JP2021503303A - Car−t細胞の機能性を改善するための組成物およびその使用 - Google Patents
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Abstract
本開示は、癌などの疾患の治療におけるCAR−T細胞およびGSK3β阻害剤を含む組成物および/またはキットの使用を含む、同CAR−T細胞およびGSK3β阻害剤を含む組成物およびキットに関する。
Description
本開示は、腫瘍の治療などの様々な治療用途において有用である、受容体タンパク質を発現する、遺伝的に改変された、またはキメラ抗原受容体T細胞(例えば、CAR−T)の機能を改善するための組成物および方法に関する。
悪性腫瘍に対する免疫療法戦略としてのキメラ抗原受容体発現人工T細胞(CAR−T)の使用は、末梢液性腫瘍の治療成功の特徴になっている。しかしながら、固形腫瘍の治療におけるCAR−T療法は、種々雑多な反応を示すものであった。養子T細胞療法の成功は、共刺激シグナルとともに、治療用T細胞が抗原源にアクセスしやすいかどうかに依存しており、これにより、例えば、CAR−T細胞がリンパ節で大量の悪性B細胞に曝されている血液腫瘍において、またはメラノーマのような免疫原性の高い腫瘍の治療時において、強力な活性化プロファイルと強い細胞毒性効果がもたらされる。対照的に、固形腫瘍のCAR−T治療時では、腫瘍抗原への曝露が制限される結果としてT細胞の活性化が弱くなり、不安定な免疫応答、貧血性クローン増殖、および未熟なクローン性収縮が起こる。
クローン性収縮およびT細胞の弱い活性化のこの問題を克服するための様々な方法が当技術分野で採用されており、中程度の成功を収めている。たとえば、クローン性収縮を克服し、急速な増殖を促進し、かつサイトカイン欠乏を克服するために、CD28シグナル伝達分子をCAR構築物の細胞内部分に追加した、第2世代のCAR−T細胞として知られているものが設計されている。時間とともに、この改変は固形腫瘍に対するCAR−Tの使用に対するすべての障壁を克服しなかったことが観察された。41BBおよび/またはOX40のような共刺激分子が追加された「第3世代」のCARを作成するために、さらなる改変がなされた。さらに、移入されたT細胞を生存させ機能させるために、患者はIL2療法で定期的に処置されるが、治療用T細胞によるサイトカインの制御されない産生を引き起こす結果となっている。
これらの方法は固形腫瘍の治療においてT細胞の活性化をある程度まで高めることができたが、クローン性の収縮(clonal contraction)を完全に克服し、T細胞の急速な増殖と活性化を促進するためのさらなるイノベーションが依然として必要である。そのような方法は本明細書において提供される。
本開示は、CAR−T療法を改善するための組成物および方法に関する。固形腫瘍におけるCAR−T細胞免疫療法の成功における主たる障害は、最適なCAR−T細胞活性化未満のものをもたらす弱い抗原曝露(exposure)であり、それは付随して弱い抗腫瘍免疫応答をもたらすものであることを認識し、本開示は、CAR−T療法における既存のハードルを克服する組成物および方法を提供する。特に、本明細書に記載される組成物および方法は、補助的なIL2療法に関連する細胞毒性とともに、第2世代CARにおけるCD28および他の共刺激シグナル伝達部分の制限の多くを克服する。
様々な実施形態において、T細胞の集団をGSK3β阻害剤と接触させることを含む、T細胞の集団のエクスビボ増殖(ex vivo expansion)のための方法が提供される。様々な実施形態において、T細胞は、最初に、キメラ抗原T細胞受容体をコードする核酸で形質導入される。様々な実施形態において、T細胞は哺乳動物に由来する。様々な実施形態において、哺乳動物はヒトである。
様々な実施形態において、方法は、形質導入された細胞を腫瘍抗原と接触させることをさらに含む。
様々な実施形態において、方法は、T細胞の集団のエクスビボ増殖のために提供され、同方法は:対象からの前記T細胞を含むサンプルを単離することと;T細胞の集団に腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸を形質導入することと;形質導入されたT細胞をGSK3β阻害剤と接触させることと、を含む。
様々な実施形態において、方法は、T細胞の集団のエクスビボ増殖のために提供され、同方法は:対象からの前記T細胞を含むサンプルを単離することと;T細胞の集団に腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸を形質導入することと;形質導入されたT細胞をGSK3β阻害剤と接触させることと、を含む。
様々な実施形態において、方法は、形質導入されたT細胞を腫瘍抗原と接触させることをさらに含む。様々な実施形態において、T細胞をGSK3β阻害剤および腫瘍抗原と同時に接触させる。
様々な実施形態において、T細胞は、インターロイキン13(IL13 CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸で形質導入される。様々な実施形態において、核酸は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kまたはそのフラグメントをコードする。
様々な実施形態において、核酸は、インターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインに結合するドメインを含むインターロイキン13のフラグメント、またはインターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインを含む融合タンパク質をコードする。様々な実施形態において、腫瘍抗原は、インターロイキン13受容体(IL13R)またはそのバリアントを含む。
様々な実施形態において、腫瘍抗原は、インターロイキン13受容体のアルファ(α)鎖(IL13Rα)またはそのバリアントを含む。
様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、(a)SB216763、1−アザケンパウロン(Azakenpaullone)、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質、および/または(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質、である。
様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、(a)SB216763、1−アザケンパウロン(Azakenpaullone)、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質、および/または(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質、である。
様々な実施形態において、T細胞はヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、ナチュラルキラーT細胞、またはγδT細胞である。
様々な実施形態において、疾患を治療するために、増殖したT細胞がその後、患者に戻されるべく投与される。様々な実施形態において、疾患は癌である。様々な実施形態において、癌は固形腫瘍である。様々な実施形態において、腫瘍は腫瘍抗原を発現する。
様々な実施形態において、疾患を治療するために、増殖したT細胞がその後、患者に戻されるべく投与される。様々な実施形態において、疾患は癌である。様々な実施形態において、癌は固形腫瘍である。様々な実施形態において、腫瘍は腫瘍抗原を発現する。
様々な実施形態において、キメラ抗原受容体タンパク質(CAR−T細胞)およびGSK3β阻害剤を含む組成物が提供される。様々な実施形態において、キメラ抗原受容体は腫瘍抗原に結合する。
様々な実施形態において、T細胞は、インターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体を発現する。様々な実施形態において、T細胞は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kを含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する。
様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、小分子または遺伝物質である。様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)である小分子、或いはsiRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)である遺伝物質である。様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせ、およびGSK3のドミナントネガティブ対立遺伝子(dominant−negative allele)(GSK3DN)から選択される遺伝物質である。
様々な実施形態において、キメラ抗原受容体タンパク質(CAR−T細胞)を発現するT細胞およびGSK3β阻害剤を含む別個の投与(separate administration)のための製剤が提供される。
様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、SB216763、TWS−119、1−アザケンパウロンまたは6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)である小分子、或いはsiRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)である遺伝物質である。
様々な実施形態において、キットが提供され、キットは、1つ以上のパッケージ中に、インターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードするCAR核酸構築物;GSK3β阻害剤;および前記CAR核酸構築物でT細胞に形質導入する(transducing T−cells)ための任意選択の第1の試薬;T細胞を活性化するためのさらなる任意選択の第2の試薬、を含む。
様々な実施形態において、第2の試薬はIL13Rα2−Fcである。様々な実施形態において、核酸構築物は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする。様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)である小分子、或いはsiRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)である遺伝物質である。様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせ、およびGSK3DNを含む遺伝物質である。
様々な実施形態において、天然または野生型のT細胞と比較して、GSKβの発現または活性を阻害したT細胞が提供される。様々な実施形態において、T細胞はヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、ナチュラルキラーT細胞、またはγδT細胞である。
様々な実施形態において、T細胞のエクスビボ増殖のための方法が提供され、同方法は、対象からのT細胞を含むサンプルを単離することと;T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることと;腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸を用いてT細胞に形質導入することと;形質導入されたT細胞を腫瘍抗原と接触させて形質導入されたT細胞を増殖させることと、を含む。
様々な実施形態において、方法は、T細胞のエクスビボ増殖のための方法が提供され、同方法は、対象からのT細胞を含むサンプルを単離することと;T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることと;腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸を用いてT細胞に形質導入することと;形質導入されたT細胞を腫瘍抗原と接触させて形質導入されたT細胞を活性化および/または増殖することと、を含む。
様々な実施形態において、T細胞は、インターロイキン13(IL13 CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸で形質導入される。様々な実施形態において、核酸は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kまたはそのフラグメントをコードする。様々な実施形態において、核酸は、インターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインに結合するドメインを含むインターロイキン13のフラグメント、またはインターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインを含む融合タンパク質をコードする。様々な実施形態において、腫瘍抗原は、インターロイキン13受容体(IL13R)またはそのバリアントを含む。様々な実施形態において、腫瘍抗原は、インターロイキン13受容体のアルファ(α)鎖(IL13Rα)またはそのバリアントを含む。
様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、(a)SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質、および/または(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質、である。
様々な実施形態において、T細胞はヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、ナチュラルキラーT細胞、またはγδT細胞である。
様々な実施形態において、それを必要とする対象においてT細胞の養子移入により治療可能な疾患を治療するための方法が提供され、同方法は、対象に、複数の活性化および増殖したT細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、活性化がCAR−Tを抗原と接触させることを含み、増殖が活性化CAR−T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含む。
様々な実施形態において、それを必要とする対象においてT細胞の養子移入により治療可能な疾患を治療するための方法が提供され、同方法は、対象に、複数の活性化および増殖したT細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、活性化がCAR−Tを抗原と接触させることを含み、増殖が活性化CAR−T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含む。
様々な実施形態において、それを必要とする対象においてT細胞の養子移入により治療可能な疾患を治療するための方法が提供され、同方法は、対象に、複数の活性化および増殖したT細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、活性化がCAR−Tを抗原と接触させることを含み、増殖が活性化CAR−T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含む。
様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、(a)SB216763、TWS−119、1−アザケンパウロンまたは6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質、および/または(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質、である。
様々な実施形態において、疾患は、腫瘍疾患、細菌性疾患、ウイルス性疾患および原生動物疾患から選択される病原性疾患、または自己免疫疾患である。
様々な実施形態において、それを必要とする対象において腫瘍を治療するための方法が提供され、同方法は、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する複数の活性化および増殖T細胞(CAR−T)を含む有効量の組成物を対象に投与することを含み、活性化がCAR−Tを腫瘍抗原と接触させることを含み、増殖が活性化CAR−T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含み、活性化CAR−T細胞はキメラ抗原受容体タンパク質を発現し、キメラ抗原受容体タンパク質は腫瘍抗原に結合する。
様々な実施形態において、それを必要とする対象において腫瘍を治療するための方法が提供され、同方法は、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する複数の活性化および増殖T細胞(CAR−T)を含む有効量の組成物を対象に投与することを含み、活性化がCAR−Tを腫瘍抗原と接触させることを含み、増殖が活性化CAR−T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含み、活性化CAR−T細胞はキメラ抗原受容体タンパク質を発現し、キメラ抗原受容体タンパク質は腫瘍抗原に結合する。
様々な実施形態において、T細胞は自家T細胞である。
様々な実施形態において、T細胞は、インターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体を発現する。様々な実施形態において、T細胞は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kを含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する。
様々な実施形態において、T細胞は、インターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体を発現する。様々な実施形態において、T細胞は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kを含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する。
様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、(a)SB216763、TWS−119、1−アザケンパウロンまたは6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質、および/または(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質、である。
様々な実施形態において、T細胞は、同時にまたは順次に、活性化および増殖される。様々な実施形態において、腫瘍はIL13R陽性である。様々な実施形態において、腫瘍はIL13R陽性神経膠腫である。
様々な実施形態において、腫瘍特異的メモリーT細胞を生成する方法が提供され、同方法は、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体をコードする核酸を対象の生体サンプルから単離されたT細胞(CAR−T)に形質導入することと;CAR−T細胞を腫瘍抗原およびGSK3β阻害剤と接触させることと;メモリー細胞に特異的な第1のマーカーおよび腫瘍抗原に特異的な第2のマーカーを検出して、それにより腫瘍特異的なメモリーT細胞を生成することと、を含む。
様々な実施形態において、CAR−T細胞は、IL13またはそのフラグメントまたはそのバリアントをコードする核酸で形質導入される。様々な実施形態において、CAR−T細胞は、IL13バリアントIL13.E13K.R109Kをコードする核酸で形質導入される。様々な実施形態において、腫瘍抗原は、IL13受容体またはそのリガンド結合ドメインである。
様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、(a)SB216763、TWS−119、1−アザケンパウロンまたは6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質、および/または(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質、である。
様々な実施形態において、T細胞は、同時にまたは順次に、活性化および増殖される。様々な実施形態において、メモリー細胞に特異的なマーカーは、CD45RO+およびCD45RA+から選択され、腫瘍抗原に特異的なマーカーは、腫瘍抗原に結合するタンパク質の発現を含む。様々な実施形態において、CAR−T細胞は、IL13R陽性細胞への結合、および場合によりIL13R陽性細胞の破壊を含む機能アッセイによって確認されるように、IL13R陽性腫瘍細胞に特異的である。様々な実施形態において、メモリーT細胞はCD8+T細胞である。
様々な実施形態において、方法は、メモリーCAR−T細胞ホメオスタシスの第3のマーカーを検出することをさらに含む。様々な実施形態において、第3のマーカーは、発現、T−bet発現、および/またはPD−1発現である。様々な実施形態において、増加したT−bet発現および/または減弱したPD−1発現は、CAR−T細胞ホメオスタシスの改善を示す。様々な実施形態において、T細胞ホメオスタシスは、T細胞疲弊の減少、持続的なサイトカイン発現、T細胞クローン性の維持(clonal maintenance)、および/またはCAR−Tメモリー発達の促進を含む。様々な実施形態において、腫瘍抗原による活性化およびGSK3β阻害剤の存在下での増殖を介して生成されたCAR−T細胞は、腫瘍抗原を発現する腫瘍細胞に対して特異性およびメモリー(memory)の増加を示す。
本開示の1つまたは複数の実施形態の詳細は、添付の図面/表および以下の説明に記載されている。本開示の他の特徴、目的、および利点は、図面/表および詳細な説明、ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
本明細書は、本開示の例示的な実施形態および用途を説明する。しかしながら、本開示は、これらの例示的な実施形態および用途、または例示的な実施形態および用途が動作する、または本明細書で説明される方法に限定されるものではない。本教示の他の実施形態、特徴、目的、および利点は、詳細な説明および添付図面から、ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。さらに、要素のリスト(要素a、b、cなど)が参照されている場合、そのような参照は、リストされた要素のいずれか1つそれ自体、リストされた要素のすべてより少ない組み合わせ、および/またはリストされているすべての要素の組み合わせ、を含むことを意図している。明細書のセクションの分割は、検討を容易にするためのものであり、説明されている要素の組み合わせを制限するものではない。
本明細書で使用する場合、「備える(comprise)」、「備える(comprises)」、「備える(comprising)」、「含有する(contain)」、「含有する(contains)」、「含有する(containing)」、「有する(have)」、「有する(having)」、「含む(include)」、「含む(includes)」、および「含む(including)」なる用語およびそれらの変形は、限定を意図するものではなく、包括的または制限のないものであり、追加の、列挙されていない添加物、成分、整数、要素、または方法のステップを除外するものではない。たとえば、特徴のリストを含むプロセス、方法、システム、組成物、キット、または装置は、必ずしもそれらの特徴に限定されるものではなく、明示的にリストされていない、またはそのようなプロセス、方法、システム、組成物、キット、または装置に固有の他の機能を含む場合がある。
他に定義されない限り、本明細書に記載される本教示に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。
本開示は、CAR−T療法を改善するための組成物および方法に関する。固形腫瘍におけるCAR−T細胞免疫療法の成功における主たる障害は、最適なCAR−T細胞活性化未満のものをもたらす弱い抗原曝露であり、それは付随して弱い抗腫瘍免疫応答をもたらすものであることを認識し、本開示は、CAR−T療法における既存のハードルを克服する組成物および方法を提供する。特に、本明細書に記載される組成物および方法は、補助的なIL2療法に関連する細胞毒性とともに、第2世代CARにおけるCD28および他の共刺激シグナル伝達部分の制限の多くを克服する。
本開示は、CAR−T療法を改善するための組成物および方法に関する。固形腫瘍におけるCAR−T細胞免疫療法の成功における主たる障害は、最適なCAR−T細胞活性化未満のものをもたらす弱い抗原曝露であり、それは付随して弱い抗腫瘍免疫応答をもたらすものであることを認識し、本開示は、CAR−T療法における既存のハードルを克服する組成物および方法を提供する。特に、本明細書に記載される組成物および方法は、補助的なIL2療法に関連する細胞毒性とともに、第2世代CARにおけるCD28および他の共刺激シグナル伝達部分の制限の多くを克服する。
様々な実施形態において、本開示の組成物および方法は、CAR−T細胞の生存および/または有効性を改善するためのアジュバントの使用を対象とする。特に、本開示は、GSK3β阻害剤を使用して、増殖を増大させ、急速に拡大し(expand)、抗原特異的CAR−T細胞の生存を改善することもできることを実証している。本開示の実施例のセクションで詳細に示されているように、GSK3βの薬理学的阻害は、これらのT細胞の抗原特異的CAR−T細胞増殖および長期生存を促進した。GSK3β阻害は、PD−1の発現を緩和することにより、活性化CAR−T細胞をT細胞疲弊(exhaustion)から保護し、抗原曝露の変動性で調節できる特定のエフェクターCAR−Tメモリー表現型の発達をさらに促進した。腫瘍担持動物をGSK3βで処理すると、抗原特異的CAR−T細胞が阻害され、100%の腫瘍の除去が得られ、脾臓および流入リンパ節におけるメモリーCAR−T細胞の蓄積が増加した。動物モデルでの腫瘍の再チャレンジ実験により、GSK3βで阻害された抗原経験のあるCAR−T細胞で処理した場合、100%の腫瘍の除去と無増悪生存率が得られた。合わせると、これらの結果は、活性化CAR−T細胞に対するGSK3β阻害のこのアジュバントのような効果が、固形腫瘍に対するCAR−T免疫療法を実施するための効果的な方法を提供することを示している。
本開示の実施例におけるデータは、GSK3β阻害がCAR−T細胞機能の成功した操作において重要な役割を果たすことをさらに実証する。驚くべきことに、活性は抗原特異的CAR−T細胞または抗原またはリガンドで活性化されたそれらのCAR−Tに限定されていることがわかった。GSK3β阻害は、活性化CAR−Tの増殖において役割を果たすのみならず、CD8+CAR−Tエフェクターメモリー(TEM)の生成も促進した。結果は、GSK3β阻害が細胞分裂の増加と抗原特異的CAR−Tの生存率の増加の複合効果を使用したことを示しているが、活性化されなかったCAR−T細胞に対してGSK3β阻害の増殖効果を与えるものでもなく、また、GSK3B阻害剤は、IL13CAR発現を欠く非形質導入T細胞にも影響を与えることはなかった。これらの観察は、GSK3β阻害の増殖効果が活性化CAR−Tに特異的であるという事実を確立した。
本発明の様々な実施形態において、GSK3β阻害は、より長い期間の増大した腫瘍防御をもたらす。本発明の様々な実施形態において、GSK3β阻害は、免疫メモリーの増加ならびにCAR−T細胞の拡大および/または増殖をもたらす。さらに、GSK3β阻害抗原特異的CAR−Tでチャレンジされた実験的異種移植動物を用いた研究は、GSK3B阻害剤で処理したCAR−T細胞は、より長い期間腫瘍防御を付与することができ、これは、拡大および/または増殖したCAR−T細胞の免疫学的メモリーを示唆するものである。研究は、抗原特異的なCAR−T細胞の亜集団を選択的に増殖するこれまで認識されていない方法を指摘している。
したがって、本開示は、以下の非限定的な実施形態に関する。
様々な実施形態において、本開示は、T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含む、T細胞を操作するための方法に関する。いくつかの実施形態において、GSK3β阻害剤は、小分子化学物質、例えば、SB216763(3−(2,4−ジクロロフェニル)−4−(1−メチル−1H−インドール−3イル)−1H−ピロール−2,5−ジオン)、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)、およびTWS−119である。いくつかの実施形態において、GSK3β阻害剤は、遺伝物質、例えば、マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA分子(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、またはGSK3βに特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用を介したRNA干渉(RNAi)、並びにGSK3βのドミナントネガティブ対立遺伝子(GSK3DN)である。好ましくは、阻害剤は、ヒトGSK3β、例えば、ヒトGSK3βバリアント1(GENBANKのmRNA配列:NM_002093;タンパク質配列:NP_002084)、ヒトGSK3βバリアント2(GENBANKのmRNA配列:NM_001146156;タンパク質配列:NP_001139628)またはヒトGSK3βバリアント3(GENBANKのmRNA配列:NM_001354596;タンパク質配列:NP_001341525)を阻害する。さらにいくつかの実施形態において、GSK3β阻害は、例えば標的化ノックアウトを介した、GSK3βの欠失または破壊を含む。いくつかの実施形態において、操作は、T細胞の拡大、増殖、生存を増加させ、および/または活性化T細胞の疲弊を減少させる。
様々な実施形態において、本開示は、T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含む、T細胞を操作するための方法に関する。いくつかの実施形態において、GSK3β阻害剤は、小分子化学物質、例えば、SB216763(3−(2,4−ジクロロフェニル)−4−(1−メチル−1H−インドール−3イル)−1H−ピロール−2,5−ジオン)、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)、およびTWS−119である。いくつかの実施形態において、GSK3β阻害剤は、遺伝物質、例えば、マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA分子(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、またはGSK3βに特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用を介したRNA干渉(RNAi)、並びにGSK3βのドミナントネガティブ対立遺伝子(GSK3DN)である。好ましくは、阻害剤は、ヒトGSK3β、例えば、ヒトGSK3βバリアント1(GENBANKのmRNA配列:NM_002093;タンパク質配列:NP_002084)、ヒトGSK3βバリアント2(GENBANKのmRNA配列:NM_001146156;タンパク質配列:NP_001139628)またはヒトGSK3βバリアント3(GENBANKのmRNA配列:NM_001354596;タンパク質配列:NP_001341525)を阻害する。さらにいくつかの実施形態において、GSK3β阻害は、例えば標的化ノックアウトを介した、GSK3βの欠失または破壊を含む。いくつかの実施形態において、操作は、T細胞の拡大、増殖、生存を増加させ、および/または活性化T細胞の疲弊を減少させる。
Tヘルパー細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞(例えば、セントラルメモリーT細胞、幹細胞様メモリーT細胞(または、幹様メモリーT細胞)またはエフェクターメモリーT細胞(例えば、TEM細胞およびTEMRA細胞))、調節性T細胞(サプレッサーT細胞としても知られる)、ナチュラルキラーT細胞、粘膜関連インバリアントT細胞、γδT細胞、腫瘍浸潤性T細胞(TIL)およびCAR−T細胞を含むがこれらに限定されない任意のタイプのT細胞は、前述の方法によって操作され得る。好ましくは、T細胞はヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、ナチュラルキラーT細胞、またはγδT細胞である。特に、T細胞はCAR−T細胞である。特に好ましい実施形態において、T細胞は活性化(activated)CAR−T細胞である。当技術分野で知られているように、CAR−T細胞は一般に抗原刺激を使用して活性化され、そのようなプロセスから得られるCAR−T細胞は抗原特異的、例えば、インターロイキン13受容体(IL13R)またはそのバリアントのような腫瘍抗原に特異的である。
様々な実施形態において、T細胞は、メモリーT細胞(例えば、セントラルメモリーT細胞、幹細胞様メモリーT細胞(または幹様メモリーT細胞)またはエフェクターメモリーT細胞(例えば、TEM細胞およびTEMRA細胞)ではない。
本開示はさらに、前述の方法によって操作されたT細胞に関し、GSK3βの発現または活性は、例えば、上記に提供されるような化学的または遺伝的阻害剤の使用を介して阻害される。好ましくは、T細胞は、野生型または正常T細胞と比較して、GSK3βの発現または活性を阻害している。特に好ましくは、T細胞は、野生型または正常なT細胞と比較してGSK3β活性の低下を示す。特に、T細胞は、siRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)の使用を介するRNA干渉に起因して、野生型または通常のT細胞と比較してGSK3β活性の低下を示す。
いくつかの実施形態において、本開示は、本開示の方法に従って操作または改変されたT細胞の使用に関する。本明細書において、操作されたT細胞は、T細胞の養子移入が有益であると考えられるあらゆる疾患または疾患の治療に有用であり、当該疾患には、例えば、癌の治療、病原性感染症(例えば、HIVなどのウイルス性疾患、細菌感染症、原虫感染症)の治療、炎症性疾患(例えば、関節リウマチまたはクローン病)の治療、および免疫系を高めることが含まれる。
様々な実施形態において、本明細書に開示される方法は、癌の治療に使用することができる。「癌」という用語は、本明細書において、黒色腫、肉腫、リンパ腫、脳、乳房、肝臓、胃および結腸癌などの癌腫、および白血病を含むがこれらに限定されない任意の癌を包含するために使用される。様々な実施形態において、本明細書に開示される方法は、腫瘍の治療に使用することができる。様々な実施形態において、腫瘍は固形腫瘍である。様々な実施形態において、固体は神経膠芽腫である。
様々な実施形態において、腫瘍は腫瘍関連抗原を発現する。このような抗原の例には、アルファフェトプロテイン(AFP)や癌胎児性抗原(CEA)などの癌胎児性抗原、CA−125やメソセリンなどの表面糖タンパク質、Her2などの癌遺伝子、ドパクロムトートメラーゼ(DCT)などの黒色腫関連抗原、GP100およびMART1、MAGEタンパク質およびNY−ESO1のような癌精巣抗原、HHPV E6およびE7のようなウイルス性腫瘍遺伝子、腫瘍で異所的に発現するタンパク質であって通常はPLAC1のような胚組織または胚外組織に限定されるタンパク質、GBM腫瘍細胞によって発現されるが、脳および上皮成長因子受容体(EGFR)には存在しないECMタンパク質フィブリン−3が含まれる。当業者が理解するように、1つまたは複数の抗原が特定の癌の治療での使用に特に適している場合があるため、本方法を使用して治療される癌のタイプに基づいて抗原を選択することができる。例えば、黒色腫の治療には、DCTのような黒色腫関連抗原を使用することができる。
様々な実施形態において、キメラ抗原受容体タンパク質は、インターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含む。様々な実施形態において、核酸は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kまたはそのフラグメントをコードする。様々な実施形態において、核酸は、インターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインに結合するドメインを含むインターロイキン13のフラグメント、またはインターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインを含む融合タンパク質をコードする。様々な実施形態において、腫瘍抗原は、インターロイキン13受容体(IL13R)またはそのバリアントを含む。様々な実施形態において、腫瘍抗原は、インターロイキン13受容体のアルファ(α)鎖(IL13Rα)またはそのバリアントを含む。様々な実施形態において、キメラ抗原受容体タンパク質は、フィブリン3を標的とすることができる細胞外ドメインを含む。
本明細書に開示される様々な実施形態において、キメラ抗原受容体(CAR)は、腫瘍関連抗原を対象とする。様々な実施形態において、CARが標的とするように設計されている腫瘍関連抗原は、本明細書に開示される方法によって治療される患者によって発現される腫瘍抗原のタイプに基づいて選択される。
好ましい実施形態において、本開示は、腫瘍により刺激されたT細胞(例えば、腫瘍浸潤リンパ球またはTIL)の操作のための方法および組成物に関し、操作後、腫瘍細胞の殺傷に有利に適用され得る。好ましくは、操作されたT細胞は、腫瘍細胞の破壊を促進するために宿主に自己移植される。
特に好ましい実施形態において、本開示は、前述の治療用途の1つまたは複数を実施するのに有用なメモリーT細胞を生成するための方法および組成物に関する。
関連する実施形態において、本開示は、T細胞のエクスビボ増殖のための方法に関し、同方法は、T細胞を含むサンプルを患者から単離することと;腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸をT細胞に形質導入することと;形質導入されたT細胞をGSK3β阻害剤および腫瘍抗原と接触させて形質導入されたT細胞を増殖させることと、を含む。好ましくは、T細胞は、インターロイキン13(IL13 CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸で形質導入される。特に、核酸は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kまたはそのフラグメントを含むCARをコードする。
関連する実施形態において、本開示は、T細胞のエクスビボ増殖のための方法に関し、同方法は、T細胞を含むサンプルを患者から単離することと;腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸をT細胞に形質導入することと;形質導入されたT細胞をGSK3β阻害剤および腫瘍抗原と接触させて形質導入されたT細胞を増殖させることと、を含む。好ましくは、T細胞は、インターロイキン13(IL13 CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸で形質導入される。特に、核酸は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kまたはそのフラグメントを含むCARをコードする。
関連する実施形態において、本開示は、T細胞のエクスビボ増殖のための方法に関し、同方法は、T細胞を含むサンプルを患者から単離することと;インターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインに結合するドメインまたはインターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインを含む融合タンパク質を含むインターロイキン13のフラグメントをコードする核酸をT細胞に形質導入することと;形質導入されたT細胞をGSK3β阻害剤および腫瘍抗原と接触させて、形質導入されたT細胞を増殖させることと、を含む。好ましくは、腫瘍抗原は、インターロイキン13受容体(IL13R)またはそのバリアントを含む。特に、腫瘍抗原は、インターロイキン13受容体のアルファ(α)鎖(IL13Rα)またはそのバリアントを含む。GSK3β阻害剤は、siRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)を含む、GSK3βの小分子阻害剤または遺伝的阻害剤であり得る。好ましくは、GSK3β阻害剤は、小分子GSK3β阻害剤、例えば、SB216763、TWS−119、1−アザケンパウロンまたは6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)である。様々な実施形態において、T細胞は、例えば、活性化とそれに続く増殖或いは増殖とそれに続く活性化など、同時にまたは順次に、活性化および増殖されてもよい。
様々な実施形態において、本開示は、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法に関し、同方法は、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する複数の活性化および/または増殖T細胞(CAR−T)を含む有効量の組成物を対象に投与することを含み、活性化がCAR−T細胞を腫瘍抗原と接触させることを含み、増殖が活性化CAR−T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含む。例えば、いくつかの実施形態において、活性化されたCAR−T細胞は、好ましくはキメラ抗原受容体タンパク質を発現し、キメラ抗原受容体タンパク質は腫瘍抗原に結合する。様々な実施形態において、T細胞は自家T細胞である。特に、腫瘍抗原はインターロイキン13受容体(IL13R)またはそのリガンド結合ドメインであり、キメラ抗原受容体タンパク質は、例えば腫瘍抗原IL13R(α1またはα2)に結合するIl13またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含む。様々な実施形態において、GSK3β阻害剤は、siRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)を含む、GSK3βの小分子阻害剤または遺伝的阻害剤であり得る。好ましくは、GSK3β阻害剤は、小分子GSK3β阻害剤、例えば、SB216763、1−アザケンパウロン、6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)またはTWS−119である。様々な実施形態下において、T細胞は、例えば、活性化とそれに続く増殖或いは増殖とそれに続く活性化など、同時にまたは順次に、活性化および増殖されてもよい。
様々な実施形態において、それを必要とする対象において腫瘍を治療するための方法が提供され、同方法は、IL13バリアントIL13.E13K.R109Kを含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する複数の活性化および/または増殖自家T細胞(CAR−T細胞)を含む有効量の組成物を対象に投与することを含み、活性化がCAR−T細胞を腫瘍抗原と接触させることを含み、増殖が活性化CAR−T細胞を小分子GSK3β阻害剤(例えば、SB216763、1−アザケンパウロン、6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)またはTWS−119)と接触させることを含み、活性化CAR−T細胞はキメラ抗原受容体タンパク質を発現し、キメラ抗原受容体タンパク質は腫瘍抗原に結合する。様々な実施形態下において、T細胞は、例えば、活性化とそれに続く増殖或いは増殖とそれに続く活性化など、同時にまたは順次に、活性化および増殖されてもよい。
様々な実施形態において、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法が提供され、同方法は、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する複数の活性化および/または増殖T細胞(CAR−T)を含む有効量の組成物を対象に投与することを含み、活性化がCAR−T細胞を腫瘍抗原と接触させることを含み、増殖が活性化CAR−T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含む。この実施形態下において、活性化されたCAR−T細胞は好ましくはキメラ抗原受容体タンパク質を発現し、キメラ抗原受容体タンパク質は神経膠腫で発現される腫瘍抗原、例えばIL13Rまたはそのバリアントに結合する。様々な実施形態において、神経膠腫は、多形神経膠芽腫(GBM)、未分化星状細胞腫または小児神経膠腫である。いくつかの実施形態において、活性化は、CAR−T細胞を神経膠腫腫瘍抗原と接触させることを含み、増殖は、活性化CAR−T細胞を小分子GSK3β阻害剤と接触させることを含み、活性化CAR−T細胞は、神経膠腫腫瘍抗原に結合するキメラ抗原受容体タンパク質を発現する。GSK3β阻害剤は、小分子阻害剤または遺伝的阻害剤であり得る。いくつかの実施形態において、GSK3β阻害剤は、小分子、例えば、SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119、または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)である。代替的にあるいは付随的に、GSK3β阻害剤は、siRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)を含む遺伝物質である。
様々な実施形態において、本開示は、腫瘍特異的メモリーT細胞を生成する方法に関し、同方法は、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体をコードする核酸を対象の生体サンプルから単離されたT細胞に形質導入すること(CAR−T)と;CAR−T細胞を腫瘍抗原およびGSK3β阻害剤と接触させることと;メモリー細胞に特異的な第1のマーカーおよび腫瘍抗原に特異的な第2のマーカーを検出して、それにより腫瘍特異的なメモリーT細胞を生成することと、を含む。好ましくは、CAR−T細胞は、IL13またはそのフラグメントまたはそのバリアント、例えばIL13.E13K.R109Kをコードする核酸で形質導入され、ここでCARタンパク質は、IL13受容体またはそのリガンド結合ドメインを含む腫瘍抗原に結合する。様々な実施形態において、活性化は、CAR−T細胞を腫瘍抗原と接触させることを含み、増殖は、活性化CAR−T細胞を小分子GSK3β阻害剤、例えばSB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119、または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、メモリー細胞に特異的なマーカーは、CD45RO+およびCD45RA+から選択され、腫瘍抗原に特異的なマーカーは、腫瘍抗原に結合するタンパク質の発現、例えば、細胞表面発現を含む。様々な実施形態において、腫瘍特異的CAR−T細胞は、IL13R陽性細胞への結合、および場合によりIL13R陽性細胞の破壊を含む機能アッセイによって確認されるように、IL13R陽性腫瘍細胞に特異的である。様々な実施形態において、腫瘍特異的メモリー細胞は、CD8+T細胞である。いくつかの実施形態において、腫瘍抗原で活性化され、かつGSK3β阻害剤の存在下で増殖され、かつメモリーT細胞のためにさらに選択されるCAR−T細胞は、腫瘍抗原を発現する腫瘍細胞に対する特異性およびメモリーの増加を示す。
様々な実施形態において、腫瘍特異的メモリーT細胞を生成する方法が提供され、同方法は、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体をコードする核酸を対象の生体サンプルから単離されたT細胞に形質導入すること(CAR−T)と;CAR−T細胞を腫瘍抗原およびGSK3β阻害剤と接触させることと;メモリー細胞に特異的な第1のマーカーおよび腫瘍抗原に特異的な第2のマーカー、およびメモリーCAR−T細胞ホメオスタシスの第3のマーカーを検出して、それにより腫瘍特異的なメモリーT細胞を生成することと、を含む。一実施形態において、第3のマーカーは、CAR−T細胞におけるIL13R発現、T−bet発現、および/またはPD−1発現であり、T−bet発現の増加および/またはPD−1発現の減少は、CAR−T細胞ホメオスタシスの改善を示す。特に、この方法は、T細胞疲弊の減少、サイトカイン発現の持続、T細胞クローン性の維持、および/またはCAR−Tメモリー発達の促進を含む、改善されたT細胞ホメオスタシスを提供する。
様々な実施形態において、本開示は、前述の形質導入、活性化、増殖、および任意選択の選択ステップを使用してT細胞を操作する方法に関し、CAR−T細胞は、腫瘍抗原で活性化され、GSK3β阻害剤の存在下で増殖され、これらはさらにメモリーT細胞に対して選択され、腫瘍抗原を発現する腫瘍細胞に対する特異性の向上とメモリーの改善を示し、CAR−T細胞のホメオスタシス(homeostashis)の改善も示す。特に、この方法は、T細胞疲弊の減少、サイトカイン発現の持続、T細胞クローン性の維持、および/またはCAR−Tメモリーの発達の促進を含む、改善されたT細胞ホメオスタシスを有する活性化CAR−T細胞の増殖した集団を提供する。
様々な実施形態において、キメラ抗原受容体タンパク質を発現するT細胞(CAR−T細胞)およびGSK3β阻害剤を含む組成物が提供される。好ましくは、T細胞は、インターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する。特に、T細胞は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kを含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する。
様々な実施形態において、キメラ抗原受容体タンパク質を発現するT細胞(CAR−T細胞)を含む組成物が提供され、キメラ抗原受容体タンパク質は腫瘍抗原およびGSK3β阻害剤に結合する。好ましくは、T細胞は、インターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する。特に、T細胞は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kを含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する。
様々な実施形態において、キメラ抗原受容体タンパク質を発現するT細胞(CAR−T細胞)およびGSK3β阻害剤を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、組成物は、CAR−T細胞および小分子GSK3β阻害剤、例えば、SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)を含む。代替的または追加的に、組成物は、CAR−T細胞と、siRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)を含む遺伝物質と、を含む。
様々な実施形態において、キメラ抗原受容体タンパク質(CAR−T細胞)を発現するT細胞およびGSK3β阻害剤を含む製剤が別個の投与のために提供される。好ましくは、GSK3β阻害剤は、小分子GSK3β阻害剤、例えば、SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119、または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)である。代替的または追加的に、製剤は、siRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)を含む遺伝物質を含む。
様々な実施形態において、本開示はキットに関し、同キットは、1つまたは複数のパッケージにて、インターロイキン13またはそのバリアントまたはそのフラグメントをコードするキメラ抗原受容体(CAR)をコードする核酸構築物(IL13CAR−T);GSK3β阻害剤;および前記CAR核酸構築物を用いてT細胞に形質導入するための任意選択の第1の試薬;およびT細胞を活性化するためのさらなる任意選択の第2の試薬、を含む。好ましくは、キットは、キメラ抗原受容体(CAR)をコードする核酸構築物;GSK3β阻害剤;前記CAR核酸構築物を用いてT細胞に形質導入するための第1の試薬;およびT細胞を活性化するための第2の試薬、を含む。この実施形態において、第1の試薬はレトロウイルスベクターである。さらにこの実施形態において、第2の試薬はIL13Rα2−Fcである。特に、キットに含まれる核酸構築物は、インターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードし、キットに含まれるGSK3β阻害剤は、SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)である。代替的または付随的に、キットは、siRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)を含む遺伝子GSK3β阻害剤を含む。
本明細書に記載される構造、材料、組成物、および方法は、本開示の代表的な実施例であることが意図され、本開示の範囲は、実施例の範囲によって限定されないことが理解される。当業者は、本開示が開示された構造、材料、組成物および方法の変形例で実施されてもよく、そのような変形例は本開示の範囲内であると見なされることを認識するであろう。
実施例1
IL13のIL13.E13K.R109KへのCAR−T改変を選択すると、IL13分子のIL13Rα2に対する親和性が増加する
細胞外リガンド結合ドメイン(IL13CAR−T)としてのIL13.E13K.R109Kと細胞内CD28共刺激ドメイン(IL13CAR−T)からなる第2世代のCARが、IL13Rα2発現U251MGヒト神経膠腫細胞株に対する特異的な細胞毒性応答の誘導、および異種移植神経膠腫マウスモデルにおける同所性腫瘍の排除、に成功したことが示されている。さらに、IL13CAR−TのIL13Rα2に対する絶対的特異性は、マイトマイシン−C(5×106細胞/mlあたり50μg/ml、37°Cで20分間、Sigma社、ミズーリ州セントルイス)の存在下で活性化されたIL13CAR−Tで処理されたU251MG神経膠腫細胞(T細胞と腫瘍細胞の異なる比率にて)、或いは濃度の増加を伴うIL13Rα2−Fcキメラ(R&D Systems社、ミネソタ州ミネアポリス)がCARエンリッチメントおよびIL13CAR−Tの増殖を示した実験において示された。IL13CAR−T細胞を、濃度の増加を伴うIL13Rα1−Fcキメラで処理した場合、(精製リガンドが10μg/mlの場合でも)同様の所見は観察されなかった(図1−補足図)。したがって、IL13CAR−Tは、この研究に最適なキメラ抗原受容体(CAR)であった。
IL13のIL13.E13K.R109KへのCAR−T改変を選択すると、IL13分子のIL13Rα2に対する親和性が増加する
細胞外リガンド結合ドメイン(IL13CAR−T)としてのIL13.E13K.R109Kと細胞内CD28共刺激ドメイン(IL13CAR−T)からなる第2世代のCARが、IL13Rα2発現U251MGヒト神経膠腫細胞株に対する特異的な細胞毒性応答の誘導、および異種移植神経膠腫マウスモデルにおける同所性腫瘍の排除、に成功したことが示されている。さらに、IL13CAR−TのIL13Rα2に対する絶対的特異性は、マイトマイシン−C(5×106細胞/mlあたり50μg/ml、37°Cで20分間、Sigma社、ミズーリ州セントルイス)の存在下で活性化されたIL13CAR−Tで処理されたU251MG神経膠腫細胞(T細胞と腫瘍細胞の異なる比率にて)、或いは濃度の増加を伴うIL13Rα2−Fcキメラ(R&D Systems社、ミネソタ州ミネアポリス)がCARエンリッチメントおよびIL13CAR−Tの増殖を示した実験において示された。IL13CAR−T細胞を、濃度の増加を伴うIL13Rα1−Fcキメラで処理した場合、(精製リガンドが10μg/mlの場合でも)同様の所見は観察されなかった(図1−補足図)。したがって、IL13CAR−Tは、この研究に最適なキメラ抗原受容体(CAR)であった。
IL13CARレトロウイルスの産生および初代ヒトT細胞の改変
IL13CARを発現するウイルス粒子を含むレトロウイルス上清の調製、および末梢血単核細胞(PBMC)の単離は、以前に説明されているように実施した(Beaudoin他、J Virol Methods、148:253−259、2008)。PBMCは、OKT3(100ng/ml;Orthoclone(登録商標))およびIL2(Proleukin(登録商標)、3000IU/ml;Prometheus Laboratories、カリフォルニア州サンディエゴ)で48時間活性化させた。
IL13CARを発現するウイルス粒子を含むレトロウイルス上清の調製、および末梢血単核細胞(PBMC)の単離は、以前に説明されているように実施した(Beaudoin他、J Virol Methods、148:253−259、2008)。PBMCは、OKT3(100ng/ml;Orthoclone(登録商標))およびIL2(Proleukin(登録商標)、3000IU/ml;Prometheus Laboratories、カリフォルニア州サンディエゴ)で48時間活性化させた。
濃縮された(Enriched)T細胞は、「スピンフェクション」技術(Kong他、Clin Cancer Res 18:5949−5960、2012)を用いてレトロウイルス上清でトランスフェクトされた。トランスフェクトされたPBMCは、IL13CAR発現について試験し(図2−補足図)、10%FBS(Sigma社、ミズーリ州セントルイス)、抗生物質およびIL2を含むRPMI−1640培地(Invitrogen社、ニューヨーク州グランドアイランド)で培養し、10〜20倍の増殖と>95%の純粋なT細胞が得られた。活性化された非形質導入T細胞を、すべての実験において対照群として使用した。
CAR−T細胞の増殖中に生成されるT細胞の種類を監視する実験は、CD8エンリッチメントを示している。IL13Rα2−FcでのIL13CAR−T細胞の活性化およびGSK3β阻害も、永続的なCD8エンリッチメント表現型を示した。さらに、IFNG遺伝子発現の7.5倍の増加とGSK3β阻害剤で処理された活性化IL13CAR−T細胞によるインターフェロン−ガンマ(IFNγ)分泌の2倍の増加(図3−補足図)は、IL13CAR−T細胞におけるCD8エンリッチメントを確認する。
ドナーの変動を緩和するために、前述の研究の結果はIL13CARの発現に対して制御された。
フローサイトメトリー分析
フローサイトメトリーは、LSRII機器(BD Biosciences社、カリフォルニア州サンノゼ)およびFACSDiva(商標)ソフトウェア(バージョン6.2、BD Biosciences社)を使用して実施した。すべてのフローサイトメトリーデータはFlowJo(商標)ソフトウェア(バージョン10.2、Flow Jo LLC、オレゴン州アッシュランド)を用いて分析した。
フローサイトメトリー分析
フローサイトメトリーは、LSRII機器(BD Biosciences社、カリフォルニア州サンノゼ)およびFACSDiva(商標)ソフトウェア(バージョン6.2、BD Biosciences社)を使用して実施した。すべてのフローサイトメトリーデータはFlowJo(商標)ソフトウェア(バージョン10.2、Flow Jo LLC、オレゴン州アッシュランド)を用いて分析した。
精製されたラット抗ヒトIL13抗体とアロフィコシアニン(APC)コンジュゲート抗ラット抗体を使用して、IL13CAR発現を測定した。T細胞を同定するための特定の実験では、抗ヒトCD3−FITCを使用した。IL13CAR−T細胞のCD4:CD8分析については、抗ヒトCD4−FITCおよび抗ヒトCD8−PE.Cy7をIL13CAR発現が陽性であったCAR−T細胞において使用した。活性化されたIL13CAR−T細胞上のFasL発現およびPD−1発現は、それぞれ抗ヒトFasL−FITC(Thermo−Fisher社)抗ヒトPD1−FITCで染色することにより測定した。抗ヒトCD127−FITC、抗ヒトCD62L−PE、抗ヒトCCR7−FITC、抗ヒトCD45RO−PEおよび抗ヒトCD45RA−PE.y7は、T細胞メモリーマーカーのフローサイトメトリー測定に使用した。それぞれのアイソタイプ対照または抗体対照(該当する場合)を使用して、各実験の陽性ゲートを設定した(draw)。すべての抗体は、BD Biosciences社またはeBisociences社から入手した。β−カテニン局在の核内染色については、FoxP3染色バッファー(eBioscience−Affymetrix、カリフォルニア州サンディエゴ)を使用して、かつ抗ヒトβ−カテニンウサギmAb(Cell Signaling Technologies、マサチューセッツ州ダンバーズ)およびAlexa Fluor(登録商標)(AF)488または647(Cell Signaling Technologies)とコンジュゲートした抗ウサギIgGで染色して、CAR−T細胞の核透過化を行った。FoxP3染色バッファーで核透過処理を行わなかった細胞では、β−カテニンの発現における変化は認められなかった。
カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル(CFSE;0.5μg/ml;Invitrogen)を使用して、フローサイトメトリーでT細胞の増殖を測定した。
T細胞生存アッセイ
形質導入されていない細胞またはIL13CAR−T細胞(1x106)は、GSK3β阻害剤(SB216763、20μg、Sigma社、ミズーリ州セントルイス)をともに、或いはGSK3β阻害剤を含まないで、若しくは培養培地中にIL2を加えて、24ウェルプレートで特定の濃度のIL13Rα2−Fcキメラで活性化した。IL13CAR−T細胞生存アッセイは、上記のように14日間実施した。GSK3β阻害後のIL13CAR−T細胞の長期間の生存は、ライブデッドゲーティング(live−dead gating)を使用したフローサイトメトリーによって測定した(セングプタ(Sengupta)他、Immunobiology 210:647−659、2005)。活性化T細胞死(ATCD)は、活性化IL13CAR−T細胞でのFasL発現(FITC;サーモフィッシャー)のフローサイトメトリー測定によって測定した。
T細胞生存アッセイ
形質導入されていない細胞またはIL13CAR−T細胞(1x106)は、GSK3β阻害剤(SB216763、20μg、Sigma社、ミズーリ州セントルイス)をともに、或いはGSK3β阻害剤を含まないで、若しくは培養培地中にIL2を加えて、24ウェルプレートで特定の濃度のIL13Rα2−Fcキメラで活性化した。IL13CAR−T細胞生存アッセイは、上記のように14日間実施した。GSK3β阻害後のIL13CAR−T細胞の長期間の生存は、ライブデッドゲーティング(live−dead gating)を使用したフローサイトメトリーによって測定した(セングプタ(Sengupta)他、Immunobiology 210:647−659、2005)。活性化T細胞死(ATCD)は、活性化IL13CAR−T細胞でのFasL発現(FITC;サーモフィッシャー)のフローサイトメトリー測定によって測定した。
定量的PCR(qPCR)
製造業者(Qiagen)のプロトコルに従って、RNeasy(登録商標)Mini Kitを使用して、IL13CAR−T細胞から全RNAを単離した。cDNAは、iScript cDNA合成キット(Biorad、カリフォルニア州カールズバッド)を使用してRNAから調製した。qPCRは、SyBR(登録商標)Green PCRマスターミックス(Applied Biosystems)を使用して、IFNG、TBX21およびPDCD1遺伝子をターゲットに実施した。標的遺伝子のCT値はハウスキーピング遺伝子GAPDHのCT値に正規化され、相対的な遺伝子発現はΔΔCT法を使用して計算した。
製造業者(Qiagen)のプロトコルに従って、RNeasy(登録商標)Mini Kitを使用して、IL13CAR−T細胞から全RNAを単離した。cDNAは、iScript cDNA合成キット(Biorad、カリフォルニア州カールズバッド)を使用してRNAから調製した。qPCRは、SyBR(登録商標)Green PCRマスターミックス(Applied Biosystems)を使用して、IFNG、TBX21およびPDCD1遺伝子をターゲットに実施した。標的遺伝子のCT値はハウスキーピング遺伝子GAPDHのCT値に正規化され、相対的な遺伝子発現はΔΔCT法を使用して計算した。
ELISA
IL13CAR−Tから培養上清を採取し、IL13Rα2−Fc±SB216763で72時間活性化し、製造業者のプロトコルに従って、Ready−Set−Go ELISA検出キット(eBiocience、米国)を使用したELISAによってインターフェロン−ガンマ(IFNγ)レベルを検出した。OD値は(Biotek、USA)を使用して測定した。活性化されていないIL13CAR−T細胞またはSB216763のみで処理されたものを実験対照として使用した。IL13CAR−T細胞によって分泌されたIFNγの濃度は、測定されたOD値を使用して、それぞれの実験設定から作成された標準曲線から外挿した。
IL13CAR−Tから培養上清を採取し、IL13Rα2−Fc±SB216763で72時間活性化し、製造業者のプロトコルに従って、Ready−Set−Go ELISA検出キット(eBiocience、米国)を使用したELISAによってインターフェロン−ガンマ(IFNγ)レベルを検出した。OD値は(Biotek、USA)を使用して測定した。活性化されていないIL13CAR−T細胞またはSB216763のみで処理されたものを実験対照として使用した。IL13CAR−T細胞によって分泌されたIFNγの濃度は、測定されたOD値を使用して、それぞれの実験設定から作成された標準曲線から外挿した。
In vivo免疫再チャレンジ試験
6週齢の雄の無胸腺ヌードマウスをJAXマウス(メイン州バーハーバー)から購入した。すべてのマウスは、ロジャーウィリアムズメディカルセンター(Roger Williams Medical Center)の特定の無菌施設に収容されており、実験は連邦政府および施設のガイドラインに従って、ロジャーウィリアムズメディカルセンターの施設内動物管理および使用委員会の承認を得て実施した。
6週齢の雄の無胸腺ヌードマウスをJAXマウス(メイン州バーハーバー)から購入した。すべてのマウスは、ロジャーウィリアムズメディカルセンター(Roger Williams Medical Center)の特定の無菌施設に収容されており、実験は連邦政府および施設のガイドラインに従って、ロジャーウィリアムズメディカルセンターの施設内動物管理および使用委員会の承認を得て実施した。
45匹の動物を無作為化し、そのうちの40匹に腫瘍細胞を移植し、一方、5匹を実験対照として選択した。各マウスの左後肢の上側腹部に、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)200μlに懸濁した2×106のIL13Rα2発現U251MGヒト神経膠腫細胞を皮下注射した。腫瘍移植の7日後、腫瘍担持マウスを、50μlのPBS中の5×106のIL13CAR−T細胞(40%の改変;n=10)、または、IL13Rα2−Fcキメラで活性化された5×106のIL13CAR−T(n=10)、または、IL13Rα2−Fcキメラ+SB216763で活性化された5×106のIL13CAR−T(n=10)、または5×106の非形質導入T細胞(n=5)、またはPBSのみ(n=5)、で処理するために5つのグループに無作為化した。動物は腫瘍成長、全身毒性および神経学的毒性について観察し、死亡を記録した。
CAR−T処理の60日後、生存動物に、元の腫瘍移植とは反対側の側腹部に、200μlのPBS中に2×106のU251MGヒト神経膠腫細胞の皮下注射で再チャレンジした。100日目に実験を終了し、生存している動物を安楽死させた。腫瘍浸潤性IL13CAR−TおよびT細胞メモリーマーカーのフローサイトメトリー分析のために、腫瘍組織、流入リンパ節(draining lymph nodes)(鼠径部)および脾臓を各動物から採取した。
実験の結果は以下の事項を示している。
GSK3β阻害は、IL2の補充が存在しない状態にて活性化CAR−T細胞を活性化T細胞死(ATCD)から防御する
IL13CAR−T細胞(32%CAR+)は、可溶性IL13Rα2−Fc(1μg/ml)およびGSK3β阻害剤(SB216763;20μM)の存在下で、10%FBSおよび抗生物質を添加したRPMI1640培地で、IL2を添加して、或いは添加せずに、14日間培養した。細胞を1、4、7、10および14日目に採取し、CD3およびIL13CARの発現のために染色し、細胞の生存率をフローサイトメトリーで測定し、前述のように生存率を分析した。SB216763が存在しない場合、IL13Rα2−Fc処理は生存率の着実な低下を示し、活性化T細胞死を示していた(図1A、上部パネル、白四角(open squares))。生存率の低下は、培養条件においてIL2の添加(図1A;上部パネル;黒四角(close squares))またはIL2を添加しない場合のSB216763を用いたGSK3βの阻害(図1A;下部パネル;白四角)によって救出された(rescued)。培養条件においてSB216763の存在下でIL2を追加しても、IL13CAR−T細胞の生存率に相加効果または相乗効果を与えることはなかった(図1A、下部パネル、黒四角)。これは、活性化CAR−T細胞におけるGSK3βの阻害が生存シグナル伝達を促進することを示し、GSK3β阻害が活性化CAR−T細胞をIL2補充の非存在下でATCDから保護する可能性があることを示唆していた。この現象を確認するために、14日目にIL13Rα2−Fc処理CAR−T細胞中でFasL発現を測定した。観察により、SB216763処理は、阻害剤で処理されなかったもの(55%)と比較して、活性化CAR−T細胞(25.3%)でのFasL発現を55%減少させたと結論付けられ、GSK3β阻害が実際にATCDから活性化CAR−T細胞を保護したことを確認した(図1B)。この研究における他のすべての実験は、培養条件においてIL2を添加せずに行われた。
GSK3β阻害は、IL2の補充が存在しない状態にて活性化CAR−T細胞を活性化T細胞死(ATCD)から防御する
IL13CAR−T細胞(32%CAR+)は、可溶性IL13Rα2−Fc(1μg/ml)およびGSK3β阻害剤(SB216763;20μM)の存在下で、10%FBSおよび抗生物質を添加したRPMI1640培地で、IL2を添加して、或いは添加せずに、14日間培養した。細胞を1、4、7、10および14日目に採取し、CD3およびIL13CARの発現のために染色し、細胞の生存率をフローサイトメトリーで測定し、前述のように生存率を分析した。SB216763が存在しない場合、IL13Rα2−Fc処理は生存率の着実な低下を示し、活性化T細胞死を示していた(図1A、上部パネル、白四角(open squares))。生存率の低下は、培養条件においてIL2の添加(図1A;上部パネル;黒四角(close squares))またはIL2を添加しない場合のSB216763を用いたGSK3βの阻害(図1A;下部パネル;白四角)によって救出された(rescued)。培養条件においてSB216763の存在下でIL2を追加しても、IL13CAR−T細胞の生存率に相加効果または相乗効果を与えることはなかった(図1A、下部パネル、黒四角)。これは、活性化CAR−T細胞におけるGSK3βの阻害が生存シグナル伝達を促進することを示し、GSK3β阻害が活性化CAR−T細胞をIL2補充の非存在下でATCDから保護する可能性があることを示唆していた。この現象を確認するために、14日目にIL13Rα2−Fc処理CAR−T細胞中でFasL発現を測定した。観察により、SB216763処理は、阻害剤で処理されなかったもの(55%)と比較して、活性化CAR−T細胞(25.3%)でのFasL発現を55%減少させたと結論付けられ、GSK3β阻害が実際にATCDから活性化CAR−T細胞を保護したことを確認した(図1B)。この研究における他のすべての実験は、培養条件においてIL2を添加せずに行われた。
メカニズムをさらに理解するために、CAR−T細胞をCFSEで染色し、無刺激の状態で、或いはIL13Rα2−Fc±SB216763で72時間処理した状態で、培養した。CFSEは蛍光細胞染色色素であり、各細胞分裂後の娘細胞内のCFSE蛍光が徐々に半減するため、インビトロおよびインビボのいずれでもリンパ球の増殖を監視するために使用することができる(Lyons他、Journal of immunological methods、171:131−137、1994)。GSK3β阻害は、IL13Rα2−Fc活性化CAR−T細胞のみの増殖を引き起こしたが、無刺激のCAR−T細胞にはそのようなことはなかった(図1C)。これらの結果は、GSK3β阻害により、IL13Rα2活性化IL13CAR−T細胞の増殖が増大したことを示すものであるが、これは、増殖の増加と活性化CAR−T細胞の生存の向上の両方の機能性の結果であった。
T−betは活性化CAR−T細胞におけるPD−1発現の減少を介在した
GSK3阻害は、PD−1を介したT細胞の疲弊を軽減し、これは、T−bet発現に依存し(Taylor他、Immunity、44:274−286、2016)、そしてGSK3β経路は活性化T細胞におけるT−bet発現を直接調節する(Verma他、J Immunol 197:108−118、2016)。活性化T細胞におけるGSK3β阻害の生存上の有意な利点により、本発明者らはすぐに、IL13Rα2−活性化IL13CAR−T細胞におけるT−betおよびPD−1発現を研究した。活性化IL13CAR−T細胞のFACS分析は、T−bet発現の有意なアップレギュレーション(図2A、左パネル)を示した一方で、SB21673で治療されなかったIL13CAR−T細胞(43%;図2A、右パネル)と比較したとき、GSK3β阻害時に、PD−1発現(17.3%)の60%の低減であった。qPCR分析は、GSK3β阻害時にTBX21遺伝子の90倍の増加(図2B、左パネル)およびPDCD1遺伝子の5倍の減少(図2B、右パネル)を示し、GSK3β阻害が、活性化CAR−T細胞において、T−betを介したPD−1発現の減少を誘導したことが確認できた。
GSK3阻害は、PD−1を介したT細胞の疲弊を軽減し、これは、T−bet発現に依存し(Taylor他、Immunity、44:274−286、2016)、そしてGSK3β経路は活性化T細胞におけるT−bet発現を直接調節する(Verma他、J Immunol 197:108−118、2016)。活性化T細胞におけるGSK3β阻害の生存上の有意な利点により、本発明者らはすぐに、IL13Rα2−活性化IL13CAR−T細胞におけるT−betおよびPD−1発現を研究した。活性化IL13CAR−T細胞のFACS分析は、T−bet発現の有意なアップレギュレーション(図2A、左パネル)を示した一方で、SB21673で治療されなかったIL13CAR−T細胞(43%;図2A、右パネル)と比較したとき、GSK3β阻害時に、PD−1発現(17.3%)の60%の低減であった。qPCR分析は、GSK3β阻害時にTBX21遺伝子の90倍の増加(図2B、左パネル)およびPDCD1遺伝子の5倍の減少(図2B、右パネル)を示し、GSK3β阻害が、活性化CAR−T細胞において、T−betを介したPD−1発現の減少を誘導したことが確認できた。
GSK3β阻害は、活性化CAR−T細胞の核におけるβ−カテニンの蓄積を増加させた
実験は、活性化T細胞増殖に対するGSK3β阻害の分子メカニズムを理解するために行われた。GSK3β阻害は、β−カテニン分解を保護することによりWntシグナル伝達経路を活性化する(Lyons他、Journal of immunological methods、171:131−137、1994)。T細胞生存のマウスモデルでは、GSK3β阻害が核β−カテニン発現の増加により活性化T細胞生存を増加させることが以前に示されている(Sengupta他、J Immunol、178:6083−6091、2007)。IL13Rα2−Fc活性化CAR−T細胞をSB216763の存在下または非存在下で36〜48時間処理し、フローサイトメトリーによりβ−カテニンの核内蓄積を測定した。GSK3β阻害により、活性化CAR−T細胞の核におけるβ−カテニン(MFI 1618)の蓄積がSB216762で処理されなかったものより66%増加した。(MFI 974;図3)。
実験は、活性化T細胞増殖に対するGSK3β阻害の分子メカニズムを理解するために行われた。GSK3β阻害は、β−カテニン分解を保護することによりWntシグナル伝達経路を活性化する(Lyons他、Journal of immunological methods、171:131−137、1994)。T細胞生存のマウスモデルでは、GSK3β阻害が核β−カテニン発現の増加により活性化T細胞生存を増加させることが以前に示されている(Sengupta他、J Immunol、178:6083−6091、2007)。IL13Rα2−Fc活性化CAR−T細胞をSB216763の存在下または非存在下で36〜48時間処理し、フローサイトメトリーによりβ−カテニンの核内蓄積を測定した。GSK3β阻害により、活性化CAR−T細胞の核におけるβ−カテニン(MFI 1618)の蓄積がSB216762で処理されなかったものより66%増加した。(MFI 974;図3)。
GSK3β阻害と活性化CAR−T細胞メモリー生成
最近の研究では、CD8+メモリーT細胞の発達におけるβ−カテニンの核内蓄積が果たす役割が示唆されている(Gattinoni他、Nat Med、15:808−813、2009;Taylor他、Immunity、44:274−286、2016;Verma他、J Immunol、197:108−118、2016)。IL13Rα2−Fc活性化IL13CAR−T集団におけるメモリー生成(memory generation)に対するSB216763処理の効果を試験するために実験を行った。IL13CAR−T細胞は、SB216763の存在下または非存在下で、IL13Rα2−Fcの濃度を増加させながら(0〜1μg/ml)で7日間活性化させた。T細胞メモリーマーカーの細胞表面発現をフローサイトメトリーで測定した。メモリー生成はCD8+T細胞の機能的派生物(derivative)として監視されたため、CD8+メモリーCAR−T細胞のホメオスタシスのマーカーとしてIL7R(CD127)発現の細胞内発現をさらに測定する実験を実施した。フローサイトメトリーデータの分析では、SB216763処理時に活性化IL13CAR−T細胞で、CD127が10倍(図4A、図4B、上部パネル)、CD45ROが4倍(図4A、図4B、3番目のパネル)の増加を示していた。この観察は、GSK3β阻害が核内β−カテニン蓄積を誘導し、活性化CAR−T細胞における抗原特異的CD8+エフェクターTメモリー表現型のホメオスタティックな増殖を促進することを示唆するものであった。しかしながら、CCR7(図4A、図4B、2番目のパネル)とCD45RA(図4A、図4B、4番目のパネル)では差はなく、CD62L発現の完全な阻害(図4A、図4B、下のパネル)は、GSK3βで阻害された抗原特異的CAR−T細胞における細胞セントラルメモリー表現型の発達を示唆するものであった。
最近の研究では、CD8+メモリーT細胞の発達におけるβ−カテニンの核内蓄積が果たす役割が示唆されている(Gattinoni他、Nat Med、15:808−813、2009;Taylor他、Immunity、44:274−286、2016;Verma他、J Immunol、197:108−118、2016)。IL13Rα2−Fc活性化IL13CAR−T集団におけるメモリー生成(memory generation)に対するSB216763処理の効果を試験するために実験を行った。IL13CAR−T細胞は、SB216763の存在下または非存在下で、IL13Rα2−Fcの濃度を増加させながら(0〜1μg/ml)で7日間活性化させた。T細胞メモリーマーカーの細胞表面発現をフローサイトメトリーで測定した。メモリー生成はCD8+T細胞の機能的派生物(derivative)として監視されたため、CD8+メモリーCAR−T細胞のホメオスタシスのマーカーとしてIL7R(CD127)発現の細胞内発現をさらに測定する実験を実施した。フローサイトメトリーデータの分析では、SB216763処理時に活性化IL13CAR−T細胞で、CD127が10倍(図4A、図4B、上部パネル)、CD45ROが4倍(図4A、図4B、3番目のパネル)の増加を示していた。この観察は、GSK3β阻害が核内β−カテニン蓄積を誘導し、活性化CAR−T細胞における抗原特異的CD8+エフェクターTメモリー表現型のホメオスタティックな増殖を促進することを示唆するものであった。しかしながら、CCR7(図4A、図4B、2番目のパネル)とCD45RA(図4A、図4B、4番目のパネル)では差はなく、CD62L発現の完全な阻害(図4A、図4B、下のパネル)は、GSK3βで阻害された抗原特異的CAR−T細胞における細胞セントラルメモリー表現型の発達を示唆するものであった。
ヒト神経膠腫異種移植腫瘍−再チャレンジ実験およびSB216763で処理した活性化CAR−T細胞のインビボメモリー発達
異種移植神経膠腫マウスモデルの活性化CAR−T細胞におけるGSK3β阻害の免疫再チャレンジ効果を試験するための研究を実施した。実験は材料および方法に記載されているように設定した。PBSで処理された腫瘍担持動物[生存中央値(MS)32日]または形質導入されていないT細胞で処理された腫瘍担持動物(MS42日)では腫瘍の成長が速く、承認されたIACUCプロトコルに従って動物を安楽死させなければならなかった。CAR−T細胞で処理された動物のグループでは、その活性化状態に関係なく、腫瘍の退縮は急速で、かつ無増悪生存期間は延長された。これは、以前に観察されたものと同様のパターンを反映していた(Kong他、Clin Cancer Res、18:5949−5960、2012)。移植後60日を超えて生存した腫瘍担持動物は、元の移植とは反対側腹部にU251MG腫瘍細胞を単回注入することで再チャレンジした。腫瘍の成長と動物の生存を監視し、承認されたIACUCプロトコルに従って、移植後100日目に実験を終了した。各実験群のMSおよび全生存率を測定した。実験終了時点において、非活性化IL13CAR−Tで処理された腫瘍担持動物グループは100%再発したが、IL13Rα2−Fc活性化CAR−Tで処理されたグループは67%の再発であった。IL13Rα2−Fc+SB216763で活性化されたIL13CAR−Tで処理されたグループの生存動物は全て、腫瘍を有していなかった(0%の再発)。IL13Rα2−Fc+SB216763を用いてエクスビボで活性化されたIL13CAR−Tで処理した動物グループでは、MSは76.5日であった。このグループでは10匹中4匹が生存しており、生存しているすべての動物には腫瘍がなかった(4匹中0匹)。
異種移植神経膠腫マウスモデルの活性化CAR−T細胞におけるGSK3β阻害の免疫再チャレンジ効果を試験するための研究を実施した。実験は材料および方法に記載されているように設定した。PBSで処理された腫瘍担持動物[生存中央値(MS)32日]または形質導入されていないT細胞で処理された腫瘍担持動物(MS42日)では腫瘍の成長が速く、承認されたIACUCプロトコルに従って動物を安楽死させなければならなかった。CAR−T細胞で処理された動物のグループでは、その活性化状態に関係なく、腫瘍の退縮は急速で、かつ無増悪生存期間は延長された。これは、以前に観察されたものと同様のパターンを反映していた(Kong他、Clin Cancer Res、18:5949−5960、2012)。移植後60日を超えて生存した腫瘍担持動物は、元の移植とは反対側腹部にU251MG腫瘍細胞を単回注入することで再チャレンジした。腫瘍の成長と動物の生存を監視し、承認されたIACUCプロトコルに従って、移植後100日目に実験を終了した。各実験群のMSおよび全生存率を測定した。実験終了時点において、非活性化IL13CAR−Tで処理された腫瘍担持動物グループは100%再発したが、IL13Rα2−Fc活性化CAR−Tで処理されたグループは67%の再発であった。IL13Rα2−Fc+SB216763で活性化されたIL13CAR−Tで処理されたグループの生存動物は全て、腫瘍を有していなかった(0%の再発)。IL13Rα2−Fc+SB216763を用いてエクスビボで活性化されたIL13CAR−Tで処理した動物グループでは、MSは76.5日であった。このグループでは10匹中4匹が生存しており、生存しているすべての動物には腫瘍がなかった(4匹中0匹)。
実験動物におけるCAR−T細胞のメモリー生成
上記から生存している各動物の腫瘍(利用可能な場合)、流入鼠径部リンパ節(draining inguinal lymph nodes)、および脾臓を採取した。各臓器から調製した単一細胞懸濁液を調製し、CAR−T細胞の組織分布と免疫メモリーマーカーの発現を試験した。細胞をヒトCD3およびIL13CAR(IL13CAR−T;図5A)について染色した。フローサイトメトリー分析では、58%の流入リンパ節の細胞(流入LN)、65%の脾臓細胞、48%の腫瘍浸潤リンパ球(TIL)が、非活性化IL13CAR−T処理群(白丸)でIL13CAR−T+であることが示された。IL13Rα2−Fcのみでエクスビボで活性化されたIL13CAR−Tで処理された動物のグループ(黒丸)では、流入LNとTILの75%、脾臓細胞の65%がIL13CAR−T+であった。一方、IL13Rα2−Fc+SB216763を用いてエクスビボで活性化されたIL13CAR−Tで処理された動物(灰色の円)のIL13CAR−Tでは、流入LNの30%と脾臓細胞の70%のみが陽性に染色されていた。このグループのすべての動物には腫瘍がないため、TILは研究できなかった。IL13CAR−T細胞上のCD45RO+CD127+のフローサイトメトリー分析(図5B)は、非活性化IL13CAR−Tで処理されたグループおよびIL13Rα2−Fcのみを用いてエクスビボで活性化されたIL13CAR−Tで処理されたグループでは、抗原特異的CD8+エフェクターTメモリーの頻度が非常に低い(<1〜2%)ことを示していた。比較的高い比率の抗原特異的CD8+エフェクターTメモリー発現が、IL13Rα2−Fc+SB216763を用いてエクスビボで活性化されたIL13CAR−Tで処理された動物の流入LN(10%)および脾臓(14%)から採取されたIL13CAR−T細胞で観察された。ちなみに、末梢リンパ組織でメモリーマーカーの発現がより高い処理群は、実験の終了時に動物が腫瘍を含まなかった処理群でもあった。
上記から生存している各動物の腫瘍(利用可能な場合)、流入鼠径部リンパ節(draining inguinal lymph nodes)、および脾臓を採取した。各臓器から調製した単一細胞懸濁液を調製し、CAR−T細胞の組織分布と免疫メモリーマーカーの発現を試験した。細胞をヒトCD3およびIL13CAR(IL13CAR−T;図5A)について染色した。フローサイトメトリー分析では、58%の流入リンパ節の細胞(流入LN)、65%の脾臓細胞、48%の腫瘍浸潤リンパ球(TIL)が、非活性化IL13CAR−T処理群(白丸)でIL13CAR−T+であることが示された。IL13Rα2−Fcのみでエクスビボで活性化されたIL13CAR−Tで処理された動物のグループ(黒丸)では、流入LNとTILの75%、脾臓細胞の65%がIL13CAR−T+であった。一方、IL13Rα2−Fc+SB216763を用いてエクスビボで活性化されたIL13CAR−Tで処理された動物(灰色の円)のIL13CAR−Tでは、流入LNの30%と脾臓細胞の70%のみが陽性に染色されていた。このグループのすべての動物には腫瘍がないため、TILは研究できなかった。IL13CAR−T細胞上のCD45RO+CD127+のフローサイトメトリー分析(図5B)は、非活性化IL13CAR−Tで処理されたグループおよびIL13Rα2−Fcのみを用いてエクスビボで活性化されたIL13CAR−Tで処理されたグループでは、抗原特異的CD8+エフェクターTメモリーの頻度が非常に低い(<1〜2%)ことを示していた。比較的高い比率の抗原特異的CD8+エフェクターTメモリー発現が、IL13Rα2−Fc+SB216763を用いてエクスビボで活性化されたIL13CAR−Tで処理された動物の流入LN(10%)および脾臓(14%)から採取されたIL13CAR−T細胞で観察された。ちなみに、末梢リンパ組織でメモリーマーカーの発現がより高い処理群は、実験の終了時に動物が腫瘍を含まなかった処理群でもあった。
他の実施形態:前述の実施例は、前述の実施例で使用されたものを本明細書の他の場所に記載された一般的または具体的に記載された反応物質および/または操作条件に置き換えることにより同様の成功で繰り返すことができる。
例示された実施形態は、IL13CAR構築物(例えば、IL13.E13K.R109K)を含むリンパ球、例えば、T細胞を利用する。構築物をコードする核酸でT細胞を形質導入するための方法を含む、そのような構築物の核酸および/またはアミノ酸配列に関する詳細な開示は、Sengupta他の米国特許第9650428号明細書および国際出願公開第WO2016/089916号に提供されており、図面、配列表、および様々な構築物の相対的なマッピングを示す表を含む、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる。
例示された実施形態は、T細胞、特に、キメラ抗原受容体構築物(例えば、IL13.E13K.R109K)を含むCAR−T細胞の機能を改善するためにGSK3β阻害剤を利用する。本開示は、この目的に対して、SB216763(3−(2,4−ジクロロフェニル)−4−(1−メチル−1H−インドール−3イル)−1H−ピロール−2,5−ジオン)(Santa Cruz Biotech、米国カリフォルニア州サンタクルーズ)の適用に限定されるものではない。他の適切なGSK−3阻害剤には、限定されるものではないが、リチウム、GF109203X(2−[1−(3−ジメチルアミノプロピル)−1H−インドール−3−イル]−3−(1H−インドール−3−イル)マレイミド)、1−アザケンパウロン(Sigma−Aldrich、アメリカ合衆国ミズーリ州セントルイス);6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)(Sigma−Aldrich、アメリカ合衆国ミズーリ州セントルイス);RO318220(2−[1−(3−(アミジノチオ)プロピル)−1H−インドール−3−イル]−3−(1−メチルインドール−3−イル)マレイミドメタンスルホネート);TWS−119((3−[6−(3−アミノフェニル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−イルオキシ]フェノール;CAS#601514−19−6);(Sigma−Aldrich、アメリカ合衆国ミズーリ州セントルイス);SB415286(3−[(3−クロロ−4−ヒドロキシフェニル)アミノ]−4−(2−ニトロフェニル)−1H−ピロール−2,5−ジオン)(GlaxoSmithKline、英国ロンドン);4−ベンジル−2−メチル−1,2,4−チアジアゾリジン−3,5−ジオン(“TDZD−8”)(Axxora、アメリカ合衆国カリフォルニア州サンディエゴ);2−チオ(3−ヨードベンジル−5−(1−ピリジル)−[1,3,4]−オキサジアゾール(“TIBPO”)(Axxora、アメリカ合衆国カリフォルニア州サンディエゴ);2,4−ジベンジル−5−オキソチアジアゾリジン−3−チオン(“OTDZT”)(Axxora、アメリカ合衆国カリフォルニア州サンディエゴ);および4−(2−アミノ−4−オキソ−2−イミダゾリン−5−イリデン)−2−ブロモ−4,5,6,7−テトラヒドロピロロ[2,3−c]アゼピン−8−オン(10Z−ヒメニアルジシン)(Axxora、アメリカ合衆国カリフォルニア州サンディエゴ)、が含まれる。さらに、GSK−3βに指向する多くのモノクローナル抗体がAxxoraから市販されている。GSK−3βの他の薬理学的阻害剤は、Meijer他の「グリコゲン合成酵素キナーゼ3の薬理学的阻害剤」、Trends Pharmacol Sci.、2004年9月、25(9)、471−80(PUBMED#15559249)に記載されており、これは参照によりその全体が組み込まれる。また、Li他の米国特許出願公開第2007−0196514号明細書も参照されたい。
例示された実施形態において、以前の成功した前臨床研究(Kong他、Clin Cancer Res、18:5949−5960、2012)のために、IL13CAR−Tが候補CARとして使用されてきたが、開示は例示された実施形態に限定されるものではない。開示された方法は、腫瘍抗原へのCAR−T細胞のアクセスが制限されることにより免疫反応がより弱い固形腫瘍のCAR−T療法に適用できる。そのような腫瘍の代表的な例には、例えば、多形神経膠芽腫(GBM)、未分化星状細胞腫および小児神経膠腫が含まれる。
上記で例示した実施形態において、多形神経膠芽腫(GBM)のような超可変腫瘍に対するCAR−Tの活性を調査した。GBMは、固形腫瘍による抗原提示を研究するための優れたモデルである。本開示の実施例のセクションは、CAR−T細胞の活性化、増殖および成功したメモリー生成を調べる。GBMのような超可変腫瘍では、抗原プロファイルの予測不能性が、CAR−T療法を含む免疫療法レジメンの成功または失敗に重要な役割を果たし、それは、複数の腫瘍抗原を標的にすることで対処することができる。代替的および/または追加的に、例えば、特定の患者または患者クラスにおける発現レベルに基づいて、個別化療法のために選択される抗原を含む、複数のGBMネオ抗原を使用することができる。
科学文献では一般に、GBMのような固形腫瘍の抗原に対するCAR−T細胞の弱い曝露を指摘しているが、GSK3β阻害剤の使用により、強力なCAR−T細胞の増殖がもたらされており、これは、対照と比較して有意であり、腫瘍治療の文脈においても驚くべきことであった。結果は、SB216763で処理された活性化CAR−Tの増殖の増加を示し、それは、GSK3β阻害剤の存在下で活性化されなかったものよりも長く生存した。IL2を培養培地に添加しても、GSK3β阻害CAR−T細胞の生存率には影響を与えることはなかった。SB216763で処理された活性化IL13CAR−T細胞の生存率の増加は、これらのT細胞におけるFasLの発現低下により影響を受けており、GSK3βの阻害が活性化CAR−T細胞を活性化誘導T細胞死(ATCD)から保護することを確認した。しかしながら、ATCDからの保護は、これらのT細胞に対するGSK3β阻害の唯一の機能的な結果ではなかった。これらの細胞のCFSEプロファイルで観察されるように、SB216763による処理は、活性化CAR−T細胞の増殖の増加をもたらした。それでも、T細胞増殖に対するGSK3β阻害の同様の効果は非活性化CAR−T細胞では観察されず、活性化または抗原特異的CAR−T細胞に対するGSK3β阻害のアジュバント様効果が示された。
さらに、活性化CAR−T細胞の疲弊に関する研究では、T−bet遺伝子(TBX21)が90倍に増加し、PD−1遺伝子(PDCD1)発現が5倍減少し、活性化IL13CAR−T細胞のSB216763処理によるタンパク質発現に対応する変化が見られた。これらの観察は、GBMのような固形腫瘍に対する免疫療法の設計において強い意義を有するものである。治療用CAR−T細胞を含む、腫瘍浸潤性T細胞上のPD−1の高レベルは、増殖、細胞溶解およびサイトカイン産生能力の低下に起因するエフェクター機能の低下を伴う疲弊したT細胞のサブセットをマークする。PD−1経路の遮断により、主にPD−1またはPD−L1(標的細胞で発現)を標的とするモノクローナル抗体により、これらのT細胞が疲弊するのを防ぐ。PD−1/PD−L1ターゲティングならびに他の免疫療法および放射線療法との併用免疫療法がGBMの治療について試験されている複数の臨床試験が進行中である(Maxwell他、Curr Treat Options Oncol、18:51、2017;Luksik他、Neurotherapeutics、doi:10.1007/s13311−017−0513−3、2017年3月3日)。したがって、本開示の実施形態は、例えば、GSK3βを阻害することによってT細胞におけるPD−1発現を減少させることを含む、GBMの成功したCAR−T細胞免疫療法を提供する。そのような戦略は、T細胞疲弊、特に活性化および/または増殖したCAR−T細胞の疲弊を低減する効果的な方法を提供するかもしれない。
本明細書に記載の実施形態は、CD45ROおよびT細胞ホメオスタシスのマーカーIL7RまたはCD127(CD62L−CD45RO+CD127+)の高発現体でもあった非常に明確なCD62L陰性CAR−T細胞集団を報告する。活性化CAR−T細胞でのGSK3β阻害時のCD45RA発現に関して変化は観察されなかったが、これは、ヒトCD8+T細胞でのCD45RA発現が元の抗原刺激に依存しているという事実と一致した。これらの細胞はCCR7の発現が低く、明確なCD8+Tエフェクターメモリー(TEM)の発生を明確に示すものであった。異種移植動物実験では、U251MGヒト神経膠腫細胞を担持するヌードマウスを、i)インビトロでのIL13Rα2−Fcで活性化されたIL13CAR−T細胞、ii)インビトロでのIL13Rα2−Fc+SB216763で活性化されたIL13CAR−T細胞、iii)非活性化IL13CAR−T細胞、またはiv)非形質導入T細胞、で処理した。60日を超えて生存した動物については腫瘍細胞で再チャレンジした。(インビトロ活性化の有無にかかわらず)IL13CAR−T細胞を注入した動物は、未処理T細胞または未形質導入T細胞のいずれよりも累積的に良好に生存した(生存の中央値42日対76.5日)。しかしながら最も重要なことに、GSK3βで阻害された活性化CAR−T細胞(IL13Rα2−Fc+SB216763、インビトロ)で処理された腫瘍担持グループで生存しているすべての動物は、実験の終了時(100日)に腫瘍がなかった。他の生存グループは、100%の再発(非活性化CAR−T)または67%の再発(2/3;インビトロのIL13Rα2−Fcのみ)であった。インビボでのCAR−T細胞メモリー生成の分析は、GSK3β阻害剤で処理しなかった非活性化または活性化CAR−T(IL13Rα2−Fcのみ)を注入した腫瘍担持動物の流入リンパ節および脾臓においてCAR−T細胞の蓄積の増加を示した。予想と一致して、これらのCAR−TはCD45RO+IL7R+表現型の低発現因子(low expressers)であった。興味深いことに、腫瘍浸潤IL13CAR−T細胞の増加は、非活性化CAR−T細胞を投与されたグループよりも、活性化CAR−Ts(IL13Rα2−Fcのみ)で処理されたグループで観察された。これは、活性化CAR−T細胞の腫瘍除去効率の向上を示唆しており、非活性化CAR−T細胞注入グループの100%と比較した67%の再発率にも反映されていた。ただし、GSK3β阻害CAR−T細胞(IL13Rα2−Fc+SB216763)で処理された腫瘍担持動物のリンパ節では、低レベルのIL13CAR−T細胞が観察されたが、脾臓には非常に多く存在していた。これらの動物はすべて腫瘍を含まないため、腫瘍浸潤リンパ球は観察されなかった。これらのCAR−T細胞は、CD45RO+IL7R+表現型のより高い発現因子であり、TEM細胞は一般にリンパ節には存在せず、通常は脾臓や他の末梢組織に蓄積するという事実と一致している。これらのインビボの結果は、抗原特異的なCAR−T細胞に対するGSK3β阻害のワクチンのような効果を示唆している。
成功した免疫応答の特徴は、a)免疫システムが抗原に対して効果的な応答を開始し、b)将来同じ抗原を認識するためのメモリーを生成する場合である。例示された実施形態は、GSK3β阻害が、ATCDを軽減し、抗原特異的CAR−T細胞における増殖を増加させることによって生存の増加を促進し、固形腫瘍に対する免疫応答の成功に必要な「免疫ブースト」を与えることを初めて示すものである。実験動物の腫瘍のその後のクリアランスを含む、抗原特異的CAR−T細胞におけるGSK3β阻害時のPD−1発現およびCD8+CAR−TEMメモリー生成の低下によるCAR−T細胞疲弊の減少を示すさらなるデータは、2番目の基準を満たしている。抗原経験のあるCAR−T細胞に対するGSK3β阻害のアジュバントのような効果は、癌(より具体的には、固形腫瘍)の免疫療法のための本開示の組成物および方法(例えば、CAR−TとともにGSK3β阻害剤)の使用、そしてまた腫瘍ワクチンの開発を提供する。
さらに、癌ネオ抗原の発見が進むにつれて、本明細書に開示される実施形態は、疾患特異的または患者特異的な様式で個別化され得るCAR−T細胞に基づく新しい腫瘍ワクチンの開発のために改変され得る。
前述の説明から、当業者は、方法の本質的な特徴を容易に確認でき、その精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更および修正を行って、様々な使用法および条件に適合させることができる。
特に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または同等の方法および材料を本開示の実施または試験において使用することができるが、適切な方法および材料は、前述の段落で説明されている。さらに、材料、方法および実施例は、単なる例示であり、限定することを意図するものではない。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が支配する。
本明細書において引用されているすべての米国特許および公開または未公開の米国特許出願は、参照により組み込まれる。本明細書において引用されたすべての公開された外国特許および特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において引用されたすべての公開された参考文献、文書、原稿、科学文献は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において参照される科学的データベース(例えば、PUBMED、NCBI)に関連するすべての識別子およびアクセッション番号は、参照により本明細書に組み込まれる。
以下の開示は、その全体が参照により組み込まれる。
1.ガーフォール(Garfall)他、多発性骨髄腫のCD19に対するキメラ抗原受容体T細胞、N Engl J Med 373:1040−1047、2015。
1.ガーフォール(Garfall)他、多発性骨髄腫のCD19に対するキメラ抗原受容体T細胞、N Engl J Med 373:1040−1047、2015。
2.ポーター(Porter)他、慢性リンパ性白血病におけるキメラ抗原受容体修飾T細胞、N Engl J Med 365:725−733、2011。
3.ヨン(Yong)他、固形腫瘍のCAR T細胞療法、Immunol Cell Biol、2016年。
3.ヨン(Yong)他、固形腫瘍のCAR T細胞療法、Immunol Cell Biol、2016年。
4.ネウィック(Newick)他、固形腫瘍のCAR T細胞療法、Annu Rev Med、2016年。
5.ヨフォン(Yvon)他、遺伝子操作されたGD2−特異的T細胞を用いた転移性黒色腫の免疫療法、Clin Cancer Res 15:5852−5860、2009。
5.ヨフォン(Yvon)他、遺伝子操作されたGD2−特異的T細胞を用いた転移性黒色腫の免疫療法、Clin Cancer Res 15:5852−5860、2009。
6.エムテージ(Emtage)他、第2世代の抗癌胎児性抗原デザイナーT細胞は、活性化による細胞死に抵抗し、腫瘍との接触で増殖し、サイトカインを分泌し、in vivoで優れた抗腫瘍活性を示す:前臨床評価、Clin Cancer Res 14:8112−8122、2008。
7.ホンバッハ(Hombach)他、キメラ抗原受容体による共刺激は、CD28−OX40シグナル伝達の組み合わせによるT細胞抗腫瘍応答の利点を再考した、Int J Cancer 129:2935−2944、2011。
8.ブラウン(Brown)他、キメラ抗原受容体T細胞療法後の神経膠芽腫の退行、N Engl J Med 375:2561−2569、2016。
9.フォンデルステーゲン(van der Stegen)他、ErbB−最標的化ヒトT細胞によって誘発されるサイトカイン放出症候群の前臨床インビボモデリング:治療機会のウィンドウを特定する?、J Immunol 191:4589−4598、2013。
9.フォンデルステーゲン(van der Stegen)他、ErbB−最標的化ヒトT細胞によって誘発されるサイトカイン放出症候群の前臨床インビボモデリング:治療機会のウィンドウを特定する?、J Immunol 191:4589−4598、2013。
10.パネリ(Panelli)他、全身性インターロイキン(IL)−2投与後のサイトカインストームの予測、J Transl Med 2:2004年17月。
11.ボニファント(Bonifant)他、CAR T細胞療法における毒性と管理、Mol Ther Oncolytics 3:16011、2016。
11.ボニファント(Bonifant)他、CAR T細胞療法における毒性と管理、Mol Ther Oncolytics 3:16011、2016。
12.ガーゲット(Gargett)他、GD−2特異的CAR T細胞は、抗原との遭遇に続いて強力な活性化と削除を受けるが、PD−1遮断により、活性化による細胞死から保護できる、Mol Ther 24:1135−1149、2016。
13.チャーカスキ−(Cherkassky)他、細胞固有のPD−1チェックポイント遮断を有するヒトCAR T細胞は、腫瘍が媒介する阻害に抵抗する、J Clin Invest 126:3130−3144、2016。
14.パウケン(Pauken)他、疲弊したT細胞のエピジェネティックな安定性は、PD−1遮断による再活性化の耐久性を制限する、Science 354:1160−1165、2016。
15.ウェルシュ(Welsh)他、T細胞の活性化は、翻訳開始因子eIF2Bの急速な刺激とグリコーゲンシンターゼキナーゼ−3の不活性化をもたらす、J Biol Chem 271:11410−11413、1996。
16.オーテキ(Ohteki)他、セリンスレオニンキナーゼGSK−3によるT細胞増殖とインターロイキン2産生の負の調節、J Exp Med 192:99−104、2000。
17.セングプタ(Sengupta)他、無拘束のグリコーゲンシンターゼキナーゼ−3ベータ活性は活性化T細胞死を引き起こし、天然のアジュバントによって阻害される、J Immunol 178:6083−6091、2007。
18.ガッティノニ(Gattinoni)他、WntシグナルはエフェクターT細胞の分化を停止させ、CD8+メモリー幹細胞を生成する、Nat Med 15:808−813、2009。
19.ゾウ(Zhou)他、メモリーCD8(+)T細胞の分化と持続はT細胞因子1に依存する、Immunity 33:229−240、2010。
20.チャチ(Thaci)他、インターロイキン−13受容体α2を標的とした膠芽腫療法の意義、Neuro Oncol 16:1304−1312、2014。
20.チャチ(Thaci)他、インターロイキン−13受容体α2を標的とした膠芽腫療法の意義、Neuro Oncol 16:1304−1312、2014。
21.コング(Kong)他、第2世代IL13R特異的キメラ抗原受容体修飾T細胞によるヒト神経膠腫異種移植の抑制、Clin Cancer Res 18:5949−5960、2012。
22.ビュードイン(Beaudoin)他、高い導入遺伝子発現のためのベクター産生細胞の選別は、レトロウイルス力価を増加させる、J Virol Methods 148:253−259、2008。
23.グハ(Guha)他、フロントラインサイエンス:増加したα5β1インテグリン発現によって救出された機能障害の老人性CAR−T細胞、J Leukoc Biol 102:201−208、2017。
24.セングプタ(Sengupta)他、クローン増殖したT細胞におけるアジュバント誘発生存シグナル伝達は、pAktレベルの一時的な増加と持続的なグルコースの取り込みに関連する、Immunobiology、210:647−659、2005。
25.リオンズ(Lyons)他、フローサイトメトリーによるリンパ球分裂の決定、Journal of Immunological methods、171:131−137、1994。
26.テイラー(Taylor)他、グリコーゲンシンターゼキナーゼ3の不活性化は、CD8(+)細胞溶解性T細胞応答を増強するために、共受容体PD−1のT−betを介したダウンレギュレーションを駆動する、Immunity、44:274−286、2016。
27.ベルマ(Verma)他、ヒトT細胞におけるLFA−1/ICAM−1ライゲーションは、GSK3βシグナル伝達依存性ノッチ経路を介してTh1分極を促進する、J Immunol 197:108−118、2016。
28.イケダ(Ikeda)他、Wntシグナル伝達経路の負の調節因子であるAxinは、GSK−3βおよびβ−カテニンと複合体を形成し、β−カテニンのGSK−3β依存性リン酸化を促進する、EMBO Journal、17:1371−1384、1998。
29.ジーネット(Jeannet)他、機能的CD8T細胞メモリーの確立のためのWnt経路エフェクターTcf−1の重要な役割、Proc Natl Acad Sci USA 107:9777−9782、2010。
30.フォーゲット(Forget)他、血液および肺腫瘍からのヒトCD8+Tリンパ球におけるWnt/ss−カテニン経路の刺激は、共有される若い/メモリー表現型をもたらす、PLoS One 7:e41074、2012。
31.マクスウェル(Maxwell)他、神経膠芽腫における免疫チェックポイント遮断を調査する臨床試験、Curr Treat Options Oncol 18:51、2017。
32.ルクシク(Luksik)他、脳腫瘍の治療における免疫チェックポイント阻害の役割、Neurotherapeutics、2017。
33.ガッティノニ(Gattinoni)他、幹細胞のような特性を有するヒトメモリーT細胞サブセット、Nat Med 17:1290−1297、2011。
33.ガッティノニ(Gattinoni)他、幹細胞のような特性を有するヒトメモリーT細胞サブセット、Nat Med 17:1290−1297、2011。
34.スタール(Staal)他、Wntシグナル伝達は胸腺細胞の発生に必要であり、Tcf−1を介した転写を活性化する、Eur J Immunol 31:285−293、2001。
35.イオニディス(Ioannidis)他、β−カテニン−−TCF−1経路は、CD4(+)CD8(+)胸腺細胞の生存を保証する、Nat Immunol 2:691−697、2001。
36.シ(Xu)他、β−カテニンの削除はT細胞の発達を損う、Nat Immunol 4:1177−1182、2003。
37.ゾウ(Zhao)、D.M.、S.ユ(Yu)、X.ゾウ(Zhou)、J.S.ハリング(Haring)、W.ヘルド(Held)、V.P.バドヴィナク(Badovinac)、J.T.ハーティ(Harty)およびH.H.シュエ(Xue)、2010、Wntシグナル伝達の構成的活性化はメモリーCD8T細胞の生成を促進する、J Immunol 184:1191−1199。
37.ゾウ(Zhao)、D.M.、S.ユ(Yu)、X.ゾウ(Zhou)、J.S.ハリング(Haring)、W.ヘルド(Held)、V.P.バドヴィナク(Badovinac)、J.T.ハーティ(Harty)およびH.H.シュエ(Xue)、2010、Wntシグナル伝達の構成的活性化はメモリーCD8T細胞の生成を促進する、J Immunol 184:1191−1199。
38.ハートン(Hurton)他、Tethered IL−15は抗腫瘍活性を増強し、腫瘍特異的T細胞の幹細胞メモリーサブセットを促進する、Proc Natl Acad Sci U S A 113:E7788−E7797、2016。
39.カラスコ(Carrasco)他、ヒトCD8T細胞のCD45RAは、最後の抗原刺激からの経過時間に感受性を有する、Blood、108:2897−2905、2006。
40.ハスター(Huster)他、メモリーT細胞上のIL−7受容体の選択的発現は、異なるCD8+メモリーT細胞サブセットの初期のCD40L依存性生成を特定する、Proc Natl Acad Sci USA 101:5610−5615、2004。
41.ハスター(Huster)他、CD8+セントラルメモリーT細胞の防御的リステリア特異的エフェクターメモリーT細胞への一方向の発達、Eur J Immunol 36:1453−1464、2006。
42.ケーチ(Kaech)他、インターロイキン7受容体の選択的発現は、長命のメモリー細胞を生じさせるエフェクターCD8T細胞を同定する、Nat Immunol 4:1191−1198、2003。
43.ボイマン(Boyman)他、サイトカインおよびT細胞ホメオスタシス、Curr Opin Immunol 19:320−326、2007。
44.セングプタ(Sengupta)他、米国特許第9650428号明細書、発明の名称「癌を治療するための方法および組成物」。
44.セングプタ(Sengupta)他、米国特許第9650428号明細書、発明の名称「癌を治療するための方法および組成物」。
45.セングプタ(Sengupta)他、PCT/US2015/063267の国際公開第WO2016/089916号、発明の名称「癌を治療するための方法および組成物」。
Claims (69)
- T細胞の集団のエクスビボ増殖のための方法であって、前記方法は、前記T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含む、方法。
- 前記T細胞がGSK3β阻害剤と接触する前に、同T細胞は腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質で最初にトランスフェクトされる、請求項1に記載の方法。
- 前記T細胞が対象から単離される、請求項1に記載の方法。
- 前記方法は、形質導入されたT細胞を腫瘍抗原と接触させることをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記T細胞をGSK3β阻害剤および腫瘍抗原と同時に接触させる、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記T細胞はインターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸で形質導入される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記核酸がインターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kまたはそのフラグメントをコードする、請求項4に記載の方法。
- 前記核酸が、インターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインに結合するドメインを含むインターロイキン13のフラグメント、またはインターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインを含む融合タンパク質をコードする、請求項6記載の方法。
- 前記腫瘍抗原がインターロイキン13受容体(IL13R)またはそのバリアントを含む、請求項6に記載の方法。
- 前記腫瘍抗原が、インターロイキン13受容体のアルファ(α)鎖(IL13Rα)またはそのバリアントを含む、請求項9に記載の方法。
- GSK3β阻害剤が
(a)SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質および
(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質のうちの少なくとも1つである、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。 - 前記T細胞が、ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、ナチュラルキラーT細胞、またはγδT細胞である、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 増殖したT細胞は、その後、疾患を治療するために患者に戻すべく投与される、請求項1に記載の方法。
- 前記疾患が癌である、請求項13に記載の方法。
- 癌が固形腫瘍である、請求項14に記載の方法。
- 前記腫瘍が腫瘍抗原を発現する、請求項15に記載の方法。
- T細胞の集団のエクスビボ増殖のための方法であって、前記方法は:
対象から前記T細胞を含むサンプルを単離することと;
T細胞の集団に、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸を形質導入することと;
形質導入されたT細胞をGSK3β阻害剤と接触させることと、を含む方法。 - キメラ抗原受容体タンパク質を発現するT細胞(CAR−T細胞)およびGSK3β阻害剤を含む組成物。
- キメラ抗原受容体タンパク質が腫瘍抗原に結合する、請求項19に記載の組成物。
- 前記T細胞がインターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する、請求項18または請求項19に記載の組成物。
- 前記T細胞がインターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kを含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する、請求項20に記載の組成物。
- 前記GSK3β阻害剤が小分子または遺伝物質である、請求項18に記載の組成物。
- 前記GSK3β阻害剤が、SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)である小分子;あるいはsiRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)である遺伝物質、である、請求項18〜22のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記GSK3β阻害剤が、マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせ、およびGSK3のドミナントネガティブ対立遺伝子(GSK3DN)から選択される遺伝物質である、請求項18〜22のいずれか一項に記載の組成物。
- キメラ抗原受容体タンパク質を発現するT細胞(CAR−T細胞)とGSK3β阻害剤とを含む別個の投与のための製剤。
- 前記GSK3β阻害剤が、SB216763、TWS−119、1−アザケンパウロンまたは6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)である小分子;あるいはsiRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)である遺伝物質、である、請求項25に記載の製剤。
- キットであって、1つ以上のパッケージ中に、インターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードするCAR核酸構築物;GSK3β阻害剤;および前記CAR核酸構築物を用いてT細胞に形質導入するための任意選択の第1の試薬;T細胞を活性化するためのさらなる任意選択の第2の試薬、を含む、キット。
- 前記第2の試薬がIL13Rα2−Fcである、請求項27に記載のキット。
- 前記核酸構築物がインターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする、請求項27または請求項28に記載のキット。
- 前記GSK3β阻害剤が、SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)である小分子;あるいはsiRNA、miRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ddRNAi、またはGSK3のドミナントネガティブ阻害剤(GSK3DN)である遺伝物質、である、請求項27〜29のいずれか一項に記載のキット。
- 前記GSK3β阻害剤が、マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせ、およびGSK3DNを含む遺伝物質である請求項27〜29のいずれか一項に記載のキット。
- ネイティブまたは野生型のT細胞と比較してGSKβの発現または活性を阻害したT細胞。
- ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、ナチュラルキラーT細胞、またはγδT細胞である、請求項32に記載のT細胞。
- T細胞が、マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはそれらの組み合わせを含む遺伝的阻害剤を含み、前記遺伝的阻害剤は、T細胞におけるGSK3βの活性または発現を阻害する、請求項32に記載のT細胞。
- T細胞のエクスビボ増殖のための方法であって、前記方法は、T細胞を含むサンプルを対象から単離することと;前記T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることと;腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸でT細胞に形質導入することと;形質導入されたT細胞を腫瘍抗原と接触させて形質導入されたT細胞を増殖させることと、を含む方法。
- T細胞のエクスビボ増殖のための方法であって、前記方法は、T細胞を含むサンプルを対象から単離することと;前記T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることと、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸でT細胞に形質導入することと;形質導入されたT細胞を腫瘍抗原と接触させて形質導入されたT細胞を活性化させることおよび増殖させることのうちの少なくとも一方を行うことと、を含む方法。
- 前記T細胞が、インターロイキン13(IL13CAR−T)またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含むキメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸で形質導入される、請求項35または請求項36に記載の方法。
- 前記核酸がインターロイキン13バリアントIL13.E13K.R109Kまたはそのフラグメントをコードする、請求項37に記載の方法。
- 前記核酸が、インターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインに結合するドメインを含むインターロイキン13のフラグメント、またはインターロイキン13受容体またはその細胞外ドメインを含む融合タンパク質をコードする、請求項38に記載の方法。
- 前記腫瘍抗原がインターロイキン13受容体(IL13R)またはそのバリアントを含む、請求項39に記載の方法。
- 前記腫瘍抗原がインターロイキン13受容体のアルファ(α)鎖(IL13Rα)またはそのバリアントを含む、請求項40に記載の方法。
- 前記GSK3β阻害剤が
(a)SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質および
(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質
のうちの少なくとも1つである、請求項35または請求項36に記載の方法。 - 前記T細胞がヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、ナチュラルキラーT細胞、またはγδT細胞である、請求項35または請求項36に記載の方法。
- それを必要とする対象におけるT細胞の養子移入により治療可能な疾患を治療する方法であって、前記方法は、前記対象に、複数の活性化および増殖したT細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、前記活性化はCAR−Tを抗原と接触させることを含み、前記増殖は、活性化されたCAR−T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含む、方法。
- 前記GSK3β阻害剤が
(a)SB216763、TWS−119、1−アザケンパウロンまたは6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質および
(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質
のうちの少なくとも1つである、請求項44に記載の方法。 - 前記疾患が、腫瘍疾患、細菌性疾患、ウイルス性疾患および原生動物疾患から選択される病原性疾患、または自己免疫疾患である、請求項44に記載の方法。
- キメラ抗原受容体タンパク質を発現するT細胞(CAR−T細胞)およびGSK3β阻害剤を含む組成物。
- それを必要とする対象において腫瘍を治療するための方法であって、前記方法は、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体タンパク質を発現する複数の活性化および増殖T細胞(CAR−T)を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含み、活性化がCAR−Tを腫瘍抗原と接触させることを含み、増殖が活性化CAR−T細胞をGSK3β阻害剤と接触させることを含み、活性化CAR−T細胞はキメラ抗原受容体タンパク質を発現し、キメラ抗原受容体タンパク質は腫瘍抗原に結合する、方法。
- 前記T細胞が自家T細胞である、請求項48に記載の方法。
- 前記腫瘍抗原がインターロイキン13受容体(IL13R)またはそのリガンド結合ドメインである、請求項48に記載の方法。
- 前記キメラ抗原受容体タンパク質が、Il13またはそのバリアントまたはそのフラグメントを含む、請求項48に記載の方法。
- 前記キメラ抗原受容体タンパク質がIL13バリアントIL13.E13K.R109Kを含む、請求項48に記載の方法。
- GSK3β阻害剤が
(a)SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質および
(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質
のうちの少なくとも1つである、請求項48に記載の方法。 - 前記T細胞が、同時にまたは順次に活性化および増殖される、請求項48に記載の方法。
- 腫瘍がIL13R陽性である、請求項48に記載の方法。
- 腫瘍がIL13R陽性神経膠腫である、請求項48に記載の方法。
- 腫瘍特異的メモリーT細胞を生成する方法であって、前記方法は、腫瘍抗原に結合する分子を含むキメラ抗原受容体(CAR−T)をコードする核酸を対象の生体サンプルから単離されたT細胞に形質導入することと;CAR−T細胞を腫瘍抗原およびGSK3β阻害剤と接触させることと;メモリー細胞に特異的な第1のマーカーおよび腫瘍抗原に特異的な第2のマーカーを検出して、それにより腫瘍特異的なメモリーT細胞を生成することと、を含む、方法。
- 前記CAR−T細胞が、IL13またはそのフラグメントまたはそのバリアントをコードする核酸で形質導入される、請求項57に記載の方法。
- 前記CAR−T細胞が、IL13バリアントIL13.E13K.R109Kをコードする核酸で形質導入される、請求項58に記載の方法。
- 腫瘍抗原がIL13受容体またはそのリガンド結合ドメインである、請求項59に記載の方法。
- GSK3β阻害剤が
(a)SB216763、1−アザケンパウロン、TWS−119または6−ブロモインジルビン−3’−オキシム(BIO)から選択される化学物質および
(b)マイクロRNA(miRNA)、低分子干渉RNA(siRNA)、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはドミナントネガティブGSK3阻害剤(GSK3DN)またはそれらの組み合わせから選択される遺伝物質
のうちの少なくとも1つである、請求項57に記載の方法。 - メモリー細胞に特異的なマーカーは、CD45RO+およびCD45RA+から選択され、腫瘍抗原に特異的なマーカーが腫瘍抗原に結合するタンパク質の発現を含む、請求項57に記載の方法。
- 前記CAR−T細胞が、IL13R陽性細胞への結合、および場合によりIL13R陽性細胞の破壊を含む機能アッセイによって確認されるように、IL13R陽性腫瘍細胞に特異的である、請求項57に記載の方法。
- メモリーT細胞がCD8+T細胞である、請求項57に記載の方法。
- メモリーCAR−T細胞ホメオスタシスの第3のマーカーをさらに検出する、請求項57に記載の方法。
- 前記第3のマーカーが、IL13R発現、T−bet発現、およびPD−1発現のうちの少なくとも1つである、請求項57に記載の方法。
- 増加したT−bet発現および減弱したPD−1発現の少なくとも1つが、改善されたCAR−T細胞ホメオスタシスを示す、請求項66に記載の方法。
- T細胞ホメオスタシスが、T細胞疲弊の減少、持続的なサイトカイン発現、T細胞クローン性の維持、およびCAR−Tメモリー発達の促進、のうちの少なくとも一つを含む、請求項67に記載の方法。
- 腫瘍抗原による活性化およびGSK3β阻害剤の存在下での増殖を介して生成されたCAR−T細胞が、腫瘍抗原を発現する腫瘍細胞に対する特異性およびメモリーの増加を示す、請求項57〜68のいずれか一項に記載の方法。
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