JP2021073932A - ファイバー担体−細胞含有ゲル複合体及びその製造方法、並びにファイバー担体−細胞含有ゲル複合体製造用キット - Google Patents
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Abstract
Description
胎齢18日のC57BL/6マウス胎児より背部の皮膚組織を採取し、中尾らが報告した方法(Koh-ei Toyoshima et al. Nature Communication, 3, 784, 2012)を一部改変して、ディスパーゼ処理を4℃で1時間、30rpm震盪条件で行い、当該皮膚組織の上皮層と間葉層とを分離した。その後、上皮層に100U/mLのコラゲナーゼ処理を1時間20分施し、さらにトリプシン処理を10分施し、最終的に40μmメッシュセルストレイナーを通過した、分散された上皮系細胞を得た。また、間葉層には100U/mLのコラゲナーゼ処理を1時間20分施し、最終的に40μmメッシュセルストレイナーを通過した、分散された間葉系細胞を得た。
基材表面として、直径6cmの培養用ディッシュの蓋の内側の撥水性表面を使用した。ファイバー担体としては、長さ約5cm〜10cmに切断した医療用の縫合糸(直径約50μm、ナイロン製又はシルク製)を使用した。そして、基材表面に、複数のファイバー担体を平行に配置した。
図4A及び図4Bには、それぞれ培養1日目(Day1)及び培養3日目(Day3)の時点における複合体の位相差顕微鏡写真を示す。図5A及び図5Bには、それぞれ培養1日目(Day1)及び培養3日目(Day3)の時点における複合体の蛍光顕微鏡写真を示す。
上述の実施例1と同様にして、間葉系細胞及び上皮系細胞を調製した。
上述の実施例1と同様にして、長さ約5mm〜10mmの医療用縫合糸(直径約50μm、ナイロン製、株式会社夏目製作所製)からなる1つのファイバー担体と、当該1つのファイバー担体に付着した1つの細胞含有ゲル体とを含む複合体を製造した。複合体の細胞含有ゲル体は、間葉系細胞の凝集塊と上皮系細胞の凝集塊とが連結して形成された細胞凝集塊連結体を含んでいた。
上述のようにして製造した複合体を、ヌードマウスの皮下に移植した。すなわち、まず、複数の複合体の各々において、細胞凝集塊連結体に含まれる間葉系細胞の凝集塊から延び出るファイバー担体の一方の自由端、及び、当該細胞凝集塊連結体に含まれる上皮系細胞の凝集塊から延び出るファイバー担体の他方の自由端のうち、当該間葉系細胞の凝集塊から延び出る当該一方の自由端を切断した。
図6A及び図6Bには、移植後3週間が経過した時点における、ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体の移植部位、及び、ファイバー担体に付着していない細胞含有ゲル体のみの移植部位の写真をそれぞれ示す。
上述の実施例1と同様にして、間葉系細胞及び上皮系細胞を調製した。
支持部材に固定された複数のファイバー担体を用意した。まず、図2A及び図3Aに示すような、枠状の支持部材を作製した。すなわち、中央部に正方形状の貫通穴が形成された枠状にPDMSを硬化させて、枠状のPDMS製支持部材を作製した。次いで、この支持部材の中央の貫通穴に正方形状(3cm×3cm)の樹脂製プレートを配置した。このプレートの表面は撥水性であった。
図7には、空気中、撥水性の基材表面上で形成した、支持部材に固定されたファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体の写真を示す。図7に示すように、支持部材には4つのファイバー担体が固定され、各ファイバー担体には、4つの細胞含有ゲル体が固定された。
Claims (16)
- (1)基材と前記基材の表面上に配置されたファイバー担体とを用意すること;、
(2)気相中、前記基材の前記表面上で、前記ファイバー担体に付着し、ハイドロゲル高分子と分散された細胞とを含む液滴を形成すること;、
(3)気相中、前記基材の前記表面上で、前記液滴をゲル化させて、前記ファイバー担体と前記ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体とを含むファイバー担体−細胞含有ゲル複合体を得ること;、
を含む、ファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の製造方法。 - 前記ファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の前記細胞含有ゲル体を前記基材の前記表面から脱離させることをさらに含む、
請求項1に記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の製造方法。 - 前記ファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の前記細胞含有ゲル体内で前記細胞を培養することをさらに含む、
請求項1又は2に記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の製造方法。 - 前記細胞含有ゲル体内で前記細胞を培養して、前記細胞の凝集塊を形成する、
請求項3に記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の製造方法。 - 前記(2)において、気相中、前記基材の前記表面上で、互いに離間して1つの前記ファイバー担体に付着し、各々が前記ハイドロゲル高分子と前記分散された細胞とを含む複数の前記液滴を形成し、
前記(3)において、気相中、前記基材の前記表面上で、前記液滴をゲル化させて、前記1つのファイバー担体と、互いに離間して前記1つのファイバー担体に付着した複数の前記細胞含有ゲル体とを含む前記ファイバー担体−細胞含有ゲル複合体を得る、
請求項1乃至4のいずれかに記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の製造方法。 - 前記ファイバー担体−細胞含有ハイドロゲル複合体の前記1つのファイバー担体を切断して、1つのファイバー担体片と前記1つのファイバー担体片に付着した1つの前記細胞含有ゲル体とを含む、ファイバー担体−細胞含有ゲル複合体片を得ることをさらに含む、
請求項5に記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の製造方法。 - 前記(1)において、前記基材の前記表面上に配置された複数の前記ファイバー担体を用意し、
前記複数のファイバー担体の各々について、前記(2)及び(3)を実施する、
請求項1乃至6のいずれかに記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の製造方法。 - 前記(1)において、一部が支持部材に固定され、他の一部が前記基材の前記表面上に配置された前記ファイバー担体を用意し、
前記支持部材に固定された前記ファイバー担体について、前記(2)及び(3)を実施する、
請求項1乃至7のいずれかに記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の製造方法。 - 前記(2)は、
(2−1)気相中、前記基材の前記表面上で、前記ファイバー担体に付着し、第一のハイドロゲル高分子と分散された第一の細胞とを含む第一の液滴を形成すること、及び、
(2−2)気相中、前記基材の前記表面上で、前記ファイバー担体に付着し、第二のハイドロゲル高分子と分散された第二の細胞とを含み、前記第一の液滴と連結した第二の液滴を形成して、前記ファイバー担体に付着した液滴連結体を得ることを含み、
前記(3)において、気相中、前記基材の前記表面上で、前記液滴連結体をゲル化させて、前記ファイバー担体と前記ファイバー担体に付着した前記細胞含有ゲル体とを含むファイバー担体−細胞含有ゲル複合体を得る、
請求項1乃至8のいずれかに記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の製造方法。 - 前記第一の細胞と前記第二の細胞との組み合わせが、上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせである、
請求項9に記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体の製造方法。 - 1つのファイバー担体と、
各々がハイドロゲル高分子及び細胞を含む、互いに離間して前記1つのファイバー担体に付着した複数の細胞含有ゲル体と、
を含む、
ファイバー担体−細胞含有ゲル複合体。 - 前記複数の細胞含有ゲル体の各々は、前記細胞の凝集塊を含む、
請求項11に記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体。 - 前記複数の細胞含有ゲル体の各々は、第一のハイドロゲル高分子及び第一の細胞を含む第一のゲル部と、第二のハイドロゲル高分子及び第二の細胞を含む第二のゲル部とを含む、
請求項11又は12に記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体。 - 前記第一の細胞と前記第二の細胞との組み合わせが、上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせである、
請求項11乃至13のいずれかに記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体。 - ハイドロゲル高分子及び細胞を含む細胞含有ゲル体を付着させるファイバー担体と、
前記ファイバー担体が固定された支持部材と、
を含む、
ファイバー担体−細胞含有ゲル複合体製造用キット。 - その表面上に、気相中、前記支持部材に固定された前記ファイバー担体が配置されるとともに、前記ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体が形成される基材をさらに含む、
請求項15に記載のファイバー担体−細胞含有ゲル複合体製造用キット。
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