JP2020141617A - がん細胞の培養方法 - Google Patents
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Abstract
Description
この工程では、血液中のがん細胞を親水性ポリマー層に捕捉する。これは、例えば、血液と親水性ポリマー層とを接触させることで実施できる。
この工程では、親水性ポリマー層に捕捉されたがん細胞を細胞解離用酵素によって剥離させる。これは、例えば、親水性ポリマー層に細胞解離用酵素を添加し、所定の時間(5〜30分程度)反応させることで実施できる。反応は、室温(1〜30℃程度)で行うことが好ましい。
この工程では、剥離させたがん細胞を含む溶液を遠心力100〜1000Gで遠心分離する。
この工程では、人工基底膜上で、ES細胞培地によってがん細胞を培養する。これは、例えば、がん細胞を含む分画を、人工基底膜が形成された基材に播き、ES細胞培地を添加して培養することで実施できる。
AIBN(アゾビスイソブチロニトリル)を用いて、2−メトキシエチルアクリレートを80℃で6時間熱重合し、ポリ2−メトキシエチルアクリレートを作製した(分子量Mn:約15000、Mw:約50000)。そして、得られたポリ2−メトキシエチルアクリレートの0.25W/V%メタノール溶液を作製した。
チャンバー付スライドガラスに、作製したポリ2−メトキシエチルアクリレート溶液(0.25W/V%)を注入し、乾燥させることで、親水性ポリマー層を作製した。TEM観察で測定した親水性ポリマー層の膜厚は135nmであった。
次いで、ポリ2−メトキシエチルアクリレートがコーティングされた部分(親水性ポリマー層)にフィブロネクチンを吸着させ、40℃で1時間放置した後、PBSで洗浄することで、検査器具を作製した。
まず、下記成分を混合し、混合物Aを得た。
DMEM/F12培地 500ml
ペニシリン−ストレプトマイシン混合溶液 5ml
ゲンタマイシン 250μl
1M HEPES 5ml
N−アセチルシステイン 81.6mg
混合物A 50ml
B−27(50X) 1ml
GlutaMAX(100X) 500μl
ウシ血清アルブミン 0.5g
混合物B 1ml
mNoggin溶液(25μg/ml) 2μl
hR−Spondin溶液(500ng/ml) 10μl
mEGF溶液(25μg/ml) 2μl
mHGF溶液(25μg/ml) 2μl
mWnt3a溶液(10μg/ml) 10μl
5mM Y−27632 2μl
50μM ヒドロコルチゾン 10μl
がん患者から採取した血液を、OncoQuickを用いて遠心分離し、がん細胞を分離(濃縮)した。次いで、がん細胞を含む分画を検査器具に注入し、室温で一晩放置した後、PBSで洗浄することで、がん細胞を選択的に親水性ポリマー層に捕捉した。
検体A 大腸がんステージIV、肝転移の患者から採取した血液 (培養時間:7日)
検体B 大腸がんステージIV、肺転移の患者から採取した血液 (培養時間:13日)
検体C 大腸がんステージIV、肝転移の患者から採取した血液 (培養時間:5日)
Claims (6)
- 血液中のがん細胞を親水性ポリマー層に捕捉する工程と、
前記親水性ポリマー層に捕捉された前記がん細胞を細胞解離用酵素によって剥離させる工程と、
剥離させた前記がん細胞を含む溶液を遠心力100〜1000Gで遠心分離する工程と、
人工基底膜上で、ES細胞培地によって前記がん細胞を培養する工程とを含むがん細胞の培養方法。 - 前記人工基底膜は、膜厚が1.0〜3.0mmである請求項1記載のがん細胞の培養方法。
- 前記血液は、濃縮処理を施したものである請求項1又は2記載のがん細胞の培養方法。
- 前記血液は、治療前の患者から採取したものである請求項1〜3のいずれかに記載のがん細胞の培養方法。
- 前記親水性ポリマー層は、下記式(I)で表されるポリマー及びポリ(メタ)アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも1種の親水性ポリマーで形成されている請求項1〜4のいずれかに記載のがん細胞の培養方法。
- 前記親水性ポリマー層は、下記式(I−1)で表される化合物及び(メタ)アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも1種の親水性モノマーと、他のモノマーとの共重合体で形成されている請求項1〜4のいずれかに記載のがん細胞の培養方法。
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