JP2021501597A - コード化粒子を使用したデジタル核酸増幅 - Google Patents
コード化粒子を使用したデジタル核酸増幅 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021501597A JP2021501597A JP2020524560A JP2020524560A JP2021501597A JP 2021501597 A JP2021501597 A JP 2021501597A JP 2020524560 A JP2020524560 A JP 2020524560A JP 2020524560 A JP2020524560 A JP 2020524560A JP 2021501597 A JP2021501597 A JP 2021501597A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- probe
- target molecule
- emission
- compartmentalized
- binding region
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 222
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 179
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 179
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims description 670
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 title claims description 359
- 230000003321 amplification Effects 0.000 title claims description 352
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 620
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 317
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims abstract description 197
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 87
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 524
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 438
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 95
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 claims description 74
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 69
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 58
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 57
- 238000007847 digital PCR Methods 0.000 claims description 55
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 52
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 52
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 claims description 43
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 34
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 34
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 30
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 claims description 26
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 claims description 22
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 18
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 claims description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 14
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 13
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 claims description 12
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 claims description 12
- 239000011368 organic material Substances 0.000 claims description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 claims description 11
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 10
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 claims description 10
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 9
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 claims description 7
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 6
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 6
- 150000004696 coordination complex Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 4
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 claims description 4
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004054 semiconductor nanocrystal Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 62
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 abstract description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 14
- 238000011002 quantification Methods 0.000 abstract description 7
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 192
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 143
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 142
- 239000000047 product Substances 0.000 description 118
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 107
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 90
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 78
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 68
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 68
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 68
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 67
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 65
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 62
- 239000000463 material Substances 0.000 description 52
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 52
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 49
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 49
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 46
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 41
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 38
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 38
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 37
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 35
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 33
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 32
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical class [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 229910021644 lanthanide ion Inorganic materials 0.000 description 31
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 28
- -1 nucleoside triphosphate Chemical class 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 27
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 27
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 25
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 22
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 22
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 22
- 241000894007 species Species 0.000 description 22
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 20
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 19
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 19
- 238000011880 melting curve analysis Methods 0.000 description 19
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 18
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 17
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 17
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 17
- 229940117927 ethylene oxide Drugs 0.000 description 16
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 15
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 15
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 14
- 238000003491 array Methods 0.000 description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 14
- 230000006870 function Effects 0.000 description 14
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 14
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 13
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 13
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 12
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N Butadiene Chemical compound C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 12
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 12
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 12
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 12
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 11
- 238000011901 isothermal amplification Methods 0.000 description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 11
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 10
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 10
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 10
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 9
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 9
- 239000005518 polymer electrolyte Substances 0.000 description 9
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 8
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 8
- IOJUPLGTWVMSFF-UHFFFAOYSA-N benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC=NC2=C1 IOJUPLGTWVMSFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920000547 conjugated polymer Polymers 0.000 description 8
- 238000010252 digital analysis Methods 0.000 description 8
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 8
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 7
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 7
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 7
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 7
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 238000012340 reverse transcriptase PCR Methods 0.000 description 7
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 7
- 238000005382 thermal cycling Methods 0.000 description 7
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 6
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 6
- NIHNNTQXNPWCJQ-UHFFFAOYSA-N fluorene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3C2=C1 NIHNNTQXNPWCJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 6
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N phosphine group Chemical group P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920000553 poly(phenylenevinylene) Polymers 0.000 description 6
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 6
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 6
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 6
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 5
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 5
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 description 5
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 5
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 5
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 5
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 5
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 5
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 5
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 5
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 5
- NOIRDLRUNWIUMX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3,7-dihydropurin-6-one;6-amino-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1.O=C1NC(N)=NC2=C1NC=N2 NOIRDLRUNWIUMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FFKUHGONCHRHPE-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-1h-pyrimidine-2,4-dione;7h-purin-6-amine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O.NC1=NC=NC2=C1NC=N2 FFKUHGONCHRHPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 4
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 4
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 4
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 4
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 description 4
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 125000003983 fluorenyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3CC12)* 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 4
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 4
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 4
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 4
- 238000001429 visible spectrum Methods 0.000 description 4
- UVAMFBJPMUMURT-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6-pentafluorobenzenethiol Chemical compound FC1=C(F)C(F)=C(S)C(F)=C1F UVAMFBJPMUMURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 3
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 238000007397 LAMP assay Methods 0.000 description 3
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 3
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical class 0.000 description 3
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 3
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 3
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 3
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 229920001083 polybutene Polymers 0.000 description 3
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 3
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M (4z)-1-(3-methylbutyl)-4-[[1-(3-methylbutyl)quinolin-1-ium-4-yl]methylidene]quinoline;iodide Chemical compound [I-].C12=CC=CC=C2N(CCC(C)C)C=CC1=CC1=CC=[N+](CCC(C)C)C2=CC=CC=C12 QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011925 1,2-addition Methods 0.000 description 2
- APQXWKHOGQFGTB-UHFFFAOYSA-N 1-ethenyl-9h-carbazole Chemical group C12=CC=CC=C2NC2=C1C=CC=C2C=C APQXWKHOGQFGTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IIBCXMVHDVUGFI-UHFFFAOYSA-N 2-(2-phenoxyethoxy)decan-2-ol Chemical compound CCCCCCCCC(C)(O)OCCOC1=CC=CC=C1 IIBCXMVHDVUGFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KGIGUEBEKRSTEW-UHFFFAOYSA-N 2-vinylpyridine Chemical compound C=CC1=CC=CC=N1 KGIGUEBEKRSTEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRNIXQHICVKSQE-UHFFFAOYSA-N 9h-carbazole;9h-fluorene Chemical group C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3C2=C1.C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 SRNIXQHICVKSQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 2
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 2
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N Isoprene Chemical compound CC(=C)C=C RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052765 Lutetium Inorganic materials 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910003849 O-Si Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910003872 O—Si Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920002367 Polyisobutene Polymers 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 2
- 229910002808 Si–O–Si Inorganic materials 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N Sorbitan monooleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052771 Terbium Inorganic materials 0.000 description 2
- YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N Thiophene Chemical group C=1C=CSC=1 YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- HVUMOYIDDBPOLL-XGKPLOKHSA-N [2-[(2r,3r,4s)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]-2-hydroxyethyl] octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O HVUMOYIDDBPOLL-XGKPLOKHSA-N 0.000 description 2
- 229940048053 acrylate Drugs 0.000 description 2
- 150000004703 alkoxides Chemical class 0.000 description 2
- 150000004645 aluminates Chemical class 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 108091006004 biotinylated proteins Proteins 0.000 description 2
- 229910052797 bismuth Inorganic materials 0.000 description 2
- JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N bismuth atom Chemical compound [Bi] JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 2
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 2
- ZPWOOKQUDFIEIX-UHFFFAOYSA-N cyclooctyne Chemical compound C1CCCC#CCC1 ZPWOOKQUDFIEIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 2
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000001152 differential interference contrast microscopy Methods 0.000 description 2
- OVTCUIZCVUGJHS-UHFFFAOYSA-N dipyrrin Chemical group C=1C=CNC=1C=C1C=CC=N1 OVTCUIZCVUGJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 238000001317 epifluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical group O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002222 fluorine compounds Chemical class 0.000 description 2
- NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N fluoromethane Chemical compound FC NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000140 heteropolymer Polymers 0.000 description 2
- DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N hexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 229910052746 lanthanum Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 2
- 229940088644 n,n-dimethylacrylamide Drugs 0.000 description 2
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 2
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 2
- 238000012634 optical imaging Methods 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 125000002080 perylenyl group Chemical group C1(=CC=C2C=CC=C3C4=CC=CC5=CC=CC(C1=C23)=C45)* 0.000 description 2
- 125000000843 phenylene group Chemical group C1(=C(C=CC=C1)*)* 0.000 description 2
- 229910000073 phosphorus hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical class N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 229920003227 poly(N-vinyl carbazole) Polymers 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 2
- 229920002959 polymer blend Polymers 0.000 description 2
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 150000004033 porphyrin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 229910052706 scandium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 2
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 2
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940047670 sodium acrylate Drugs 0.000 description 2
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229920001169 thermoplastic Polymers 0.000 description 2
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHIJQRMRRMOSBD-UHFFFAOYSA-M 1-prop-1-enylpyridin-1-ium;iodide Chemical compound [I-].CC=C[N+]1=CC=CC=C1 BHIJQRMRRMOSBD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNECHEBEGNWYCN-UHFFFAOYSA-N 2-ethenyl-1-methylpyrrolidine Chemical compound CN1CCCC1C=C HNECHEBEGNWYCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXYAVSFOJVUIHT-UHFFFAOYSA-N 2-vinylnaphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C=C)=CC=C21 KXYAVSFOJVUIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRJRKPMIRMSBNK-UHFFFAOYSA-N 3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridecafluorooctan-1-ol Chemical compound OCCC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F GRJRKPMIRMSBNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLBJTVDPSNHSKJ-UHFFFAOYSA-N 4-Methylstyrene Chemical compound CC1=CC=C(C=C)C=C1 JLBJTVDPSNHSKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 4-[4-[[2,5-dimethoxy-4-[(4-nitrophenyl)diazenyl]phenyl]diazenyl]-n-methylanilino]butanoic acid Chemical compound COC=1C=C(N=NC=2C=CC(=CC=2)N(C)CCCC(O)=O)C(OC)=CC=1N=NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJWDVSJQPIRAKK-UHFFFAOYSA-N 4-ethenyl-1-methylpyridin-1-ium Chemical compound C[N+]1=CC=C(C=C)C=C1 AJWDVSJQPIRAKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JJTUDXZGHPGLLC-IMJSIDKUSA-N 4511-42-6 Chemical compound C[C@@H]1OC(=O)[C@H](C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- LQQKFGSPUYTIRB-UHFFFAOYSA-N 9,9-dihexylfluorene Polymers C1=CC=C2C(CCCCCC)(CCCCCC)C3=CC=CC=C3C2=C1 LQQKFGSPUYTIRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RXACYPFGPNTUNV-UHFFFAOYSA-N 9,9-dioctylfluorene Polymers C1=CC=C2C(CCCCCCCC)(CCCCCCCC)C3=CC=CC=C3C2=C1 RXACYPFGPNTUNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108091079001 CRISPR RNA Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052684 Cerium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 229910052692 Dysprosium Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 229910052691 Erbium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910052689 Holmium Inorganic materials 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910052779 Neodymium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000269800 Percidae Species 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920003062 Poly(ferrocenyldimethylsilane) Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920000265 Polyparaphenylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000388 Polyphosphate Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229910052777 Praseodymium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 229910052772 Samarium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 229910052775 Thulium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910003088 Ti−O−Ti Inorganic materials 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 229910052769 Ytterbium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000011166 aliquoting Methods 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004450 alkenylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002355 alkine group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 229920000109 alkoxy-substituted poly(p-phenylene vinylene) Polymers 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004419 alkynylene group Chemical group 0.000 description 1
- 229920005603 alternating copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- PXTQQOLKZBLYDY-UHFFFAOYSA-N bis(2-ethylhexyl) carbonate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)OCC(CC)CCCC PXTQQOLKZBLYDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000002358 circulating endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000004581 coalescence Methods 0.000 description 1
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 150000001913 cyanates Chemical class 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002993 cycloalkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- QAWTYRYXDYHQNU-UHFFFAOYSA-N diazathiane Chemical compound NSN QAWTYRYXDYHQNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 229920002313 fluoropolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000295 fuel oil Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006588 heterocycloalkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 1
- 238000003703 image analysis method Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 239000002608 ionic liquid Substances 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000311 lanthanide oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N lichenxanthone Natural products COC1=CC(O)=C2C(=O)C3=C(C)C=C(OC)C=C3OC2=C1 QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007769 metal material Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylprop-2-enamide Chemical compound CC(C)NC(=O)C=C QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002073 nanorod Substances 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000013110 organic ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002907 paramagnetic material Substances 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 238000000059 patterning Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- CSHWQDPOILHKBI-UHFFFAOYSA-N peryrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=3C2=C2C=CC=3)=C3C2=CC=CC3=C1 CSHWQDPOILHKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002098 polyfluorene Polymers 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 239000001205 polyphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011176 polyphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002165 resonance energy transfer Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- LCHPDUINHQCCKZ-UHFFFAOYSA-N s-azidothiohydroxylamine Chemical compound NSN=[N+]=[N-] LCHPDUINHQCCKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003377 silicon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- PVGBHEUCHKGFQP-UHFFFAOYSA-N sodium;n-[5-amino-2-(4-aminophenyl)sulfonylphenyl]sulfonylacetamide Chemical compound [Na+].CC(=O)NS(=O)(=O)C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 PVGBHEUCHKGFQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 125000001273 sulfonato group Chemical class [O-]S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N terbium atom Chemical compound [Tb] GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SJMYWORNLPSJQO-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OC(C)(C)C SJMYWORNLPSJQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 150000003732 xanthenes Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
- C12Q2527/107—Temperature of melting, i.e. Tm
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2531/00—Reactions of nucleic acids characterised by
- C12Q2531/10—Reactions of nucleic acids characterised by the purpose being amplify/increase the copy number of target nucleic acid
- C12Q2531/125—Rolling circle
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2537/00—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature
- C12Q2537/10—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature the purpose or use of
- C12Q2537/143—Multiplexing, i.e. use of multiple primers or probes in a single reaction, usually for simultaneously analyse of multiple analysis
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
本出願は、全ての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、2017年11月3日に出願された米国仮出願第62/581,429号の利益を主張する。
本明細書で言及される全ての刊行物、特許、および特許出願は、個々の刊行物、特許、または特許出願が各々参照により組み込まれると具体的かつ個別に示された場合と同じ程度に参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載されるように、試料の標的分子(または試料の複数の別個の標的分子)に関連する様々な特性は、試料から作製された複数の区画化された体積のデジタル分析によって決定され得、区画化された体積のうちの少なくともいくつかが標的分子を含む。例えば、複数の区画化された体積の各区画化された体積中の各別個の標的分子の存在または不在を決定することにより、試料中の各別個の標的分子の濃度の効率的かつ正確な計算が可能になり得る。いくつかの事例では、区画化された体積中の標的分子の存在または不在の決定は、区画化された体積中に含有されるプローブの検出可能なシグナルまたはコードを検出することを含み得る。いくつかの事例では、プローブによって生成された(例えば、放出された)検出可能なシグナルまたはコードは、変調可能である(例えば、区画化された体積中に含有されるクエンチャーによる検出可能なシグナルまたはコードの条件付きクエンチングによる)。言い換えれば、試料またはその一部(例えば、標的分子を含む試料から得られた区画化された体積)中の標的分子の検出は、試料またはその一部中に存在するプローブによって生成された変調可能な検出可能なシグナルまたはコードを検出することを含み得る。
デジタルアッセイは、クエンチャーを含み得る。いくつかの事例では、プローブの検出可能なコード(例えば、光学的に検出可能なコード)は、クエンチャーへの近接性によって変調され得る。クエンチャーは、(例えば、動的クエンチング機構または双極子−双極子機構を介して)別の分子によって生成された電磁放出物を吸収することができる分子を含み得る。例えば、クエンチャーは、蛍光灯スペクトル中の放出されたエネルギーを吸収することができる化学シグナルクエンチャー、例えば、Black Hole Quencher(登録商標)(例えば、Sigma−Aldrich製のBHQ−1、BHQ−2、またはBHQ−3)を含み得る。いくつかの事例では、クエンチャーは、広範囲の波長の検出を阻止し得る。例えば、クエンチャーは、いくつかの事例では、コード化粒子または発色団によって放出された波長ピークの全ての検出を阻止し得る。いくつかの事例では、クエンチャーは、コード化粒子または発色団によって生成された発光波長ピークの一部のみの検出を阻止し得る。いくつかの事例では、クエンチャーは、プローブの発色団またはコード化粒子によって放出されたいずれの波長も阻止することができない。例えば、プローブは、複数の発色団を含み得、クエンチャーは、プローブを含む各発色団の検出を阻止し得ない。
増幅ステップは、デジタルアッセイの区画化された体積中の検出可能なシグナルまたはコードの検出の調節に有用であり得る。本明細書に記載されるように、増幅(例えば、増幅ステップ)は、核酸合成、核酸の伸長(例えば、ポリメラーゼ活性による核酸の伸長)、核酸の別の分子(例えば、別の核酸)へのアニーリング、または融解(例えば、温度調節により互いに結合またはハイブリダイズされた第1の核酸の第2の核酸からの分離)を含み得る。いくつかの事例では、増幅(または増幅ステップ)は、区画化された体積中に存在する分子の1つ以上のコピーまたは分子の一部の1つ以上のコピーを生成することを含み得る。いくつかの事例では、増幅は、標的分子の1つ以上のコピーを生成することを含み得る。いくつかの事例では、増幅は、標的分子の一部の1つ以上のコピーを生成することを含み得る。いくつかの事例では、増幅は、標的分子の増幅産物等の標的分子と相関している分子の1つ以上のコピーを生成することを含み得る。例えば、核酸の増幅は、標的分子またはその一部(例えば、標的分子の増幅産物)に相補的な配列を有する1つ以上の分子を生成することを含み得る。
いくつかの事例では、増幅(または増幅ステップ)は、区画化された体積中の分子の切断または破壊を含み得る。いくつかの事例では、区画化された体積中の分子の切断または破壊により、区画化された体積中の別の分子とハイブリダイズするか、それに結合するか、またはそれと会合する分子の能力に影響が及ぼされ得る。例えば、図6Aに図解されるように、プローブ(例えば、蛍光プローブ)は、コード化粒子(例えば、ポリマードット(Pdot))に結合される(すなわち、共有結合により共役される)クエンチャーを含み得る。いくつかの事例では、プローブおよびクエンチャーは各々、同じDNA配列に共有結合し得る。いくつかの事例では、クエンチャーは、DNA配列の5’末端に結合し、プローブは、DNA配列の3’末端に結合し得る。いくつかの事例では、クエンチャーは、DNA配列の3’末端に結合し得、プローブは、DNA配列の5’末端に結合し得る。いくつかの事例では、コード化粒子は、1つ以上の同一のDNA配列を介して1つ以上のクエンチャーに結合し得る(例えば、これは、プローブの結合領域の一部を含み得る)。いくつかの事例では、DNA配列は、同一でない場合があり、1つより多くのDNA配列の使用は、例えば、2因子認証を必要とすることによって偽陽性を最小限に抑えるために使用され得るか、または多重化を助けるために使用され得る。いくつかの事例では、1つ以上のクエンチャーは、コード化粒子から放出された検出可能なシグナルまたはコードのかなりの部分をクエンチするのに十分にコード化粒子にごく近接している場合がある(例えば、1つ以上のクエンチャーがコード化粒子に共有結合している場合)。いくつかの事例では、1つ以上のクエンチャーは、同じ吸収スペクトルを有する同じタイプのものであり得る。いくつかの事例では、1つ以上のクエンチャーは、異なる吸収スペクトルを有する異なるタイプのものであり得る。異なるタイプのクエンチャーの使用は、蛍光プローブからの発光が広範囲の発光波長を網羅する場合、蛍光発光のより良好なクエンチングを助けるのに有効であり得る。クエンチャーとコード化粒子を連結するDNA配列は、標的分子の一部(または標的分子の増幅産物)に相補的であり得る。いくつかの事例では、標的分子(または標的分子の増幅産物)の相補的な配列は、増幅(例えば、PCR関連増幅)中にプローブにハイブリダイズし得る。ポリメラーゼがエキソヌクレアーゼ活性を有する場合(例えば、Taqman(登録商標)ポリメラーゼ)、ポリメラーゼは、標的分子の異なる領域にも相補的なプライマーから核酸(例えば、DNAまたはRNA)を複製(例えば、増幅)するため、クエンチャーをコード化粒子に連結するDNA配列を切断または分解し得る。結果として、エキソヌクレアーゼ切断プロセスにより、クエンチャーがコード化粒子から分離され得る。溶液中に遊離すると、クエンチャーは、プローブのコード化粒子の検出可能なコード(例えば、蛍光シグナル)を効率的にクエンチするには十分にコード化粒子にごく近接していない場合がある。クエンチャーが増幅中にコード化粒子から切断されると、コード化粒子の検出可能なコードまたはシグナルの1つ以上の態様(例えば、発光波長、発光寿命、発光強度、または強度比範囲、例えば、スペクトル強度コードによって表されるもの)は、検出器にとって十分に検出可能になり、標的分子の存在を示す閾値レベルを上回るようになり得る。
いくつかの事例では、リンカーの切断/分解を必要とすることなく可逆的様式でクエンチャーとコード化粒子との間の距離を増加させることが可能である。これは、クエンチャーとコード化粒子を結合するリンカーの可逆的立体構造変化により行われ得る。いくつかの事例では、クエンチャーは、プローブの結合領域に共有結合し得、これはプローブのコード化粒子にも共有結合し得る。いくつかの事例では、プローブの結合領域の第1の部分は、結合領域の第2の部分とハイブリダイズすることができる。いくつかの事例では、結合領域の第1の部分の結合領域の第2の部分とのハイブリダイゼーション(例えば、結合領域の自己会合または自己ハイブリダイゼーション)により、クエンチャーがコード化粒子に十分にごく近接して、クエンチャーがコード化粒子の検出可能なコードまたはシグナルを部分的または完全にクエンチするようになり得る(例えば、図6Bに図解される)。いくつかの事例では、互いにハイブリダイズすることができる結合領域の第1の部分および/または第2の部分は、およそ6塩基対長であり得る。いくつかの事例では、互いにハイブリダイズすることができる結合領域の第1の部分および第2の部分は、結合領域の近位端および遠位端(すなわち、5’末端および3’末端)に位置し得るか、または逆もまた同様であり得る。結合領域の第1の部分と第2の部分との間に位置し得る核酸結合領域の第3の部分は、標的分子(または標的分子の増幅産物)に相補的であり得、標的分子(または標的分子の増幅産物)とのハイブリダイゼーション時に、結合領域の(例えば、ヘアピン構造への)自己ハイブリダイズを阻止することができる二重らせん構造を形成し得る。いくつかの事例では、プローブの結合領域の第3の部分は、結合領域の第1の部分または第2の部分よりも十分に長くあり得る(例えば、それにより、標的分子と結合領域の第3の部分との間のハイブリダイゼーションが、結合領域の第1の部分および結合領域の第2の部分のハイブリダイゼーションよりも熱力学的に好ましくなる)。いくつかの事例では、結合領域の第3の部分は、第1の部分および/または第2の部分と重複し得る。増幅中、区画化された体積中に存在する標的分子が増幅され得、標的分子の増幅産物がさらに増幅されて、標的分子の核酸配列と同一の核酸配列を含む分子を生成することができる。したがって、プローブの結合領域の伸長を引き起こし、かつクエンチャーをコード化粒子から分離するのに十分な数量の標的分子および/または標的分子の増幅産物を生成することが可能である。結果として、核酸増幅によりクエンチャーをコード化粒子に結合するプローブの結合領域におけるヘアピン構造の開放を促進して、クエンチャーをコード化粒子から分離することが可能である。いくつかの事例では、結合領域のこの標的分子依存的伸長は、クエンチャーがもはやプローブの検出可能なコードまたはシグナルを阻害することができない十分な距離で、クエンチャーとプローブのコード化粒子(または発色団)を分離することができる。いくつかの事例では、その後、検出可能なコードまたはシグナルが検出され得、標的分子の存在を反映する二進値が区画化された体積に割り当てられ得る。
クエンチャーとコード化粒子との会合は、クエンチャーの配列に相補的な配列を有するプローブの結合領域の核酸配列間のハイブリダイゼーションの競合的阻害によって阻害され得る。例えば、図6C〜6Eおよび6Gに図解されるように、プローブは、クエンチャーのDNA配列に相補的なDNA配列を有する1つ以上の結合領域に共有結合しているコード化粒子を含み得る。いくつかの事例では、クエンチャーおよび結合領域の相補的なDNA配列が互いにハイブリダイズすると、クエンチャーおよびコード化粒子は、コード化粒子によって生成された検出可能なコードまたはシグナル(例えば、蛍光シグナル)の部分的または完全なクエンチングを可能にするのに十分に互いにごく近接するようになり得る。いくつかの事例では、コード化粒子は、クエンチャーのDNA配列とハイブリダイズすることができる複数の結合領域に共有結合し得、これにより、コード化粒子にごく近接しているクエンチャーの数が増加し、クエンチング効率が改善され得る。いくつかの実施形態では、プローブの結合領域(またはその一部)は、標的分子(または標的分子の増幅産物)の一部とハイブリダイズし、かつ/または標的分子(または標的分子の増幅産物)のPCRに基づく増幅のためのプライマーとしての機能を果たし得る。例えば、図6Cに図解されるように、増幅ステップ前の標的分子(または標的分子の増幅産物)への結合領域(この結合領域は、PCRプライマー(例えば、P1)を含む)のハイブリダイゼーションにより、プライマーの伸長および/または標的分子(または標的分子の増幅産物)の増幅がもたらされ得る。伸長された結合領域は、いくつかの事例では、結合領域の伸長中に合成された結合領域のある位置(例えば、プローブの伸長されていない結合領域に結合することができる部分として標的分子の反対の末端に位置する標的分子の一部に相補的な伸長された結合領域の一部)で、区画化された体積中に存在する第2のプライマー(例えば、図6Cに図解される「P2」等のオリゴヌクレオチドPCRプライマー)とハイブリダイズすることができ、それ故に、P2が伸長されて、クエンチャーの核酸配列よりもはるかに長く、ひいてはハイブリダイゼーション中により安定した伸長された結合領域に相補的な配列が作製され得る。いくつかの事例では、P1として機能する結合領域の全てまたはほぼ全てが伸長され、標的分子または増幅産物の相補的な部分にハイブリダイズされ得る。いくつかの事例では、デジタルアッセイで生成される増幅産物(例えば、標的分子の一部と同一のまたはそれに相補的なDNA配列を含む分子)の数量は、区画化された体積中のクエンチャーの数をはるかに上回り得る。増幅産物が、プローブの伸長されていない結合領域またはクエンチャーの核酸配列のいずれかよりも著しく長いハイブリダイゼーション領域を含み得るため、クエンチャーは、プローブの結合領域から優先的に移動させられ、それ故に、クエンチャーとコード化粒子との会合を阻害し、蛍光クエンチングを阻害し得る。結果として、プローブの結合領域の標的分子依存的伸長および標的分子(および/または標的分子の増幅産物)の増幅により、コード化粒子の検出可能なコードまたはシグナルのクエンチングの減少がもたらされ得る。
クエンチャーとプローブのコード化粒子または発色団との間の距離は、第1の結合領域の一部を同じプローブの第2の結合領域の一部と会合することによって増加し得る。いくつかの事例では、第1の結合領域は、第2の結合領域とは異なる核酸配列を有し得る(例えば、プローブは、2つの別個の結合領域を含み得る)。本明細書に記載されるように、プローブの結合領域(例えば、第1の別個の結合領域、第2の別個の結合領域、第3の別個の結合領域等)は、PCRプライマーを含み得る。例えば、図6Eおよび図6Fに図解されるように、プローブは、2つの別個の結合領域(例えば、2つの異なるタイプの結合領域)を含み得る。いくつかの事例では、プローブを含有する区画化された体積は、複数のクエンチャーも含み得る。区画化された体積の複数のクエンチャーは、プローブの各結合領域と会合することができる1つ以上のクエンチャーを含み得る。いくつかの事例では、複数のクエンチャーは、複数の別個のクエンチャーを含み得る。いくつかの事例では、区画化された体積は、プローブの各別個の結合領域と会合することができる別個のクエンチャーを含み得る。いくつかの事例では、標的分子の一部は、プローブの第1の結合領域と会合することができる。標的分子の増幅産物の一部は、プローブの第2の結合領域と会合することができる。いくつかの事例では、標的分子(または標的分子の増幅産物)の第1の部分は、プローブの第1の結合領域と会合することができ、標的分子(または標的分子の増幅産物)の第2の部分は、プローブの第2の結合領域と会合することができる。いくつかの事例では、標的分子または標的分子の増幅産物とプローブの結合領域との会合により、クエンチャーと結合領域との会合が阻止され得る。図6Eおよび図6Fに図解されるように、プローブの結合領域と会合している標的分子または標的分子の増幅産物は、鋳型(例えば、PCR鋳型)としての機能を果たすことができ、この結合領域は、プライマーとして機能することができ、この結合領域の伸長が生じ得る。いくつかの事例では、増幅ステップ中に伸長された結合領域の一部(例えば、標的分子または標的分子の増幅産物が結合領域伸長のための鋳型として使用される)は、同じプローブの別の結合領域と会合することができ(例えば、図6Eに図解される)、プローブ内ハイブリダイゼーションおよび増幅をもたらす。いくつかの事例では、増幅ステップ中に伸長された結合領域の一部は、別のプローブの結合領域または伸長された結合領域と会合することができ(例えば、図6Fに図解される)、プローブ間ハイブリダイゼーションをもたらす。図6Fにさらに図解されるように、第1のプローブの複数の結合領域の第1の部分は、第1のプローブの複数の結合領域の第2の部分と会合し得、第1のプローブの複数の結合領域の第3の部分は、第2のプローブの結合領域の一部と会合し得る。いくつかの事例では、プローブの結合領域は、複数の他の同一のプローブまたは複数の他の別個のプローブと会合し得る(例えば、それとハイブリダイズし得るか、またはそれに結合し得る)。図6Eおよび図6Fの両方で例示される標的分子依存的増幅の機構において、標的分子(またはその増幅産物)を使用した結合領域の伸長は、競合的ハイブリダイゼーションによりクエンチャーとプローブのコード化粒子または発色団との間の距離を増加させ得る。
区画化された体積は、環状化核酸分子を含み得る。いくつかの事例では、複数の区画化された体積の各区画化された体積は、環状化核酸分子を含む。いくつかの事例では、環状化核酸分子は、クエンチャーの核酸配列と同一であり、かつプローブの結合領域またはその一部の核酸配列に相補的な核酸配列を含み得る。この実施形態等の実施形態では、プローブの結合領域の一部に相補的な核酸配列も有するクエンチャーは、プローブの結合領域と会合し得る。いくつかの事例では、プローブの検出可能なコードまたはシグナルの検出は、クエンチャーがプローブの結合領域と会合したとき(例えば、それに結合したとき、またはそれとハイブリダイズされたとき)に阻害され得る。いくつかの事例では、環状化核酸分子の一部とハイブリダイズすることができるPCRプライマーを含み得るトリガー分子も、区画化された体積中に提供され得る。このトリガー分子は、標的分子またはその一部、標的分子の増幅産物またはその一部、または標的分子の存在に関連した別の分子であり得る。デジタルアッセイの増幅ステップ中、トリガー分子は、環状化核酸分子のローリングサークル増幅を容易にすることができる。ローリングサークル増幅の増幅産物は、クエンチャーに相補的な核酸配列を含み得る。ローリングサークル増幅の増幅産物は、クエンチャーに相補的な複数の核酸配列を含み得る。結果として、クエンチャーは、プローブの結合領域の代わりにローリングサークル増幅反応の増幅産物と会合して、クエンチャーとプローブのコード化粒子または発色団との間の距離を増加させ得る。ローリングサークル増幅反応の増幅産物は、プローブの結合領域と会合して、クエンチャーとプローブの結合領域との会合を競合的に阻害することもできる。したがって、図6Mに図解されるように、標的分子依存的ローリングサークル増幅反応をデジタルアッセイに使用して、クエンチャーとプローブのコード化粒子または発色団との間の距離を増加させることができる。したがって、標的分子依存的ローリングサークル増幅を使用して、区画化された体積中の標的分子の存在または不在を示すことができる。
いくつかの事例では、デジタルアッセイまたはその一部は、等温ステップ、反応、またはアッセイを含み得る。等温ステップ、反応、またはアッセイは、複数の区画化された体積の1つ以上の区画化された体積を、ある特定の温度で、ある特定の温度を超えて、またはある特定の温度未満で維持することを含み得る。
本開示の別の態様は、融解曲線分析により標的分子間の遺伝的変異の存在を決定するための方法およびシステムを含む。遺伝的変異は、2つの分子間(例えば、対照分子と標的分子との間)の遺伝的突然変異、遺伝的多型、または後成的差異を含み得る。いくつかの事例では、融解曲線分析を使用して、操作されたまたはデノボ突然変異を検出、検証、もしくは特定するか、接合性について試験するか、核酸分子の後成的状態を試験するか、または遺伝配列の存在に基づいて患者の状態を診断することができる。例えば、融解曲線分析試験を使用して、患者が感染していると疑われているウイルスの種、株、または亜型を迅速に特定することができる。患者の診断は、融解曲線分析によって決定されるか、または本明細書に記載の任意の他の方法もしくはシステムを使用して決定される標的分子の存在、不在、同一性、または配列に基づき得る。融解曲線分析は、時間的融解曲線分析または空間的融解曲線分析であり得る。
プローブを使用して、デジタルアッセイにおいて標的分子を検出、特定、または定量化することができる。本明細書に記載の方法およびシステムによれば、デジタルアッセイの区画化された体積は、1つのプローブまたは複数のプローブを含み得る。区画化された体積は、複数の別個のプローブも含み得る。いくつかの事例では、区画化された体積は、少なくとも2、少なくとも5、少なくとも10、少なくとも20、少なくとも50、少なくとも100、少なくとも200、少なくとも500、または少なくとも1000個の別個のプローブを含み得る。いくつかの事例では、区画化された体積は、約2個の別個のプローブ、約5個の別個のプローブ、約10個の別個のプローブ、約20個の別個のプローブ、約50個の別個のプローブ、約100個の別個のプローブ、約200個の別個のプローブ、約500個の別個のプローブ、約1000個の別個のプローブ、またはプローブの前述の数量のうちのいずれか2つによって定義される範囲内のプローブ数を含み得る。
様々な態様では、デジタルアッセイは、検出可能な薬剤を含み得る。検出可能な薬剤は、蛍光分子または発光分子等の発色団を含み得る。
本開示によれば、プローブは、コード化粒子を含み得る。コード化粒子は、化学的または物理的に区別可能な特徴(複数可)でコード化され得る。本開示によるコード化粒子は、特徴的な検出可能なシグナルまたはコードによって検出および特定されるか、またはそれを生成することができる。いくつかの態様では、コード化粒子は、2つ以上の区別可能な特徴を有する化合物を含む。ある特定の態様では、コード化粒子は、分子の凝集体を含み、コード化粒子は、2つ以上の区別可能な特徴を有する。
様々なタイプの発色団ポリマー粒子は、本開示の光学的コード化および/または生体分子コード化アプローチのプラットホームとしての使用に好適である。発色団ポリマー粒子に関する本明細書におけるいずれの記述も本開示のコード化粒子に適用可能であることを理解されたい。コード化粒子は、均一の同種組成を有するモノリシックポリマー粒子または別個のコアおよびキャップ構造を有するポリマー粒子を含むが、これらに限定されない様々な構成を採用し得る。本明細書に提供されるコード化粒子は、沈殿に依存する方法、エマルジョン(例えば、ミニエマルジョンまたはマイクロエマルジョン)の形成に依存する方法、および凝縮に依存する方法を含むが、これらに限定されない当該技術分野で既知のいずれかの方法によって形成され得る。本明細書に記載の技法との使用に好適なさらなるコード化粒子組成物(例えば、発色団ポリマー粒子組成物)の例は、例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれる、PCT出願第PCT/US2010/056079号、同第PCT/US2012/071767号、同第PCT/US2011/056768号、同第PCT/US2013/024300号、および同第PCT/US2013/063917号、同第PCT/US2014/067471号、および米国特許出願第13/687,813号で見つけることができる。
コード化粒子は、有機材料または無機材料またはそれらの組み合わせを含み得る。例えば、コード化粒子は、有機−無機ハイブリッドを含み得る。いくつかの事例では、コード化粒子は、有機材料と無機材料との相互貫入網状組織を含み得る。本開示は、本明細書で「ハイブリッドコード化粒子」とも称される有機−無機ハイブリッドコード化粒子の様々な実施形態を提供する。いくつかの事例では、ハイブリッドコード化粒子は、ポリマードット(例えば、ハイブリッドポリマードット)であり得る。いくつかの実施形態では、有機−無機ハイブリッドコード化粒子は、有機網状組織および無機網状組織を含み得る。ある特定の実施形態では、有機網状組織は、少なくとも1つの有機種、例えば、本明細書に記載の発色団ポリマーのうちの1つ以上を含む。いくつかの事例では、無機網状組織は、少なくとも1つの無機種、例えば、シロキサン、アルミノ−シロキサン、チタン−シロキサン、酸化チタン、またはそれらの組み合わせを含み得る。ある特定の実施形態では、無機網状組織は、シロキサン網状組織(例えば、Si−O−Si結合を含む)、アルミノ−シロキサン網状組織(例えば、Al−O−Si結合を含む)、チタン−シロキサン網状組織(例えば、Ti−O−Si結合を含む)、酸化チタン網状組織(例えば、Ti−O−Ti結合を含む)、またはそれらの組み合わせであり得る。「シロキサン網状組織」および「シリカ(SiO2)網状組織」という用語は、本明細書において同義語として扱われる。本明細書に記載の方法、組成物、およびシステムとともに使用され得るシリカおよびハイブリッドコード化粒子(例えば、ハイブリッドポリマードット)のさらなる例は、全体が本明細書に組み込まれるPCT/US2017/037260で見つけることができる。
本明細書に記載のコード化粒子は、シロキサン網状組織、例えば、複数のSi−O−Si結合を含む網状組織を含み得る。シロキサン網状組織は、1つ以上のシランおよび/またはシロキサン種の完全または部分的加水分解によって形成され得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、シロキサン網状組織が疎水性相互作用等により半導体発色団ポリマーと物理的に会合しているハイブリッドコード化粒子を提供する。いくつかの実施形態では、シロキサン網状組織は、アルキレン、アルコキシ、アルケニル、アルケニレン、アルキニル、アルキニレン、アルキルアミン、シクロアルキル、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルキレンを含む。
いくつかの実施形態では、発色団ポリマーは、シロキサン網状組織と物理的に会合しているが、それに共有結合していない。例えば、様々な実施形態では、発色団ポリマーは、シラン官能化されておらず、ハイブリッドコード化粒子の相互貫入網状組織の官能化および形成は、発色団ポリマーのシロキサン網状組織のみとの物理的会合(例えば、疎水性相互作用)によって達成される。代替の実施形態では、発色団ポリマーは、本明細書の以下でより詳細に論じられるように、シロキサン網状組織にも共有結合し得る。
本明細書に記載のコード化粒子は、本明細書に記載の発色団ポリマータイプのうちの1つ以上等の様々なタイプの発色団ポリマーを含み得る。コード化粒子は、安定したサブミクロンサイズの粒子に崩壊された1つ以上の発色団ポリマー(例えば、半導体発色団ポリマー)を含み得る。
本開示のいくつかの態様では、本明細書に記載のコード化粒子は、1つ以上のランタニド材料を含む。ランタニド材料は、ランタニドイオン、ランタニド錯体、またはランタニドナノ粒子であり得る。ある特定の態様では、ランタニド材料は、ランタニド発色団である。いくつかの態様では、本開示は、ランタニドイオンの特有の発光特性、例えば、環境によって容易に影響されないそれらの狭い発光帯域幅、長い寿命、および安定したf−f遷移を利用する。したがって、コンジュゲートポリマーナノ粒子または他のタイプの発色団ポリマー粒子中に組み込まれると、ランタニドイオンはそれらの個々の発光を維持し、それらの発光強度が独立してまたは半独立して調節され得る。これらの特有の特性に基づいて、本開示は、ハイスループット生物分析のための改善されたコード化技術を提供する。
様々な態様では、本開示のコード化粒子は、1つ以上の発色団色素、例えば、蛍光色素、発光色素、またはそれらの組み合わせを含む。発色団色素は、小分子色素であり得る。ある特定の態様では、本開示のコード化粒子は、本明細書に記載の少なくとも1つのタイプの発色団ポリマーおよび少なくとも1つのタイプの発色団色素を含み得る。発色団ポリマーおよび/または発色団色素の光学的特性を所望通りに変化させることができる。いくつかの態様では、発色団ポリマーは蛍光性であり、それにより、ポリマー蛍光および発色団色素発光の両方がコード化に使用されるようになり得る。いくつかの態様では、発色団ポリマーは、弱蛍光性であるか、または著しくクエンチされ、それにより、ランタニド材料のみがコード化に使用されるようになる。ある特定の態様では、発色団色素のピーク発光波長は、発色団ポリマーのピーク発光波長よりも長い。他の態様では、発色団色素のピーク発光波長は、発色団ポリマーのピーク発光波長よりも短い。
いくつかの態様では、本明細書に提供されるコード化粒子は、高分子電解質コーティングを有し得る。有利に、高分子電解質コーティングは、例えば、高いイオン強度を有するか、二価金属イオンを含有するか、またはそれらの両方である溶液中のポリマー粒子のコロイド安定性を改善することができる。高分子電解質コーティングを有しないいくつかのポリマー粒子と比較して改善されたコロイド安定性は、例えば、ポリマー粒子がそれらの官能性を失うことなくアッセイに使用されることを可能にする。ある特定の態様では、高分子電解質コーティングの組成構成は、溶液、例えば、高イオン強度溶液中のポリマー粒子の凝集を低減または排除するように調整され得る。加えて、ある特定の条件下で、溶液中のイオン(例えば、二価イオン)は、ポリマー粒子の表面上のキレート基であり得、それにより、凝集特性に影響を及ぼし得る。いくつかの態様では、高分子電解質コーティングは、溶液中のポリマー粒子の凝集を低減または排除するために使用される。
いくつかの態様では、本開示は、生体分子コード化のための官能化されたコード化粒子を提供する。官能化された粒子は、コード化粒子と、その粒子に物理的または化学的に結合した官能基とを含む。
いくつかの態様では、コード化粒子を調製する方法が開示される。いくつかの態様では、発色団ポリマー粒子は、ナノ沈殿を使用して形成され得る。ナノ沈殿法は、溶解度の変化によりポリマーが崩壊されて粒子形態になる、良溶媒中のポリマー溶液の貧溶媒中への導入を伴う。ある特定の態様では、発色団ポリマー粒子は、ミニエマルジョン法、溶媒混合法、エマルジョンを使用する方法、または沈殿法を使用して調製され得る。本明細書に記載の方法およびシステムとの使用のためのコード化粒子を調製するためのこれらおよび他の方法の例は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるPCT出願第WO2015/081126号で見つけることができる。
本明細書で使用されるとき、「検出可能なコード」とは、分子(例えば、コード化粒子または発色団)によって独力でまたは電磁放射線源による励起等の刺激に応答して生成された特定可能または定量化可能なシグナルを指し得る。コード化粒子によって生成された検出可能なコードは、光学的に検出可能なコードを含み得る。いくつかの事例では、光学的に検出可能なコードは、蛍光シグナル(例えば、ポリマードット、量子ドット、またはフルオロフォア等の蛍光分子によって生成されたもの)であり得る。いくつかの事例では、光学的に検出可能なコードは、発光シグナルであり得る。いくつかの事例では、検出可能なコードは、比色シグナル、例えば、酵素色素によって生成され得るものであり得る。
いくつかの態様では、本開示は、光学的コード化系を提供する。ある特定の態様では、光学的コード化系は、互いに区別可能な光学的に検出可能なコードを有する第1のコード化粒子および第2のコード化粒子を含む。ある特定の態様では、この系は、複数のコード化粒子を含み、これらのうちの少なくともいくつかは、互いに区別可能な光学的に検出可能なコードを有する。
<区画化された体積>
ある特定の態様では、本方法およびシステムを使用して、区画化された体積中の試料を分析することができる。「デジタル化された体積」という用語は、アッセイのための調製において初期試料を得てこれを物理的に別個のより小さい体積に分類する前に生成された体積を指す。
区画化された体積は、無作為にまたはマイクロ流体の制御された適用のいずれかにより、様々な方法で作製され得る。いくつかの事例では、区画化された体積は、チャネルと区画との網状組織を含み得るマイクロ流体デバイスを通して流体(例えば、水相)を流すことによって生成され得る。例えば、区画化された体積を生成する方法は、油相が予充填された自己デジタル化デバイス(例えば、チャンバまたはウェルのアレイを含むマイクロ流体チップ等)を備えるマイクロ流体デバイスを通して水相を流し、その後、そのデバイスを通して追加の油相を流すことを含み得る。水相を流すことにより、油相が区画から移動し得る。いくつかの事例では、デバイスを通して追加の油相を流すことにより、残りの水相がチャネルから移動し得る。いくつかの事例では、デバイスを通して水相を流した後にデバイスを通して追加の油相を流すことにより、水相がデバイスの1つ以上のチャンバ内に「キャップ」および区画化され得る。例えば、デバイスを通して水相を流した後にデバイスを通して追加の油相を流すことにより、水相がデバイスのチャンバの一部内に捕捉され得る。
本開示の別の態様は、本開示の方法を行うためのデバイスを含む。この態様によれば、本開示は、体積分布を有する複数の区画化された体積を生成するための手法、複数の区画化された体積における所与の区画化された体積の体積を測定するための手法、区画化された体積中の試料の存在または不在を決定するための手法、および複数の区画化された体積中の試料の濃度を決定するための手法を提供する。本方法は、広ダイナミックレンジにわたるデジタル測定の実行、ならびにダイナミックレンジを増大させるための方法およびシステムの実行を可能にする。具体的には、本デバイスは、とりわけ、異なるサイズの試料体積を作製することによって試料のデジタル測定のダイナミックレンジを増大させる。
本明細書に記載のシステムは、複数の区画化された体積を収容する容器(例えば、試料保持器)、試料、標的分子、複数の区画化された体積のうちの少なくとも1つの区画化された体積中に含有されるコード化粒子もしくは指標、またはメモリデバイスを備えるコンピュータを含み得る。任意に、本システムは、区画化された体積のサイズ(すなわち、区画化された体積の体積)を検出するための検出器も含み得る。デジタルアッセイを行うためのシステムは、熱エネルギーを1つ以上の区画化された体積に適用するように構成された加熱要素も含み得る。
本明細書で使用される試料は、デジタルアッセイの成分であり得る。試料またはその一部は、区画化された体積(例えば、デジタル化された体積)にアリコート、分割、または別様に分けられ得る。試料は、均一溶液または不均一混合物を含み得る。試料は、対象(例えば、動物、植物、または単細胞生物)由来の組織、細胞、流体、標的分子、またはそれらの組み合わせを含み得る。例えば、試料は、血液、血清、血漿、尿、便、リンパ液、唾液、または脳脊髄液を含み得る。いくつかの事例では、試料は、処理(例えば、濾過、精製、均質化、濃縮、希釈、または区画化)され得るか、または増大され得る(例えば、分子、酵素、クエンチャー、プローブ、内部標準、検出可能な薬剤、または増幅試薬等の他の試薬の添加により)。
区画化された体積は、容器内に位置し得る。容器(container)は、区画化された体積を個別の体積として維持することができる容器(vessel)を含み得る。容器は、(例えば、検出可能なシグナルまたはコードの検出中に)区画化された体積または複数の区画化された体積を保持するように構成され得る。例えば、容器は、試験管、試料管、毛細管、ピペットもしくはピペットチップ、マルチウェルプレート(例えば、マイクロタイタープレート)のウェル、またはマイクロ流体チップであり得る自己デジタル化チップ内のチャンバを含み得る。いくつかの事例では、容器は、複数の区画化された体積を収容する。例えば、自己デジタル化チップまたはマイクロ流体チップは、各チャンバが区画化された体積を含み得る複数のチャンバを含み得る。マルチウェルプレートも、各ウェルが区画化された体積を含み得る複数のウェルを含み得る。管、チャネル、または管類の長さは、例えば、疎水性力によって分離される複数の区画化された体積を収容し得る。いくつかの点で、容器は、チップを含み得るか、または、チップ内のチャンバ等のチップのある領域を含み得る。チップは、自己デジタル化チップを含み得る。本明細書に記載の方法およびシステムと使用され得る自己デジタル化チップ等の容器の例は、参照により全体が組み込まれるWO2012/100198で見つけることができる。
本開示の方法およびシステムは、区画化された体積のおよび/または本明細書に記載の方法およびシステムに使用される任意の分子もしくは試薬の温度を制御するための温度制御装置(温度制御デバイスを含み得る)を含み得る。したがって、制御された(例えば、調節された)温度は、標的温度または温度設定点を定義することによって区画化された体積および/またはその内容物に適用され得る。区画化された体積(例えば、細胞、分子、または検出可能な薬剤)の温度を制御することにより、増幅の程度および効率(例えば、核酸の合成、伸長、アニーリング、または融解を含むデジタルプロセスの任意のステップまたはプロセス)が改善または最適化され得る。
温度制御デバイスは、熱電対および/またはペルチェヒートポンプを備え得る。温度制御デバイスは、温度制御デバイス(温度を上昇させる手段、温度を検出する手段、および/または温度を低下させる手段を含み得る)を容器内に組み込むことによって、または温度制御デバイスを区画化された体積に近接して位置付けることによって、または容器または区画化された体積周辺の温度を制御することによって、区画化された体積またはその内容物(例えば、プローブまたは標的分子)の温度を制御するために(例えば、手動でまたはコンピュータプロセッサで実行可能なプログラムによって)使用され得る。コンピュータプロセッサの制御フィードバックループ、熱電対等の温度検出要素、および加熱要素または冷却要素を介して、区画化された体積またはその内容物の温度は、温度設定点に対して測定され得る、0.25℃以下、0.5℃以下、0.75℃以下、1℃以下、2℃以下、3℃以下、4℃以下、または5℃以下の変動で制御され得る。
画像化源は、本明細書に記載の画像化デバイスおよび画像化源のうちのいずれかを含み得る。画像化源は、例えば、光学的画像化源を含み得る。画像化源は、共焦点顕微鏡法、線共焦点顕微鏡法、デコンボリューション顕微鏡法、スピニングディスク顕微鏡法、多光子顕微鏡法、平面照明顕微鏡法、ベッセルビーム顕微鏡法、微分干渉コントラスト顕微鏡法、位相コントラスト顕微鏡法、落射蛍光顕微鏡法、明視野画像化、暗視野画像化、斜照明、またはそれらの組み合わせのうちの1つ以上を行うように構成され得る。
本明細書で論じられるように、本開示は、複数の区画化された体積のうちの1つの区画化された体積中の体積および標的分子の存在または不在を分析するように構成された検出システムを含む。検出システムは、ユーザーによって操作されるように構成されたコンピューティングデバイス、コンピューティングデバイスによって操作されるように構成された画像化源、および画像化プラットホームまたは源によって画像化されるように構成されており、かつ画像化および分析される区画化された体積系またはエマルジョン系を含有し得るマルチウェルプレートを備え得る。検出システムは、ユーザーによって操作されるように構成されたコンピューティングデバイス、コンピューティングデバイスによって操作されるように構成された画像化源、および画像化プラットホームまたは源によって画像化されるように構成されており、かつ画像化および分析される区画化された体積系またはエマルジョン系を含有し得るマイクロ流体チップを備え得る。
様々な態様では、本開示は、本明細書に記載のライン走査法、単純境界法、逆流域法、円検出法、逆流域と円検出との組み合わせ法、またはそれらの組み合わせ等の区画化された体積を特定、選択、または分析する(例えば、区画化された体積の寸法またはサイズを決定する)ための多くの方法を提供する。いくつかの態様では、区画化された体積を検出または認識する方法は、試料濃度を決定するための方法に非依存的であり得る。すなわち、区画化された体積を検出または認識する方法は、本明細書に記載のデジタルアッセイを行う以外の多くの目的に使用され得る。本明細書に記載のシステムおよび方法と使用するための画像検出法および画像分析法の例は、全体が本明細書に組み込まれるWO2015/157369およびWO2012/100198で見つけることができる。
いくつかの態様では、区画化された体積が特定され、それらのサイズが決定された後、検出可能なシグナルまたはコード(例えば、発光強度、発光波長、発光寿命、またはスペクトル強度)を使用して、標的分子が区画化された体積中に存在するか、または存在したかを決定することができる。
コンピューティングデバイスは、本明細書に記載の方法のうちの1つ以上を実装するようにプログラミングされ得る。コンピューティングデバイスは、例えば、パーソナルコンピュータ、ワークステーション、またはサーバーを備え得る。コンピューティングデバイスは、プロセッサ、コンピュータプロセッサ、シングルコアもしくはマルチコアプロセッサであり得る中央処理装置もしくはCPU、または並列処理のための複数のプロセッサを含む。
本明細書に記載の方法、システム、キット、およびデバイスは、多重化および自動化戦略の使用により、速度および効率に関してさらに改善され得る。多重化アプローチにおいて、複数の容器(例えば、試験管、マイクロタイタープレート、デジタルアッセイチップ等)は、矢継早に処理され得る(例えば、本明細書に記載されるように、試薬および標的分子が充填され、撹拌されて区画化された体積を形成し、増幅ラウンドが周期的に繰り返され、融解曲線加熱プロトコルに供され、スペクトル強度の差について監視され、液滴毎に測定および計数され、液滴毎に値が割り当てられ得る)。多重化を容易にするために、基板が積み重ねられ、各ステップのために基板を個別に適所に移動させることができる移動可能な試料トレイを介して増幅および画像化プロセス(例えば、充填、撹拌、加熱、標識、検出、定量化等)の個々のステップのために適所に移動し得る。この各ステップのための基板の適所への移動は、試料トレイを動作させるギアを含み得、このギアは、事前に確立されたプログラムの一部としてコンピュータプロセッサによって動作し得、これは、次いで、実験に使用される個々のプロトコルまたは検出可能な薬剤のためにカスタマイズされ得る。いくつかの実施形態では、所与のデジタルアッセイプロトコルにおける複数のステップは、ステップ間で基板の移動を必要とすることなく同じ場所で起こり得る。
多重化デジタルアッセイの効率は、検出可能なシグナルまたはコードについて区画化された体積中に位置する各プローブまたはコード化粒子を個別に評価するのではなく、検出可能なシグナルまたはコードの存在について各区画化された体積を全体として評価することによって改善され得る。区画化された体積中の複数の検出可能なコードまたはシグナルを粒子(または粒子のクラスターもしくは粒子の凝集体)数に基づいて解像する(例えば、検出する)ことができる画像化レンズ(例えば、顕微鏡対物レンズ)が、本明細書に記載されるように、デジタルアッセイの検出ステップ中に使用され得る。ハイスループット多重化ワークフローが本明細書に記載されるようにデジタルアッセイに使用される場合、各区画化された体積を全体として評価するように設計または最適化された検出スキームを用いることが有利であり得る。すなわち、区画化された体積中の複数の検出可能なコードまたはシグナルを個別に解像するのに必要な方法およびシステムを用いる(例えば、金銭的に、コンピュータ的に、または時間的に費用のかかるものであり得る、個々のプローブの検出可能なシグナルを解像および/または定量化することができる高倍率対物レンズおよび/またはソフトウェアを使用する)のではなく、区画化された体積を全体として画像化および評価(例えば、検出および分析)するように設計された方法およびシステムが使用され得る。したがって、個々の区画化された体積は、全体として評価され、区画化された体積中の検出可能なコードまたはシグナルが閾値を満たすか、またはそれを超える(例えば、増幅ステップ前に区画化された体積を検出することによって確立されたベースライン値と比較して)かに基づいて二進値が割り当てられ得る。いくつかの事例では、複数の区画化された体積は、同時に検出および/または分析され得る。結果として、多重化デジタルアッセイの全体的な効率が、各区画化された体積を全体として評価することによって複数の区画化された体積中の検出可能なコードまたはシグナルを検出することによって改善され得る。
本開示は、本明細書に記載のデジタルアッセイを行うための組成物およびキットを提供する。ある特定の態様では、デジタル核酸分析、デジタルPCR、融解曲線、または等温アッセイ等のデジタルアッセイを行うためのキットおよびアッセイが提供される。
デジタルPCRにおけるコード化粒子を有する標的分子を検出するための方法
本実施例は、本開示の一態様による、デジタルPCRを使用して標的分子の標的配列を検出する際にコード化ポリマードットナノ粒子を使用するための例示的な方法を提供する。
クエンチャーコンジュゲートポリマードットプローブを使用したデジタルPCRのための方法
本実施例は、本開示の一態様による、デジタルPCRおよびクエンチャーコンジュゲートポリマードットを使用して標的分子を検出するための方法を提供する。
自己アニーリング結合領域を有するクエンチャーコンジュゲートポリマードットプローブを使用したデジタルPCR法
本実施例は、本開示の一態様による、デジタルPCRおよび自己アニーリング結合領域を有するクエンチャーコンジュゲートポリマードットを使用して標的分子の濃度を決定するための方法を提供する。
増幅媒介クエンチャー競合を使用したデジタルPCRのための方法
本実施例は、本開示の一態様による、増幅媒介クエンチャー競合を伴うデジタルPCR法を使用して標的分子を検出および定量化するための方法を提供する。
競合的ハイブリダイゼーションを使用したデジタルPCRのための方法
本実施例は、本開示の一態様による、デコイ媒介競合的ハイブリダイゼーションを使用したデジタルPCRを使用して標的分子を検出および定量化するための方法を提供する。
プローブ内および/またはプローブ間増幅ならびにハイブリダイゼーションを使用したデジタルPCRのための方法
本実施例は、本開示の一態様による、デジタルPCRおよび一致したプライマー組にコンジュゲートしたポリマードットを使用して標的分子を検出および定量化するための方法を提供する。
ポリメラーゼ誘導分子切断を使用したデジタルPCRのための方法
本実施例は、本開示の一態様による、デジタルPCRおよびクエンチャーコンジュゲートポリマードットを使用して標的分子を検出および定量化するための方法を提供する。
プローブ間ハイブリダイゼーションを使用したデジタルPCRのための方法
本実施例は、本開示の一態様による、デジタルPCRおよび相補的ポリマードットプローブを使用して標的分子を検出および定量化するための方法を提供する。
不均衡プローブ間ハイブリダイゼーションを使用したデジタルPCRのための方法
本実施例は、本開示の一態様による、不均衡結合領域の組を有するデジタルPCRおよびクエンチャーコンジュゲートポリマードットを使用して標的分子を検出および定量化するための方法を提供する。
ローリングサークル増幅を使用したデジタルPCRのための方法
本実施例は、本開示の一態様による、デジタルPCRおよびクエンチャーコンジュゲートポリマードットを使用して標的分子を検出するための方法を提供する。
空間的融解曲線分析のための方法
本実施例は、本開示の一態様による、デジタル空間的融解曲線分析を使用して標的分子の配列を決定するための方法を提供する。
区画化された体積中の複数の検出可能なシグナルを個別に検出するための方法
本実施例は、本開示の一態様による、複数の検出可能なコードを個別に検出することによって標的分子を定量化するための例示的な方法を提供する。
区画化された体積中の検出可能なシグナルの存在を決定するための方法
本実施例は、本開示の一態様による、1区画化された体積あたりの自己デジタル化チップの複数のチャンバ内の検出可能なコードを検出することによって標的分子を定量化するための例示的な方法を提供する。
ハイブリッド相互貫入SiO2−Pdotに基づいてプローブを生成するための方法
本実施例は、ハイブリッド相互貫入SiO2−Pdotを使用してプローブを生成するための例示的な方法を提供する。
デジタルPCRおよび単一プローブ画像化およびデコード化のための方法
本実施例は、ハイブリッド相互貫入SiO2−Pdotを使用してデジタルPCRを行うための、かつ個々のハイブリッド相互貫入SiO2−Pdotの単一粒子画像化およびデコード化のための例示的な方法を提供する。
プローブ間ハイブリダイゼーションを使用した多重化デジタルPCRのための方法
本実施例は、Pdot−DNプローブのプローブ間ハイブリダイゼーションを使用してデジタルPCRを行うための例示的な方法を提供する。
空間的融解曲線分析のためにSDチップの温度を変化させるための方法
本実施例は、空間的融解曲線分析のためにSDチップの温度を制御するための例示的な方法を提供する。
Claims (96)
- デジタルアッセイを行う方法であって、前記方法は、
複数の区画化された体積を提供することであって、
前記複数の区画化された体積における各区画化された体積がプローブを含み、各プローブが、コード化粒子と、標的分子または前記標的分子の存在と相関している分子に結合することができる結合領域とを含み、前記コード化粒子が、3nmを超える少なくとも1つの寸法を有し、
前記複数の区画化された体積における前記区画化された体積のうちの少なくともいくつかが前記標的分子を含む、提供することと、
前記標的分子を増幅することと、
前記区画化された体積中のコード化粒子によって放出された光学的に検出可能なコードを検出することであって、前記光学的に検出可能なコードの前記検出が、前記標的分子が前記区画化された体積中に存在することを示す、検出することと、を含む、方法。 - デジタルアッセイを行う方法であって、前記方法は、
複数の区画化された体積を提供することであって、
前記複数の区画化された体積における各区画化された体積がプローブを含み、各プローブが、コード化粒子と、標的分子または前記標的分子の存在と相関している分子に結合することができる結合領域とを含み、前記コード化粒子が、3nmを超える少なくとも1つの寸法を有し、
前記複数の区画化された体積における前記区画化された体積のうちの少なくともいくつかが前記標的分子を含む、提供することと、
前記標的分子の存在と相関している分子を増幅することと、
前記区画化された体積中のコード化粒子によって放出された光学的に検出可能なコードを検出することであって、前記光学的に検出可能なコードの前記検出が、前記標的分子が前記区画化された体積中に存在することを示す、検出することと、を含む、方法。 - 前記光学的に検出可能なコードが、(i)発光ピーク波長、(ii)所与の波長での発光ピーク強度、(iii)発光ピークスペクトル強度、(iv)発光寿命、および(v)吸光度ピーク波長のうちの少なくとも1つを含む、請求項1または2に記載の方法。
- 前記光学的に検出可能なコードが、(i)発光ピーク波長、(ii)所与の波長での発光ピーク強度、(iii)発光ピークスペクトル強度、(iv)発光寿命、および(v)吸光度ピーク波長のうちの少なくとも2つを含む、請求項1または2に記載の方法。
- 前記光学的に検出可能なコードが、(i)発光ピーク波長、(ii)所与の波長での発光ピーク強度、(iii)発光ピークスペクトル強度、(iv)発光寿命、および(v)吸光度ピーク波長のうちの少なくとも3つを含む、請求項1または2に記載の方法。
- 前記光学的に検出可能なコードが、(i)発光ピーク波長、(ii)所与の波長での発光ピーク強度、(iii)発光ピークスペクトル強度、(iv)発光寿命、および(v)吸光度ピーク波長のうちの少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9、または少なくとも10個を含む、請求項1または2に記載の方法。
- 前記光学的に検出可能なコードが、(i)、(ii)、(iii)、(iv)、もしくは(v)から選択される単一タイプの光学的に検出可能なコード、または(i)、(ii)、(iii)、(iv)、および(v)から選択される組み合わせタイプの光学的に検出可能なコードであり得る、請求項4〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記光学的に検出可能なコードが、少なくとも2個の発光ピーク、少なくとも3個の発光ピーク、少なくとも4個の発光ピーク、少なくとも5個の発光ピーク、少なくとも6個の発光ピーク、少なくとも7個の発光ピーク、少なくとも8個の発光ピーク、少なくとも9個の発光ピーク、または少なくとも10個の発光ピークを有する、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記コード化粒子が、(i)発光ピーク波長、(ii)所与の波長での発光ピーク強度、(iii)発光ピークスペクトル強度、(iv)発光寿命、および(v)吸光度ピーク波長のうちの少なくとも1つによって特徴付けられる、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記コード化粒子が、(i)発光ピーク波長、(ii)所与の波長での発光ピーク強度、(iii)発光ピークスペクトル強度、(iv)発光寿命、および(v)吸光度ピーク波長のうちの少なくとも2つによって特徴付けられる、請求項1または2に記載の方法。
- 前記コード化粒子が、(i)発光ピーク波長、(ii)所与の波長での発光ピーク強度、(iii)発光ピークスペクトル強度、(iv)発光寿命、および(v)吸光度ピーク波長のうちの少なくとも3つによって特徴付けられる、請求項1または2に記載の方法。
- 前記コード化粒子が、(i)発光ピーク波長、(ii)所与の波長での発光ピーク強度、(iii)発光ピークスペクトル強度、(iv)発光寿命、および(v)吸光度ピーク波長のうちの少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9、または少なくとも10個によって特徴付けられる、請求項1または2に記載の方法。
- 前記コード化粒子が、(i)、(ii)、(iii)、(iv)、もしくは(v)から選択される単一タイプの特性、または(i)、(ii)、(iii)、(iv)、および(v)から選択される組み合わせタイプの特性によって特徴付けられる、請求項9〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記コード化粒子が、少なくとも2個の発光ピーク、少なくとも3個の発光ピーク、少なくとも4個の発光ピーク、少なくとも5個の発光ピーク、少なくとも6個の発光ピーク、少なくとも7個の発光ピーク、少なくとも8個の発光ピーク、少なくとも9個の発光ピーク、または少なくとも10個の発光ピークによって特徴付けられる、請求項9〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 各プローブの前記光学的に検出可能なコードを検出することが、前記検出可能なコードのスペクトル強度を測定することを含む、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記区画化された体積が、前記複数の区画化された体積中に存在する少なくとも1つの他のコード化粒子とは別個の光学的に検出可能なコードを含む少なくとも1つのコード化粒子を含む、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記区画化された体積が、前記複数の区画化された体積中に存在する少なくとも1つの他のコード化粒子とは別個の光学的に検出可能なコードを各々含む複数のコード化粒子を含む、請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記光学的に検出可能なコードの前記スペクトル強度に基づいて前記区画化された体積中の前記標的分子の存在を決定することをさらに含む、請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記発光ピーク強度を検出することが、複数の発光波長を検出することを含む、請求項3〜18のいずれか一項に記載の方法。
- 前記発光ピーク強度が、前記発光ピークのピーク最大値で測定される、請求項3〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記検出可能なコードのスペクトル強度を測定することが、0.01〜100、0.05〜50、0.1〜10、1〜100、1〜50、1〜40、1〜30、1〜20、1〜10、1〜9、1〜8、1〜7、1〜6、1〜5、1〜4、1〜3、1〜2、0〜10、0〜9、0〜8、0〜7、0〜6、0〜5、0〜4、0〜3、0〜2、または0〜1の異なる発光波長範囲で発光強度の比率を測定することを含む、請求項3〜20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記光学的に検出可能なコードが、発光シグナルまたは蛍光シグナルを含む、請求項1〜21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数の区画化された体積が、複数のプローブを含み、
各区画化された体積が、少なくとも1つのプローブを含み、
前記複数のプローブの第1の別個のプローブが、前記複数のプローブの第2の別個のプローブの結合領域とは別個の結合領域を含み、
前記複数のプローブの前記第1の別個のプローブが、前記複数のプローブの前記第2の別個のプローブの光学的に検出可能なコードとは別個の光学的に検出可能なコードを放出することができるコード化粒子を含む、請求項1〜22のいずれか一項に記載の方法。 - 各別個のプローブの前記光学的に検出可能なコードが、発光ピークスペクトル強度、発光ピーク波長、吸収ピーク波長、励起ピーク波長、発光寿命、またはそれらの組み合わせの特有の組を含む、請求項23に記載の方法。
- 複数の別個の標的分子の存在を検出することをさらに含む、請求項1〜24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数の区画化された体積のうちの1つの区画化された体積が、少なくとも2、5、10、20、50、100、200、500、1000個の別個のプローブを含む、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
- コード化粒子がマトリックスを含む、請求項1〜26のいずれか一項に記載の方法。
- コード化粒子が発色団を含む、請求項1〜27のいずれか一項に記載の方法。
- コード化粒子が複数の発色団を含む、請求項28に記載の方法。
- コード化粒子が少なくとも3つの色素単位を含む、請求項29に記載の方法。
- コード化粒子がポリマードットを含む、請求項1〜30のいずれか一項に記載の方法。
- 前記コード化粒子の前記マトリックスが、1つの発色団または複数の発色団である、請求項27〜31のいずれか一項に記載の方法。
- 前記コード化粒子の前記マトリックスが、無機材料、有機材料、またはそれらの組み合わせを含む、請求項27〜32のいずれか一項に記載の方法。
- 前記マトリックスが、シリカ、ケイ酸塩、二酸化チタン、リン酸塩、ポリマー、またはそれらの組み合わせを含む、請求項27〜33のいずれか一項に記載の方法。
- 前記マトリックスが半導体ポリマーを含む、請求項34に記載の方法。
- 前記マトリックスが、ポリスチレン(PS)またはポリ(メタクリル酸メチル)(PMMA)を含む、請求項34または35に記載の方法。
- 前記発色団が、無機材料、有機材料、またはそれらの組み合わせを含む、請求項28〜36のいずれか一項に記載の方法。
- 前記コード化粒子が、有機材料と無機材料との相互貫入網状組織を含む、請求項1〜37のいずれか一項に記載の方法。
- 前記発色団が、色素、小分子色素、ポリマー、金属錯体、半導体ナノ結晶、半導体ポリマー、またはそれらの組み合わせを含む、請求項28〜38のいずれか一項に記載の方法。
- 前記発色団が、蛍光発色団または発光発色団である、請求項28〜39のいずれか一項に記載の方法。
- 前記コード化粒子が、3nm〜1000nm、10nm〜500nm、25nm〜250nm、50nm〜100nm、10nm〜50nm、10nm〜30nm、10nm〜20nm、または5nm〜15nmの少なくとも1つの寸法を有する、請求項1〜40のいずれか一項に記載の方法。
- プローブがクエンチャーをさらに含み、前記クエンチャーが、前記標的分子の不在下で、または前記標的分子の増幅前に、前記光学的に検出可能なコードの強度を低減する、請求項1〜41のいずれか一項に記載の方法。
- 前記クエンチャーが、前記プローブの結合領域に結合される、請求項42に記載の方法。
- 前記クエンチャーが、前記プローブの結合領域に結合することができる、請求項42または請求項43に記載の方法。
- 前記増幅中または前記増幅後に前記コード化粒子と前記クエンチャーとの間の距離を増加させることをさらに含む、請求項42〜44のいずれか一項に記載の方法。
- 前記クエンチャーと前記コード化粒子との間の結合を切断することによって前記コード化粒子と前記クエンチャーとの間の距離を増加させることをさらに含む、請求項42〜45のいずれか一項に記載の方法。
- 前記増幅することが、前記プローブの前記結合領域を切断することを含むか、またはそれを伴う、請求項1〜46のいずれか一項に記載の方法。
- 前記増幅することが、複数のコピーを生成することを含む、請求項1〜47のいずれか一項に記載の方法。
- 前記増幅することが、前記標的分子の存在と相関している前記分子の複数のコピーを生成することを含む、請求項48に記載の方法。
- 増幅することが、増幅産物を作製することを含む、請求項1〜49のいずれか一項に記載の方法。
- 前記増幅することが、前記プローブの前記結合領域を切断することを含むか、またはそれを伴う、請求項1〜50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記結合領域が、前記標的分子または前記標的分子の存在と相関している前記分子にハイブリダイズするように構成された核酸を含む、請求項1〜51のいずれか一項に記載の方法。
- 前記結合領域の第1の部分が、前記結合領域の第2の部分とハイブリダイズすることができる、請求項1〜52のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数の区画化された体積における各区画化された体積が、複数のプローブを含み、少なくとも1つのプローブが、
前記区画化された体積中の少なくとも1つの他のプローブと同じ別個の標的分子または同じ別個の標的分子の存在と相関している前記分子に結合するように構成された結合領域と、
前記区画化された体積中の前記少なくとも1つの他のプローブと同じ光学的に検出可能なコードを放出することができるコード化粒子と、を含む、請求項1〜53のいずれか一項に記載の方法。 - 前記複数の区画化された体積における各区画化された体積が、複数のプローブを含み、各プローブが、
前記区画化された体積中の少なくとも1つの他のプローブとは異なる別個の標的分子または異なる別個の標的分子の存在と相関している前記分子に結合するように構成された結合領域と、
前記区画化された体積中の前記少なくとも1つの他のプローブとは異なる光学的に検出可能なコードを放出することができるコード化粒子と、を含む、請求項1〜54のいずれか一項に記載の方法。 - プローブの第1の結合領域を伸長することをさらに含み、前記第1の結合領域を伸長することは、前記プローブが同じプローブの第2の結合領域にハイブリダイズすることを可能にする、請求項1〜55のいずれか一項に記載の方法。
- 結合領域を伸長することをさらに含み、前記結合領域を伸長することは、第1のプローブが第2のプローブの結合領域に結合することを可能にし、前記第1のプローブおよび前記第2のプローブが、同じ検出可能な光学的コードを生成することができる、請求項1〜56のいずれか一項に記載の方法。
- 結合領域を酵素の活性によって伸長することをさらに含み、前記複数の区画化された体積の各区画化された体積が前記酵素を含む、請求項1〜57のいずれか一項に記載の方法。
- 酵素の活性によって伸長された前記結合領域が、同じプローブの結合領域または異なるプローブの結合領域に結合することができ、別のプローブに結合した各プローブが、それが結合したプローブと同じ光学的に検出可能なコードを生成することができる、請求項58に記載の方法。
- 前記酵素がポリメラーゼである、請求項58または59に記載の方法。
- 前記増幅中または前記増幅後に前記複数のプローブの1つのプローブを前記複数のプローブの別のプローブと連結して、プローブ網状組織を形成することをさらに含み、前記連結することが、前記標的分子の存在下または前記標的分子の存在と相関している前記分子の存在下でのみ生じる、請求項1〜60のいずれか一項に記載の方法。
- 各プローブが、複数の異なる結合領域を含む、請求項1〜60のいずれか一項に記載の方法。
- 第1のプローブ上の第1の結合領域の第2の結合領域に対する比率が、同じタイプの第2のプローブ上の前記第1の結合領域の前記第2の結合領域に対する比率の1.0倍、1.05倍、1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9、times、2倍、2.5倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、または100倍である、請求項1〜62のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数の区画化された体積の各区画化された体積が、前記標的分子または前記標的分子の存在と相関している前記分子に結合することができる領域を含む環状化核酸を含み、
前記クエンチャーが、前記環状化核酸の増幅産物とハイブリダイズすることができる、請求項1〜63のいずれか一項に記載の方法。 - 前記環状化核酸をローリングサークル増幅によって増幅することをさらに含む、請求項64に記載の方法。
- 前記デジタルアッセイがデジタル核酸分析である、請求項1〜65のいずれか一項に記載の方法。
- 前記デジタル核酸分析がデジタルPCRを含む、請求項66に記載の方法。
- 前記デジタルアッセイが、少なくとも2、少なくとも5、少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも35、少なくとも40、または少なくとも45回の温度サイクルを含む、請求項1〜67のいずれか一項に記載の方法。
- 前記デジタルアッセイが等温アッセイである、請求項1〜68のいずれか一項に記載の方法。
- 前記等温アッセイが等温核酸増幅を含む、請求項69に記載の方法。
- 前記区画化された体積が、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃、71℃、72℃、73℃、74℃、または75℃で維持される、請求項69または請求項70に記載の方法。
- 前記区画化された体積が各々、20pL未満、15pL未満、10pL未満、5pL未満、4pL未満、3pL未満、2pL未満、または1pL未満の体積を有する、請求項1〜71のいずれか一項に記載の方法。
- デジタルアッセイシステムであって、前記デジタルアッセイシステムは、
複数の区画化された体積であって、
前記複数の区画化された体積における各区画化された体積が、
増幅試薬と、
コード化粒子と、標的分子または前記標的分子の存在と相関している分子に結合することができる結合領域とを含むプローブであって、前記コード化粒子が、3nmを超える少なくとも1つの寸法を有し、
前記複数の区画化された体積における前記区画化された体積のうちの少なくともいくつかが前記標的分子を含む、プローブと、を含む、複数の区画化された体積と、
1つ以上の区画化された体積中の前記コード化粒子によって生成された光学的に検出可能なコードを光学的に検出するように構成された検出器と、
プロセッサと、実行可能命令が記憶されたメモリデバイスとを備えるコンピュータであって、前記命令が、実行されると、前記プロセッサに、
前記検出器を動作させて、前記光学的に検出可能なコードを測定させ、
前記測定された光学的に検出可能なコードを記憶させ、かつ
前記測定された光学的に検出可能なコードを分析させる、コンピュータと、を備える、デジタルアッセイシステム。 - 前記光学的に検出可能なコードが、発光波長、発光スペクトル、発光寿命、発光強度、発光強度範囲、発光波長範囲、吸収スペクトル、吸収波長範囲、励起スペクトル、および励起波長範囲、またはそれらの組み合わせを含む、請求項73に記載のシステム。
- 前記光学的に検出可能なコードが、スペクトル強度を含む、請求項73または請求項74に記載のシステム。
- 前記コード化粒子がポリマードットを含む、請求項73〜75のいずれか一項に記載のシステム。
- 試料保持器が、前記光学的に検出可能なコードの前記検出中に前記複数の区画化された体積を保持することができる、請求項73〜76のいずれか一項に記載のシステム。
- 電磁放射線源をさらに備える、請求項73〜77のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記複数の区画化された体積のうちの少なくとも1つの区画化された体積の温度を制御することができる加熱要素をさらに備える、請求項73〜78のいずれか一項に記載のシステム。
- デジタル融解曲線アッセイを行う方法であって、前記方法は、
複数の容器内に分布した複数の区画化された体積を提供することであって、前記複数の前記区画化された体積における前記区画化された体積のうちの少なくともいくつかが標的分子を含む、提供することと、
熱エネルギー勾配を前記複数の区画化された体積に適用して、面積とともに変化する複数のアッセイ温度をもたらすことと、
前記標的分子または前記標的分子の存在と相関している分子の融解温度を、温度勾配の存在下で前記標的分子または前記標的分子の存在と相関している前記分子の前記デジタル融解曲線アッセイを行うことによって決定することと、を含む、方法。 - 可変熱エネルギーを前記複数の区画化された体積に適用して、時間とともに変化する複数のアッセイ温度をもたらすことをさらに含む、請求項80に記載の方法。
- 前記複数の容器が、マルチチャンバ自己デジタル化チップ、複数の液滴、マルチウェルマイクロ流体チップ、またはマルチウェルプレートを含む、請求項80に記載の方法。
- デジタル融解曲線アッセイを行う方法であって、前記方法は、
複数の区画化された体積を提供することであって、
前記複数の区画化された体積における各区画化された体積が、標的分子または前記標的分子の存在と相関している分子にハイブリダイズすることができる核酸を含み、
前記複数の前記区画化された体積における前記区画化された体積のうちの少なくともいくつかが前記標的分子を含む、提供することと、
前記標的分子を増幅して、増幅された分子を生成することと、
熱エネルギー勾配を前記複数の区画化された体積に適用して、面積とともに変化する複数のアッセイ温度をもたらすことであって、それにより、各区画化された体積における前記アッセイ温度が、
標的分子または増幅された分子の融解温度未満である場合、前記標的分子または前記増幅された分子の少なくとも50%がハイブリダイズされ、
前記標的分子または前記増幅された分子の融解温度を超える場合、前記標的分子または前記増幅された分子の50%未満がハイブリダイズされるようになる、もたらすことと、
前記ハイブリダイズされた標的分子または前記増幅された分子と会合している発色団によって生成された光学的に検出可能なシグナルを検出することであって、前記発色団が前記ハイブリダイズされた標的分子または前記増幅された分子と会合しているときに前記光学的に検出可能なシグナルが検出される、検出することと、
前記複数のアッセイ温度の前記アッセイ温度の各々での前記光学的に検出可能なシグナルの存在または不在または規模に基づいて前記標的分子または前記増幅された分子の融解温度を決定することと、を含む、方法。 - 前記標的分子が核酸である、請求項80〜83のいずれか一項に記載の方法。
- 可変熱エネルギーを前記適用することが、前記熱エネルギーを時間とともに変化させることを含む、請求項83に記載の方法。
- 前記可変熱エネルギーが時間とともに周期的に変化する、請求項81または85に記載の方法。
- 前記可変熱エネルギーが複数の個別の温度変化を含む、請求項81、85、または86のいずれか一項に記載の方法。
- 前記可変熱エネルギーが連続的な温度変化を含む、請求項81、85、または86のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アッセイ温度が、前記複数の区画化された体積の前記区画化された体積に存在する温度である、請求項81〜88のいずれか一項に記載の方法。
- 可変熱エネルギーを前記複数の区画化された体積に前記適用することが、1分間〜90分間、5分間〜60分間、10分間〜30分間、または10分間〜20分間の時間にわたって行われる、請求項81〜89のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アッセイ温度が、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃、71℃、72℃、73℃、74℃、75℃、76℃、77℃、78℃、79℃、80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃、86℃、87℃、88℃、89℃、または90℃から選択される、請求項81〜90のいずれか一項に記載の方法。
- 前記発色団が蛍光発色団である、請求項80〜91のいずれか一項に記載の方法。
- 前記発色団がインターカレート色素を含む、請求項92に記載の方法。
- 各区画化された体積が、100nL以下、50nL以下、25nL以下、10nL以下、9nL以下、8nL以下、7nL以下、6nL以下、5nL以下、4nL以下、3nL以下、2nL以下、または1nL以下の体積を有する、請求項80〜93のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的分子の融解温度に基づいて前記標的分子中の突然変異の存在を特定することをさらに含む、請求項80〜94のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的分子の融解温度に基づいて患者を診断することをさらに含む、請求項80〜95のいずれか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762581429P | 2017-11-03 | 2017-11-03 | |
US62/581,429 | 2017-11-03 | ||
PCT/US2018/058803 WO2019089996A1 (en) | 2017-11-03 | 2018-11-01 | Digital nucleic acid amplification using encoded particles |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021501597A true JP2021501597A (ja) | 2021-01-21 |
JP2021501597A5 JP2021501597A5 (ja) | 2021-10-28 |
JP7333634B2 JP7333634B2 (ja) | 2023-08-25 |
Family
ID=66332339
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020524560A Active JP7333634B2 (ja) | 2017-11-03 | 2018-11-01 | コード化粒子を使用したデジタル核酸増幅 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11753681B2 (ja) |
EP (1) | EP3704059A4 (ja) |
JP (1) | JP7333634B2 (ja) |
CN (1) | CN111683897A (ja) |
WO (1) | WO2019089996A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2019144050A2 (en) * | 2018-01-22 | 2019-07-25 | University Of Washington | Methods of performing digital nucleic acid amplification using polybutene |
US11305284B2 (en) * | 2018-11-26 | 2022-04-19 | Tokitae, LLC | Determining a bulk concentration of a target in a sample using a digital assay with compartments having nonuniform volumes |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010524430A (ja) * | 2006-11-29 | 2010-07-22 | キヤノン ユー.エス. ライフ サイエンシズ, インコーポレイテッド | デジタル式マルチプレックスpcrアッセイに関する機器及び方法 |
JP2014500891A (ja) * | 2010-10-18 | 2014-01-16 | ユニバーシティ オブ ワシントン センター フォー コマーシャライゼーション | 発色団ポリマードット |
US20140087962A1 (en) * | 2011-03-22 | 2014-03-27 | Life Technologies Corporation | Identification of Linkage Using Multiplex Digital PCR |
JP2015107113A (ja) * | 2013-11-29 | 2015-06-11 | アイメック・ヴェーゼットウェーImec Vzw | デジタルpcrを実施するためのデバイスおよび方法 |
WO2016166295A1 (de) * | 2015-04-15 | 2016-10-20 | Attomol Gmbh Molekulare Diagnostika | Verfahren zum reaktionsraumbegrenzten nachweis von einem oder mehreren analyten in einer probe |
JP2017507191A (ja) * | 2013-11-27 | 2017-03-16 | ユニバーシティ オブ ワシントン スルー イッツ センター フォー コマーシャリゼーション | コード化された発色団ポリマー粒子 |
JP2017519484A (ja) * | 2014-04-08 | 2017-07-20 | ユニバーシティ オブ ワシントン スルー イッツ センター フォー コマーシャリゼーション | 多分散液滴を使用するデジタルアッセイを行うための方法及び装置 |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1294930B1 (en) * | 2000-01-13 | 2011-03-30 | Nanosphere, Inc. | Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor |
AU2001250937A1 (en) * | 2000-03-22 | 2001-10-03 | Quantum Dot Corporation | Loop probe hybridization assay for polynucleotide analysis |
US20050059042A1 (en) * | 2003-05-16 | 2005-03-17 | Rothberg Lewis J. | Colorimetric and fluorescent methods for sensing of oligonucleotides |
US20080102036A1 (en) * | 2003-06-04 | 2008-05-01 | Poss Kirtland G | Biocompatible Fluorescent Silicon Nanoparticles |
US20050014160A1 (en) * | 2003-07-18 | 2005-01-20 | Sriram Kumaraswamy | Assays for protease enzyme activity |
WO2008074023A2 (en) * | 2006-12-13 | 2008-06-19 | Luminex Corporation | Systems and methods for multiplex analysis of pcr in real time |
KR101518085B1 (ko) * | 2007-09-07 | 2015-05-07 | 플루이다임 코포레이션 | 카피수 변이 측정, 방법 및 시스템 |
CA2712426A1 (en) * | 2008-02-05 | 2009-08-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Paired end sequencing |
SI2757091T1 (en) * | 2008-04-01 | 2018-01-31 | Biosearch Technologies, Inc. | Stabilized nucleic acid black gas-fluorofor probe |
US20100159452A1 (en) * | 2008-12-22 | 2010-06-24 | Roche Molecular Systems, Inc. | Method For Detecting a Target Nucleic Acid in a Sample |
EP2534263B1 (en) * | 2010-02-09 | 2020-08-05 | Unitaq Bio | Methods and compositions for universal detection of nucleic acids |
CA2849023C (en) * | 2011-09-15 | 2022-07-19 | David A. Shafer | Probe:antiprobe compositions for high specificity dna or rna detection |
CN108103145A (zh) * | 2011-10-31 | 2018-06-01 | 荣研化学株式会社 | 靶核酸的检测方法 |
SI2828399T1 (sl) * | 2012-03-22 | 2017-05-31 | Lgc Genomics Limited | Sistem za detekcijo verižne reakcije s polimerazo z uporabo oligonukleotidov, ki obsegajo fosforotioatno skupino |
WO2016191533A1 (en) | 2015-05-26 | 2016-12-01 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Rna printing and sequencing devices, methods, and systems |
CN113640512A (zh) * | 2015-10-05 | 2021-11-12 | 北卡罗来纳-查佩尔山大学 | 用于多路测定的解码方法及相关流体设备、试剂盒和固体支持物 |
CN106086173B (zh) * | 2016-06-14 | 2019-12-24 | 西安交通大学 | 一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法 |
-
2018
- 2018-11-01 WO PCT/US2018/058803 patent/WO2019089996A1/en unknown
- 2018-11-01 US US16/761,235 patent/US11753681B2/en active Active
- 2018-11-01 JP JP2020524560A patent/JP7333634B2/ja active Active
- 2018-11-01 CN CN201880085447.XA patent/CN111683897A/zh active Pending
- 2018-11-01 EP EP18872752.3A patent/EP3704059A4/en active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010524430A (ja) * | 2006-11-29 | 2010-07-22 | キヤノン ユー.エス. ライフ サイエンシズ, インコーポレイテッド | デジタル式マルチプレックスpcrアッセイに関する機器及び方法 |
JP2014500891A (ja) * | 2010-10-18 | 2014-01-16 | ユニバーシティ オブ ワシントン センター フォー コマーシャライゼーション | 発色団ポリマードット |
US20140087962A1 (en) * | 2011-03-22 | 2014-03-27 | Life Technologies Corporation | Identification of Linkage Using Multiplex Digital PCR |
JP2017507191A (ja) * | 2013-11-27 | 2017-03-16 | ユニバーシティ オブ ワシントン スルー イッツ センター フォー コマーシャリゼーション | コード化された発色団ポリマー粒子 |
JP2015107113A (ja) * | 2013-11-29 | 2015-06-11 | アイメック・ヴェーゼットウェーImec Vzw | デジタルpcrを実施するためのデバイスおよび方法 |
JP2017519484A (ja) * | 2014-04-08 | 2017-07-20 | ユニバーシティ オブ ワシントン スルー イッツ センター フォー コマーシャリゼーション | 多分散液滴を使用するデジタルアッセイを行うための方法及び装置 |
WO2016166295A1 (de) * | 2015-04-15 | 2016-10-20 | Attomol Gmbh Molekulare Diagnostika | Verfahren zum reaktionsraumbegrenzten nachweis von einem oder mehreren analyten in einer probe |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
ANGEW CHEM INT ED ENGL. 2013年, vol. 52, no. 11, JPN6023004548, pages 3086 - 3109, ISSN: 0004983128 * |
BIOMOLECULAR DETECTION AND QUANTIFICATION, 2016年, vol. 10, JPN6022037729, pages 15 - 23, ISSN: 0004983129 * |
CURRENT OPINION IN BIOTECHNOLOGY, 2015年, vol. 34, JPN6022037731, pages 30 - 40, ISSN: 0004983131 * |
INTERFACE FOCUS, 2016年, vol. 6, JPN6022037730, pages 1 - 17, ISSN: 0004983130 * |
NANO CONVERGENCE, 2016年, vol. 3, JPN6022037732, pages 1 - 13, ISSN: 0004983133 * |
NATURE METHODS, 2008年, vol. 5, no. 9, JPN6022037728, pages 763 - 775, ISSN: 0004983132 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3704059A1 (en) | 2020-09-09 |
EP3704059A4 (en) | 2022-06-29 |
US11753681B2 (en) | 2023-09-12 |
CN111683897A (zh) | 2020-09-18 |
WO2019089996A1 (en) | 2019-05-09 |
JP7333634B2 (ja) | 2023-08-25 |
US20200362391A1 (en) | 2020-11-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2020060579A (ja) | 多分散液滴を使用するデジタルアッセイを行うための方法及び装置 | |
Qiu et al. | Three-dimensional FRET multiplexing for DNA quantification with attomolar detection limits | |
US10012592B2 (en) | Managing variation in spectroscopic intensity measurements through the use of a reference component | |
CN105431553B (zh) | 用于在基于乳液的微流体中测序的系统和方法 | |
JP2019205438A (ja) | デジタル検体分析 | |
US20120088691A1 (en) | Highly multiplexed real-time pcr using encoded microbeads | |
Chen et al. | Exonuclease III-assisted upconversion resonance energy transfer in a wash-free suspension DNA assay | |
JP2011254837A (ja) | 超高スループットの光学−ナノ細孔dna読み取りプラットフォーム | |
US20220011300A1 (en) | Decoding methods for multiplexing assays and associated fluidic devices, kits, and solid supports | |
WO2020261858A1 (ja) | デジタルpcrの測定方法および測定装置 | |
JP7333634B2 (ja) | コード化粒子を使用したデジタル核酸増幅 | |
JP2019213513A (ja) | デジタルpcrの測定方法および測定装置 | |
Liao et al. | Optical fingerprint classification of single upconversion nanoparticles by deep learning | |
CN108410964B (zh) | 一种用于减小数字聚合酶链式反应中由光学假象引起的量化误差的方法 | |
EP3283879A1 (de) | Verfahren zum reaktionsraumbegrenzten nachweis von einem oder mehreren analyten in einer probe | |
JP6812431B2 (ja) | Dna検出方法およびそのための装置 | |
KR102083396B1 (ko) | 양자점을 분산광원으로 하는 표적 핵산 검출 방법 | |
WO2023069648A1 (en) | Systems and methods for improving particle processing | |
Peng | Single-molecule detection of molecular beacons generated from LDR on thermoplastic microfluidic device for bioanalysis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210916 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210916 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220906 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221118 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230207 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230502 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230711 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230807 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7333634 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |