JP2021035917A

JP2021035917A - 免疫再構築促進剤、及び移植片対宿主病（ｇｖｈｄ）治療剤

Info

Publication number: JP2021035917A
Application number: JP2019157710A
Authority: JP
Inventors: 岳郎進藤; Takero Shindo; 英和板村; Hidekazu Itamura; 啓行村主; Hiroyuki Suguri
Original assignee: Kyoto University NUC
Current assignee: Kyoto University NUC
Priority date: 2019-08-30
Filing date: 2019-08-30
Publication date: 2021-03-04

Abstract

【課題】本発明は、移植後のポリクローナルな免疫再構築を促進させる方法を提供すること、さらにポリクローナルな免疫再構築を促進させることにより難治性ＧＶＨＤを含むＧＶＨＤを効果的に治療する方法を提供することを課題とする。【解決手段】上記課題を解決するための本発明は、ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む、移植後の免疫再構築促進剤である。上記移植は、造血幹細胞移植であることが好ましく、また、上記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、及びセルメチニブからなる群より選択される少なくとも１種であることがより好ましい。また、上記課題を解決するための本発明は、ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）治療剤も含む。【選択図】なし

Description

本発明は、免疫再構築促進剤、及び移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）治療剤に関する。

同種造血幹細胞移植は難治性造血器腫瘍に治癒をもたらし得る魅力的治療法だが、致死的合併症も多い。特に重篤な合併症である移植片対宿主病（Ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ−ＨｏｓｔＤｉｓｅａｓｅ：ＧＶＨＤ）を抑制しつつ、抗腫瘍免疫（Ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ−ＴｕｍｏｒＥｆｆｅｃｔｓ：ＧＶＴ効果）や抗ウイルス免疫を温存する方法は未だ確立されているとはいえない。実際ＧＶＨＤを抑制・治療するために複数の免疫抑制剤が投与された患者では、ＧＶＴ効果や抗ウイルス免疫の弱体化により、造血器腫瘍の再発や致死的な日和見感染症を招くことがあり、臨床現場では大きなアンメットニーズとなっている（非特許文献１参照）。これに対して本発明者らは、以前に、細胞内ＭＡＰＫ経路の一つＲＡＳ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の選択的遮断薬であるＭＥＫ阻害剤がＧＶＴ効果や抗ウイルス免疫を温存しつつ、ＧＶＨＤの発症を抑制することを示した（非特許文献２及び３参照）。

一方、同種造血幹細胞移植におけるもう一つの問題として、難治性ＧＶＨＤがある。移植後早期に発症する急性ＧＶＨＤの重症度はｇｒａｄｅＩ／ＩＩ／ＩＩＩ／ＩＶの４段階に分類され、積極的治療を要するのはｇｒａｄｅＩＩ／ＩＩＩ／ＩＶである。日本では、血縁・非血縁を合わせて年間約３５００例の同種造血幹細胞移植が行われ、そのうちの約３５％がｇｒａｄｅＩＩ／ＩＩＩ／ＩＶの急性ＧＶＨＤを発症することが知られている（非特許文献４参照）。一般にＧＶＨＤのトリガーとなるのはドナーのＴ細胞であるが、その増悪にはＢ細胞やＮＫ細胞、マクロファージなども関与する。そのため、急性増悪を来したＧＶＨＤの約４０％は、副腎皮質ステロイドを始めとした複数の免疫抑制剤の併用にもなお抵抗性を示す難治性ＧＶＨＤに至る（非特許文献５及び６参照）。このような難治性ＧＶＨＤ患者の長期生存率は３０％程度と不良だが、有効な治療方法は未だ確立されていない。

ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ，２０１７，３７７，ｐ．２１６７−２１７９Ｂｌｏｏｄ，２０１３，１２１（２３），ｐ．４６１７−４６２６ＪＣＩ，Ｉｎｓｉｇｈｔ，２０１６，１（１０），ｅ８６３３１ＢｉｏｌＢｌｏｏｄＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，２０１６，２２，７４４ｅ７５１Ｂｌｏｏｄ，１９９８，９２，ｐ．２２８８−２２９３ＢｉｏｌＢｌｏｏｄＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，２０１３，１９，１１８３ｅ１１８９

このような中、本発明者らは難治性ＧＶＨＤを含む、造血幹細胞移植後の種々の問題を解決するためには、移植後の免疫再構築という観点が重要であると考えた。即ち、移植後、多様性を持ったポリクローナルな免疫の再構築の遅れが生じることが、移植後合併症や腫瘍の再発に繋がると考えられることから、造血幹細胞移植後のポリクローナルな免疫再構築を促進させる方法を見出すことが上記問題を解決することに繋がると考え研究を進めた。そこで、本発明は、造血幹細胞移植後のポリクローナルな免疫再構築を促進させる方法を提供すること、さらにポリクローナルな免疫再構築を促進させることにより難治性ＧＶＨＤを含むＧＶＨＤを効果的に治療する方法を提供することを課題とする。

上記課題を解決するために、本発明者らは、造血幹細胞移植の際に各種薬剤を投与し、生着するＴ細胞の多様性に与える影響を評価した。その結果、ＭＥＫ阻害剤が、移植後のポリクローナルな免疫再構築を促進する優れた効果を有することを見出し、本発明を完成させた。即ち、本発明の要旨は、以下のとおりである。

［１］ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む、造血幹細胞移植後の免疫再構築促進剤。
［２］上記ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、及びセルメチニブからなる群より選択される少なくとも１種である、［１］に記載の免疫再構築促進剤。
［３］上記移植時及び／又は移植後ＧＶＨＤを発症している期間内に投与される、［１］又は［２］に記載の免疫再構築促進剤。
［４］免疫抑制剤と併用される、［１］から［３］のいずれかに記載の免疫再構築促進剤。
［５］上記免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤である、［４］に記載の免疫再構築促進剤。
［６］ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）治療剤。
［７］上記ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、及びセルメチニブからなる群より選択される少なくとも１種である、［６］に記載のＧＶＨＤ治療剤。
［８］造血幹細胞移植後のＧＶＨＤを治療することを特徴とする、［６］又は［７］に記載のＧＶＨＤ治療剤。
［９］移植時及び／又は移植後ＧＶＨＤを発症している期間内に投与される、［６］から［８］のいずれかに記載のＧＶＨＤ治療剤。
［１０］免疫抑制剤抵抗性の患者に対して用いられる、［６］から［９］のいずれかに記載のＧＶＨＤ治療剤。
［１１］上記免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤である、［１０］に記載のＧＶＨＤ治療剤。

本発明によると、造血幹細胞移植の際又は移植後に、ＭＥＫ阻害剤を含む免疫再構築促進剤を投与することで、多様なＴ細胞の生着が可能となり、移植後のポリクローナルな免疫再構築を促進することができる。また、ＭＥＫ阻害剤は、免疫再構築を促進することにより、ＧＶＨＤ、特に難治性ＧＶＨＤ（治療抵抗性のＧＶＨＤ）の治療薬として効果を奏することが期待できる。なお、ＧＶＨＤは、免疫抑制剤による免疫再構築障害（ｓｋｅｗｉｎｇ）によって起こる合併症とみることもでき、ＭＥＫ阻害剤は、同障害を軽減することでＧＶＨＤの治療に効果を奏すると考えられる。特にＧＶＨＤを生じた個体では免疫再構築の障害（ｓｋｅｗｉｎｇ）がみられる、すなわちドナー由来の特定のＴ細胞クローンが脾臓、肺等で病的に増生することも本研究で本発明者らが明らかにしたが、ＭＥＫ阻害剤はそのような病的な単一クローンの増生を抑制することができる。したがって、本発明の免疫再構築促進剤及びＧＶＨＤ治療剤は、既存の免疫抑制剤との併用も可能であり、優れた効果を奏する。

図１は、同種造血幹細胞移植のＧＶＨＤモデルにおけるＭＥＫ阻害剤投与の効果を示す図である（体重、生存率）。図２は、異種造血幹細胞移植のＧＶＨＤモデルにおけるＭＥＫ阻害剤投与の効果を示す図である（Ｔ細胞生着率）。図３は、異種造血幹細胞移植のＧＶＨＤモデルにおけるＭＥＫ阻害剤投与の効果を示す図である（生存率）。図４は、異種造血幹細胞移植のＧＶＨＤモデルにおけるＭＥＫ阻害剤投与の効果を示す図である（各臓器に生着したＴ細胞のＴＣＲレパトア解析）。図５は、異種造血幹細胞移植のＧＶＨＤモデルにおける、ＧＶＨＤ発症後のＭＥＫ阻害剤投与の効果を示す図である（体重及びＧＶＨＤスコア）。図６は、異種造血幹細胞移植のＧＶＨＤモデルにおける、ＧＶＨＤ発症後のＭＥＫ阻害剤投与の効果を示す図である（脾臓に生着したＴ細胞のＴＣＲレパトア解析）。図７は、異種造血幹細胞移植のＧＶＨＤモデルにおける、ＧＶＨＤ発症後のＭＥＫ阻害剤投与の効果を示す図である（肝臓に生着したＴ細胞のＴＣＲレパトア解析）。図８は、異種造血幹細胞移植のＧＶＨＤモデルにおける、ＧＶＨＤ発症後のＭＥＫ阻害剤投与の効果を示す図である（肺に生着したＴ細胞のＴＣＲレパトア解析）。

以下、本発明の免疫再構築促進剤、ＧＶＨＤ治療剤について詳細に説明する。なお、本明細書における実験は、特に明記しない限り、当業者に公知の一般的実験書に記載の方法又はそれに準じた方法により行うことができる。また、本明細書中で使用される用語は、特に言及しない限り、当該技術分野で通常用いられる意味で解釈される。

＜免疫再構築促進剤＞
本発明の免疫再構築促進剤は、造血幹細胞移植後の免疫再構築の促進のために用いられるものであり、ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含むことを特徴とする。特に、造血幹細胞移植の際又は造血幹細胞移植後に本発明の免疫再構築促進剤を投与することで、ドナー由来の多様なＴ細胞の生着が可能となり、移植後のポリクローナルな免疫再構築を促進することができる。また、本発明の免疫再構築促進剤の有効成分であるＭＥＫ阻害剤は、このようにポリクローナルな免疫再構築を促進することにより、ＧＶＨＤ、特に難治性ＧＶＨＤ（治療抵抗性のＧＶＨＤ）の治療効果を奏することも期待できる。

［移植後の免疫再構築］
本発明の免疫再構築促進剤は、造血幹細胞移植後の免疫再構築の促進のため、移植を受けるホスト（患者）に対して用いられる。つまり、造血幹細胞移植前に大量抗がん剤投与や全身放射線照射等を行ってホストの免疫系を破壊し、ドナーからの造血幹細胞移植によりホストの免疫系を再構築することが必要となるような場合に用いられる。ここで、「造血幹細胞移植」としては、造血幹細胞を含む移植であれば特に限定されないが、主に骨髄移植、臍帯血移植、末梢血幹細胞移植等のことを指す。

本発明において免疫再構築とは、造血幹細胞移植を受けた患者の免疫系が正常に機能するレベルに再構築されることをいう。具体的には、移植を受けた患者においてドナー由来のポリクローナルなＴ細胞が生着することをいう。本実施例でも示すとおり、造血幹細胞移植において本発明の免疫再構築促進剤を用いると、ホストに生着するＴ細胞の、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）レパトアを多様とすることができ、そのことは、当業者に公知の方法によるＴＣＲレパトア解析技術により確認することができる。免疫再構築においては、さらにドナーの造血幹細胞からＴ細胞のみならずＢ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ等の種々の免疫担当細胞が分化誘導され、正常な免疫システムが機能するようになることが望ましい。

［ＭＥＫ阻害剤］
本発明の免疫再構築促進剤が有効成分として含むＭＥＫ阻害剤は、Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路（ＭＡＰＫ経路）に存在するリン酸化酵素ＭＥＫ（マイトジェン活性化蛋白質（ＭＡＰ）キナーゼ／細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）キナーゼ）の作用を阻害することで、ＭＡＰＫ経路を遮断することが知られている物質である。

胸腺を出たＴ細胞は免疫記憶を持たないナイーブＴ細胞と特定の抗原に反応するメモリーＴ細胞とに分けられ、ナイーブＴ細胞からメモリーＴ細胞へと機能分化する。造血幹細胞移植でＧＶＨＤを惹起するのはアロ反応性を持ったドナーのナイーブＴ細胞、抗ウイルス免疫を担うのはメモリーＴ細胞で、ＧＶＨＤの抑制にはナイーブＴ細胞の抑制が肝要である。Ｔ細胞内のＭＥＫ／ＥＲＫ経路はナイーブＴ細胞で選択的に活性化されるため、ＭＥＫ阻害剤で同経路を抑制すると、ナイーブＴ細胞の抑制を介してＧＶＨＤが抑制される（非特許文献２参照）。しかし日和見感染症など、移植後の合併症を回避し長期生存を得るには、ＧＶＨＤの抑制のみでは不十分で、多様な抗原に対する特異性を持ったポリクローナルＴ細胞の生着・回復が必要である。本件、造血幹細胞移植後に関する各種分子標的薬の作用、特にＭＥＫ阻害剤の作用はこれまで未知であった。今回ＭＥＫ阻害剤が移植後の免疫再構築を促進することを確認した。

ＭＥＫ阻害剤としては、上記ＭＥＫの作用を阻害することでＭＡＰＫ経路を遮断する効果を奏するものであれば特に限定されないが、例えば、トラメチニブ（Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ）、コビメチニブ（Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ）、ビニメチニブ（Ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂ）、セルメチニブ（Ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、レファメティニブ（Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ）、ピマセルチブ（Ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ）、Ｕ０１２６、ＭＥＫ１６２／ＡＲＲＹ−１６２、ＡＺＤ８３３０／ＡＲＲＹ−４２４７０４、ＧＤＣ−０９７３／ＲＧ７４２０、ＧＤＣ−０６２３／ＲＧ７４２１／ＸＬ５１８、ＣＩＦ／ＲＧ７１６７／ＲＯ４９８７６５５、ＣＫ１２７／ＲＧ７３０４／ＲＯ５１２６７６６、Ｅ６２０１、ＴＡＫ−７３３、ＰＤ−０３２５９０１、ＡＳ７０３９８８／ＭＳＣ２０１５１０３Ｂ、ＷＸ−５５４、ＣＩ−１０４０／ＰＤ１８４３５２、ＡＳ７０３０２６、ＰＤ３１８０８８、ＰＤ９８０５９、ＳＬ３２７、並びにこれらの薬学的に許容される塩及び溶媒和物が挙げられる。これらうち、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ並びにこれらの薬学的に許容される塩及び溶媒和物が好ましく、トラメチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ並びにこれらの薬学的に許容される塩及び溶媒和物がより好ましく、トラメチニブ並びにこの薬学的に許容される塩及び溶媒和物がさらに好ましい。本発明の免疫再構築促進剤において、これらのＭＥＫ阻害剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。

薬学的に許容できる塩としては、特に限定されないが、例えば、アルカリ金属（カリウム、ナトリウム等）の塩、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）の塩、アンモニウム塩、薬学的に許容される有機アミン（テトラメチルアンモニウム、トリエチルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、シクロペンチルアミン、ベンジルアミン、フェネチルアミン、ピペリジン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、リジン、アルギニン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等）の塩、無機酸塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩等）、有機酸塩（酢酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、グルクロン酸塩、グルコン酸塩等）が挙げられる。

溶媒和物に含まれる溶媒は、薬学上許容されるものであれば特に限定されず、例えば、水、エタノール、１−プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、１−ペンタノール、酢酸、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブチル、酢酸イソブチル、ギ酸、ギ酸エチル、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ヘプタン、ペンタン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、エチレングリコール、テトラヒドロフラン、アニソール、クメン、ジメチルスルホキシド等が挙げられる。

本発明の免疫再構築促進剤は、必須成分であるＭＥＫ阻害剤に加えて、薬学的に許容される担体、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、矯味剤、矯臭剤、界面活性剤、香料、着色剤、抗酸化剤、隠蔽剤、静電気防止剤、流動化剤、湿潤剤等の添加剤を含んでもよい。

［免疫抑制剤との併用］
本発明の免疫再構築促進剤は、免疫抑制剤と併用することができる。本発明における免疫抑制剤としては、ＭＥＫ阻害剤以外の免疫抑制剤であり、例えば、カルシニューリン阻害薬（ＦＫ−５０６（タクロリムス）、シクロスポリン、シクロスポリンＡ等）、ステロイド薬（プレドニゾロン等）、代謝拮抗薬（ミコフェノール酸モフェチル、ミゾリビン等）、ｍＴＯＲ阻害薬（エベロリムス等）、アルキル化剤（シクロフォスファミド等）、プリン拮抗薬（アザチオプリン）、葉酸拮抗薬（メトトレキサート等）、広範な抗体、レセプターアゴニスト、レセプターアンタゴニスト等が挙げられる。これらのうち、本発明の免疫再構築促進剤との併用効果に優れる観点から、カルシニューリン阻害薬が好ましく、中でもＦＫ−５０６（タクロリムス）がより好ましい。

本発明の免疫再構築促進剤と免疫抑制剤との併用の例としては、（ｉ）造血幹細胞移植時に、免疫抑制剤及び本発明の免疫再構築促進剤を投与する場合、（ｉｉ）造血幹細胞移植時に免疫抑制剤を投与し、その後ＧＶＨＤの症状を示した場合に、本発明の免疫再構築促進剤を投与する場合、（ｉｉｉ）造血幹細胞移植時に免疫抑制剤を投与し、その後ＧＶＨＤの症状を示した場合に、他の１種以上の免疫抑制剤をさらに投与してもＧＶＨＤの症状が治まらない場合に（難治性ＧＶＨＤ）、本発明の免疫再構築促進剤を投与する場合、（ｉｖ）造血幹細胞移植後、免疫再構築が進まず、繰り返し日和見感染症を来す場合等が挙げられる。

［免疫再構築促進剤の調製方法］
本発明の免疫再構築促進剤は、必須成分であるＭＥＫ阻害剤、薬学的に許容される担体に加えて、必要に応じて医薬品に通常用いられる添加剤等を混合し、常法に従って調製することができる。

［投与対象］
本発明の免疫再構築促進剤の投与対象は、移植患者であり、特に大量抗癌剤投与や全身放射線照射でホストの免疫系を破壊した後に、ドナーからの造血幹細胞移植でホストの免疫系を再構築することが必要となる患者である。臓器移植の種類としては、主に骨髄移植、臍帯血移植、末梢血幹細胞移植等の造血幹細胞移植を指す。

［用法、用量］
本発明の免疫再構築促進剤を、造血幹細胞移植の際、又は移植後に投与することで、多様なＴ細胞の生着が可能となり、移植後のポリクローナルな免疫再構築を促進することができる。本発明の免疫再構築促進剤の具体的な投与タイミングとしては、移植時に加え、移植後ＧＶＨＤを発症している期間内（移植後に急性ＧＶＨＤを発症している期間内、移植後に慢性ＧＶＨＤを発症している期間内）等が挙げられる。急性ＧＶＨＤは移植後１００日程度までの間に発症することが多く、慢性ＧＶＨＤは移植後数年、即ち２〜３年程度まで継続することが多い。なお、具体的な投与のタイミングは、患者の状態に応じて決定することとなるが、急性ＧＶＨＤの患者に対しては、移植後急性ＧＶＨＤの症状が認められる期間内においてであり、通常は移植後２週間ないし移植後１００日程度の間となる場合が多い。また、慢性ＧＶＨＤの患者に対しては、移植後慢性ＧＶＨＤの症状が認められる期間内であり、通常は移植後１００日ないし移植後２〜３年程度の間となる場合が多い。移植時に投与する場合は、本発明の免疫再構築促進剤を単独で投与してもよいし、他の免疫抑制剤と併用してもよい。移植後に投与するタイミングとしては、ＧＶＨＤの症状が出る前でも、出た後でもよい。本発明の免疫再構築促進剤は、ＧＶＨＤの症状が出た後に投与しても、効果を奏することが実験的に示されている（実施例参照）。マウスの系では、本発明の免疫再構築促進剤が慢性ＧＶＨＤに効果を奏することは確認している。また、本発明の免疫再構築促進剤は、免疫抑制剤を１種又は２種以上使用してもＧＶＨＤの症状が治まらない難治性ＧＶＨＤに対しても、用いることができる。

本発明の免疫再構築促進剤の投与方法としては、特に限定されず、全身投与又は局所投与のいずれであってもよく、例えば、経口投与、皮内投与、筋肉注射、皮下投与、静脈注射、点滴投与、腹腔内投与等が挙げられる。これらの投与方法の中でも、本発明の効果が得られやすいという観点から、経口投与が好ましい。

本発明の免疫再構築促進剤の投与量は、ホスト（患者）の年齢、体重、投与開始時におけるＧＶＨＤの有無・程度等に応じて適宜設定すればよいが、例えば、ＭＥＫ阻害剤の量換算として０．１〜１００．０ｍｇ／５０ｋｇ／日が挙げられ、０．５〜５０．０ｍｇ／５０ｋｇ／日が好ましく、１．０〜３０．０ｍｇ／５０ｋｇ／日がより好ましく、２．０〜１．０ｍｇ／５０ｋｇ／日がさらに好ましい。投与頻度は、例えば１〜３日に１回、１日に１〜２回が好ましい。

造血幹細胞移植において本発明の免疫再構築促進剤を用いると、ポリクローナルなＴ細胞の生着が促進される。具体的には、本実施例でも示すとおり、造血幹細胞移植において本発明の免疫再構築促進剤を用いると、ホストに生着するＴ細胞の、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）レパトアを多様とすることができる。なお、本発明の免疫再構築促進剤を用いず、ＧＶＨＤの症状を呈する条件では、ある特定のＴ細胞単一クローンの増生が確認されるが、本発明の免疫再構築促進剤を用いると、このような単一クローンの増生が起こらず、多様なＴ細胞クローンを生着させることができる。

＜移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）治療剤＞
本発明の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）治療剤は、ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む。本発明のＧＶＨＤ治療剤は、ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含むことで、造血幹細胞移植において、ホストのポリクローナルな免疫再構築を促進させることにより、ＧＶＨＤを効果的に治療することができる。特に、造血幹細胞移植後、急性憎悪を来したＧＶＨＤで、副腎皮質ステロイドをはじめとした複数の免疫抑制剤の併用にもなお抵抗性を示すような難治性ＧＶＨＤに対しても、効果を奏することが期待できる。

本発明の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）治療剤は、ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含み、組成物としては、上述の本発明の免疫再構築促進剤と同じである。有効成分であるＭＥＫ阻害剤やその他の成分、免疫抑制剤との併用、調製方法、用法・用量についての具体的内容は、免疫再構築促進剤の項における説明をそのまま適用できる。

＜免疫再構築促進方法、ＧＶＨＤの予防／治療方法＞
本発明は、有効量のＭＥＫ阻害剤を投与することを含む、移植後の免疫再構築促進方法、ＧＶＨＤの予防／治療方法も含む。具体的な本発明の免疫再構築促進方法、ＧＶＨＤの予防／治療方法は以下のとおりである。
［１］有効量のＭＥＫ阻害剤を投与することを含む、造血幹細胞移植後の免疫再構築促進方法。
［２］上記ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、及びセルメチニブからなる群より選択される少なくとも１種である、［１］に記載の免疫再構築促進方法。
［３］上記移植時〜移植後１年の間に有効量のＭＥＫ阻害剤が投与される、［１］又は［２］に記載の免疫再構築促進方法。
［４］免疫抑制剤の投与を受ける患者を対象とする、［１］から［３］のいずれかに記載の免疫再構築促進方法。
［５］上記免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤である、［４］に記載の免疫再構築促進方法。
［６］有効量のＭＥＫ阻害剤を投与することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予防／治療方法。
［７］上記ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、及びセルメチニブからなる群より選択される少なくとも１種である、［６］に記載のＧＶＨＤの予防／治療方法。
［８］造血幹細胞移植後のＧＶＨＤを治療することを特徴とする、［６］又は［７］に記載のＧＶＨＤの予防／治療方法。
［９］移植時〜移植後１年の間に有効量のＭＥＫ阻害剤が投与される、［６］から［８］のいずれかに記載のＧＶＨＤの予防／治療方法。
［１０］免疫抑制剤抵抗性の患者を対象とする、［６］から［９］のいずれかに記載のＧＶＨＤの予防／治療方法。
［１１］上記免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤である、［１０］に記載のＧＶＨＤの予防／治療方法。

本発明の、有効量のＭＥＫ阻害剤を投与することを含む、造血幹細胞移植後の免疫再構築促進方法、ＧＶＨＤの予防／治療方法は、それぞれ上述の免疫再構築促進剤、ＧＶＨＤ治療剤を患者に投与する方法であると言い換えることもできる。具体的な内容については、それぞれ上述の免疫再構築促進剤、ＧＶＨＤ治療剤の項の説明をそのまま適用できる。

以下の実施例にて本発明を具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。

１．同種移植によるＧＶＨＤモデル（マウスＧＶＨＤモデル）
全身放射線照射（ＴＢＩ１０Ｇｙ）を受けたＢＤＦ１マウスに、Ｃ５７ＢＬ／６マウスのＴ細胞除去骨髄（ＴＣＤＢＭ）５ｘ１０^６個／匹とＴ細胞１ｘ１０^６個／匹を輸注（移植）して、マウスＧＶＨＤモデルを作成した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの骨髄は大腿骨および脊椎から採取し、ＭＡＣＳ^TM ＣＤ９０．２Ｍｉｃｒｏｂｅａｄｓ，ｍｏｕｓｅ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ社製）を用いてＴ細胞を含めた骨髄細胞以外の細胞を除去した。Ｔ細胞は脾臓内リンパ球からＥＡＳＹＳＥＰ^TM ｍｏｕｓｅＴｃｅｌｌｉｓｏｌａｔｉｏｎｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ社製）を用いて単離した。本モデルに移植日または移植から１０日後よりＭＥＫ阻害剤トラメチニブの連日経口投与を行った（０．１ｍｇ／ｋｇ）。図１に移植後の体重変化（Ａ）及び生存率（Ｂ）を示す。各群はそれぞれｎ＝１６である。なお、マウスを用いた本実験においては、移植から１０日後にはＧＶＨＤをすでに発症している。

図１Ａに示すとおり、放射線照射を受けたＢＤＦ１マウスにＣ５７ＢＬ／６マウスの骨髄（ＴＣＤＢＭ）とＴ細胞を輸注（移植）すると、ＢＤＦ１マウスはＧＶＨＤによる腸管障害のため、激しい体重の減少を起こし、移植後２０日経過すると移植時の体重の７０％程度にまで減少し、その後も減少が続いた。生存率も、移植後２０日で約７０％、移植後３０日で約５０％、６０日で約２５％となった。それに対して、トラメチニブを投与した場合には、体重減少が顕著に抑制され、移植後２０日を経過しても移植時の体重の８０〜９０％を維持できていた。また、生存率も高く、移植後２０日で約９０％、移植後３０日で約７０％、移植後６０日でも約６０〜７０％であった。また、トラメチニブの投与時期は、移植時（ｄａｙ０）と移植後１０日目（ｄａｙ１０）で大きな差は見られず、移植後に投与しても十分なＧＶＨＤ抑制効果が見られることがわかった。なお、ＴＣＤＢＭのみを移植したマウスでは、移植後数日は体重減少が見られるものの、その後は徐々に回復し、１０日目以降は移植時よりも体重が増加した。移植後６０日でもマウス生存率は１００％であった。

２．異種移植によるＧＶＨＤモデル
（１）ＭＥＫ阻害剤投与の効果（ヒト末梢血リンパ球の生着率、生存率）
Ｔ・Ｂ・ＮＫ細胞を欠損した重度免疫不全マウス（ＮＯＪマウス）にヒト末梢血リンパ球（ｈＰＢＭＣ）１×１０^７個／匹を輸注して、異種移植によるＧＶＨＤモデルを作成した。ｈＰＢＭＣ移植後よりＭＥＫ阻害剤トラメチニブ０．１ｍｇ／ｋｇを連日経口投与し、移植後１７日目にｈＰＢＭＣのマウス末梢血への生着を、移植後３０日目に各臓器における生着を、いずれもフローサイトメトリーで解析した。その結果、トラメチニブの投与によりｈＰＢＭＣの生着が促進され（図２）、しかしＧＶＨＤによる消耗と死亡は軽減され、生存率を有意に向上させることができた（図３）。各群はそれぞれｎ＝１３である。

（２）ＭＥＫ阻害剤投与の効果（Ｔ細胞レパトア解析）
上記（１）の実験において、肝臓、脾臓、肺に浸潤したヒトＴ細胞について、次世代シークエンサーＭｉｓｅｑを用いたＴ細胞受容体（Ｔ−ｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＣＲ）のレパトア解析を行い、生着したヒトＴ細胞の多様性を評価した（図４）。具体的には組織に浸潤したヒトＴ細胞ＴＣＲのＶ領域、Ｊ領域およびＣＤＲ３領域の遺伝子につき、各レパトアに特異的なｐｒｉｍｅｒを用いたｕｎｂｉａｓｅｄＰＣＲ法を行い、各レパトア遺伝子の頻度を変えることなく増幅した。その上でソフトウェアＲｅｐｅｒｔｏｉｒｅＧｅｎｅｓｉｓを用いて各レパトアの頻度を算出した。各サンプルにおける有効評価リード数は、１０^４もしくは１０^５リード以上であった。ＧＶＨＤを発症したマウスの肝臓、脾臓、肺では共通の単一クローンのみが増加しており、ＧＶＨＤを惹起するＴ細胞クローンである可能性が高いと考えられた。一方、ポリクローナルなＴ細胞の生着は抑制されていた（ｓｋｅｗｉｎｇ）。しかし、トラメチニブを投与したマウスでは、同じ単一クローンの増生はみられず、その一方で多様性を持ったポリクローナルＴ細胞の生着が確認された。この結果から、ＧＶＨＤとは移植後の免疫再構築障害（ｓｋｅｗｉｎｇ）による合併症で、ＭＥＫ阻害剤は同障害を軽減することでＧＶＨＤを抑制すると考えられた。なお、図４の３Ｄグラフにおける底面はＴＣＲα鎖のＪ領域（横軸）とＶ領域（縦軸）の多様性を、各ｂａｒの高さは各Ｔ細胞クローンの頻度を表している。図中、Ｉｎｄｅｘの数値はＳｉｍｐｓｏｎ’ｓｉｎｄｅｘ（シンプソン多様度指数）であり、レパトアの多様性を表す。Ｓｉｍｐｓｏｎ’ｓｉｎｄｅｘの算出は、Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｅ．Ｈ．（１９４９）．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｄｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ，１６３，６８８．に記載の方法に従って行った。Ｉｎｄｅｘの数値が大きいほどレパトアの多様性が高いことを示している。

（３）ＧＶＨＤ発症後のＭＥＫ阻害剤投与の効果（体重、ＧＶＨＤスコア）
上記と同様のＮＯＪマウスに、放射線照射後（ＴＢＩ２Ｇｙ）、ｈＰＢＭＣ３×１０^６ｃｅｌｌｓ／匹を輸注して、異種移植によるＧＶＨＤモデルを作成した。ｈＰＢＭＣ移植後１４日目よりＭＥＫ阻害剤トラメチニブを０．１ｍｇ／ｋｇ投与した。無投薬マウスはｄａｙ１４までにＧＶＨＤ徴候（ＧＶＨＤスコア：マウスの姿勢、活動性、毛並み、下痢、脱毛、皮膚異常の有無により、無症状である０点から重篤である１２点までで評価）を発症したが、トラメチニブ投与マウスでこれらの徴候はその後軽快した（図５）。

（４）ＧＶＨＤ発症後のＭＥＫ阻害剤投与の効果（Ｔ細胞レパトア解析）
上記（３）の実験において、脾臓、肝臓、肺に浸潤したヒトＴ細胞についてｄａｙ１４とｄａｙ２８のＴＣＲレパトアを解析した。結果を図６（脾臓）、図７（肝臓）、図８（肺）に示す。図６〜８に示すとおり、無投薬マウスに比してトラメチニブ投与マウスでは、ＴＣＲレパトアの多様性が温存された。特筆すべきことに、この作用は既存の免疫抑制剤カルシニューリン阻害剤（タクロリムス）ではみられなかった。トラメチニブは、既存の免疫抑制剤カルシニューリン阻害剤（タクロリムス）では得られない効果、即ち移植後のポリクローナルな免疫再構築を促進させる効果を奏することがわかった。このことから、トラメチニブは、免疫再構築の障害を是正することで、治療抵抗性（難治性）のＧＶＨＤの治療薬となり得ると考えられる。なお、各図中のＩｎｄｅｘの数値は、Ｓｉｍｐｓｏｎ’ｓｉｎｄｅｘ（シンプソン多様度指数）であり、レパトアの多様性を表す。

上記と同様の効果は、トラメチニブのみならずコビメチニブでも確認できており、上記はＭＥＫ阻害剤全般に敷衍できる。トラメチニブ等のＭＥＫ阻害剤が既発症例・難治例の治療薬としても有用であれば、その用途は大きく広がり、重症ＧＶＨＤに苦しむ多くの患者に福音をもたらし、造血幹細胞移植の長期予後は大きく改善すると期待される。また、トラメチニブ及びコビメチニブは、欧米や日本において、悪性黒色腫に対して保険収載され、その安全性も担保されていることから、薬事承認までの開発過程を加速できるという優位性もある。

本発明によると、造血幹細胞移植の際又は移植後にＭＥＫ阻害剤を含む免疫再構築促進剤を投与することで、多様なＴ細胞の生着が可能となり、移植後のポリクローナルな免疫再構築を促進することができる。また、ＭＥＫ阻害剤は、免疫再構築を促進することにより、ＧＶＨＤ、特に難治性ＧＶＨＤ（治療抵抗性のＧＶＨＤ）の治療薬として効果を奏することが期待できる。なお、ＧＶＨＤは、免疫抑制剤による免疫再構築障害（ｓｋｅｗｉｎｇ）によって起こる合併症であると言うこともでき、ＭＥＫ阻害剤は、同障害を軽減することでＧＶＨＤの治療に効果を奏すると考えられる。特にＧＶＨＤ発症個体では、生理的な免疫再構築が障害され（ｓｋｅｗｉｎｇ）、ドナー由来の特定のＴ細胞クローンが脾臓、肺等で病的に増生することも本研究により本発明者らが明らかにした。ＭＥＫ阻害剤はそのような病的な単一クローンの増生を抑制することができる。したがって、本発明の免疫再構築促進剤及びＧＶＨＤ治療剤は、既存の免疫抑制剤との併用も可能であり、優れた効果を奏する。

Claims

ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む、造血幹細胞移植後の免疫再構築促進剤。
上記ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、及びセルメチニブからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の免疫再構築促進剤。
上記移植時及び／又は移植後ＧＶＨＤを発症している期間内に投与される、請求項１又は２に記載の免疫再構築促進剤。
免疫抑制剤と併用される、請求項１から３のいずれか１項に記載の免疫再構築促進剤。
上記免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤である、請求項４に記載の免疫再構築促進剤。
ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）治療剤。
上記ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、及びセルメチニブからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項６に記載のＧＶＨＤ治療剤。
造血幹細胞移植後のＧＶＨＤを治療することを特徴とする、請求項６又は７に記載のＧＶＨＤ治療剤。
移植時及び／又は移植後ＧＶＨＤを発症している期間内に投与される、請求項６から８のいずれか１項に記載のＧＶＨＤ治療剤。
免疫抑制剤抵抗性の患者に対して用いられる、請求項６から９のいずれか１項に記載のＧＶＨＤ治療剤。
上記免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤である、請求項１０に記載のＧＶＨＤ治療剤。