JP2020511945A - 先天性振戦aを引き起こす新規ペスチウイルスの単離 - Google Patents
先天性振戦aを引き起こす新規ペスチウイルスの単離 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020511945A JP2020511945A JP2019532687A JP2019532687A JP2020511945A JP 2020511945 A JP2020511945 A JP 2020511945A JP 2019532687 A JP2019532687 A JP 2019532687A JP 2019532687 A JP2019532687 A JP 2019532687A JP 2020511945 A JP2020511945 A JP 2020511945A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- pestivirus
- sequence
- virus
- polynucleotide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000710778 Pestivirus Species 0.000 title claims abstract description 202
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 title claims description 16
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 title claims description 12
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 95
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 67
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 67
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 67
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 49
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 59
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 57
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 46
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 45
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 42
- 241000710780 Bovine viral diarrhea virus 1 Species 0.000 claims description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 31
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 31
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 31
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 30
- LXWYCLOUQZZDBD-LIYNQYRNSA-N csfv Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXWYCLOUQZZDBD-LIYNQYRNSA-N 0.000 claims description 29
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 29
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 29
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 24
- 241000726028 Porcine pestivirus Species 0.000 claims description 23
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 23
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 claims description 21
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 claims description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 21
- 101710144111 Non-structural protein 3 Proteins 0.000 claims description 20
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 20
- 241000530623 Bovine viral diarrhea virus 2 Species 0.000 claims description 19
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 19
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 18
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 18
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 101800001554 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 claims description 16
- 101800001019 Non-structural protein 4B Proteins 0.000 claims description 14
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 14
- 101800001020 Non-structural protein 4A Proteins 0.000 claims description 13
- 101800001014 Non-structural protein 5A Proteins 0.000 claims description 13
- 244000309465 heifer Species 0.000 claims description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 11
- 101710125507 Integrase/recombinase Proteins 0.000 claims description 9
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 9
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 9
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 208000004571 Pestivirus Infections Diseases 0.000 claims description 8
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 claims description 6
- 241001673669 Porcine circovirus 2 Species 0.000 claims description 6
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 6
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 5
- -1 beta-ethyleneimine Chemical compound 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 5
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 claims description 4
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OXJUJQDEISSCTB-UHFFFAOYSA-N but-3-en-2-imine Chemical compound CC(=N)C=C OXJUJQDEISSCTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000013011 mating Effects 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 claims description 4
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 claims description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 4
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 208000008921 border disease Diseases 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 abstract description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 6
- 241001229027 Linda virus Species 0.000 description 65
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 51
- 241000951977 Atypical porcine pestivirus Species 0.000 description 35
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 34
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 33
- 241001118702 Border disease virus Species 0.000 description 30
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 18
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 18
- 241000894007 species Species 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 10
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 9
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 8
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 8
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 8
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 8
- 241000282817 Bovidae Species 0.000 description 7
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 7
- 241000283011 Rangifer Species 0.000 description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 241000282819 Giraffa Species 0.000 description 6
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 6
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 6
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 6
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 5
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 4
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 241000288673 Chiroptera Species 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001135549 Porcine epidemic diarrhea virus Species 0.000 description 3
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 3
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SPBDXSGPUHCETR-JFUDTMANSA-N 8883yp2r6d Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](OC)C[C@H](O[C@@H]2C(=C/C[C@@H]3C[C@@H](C[C@@]4(O[C@@H]([C@@H](C)CC4)C(C)C)O3)OC(=O)[C@@H]3C=C(C)[C@@H](O)[C@H]4OC\C([C@@]34O)=C/C=C/[C@@H]2C)/C)O[C@H]1C.C1C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@@]21O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]1O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C1)[C@@H](C)\C=C\C=C/1[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\1)O)C[C@H]4C2 SPBDXSGPUHCETR-JFUDTMANSA-N 0.000 description 2
- 241000489313 Bovine viral diarrhea virus 3 Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 206010062343 Congenital infection Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000282818 Giraffidae Species 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Chemical group OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 208000006941 Laboratory Infection Diseases 0.000 description 2
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 241000489978 Ovine pestivirus Species 0.000 description 2
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 description 2
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Chemical group OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000011331 genomic analysis Methods 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Chemical group 0.000 description 2
- 244000144980 herd Species 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 2
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 208000002254 stillbirth Diseases 0.000 description 2
- 231100000537 stillbirth Toxicity 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZSNMRSAGSSBNP-UHFFFAOYSA-N 22,23-dihydroavermectin B1a Natural products C1CC(C)C(C(C)CC)OC21OC(CC=C(C)C(OC1OC(C)C(OC3OC(C)C(O)C(OC)C3)C(OC)C1)C(C)C=CC=C1C3(C(C(=O)O4)C=C(C)C(O)C3OC1)O)CC4C2 AZSNMRSAGSSBNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- LHYQAEFVHIZFLR-UHFFFAOYSA-L 4-(4-diazonio-3-methoxyphenyl)-2-methoxybenzenediazonium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=C([N+]#N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C([N+]#N)=CC=2)=C1 LHYQAEFVHIZFLR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 208000007407 African swine fever Diseases 0.000 description 1
- 101150011571 BSL2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical class NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 241000505472 Chivirus Species 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 1
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 1
- 208000004145 Endometritis Diseases 0.000 description 1
- 201000000297 Erysipelas Diseases 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 208000012766 Growth delay Diseases 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241001182316 Linda Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 208000002033 Myoclonus Diseases 0.000 description 1
- FFDGPVCHZBVARC-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylglycine Chemical compound CN(C)CC(O)=O FFDGPVCHZBVARC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102100029251 Phagocytosis-stimulating peptide Human genes 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 241000255969 Pieris brassicae Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000202347 Porcine circovirus Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010037549 Purpura Diseases 0.000 description 1
- 101710086015 RNA ligase Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 1
- 206010042434 Sudden death Diseases 0.000 description 1
- 241000282894 Sus scrofa domesticus Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031737 Tissue Adhesions Diseases 0.000 description 1
- 108010084754 Tuftsin Proteins 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 206010062233 Uterine infection Diseases 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000027645 antigenic variation Effects 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 1
- YTLQFZVCLXFFRK-UHFFFAOYSA-N bendazol Chemical compound N=1C2=CC=CC=C2NC=1CC1=CC=CC=C1 YTLQFZVCLXFFRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 108010008529 bovine viral diarrhea virus gp53 Proteins 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000007435 diagnostic evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 108700003601 dimethylglycine Proteins 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000026502 entry into host cell Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 1
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- HDDSHPAODJUKPD-UHFFFAOYSA-N fenbendazole Chemical compound C1=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=CC=C1SC1=CC=CC=C1 HDDSHPAODJUKPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 230000005099 host tropism Effects 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960002418 ivermectin Drugs 0.000 description 1
- 229940007210 ivomec Drugs 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000005230 lumbar spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 230000023105 myelination Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007971 neurological deficit Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 229940078666 panacur Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008807 pathological lesion Effects 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 208000025858 pestivirus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 206010034754 petechiae Diseases 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 230000037425 regulation of transcription Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N tuftsin Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N 0.000 description 1
- 229940035670 tuftsin Drugs 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000010913 used oil Substances 0.000 description 1
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000008957 viral persistence Effects 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 230000007485 viral shedding Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1081—Togaviridae, e.g. flavivirus, rubella virus, hog cholera virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
- C12N2770/24321—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
- C12N2770/24334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
- C12N2770/24341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
- G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
Abstract
Description
新規単離ペスチウイルスは、動物において低い病原性を有し、そして天然感染経路の後であっても、迅速で、そして信頼性がある血清転換を導きうる。したがって、該ウイルスは、ワクチン接種目的に非常に適用可能である。
本発明にしたがって、配列番号1または配列番号2のヌクレオチド配列、あるいは該配列に少なくとも60%、特に少なくとも70%の同一性を持つ配列を含む、単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明の1つの態様において、該ポリヌクレオチドは細胞中、特に宿主細胞中に存在する。
さらなる態様にしたがって、該ポリヌクレオチドは外因性異種ポリヌクレオチドをさらに含む。
さらなる態様において、配列番号1のcDNAポリヌクレオチドを提供する。
さらなる態様において、配列番号1に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも99%、少なくとも99.5%の同一性を有する、cDNAポリヌクレオチドを提供する。
特定の態様にしたがって、ペスチウイルスは凍結乾燥型である。
また、本発明のさらなる態様にしたがって、本明細書に記載するようなポリヌクレオチド、組成物、ベクターまたはキメラペスチウイルスを含む、薬学的組成物も提供する。
別の態様にしたがって、異種配列は、ペスチウイルスのNpro、E2またはE1タンパク質を含む融合ペプチドをコードする。
さらに本明細書に提供するのは、動物、特にブタにおけるブタペスチウイルス感染に対する免疫反応を誘導するためのキットであって、本明細書に記載するような組成物またはワクチン、および前記動物に前記組成物を投与するための使用説明書を含む、前記キットである。
本明細書にやはり提供するのは、配列番号32および配列番号33より選択されるプライマーの少なくとも1つを含み、さらにデバイスおよび使用説明書を含む、ペスチウイルスを検出するための診断キットである。
a)本明細書に記載するようなポリヌクレオチド、ベクター、またはキメラペスチウイルスで、宿主細胞培養を感染させ、
b)ウイルス増殖のため、前記宿主細胞培養をインキュベーションし、
c)宿主細胞培養を採取し、そして場合によって
d)培養からウイルスを単離し、そして
e)薬学的に許容されうるキャリアーと培養を混合する
連続工程を含む、前記方法も提供する。
本明細書にさらに提供するのは、ワクチンにおいて、または動物の治療のために使用するための、本明細書に記載するようなポリヌクレオチド、ベクター、組成物、またはキメラペスチウイルス、あるいはその任意の組み合わせである。
用語「含む」、「含有する」、「有する」および「含まれる」は、本明細書において、同義に使用可能であり、そして開放(open)定義と理解されるべきであり、さらなるメンバーまたは部分または要素が可能である。「からなる」は、それらからなる定義の特徴のさらなる要素を伴わない、最も厳密な定義と見なされる。したがって、「含む」はより広く、そして「からなる」定義を含有する。
本明細書に提示する配列識別子において、ヌクレオチドは、DNAの標準的IUPAC−IUBコードで示される。しかし、当業者が理解するであろうように、天然のペスチウイルスゲノム配列はRNA型であり、この場合、TはUであろう。本発明のペスチウイルスRNA配列は、特に、配列番号2である。
ポリヌクレオチド分子は、鎖状に共有結合される13またはそれより多いヌクレオチド単量体で構成されるバイオポリマーである。DNA(デオキシリボ核酸)およびRNA(リボ核酸)は、ポリヌクレオチドの例である。本明細書において、用語「外因性ポリヌクレオチド」または「異種ポリヌクレオチド」は、本発明の配列によってコードされるペスチウイルスに天然に存在しない任意のポリヌクレオチド配列を指す。
一般的に、免疫系細胞と抗原の相互作用を通じて、抗原に対する免疫反応が生じる。免疫反応は、広く2つのカテゴリー:体液性および細胞仲介性免疫反応に分類可能である(例えば、それぞれ、防御における抗体機構および細胞性エフェクター機構によって伝統的に特徴付けられる)。これらの反応カテゴリーは、Th1型反応(細胞仲介性反応)、およびTh2型免疫反応(体液性反応)と称されてきている。免疫反応の刺激は、免疫原への曝露に対する免疫系の細胞または構成要素の直接または間接的反応から生じうる。免疫反応は、免疫系の細胞(例えばB細胞、T細胞、樹状細胞、APC、マクロファージ、NK細胞、NKT細胞等)の活性化、増殖または分化;マーカーおよびサイトカインの上方制御または下方制御された発現;IgA、IgM、またはIgG力価の刺激;脾腫(脾臓細胞充実度の増加を含む);多様な臓器における過形成および混合細胞浸潤を含む多くの方法で測定可能である。免疫刺激に関して評価可能である免疫系の他の反応、細胞、および構成要素が当該技術分野に知られる。
本明細書にさらに提供するのは、配列番号1または配列番号2に対して、少なくとも60%、特に少なくとも70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%または100%の同一性を持つヌクレオチド配列を有するブタペスチウイルスを含む組成物である。
前記異種配列は、本発明のペスチウイルス、あるいは配列番号1または配列番号2のポリヌクレオチドから生じずまたはこれらに由来しない、任意の配列であってもよい。前記異種配列は、ブタサーコウイルス2(PCV2)、ウシウイルス性下痢ウイルス−1(BVDV−1)およびBVDV−2、ボーダー病ウイルス(BDV)、豚コレラウイルス(CSFV)、非定型ペスチウイルス(APPV)、特にNRPV、RaPVおよびボーダー病ウイルス由来の異種ポリペプチドまたはタンパク質あるいはその一部をコードしてもよい。異種配列は、上に列挙するような任意のウイルス由来の表面抗原またはそれらに由来する合成配列をコードしてもよい。特に、異種配列をNproまたはE2の5’または3’端に挿入する。より具体的には、異種配列は、ペスチウイルスのNpro、E2またはE1、あるいはNpro、E2またはE1の部分または断片との融合ペプチドをコードする。
1つの態様にしたがって、異種ポリペプチドをN末端またはC末端領域内に挿入する。
「ワクチン」は、固有の医学的効果を有する、免疫原性組成物である。ワクチンは、免疫学的に活性である構成要素、および薬学的に許容されうるキャリアーを含む。「免疫学的に活性である構成要素」は、ターゲットの免疫系によって認識される、1またはそれより多い抗原性分子(単数または複数)、すなわち本発明にしたがうペスチウイルスそれ自体、あるいは本明細書に記載するようなベクターまたはキメラペスチウイルスであり、そして防御性免疫反応を誘導するものである。ワクチンは、一般的に、例えば宿主動物におけるウイルス負荷を減少させるかまたはウイルス複製期間を短縮させることによって、感染のレベルまたは度合いを減少させる際に有効である。また、ワクチンは、一般的に、疾患の症状を減少させるかまたは改善させる際に有効であり、これはこうしたウイルス感染または複製によって、あるいはその感染に対する動物の反応によって、引き起こされてもよいし、あるいはこれらの結果であってもよい。
用語「未経産ブタ」は、若い雌ブタを指す。本明細書において、未経産ブタは、わずか数ヶ月齢であるかまたは1歳に近付いているかのいずれであっても、まだ交配させていないブタである。未経産ブタは、未交配である(intact)か、または交配および出産可能であり、そして生殖器が外科的にまたは化学的に改変されていない。用語「雌ブタ」は成体雌ブタを指す。
あるいは、本発明にしたがうワクチンまたはその部分は、サブユニットワクチンであってもよい。これは、生または不活性化ウイルスのいずれかから、ウイルス粒子の1またはそれより多い部分の分画または単離のための1またはそれより多い(さらなる)工程を適用することによって、調製可能である。これは、例えば、すべて当該技術分野に周知の抽出、分画、ホモジネート、または超音波処理産物を調製する工程を含む。
本発明にしたがうワクチンはまた、アジュバントも含んでもよい。これは、ワクチンが不活性化ワクチンまたはサブユニットワクチンである場合、特に有用である。しかしまた、生ワクチンはアジュバントも含んでもよいが、ワクチンウイルスの生存度、さらには長期間の貯蔵に際しての生存度を減少させないように、注意深く選択しなければならない。
投与のため、組成物、例えばワクチンは、少なくとも約1x104、特に少なくとも1x105、1x106、1x107、1x108のTCID50のウイルス力価を含んでもよい。投薬量、すなわち投与されるウイルスの量の決定は、投与様式に応じうる。例えば、ウイルスを経口または鼻内経路によって投与する場合、用量あたり少なくとも1x106のTCID50を投与しなければならず、ウイルスを筋内経路によって投与する場合、用量あたり少なくとも1x104のTCID50を投与しなければならないが、より高い力価、例えば1x105、1x106、1x107またはそれより高い力価もまた包含される。それぞれの用量は、当業者によって決定可能である。
本発明にしたがう方法において、そして本発明にしたがうペスチウイルスの増幅のため、適切な宿主細胞においてウイルスを産生する。これは、宿主細胞への接種、および天然複製による増幅によってもよい。
1. 配列番号1または配列番号2のヌクレオチド配列、あるいは該配列に少なくとも60%、特に少なくとも70%の同一性を持つ配列を含む、単離ポリヌクレオチド。
3. 細胞中に存在する、項目1または2記載のポリヌクレオチド。
4. RNAポリメラーゼプロモーターが、ポリヌクレオチドに機能可能であるように連結されている、項目1〜3のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
6. ベクター中に存在する、項目1〜4のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
8. 配列番号1に対して、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%の相同性を有する、cDNAポリヌクレオチド。
12. 配列番号4(Npro)、配列番号5(コア)、配列番号6(Erns)、配列番号7(E1)、配列番号8(E2)、配列番号9(P7)、配列番号10(NS2)、配列番号11(NS3)、配列番号12(NS4A)、配列番号13(NS4B)、配列番号14(NS5A)および配列番号15(NS5B)からなる群より選択される1またはそれより多いアミノ酸配列を含むブタペスチウイルスを含む、組成物。
14. 前記ペスチウイルスが化学的に不活性化されたウイルスであって、特に、バイナリーエチレンイミン、エチレンイミン、アセチルエチレンイミン、ベータ−エチレンイミン、ベータ−プロピオラクトン、グルタルアルデヒド、オゾン、およびホルムアルデヒドからなる群より選択される不活性化剤での処理によって不活性化されている、項目13の組成物。
17. 凍結乾燥型のペスチウイルスを含む、項目10〜16のいずれか一項記載の組成物。
19. 項目10〜18のいずれか一項記載の組成物を含む、薬学的組成物。
23. 異種配列が、ペスチウイルスのNpro、E2またはE1タンパク質との融合ペプチドをコードする、項目25または27のいずれか一項記載のベクター。
29. 組成物を、非経口投与、特に、針およびシリンジ、または無針注射デバイスを用いて、筋内、皮下、皮内または静脈内で;あるいは粘膜投与を通じて、特に経鼻または経口で投与する、項目27または28記載の方法。
31. 配列番号32および配列番号33より選択されるプライマーの少なくとも1つを含む、ペスチウイルスを検出するための診断アッセイ。
生物学的試料を、モノクローナル抗体6A5抗体と接触させ、前記ペスチウイルス抗原が前記試料に存在する場合、前記モノクローナル抗体が前記ペスチウイルス抗原に特異的に結合し;そして前記試料において、前記抗原に対する抗体結合を検出する
工程を含む、前記方法。
a)項目1〜9のいずれか一項記載のポリヌクレオチド、項目20〜23のいずれか一項記載のベクター、または項目24記載のキメラペスチウイルスで、宿主細胞培養を感染させ、
b)ウイルス増殖のため、前記宿主細胞培養をインキュベーションし、
c)宿主細胞培養を採取し、そして場合によって
d)培養からウイルスを単離し、そして
e)薬学的に許容されうるキャリアーと培養を混合する
連続工程を含む、前記方法。
本発明は、限定されることなく、以下の実施例によってさらに例示される。
オーストリアの仔ブタ産出農場は、新生仔ブタにおいて、重度の反復性ミオクローヌスのアウトブレイクを記録した。罹患仔ブタの中枢神経系(CNS)の組織学的検査によって、小脳および脊髄における白質のミエリン形成不全が明らかになった。罹患仔ブタにおける非定型ブタペスチウイルス(APPV)ゲノムに関する検索中、仮に「リンダウイルス」と称される、以前は知られていなかったペスチウイルス株が発見された。このウイルスは、血清試料から単離され、そして培養ブタ細胞において容易に増殖可能であった。サンガー配列決定およびRACE−PCRとともに、プライマーウォーキングを用いて、全長ゲノム配列を決定した。リンダ配列と他の既知のペスチウイルス種および割り当てられていない株との対整列によって、最も近縁のボンゴワナウイルスに対して、68%未満のヌクレオチド同一性および70%未満のアミノ酸同一性が明らかになった。ペスチウイルス種であるBVDV−1、BVDV−2、CSFVおよびボンゴワナウイルスに対して作製された、100を超えるモノクローナル抗体の広いパネル内で、リンダウイルスに対して反応性である1つのE2特異的抗体が同定された。E2特異的抗体を用いて、病変部位での罹患仔ブタのCNSにおいて、リンダの存在が確認された。結論として、近年発見されたAPPVとは明らかに異なる、欧州家畜ブタにおける先天性振戦を引き起こす、推定上の新規ペスチウイルス種を本明細書に記載する。
2.1. 試料収集
本研究で使用するすべての動物使用プロトコルは、施設倫理動物福祉委員会および国内当局によって認可され、絶滅危惧種または保護種は本研究に関与しなかった。試料収集には、もっぱら私有の土地を用い、そして所有者の許可を得た後にのみアクセスした。2015年、CTによる多大な仔ブタの損失を報告した小規模オーストリア仔ブタ産出農場から契約獣医によって試料を得た。農場Lは、オーストリア法令にしたがって、CSFVまたは他のペスチウイルスに対するいかなるワクチンも用いていなかった。ウィーンの大学ブタクリニックの獣医が農場Lを訪問し、そして診断評価のため、さらなる試料を収集した。
農場Lは、オーストリア南部のスティリアに位置する仔ブタ産出場である。総数25のラージ・ホワイト×ランドレース交雑雌ブタが、連続出産サイクルで管理されている。CT罹患同腹仔は、未経産ブタでのみ生じ、そして続く同腹仔には観察されなかった。該未経産ブタは未経産ブタ生産者から得られ、該生産者はCTの問題を報告していなかった。すべての未経産ブタは、パルボウイルス症および丹毒に対してワクチン接種され(Parvoruvac(登録商標)、Merial SAS、フランス・リヨン)、そして別に、ヒゼンダニ症および線形動物の導入を防止するため、フェンベンダゾール(Panacur 4%、Intervet、ウィーン)およびイベルメクチン(Ivomec、Merial SAS、フランス・リヨン)で交互に処理された。この群れは、CTの発生前および発生後、PRRSVを生じなかった。
2頭の異なる同腹仔から生じる農場Lの8頭の仔ブタに対して、完全剖検を行った。6頭の臨床的に罹患した仔ブタおよび症状を示さない2頭の健康な同腹仔からの知見を比較した。仔ブタを安楽死させ;巨視的病理学的検査を行い、そして試料を採取した。組織学的検査のため、すべての仔ブタおよびCTの問題を伴わない農場由来の健康な対照動物の脳、脊髄、および臓器試料を10%中性緩衝ホルマリン中で固定した。ホルマリン固定した脳を、2〜3mmの厚さの冠状(coronary)切片にカットし、そしてパラフィン蝋中に包埋した。頸髄、胸髄および腰髄の臓器試料、ならびに冠状および縦断切片もまたカットし、そしてパラフィン蝋中に包埋した。すべての包埋した臓器で、1.5μm厚切片をカットし、そしてヘマトキシリンおよびエオジン(HE)で染色した。さらに、脳および脊髄試料を、ルクソール・ファースト・ブルーおよびHE(LFB−HE)の組み合わせで染色し、ミエリン形成の度合いを決定した。リンダ検出のため、自動染色装置(Lab Vision AS 360、Thermo Fisher Scientific、米国ウォルサム)上で、一次抗汎ペスチウイルスE2抗体(mAb 6A5、希釈1:1000)を用いて、免疫組織化学検査を自動で行った。簡潔には、仔ブタの脳および脊髄の2μmパラフィン包埋切片をコーティングしたスライドに乗せ、そして組織接着を増進させるために乾燥させた。クエン酸緩衝液(pH6)中で加熱することによって、脱パラフィン処理し、そして再水和した切片上で、抗原回収を行った。H2O2中でインキュベーションすることによって、内因性ペルオキシダーゼ活性を遮断した。一次抗体を適用した後、酵素標識ポリマーにコンジュゲート化された普遍的二次抗体配合物からなる、ポリマー検出系(UltraVision LP大量検出系;Thermo Fisher Scientific、米国ウォルサム)を用いた。次いで、ポリマー複合体を、適切な基質/色素原(ジアミノベンジジン[DAB];Labvision/Thermo Fisher Scientific、米国ウォルサム)で可視化した。続いて、すべての切片をヘマトキシリンで対比染色し、脱水し、そしてマウンティングした。
製造者の指示にしたがってQIAampウイルスRNAミニキット(Qiagen、ドイツ・ヒルデン)を用いて、フィールド血清または組織試料から総RNAを抽出した。RNAを60μl RNアーゼ不含蒸留水中で溶出し、そして直接、RT−PCRに用いたか、または続く分析のため、−80℃で保存した。製造者の指示にしたがって、One Taq One−Step RT−PCRキット(NEB、米国イプスウィッチ)またはOne Step RT−PCRキット(Qiagen、ドイツ・ヒルデン)を用いて、RT−PCRを行った。汎ペスチウイルスRT−PCRプロトコルを開発して、オリゴヌクレオチドPPF(5’−GTKATHCAATACCCTGARGC−3’、配列番号32)およびPPR(5’−GGRTTCCAGGARTACATCA−3’、配列番号33)、55℃のアニーリング温度、ならびに1分間の伸長時間を用いて、非定型ペスチウイルスを検出した。
ウイルス単離のため、罹患農場L由来の疾患仔ブタの50μl血清または50μlのホモジナイズ組織試料を用いて、6ウェルプレート上、5x106(5x106)個のSK−6細胞に接種した。3日後、細胞培養上清を採取し、遠心分離によって清澄にし、そして新鮮なSK−6細胞上で継代した。10%ウシ胎児血清(FCS Gold Plus、Bio&Sell、ドイツ・フォイヒト)を補充したダルベッコの修飾イーグル培地(DMEM)中ですべての細胞を増殖させ、そして37℃および5%CO2で維持した。RT−PCRおよび免疫蛍光によって、ウイルス感染および継代を分析した。
以前の研究において、CSFVおよびBVDVの大部分のタンパク質に対して、モノクローナル抗体が生成された。さらに、ボンゴワナウイルスのE2およびNS3に対して抗体が作製された(未公表データ)。簡潔には、血清転換が観察されるまで、BALB/cマウスを組換えタンパク質で免疫した。脾臓細胞を調製し、そしてsp2/0−AG14骨髄腫細胞と融合させて、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを生成した。ELISA、イムノブロット(mmunoblot)および免疫蛍光アッセイを必要に応じて用いて、生じたmAbを評価した。これらの融合実験各々は、最大100の異なる反応性モノクローナル抗体を生じ、ペスチウイルスタンパク質に対する広範な抗体コレクションを生成した。リンダウイルス感染細胞培養を用いた間接的免疫蛍光アッセイによって、交差反応性抗体のいくつかのE2特異的およびNS3特異的パネルをスクリーニングした。
GenBankにおいて入手可能な公開配列にしたがって、異なるペスチウイルス種(BVDV、BDV、CSFV、ボンゴワナ、およびAPPV)中の非常に保存された領域とハイブリダイズするいくつかのプライマー対(要請に応じて入手可能)を設計した。最5’および3’末端の配列を決定するため、RACE−PCRを行った。T4 RNAリガーゼI(NEB、米国イプスウィッチ)を用いて、ウイルス感染細胞培養から精製した総RNAを2つの異なるアダプターオリゴヌクレオチドに連結した。非リン酸化標準オリゴヌクレオチド(AD1、5’−GGCCACGCGTCGACTAGTAC−3’−OH、配列番号34)を5’−RACEに用い、そしてアミン基によって3’端でブロッキングされているリン酸化オリゴヌクレオチドを3’−RACEに用いた(AD2、PO3−5’−GGCCACGCGTCGACTAGTAC−3’−AmC3、配列番号35)。cDNA生成およびそれに続くPCR増幅のため、リンダウイルス特異的配列にハイブリダイズするプライマーおよびアダプタープライマー(AD1またはAD1rev)を、逆転写酵素(Superscript II、Thermo Fisher Scientific)および高忠実度Taqポリメラーゼ(One Taq、NEB)とともに適用した。アダプターオリゴヌクレオチド(AD1またはAD1rev)を、入れ子(nested)リンダ配列特異的プライマーと共に用いた第二のPCRを使用して、望ましい5’および3’末端を増幅した。PCRアンプリコンをゲル電気泳動に供し、peqGOLDゲル抽出キット(Peqlab、ドイツ・エアランゲン)によって精製し、そして商業的供給業者(Eurofins Genomics、ドイツ・エーバースベルグ)によって配列決定した。さらに、すべてのリンダcDNA断片を、pGEM−T easyベクター(Promega、米国マディソン)にサブクローニングし、そしてプラスミドから再配列決定して、高品質の配列決定結果を得た。ペスチウイルスであるリンダ株の配列をGenBankに提出し、そして該配列を配列番号1として以下に列挙する。NCBIのヌクレオチド(BLASTn)およびタンパク質(BLASTp)のための基本的局所整列検索ツールを用いて、最初の分析を行った。CLC Main Workbench 7.6(CLCBIO、デンマーク・オーフス)で、系統発生対比較および同一性計算を行った。1,000回の複製に基づくブートストラップ値で、ソフトウェアCLC Sequence Viewer 7.6(CLCBIO、デンマーク・オーフス)を用いて、整列および系統発生樹を生成した。系統発生樹の構築のため、GenBankに寄託されている他のペスチウイルス種の配列を、示すとおりに用いた。
3.1. 罹患農場Lにおける臨床徴候の説明
2015年7月、CTの最初の徴候が、初めて出産した雌ブタの新生仔ブタで観察された:これらの同腹仔由来の新生仔ブタの20%〜100%が、全身を伴う水平振戦(horizontal shaking)を示した。多くの新生仔ブタは、母乳を吸うことができず、そして離乳前に死亡した。振戦は、単一の罹患仔ブタにおいて、徐々に消滅し、疑わしくない離乳後仔ブタを生じた。CTのアウトブレイクは、新規出産雌ブタの最後の同腹仔とともに、2015年9月に終わった。
2頭のCT罹患同腹仔由来の仔ブタは、巨視的検査に際して、まったく病変を示さないかまたは軽度の病変しか示さなかった。脚の擦りむき、肺胞性肺浮腫および肺気腫が見られた。CT罹患仔ブタの何頭かは、腎皮質および脊髄に安楽死とは関連しない散在性点状出血を示した。CT罹患仔ブタの脊髄は、わずかに発育不全を示した。HE−LFB染色において、すべての臨床的罹患動物の小脳白質に、目立つ液胞が存在し(n=6/6)、一方、非罹患同腹仔にはより少ない液胞が見られた(図1A、B)。ミエリン形成不全および低形成は、健康な対照に比較して、罹患仔ブタおよび非罹患同腹仔の小脳白質および脊髄において明らかであった(図1)。
新規プライマーセットを用いて、非定型ペスチウイルスを検出するため、よく保存されたNS5B領域をターゲティングする汎ペスチウイルスRT−PCRを開発した。このアッセイは、BVDV−1、BVDV−2、CSFV、BDV、ボンゴワナウイルスおよび最近単離されたAPPV株(Schwarzら、2016)の培養を用いて、成功と評価された。このRT−PCRアッセイおよび農場LのCT罹患仔ブタの臨床試料を用いて、適切な長さのアンプリコンが得られた。該PCRプライマーを用いて、815bpのアンプリコンを配列決定し、中断されないオープンリーディングフレームを含む未知の配列を生じた。最初のBLASTn検索結果では、「有意な類似性は見られなかった」が、270アミノ酸の翻訳されたアミノ酸配列を異なるペスチウイルスと整列させた。整列は、ボンゴワナウイルス(YP_008992092.1、同一性84%、E値1e−154)、CSFV(NP_777506.1、同一性78%、E値2e−153)、BDV(NP_777545.1、同一性77%、E値9e−151)、およびBVDV−1(1S4F_A、同一性75%、E値6e−150)をカバーした。CTに罹患していてもいなくても、農場L由来の調べたCT同腹仔由来のすべての仔ブタにおける臨床試料(血清、扁桃腺、肺、肝臓、脾臓およびCNS材料)において、ウイルスRNA配列が見出された。対照的に、リンダ株核酸の存在に関する、農場Lの母雌ブタの血清試料の試験結果は陰性であった。
標準的プライマーウォーキングRT−PCRアプローチを、最5’および3’末端を同定するRACE−PCRと共に用いて、リンダの全ゲノムを決定した。リンダウイルスに関して、総数12,614ヌクレオチド(nt)を決定し、これは5’−NTRの381nt、3’−NTRの461ntおよびコード領域(ORF)の11,772ntに相当した。リンダおよびその最近縁種ボンゴワナウイルスの間のヌクレオチド同一性は、68.0%未満であり、配列整列包括度はわずか88%であった。他のペスチウイルス間で保存される遺伝子内において非常に類似したヌクレオチド整列は短いストレッチのみが得られ、ゲノムの42%未満しかカバーしなかった。その結果、リンダおよびBVDV−1、BVDV−2、BDV、APPVまたはCSFVの間の同一性は60%未満であった。明らかであるように、ボンゴワナウイルスへの、ならびに古典的ペスチウイルス種への距離はかなりのものである。リンダウイルス、非定型ペスチウイルス株およびペスチウイルス基準株の系統発生ゲノム分析を図2に示す。
リンダのORFは3,924コドンを含有し;これは、外来遺伝子挿入を含むBVDV株を除けば、いかなる他の既知のペスチウイルスゲノムのORFよりも多いコドンである。リンダのアミノ酸配列と、GenBankで入手可能な他のペスチウイルスとの比較は、各々0.0の期待値で、ボンゴワナウイルス(YP_008992092.1)と69%、BVDV−3(BAO04453.1)と53%、BDV(AHM88396.1)と53%、CSFV(AGE89843.1)と53%、BVDV−2(CDH30717.1)と52%、そしてBVDV−1(AEW46241.1)と52%のアミノ酸同一性を生じる。ペスチウイルスポリタンパク質の系統発生分析を図3に示す。リンダウイルスのすべての仮説上のポリタンパク質プロセシング産物は、ボンゴワナウイルスの成熟タンパク質と最もよくマッチする。ボンゴワナウイルスに対する同一性スコアは、Npro(AA1−182)に関して63%、コア(AA183−283)に関して83%、Erns(AA284−504)に関して74%、E1(AA505−702)に関して67%、E2(AA703−1077)に関して53%、P7(AA1078−1152)に関して59%、NS2(AA1153−1608)に関して63%、NS3(AA1609−2291)に関して85%、NS4A(AA2292−2354)に関して81%、NS4B(AA2355−2701)に関して78%、NS5A(AA2702−3205)に関して53%、そしてNS5B(AA3206−3923)に関して73%と決定された。シグナルペプチド切断部位は、古典的ペスチウイルスの実験的に決定されたタンパク質境界と同様に注釈付けされ、そしてインシリコ予測を用いて確認された。他のペスチウイルスと異なり、非構築タンパク質NS4AおよびNS4Bの間でNS3が仲介する切断は、ボンゴワナウイルスとちょうど同様に、リンダウイルス中のロイシン/セリン部位で行われる。NS3内で、プロテアーゼおよびヘリカーゼドメインを分離する特定の分子内ロイシン/アラニン切断部位(L1834/A1835)がリンダウイルスに存在する。
ペスチウイルス・エンベロープタンパク質E2は、ウイルス表面上にホモ二量体およびE1−E2ヘテロ二量体を形成し、受容体仲介性エンドサイトーシスを通じた、宿主細胞への付着および進入を仲介する。回復期宿主は、E2タンパク質に対する抗体反応を発展させ、これはウイルス中和に非常に重要である。E2タンパク質は、ペスチウイルス種特異的宿主指向性の原因であり、そしてすべてのペスチウイルスタンパク質の間で、最大の多様性量を示す。リンダウイルスE2は、ボンゴワナウイルスE2に53%同一であった(図4)。わずか241〜244アミノ酸しか持たない、より短いラットペスチウイルスおよびAPPV E2を除いて、すべてのE2タンパク質は、同等の長さ(373〜378AA)を示し、そして3ドメイン構造を共有した。APPVおよびコウモリペスチウイルスE2は、8つのシステインを含有し、CSFV E2は15のシステイン、リンダウイルスE2は16のシステイン、BVDV−1、BVDV−2、BVDV−3、ヒツジ、トナカイ、キリン、ラットペスチウイルスおよびBDV E2は17のシステイン、エダツノレイヨウペスチウイルスE2は18のシステイン、そしてボンゴワナウイルスは19のシステインを含有する。最大8までの分子内ジスルフィド結合が、E2タンパク質ドメインの構造単位を形成し、そして未結合システインは、E2−E2ホモ二量体またはE1−E2ヘテロ二量体の分子間二量体化を仲介する。典型的なシステイン位は、リンダウイルスにおいて保存され、そしてBVDV同様、296位のリンダウイルスのE2におけるシステインは、ヘテロ二量体形成を仲介する。N連結グリコシル化(NLG)、アスパラギン残基へのオリゴ糖の付加は、コンセンサス配列モチーフAsn−X−Ser/Thrの認識を必要とする。ペスチウイルスE2は、エダツノレイヨウペスチウイルスの場合、3つのNLG部位、BVDV−1、BVDV−2、ラットペスチウイルス、キリンペスチウイルスおよびボンゴワナウイルスの場合、4つのNLG部位、BVD、APPVおよびヒツジペスチウイルスの場合、5つのNLG部位を含有するが、CSFV、BVDV−3、トナカイペスチウイルスおよびコウモリペスチウイルスの場合、最大6のNLG部位を含有する。高度にグリコシル化されると、グリカン付着により、分子量増加が引き起こされ、そして免疫原性タンパク質表面がマスキングされる。すべての既知のペスチウイルス種とは対照的に、リンダペスチウイルスの配列には、2つの潜在的なNLG部位しか含まれない。リンダペスチウイルスE2は、古典的ペスチウイルスのE2分子と配列類似性を示したが、別個の特徴を示す。
RT−PCRアッセイが利用可能であることで、培養細胞のリンダ感染の検出が可能になった。SK−6細胞に、CT罹患仔ブタの血清をまず接種し、そして細胞培養上清を継代した後、リンダウイルスの単離に成功したことがRT−PCRによって示された。SK−6またはPK−15細胞のリンダによる感染は、見かけ上、細胞傷害性の影響を導かなかった。確立された血清学的試薬および免疫蛍光を用いて、感染後のSK−6、PK−15およびMDBK細胞におけるリンダ抗原の存在をさらに示した。リンダのかなり高い感染力価が、感染ブタ細胞培養上清で測定された(1mlあたり>107 TCID50(107 TCID50)、図5)。さらに、ブタおよびウシ細胞株を使用した病巣サイズアッセイによって、MDBK細胞におけるよりも、SK−6細胞において、約10倍のより大きい抗原陽性病巣が明らかになった(図5B)。
以前の研究によって確立された、免疫蛍光陽性ペスチウイルス特異的mAbのパネルを、リンダウイルス感染細胞培養に対する反応性に関してスクリーニングした。BVDV E2に対して生成されたE2特異的抗体6A5を用いると、リンダ感染細胞に対する強い反応が見られた(図6)。この抗体の免疫蛍光は、小胞体膜の優勢な染色を伴う細胞質シグナルを生じる。この染色パターンはまた、他のペスチウイルスの相同タンパク質にも関しても立証されてきている。
APPVの存在に関して、CTの典型的な症例を調べる過程で、TaqManプローブに基づくRT−PCRアッセイ(Schwarzら、2016)を用いてもAPPVが検出されなかったため、仔ブタ産出農場Lは目を引いた。これは、臨床的観察が明らかであり、そして感染動物の脊髄および小脳における病変が顕著であったため、驚くべきことであった。
動物試験リンダウイルス
リンダウイルス病原性および排出を調べるため、動物試験をセットアップした。21頭の離乳後仔ブタ(Sus scrofa domestica、12週齢)を3つの異なる群にして生物学的安全装置(BSL2)中で飼育した。1週後、1x10^7組織感染性用量50%(TCID50)のリンダウイルスで、5頭の動物に鼻内、そして5頭の動物に筋内感染させた。5頭の動物群に偽感染させ、そしてこれは分離された対照としての役割を果たした一方、3頭の歩哨動物を感染日(the day post infection)に感染群に含めた。すべての動物の健康状態を毎日評価し、そして体重を測定した。感染後、第0日(感染日)、第3日、第5日、第7日、第14日、第21日、および第28日に、血清試料、鼻および経口スワブ、ならびに糞便試料を分析して、ウイルス血症およびウイルス排出を評価した。動物試験は、以下を示した:
1. リンダは、離乳後動物には低病原性である(明らかな発熱なし、明らかな増殖遅延なし、体重獲得のわずかな減少)
2. リンダは、天然感染経路後であっても(感染歩哨動物において、SNT力価>1:100)、迅速でそして信頼性がある血清変換を導く(鼻内5頭、および筋内5頭の10頭の感染ブタのうち、10頭で中和抗体が検出可能−すべてSNT力価>1:256)
3. リンダはブタに関して伝染性病原体である(6頭の歩哨のうち1頭が感染)
4. リンダは、短期持続性ウイルス血症を引き起こす(感染性ウイルスは、2頭の筋内動物および歩哨でのみ、各々、単一の試験時点で観察された。試験スキーム:d3、d7、d14、d21、d28)
5. リンダは口腔鼻液を通じて分泌される(第7日および/または第14日に3頭の感染動物でRT−PCR陽性を通じてウイルス検出)
Claims (36)
- 配列番号1または配列番号2のヌクレオチド配列、あるいは該配列に少なくとも60%、特に少なくとも70%の同一性を持つ配列を含む、単離ポリヌクレオチド。
- 感染性ポリヌクレオチドである、請求項1のポリヌクレオチド。
- 細胞中に存在する、請求項1または2記載のポリヌクレオチド。
- RNAポリメラーゼプロモーターが、該ポリヌクレオチドに機能可能であるように連結されている、請求項1〜3のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
- 外因性ポリヌクレオチドをさらに含む、請求項1〜4のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
- ベクター中に存在する、請求項1〜5のいずれか一項記載のポリヌクレオチド。
- 配列番号1のcDNAポリヌクレオチド。
- 配列番号1に対して、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%の相同性を有する、cDNAポリヌクレオチド。
- 配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29またはその任意の組み合わせ、あるいは該配列に少なくとも95%の同一性を有する配列の群より選択される配列を含む、感染性ポリヌクレオチド。
- 配列番号1または配列番号2のヌクレオチド配列、あるいは該配列に少なくとも60%、特に少なくとも70%の同一性を持つ配列を有するブタペスチウイルスを含む、組成物。
- 配列番号3のアミノ酸配列、または該配列に少なくとも60%の同一性を有する配列を含むブタペスチウイルスを含む、組成物。
- 配列番号4(Npro)、配列番号5(コア)、配列番号6(Erns)、配列番号7(E1)、配列番号8(E2)、配列番号9(P7)、配列番号10(NS2)、配列番号11(NS3)、配列番号12(NS4A)、配列番号13(NS4B)、配列番号14(NS5A)および配列番号15(NS5B)からなる群より選択される1またはそれより多いアミノ酸配列を含むブタペスチウイルスを含む、組成物。
- 該ブタペスチウイルスが不活性化されているかまたは弱毒化されている、請求項10〜12のいずれか一項記載の組成物。
- 前記ペスチウイルスが化学的に不活性化されたウイルスであって、特に、バイナリーエチレンイミン、エチレンイミン、アセチルエチレンイミン、ベータ−エチレンイミン、ベータ−プロピオラクトン、グルタルアルデヒド、オゾン、およびホルムアルデヒドからなる群より選択される不活性化剤での処理によって不活性化されている、請求項13の組成物。
- 該ペスチウイルスが物理的に不活性化されたペスチウイルスであって、UV照射、X線照射、ガンマ照射、凍結融解、および/または加熱での処理によって不活性化されている、請求項13の組成物。
- 該ペスチウイルスが、Npro、ErnsまたはN2−3遺伝子を修飾することによって弱毒化されている、請求項13の組成物。
- 凍結乾燥型の該ペスチウイルスを含む、請求項10〜16のいずれか一項記載の組成物。
- 少なくとも約104のTCID50を含む、請求項10〜17のいずれか一項記載の組成物。
- 請求項10〜18のいずれか一項記載の組成物を含む、薬学的組成物。
- 配列番号2のヌクレオチド配列、または該配列に少なくとも60%、特に少なくとも70%の同一性を有する配列、および異種配列をコードする配列を含む、ブタペスチウイルスベクター。
- 該異種配列が、APPV、NRPV、ブタサーコウイルス2(PCV2)、ボンゴワナウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス(BVDV)、特にBVDV−1、BVDV−2、豚コレラウイルス(CSFV)、RaPVおよびボーダー病ウイルスからなる群より選択されるウイルスから選択され、特に、前記異種配列が前記ウイルス由来の表面抗原をコードする、請求項20のベクター。
- 異種配列がNproの5’または3’端に挿入される、請求項20または21のいずれか一項記載のベクター。
- 該異種配列が、ペスチウイルスのNpro、E2またはE1タンパク質との融合ペプチドをコードする、請求項20〜22のいずれか一項記載のベクター。
- 配列番号1または配列番号2に対して少なくとも60%、特に少なくとも70%の同一性を有するヌクレオチド配列、および外来ポリペプチドを含む、キメラペスチウイルス。
- 請求項1〜9のいずれか一項記載のポリヌクレオチド、または請求項10〜18のいずれか一項記載の組成物、または請求項20〜23のいずれか一項記載のベクター、または請求項24記載のキメラペスチウイルスを含む、動物用ワクチン。
- 動物におけるブタペスチウイルス感染に対する免疫反応を誘導するためのキットであって、請求項10〜18のいずれか一項記載の組成物、および前記動物に前記組成物を投与するための使用説明書を含む、前記キット。
- ペスチウイルスと関連する疾患に対して、仔ブタを防御するための方法であって、妊娠雌ブタ、離乳後の仔ブタ、未経産ブタ、あるいは交配前の雌ブタまたは未経産ブタに、仔ブタを防御するために十分な量の請求項10〜18のいずれか一項の組成物を投与する工程を含む、前記方法。
- 該疾患が、先天性振戦、特に先天性振戦A−IIである、請求項27記載の方法。
- 該組成物を、非経口投与、特に、針およびシリンジ、または無針注射デバイスを用いて、筋内、皮下、皮内または静脈内で;あるいは粘膜投与を通じて、特に経鼻または経口で投与する、請求項27または28記載の方法。
- 配列番号32および配列番号33より選択されるプライマーの少なくとも1つを用いたRT PCRで試料を試験する、ペスチウイルスを検出するための方法。
- 配列番号32および配列番号33より選択されるプライマーの少なくとも1つを含む、ペスチウイルスを検出するための診断アッセイ。
- 配列番号3のアミノ酸配列または少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するペスチウイルス抗原を、生物学的試料において検出するための方法であって:
生物学的試料を、モノクローナル抗体6A5抗体と接触させ、前記ペスチウイルス抗原が前記試料に存在する場合、前記モノクローナル抗体が前記ペスチウイルス抗原に特異的に結合し;そして前記試料において、前記抗原に対する抗体結合を検出する
工程を含む、前記方法。 - 請求項32記載のワクチンを調製するための方法であって、
a)請求項1〜9のいずれか一項記載のポリヌクレオチド、請求項20〜23のいずれか一項記載のベクター、または請求項24記載のキメラペスチウイルスで、宿主細胞培養を感染させ、
b)ウイルス増殖のため、前記宿主細胞培養をインキュベーションし、
c)宿主細胞培養を採取し、そして場合によって
d)培養からウイルスを単離し、そして
e)薬学的に許容されうるキャリアーと培養を混合する
連続工程を含む、前記方法。 - 動物用ワクチンを調製するための、請求項1〜9のいずれか一項記載のポリヌクレオチド、または請求項10〜18のいずれか一項記載の組成物、または請求項20〜23のいずれか一項記載のベクター、または請求項24記載のキメラペスチウイルス、あるいはその任意の組み合わせの使用。
- 動物用ワクチンにおいて使用するための、請求項1〜8のいずれか一項記載のポリヌクレオチド、または請求項10〜18のいずれか一項記載の組成物、または請求項20〜23のいずれか一項記載のベクター、または請求項24記載のキメラペスチウイルス、あるいはその任意の組み合わせ。
- 請求項25記載のワクチンを、請求項26記載の診断キットと組み合わせる、動物におけるペスチウイルス感染を管理するための方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662437888P | 2016-12-22 | 2016-12-22 | |
US62/437,888 | 2016-12-22 | ||
PCT/EP2017/084453 WO2018115474A1 (en) | 2016-12-22 | 2017-12-22 | Isolation of a novel pestivirus causing congenital tremor a |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020511945A true JP2020511945A (ja) | 2020-04-23 |
Family
ID=61002983
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019532687A Pending JP2020511945A (ja) | 2016-12-22 | 2017-12-22 | 先天性振戦aを引き起こす新規ペスチウイルスの単離 |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11529407B2 (ja) |
EP (1) | EP3559021A1 (ja) |
JP (1) | JP2020511945A (ja) |
KR (1) | KR20190096965A (ja) |
CN (1) | CN110177799A (ja) |
AU (1) | AU2017380107B2 (ja) |
BR (1) | BR112019008720A2 (ja) |
CA (1) | CA3040199A1 (ja) |
CL (1) | CL2019001689A1 (ja) |
MX (1) | MX2019007205A (ja) |
MY (1) | MY195526A (ja) |
PH (1) | PH12019500903A1 (ja) |
UA (1) | UA126567C2 (ja) |
WO (1) | WO2018115474A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109053904B (zh) * | 2018-09-19 | 2020-07-03 | 天康生物股份有限公司 | Appv-e2融合蛋白及其制备方法、应用和疫苗 |
CN111116720B (zh) * | 2020-02-24 | 2022-02-15 | 中牧实业股份有限公司 | 一种猪瘟病毒重组e2蛋白及其应用 |
CN118176015A (zh) * | 2021-10-19 | 2024-06-11 | 勃林格殷格翰动物保健(中国)有限公司 | 具有b/c结构域交换的重组经典猪瘟病毒e2蛋白 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080268425A1 (en) * | 2007-04-25 | 2008-10-30 | Chin-Sheng George Chou | Methods and kits for detecting classical swine fever virus |
US20100203063A1 (en) * | 2006-04-21 | 2010-08-12 | Minister for Primary Industries For And On Behalf Of The State Of New South Wales | Pestivirus species |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7572455B2 (en) | 2004-05-19 | 2009-08-11 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Vaccine comprising an attenuated pestivirus |
UY31930A (es) | 2008-06-25 | 2010-01-29 | Boheringer Ingelheim Pharma Kg | Pestivirus atenuados recombinantes, en particular a csfv, bvdv o bdv atenuado recombinante |
EP2392680A1 (en) * | 2010-06-04 | 2011-12-07 | Labor Diagnostik GmbH Leipzig | Method for specific detection of classical swine fever virus |
-
2017
- 2017-12-22 CN CN201780076564.5A patent/CN110177799A/zh active Pending
- 2017-12-22 US US16/472,846 patent/US11529407B2/en active Active
- 2017-12-22 KR KR1020197013863A patent/KR20190096965A/ko not_active Application Discontinuation
- 2017-12-22 BR BR112019008720A patent/BR112019008720A2/pt unknown
- 2017-12-22 WO PCT/EP2017/084453 patent/WO2018115474A1/en unknown
- 2017-12-22 MY MYPI2019001997A patent/MY195526A/en unknown
- 2017-12-22 AU AU2017380107A patent/AU2017380107B2/en not_active Ceased
- 2017-12-22 CA CA3040199A patent/CA3040199A1/en active Pending
- 2017-12-22 EP EP17832078.4A patent/EP3559021A1/en not_active Withdrawn
- 2017-12-22 MX MX2019007205A patent/MX2019007205A/es unknown
- 2017-12-22 JP JP2019532687A patent/JP2020511945A/ja active Pending
- 2017-12-22 UA UAA201904236A patent/UA126567C2/uk unknown
-
2019
- 2019-04-24 PH PH12019500903A patent/PH12019500903A1/en unknown
- 2019-06-19 CL CL2019001689A patent/CL2019001689A1/es unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100203063A1 (en) * | 2006-04-21 | 2010-08-12 | Minister for Primary Industries For And On Behalf Of The State Of New South Wales | Pestivirus species |
US20080268425A1 (en) * | 2007-04-25 | 2008-10-30 | Chin-Sheng George Chou | Methods and kits for detecting classical swine fever virus |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
VET WORLD., vol. 8(9), JPN6021051215, 2015, pages 1059 - 1062, ISSN: 0005038433 * |
ウイルス, vol. 第61巻,第2号, JPN6022031273, 2011, pages 239 - 248, ISSN: 0005038434 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
PH12019500903A1 (en) | 2019-07-01 |
WO2018115474A1 (en) | 2018-06-28 |
UA126567C2 (uk) | 2022-11-02 |
RU2019111600A3 (ja) | 2021-07-26 |
KR20190096965A (ko) | 2019-08-20 |
CN110177799A (zh) | 2019-08-27 |
AU2017380107A1 (en) | 2019-05-02 |
CA3040199A1 (en) | 2018-06-28 |
RU2019111600A (ru) | 2021-01-22 |
CL2019001689A1 (es) | 2019-09-06 |
US11529407B2 (en) | 2022-12-20 |
RU2765658C2 (ru) | 2022-02-01 |
MY195526A (en) | 2023-01-30 |
MX2019007205A (es) | 2019-11-21 |
EP3559021A1 (en) | 2019-10-30 |
BR112019008720A2 (pt) | 2019-07-16 |
US20210308248A1 (en) | 2021-10-07 |
AU2017380107B2 (en) | 2021-04-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7445375B2 (ja) | ブタサーコウイルス3型免疫原性組成物、その製造方法、およびその使用方法 | |
Blome et al. | Classical swine fever vaccines—State-of-the-art | |
US10555995B2 (en) | Porcine pestvirus, vaccines, and assays | |
US9897605B2 (en) | Porcine torque teno virus vaccines and diagnosis | |
CN108064165A (zh) | 猪流行性腹泻病毒株和由其产生的免疫原性组合物 | |
KR102472939B1 (ko) | 페스티바이러스 | |
AU2017380107B2 (en) | Isolation of a novel pestivirus causing congenital tremor A | |
Kumar et al. | Evaluation of surface glycoproteins of classical swine fever virus as immunogens and reagents for serological diagnosis of infections in pigs: A recombinant Newcastle disease virus approach | |
TWI328039B (ja) | ||
RU2765658C9 (ru) | Выделение нового пестивируса, вызывающего врожденный тремор а | |
US9315873B2 (en) | Marker vaccine for classical swine fever | |
JP2019506850A (ja) | ペスチウイルスマーカーワクチン | |
TWI393778B (zh) | Recombinant swine fever virus E2 glycoprotein, its single source antibody and its application in diagnostic reagents and subunit vaccines (2) | |
Zhang et al. | Identification of novel monoclonal antibodies specific for the conserved epitopes in the E2 protein of genotype 2 classical swine fever virus: implication for differential diagnosis | |
Jiang et al. | 24 Border Disease Virus |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201221 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211224 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220323 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220520 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220523 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220729 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221018 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221227 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230127 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230418 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20231107 |