JP2020037597A - 白血病細胞の根絶のための方法および組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】集団または被験体中の白血病細胞を選択的に根絶するためのギャップジャンクションブロッカーを含む組成物、方法、およびキット、ならびに急性骨髄性白血病を処置し、急性骨髄性白血病患者の生存を促進する関連方法を提供すること。【解決手段】細胞集団中の白血病細胞を根絶する方法であって、前記細胞集団を有効量のギャップジャンクションブロッカーと接触させ、それにより前記細胞集団中の白血病細胞を根絶することを含む、方法が提供される。【選択図】なし

Description

関連出願
本願は、２０１３年１０月１５日に出願された米国仮出願第６１／８９１，２５９号の利益を主張する。この出願の内容は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。
政府支援
本発明は、国立衛生研究所によって授与されたＲ０１ＨＬ０９７７９４の下での政府支援により行われた。政府は、本発明において一定の権利を有する。

発明の背景
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、正常な血液形成を激しく損ねる骨髄中の悪性芽細胞の蓄積を特徴とする血液幹および骨髄前駆細胞の遺伝的に異質な疾患である。ＡＭＬの異質な特質にもかかわらず、様々なサブタイプが白血病誘発に至るいくつかの共通経路を共有するようであり、疾患の階層的な特質は、一般によく確立されている（Laneら、Blood、１１５０〜１１５７頁（２００９年））。ＡＭＬは、遺伝子の観点から最もよく特徴付けられた悪性腫瘍の１つである。白血病に至る多数の遺伝的形質転換事象が特徴付けられている（Marcucciら、J. Clinical Oncology、２９巻、４７５〜４８６頁（２０１１年）；Puiら、J. Clinical Oncology、２９巻、５５１〜６５頁（２０１１年）；およびBurnettら、J. Clinical Oncology、２９巻、４８７〜９４頁（２０１１年））。細胞自律的な事象に加えて、白血病細胞の微小環境との互恵的相互作用が報告されており（Gilletteら、Nature Cell Biology、１１巻、３０３〜１１頁（２００９年）；Walkleyら、Cell、１２９巻、１０９７〜１１０頁（２００７年）；およびWeiら、Cancer Cell、１３巻、４８３〜９５頁（２００８年））、結果として起こる白血病細胞と微小環境との間のクロストークを示唆している。しかし、白血病誘発に関与する分子改変の分類化における進展にもかかわらず、このような変化がどのように薬物耐性を誘導するように協同するかの本発明者らの理解は依然として弱い。さらに、特に一般的なおよび誘導化学療法中の白血病細胞間における層全体のジャンクションによる相互作用に関してはほとんど何もわかっていない。

Laneら、Blood、１１５０〜１１５７頁（２００９年） Marcucciら、J. Clinical Oncology、２９巻、４７５〜４８６頁（２０１１年） Puiら、J. Clinical Oncology、２９巻、５５１〜６５頁（２０１１年） Burnettら、J. Clinical Oncology、２９巻、４８７〜９４頁（２０１１年） Gilletteら、Nature Cell Biology、１１巻、３０３〜１１頁（２００９年） Walkleyら、Cell、１２９巻、１０９７〜１１０頁（２００７年） Weiら、Cancer Cell、１３巻、４８３〜９５頁（２００８年）

一態様では、本開示は、細胞集団中の白血病細胞を根絶する方法であって、細胞集団を有効量のギャップジャンクションブロッカーと接触させ、それにより細胞集団中の白血病細胞を根絶することを含む、方法を提供する。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１１β−ＨＳＤ）の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、以下の式Ｉ〜ＩＩＩ：

（式中、Ｘ_１ Ｙ、およびＺはそれぞれ独立して、ハロゲン、特に、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、もしくはＢｒ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_５〜Ｃ_１５アリール、またはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシを表し、ｎは、１〜１０、特に１〜４の整数を表し、Ｌは、アミド、アミン、スルホンアミド、エステル、チオエステル、またはケト基を表し、Ｔ、Ｕ、Ｖ、およびＷはそれぞれ独立して、オキソ、チオ、ケトン、チオケトン、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、またはＣ_１〜Ｃ_６アルカノール基を表し、Ａｒは、芳香族環系を表し、Ｃｙｃは、環式環系を表す）、

（式中、Ａは、Ｃ_１〜Ｃ_１０エステル（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−Ｏ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アミド（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−ＮＨ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０エーテル、またはＣ_１〜Ｃ_１０ケトン（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−）基を表し、ＢおよびＣはそれぞれ独立して、オキソ基、ケト基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルカノール基、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、ｍは、１〜１０、特に、１〜４の整数であり、Ｄは、ＣＯＯＲ^１またはＣＯＮＲ^２Ｒ^３から選択される基であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表す）、

（式中、Ｅは、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_１０エステル（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−Ｏ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アミド（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−ＮＨ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０エーテル（Ｃ_１〜Ｃ_１０−Ｏ−）、またはＣ_１〜Ｃ_１０ケトン（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−）基を表し、Ｆは、オキソ基、ケト基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルカノール基、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、Ｇは、ＣＯＯＲ^１またはＣＯＮＲ^２Ｒ^３から選択される基であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_２０炭化水素基、特に、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基を表す）からなる群から選択される。

一態様では、本開示は、細胞集団中の白血病細胞を根絶する方法であって、細胞集団を有効量のギャップジャンクションブロッカーと接触させ、それにより細胞集団中の白血病細胞を根絶することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、１８−β−グリチルレチン酸またはその誘導体である。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、グリチルリチン（glycyrrhizine）、グリチルリチン酸、カルベノキソロン、または２−ヒドロキシエチル−１８β−グリチルレチン酸アミドからなる群から選択される１８−β−グリチルレチン酸の誘導体である。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、カルベノキソロンまたはその類似体を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ヘプタノール、オクタノール、アナダミド（anadamide）、フェナメート、レチノイン酸、オレアミド、スペルミン、アミノスルフェート、ハロタン、エンフルラン、イソフルラン、プロポフォール、チオペンタール、グリチルレチン酸、キニーネ、２−アミノエトキシジフェニルボレート、またはそれらの薬学的に許容され得る誘導体、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、薬学的に許容され得る誘導体は、１−ヘプタノール、２−ヘプタノール、３−ヘプタノール、４−ヘプタノール、およびこれらの組合せからなる群から選択されるヘプタノールの薬学的に許容され得る誘導体；メクロフェナム酸、ニフルム酸、フルフェナム酸、およびこれらの組合せからなる群から選択されるフェナメートの薬学的に許容され得る誘導体；グリチルレチン酸の水素エステル、グリチルレチン酸の水素エステルの塩、カルベノキソロン、およびこれらの組合せからなる群から選択されるグリチルレチン酸の薬学的に許容され得る誘導体；ならびにキニジン、メフロキン、およびこれらの組合せからなる群から選択されるキニーネの薬学的に許容され得る誘導体を含む。

一部の実施形態では、白血病細胞を根絶することは、白血病細胞の顆粒球への分化を誘導することを含む。一部の実施形態では、顆粒球は、好中球を含む。一部の実施形態では、好中球は、ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４−好中球を含む。一部の実施形態では、白血病細胞を根絶することは、白血病細胞生存を促進する白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることを含む。一部の実施形態では、白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることは、白血病細胞と間質細胞との異型相互作用を妨害することを含む。一部の実施形態では、白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることは、白血病細胞間の同型相互作用を妨害することを含む。一部の実施形態では、白血病細胞は、細胞集団中の正常白血球の増殖を誘導しながら選択的に根絶される。一部の実施形態では、白血病細胞は、細胞集団中の正常白血球細胞を根絶することなく選択的に根絶される。一部の実施形態では、細胞集団中の白血病細胞の少なくとも２０％が根絶される。一部の実施形態では、細胞集団中の白血病細胞の少なくとも５０％が根絶される。一部の実施形態では、細胞集団中の白血病細胞の少なくとも７０％が根絶される。一部の実施形態では、細胞集団中の白血病細胞のすべてが根絶される。

一部の実施形態では、白血病細胞は、ＭＬＬ−ＡＦ９細胞、ＭＬＬ−ＥＮＬ細胞、Ｎｕｐ９８−ＨｏｘＡ９細胞、ＡＭＬ１−ＥＴ０９Ａ細胞、ＫＧ−１細胞、ＫＧ−１ａ細胞、Ｕ９３７細胞、ＨＬ６０細胞、ＮＢ−４細胞、ＨｏｘＡ９／Ｍｅｉｓ１細胞、およびＴＨＰ１細胞からなる群から選択される急性骨髄性白血病細胞株を含む。

一部の実施形態では、細胞集団は、骨髄白血球および末梢血白血球からなる群から選択される初代白血球を含む。

一部の実施形態では、有効量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで５０μＭ〜４００μΜまたはｉｎ
ｖｉｖｏで１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内の濃度を含む。

一部の実施形態では、接触は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、接触は、ｉｎ ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏの接触は、被験体におけるものである。一部の実施形態では、被験体は、マウスである。一部の実施形態では、被験体は、ヒトである。一部の実施形態では、被験体は、白血病に罹患している。一部の実施形態では、被験体は、急性骨髄性白血病に罹患している。

一態様では、本開示は、白血病細胞の非白血病細胞への分化を促進する方法であって、白血病細胞を有効量のギャップジャンクションブロッカーと接触させ、それにより白血病細胞の非白血病細胞への分化を促進することを含む、方法を提供する。

一部の実施形態では、白血病細胞は、白血病幹細胞または白血病前駆細胞を含む。一部の実施形態では、白血病幹細胞または白血病前駆細胞は、急性骨髄性白血病細胞を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病は、ＭＬＬ−ＡＦ９細胞、ＭＬＬ−ＥＮＬ細胞、Ｎｕｐ９８−ＨｏｘＡ９細胞、ＡＭＬ１−ＥＴ０９Ａ細胞、ＫＧ−１細胞、ＫＧ−１ａ細胞、Ｕ９３７細胞、ＨＬ６０細胞、ＮＢ−４細胞、ＨｏｘＡ９／Ｍｅｉｓ１細胞、およびＴＨＰ１細胞からなる群から選択される細胞株を含む。

一部の実施形態では、非白血病細胞は、成熟したまたは最終分化した細胞を含む。一部の実施形態では、非白血病細胞は、顆粒球を含む。一部の実施形態では、顆粒球は、短命の顆粒球を含む。一部の実施形態では、非白血病細胞は、好中球を含む。一部の実施形態では、好中球は、ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４−好中球を含む。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１１β−ＨＳＤ）の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、以下の式Ｉ〜ＩＩＩ：

（式中、Ｘ_１ Ｙ、およびＺはそれぞれ独立して、ハロゲン、特に、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、もしくはＢｒ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_５〜Ｃ_１５アリール、またはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシを表し、ｎは、１〜１０、特に１〜４の整数を表し、Ｌは、アミド、アミン、スルホンアミド、エステル、チオエステル、またはケト基を表し、Ｔ、Ｕ、Ｖ、およびＷはそれぞれ独立して、オキソ、チオ、ケトン、チオケトン、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、またはＣ_１〜Ｃ_６アルカノール基を表し、Ａｒは、芳香族環系を表し、Ｃｙｃは、環式環系を表す）、

（式中、Ａは、Ｃ_１〜Ｃ_１０エステル（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−Ｏ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アミド（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−ＮＨ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０エーテル、またはＣ_１〜Ｃ_１０ケトン（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−）基を表し、ＢおよびＣはそれぞれ独立して、オキソ基、ケト基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルカノール基、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、ｍは、１〜１０、特に、１〜４の整数であり、Ｄは、ＣＯＯＲ^１またはＣＯＮＲ^２Ｒ^３から選択される基であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表す）、

（式中、Ｅは、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_１０エステル（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−Ｏ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アミド（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−ＮＨ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０エーテル（Ｃ_１〜Ｃ_１０−Ｏ−）、またはＣ_１〜Ｃ_１０ケトン（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−）基を表し、
Ｆは、オキソ基、ケト基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルカノール基、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、Ｇは、ＣＯＯＲ^１またはＣＯＮＲ^２Ｒ^３から選択される基であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_２０炭化水素基、特に、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基を表す）からなる群から選択される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、１８−β−グリチルレチン酸またはその誘導体である。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、グリチルリチン、グリチルリチン酸、カルベノキソロン、または２−ヒドロキシエチル−１８β−グリチルレチン酸アミドからなる群から選択される、１８−β−グリチルレチン酸の誘導体である。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、カルベノキソロンまたはその類似体を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ヘプタノール、オクタノール、アナダミド、フェナメート、レチノイン酸、オレアミド、スペルミン、アミノスルフェート、ハロタン、エンフルラン、イソフルラン、プロポフォール、チオペンタール、グリチルレチン酸、キニーネ、２−アミノエトキシジフェニルボレート、またはそれらの薬学的に許容され得る誘導体、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。

一部の実施形態では、薬学的に許容され得る誘導体は、１−ヘプタノール、２−ヘプタノール、３−ヘプタノール、４−ヘプタノール、およびこれらの組合せからなる群から選択されるヘプタノールの薬学的に許容され得る誘導体；メクロフェナム酸、ニフルム酸、フルフェナム酸、およびこれらの組合せからなる群から選択されるフェナメートの薬学的に許容され得る誘導体；グリチルレチン酸の水素エステル、グリチルレチン酸の水素エステルの塩、カルベノキソロン、およびこれらの組合せからなる群から選択されるグリチルレチン酸の薬学的に許容され得る誘導体；ならびにキニジン、メフロキン、およびこれらの組合せからなる群から選択されるキニーネの薬学的に許容され得る誘導体を含む。

一態様では、本開示は、急性骨髄性白血病の処置を必要とする被験体における急性骨髄性白血病を処置する方法であって、被験体に有効量のギャップジャンクションブロッカーを投与し、それにより被験体における急性骨髄性白血病を処置することを含む、方法を提供する。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１１β−ＨＳＤ）の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、カルベノキソロンまたはその類似体を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体中の正常白血球を根絶することなく、被験体中の白血病細胞を選択的に根絶する。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体中の正常白血球の増殖を誘導しながら、被験体中の白血病細胞を選択的に根絶する。

一部の実施形態では、本方法は、被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与することをさらに含む。一部の実施形態では、誘導化学療法は、被験体に代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を投与することを含む。一部の実施形態では、代謝拮抗剤は、シタラビンを含む。一部の実施形態では、アントラサイクリン系薬剤は、ドキソルビシンを含む。一部の実施形態では、誘導化学療法は、患者に５日間の期間にわたってシタラビンおよびドキソルビシンを投与することを含む。一部の実施形態では、誘導化学療法は、３日間の期間にわたる患者へのシタラビンおよびドキソルビシンの投与、その後の２日間の期間にわたる患者へのシタラビン単独の投与を含む。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日にわたって被験体に投与される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ギャップジャンクションブロッカーと同時に被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日にわたって被験体に投与される。

一部の実施形態では、被験体は、難治性または再発急性骨髄性白血病に罹患している。一部の実施形態では、本方法は、被験体を評価して、被験体が難治性または再発急性骨髄性白血病を有するか否かを決定することをさらに含む。

一部の実施形態では、被験体は、誘導化学療法後に急性骨髄性白血病の完全な寛解から再発する被験体である。

一部の実施形態では、急性骨髄性白血病を処置することは、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導することを含む。

一部の実施形態では、急性骨髄性白血病を処置することは、被験体の骨髄または末梢血中の残留する白血病細胞に起因する再発リスクの非存在下で、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導することを含む。

一態様では、本開示は、急性骨髄性白血病に罹患している被験体の生存を促進する方法であって、被験体に有効量のギャップジャンクションブロッカーを投与し、それにより被験体の生存を促進することを含む、方法を提供する。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１１β−ＨＳＤ）の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、カルベノキソロンまたはその類似体を含む。一部の実施形態では、本方法は、被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与することをさらに含む。一部の実施形態では、誘導化学療法は、被験体に代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を投与することを含む。一部の実施形態では、代謝拮抗剤は、シタラビンを含む。一部の実施形態では、アントラサイクリン系薬剤は、ドキソルビシンを含む。一部の実施形態では、誘導化学療法は、患者に５日間の期間にわたってシタラビンおよびドキソルビシンを投与することを含む。一部の実施形態では、誘導化学療法は、３日間の期間にわたる患者へのシタラビンおよびドキソルビシンの投与、その後の２日間の期間にわたる患者へのシタラビン単独の投与を含む。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日にわたって被験体に投与される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ギャップジャンクションブロッカーと同時に被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日にわたって被験体に投与される。

一部の実施形態では、本方法は、急性骨髄性白血病の末期状態に罹患しているかまたはそれを示している被験体を選択することをさらに含む。一部の実施形態では、被験体は、進行した腫瘍転移を有する。一部の実施形態では、被験体は、高い全身腫瘍量を有する。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ギャップジャンクションブロッカーを受けていない被験体の生存の長さと比較して、被験体の生存の長さを増大させる。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ギャップジャンクションブロッカーを受けていない被験体の生存の可能性と比較して、被験体の生存の可能性を増大させる。

一態様では、本開示は、被験体中の白血病細胞を選択的に根絶することによって再発したかまたは難治性の急性骨髄性白血病を有する被験体における完全な寛解を誘導する方法であって、（ａ）被験体を評価して、被験体が再発したかまたは難治性の急性骨髄性白血病を有するか否かを決定することと、（ｂ）被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与する少なくとも１日前にギャップジャンクションブロッカーを被験体に投与することと、（ｃ）禁止された（proscribed）時間にわたって代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を含む誘導化学療法処置レジメンを被験体に投与し、それにより被験体中の白血病細胞を選択的に根絶することによって被験体における完全な寛解を誘導することとを含む、方法を提供する。

一態様では、本開示は、有効量のギャップジャンクションブロッカー、急性骨髄性白血病が耐性を示す有効量の少なくとも１種の化学療法剤、および薬学的に許容され得る担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。

一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、代謝拮抗剤を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、シタラビンを含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、アントラサイクリン系薬剤を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、ドキソルビシンを含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、シタラビンおよびドキソルビシンを含む。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、カルベノキソロンまたはその類似体を含む。

一態様では、本開示は、ギャップジャンクションブロッカー、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤、ならびに急性骨髄性白血病に罹患している被験体にギャップジャンクションブロッカーおよび少なくとも１種の化学療法剤を投与するための指示書を含むキットを提供する。

一部の実施形態では、キットは、ギャップジャンクションブロッカーおよび／または少なくとも１種の化学療法剤を投与される予防的処置、ならびにギャップジャンクションブロッカーおよび／または少なくとも１種の化学療法剤を用いた予防的処置を投与するための指示書をさらに含む。一部の実施形態では、予防的処置は、高血圧、低カリウム血症、および浮腫を処置または防止するための本明細書に記載の医薬活性剤を含む。一部の実施形態では、指示書は、被験体のための誘導化学療法処置レジメンの一部として少なくとも１種の化学療法剤を投与するための指示をさらに含む。一部の実施形態では、指示書は、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するために、ギャップジャンクションブロッカー、および少なくとも１種の治療剤を投与するための指示をさらに含む。一部の実施形態では、指示書は、被験体中の白血病細胞を完全に根絶することによって再発のリスクを伴うことなく、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するために、ギャップジャンクションブロッカー、および少なくとも１種の治療剤を投与するための指示をさらに含む。一部の実施形態では、指示書は、増殖性不死化白血病細胞から短命の非白血病細胞に分化するように白血病細胞を誘導することにより、被験体中の白血病細胞を完全に根絶することによって、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するためにギャップジャンクションブロッカー、および少なくとも１種の治療剤を投与するための指示をさらに含む。

一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、代謝拮抗剤を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、シタラビンを含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、アントラサイクリン系薬剤を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、ドキソルビシンを含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、シタラビンを含み、アントラサイクリン系薬剤は、ドキソルビシンを含む。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、カルベノキソロンまたはその類似体を含む。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
細胞集団中の白血病細胞を根絶する方法であって、前記細胞集団を有効量のギャップジャンクションブロッカーと接触させ、それにより前記細胞集団中の白血病細胞を根絶することを含む、方法。
（項目２）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１１β−ＨＳＤ）の阻害剤を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、以下の式Ｉ〜ＩＩＩ：


（式中、
Ｘ_１ Ｙ、およびＺはそれぞれ独立して、ハロゲン、特に、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、もしくはＢｒ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_５〜Ｃ_１５アリール、またはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシを表し、
ｎは、１〜１０、特に１〜４の整数を表し、
Ｌは、アミド、アミン、スルホンアミド、エステル、チオエステル、またはケト基を表し、
Ｔ、Ｕ、Ｖ、およびＷはそれぞれ独立して、オキソ、チオ、ケトン、チオケトン、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、またはＣ_１〜Ｃ_６アルカノール基を表し、
Ａｒは、芳香族環系を表し、
Ｃｙｃは、環式環系を表す）、


（式中、
Ａは、Ｃ_１〜Ｃ_１０エステル（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−Ｏ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アミド（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−ＮＨ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０エーテル、またはＣ_１〜Ｃ_１０ケトン（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−）基を表し、
ＢおよびＣはそれぞれ独立して、オキソ基、ケト基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルカノール基、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、
ｍは、１〜１０、特に、１〜４の整数であり、
Ｄは、ＣＯＯＲ^１またはＣＯＮＲ^２Ｒ^３から選択される基であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表す）、


（式中、
Ｅは、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_１０エステル（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−Ｏ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アミド（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−ＮＨ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０エーテル（Ｃ_１〜Ｃ_１０−Ｏ−）、またはＣ_１〜Ｃ_１０ケトン（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−）基を表し、
Ｆは、オキソ基、ケト基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルカノール基、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、
Ｇは、ＣＯＯＲ^１またはＣＯＮＲ^２Ｒ^３から選択される基であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_２０炭化水素基、特に、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基を表す）
からなる群から選択される、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、１８−β−グリチルレチン酸またはその誘導体である、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、グリチルリチン、グリチルリチン酸、カルベノキソロン、または２−ヒドロキシエチル−１８β−グリチルレチン酸アミドからなる群から選択される、１８−β−グリチルレチン酸の誘導体である、項目１に記載の方法。（項目６）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、カルベノキソロンまたはその類似体を含む、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、ヘプタノール、オクタノール、アナダミド、フェナメート、レチノイン酸、オレアミド、スペルミン、アミノスルフェート、ハロタン、エンフルラン、イソフルラン、プロポフォール、チオペンタール、グリチルレチン酸、キニーネ、２−アミノエトキシジフェニルボレート、またはそれらの薬学的に許容され得る誘導体、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記薬学的に許容され得る誘導体が、
１−ヘプタノール、２−ヘプタノール、３−ヘプタノール、４−ヘプタノール、およびそれらの組合せからなる群から選択されるヘプタノールの薬学的に許容され得る誘導体；
メクロフェナム酸、ニフルム酸、フルフェナム酸、およびそれらの組合せからなる群から選択されるフェナメートの薬学的に許容され得る誘導体；
グリチルレチン酸の水素エステル、グリチルレチン酸の水素エステルの塩、カルベノキソロン、およびそれらの組合せからなる群から選択されるグリチルレチン酸の薬学的に許容され得る誘導体；ならびに
キニジン、メフロキン、およびそれらの組合せからなる群から選択されるキニーネの薬学的に許容され得る誘導体
を含む、項目７に記載の方法。
（項目９）
白血病細胞を根絶することが、前記白血病細胞の顆粒球への分化を誘導することを含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記顆粒球が、好中球を含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記好中球が、ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４−好中球を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
白血病細胞を根絶することが、白血病細胞生存を促進する前記白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることを含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることが、白血病細胞と間質細胞との異型相互作用を妨害することを含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることが、白血病細胞間の同型相互作用を妨害することを含む、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記白血病細胞が、前記細胞集団中の正常白血球の増殖を誘導しながら選択的に根絶される、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記白血病細胞が、前記細胞集団中の正常白血球細胞を根絶することなく選択的に根絶される、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記細胞集団中の前記白血病細胞の少なくとも２０％が根絶される、項目１５または１６に記載の方法。
（項目１８）
前記細胞集団中の前記白血病細胞の少なくとも５０％が根絶される、項目１５または１６に記載の方法。
（項目１９）
前記細胞集団中の前記白血病細胞の少なくとも７０％が根絶される、項目１５または１６に記載の方法。
（項目２０）
前記細胞集団中の前記白血病細胞のすべてが根絶される、項目１５または１６に記載の方法。
（項目２１）
前記白血病細胞が、ＭＬＬ−ＡＦ９細胞、ＫＧ−１細胞、ＫＧ−１ａ細胞、Ｕ９３７細胞、ＨＬ６０細胞、ＮＢ−４細胞、およびＴＨＰ１細胞からなる群から選択される急性骨髄性白血病細胞株を含む、項目１に記載の方法。
（項目２２）
前記細胞集団が、骨髄白血球および末梢血白血球からなる群から選択される初代白血球を含む、項目１に記載の方法。
（項目２３）
前記有効量が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで５０μＭ〜４００μΜまたはｉｎ ｖｉｖｏで１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内の濃度を含む、項目１に記載の方法。
（項目２４）
前記接触が、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで行われる、項目１に記載の方法。
（項目２５）
前記接触が、ｉｎ ｖｉｖｏで行われる、項目１に記載の方法。
（項目２６）
前記ｉｎ ｖｉｖｏの接触が、被験体におけるものである、項目１に記載の方法。
（項目２７）
前記被験体が、マウスである、項目１に記載の方法。
（項目２８）
前記被験体が、ヒトである、項目１に記載の方法。
（項目２９）
前記被験体が、白血病に罹患している、項目１に記載の方法。
（項目３０）
前記被験体が、急性骨髄性白血病に罹患している、項目１に記載の方法。
（項目３１）
白血病細胞の非白血病細胞への分化を促進する方法であって、前記白血病細胞を有効量のギャップジャンクションブロッカーと接触させ、それにより前記白血病細胞の非白血病細胞への分化を促進することを含む、方法。
（項目３２）
前記白血病細胞が、白血病幹細胞または白血病前駆細胞を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記白血病幹細胞または白血病前駆細胞が、急性骨髄性白血病細胞を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３４）
前記急性骨髄性白血病が、ＭＬＬ−ＡＦ９細胞、ＫＧ−１細胞、ＫＧ−１ａ細胞、Ｕ９３７細胞、ＨＬ６０細胞、ＮＢ−４細胞、およびＴＨＰ１細胞からなる群から選択される細胞株を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３５）
前記非白血病細胞が、成熟または最終分化した細胞を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３６）
前記非白血病細胞が、顆粒球を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３７）
前記顆粒球が、短命の顆粒球を含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記非白血病細胞が、好中球を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３９）
前記好中球が、ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４−好中球を含む、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１１β−ＨＳＤ）の阻害剤を含む、項目３１に記載の方法。
（項目４１）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、以下の式Ｉ〜ＩＩＩ：


（式中、
Ｘ_１ Ｙ、およびＺはそれぞれ独立して、ハロゲン、特に、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、もしくはＢｒ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_５〜Ｃ_１５アリール、またはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシを表し、
ｎは、１〜１０、特に１〜４の整数を表し、
Ｌは、アミド、アミン、スルホンアミド、エステル、チオエステル、またはケト基を表し、
Ｔ、Ｕ、Ｖ、およびＷはそれぞれ独立して、オキソ、チオ、ケトン、チオケトン、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、またはＣ_１〜Ｃ_６アルカノール基を表し、
Ａｒは、芳香族環系を表し、
Ｃｙｃは、環式環系を表す）、


（式中、
Ａは、Ｃ_１〜Ｃ_１０エステル（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−Ｏ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アミド（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−ＮＨ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０エーテル、またはＣ_１〜Ｃ_１０ケトン（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−）基を表し、
ＢおよびＣはそれぞれ独立して、オキソ基、ケト基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルカノール基、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、
ｍは、１〜１０、特に、１〜４の整数であり、
Ｄは、ＣＯＯＲ^１またはＣＯＮＲ^２Ｒ^３から選択される基であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表す）、


（式中、
Ｅは、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_１０エステル（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−Ｏ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アミド（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−ＮＨ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０エーテル（Ｃ_１〜Ｃ_１０−Ｏ−）、またはＣ_１〜Ｃ_１０ケトン（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−）基を表し、
Ｆは、オキソ基、ケト基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルカノール基、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、
Ｇは、ＣＯＯＲ^１またはＣＯＮＲ^２Ｒ^３から選択される基であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_２０炭化水素基、特に、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基を表す）
からなる群から選択される、項目３１に記載の方法。
（項目４２）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、１８−β−グリチルレチン酸またはその誘導体である、項目３１に記載の方法。
（項目４３）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、グリチルリチン、グリチルリチン酸、カルベノキソロン、または２−ヒドロキシエチル−１８β−グリチルレチン酸アミドからなる群から選択される、１８−β−グリチルレチン酸の誘導体である、項目３１に記載の方法。
（項目４４）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、カルベノキソロンまたはその類似体を含む、項目３１に記載の方法。
（項目４５）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、ヘプタノール、オクタノール、アナダミド、フェナメート、レチノイン酸、オレアミド、スペルミン、アミノスルフェート、ハロタン、エンフルラン、イソフルラン、プロポフォール、チオペンタール、グリチルレチン酸、キニーネ、２−アミノエトキシジフェニルボレート、またはそれらの薬学的に許容され得る誘導体、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目３１に記載の方法。
（項目４６）
前記薬学的に許容され得る誘導体が、
１−ヘプタノール、２−ヘプタノール、３−ヘプタノール、４−ヘプタノール、およびそれらの組合せからなる群から選択されるヘプタノールの薬学的に許容され得る誘導体；
メクロフェナム酸、ニフルム酸、フルフェナム酸、およびそれらの組合せからなる群から選択されるフェナメートの薬学的に許容され得る誘導体；
グリチルレチン酸の水素エステル、グリチルレチン酸の水素エステルの塩、カルベノキソロン、およびそれらの組合せからなる群から選択されるグリチルレチン酸の薬学的に許容され得る誘導体；ならびに
キニジン、メフロキン、およびそれらの組合せからなる群から選択されるキニーネの薬学的に許容され得る誘導体
を含む、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
急性骨髄性白血病の処置を必要とする被験体における急性骨髄性白血病を処置する方法であって、前記被験体に有効量のギャップジャンクションブロッカーを投与し、それにより前記被験体における急性骨髄性白血病を処置することを含む、方法。
（項目４８）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１１β−ＨＳＤ）の阻害剤を含む、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、カルベノキソロンまたはその類似体を含む、項目４７または４８に記載の方法。
（項目５０）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、前記被験体中の正常白血球を根絶することなく、前記被験体中の白血病細胞を選択的に根絶する、項目４７から４９に記載の方法。
（項目５１）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、前記被験体中の正常白血球の増殖を誘導しながら、前記被験体中の白血病細胞を選択的に根絶する、項目４７から５０に記載の方法。
（項目５２）
前記被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与することをさらに含む、項目４７から５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記誘導化学療法が、前記被験体に代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を投与することを含む、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記代謝拮抗剤が、シタラビンを含む、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記アントラサイクリン系薬剤が、ドキソルビシンを含む、項目５３に記載の方法。
（項目５６）
前記誘導化学療法が、前記患者に５日間の期間にわたってシタラビンおよびドキソルビシンを投与することを含む、項目４７から５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記誘導化学療法が、３日間の期間にわたる前記患者へのシタラビンおよびドキソルビシンの投与、その後の２日間の期間にわたる前記患者へのシタラビン単独の投与を含む、項目４７から５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、前記被験体に前記誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日にわたって前記被験体に投与される、項目４７から５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、前記ギャップジャンクションブロッカーと同時に前記被験体に前記誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日にわたって前記被験体に投与される、項目４７から５８のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記被験体が、難治性または再発した急性骨髄性白血病に罹患している、項目４７から５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
前記被験体を評価して、前記被験体が難治性または再発した急性骨髄性白血病を有するか否かを決定することをさらに含む、項目４７から６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
前記被験体が、誘導化学療法後に急性骨髄性白血病の完全な寛解から再発する被験体である、項目４７から６１のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
急性骨髄性白血病を処置することが、前記被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導することを含む、項目４７から６２のいずれか一項に記載の方法。
（項目６４）
急性骨髄性白血病を処置することが、前記被験体の骨髄または末梢血中の残留する白血病細胞に起因する再発リスクの非存在下で、前記被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導することを含む、項目４７から６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
急性骨髄性白血病に罹患している被験体の生存を促進する方法であって、前記被験体に有効量のギャップジャンクションブロッカーを投与し、それにより前記被験体の生存を促進することを含む、方法。
（項目６６）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１１β−ＨＳＤ）の阻害剤を含む、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、カルベノキソロンまたはその類似体を含む、項目６５または６６に記載の方法。
（項目６８）
前記被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与することをさらに含む、項目６５から６７のいずれか一項に記載の方法。
（項目６９）
前記誘導化学療法が、前記被験体に代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を投与することを含む、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記代謝拮抗剤が、シタラビンを含む、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
前記アントラサイクリン系薬剤が、ドキソルビシンを含む、項目６９に記載の方法。
（項目７２）
前記誘導化学療法が、前記患者に５日間の期間にわたってシタラビンおよびドキソルビシンを投与することを含む、項目６５から７１のいずれか一項に記載の方法。
（項目７３）
前記誘導化学療法が、３日間の期間にわたる前記患者へのシタラビンおよびドキソルビシンの投与、その後の２日間の期間にわたる前記患者へのシタラビン単独の投与を含む、項目６５から７１のいずれか一項に記載の方法。
（項目７４）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、前記被験体に前記誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日にわたって前記被験体に投与される、項目６５から７３のいずれか一項に記載の方法。
（項目７５）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、前記ギャップジャンクションブロッカーと同時に前記被験体に前記誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日にわたって前記被験体に投与される、項目６５から７４のいずれか一項に記載の方法。
（項目７６）
急性骨髄性白血病の末期状態に罹患しているかまたはそれを示している被験体を選択することをさらに含む、項目６５から７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７７）
前記被験体が、進行した腫瘍転移を有する、項目７６に記載の方法。
（項目７８）
前記被験体が、高い全身腫瘍量を有する、項目７６または７７に記載の方法。
（項目７９）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、前記ギャップジャンクションブロッカーを受けていない前記被験体の生存の長さと比較して、前記被験体の生存の長さを増大させる、項目６５から７８のいずれか一項に記載の方法。
（項目８０）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、前記ギャップジャンクションブロッカーを受けていない前記被験体の生存の可能性と比較して、前記被験体の生存の可能性を増大させる、項目６５から７９のいずれか一項に記載の方法。
（項目８１）
被験体中の白血病細胞を選択的に根絶することによって再発したかまたは難治性の急性骨髄性白血病を有する前記被験体における完全な寛解を誘導する方法であって、（ａ）前記被験体を評価して、前記被験体が再発したかまたは難治性の急性骨髄性白血病を有するか否かを決定することと、（ｂ）前記被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与する少なくとも１日前にギャップジャンクションブロッカーを前記被験体に投与することと、（ｃ）指定の時間にわたって代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を含む誘導化学療法処置レジメンを前記被験体に投与し、それにより前記被験体中の白血病細胞を選択的に根絶することによって前記被験体における完全な寛解を誘導することとを含む、方法。
（項目８２）
有効量のギャップジャンクションブロッカー、急性骨髄性白血病が耐性を示す有効量の少なくとも１種の化学療法剤、および薬学的に許容され得る担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物。
（項目８３）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、代謝拮抗剤を含む、項目８２に記載の医薬組成物。
（項目８４）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、シタラビンを含む、項目８２に記載の医薬組成物。
（項目８５）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、アントラサイクリン系薬剤を含む、項目８２に記載の医薬組成物。
（項目８６）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、ドキソルビシンを含む、項目８２に記載の医薬組成物。
（項目８７）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を含む、項目８２に記載の医薬組成物。
（項目８８）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、シタラビンおよびドキソルビシンを含む、項目８２に記載の医薬組成物。
（項目８９）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、カルベノキソロンまたはその類似体を含む、項目８２から８８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９０）
ギャップジャンクションブロッカー、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤、ならびに急性骨髄性白血病に罹患している被験体に前記ギャップジャンクションブロッカーおよび前記少なくとも１種の化学療法剤を投与するための指示書を含むキット。
（項目９１）
前記指示書が、前記被験体のための誘導化学療法処置レジメンの一部として前記少なくとも１種の化学療法剤を投与するための指示をさらに含む、項目９０に記載のキット。
（項目９２）
前記指示書が、前記被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するために、前記ギャップジャンクションブロッカー、および前記少なくとも１種の治療剤を投与するための指示をさらに含む、項目９０または９１に記載のキット。
（項目９３）
前記指示書が、前記被験体中の白血病細胞を完全に根絶することによって再発のリスクを伴うことなく、前記被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するために、前記ギャップジャンクションブロッカー、および前記少なくとも１種の治療剤を投与するための指示をさらに含む、項目９０から９２のいずれか一項に記載のキット。
（項目９４）
前記指示書が、増殖性不死化白血病細胞から短命の非白血病細胞に分化するように前記白血病細胞を誘導することにより、前記被験体中の白血病細胞を完全に根絶することによって、前記被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するために前記ギャップジャンクションブロッカー、および前記少なくとも１種の治療剤を投与するための指示をさらに含む、項目９０から９３のいずれか一項に記載のキット。
（項目９５）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、代謝拮抗剤を含む、項目９０から９４のいずれか一項に記載のキット。
（項目９６）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、シタラビンを含む、項目９０から９５のいずれか一項に記載のキット。
（項目９７）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、アントラサイクリン系薬剤を含む、項目９０から９４のいずれか一項に記載のキット。
（項目９８）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、ドキソルビシンを含む、項目９０から９４および９７のいずれか一項に記載のキット。
（項目９９）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を含む、項目９０から９４のいずれか一項に記載のキット。
（項目１００）
急性骨髄性白血病が耐性を示す前記少なくとも１種の化学療法剤が、シタラビンを含み、前記アントラサイクリン系薬剤が、ドキソルビシンを含む、項目９０から９４および９９のいずれか一項に記載のキット。
（項目１０１）
前記ギャップジャンクションブロッカーが、カルベノキソロンまたはその類似体を含む、項目９０から１００のいずれか一項に記載のキット。

特許ファイルまたは出願ファイルは、カラーで制作された少なくとも１つの図面を含有する。カラー図面を含む本特許または特許出願刊行物のコピーは、請求し、必要な料金を支払うと庁によって提供される。

図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、および１Ｄは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のマウスモデルにおいて投与した５日の誘導化学療法レジメンの動的試験の結果を実証する。図１Ａは、ＡＭＬのマウスモデルのための実験設計を示す略図である。図１Ｂは、骨におけるルシフェラーゼ活性を示す１４日目におけるマウスのＩＶＩＳイメージングの例である。図１Ｃおよび１Ｄは、血液（図１Ｃ）および骨髄（ＢＭ）（図１Ｄ）の試料からのＧＦＰ陽性ＭＬＬ−ＡＦ９細胞のＦＡＣＳ分析の結果を示す棒グラフである。

図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、および２Ｄは、ギャップジャンクション活性が白血病細胞薬物耐性の維持において重要な役割を果たすことを実証する。１００，０００のＭＬＬ−ＡＦ９細胞を、化学療法（５０ｎＭ シタラビン＋２０ｎＭ ドキソルビシン）とともに、またはそれを伴わないで、かつサブコンフルエントなＭＳ−５層とともに、またはそれを伴わないで１６時間インキュベートした（図２Ａ）。トランスウェルインサート（０．４μｍ）とともに、またはそれを伴わないでサブコンフルエントなＭＳ−５層とともに共培養した１００，０００のＭＬＬ−ＡＦ９細胞を、化学療法（５０ｎＭ シタラビン＋２０ｎＭ ドキソルビシン）とともに、またはそれを伴わないで、かつ１００μＭ ＣＢＸとともに、またはそれを伴わないで１６時間インキュベートした（図２Ｂおよび２Ｃ）。細胞生存能を、ＦＡＣＳ分析において、７ＡＡＤ陰性細胞の％によって決定した（^＊ｐ＜０．０１）。図２Ｄは、示した処置をして１週間後の全身生物発光イメージング（ＩＶＩＳ）を示す。白色の矢印は、最小限の残留するＡＭＬ細胞を示す。

図３Ａおよび３Ｂは、ＭＬＬ−ＡＦ９白血病を移植したマウス（ヒト白血病の確立されたマウスモデル）への単独の、または化学療法と組み合わせたカルベノキソロンのｉｎ ｖｉｖｏ投与が生存の延長をもたらすことを実証する。図３Ａは、骨において白血病細胞を検出した際の未処置で放置したマウス（赤線）、または２７日目に処置を受けたマウス（示したように、緑色、青色、紫色、または黒色の線）の生存曲線を示す。３日間の期間にわたる被験体への化学療法：シタラビン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびドキソルビシン（３ｍｇ／ｋｇ）、その後、２日間の期間にわたる被験体へのシタラビン単独（１００ｍｇ／ｋｇ）の投与。化学療法を伴った、または伴わない３日間または６日間の期間にわたる被験体へのＣＢＸ：カルベノキソロン（２０ｍｇ／ｋｇ）。図３Ｂは、未処置で放置された（赤線）、または６８日目に処置を受けた（青線）末期症状のマウス、白血病細胞が体全体に広がった、全身腫瘍量が高い疾患の末期状態の生存曲線を示す。３日間の期間にわたる被験体へのＣＢＸ：カルベノキソロン（１０ｍｇ／ｋｇ）、その後、処置を伴わない３日、その後、被験体への２日のカルベノキソロン（２０ｍｇ／ｋｇ）、その後、処置を伴わない３日、その後、被験体への３日のカルベノキソロン（３０ｍｇ／ｋｇ）。

図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、および４Ｄは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのギャップジャンクション遮断による異なるＡＭＬ細胞型の選択的な根絶を実証する。カルベノキソロン（ＣＢＸ）を、示した濃度で、１６時間にわたって１００，０００のＭＬＬ−ＡＦ９、初代骨髄白血球または初代末梢血白血球に添加した（図４Ａ）。１００，０００のＭＬＬ−ＡＦ９（クローンＡ）細胞（図４Ｂ）、１００，０００のＭＬＬ−ＡＦ９（クローンＢ）細胞（図４Ｃ）、または１００，０００のＨｏｘＡ９／Ｍｅｉｓ１細胞（図４Ｄ）を１００，０００の初代ＢＭ白血球と混合し、１６時間にわたって示したようにＣＢＸに曝露した。細胞をＣｄ４５．１／ＣＤ４５．２発現によって区別し、細胞生存能をＦＡＣＳ分析において、７ＡＡＤ陰性細胞の％によって決定した（^＊ｐ＜０．０１）。

図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、および５Ｄは、カルベノキソロンが、非白血病正常対応物（赤色のバー）に影響を与えることなく異なるマウスＡＭＬ細胞（青色のバー）を選択的に根絶することを実証する。図５Ａは、新たに単離した初代血液白血球と１：１で混合し、１６時間にわたって示したようにカルベノキソロンに曝露したＭＬＬ−ＡＦ９（クローンＡ）細胞の結果を示す棒グラフである。ＭＬＬ−ＡＦ９（クローンＡ）細胞（図５Ｂ）、ＭＬＬ−ＡＦ９（クローンＢ）細胞（図５Ｃ）、およびＨｏｘＡ９／Ｍｅｉｓ１細胞（図５Ｄ）を、新たに単離した骨髄白血球と１：１の比で混合し、１６時間にわたって示したようにカルベノキソロンに曝露した。細胞をＣＤ４５．１／ＣＤ４５．２発現によって区別し、細胞生存能をＦＡＣＳ分析において、７ＡＡＤ陰性細胞の％によって決定した（^＊ｐ＜０．０１）。

図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、および６Ｆは、カルベノキソロン処置が、正常な幹細胞の増殖を誘導しながらマウス白血球がん幹細胞を根絶することを実証する。コロニー形成アッセイを、示したように漸増濃度のカルベノキソロンに曝露したＭＬＬ−ＡＦ９細胞（図６Ａ）、骨髄初代白血球（図６Ｂ）、ならびにＭＬＬ−ＡＦ９細胞および骨髄初代白血球の両方の１：１の混合物（図６Ｃ）に対して実施し、１０，０００細胞当たりの培養液ＣＦＵ−Ｃ中のコロニー形成単位を各濃度で決定した。図６Ｄ、６Ｅ、および６Ｆは、０μΜ（図６Ｄ）、５０μΜ（図６Ｅ）、および２００μΜまたは１００μΜ（図６Ｆ）のカルベノキソロンに曝露した際の白血病コロニー（緑色）および正常コロニー（青色）の形成を示す画像である。

図７Ａ、７Ｂ、および７Ｃは、ギャップジャンクション遮断が、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＡＭＬ細胞の短命の顆粒球への分化を促進することを実証する。初代ＭＬＬ−ＡＦ９細胞を、１６時間にわたって示したように漸増濃度のカルベノキソロンに曝露し、次いでＧｒ１（図７Ａ）、Ｍａｃ１（図７Ｂ）、またはＧｒ１／Ｍａｃ１（図７Ｃ）の発現についてＦＡＣＳ分析によって分析した。細胞生存能をＦＡＣＳ分析において、７ＡＡＤ陰性細胞の％によって決定した（^＊ｐ＜０．０１）。

図８Ａ、８Ｂ、８Ｃ、８Ｄ、８Ｅ、８Ｆ、８Ｇ、８Ｈ、８Ｉ、８Ｊ、８Ｋ、および８Ｌは、カルベノキソロンが、ヒトＡＭＬ細胞株Ｕ９３７内で急速な（１６時間以内）好中球分化（ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４−）を誘導することを実証する。ヒトＡＭＬ Ｕ９３７細胞を、１６時間にわたって示したように漸増濃度のカルベノキソロンに曝露し、次いで生細胞（図８Ａ）、ＣＤ１４＋（図８Ｂ）、ＣＤ６６ｂ＋（図８Ｃ）、Ｍａｃ１＋（図８Ｄ）、ＣＤ６６ｂ＋／Ｍａｃ１−（図８Ｅ）、ＣＤ６６ｂ＋／Ｍａｃ１＋（図８Ｆ）、ＣＤ６６ｂ−／Ｍａｃ１＋（図８Ｇ）、ＣＤ６６ｂ−／Ｍａｃ１−（図８Ｈ）、ＣＤ６６＋／ＣＤ１４−（図８Ｉ）、ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４＋（図８Ｊ）、ＣＤ６６ｂ−／ＣＤ１４＋（図８Ｋ）、およびＣＤ６６ｂ−／ＣＤ１４−（図８Ｌ）の発現についてＦＡＣＳ分析によって分析した。細胞生存能をＦＡＣＳ分析において、７ＡＡＤ陰性細胞の％によって決定した（^＊ｐ＜０．０１）。

図９Ａ、９Ｂ、９Ｃ、９Ｄ、９Ｅ、９Ｆ、９Ｇ、９Ｈ、９Ｉ、９Ｊ、９Ｋ、および９Ｌは、カルベノキソロンが、ヒトＡＭＬ細胞株ＨＬ６０内で急速な（１６時間以内）好中球分化（ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４−）を誘導することを実証する。ヒトＡＭＬ ＨＬ６０細胞を、１６時間にわたって示したように漸増濃度のカルベノキソロンに曝露し、次いで生細胞（図９Ａ）、ＣＤ１４＋（図９Ｂ）、ＣＤ６６ｂ＋（図９Ｃ）、Ｍａｃ１＋（図９Ｄ）、ＣＤ６６ｂ＋／Ｍａｃ１−（図９Ｅ）、ＣＤ６６ｂ＋／Ｍａｃ１＋（図９Ｆ）、ＣＤ６６ｂ−／Ｍａｃ１＋（図９Ｇ）、ＣＤ６６ｂ−／Ｍａｃ１−（図９Ｈ）、ＣＤ６６＋／ＣＤ１４−（図９Ｉ）、ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４＋（図９Ｊ）、ＣＤ６６ｂ−／ＣＤ１４＋（図９Ｋ）、およびＣＤ６６ｂ−／ＣＤ１４−（図９Ｌ）の発現についてＦＡＣＳ分析によって分析した。細胞生存能をＦＡＣＳ分析において、７ＡＡＤ陰性細胞の％によって決定した（^＊ｐ＜０．０１）。

図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、１０Ｄ、１０Ｅ、１０Ｆ、１０Ｇ、１０Ｈ、１０Ｉ、１０Ｊ、１０Ｋ、および１０Ｌは、カルベノキソロンが、新たに単離された初代ヒト白血球内で好中球分化（ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４−）を誘導しないことを実証する。初代ヒト白血球を新たに単離し、１６時間にわたって示したように漸増濃度のカルベノキソロンに曝露し、次いで生細胞（図１０Ａ）、ＣＤ１４＋（図１０Ｂ）、ＣＤ６６ｂ＋（図１０Ｃ）、Ｍａｃ１＋（図１０Ｄ）、ＣＤ６６ｂ＋／Ｍａｃ１−（図１０Ｅ）、ＣＤ６６ｂ＋／Ｍａｃ１＋（図１０Ｆ）、ＣＤ６６ｂ−／Ｍａｃ１＋（図１０Ｇ）、ＣＤ６６ｂ−／Ｍａｃ１−（図１０Ｈ）、ＣＤ６６＋／ＣＤ１４−（図１０Ｉ）、ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４＋（図１０Ｊ）、ＣＤ６６ｂ−／ＣＤ１４＋（図１０Ｋ）、およびＣＤ６６ｂ−／ＣＤ１４−（図１０Ｌ）の発現についてＦＡＣＳ分析によって分析した。細胞生存能をＦＡＣＳ分析において、７ＡＡＤ陰性細胞の％によって決定した（^＊ｐ＜０．０１）。

図１１Ａ、１１Ｂ、１１Ｃ、および１１Ｄは、カルベノキソロン処置が、正常なヒト幹および前駆細胞（１１Ｄ）の増殖を誘導しながらヒト白血球がん幹および前駆細胞（１１Ａ〜１１Ｃ）を根絶することを示す。コロニー形成アッセイを、示したように漸増濃度のカルベノキソロンに曝露したＴＨＰ１細胞（図１１Ａ）、ＨＬ６０（図１１Ｂ）、Ｕ９３７（図１１Ｃ）、および新たに単離した初代非白血病正常ヒト白血球（図１１Ｄ）に対して実施し、２，０００細胞当たりの培養液ＣＦＵ−Ｃ中のコロニー形成単位を各濃度で決定した。

図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ａは、悪性のおよび正常な血液中の１１βＨＳＤ発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｂは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ４０．１発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｃは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ３０．２発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｄは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ３１．１発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｅは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ３６発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｆは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ４５発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｇは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ４７発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｈは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ３２発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｉは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ５０発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｊは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ３０．３発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｋは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ３１発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｌは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ２６発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｍは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ４０発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｎは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ３７発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｏは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ４６発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｐは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ４３発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、１２Ｉ、１２Ｊ、１２Ｋ、１２Ｌ、１２Ｍ、１２Ｎ、１２Ｏ、１２Ｐ、および１２Ｑは、１１βＨＳＤ、およびコネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーがヒトＡＭＬ中で過剰発現されることを実証する公開されたアレイからの遺伝子発現プロファイルである。図１２Ｑは、悪性のおよび正常な血液中のＣｘ３０発現を示す発現プロファイルである。図１２Ａ〜１２Ｑに表した発現プロファイルのそれぞれにおける各ドットは、異なる独立した試験を表示する。

図１３は、生体内顕微鏡観察、疾患進行の監視、処置の同期化、再発の監視、異なる発癌遺伝子の有効な比較、ウイルスの使用の最少化、ｉｎ ｖｉｔｒｏライブビデオ顕微鏡観察、およびｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニングを可能にする、誘導化学療法中の白血病細胞の相互作用およびコミュニケーションのリアルタイム分析のための実験設計を実証する。

図１４Ａ、１４Ｂ、および１４Ｃは、ＣＢＸが間質媒介薬物耐性を克服することを実証する。化学療法として２５ｎＭシタラビンおよび１０ｎＭドキソルビシンを使用して得た結果。アスタリスクは、１６時間のインキュベーション後に得た結果を示す。生存能を、ＧＦＰ発現および７ＡＡＤ排除を介して検出した。トランスウェルインサート分離を用いて実現した図１４Ｃ中の結果。

図１５は、ＣＢＸ（１００μΜ超またはそれに等しい）へのｉｎ ｖｉｔｒｏ曝露が、ＭＬＬ−ＡＦ９白血病を根絶するが、正常な血液細胞を根絶しないことを実証する。ＧＦＰ発現および７ＡＡＤ排除による生存能検出で示されたＣＢＸの量を用いた１６時間のインキュベーション後のフローサイトメトリー生存能アッセイを介して得た結果。

図１６Ａ、１６Ｂ、１６Ｃ、および１６Ｄは、ＣＢＸが、１：１の細胞混合物中で非白血病正常対応物（赤色のバー）に影響を与えることなく、異なるマウスＡＭＬ細胞（青色のバー）を選択的に根絶することを実証する。図１６Ａは、新たに単離した血液白血球と１：１で混合したＭＬＬ−ＡＦ９（バルクＡ）細胞の示した濃度でのＣＢＸ処置の結果を示す。図１６Ｂは、新たに単離した骨髄白血球と１：１で混合したＭＬＬ−ＡＦ９（バルクＡ）細胞の示した濃度でのＣＢＸ処置の結果を示す。図１６Ｃは、新たに単離した骨髄白血球と１：１で混合したＭＬＬ−ＡＦ９（バルクＢ）細胞の示した濃度でのＣＢＸ処置の結果を示す。図１６Ｄは、新たに単離した骨髄白血球と１：１で混合したＨｏｘＡ９／Ｍｅｉｓ１細胞の示した濃度でのＣＢＸ処置の結果を示す。

図１７Ａ、１７Ｂ、１７Ｃ、および１７Ｄは、悪性対正常未成熟幹および前駆細胞に対するＣＢＸ（５０μＭ超またはそれに等しい）の差動効果を実証する（ＣＦＵ−Ｃアッセイ）。図１７Ａは、ＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞単独に対する示した濃度でのＣＢＸ処置の結果を示す棒グラフである。図１７Ｂは、正常骨髄初代白血球単独に対する示した濃度でのＣＢＸ処置の結果を示す棒グラフである。図１７Ｃは、ＭＬＬ−ＡＦ９細胞および正常骨髄初代白血球の１：１の混合物に対する示した濃度でのＣＢＸ処置の結果を示す棒グラフである。図１７Ｄは、図１７Ｃに記載した細胞混合物に対するＣＢＸ処置の結果の画像を示す。

図１８Ａ、１８Ｂ、１８Ｃ、および１８Ｄは、ヒトＡＰＬ細胞株ＨＬ６０が、ＣＢＸに感受性であることを実証する。図１８Ａは、フローサイトメトリーによって評価した場合の、示した濃度のＣＢＸに曝露して１６時間後のＨＬ６０細胞の生存能を示す棒グラフである。図１８Ｂは、フローサイトメトリーによって評価した場合の、示した濃度のＣＢＸに曝露して１６時間後の新たに単離したヒト末梢血白血球の生存能を示す棒グラフである。図１８Ｃは、がんおよび正常幹および前駆細胞の機能的定量化のためのＣＦＵ−Ｃアッセイによって評価した場合の、示した濃度のＣＢＸに曝露して７日後のＨＬ６０細胞のコロニー形成を示す棒グラフである。図１８Ｄは、がんおよび正常幹および前駆細胞の機能的定量化のためのＣＦＵ−Ｃアッセイによって評価した場合の、示した濃度のＣＢＸに曝露して７日後の新たに単離したヒト末梢血白血球のコロニー形成を示す棒グラフである。

図１９Ａ、１９Ｂ、１９Ｃ、および１９Ｄは、ＣＢＸ処置（１００μΜ）が、ヒト白血病前駆細胞を根絶するが、正常前駆細胞の増殖を誘導することを実証する。図１９Ａは、ＣＦＵ−Ｃアッセイによって評価した場合の、示した濃度のＣＢＸで処置したＴＨＰ１細胞の増殖を示す棒グラフである。図１９Ｂは、ＣＦＵ−Ｃアッセイによって評価した場合の、示した濃度のＣＢＸで処置したＨＬ６０細胞の増殖を示す棒グラフである。図１９Ｃは、ＣＦＵ−Ｃアッセイによって評価した場合の、示した濃度のＣＢＸで処置したＵ９３７細胞の増殖を示す棒グラフである。図１９Ｄは、ＣＦＵ−Ｃアッセイによって評価した場合の、示した濃度のＣＢＸで処置した初代ヒト前駆細胞の増殖を示す棒グラフである。

図２０Ａ、２０Ｂ、および２０Ｃは、ＣＢＸが、ＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞のアポトーシスを急速に誘導することを実証する。青色のバーおよび赤色のバーは、６時間（図２０Ａ）、１２時間（図２０Ｂ）、および２０時間（図２０Ｃ）についての、対照と比較した、示した濃度のＣＢＸで処置した後のＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞の生存能（７ＡＡＤ陰性細胞の頻度によって評価した）およびアポトーシス（７ＡＡＤ陰性、アネキシン−Ｖ陽性細胞の頻度によって評価した）を示す。

図２１は、ＣＢＸ処置が、白血病細胞のアポトーシスを誘導し、正常健康細胞の補充を増強することを実証する。ＦＡＣＳドットプロットは、正常骨髄単核細胞（ＢＭ−ＭＮＣ）とのｉＲＦＰ＋ ＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞の１：１の混合物に対する４時間後の対照（ＰＢＳ）と比較したＣＢＸ処置の結果を示す。

図２２は、ＣＢＸ処置が、白血病細胞のアポトーシスを誘導し、正常健康細胞の補充を増強することを実証する。青色のバーおよび赤色のバーは、ＰＢＳ対照と比較した、示した濃度のＣＢＸで処置した後の、それぞれ、アポトーシス性単核細胞（ＭＮＣ）およびアポトーシス性白血病細胞を示す。

図２３は、ＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞が、Ｍａｃ１、Ｇｒ１、およびｃＫｉｔについて二重陽性であることを実証する。ＦＡＣＳドットプロットは、正常筋原細胞が比較のための最も適切な対応物であることを示す。

図２４は、正常骨髄芽球とのｉＲＦＰ＋ＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞の１：１の混合物に対する、４時間後の対照（ＰＢＳ）と比較したＣＢＸ処置の結果を示すＦＡＣＴＳドットプロットを示す。

図２５は、ＣＢＸ誘導白血病アポトーシスが、細胞周期依存性でないことを実証する。図２５は、高度に増殖する正常骨髄芽球（myeoblast）（黒色のバー）または拡張系統−／ｃＫｉｔ＋／Ｓｃａ１＋（ＬＫＳ）細胞（黒色のバー）とのｉＲＦＰ＋ＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞（青色のバー）の１：１混合物に対する４時間のＣＢＸ処置の結果を示す棒グラフである。使用した細胞集団の増殖の速度は、以下の通りである：ＭＬＬ−ＡＦ９：３分裂／２４時間；骨髄芽球：３分裂／２４時間、ｅＬＫＳ：７分裂／２４時間。

図２６Ａ、２６Ｂ、２６Ｃ、および２６Ｄ。図２６Ａおよび２６Ｂは、２００μΜのＣＢＸまたはアルドステロンで４時間処置した後のＭＬＬ−ＡＦ９ ｉＲＦＰ＋白血病および正常骨髄芽球細胞の１：１の混合物の生存能（７ＡＡＤ陰性、ｉＲＦＰ＋／−；図２６Ａ）およびアポトーシス（７ＡＡＤ陰性、ｉＲＦＰ＋、アネキシン−Ｖ陽性；図２６Ｂ）を示す棒グラフである。図２６Ｃおよび２６Ｄは、２００μΜのＣＢＸまたはアルドステロンで２４時間処置した後のＭＬＬ−ＡＦ９ ｉＲＦＰ＋白血病および正常骨髄芽球細胞の１：１の混合物の生存能（７ＡＡＤ陰性、ｉＲＦＰ＋／−；図２６Ｃ）およびアポトーシス（７ＡＡＤ陰性、ｉＲＦＰ＋、アネキシン−Ｖ陽性；図２６Ｄ）を示す棒グラフである。

図２７Ａ、２７Ｂ、２７Ｃ、および２７Ｄ。図２７Ａおよび２７Ｂは、２００μΜのＣＢＸまたはアルドステロンで４時間処置した後のＭＬＬ−ＡＦ９ ＧＦＰ＋白血病および正常骨髄芽球細胞の１：１の混合物の生存能（７ＡＡＤ陰性、ＧＦＰ＋／−；図２７Ａ）およびアポトーシス（７ＡＡＤ陰性、ＧＦＰ＋／、アネキシン−Ｖ陽性；図２７Ｂ）を示す棒グラフである。図２７Ｃおよび２７Ｄは、２００μΜのＣＢＸまたはアルドステロンで２４時間処置した後のＭＬＬ−ＡＦ９ ＧＦＰ＋白血病および正常骨髄芽球細胞の１：１の混合物の生存能（７ＡＡＤ陰性、ＧＦＰ＋／−；図２６Ｃ）およびアポトーシス（７ＡＡＤ陰性、ＧＦＰ＋／、アネキシン−Ｖ陽性；図２７Ｄ）を示す棒グラフである。

図２８Ａ〜Ｍは、ＣＢＸ（図２８Ｎ）と同様の構造および／または同様の全身性の「ステロイド様」効果を有する化合物を表す。図２８Ａ、２８Ｂ、２８Ｃ、および２８Ｄは、ミネラルコルチコイドアルドステロン（図２８Ａ）、スピロノラクトン（図２８Ｂ）、フルドロコルチゾン（図２８Ｃ）、およびデオキシコルチコステロン（図２８Ｄ）の構造式である。図２８Ｅ、２８Ｆ、２８Ｇ、２８Ｈ、２８Ｉ、２８Ｊ、２８Ｋ、２８Ｌ、および２８Ｍは、グルココルチコイドジプロピオン酸ベクロメタゾン（図２８Ｅ）、コルチゾール（図２８Ｆ）、コルチゾン（図２８Ｇ）、デキサメタゾン（図２８Ｈ）、ベタメタゾン（図２８Ｉ）、プレドニゾロン（図２８Ｊ）、プレドニゾン（図２８Ｋ）、メチルプレドニゾロン（図２８Ｌ）、およびトリアムシノロンアセトニド（図２８Ｍ）の構造式である。

図２９Ａおよび２９Ｂ。図２９Ａは、２００μＭのＣＢＸまたは示したミネラルコルチコイド化合物で２４時間処置した後のＭＬＬ−ＡＦ９ ｉＲＦＰ＋白血病および正常骨髄芽球細胞の１：１の混合物の生存能（７ＡＡＤ陰性、ｉＲＦＰ＋／−）を示す棒グラフである。図２９Ｂは、図２８Ａ〜２８Ｎに示した化合物の比較によるステロイド効力を示す表である。

図３０Ａおよび３０Ｂ。図３０Ａは、２００μＭのＣＢＸまたは示したグルココルチコイド化合物で２４時間処置した後のＭＬＬ−ＡＦ９ ｉＲＦＰ＋白血病および正常骨髄芽球細胞の１：１の混合物の生存能（７ＡＡＤ陰性、ｉＲＦＰ＋／−）を示す棒グラフである。図３０Ｂは、図２８Ａ〜２８Ｎに示した化合物の比較によるステロイド効力を示す表である。

図３１Ａおよび３１Ｂ。図３１Ａは、２００μＭのＣＢＸまたは示したグルココルチコイド（glucoocorticoid）化合物で２４時間処置した後のＭＬＬ−ＡＦ９ ｉＲＦＰ＋白血病および正常骨髄芽球細胞の１：１の混合物の生存能（７ＡＡＤ陰性、ｉＲＦＰ＋／−）を示す棒グラフである。図３１Ｂは、図２８Ａ〜２８Ｎに示した化合物の比較によるステロイド効力を示す表である。

図３２は、Ｍａｃ１（ＣＤ１１ｂ、インテグリンα_ｍ）が、アポトーシスを起こしているＣＢＸ処置マウス白血病細胞（７ＡＡＤ陰性ＭＬＬ−ＡＦ９細胞）内で下方制御されることを実証する。

図３３は、ヒト骨髄マーカーがマウスと異なることを実証する表である。Ｍａｃ１は、好中球、ＮＫ細胞、およびマクロファージによって発現される。ＣＤ６６ｂは、顆粒球上でもっぱら発現され、顆粒球マーカーとして使用される。ＣＤ１４は、主にマクロファージによって（かつ好中球によって１０分の１少ない程度に）発現される。ＣＤ６６ｂ＋、ＣＤ１４＋は、単球のみをマークする。図３３に示したように、ＣＤ１４は、マウスにおけるＭａｃ−１と等価なヒトであり、ＣＤ６６ｂは、マウスにおけるＧｒ−１と等価なヒトである。

図３４Ａ、３４Ｂ、３４Ｃ、および３４Ｄは、Ｍａｃ１が、１６時間にわたって示した濃度のＣＢＸとともにインキュベートされた生きた７ＡＡＤヒト細胞のフローサイトメトリー分析によって決定した場合、ＣＢＸ処置ヒト白血病内で下方制御されるが、ＣＢＸ処置正常ヒト血液細胞内で下方制御されないことを実証する。図３４Ａ〜３４Ｄは、ＣＢＸ処置ヒト白血病細胞株Ｕ９３７、ＨＬ６０、およびＴＨＰ１と比較してＣＢＸ処置初代正常ヒト白血球内の骨髄マーカーＣＤ１１ｂ（図３４Ａ）、ＣＤ１４＋（図３４Ｂ）、ＣＤ６６ｂ＋（図３４Ｃ）、およびＣＤ６６＋／ＣＤ１４＋（図３４Ｄ）を定量化する棒グラフである。

図３５は、骨髄白血病細胞およびこれらの正常対応物中のギャップジャンクション分子のｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子発現試験の結果を実証する表である。評価した骨髄白血病細胞は、ＭＬＬ−ＡＦ９＋、ＧＦＰ陽性、Ｇｒ１／Ｍａｃ１−陽性、ｃ−Ｋｉｔ高細胞を含む。評価した骨髄の正常骨髄前駆細胞は、Ｂ２２０／ＣＤ８ａ／ＣＤ３ｅ／ＣＤ４／ＴＥＲ１１９−陰性、ＧＦＰ−陰性、ＧＲ１／Ｍａｃ−１陽性、ｃ−Ｋｉｔ高細胞を含む。

図３６は、指定した時間にわたって示した処置および対照を使用した後の白血病と比較した正常ＧＭＰ内のＨＰＲＴの発現と比べたコネキシン選別タンパク質コンソルチン（Consortin）の発現を例示する棒グラフである。

図３７Ａ、３７Ｂ、３７Ｃ、３７Ｄ、３７Ｅ、３７Ｆ、３７Ｇ、３７Ｈ、および３７Ｉは、ギャップジャンクションアルファ分子Ａ１（図３７Ａ）、Ａ３ Ｖ１（図３７Ｂ）、Ａ３ Ｖ２（図３７Ｃ）、Ａ４（図３７Ｄ）、Ａ５ Ｖ１（図３７Ｅ）、Ａ５ Ｖ２（図３７Ｆ）、Ａ６（図３７Ｇ）、Ａ８（図３７Ｈ）、およびＡ１０（図３７Ｉ）を含めた、指定した時間にわたって示した処置および対照を使用した後の白血病と比較した正常ＧＭＰ内のＨＰＲＴの発現と比べたギャップジャンクションアルファ分子の発現を例示する棒グラフである。

図３８Ａ、３８Ｂ、３８Ｃ、３８Ｄ、３８Ｅ、３８Ｆ、および３８Ｇは、ギャップジャンクションベータ分子Ｂ１（図３８Ａ）、Ｂ２（図３８Ｂ）、Ｂ３（図３８Ｃ）、Ｂ４（図３８Ｄ）、Ｂ５（図３８Ｅ）、Ｂ６ Ｖ３（図３８Ｆ）、およびＢ６ Ｖ２（図３８Ｇ）を含めた、指定した時間にわたって示した処置および対照を使用した後の白血病と比較した正常ＧＭＰ内のＨＰＲＴの発現と比べたギャップジャンクションベータ分子の発現を例示する棒グラフである。

図３９Ａ、３９Ｂ、および３９Ｃは、ギャップジャンクションガンマ分子Ｃ１（図３９Ａ）、Ｃ２（図３９Ｂ）、およびＣ３（図３９Ｃ）を含めた、指定した時間にわたって示した処置および対照を使用して白血病と比較した正常ＧＭＰ内のＨＰＲＴの発現と比べたギャップジャンクションガンマ分子の発現を例示する棒グラフである。

図４０Ａ、４０Ｂ、および４０Ｃは、ギャップジャンクションデルタ分子Ｄ２（図４０Ａ）、Ｄ３（図４０Ｂ）、およびＤ４（図４０Ｃ）を含めた、指定した時間にわたって示した処置および対照を使用して白血病と比較した正常ＧＭＰ内のＨＰＲＴの発現と比べたギャップジャンクションデルタ分子の発現を例示する棒グラフである。

図４１は、指定した時間にわたって示した処置および対照を使用した後の白血病と比較した正常ＧＭＰ内のＨＰＲＴの発現と比べたギャップジャンクションイプシロン分子の発現を例示する棒グラフである。

図４２は、ＭＬＬ−ＡＦ９白血病マウスへのＣＢＸの腹腔内（ＩＰ）投与が、生存の延長をもたらすことを実証する。非照射レシピエント内に１００万の生きたＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞（ＧＦＰおよびルシフェラーゼを発現している）を静脈内注射することによって、白血病をマウス内で誘導した。モデルでは、白血病細胞を、移植して約２７日後に骨髄内で検出することができ、非処置マウスは、約７０日目に白血病に屈した。骨髄内に白血病を検出した際の２７日目に開始して６日、５０ｍｇ／ｋｇでマウスにＣＢＸを腹腔内投与した。図４２は、処置していない（左）、化学療法で処置した（中央）、およびＣＢＸと化学療法で処置した（右）マウスの３６日目の全身生物発光シグナル（ＩＶＩＳ）を示す。

図４３Ａおよび４３Ｂは、ＭＬＬ−ＡＦ９白血病マウスへのＣＢＸの腹腔内（ＩＰ）投与が、生存の延長をもたらすことを実証する。図４３Ａに表した実験結果について、処置を、骨中に白血病細胞を検出した際の２７日目に与え、化学療法は、３日にわたるシタラビン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびドキソルビシン（３ｍｇ／ｋｇ）、その後の追加の２日にわたるシタラビン単独（１００ｍｇ／ｋｇ）の投与を含み、ＣＢＸを６日間被験体に２０ｍｇ／ｋｇで投与した。図４３Ｂに表した実験結果について、処置を、白血病細胞が体全体にわたって広がった疾患の末期状態における６８日目に与え、ＣＢＸを、３日間１０ｍｇ／ｋｇで投与し、その後３日間処置をせず、その後２日間２０ｍｇ／ｋｇで投与し、その後３日間処置をせず、その後３日間３０ｍｇ／ｋｇで投与した。

図４４は、２週間にわたるＣＢＸの毎日の皮下（ＳＣ）投与（単独で７５ｍｇ／ｋｇで、または化学療法と組み合わせて５０ｍｇ／ｋｇで）が、白血病マウスの生存の延長をもたらすことを実証する。亜致死的に照射されたレシピエント内に５００万の生きたＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞（赤外（infrafred）蛍光タンパク質（ｉＲＦＰ）を発現している）を静脈内注射することによって、白血病をマウス内で誘導した。モデルでは、白血病細胞を、移植して約７日後に骨髄内で検出することができ、非処置マウスは、約３４日目に白血病に屈した。以下の処置レジメン（treatment regiment）を使用した：−１日目：亜致死性の照射（４．５Ｇｙ）；１日目：５Ｍの生きたｉＲＦＰ＋ＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞の尾静脈注射；７＋８日目：ＰＢＳまたはＣＢＸ処置（皮下、表した通り；９〜１１日目：ＰＢＳまたはＣＢＸ処置＋化学療法（１００ｍｇ／ｋｇ シタラビン＋３ｍｇ／ｋｇ ドキソルビシン）、１２＋１３日目：ＰＢＳまたはＣＢＸ処置＋化学療法（１００ｍｇ／ｋｇ シタラビン）；１４〜２１日目：ＰＢＳまたはＣＢＸ処置。図４４に示したように、ＣＢＸの長期的な全身曝露（連続的に２週間）は、予防的処置を用いないと、いくつかの場合では急性の致命的な疑似高アルドステロン症（例えば、高血圧および胃の浮腫）をもたらした。

図４５Ａ、４５Ｂ、および４５Ｃは、単独のまたは誘導化学療法と組み合わせた２５ｍｇ／ｋｇ ＣＢＸで処置したマウスの生存曲線を実証する。ＣＢＸ処置マウスの４０〜６０％が生存し、早期の死亡率は、急性の致命的な疑似高アルドステロン症（pseudo-hyperadlosteronism）に起因した。特に、ＰＢＳおよび化学療法対照の両方と比較して、誘導化学療法と組み合わせたＣＢＸで処置したマウスの生存において統計的に有意な差異はなかった。

図４６Ａ、４６Ｂ、および４６Ｃは、単独のまたは誘導化学療法と組み合わせた５０ｍｇ／ｋｇ ＣＢＸで処置したマウスの生存曲線を実証する。５０ｍｇ／ｋｇ ＣＢＸ単独は、早期死亡率をもたらし、統計的に有意な差異はなかった（ＣＢＸ処置マウスの２０％が生存した）。しかし、化学療法と組み合わせると、５０ｍｇ／ｋｇのＣＢＸは、ＰＢＳおよび化学療法対照の両方と比較して生存の有意な増大をもたらした。

図４７Ａ、４７Ｂ、および４７Ｃは、単独のまたは誘導化学療法と組み合わせた７５ｍｇ／ｋｇ ＣＢＸで処置したマウスの生存曲線を実証する。７５ｍｇ／ｋｇ単独は、ＰＢＳ対照と比較して生存の有意な増大をもたらした。しかし、化学療法と組み合わせると、７５ｍｇ／ｋｇは、早期死亡率をもたらし、統計的に有意な差異はなかった（ＣＢＸ処置マウスの２０％が生存した）。

図４８は、図４５Ａ〜Ｃ、図４６Ａ〜Ｃ、および図４７Ａ〜Ｃに記載のすべてのＳＣ長期投与治験の生存曲線およびｐ値を実証する。

図４９Ａおよび４９Ｂは、ＣＢＸの長期投与（ＳＣ、毎日、１４日）が、白血病の徴候のない致命的な疑似高アルドステロン症をもたらし得ることを実証する。図４９Ａは、健康な対照マウスの剖検画像である。図４９Ｂは、胃の浮腫を示した、５０ｍｇ／ｍｌ ＣＢＸ処置後、２８日目に死亡したマウス（図４９Ｂ）の剖検画像である。

図５０Ａ、５０Ｂ、および５０Ｃは、ＣＢＸ処置動物（ＳＣ、１４日間毎日）における早期死亡率は、白血病によってではなく、急性疑似高アルドステロン症によって誘導される可能性が最も高いことを実証する。図５０Ａは、白血病の明らかな徴候を示す、ＰＢＳで処置したマウスの剖検画像である。図５０Ｂは、白血病の徴候を示す、化学療法で処置したマウスの剖検画像である。図５０Ｃは、白血病の徴候を示さない、化学療法と５０ｍｇ／ｋｇ ＣＢＸで処置したマウスの剖検（autoposy）画像である。黒色の矢印は、腫大したリンパ節を示す。赤色の矢印は、脾腫を示す。青色の矢印は、胃の浮腫を示す。

図５１は、白血病の徴候を示す、化学療法で処置した被験体マウスの剖検画像である。黒色の矢印は、腫大したリンパ節を示す。赤色の矢印は、脾腫を示す。青色の矢印は、胃の浮腫を示す。

図５２は、白血病の徴候を示さない、化学療法と５０ｍｇ／ｋｇ ＣＢＸで処置した被験体マウスの剖検画像である。黒色の矢印は、腫大したリンパ節を示す。赤色の矢印は、脾腫を示す。青色の矢印は、胃の浮腫を示す。

発明の詳細な説明
本開示は、ギャップジャンクションブロッカーを、被験体中の正常細胞を根絶することなく、集団または被験体中の白血病細胞を根絶するのに有効に使用することができるという発見に関する。したがって、本開示は、白血病細胞を根絶するための方法、組成物、およびキットにおける、かつ急性骨髄性白血病を処置するための関連した方法、組成物、およびキットにおけるギャップジャンクションブロッカーの使用を企図する。

白血病細胞の根絶

一部の態様では、細胞集団中の白血病細胞を根絶するための方法が本明細書に開示されている。このような方法は、とりわけ、白血病（例えば、急性骨髄性白血病）を処置するのに有用である。一実施形態では、細胞集団中の白血病細胞を根絶する方法は、細胞集団を有効量のギャップジャンクションブロッカーと接触させ、それにより細胞集団中の白血病細胞を根絶することを含む。

白血病細胞は、本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーに曝露し、またはそれと接触させる際の様々な機構によって根絶することができることが認識されると予想される。一部の実施形態では、白血病細胞を根絶することは、白血病細胞の本明細書に記載の非白血病細胞への分化を誘導することを含む。一部の実施形態では、白血病細胞を根絶することは、白血病細胞の顆粒球への分化を誘導することを含む。一部の実施形態では、顆粒球は、好中球を含む。一部の実施形態では、白血病細胞は、白血病細胞（例えば、ヒト）のＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４−好中球への分化を誘導することによって、本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーと接触すると根絶される。

他の実施形態では、白血病細胞を根絶することは、白血病細胞生存を促進する白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることを含む。ある特定の実施形態では、白血病細胞を根絶することは、白血病細胞に薬物耐性を付与する白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることを含む。一部の実施形態では、白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることは、白血病細胞間の同型相互作用を妨害することを含む。一部の実施形態では、白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることは、白血病細胞と間質細胞との異型相互作用を妨害することを含む。ある特定の実施形態では、白血病細胞を根絶することは、間質媒介薬物耐性（例えば、がん処置、例えば、誘導化学療法に対する）を克服することを含む。

一部の場合では、白血病細胞が関与する細胞間コミュニケーションを混乱させることは、白血病細胞を非白血病細胞に分化させ、それにより細胞を根絶する。

一部の実施形態では、白血病細胞は、細胞集団中の正常白血球の増殖を誘導しながら選択的に根絶される。例えば、急性骨髄性白血病細胞の集団を本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーと接触させると、集団中の正常白血球の増殖を誘導しながら、急性骨髄性白血病細胞が選択的に根絶される。

本明細書に記載の組成物および方法は、好ましくは、細胞集団中の正常細胞（例えば、白血球）に影響を与えることなく白血病細胞に選択的に影響することが当業者によって認識されると予想される。一部の実施形態では、白血病細胞は、細胞集団中の正常白血球を根絶することなく、選択的に根絶される。例えば、白血病細胞は、限定することなく、幹および前駆細胞、骨髄単核細胞、骨髄芽球、好中球、ＮＫ細胞、マクロファージ、顆粒球、単球、ならびに系統−／ｃＫｉｔ＋／Ｓｃａ１＋（ＬＫＳ）細胞を含めた正常骨髄白血球または正常末梢血白血球を根絶することなく、選択的に根絶される。一部の実施形態では、細胞集団中の白血病細胞の量または活性は、集団中の正常白血球の量または活性を減少させることなく、選択的に減少する。一部の実施形態では、白血病細胞の増殖は、集団中の正常白血球の増殖を阻害することなく、細胞集団中で選択的に阻害される。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法を使用して、細胞集団中の白血病細胞の数、活性、および／または増殖を選択的に低減することによって、細胞集団中の正常白血球の数を増加させることができる。理論に束縛されることを望むわけではないが、細胞の任意の特定の集団中で根絶、低減、または阻害される白血病細胞の量は、細胞集団が曝露されたギャップジャンクションブロッカーの濃度に比例することが予期される。一部の場合では、細胞集団中の白血病細胞の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．１％、少なくとも９９．２％、少なくとも９９．３％、少なくとも９９．４％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、少なくとも９９．９％、または１００％もの多くが、ギャップジャンクションブロッカーへの曝露、またはそれとの接触によって根絶、低減、または阻害される。一部の実施形態では、細胞集団中の白血病細胞の少なくとも２０％が、根絶、低減、または阻害される。一部の実施形態では、細胞集団中の白血病細胞の少なくとも５０％が、根絶、低減、または阻害される。一部の実施形態では、細胞集団中の白血病細胞の少なくとも７０％が、根絶、低減、または阻害される。一部の実施形態では、細胞集団中の白血病細胞のすべてが、根絶、低減、または阻害される。

本発明は、細胞集団をギャップジャンクションブロッカーと接触させ、または細胞集団をそれに曝露することによって任意の白血病細胞を選択的に根絶することを企図する。一部の実施形態では、白血病細胞は、急性骨髄性白血病細胞株に由来する白血病細胞を含む。例示的な急性骨髄性白血病細胞株の例としては、これらに限定されないが、ＭＬＬ−ＡＦ９細胞、ＭＬＬ−ＥＮＬ細胞、Ｎｕｐ９８−ＨｏｘＡ９細胞、ＡＭＬ１−ＥＴ０９Ａ細胞、ＫＧ−１細胞、ＫＧ−１ａ細胞、Ｕ９３７細胞、ＴＨＰ１細胞、ＨＬ６０細胞、ＨｏｘＡ９／Ｍｅｉｓ１細胞、およびＮＢ−４細胞がある。

細胞集団中の白血病細胞の選択的根絶は、集団中の他の正常細胞を根絶することなく、またはそれに別段に影響を与えることなく、集団中の白血病細胞が根絶されることを意味することが認識されると予想される。一部の実施形態では、細胞集団は、初代白血球、例えば、骨髄白血球および末梢血白血球などを含む。このような初代白血球の例としては、限定することなく、幹および前駆細胞、単核細胞、骨髄芽球、好中球、ＮＫ細胞、マクロファージ、顆粒球、単球、ならびに系統−／ｃＫｉｔ＋／Ｓｃａ１＋（ＬＫＳ）細胞がある。

ギャップジャンクションブロッカーの有効量は、例えば、使用されているギャップジャンクションブロッカー、および使用のその場所に応じて変動し得ることが認識されると予想される。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏで使用するためのギャップジャンクションブロッカーの有効量は、５０μΜ〜４００ｕｍの範囲内の濃度を含む。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏで使用するためのギャップジャンクションブロッカーの有効量は、１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内の濃度を含む。一部の実施形態では、有効量は、２５ｍｇ／ｋｇの濃度を含む。一部の実施形態では、有効量は、５０ｍｇ／ｋｇの濃度を含む。一部の実施形態では、有効量は、７５ｍｇ／ｋｇの濃度を含む。

一部の実施形態では、接触は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで行われる。

一部の実施形態では、接触は、ｉｎ ｖｉｖｏで行われる。一部の実施形態では、ｉｎ
ｖｉｖｏの接触は、本明細書に記載の被験体におけるものである。

白血病細胞の非白血病細胞への分化の促進

本開示は、白血病細胞の非白血病細胞への分化を促進するための方法を提供する。このような方法は、白血病、例えば、急性骨髄性白血病を処置するのに有用であり得る。

一態様では、白血病細胞の非白血病細胞への分化を促進する方法は、白血病細胞を有効量のギャップジャンクションブロッカーと接触させ、それにより白血病細胞の非白血病細胞への分化を促進することを含む。

本開示は、本明細書に記載の方法に従って任意の白血病細胞を非白血病細胞に分化させることを企図する。一部の実施形態では、白血病細胞は、白血病幹細胞または白血病前駆細胞を含む。一部の実施形態では、白血病幹細胞または白血病前駆細胞は、急性骨髄性白血病細胞を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病は、ＭＬＬ−ＡＦ９細胞、ＭＬＬ−ＥＮＬ細胞、Ｎｕｐ９８−ＨｏｘＡ９細胞、ＡＭＬ１−ＥＴ０９Ａ細胞、ＫＧ−１細胞、ＫＧ−１ａ細胞、Ｕ９３７細胞、ＨＬ６０細胞、ＴＨＰ１細胞、ＨｏｘＡ９／Ｍｅｉｓ１細胞、およびＮＢ−４細胞からなる群から選択される細胞株を含む。

分化される白血病細胞は、様々な段階の非白血病細胞に分化し得ることが認識されると予想される。一部の実施形態では、非白血病細胞は、成熟または最終分化した細胞を含む。一部の実施形態では、非白血病細胞は、顆粒球を含む。一部の実施形態では、顆粒球は、短命の顆粒球を含む。一部の実施形態では、非白血病細胞は、好中球を含む。一部の実施形態では、好中球は、ＣＤ６６ｂ＋／ＣＤ１４−好中球を含む。

処置の方法

本開示は、本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質を含む組成物およびキットを利用する処置の様々な方法を企図する。本開示は、ギャップジャンクションを通じた細胞間コミュニケーションもしくは相互作用が、悪性もしくは新生物細胞の生存を促進することに役割を果たし、またはギャップジャンクションを通じた細胞間コミュニケーションもしくは相互作用が、処置もしくは療法の耐病性に役割を果たす任意の疾患の処置を企図する。本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーは、このような疾患を処置および／または防止するのに使用することができる。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ギャップジャンクションを通じた細胞間コミュニケーションまたは相互作用が、処置または療法に対する耐病性に役割を果たす悪性または新生物細胞（例えば、血液細胞）を選択的に根絶する。

一部の態様では、本開示は、急性骨髄性白血病の処置を必要とする被験体における急性骨髄性白血病を処置する方法であって、被験体に有効量の本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーを投与し、それにより被験体における急性骨髄性白血病を処置することを含む、方法を提供する。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体中の正常細胞を根絶することなく、白血病細胞を選択的に根絶する。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体中の正常白血球を根絶することなく、被験体中の白血病細胞を選択的に根絶する。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体中の正常白血球の増殖を誘導しながら被験体中の白血病細胞を選択的に根絶する。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体中の正常白血球の補充を誘導しながら被験体中の白血病細胞を選択的に根絶する。もちろん、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体中の正常白血球の増殖および／または補充を誘導しながら、正常白血球を根絶することなく白血病細胞を選択的に根絶することができる。

一部の実施形態では、本方法は、被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与することをさらに含む。本開示は、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するのに有用である任意の誘導化学療法処置レジメンを投与することを企図する。一部の実施形態では、誘導化学療法は、被験体に代謝拮抗剤（例えば、シタラビン）およびアントラサイクリン系薬剤（例えば、ドキソルビシン）を投与することを含む。一部の実施形態では、代謝拮抗剤は、シタラビンを含む。誘導化学療法処置レジメンは、数時間、数日、または数カ月の期間にわたって被験体に投与することができる。誘導化学療法処置レジメンで使用される化学療法剤は、期間全体にわたって同じ時間に投与することができ、または期間内の異なる間隔で投与することができる。一部の実施形態では、誘導化学療法は、５日間の期間にわたって被験体にシタラビンおよびドキソルビシンを投与することを含む。一部の実施形態では、誘導化学療法は、３日間の期間にわたって被験体にシタラビンおよびドキソルビシンを投与し、その後２日間の期間にわたって被験体にシタラビン単独を投与することを含む。

ギャップジャンクションブロッカーは、誘導化学療法処置レジメンが被験体に投与される前に、誘導化学療法処置レジメンが被験体に投与されるのと同じ時間に、誘導化学療法処置レジメンが被験体に投与された後に、または上記の任意の組合せで被験体に投与することができる。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、誘導化学療法処置レジメンを被験体に投与する前に少なくとも１日にわたって被験体に投与される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ギャップジャンクションブロッカーと同時に被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日にわたって被験体に投与される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、誘導化学療法処置レジメンを被験体に投与する少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、または最大で少なくとも１週間前に被験体に投与される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、誘導化学療法処置レジメンが被験体に投与される少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも２週間、少なくとも３週間、または少なくとも１カ月前に被験体に投与される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、誘導化学療法処置レジメンを被験体に投与する少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、または最大で少なくとも１週間前に被験体に投与され、次いで誘導化学療法レジメンが、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも２週間、少なくとも３週間、または少なくとも１カ月にわたってギャップジャンクションブロッカーと同時に被験体に投与される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、または最大で少なくとも１週間にわたって被験体に投与され、次いで誘導化学療法レジメンが、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも２週間、少なくとも３週間、または少なくとも１カ月にわたって被験体へのギャップジャンクションブロッカーの投与を継続しながら誘導化学療法レジメンの投与を中止する前に、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも２週間、少なくとも３週間、または少なくとも１カ月にわたってギャップジャンクションブロッカーと同時に被験体に投与される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、３日間のギャップジャンクションブロッカーの投与と同時に、またはそれを伴わないで被験体に１００ｍｇ／ｋｇシタラビン＋３ｍｇ／ｋｇドキソルビシンを含む誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも２日間被験体に投与され、その後、２日間のギャップジャンクションブロッカーと同時に、またはそれを伴わないでドキソルビシンの非存在下で１００ｍｇ／ｋｇシタラビンを用いた化学療法が続き、その後、被験体へのギャップジャンクションブロッカーの２週間（１４日）の投与が続く。一部の実施形態では、ＣＢＸは、３日間のＣＢＸの投与と同時に、またはそれを伴わないで被験体に１００ｍｇ／ｋｇシタラビン＋３ｍｇ／ｋｇドキソルビシンを含む誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも２日間被験体に投与され、その後、２日間のＣＢＸと同時に、またはそれを伴わないでドキソルビシンの非存在下で１００ｍｇ／ｋｇシタラビンを用いた化学療法が続き、その後、被験体へのＣＢＸの２週間（１４日）の投与が続く。一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＢＸまたはギャップジャンクションブロッカーの投与は、被験体にある時間にわたって上昇する、かつ断続的な濃度または用量の本明細書に記載のＣＢＸまたはギャップジャンクションブロッカーを投与することを含む。例えば、ＣＢＸまたはギャップジャンクションブロッカーは、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、または少なくとも１週間にわたって１０ｍｇ／ｋｇで投与することができ、その後、ＣＢＸまたはギャップジャンクションブロッカー投与の非存在下での少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、または少なくとも１週間が続き、その後、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、または少なくとも１週間にわたる２０ｍｇ／ｋｇの投与が続き、その後、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、または少なくとも１週間にわたるＣＢＸまたはギャップジャンクションブロッカーの投与の非存在が続き、次いでその後、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、または少なくとも１週間にわたる３０ｍｇ／ｋｇの投与が続く。最初に、かつ処置の間欠期後の連続的な間隔で投与されるＣＢＸまたはギャップジャンクションブロッカーの濃度または投与量は、処置間隔間の濃度または用量の段階的な増大と同様に変動し得ることが認識されると予想される。例えば、ＣＢＸまたはギャップジャンクションブロッカーの初期用量または濃度は、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、もしくは５０ｍｇ／ｋｇ、またはそれ超であり得、間隔間の濃度または用量の段階的な増大は、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、または２５ｍｇ／ｋｇであり得る。さらに、上昇する、かつ断続的な濃度の用量のＣＢＸまたはギャップジャンクションブロッカーを、様々な処置間隔、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または被験体が寛解に入るまで望まれるだけ多くにわたって投与して、例えば、患者を寛解に誘導し、または患者が寛解から再発することを防止することによって、被験体を寛解に保ち、または患者の生存をさらに延長することができる。一部の実施形態では、処置および処置間隔からの間欠期は、被験体における疾患の過程に応じて、１週間超、例えば、２週間、３週間、４週間、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、または１年であり得る。上述の上昇する、かつ断続的な濃度または投薬スケジュールは、被験体が疾患の末期状態にあるとき、例えば、白血病細胞が被験体の体全体にわたって広がっているとき、被験体の生存時間を延長するのに使用することができる。

本明細書で使用される場合、「処置する」、「処置」、「処置すること」、または「改善」は、疾患、障害、または医学的状態に言及して使用される場合、状態についての治療的処置を指し、ここで目的は、症状または状態の進行または重症度を逆転させ、軽減し、改善し、阻害し、減速し、または止めるためである。用語「処置すること」は、状態の少なくとも１つの有害作用または症状を低減し、または軽減することを含む。処置は一般に、１つまたは複数の症状または臨床マーカーが低減される場合、「有効」である。代わりに、処置は、状態の進行が低減または停止される場合、「有効」である。すなわち、「処置」は、症状またはマーカーの改善だけでなく、処置の非存在下で予期される症状の進展または悪化の休止または少なくとも減速も含む。有益なまたは所望の臨床結果としては、これらに限定されないが、処置の非存在下で予期されるものと比較した、１つまたは複数の症状の軽減、欠陥の程度の縮小、例えば、急性骨髄性白血病の安定化した（すなわち、悪化でない）状態、急性骨髄性白血病の進行の遅延または減速、および寿命の増大がある。

一部の実施形態では、急性骨髄性白血病を処置することは、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導することを含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、完全な寛解が急性骨髄性白血病患者において誘導された後、少なくとも１日にわたって患者に投与される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、完全な寛解が急性骨髄性白血病患者において誘導された後、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも１６日、少なくとも１７日、少なくとも１８日、少なくとも１９日、少なくとも２０日、少なくとも２１日、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、またはそれ超にわたって患者に投与される。

一部の実施形態では、急性骨髄性白血病を処置することは、被験体の骨髄または末梢血中の残留する白血病細胞に起因する再発リスクの非存在下で、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導することを含む。

一部の実施形態では、本方法は、被験体を評価して、被験体が難治性または再発急性骨髄性白血病を有するか否かを決定することをさらに含む。

一部の態様では、本開示は、急性骨髄性白血病に罹患している被験体の生存を促進する方法であって、被験体に有効量のギャップジャンクションブロッカーを投与し、それにより被験体の生存を促進することを含む、方法を提供する。本方法は、本明細書に記載の任意のギャップジャンクションブロッカーを企図する。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１１β−ＨＳＤ）の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、カルベノキソロンまたはその類似体を含む。

一部の実施形態では、本方法は、被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与することをさらに含む。一部の実施形態では、誘導化学療法は、被験体に代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を投与することを含む。一部の実施形態では、代謝拮抗剤は、シタラビンを含む。一部の実施形態では、アントラサイクリン系薬剤は、ドキソルビシンを含む。一部の実施形態では、誘導化学療法は、５日間の期間にわたって患者にシタラビンおよびドキソルビシンを投与することを含む。一部の実施形態では、誘導化学療法は、３日間の期間にわたって患者にシタラビンおよびドキソルビシンを投与し、その後、２日間の期間にわたって患者にシタラビン単独を投与することを含む。本明細書に記載の投与もしくは投薬スケジュールおよび／または処置レジメンのいずれも、本方法とともに使用することができることが認識されると予想される。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与する前に少なくとも１日にわたって被験体に投与される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、誘導化学療法処置レジメンをギャップジャンクションブロッカーと同時に被験体に投与する前に、少なくとも１日にわたって被験体に投与される。

一部の実施形態では、本方法は、急性骨髄性白血病の末期状態に罹患しているかまたはそれを示している被験体を選択することをさらに含む。一部の実施形態では、被験体は、進行した腫瘍転移を有する。一部の実施形態では、被験体は、高い全身腫瘍量を有する。

「生存」は、生きたままである被験体を指し、全生存および無増悪生存を含む。「全生存」は、診断または処置の時間から規定された時間、例えば、１年、２年、３年、４年、５年などにわたって生きたままである被験体を指す。

「無増悪生存」は、急性骨髄性白血病が進展し、または悪化していることなく生きたままである被験体を指す。

「生存を促進すること」は、未処置の被験体（すなわち、カルベノキソロンなどのギャップジャンクションブロッカーで処置されていない被験体）と比べて、またはギャップジャンクションブロッカー投与の非存在下で承認された化学療法剤単独（ドキソルビシンなど）で処置された被験体と比べて、処置された被験体の生存の１つまたは複数の態様を増強することを指す。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ギャップジャンクションブロッカーを受けない下での被験体の生存の長さと比較して、被験体の生存の長さを増大させる。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ギャップジャンクションブロッカーを受けない下での被験体の生存の可能性と比較して、被験体の生存の可能性を増大させる。一部の実施形態では、被験体にギャップジャンクションブロッカー（例えば、ＣＢＸ）を投与すると、ギャップジャンクションブロッカー投与の非存在下での被験体の全生存時間と比べて、かつ／または化学療法処置単独と比較して、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ超、被験体の全生存時間が増大する。一部の実施形態では、被験体にギャップジャンクションブロッカー（例えば、ＣＢＸ）を投与すると、ギャップジャンクションブロッカー投与の非存在下での被験体の全生存時間と比べて、かつ／または化学療法処置単独と比較して、少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、もしくは少なくとも５倍、またはそれ超、被験体の全生存時間が増大する。一部の実施形態では、被験体にギャップジャンクションブロッカー（例えば、ＣＢＸ）を投与すると、ギャップジャンクションブロッカー投与の非存在下での被験体の全生存時間と比べて、かつ／または化学療法処置単独と比較して、１日、５日、１０日、３０日、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１年、１８カ月、２年、３０カ月、３年、４０カ月、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１５年、２０年、２５年、３０年、３５年、４０年、５０年、５５年、６０年、６５年、７０年、もしくは７５年、またはそれ超、被験体の生存時間が増大する。

一態様では、本開示は、被験体中の白血病細胞を選択的に根絶することによって再発したかまたは難治性の急性骨髄性白血病を有する被験体における完全な寛解を誘導する方法であって、（ａ）被験体を評価して、被験体が再発したかまたは難治性の急性骨髄性白血病を有するか否かを決定することと、（ｂ）被験体に誘導化学療法処置レジメンを投与する少なくとも１日前にギャップジャンクションブロッカーを被験体に投与することと、（ｃ）指定の時間にわたって代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を含む誘導化学療法処置レジメンを被験体に投与し、それにより被験体中の白血病細胞を選択的に根絶することによって被験体における完全な寛解を誘導することとを含む、方法を提供する。

被験体

本明細書で使用される場合、「被験体」は、ヒトまたは動物を意味する。通常、動物は、脊椎動物、例えば、霊長類、げっ歯類、家庭動物、または狩猟動物などである。霊長類としては、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、およびマカク、例えば、アカゲザルがある。げっ歯類としては、マウス、ラット、マーモット、フェレット、ウサギ、およびハムスターがある。家庭動物および狩猟動物としては、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、バッファロー、ネコ科動物、例えば、家ネコ、イヌ科動物、例えば、イヌ、キツネ、オオカミ、トリ種、例えば、ニワトリ、エミュー、ダチョウ、ならびに魚、例えば、マス、ナマズ、およびサケがある。患者または被験体には、上記の任意のサブセット、例えば、１つまたは複数の群または種、例えば、ヒト、霊長類、またはげっ歯類などを除く上記のすべてが含まれる。ある特定の実施形態では、被験体は、哺乳動物、例えば、霊長類、例えば、ヒトである。用語「患者」および「被験体」は、本明細書で互換的に使用される。一部の実施形態では、被験体は、急性骨髄性白血病に罹患している。

一部の実施形態では、被験体は、急性骨髄性白血病を提示している患者である。本明細書で使用される場合、「急性骨髄性白血病」は、骨髄新生物および急性白血病の世界保健機関（ＷＨＯ）分類による急性骨髄性白血病および関連新生物のすべての形態を、これらの再発したかまたは難治性の状態における以下の亜群のすべてを含めて包含する：再発性遺伝的異常を伴った急性骨髄性白血病、例えば、ｔ（８；２１）（ｑ２２；ｑ２２）を伴ったＡＭＬ；ＲＵＮＸ１−ＲＵＮＸ１Ｔ１、ｉｎｖ（１６）（ｐ１３．１ｑ２２）またはｔ（１６；１６）（ｐ１３．１；ｑ２２）を伴ったＡＭＬ；ＣＢＦＢ−ＭＹＨ１１、ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）を伴ったＡＭＬ；ＭＬＬＴ３−ＭＬＬ、ｔ（６；９）（ｐ２３；ｑ３４）を伴ったＡＭＬ；ＤＥＫ−ＮＵＰ２１４、ｉｎｖ（３）（ｑ２１ ｑ２６．２）またはｔ（３；３）（ｑ２１；ｑ２６．２）を伴ったＡＭＬ；ＲＰＮ１−ＥＶＩ１、ｔ（１；２２）（ｐ１３；ｑ１３）を伴ったＡＭＬ（巨核芽球）；ＲＢＭ１５−ＭＫＬ１、突然変異ＮＰＭ１を伴ったＡＭＬ、突然変異ＣＥＢＰＡを伴ったＡＭＬ；骨髄異形成症候群関連変化を伴ったＡＭＬ；療法関連骨髄新生物；最小限の分化を伴ったＡＭＬなどの別段に指定されていないＡＭＬ、成熟を伴わないＡＭＬ、成熟を伴ったＡＭＬ、急性骨髄単球性白血病、急性単芽球／単球白血病、急性赤白血病（例えば、純粋赤白血病、赤白血病、赤血球／骨髄性）、急性巨核芽球性白血病、急性好塩基球性白血病、骨髄線維症を伴った急性汎骨髄症；骨髄性肉腫；ダウン症候群に関連した骨髄増殖、例えば、ダウン症候群に関連した一過性の異常な骨髄造血または骨髄性白血病など；および芽細胞性形質細胞様樹状細胞新生物など。

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、例えば、提示された症状に基づいて、急性骨髄性白血病と診断された被験体を選択することをさらに含む。急性骨髄性白血病に関連した症状は、熟練した専門家に公知である。例えば、患者は、被験体が末梢血または骨髄中に２０％またはそれ超の芽細胞を有する骨髄新生物を提示する場合、患者は、急性骨髄性白血病と診断され得る。

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、急性骨髄性白血病を発症するリスクにある被験体を選択することをさらに含む。例えば、被験体は、白血病の家族歴に基づいて白血病を発症するリスクにあると選択され得る。

一部の実施形態では、被験体は、骨髄新生物の診断マーカーまたは予後マーカーとして有用な遺伝子突然変異に基づいて急性骨髄性白血病と、または急性骨髄性白血病を発症するリスクにあると診断される場合選択される。例示的なこのようなマーカーとしては、ＭＰＮにおけるＪＡＫ２、ＭＰＬ、およびＫＩＴ；ＭＤＳ／ＭＰＮにおけるＮＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＮＦ１、およびＰＴＰＮ１１；ＡＭＬにおけるＮＰＭ１、ＣＥＢＰＡ、ＦＬＴ３、ＲＵＮＸ１、ＫＩＴ、ＷＴ１、およびＭＬＬ；ダウン症候群と関連した骨髄増殖におけるＧＡＴＡ１の突然変異がある（その全体が参照により本明細書に組み込まれるVardimanら、「The 2008 revision of the World Health Organization (WHO) classification of myeloid neoplasms and acute leukemia: rationale and important changes」、Blood、１１４巻（５号）、９３７〜９５１頁（２００９年）を参照）。

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、急性骨髄性白血病を有すると疑われる被験体を選択することをさらに含む。急性骨髄性白血病を有すると疑われる被験体は、例えば、家族歴、診断検査に基づいて、または提示される症状、またはこれらの組合せに基づいて選択することができる。

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、難治性または再発急性骨髄性白血病に罹患している被験体を選択することをさらに含む。本明細書で使用される場合、「再発急性骨髄性白血病」は、任意の他の原因に起因しない完全な寛解後の血液中の白血病芽細胞の再出現または骨髄中の５％超の芽細胞として定義される。再発ＡＭＬを提示している被験体について、ベースライン骨髄評価に対する５％超の芽細胞が要求される。本明細書で使用される場合、「難治性急性骨髄性白血病」は、完全な寛解を実現することの失敗、または以前の療法後の不完全な血液の回復を伴った完全な寛解として定義される。任意の数の先の抗白血病スケジュールが許容される。本明細書で使用される場合、「完全な寛解」は、形態学的に白血病のない状態（すなわち、形態的な基準によって５％未満の芽細胞を有する骨髄、およびアウエル小体なし、髄外白血病の証拠なし）、ならびに１，０００／μＬ超またはそれに等しい絶対好中球数、ならびに１００，０００／μＬ超の血小板として定義される。本明細書で使用される場合、「不完全な血液の回復を伴った完全な寛解」は、形態学的に白血病のない状態（すなわち、形態的な基準によって５％未満の芽細胞を有する骨髄、およびアウエル小体なし、髄外白血病の証拠なし）、ならびに血液中の１，０００／μＬ未満の好中球数、または１００，０００μＬ未満の血小板として定義される。

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、誘導化学療法処置レジメンを受けた後に急性骨髄性白血球の完全な寛解から再発する被験体を選択することをさらに含む。

医薬組成物

本開示は、本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質（例えば、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤）を含む組成物を企図する。

一部の態様では、本開示は、有効量のギャップジャンクションブロッカー、および有効量の本明細書に記載の急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤を含む医薬組成物を提供する。

一部の実施形態では、医薬組成物は、有効量のギャップジャンクションブロッカー、急性骨髄性白血病が耐性を示す有効量の少なくとも１種の化学療法剤、および薬学的に許容され得る担体、希釈剤、または賦形剤を含む。

一部の実施形態では、医薬組成物は、高血圧、低カリウム血症、および／または浮腫のための有効量の予防的処置を含む。

ギャップジャンクションブロッカー、および急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤を含む組成物を、本明細書に記載するように、急性骨髄性白血病を処置するのに使用することができる。一部の実施形態では、組成物は、被験体中の正常白血球を根絶することなく被験体中の白血病細胞を選択的に根絶するのに有用である。一部の実施形態では、組成物は、被験体中の正常細胞を根絶することなく被験体中の白血病細胞を選択的に根絶するのに有用である。一部の実施形態では、組成物は、被験体中の正常白血球の増殖を誘導しながら被験体中の白血病細胞を選択的に根絶するのに有用である。一部の実施形態では、組成物は、被験体における白血病の完全な寛解を誘導するのに有用である。一部の実施形態では、組成物は、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するのに有用である。一部の実施形態では、組成物は、被験体の骨髄または末梢血中の残留する白血病細胞に起因する再発リスクの非存在下で、被験体における急性白血病の完全な寛解を誘導するのに有用である。

製剤および投与

本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質は、単独で、または適当な薬学的担体とともに投与することができ、固体または液体の形態、例えば、錠剤、カプセル剤、粉剤、溶液、懸濁液、またはエマルジョンなどであり得る。本明細書で使用される場合、用語「投与される」は、所望の部位での作用物質の少なくとも部分的な局在化をもたらす方法または経路による被験体への本明細書に記載の作用物質の配置を指す。本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーまたは作用物質は、被験体において有効な処置をもたらす任意の適切な経路によって投与することができ、すなわち、投与は、組成物の少なくとも一部が送達される被験体中の所望の場所への送達をもたらす。薬物送達戦略の包括的な総説については、Hoら、Curr. Opin. Mol. Ther.（１９９９年）、１巻：３３６〜３４４３頁；Groothuisら、J. Neuro Virol.（１９９７年）、３巻：３８７〜４００頁；およびJan、Drug Delivery Systems: Technologies and Commercial Opportunities, Decision Resources、１９９８年を参照されたい。これらのすべての内容は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質（例えば、ＣＢＸ）の例示的な投与経路としては、限定することなく、例えば、ボーラスとしての、もしくはある時間にわたる持続注入による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内（intracerobrospinal）、皮下、関節内、滑液包内、髄腔内、経口、局所、または吸入経路がある。ギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質は、治療有効量の作用物質を含む薬学的に許容され得る組成物中に製剤化し、１種または複数の薬学的に許容され得る担体（添加剤）および／もしくは希釈剤、または賦形剤と一緒に製剤化することができる。製剤は、好都合なことには単位剤形で提供することができ、薬学の技術分野で周知の方法のいずれかによって調製され得る。技法、賦形剤、および製剤は一般に、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Co.、Easton、Pa.、１９８５年、１７版、Nemaら、PDA J. Pharm. Sci. Tech.、１９９７年、５１巻：１６６〜１７１頁において見出される。

一部の実施形態では、本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質は、ナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子）内にカプセル化して投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質は、リポソーム内にカプセル化して投与することができる。このようなリポソームの製造、およびこのようなリポソーム中への分子の挿入は、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように当技術分野で周知である。リポソーム懸濁液（特定の細胞、例えば、内皮細胞を標的にしたリポソームを含む）も、薬学的に許容され得る担体として使用することができる。

ギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質は、他の医薬活性剤と組み合わせて被験体に投与することができる。例示的な医薬活性剤としては、これらに限定されないが、Harrison’s Principles of Internal Medicine、１３版、T.R. Harrisonら編、McGraw-Hill N.Y.、NY；Physician’s Desk Reference、５０版、１９９７年、Oradell New Jersey、Medical Economics Co.；Pharmacological Basis of Therapeutics、８版、GoodmanおよびGilman、１９９０年；United States Pharmacopeia、The National Formulary、ＵＳＰ ＸＩＩ ＮＦ ＸＶＩＩ、１９９０年に見つかるものがある。これらのすべての完全な内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、医薬活性剤は、急性骨髄性白血病の慣例的な処置である。一部の実施形態では、医薬活性剤は、自己免疫状態または炎症状態の慣例的な処置である。予防的処置の非存在下での本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカー（例えば、ＣＢＸ）の長期的な皮下投与は、例えば、高血圧、低カリウム血症、および浮腫（例えば、胃の浮腫）によって特徴付けられる疑似高アルドステロン症の結果として、有害な副作用の頻度を増大させ得る。したがって、一部の実施形態では、医薬活性剤は、ギャップジャンクションブロッカー（例えば、ＣＢＸ）の投与によって引き起こされる高血圧、低カリウム血症、浮腫（edmea）、および他の有害な副作用を処置または防止するための予防的処置を含む。一部の実施形態では、このような医薬活性剤は、抗ミネラルコルチコイド（minealocorticoid）、またはアルドステロン受容体アンタゴニストなどのアルドステロン阻害剤、例えば、エプレレノンまたはスピロノラクトンを含む。一部の実施形態では、このような医薬活性剤は、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤または他の利尿薬、例えば、チアジド利尿薬、例えば、クロロチアジド、クロルタリドン、インダパミド、ヒドロクロロチアジド、メチクロチアジド、メトラゾンなど；ループ利尿薬、例えば、ブメタニド、フロセミド、エタクリネート、およびトルセミドなど；カリウム保持性利尿薬、例えば、アミロリド塩酸塩、スピロノラクトン、およびトリアムテレンなど；炭酸脱水酵素阻害剤、例えば、アセタゾラミド、メタゾラミドなど、ならびに浸透圧利尿薬、例えば、グリセリン、イソソルビド、マンニトールＩＶ、および尿素などを含む。当業者は、彼らの専門知識、知見、および経験に基づいて、上述した参考文献を使用して任意の特定の疾患または疾患サブタイプを処置するのに適切な慣例的な医薬活性剤を選択することができる。

作用物質および他の医薬活性剤は、同じ医薬組成物中または異なる医薬組成物中で（同じ時間に、または異なる時間に）被験体に投与することができる。例えば、ギャップジャンクションブロッカー、および急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、同じ組成物中または異なる組成物中で製剤化することができる。

医薬組成物は、投与のための指示書と一緒に容器、パック、またはディスペンサー中に含めることができる。

本明細書で使用される場合、「有効量（effective amount）」、「有効量（effective amounts）」、または「治療有効量」は、集団または被験体中の正常細胞（例えば、骨髄または末梢血白血球）を根絶することなく、細胞集団または被験体中の白血病細胞（例えば、幹または前駆細胞）の大部分またはすべてを選択的に根絶するのに有効である作用物質（例えば、ギャップジャンクションブロッカー）の量を意味する。治療有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。一般に、治療有効量は、被験体の履歴、年齢、状態、性別、ならびに被験体における医学的状態の重症度およびタイプ、ならびに急性骨髄性白血病または自己免疫障害もしくは炎症性障害における病的過程を阻害する他の作用物質の投与とともに変動し得る。

キット

本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質は、キットで提供することができる。キットは、（ａ）作用物質、例えば、作用物質を含む組成物、および（ｂ）情報資料を含む。情報資料は、本明細書に記載の方法および／または本明細書に記載の方法のための作用物質の使用に関する説明的な、教育用の、マーケティングの、または他の資料であり得る。例えば、情報資料には、急性骨髄性白血病を処置するために被験体にギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質を投与するための方法が記載されている。
情報資料は、適当な様式、例えば、適当な用量、剤形、または投与モードで本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質を投与するための指示書を含み得る。例えば、その急速な作用動態に起因して、ＣＢＸなどのギャップジャンクションブロッカーは、白血病細胞に約２００μＭを曝露して数時間以内に選択的なアポトーシスを誘導する。ＣＢＸの同様の血漿レベルが、１日３回１００ｍｇの錠剤を服用する潰瘍患者において報告されている。したがって、一部の実施形態では、本開示は、約２００μΜの血漿レベルを実現するのに有効量のギャップジャンクションブロッカー（例えば、ＣＢＸ）を投与することを企図する。一部の実施形態では、指示書は、約２００μΜの血漿レベルを実現するのに有効量のギャップジャンクションブロッカー（例えば、ＣＢＸ）を投与することを推奨する。一部の実施形態では、指示書は、１日当たり３回、ギャップジャンクションブロッカー（例えば、ＣＢＸ）１００ｍｇを含む錠剤として製剤化されたギャップジャンクションブロッカーを経口投与することを推奨する。情報資料は、適当な被験体、例えば、ヒト、例えば、再発したかまたは難治性の急性骨髄性白血病に罹患しているヒトを選択するための指示書を含み得る。キットの情報資料は、その形態において制限されない。多くの場合では、情報資料、例えば、指示書は、印刷物、例えば、印刷されたテキスト、図面、および／または写真、例えば、ラベルまたは印刷されたシートで提供される。しかし、情報資料は、他のフォーマット、例えば、点字、コンピューター可読資料、録画、または録音などで提供することもできる。別の実施形態では、キットの情報資料は、リンクまたは連絡先情報、例えば、実際の住所、電子メールアドレス、ハイパーリンク、ウェブサイト、または電話番号であり、この場合、キットのユーザーは、本明細書に記載の方法におけるモジュレーターおよび／またはその使用についての実質的な情報を得ることができる。もちろん、情報資料は、フォーマットの任意の組合せで提供することもできる。
作用物質または組成物に加えて、キットは、他の成分、例えば、溶媒もしくは緩衝液、安定剤、または防腐剤、および／あるいは本明細書に記載の状態または障害、例えば、急性骨髄性白血病を処置するための第２の作用物質などを含み得る。代わりに、他の成分を、キット中に、しかし作用物質と異なる組成物または容器中に含めることができる。このような実施形態では、キットは、作用物質と他の成分とを混ぜるための、または他の成分と一緒にギャップジャンクションブロッカーを使用するための指示書を含み得る。
本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質は、任意の形態、例えば、液体、乾燥、または凍結乾燥形態で提供することができる。ギャップジャンクションおよび／または作用物質は、実質的に純粋な、かつ／または滅菌したものであることが好ましい。ギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質が溶液で提供される場合、溶液は、好ましくは水溶液であり、滅菌水溶液が好ましい。ギャップジャンクションブロッカーおよび／または作用物質が乾燥形態で提供される場合、再構成は一般に、適当な溶媒の添加によるものである。溶媒、例えば、滅菌水または緩衝液は任意選択で、キット中に提供することができる。
キットは、作用物質を含有する組成物のための１つまたは複数の容器を含み得る。一部の実施形態では、キットは、作用物質（例えば、組成物中の）および情報資料のための別個の容器、仕切り、または区画を含有する。例えば、作用物質（例えば、組成物中の）は、ボトル、バイアル、またはシリンジ中に収容することができ、情報資料は、プラスチックスリーブまたは小包中に収容することができる。他の実施形態では、キットの別個のエレメントは、単一の分割されていない容器内に収容される。例えば、作用物質（例えば、組成物中の）は、ラベルの形態で情報資料を自己に付けられたボトル、バイアル、またはシリンジ中に収容される。一部の実施形態では、キットは、複数（例えば、パック）の個々の容器を含み、それぞれは、作用物質（例えば、組成物中の）の１つまたは複数の単位剤形（例えば、本明細書に記載の剤形）を含有する。例えば、キットは、複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、またはブリスター包装を含み、それぞれは、単一単位用量の作用物質を含有する。キットの容器は、気密および／または防水であり得る。

一部の態様では、キットは、ギャップジャンクションブロッカー、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤、ならびに急性骨髄性白血病に罹患している被験体にギャップジャンクションブロッカーおよび少なくとも１種の化学療法剤を投与するための指示書を含む。

一部の実施形態では、指示書は、被験体のための誘導化学療法処置レジメンの一部として少なくとも１種の化学療法剤を投与するための指示をさらに含む。

一部の実施形態では、指示書は、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するためにギャップジャンクションブロッカー、および少なくとも１種の治療剤を投与するための指示をさらに含む。

一部の実施形態では、指示書は、被験体中の白血病細胞を完全に根絶することによって再発のリスクを伴うことなく、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するためにギャップジャンクションブロッカー、および少なくとも１種の治療剤を投与するための指示をさらに含む。

一部の実施形態では、指示書は、増殖性不死化白血病細胞から短命の非白血病細胞に分化するように白血病細胞を誘導することにより、被験体中の白血病細胞を完全に根絶することによって、被験体における急性骨髄性白血病の完全な寛解を誘導するためにギャップジャンクションブロッカー、および少なくとも１種の治療剤を投与するための指示をさらに含む。

作用物質

本開示は、本明細書に記載の方法、組成物、およびキットにおける、単独の、または少なくとも１種の追加の化学療法剤、例えば、急性骨髄性白血病が耐性を示す化学療法剤などと一緒に組み合わせたギャップジャンクションブロッカーの使用を企図する。本開示は、集団または被験体中の正常細胞（例えば、白血球）を根絶することなく、細胞集団または細胞中の白血病細胞を選択的に根絶することができる任意のギャップジャンクションブロッカーの使用を企図する。ギャップジャンクションブロッカーとして使用することができる作用物質の例示的なタイプとしては、小さい有機または無機分子；サッカリン；オリゴ糖；多糖；ペプチド、タンパク質、ペプチド類似体および誘導体からなる群から選択される生物学的巨大分子；ペプチド模倣体；ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびアプタマーからなる群から選択される核酸；細菌、植物、真菌、動物細胞、および動物組織からなる群から選択される生体物質から作製される抽出物；天然に存在するまたは合成の組成物；ならびにこれらの任意の組合せがある。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１１β−ＨＳＤ）の阻害剤を含む。このような阻害剤は、１１β−ＨＳＤ１の阻害剤、１１β−ＨＳＤ２の阻害剤、または１１β−ＨＳＤ１および１１β−ＨＳＤ２の両方の阻害剤であり得ることが認識されると予想される。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、以下の式Ｉ〜ＩＩＩ：

（式中、

Ｘ_１ Ｙ、およびＺは、それぞれ独立して、ハロゲン、特に、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、もしくはＢｒ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_５〜Ｃ_１５アリール、またはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシを表し、

ｎは、１〜１０、特に、１〜４の整数を表し、

Ｌは、アミド、アミン、スルホンアミド、エステル、チオエステル、またはケト基を表し、

Ｔ、Ｕ、Ｖ、およびＷは、それぞれ独立して、オキソ、チオ、ケトン、チオケトン、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、またはＣ_１〜Ｃ_６アルカノール基を表し、

Ａｒは、芳香族環系を表し、

Ｃｙｃは、環式環系を表す）、

（式中、

Ａは、Ｃ_１〜Ｃ_１０エステル（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−Ｏ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アミド（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−ＮＨ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０エーテル、またはＣ_１〜Ｃ_１０ケトン（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−）基を表し、

ＢおよびＣは、それぞれ独立して、オキソ基、ケト基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルカノール基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、

ｍは、１〜１０、特に、１〜４の整数であり、

Ｄは、ＣＯＯＲ^１またはＣＯＮＲ^２Ｒ^３から選択される基であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３は、それぞれ独立に、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表す）、

（式中、

Ｅは、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_１０エステル（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−Ｏ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アミド（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−ＮＨ−）、Ｃ_１〜Ｃ_１０エーテル（Ｃ_１〜Ｃ_１０−Ｏ−）、またはＣ_１〜Ｃ_１０ケトン（Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル−ＣＯ−）基を表し、

Ｆは、オキソ基、ケト基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルカノール基、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、

Ｇは、ＣＯＯＲ^１またはＣＯＮＲ^２Ｒ^３から選択される基であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_２０炭化水素基、特に、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基を表す）からなる群から選択される。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、１８−β−グリチルレチン酸またはその誘導体である。１８−β−グリチルレチン酸の例示的な誘導体としては、これらに限定されないが、グリチルリチン、グリチルリチン酸、カルベノキソロン、および２−ヒドロキシエチル−１８β−グリチルレチン酸アミドがある。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、カルベノキソロンまたはその類似体を含む。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、ヘプタノール、オクタノール、アナダミド、フェナメート、レチノイン酸、オレアミド、スペルミン、アミノスルフェート、ハロタン、エンフルラン、イソフルラン、プロポフォール、チオペンタール、グリチルレチン酸、キニーネ、２−アミノエトキシジフェニルボレート、またはこれらの薬学的に許容され得る誘導体、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。ヘプタノールの例示的な薬学的に許容され得る誘導体としては、これらに限定されないが、１−ヘプタノール、２−ヘプタノール、３−ヘプタノール、４−ヘプタノール、およびこれらの組合せがある。フェナメートの例示的な薬学的に許容され得る誘導体としては、これらに限定されないが、メクロフェナム酸、ニフルム酸、フルフェナム酸、およびこれらの組合せがある。グリチルレチン酸の例示的な薬学的に許容され得る誘導体としては、これらに限定されないが、グリチルレチン酸の水素エステル、グリチルレチン酸の水素エステルの塩、カルベノキソロン、およびこれらの組合せがある。グリチルレチン酸（glycrrhetinic acid）の水素エステル、およびグリチルレチン酸の水素エステルの塩を作製する方法は、その全体が本明細書に参照により組み込まれる米国特許第３，０７０，６２３号に記載されている。キニーネの例示的な薬学的に許容され得る誘導体としては、これらに限定されないが、キニジン、メフロキン、およびこれらの組合せがある。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、カルベノキソロンを含む。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、カルベノキソロンの類似体を含む。

一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンギャップジャンクションファミリーのメンバーの阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ４０．１の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ３０．２の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ３１．１の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ３６の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ４５の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ４７の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ３２の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ５０の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ３０．３の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ３１の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ２６の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ４０の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ３７の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ４６の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ４３の阻害剤を含む。一部の実施形態では、ギャップジャンクションブロッカーは、コネキシンＣｘ３０の阻害剤を含む。上記に列挙したコネキシンギャップジャンクションファミリーメンバーの例示的な阻害剤としては、これらに限定されないが、細胞外Ｃａ２＋、カルベノキソロン、フルフェナム酸、およびオクタノールがある。コネキシンギャップジャンクションファミリーメンバーの他の適当な阻害剤は、当業者に明らかであるはずである。

本開示は、がん（例えば、白血病）を処置するのに有用である任意の化学療法剤の使用を企図する。本発明のギャップジャンクションブロッカー（例えば、細胞間コミュニケーションを混乱させる作用物質）と組み合わせて投与することができる例示的な化学療法剤としては、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン（oxaloplatin）、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロランブシル（chorambucil）、ニトロソ尿素（nitrosurea））；抗代謝産物（例えば、メトトレキセート、ペメトレキセド、６−メルカプトプリン、ダカルバジン、フルダラビン、５−フルオロウラシル、アラビノシルシトシン（arabinosycytosine）、カペシタビン、ゲムシタビン、デシタビン）；ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン）、ポドフィロトキシン（例えば、エトポシド、テニポシド）、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）を含めた植物性アルカロイドおよびテルペノイド；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、ノテカン（notecan）、トポテカン、アマサクリン（amasacrine）、エトポシドリン酸塩）；抗腫瘍性抗生物質（ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびブレオマイシン）；リボヌクレオチド還元酵素阻害剤；微小管阻害剤（antimicrotubules agent）；ならびにレチノイドがある。（例えば、Cancer：Principles and Practice of Oncology（V.T. DeVitaら編、J.B. Lippincott Company、９版、２０１１年；Brunton,L.ら（編）、Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics、１２版、McGraw Hill、２０１０年を参照）。

本明細書に記載の組成物、方法、およびキットは、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤の使用を企図する。少なくとも１種の化学療法剤は、任意の薬物耐性機構に起因して急性骨髄性白血病が薬物耐性を示す場合がある。一部の実施形態では、少なくとも１種の化学療法剤は、間質媒介薬物耐性が示される。本明細書で使用される場合、間質媒介薬物耐性は、白血病細胞と間質細胞との異型相互作用に起因する急性骨髄性白血病が呈する化学的抵抗を指す。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、代謝拮抗剤を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、シタラビンを含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、アントラサイクリン系薬剤を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、ドキソルビシンを含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、代謝拮抗剤およびアントラサイクリン系薬剤を含む。一部の実施形態では、急性骨髄性白血病が耐性を示す少なくとも１種の化学療法剤は、シタラビンを含み、アントラサイクリン系薬剤は、ドキソルビシンを含む。本明細書に記載のギャップジャンクションブロッカー（例えば、ＣＢＸ）を投与すると、間質媒介化学的抵抗などの白血病細胞が呈する化学的抵抗を部分的に克服することによって白血病細胞が選択的に根絶されることが認識されると予想される。

いくつかの定義

本明細書で別段の定義のない限り、本願に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。さらに、脈絡による別段の要求のない限り、単数形の用語は、複数存在することを含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。

本明細書で使用される場合、用語「含む（comprising）」または「含む（comprises）
」は、本発明に本質的である組成物、方法、キット、およびこれらのそれぞれのコンポーネント（複数可）に言及して使用されるが、本質的であってもなくても不特定のエレメントを含める余地がある。

本明細書で使用される場合、用語「〜から本質的になる」は、所与の実施形態に要求されるエレメントを指す。用語は、本発明のその実施形態の基本のかつ新規の、または機能的な特徴（複数可）に実質的に影響しない追加のエレメントの存在を許容する。

用語「〜からなる」は、実施形態のその記載に列挙されていないいずれのエレメントも除外する、本明細書に記載の組成物、方法、キット、およびこれらのそれぞれのコンポーネントを指す。

操作例以外で、または別段に示されている場合、本明細書で使用される成分の量または反応条件を表現するすべての数値は、用語「約」によってすべての事例において修飾されていると理解されるべきである。用語「約」は、百分率に関連して使用される場合、±１％を意味し得る。

単数形の用語「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈からそうではないことが明示されない限り、複数形の指示対象を含む。同様に、単語「または」は、文脈からそうではないことが明示されない限り、「および」を含むように意図されている。核酸またはポリペプチドについて与えられているすべての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、およびすべての分子量または分子質量値は、おおよそであり、説明のために提供されていることが理解されるべきである。本明細書に記載のものと同様のまたは等価な方法および材料を本開示の実行または試験において使用することができるが、適当な方法および材料を以下に記載する。用語「含む（comprises）」は、「含む（includes）」を意味する。略語「例
えば（e.g.）」は、ラテン語の「例えば（exempli gratia）」に由来し、非限定的な例
を示すのに本明細書で使用される。したがって、略語「例えば（e.g.）」は、用語「例えば（for example）」と同義である。

特定したすべての特許および他の刊行物は、例えば、本開示に関連して使用され得るこのような刊行物に記載されている方法論を記載および開示する目的で、参照により本明細書に明白に組み込まれる。これらの刊行物は、本願の出願日前のこれらの開示についてもっぱら提供されている。この点において何も、本発明者らが、先行発明によって、または任意の他の理由のためにこのような開示に先行する権利を与えられていないという承認として解釈されるべきでない。これらの文書の日付に関するすべての陳述または内容に関する表示は、出願人に利用可能な情報に基づき、これらの文書の日付または内容の正確さに関するいずれの承認も構成しない。

既に示されていない程度に、記載および例示した本明細書の様々な実施形態のいずれか１つをさらに改変して、本明細書に開示の他の実施形態のいずれかに示した特徴を組み込んでもよいことが当業者によって理解されることになる。

以下の実施例は、本発明の一部の実施形態および態様を例示するものである。様々な改変、付加、置換などを、本発明の趣旨または範囲を変更することなく実施することができ、このような改変およびバリエーションは、以下に続く特許請求の範囲に定義した本発明の範囲内に包含されることが当業者に明らかになる。以下の実施例は、本発明を決して限定しない。

実施例

（実施例１）
ギャップジャンクション細胞間コミュニケーションは、白血病細胞の生存および薬物耐性を調節する

混合系統白血病（ＭＬＬ）遺伝子を伴うものを含めたヒト白血病における遺伝的転座によってコードされるいくつかの融合タンパク質は、拘束された造血前駆細胞に白血病幹細胞の性質を付与することが報告されている（Huntlyら、Cancer Cell、６巻、５８７〜９６頁（２００４年）；Cozzioら、Genes & Development、１７巻、３０２９〜３５頁（２００３年）；および（Soら、Cancer Cell、３巻、１６１〜７１頁（２００３年））。さらに、正常骨髄細胞内にこれらの変更された対立遺伝子を導入すると、疾患のマウスモデルにおいてＡＭＬが誘導される。このようなＡＭＬモデルは、ヒト疾患表現型を再現し、ｉｎ−ｖｉｔｒｏで連続的にコロニー形成する能力、およびｉｎ ｖｉｖｏで連続的に移植され得るＡＭＬ表現型を付与する能力を実証する幹細胞様の性質を示す（Huntlyら（２００４年）、およびKrivtsovら、Nature、４４２巻、８１８〜２２頁（２００６年））。

本発明者らは、ヒトＭＬＬ−ＡＦ９白血病のマウスモデルにおける誘導化学療法に対するＡＭＬ細胞の即時型応答を最初に試験した。ＭＬＬ−ＡＦ９は、ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）転座によってコードされ（Krivtsovら、２００６年、およびSykesら、Cell
、１４６巻、６９７〜７０８頁（２０１１年））、ＡＭＬを有する患者に由来する白血病芽細胞内に存在する融合タンパク質であり、予後不良と関連する（Schochら、Blood、１０２巻、２３９５〜４０２頁（２００３年））。本発明者らの実験のための初代ＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞を生成するために、本発明者らは、図１Ａに表したように、Ｂ６．ＳＪＬマウスに由来する系統枯渇骨髄細胞内にレトロウイルスでの形質導入を介してＭＬＬ−ＡＦ９発癌遺伝子を導入した。次いで選別したＧＦＰ陽性細胞を亜致死的に照射したＣ５７Ｂｌ６レシピエント中に静脈内注射し、ＭＬＬ−ＡＦ９ ＧＦＰ陽性白血病細胞を、疾患の末期において３カ月後に回収した。処置のタイミングを同期化し、疾患の進行を可視化するために、本発明者らは、初代ＭＬＬ−ＡＦ９ ＧＦＰ陽性細胞をルシフェラーゼレンチウイルスで形質導入した。次いで、本発明者らは、抗生物質を含むルシフェラーゼ発現細胞を選択し、１００万の二重陽性白血病細胞を照射していないレシピエント中に移植し、全身生物発光イメージングによって疾患の進行を監視した（図１Ａおよび１Ｂ）。診療所では、新しく診断されたＡＭＬ患者が完全な寛解に入るように誘導化学療法（アントラサイクリンと組み合わせたシタラビン）で処置されており（Puiら、２０１１年、およびBurnettら、２０１１年）、同様の転帰が、３日間のシタラビンおよびドキソルビシンの組合せ、追加の２日間のシタラビン単独での続行の５日の処置レジメンによってヒトＡＭＬのマウスモデルにおいて記載されている（Zuberら、Genes & Development、２３巻、８７７〜８９頁（２００９年））。照射されていないレシピエント中に移植して１４日後、ＭＬＬ−ＡＦ９細胞をレシピエントの骨中に検出し（図１Ｂ）、マウスを、処置の前に循環ＧＦＰ陽性の％によってさらに層別化した。本発明者らの動態実験により、誘導化学療法に対する非常に速い応答が明らかになり、ＧＦＰ陽性ＭＬＬ−ＡＦ９細胞は、フローサイトメトリーによって第１の用量から１時間後に血液循環中に検出されなかった（図１Ｃ）。第１の用量から２４時間後に、本発明者らは、ＧＦＰ陽性循環ＭＬＬ−ＡＦ９細胞を検出することができたが、これらは、第２の用量から１時間後に再び消失した。同様のパターンを第３、第４、および第５の用量で記録した（図１Ｃ）。意外にも、骨髄ＭＬＬ−ＡＦ９細胞のレベルは、５日のレジメンの過程でどの用量からも１時間後に劇的に低減した（図１Ｄ）。本発明者らは、これが細胞死のものを超えた機能的な変化を反映し得ると仮定した。実際に、本発明者らは、有効用量の組合せ化学療法でｉｎ ｖｉｔｒｏで初代ＡＭＬ細胞を処置しても、細胞死を誘導しないことを見出した。

本発明者らは、おそらく化学療法処置が細胞の異なるｉｎ ｖｉｖｏ局在化をもたらしたと仮定する。真である場合、細胞−細胞関係が起こっている場合があり、ＡＭＬ細胞生存に寄与し得る。この仮説を試験するために、本発明者らは、フローサイトメトリーと組み合わせたタイムラプスビデオ顕微鏡観察を使用して、骨髄間質細胞を支持して、および支持しないでｉｎ ｖｉｔｒｏでの化学療法に対するＭＬＬ−ＡＦ９白血病細胞の応答を評価した。２０ｎＭドキソルビシンと一緒の５０ｎＭシタラビンという高い用量のみが（Pardeeら、Experimental Hematology、３９巻、４７３〜４８５頁（２０１１年））、誘導して１６時間後に低い耐性および約８５％の細胞死をもたらした（図２Ａ）。ＭＳ−５は、造血幹および前駆細胞を支持することが以前に示されたマウス骨−骨髄間質細胞である（Itohら、Experimental Hematology、２１巻、１４５〜１５３頁（１９８９年）、およびSchajnovitzら、Nature Immunology、１２巻、３９１〜８頁（２０１１年））。予期されたように、ＭＳ−５間質細胞を支持するＢＭとともにＭＬＬ−ＡＦ９細胞を共培養すると、組合せ療法に対する耐性が増大し（約７０％）、わずか約３０％の細胞死を伴った（図２Ａ）。これは、白血病細胞と間質細胞との直接相互作用が薬物耐性を促進することを示唆する。間質−白血病（異型）相互作用と白血病−白血病（同型）相互作用とを区別するために、本発明者らは、トランスウェルインサートによって間質からＭＬＬ−ＡＦ９を分離して同型相互作用を可能にしながら異型相互作用を制限した。本発明者らは、異型相互作用が耐性の主な原因であるが、完全にではないことを見出し、理由は、ＭＬＬ−ＡＦ９細胞の約３０％が（間質を含まない約１５％の耐性と比較して）、間質から物理的に分離したけれども依然として耐性であるためである（図２Ｃ）。

造血細胞の接着相互作用が一般に細胞間コミュニケーションに付随するので、本発明者らは、薬物耐性におけるギャップジャンクション活性の潜在的な役割を試験した。ギャップジャンクション細胞間チャネルは、コネキシンタンパク質のホモおよびヘテロ六量体であり、カルシウムおよびｃＡＭＰ^１７などの二次メッセンジャーの通過を介して接触している細胞間の細胞間コミュニケーションを促進する。カルベノキソロン（ＣＢＸ）は、細胞生存能に影響を与えることなく１００μＭで細胞−細胞コミュニケーションを効率的に遮断する強力な広範囲のギャップジャンクション阻害剤である（Schajnovitzら、２０１１年）。誘導化学療法の２０分前に１００μＭ ＣＢＸによって共培養系におけるギャップジャンクション活性を遮断すると、耐性が逆転し、ＭＬ−ＡＦ９細胞のほぼ９０％が根絶された（図２Ｂ）。トランスウェルインサートで分離した共培養におけるギャップジャンクション遮断は、９０％超の根絶をもたらし（図２Ｃ）、同型の細胞間コミュニケーションも、後天性薬物耐性に寄与することを示唆した。

これらの有望な結果の後、本発明者らは、マウスにおける化学療法と組み合わせた全身性ギャップジャンクション阻害の効果を試験した。誘導化学療法の２４時間前に、５日の処置全体にわたって、２５ｍｇ／ｋｇ ＣＢＸを病気のマウスに投与した。処置して１週間後に、マウスを画像化し、次いで屠殺して処置転帰を評価した。図２Ｄに表したように、化学療法単独で処置したマウスは、完全な寛解に入ったが、最小限の残留する細胞を骨中に検出することができた（白色の矢印）。驚くべきことに、化学療法およびギャップジャンクションブロッカーで処置されたマウスは、完全に白血病がなく、ルシフェラーゼイメージングまたはフローサイトメトリーによって検出可能な白血病細胞がなかった。

次いで本発明者らは、追加の処置なしで、ギャップジャンクション細胞間コミュニケーションの遮断がどのようにＡＭＬ細胞に影響するかを問うた。本発明者らが驚いたことに、初代ＭＬＬ−ＡＦ９細胞は、ギャップジャンクション遮断に感受性であることが判明し、細胞の約２０％が１６時間にわたる１００μＭ ＣＢＸによって根絶された（図４Ａ）。重要なことに、これは、白血病特異的効果であった。理由は、ＢＭまたは末梢血（ＰＢ）から新たに単離した非白血病野生型初代白血球は、２００μΜの高濃度でさえＣＢＸ曝露に感受性でなかった一方、ＭＬＬ−ＡＦ９細胞死は、２００μΜで約７０％まで増大したためである（図４Ａ）。本発明者らは、初代ＭＬＬ−ＡＦ９細胞（ＣＤ４５．１抗原を発現する）を新たに単離した正常ＢＭ白血球（ＣＤ４５．２抗原を発現する）と１：１の比で混合し、混合物を漸増濃度のＣＢＸに１６時間曝露することによってこれらの結果をさらにバリデートした。これらの実験により、ＣＢＸが、４００μΜもの高い濃度でさえ正常細胞に影響を与えることなくＭＬＬＡＦ９細胞を選択的に根絶することが確認された（図４Ｂ）。クローン特異的効果の可能性を除外するために、本発明者らは、独立して生成した異なるＭＬＬ−ＡＦ９クローンを用いて実験を繰り返し、ＡＭＬの異なるタイプを代表するＨｏｘＡ９／Ｍｅｉｓ１ ＡＭＬ細胞も含めた。図４Ｃおよび４Ｄに表したように、ＣＢＸは、正常細胞に影響を与えることなく、試験したすべてのＡＭＬ細胞を選択的に根絶した。

これらの結果は、白血病細胞生存の維持における細胞間コミュニケーションの予想外の選択的な役割を明らかにした。ＣＢＸは、正常細胞に対して細胞傷害効果を有さないので、本発明者らは、試験した白血病細胞において観察された死の原因を理解しようと務めた。ＭＬＬ−ＡＦ９ ＡＭＬ細胞は、Ｇｒ−１およびＭａｃ−１抗原の両方を発現する未分化骨髄前駆細胞であり、一方、成熟骨髄細胞は、Ｇｒ−１（顆粒球）またはＭａｃ−１（マクロファージ）を発現する。本発明者らは、初代ＭＬＬ−ＡＦ９細胞内のＧｒ−１およびＭａｃ−１の発現を、これらの細胞を０μΜ〜２００μΜ ＣＢＸに１６時間曝露した後に試験することによって分化アッセイを実施した。本発明者らは、実際には、ＣＢＸは、細胞に対して有毒でないが、代わりに短命の細胞である成熟顆粒球へのこれらの分化を誘導することを見出した。
参考文献

Claims (1)

1. 本明細書に記載の発明。