JP2020510094A - 殺線虫剤の相乗的カルコン含有組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
MLCEIECRALSTAHTRLIHDFEPRDALTYLEGKNIFTEDHSELISKMSTRLERIANFLRIYRRQASELGPLIDFFNYNNQSHLADFLEDYIDFAINEPDLLRPVVIAPQFSRQMLDRKLLLGNVPKQMTCYIREYHVDRVIKKLDEMCDLDSFFLFLHGRAGSGKSVIASQALSKSDQLIGINYDSIVWLKDSGTAPKSTFDLFTDILLMLKSEDDLLNFPSVEHVTSVVLKRMICNALIDRPNTLFVFDDVVQEETIRWAQELRLRCLVTTRDVEISNAASQTCEFIEVTSLEIDECYDFLEAYGMPMPVGEKEEDVLNKTIELSSGNPATLMMFFKSCEPKTFEKMAQLNNKLESRGLVGVECITPYSYKSLAMALQRCVEVLSDEDRSALAFAVVMPPGVDIPVKLWSCVIPVDICSNEEEQLDDEVADRLKRLSKRGALLSGKRMPVLTFKIDHIIHMFLKHVVDAQTIANGISILEQRLLEIGNNNVSVPERHIPSHFQKFRRSSASEMYPKTTEETVIRPEDFPKFMQLHQKFYDSLKNFACCを含む。
1)15アミノ酸DLLRPVVIAPQFSRQ(99〜113アミノ酸区間、配列番号2)からなるペプチド2、
2)19アミノ酸RQMLDRKLLLGNVPKQMTC(112〜130アミノ酸区間、配列番号3)からなるペプチド3及び
3)12アミノ酸FPKFMQLHQKFY(529〜540アミノ酸区間、配列番号4)からなるペプチド12
から構成された。
したがって、本発明の主な目的は、環境面で安全で作製及び使用し易い殺線虫剤の組成物を提供することである。
1.CED−4タンパク質由来の少なくとも1つのペプチド、ペプチド2、ペプチド3又はペプチド12
a.ペプチド2、配列DLLRPVVIAPQFSRQ(配列番号2)から構成される15アミノ酸長ペプチド
b.ペプチド3、配列RQMLDRKLLLGNVPKQMTC(配列番号3)から構成される19アミノ酸長及び
c.ペプチド12、配列FPKFMQLHQKFY(配列番号4)から構成される12アミノ酸長;及び
2.化合物、カルコンの群に属する少なくとも1つのカルコンであって、カルコン17、カルコン25又はカルコン30の何れかである、化合物
を含む相乗的殺線虫組成物を提供することである。
1.CED−4タンパク質由来の少なくとも1つのペプチド、ペプチド2、ペプチド3又はペプチド12
a.ペプチド2、配列DLLRPVVIAPQFSRQ(配列番号2)から構成される15アミノ酸長ペプチド
b.ペプチド3、配列RQMLDRKLLLGNVPKQMTC(配列番号3)から構成される19アミノ酸長及び
c.ペプチド12、配列FPKFMQLHQKFY(配列番号4)から構成される12アミノ酸長;及び
2.化合物、カルコン17{(2E)−1−(2,4−ジクロロフェニル)−3−フェニル−2−プロペン−1−オン}、カルコン25{(2E)−1−(4−エトキシフェニル)−3−フェニル−2−プロペン−1−オン又はカルコン30{(2E)−3−フェニル−1−(2−チエニル)−2−プロペン−1−オン}の何れかである、カルコン又はカルコノイドの群に属する少なくとも1つのカルコン
を含む殺線虫剤の組成物を提供する。
カルコン構造は、2個の芳香族環、環A及び環Bから構成され、これらは3個の炭素α,β−不飽和カルボニル系により連結される。環A又はBに結合される化学基のいくつかのタイプとともに、少なくとも30種類の天然のカルコンが知られている。
カルコン17は、化学名(2E)−1−(2,4−ジクロロフェニル)−3−フェニル−2−プロペン−1−オン及び式2で示されるような式を有し:
カルコン25は、化学名(2E)−1−(4−エトキシフェニル)−3−フェニル−2−プロペン−1−オン及び式3で示されるような式を有し:
カルコン30は、化学名(2E)−3−フェニル−1−(2−チエニル)−2−プロペン−1−オン及び式4で示されるような式を有する:
カルコン及びカルコン様の構造は、多くの植物において天然に存在し、そのため環境に優しく;いくつかの生物学的活性とのそれらの組み合わせにより、農業でのそれらの使用の可能性が大きく上昇する。しかし、カルコンの大きな制約はそれらの溶解度である。カルコンは、水などの水性溶媒中で容易に溶解されず、そのため、ジメチルスルホキシド(DMSO)などの有機溶媒中で溶解させなければならない。DMSOは、ヒト及び動物にとって毒性があると考えられ、急性経口毒性(LD50)は7920mg/kg[マウス]であり、急性皮膚毒性(LD50)は40000mg/kg[ラット]である。ゆえに、DMSO中で溶解されたカルコンは、それに接触する使用者及び動物に対して有害であるため、土壌への直接散布に適切ではない。同様に、別の溶媒エタノールは、急性経口毒性(LD50)が7060mg/kg[ラット]であり、これは使用者に対しても安全ではない。したがって、環境面で安全な溶液中でカルコンを使用するための方法が必要とされる。
1.CED−4タンパク質由来の少なくとも1つのペプチド、ペプチド2、ペプチド3又はペプチド12、
a.ペプチド2、配列DLLRPVVIAPQFSRQ(配列番号2)の15アミノ酸長ペプチド、
b.ペプチド3、配列RQMLDRKLLLGNVPKQMTC(配列番号3)から構成される19アミノ酸長及び
c.ペプチド12、配列FPKFMQLHQKFY(配列番号4)から構成される12アミノ酸長;
及び
2.化合物、カルコン17{(2E)−1−(2,4−ジクロロフェニル)−3−フェニル−2−プロペン−1−オン}又はカルコン25{(2E)−1−(4−エトキシフェニル)−3−フェニル−2−プロペン−1−オンの何れかである、カルコン又はカルコノイドの群に属する少なくとも1つのカルコン
を含む殺線虫剤の相乗的組成物を提供する。
1.例えば、1000μlのDMSO中で13.8mgのカルコン17又は12.65mgのカルコン25を添加することによって、10−1M濃度でDMSO中でカルコンの保存溶液を作製すること;
2.100%エタノール中でカルコン保存溶液を希釈して、10−2M濃度でカルコン溶液を調製する、例えば、900μlの100%エタノールに段階1からの100μlのカルコン保存溶液を添加すること;
3.水溶液中50%エタノール中で段階2からのカルコン溶液を希釈して、10−3M濃度のカルコン溶液を得る、例えば段階2からの100μlのカルコン溶液を900μlの水溶液中50%エタノールに添加すること;及び
4.作業溶液として、通常の蒸留水中で段階3からのカルコン溶液を希釈して、10−4M濃度のカルコン水溶液を得て、例えば段階2からの1mLのカルコン溶液を900mLの水溶液中50%エタノールに添加して、続いて10−5M以下などのより低濃度のカルコン溶液を得るために蒸留水中で溶液をさらに希釈すること
から構成される段階において水などの水性溶媒中で作製され、
それぞれ0.01〜0.1%及び0.5〜5%であるカルコンの作業溶液中のDMSO及びエタノールの最終濃度はその溶媒の致死濃度よりも顕著に低い。この方法は、10−4M未満の濃度で、水性溶液中でカルコンを溶解させるための希釈方法を提供する。
A)M.インコグニタ(M.incognita)増殖
トマト植物にM.インコグニタ(M.incognita)幼虫を接種し、栽培箱中で維持した。少なくとも2か月後、M.インコグニタ(M.incognita)卵を実験のために根から抽出した。M.インコグニタ(M.incognita)卵を抽出するために従った手順を以下で説明する。
試験しようとするカルコンを1.5mLエッペンドルフチューブに入れ、1mLのジメチルスルホキシド(DMSO)を添加して、10−1M溶液を作製した。滅菌二重蒸留水中でのさらなる希釈のためにこの保存液を使用した(10−4M〜10−5M)。例えば、DMSO溶液中の10μLの10−1Mカルコンを9990μLの滅菌二重蒸留水に添加して、線虫でのアッセイ用の10−4M溶液を作製した。水中の100μLの希釈液をピペットで96ウェルプレートの30ウェルに添加し、抽出したJ2 M.インコグニタ(M.incognita)の保存物から各ウェルに1匹を移した。陰性対照に対して、DMSOの濃度が線虫を死滅させるものではなかったことを確認するために、各実験に対して100μLの滅菌二重蒸留水中1%DMSO中に30匹の寄生虫を入れた(過去の研究から、このDMSO濃度でC.elegans(C.エレガンス)寄生虫が生存し得ることが明らかになっている(Attarら、2011)。
この寄生虫を死滅させるためのペプチド及びカルコンの能力を試験するためにバイオアッセイを設計する(%死亡率)。各ウェル(全部で30ウェル)中線虫1匹を使用して96ウェルプレート中で各試験を行った。5日間にわたり処理溶液中で線虫を温置した。プローブでの撹乱後、運動性についてそれぞれを調べることによって、手術用顕微鏡下で線虫の生存能を試験した。
ペプチド及びカルコンの混合物の卵孵化防止能(%未孵化卵)を試験するために、バイオアッセイを設計する。ウェルあたり10個の卵を使用して96ウェルプレート中で各試験を行った。16日間にわたり各処理において卵を温置した。顕微鏡画像によって孵化対未孵化卵を調べた。
ペプチド及びカルコンから構成される殺線虫組成物の有効性
以前に記載のように、5日間にわたり96ウェルプレートにて様々な処理溶液中で等しい数の線虫を温置し、第5日に死亡したか又は生存している線虫数を数えることによって、殺線虫剤の様々な組み合わせの効力を試験した。同様に、線虫卵孵化に対する殺線虫剤組成物の様々な組み合わせの効果も数えた。
Claims (7)
- a)配列番号2〜4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むCED−4タンパク質由来の少なくとも1つのペプチドの有効量;及び
b)少なくとも1つの式1の化合物の有効量
(式中、
環Aは
を含む線虫を防除するための組成物であって、
前記ペプチド約0.8mg/ml及び式1の化合物約10−4〜10−6Mの濃度で100%の相乗的な抗線虫効果を有する、組成物。 - 全ての類縁体、ホモローグ、誘導体及びその保存的変異体を包含する、15アミノ酸の長さを有する配列番号2のアミノ酸配列からなるペプチドから構成される、請求項1に記載の組成物。
- 全ての類縁体、ホモローグ、誘導体及びその保存的変異体を包含する、16アミノ酸の長さを有する配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチドから構成される、請求項1に記載の組成物。
- 全ての類縁体、ホモローグ、誘導体及びその保存的変異体を包含する、12アミノ酸の長さを有する配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドから構成される、請求項1に記載の組成物。
- 少なくとも1つの増量剤、乳化剤及び/又は界面活性剤をさらに含む、請求項1に記載の組成物。
- 少なくとも1つの農薬活性を有する化合物をさらに含む、請求項1に記載の組成物。
- 農薬活性を有する化合物が、植物に処理可能な物質、殺真菌剤、殺菌剤、殺虫剤、殺ダニ剤、殺線虫剤、軟体動物防除剤、セーフナー、植物成長調節物質、植物栄養剤及び生物学的防除剤から選択されるが限定されない、請求項1に記載の組成物。
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