JP2021509686A - 間欠性絶食に関連するβ−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）の組成物およびその使用法 - Google Patents

Abstract

本発明は、間欠性絶食を行っている個体において、除脂肪体重の喪失を軽減し、除脂肪量を増加させ、筋性能を改善し、体脂肪喪失を増加させ、そして体脂肪パーセントを減少させるための、ＨＭＢを含む組成物およびＨＭＢを用いる方法を提供する。

Description

発明の背景
本出願は、２０１８年１月５日出願の米国仮特許出願第６２／６１３，９５２号に優先権を請求し、そして該仮出願は本明細書に援用される。

分野
本発明は、β−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）を含む組成物、および間欠性絶食（ＩＦ）と関連して該組成物を用いて、除脂肪体重喪失を軽減し、除脂肪量を増加させ、筋性能を改善し、体脂肪喪失を増加させ、そして体脂肪パーセントを減少させる方法に関する。

肥満の有病率増加は、大きな保健衛生上の危機である。２０３０年までに、米国の成人集団のおよそ５０％が肥満となり、これには２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）、心臓血管疾患（ＣＶＤ）、高血圧、および多くの癌の増加の大きな結果が伴うと推定される。有効な長期療法アプローチはなく、その結果、肥満の管理には、代替法が調べられ続けているが、成功は限定的である。隔日絶食（ＡＤＦ）と称される間欠性絶食（ＩＦ）の１つのよく研究されたアプローチは、制限されない食物消費の日、およびおよそ５００ｋｃａｌの１回の食事を消費する修飾された絶食日を交互に行うスケジュールを指示する。ＡＤＦが、食物消費を減少させ、体組成を改善し、そして多様な心臓血管および代謝健康マーカーを有益に修飾する能力は、繰り返し立証されてきている。

間欠性絶食（ＩＦ）は、典型的な一晩絶食より長い食物欠如の定期的発生期間を伴う摂食パターンを含む、広義の用語である（１）。連続エネルギー制限の伝統的な方法とは対照的に、ＩＦプログラムは、より制限されないまたは制限されない摂食期間に、厳しく制限されたエネルギー摂取の期間が散在することによる、間欠性エネルギー制限を利用する。時間制限摂食（ＴＲＦ）（食物摂取を１日の特定の期間、典型的には各日８〜１２時間の間に制限する）、隔日絶食（ＡＤＦ）（１日間のゼロカロリーおよび翌日の制限を伴わない摂食を交互に行う）、隔日修飾絶食（１日間の少カロリーおよび翌日の制限を伴わない摂食を交互に行う）および定期的絶食（週あたり１または２日間の絶食および週あたり５〜６日間の自由な食物消費）を含む、ＩＦのいくつかの型が記載されてきている（２）。ヒトにおける非常に多様な現存する研究は、太り過ぎおよび肥満の成人における、ＩＦによって誘導される体重喪失および健康上の影響に焦点を置いている。総合すると、この研究は、ＩＦプログラムが、体重喪失および健康改善に関して、伝統的な連続エネルギー制限の実行可能な代替法であることを立証している（３〜５）。

脂肪喪失のための食餌推奨は、典型的には、毎日のカロリー制限、つまり、通常の摂食スケジュールおよび頻度にしたがうが、より少量および／またはより少ないカロリーを各食事で消費するものを伴う。間欠性絶食、または反復短期絶食の使用は、食物消費を減少させ、体組成を修飾し、そして全体の健康状態を改善するように働く。これらの短期絶食は、典型的な一晩絶食より長いが、典型的には２４時間より長い期間ではない。

エネルギー摂取の意図的な減少は、しばしば、典型的には脂肪喪失を目的として、一般集団およびアスリートで同様に実行される。こうした低カロリー食餌状態と関連する１つの重要な考慮は、除脂肪体重を維持するか、またはその喪失を遅延させる能力である。除脂肪量は、機能的な能力およびアスリートの成績のために重要であるだけではなく、除脂肪量の減少は、過食を誘発し、そして体重喪失後の脂肪量の再増加を促進する可能性もある。さらに、除脂肪量の維持は、安静代謝率に対するその大きな寄与のため、エネルギー支出の優れた維持につながりうる。したがって、最適脂肪喪失プログラムは、除脂肪量の最大維持を促進すべきである。

低カロリー状態中の除脂肪体重の維持に関する伝統的な懸念に加えて、ＩＦプログラムは、タンパク質消費を伴わない１２〜２４時間の期間を必要とする絶食期間を実行する。この期間中、筋肉タンパク質分解が筋肉タンパク質合成活性を超え、したがって骨格筋における負のタンパク質バランスを生じると予期される。骨格筋組織は、肝臓糖新生のためのアミノ酸基質を提供するため、短期絶食中に分解されうる。これらの懸念にもかかわらず、抵抗運動は、１６〜２０時間の絶食期間を利用するＩＦプログラム中、除脂肪体重の喪失を防止しうることが先に立証されてきている。しかし、アスリートにおける脱トレーニング期間には、そして一般集団においては身体活動要求を充たすことが困難であることが知られているため、ＩＦを含む脂肪喪失プログラム中、骨格筋組織の潜在的な喪失を軽減する、非エクササイズ戦略の探査が必要である。

ますます多くの研究が、ＩＦの生理学的効果を報告してきているが、活動的なまたはエクササイズ中の個体においては、非常に限定された数の管理された試験しか行われてきていない（６〜８）。２つの以前の研究によって、抵抗運動（ＲＴ）を実行している成人男性におけるＴＲＦの効果が報告された（７、８）。Ｔｉｎｓｌｅｙら（７）は、８週間のＴＲＦ中、除脂肪量増加の明らかな減弱を観察したが、この結果は、対照食餌よりも低いタンパク質摂取を自己選択したＴＲＦ群（１．０対１．４ｇ／ｋｇ／日）では悪化し、そして活動的な個体に関して準最適であった（９、１０）。にもかかわらず、筋性能においては、両群において、匹敵する改善が観察された。Ｍｏｒｏら（８）は、ＴＲＦおよび対照食餌においてより高いタンパク質摂取（１．９ｇ／ｋｇ／日）を指示し、そして両群が除脂肪量を維持し、そして類似の筋性能を示す一方、ＴＲＦは、脂肪量（ＦＭ）の有意な減少、および生理学的マーカーに対する示差的な影響を生じることを見出した。

活動的な個体においてＩＦ摂食パターンが流行しており、そしてこの集団において現存する研究が少ないことから、さらなる研究が必要であることが示される。さらに、いくつかの報告が、ヒトにおいて、ＩＦに対する反応に潜在的に性差があることを同定している（１１、１２）にも関わらず、以前の試験では、女性におけるＩＦプラスＲＴの効果を調べたものはない。さらに、ＩＦプログラムは、筋肉タンパク質合成のアミノ酸誘導性刺激および筋肉タンパク質分解の抑制を伴わない期間を長期間必要とする（１３）ため、アミノ酸またはその代謝産物の摂取を許すような絶食期間の修飾が、ＩＦ中の除脂肪量維持または増加に有益でありうるかどうかが疑問とされてきている（１４）。しかし、以前の研究は、これを実験的に調べてこなかった。したがって、以下に記載する研究は、活動的な女性において、漸増ＲＴ中に朝食消費を必要とする対照食餌に対して、絶食期間中、ロイシン代謝産物、ベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート（ＨＭＢ）の補充を伴うまたは伴わないＴＲＦの生理学的および成績効果を比較するように設計された。

ＡＤＦを含む間欠性絶食を含むすべての体重喪失プログラムに関連する１つの重要な懸念は、除脂肪体重（ＬＢＭ）の潜在的な喪失である。いくつかの最近のＡＤＦ試験は、脂肪量喪失および有益な健康上の改善を立証してきているが、ＬＢＭの喪失もまた報告されてきている。ＬＢＭは安静代謝率および機能的能力に対して大きく貢献するため、脂肪量減少を最大にしながら、ＬＢＭ喪失を最小限にする体重喪失戦略を開発することが非常に重要である。近年、抵抗運動（ＲＴ）が、しばしば間欠性絶食中に見られるＬＢＭの喪失を減少させうることが立証されてきており、そしてＡＤＦおよび有酸素エクササイズの組み合わせが、どちらか個々の処置よりも、より多くの体重および脂肪喪失を生じることもまた立証されてきている。しかし、これらの戦略のいずれも、ＬＢＭの関連する喪失を完全に逆転させるには十分ではなかった。

ＨＭＢ
アルファ−ケトイソカプロエート（ＫＩＣ）はロイシンの第一の主要でそして活性である代謝産物である。ＫＩＣ代謝のより少ない産物は、β−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）である。ＨＭＢは、多様な適用の背景内で有用であることが見出されてきている。特に、米国特許第５，３６０，６１３号（Ｎｉｓｓｅｎ）において、ＨＭＢは、総コレステロールおよび低密度リポタンパク質コレステロールの血中レベルを減少させるために有用であると記載されている。米国特許第５，３４８，９７９号（Ｎｉｓｓｅｎら）において、ＨＭＢは、ヒトにおいて、窒素保持を促進するために有用であると記載される。米国特許第５，０２８，４４０号（Ｎｉｓｓｅｎ）は、動物において、除脂肪組織発生を増加させるためのＨＭＢの有用性を論じる。また、米国特許第４，９９２，４７０号（Ｎｉｓｓｅｎ）において、ＨＭＢは、哺乳動物の免疫反応を増進する際に有効であると記載される。米国特許第６，０３１，０００号（Ｎｉｓｓｅｎら）は、疾患関連消耗を治療するためのＨＭＢおよび少なくとも１つのアミノ酸の使用を記載する。

タンパク質分解を抑制するためのＨＭＢの使用は、ロイシンがタンパク質節約（ｐｒｏｔｅｉｎ−ｓｐａｒｉｎｇ）特性を有するという観察から生じる。必須アミノ酸ロイシンは、タンパク質合成に用いられるか、またはα−ケト酸（α−ケトイソカプロエート、ＫＩＣ）にアミノ基転移されるか、いずれも可能である。１つの経路において、ＫＩＣはＨＭＢに酸化されることも可能であり、そしてこれは、ロイシン酸化のおよそ５％を占める。ＨＭＢは、筋肉量および強度を増進させる際に、ロイシンより優れている。ＨＭＢの最適効果は、ＨＭＢのカルシウム塩として投与された際、１日あたり３．０グラム、または１日あたり０．０３８ｇ／ｋｇ体重で達成可能である一方、ロイシンの最適効果は、１日あたり３０．０グラムより多くを必要とする。

ひとたび産生されるかまたは摂取されると、ＨＭＢは２つの運命を有するようである。第一の運命は、尿中への単純な排出である。ＨＭＢが供給された後、尿濃度が増加し、尿へのおよそ２０〜５０％のＨＭＢ喪失が生じる。別の運命は、ＨＭＢのＨＭＢ−ＣｏＡへの活性化に関する。ひとたびＨＭＢ−ＣｏＡに変換されたら、さらなる代謝、ＨＭＢ−ＣｏＡのＭＣ−ＣｏＡへの脱水またはＨＭＢ−ＣｏＡのＨＭＧ−ＣｏＡへの直接変換のいずれかが起こることも可能であり、これは細胞内コレステロール合成の基質を提供する。いくつかの研究によって、ＨＭＢがコレステロール合成経路に取り込まれ、そして損傷を受けた細胞膜の再生に用いられる、新規細胞膜の供給源となりうることが示されてきている。ヒト研究によって、血漿ＣＰＫ（クレアチンホスホキナーゼ）の上昇によって測定される、激しい運動後の筋肉損傷は、最初の４８時間以内のＨＭＢ補充で減少することが示されてきている。ＨＭＢの保護効果は、毎日の使用を続けると、最大３週間まで続いた。多くの研究によって、ＨＭＢの有効な用量が、ＣａＨＭＢ（カルシウムＨＭＢ）として、１日あたり３．０グラム（〜３８ｍｇ・ｋｇ体重^−１・日^−１）であることが示されてきている。ＨＭＢは安全性に関して試験されてきており、健康な若年層または高齢成人において、副作用はまったく示さない。Ｌ−アルギニンおよびＬ−グルタミンと組み合わせたＨＭＢはまた、ＡＩＤＳおよび癌患者に補充した際、安全であることが示されてきている。

最近、ＨＭＢの新たな送達型であるＨＭＢ遊離酸が開発されてきている。この新規送達型は、ＣａＨＭＢより迅速に吸収され、そしてより高い組織クリアランスを有することが示されてきている。新規送達型は、米国特許公報第２０１２００５３２４０号に記載され、該文献はその全体が本明細書に援用される。

ＨＭＢは、高強度エクササイズからの回復を増進し、そして筋損傷を減弱させることが立証されてきている。ＨＭＢは、ＴＮＦ−アルファでのタンパク質合成の低下を減弱させ、そしてＴＮＦと関連するタンパク質分解を減少させる。

ＨＭＢは、若年層およびより高齢の成人集団の両方において、健康時および疾患時、筋肉タンパク質分解を減少させ、そして筋肉タンパク質合成を促進し、その結果、ＬＢＭ増加および筋機能改善を生じる。さらに、ＨＭＢは、米国特許出願第１５／１７０，３２９号において、ＨＭＢ消費が脂肪量減少および脂肪喪失増加を生じることが立証されてきている。

驚くべきことに、そして予期せぬことに、ＨＭＢの投与は、間欠性絶食が誘導する体重喪失中のＬＢＭの喪失を、抵抗運動単独よりもより高い度合いまで軽減し、それによって代謝率の維持を増進させることが発見されてきている。また、間欠性絶食プログラムに伴うＨＭＢの投与は、間欠性絶食プログラム単独での関与に比較した際、脂肪のより多い喪失を生じることもまた発見されてきている。さらに、ＨＭＢ投与および間欠性絶食プログラムと関連する脂肪喪失は、ＨＭＢ単独の投与に関連する脂肪喪失よりもより多い。

除脂肪量獲得は、間欠性絶食または対照食餌よりも、間欠性絶食およびＨＭＢ投与でより高いことが発見されてきている。さらに、安静代謝率は間欠性絶食およびＨＭＢで増加する一方、対照食餌および間欠性絶食群では減少する。

急性絶食（単回２４時間絶食）中、ＨＭＢ補充に伴って、コルチゾールが減少することもまた発見されてきている。ＨＭＢ補充は、コルチゾール濃度のより迅速な減少を生じることによって、コルチゾール覚醒反応を修飾する。ＨＭＢ補充はまた、男性におけるテストステロン：コルチゾール比も改変する。

米国特許第５，３６０，６１３号（Ｎｉｓｓｅｎ） 米国特許第５，３４８，９７９号（Ｎｉｓｓｅｎら） 米国特許第５，０２８，４４０号（Ｎｉｓｓｅｎ） 米国特許第４，９９２，４７０号（Ｎｉｓｓｅｎ） 米国特許第６，０３１，０００号（Ｎｉｓｓｅｎら） 米国特許公報第２０１２００５３２４０号 米国特許出願第１５／１７０，３２９号

本発明の１つの目的は、間欠性絶食と組み合わせて、除脂肪体重の喪失を軽減するための組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、絶食を経験している個体において、筋性能を改善するための組成物を提供することである。

本発明のさらなる目的は、間欠性絶食と関連して組成物を投与して、体脂肪喪失を増加させ、そして／または体脂肪パーセントを減少させる方法を提供することである。
本発明のさらなる目的は、間欠性絶食と関連して組成物を投与して、除脂肪量を増加させる方法を提供することである。

本発明のさらなる目的は、間欠性絶食と関連して組成物を投与して、安静代謝率を増加させる方法を提供することである。
本発明のこれらのおよび他の目的は、以下の明細、図、および請求項を参照すると、当業者には明らかとなるであろう。

本発明は、これまでに直面された困難を克服することを意図する。この目的に向けて、ＨＭＢを含む組成物を提供する。該組成物をその必要がある被験体に投与する。該組成物は、その必要がある被験体によって消費される。すべての方法は、動物にＨＭＢを投与する工程を含む。本発明に含まれる被験体には、ヒトおよび非ヒト哺乳動物が含まれる。

図１は、体組成変化を示す表である。 図２は、筋性能変化を示す表である。

驚くべきことに、そして予期せぬことに、食物消費減少期間中、例えば間欠性絶食（ＩＦ）中に投与されたＨＭＢは、食物消費減少から生じる除脂肪体重の喪失を軽減することが発見されてきている。間欠性絶食は、食物消費を減少させるために、典型的な一晩絶食よりは長いが、典型的には２４時間よりも短い、短期間絶食反復を使用する。これらの絶食期間は、制限されない摂食期間と交互に行われ、そして毎日、１日おき、またはさらに週１日、実施されてもよい。

限定されるわけではないが、制限されない食物消費の日、および単回の食事を消費するかまたは時間制限摂食（ＴＲＦ）を行う修飾された絶食日を繰り返すスケジュールを指示する、隔日絶食（ＡＤＦ）を含む、任意の間欠性絶食期間と組み合わせて、ＨＭＢの消費を用いてもよい。間欠性絶食は、食物消費を減少させ、体組成を改善し、そして多様な心臓血管および代謝健康マーカーを有益に修飾することが立証されてきている。ＨＭＢはまた、急性絶食と組み合わせて用いられてもよい。

間欠性絶食を含むすべての体重喪失プログラムに関連する１つの重要な懸念は、関連するＬＢＭの喪失であり、ＬＢＭは一般的に、有意な脂肪量喪失とともに観察され、そしてこれには有益な健康改善が付随する。ＬＢＭは安静代謝率および機能的能力に対して大きく貢献するため、脂肪量減少を最大にしながら、ＬＢＭ喪失を最小限にする体重喪失戦略を開発することが非常に重要である。ＲＴが、しばしばＩＦ中に見られるＬＢＭを減少させうることが立証されてきている。さらに、間欠性絶食および有酸素エクササイズの組み合わせが、どちらか個々の処置よりも、より多くの体重および脂肪喪失を生じることもまた立証されてきている。しかし、多くの個体は、エクササイズプログラムを着実に実行することに困難を感じ、そして大部分のアメリカ人は、推奨される身体活動推奨を満たしていない。したがって、エクササイズは、体重喪失プログラムの一部として奨励されるべきではあるが、体重喪失プログラム、例えば間欠性絶食中に、ＬＢＭを保持しうる、さらなる介入（最小限のエクササイズを補助するか、または事実上、完全にエクササイズではないかいずれか）に関する大きな必要性もまたある。本発明にしたがって、ＨＭＢは、間欠性絶食中にＬＢＭを保持するために用いられる、１つのこうした介入である。ＨＭＢ補充は、間欠性絶食が誘導する体重喪失中のＬＢＭ喪失を、抵抗運動単独よりもより高い度合いまで軽減し、それによって、代謝率の維持および脂肪量減少を増進させる。さらに、驚くべきことに、そして予期せぬことに、間欠性絶食プログラムと組み合わせたＨＭＢ補充が脂肪喪失を生じ、そしてこの脂肪喪失は、ＨＭＢを単独で用いた際に見られるよりも有意により高かったことが発見された。

β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸またはβ−ヒドロキシ−イソ吉草酸は、（ＣＨ_３）_２（ＯＨ）ＣＣＨ_２ＣＯＯＨとして遊離酸の形で示されうる。用語「ＨＭＢ」は、遊離酸および塩型の両方、ならびにその誘導体の、前述の化学式を有する化合物を指す。本発明の背景内で、任意の型のＨＭＢを用いてもよいが、好ましくは、ＨＭＢは、遊離酸、塩、エステル、およびラクトンを含む群より選択される。ＨＭＢエステルには、メチルおよびエチルエステルが含まれる。ＨＭＢラクトンには、イソバラリル（ｉｓｏｖａｌａｒｙｌ）ラクトンが含まれる。ＨＭＢ塩には、ナトリウム塩、カリウム塩、クロム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アルカリ金属塩、および土類金属塩が含まれる。

ＨＭＢおよびその誘導体を産生するための方法は、当該技術分野に周知である。例えば、ジアセトンアルコールの酸化によって、ＨＭＢを合成してもよい。１つの適切な方法は、Ｃｏｆｆｍａｎら， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ８０： ２８８２−２８８７（１９５８）に記載される。本明細書に記載するように、ＨＭＢは、ジアセトンアルコールのアルカリ次亜塩素酸ナトリウム酸化によって合成される。産物は遊離酸型で回収され、これを塩に変換してもよい。例えば、ＨＭＢは、ＨＭＢの遊離酸を水酸化カルシウムで中和して、そして水性エタノール溶液からの結晶化によって回収する、Ｃｏｆｆｍａｎら（１９５８）の方法と同様の方法によって、そのカルシウム塩として調製されてもよい。ＨＭＢのカルシウム塩は、Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、アイオワ州エームズより商業的に入手可能である。

カルシウムβ−ヒドロキシ−βメチルブチレート（ＨＭＢ）の補充。
２０年以上前、ＨＭＢのカルシウム塩は、ヒトの栄養補助剤として開発された。研究によって、体重１ｋｇあたり３８ｍｇのＣａＨＭＢは、平均的なヒトには有効な投薬量であるようであることが示されてきている。

ＨＭＢがタンパク質分解を減少させ、そしてタンパク質合成を増加させる分子機構が報告されてきている。Ｅｌｅｙらは、ＨＭＢが、ｍＴＯＲリン酸化を通じて、タンパク質合成を刺激することを示すｉｎ ｖｉｔｒｏ研究を行った。他の研究によって、筋肉タンパク質異化が、タンパク質分解誘導因子（ＰＩＦ）、リポ多糖（ＬＰＳ）、およびアンジオテンシンＩＩによって刺激された際に、ユビキチン−プロテオソームタンパク質分解経路の誘導の減弱を通じて、ＨＭＢがタンパク質分解を減少させることが示されてきている。さらに他の研究によって、ＨＭＢはまた、カスパーゼ−３および−８プロテアーゼの活性化も減弱させることが立証されてきている。

ＨＭＢ遊離酸型
大部分の場合、臨床研究において利用され、そしてエルゴジェニック補助として販売されるＨＭＢは、カルシウム塩型であった。近年の進歩によって、栄養補助剤として使用するため、ＨＭＢが遊離酸型で製造されることが可能になってきている。近年、ＨＭＢの新規遊離酸型が開発されてきており、これは、ＣａＨＭＢよりもより迅速に吸収され、より迅速でそしてより高いピーク血清ＨＭＢレベルおよび組織への改善された血清クリアランスを生じることが示された。

ＨＭＢ遊離酸は、したがって、特に、激しい運動の直前に投与される際には、カルシウム塩型よりもＨＭＢを投与する、より有効な方法でありうる。しかし、一般の当業者は、本発明が任意の型のＨＭＢを含むことを認識するであろう。

約０．５グラムＨＭＢから約３０グラムＨＭＢの典型的な投薬範囲を生じるような方式で、任意の型のＨＭＢを送達および／または投与型に取り込んでもよい。
本発明の背景内で、任意の適切な用量のＨＭＢを用いてもよい。適切な用量を計算する方法が当該技術分野に周知である。ＨＭＢの投薬量は、Ｃａ−ＨＭＢの対応するモル量に関して示されてもよい。ＨＭＢを経口または静脈内投与してもよい投薬範囲は、２４時間あたり、体重１キログラムあたり、０．０１〜０．２グラムＨＭＢ（Ｃａ−ＨＭＢ）の範囲内である。成人に関しては、約１００〜２００ポンドの体重と仮定して、ＨＭＢ（Ｃａ−ＨＭＢに基づく）の経口または静脈内投薬量は、２４時間あたり、被験体あたり、０．５〜３０グラムの範囲であってもよい。

組成物を可食型で経口投与する際、組成物は、好ましくは栄養補助食品、食料品または薬学的媒体の形であり、より好ましくは栄養補助食品または食料品の形である。組成物を含む任意の適切な栄養補助食品または食料品を本発明の背景内で利用してもよい。一般の当業者は、型（例えば栄養補助食品、食料品または薬学的媒体）に関わらず、組成物には、アミノ酸、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂肪、糖、ミネラルおよび／または微量元素が含まれてもよいことを理解するであろう。

栄養補助食品または食料品として組成物を調製するため、組成物は、通常、組成物が実質的に均一に栄養補助食品または食料品中に分布するような方式で、組み合わせられるかまたは混合されるであろう。あるいは、組成物を水などの液体中に溶解してもよい。

栄養補助食品の組成物は、粉末、ゲル、液体であってもよいし、あるいは該組成物を錠剤にする（ｔａｂｕｌａｔｅｄ）かまたは被包してもよい。ＨＭＢに加えて、組成物には、ビタミン（例えばビタミンＤ、ビタミンＢ、ビタミンＣ等）、遊離型で（例えばアルギニン、グルタミン、リジン等）および／またはタンパク質を通じて送達されるアミノ酸、炭水化物、脂肪等を含む、他の構成要素が含まれてもよい。

本発明の背景内で、組成物を含む任意の適切な薬学的媒体を利用してもよいが、好ましくは、組成物は、適切な薬学的キャリアー、例えばデキストロースまたはスクロースと組み合わせられる。

さらに、薬学的媒体の組成物は、任意の適切な方式で、静脈内投与されてもよい。静脈内注入を通じた投与のため、組成物は、好ましくは水溶性の非毒性型である。静脈内（ＩＶ）療法を受けている入院患者には、静脈内投与が特に適切である。例えば、患者に投与するＩＶ溶液（例えば生理食塩水またはグルコース溶液）に、組成物を溶解してもよい。また、組成物を栄養ＩＶ溶液に添加してもよく、これには、アミノ酸、グルコース、ペプチド、タンパク質および／または脂質が含まれてもよい。静脈内投与すべき組成物の量は、経口投与に用いられるレベルと同程度であってもよい。静脈内注入は、経口投与よりもより制御され、そして正確でありうる。

組成物を投与する頻度を計算する方法は、当該技術分野に周知であり、そして投与の任意の適切な頻度を、本発明の背景内で（例えば１日あたり１回の６ｇ用量または１日あたり２回の３ｇ用量）、そして任意の適切な期間に渡って（例えば単回用量を５分間の期間に渡ってまたは１時間の期間に渡って投与してもよいし、あるいは多数回の用量を長期間に渡って投与してもよい）用いてもよい。組成物を長期間、例えば数週間、数ヶ月間または数年間に渡って投与してもよい。

ＨＭＢの任意の適切な用量を本発明の背景内で用いてもよい。適切な用量を計算する方法が、当該技術分野に周知である。
用語、投与することまたは投与には、哺乳動物に組成物を提供すること、組成物を消費することおよびその組み合わせが含まれる。

実験実施例
以下の実施例は、本発明をさらに詳細に例示するであろう。本明細書の実施例に一般的に記載されそして例示されるような、本発明の組成物は、多様な配合物および投薬型で合成されてもよいことが容易に理解されるであろう。したがって、本発明の方法、配合物および組成物の現在好ましい態様の以下のより詳細な説明は、請求するような本発明の範囲を限定することを意図せず、本発明の現在好ましい態様を単に例示するものである。例えば、本発明は、投与される組成物の量または型に限定されないことが理解される。ＨＭＢの有効量は、当該技術分野に周知であり、そして実験実施例に例示されるように、１日あたり０．５グラム〜３０グラムのＨＭＢの範囲に渡るすべての点で有効であることが認識される。

実験実施例１
設計
本研究は、ランダム化プラセボ対照要因縮小（ｒｅｄｕｃｅｄ ｆａｃｔｏｒｉａｌ）設計を使用し、そしてＴＲＦ群における補充に関して二重盲検であった。活動的な女性を対照食餌（ＣＤ）、ＴＲＦまたはＴＲＦプラス３ｇ／日ＨＭＢ（ＴＲＦ_ＨＭＢ）にランダム化した。ＴＲＦ群は、〜８時間／日にすべてのカロリーを消費した。すべての群は８週の監視されたＲＴを完了し、そして補充ホエイタンパク質を消費した。体組成、筋性能、食餌摂取、身体活動、および生理学的変数を評価した。混合モデル、ならびにパープロトコル（ＰＰ）および治療企図（ＩＴＴ）フレームワーク両方を用いて、非盲検化の前にデータを分析した。

参加者および方法
概要
本研究は、ランダム化プラセボ対照要因縮小設計を使用した。該実験は、ＨＭＢおよびプラセボ補充に関して二重盲検であり、そして補助食餌プログラムに関してありうる場合は単盲検であった。以下の一次転帰測定を事前に特定した：ＦＭ、除脂肪体重（ＦＦＭ）、体脂肪パーセント（ＢＦ％）、肘屈筋の筋肉の厚さ（ＭＴ_ＥＦ）および膝伸筋の筋肉の厚さ（ＭＴ_ＫＥ）。事前に特定された二次転帰測定には、筋性能の計量、安静代謝、血液マーカー、血圧、動脈壁硬化、身体活動レベルおよびアンケート反応が含まれた。

参加者
１８〜３０歳の健康な女性参加者を、ポスター、ｅｍａｉｌ告知および口伝えで募集した。参加者は、以前のＲＴ経験を有する必要があり、これは、１週あたり２〜４セッションの頻度での、そして主要な上半身および下半身筋肉群の毎週のトレーニングを伴うＲＴ≧１年の報告と定義された。さらに、参加者は、多周波生体電気インピーダンス分析（ＭＦＢＩＡ；ｍＢＣＡ ５１４／５１５、Ｓｅｃａ、ドイツ・ハンブルグ）を用いて、ＢＦ％に関してスクリーニングされた。参加者の元来のターゲットＢＦ％範囲は１５〜２９％であった；が、本発明者らの実験室のデータは、抵抗運動を行った女性において、４成分モデルに比較した際、ＭＦＢＩＡを通じた体脂肪は過大評価されることを示していたため（１５）、スクリーニング時に最大３３％までの体脂肪を持つ個体は、適格と見なされた。前述の基準を満たしていないか、あるいは妊娠中であるか、妊娠しようとしているか、現在授乳中であるか、喫煙者であるか、乳タンパク質に対してアレルギーがあるか、またはペースメーカーもしくは他の電気移植機器を有する場合、個体を排除した。スクリーニング時の体脂肪パーセント（１５〜２１％対＞２１％）および習慣的な朝食消費（≧５日／週対＜５日／週）に基づいて適格な参加者を階層化し、次いで、ランダムシーケンス生成装置（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒａｎｄｏｍ．ｏｒｇ）を用い、そして１：１：１割り当て比に基づいて、３つの研究群（対照食餌プラスプラセボ［ＣＤ］、ＴＲＦプラスプラセボ［ＴＲＦ］またはＴＲＦプラスＨＭＢ［ＴＲＦ_ＨＭＢ］）の１つにランダムに割り当てた。所定の階層内の各参加者は、連続方式で、その階層に関するランダム整数シーケンスを用いて、ベースライン試験時に、最初の利用可能群割り当てに割り当てられた。ランダムシーケンスの生成および階層化ランダム化の実施は、主任研究者（ＧＭＴ）によって実行された。

栄養および補充プログラム
ＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢの参加者は、各日、正午から８ＰＭの間にすべてのカロリーを消費するよう指示され、そしてＣＤ参加者は、起床後、可能な限りすぐに朝食を消費し、そして１日の残り全体で、自身が選択した間隔で摂食を続けるよう指示された。割り当てられた摂食スケジュールに加えて、参加者は、重量測定された食餌記録および代謝試験の結果に基づいて、最小限の量の食餌アドバイスを提供された。特に、参加者は、≧１．４ｇ／ｋｇ／日のタンパク質摂取を達成するため、提供されたホエイタンパク質補充剤（Ｅｌｉｔｅ １００％ホエイ、Ｄｙｍａｔｉｚｅ Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ，ＬＬＣ、米国テキサス州ダラス）を消費するよう指示された。この範囲は、エクササイズ中の個体における除脂肪体重増加または保持のために推奨されたタンパク質摂取推奨に基づいて選択された（９）。補充タンパク質のエネルギー含量は、〜２００−２５０ｋｃａｌ／日であった。すべての群において、ターゲットエネルギー摂取は、間接熱量測定法を通じた安静エネルギー支出（ＲＥＥ）に１．５の活動係数を乗じ、次いで２５０ｋｃａｌを減じることによって規定された。小カロリー減少の目的は、筋肉肥大のためになお適切な栄養補助を提供しながら、脂肪喪失を促進することであった。介入開始前に、ならびに介入中の２つの別々の週の間に、重量測定した食餌記録を平日および週末に関して完了した。各参加者は、食品はかりを提供され、そしてどのように食品を適切に重量測定しそして記録するかを指示された。栄養成分表ラベルを再検討し、そして米国農務省（ＵＳＤＡ）食品組成データベース（ｈｔｔｐｓ：／／ｎｄｂ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ｎｄｂ／）を利用することによって、生じた食餌記録をマニュアルで分析した。

二重盲検方式で、ＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢの参加者には、それぞれ、プラセボ（乳酸カルシウム）またはカルシウムＨＭＢ補充剤を投与した。ＨＭＢおよびプラセボカプセルは同じ製造者（Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．、米国アイオワ州エームズ）によって製造され、外見および味は同一であり、そしてカルシウム（１０２ｍｇ）、リン（２６ｍｇ）およびカリウム（４９ｍｇ）含量に関してはマッチしていた。ＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢの参加者は、１日３回：起床時、まだ絶食中である午前の中頃、および就寝前に２カプセルずつ、総用量３ｇ／日を摂取するように指示された。ＣＤの参加者もまた、ＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢで用いられる補充剤に関して、研究者の盲検状態を維持するため、ユニークな補充剤コードを用いて、朝食時、昼食時、および夕食時に消費するためのプラセボカプセルを受け取った。すべての研究者は、データ収集および統計分析が完了するまで、ＴＲＦ群の補充剤割り当てに関して盲検状態であり、完了時点で、非盲検化のため、研究依頼者（ｓｔｕｄｙ ｓｐｏｎｃｅｒ）が補充剤コードを提供した。さらに、ＲＴプログラムを監視するトレーナーは、盲検状態を維持するため、参加者と群割り当てについて論じないよう要請された。参加者は、研究者によって提供されるもの以外のいかなるさらなるスポーツ補充剤も消費しないように指示されたが、一般的なマルチビタミン／ミネラル補充剤は例外とされた。

抵抗運動プログラムおよび身体活動監視
すべての群は、割り当てられた食餌および補充剤プログラムと組み合わせた監視ＲＴの８週間を完了した。トレーニングは、直接監視下、研究実験室内で行われた。ＲＴセッションは、各週の連続しない３日間（すなわち月曜日、水曜日および金曜日）に完了し、そして上半身および下半身セッションを交互に行った（表１）。

表１． 抵抗運動プログラム。セット数ｘ反復範囲、休憩間隔として示されるエクササイズ指示。
ＢＢ：バーベル；ＤＢ：ダンベル；ｓ：秒；Ｗ：週。

参加者は、各セットに関して、一時的に筋肉消耗するまでトレーニングするよう指示され、そして負荷は特定された反復範囲での順守を確実にするため、必要に応じて調整された。各エクササイズの各セットに関して完了するウェイトおよび反復を記録して、ＲＴ量の計算を可能にした。セッションは、１２：００〜１８：００の間に行った。１２：００〜１３：００の間にＲＴセッションを行うＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢの参加者は、トレーニング日には、摂食ウィンドウを１時間早くシフトする（すなわち１１：００〜１９：００）よう要請され、ＲＴを絶食状態で行わないことを確実にした。各ＲＴセッション後、各群の参加者は、２５ｇのホエイタンパク質（Ｅｌｉｔｅ １００％ホエイ、Ｄｙｍａｔｉｚｅ Ｅｎｔｅｒｐｒｅｓｅｓ， ＬＬＣ、米国テキサス州ダラス）を提供された。

参加者は、研究介入の外では、いかなるＲＴも行わないように、また他の高強度エクササイズも回避するよう要請された。介入経過中、自由生活中の身体活動レベルを明確に評価するため、各参加者には、ベースライン、介入の最初の１／２中、および介入の第二の１／２中に、加速度計（ＡｃｔｉＧｒａｐｈ ＧＴ９Ｘ Ｌｉｎｋ；Ａｃｔｉｇｒａｐｈ Ｉｎｃ、米国フロリダ州ペンサコーラ）を提供した。参加者らは、少なくとも４日間、起床している間、入浴中または睡眠中を除いていつでも、該デバイスを装着するよう指示された。加速度計は、３０Ｈｚのサンプリング率で加速を記録するようにセットされ、そしてポストデータプロセシング中、加速を、１分間のエポック長あたりの活動カウントに変換した。各監視日の装着時間を決定するため、活動カウントデータをスクリーニングし、非装着時間を、連続ゼロ活動カウント（すなわち動きなし）が≧６０分間の期間と定義し、１分間あたり＜１００の活動カウントでの中断を２分間まで許容した（１６）。１分間あたり＞１９５１カウントの活動カウントに関してフリードソンの予測等式（１７）を、そして１分間あたり≦１９５１カウントの活動カウントに関してウィリアムズの作業エネルギー等式（１８）を用いて、装着時間の各分に関して、身体活動エネルギー支出（ＰＡＥＥ；ｋｃａｌ／分）を概算した。１日ＰＡＥＥを各参加者の有効な日に関して平均し、ここで、有効な日は、装着時間が≧１０時間の日と定義された。最後に、概算された非装着時間は非起床時間と仮定されたが、１日ＰＡＥＥに影響を及ぼす誤判別の可能性があるため、最小二乗調整法（１９）を用いて、各参加者に関する平均装着時間によって、平均１日ＰＡＥＥを調整した。

実験室評価の概説
ベースライン、ならびに介入４週および８週後、参加者は２つの試験セッションを完了した：（１）体組成、代謝、血管測定および主観的要因の評価のための、一晩絶食後に行われる午前の評価；ならびに（２）非絶食状態で行われる筋性能の午後の評価。午前の評価のため、参加者は、≧８時間、食べ、飲み、エクササイズし、そしてカフェインまたはニコチンを利用することなく、実験室に出頭した。参加者は、インタビューを受け、これらの評価前制限を着実に実行したことを確認された。エクササイズの節制は、実際には、エクササイズセッションのスケジュールのため、≧１４時間であった。参加者は運動できる服装で実験室に出頭し、そしてすべての金属およびアクセサリーは試験前に体から外した。各参加者は排尿し、そして尿試料を提供した。尿試料は、デジタル屈折計（ＰＡ２０１Ｘ−０９３、Ｍｉｓｃｏ、米国オハイオ州ソロン）を用いて、尿比重（ＵＳＧ）に関して評価された。さらに、標準的尿ＨＣＧ試験を行って、各参加者が妊娠中でないことを確認した。最後に、研究非盲検化後に尿ＨＭＢ含量を評価するために、尿試料を−８０℃で凍結した。排尿後、身長計を含むデジタルはかり（Ｓｅｃａ ７６９、ドイツ・ハンブルグ）で、各参加者の体重（ＢＭ）および身長を決定した。一晩絶食後、Ｔｅｘａｓ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｔｕｄｅｎｔ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅで、採血を行い、そして参加者は、コルチゾール覚醒反応（ＣＡＲ）の評価のため、自宅で唾液収集を完了した。

体組成評価
二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＸＡ）および生体インピーダンス分光法（ＢＩＳ）データから産生した、修飾４成分（４Ｃ）モデル（２０、２１）を用いて、体組成を評価した。ｅｎＣＯＲＥソフトウェア（ｖ．１６．２）を含むＬｕｎａｒ Ｐｒｏｄｉｇｙスキャナ（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ、米国マサチューセッツ州ボストン）上で、ＤＸＡスキャンを行った。使用前の毎朝、品質管理ブロックを用いてスキャナを較正し、そして製造者の推奨にしたがって、参加者の配置を行った。各参加者は、スキャンニング寸法内に当てはまることが可能であった。ＤＸＡ骨ミネラル含量（ＢＭＣ）を０．９５８２で割って、骨ミネラル（Ｍｏ）の概算を得た（２２）。さらに、Ｗｉｌｓｏｎらによって、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ ＤＸＡスキャナ用に開発された等式を用いて、ＤＸＡ除脂肪軟組織（ｌｅａｎ ｓｏｆｔ ｔｉｓｓｕｅ）（ＬＳＴ）、脂肪量（ＦＭ）およびＢＭＣから、身体容積（ＢＶ）を概算した（２０）。

ＢＩＳを利用して、体内総水分量（ＴＢＷ）概算を得た。ＢＩＳは、他のインピーダンス法（例えば生体電気インピーダンス分析（２５））によって用いられる回帰方程式ではなく、Ｃｏｌｅモデリング（２３）および混合理論（２４）を利用して、体液を予測する。本研究で用いたＢＩＳデバイス（ＳＦＢ７、ＩｍｐｅｄｉＭｅｄ、米国カリフォルニア州カールスバッド）は、４〜１，０００ｋＨｚに渡る２５６の測定周波数を使用する。各参加者は、製造者が推奨する手から足への電極配置を用いた評価の直前に、≧５分間仰臥位を維持した。２つ組評価を行い、分析のため、値を平均した。Ｃｏｌｅプロットの視覚検査を通じて、品質保証のため、評価を検討した。

全身ＦＭの概算に関しては、Ｗａｎｇらの４Ｃ等式を利用した（２６）：

ＦＦＭはＢＭ−ＦＭとして計算し、そしてＢＦ％は（ＦＭ／ＢＭ）ｘ１００として計算した。
全身組成概算に加えて、肘屈筋（ＭＴ_ＥＦ）および膝伸筋の筋肉の厚さ（ＭＴ_ＫＥ）を、ベースラインおよび研究完了時に、超音波検査（Ｌｏｇｉｑ ｅ、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ、米国マサチューセッツ州ボストン）を通じて評価した。肘屈筋測定を肩甲骨の肩峰から肘窩までの距離の６６％で行い、そして膝伸筋測定を上前腸骨棘から膝蓋骨上縁までの距離の５０％で行った（２７、２８）。参加者が立った状態でこれらの距離を測定し、そしてベースラインでの測定距離を記録し、そして最終評価で用いた。すべての評価は、体の右側で行った。肘屈筋測定のため、仰臥位で、腕を保持しながら、参加者の腕を〜８０°に外転させた。膝伸筋測定のため、膝の下に気泡パッドを置き、膝関節で〜１０°の屈曲を可能にした。すべての評価に関して、印をつけた測定位置に伝達ゲルをたっぷりと適用し、そして組織への圧迫を回避するため、トランスデューサーによって、最小限の圧を適用した。３つの単一横断画像を各位置で撮り、分析のため値を平均した。所定の部位でのすべての測定に関して、トランスデューサーのゲインや深度を一定に維持した。超音波画像を分析に関して盲検化し、そしてＩｍａｇｅＪ（ｖ．１．５２ａ；米国国立衛生研究所）を用いて、単一の盲検化された研究者が分析した。超音波画像を分析する研究者の信頼性は、２つの場合で２８のランダムに選択された超音波画像の盲検化分析を通じて決定した。このエクササイズは、ＭＴ_ＥＦに関して０．０７ｃｍ、そしてＭＴ_ＫＥに関して０．１４ｃｍの最小相違（ＭＤ）を生じた。

筋性能評価
筋性能評価を、非絶食状態の１２：００〜１８：００の間に行い、そして参加者は試験の前に、好ましい食物および水分摂取パターンにしたがうように指示された。評価は、固定自転車上での自身が選択したペースを用いた５分間のウォーミングアップ期間で始まった。このウォーミングアップ期間に続いて、機械化スクワットデバイス上で試験する、対抗運動垂直ジャンプ（ＣＭＶＪ）成績、ならびにベンチプレスおよびヒップスレッドエクササイズでの筋肉強度および耐久性の評価を行った。第４週の評価時には、ＣＭＶＪおよびヒップスレッド評価は行われなかった。

ＣＭＶＪ試験のため、参加者は、自身の履物を履いて８回の試験を完了した。およそ３０秒間の休憩で各試験を分けた。１ｋＨｚでサンプリングする、２つの力台を用いたＣＭＶＪ中、地面反力（ＧＲＦ）データを得た（ＯＰＴ４６４５０８；Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ．、米国マサチューセッツ州ウォータータウン）。参加者は各足を力台に置き、そして手を腰において動かずに立った後、自身で選択した深さを用い、そして可能な限り最高の垂直移動を達成するために最大の努力でジャンプする対抗運動動作でＣＭＶＪを開始した。各足がそれぞれの力台に接触するように着地する他は、テイクオフから、そして下方への動きを止め、そして動かない立位に戻るまで、着地期に関しての指示は提供されなかった。３０Ｈｚカットオフ周波数を伴う４次低域Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈデジタルフィルタを用いて、２つの力台からの生ＧＲＦデータを整えた。２つの力台由来の整えたＧＲＦを、次いで、垂直軸に沿って合計して、質量の体心で作用する垂直ＧＲＦを得た。ＣＭＶＪ開始は、体重が２．５％減少した時点と定義された（２９）。テイクオフは、合計垂直ＧＲＦが２０Ｎ閾値未満に減った際の時間と定義された（３０）。次いで、ジャンプ時間を、秒の単位で表される、ＣＭＶＪ開始およびテイクオフの間に経過した時間として計算した。力積−運動量関係を用いて垂直ジャンプの高さを計算し、そしてメートルの単位で表した。

機械化スクワットデバイス（Ｅｘｅｒｂｏｔｉｃｓ ｅＳｑ、米国オクラホマ州タルサ）を用いて、等尺性および等速性スクワットを行った（３１、３２）。最初の評価時、スクワットデバイスの足台上に重ねたカスタムグリッドを用いて、各参加者の好ましい足配置を決定した。この足配置を記録し、そしてすべての試験時に利用した。ウェイトベルト、ニーラップ、または他の補助は試験中には利用しなかった。試験前、等速性試験に関する参加者の動きの範囲を決定した。動きの範囲は、ゴニオメーターによって決定されるように、太腿および下肢の間で、反復の最低部では９０°に、そして反復の最高ではおよそ１７０°に設定された。等尺性試験には、１２０°および１５０°の膝の角度での最大努力プッシュが含まれた。各参加者は、スクワットの動きを完了しようとしながら、出来る限り強くそして迅速に、デバイスを押すよう指示された。各膝角度で、２回の等尺性プッシュを行い、そして各努力はおよそ２〜３秒間続いた。等尺性試験後、３回の反復の最大等速性力産生試験を完了した。試験前に、参加者は機械の動きを観察し、そして評価の適切なパフォーマンスに関して口頭の指示を受けた。最大等速性力産生試験中の反復は各々、４秒間の伸張性収縮(エキセントリック)期、その後、９０°の膝位置でのおよそ半秒のポーズ、そして４秒間の短縮性収縮（コンセントリック）期からなった。試験中、力のシグナルを１ｋＨｚのロードセルからサンプリングし（ＭＰ１００；Ｂｉｏｐａｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｉｎｃ．、米国カリフォルニア州サンタバーバラ）、パソコン上に保存し、そして特注のソフトウェア（ＬａｂＶＩＥＷ、バージョン１１．０；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国テキサス州オースティン）を用いてオフラインでプロセシングした。スケーリングした力シグナルを、１０Ｈｚカットオフで低域フィルタリングした（零相ラグ、４次Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈフィルタ）。スケーリングし、そしてフィルタリングした力シグナルに対して、すべての続く分析を行った。等尺性力産生試験に関しては、特注Ｌａｂ ＶＩＥＷプログラム内の力産生開始をマニュアルで特定することによって、特定の時間間隔（すなわち３０、５０、１００および２００ｍｓ）に渡る力発展速度（ＲＦＤ）を計算した。最大等速性力産生試験の各反復に関しては、等速性ピーク力（ＰＦ）を、短縮性収縮および伸張性収縮試験の両方に関して、最高平均２５ｍｓエポックとして決定した（すなわちＰＦ_ＣＯＮＣおよびＰＦ_ＥＣＣ）。

ベンチプレスおよびヒップスレッドエクササイズに関する抵抗運動成績を、１−反復最大（１ＲＭ）および１ＲＭの７０％での失敗までの反復を通じて評価した。１ＲＭ試験プロトコルは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅｎｇｔｈ ａｎｄ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎの推奨に基づいた（３３）。簡潔には、ウォーミングアップセットを完了した後、参加者は、ほぼ最大と推定される負荷を用いて、２〜３回の反復を完了した。次いで、１ＲＭ試行を開始し、３〜５の間の試行で１ＲＭを得ることを目的とした。試行の間に３分間の休憩を許可した。適切なフォームでの最大ウェイトリフトを１ＲＭとして記録した。１ＲＭが得られた後、３分間の休憩期間を許可し、その後、１ＲＭの７０％を用いて、失敗までの反復（ＲＴＦ）を完了した。すべての参加者に関して、機械化スクワット試験後、下半身の回復を可能にするために、レッグプレスの前に、ベンチプレスを試験した。

代謝および生理学的測定
間接熱量測定法を通じて、ＲＥＥおよび基質利用を評価した（ＴｒｕｅＯｎｅ ２４００、ＰａｒｖｏＭｅｄｉｃｓ、米国ユタ州サンディ）。製造者の明記にしたがって、各午前に、気体および流動較正を行い、そしてＣｏｍｐｈｅｒら（３４）の評価前手順を利用した。参加者は、評価中、動かないままであるが覚醒しているように指示され、評価は明かりを薄暗くした空調室で行われた。各試験の最初の５分間は放棄され、そして≦５％のＲＥＥに関する変動係数（ＣＶ）で連続５分間の期間があるまで、評価を続けた。本研究において、ＲＥＥに関する平均ＣＶは３．２±１．１％（平均±ＳＤ）であった。

自動化カフ血圧計（ＨＥＭ−９０７，オムロン・ヘルスケア、日本・京都）を用いて、上腕血圧を測定した。この測定から、平均血圧および拡張期血圧を用い、圧平眼圧測定（ＳｐｈｙｇｍｏＣｏｒＰＶｘ、ＡｔＣｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ、米国イリノイ州イタスカ）を用いて、左橈骨動脈で測定した集合平均圧波形を較正した。一般的な伝達関数も用いて、橈骨動脈測定から大動脈波形を合成した。大動脈圧波形の波分離分析によって、動脈壁硬化の指標である大動脈パルス波速度（ＰＷＶ）の概算が可能になった。各参加者は血管評価前、≧１０分間、仰臥位のままであった。２つ組測定を得て、そして分析のために平均した。

有資格の医療関係者によって収集された血液試料を、分析のため、宅配業者によって、地域の臨床実験室（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ、米国テキサス州ルボック）に輸送した。標準的な装置（Ｃｏｂａｓ ６０００、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、スイス・リッシュ−ロートクロイツ）を用いて試験を行った。酵素的比色分析アッセイを用いて、総コレステロール、トリグリセリドおよびＨＤＬコレステロールを評価し、そしてＶＬＤＬおよび非ＨＤＬコレステロールを計算した。Ｍａｒｔｉｎ−Ｈｏｐｋｉｎｓ等式を用いて、ＬＤＬコレステロールを計算した（３５）。酵素的ＵＶ試験を用いて、グルコースを測定し、そして電気化学発光イムノアッセイを通じて、インスリンを評価した。臨床実験分析の結果を研究者に提供した。

各参加者は、ベースライン訪問時に唾液収集法に習熟した。受動的よだれ法を用いて唾液収集を行い、製造者の推奨にしたがって、口から小さなバイアルに唾液を移した（３６）。コルチゾール覚醒反応（ＣＡＲ；覚醒の際のコルチゾール濃度の特徴的な増加（３７））の評価のため、ベースライン期間中に３回の唾液試料を収集した。起床の０分、３０分および４５分後に、参加者の自宅で、これらの試料を収集した。研究参加者には、唾液試料を正確に指示されたとおりに収集する重要性を強く強調した。参加者には、ベッドサイドに置くリマインダーサインが提供され、そして唾液収集時点のためにアラームをセットするよう指示された。試料を得たら、各参加者は、実験室に輸送可能になるまで、バイアルをフリーザーに入れるよう指示された。実験室に送達されたら、唾液の各バイアルは、分析のための唾液試験施設（Ｓａｌｉｍｅｔｒｉｃｓ ＬＬＣ、米国カリフォルニア州カールスバッド）に輸送されるまで、−８０℃で保存された。分析のため、試料を室温に融解して、ボルテックスし、そして次いで、アッセイを実行する直前におよそ３，０００ＲＰＭ（１，５００ｘｇ）で１５分間遠心分離した。高感度酵素イムノアッセイ（カタログ番号１−３００２）を用いて、唾液コルチゾールに関して試料を試験した。試料試験体積は、測定あたり唾液２５μｌであった。アッセイは０．００７μｇ／ｄＬの感度下限を有し、標準曲線は０．０１２〜３．０μｇ／ｄＬの範囲であり、そして平均アッセイ内変動係数は４．６０％であり、そして平均アッセイ間変動係数は６．００％であり、これはＳａｌｉｖａｒｙ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅの正確さおよび再現性に関する製造者規準を満たし、そして厳密さおよび透明性を通じた再現可能性増進に関する適用可能なＮＩＨ指針を超えている。

アンケート
スクリーニング法の一部として、参加者は、ベースライン摂食およびエクササイズ習慣の決定のため、ライフスタイルアンケートを用いて、インタビューを受けた。参加者は、続く研究訪問時に、フォローアップライフスタイルアンケートを完了した。さらに、参加者は、各午前研究室評価セッション時に、気分および感情アンケート（３８）、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ睡眠品質指標（３９）、３要素摂食アンケート改訂１８アイテムバージョン（４０）および生理周期アンケートを完了した。

統計分析
ＴＲＦおよびＲＴの以前の研究から概算したエフェクトサイズ（ＥＳ）を用いて、アプリオリ検出力分析を行った（Ｇ^＊Ｐｏｗｅｒ、ｖ．３．１．９．２）（８）。一次従属変数としてＦＭを特定し、そして検出力分析に用いるＥＳは、ＴＲＦにおけるＦＭ減少に関する観察ＥＳから対照群におけるＦＭ減少に関するＥＳを減じたものであった。このＥＳ（ｄ＝０．４６）、０．０５のαエラー確率、および０．８の検出力を用いて、脂肪量における有意な変化を検出するために１５人の参加者が必要であると概算された。同じ研究から筋性能改善に関するＥＳを用いて検出力分析を行った場合（ｄ＝０．２５）、ソフトウェアは、有意な変化を検出するために３６人の参加者が必要であると概算した。したがって、より感受性の低い測定のための適切な検出力を促進するため、そして１０％の摩耗率を考慮して、ターゲットサンプルサイズは４０であった。

すべてのデータ分析は、研究者の非盲検化の前に、そして尿ＨＭＢ濃度を受け取る前に行った。モデルに基づく尤度法を用いて、治療企図（ＩＴＴ）フレームワークでデータを分析し、すなわち介入効果は、介入プロトコルに適合しているか（例えばフォローアップ評価の際に欠席しているかまたはドロップアウトしたか）どうかにかかわらず、ベースライン時にグループにランダム化されたすべての参加者に関して概算されたことを意味する。研究からドロップアウトしたかまたは研究プロトコルを順守できなかった（割り当てられた摂食スケジュールを＜８０％しか順守しなかったか、２２／２４のＲＴセッション未満しか完了しなかったか、またはカプセル計数によって決定されるように、カプセル補充剤を＜７０％しか順守しなかったと定義される）参加者を排除することによって、さらなるパープロトコル（ＰＰ）分析を行った。ＩＴＴおよびＰＰ分析両方に関して、制限された最大尤度法を伴う線形混合モデルを用いて、群（すなわちＴＲＦ、ＴＲＦ_ＨＭＢおよびＣＤ）に渡る長期間の転帰変数の変化を試験した。反復測定のための非構造化分散−共分散構造に基づいてモデルを確立し、そして失われた値は、ランダムに失われていると仮定した。Ｑ−Ｑプロットの視覚的検査を用いて、残差仮定の正規性を試験した。時間相互作用効果による群が有意であるならば、適切であるように一方向または反復測定ＡＮＯＶＡを用いて、単純効果試験を、そして多数の比較のためにＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ調整を行った。時間相互作用によっては統計的に有意な群がない場合、Ｓｉｄａｋの対比較を用いて、フォローアップを伴い、主効果を調べた。プールされた標準偏差によって、ベースラインおよび第８週（Ｗ８）の間の相違を割ることによって、各群に関して、ＣｏｈｅｎのｄＥＳを計算した。統計的有意性に関しては、＜０．０５のファミリーワイズアルファレベルを用い、そしてＩＢＭ ＳＰＳＳ ｖ．２５およびＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ｖ．１６．１６．３を用いて、すべてのデータ分析を行った。

結果
参加者
４０人の参加者をランダム化して、そしてＩＴＴ分析に含める一方、２４人の参加者をＰＰ分析に含めた。どちらの分析においてもベースライン相違は存在しなかった（表２）。

表２． 参加者特性
平均±ＳＤ。一方向ＡＮＯＶＡによるＰ値。
ＣＤ：対照食餌；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ：パープロトコル；ＲＴ：抵抗運動；ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充
参加者は、ＩＴＴ分析においては非順守のために排除はされなかったが、割り当てられたプロトコルへの平均群順守は、割り当てられた摂食スケジュールに関しては≧８９％、そしてカプセル計数に基づく割り当てられたカプセル補充に関しては≧８４％であった（補助表１）。ＰＰ分析においては、群順守は、摂食スケジュールに関して≧９１％、そしてカプセル補充に関して≧８７％であった。どちらの分析においても、尿ＨＭＢ濃度は、介入前期間から介入まで、ＴＲＦ_ＨＭＢで有意に増加し、ＴＲＦまたはＣＤでは変化はなかった（補助表２）。

栄養および補充
介入前に、１日の最初のまたは最後の摂食機会の時間に相違はなく、また摂食ウィンドウの総期間にも相違はなかった（補助表３）。介入中、最初の摂食機会の時間は、ＣＤに比較した際、ＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢではより遅い一方、最後の摂食機会の時間はＣＤにおいてより遅かった。これらの相違は、ＴＲＦ（ＩＴＴ：７．５±０．６時間／日；ＰＰ：７．５±０．５時間／日）またはＴＲＦ_ＨＭＢ（ＩＴＴ：７．６±０．７時間／日；ＰＰ：７．５±０．５時間／日）に比較した際、ＣＤ（ＩＴＴ：１３．２±１．６時間／日、ＰＰ：１３．３±１．８時間／日）に関して有意により長い摂食ウィンドウを生じた。摂食ウィンドウ内で、食事頻度は介入前または介入中に群間で異ならなかった。

介入前期間中、重量測定食餌記録の分析によって、すべての群が、ベースラインＲＥＥに匹敵する平均エネルギー摂取を有することが示された（ＩＴＴ：０〜−１６４ｋｃａｌ／日、ＰＰ：−５５〜−１９４ｋｃａｌ／日）。介入中、エネルギー摂取はすべての群で増加し（ＩＴＴ：２３〜１９４ｋｃａｌ／日、ＰＰ：９０〜２５０ｋｃａｌ／日）、群間で相違はなかった（表３）。

表３．栄養摂取。
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値；^＊合わせたすべての群における有意変化（時間主効果）
ＣＤ：対照食餌；Ｉ：時間相互作用による群；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ：パープロトコル；ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充。

エネルギー摂取の増加の度合いは、提供されたホエイタンパク質補充剤から消費される平均１日カロリーに近似した（〜２００−２５０ｋｃａｌ／日）。エネルギー摂取のこの増加にもかかわらず、１日カロリー消費は、ベースラインＲＥＥ（ＩＴＴ：＋２２〜７５ｋｃａｌ／日、ＰＰ：−３２〜＋１９５ｋｃａｌ／日）およびＷ８ ＲＥＥ（ＩＴＴ：＋８〜９３ｋｃａｌ／日、ＰＰ：−７７〜＋２４０ｋｃａｌ／日）で近いままであった。すべての群におけるタンパク質摂取は、介入前期間から介入まで増加し、介入中の平均取り込みは１．５〜１．７ｇ／ｋｇ／日であった。炭水化物および脂肪摂取は、一般的に、介入中に変化しなかった。

抵抗運動プログラムおよび身体活動監視
いずれの分析においても、上半身または下半身セッション量または総量に関して、群間の相違はなかった（補助表４）。すべての群において、介入の前半から介入の後半に向かって量は増加し、群セッション量における増加の度合いは１５〜２７％の範囲であった。介入中、群ステップカウントは、７．３５４〜８．８３０ステップ／日の範囲であり、群間でまたは時間に渡って、有意な相違はなかった（補助表５）。時間相互作用による群を、ＰＡＥＥ、座っている時間および軽強度ＰＡに関して示した。群間の相違は、座っている時間および軽強度ＰＡに関して、介入前期間には存在したが、初期または後期介入期間中には存在しなかった。さらに、群内の時点間には統計的に有意な相違は観察されず、ＩＴＴ分析における介入前と比較した際の初期介入中のＴＲＦ群において座っている時間がより長く観察されたことが例外であった。

体組成
ＰＰ分析において、ＦＦＭは、すべての群において１．０〜１．４ｋｇ増加し、群間の有意差はなかった（表４）。しかし、除脂肪量獲得は、ＴＲＦ＋ＨＭＢ群で、ＣＤまたはＴＲＦ単独におけるよりも数値的により高く（ＴＲＦ＋ＨＭＢの１．４ｋｇ対ＣＤの１．１およびＴＲＦの１．０）、そしてより大きなエフェクトサイズを有した（０．３２対０．２５および０．２３）。

表４． 体組成。

平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値；^＊統計的に有意（ｐ＜０．０５）；^ａ合わせたすべての群において、Ｗ４およびＷ８でベースラインとは有意に異なる；^ｂ明記する群において、ベースライン値と有意に異なる；^ｃ合わせたすべての群において、Ｗ４でベースラインとは有意に異なる；^ｄ合わせたすべての群において、ベースライン値とは有意に異なる；^ｅＣＤよりもＴＲＦにおいてより高いベースライン値；ＢＦ％：４成分モデル体脂肪パーセント；ＢＭ：体重；ＣＤ：対照食餌；ＥＳ：エフェクトサイズ；ＦＭ：４成分モデル脂肪量；ＦＦＭ：４成分モデル除脂肪量；Ｉ：時間相互作用による群；ＩＴＴ：治療企図；ＭＴ_ＥＦ：肘屈筋の超音波での筋肉の厚さ；ＭＴ_ＫＥ：膝伸筋の超音波での筋肉の厚さ；ＰＰ：パープロトコル；ＴＲＦ：時間制限摂食：ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充。

脂肪量はＣＤでは変化がなかったが、ＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢでは有意な減少が観察された（図１）。図１において、パーセント変化（平均±ＳＥＭ）を、各変数に関する、ベースラインおよびベースライン値と比較した最終値の間の相違として示す。上部パネルは、パープロトコル（ＰＰ）分析の結果を示し、そして下部パネルは治療企図（ＩＴＴ）分析の結果を示す。４成分モデルを用いて総体組成を概算する一方、超音波検査を通じて筋肉の厚さを評価した。括弧つきのアステリスクは、混合モデル分析に基づいた、すべての群における有意な変化を示し（すなわち時間主効果）、群間に有意差はなかった。１つの列のみの上のアステリスクは、明記する群でのみの変化を示す（すなわち、フォローアップ試験を伴う混合モデル分析における時間相互作用による有意群）。

ＦＭはＴＲＦにおいて、第４週（Ｗ４）でベースラインより有意に低かったが、Ｗ８のＦＭはベースラインとは有意に異ならなかった。対照的に、ＴＲＦ_ＨＭＢにおけるＦＭは、Ｗ８でベースラインより低かった。ＣＤにおいては、ＢＦ％の変化は観察されず、そしてＢＦ％の減少は、Ｗ８で、ＴＲＦ_ＨＭＢでは統計的に有意であったが、ＴＲＦでは有意ではなかった。ＭＴ_ＥＦおよびＭＴ_ＫＥに関しては時間主効果が存在し、すべての群で増加を示した。ＩＴＴ分析において、ＦＦＭはすべての群で０．９〜１．２ｋｇ増加し、群間で有意差はなかった。ＰＰ分析とは対照的に、時間相互作用による群は、ＦＭまたはＢＦ％に関して統計的に有意ではなかったが、時間主効果は、合わせたすべての群において、ＦＭおよびＢＦ％で減少を示した。統計的に有意ではなかったが、筋肉の厚さの増加の度合いは、どちらの分析においても、上半身および下半身に関して、群間で潜在的に異なるようであった。

筋性能
最大強度および筋肉耐久性は、すべての群で改善し、群間で統計的有意差はなかった（図２；表５）。筋性能は改善し、群間で有意差はなかったが、下半身力生成の試験に関する平均エフェクトサイズは、ＴＲＦまたはＣＤ（ｄ＝０．３〜０．４）に比較した際、ＴＲＦ_ＨＭＢ（ｄ＝０．６〜０．７）で好ましかった。

表５． 筋性能
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値
^ａ合わせたすべての群において、各時点間で有意に異なる；^ｂＷ８で、ベースラインおよびＷ４と有意に異なる；^ｃＷ８でベースラインと有意に異なる；
ＰＰ．ＰＰ分析において、ＣＤと比較した際、ＴＲＦにおいて、より大きい１ＲＭ_ＬＰであった（ｐ＝０．０２）ことを例外として、群間にベースライン相違は存在しなかった。１−ＲＭ_ＢＰ：ベンチプレスエクササイズに関する１反復最大値；１−ＲＭ_ＬＰ：レッグプレスエクササイズに関する１反復最大値；ＣＤ：対照食餌；ＥＳ：エフェクトサイズ；Ｉ：時間相互作用による群；ＩＴＴ：治療企図；ＰＦ_ＣＯＮ：短縮性収縮ピーク力；ＰＦ_ＥＣＣ：伸張性収縮ピーク力；ＰＰ：パープロトコル；ＲＴＦ_ＢＰ：ベースライン１−ＲＭの７０％を用いたベンチプレスエクササイズに関する失敗までの反復；ＲＴＦ_ＬＰ：ベースライン１−ＲＭの７０％を用いたレッグプレスエクササイズに関する失敗までの反復；ＴＲＦ：時間制限摂食：ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充。

図２において、パーセント変化（平均＋ＳＥＭ）を、各変数に関する、ベースラインおよびベースライン値と比較した最終値の間の相違として示す。上部パネルは、パープロトコル（ＰＰ）分析の結果を示し、そして下部パネルは治療企図（ＩＴＴ）分析の結果を示す。括弧つきのアステリスクは、混合モデル分析に基づいた、すべての群における有意な変化を示し（すなわち時間主効果）、群間に有意差はなかった。最大強度（１ＲＭ）および失敗までの反復（ＲＴＦ）をレッグプレスおよびベンチプレスエクササイズに関して得て、ピーク力（ＰＦ）を等速性スクワット試験から得て、力発展速度（ＲＦＤ）を等尺性スクワット試験から得て、そしてジャンプの高さ（ＪＨ）を、力台を用いて計算した。ＲＦＤ値を計算する期間を、下付き文字に示す。

いくつかのＲＦＤ変数もまた、すべての群において、特にＩＴＴ分析において改善された（補助表６）。増加したジャンプの高さに関する時間主効果の傾向（ｐ＝０．０６）がＩＴＴ分析において観察されたが、ＣＤ（ｄ＝０．６３）およびＴＲＦ_ＨＭＢ（ｄ＝０．６５）におけるＥＳは、ＴＲＦ（ｄ＝０．００）より大きいようであった（補助表７）。

代謝および生理学的変数
いかなる群でもＲＥＥまたはＲＱの有意な変化は観察されなかった（補助表８）。ＣＤおよびＴＲＦ群において、４５〜７１ｋｃａｌ／日のＲＥＥの有意でない減少（ｄ＝−０．２９〜−０．４２）が観察される一方、ＲＥＥは、ＴＲＦ_ＨＭＢ（ｄ＝０．０９〜０．３０）において、ベースラインよりも１５〜４９ｋｃａｌ／日より高かった。安静代謝率はＴＲＦ＋ＨＭＢ群（＋４７ｋｃａｌ／日；３％）において増加する一方、ＣＤ（−４５ｋｃａｌ／日；−３％）およびＴＲＦ（−６３ｋｃａｌ／日；−４％）群では減少した。血液マーカーは、一般的に、研究介入によっては不変であったが、ＰＰ分析において、ＬＤＬ増加に関する有意な時間主効果が観察された（補助表９）。血管評価、コルチゾール覚醒反応または平均コルチゾール濃度に有意な変化はないことが観察された（補助表１０および１１）。

アンケート
総合すると、研究中に大きな副作用または不都合な事象は起こらなかった。Ｗ４で、参加者の８４％は副作用なしと報告した。報告された副作用には、ＴＲＦにおける食欲抑制（ｎ＝１）および関連するいら立ちを伴う食欲増加（ｎ＝１）の両方、ＴＲＦ_ＨＭＢにおける朝の疲労（ｎ＝１）、ＣＤにおける悪心（ｎ＝１）、ならびにＣＤおよびＴＲＦ_ＨＭＢにおける胃膨満（各ｎ＝１）が含まれた。Ｗ８で、９０％の参加者が副作用なしと報告した。報告された副作用には、ＴＲＦにおける食欲抑制（ｎ＝１）、ならびにＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢ両方における胃膨満（各ｎ＝１）が含まれた。

アンケート反応に関して、群間に相違は観察されなかった。時間主効果は、すべての群において、ベースラインに比較して、Ｗ４およびＷ８で、気分および感情アンケートに関して、スコアの改善を示した（補助表１２）。ＩＴＴ分析において、３要素摂食アンケートの非管理摂食スコアは、すべての群において、時間の経過とともに減少し、ＰＰ分析において同じ効果の傾向があった。各群において、定期的に起こる月経周期を伴う参加者の比率は、ＰＰ分析において５７〜７８％の範囲であり、そしてＩＴＴ分析において６９〜７９％の範囲であった（補助表１３）。

考察
本研究は、女性参加者における、ＲＴを加えたＩＦの最初の試験である。試験の目的は、漸増ＲＴ中、絶食期間中のＨＭＢ補充を伴うまたは伴わないＴＲＦの効果を、朝食消費を必要とする対照食餌に比較することであった。

本研究において、ＴＲＦの着実な実行は、ＦＦＭ増加、骨格筋肥大または筋性能の改善を妨げることなく、ＦＭの喪失を生じた。ＰＰ分析において、ＦＭはＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢにおいて減少した。ＩＴＴ分析において、効果の度合いは予期されるように減少した。ＦＭおよびＢＦ％に関して、群間の統計的有意性は生じないが、ＰＰ分析におけるものと同じ傾向が観察された。筋性能における改善は、群間で有意には異ならないが、１ＲＭ_ＬＰ、ＰＦ_ＣＯＮ、ＰＦ_ＥＣＣ、およびＲＦＤを含む、下半身における迅速な力の生成に関連する測定の改善の度合いは、群間で異なる。これらの測定に関しては、ＣＤおよびＴＲＦの両方において０．３〜０．４であるのに比較して、ＴＲＦ_ＨＭＢにおける平均ＥＳは０．６〜０．７であった。

迅速な力の生成の計量値とは対照的に、筋肉耐久性（すなわちＲＴＦ_ＬＰおよびＲＴＦ_ＢＰ）の改善の度合いは、ＰＰ分析においてのみ、より長い摂食ウィンドウ（すなわちＣＤ）を含む食餌パターンを支持している可能性もあり、平均ＥＳはＣＤにおいては２．３であったが、ＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢにおいては１．５であった。

本研究中に提供される食餌アドバイスは最小限であった。特に、各参加者は、群割り当て時に、主任研究者と短時間（＜１０分間）会って、割り当てられた摂食スケジュールおよびタンパク質消費ターゲットを議論した。２回のさらなるフォローアップ訪問時に、同様の時間で、重量測定食餌記録の結果の議論を許可した。自己報告食餌摂取の欠点はよく確立されており、そして生じる栄養摂取概算は注意深く評価しなければならないが（５０、５１）、重量測定食餌記録は、エネルギーまたは主要栄養素摂取に関して、群間で有意な相違を明らかにしなかった。概算されるエネルギー摂取は、典型的にはターゲット摂取より低いため、一次食餌フィードバックは、タンパク質含有食物および提供される補充剤の消費を通じた高タンパク質摂取を達成することであった。すべての群において、平均タンパク質摂取は、介入前期間の１．１〜１．３ｇ／ｋｇ／日から、研究介入中の１．５〜１．７ｇ／ｋｇ／日に増加し、範囲は筋肉適応のための最適摂取に一致した（９、１０）。

ＲＴへの適応に際して、タンパク質摂取の１日分布の影響を解明するためには、長期に渡るデータが必要であることが認識されてきている（９）。ＩＦは、食餌アミノ酸を通じた筋肉タンパク質合成の刺激および筋肉タンパク質分解の抑制を伴わない長期間を必要とするため（１３）、この疑問を調べる機会を提示する。本研究は、〜１３．５時間／日に比較して、〜７．５時間／日に、すべてのタンパク質および他の栄養摂取を限定した際、ＲＴ適応への有害な影響がないことを明らかにする。ＩＦの背景において、選択されたアミノ酸またはその代謝産物の摂取を可能にする修飾絶食期間の実行が、除脂肪量維持または増加に、特に活動的な個体において、有益でありうるかどうかもまた検討されてきている（１４）。本研究は、この問題を直接調べる最初の試験であり、そしてＦＭ減少のためのＨＭＢ補充および下半身筋性能の利点を明らかにする。

ＴＲＦプログラムの絶食期間中の補充ＨＭＢは、ＴＲＦ単独に比較した際、脂肪喪失を増進させ、そして下半身筋性能に利益をもたらす。
実験実施例２
β−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）補充で生じる脂肪喪失の量は、間欠性絶食と組み合わせた際に増加しうる。本実施例において、間欠性絶食を伴うＨＭＢ補充が、ＨＭＢ補充単独よりもより多い脂肪喪失を生じることを立証する。

実施例１において、活動的な女性（ｎ＝７、２２±３．３歳、６３．７±７．０ｋｇ）を、時間制限摂食に加えた３ｇ／日カルシウム−ＨＭＢ（ＴＲＦＨＭＢ）にランダム化した。ＴＲＦＨＭＢ群は、〜８時間／日の間にすべてのカロリーを消費した。ＴＲＦＨＭＢ群は、８週間の監視された抵抗運動を完了した。二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＸＡ）および生体インピーダンス分光法（ＢＩＳ）データから生じる修飾４成分（４Ｃ）モデル^１、２を用いて、体組成を、ベースライン、ならびに第４週および第８週に評価した。ｅｎＣＯＲＥソフトウェア（ｖ．１６．２）を含むＬｕｎａｒ Ｐｒｏｄｉｇｙスキャナ（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ、米国マサチューセッツ州ボストン）上で、ＤＸＡスキャンを行った。

Ｐａｎｔｏｎら（５４）に記載される以前の研究では、トレーニングしたおよびしていない女性（ｎ＝１８、２７±２．１歳、６２．３±２．２ｋｇ）が、間欠性絶食を伴わず、３ｇ／日のカルシウム−ＨＭＢにランダム化された。ＨＭＢ単独の群は、４週間の監視された抵抗運動を完了し、そして週３回運動した。水中計量法（５５）を用いて、４週間の運動前および運動後の体組成を測定した。体脂肪パーセント（ＢＦ％）をＳｉｒｉ等式^５から概算した。

ＴＲＦＨＭＢ群では、ＢＦ％は、４週間で、２９．１±２．５から２７．０±２．７％に減少した（ｐ＜０．０５）。４週間Δ変化は−２．１％であり、エフェクトサイズはｄ＝−０．３１であった。この脂肪喪失効果は、８週を通じて維持された。ＨＭＢ単独群では、ＢＦ％は、４週間で、２３．７±１．１から２３．０±１．２％に有意でなく減少した。４週間Δ変化は−０．７％であり、エフェクトサイズはｄ＝−０．１５であった。絶対エフェクトサイズはＴＲＦＨＭＢで２倍大きく、そしてＨＭＢ補充を間欠性絶食と組み合わせた際、ＢＦ％喪失に関してより強い効果があることが示される。

結論として、これらのデータは、驚くべきことに、ＨＭＢ補充の使用を間欠性絶食と組み合わせると、ＨＭＢ単独の補充に比較して、体脂肪喪失が加速されることを裏付ける。
前述の説明および図は、本発明の例示的態様を含む。本明細書に記載する前述の態様および方法は、当業者の能力、経験、および優先度に応じて多様でありうる。特定の順序で方法の工程を単に列挙した場合であっても、方法の工程の順序に関するいかなる限定も構成しない。前述の説明および図は、本発明を単に説明し、そして例示し、そして本発明は、請求項がそのように限定しない限り、こうしたものに限定されない。当業者は、本開示を読めば、本発明の範囲から逸脱することなく、その修飾および変動を行うことが可能であろう。

参考文献

補助表１．参加者の順守。
平均±ＳＤ；一方向ＡＮＯＶＡからのＰ値。^＊食事タイミング順守は、ＴＲＦよりＣＤでより高かった（ｐ＝０．０３）が、ＣＤおよびＴＲＦ_ＨＭＢ間（ｐ＝０．２９）またはＴＲＦ_ＨＭＢおよびＴＲＦ間（ｐ＝０．９６）では異ならなかった。
ＣＤ：対照食餌；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ；パープロトコル：ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充。

補助表２．尿ＨＭＢ濃度。
^＊統計的に有意（ｐ＜０．０５）；^ａ値をｎｍоｌ／ｍＬで示す。
ＣＤ：対照食餌；Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ；パープロトコル：ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充。

補助表３．摂食ウィンドウのタイミング
平均±ＳＤ；混合モデル分析からのＰ値。^ａ摂食機会を時間：分で示す。
^＊統計的に有意（ｐ＜０．０５）；^ａＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢの両方で、ＣＤとは有意に異なる；^ｂ介入前および介入の間で有意に異なる；^ｃ介入中、最後の摂食機会のタイミングは、ＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢの両方よりも、ＣＤで遅かった；^ｄ介入前に比較して、介入摂食ウィンドウはＣＤにおいてより長いが、ＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢにおいてより短かった；^ｅ最初の摂食機会のタイミングは、ＴＲＦおよびＴＲＦ_ＨＭＢに関しては介入前期間よりも介入中でより遅いが、ＣＤでは異ならなかった。
ＣＤ：対照食餌；Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ；パープロトコル：ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充。

補助表４．ワークアウト量
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値。
^＊介入の第一および第二の４週の間で統計的に有意（ｐ＜０．０５）な差
ＣＤ：対照食餌；ＥＳ：エフェクトサイズ：Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＬＢ：下半身；ＰＰ；パープロトコル：ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充；ＵＢ：上半身

補助表５．身体活動
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値。
^＊統計的に有意（ｐ＜０．０５）；^ａ介入前期間中、ＴＲＦとＣＤの間で異なる値、介入中には群間の相違なし；^ｂＴＲＦ単独において、時間に関する単純主効果、しかし時点間の比較は統計的に有意ではなかった；^ｃＴＲＦ単独において、介入前と初期介入の間で異なる値；^ｄ介入前ＬＩＰＡはＴＲＦ_ＨＭＢよりもＴＲＦで高く、そして介入前から初期介入までに、ＴＲＦ単独でＬＩＰＡは減少した
ＣＤ：対照食餌；ＥＳ：エフェクトサイズ：Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＬＩＰＡ：軽強度身体活動；ＭＶＰＡ：中程度または強強度身体活動；ＰＡＥＥ：身体活動エネルギー支出；ＰＰ；パープロトコル：ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充。

補助表６．力発展速度
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値。
^＊統計的に有意（ｐ＜０．０５）；^ａ時点間の対比較は、統計的に有意ではなかった；^ｂ合わせたすべての群で、Ｗ８の値は、ベースラインよりも高かった
ＣＤ：対照食餌；ＥＳ：エフェクトサイズ：Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ；パープロトコル：ＲＦＤ：力発展速度；ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充。ＲＦＤの時間の下付き表示は、ＲＦＤを計算した期間を示す；Ｗ４：第４週；Ｗ８：第８週

補助表７．垂直ジャンプ成績
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値。
^＊合わせたすべての群で、ベースラインおよびＷ８値の間で統計的有意差
ＣＤ：対照食餌；ＥＳ：エフェクトサイズ：Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ；パープロトコル：ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充；Ｗ８：第８週

補助表８．代謝
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値。
^＊合わせた両方の時点に渡って、ＣＤおよびＴＲＦ_ＨＭＢの間で統計的有意差
ＣＤ：対照食餌；ＥＳ：エフェクトサイズ：Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ；パープロトコル：ＲＭＲ；安静代謝率；ＲＱ：呼吸商；ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充；Ｗ８；第８週

補助表９．血液変数
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値。
^＊合わせたすべての群で、ベースラインおよびＷ８値の間で統計的有意差
ＣＤ：対照食餌；ＥＳ：エフェクトサイズ：ＨＤＬ：高密度リポタンパク質コレステロール；Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＬＤＬ：低密度リポタンパク質コレステロール；ＰＰ；パープロトコル：ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充；ＶＬＤＬ：超低密度リポタンパク質コレステロール

補助表１０．血管評価
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値。
^＊群主効果はＣＤおよびＴＲＦ_ＨＭＢの間の相違を示す
ＣＤ：対照食餌；ＥＳ：エフェクトサイズ；Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ；パープロトコル：ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充；Ｗ８：第８週

補助表１１．コルチゾール覚醒反応
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値。
^ａベースラインでは、ＡＵＣ（ｐ＝０．０８）または平均コルチゾール（ｐ＝０．１３）に関して、群間で有意差はなかった；^ｂベースラインでは、ＡＵＣ（ｐ＝０．４８）または平均コルチゾール（ｐ＝０．４３）に関して、群間で有意差はなかった
ＡＵＣ：曲線下面積；ＣＤ：対照食餌；ＥＳ：エフェクトサイズ；Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ；パープロトコル：ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充；Ｗ８：第８週

補助表１２．アンケート反応
平均±ＳＥ；混合モデル分析からのＰ値。
^＊統計的に有意（ｐ＜０．０５）；^ａＷ４およびＷ８で、ベースラインとは異なる値；^ｂＷ８で、ベースラインとは異なる値
ＣＤ：対照食餌；ＣＲ；認識される抑制；ＥＥ：感情的摂食；Ｉ：相互作用；ＩＴＴ：治療企図；ＭＦＱ：気分および感情アンケート；ＰＰ；パープロトコル：ＰＳＱＩ：Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ睡眠品質指標；ＴＦＥＱ：３要素摂食アンケート；ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充；ＵＥ：非管理摂食；Ｗ４：第４週：Ｗ８：第８週

補助表１３．月経周期分析
ＣＤ：対照食餌；ＩＴＴ：治療企図；ＰＰ；パープロトコル；ＴＲＦ：時間制限摂食；ＴＲＦ_ＨＭＢ：時間制限摂食に加えてベータ−ヒドロキシ・ベータ−メチルブチレート補充；Ｗ４：第４週：Ｗ８：第８週

Claims (19)

1. 間欠性絶食を行っている個体において脂肪喪失を促進するための方法であって、該個体に、約０．５ｇ〜約３０ｇのβ−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）を含む組成物を投与する
   工程を含む、前記方法。
2. 前記ＨＭＢが、遊離酸型、その塩、そのエステルおよびそのラクトンからなる群より選択される、請求項１の方法。
3. 前記ＨＭＢがカルシウム塩である、請求項１の方法。
4. 前記ＨＭＢが遊離酸型である、請求項１の方法。
5. 前記間欠性絶食が時間制限摂食である、請求項１の方法。
6. 前記間欠性絶食が隔日絶食である、請求項１の方法。
7. 脂肪喪失を加速させる方法であって、間欠性絶食を行っている個体に約０．５ｇ〜約３０ｇのβ−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）を投与する工程を含む、前記方法。
8. 前記ＨＭＢが、遊離酸型、その塩、そのエステルおよびそのラクトンからなる群より選択される、請求項７の方法。
9. 前記ＨＭＢがカルシウム塩である、請求項７の方法。
10. 前記ＨＭＢが遊離酸型である、請求項７の方法。
11. 前記間欠性絶食が時間制限摂食である、請求項７の方法。
12. 前記間欠性絶食が隔日絶食である、請求項７の方法。
13. 間欠性絶食を行っている個体において筋性能を改善する方法であって、約０．５ｇ〜約３０ｇのβ−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）を消費する工程を含む、前記方法。
14. 前記ＨＭＢが、遊離酸型、その塩、そのエステルおよびそのラクトンからなる群より選択される、請求項１３の方法。
15. 前記ＨＭＢがカルシウム塩である、請求項１３の方法。
16. 前記ＨＭＢが遊離酸型である、請求項１３の方法。
17. 前記間欠性絶食が時間制限摂食である、請求項１３の方法。
18. 前記間欠性絶食が隔日絶食である、請求項１３の方法。
19. 個体において除脂肪量を増加させる方法であって、間欠性絶食を行っている個体に約０．５ｇ〜約３０ｇのβ−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）を投与する工程を含む、前記方法。

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