JP2020150900A - プライマー及びマンゴーの検出方法 - Google Patents
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Abstract
Description
項1. 配列表の配列番号1における塩基番号6〜20の塩基配列を3´末端側に含む最大30塩基のDNAからなるPCRプライマーと、配列表の配列番号2における塩基番号5〜19の塩基配列を3´末端側に含む最大30塩基のDNAからなるPCRプライマーとからなるマンゴー検出用PCRプライマーセット。
項2.試料からDNAを抽出する工程と、このDNAを鋳型として、請求項1記載のプライマーセットを用いてPCRを行う工程と、増幅されたDNAを検出することにより試料中にマンゴーが存在しているか否かを検出する工程とを含むマンゴーの検出方法。
マンゴー検出用PCRプライマーセット
本発明者等は、上記の目的に従い、以下のマンゴー検出用PCRプライマーセットを開発した。本発明のマンゴー検出用PCRプライマーセットは、マンゴーに特徴的な塩基配列を有するものである。
塩基番号 12345678901234567890
配列番号1(S) CTAACGATTCTTTCGGCGTG
配列番号2(AS) GTCGAAGAGCTCGTGGTCG
また、本発明が提供する30塩基のDNAからなるプライマーとしては、例えば以下の塩基配列のものを上げることができる。
配列番号3(S) cgacccgacaCTAACGATTCTTTCGGCGTG
配列番号4(AS) gacgaacgcacGTCGAAGAGCTCGTGGTCG
( Sはセンスプライマーを表し、ASはアンチセンスプライマーを表す。)
本発明のマンゴー検出方法は、試料からDNAを抽出する工程と、このDNAを鋳型として、本発明のプライマーセットを用いてPCRを行う工程と、増幅されたDNAを検出することにより試料中にマンゴーが存在しているか否かを検出する工程とを含む方法である。
本発明は、また、マンゴー検出キットとして利用することも可能である。当該キットは、上記本発明のマンゴー検出用PCRプライマーセットを含んで成るものであれば、その構成は特に限定されない。
具体的には、配列番号1における塩基番号6〜20の塩基配列を3´末端側に含む最大30塩基のDNAからなるPCRプライマーと、配列番号2における塩基番号5〜19の塩基配列を3´末端側に含む最大30塩基のDNAからなるPCRプライマーとのセットを含むマンゴー検出キットが挙げられる。
以下に、本発明について実施例を用いて、さらに、詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定して解釈されるものではない。また、本発明の要旨を逸脱することなく、適宜変更することが可能である。
各種動物、植物、真菌、及び細菌由来DNAに対するマンゴー検出用PCRプライマーセットの検出特異性の確認
本発明のマンゴー検出用PCRプライマーセットを使用したPCR分析法の有効性を確認するために、各種生物由来DNAに対するPCRの検出特異性を調べる実験を、下記のように実施した。
及びマサバの精製DNAは、商店から購入した各々の試料の(筋)肉質部分をマルチビーズショッカー(安井器械、大阪)で破砕した試料からDNeasy Blood&Tissue kit(Qiagen GmbH, Germany)、またはGenomic-tip 20/G(Qiagen GmbH, Germany)を用いて調製したものを使用した。
マンゴー検出用PCRプライマーセットを用いたPCRの検出感度の確認実施例1で使用したマンゴー検出用PCRプライマーセットを用いたPCRの検出感度を調べるために、下記のような実験を実施した。
実施例1で調製したマンゴーのDNAを滅菌水で希釈し、10 fg/μl、100 fg/μl、1 pg/μl、10 pg/μl、100 pg/μl 、1 ng/μlのDNA溶液の希釈系列を作製し、これらの希釈した被験DNA液の1 μLを、実施例1に記載したPCR反応条件で、PCRに供した。PCR反応後、増幅産物の有無をアガロースゲル電気泳動によって確認した。
マンゴー検出用PCRプライマーセットを用いたPCRによるマンゴー含有食品中のマンゴー由来DNAの検出
各種マンゴーを原料として含有する市販食品等に対する本発明のマンゴー検出用PCRプライマーセットを用いたPCR分析を下記のように行い、本発明の実用性を検討した。
Claims (2)
- 配列表の配列番号1における塩基番号6〜20の塩基配列を3´末端側に含む最大30塩基のDNAからなるPCRプライマーと、配列表の配列番号2における塩基番号5〜19の塩基配列を3´末端側に含む最大30塩基のDNAからなるPCRプライマーとからなるマンゴー検出用PCRプライマーセット。
- 試料からDNAを抽出する工程と、このDNAを鋳型として、請求項1記載のプライマーセットを用いてPCRを行う工程と、増幅されたDNAを検出することにより試料中にマンゴーが存在しているか否かを検出する工程とを含むマンゴーの検出方法。
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