準曲線の調製が含まれた。タンパク質含有量が低いため、標準化されたタンパク質濃度に基づくのではなく、容積に基づいて、ＢＡＬＦ試料を処理した。適合させた方法では、マウス血清品質制御試料のみの場合の最小必要希釈率（ＭＲＤ）が５０倍であった。標準試料および研究試料にはＭＲＤを享受させなかった。生成された信号は、試料中のＲＶＴ−８０１の濃度に比例した。適合させたアッセイのＬＬＯＱは０．４００ｎｇ／ｍＬであり、アッセイのＵＬＯＱは２４．５ｎｇ／ｍＬであった。測定されたＲＶＴ−８０１濃度を、組織の均質化および溶解液の希釈に関して補正した。生物分析方法および結果の記載は、最終生物分析報告で提供されている。

表１０の薬物動態パラメータは、ＰｈｏｅｎｉｘＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）バージョン７．０（Ｃｅｒｔａｒａ、プリンストン、ニュージャージー州）を使用して、血清および組織の濃度−時間複合データを使用する非コンパートメント法を使用して導出された。ゼロ時間（投与前）から最終の非ゼロ時点までの濃度−時間曲線下の面積は、線形法および対数台形法（ｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｔｒａｐｅｚｏｉｄａｌｍｅｔｈｏｄ）の組み合わせによって計算された。線形台形法は、濃度の増加から生じる全ての増分台形に使用され、対数台形法は、濃度の低下から生じるものに使用された（線形アップ／ログダウン法（ｌｉｎｅａｒｕｐ／ｌｏｇｄｏｗｎｍｅｔｈｏｄ））。公称血液サンプリングおよび組織収集時間を分析において使用した。

ＲＶＴ−８０１濃度値は、ｎｇ／ｍＬの単位で生物分析ラボから受信され、ＰＫ分析および報告のためにμｇ／ｍＬの単位に変換された。濃度データおよびＰＫパラメータは、小数点以下２桁で報告されたＴ_ｍａｘおよびＴ_ｌａｓｔの値を除いて、有効数字３桁で報告された。

定量限界（ＢＬＱ）未満の全ての濃度をゼロに設定し、各時点の各投与量群の平均濃度を計算して、濃度時間の要約統計と平均濃度時間の数値を報告した。ＢＬＱである平均濃度を調整せずに非コンパートメント分析で使用した。

０に等しい任意の平均濃度（全ての値ＢＬＱ）はＢＬＱとみなされ、ＮＣＡでは次のように処理された。

ＢＬＱ値がプロファイル内の測定可能な濃度の後に発生し、その後に定量化可能な値が続く場合、欠落データとして扱われました。

ＢＬＱ値が収集間隔の最後に発生した場合（最終の定量可能な濃度の後）、欠落データとして扱われた。

Ｃ_ｍａｘの後に２つのＢＬＱ値が連続して発生した場合、プロファイルは最初のＢＬＱ値で終了したとみなされ、任意の後続の濃度はＰＫ計算から除外された。

結果。
パートＢのＰＫ分析で使用されたＲＶＴ−８０１についての個々のマウスの血清および組織濃度−時間データを表１１に示す。

組織および用量によって群分けされた複合平均ＲＶＴ−８０１濃度−時間データを表１２に示す。

１０ｍｇ／ｋｇ投与群の平均ＲＶＴ−８０１濃度−時間データが、図２０において直線軸に重ねられた組織を伴って表示される。

図２０Ａおよび図２０Ｂは、それぞれパートＢにおける幼若マウスへのＩＰ投与後の平均ＲＶＴ−８０１組織濃度−時間プロファイル（線形および対数線形）を示す。

幼若マウスへのＩＰ投与後、平均血清ＲＶＴ−８０１濃度は、全ての投与群について用量投与後０．２５時間で最も高かった。血清ＲＶＴ−８０１濃度は急速に低下した。最終の非ゼロ平均濃度は、１ｍｇ／ｋｇ用量の場合は３時間、３ｍｇ／ｋｇ用量の場合は投与後４時間、および１０ｍｇ／ｋｇ用量の場合は投与後４時間で生じた。投与群にわたって血清濃度の変動は大きかった。研究のパートＢの血清濃度は、パートＡの血清濃度と一般に一致した。

１０ｍｇ／ｋｇの投与後、組織中のＲＶＴ−８０１濃度は投与後の最初の時点で定量化でき、肺では投与後０．５時間、肝臓、脾臓、腎臓、および心臓では投与後１時間で最高であった。ＲＶＴ−８０１の濃度は、一般に、投与後１８時間まで組織で定量化可能であった。

用量によって群分けされたパートＡおよびパートＢの複合平均ＲＶＴ−８０１血清濃度−時間データを、それぞれ表１３および１４に纏めた。

マトリックスによるＲＶＴ−８０１の複合平均非コンパートメントＰＫパラメータを表１５に示す。

組織と血清曝露との比を表１６に示し、図２１に図示する。図２１は、ＡＵＣ_ｌａｓｔに基づくＲＶＴ−８０１組織：血清曝露比を示す。

ＢＡＬＦ、脳、心臓、腎臓、および肺は、１０ｍｇ／ｋｇ投与群についてのみ収集された。

ＥＬＦの濃度を反映するには、希釈を考慮した補正係数が必要である。

様々な組織の投与レベルに対してプロットされた用量正規化ＰＫパラメータを図２２Ａ〜図２２Ｄに示す。

図２２Ａは、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１の投与後の血液における用量正規化曲線下面積（ＤＮＡＵＣ）データを示す。

図２２Ｂは、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１の投与後の血清における用量正規化曲線下面積（ＤＮＡＵＣ）データを示す。

図２２Ｃは、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１の投与後の肝臓組織における用量正規化曲線下面積（ＤＮＡＵＣ）データを示す。

図２２Ｄは、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１の投与後の脾臓における用量正規化曲線下面積（ＤＮＡＵＣ）データを示している。

ＲＶＴ−８０１への全身血清曝露は短期間であり、血清中の濃度は、組織濃度よりもはるかに短い期間にわたり定量可能であり、血清で４時間であるのに対して、組織で１８〜２４時間であった。Ｔ_ｍａｘは、投与後１時間以内に発生し、組織への化合物の急速な分布と一致している。

ＲＶＴ−８０１は組織に広く分布し、組織と血清曝露（ＡＵＣ_ｌａｓｔ）との比は、０．０００１６５（ＢＡＬＦ：血清）〜９２．９（肝臓：血清）の範囲であった。最高値の曝露は、肝臓＞脾臓＞腎臓＞肺＞心臓＞全血＞ＢＡＬＦで観察され、Ｔ_ｍａｘは、投与後０．２５時間〜２時間の範囲であった。肝臓、脾臓、腎臓、心臓、および肺における曝露は、投与後１８〜２４時間定量可能であった。

ＢＡＬＦ試料は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）注入液で希釈したＥＬＦ（肺胞上皮粘液）からなる。ＢＡＬＦ収集の直後に遠心分離により細胞を除去したため、肺胞細胞集団はアッセイ試料中に存在しなかった。ＰＢＳ中の天然肺液の希釈を反映する補正係数は、ＢＡＬＦにおけるＲＶＴ−８０１濃度をＥＬＦにおけるレベルに変換するために必要である。絶対希釈係数の決定は、この探索的研究の一部として行わなかった。補正係数は、ＢＡＬＦにおける尿素含有量を同じ動物由来の血漿中の尿素含有量と比較することによって決定することができるが、それは、上皮液中の天然尿素レベルが、血漿尿素含有量を反映すると一般的に認められているからである（ＲｅｎｎａｒｄＳＩ，ＢａｓｓｅｔＧ，ＬｅｃｏｓｓｉｅｒＤ，Ｏ’ＤｏｎｎｅｌｌＫＭ，ＰｉｎｋｓｔｏｎＰ，ＭａｒｔｉｎＰＧ，ＣｒｙｓｔａｌＲＧ，１９８６，“Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎｏｆｖｏｌｕｍｅｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｌｉｎｉｎｇｆｌｕｉｄｒｅｃｏｖｅｒｅｄｂｙｌａｖａｇｅｕｓｉｎｇｕｒｅａａｓｍａｒｋｅｒｏｆｄｉｌｕｔｉｏｎ，”ＪｏｆＡｐｐｌｉｅｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．１９８６，６０（２）：５３２−５３８）。同様の収集方法を使用してＢｅｒｋｈｏｕｔらによって決定される補正係数（ＢｅｒｋｈｏｕｔＪ，ＭｅｌｃｈｅｒｓＭＪ，ｖａｎＭｉｌＡＣ，ＳｅｙｅｄｍｏｕｓａｖｉＳ，ＬａｇａｒｄｅＣＭ，ＮｉｃｈｏｌｓＷＷ，ＭｏｕｔｏｎＪＷ，２０１５ “Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓａｎｄｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎｏｆｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅａｎｄａｖｉｂａｃｔａｍｉｎｔｏｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｌｉｎｉｎｇｆｌｕｉｄｉｎｔｈｉｇｈ−ａｎｄｌｕｎｇ−ｉｎｆｅｃｔｅｄｍｉｃｅ，”．ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ．，５９（４）：２２９９−２３０４）は変動性が高く（平均、１１．６倍；範囲、２ｍＬの総注入容積の場合には４．３〜１４４．２倍）、本研究（０．５ｍＬの注入容積）での希釈は、最大３６倍になる可能性があることを示している。

ＲＶＴ−８０１の濃度は、血清中よりも血中で低く、血中：血清比は、０．１２７〜０．５８４の範囲であり、これは、ＲＶＴ−８０１が優先的に赤血球と関連しないことを示唆している。表１７を参照のこと。

本研究の目的は、ボーラスＩＰ注射として投与された１、３、または１０ｍｇ／ｋｇの幼若雄ＣＤ−１マウスへの単回投与処置後のＲＶＴ−８０１の血清および組織薬物動態を決定することであった。幼若マウスへのＩＰ投与後、平均血清ＲＶＴ−８０１濃度は、全ての投与群について用量投与後０．２５〜１時間で最も高く、そして急速に減少し、推定半減期は１時間であった。血清ＲＶＴ−８０１は用量の増加に伴って増加し、Ｃ_ｍａｘおよびＡＵＣ_ｌａｓｔは、用量に関して比例するよりも大きく増加した。Ｖｚ／Ｆは体内全水分量を上回り、ＣＬ／Ｆは肝臓の血流を上回った。用量が３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇに増加すると、Ｖｚ／ＦおよびＣＬ／Ｆが低下する傾向があり、これは、組織の分布およびクリアランスが飽和していることを示唆している。ファーバーマウスにおける最大有効用量（ＭＥＤ）は、ボーラスＩＰ注射により送達された１０ｍｇ／ｋｇであり、本研究と一致した。同齢の野生型ＣＤ−１マウスへの１０ｍｇ／ｋｇの単回用量の後に決定されるＡＵＣ_ｌａｓｔの値は、１．３７μｇ．ｈ／ｍＬであり、Ｃ_ｍａｘは１．２３μｇ／ｍＬであった。

ＲＶＴ−８０１は、血清から他の組織への広範な分布と一致して、全身循環から迅速なクリアランスを受けた。ＲＶＴ−８０１の最も高い曝露は、肝臓＞脾臓＞腎臓＞肺＞心臓＞全血＞ＢＡＬＦで観察された。ＡＵＣ_ｌａｓｔに基づく組織と血清との曝露比は、０．０００１６５（ＢＡＬＦ：血清）〜９２．９（肝臓：血清）の範囲であった。組織曝露は、一般に、投与後１８〜２４時間持続した。ＲＶＴ−８０１の濃度は、血清中よりも血中で低く、血液：血清比は、０．１２７〜０．５８４の範囲であり、これは、ＲＶＴ−８０１が赤血球と優先的に関連しないことを示唆している。

実施例５
投与時に４〜５週齢のファーバーマウスでの組織分布研究は、合計１２匹のファーバーマウスを利用して行った（研究ＲＶＴ−８０１−９０２１；パートＡ）。６匹の動物にそれぞれ、１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１の単回用量、または３回の、１０ｍｇ／ｋｇ／投与のＲＶＴ−８０１の週１回用量のいずれかを投与した。Ａｓａｈ１^{Ｐ３６１Ｒ／Ｐ３６１Ｒ}動物の供給が制限され、ｒｈＡＣの性別特異的な影響がこれらの動物で観察されなかったため、投与群はどちらかの性別の動物からなるものとした。研究の投与段階の概要を表１８に示す。

投与開始時に４〜５週齢の雄および雌のファーバーマウスに、ボーラス腹腔内（ＩＰ）注射により、ＲＶＴ−８０１を単回投与するか、または週１回の反復投与をした。表１９に示すように、投与物質を調製した。個々の用量は、用量投与の日に記録された体重に基づいて計算した。ＲＶＴ−８０１を滅菌生理食塩水で希釈し、投与物質を各投与日に新しく調製した。

実験は、ファーバーマウスへのＲＶＴ−８０１の単回投与または反復投与後の選択された時点で循環中および組織中のｒｈＡＣの濃度を決定するため、およびＣＤ−１マウスにおいて確立された薬物動態に関する、重要組織に対するＲＶＴ−８０１分布の範囲および程度を評価するために設計された。

実施例６
未処理および処理ファーバーマウスでの免疫型研究を行った。未処理ファーバーマウスおよび野生型（ＷＴ）マウスに４、６、８週間目で投与した。処置ファーバーマウスには約４週間目で投与した。１１匹の（雄／雌）未処理ファーバーマウス、８匹の（雄／雌）未処理ＷＴマウス、および７匹の（雄／雌）処理ファーバーマウスを利用して、研究を行った。ＲＶＴ−８０１を週１回投与した。研究のこの部門をＲＶＴ−８０１−９０２５パートＢとして命名した。

実施例５および６で投与したｒｈＡＣは、ｐＨ７．４のｒｈＡＣの１０ｍｇ／ｍｌ（実際には９．９１ｍｇ／ｍｌ）溶液から構成された。

ＲＶＴ−８０１の投与後、標準的操作手順に従ってマウスを安楽死させ、ＰＫ試料を投与後６時間および２４時間で収集した（試料の収集を、反復投与群でのＲＶＴ−８０１の３回目の週１回注射後に行った）。ファーバーマウスの試料入手が限られるため、薬物動態試料の収集をこれら２つの時点に制限した。全血は、心臓穿刺によってリチウムヘパリンバイアルに収集され、全体が血漿に処理された。無傷の肝臓、脾臓、腎臓、肺、心臓、脳、および胸腺組織を各動物から収集し、穏やかに吸い取って乾燥させ、個々のバイアルに入れた。組織は固定されておらず、どの段階でも緩衝液で灌流せず、緩衝液、防腐剤、プロテアーゼ阻害剤、または抗生物質を添加せずに試料を凍結した。血漿および組織試料を約−７０℃で保存し、分析のために生物分析施設にドライアイス上で出荷した。ＰＫ試料収集を表２０に詳細に示す。

組織に基づくＥＬＩＳＡ
ＲＶＴ−８０１投与後のファーバーマウス組織におけるｒｈＡＣの濃度を、ＢｉｏＡｇｉｌｙｔｉｘ（ダーラム、ノースカロライナ州）により行わるＥＬＩＳＡによって測定した。

組織試料は、血清試料または緩衝液に基づく品質管理（ＱＣ）試料のいずれかを含む均質化緩衝液中で調製された校正標準に対して行った。

生じた組織試料を、プロテアーゼ阻害剤カクテル（ＨＡＬＴ、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含む緩衝液（１５０ｍＭの塩化ナトリウム、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２％（ｗ／ｖ）ＣＨＡＰＳ、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で均質化した。ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用し、それぞれ３分間の３サイクルとし、３０Ｈｚでの単一の５ｍｍステンレス鋼ビーズを用いて、試料を処理した。試料温度を制御するために、ホモジネートをサイクル間で２〜８℃とした。各組織ホモジネートの総タンパク質濃度を比色ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質定量キット（Ｐｉｅｒｃｅ）で決定し、ＥＬＩＳＡで分析する前に、試料を緩衝液を用いて１ｍｇ／ｍＬの公称総タンパク質濃度に希釈した。

捕捉抗体（ウサギ抗ｒｈＡＣ）をマイクロタイタープレート上にコーティングした。プレートをタンパク質性緩衝液でブロッキングし、洗浄して、過剰の捕捉試薬およびブロッキング試薬を除去した。希釈した組織ホモジネートを校正標準およびＱＣと一緒にプレートに添加し、インキュベートして、試料および対照中のｒｈＡＣをプレートをコーティングしている抗体と結合させた。プレートを洗浄して、未結合のｒｈＡＣを除去し、検出抗体（ウサギ抗ｒｈＡＣ−ＨＲＰ）と共にインキュベートした。プレートを洗浄して、未結合の検出抗体を除去し、比色基質（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ））を添加してインキュベートし、検出抗体と結合したｒｈＡＣを可視化した。停止溶液を添加した後、試料の吸光度を読み取った。アッセイは、表２１に概説されるパラメータを使用して、試料中のｒｈＡＣの濃度に比例する信号を生成した。組織ホモジネートにおけるＲＶＴ−８０１濃度を標準曲線から内挿し、希釈係数を適用することにより補正して、天然組織における濃度を計算した。

ファーバーマウス血漿中のｒｈＡＣの含有量は、適格なＥＬＩＳＡ分析によって決定された。簡単に言うと、マイクロタイタープレートを捕捉試薬（ウサギ抗ｒｈＡＣ）でコーティングし、ブロッキングし、洗浄し、生じた血漿試料およびマトリックス一致（ｍａｔｒｉｘ−ｍａｔｃｈｅｄ）校正標準およびＱＣと共にインキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄して未結合のｒｈＡＣを除去し、次いで検出試薬（ウサギ抗ｒｈＡＣ−ＨＲＰ）と共にインキュベートした。さらに洗浄することにより、過剰な（非結合の）検出試薬を除去し、比色基質（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ））をプレートに添加した。最後に、停止溶液を添加し、比色の発色を停止し、試料の吸光度を読み取った。アッセイで生成された比色シグナルの強度は、試料中のｒｈＡＣの濃度に比例した。アッセイパラメータの概要については、表２２を参照のこと。ファーバーマウス血漿試料中のＲＶＴ−８０１濃度を標準曲線から逆算した。

ＲＶＴ−８０１濃度−時間曲線下面積は、利用可能なＡｓａｈ１^{Ｐ３６１Ｒ／Ｐ３６１Ｒ}動物の限られた数の関数である、投与後の期間にわたるデータポイントの量および時間密度が不十分であるため、ファーバーマウスでは計算されなかった。同様の理由で、半減期もクリアランスも計算されなかった。

ＲＶＴ−８０１濃度データは有効数字３桁まで報告され、Ｔ_ｍａｘ値は小数点第２位まで報告された。

定量限界（ＢＬＱ）未満で報告された全ての生じた試料濃度は、平均濃度−時間データを計算するときにゼロに等しい値を有するものとして処置された。

結果
血漿中の平均ｒｈＡＣ濃度−時間データ、および１０ｍｇ／ｋｇ／投与のＲＶＴ−８０１の単回投与または毎週の反復投与を受けたファーバーマウス由来の選択された組織を表６に示し、表７に個々のデータを詳細に示す。

ＲＶＴ−８０１の単回投与後、ファーバーマウスから収集された全ての生物学的マトリックスにわたって、投与後６時間（投与後の最初の時点）でｒｈＡＣの最高濃度が測定された。しかしながら、これらのデータは、実行可能なサンプリング時点の限られた数によって偏りがあり得る。

１０ｍｇ／ｋｇ／投与のＲＶＴ−８０１を反復投与した後、循環中および投与後６時間および２４時間に収集された組織にわたるｒｈＡＣレベルは、ＣＤ−１マウス（ＲＶＴ−８０１−９０２１）では、一般に、１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１の単回投与後の値よりも低く、複数の２４時間反復投与試料が定量限界未満であった。この傾向は、ファーバーマウスへのＲＶＴ−８０１投与後のｒｈＡＣ全含有量が最も高い３つの組織（肝臓、脾臓、腎臓）間で容易に理解でき、平均単回投与の２４時間濃度が、反復投与後の濃度よりも１桁大きい（図１３）。この一般的な傾向の１つの例外は脳であり、定量可能なｒｈＡＣ濃度を有する試料は、ＲＶＴ−８０１の複数回投与を受けた２匹のマウス由来の試料のみであった。

図２１は、幼若ＣＤ−１マウスに１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１を単回投与した後の、ＡＵＣ_ｌａｓｔに基づくＢＡＬＦ、血液、脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、および脾臓におけるＲＶＴ−８０１組織：血清曝露比を示す。

表２３：１０ｍｇ／ｋｇ／投与のＲＶＴ−８０１を単回投与または週１回反復投与のいずれかをボーラスＩＰ注射により受けた後の、ファーバー（Ａｓａｈ１^{Ｐ３６１Ｒ／Ｐ３６１Ｒ}）マウスの選択された生体マトリックスにわたる平均ｒｈＡＣ濃度。ＲＶＴ−８０１−９０２５パートＢの動物は、ＲＶＴ−８０１を週１回、４回投与を受け、ＲＶＴ−８０１−９０２１において複数回投与を受けたマウスには、ＲＶＴ−８０１を週１回、３回注射した。サンドイッチＥＬＩＳＡによって決定されたＲＶＴ−８０１試料濃度。ＥＬＩＳＡ校正範囲：２０．０〜１２２４ｎｇ／ｍＬ（血清）、０．４００〜２４．５ｎｇ／ｍＬ（組織）、２０．０〜１２８０ｎｇ／ｍＬ（血漿）。

ＢＬＱ：定量限界未満
ＮＣ：収集なし
^１研究ＲＶＴ−８０１−９０２１のデータ
^２研究ＲＶＴ−８０１−９０２５パートＢのデータ

表２４は、１０ｍｇ／ｋｇ／投与のＲＶＴ−８０１を単回投与または週１回反復投与のいずれかをボーラスＩＰ注射により受けた後の、ファーバー（Ａｓａｈ１^{Ｐ３６１Ｒ／Ｐ３６１Ｒ}）マウスの選択された生体マトリックスにわたる平均ｒｈＡＣ濃度を示している。ＲＶＴ−８０１−９０２５パートＢの動物は、ＲＶＴ−８０１を週１回、４回投与を受け、ＲＶＴ−８０１−９０２１において複数回投与を受けたマウスには、ＲＶＴ−８０１を週１回、３回注射した。サンドイッチＥＬＩＳＡによって決定されたＲＶＴ−８０１試料濃度。ＥＬＩＳＡ校正範囲：２０．０〜１２２４ｎｇ／ｍＬ（血清）、０．４００〜２４．５ｎｇ／ｍＬ（組織）、２０．０〜１２８０ｎｇ／ｍＬ（血漿）。
ＢＬＱ：定量限界未満
ＮＣ：収集なし

結果。
ＲＶＴ−８０１のマウス薬物動態は、健康な幼若雄ＣＤ−１マウス（約３．５週齢）において、以前に特徴付けした（ＲＶＴ−８０１−９０１３パートＡ）。離乳直後にマウスに投与し、重度のファーバーモデルで行われた有効性試験の開始時のファーバーマウスのサイズおよびそれらの年齢に近づけた。一般的なＡＤＭＥ研究のためにＣＤ−１マウスを使用するという決定は、投与されたＲＶＴ−８０１の十分な濃度−時間経過を説明するための好適性および利用可能性に影響を及ぼす、重度のファーバーマウスの悪液質の性質および特徴的な脆弱性と共に、一般的な遺伝的背景（ファーバーマウスの親系統）に基づいた。

健康な幼若雄ＣＤ−１マウスへの単回ＩＰボーラス注射として１、３、または１０ｍｇ／ｋｇで投与した場合、ＲＶＴ−８０１の全身曝露は、一般に、Ｃ_ｍａｘおよびＡＵＣの両方に関して、用量に関する比例を上回って増加し、投与後１時間以内に血清中濃度がピークに達した。循環で比較的短命（半減期＜１時間）であるが、見かけの分布容積および見かけのクリアランスは、これらの値が体内全水分量および肝臓の血流をそれぞれ上回ったため、血管系を上回るＲＶＴ−８０１の急速かつ広範囲な分布と一致した（表２５）。

表２５．健康な幼若雄ＣＤ−１マウスへの単回ＩＰボーラス注射後のＲＶＴ−８０１の血清薬物動態；投与後２４時間までに収集されたＰＫ試料、１時点あたりｎ＝３。
Ｃ_ｍａｘ：最大観測濃度
Ｔ_ｍａｘ：最大観測濃度の時間
Ｔ_ｌａｓｔ：最終的な定量可能な時点の時間
ＡＵＣ_ｌａｓｔ：０から最終の定量可能な時点までの濃度−時間曲線下面積
ｔ_１／２：終末相半減期
Ｖｚ／Ｆ：血管外投与後の見かけの分布容積
ＣＬ／Ｆ：血管外投与後の見かけのクリアランス

ＣＤ−１マウスにおけるＲＶＴ−８０１の曝露時間および一般的な排泄動態は、いずれかの系統にｒｈＡＣを１０ｍｇ／ｋｇで単回投与した後のファーバーマウスにおいて測定された酸性セラミダーゼ活性の持続時間および半減期と密接に相関していた（図１４）。この観察は、ＣＤ−１マウスを使用してＲＶＴ−８０１のマウス薬物動態を特徴付けし、一般的なＡＤＭＥ特性を疾患モデルに外挿する手法に対してさらなる信頼を与えた。

図１５は、ＲＶＴ−８０１の単回１０ｍｇ／ｋｇ投与後の健康な幼若ＣＤ−１マウスにおける最終的なｒｈＡＣ組織：血清ＡＵＣ比を示す。

幼若雄ＣＤ−１マウスに単回ＩＰボーラス注射として１、３、または１０ｍｇ／ｋｇで投与した場合、ＲＶＴ−８０１は、選択された組織および臓器の範囲に広範囲に分布した（ＲＶＴ−８０１−９０１３パートＢ）。組織を曝露順に順位付けすると、ＡＵＣに基づいて、肝臓＞脾臓＞腎臓＞肺＞心臓＞血清＞血液が示される（図１５、表９）。

インビボ血液分布分析は、ＲＶＴ−８０１が優先的に赤血球と関連しないことを示唆した。血清と比較して組織における曝露期間が大幅に延長されたことが観察された。ＲＶＴ−８０１は、投与後最大４〜６時間まで血清中で定量可能であったが、組織曝露は、一般に、投与後少なくとも１８〜２４時間持続した。

肝臓および脾臓での蓄積されたセラミドレベルの低下に基づいてファーバーマウスモデルにおける最大有効用量（ＭＥＤ）と相関する、ＣＤ−１マウスへの１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１の用量では、分析のために選択された組織での定量化可能なｒｈＡＣの大部分は、肝臓、脾臓、および腎臓に分布していた。

表２６．健康な幼若雄ＣＤ−１マウスへの単回ＩＰボーラス注射後のＲＶＴ−８０１の全身および組織薬物動態；投与後２４時間までに収集されたＰＫ試料、１時点あたりｎ＝３。
Ｃ_ｍａｘ：最大観測濃度
Ｔ_ｍａｘ：最大観測濃度の時間
Ｔ_ｌａｓｔ：最終の定量可能な時点の時間
ＡＵＣ_ｌａｓｔ：０から最終の定量可能な時点までの濃度−時間曲線下面積
ファーバーマウスにおけるＲＶＴ−８０１の単回投与薬物動態（投与後２つの時点に限定する）を、ＣＤ−１マウスにおいて特徴付けられた曝露プロファイルと比較することにより、いずれかの系統へのＲＶＴ−８０１の単回１０ｍｇ／ｋｇボーラスＩＰ注射後の分析された時点において、ファーバーマウスにおけるｒｈＡＣ曝露が高く、ｒｈＡＣの全身レベルが著しく増加し、組織にわたってより一般的には高い曝露であることが示唆された（表２６）。

表２７．ＲＶＴ−８０１の単回１０ｍｇ／ｋｇボーラスＩＰ注射後の約３．５週齢の健康な雄ＣＤ−１マウスならびに４〜５週齢の雄および雌のファーバーマウス（Ａｓａｈ１^{Ｐ３６１Ｒ／Ｐ３６１Ｒ}）のＲＶＴ−８０１薬物動態パラメータ。合計３３匹のＣＤ−１マウスおよび合計６匹のファーバーマウスを使用した（各系統について１時点あたりｎ＝３）；平均データを報告。サンドイッチＥＬＩＳＡによって決定されたＲＶＴ−８０１試料濃度。ＥＬＩＳＡ校正範囲：２０．０〜１２２４ｎｇ／ｍＬ（血清）、０．４００〜２４．５ｎｇ／ｍＬ（組織）、２０．０〜１２８０ｎｇ／ｍＬ（血漿）。ＲＶＴ−８０１の脳曝露は、ＣＤ−１マウスでは限定され、単回投与のファーバーマウスでは定量可能ではなかったため、示していない。

^１利用可能なＡｓａｈ１^{Ｐ３６１Ｒ／Ｐ３６１Ｒ}動物の限定された数の関数である、投与後の期間にわたる濃度−時間データポイントが不十分であったなため、ファーバーマウスについてＡＵＣは計算されなかった。

^２最大ＲＶＴ−８０１濃度は、ファーバーマウスから収集された全ての生物学的マトリックスにわたって、投与後６時間で測定された（以前の投与後評価）。これらのデータは、限られた数の実行可能なサンプリング時点によって偏りがあり得る。

^３利用可能なファーバーマウスが限られているため、薬物動態試料の収集を投与後６時間および２４時間に制限した。

ＲＶＴ−８０１の単回１０ｍｇ／ｋｇのＩＰ投与後のファーバー血漿およびＣＤ−１血清で測定された全身ｒｈＡＣレベルは、ファーバーマウスが、投与後６時間におけるより高いレベルによって示されるように、ＣＤ−１マウスよりも高い全身ｒｈＡＣ曝露を経験し、循環中に存在を維持し、ファーバー血漿では２４時間の濃度時点まで定量可能であったが、ｒｈＡＣは、ＣＤ−１マウス血清中では６時間超では検出できず／定量限界未満であったことを示唆している。（図１６）。

ファーバーマウスでは、最高濃度のＲＶＴ−８０１が、分析された全ての生物学的マトリックスにわたって、投与後６時間で生じた。ファーバーの研究はＣ_ｍａｘを明確に定義するように設計されておらず、ファーバーでの投与後６時間におけるｒｈＡＣ濃度をＣＤ−１マウスと直接比較することは、その特定の時点でのＣＤ−１データの不足に照らしてしなかったが、６時間において、ファーバーの肝臓、脾臓、肺、および心臓の濃度は、対応するＣＤ−１組織で観察されたＣ_ｍａｘよりも高かった。例外は腎臓であり、ＣＤ−１マウスはわずかに高い濃度を示した。投与後２４時間において、ＣＤ−１組織中のｒｈＡＣレベルは、定量限界未満であるか、または急速に低下したが、ファーバーマウス組織での濃度は、ＬＬＯＱを大幅に上回り、ＣＤ−１マウスにおけるＴ_ｌａｓｔ血清データと比較して高いままであった。

ＲＶＴ−８０１の単回投与後の循環中および曝露の主要組織中のｒｈＡＣの比較を図１７に示す。個々のデータポイントの広がりの比較を図１８に示し、ＲＶＴ−８０１の単回投与後の所与の時点でのｒｈＡＣ濃度の変動は、分析した組織にわたって理解することができる。繰り返すが、投与後２４時間でのＣＤ−１マウスと比較したファーバーでの曝露の増加は容易に理解できる。

図１７は、ＲＶＴ−８０１の単回１０ｍｇ／ｋｇボーラスＩＰ注射後のファーバー（白抜きの記号）およびＣＤ−１（黒塗りの記号）マウスにおける循環中および３つの主要な曝露組織中のｒｈＡＣの濃度を示している。１時点あたりの動物ｎ＝３。試料を収集し、投与後２４時間まで分析した。ファーバーマウスの試料を、投与後６時間および２４時間でのみ収集した。６時間のＣＤ−１脾臓データは、単一の定量化可能な値によって駆動される。

図１８は、ＲＶＴ−８０１の単回１０ｍｇ／ｋｇボーラスＩＰ注射後のファーバー（白抜きの記号）およびＣＤ−１（黒塗りの記号）マウスの肝臓（図１８Ａ）、脾臓（図１８Ｂ）、腎臓（図１８Ｃ）、肺（図１８Ｄ）、および心臓（図１８Ｅ）での個々のｒｈＡＣ濃度−時間データを示している。１時点あたりｎ＝３。試料を収集し、投与後２４時間まで分析した。

幼若で健康なＣＤ−１マウスは、ファーバー病マウスモデルの親系統とみなされる。図３は、幼若ＣＤ−１マウスのＲＶＴ−８０１薬物動態プロファイルが、ファーバーマウスの血中の実験的ｒｈＡＣ活性プロファイルと同様であることを示しており、幼若ＣＤ−１マウスがファーバーマウスのＰＫを適切に近似していることを示している（ファーバーマウスが脆弱であり、交配が難しく、ＰＫ評価を行うのに十分な数ではないためである）。

少数のファーバーマウスに基づき、系統間で重複するデータポイントが限られているが、データは、ＲＶＴ−８０１の単回１０ｍｇ／ｋｇ投与後のＣＤ−１マウスと比較して、ファーバーでは、全身ｒｈＡＣ曝露が有意に高いことを示唆している。生じた全身ＰＫ試料は、潜在的に重要な多くの点で異なっていた。ファーバーマウスは、混合性別（ｍｉｘｅｄ−ｓｅｘ）であり、健康で同齢のＣＤ−１よりも大幅に小さく、深刻な病理を示し、血漿試料を生成したが、血清は幼若な雄ＣＤ−１マウスから収集した。

ＲＶＴ−８０１曝露で観察された違いは、血清および血漿のタンパク質含有量（凝固因子を除いて）がほぼ同じであるため、系統間で異なるマトリックスを分析した結果ではない可能性がある。さらに、測定されたファーバー血漿曝露の増加は、血清でのＥＬＩＳＡ感度と比較して増加した血漿ＥＬＩＳＡ感度、および／または方法の感度の違いに起因してＣＤ−１血清で検出不能であった追加のデータポイント（すなわち投与後２４時間）を報告する能力の結果ではなかった。報告されたファーバー血漿データはＬＬＯＱを大きく上回り、血漿および血清方法を同様に行った（表２７）。

投与後の組織中のＲｈＡＣ濃度は、ファーバーマウスの組織重量と体重の比に依存していないようであった^ａ。

^ａＲＶＴ−８０１−９０２５での反復投与ファーバー動物に基づく；ＲＶＴ−８０１−９０２１では、性別および体重は記録していない。

野生型マウスとファーバーマウスとの間の顕著な免疫学的差異が示されているが、ＲＶＴ−８０１の薬物動態に対するそれらの影響は不明である。抗薬物抗体（ＡＤＡ）は、薬物抗体複合体の循環を延長させることができるが、目下検討中のＰＫの違いが、ＲＶＴ−８０１の単回用量投与後２４時間以内に観察され、これらの試料ではＡＤＡは検出されなかった。

ＣＤ−１マウスと比較してファーバーマウスで観察された曝露の差異は、ファーバー疾患マウスモデルの多臓器生理学的変化の結果であった可能性がある。

ファーバーマウスとＣＤ−１マウスとの間の、腹腔から血管系へのＲＶＴ−８０１の分布割合の違い、および／または循環からの組織へのｒｈＡＣの取り込みの違いは、系統間で観察されたＰＫの差異を説明し得る。しかしながら、これらの潜在的な傾向は、限られた利用可能なデータの著しく過度な解釈を行わなければ、本研究から評価することはできない。

ＲＶＴ−８０１−９０２１における投与群と比較すると、ＲＶＴ−８０１の毎週反復投与時において、ｒｈＡＣの明らかな蓄積はなかった。むしろ、データは、限られたものであるが、同じ投与レベル（１０ｍｇ／ｋｇ／投与）での単回注射と比較して、ＲＶＴ−８０１を週１回で複数回投与した場合には、循環中および分析した組織にわたってｒｈＡＣ濃度がより低かったことを示唆している。脳を除く全てのマトリックスにわたり、投与後６時間および２４時間での単回投与の濃度−時間データは、ＲＶＴ−８０１の単回投与後は、３回の毎週投与後よりも高かった（図１９Ａ〜図１９Ｇ）。さらに、データは、ＲＶＴ−８０１の複数回投与後の絶対ｒｈＡＣ濃度がより低いことおよびクリアランス率がより高いことの両方に起因する、より低い曝露のシナリオと一致している。これらの明らかな傾向を調査し、データが、反復投与時のＲＶＴ−８０１の一般的なマウス薬物動態と一致するかどうか、またはファーバー病マウスモデルに固有の病状の特徴が、ｒｈＡＣの取り込み、性質、およびクリアランスに影響を及ぼすかどうかを確立するために、さらなる研究が必要であろう。

図１９Ａ〜図１９Ｇは、実施例５（ＲＶＴ−８０１−９０２１）に従って、ボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇの単回投与後のＣＤ−１マウスおよび１０ｍｇ／ｋｇの単回投与または１０ｍｇ／ｋｇ／投与の週１回の複数回投与後のいずれかのファーバーマウスでの平均ｒｈＡＣ濃度を示す。

図２０Ａおよび図２０Ｂは、それぞれ、ＲＶＴ−８０１−９０１３パートＢにおける幼若ＣＤ−１マウスへのＩＰ投与後の平均ｒｈＡＣ組織濃度−時間プロファイルを示す（線形図２０Ａおよび対数線形図２０Ｂ）。

図２１は、ＣＤ−１マウスにおける１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇのＲＶＴ−８０１の単回投与に基づくＡＵＣ_ｌａｓｔに基づく、ＢＡＬＦ、血液、脳、心臓、腎臓、肝臓、肺および脾臓におけるＲＶＴ−８０１組織：血清曝露比を示す。

図２２Ａ〜図２２Ｄは、ＣＤ−１マウスにおける１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇの用量でのＲＶＴ−８０１のＩＰ投与後の様々な組織について、投与レベルに対してプロットされた用量正規化ＰＫパラメータを示す。

図１９Ａは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の単回投与後の血清中の全身ｒｈＡＣ濃度のプロットを示す。図１９Ａはまた、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の用量投与後のファーバーマウスにおける血漿濃度を示す。さらに、図１９Ａは、ＲＶＴ−８０の注射による反復用量投与後の血漿濃度を示す。ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射により１０ｍｇ／ｋｇ／投与を単回投与されたＣＤ−１マウスにおける血清濃度も示す。

図１９Ｂは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の単回投与後のＣＤ−１マウスの肝臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を示す。図１９Ｂはまた、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の単回投与で処置されたファーバーマウスの肝臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を示す。図１９Ｂは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の反復投与で処置されたファーバーマウスの肝臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度をさらに示す。

図１９Ｃは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による単回１０ｍｇ／ｋｇ／投与後のＣＤ−１マウスの脾臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を表す。図１９Ｃはまた、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による単回１０ｍｇ／ｋｇ／投与で処置されたファーバーマウスの脾臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を示す。図１９Ｃは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の反復投与で処置されたファーバーマウスの肝臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度をさらに示す。

図１９Ｄは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の単回投与後のＣＤ−１マウスの腎臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を表す。図１９Ｄはまた、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の単回投与で処置されたファーバーマウスの腎臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を示す。図１９Ｃは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の反復投与で処置されたファーバーマウスの腎臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度をさらに示す。

図１９Ｅは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による単回１０ｍｇ／ｋｇ／投与後のＣＤ−１マウスの心臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を示す。図１９Ｅはまた、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による単回１０ｍｇ／ｋｇ／投与で処置されたファーバーマウスの心臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を示す。図１９Ｅは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の反復投与で処置されたファーバーマウスの心臓組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度をさらに示す。

図１９Ｆは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による単回１０ｍｇ／ｋｇ／投与後のＣＤ−１マウスの肺組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を表す。図１９Ｆはまた、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による単回１０ｍｇ／ｋｇ／投与で処置されたファーバーマウスの肺組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を示す。図１９Ｆは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の反復投与で処置されたファーバーマウスの肺組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度をさらに示す。

図１９Ｇは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の単回投与後のＣＤ−１マウスの脳組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度を示す。図１９Ｇは、ＲＶＴ−８０１のボーラスＩＰ注射による１０ｍｇ／ｋｇ／投与の反復投与で処理されたファーバーマウスの脳組織におけるＲＶＴ−８０１の濃度をさらに示す。

略語。
ＡＳＡＨ１＝酸性セラミダーゼ遺伝子。

ＡＵＣ＝濃度−時間曲線下面積。

ＡＵＣ_{（０−∞）}＝ゼロ時間から無限時間まで外挿される血漿濃度−時間曲線下面積。

ＡＵＣ_{（０〜ｔ）}＝ゼロ時間から最終のサンプリング時間までの血漿中濃度−時間曲線下面積。

ＢＭＩ＝体格指数。

ＢＷ＝体重。

ｃＤＮＡ＝相補的デオキシリボ核酸。

ＣＦＲ＝連邦規則コード。

ＣＩ＝信頼区間。

ＣＬ＝クリアランス。

Ｃｍａｘ＝最高濃度。

ＣＮＳ＝中枢神経系。

ＦＤＡ＝食品医薬品局。

ＨＥＤ＝ヒト等価用量。

ＨＳＣＴ＝造血幹細胞移植。

ＩＰ＝腹腔内。

ＩＶ＝静脈内。

ＭＣＰ−１＝単球走化性タンパク質１。

ＰＤ＝薬力学（複数可）。

ＰＫ＝薬物動態（複数可）。

ＰＲＮ＝必要な場合。

ｒｈＡＣ＝組換えヒト酸性セラミダーゼ。

ＳＤ＝標準偏差。

ＳＭＡ−ＰＭＥ＝進行性ミオクローヌス癲癇を伴う脊髄性筋萎縮症。

ｔ_ｍａｘ＝最高濃度までの時間。

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Ｓｃｈｕｃｈｍａｎ，Ｅ．Ｈ．（発明者），ＩｃａｈｎＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅａｔＭｏｕｎｔＳｉｎａｉ（出願人），ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨｕｍａｎＡｃｉｄＣｅｒａｍｉｄａｓｅＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＰｒｏｃｅｓｓ，特許協力条約に基づく国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５２４６３（まだ未公開である）。

Ｓｃｈｕｃｈｍａｎ，Ｅ．Ｈ．（発明者），ＩｃａｈｎＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅａｔＭｏｕｎｔＳｉｎａｉ（出願人），２０１６年２月１１日，ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＡｃｉｄＣｅｒａｍｉｄａｓｅＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓＡｎｄＭｅｔｈｏｄｓＯｆＭａｋｉｎｇＡｎｄＵｓｉｎｇＴｈｅｍ，米国特許出願公開番号ＵＳ２０１６／００３８５７４Ａ１として公開。

Ｓｃｈｕｃｈｍａｎ，Ｅ．Ｈ．（発明者），ＩｃａｈｎＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅａｔＭｏｕｎｔＳｉｎａｉ（出願人），ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨｕｍａｎＡｃｉｄＣｅｒａｍｉｄａｓｅＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＰｒｏｃｅｓｓ，特許協力条約に基づく国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５２４６３。

Ｓｃｈｕｃｈｍａｎ，Ｅ．Ｈ．（発明者），ＩｃａｈｎＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅａｔＭｏｕｎｔＳｉｎａｉ（出願人）、２０１８年１月１２日、ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓａｎｄＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＴｒｅａｔｉｎｇＦａｒｂｅｒＤｉｓｅａｓｅ，特許協力条約に基づく国際出願ＷＯ２０１８／１３２６６７。

Ｓｉｍｏｎａｒｏ，Ｃ．Ｍ．，Ｓａｃｈｏｔ，Ｓ．，Ｇｅ，Ｙ．，Ｈｅ，Ｘ．，ＤｅＡｎｇｅｌｉｓ，Ｖ．Ａ．，Ｅｌｉｙａｈｕ，Ｅ．，Ｌｅｏｎｇ，Ｄ．Ｊ．，Ｓｕｎ，Ｈ．Ｂ．，Ｍａｓｏｎ，Ｊ．Ｂ．，Ｈａｓｋｉｎｓ，Ｍ．Ｅ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｄ．Ｗ．，ａｎｄＳｃｈｕｃｈｍａｎ，Ｅ．Ｈ．，２０１３，“Ａｃｉｄｃｅｒａｍｉｄａｓｅｍａｉｎｔａｉｎｓｔｈｅｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｉｃｐｈｅｎｏｔｙｐｅｏｆｅｘｐａｎｄｅｄｐｒｉｍａｒｙｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｓｔｈｅｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ−ｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，”ＰＬｏＳＯｎｅ，８：ｅ６２７１５。

Ｓｈｔｒａｉｚｅｎｔ，Ｎ．，Ｅ．Ｅｌｉｙａｈｕ，Ｊ．Ｈ．Ｐａｒｋ，Ｘ．Ｈｅ，Ｒ．ＳｈａｌｇｉａｎｄＥ．Ｈ．Ｓｃｈｕｃｈｍａｎ，２００８，“Ａｕｔｏｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｃｌｅａｖａｇｅａｎｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎａｃｉｄｃｅｒａｍｉｄａｓｅ，”ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２８３（１７）：１１２５３−１１２５９。

ＳｏｌｙｏｍＡ，ＨｕｅｇｌｅＢ，ＭａｇｎｕｓｓｏｎＢ，ＭａｋａｙＢ，ＡｒｓｌａｎＮ，ＭｉｔｃｈｅｌｌＪ，ＴａｎｐａｉｂｏｏｎＰ，ＧｕｅｌｂｅｒｔＮ，ＰｕｒｉＲ，ＪｕｎｇＬ，ＧｒｉｇｅｌｉｏｎｉｅｎｅＧ，ＥｈｌｅｒｔＫ，ＢｅｃｋＭ，ＳｉｍｏｎａｒｏＣ，ＳｃｈｕｃｈｍａｎＥ．，２０１５，“ＦａｒｂｅｒＤｉｓｅａｓｅ：ＩｍｐｏｒｔａｎｔＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｏｒＪＩＡａｎｄＯｔｈｅｒＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＡｒｔｈｒｉｔｉｓＰｈｅｎｏｔｙｐｅｓＩｓＲｅｖｅａｌｅｄＢｙＤａｔａｆｒｏｍｔｈｅＬａｒｇｅｓｔＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｈｏｒｔｔｏＤａｔｅ，”ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍａｔｏｌ．，６７（ｓｕｐ．１０），要約。

Ｓｕｇｉｔａ，Ｍ．，Ｄｕｌａｎｅｙ，Ｊ．Ｔ．，ａｎｄＭｏｓｅｒ，ＨＷ，１９７２，“ＣｅｒａｍｉｄａｓｅｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｉｎＦａｒｂｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ（ｌｉｐｏｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ），”Ｓｃｉｅｎｃｅ，１７８（４０６５）：１１００−１１０２

ＴｅｔｚｌＤ，ＣｏｙｎｅＫ，ＪｏｈｎｓｏｎＢ，ＳｏｌｙｏｍＡ，ＥｈｌｅｒｔＫ．，２０１７，“ＡＱｕａｌｉｔａｔｉｖｅＲｅｓｅａｒｃｈＳｔｕｄｙＤｏｃｕｍｅｎｔｉｎｇｔｈｅＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｐａｃｔｏｆＳｙｍｐｔｏｍｓｉｎａＤｉｖｅｒｓｅＰｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆＰａｔｉｅｎｔｓａｎｄＣａｒｅｇｉｖｅｒｓｗｉｔｈＡｃｉｄＣｅｒａｍｉｄａｓｅＤｅｆｉｃｉｅｎｃｙ（ＦａｒｂｅｒＤｉｓｅａｓｅ）．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｂｏｒｎＥｒｒｏｒｓｏｆＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ＆Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．２０１７；５：３２４。

ＴｏｒｃｏｌｅｔｔｉＭ，ＰｅｔａｃｃｉａＡ，ＰｉｎｔｏＲＭ，ＨｌａｄｎｉｋＵ，ＬｏｃａｔｅｌｌｉＦ，ＡｇｏｓｔｏｎｉＣ，ＣｏｒｏｎａＦ．，２０１４，“Ｆａｒｂｅｒｄｉｓｅａｓｅｉｎｉｎｆａｎｃｙｒｅｓｅｍｂｌｉｎｇｊｕｖｅｎｉｌｅｉｄｉｏｐａｔｈｉｃａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｗｏｎｅｗｍｕｔａｔｉｏｎｓａｎｄａｇｏｏｄｅａｒｌｙｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏａｌｌｏｇｅｎｅｉｃｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ），Ａｕｇ；５３（８）：１５３３−４。

Ｙｏｕｎｇｅｔａｌ．，２０１３，“Ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ：ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｏｆｃｒｏｓｓｔａｌｋｂｅｔｗｅｅｎａｐｏｔｏｓｉｓａｎｄａｕｔｏｐｈａｇｙ，”Ｊ．Ｌｉｐｉｄ．Ｒｅｓ．５４：５−１９。

ＺｈｏｕＪ，ＴａｗｋＭ，ＴｉｚｉａｎｏＦＤ，ＶｅｉｌｌｅｔＪ，ＢａｙｅｓＭ，ＮｏｌｅｎｔＦ，ＧａｒｃｉａＶ，ＳｅｒｖｉｄｅｉＳ，ＢｅｒｔｉｎｉＥ，Ｃａｓｔｒｏ−ＧｉｎｅｒＦ，ＲｅｎｄａＹ，ＣａｒｐｅｎｔｉｅｒＳ，ａｎｄｒｉｅｕ−ＡｂａｄｉｅＮ，ＧｕｔＩ，ＬｅｖａｄｅＴ，ＴｏｐａｌｏｇｌｕＨ，ＭｅｌｋｉＪ．，２０１２，“ＳｐｉｎａｌｍｕｓｃｕｌａｒａｔｒｏｐｈｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｍｙｏｃｌｏｎｉｃｅｐｉｌｅｐｓｙｉｓｃａｕｓｅｄｂｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎＡＳＡＨ，”ＡｍＪＨｕｍＧｅｎｅｔ．２０１２Ｊｕｌ１３；９１（１）：５−１４。

本明細書に引用される全ての特許、特許出願、公開物、およびアクセッション番号の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本開示は様々な実施形態を参照して開示されてきたが、本開示の真の精神および範囲から逸脱することなく、他の実施形態およびこれらの変形が当業者によって考案され得ることは明らかである。添付の特許請求の範囲は、全てのそのような実施形態および同等の変形を含むと解釈されることを意図している。

同等
前述の明細書は、当業者が実施形態を実施できるようにするのに十分であると考えられる。前述の説明および実施例は、特定の実施形態を詳述し、発明者らによって企図された最良の形態を説明している。しかしながら、前述の内容がいかに詳細にテキストに現れても、実施形態は多くの方法で実施され得、添付の特許請求の範囲およびその均等物に従って解釈されるべきであることが理解される。

本明細書で使用する場合約という用語は、明示的に示されているかどうかに関係なく、例えば、整数、分数、およびパーセンテージを含む数値を指す。約という用語は、当業者が列挙された値と同等であると考える（例えば、同じ関数または結果を有する）数値の範囲（例えば、列挙された範囲の＋／−５〜１０％）を指す。数値や範囲の列挙の前に少なくともおよび約などの用語が使用されている場合、その用語は、列挙に提供されている全ての値または範囲を改変する。場合によっては、約という用語には、最も近い有効数字に四捨五入された数値が含まれる場合がある。

Claims

ファーバー病の処置を必要とするヒト対象においてファーバー病を処置する方法であって、活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、前記ヒト対象に投与することを含む、方法。
前記用量が、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の方法。
前記用量が、約１ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の方法。
前記用量が、約２ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の方法。
前記用量が、約２．５ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の方法。
前記用量が、約５ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の方法。
前記用量が、約１０ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）が、ＲＶＴ−８０１であり、ＲＶＴ−８０１が、組換えにより生成された酸性セラミダーゼをｉ）陽イオン交換クロマトグラフィー、ｉｉ）疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、およびｉｉｉ）陰イオン交換クロマトグラフィーから選択される少なくとも２つのクロマトグラフィー工程に供する工程と、溶液中の前記ｒｈＡＣを１つ以上のウイルス不活化工程にさらに供する工程であって、前記１つ以上のウイルス不活化工程において、前記ｒｈＡＣ溶液が、３．７以下のｐＨに調整される、工程と、を含むプロセスにより、少なくとも９５％の活性化形態の純度に精製された前記組換えにより生成された酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
前記組換えにより生成された酸性セラミダーゼを、ｉ）陽イオン交換クロマトグラフィー、ｉｉ）疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、およびｉｉｉ）陰イオン交換クロマトグラフィーから本質的になる３つのクロマトグラフィー工程に供する、請求項８に記載の方法。
前記１つ以上のウイルス不活化工程が、前記クロマトグラフィー工程の前に行われる、請求項８に記載の方法。
前記１つ以上のウイルス不活化工程が、前記少なくとも２つのクロマトグラフィー工程のうちの１つの前に行われる、請求項８に記載の方法。
前記１つ以上のウイルス不活化工程が、前記少なくとも２つのクロマトグラフィー工程のうちの少なくとも２つの前に行われる、請求項８に記載の方法。
前記ｐＨ３．７への調整が、クエン酸を用いて行われる、請求項８に記載の方法。
前記ｐＨ３．７への調整が、クエン酸を用いて行われる、請求項９に記載の方法。
前記ｐＨ３．７への調整が、クエン酸を用いて行われる、請求項１０に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）の前記純度が、少なくとも９５重量％である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）の前記純度が、少なくとも９６重量％である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）の前記純度が、少なくとも９７重量％である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）の前記純度が、少なくとも９８重量％である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）の前記純度が、少なくとも９９重量％である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）の前記純度が、実質的に１００重量％である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
ヒト成人対象における前記用量が、約０．８ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の方法。
ヒト小児における前記用量が、約１．２ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の方法。
ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法であって、治療有効用量の組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）を前記ヒト対象に投与することを含み、前記治療有効用量は、単回かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量のｒｈＡＣを腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られた薬物動態プロファイルに基づいて決定され得、前記ｒｈＡＣは、前記健康なＣＤ−１マウスにおいて、約０．２５〜１．０時間のＴ_ｍａｘ、約１．２３〜約２．１７μｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘ、または約１時間＊μｇ／ｍＬ〜約２時間＊μｇ／ｍＬの曲線下面積（ＡＵＣ）のうちの１つ以上を生じさせる、方法。
前記ＡＵＣが、約１．３７時間＊μｇ／ｍＬ〜約１．４９時間＊μｇ／ｍＬである、請求項２４に記載の方法。
前記ＡＵＣが、約１．３７時間＊μｇ／ｍＬ〜約１．４９時間＊μｇ／ｍＬであり、前記Ｃ_ｍａｘが、約１．２３〜約２．１７μｇ／ｍＬである、請求項２４に記載の方法。
前記Ｔ_ｍａｘが、約０．２５〜１．０時間である、請求項２４に記載の方法。
前記Ｃ_ｍａｘが、約１．２３μｇ／ｍＬ〜２．１７μｇ／ｍＬである、請求項２４に記載の方法。
約１．３７〜１．４９時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣである、請求項２４に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）が、ＲＶＴ−８０１である、請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の方法。
ファーバー病を有するヒト対象を処置する方法であって、治療有効用量のｒｈＡＣを前記対象に投与することを含み、前記治療有効用量は、単一かつ１０ｍｇ／ｋｇの最大有効用量（「ＭＥＤ」）のｒｈＡＣを腹腔内に受けた幼若で健康なＣＤ−１マウスにおいて得られた薬物動態プロファイルに基づいて決定され得、前記ｒｈＡＣは、前記健康なＣＤ−１マウスにおいて、図７に示される値に従ったＣ_ｍａｘ、ＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、またはＡＵＣ_組織／ＡＵＣ_血清を生じさせる、方法。
前記ｒｈＡＣが、前記健康なＣＤ−１マウスにおいて、肝臓組織における約１３８時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、および／または肝臓組織における約１３μｇ／ｍＬの薬物のＣ_ｍａｘを生じさせる、請求項３１に記載の方法。
前記ｒｈＡＣが、前記健康なＣＤ−１マウスにおいて、脾臓組織における約７０．９時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、および／または脾臓組織における約７．５８μｇ／ｍＬの薬物のＣ_ｍａｘを生じさせる、請求項３１に記載の方法。
前記ｒｈＡＣが、前記健康なＣＤ−１マウスにおいて、腎臓組織における約２５．８時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、および／または腎臓組織における約２．６１μｇ／ｍＬの薬物のＣ_ｍａｘを生じさせる、請求項３１に記載の方法。
前記ｒｈＡＣが、前記健康なＣＤ−１マウスにおいて、心臓組織における約４時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、および／または心臓組織における約０．３６２μｇ／ｍＬの薬物のＣ_ｍａｘを生じさせる、請求項３１に記載の方法。
前記ｒｈＡＣが、前記健康なＣＤ−１マウスにおいて、肝臓組織における約０．０４１９時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、および／または肝臓組織における約０．１４７μｇ／ｍＬの薬物のＣ_ｍａｘを生じさせる、請求項３１に記載の方法。
前記ｒｈＡＣが、前記健康なＣＤ−１マウスにおいて、血液における約０．８５８時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、および／または血液組織における約１．２３μｇ／ｍＬの薬物のＣ_ｍａｘを生じさせる、請求項３１に記載の方法。
前記ｒｈＡＣが、前記健康なＣＤ−１マウスにおいて、ＢＡＬＦにおける約０．０００２４５時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、および／またはＢＡＬＦにおける約０．００１９６μｇ／ｍＬの薬物のＣ_ｍａｘを生じさせる、請求項３１に記載の方法。
前記ｒｈＡＣが、前記健康なＣＤ−１マウスにおいて、肺組織における約８．４時間＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、および／または肺組織における約１．４２μｇ／ｍＬの薬物のＣ_ｍａｘを生じさせる、請求項３１に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）が、ＲＶＴ−８０１である、請求項３１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
前記精製された、組換えにより生成された酸性セラミダーゼが、検出可能な酸性スフィンゴミエリナーゼ活性を有しない、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）の投与前、投与と同時、または投与後に、解熱剤、抗ヒスタミン剤、コルチコステロイド、またはそれらの任意の組み合わせを前記ヒト対象に投与することをさらに含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
前記活性化形態の精製された組換えヒト酸性セラミダーゼ（ｒｈＡＣ）が、治療用組成物中で投与される、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
前記治療用組成物が、経口、吸入、鼻腔内注入、局所、経皮、非経口、皮下、静脈内注射、動脈内注射、筋肉内注射、胸腔内、腹腔内、髄腔内、または粘膜への適用により投与される、請求項４３に記載の方法。
前記治療用組成物の１回以上の反復投与をさらに含む、請求項４３または４４に記載の方法。
セラミドレベルを低下させる１つ以上の追加の薬剤を投与することをさらに含む、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。