JP2020507314A - ゲノムネットワークを構築するための方法およびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2017年1月25日に出願された米国仮出願番号第62/450,540号の利益を主張しており、その全体の教示は、参考として本明細書中に援用される。
本発明は、国立衛生研究所によって授与された認可番号AG038546、CA184898、GM089903、GM081871、HG006061、HG004233およびHG001715の下、政府支援でなされた。政府は、本発明において特定の権利を有する
一般的な神経変性疾患は、明確なニューロン集団の喪失およびミスフォールディングされたタンパク質の異常な蓄積をもたらす。パーキンソン病(PD)、レビー小体を伴う認知症および多系統萎縮症を含むシヌクレイン症は、α−シヌクレイン(α−syn)の異常な細胞内凝集と関連している。アルツハイマー病(AD)は、アミロイド−β(Aβ)およびタウ蓄積と関連しているが、筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、TAR DNA結合性タンパク質43(TDP−43)の局在性および蓄積の変更などと関連している。これらの疾患の病態形成に関する仮説の豊富な供給源は、死後脳の神経病理学に由来してきた。これらの観察は、重要な洞察を提供しながら、疾患開始の数十年後に行われる。
多数の遺伝子および分子経路が、神経変性タンパク質症に関与しているが、その相互関係は、十分に理解されていない。本発明者らは、アルファ−シヌクレイン(α−syn)、パーキンソン病の中心となるタンパク質の毒性の根底にある分子経路を系統的にマッピングした。酵母におけるゲノムワイドスクリーンによって、α−syn毒性に影響を及ぼす332種の遺伝子を同定した。この分子ネットワークを「ヒト化」するために、本発明者らは、コンピュータによる方法、TransposeNetを開発した。これは、Steinerの賞金収集(prize−collecting)アプローチを、配列、構造および相互作用トポロジーを介した相同性割り当てと統合する。TransposeNetは、α−synを、撹乱されたタンパク質輸送/ER品質管理およびmRNA代謝/翻訳を介して、複数のパーキンソニズム遺伝子およびドラッガブルな標的と関連付けた。カルシウムシグナル伝達ハブは、これらのプロセスを、撹乱されたミトコンドリア品質管理/機能、金属イオン輸送、転写調節およびシグナル伝達と関連付けた。ネットワーク(ATP13A2/PARK9、VPS35/PARK17)中で空間的に反対のパーキンソニズム遺伝子相互作用プロファイルは、高度に別個であり、患者iPS細胞由来ニューロンにおいて特定の遺伝子(LRRK2/PARK8、ATXN2およびEIF4G1/PARK18)のネットワーク関係が確認された。この異種間プラットフォームは、多様な神経変性遺伝子を、特定の機序を介してタンパク質症に結び付け、標的化された療法のための患者層別化を容易にし得る。
(a)ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供し、細胞が表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つまたは複数において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアルファ−シヌクレイン毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップと
を含む。
(a)ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供し、細胞が、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つまたは複数において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がシヌクレイン症の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアルファ−シヌクレイン毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がシヌクレイン症の処置のための候補薬剤として同定されるステップと
を含む方法を対象とする。
(a)ヒトTDP−43タンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供するステップであって、細胞が、表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第2列に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)細胞においてTDP−43媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップと
を含む。
(a)ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供するステップであって、細胞が、表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第2列に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がTDP−43媒介毒性の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)細胞においてTDP−43媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がTDP−43媒介毒性の処置のための候補薬剤として同定されるステップと
を含む。
(a)ヒトアミロイドベータタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供するステップであって、細胞が、表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第3列に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアミロイドベータ媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアミロイドベータ毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップと
を含む。
(a)ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供するステップであって、細胞が、表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第3列に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がアミロイドベータ媒介毒性の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアミロイドベータ媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアミロイドベータ毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がアミロイドベータ媒介毒性の処置のための候補薬剤として同定されるステップと
を含む。
生理学的プロセスまたは病理プロセスの増大されたモデリング
いくつかの態様では、本発明は、第1の真核生物(例えば、真菌、原生動物、昆虫、植物、脊椎動物)において生理学的プロセスまたは病理プロセスをモデリングする方法であって、(a)第1の真核生物における生理学的プロセスまたは病理プロセスの類似物を有する第2の真核生物(例えば、真菌、原生動物、昆虫、植物、脊椎動物)において同定される候補真核細胞遺伝子のセットを提供するステップと、(b)ステップ(a)の候補真核細胞遺伝子を含む第1の真核生物の真核生物遺伝子間の相互作用を提供するステップと、(c)第2の真核生物における遺伝子間の相互作用を提供するステップと、(d)候補真核細胞遺伝子のセットに対して相同な、第1の真核生物における遺伝子のセットを決定するステップと、(e)第2の真核生物から得られたステップ(b)の相互作用に基づいて予測される遺伝子相互作用を用いて、ステップ(d)において得られた第1の真核生物における遺伝子のセット間の相互作用を増大することによって、第1の真核生物における生理学的プロセスまたは病理プロセスのモデルを作出するステップとを含む方法を対象とする。いくつかの実施形態では、第1の真核生物は、哺乳動物細胞(例えば、ヒト細胞、マウス細胞、ラット細胞、サル細胞)である。いくつかの実施形態では、第2の真核生物は、酵母細胞である。
細胞
スクリーニングの方法
療法の標的を決定する方法
生理学的プロセスまたは病理プロセス(増大されていない)をモデリングする方法
細胞および方法:ヒトα−シヌクレインタンパク質
(a)ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供し、細胞が表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つまたは複数において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアルファ−シヌクレイン毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップと
を含む。
(a)ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供し、細胞が、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つまたは複数において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がシヌクレイン症の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアルファ−シヌクレイン毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がシヌクレイン症の処置のための候補薬剤として同定されるステップと
を含む方法を対象とする。
(a)ヒトアルファ−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供し、細胞が表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つまたは複数において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、試験薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアルファ−シヌクレイン毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップと
を含む方法を対象とする。
(a)ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供し、細胞が、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つまたは複数において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、試験薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がシヌクレイン症の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアルファ−シヌクレイン毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がシヌクレイン症の処置のための候補薬剤として同定されるステップと
を含む方法を対象とする。
細胞および方法:ヒトTDP−43タンパク質
(a)ヒトTDP−43タンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供するステップであって、細胞が、表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第2列に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)細胞においてTDP−43媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップと
を含む。
(a)ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供するステップであって、細胞が、表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第2列に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がTDP−43媒介毒性の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)細胞においてTDP−43媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がTDP−43媒介毒性の処置のための候補薬剤として同定されるステップと
を含む。
(a)TDP−43タンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供し、細胞が表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、試験薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)細胞においてTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップと
を含む方法を対象とする。
(a)ヒトTDP−43タンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供し、細胞が、表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、試験薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がTDP−43関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)細胞においてTDP−43媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がTDP−43関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップと
を含む方法を対象とする。
細胞および方法:ヒトアミロイドベータタンパク質
(a)ヒトアミロイドベータタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供するステップであって、細胞が、表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第3列に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアミロイドベータ媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアミロイドベータ毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップと
を含む。
(a)ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供するステップであって、細胞が、表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、表S3:第3列に列挙される遺伝子によってコードされるタンパク質またはその哺乳動物相同体の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がアミロイドベータ媒介毒性の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアミロイドベータ媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアミロイドベータ毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がアミロイドベータ媒介毒性の処置のための候補薬剤として同定されるステップと
を含む。
(a)アミロイドベータタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供し、細胞が表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、試験薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアミロイドベータ媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアミロイドベータ毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップと
を含む方法を対象とする。
(a)ヒトアミロイドベータタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む本明細書において記載されるような細胞を提供し、細胞が、表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているステップと、
(b)細胞を、試験薬剤と接触させるステップと、
(c)(i)薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、薬剤がアミロイドベータ関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)細胞においてアミロイドベータ媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、薬剤の不在下と比較した、薬剤の存在下でのアミロイドベータ毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、薬剤がアミロイドベータ関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップと
を含む方法を対象とする。
一時的でない媒体および系
α−synマップにおいて、いくつかのパーキンソニズム遺伝子の相同体は、RAB6Aの酵母相同体であるYPT6周囲のサブネットワークにおいて癒合した(Soperら、2011年)(図4A)。エンドソーム輸送に関与するタンパク質をコードするYPT7、VTH1およびVPS35が含まれていた。YPT7は、PARK16遺伝子座のリード候補であるRAB7L1(Macleodら、2013年;Nallsら、2014年)の、また、メンデルの法則に従ったパーキンソニズムリスク因子RAB39B(Wilsonら、2014年)の緊密な相同体である。VTH1は、細胞内選別(NykjaerおよびWillnow、2012年)に関与するタンパク質をコードする確立されたADリスク修飾因子(Rogaevaら、2007年)であるSORL1の緊密な酵母相同体である。VPS35は、古典的PDのメンデルの法則に従ったリスク因子、VPS35(PARK17)と相同である(Zimprichら、2011年)。VPS35は、VPS26およびVPS29と共に、エンドソーム区画からゴルジ区画へとカーゴを搬送するレトロマー複合体を含む。近日発表される研究において(Chungら Cell Systems 2016年)、本発明者らは、VSP26およびVPS29コアレトロマー成分の欠失が、α−syn毒性を強く増強することを示す。ゴルジからエンドソームへのおよびエンドサイトーシス輸送に関与する第4の遺伝子、INP53は、メンデルの法則に従ったパーキンソニズム遺伝子SYNJ1(PARK20)と相同である(Olgiatiら、2014年)。これらの遺伝子のうちいずれか1種の欠失は、野生型株において毒性ではなかった。しかし、低(無毒)レベルのα−synを発現する株におけるこれらの遺伝子のうちいずれか1種の欠失は、強く相乗的な成長欠損を産生した(表S5、図4Bおよび図15A)。重要なことに、酵母またはヒトVPS35の異所性発現は、VPS35欠失によって誘導された毒性をレスキューしたが、疾患を引き起こす突然変異(VPS35−D620N)の発現は、レスキューしなかった(図4C)。最後に、yRAB7L1は、欠失された場合にα−syn毒性を増強したが、過剰発現された場合にこの毒性からレスキューした(図15B)。
実験モデルおよび対象詳細
酵母株:
ヒトiPSc系統:
LRRK2突然変異体系統のための、ヒトiPSC生成、および中脳ドーパミン作動性(DA)ニューロンへの分化
α−syn突然変異体系統のためのヒト多能性幹細胞培養
初代ラット皮質培養物
方法詳細
酵母−対−ヒト相同性
インタラクトームの前処理
酵母−対−酵母エッジによるヒトインタラクトームの増大(ヒト化ネットワークのみのため)
賞金収集Steiner森アルゴリズム
酵母およびヒト化Steinerネットワークのためのノードおよびエッジセットアップ
コンピュータ処理によるパイプラインのためのパラメータ整調
DCA相同性ツールにおけるBLASTおよびHHpredのための有意性閾値
公知パーキンソン遺伝子の相同体に対する報酬
現存するインタラクトームのための信頼閾値および予測される連結
新たなハイスループットバイナリインタラクトームのための信頼スコア
賞金収集Steiner森アルゴリズム(PCSF)のためのパラメータ
スポット形成アッセイ
ΔPARK17/α−synおよびΔPARK9/α−syn株における公知α−syn修飾因子に対するスクリーニング
小分子(NAB2)処理
プールα−syn過剰発現スクリーン
プールスクリーンQPCR立証
プールスクリーン成長曲線解析
ゲノムワイド欠失スクリーン(合成遺伝子アレイ方法論)
LRRK2突然変異体系統のためのヒトiPSC生成、および中脳ドーパミン作動性(DA)ニューロンへの分化
α−syn突然変異体系統のためのヒト多能性幹細胞培養
胚様体(EB)形成によるヒト神経誘導
ヒト皮質神経分化
初代ラット皮質培養物
iPSニューロンのAAV−1形質導入
抗体
サイトゾルにおける遊離35S−メチオニン/−システイン
細胞溶解およびエンドグリコシダーゼH消化
ウエスタンブロッティング
TALE−TF設計
TALE−TFアセンブリ
リボソームフットプリントプロファイリング
定量化および統計解析
現存する相同性予測アプローチとの比較
PCSFおよびヒト化Steinerネットワークの評価
細胞に基づくアッセイのための統計的方法およびデータ解析
データおよびソフトウェア利用能
Claims (182)
- 動物において生理学的プロセスまたは病理プロセスをモデリングする方法であって、
(a)前記動物における前記生理学的プロセスまたは病理プロセスの酵母類似物において同定される候補酵母遺伝子のセットを提供するステップと、
(b)ステップ(a)の候補酵母遺伝子を含む酵母遺伝子間の相互作用を提供するステップと、
(c)前記動物における遺伝子間の相互作用を提供するステップと、
(d)候補酵母遺伝子の前記セットに対して相同な、前記動物における遺伝子のセットを決定するステップと、
(e)ステップ(b)の前記相互作用に基づいて予測される遺伝子相互作用を用いて、ステップ(d)において得られた前記動物における遺伝子の前記セット間の相互作用を増大することによって、前記動物における前記生理学的プロセスまたは病理プロセスのモデルを作出するステップと
を含む、方法。 - ステップ(a)の候補酵母遺伝子の前記セットが、
(i)前記生理学的プロセスまたは病理プロセスの酵母類似物である条件下で、酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現または活性が増大または減少するように修飾された酵母細胞を提供するステップと、
(ii)前記修飾が、前記条件に対する前記酵母細胞の応答を調節するか否かを決定するステップと、
(iii)前記酵母細胞の応答が調節される場合に、前記酵母遺伝子を候補酵母遺伝子として同定するステップと
を含む方法によって得られた、請求項1に記載の方法。 - 前記条件が、1種または複数の遺伝子の異常な発現を含む、請求項2に記載の方法。
- 前記条件が、1種または複数の遺伝子の過剰発現を含む、請求項2または3に記載の方法。
- 前記条件が、1種または複数の遺伝子の発現の低減または消失を含む、請求項2から4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記1種または複数の遺伝子が、非内因性遺伝子を含む、請求項3または4に記載の方法。
- ステップ(ii)の酵母細胞の応答の前記調節が、少なくとも1つの表現型の変化、少なくとも1種の遺伝子の発現の変化、少なくとも1種のタンパク質の活性の変化または細胞生存力の変化を含む、請求項2から6のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(iii)の候補酵母遺伝子の前記同定が、少なくとも1つの表現型の変化、少なくとも1種の遺伝子の発現の変化、少なくとも1種のタンパク質の活性の変化または細胞生存力の変化の同定を含む、請求項2から7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記酵母細胞の応答が、細胞生存力の変化である、請求項2から7のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(a)の候補酵母遺伝子の前記セットが、酵母遺伝子のゲノムワイドスクリーンから得られた、請求項2から9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ゲノムワイドスクリーンが、酵母ゲノムの欠失または過剰発現スクリーンを含む、請求項10に記載の方法。
- ステップ(b)および/または(c)が、賞金収集Steiner森(Prize−Collecting Steiner Forest)(PCSF)アルゴリズムを使用して、ネットワークを得るためのコストを最小にしながら、1つまたは複数の精選されたデータベースからの遺伝子相互作用、物理的相互作用およびアノテートされた経路を介して、遺伝子またはタンパク質ノードを接続することを含む、請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(b)および/または(c)が、多様なアルゴリズムパラメータを用いる前記PCSFアルゴリズムを使用して、マルチプルネットワークを生成することおよび最大全域木アルゴリズムを用いて前記マルチプルネットワークから代表的ネットワークを作出することをさらに含む、請求項12に記載の方法。
- ステップ(b)の前記相互作用が、ステップ(a)の候補酵母遺伝子の前記セット中に含まれない予測された遺伝子またはタンパク質ノードを含む、請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記予測された遺伝子またはタンパク質ノードが、ドラッガブルな標的を含む、請求項14に記載の方法。
- ステップ(d)が、前記候補酵母遺伝子と前記動物遺伝子間の核酸配列、ポリペプチド配列、タンパク質構造または分子的相互作用のうち少なくとも1つを比較することを含む、請求項1から15のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(d)が、
(i)前記動物遺伝子と前記候補酵母遺伝子間の配列類似性を決定することと、
(ii)前記動物遺伝子と前記候補酵母遺伝子間の進化的類似性および構造類似性を決定することと、
(iii)前記動物遺伝子および前記候補酵母遺伝子間の分子的相互作用類似性を決定することと、
(iv)拡散成分解析を使用してステップ(i)から(iii)における前記類似性を統合することによって、候補酵母遺伝子の前記セットに対して相同な、前記動物における遺伝子のセットを決定することと
を含む、請求項1から16のいずれか一項に記載の方法。 - ステップ(i)が、BLOSUM62置換マトリックスおよび/またはDIOPTを用いてNCBIタンパク質BLASTを利用することを含む、請求項17に記載の方法。
- ステップ(ii)が、PSI−BLASTを利用して、マルチプル配列アラインメントを構築し、プロファイル隠れマルコフモデルを築いて、リモート進化信号をコードし、それに続いてHHpredを行うことを含む、請求項17または18に記載の方法。
- ステップ(iii)が、遺伝子の機能解析のためのマルチ−ネットワークトポロジーのコンパクト統合(Compact Integration of Multi−Network Topology for Functional Analysis of Genes)(Mashup)を利用することを含む、請求項17から19のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(e)が、前記賞金収集Steiner森(PCSF)アルゴリズムを使用して、ネットワークを得るためのコストを最小にしながら、精選されたデータベースからの遺伝子相互作用、物理的相互作用およびアノテートされた経路を介して、遺伝子またはタンパク質ノードを接続することを含む、請求項1から20のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(e)が、多様なアルゴリズムパラメータを用いる前記PCSFアルゴリズムを使用して、マルチプルネットワークを生成するステップおよび最大全域木アルゴリズムを用いて前記マルチプルネットワークから代表的ネットワークを作出することをさらに含む、請求項21に記載の方法。
- ステップ(e)の前記生理学的プロセスまたは病理プロセスの前記モデルが、ステップ(a)の候補酵母遺伝子の前記セット中に含まれない予測された遺伝子またはタンパク質ノードを含む、請求項1から22のいずれか一項に記載の方法。
- 前記予測された遺伝子またはタンパク質ノードが、ドラッガブルな標的を含む、請求項23に記載の方法。
- 前記生理学的プロセスまたは病理プロセスが、神経変性疾患である、請求項1から24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生理学的プロセスまたは病理プロセスが、神経変性タンパク質症である、請求項1から25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生理学的プロセスまたは病理プロセスが、シヌクレイン症、アルツハイマー病、前頭側頭変性症、脊髄小脳失調症、ハンチントン病または筋萎縮性側索硬化症である、請求項1から25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記シヌクレイン症が、パーキンソン病である、請求項27に記載の方法。
- 前記動物がヒトである、請求項1から28のいずれか一項に記載の方法。
- 前記モデルを一時的でないコンピュータ可読媒体に記憶するステップをさらに含む、請求項1から29のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞を生成する方法であって、
(a)請求項1から30のいずれか一項に記載の方法に従って生成された生理学的プロセスまたは病理プロセスのモデルを得るステップと、
(b)ステップ(a)において得られた前記モデルにおいて遺伝子ノードを同定するステップと、
(c)前記遺伝子ノードの発現の変更または前記遺伝子ノードの遺伝子産物の活性の変更を有する細胞を生成するステップと
を含む、方法。 - 前記細胞が、哺乳動物細胞である、請求項31に記載の方法。
- 前記細胞が、ヒト細胞である、請求項32に記載の方法。
- 前記細胞が、人工多能性幹細胞または人工多能性幹細胞に由来する細胞である、請求項31から33のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(c)が、細胞のゲノムに付加、欠失、破壊または突然変異を導入するステップを含む、請求項31から34のいずれか一項に記載の方法。
- 生理学的プロセスまたは病理プロセスのモジュレーターについてスクリーニングする方法であって、請求項31から35のいずれか一項に記載の方法に従って生成された細胞を得るステップおよび前記細胞を使用して、前記生理学的プロセスまたは病理プロセスのモジュレーターについて化合物をスクリーニングするステップを含む、方法。
- 生理学的プロセスまたは病理プロセスを有する動物において療法の標的を決定する方法であって、
(a)請求項1から30のいずれか一項に記載の方法に従って生成された生理学的プロセスまたは病理プロセスのモデルを得るステップと、
(b)ステップ(a)において得られた前記モデルの1種または複数の遺伝子またはタンパク質ノードを同定するステップと、
(c)前記動物が、ステップ(b)において同定された前記遺伝子またはタンパク質ノードのいずれかにおける突然変異、発現の変更または活性の変更を有するか否かを決定するステップと
を含む、方法。 - 動物において病理プロセスを処置するための化合物についてスクリーニングする方法であって、
(a)請求項1から30のいずれか一項に記載の方法によって前記動物における生理学的プロセスまたは病理プロセスをモデリングするステップと、
(b)ステップ(a)のモデルの遺伝子またはタンパク質ノードを同定するステップと、
(c)化合物をスクリーニングして前記同定された遺伝子またはタンパク質ノードのモジュレーターを同定するステップと
を含む、方法。 - 請求項1から30のいずれか一項に記載の方法を容易にするように構成されたシステムであって、実行された場合に、コンピュータシステムにステップ(a)〜(e)のうち少なくとも1つを実施させる1つまたは複数のコンピュータにより実行可能な命令を実行するようにプログラムされた1つまたは複数のプロセッサを含む前記コンピュータシステムを含む、システム。
- 請求項1から30のいずれか一項に記載の方法を容易にするように構成されたシステムであって、実行された場合に、コンピュータシステムに、候補酵母遺伝子の前記セットに対して相同な、前記動物における遺伝子のセットを決定させる、および/またはステップ(b)の前記相互作用に基づいて予測される遺伝子相互作用を用いてステップ(d)の得られた前記動物における遺伝子の前記セット間の相互作用を増大することによって前記動物における前記生理学的プロセスもしくは病理プロセスのモデルを作出させる1つまたは複数のコンピュータにより実行可能な命令を実行するようにプログラムされた1つまたは複数のプロセッサを含む前記コンピュータシステムを含む、システム。
- 前記モデルをディスプレイするためのスクリーンをさらに含む、請求項39または40に記載のシステム。
- 酵母における生理学的プロセスまたは病理プロセスをモデリングする方法であって、
(a)前記生理学的プロセスまたは病理プロセスの酵母類似物において同定される酵母遺伝子のセットを提供するステップと、
(b)ステップ(a)の酵母遺伝子の前記セットを含む酵母遺伝子間の相互作用を得るステップと、
(c)酵母遺伝子の前記セットを使用して前記生理学的プロセスまたは病理プロセスのモデルを作出するステップと
を含み、ステップ(b)の前記相互作用が、賞金収集Steiner森(PCSF)アルゴリズムを使用して、ネットワークを得るためのコストを最小にしながら、精選されたデータベースからの遺伝子相互作用、物理的相互作用およびアノテートされた経路を介して、遺伝子またはタンパク質ノードを接続することによって得られる、方法。 - ステップ(a)の酵母遺伝子の前記セットが、
(i)前記生理学的プロセスまたは病理プロセスに対する酵母類似物の条件下で、酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現または活性が増大または減少するように修飾された酵母細胞を提供するステップと、
(ii)前記修飾が、前記条件に対する前記酵母細胞の応答を調節するか否かを決定するステップと、
(iii)前記酵母細胞の応答が調節される場合に、前記酵母遺伝子を候補酵母遺伝子として同定するステップと
を含む方法によって得られた、請求項42に記載の方法。 - 前記条件が、1種または複数の遺伝子の異常な発現を含む、請求項43に記載の方法。
- 前記条件が、1種または複数の遺伝子の過剰発現を含む、請求項43または44に記載の方法。
- 前記条件が、1種または複数の遺伝子の発現の低減または消失を含む、請求項43または44に記載の方法。
- 前記1種または複数の遺伝子が、非内因性遺伝子を含む、請求項44または45に記載の方法。
- ステップ(ii)の酵母細胞の応答の前記調節が、少なくとも1つの表現型の変化、少なくとも1種の遺伝子の発現の変化、少なくとも1種のタンパク質の活性の変化または細胞生存力の変化を含む、請求項43から47のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(iii)の候補酵母遺伝子の前記同定が、少なくとも1つの表現型の変化、少なくとも1種の遺伝子の発現の変化、少なくとも1種のタンパク質の活性の変化または細胞生存力の変化の同定を含む、請求項43から48のいずれか一項に記載の方法。
- 前記酵母細胞の応答が、細胞生存力の変化である、請求項43から48のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(a)の候補酵母遺伝子の前記セットが、酵母遺伝子のゲノムワイドスクリーンから得られた、請求項43から49のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ゲノムワイドスクリーンが、酵母ゲノムの欠失または過剰発現スクリーンを含む、請求項51に記載の方法。
- ステップ(b)が、多様なアルゴリズムパラメータを用いる前記PCSFアルゴリズムを使用して、マルチプルネットワークを生成することおよび最大全域木アルゴリズムを用いて前記マルチプルネットワークから代表的ネットワークを作出することをさらに含む、請求項43から52のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(b)の前記相互作用が、ステップ(a)の真核生物遺伝子のセット中に含まれない予測された遺伝子またはタンパク質ノードを含む、請求項43から53のいずれか一項に記載の方法。
- 前記予測された遺伝子またはタンパク質ノードが、ドラッガブルな標的を含む、請求項54に記載の方法。
- 前記真核生物が、酵母である、請求項43から55のいずれか一項に記載の方法。
- 前記モデルを一時的でないコンピュータ可読媒体に記憶するステップをさらに含む、請求項43から56のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項43から57のいずれか一項に記載の方法を容易にするように構成されたシステムであって、実行された場合に、コンピュータシステムにステップ(a)〜(e)のうち少なくとも1つを実施させる1つまたは複数のコンピュータにより実行可能な命令を実行するようにプログラムされた1つまたは複数のプロセッサを含む前記コンピュータシステムを含む、システム。
- 請求項43から57のいずれか一項に記載の方法を容易にするように構成されたシステムであって、実行された場合に、コンピュータシステムに、候補酵母遺伝子の前記セットに対して相同な、前記動物における遺伝子のセットを決定させる、および/またはステップ(b)の前記相互作用に基づいて予測される遺伝子相互作用を用いてステップ(d)の得られた前記動物における遺伝子の前記セット間の相互作用を増大することによって前記動物における前記生理学的プロセスもしくは病理プロセスのモデルを作出させる1つまたは複数のコンピュータにより実行可能な命令を実行するようにプログラムされた1つまたは複数のプロセッサを含む前記コンピュータシステムを含む、システム。
- 前記モデルをディスプレイするためのスクリーンをさらに含む、請求項58または59に記載のシステム。
- 真核生物において病理プロセスを処置するために化合物についてスクリーニングする方法であって、
(a)請求項43から57のいずれか一項に記載の方法によって前記真核生物における生理学的プロセスまたは病理プロセスをモデリングするステップと、
(b)ステップ(a)のモデルの遺伝子またはタンパク質ノードを同定するステップと、
(c)化合物をスクリーニングして前記同定された遺伝子またはタンパク質ノードのモジュレーターを同定するステップと
を含む、方法。 - ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む細胞であって、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つもしくは複数において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されている、細胞。
- ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む前記発現構築物が、前記細胞のゲノム中に組み込まれる、請求項62に記載の細胞。
- ヒトα−シヌクレインタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結された前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項62に記載の細胞。
- 表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つもしくは複数において列挙される酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む、請求項62から64のいずれかに記載の細胞。
- 表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つもしくは複数において列挙される酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む前記発現構築物が、前記細胞のゲノム中に組み込まれる、請求項65に記載の細胞。
- 表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つもしくは複数において列挙される酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結された前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項66に記載の細胞。
- 酵母細胞である、請求項62から67のいずれかに記載の細胞。
- 哺乳動物細胞である、請求項62から67のいずれかに記載の細胞。
- 表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1つもしくは複数において列挙される遺伝子において欠失、破壊もしくは突然変異を有する酵母細胞である、またはこのような遺伝子の哺乳動物相同体において欠失、破壊もしくは突然変異を有する哺乳動物細胞である、請求項62から64のいずれかに記載の細胞。
- 前記α−シヌクレインタンパク質が、突然変異体α−シヌクレインタンパク質であり、必要に応じて、前記突然変異体α−シヌクレインタンパク質が、A30P、E46K、A53T、H50Q、G51D、A18TまたはA29Sを含む、請求項62から70のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとα−シヌクレイン媒介毒性を抑制する、請求項62から71のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとα−シヌクレイン媒介毒性を増強する、請求項62から71のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子の欠失が、α−シヌクレイン媒介毒性を増強する、請求項62から71のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体が、α−シヌクレイン毒性ネットワークにおける隠れたノードである、請求項62から71のいずれかに記載の細胞。
- 同一種類の修飾されていない細胞と比較して、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれかにおいて列挙される酵母遺伝子の相同体である哺乳動物遺伝子によってコードされる哺乳動物タンパク質の発現または活性が増大または減少するように修飾されている哺乳動物細胞。
- 前記哺乳動物遺伝子が、表S9、表S10および/または表S11において列挙される、請求項76に記載の細胞。
- 前記哺乳動物遺伝子によってコードされる、または前記哺乳動物遺伝子において欠失、破壊もしくは突然変異を有するタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む、請求項76または77に記載の細胞。
- 前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項78に記載の細胞。
- シヌクレイン症を患う、またはシヌクレイン症と関連する遺伝的変動を有する対象に由来するヒト細胞である、請求項76から79のいずれかに記載の細胞。
- 同一種類の正常哺乳動物細胞と比較して、アルファ−シヌクレインの発現が増大しており、または突然変異体α−シヌクレインタンパク質を発現し、必要に応じて、前記突然変異体α−シヌクレインタンパク質が、A30P、E46K、A53T、H50Q、G51D、A18TもしくはA29Sを含む、請求項76から80のいずれかに記載の細胞。
- ヒト細胞である、請求項76から81のいずれかに記載の細胞。
- 神経細胞またはグリア細胞である、請求項76から82のいずれかに記載の細胞。
- α−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物を同定する方法であって、(a)請求項62から83のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を表S3:第1列、表S5、表S6または表S7に列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのアルファ−シヌクレイン毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップとを含む、方法。
- シヌクレイン症の処置のための候補薬剤を同定する方法であって、(a)請求項62から83のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7に列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がシヌクレイン症の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのアルファ−シヌクレイン毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がシヌクレイン症の処置のための候補薬剤として同定されるステップとを含む、方法。
- 前記遺伝子が、過剰発現されるとアルファ−シヌクレイン毒性を抑制するものであるか、またはその欠失が、アルファ−シヌクレイン毒性を増強するものであり、前記薬剤が、前記タンパク質の発現または活性を増強する、請求項84または85に記載の方法。
- 前記遺伝子が、過剰発現されるとアルファ−シヌクレイン毒性を増強するものであるか、または欠失されるとその欠失がアルファ−シヌクレイン毒性を抑制するものであり、前記薬剤が、前記タンパク質の発現または活性を阻害する、請求項84または85に記載の方法。
- アルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物を同定する方法であって、(a)請求項62から83のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を試験薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのアルファ−シヌクレイン毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップとを含む、方法。
- シヌクレイン症の処置のための候補薬剤を同定する方法であって、(a)請求項62から83のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を、試験薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がシヌクレイン症の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのアルファ−シヌクレイン毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がシヌクレイン症の処置のための候補薬剤として同定されるステップとを含む、方法。
- アルファシヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物を同定する方法であって、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のいずれか1つまたは複数に列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現または活性を調節する薬剤を同定するためにスクリーニングするステップと、前記細胞の生存力を低減するアルファシヌクレインの量を発現する細胞を提供するステップと、前記細胞を前記薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がアルファシヌクレイン媒介毒性を阻害する化合物として同定される、方法。
- 前記スクリーニングが、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のいずれか1つまたは複数において列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質を発現する細胞を提供するステップと、前記細胞を薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下での前記タンパク質の発現を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の発現の増大から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を増大する化合物として同定され、前記薬剤の不在下でのリポータータンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記リポータータンパク質の発現の減少から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を減少させる化合物として同定される、請求項90に記載の方法。
- 前記スクリーニングが、(i)表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1種または複数において列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体のプロモーター配列および(ii)リポータータンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むリポーター構築物を含む細胞を提供するステップと、前記細胞を薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下で前記リポータータンパク質の発現を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記リポータータンパク質の発現の増大から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を増大する化合物として同定され、前記薬剤の不在下での前記リポータータンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記リポータータンパク質の発現の減少から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を減少させる化合物として同定される、請求項90に記載の方法。
- 前記スクリーニングが、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のうちいずれか1種または複数において列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質を提供するステップと、前記タンパク質を薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下で前記タンパク質の活性を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の活性と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の活性の増大から、前記薬剤が前記タンパク質の活性を増大する化合物として同定され、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の活性と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の活性の低下から、前記薬剤が前記タンパク質の活性を低下させる化合物として同定される、請求項90に記載の方法。
- ヒト細胞または対象においてアルファ−シヌクレイン媒介毒性を阻害する方法であって、前記細胞または対象において表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のいずれか1つまたは複数において列挙される酵母遺伝子によってコードされる酵母タンパク質の相同体であるヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップを含む、方法。
- シヌクレイン症を処置する方法であって、シヌクレイン症の処置を必要とする対象において、表S3:第1列、表S5、表S6または表S7のいずれか1つまたは複数において列挙される酵母遺伝子によってコードされる酵母タンパク質の相同体であるヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップを含む、方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を増強することを含む、請求項94または請求項95に記載の方法。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとアルファ−シヌクレイン媒介毒性のサプレッサーであるか、または欠失されるとアルファ−シヌクレイン媒介毒性のエンハンサーであり、前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を増強することを含む、請求項94または請求項95に記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を阻害することを含む、請求項94または請求項95に記載の方法。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとアルファ−シヌクレイン媒介毒性のエンハンサーであるか、または欠失されるとアルファ−シヌクレイン媒介毒性のサプレッサーであり、前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を阻害することを含む、請求項94または請求項95に記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、細胞を、前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節する薬剤と接触させるまたは前記薬剤を対象に投与することを含む、請求項94から99のいずれかに記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性が増強され、前記薬剤が、前記ヒトタンパク質をコードする核酸または前記ヒトタンパク質をコードするRNA転写物の転写を活性化する合成転写アクチベーターを含む、請求項100に記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性が阻害され、前記薬剤が、前記ヒトタンパク質をコードするmRNAを標的とする短鎖干渉RNA(siRNA)もしくはアンチセンス核酸、前記ヒトタンパク質をコードする遺伝子の転写を抑制する合成転写レプレッサーまたは前記ヒトタンパク質と結合するアプタマー、ポリペプチドもしくは小分子である、請求項100に記載の方法。
- ヒトTDP−43タンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む細胞であって、表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されている、細胞。
- ヒトTDP−43タンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む前記発現構築物が、前記細胞のゲノム中に組み込まれる、請求項103に記載の細胞。
- ヒトTDP−43タンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結された前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項103に記載の細胞。
- 表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む、請求項103から105のいずれかに記載の細胞。
- 表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む前記発現構築物が、前記細胞のゲノム中に組み込まれる、請求項106に記載の細胞。
- 表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結された前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項107に記載の細胞。
- 酵母細胞である、請求項103から108のいずれかに記載の細胞。
- 哺乳動物細胞である、請求項103から108のいずれかに記載の細胞。
- 表S3:第2列において列挙される遺伝子において欠失、破壊もしくは突然変異を有する酵母細胞である、またはこのような遺伝子の哺乳動物相同体において欠失、破壊もしくは突然変異を有する哺乳動物細胞である、請求項103から105のいずれかに記載の細胞。
- 前記TDP−43タンパク質が、突然変異体TDP−43タンパク質である、請求項103から111のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとTDP−43媒介毒性を抑制する、請求項103から111のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとTDP−43媒介毒性を増強する、請求項103から111のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子の欠失が、TDP−43媒介毒性を増強する、請求項103から111のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体が、TDP−43毒性ネットワークにおける隠れたノードである、請求項103から111のいずれかに記載の細胞。
- 同一種類の修飾されていない細胞と比較して、表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子の相同体である哺乳動物遺伝子によってコードされる哺乳動物タンパク質の発現または活性が増大または減少するように修飾されている哺乳動物細胞。
- 前記哺乳動物遺伝子によってコードされる、または前記哺乳動物遺伝子において欠失、破壊もしくは突然変異を有するタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む、請求項117に記載の細胞。
- 前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項118に記載の細胞。
- TDP−43関連疾患を患う、またはTDP−43関連疾患と関連する遺伝的変動を有する対象に由来するヒト細胞である、請求項117から119のいずれかに記載の細胞。
- 同一種類の正常哺乳動物細胞と比較して、TDP−43の発現が増大している、または突然変異体TDP−43タンパク質を発現する、請求項117から120のいずれかに記載の細胞。
- ヒト細胞である、請求項117から121のいずれかに記載の細胞。
- 神経細胞またはグリア細胞である、請求項117から122のいずれかに記載の細胞。
- TDP−43媒介毒性を阻害する化合物を同定する方法であって、(a)請求項103から123のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を表S3:第2列に列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてTDP−43媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップとを含む、方法。
- TDP−43関連疾患の処置のための候補薬剤を同定する方法であって、(a)請求項103から123のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を、表S3:第2列に列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がTDP−43関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてTDP−43媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がTDP−43関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップとを含む、方法。
- 前記遺伝子が、過剰発現されるとTDP−43毒性を抑制するものであるか、またはその欠失が、TDP−43毒性を増強するものであり、前記薬剤が、前記タンパク質の発現または活性を増強する、請求項124または請求項125に記載の方法。
- 前記遺伝子が、過剰発現されるとTDP−43毒性を増強するものであるか、または欠失されるとその欠失がTDP−43毒性を抑制するものであり、前記薬剤が、前記タンパク質の発現または活性を阻害する、請求項124または請求項125に記載の方法。
- TDP−43媒介毒性を阻害する化合物を同定する方法であって、(a)請求項103から123のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を試験薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてTDP−43媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップとを含む、方法。
- TDP−43関連疾患の処置のための候補薬剤を同定する方法であって、(a)請求項103から123のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を、試験薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がTDP−43関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてTDP−43媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのTDP−43毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がTDP−43関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップとを含む、方法。
- TDP−43媒介毒性を阻害する化合物を同定する方法であって、表S3:第2列に列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現または活性を増強する薬剤を同定するためにスクリーニングするステップと、前記細胞の生存力を低減するTDP−43の量を発現する細胞を提供するステップと、前記細胞を前記薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がTDP−43媒介毒性を阻害する化合物として同定される、方法。
- 前記スクリーニングが、表S3:第2列において列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質を発現する細胞を提供するステップと、前記細胞を薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下での前記タンパク質の発現を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の発現の増大から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を増大する化合物として同定され、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の発現の減少から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を減少させる化合物として同定される、請求項130に記載の方法。
- 前記スクリーニングが、(i)表S3:第2列において列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体のプロモーター配列および(ii)リポータータンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むリポーター構築物を含む細胞を提供するステップと、前記細胞を薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下で前記リポータータンパク質の発現を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記リポータータンパク質の発現の増大から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を増大する化合物として同定され、前記薬剤の不在下での前記リポータータンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記リポータータンパク質の発現の減少から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を減少させる化合物として同定される、請求項130に記載の方法。
- 前記スクリーニングが、表S3:第2列において列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質を提供するステップと、前記タンパク質を薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下で前記タンパク質の活性を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の活性と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の活性の増大から、前記薬剤が前記タンパク質の活性を増大する化合物として同定され、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の活性と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の活性の低下から、前記薬剤が前記タンパク質の活性を低下させる化合物として同定される、請求項130に記載の方法。
- ヒト細胞または対象においてTDP−43媒介毒性を阻害する方法であって、前記細胞または対象において表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子によってコードされる酵母タンパク質の相同体であるヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップを含む、方法。
- TDP−43関連疾患を処置する方法であって、TDP−43関連疾患の処置を必要とする対象において、表S3:第2列において列挙される酵母遺伝子によってコードされる酵母タンパク質の相同体であるヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップを含む、方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を増強することを含む、請求項134または請求項135に記載の方法。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとTDP−43媒介毒性のサプレッサーであるか、または欠失されるとTDP−43媒介毒性のエンハンサーであり、前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を増強することを含む、請求項134または請求項135に記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を阻害することを含む、請求項134または請求項135に記載の方法。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとTDP−43媒介毒性のエンハンサーであるか、または欠失されるとTDP−43媒介毒性のサプレッサーであり、前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を阻害することを含む、請求項134または請求項135に記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、細胞を、前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節する薬剤と接触させるまたは前記薬剤を対象に投与することを含む、請求項135から139のいずれかに記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性が増強され、前記薬剤が、前記ヒトタンパク質をコードする核酸または前記ヒトタンパク質をコードするRNA転写物の転写を活性化する合成転写アクチベーターを含む、請求項140に記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性が阻害され、前記薬剤が、前記ヒトタンパク質をコードするmRNAを標的とする短鎖干渉RNA(siRNA)もしくはアンチセンス核酸、前記ヒトタンパク質をコードする遺伝子の転写を抑制する合成転写レプレッサーまたは前記ヒトタンパク質と結合するアプタマー、ポリペプチドもしくは小分子である、請求項140に記載の方法。
- ヒトアミロイドベータタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む細胞であって、表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されているか、または同一種類の修飾されていない細胞と比較して、このような酵母遺伝子の哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現もしくは活性が増大もしくは減少するように修飾されている、細胞。
- ヒトアミロイドベータタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む前記発現構築物が、前記細胞のゲノム中に組み込まれる、請求項143に記載の細胞。
- ヒトアミロイドベータタンパク質を含むポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結された前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項143に記載の細胞。
- 表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む、請求項143から145のいずれかに記載の細胞。
- 表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む前記発現構築物が、前記細胞のゲノム中に組み込まれる、請求項146に記載の細胞。
- 表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結された前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項147に記載の細胞。
- 酵母細胞である、請求項143から148のいずれかに記載の細胞。
- 哺乳動物細胞である、請求項143から148のいずれかに記載の細胞。
- 表S3:第3列において列挙される遺伝子において欠失、破壊もしくは突然変異を有する酵母細胞である、またはこのような遺伝子の哺乳動物相同体において欠失、破壊もしくは突然変異を有する哺乳動物細胞である、請求項143から145のいずれかに記載の細胞。
- 前記アミロイドベータタンパク質が、突然変異体アミロイドベータタンパク質である、請求項143から151のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとアミロイドベータ媒介毒性を抑制する、請求項143から152のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとアミロイドベータ媒介毒性を増強する、請求項143から152のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子の欠失が、アミロイドベータ媒介毒性を増強する、請求項143から152のいずれかに記載の細胞。
- 前記酵母遺伝子またはその哺乳動物相同体が、アミロイドベータ毒性ネットワークにおける隠れたノードである、請求項143から152のいずれかに記載の細胞。
- 同一種類の修飾されていない細胞と比較して、表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子の相同体である哺乳動物遺伝子によってコードされる哺乳動物タンパク質の発現または活性が増大または減少するように修飾されている哺乳動物細胞。
- 前記哺乳動物遺伝子によってコードされる、または前記哺乳動物遺伝子において欠失、破壊もしくは突然変異を有するタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現構築物を含む、請求項157に記載の細胞。
- 前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項158に記載の細胞。
- アミロイドベータ関連疾患を患う、またはアミロイドベータ関連疾患と関連する遺伝的変動を有する対象に由来するヒト細胞である、請求項157から159のいずれかに記載の細胞。
- 同一種類の正常哺乳動物細胞と比較して、アミロイドベータの発現が増大している、または突然変異体アミロイドベータタンパク質を発現する、請求項157から160のいずれかに記載の細胞。
- ヒト細胞である、請求項157から161のいずれかに記載の細胞。
- 神経細胞またはグリア細胞である、請求項157から162のいずれかに記載の細胞。
- アミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物を同定する方法であって、(a)請求項143から163のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を表S3:第3列に列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてアミロイドベータ媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのアミロイドベータ毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップとを含む、方法。
- アミロイドベータ関連疾患の処置のための候補薬剤を同定する方法であって、(a)請求項143から163のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を、表S3:第3列に列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現または活性を調節する薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がアミロイドベータ関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてアミロイドベータ媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのアミロイドベータ毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がアミロイドベータ関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップとを含む、方法。
- 前記遺伝子が、過剰発現されるとアミロイドベータ毒性を抑制するものであるか、またはその欠失が、アミロイドベータ毒性を増強するものであり、前記薬剤が、前記タンパク質の発現または活性を増強する、請求項164または請求項165に記載の方法。
- 前記遺伝子が、過剰発現されるとアミロイドベータ毒性を増強するものであるか、または欠失されるとその欠失がアミロイドベータ毒性を抑制するものであり、前記薬剤が、前記タンパク質の発現または活性を阻害する、請求項164または請求項165に記載の方法。
- アミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物を同定する方法であって、(a)請求項143から163のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を試験薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてアミロイドベータ媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのアミロイドベータ毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定されるステップとを含む、方法。
- アミロイドベータ関連疾患の処置のための候補薬剤を同定する方法であって、(a)請求項143から163のいずれかに記載の細胞を提供するステップと、(b)前記細胞を、試験薬剤と接触させるステップと、(c)(i)前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップであって、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記試験薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がアミロイドベータ関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップまたは(ii)前記細胞においてアミロイドベータ媒介毒性と関連する少なくとも1つの表現型を測定するステップであって、前記薬剤の不在下と比較した、前記薬剤の存在下でのアミロイドベータ毒性と関連する少なくとも1つの表現型の減少から、前記薬剤がアミロイドベータ関連疾患の処置のための候補薬剤として同定されるステップとを含む、方法。
- アミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物を同定する方法であって、表S3:第3列に列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質の発現または活性を調節する薬剤を同定するためにスクリーニングするステップと、前記細胞の生存力を低減するアミロイドベータの量を発現する細胞を提供するステップと、前記細胞を前記薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下で細胞生存力を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での細胞生存力と比較した、前記薬剤の存在下での細胞生存力の増大から、前記薬剤がアミロイドベータ媒介毒性を阻害する化合物として同定される、方法。
- 前記スクリーニングが、表S3:第3列において列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質を発現する細胞を提供するステップと、前記細胞を薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下での前記タンパク質の発現を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の発現の増大から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を増大する化合物として同定され、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の発現の減少から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を減少させる化合物として同定される、請求項170に記載の方法。
- 前記スクリーニングが、(i)表S3:第3列において列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体のプロモーター配列および(ii)リポータータンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むリポーター構築物を含む細胞を提供するステップと、前記細胞を薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下で前記リポータータンパク質の発現を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の発現と比較した前記薬剤の存在下での前記リポータータンパク質の発現の増大から、前記薬剤が前記タンパク質の発現を増大する化合物として同定される、請求項170に記載の方法。
- 前記スクリーニングが、表S3:第3列において列挙される遺伝子またはその哺乳動物相同体によってコードされるタンパク質を提供するステップと、前記タンパク質を薬剤と接触させるステップと、前記薬剤の存在下で前記タンパク質の活性を測定するステップとを含み、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の活性と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の活性の増大から、前記薬剤が前記タンパク質の活性を増大する化合物として同定され、前記薬剤の不在下での前記タンパク質の活性と比較した前記薬剤の存在下での前記タンパク質の活性の低下から、前記薬剤が前記タンパク質の活性を低下させる化合物として同定される、請求項170に記載の方法。
- ヒト細胞または対象においてアミロイドベータ媒介毒性を阻害する方法であって、前記細胞または対象において表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子によってコードされる酵母タンパク質の相同体であるヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップを含む、方法。
- アミロイドベータ関連疾患を処置する方法であって、アミロイドベータ関連疾患の処置を必要とする対象において、表S3:第3列において列挙される酵母遺伝子によってコードされる酵母タンパク質の相同体であるヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップを含む、方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を増強することを含む、請求項174または請求項175に記載の方法。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとアミロイドベータ媒介毒性のサプレッサーであるか、または欠失されるとアミロイドベータ媒介毒性のエンハンサーであり、前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を増強することを含む、請求項174または請求項175に記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を阻害することを含む、請求項174または請求項175に記載の方法。
- 前記酵母遺伝子が、過剰発現されるとアミロイドベータ媒介毒性のエンハンサーであるか、または欠失されるとアミロイドベータ媒介毒性のサプレッサーであり、前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、前記ヒトタンパク質の発現または活性を阻害することを含む、請求項174または請求項175に記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節するステップが、細胞を、前記ヒトタンパク質の発現または活性を調節する薬剤と接触させるまたは前記薬剤を対象に投与することを含む、請求項174から179のいずれかに記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性が増強され、前記薬剤が、前記ヒトタンパク質をコードする核酸または前記ヒトタンパク質をコードするRNA転写物の転写を活性化する合成転写アクチベーターを含む、請求項180に記載の方法。
- 前記ヒトタンパク質の発現または活性が阻害され、前記薬剤が、前記ヒトタンパク質をコードするmRNAを標的とする短鎖干渉RNA(siRNA)またはアンチセンス核酸、前記ヒトタンパク質をコードする遺伝子転写物の転写を抑制する合成転写レプレッサーまたは前記ヒトタンパク質と結合するアプタマー、ポリペプチドもしくは小分子である、請求項180に記載の方法。
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