JP2019501901A - 炎症性腸疾患の治療及び診断のための抗体 - Google Patents

炎症性腸疾患の治療及び診断のための抗体 Download PDF

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Abstract

本発明は、炎症性障害、増殖性障害及び自己免疫疾患を含む疾患の診断及び治療に関する。本発明は、ｉ）リゾチーム、ｉｉ）好中球エラスターゼ、ｉｉｉ）組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１（ＴＩＭＰ−１）又はｉｖ）テネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子を提供し、その使用を含む。本発明は、炎症性腸疾患等の炎症性障害の診断及び治療における、ｖ）フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、ｖｉ）フィブロネクチンのエキストラドメイン−Ｂ（ＥＤ−Ｂ）、ｖｉｉ）マトリックスメタロプロテアーゼ３（ＭＭＰ３）又はｖｉｉｉ）テネイシン−ＣのＡ１ドメインに結合する抗体分子の使用にも関する。【選択図】なし

Description

本発明は疾患、特に炎症性腸疾患（ＩＢＤ）等の炎症性障害及び自己免疫疾患の診断及び治療に関する。これに関連して、本発明は、（ｉ）リゾチーム、（ｉｉ）好中球エラスターゼ、（ｉｉｉ）組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１（ＴＩＭＰ−１）又は（ｉｖ）テネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子を提供し、その使用を含む。本発明は、ＩＢＤの診断及び治療における（ｖ）フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、（ｖｉ）フィブロネクチンのエキストラドメイン−Ｂ（ＥＤ−Ｂ）、（ｖｉｉ）マトリックスメタロプロテアーゼ３（ＭＭＰ３）又は（ｖｉｉｉ）テネイシン−ＣのＡ１ドメインに結合する抗体分子の使用にも関する。
癌及び炎症性疾患等の重篤な障害の治療に現在使用されている従来の医薬の殆どは、疾患部位に選択的に蓄積しない（非特許文献１）。例えば、静脈内に投与される薬物は、疾患部位に選択的に蓄積するのではなく、身体の種々の臓器及び組織内に一様に分散する。
従来の薬物療法の不利点を回避するアプローチの１つは、病理関連マーカーに特異的な結合分子を用いた疾患部位への生物活性剤の優先的送達を含む（非特許文献２）。罹患組織への薬物の選択的な標的化は、最終的にその作用部位での局所濃度の増大をもたらし、薬理学的利益を与えるために使用される生物活性剤（例えば、成長因子、酵素、ホルモン、抗炎症薬、細胞毒性薬、サイトカイン、放射性核種又は光増感剤）の望ましくない効果から正常臓器を免れさせる。大抵の場合、これは送達される医薬の治療指数の改善、すなわち副作用を最小限に抑えた有効性の増大につながる。実際に、部位特異的治療法の有利な毒性プロファイルは、血管新生関連疾患の療法において新たな道を開く可能性があり、現在準最適用量で与えられているか、又はその臨床用途がこれまで未修飾形態で適用される場合の許容不可能な副作用によって妨げられていた、極めて強力かつ有望な作用物質の全身投与を可能にする。
リガンドベースの薬物送達（pharmacodelivery）戦略は、罹患組織と健常臓器との明確な識別を可能にする高品質の病理マーカーの同定に根本的に依存する。モノクローナル抗体及びそれらのフラグメントが薬物送達用途に好ましい作用物質であるが（非特許文献３、非特許文献４）、球状タンパク質突然変異体（非特許文献５）、ペプチド（非特許文献６）、更には小有機リガンド（非特許文献７）もますます使用されている。
癌治療の治療戦略として血管新生部位への生物活性剤の抗体ベースの標的化送達が記載されている。炎症性障害の場合、抗体ベースの標的化送達は殆ど研究されていない。本出願人は、フィブロネクチンのＥＤ−Ａドメインが炎症性腸疾患において発現されることを以前に実証している。放射技法及び蛍光技法の両方を使用する場合、ＥＤ−Ａに特異的なヒトモノクローナル抗体Ｆ８が、静脈内投与後にｉｎ ｖｉｖｏ炎症部位に選択的に局在化することが見出されている（特許文献１）。
しかしながら、当該技術分野では、ＩＢＤ等の炎症性障害及び自己免疫疾患の治療及び診断のためのリガンドベースの薬物送達の用途に用いることができる更なる抗体が依然として必要とされている。
リゾチーム
リゾチームは、ペプチドグリカン中のＮ−アセチルムラミン酸残基とＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基との間、及びキトデキストリン（chitodextrins）中のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基間の１，４−β結合の加水分解を触媒することによって細菌細胞壁を損傷するグリコシドヒドロラーゼ酵素である。リゾチームは、活動性ＩＢＤの粘膜中の上皮細胞によって発現されることが知られている（非特許文献８、非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１）。
好中球エラスターゼ
好中球エラスターゼは、炎症時に好中球及びマクロファージによって分泌されるセリンプロテアーゼである。他のセリンプロテアーゼと同様、好中球エラスターゼは、ポリペプチドの一次配列中に分散しているが、フォールディングしたタンパク質の三次元構造において集まるヒスチジン、アスパラギン酸及びセリン残基の触媒三残基から構成される電荷リレー系を含有する。
好中球エラスターゼ活性が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）患者の結腸粘膜及び血液の両方において上昇しており、それがＩＢＤにおいて増悪因子として作用し得ることが報告されている（非特許文献１２、非特許文献１３）。これは、活動性炎症性腸疾患と非活動性炎症性腸疾患及び過敏性腸症候群（ＩＢＳ）とを区別することが可能なマーカーでもある（非特許文献１４）。
組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１（ＴＩＭＰ−１）
組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１（ＴＩＭＰ−１）は、細胞外基質の分解に関与するペプチダーゼ群であるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）を阻害する糖タンパク質である。既知のＭＭＰの殆どに対するその阻害的役割に加えて、コード化タンパク質は、広範な細胞型において細胞増殖を促進することが可能であり、抗アポトーシス機能を有する場合もある。
ＴＩＭＰ−１の血清濃度は、潰瘍性大腸炎及びクローン病を有する患者において対照と比較して顕著に増大することが示されている（非特許文献１５）。
フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム
フィブロネクチン（ＦＮ）は、細胞外基質及び体液の両方の多官能性高分子量糖タンパク質構成要素である。フィブロネクチンは、正常細胞形態の確立及び維持、細胞移動、止血及び血栓形成、創傷治癒、並びに発癌性形質転換等の多くの異なる生物学的過程に関与する（非特許文献１６、非特許文献１７、非特許文献１８、非特許文献１９、非特許文献２０）。ＦＮにおける構造多様性は、少なくとも２０個の異なるアイソフォームを生成する一次ＦＮ転写産物の３つの領域（ＥＤ−Ａ、ＥＤ−Ｂ及びＩＩＩＣＳ）の選択的スプライシングによってもたらされ（非特許文献１８、非特許文献２１）、そのアイソフォームの幾つかは腫瘍及び正常組織において差次的に発現する。例えば、フィブロネクチンのヒトＩＩＩＣＳアイソフォームの５個の異なるスプライスアイソフォームが記載されている。組織特異的かつ発生特異的に調節されることに加え、ＦＮ−ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングパターンが形質転換細胞及び悪性腫瘍において脱調節されることが知られている（非特許文献２２、非特許文献２３、非特許文献２４、非特許文献２１、非特許文献２５、非特許文献２６、非特許文献２７、非特許文献２８）。ＥＤ−Ａ、ＥＤ−Ｂ及びＩＩＩＣＳ配列を含有するＦＮアイソフォームは、形質転換細胞及び悪性腫瘍細胞において正常細胞よりも大規模に発現されることが示されている。
健常組織及び罹患組織におけるフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォームの発現に関する情報の大半は、ｍＲＮＡ研究又はモノクローナル抗体（抗体ＦＤＣ−６及びＸ１８Ａ４）を用いた研究のいずれかから導き出される。これらの抗体は、フィブロネクチンによる免疫化及びシクロホスファミドによる免疫抑制後のハイブリドーマ技術によって生成された。抗体ＦＤＣ−６は、フィブロネクチンＩＩＩ型接続セグメント（ＩＩＩＣＳ）内の特異的なＯ−連結Ｎ−アセチルガラクトサミン化ヘキサペプチドエピトープに結合する（非特許文献２９、非特許文献３０）。しかしながら、この抗体は、エピトープの認識にペプチド骨格及び炭水化物部分の両方を必要とするため、標的化用途、特に種間の交差反応性が必要とされる場合に好適ではない。抗体Ｘ１８Ａ４は、ＦＤＣ−６とは異なるＩＩＩＣＳ領域を認識するが、結合エピトープは、完全には特性化されていない（非特許文献３１）。抗体Ｘ１８Ａ４の主な用途は、早期陣痛を予測するための妊婦の子宮頚部における癌胎児性フィブロネクチンの検出と関連する。ＩＩＩＣＳ発現が関節リウマチ及び変形性関節症において変調されることが証明されている。特に、アイソフォーム８９Ｖ（ＣＳ１）が炎症において上方調節されるようである（非特許文献３２、非特許文献３３）。しかしながら、本発明者らの知る限りでは、炎症性腸疾患におけるＩＩＩＣＳの存在又は役割は報告されていない。
フィブロネクチンのＥＤ−Ｂドメイン
フィブロネクチンは、血漿及び組織中に大量に存在する大きな糖タンパク質である。ＥＤ−Ｂは、組織リモデリング条件下において選択的スプライシング機構によって一次転写産物レベルでフィブロネクチン分子に挿入される９１アミノ酸ＩＩＩ型相同性ドメインである。ＥＤ−Ｂ配列はマウス、ラット、ウサギ、イヌ、サル及びヒト（man）において同一であり、ＥＤ−Ｂは、生理学的血管新生が生じる増殖期における卵巣及び子宮内膜内の幾つかの血管を除き、健常成体個体では本質的に検出不可能である。
しかしながら、ＥＤ−Ｂ含有フィブロネクチンは、多くの浸潤性固形腫瘍において豊富であることが示されており、腫瘍に応じて主に血管発現パターン又は散在性の間質発現パターンを示す。ＥＤ−Ｂの存在は、眼血管新生（非特許文献３４、非特許文献３５）、関節リウマチ（特許文献２）、子宮内膜症（非特許文献３６、特許文献３）及びアテローム斑（非特許文献３７、非特許文献３８）においても報告されている。本願の出願人は、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂが、潰瘍性大腸炎の試料において抗ＥＤ−Ｂ抗体Ｌ１９でプロービングした場合に陰性にスコアリングされることを以前に示している（特許文献３）。
マトリックスメタロプロテアーゼ３（ＭＭＰ３）
マトリックスメタロプロテアーゼ３（ストロメリシン１としても知られる）は、組織リモデリングにおいて重要な役割を有する２０個を超える亜鉛依存性細胞外酵素のファミリーのメンバーである（非特許文献３９、非特許文献４０、非特許文献４１）。
様々なＭＭＰタンパク質の異常発現が、癌の進行を含む様々な疾患タイプ及び関節リウマチ等の炎症病態において役割を果たすことが示されている（非特許文献４０、非特許文献４２、非特許文献４３）。クローン病のゲノムマイクロアレイでは、ＭＭＰ３遺伝子が対照と比較して差次的に発現することが報告されている（非特許文献４４）。
テネイシン−ＣのＡ１、Ｃ及びＤドメイン
テネイシン−Ｃは、細胞外基質の糖タンパク質である。テネイシン−Ｃは、選択的スプライシングによって一次転写産物において追加又は除外され得る幾つかのフィブロネクチン３型相同性反復を含み、異なる生物学的機能を有する小さな及び大きなアイソフォームをもたらす。小さなアイソフォームは幾つかの組織において発現されるが、テネイシン−Ｃの大きなアイソフォームは限局的な発現パターンを示す。これは健常な成体組織では実質的に検出不可能であるが、胚形成中に発現され、新生物形成を含む組織リモデリングを受ける成体組織において発現される。
従来、テネイシン分子について、推定的には全ての選択的スプライシングされたドメインＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｂ、ＡＤ、Ｃ、Ｄを含む、テネイシン−Ｃの大きなアイソフォーム、また、これらのドメインが存在しなかった場合にはテネイシン−Ｃの小さなアイソフォームを参照していた。
概して、ＩＢＤを有する患者の血清及び結腸組織におけるテネイシン−Ｃの存在が幾つか報告されている（非特許文献４５、非特許文献４６、非特許文献４７）。しかしながら、テネイシン−ＣのＡ１及びＤドメインの役割は完全には解明されておらず、ＩＢＤを治療又は診断するための作用物質の薬物送達の標的として使用することができるかは明らかではない。例えば、本願の出願人は、テネイシン−ＣのドメインＡ１が、潰瘍性大腸炎の試料において抗Ａ１ドメイン抗体Ｆ１６でプロービングした場合に陰性にスコアリングされることを以前に示している（特許文献３）。テネイシン−ＣのドメインＤに結合する抗体、特に腫瘍標的化のためのＰ１２抗体の特性が記載されている（非特許文献４８及び特許文献４）。
国際公開第２０１４／０５５０７３号 国際公開第２００７／１２８５６３号 国際公開第２０１０／０７８９５０号 国際公開第２００６／０５０８３４号
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本発明者らは、（ｉ）リゾチーム、（ｉｉ）好中球エラスターゼ、（ｉｉｉ）組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１（ＴＩＭＰ−１）又は（ｉｖ）テネイシン−ＣのＤドメインに結合する新規の抗体分子を調製した。
上記の抗体分子は、薬物送達用途を含む療法及び診断に応用される。特に、本発明の抗体分子は、炎症性障害及び自己免疫疾患の治療及び診断に応用される。
加えて、本発明者らは、（ｉ）フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、（ｉｉ）フィブロネクチンのＥＤ−Ｂ、（ｉｉｉ）テネイシン−ＣのＡ１ドメイン、（ｉｖ）テネイシンＣのＤドメイン又は（ｖ）ＭＭＰ３に結合する抗体分子が、潰瘍性大腸炎と関連する血管構造を標的化することが可能であることを初めて示した。この標的化は、テネイシンＣのＣドメインに結合する抗体分子によっては示されない。このため、かかる抗体分子は、潰瘍性大腸炎及びクローン病を含むＩＢＤの治療及び診断に応用される。これらの結果は、例えばフィブロネクチンのＥＤ−Ｂ及びテネイシン−ＣのＡ１ドメインが、潰瘍性大腸炎において発現されないことが本出願人によって以前に示されていることから（特許文献３）、予期せぬものであった。特許文献３において分析された潰瘍性大腸炎試料が長期にわたって−８０℃で保管されていたことから、これらの以前の偽陰性結果は、凍結潰瘍性大腸炎サンプルの分解の結果であった可能性がある。
第１の態様では、本発明はリゾチーム、好ましくはヒトリゾチームに結合する抗体分子に関する。抗体分子は、配列番号５に規定されるＣＴ０１抗体分子のＶＨドメイン相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、又は３個以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入を有する配列番号５に規定されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含むのが好ましい。加えて、抗体分子は配列番号３、４及び６〜８にそれぞれ規定されるＣＴ０１抗体分子のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。一例では、抗体分子は、配列番号１及び２にそれぞれ規定されるＣＴ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。代替的には、抗体分子は、配列番号６９及び２にそれぞれ規定されるＣＴ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。
第２の態様では、本発明は好中球エラスターゼ、好ましくはヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）に結合する抗体分子に関する。抗体分子は、配列番号７８に規定されるＦＦ０２抗体分子のＨＣＤＲ３、又は３個以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入を有する配列番号７８に規定されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含むのが好ましい。加えて、抗体分子は配列番号７６、７７及び７９〜８１にそれぞれ規定されるＦＦ０２抗体分子のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。抗体分子は、配列番号７４及び７５にそれぞれ規定されるＦＦ０２抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。
代替的には、好中球エラスターゼに結合する抗体分子は、配列番号１３に規定されるＦＦ０１抗体分子のＨＣＤＲ３、又は３個以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入を有する配列番号１３に規定されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み得る。加えて、抗体分子は配列番号１１、１２及び１４〜１６にそれぞれ規定されるＦＦ０１抗体分子のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。代替的には、抗体分子は、配列番号１１及び８６及び１４〜１６にそれぞれ規定されるＦＦ０１抗体分子のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。一例では、抗体分子は、配列番号９及び１０にそれぞれ規定されるＦＦ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。代替的には、抗体分子は、配列番号７０及び１０にそれぞれ規定されるＦＦ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。更なる代替として、抗体分子は、配列番号９及び８５にそれぞれ規定されるＦＦ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。また更なる代替として、抗体分子は、配列番号７０及び８５にそれぞれ規定されるＦＦ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。
第３の態様では、本発明は、組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１（ＴＩＭＰ−１）に結合する抗体分子に関する。組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１は、ヒト組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１であるのが好ましい。抗体分子は、配列番号２１に規定される２ＰＣ１０抗体分子のＨＣＤＲ３、又は３個以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入を有する配列番号２１に規定されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み得る。加えて、抗体分子は配列番号１９、２０及び２２〜２４にそれぞれ規定される２ＰＣ１０抗体分子のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。一例では、抗体分子は、配列番号１７及び１８にそれぞれ規定される２ＰＣ１０抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。代替的には、抗体分子は、配列番号７１及び１８にそれぞれ規定される２ＰＣ１０抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。
第４の態様では、本発明は、テネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子に関する。テネイシン−ＣのＤドメインは、ヒトテネイシンＣのＤドメインであるのが好ましい。抗体分子は、配列番号２９に規定されるＣＰＲ０１抗体分子のＨＣＤＲ３、又は３個以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入を有する配列番号２９に規定されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含むのが好ましい。加えて、抗体分子は配列番号２７、２８及び３０〜３２にそれぞれ規定されるＣＰＲ０１抗体分子のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。一例では、抗体分子は、配列番号２５及び２６にそれぞれ規定されるＣＰＲ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。代替的には、抗体分子は、配列番号７２及び２６にそれぞれ規定されるＣＰＲ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。更なる代替として、抗体分子は、配列番号２５及び８７にそれぞれ規定されるＣＰＲ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。また更なる代替として、抗体分子は、配列番号７２及び８７にそれぞれ規定されるＣＰＲ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。
代替的には、テネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子は、同じＣＰＲ０１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、ＣＰＲ０１．１と称されるＣＰＲ０１の類縁体であり得る。テネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子ＣＰＲ０１．１は、配列番号２９に規定されるＣＰＲ０１．１抗体分子のＨＣＤＲ３、又は３個、２個若しくはそれ以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入を有する配列番号２９に規定されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み得る。加えて、抗体分子は、配列番号２７に規定されるＣＰＲ０１．１抗体分子のＨＣＤＲ１配列、配列番号９１に規定されるＣＰＲ０１．１抗体分子のＨＣＤＲ２配列、配列番号３０に規定されるＣＰＲ０１．１抗体分子のＬＣＤＲ１配列、配列番号３１に規定されるＣＰＲ０１．１抗体分子のＬＣＤＲ２配列、及び／又は配列番号９２に規定されるＣＰＲ０１．１抗体分子のＬＣＤＲ３配列を含み得る。一例では、抗体分子は、配列番号８９及び９０にそれぞれ規定されるＣＰＲ０１．１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。完全長ＣＰＲ０１．１ ｓｃＦｖのアミノ酸配列は、配列番号９３に規定される。このため、抗体分子又はそのフラグメントは、配列番号９３に規定されるアミノ酸配列、又は２０個以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入、より好ましくは８個のアミノ酸置換を有する配列番号９３に規定される配列を含むか又は有するのが好ましい。幾つかの実施の形態では、ＣＰＲ０１．１抗体分子は、ＣＲＰ０１に対する配列同一性がおよそ９６％のアミノ酸配列を含み得る。
加えて、本発明者らは、テネイシンＣのＤドメインに結合する抗体分子が、癌等の増殖性障害と関連する血管構造を標的化することが可能であることも示した。このため、かかる抗体分子は、癌等の増殖性障害の治療及び診断に応用される。
本明細書で言及されるように、本発明の又は本発明に使用される抗体分子は、３個以下のアミノ酸置換、欠失又は挿入を有する本明細書に記載のＨＣＤＲ３配列を含み得る。例えば、本発明の又は本発明に使用される抗体分子は、２個以下又は１個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を有する本明細書に記載のＨＣＤＲ３配列を含み得る。ＨＣＤＲ３配列に関して、本発明の又は本発明に使用される抗体分子は、３個以下、２個以下又は１個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を有する本明細書に記載のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。同様に、本発明の又は本発明に使用される抗体分子は１０個以下、例えば９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下又は１個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を有する本明細書に記載のＶＨ及び／又はＶＬドメイン配列を含み得る。ＶＨ及び／又はＶＬドメインに関する限り、アミノ酸の置換（複数の場合もある）、欠失（複数の場合もある）又は挿入（複数の場合もある）は、ＶＨ及び／又はＶＬドメインフレームワーク領域内であってもよい。
本願において抗体のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＶＨ又はＶＬ配列が特定の配列を有することが開示される場合、これは記載の配列を含む又はそれからなるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＶＨ又はＶＬを指すことがある。
上記の新規の抗体に加えて、本出願人によって以前に生成された、フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂ、テネイシン−ＣのＡ１ドメイン又はＭＭＰ−３に結合する他の抗体がＩＢＤと関連する新生血管構造、特に潰瘍性大腸炎と関連する新生血管構造の標的化に好適であることが示されているが、クローン病等の炎症性腸疾患の他の例の新生血管構造を、本明細書に記載される抗体を用いて同様に標的化することができると予期される。
このため、第５の態様では、本発明は、炎症性腸疾患を治療する方法に使用されるフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂ、テネイシン−ＣのＡ１ドメイン、テネイシン−ＣのＤドメイン又はＭＭＰ−３に結合する抗体分子であって、該抗体分子が免疫抑制剤又は抗炎症剤にコンジュゲートしている、抗体分子に関する。患者において炎症性腸疾患を治療する方法であって、フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂ、テネイシン−ＣのＡ１ドメイン、テネイシン−ＣのＤドメイン又はＭＭＰ−３に結合する抗体分子を含む薬剤を治療有効量、投与することを含み、該抗体分子が免疫抑制剤又は抗炎症剤にコンジュゲートしている、方法が同様に本発明の一部をなす。炎症性腸疾患の治療のための薬剤の製造へのフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂ、テネイシン−ＣのＡ１ドメイン、テネイシン−ＣのＤドメイン又はＭＭＰ−３に結合する抗体分子の使用も本発明の一部をなす。
加えて、本発明は、炎症性腸疾患を画像化、検出又は診断する方法に使用されるフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂ、テネイシン−ＣのＡ１ドメイン、テネイシン−ＣのＤドメイン又はＭＭＰ−３に結合する抗体分子であって、該抗体分子が検出可能な標識に任意にコンジュゲートしている、抗体分子に関する。患者において炎症性腸疾患を画像化、検出又は診断する方法であって、患者にフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂ、テネイシン−ＣのＡ１ドメイン、テネイシン−ＣのＤドメイン又はＭＭＰ−３に結合する抗体分子を投与することを含み、該抗体分子が検出可能な標識に任意にコンジュゲートしている、方法が同様に本発明の一部をなす。炎症性腸疾患の画像化、検出又は診断のための診断薬の製造へのフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂ、テネイシン−ＣのＡ１ドメイン、テネイシン−ＣのＤドメイン又はＭＭＰ−３に結合する抗体分子の使用も本発明の一部をなす。抗体分子は、この場合も検出可能な標識にコンジュゲートしていてもよい。
本発明において、フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂ、テネイシン−ＣのＡ１ドメイン、テネイシン−ＣのＤドメイン及びＭＭＰ−３は、ヒトフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、ヒトフィブロネクチンのＥＤ−Ｂ、ヒトテネイシン−ＣのＡ１ドメイン、ヒトテネイシン−ＣのＤドメイン又はヒトＭＭＰ−３であるのが好ましい。
抗ＩＩＩＣＳ抗体ＳＷ０１及び抗ＭＭＰ３ ＣＨ０１抗体は、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６７３０９号に初めて開示された。抗ＥＤＢ抗体Ｌ１９は、例えば国際公開第２０１３／０４５１２５号に開示されている。テネイシンＣ抗体Ｆ１６の抗ドメインＡ１は、国際公開第２０１１／００１２７６号に開示されている。テネイシンＣ抗体Ｇ１１の抗ドメインＣは、特許文献４に開示されている。本明細書に報告される実施例において対照として使用される抗鶏卵リゾチーム（ＨＥＬ）抗体ＫＳＦは、Frey et al., 3, 468-478, Integr Biol (2011)に開示されている。
このため、本発明に使用されるフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォームに結合する抗体分子は、配列番号３７に規定される抗体分子ＳＷ０１のＨＣＤＲ３、又は３個以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入を有する配列番号３７に規定されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み得る。加えて、抗体分子は配列番号３５、３６及び３８〜４０にそれぞれ規定されるＳＷ０１抗体分子のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。例えば、抗体分子は、配列番号３３及び３４にそれぞれ規定されるＳＷ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。代替的には、抗体分子は、配列番号３３及び７３にそれぞれ規定されるＳＷ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。
同様に、本発明に使用されるＭＭＰ３に結合する抗体分子は、配列番号４５に規定される抗体分子ＣＨ０１のＨＣＤＲ３、又は３個以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入を有する配列番号４５に規定されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み得る。加えて、抗体分子は配列番号４３、４４及び４６〜４８にそれぞれ規定されるＣＨ０１抗体分子のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。例えば、抗体分子は、配列番号４１及び４２にそれぞれ規定されるＣＨ０１抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。
本発明に使用されるテネイシン−ＣのＡ１ドメインに結合する抗体分子は、本明細書に記載されるＦ１６抗体のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。一例では、抗体は、本明細書に記載されるＦ１６抗体のＶＨ及び／又はＶＬドメインを含み得る。具体的には、本発明に使用されるテネイシン−ＣのＡ１ドメインに結合する抗体分子は、配列番号６１に規定される抗体分子Ｆ１６のＨＣＤＲ３、又は３個以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入を有する配列番号６１に規定されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み得る。加えて、抗体分子は配列番号５９、６０及び６２〜６４にそれぞれ規定されるＦ１６抗体分子のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。例えば、抗体分子は、配列番号５７及び５８にそれぞれ規定されるＦ１６抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。代替的には、抗体分子は、配列番号５７及び８８にそれぞれ規定されるＦ１６抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。
同様に、本発明に使用されるフィブロネクチンのＥＤ−Ｂに結合する抗体分子は、本明細書に記載されるＬ１９抗体のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。一例では、抗体は、本明細書に記載されるＬ１９抗体のＶＨ及び／又はＶＬドメインを含み得る。具体的には、本発明に使用されるフィブロネクチンのＥＤ−Ｂに結合する抗体分子は、配列番号５３に規定される抗体分子Ｌ１９のＨＣＤＲ３、又は３個以下のアミノ酸置換、欠失若しくは挿入を有する配列番号５３に規定されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含み得る。加えて、抗体分子は配列番号５１、５２及び５４〜５６にそれぞれ規定されるＬ１９抗体分子のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含み得る。例えば、抗体分子は、配列番号４９及び５０にそれぞれ規定されるＬ１９抗体分子のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含み得る。
抗体分子は、本明細書で言及される場合、任意の好適なフォーマットであり得る。多くの抗体分子フォーマットが当該技術分野で既知であり、ＩｇＧ等の完全な抗体分子の分子及び一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）等の抗体分子フラグメントの両方が含まれる。本明細書で使用される「抗体分子」という用語は、完全な抗体分子の分子及び抗体分子フラグメント、特に抗原結合フラグメントの両方を包含する。抗体分子は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含むのが好ましい。好ましい実施の形態では、抗体分子はｓｃＦｖである若しくはそれを含むか、小免疫タンパク質（ＳＩＰ）であるか、ダイアボディであるか、又は（完全な）ＩｇＧ分子である。
本発明の又は本発明に使用される抗体分子は、本明細書に開示又は記載される抗体のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列をフレームワーク内に含むのが好ましい。フレームワークは、好ましくはヒトフレームワーク、具体的にはヒト生殖細胞フレームワークである。このため、ＶＨ及び／又はＶＬドメインフレームワークは、本明細書で言及される場合、好ましくはヒトフレームワーク、より好ましくはヒト生殖細胞フレームワークである。例えば、ＶＨドメインフレームワークはＤＰ４７とすることができ、及び／又はＶＬドメインフレームワークはＤＰＬ１６又はＤＰＫ２２とすることができる。本実施例に用いられるＣＴ０１、ＣＰＲ０１、ＣＰＲ０１．１、ＦＦ０２及びＦＦ０１抗体は、ＶＨドメインヒトフレームワーク生殖細胞配列ＤＰ４７及びＶＬドメインヒトフレームワーク生殖細胞配列ＤＰＬ１６を含み、本実施例に用いられる抗体２ＰＣ１０は、ＶＨドメインヒトフレームワーク生殖細胞配列ＤＰ４７及びＶＬドメインヒトフレームワーク生殖細胞配列ＤＰＫ２２を含むものであった。
本発明の抗体分子を分子にコンジュゲートし、コンジュゲートを得ることができる。抗体分子にコンジュゲートする分子の選択は、意図されるコンジュゲートの用途によって決まる。例えば、コンジュゲートが炎症性障害又は自己免疫疾患の治療を対象とする場合、コンジュゲートは、本発明の又は本発明に使用される抗体分子と、免疫抑制剤又はサイトカイン等の抗炎症剤とを含み得る。コンジュゲートが疾患又は障害の画像化、検出又は診断への使用を対象とする場合、コンジュゲートは、本発明の又は本発明に使用される抗体分子と放射性同位体、例えば非治療用放射性同位体等の検出可能な標識とを含み得る。抗体分子にコンジュゲートする分子に応じて、コンジュゲートは一本鎖タンパク質であっても又は一本鎖タンパク質を含んでいてもよい。コンジュゲートが一本鎖タンパク質である場合、全タンパク質を単一ポリペプチド又は融合タンパク質として発現させることができる。この場合、ペプチドリンカーを用いて分子を抗体分子にコンジュゲートすることができる。融合タンパク質は、単一種からなることから、作製及び精製がより容易であるという利点を有する。これにより臨床グレード材料の作製が容易となる。代替的には、切断可能なリンカーを用いて分子を抗体分子にコンジュゲートすることができる。
本発明は、本発明の抗体及びコンジュゲートをコードする単離核酸も提供する。かかる核酸を当該技術分野で既知の方法を用いて調製することは、当業者には困難ではない。単離核酸を使用して、本発明の抗体分子又はコンジュゲートを例えば細菌、酵母、昆虫又は哺乳動物宿主細胞における発現によって発現させることができる。好ましい宿主細胞は、大腸菌（E. coli）である。核酸は概して、発現用の組み換えベクターの形態で提供される。かかる核酸及びベクターを含むｉｎ ｖｉｔｒｏ宿主細胞は、本発明の抗体及びコンジュゲートの発現へのそれらの使用と同様、本発明の一部であり、これを続いて細胞培養物から精製し、任意に医薬組成物へと配合することができる。
本発明の抗体分子又はコンジュゲートは、例えば医薬組成物中で提供することができ、単独で又は１つ以上の更なる治療剤若しくは治療的に許容可能な賦形剤と組み合わせて、本明細書に記載される医学的用途に用いることができる。代替的には、本発明の抗体分子又はコンジュゲートは、診断用組成物中で提供することができ、本明細書に記載される診断用途に用いることができる。
本発明は、療法によりヒト又は動物の身体を治療する方法に使用される本発明の抗体分子又はコンジュゲートにも関する。例えば、本発明の抗体分子又はコンジュゲートは、患者において炎症性障害、好ましくは炎症性腸障害又は自己免疫疾患を治療する方法に使用することができる。本発明は、患者において炎症性障害、好ましくは炎症性腸障害及び／又は自己免疫疾患を治療する方法であって、患者に本発明の抗体分子又はコンジュゲートを治療有効量、投与することを含む、方法にも関する。炎症性障害、好ましくは炎症性腸障害又は自己免疫疾患の治療のための薬剤の製造への本発明の抗体分子又はコンジュゲートの使用も本発明の一部をなす。幾つかの疾患が炎症性障害及び自己免疫疾患の両方として記載される場合もある。これには、好ましくは本発明の抗体を用いて治療又は診断することができるＩＢＤが含まれる。
本発明は、患者における炎症性障害の部位、好ましくは炎症性腸障害の部位又は自己免疫疾患の部位に分子を送達する方法に使用される本発明の抗体分子に更に関する。本発明は、患者における炎症性障害の部位、好ましくは炎症性腸障害の部位又は自己免疫疾患の部位に分子を送達する方法であって、患者に本発明の抗体分子を投与することを含み、抗体分子が分子にコンジュゲートしている、方法にも関する。患者における炎症性障害の部位、好ましくは炎症性腸障害の部位又は自己免疫疾患の部位への分子の送達のための薬剤の製造への本発明の抗体分子の使用も本発明の一部をなす。
本発明は、患者における炎症性障害、好ましくは炎症性腸障害又は自己免疫疾患を画像化、検出又は診断する方法に使用される本発明の抗体分子であって、抗体分子が検出可能な標識に任意にコンジュゲートしている、抗体分子にも関する。本発明は、患者における炎症性障害、好ましくは炎症性腸障害又は自己免疫疾患を画像化、検出又は診断する方法であって、患者に本発明の抗体分子を投与することを含み、抗体分子が検出可能な標識に任意にコンジュゲートしている、方法に更に関する。炎症性障害、好ましくは炎症性腸障害又は自己免疫疾患の画像化、検出又は診断のための診断薬の製造への本発明の抗体の使用も本発明の一部をなす。抗体分子はこの場合も、検出可能な標識にコンジュゲートすることができる。
患者は、本明細書で言及される場合、ヒト患者であるのが好ましい。
ＩＢＤは、本明細書で言及される場合、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）又はクローン病であるのが好ましい。
図１Ａは、抗体ＣＴ０１のＢｉａｃｏｒｅ特性評価を示し、ヒトリゾチームへのその結合が確認される。 図１Ｂは抗体２ＰＣ１０のＢｉａｃｏｒｅ特性評価を示し、ＴＩＭＰ−１へのその結合が確認される。 図１Ｃは、抗体ＣＰＲ０１のＢｉａｃｏｒｅ特性評価を示し、ヒトテネイシン−ＣのドメインＤへのその結合が確認される。 図１Ｄは、抗体ＣＰＲ０１のＢｉａｃｏｒｅ特性評価を示し、ネズミテネイシン−ＣのドメインＢＣＤへのその結合が確認される。 図１Ｅは、抗体ＣＰＲ０１．１のＢｉａｃｏｒｅ特性評価を示し、ヒトテネイシン−ＣのドメインＤへのその結合が確認される。 図１Ｆは、抗体ＣＰＲ０１．１のＢｉａｃｏｒｅ特性評価を示し、ネズミテネイシン−ＣのドメインＢＣＤへのその結合が確認される。 図２は種々の抗体を用いて潰瘍性大腸炎患者の切片において行った免疫蛍光実験を示す図である。図２Ａは、抗ＩＩＩＣＳ抗体ＳＷ０１による新生血管構造の強い陽性染色を示す。 図２Ｂは、抗ＩＩＩＣＳ抗体ＳＷ０１により観察される染色ほど強くはないが、抗ＥＤＢ抗体Ｌ１９による新生血管構造の陽性染色を示す。 図２Ｃは、抗Ａ１ＴＮＣ抗体Ｆ１６による新生血管構造の陽性染色を示す。Ｆ１６抗体により観察される染色は、抗体Ｌ１９により観察される染色と同様であり、抗ＩＩＩＣＳ抗体ＳＷ０１により観察される染色ほど強くない。 図２Ｄは、抗ＣＴＮＣ抗体Ｇ１１が新生血管構造を染色しなかったことを示す。 図２Ｅは、抗ＭＭＰ３抗体ＣＨ０１による新生血管構造の陽性染色を示すが、観察される染色は、この場合も抗ＩＩＩＣＳ抗体ＳＷ０１により観察される染色ほど強くはなかった。 図２Ｆは、抗鶏卵リゾチーム（ＨＥＬ）抗体ＫＳＦが新生血管構造を染色しないことを示す。鶏卵リゾチームが哺乳動物組織において発現しないことから、ＫＳＦ抗体を陰性対照として使用した。 抗ヒトリゾチーム抗体ＣＴ０１を用いて培養ＨＴ２９細胞及びＨｅＬＡ細胞において行った免疫蛍光実験の結果を示す図である。図３Ａは、抗ヒトリゾチーム抗体ＣＴ０１がＨＴ２９細胞を明らかに染色することを実証するが、図３Ｃは、陰性対照抗体である抗鶏卵リゾチームＫＳＦがそうではないことを示す。図３Ｂは、図３Ａに示す細胞の核のＤＡＰＩ染色を示し、図３Ｄは、図３Ｃに示す細胞の核の染色を示す。 大腸炎を有する２人の患者及びクローン病を有する２人の患者に由来する大腸炎／クローン病生検サンプルに対して行った免疫蛍光実験の結果を示す図である。切片をＳＩＰフォーマットの抗ヒトリゾチーム抗体であるＣＴ０１抗体でプロービングした場合、上皮の蛍光染色は明らかに視認可能であるが、同じＳＩＰフォーマットの陰性対照抗体である抗鶏卵リゾチームＫＳＦでプロービングした場合には視認可能でない。抗ＣＤ３１抗体（内皮マーカーに特異的）を陽性対照として使用した。核のＤＡＰＩ染色も行った。図４Ａ及び図４Ｂは、大腸炎を有する患者ｎ°１のものであり、図４Ｃ及び図４Ｄは、大腸炎を有する患者ｎ°２のものである。図４Ｅ及び図４Ｆは、クローン病を有する患者ｎ°１のものであり、図４Ｇ及び図４Ｈは、クローン病を有する患者ｎ°２のものである。 大腸炎を有するマウスの腸から採取したサンプルに対して行った免疫蛍光実験の結果を示す図である。抗ヒトリゾチーム抗体ＣＴ０１がネズミリゾチームと交差反応するか否かを確認するために実験を行った。切片をＳＩＰフォーマットのＣＴ０１抗体でプロービングした場合、蛍光染色は明らかに視認可能であるが、同じＳＩＰフォーマットの陰性対照抗体である抗鶏卵リゾチームＫＳＦでプロービングした場合には視認可能でない。抗ＣＤ３１抗体（内皮マーカーに特異的）を陽性対照として使用した。核のＤＡＰＩ染色も行った。 ＦＦ０１抗体のＥＬＩＳＡ特性評価を示す図であり、ヒト好中球エラスターゼへのそれらの結合が確認される。図６Ａは、ヒト好中球エラスターゼへのＦＦ０１抗体の結合を示す。「ｕｇ／ｍｌ」は、μｇ／ｍｌを指す。ｙ軸は、４５０ｎＭで測定される光学密度（ＯＤ）を示す。 ＦＦ０１抗体のＥＬＩＳＡ特性評価を示す図であり、ヒト好中球エラスターゼへのそれらの結合が確認される。図６Ｂは、ヒト好中球エラスターゼへのＦＦ０１抗体の結合を示す。「ｕｇ／ｍｌ」は、μｇ／ｍｌを指す。ｙ軸は、４５０ｎＭで測定される光学密度（ＯＤ）を示す。 ＦＦ０２抗体のＥＬＩＳＡ特性評価を示す図であり、ヒト好中球エラスターゼへのそれらの結合が確認される。図６Ｃは、ヒト好中球エラスターゼへのＦＦ０２抗体の結合を示す。「ｕｇ／ｍｌ」は、μｇ／ｍｌを指す。ｙ軸は、４５０ｎＭで測定される光学密度（ＯＤ）を示す。 ＦＦ０２抗体のＥＬＩＳＡ特性評価を示す図であり、ヒト好中球エラスターゼへのそれらの結合が確認される。図６Ｄは、ヒト好中球エラスターゼへのＦＦ０２抗体の結合を示す。「ｕｇ／ｍｌ」は、μｇ／ｍｌを指す。ｙ軸は、４５０ｎＭで測定される光学密度（ＯＤ）を示す。 クローン病及び潰瘍性大腸炎を有する患者から採取した切片に対してＦＦ０２抗体を用いて行った免疫蛍光実験の結果を示す図である。 大腸炎を有するマウスの腸から採取した切片に対してＣＰＲ０１．１抗体を用いて行った免疫蛍光実験の結果を示す図である。ＣＰＲ０１．１（図８Ａ）で染色した動物の結腸において、無関連抗体（ＫＳＦ）（図８Ｂ）を用いて観察されるシグナルと比較して、より強い強度のシグナルを検出することができる。抗ＣＤ３１抗体（内皮マーカーに特異的）を陽性対照として使用した。核のＤＡＰＩ染色も行った。 大腸炎を有するマウスの腸から採取した切片に対してＣＰＲ０１．１抗体を用いて行った免疫蛍光実験の結果を示す図である。ＣＰＲ０１．１（図８Ａ）で染色した動物の結腸において、無関連抗体（ＫＳＦ）（図８Ｂ）を用いて観察されるシグナルと比較して、より強い強度のシグナルを検出することができる。抗ＣＤ３１抗体（内皮マーカーに特異的）を陽性対照として使用した。核のＤＡＰＩ染色も行った。 ＰＣ−３異種移植片を担持するマウスにおけるＣＰＲ０１．１のｉｎ ｖｉｖｏ近赤外蛍光画像化を示す図である。皮下ＰＣ３腫瘍を担持するマウスに、ＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ（Licor）で標識したＣＰＲ０１．１（２００μＬ）を静脈内注射した。７２時間後に、蛍光画像をＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ画像化システムで取得した。次いで、マウスを頸椎脱臼により屠殺し、同じ設定を用いて摘出臓器の画像を取得した。画像は、腫瘍におけるＣＰＲ０１．１の優先的かつ選択的な蓄積を示す。健常臓器は、ＣＰＲ０１．１の任意の取込みについて実質的に陰性である。肝臓において記録されたシグナルは、近赤外色素で標識したＩｇＧの予想される肝排出経路と一致する。 ヒト異種移植片黒色腫Ａ３７５（図１０Ａ）に由来する切片でのテネイシン−ＣのＤドメインに対するＣＰＲ０１．１抗体による免疫蛍光実験の結果を示す図である。抗ＣＤ３１抗体（内皮マーカーに特異的）を陽性対照として使用した。核のＤＡＰＩ染色も行った。抗鶏卵リゾチーム抗体ＳｃＦｖ（ＫＳＦ）をアイソタイプ陰性対照として染色に使用し、抗フィブロネクチンＥＤＡドメイン抗体ＳＩＰ（Ｆ８）を陽性対照として使用した。 ヒト異種移植片膠芽腫Ｕ８７（図１０Ｂ）に由来する切片でのテネイシン−ＣのＤドメインに対するＣＰＲ０１．１抗体による免疫蛍光実験の結果を示す図である。抗ＣＤ３１抗体（内皮マーカーに特異的）を陽性対照として使用した。核のＤＡＰＩ染色も行った。抗鶏卵リゾチーム抗体ＳｃＦｖ（ＫＳＦ）をアイソタイプ陰性対照として染色に使用し、抗フィブロネクチンＥＤＡドメイン抗体ＳＩＰ（Ｆ８）を陽性対照として使用した。 ネズミ異種移植片奇形癌Ｆ９（図１０Ｃ）に由来する切片でのテネイシン−ＣのＤドメインに対するＣＰＲ０１．１抗体による免疫蛍光実験の結果を示す図である。抗ＣＤ３１抗体（内皮マーカーに特異的）を陽性対照として使用した。核のＤＡＰＩ染色も行った。抗鶏卵リゾチーム抗体ＳｃＦｖ（ＫＳＦ）をアイソタイプ陰性対照として染色に使用し、抗フィブロネクチンＥＤＡドメイン抗体ＳＩＰ（Ｆ８）を陽性対照として使用した。抗体抗テネイシン−Ｃ ＤドメインＳＩＰ（ＣＰＲ０１．１）は、ネズミ及びヒトの両方の腫瘍細胞株に由来する異種移植片腫瘍を染色することが可能であった。
本発明は、記載の態様及び好ましい特徴の組合せを、かかる組合せが明らかに許容不可能であるか又は明白に回避されない限りにおいて含む。
一態様では、本発明は、（ｉ）ヒトリゾチーム、（ｉｉ）好中球エラスターゼ、（ｉｉｉ）組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１（ＴＩＭＰ１）又は（ｉｖ）テネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体に関する。
抗体分子
「抗体分子」という用語は、天然であるか、又は部分的若しくは完全に合成的に作製されるかにかかわらず、免疫グロブリンを記載するものである。この用語は、抗体結合ドメインであるか又はそれと実質的に相同な結合ドメインを有する任意のポリペプチド又はタンパク質も包含する。抗体の例は、免疫グロブリンアイソタイプ及びそれらのアイソタイプサブクラス、一本鎖ダイアボディ等の抗原結合ドメインを含むフラグメントである。抗体分子又はそのフラグメントは、ヒト又はヒト化のものであってもよい。モノクローナル抗体及び他の抗体、並びに組み換えＤＮＡ技術の使用法を採用して、元の抗体の特異性を保持する他の抗体又はキメラ分子を作製することが可能である。かかる技法は、免疫グロブリン可変領域又は抗体のＣＤＲをコードするＤＮＡを、異なる免疫グロブリンの定常領域又は定常領域＋フレームワーク領域に導入することを含み得る。例えば、欧州特許出願公開第１８４１８７号、英国特許出願公開第２１８８６３８号又は欧州特許出願公開第２３９４００号を参照されたい。抗体を産生するハイブリドーマ又は他の細胞を、産生される抗体の結合特異性を変化させる場合も又は変化させない場合もある遺伝子突然変異又は他の変化に供することができる。
抗体を多数の方法で修飾することができるため、「抗体分子」という用語は、天然であるか、又は完全若しくは部分的に合成されているかにかかわらず、免疫グロブリン結合ドメインを含む任意のポリペプチドを含む、抗体フラグメント、抗体の誘導体、機能的等価物及び相同体を包含すると解釈すべきである。したがって、別のポリペプチドに融合した免疫グロブリン結合ドメイン又は等価物を含むキメラ分子が含まれる。キメラ抗体のクローニング及び発現は、欧州特許出願公開第０１２０６９４号及び欧州特許出願公開第０１２５０２３号に記載されている。
「特異的な」という用語は、抗体分子がその特異的な結合パートナー（複数の場合もある）以外の分子に対して任意の顕著な結合を示さない状況を指すために使用され得る。この用語は、例えば抗体分子の抗原結合部位が多数の抗原によって保有される特定のエピトープに特異的である場合にも適用することができ、この場合、抗原結合部位を保有する抗体分子は、エピトープを保有する様々な抗原に結合することが可能である。
抗体分子は、一価であっても又は二価であってもよく、すなわち２つの抗原結合部位を有していてもよい。抗体分子が二価である場合、２つの抗原結合部位は同一であっても又は異なっていてもよい。「抗原結合部位」は、一部又は全ての抗原に特異的に結合し、それに相補的な領域を含む抗体の部分を記載するものである。抗原が大きい場合、抗体分子は、抗原の特定の部分にのみ結合する可能性があり、この部分はエピトープと称される。抗原結合部位は、１つ以上の抗体可変ドメイン（例えば、ＶＨドメインからなる、いわゆるＦｄ抗体フラグメント）によって提示される場合がある。抗原結合部位は、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むのが好ましい。
ＶＨ及びＶＬは、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と称される、より保存的な領域が組み入れられた、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と称される超可変性の領域に更に細分することができる。各々のＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。ここで、重鎖の３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３」と称され、軽鎖の３つのＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは、抗原と特異的相互作用を形成する殆どの残基を含有する。
様々なシステムが抗体可変ドメイン内のＣＤＲ残基を定義するために用いられている。最も一般的に用いられているシステムは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａのシステムである。ＫａｂａｔのＣＤＲ定義（Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）は、抗体配列の可変性に基づく。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義（Chothia et al., "Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins", Journal of Molecular Biology, 196, 901-917 (1987)、Al-Lazikani et al., "Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins", Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997)）は、抗体の三次元構造及びＣＤＲループのトポロジーに基づく。Ｃｈｏｔｈｉａシステムによって定義されるＣＤＲは、ＨＣＤＲ１及びＨＣＤＲ２を除いてＫａｂａｔシステムによって定義されるＣＤＲと同一である。
本開示では、Ｋａｂａｔの定義をＨＣＤＲ２に用いる。
本開示では、先行特許開示と一致させるために、Ｌ１９及びＦ１６抗体（Ｌ１９：配列番号５１、Ｆ１６：配列番号５９）についてのＨＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔシステムを用いて定義される。他の抗体については、ＨＣＤＲ１はＣｈｏｔｈｉａシステムを用いて定義される。Ｋａｂａｔの定義によると、ＨＣＤＲ１は、重鎖の最初のシステインの後の８つの残基から始まるが、ＨＣＤＲ１のＣｈｏｔｈｉａの定義では、このシステインの後の３つの残基から始まる。ＨＣＤＲ１は、どちらのシステムにおいても同じ残基で終わる。例えば、ＣｈｏｔｈｉａシステムによるＣＴ０１、ＦＦ０１、ＦＦ０２、ＳＷ０１、ＣＰＲ０１及びＣＰＲ０１．１のＨＣＤＲ１はＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳであり、ＫａｂａｔシステムによるとＳＳＹＡＭＳである。ＣｈｏｔｈｉａシステムによるＣＨ０１のＨＣＤＲ１はＧＦＴＦＳＰＹＡＭＳであり、ＫａｂａｔシステムによるとＳＰＹＡＭＳである。また、Ｃｈｏｔｈｉａシステムによる２ＰＣ１０のＨＣＤＲ１はＧＦＴＦＳＳＡＡＭＳであり、ＫａｂａｔシステムによるとＳＳＡＡＭＳである。ＣｈｏｔｈｉａのＨＣＤＲ１の定義がこれらの抗体で好ましいが、本開示は、Ｋａｂａｔシステムによって定義されるＨＣＤＲ１を有するこれらの抗体も包含する。
本発明の抗体分子は抗体ＣＴ０１、抗体ＦＦ０１、抗体ＦＦ０２、抗体２ＰＣ１０又は抗体ＣＰＲ０１／ＣＰＲ０１．１のＨＣＤＲ３を含むのが好ましい。ＨＣＤＲ３は、抗体分子の特異性の決定において役割を果たすことが知られている（Segal et al., (1974), PNAS, 71:4298-4302、Amit et al., (1986), Science, 233:747-753、Chothia et al., (1987), J. Mol. Biol., 196:901-917、Chothia et al., (1989), Nature, 342:877-883、Caton et al., (1990), J. Immunol., 144:1965-1968、Sharon et al., (1990a), PNAS, 87:4814-4817、Sharon et al., (1990b), J. Immunol., 144:4863-4869、Kabat et al., (1991b), J. Immunol., 147:1709-1719）。
抗体分子は抗体ＣＴ０１、抗体ＦＦ０１、抗体ＦＦ０２、抗体２ＰＣ１０、抗体ＣＰＲ０１又は抗体ＣＰＲ０１．１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３を更に含んでいてもよい。
抗体は抗体ＣＴ０１、抗体ＦＦ０１、抗体ＦＦ０２、抗体２ＰＣ１０、抗体ＣＰＲ０１又は抗体ＣＰＲ０１．１のＶＨ及び／又はＶＬドメインを含んでいてもよい。
本発明の抗体分子は抗体ＣＴ０１、抗体ＦＦ０１、抗体ＦＦ０２、抗体２ＰＣ１０、抗体ＣＰＲ０１又は抗体ＣＰＲ０１．１のＶＨドメインに対して少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のうち１つの配列同一性を有するＶＨドメインを含んでいてもよい。
本発明の抗体分子は抗体ＣＴ０１、抗体ＦＦ０１、抗体ＦＦ０２、抗体２ＰＣ１０、抗体ＣＰＲ０１又は抗体ＣＰＲ０１．１のＶＬドメインに対して少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のうち１つの配列同一性を有するＶＬドメインを含んでいてもよい。
配列同一性は一般に、アルゴリズムＧＡＰ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ＧＣＧパッケージ、Accelerys Inc, San Diego USA）を参照して規定される。ＧＡＰは、マッチ数を最大にし、ギャップ数を最小にして２つの完全配列をアラインメントするためにＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムを用いる。概して、デフォルトパラメーターがギャップ生成ペナルティ＝１２及びギャップ伸長ペナルティ＝４で使用される。ＧＡＰの使用が好ましい場合もあるが、他のアルゴリズム、例えばＢＬＡＳＴ（Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 405-410の方法を用いる）、ＦＡＳＴＡ（Pearson and Lipman (1988) PNAS USA 85: 2444-2448の方法を用いる）、又はＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（Smith and Waterman (1981) J. Mol Biol. 147: 195-197）、又はAltschul et al. (1990)（上掲）のＴＢＬＡＳＴＮプログラムを、概してデフォルトパラメーターを用いて使用してもよい。特に、ｐｓｉ−Ｂｌａｓｔアルゴリズム（Nucl. Acids Res. (1997) 25 3389-3402）を使用することができる。
これらのＶＨドメイン及びＶＬドメイン並びにＣＤＲの変異体を、本明細書に記載されるように使用される抗体分子中に用いてもよい。好適な変異体は、配列変化又は突然変異の方法及びスクリーニングを用いて得ることができる。
本明細書に記載されるように使用される特定の変異体は、１個以上のアミノ酸配列変化（アミノ酸残基の付加、欠失、置換及び／又は挿入）、場合によっては約２０個未満の変化、約１５個未満の変化、約１０個未満の変化、又は約５個未満、４個、３個、２個若しくは１個の変化を含み得る。
変化は、１つ以上のフレームワーク領域及び／又は１つ以上のＣＤＲ内に生じさせることができる。特に、変化はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／又はＨＣＤＲ３中に生じさせることができる。
抗体分子は、全抗体又はそのフラグメント、特にその抗原結合フラグメントであり得る。
全抗体はＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭを含む。全抗体はＩｇＧであるのが好ましい。
全抗体の抗原結合フラグメントとしては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｉｖ）ＶＨ又はＶＬドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ward et al. (1989) Nature 341, 544-546、McCafferty et al., (1990) Nature, 348, 552-554、Holt et al. (2003) Trends in Biotechnology 21, 484-490）、（ｖ）単離ＣＤＲ領域、（ｖｉ）２つの連結したＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｖｉｉ）２つのドメインが会合して抗原結合部位を形成することを可能にするペプチドリンカーによってＶＨドメイン及びＶＬドメインが連結した一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（Bird et al. (1988) Science, 242, 423-426、Huston et al. (1988) PNAS USA, 85, 5879-5883）、（ｖｉｉｉ）二重特異性一本鎖Ｆｖ二量体（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５号）、並びに（ｉｘ）遺伝子融合によって構成される多価又は多特異性フラグメントである「ダイアボディ」（国際公開第２０１３／０１４１４９号、国際公開第９４／１３８０４号、Holliger et al. (1993a), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 6444-6448）が挙げられる。Ｆｖ、ｓｃＦｖ又はダイアボディ分子は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを連結するジスルフィド架橋を組み込むことによって安定化することができる（Reiter et al. (1996), Nature Biotech, 14, 1239-1245）。ＣＨ３ドメインに接合したｓｃＦｖを含むミニボディ（Minibodies）を作製することもできる（Hu et al. (1996), Cancer Res., 56(13):3055-61）。結合フラグメントの他の例は、抗体ヒンジ領域に由来する１つ以上のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端での少数の残基の付加によりＦａｂフラグメントとは異なるＦａｂ’、及び定常ドメインのシステイン残基（複数の場合もある）が遊離チオール基を有するＦａｂ’フラグメントであるＦａｂ’−ＳＨである。
例えば、Li et al., (1997), Protein Engineering, 10: 731-736に記載されているように、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）がミニ免疫グロブリン又は小免疫タンパク質（ＳＩＰ）内に含まれていてもよい。ＳＩＰは、ホモ二量体ミニ免疫グロブリン抗体分子を形成するヒトＩｇＥ分泌型アイソフォームＩｇＥ−Ｓ２のＣＨ４ドメイン（εＳ２−ＣＨ４；Batista et al., (1996), J. Exp. Med., 184: 2197-205）に融合したｓｃＦｖ分子を含んでいてもよい。
抗体分子がダイアボディである場合、ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、５〜１２アミノ酸リンカーによって連結するのが好ましい。ダイアボディは、会合して二量体を形成する２つのＶＨ−ＶＬ分子を含む。各々のＶＨ−ＶＬ分子のＶＨドメイン及びＶＬドメインは、５〜１２アミノ酸リンカーによって連結するのが好ましい。例えば、ＶＨドメイン及びＶＬドメインは５、６、７、８、９、１０、１１又は１２アミノ酸長のアミノ酸リンカーによって連結することができる。アミノ酸リンカーは５アミノ酸長であるのが好ましい。好適なリンカー配列は当該技術分野で既知であり、配列番号６８に規定されるリンカー配列を含む。
抗体分子がｓｃＦｖである場合、抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインは、１４〜２０アミノ酸リンカーによって連結するのが好ましい。例えば、ＶＨドメイン及びＶＬドメインは１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０アミノ酸長のアミノ酸リンカーによって連結することができる。好適なリンカー配列は当該技術分野で既知であり、配列番号６７に規定されるリンカー配列を含む。
抗体が小免疫タンパク質（ＳＩＰ）である場合、ｓｃＦｖ抗体のＶＬドメインは、５〜２０アミノ酸リンカー、より好ましくは５〜１０アミノ酸リンカーを介してヒトＩｇＥのＣＨ４ドメインに連結するのが好ましい。好適なリンカー配列は当該技術分野で既知であり、配列番号８３に規定されるリンカー配列を含む。ヒトＩｇＥのＣＨ４ドメインは、配列番号８４に規定される配列、又は配列番号８４に規定される配列に対して少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％のうち１つの配列同一性を有する配列を有するのが好ましい。
抗体分子は一本鎖Ｆｖ、小免疫タンパク質、ダイアボディ又は（全）ＩｇＧ分子を含むか又はそれからなるのが好ましい。
コンジュゲート
本発明のコンジュゲートは、本発明の抗体分子と治療剤又は診断剤とを含む。治療剤は、免疫抑制剤又はサイトカイン等の抗炎症剤であり得る。
診断剤は放射性同位体、例えば非治療用放射性同位体等の検出可能な標識であり得る。
本発明の結合メンバーにコンジュゲートすることができる放射性同位体としては、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２０３Ｐｂ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、４７Ｓｃ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、８８Ｙ、９０Ｙ、１２１Ｓｎ、１６１Ｔｂ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、１０５Ｒｈ、１７７Ｌｕ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８Ｆ、２１１Ａｔ及び２２５Ａｃ等の同位体が挙げられる。１８Ｆ及び１２４Ｉ等の陽電子放出体又は９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ及び１２３Ｉ等のγ放出体を診断用途（例えば、ＰＥＴ）に使用するのが好ましく、１３１Ｉ、９０Ｙ及び１７７Ｌｕ等のβ放出体を治療用途に使用するのが好ましい。２１１Ａｔ及び２２５Ａｃ等のα放出体を療法に使用することもできる。一例では、特定の結合メンバーを１７７Ｌｕ又は９０Ｙにコンジュゲートすることができる。
特定の結合メンバーは、ペプチド結合又はリンカーを用いて、すなわち上記分子と特定の結合メンバー又はそのポリペプチド鎖構成成分とを含む融合ポリペプチドにおいて免疫抑制剤若しくは抗炎症剤、又は検出可能な標識にコンジュゲートすることができる。他のコンジュゲーション手段としては、化学コンジュゲーション、特に二官能性試薬を用いた（例えば、ＤＯＵＢＬＥ−ＲＥＡＧＥＮＴＳ（商標） Ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔｓ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｇｕｉｄｅ（Pierce）を用いた）架橋が挙げられる。
リンカー
抗体分子と治療剤又は診断剤とを、例えば任意の好適な化学結合を介して又はリンカー、例えばペプチドリンカーを介して互いに直接接続することができる。
ペプチドリンカーは短くてもよい（２〜２０、好ましくは２〜１５残基のアミノ酸ストレッチ）。ペプチドリンカー配列の好適な例は、当該技術分野で既知である。１つ以上の異なるリンカーを使用してもよい。リンカーは約５アミノ酸長であり得る。
化学結合は、例えば共有結合又はイオン結合であり得る。共有結合の例としては、ペプチド結合（アミド結合）及びジスルフィド結合が挙げられる。例えば、抗体分子と治療剤又は診断剤とを、例えばペプチド結合（アミド結合）によって共有結合的に連結することができる。このため、抗体分子と治療剤又は診断剤とを、一本鎖ポリペプチドとして作製（分泌）することができる。抗体分子又は治療剤若しくは診断剤を形成する個々の構成成分は、例えば任意の好適な化学結合を介して又はリンカー、例えばペプチドリンカーを介して直接接続することもできる。抗体分子において連結することができる個々の構成成分の例は、ＣＤＲ又はＶＨ若しくはＶＬ配列である。
例えば、免疫抑制剤若しくはサイトカイン等の抗炎症剤、又は検出可能な標識を、アミノ酸リンカーを介して又は直接、抗体分子のＮ末端又はＣ末端にコンジュゲートすることができる。例えば、抗体分子がｓｃＦｖであるか又はｓｃＦｖを含む場合、免疫抑制剤若しくは抗炎症剤、又は検出可能な標識を、アミノ酸リンカーを介して又は直接、ｓｃＦｖのＶＨドメインのＮ末端又はｓｃＦｖのＶＬドメインのＣ末端にコンジュゲートすることができる。抗体分子がダイアボディ（２つのｓｃＦｖ分子を含む）である場合、免疫抑制剤若しくは抗炎症剤、又は検出可能な標識を、アミノ酸リンカーを介して又は直接、ダイアボディを構成する２つのｓｃＦｖのＶＨドメインの一方若しくは両方のＮ末端、又はＶＬドメインの一方若しくは両方のＣ末端にコンジュゲートすることができる。
治療及び診断の方法
本発明の抗体分子又はコンジュゲートは、ヒト又は動物の身体の治療方法、例えば患者に抗体分子又はコンジュゲートを投与することを含む、患者（通例、ヒト患者）における疾患又は障害の治療（予防的治療を含み得る）の方法に使用することができる。
したがって、かかる本発明の態様は、本発明の抗体分子又はコンジュゲートを投与することを含む治療方法、病態又は疾患の治療のためのかかる抗体分子又はコンジュゲートを含む医薬組成物、及び本発明の抗体分子又はコンジュゲートと生理学的に許容可能な担体又は賦形剤とを配合することを含む薬剤又は医薬組成物を作製する方法を提供する。
本明細書に記載される抗体分子又はコンジュゲートは、患者における炎症性障害、好ましくは炎症性腸障害を治療するか又は自己免疫疾患を治療する方法に使用することができる。該方法は、治療剤をｉｎ ｖｉｖｏ新生血管に標的化することを含み得る。治療剤は、問題となる疾患又は障害の治療に好適な本明細書で論考される任意の治療剤であり得る。
治療剤を患者の新生血管に標的化することによって、患者において炎症性障害、好ましくは炎症性腸障害を治療するか又は自己免疫疾患を治療する方法であって、患者に本明細書に記載される抗体分子又はコンジュゲートを治療有効量、投与することを含む、方法も企図される。
本明細書に記載される抗体分子又はコンジュゲートは、患者における疾患又は障害を画像化、検出又は診断する方法にも使用することができる。患者に本明細書に記載される抗体又はコンジュゲートを投与することを含む、疾患又は障害を画像化、検出又は診断する方法が同様に企図される。疾患又は障害は炎症性障害、好ましくは炎症性腸障害又は自己免疫疾患であり得る。該方法は、検出可能な標識等の診断剤をｉｎ ｖｉｖｏ新生血管に標的化することを含み得る。
「炎症性疾患及び／又は障害」は、炎症を伴う及び／又は炎症を特徴とする疾患及び／又は障害を指す。炎症性疾患及び／又は障害は、血管新生と関連する及び／又は血管新生を特徴とするのが好ましい。炎症性疾患及び／又は障害は、新生血管がフィブロネクチンのＥＤ−Ａアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂアイソフォーム、及び／又は代替的にはスプライステネイシン−Ｃを発現する、血管新生を特徴とする炎症性疾患及び／又は障害であり得る。
自己免疫疾患は、血管新生と関連する及び／又は血管新生を特徴とするのが好ましい。自己免疫疾患は、新生血管がフィブロネクチンのＥＤ−Ａアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂアイソフォーム、及び／又は代替的にはスプライステネイシン−Ｃを発現する、血管新生を特徴とする自己免疫疾患であり得る。自己免疫疾患は炎症性自己免疫疾患、すなわち炎症と関連する及び／又は炎症を特徴とする自己免疫疾患であり得る。炎症性自己免疫疾患は、特に患者における炎症部位でのフィブロネクチンのＥＤ−Ａアイソフォーム、フィブロネクチンのＥＤ−Ｂアイソフォーム、及び／又は代替的にはスプライステネイシンＣの発現を特徴とする任意の炎症性自己免疫疾患であり得る。自己免疫疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、子宮内膜症、自己免疫性糖尿病（１型糖尿病等）、乾癬、乾癬性関節炎及び歯周炎からなる群から選択することができる。自己免疫疾患は、ＩＢＤであるのが好ましい。
炎症性腸疾患は、結腸及び小腸を侵す炎症病態群である。主要なＩＢＤタイプはクローン病及び潰瘍性大腸炎であり、他のＩＢＤタイプとしては、膠原線維性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置（diversion）大腸炎、ベーチェット病及び分類不能大腸炎が挙げられる。クローン病は胃腸管の任意の部分を侵す可能性があるが、潰瘍性大腸炎は通例、結腸及び直腸に限られる。
ＩＢＤは、本明細書で言及される場合、クローン病、潰瘍性大腸炎、膠原線維性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病又は分類不能大腸炎であり得る。特に、本明細書で使用されるクローン病、潰瘍性大腸炎、膠原線維性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病及び分類不能大腸炎という用語は、それぞれ活動性クローン病、活動性潰瘍性大腸炎、活動性膠原線維性大腸炎、活動性リンパ球性大腸炎、活動性虚血性大腸炎、活動性空置大腸炎及び活動性分類不能大腸炎を指す場合がある。
炎症性障害又は自己免疫疾患は、潰瘍性大腸炎又はクローン病等の炎症性腸疾患であるのが好ましい。
本発明の別の態様は、癌等の増殖性障害の治療に使用される本明細書に記載のテネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子を提供する。
本発明の別の態様は、癌等の増殖性障害を治療する方法であって、本明細書に記載されるテネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子を、それを必要とする個体に投与することを含む、方法を提供する。個体は、ヒトであるのが好ましい。
本発明の別の態様は、個体における癌等の増殖性障害を診断する方法であって、本明細書に記載されるテネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子を個体に投与することと、個体における抗体分子の結合を検出することとを含む、方法を提供する。
本発明の他の態様は、癌等の増殖性障害を治療又は診断する方法に使用される本明細書に記載のテネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子、及び癌等の増殖性障害を治療又は診断する方法に使用される薬剤の製造における本明細書に記載される抗体分子の使用を提供する。
テネイシン−ＣのＤドメインに結合する好ましい抗体分子は上に記載されており、ＣＰＲ０１．１が含まれる。
テネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子を用いた治療に好適な個体は増殖性障害、好ましくは癌を有し得る。
増殖性障害は、細胞の成長及び増殖の増大に起因するか又はそれを特徴とし、前悪性又は悪性の新生物又は腫瘍（例えば、組織球腫、神経膠腫、星細胞腫、骨腫）、癌（例えば、肺癌、小細胞肺癌、消化管癌、腸癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、肝癌、腎癌、膀胱癌、メルケル細胞癌、膵癌、神経膠腫等の脳癌、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、黒色腫）、新生血管を特徴とする疾患又は血管新生疾患を挙げることができる。これらの組織のいずれかの非癌性腫瘍を治療することもできる。癌は、家族性又は散発性であってもよい。
個体における腫瘍又は癌の治療は、腫瘍の根絶を含み得る。しかしながら、多くの腫瘍型、特に悪性癌及び膠芽腫等の侵攻型については、完全な治癒が可能でない場合もある。治療は、腫瘍成長を遅らせる及び／又は腫瘍体積を低減することを含み得る。治療は、個体の全生存期間又は無増悪生存期間を延長することを含み得る。治療は、例えば腫瘍に起因する１つ以上の症状を低減することによって個体の生活の質を改善することを含み得る。治療は、腫瘍の退縮後の腫瘍の再成長を阻害することを含み得る。本発明による治療は、これらの治療効果のいずれか又は全てを達成するために用いることができる。
本明細書に記載されるテネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子は、癌等の増殖性障害を含む疾患の治療のために単独で、又は他の治療と組み合わせて同時若しくは順次に、又は別の治療剤（単数又は複数）との組み合わせ製剤として投与することができる。例えば、本明細書に記載されるテネイシン−ＣのＤドメインに結合する抗体分子は、癌等の増殖性障害の治療のための既存の治療剤と組み合わせて使用することができる。治療剤としては、当該技術分野で既知の抗癌化合物、例えばアルキル化剤、代謝拮抗物質、植物アルカロイド及びテルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、並びにコルチコステロイドを挙げることができる。
医薬組成物
本発明の更なる態様は、少なくとも１つの本発明の抗体分子又はコンジュゲートと任意に薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
本発明の医薬組成物は通例、治療有効量の本発明による抗体分子又はコンジュゲートと、任意に薬学的に許容可能な賦形剤（複数の場合もある）等の補助物質とを含む。該医薬組成物は、医薬分野で既知の方法で調製される。担体又は賦形剤は、活性成分のビヒクル又は媒体として働くことができる液体物質であり得る。好適な担体又は賦形剤は、当該技術分野で既知であり、例えば安定剤、酸化防止剤、ｐＨ調節物質、制御放出賦形剤が挙げられる。本発明の医薬組成物は、例えば非経口用途に適合させ、溶液等の形態で患者に投与することができる。
本発明の抗体分子又はコンジュゲートを含む医薬組成物を患者に投与することができる。投与は、患者に対する利益を示すのに十分な「治療有効量」での投与であるのが好ましい。かかる利益は、少なくとも１つの症状の改善であり得る。実際の投与量、並びに投与の速度及び時間経過は、治療される患者の性質及び重症度によって決まる。治療の処方、例えば投与量等に関する決定は、総合診療医及び他の医師の責任に含まれる。治療は、医者の裁量により１日１回、週２回、週１回又は月１回の間隔で繰り返すことができる。
本発明の医薬組成物は、治療を必要とする患者に任意の好適な経路により、通常は血流への注射及び／又は治療部位への直接の注射によって投与することができる。正確な用量及びその投与頻度は多数の要因、すなわち治療経路、治療対象の領域のサイズ及び位置によって決まる。
経口投与用の医薬組成物は錠剤、カプセル、粉末又は液体の形態とすることができる。錠剤は、ゼラチン又はアジュバント等の固体担体を含み得る。液体医薬組成物は概して、水、石油、動物油若しくは植物油、鉱油又は合成油等の液体担体を含む。生理食塩溶液、デキストロース若しくは他の糖溶液、又はエチレングリコール、プロピレングリコール若しくはポリエチレングリコール等のグリコールが含まれていてもよい。
静脈注射又は罹患（affliction）部位での注射については、医薬組成物は、パイロジェンフリーであり、好適なｐＨ、等張性及び安定性を有する非経口的に許容可能な水溶液の形態である。当業者は、例えば塩化ナトリウム注射液、リンガー液、乳酸加リンガー液等の等張ビヒクルを用いて好適な溶液を調製することが十分に可能である。保存料、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤及び／又は他の添加剤が必要に応じて含まれていてもよい。
医薬組成物は、治療対象の病態に応じて単独で、又は他の治療と組み合わせて同時若しくは順次に投与することができる。
キット
本発明の別の態様は、本発明の抗体分子又はコンジュゲートを含む、疾患又は障害の治療に使用される治療用キットを提供する。キットの構成要素は好ましくは滅菌され、密閉バイアル又は他の容器内に入れられる。
キットは、本明細書に記載される方法における構成要素の使用説明書を更に含んでいてもよい。キットの構成要素は容器、例えば袋、箱、瓶、缶又はブリスターパック内に入れられるか又は包装することができる。
本発明の更なる態様及び実施形態は、以下の実験的実例を含む本開示を考慮することで当業者に明らかである。
本明細書において言及される文献は、その全体が全ての目的で引用することにより本明細書の一部をなす。
「及び／又は」は、本明細書で使用される場合、他方を含む又は含まない２つの指定の特徴又は構成成分の各々の具体的な開示とみなされる。例えば、「Ａ及び／又はＢ」は、各々が本明細書に個別に提示されているかのように、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、並びに（ｉｉｉ）Ａ及びＢの各々の具体的な開示とみなされる。
文脈により他に指示されない限り、上に提示される特徴の説明及び定義は、本発明の任意の特定の態様又は実施形態に限定されず、記載される全ての態様及び実施形態に同様に当てはまる。
ここで、或る特定の本発明の態様及び実施形態を、例として、上に記載される図面を参照して説明する。
実施例１ − リゾチームに対する新規抗体ＣＴ０１、好中球エラスターゼに対するＦＦ０１及びＦＦ０２、ＴＩＭＰ−１に対する２ＰＣ１０、テネイシンＣのドメインＤに対するＣＰＲ０１及びＣＰＲ０１．１の調製及び特性評価
ヒトリゾチーム、ヒト好中球エラスターゼ、ヒトＴＩＭＰ−１及びヒトテネイシンＣのドメインＤに対する抗体である抗体ＣＴ０１、ＦＦ０１及びＦＦ０２、２ＰＣ１０、ＣＰＲ０１及びＣＰＲ０１．１を、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００６４８７号、Weber et al. (PLoS One, 2014, 9 (6) doi: 10/1361)及びSilacci et al. (Protein Engineering Design & Selection, 2006, 19, 471-478)に記載のライブラリーを含むファージディスプレイライブラリーから、Silacci et al. (Protein Engineering Design & Selection, 2006, 19, 471-478)によって記載されるスクリーニング法に従い、リゾチーム、好中球エラスターゼ、ＴＩＭＰ−１及びテネイシンＣのドメインＤをそれぞれスクリーニング抗原として使用して一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）構成で単離した。
ＳＩＰフォーマットの抗体を、ｓｃＦｖフォーマットの抗体のＶＬドメイン配列をヒトＩｇＥのＣＨ４ドメインに重複伸長ＰＣＲを用いて融合することによって調製した。次いで、ＳＩＰ構築物を哺乳動物リーダー配列に重複伸長ＰＣＲを用いて融合し、制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ及びＮｏｔＩを用いてｐｃＤＮＡ３．１ベクターにサブクローニングした。タンパク質を、ＣＨＯ．Ｓ細胞においてＰＥＩ媒介一過性遺伝子発現を用いて発現させ、プロテインＡ樹脂（Sino Biological Inc.）を用いるアフィニティークロマトグラフィーによって培養上清から精製した。ＶＬドメインとヒトＩｇＥのＣＨ４ドメインとを連結するリンカーの配列を配列番号８３に示す。ヒトＩｇＥのＣＨ４ドメインの配列を配列番号８４に示す。ＳＩＰフォーマットのＦＦ０２抗体の配列を配列番号８２に示す。
結果：
抗体ＣＴ０１とリゾチーム、２ＰＣ１０とＴＩＭＰ−１、ＣＰＲ０１及びＣＰＲ０１．１とテネイシン−ＣのドメインＤとの結合を、下記のようにＢｉａｃｏｒｅ分析によって更に確認した。対応する結果を図１に示す。抗体ＦＦ０１及びＦＦ０２とヒト好中球エラスターゼとの結合は、ＥＬＩＳＡによって確認した。対応する結果を図６に示す。
ＣＴ０１とリゾチームとの結合の親和性測定を表１に示す。Ｂｉａｃｏｒｅ分析により、ｓｃＦｖ（ＣＴ０１）がリゾチームに対して８．９×１０−７Ｍの親和性（ＫＤ）を有していたことが実証される。
ＣＰＲ０１とヒトテネイシン−ＣのＤドメインとの結合の親和性測定を表２に示す。
ＣＰＲ０１とネズミテネイシン−ＣのＢＣＤドメインとの結合の親和性測定を表３に示す。
Ｂｉａｃｏｒｅ分析により、ｓｃＦｖ（ＣＰＲ０１）がヒトテネイシン−ＣのＤドメインに対して７．０×１０−８Ｍの親和性（ＫＤ）及びネズミテネイシン−ＣのＢＣＤドメインに対して２．９×１０−８ＭのＫＤを有していたこと、ひいてはこの抗体の種交差反応性が実証される。
ＣＰＲ０１．１とヒトテネイシン−ＣのＤドメインとの結合の親和性測定を表４に示す。
ＣＰＲ０１．１とネズミテネイシン−ＣのＢＣＤドメインとの結合の親和性測定を表５に示す。
Ｂｉａｃｏｒｅ分析により、ｓｃＦｖ（ＣＰＲ０１．１）がヒトテネイシン−ＣのＤドメインに対して８．５×１０−７Ｍの親和性（ＫＤ）及びネズミテネイシン−ＣのＢＣＤドメインに対して４．３×１０−７ＭのＫＤを有していたこと、ひいてはこの抗体の種交差反応性が実証される。
ＣＨ０１とヒトＭＭＰ３との結合の親和性測定を表６に示す。
ＣＨ０１とネズミＭＭＰ３との結合の親和性測定を表７に示す。
Ｂｉａｃｏｒｅ分析により、ｓｃＦｖ（ＣＨ０１）がヒトＭＭＰ３に対して２．８×１０−８Ｍの親和性（ＫＤ）及びネズミＭＭＰ３に対して２．９×１０−８Ｍの親和性（ＫＤ）を有していたことが実証される。
ＳＷ０１とフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォームとの結合の親和性測定を表８に示す。Ｂｉａｃｏｒｅ分析により、ｓｃＦｖ（ＳＷ０１）がフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォームに対して２．６２×１０−７Ｍの親和性（ＫＤ）を有していたことが実証される。
Ｂｉａｃｏｒｅ分析：
ＣＴ０１、ＣＰＲ０１及び２ＰＣ１０を、ＣＨＯ．Ｓ細胞においてＳｃＦｖ抗体フラグメントとして発現させ、プロテインＡ樹脂（Sino Biological Inc.）を用いるアフィニティークロマトグラフィーによって培養上清から精製した。
ＣＴ０１を、２０００レゾナンスユニット（ＲＵ）の最終コーティング密度で市販の天然ヒトリゾチーム（ヒト好中球に由来する；カタログ番号Ｌ８４０２；SIGMA）によりコーティングしたＣＭ５チップを用いるＢｉａｃｏｒｅによって抗原結合について分析した。Ｂｉａｃｏｒｅ分析の流速は、２０μＬ／分に設定した。
ＣＰＲ０１を、ヒトテネイシン−ＣのＤドメインでコーティングしたＣＭ５チップを用いるＢｉａｃｏｒｅによって抗原結合について分析した。Ｂｉａｃｏｒｅ分析の流速は、１０μＬ／分に設定した。
ＳｃＦｖ（ＣＰＲ０１．１）抗体フラグメントをＣＨＯ．Ｓ細胞において発現させ、プロテインＡ樹脂（Sino Biological Inc.）を用いるアフィニティークロマトグラフィーによって培養上清から精製した。ＳｃＦｖ抗体画分を含有する溶出画分を、ヒトテネイシン−ＣのＤドメインでコーティングしたＣＭ５チップを用いるＢＩＡｃｏｒｅによって抗原結合について分析した。ＣＭ５チップにコーティングしたネズミテネイシン−ＣのＢＣＤドメインとの結合も評価し、抗体の種交差反応性を決定した。分析は、１０μＬ／分の流速でリン酸緩衝液（１００ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）、１００ｍＭ ＮａＣｌ）中で行い、各注入後にチップを５μＬの１０ｍＭ ＨＣｌで再生した。
２ＰＣ１０を、３５００レゾナンスユニット（ＲＵ）の最終コーティング密度を達成するようにｒＨｓＴＩＭＰ１（ｈｓ−ＴＩＭＰ１配列ａａ２４〜２０７、及びタンパク質のＣ末端の６ｘＨｉｓを含む組み換えポリペプチド）でコーティングしたＣＭ５チップを用いるＢｉａｃｏｒｅによって抗原結合について分析した。Ｂｉａｃｏｒｅ分析の流速は、１０μＬ／分に設定した。
ＥＬＩＳＡ分析
ヒト好中球に由来するエラスターゼ（ＥＬＡＮＥ）タンパク質は、MyBiosourceから購入した（ＭＢＳ１７３３８４）。ヒト好中球エラスターゼ（MyBiosource）を、標準プロトコルに従ってビオチン化した。ビオチン化の程度は、１分子当たり約０．３個〜０．６個のビオチンとした。
ｓｃＦｖフォーマットのＦＦ０１及びＦＦ０２抗体を用いたＥＬＩＳＡ
ＭＡＸＩｓｏｒｐストリップ（Nunc）を１０−６ＭのＨＮＥでコーティングした。コーティングしたプレートを、種々の濃度（１００μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ又は１２．５μｇ／ｍｌ）のｍｙｃタグ付きＦＦ０１、ＦＦ０２ ｓｃＦｖフラグメント、又は陰性対照である抗鶏卵リゾチームｓｃＦｖとともに１時間インキュベートした。結合抗体を、抗Ｍｙｃ抗体９Ｅ１０（５００倍希釈）及びＨＲＰコンジュゲート抗ネズミＦｃ抗体（Sigma）（１０００倍希釈）で検出した。抗体−抗原結合の比色検出を、ＢＭ−Ｂｌｕｅ ＰＯＤ可溶性基質（Roche）を用いて行った。光学密度を４５０ｎＭで測定した。
ＳＩＰフォーマットのＦＦ０１及びＦＦ０２抗体を用いたＥＬＩＳＡ
Ｓｔｒｅｐｔａｗｅｌｌ Ｈｉｇｈ Ｂｉｎｄストリップ（Roche）を、３．５×１０−６Ｍのビオチン化ＨＮＥでコーティングした。コーティングしたプレートを、ＳＩＰフォーマットのＦＦ０１又はＦＦ０２抗体（５０μｇ／ｍｌ）とともに１時間インキュベートした。結合抗体を、ウサギ抗ヒトＩｇＥ（Sigma）及びＨＲＰコンジュゲート抗ウサギＩｇＧ抗体（Sigma）で検出した。プレートのコーティング密度を、ＨＮＥ特異的ウサギＩｇＧ（Abcam ６８６７２、１５０倍希釈）を用いた固定化ＨＮＥの検出及びＨＲＰコンジュゲート抗ウサギＩｇＧ抗体（１０００倍希釈、Sigma）を用いた検出によって評価した。
抗体−抗原結合の比色検出を、ＢＭ−Ｂｌｕｅ ＰＯＤ可溶性基質（Roche）を用いて行った。光学密度を４５０ｎＭで測定した。
結果：
結果を図６に示すが、ＦＦ０１及びＦＦ０２抗体がｓｃＦｖ及びＳＩＰの両方のフォーマットでヒト好中球エラスターゼに結合することが確認される。
実施例２ − 潰瘍性大腸炎患者に由来する切片の免疫蛍光染色
潰瘍性大腸炎の新鮮凍結生検サンプルを、公表されている方法（S. Pfaffen. Eur J Nucl Med Mol Imaging 2010）に従って染色した。簡潔に述べると、ＳＩＰ（ＫＳＦ）又はＩｇＧ（ＳＷ０１、Ｌ１９、Ｆ１６、ＣＨ０１、Ｇ１１）フォーマットの精製ビオチン化抗体を、２μｇ／ｍｌの最終濃度で切片に添加した。一次抗体の検出を、ストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ−４８８抗体（Invitrogen）を用いて行った。
陽性対照を、血管を内皮細胞マーカーであるＣＤ３１に特異的な抗体（eBioscience、１００倍）で染色することによって行い、シグナルをヤギ抗マウスＡｌｅｘａ−５９４（Invitrogen）で解明した。更なる陽性対照を、ＤＡＰＩ（eBioscience）を用いた細胞核の対比染色によって行った。蛍光マウント媒体（DAKO）を用いて切片をマウントし、続いて１０倍対物レンズを有するＡｘｉｏｓｋｏｐ２顕微鏡（Carl Zeiss AG, Jena, Germany）を用いた分析を行った。結果を図２に示す。
実施例３ − ＣＴ０１抗体を用いたＨＴ２９細胞の免疫蛍光染色
カバーガラスを培養皿（１００ｍｍ×２０ｍｍ）に入れた後、ＨＴ２９細胞（いずれもヒト腺癌細胞株）を培養皿にそれぞれ１０００００細胞／ｍＬで播種した。培養物を適当なコンフルエンシーに達するまでインキュベートした。細胞を固定し、−２０℃の氷冷メタノールインキュベーションによって透過処理した。次いで、細胞を１０％ＦＢＳ／２％ＢＳＡでブロッキングした。ＳＩＰフォーマットのアフィニティー精製抗体ＣＴ０１（最終濃度５μｇ／ｍｌ）を初めに細胞とともにインキュベートし、続いてウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体（５００倍希釈；DAKO）とのインキュベーションを行った。次いで、抗体をヤギ抗ウサギＩｇＧ Ａｌｅｘａ ４８８（１０００倍希釈；Invitrogen）で検出した。ＤＡＰＩを核染色に用いた。抗鶏卵リゾチームＳＩＰ抗体（ＫＳＦ）をアイソタイプ陰性対照として染色に使用した。結果から、抗ヒトリゾチーム抗体ＣＴ０１が生体サンプル中のリゾチームを染色することが可能であることが実証される（図３）。
実施例４ − ＣＴ０１抗体を用いた潰瘍性大腸炎及びクローン病の患者から採取した生検材料の免疫蛍光染色
リゾチーム及びＣＤ３１（内皮マーカー）についての染色を、ヒト大腸炎及びクローン病生検サンプルに対して行った。１０μｍ厚の凍結試料を室温で解凍し、氷冷メタノールで処理し、ＰＢＳ中で再水和し、２０％ＦＣＳでブロッキングした。アフィニティー精製ＳＩＰ（最終濃度５μｇ／ｍＬ）を初めに組織サンプル、続いてウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体（５００倍希釈；DAKO）及びマウス抗ヒトＣＤ３１抗体（２００倍希釈；eBioscience）とともにインキュベートした。結合ＳＩＰは、ヤギ抗ウサギＩｇＧ Ａｌｅｘａ ４８８（２００倍希釈；Invitrogen）で検出し、抗ＣＤ３１抗体は、ヤギ抗マウスＩｇＧ Ａｌｅｘａ ５９４（２００倍希釈；Invitrogen）を用いて検出した。ＤＡＰＩを核染色に用いた。抗鶏卵リゾチーム抗体ＳｃＦｖ（ＫＳＦ）を、アイソタイプ陰性対照として染色に使用した。結果から、抗ヒトリゾチーム抗体ＣＴ０１抗体が大腸炎及びクローン病のヒト生検サンプル中で上皮を染色することが可能であることが実証される（図４）。
実施例５ − ＣＴ０１抗体を用いた大腸炎を有するマウスから採取したサンプルの免疫蛍光染色
大腸炎マウスモデルに由来する１０μｍ厚の凍結生検試料を室温で解凍し、氷冷メタノールで処理し、ＰＢＳ中で再水和し、２０％ＦＣＳでブロッキングした。アフィニティー精製ＳＩＰ（最終濃度５μｇ／ｍＬ）を初めに組織サンプル、続いてウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体（５００倍希釈；DAKO）及びラット抗マウスＣＤ３１抗体（２００倍希釈；BD Biosciences）とともにインキュベートした。結合ＳＩＰは、ヤギ抗ウサギＩｇＧ Ａｌｅｘａ ４８８（２００倍希釈；Invitrogen）で検出し、抗ＣＤ３１抗体は、ロバ抗ラットＩｇＧ Ａｌｅｘａ ５９４（２００倍希釈；Invitrogen）を用いて検出した。ＤＡＰＩを核染色に用いた。抗鶏卵リゾチーム抗体ＳｃＦｖ（ＫＳＦ）を、アイソタイプ陰性対照として染色に使用した。結果から、抗ヒトリゾチーム抗体ＣＴ０１がマウスリゾチームに結合する、すなわちマウスリゾチームと交差反応することが可能であることが実証され、このことは、ＩＢＤのマウスモデルにおけるＣＴ０１抗体及びそのコンジュゲートの試験に有用である（図５）。
実施例６ − ＦＦ０２抗体を用いた潰瘍性大腸炎又はクローン病を有する患者から採取したサンプルの免疫蛍光染色
凍結ヒト大腸炎及びクローン病患者組織試料（１０μｍ切片）を室温で解凍し、氷冷アセトンで固定し、その後ＰＢＳ中の２０％ＦＣＳでブロッキングした。スライドを初めにＦＦ０２ ＳＩＰ又は陰性対照として使用されるＫＳＦ ＳＩＰのいずれか（どちらも５μｇ／ｍＬの濃度）とともに２時間インキュベートし、その後ウサギ抗ヒトＩｇＥ（１０００倍希釈、Sigma）で解明した。陽性対照として、マウス抗ヒトＣＤ３１抗体（２００倍希釈、eBioscience）を使用した。ＳＩＰは、Ａｌｅｘａ ４８８コンジュゲートヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（２００倍希釈、Sigma）で検出し、抗ＣＤ３１抗体は、Ａｌｅｘａ ５９４コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ（２００倍希釈、Invitrogen）で検出した。また、細胞をＤＡＰＩ（Sigma）で対比染色し、蛍光マウント媒体（Dako）を用いてスライドをマウントし、２０倍対物レンズを用いたＡｘｉｏｓｋｏｐｅ２ ｍｏｔ ｐｌｕｓ顕微鏡（Zeiss）で分析した。結果を図７に示すが、潰瘍性大腸炎及びクローン病のどちらにおいても、ＦＦ０２抗体及び細胞の核並びに抗ＣＤ３１抗体の染色に良好な一致が見られたことが実証される。陰性対照抗体については、染色は視認可能でなかった。
実施例７ − ＣＰＲ０１．１抗体を用いた大腸炎を有するマウスに由来するサンプルの免疫蛍光染色
２週間の順化後に、８週齢の特定病原体除去雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Janvier Labs）に、飲用水中の３．０％（ｗｔ／ｖｏｌ）ＤＳＳ（４００００ｇ／ｍｏｌ、TdB Consultancy）を自由に与えた。５日後に、ＤＳＳ水を５％グルコース及び０．２５％ＮａＨＣＯ３を添加した水（７日間）、続いて無添加の（すなわち、通常の）水に置き換えた。体重及び疾患スコアを毎日評価した。大腸炎誘導の１０日後に、マウスを屠殺し、結腸を摘出し、Ｏ．Ｃ．Ｔ．化合物に包埋した。８μｍ厚の切片を切り出し、標準免疫蛍光プロトコルに従って染色した。簡潔に述べると、完全ＩｇＧフォーマットの精製抗体（ＣＰＲ０１．１及びＫＳＦ）を、２μｇ／ｍｌの最終濃度で切片に添加した。一次抗体の検出を、ウサギ抗ヒトＩｇＧ（DAKO）を用いて行った。ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ ４８８を用いてシグナルを解明した。血管をラット抗マウスＣＤ３１抗体（BD Pharmingen）、続いてロバ抗ラットＡｌｅｘａ ５９４を用いて解明した。細胞核の対比染色を、ＤＡＰＩ（eBioscience）を用いて行った。
結果：
結果を図８に示す。ＣＰＲ０１．１で染色した動物の結腸において、無関連抗体（ＫＳＦ）を用いて観察されるシグナルと比較して、より強い強度のシグナルを検出することができる。
実施例８ − ＰＣ３異種移植を担持するマウスにおけるＩＶＩＳ画像化によるＣＰＲ０１．１抗体のｉｎ ｖｉｖｏ標的化特性
ＰＣ−３細胞をアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入し、８０％コンフルエンスまで成長させ、トリプシン−ＥＤＴＡ ０．０５％（Life Technologies）で分離した。ヒト前立腺癌のＰＣ−３モデルは、Kaighn et al. (1983) Invest. Urol. 17: 16-23に記載されている。細胞をＨＢＳＳ培地（Gibco）で２回洗浄し、計数し、ＨＢＳＳ培地に１億細胞／ｍｌの最終濃度で再懸濁した。５百万細胞のアリコート（５０μｌの懸濁液）を、マトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍａｔｒｉｇｅｌ、７３４−１１０１、VWR）と１：１で混合し、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（７週齢、Charles River）の腰部に皮下注射した。
ＩｇＧフォーマットのＣＰＲ０１．１のｉｎ ｖｉｖｏ標的化特性を、近赤外蛍光画像化を用いて調査した。皮下ＰＣ３腫瘍を担持するマウスに、ＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ（Licor）で標識したＣＰＲ０１．１（２００μＬ）を静脈内注射した。７２時間後に、蛍光画像をＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ画像化システムで取得した。次いで、マウスを頸椎脱臼により屠殺し、同じ設定を用いて摘出臓器の画像を取得した。
結果：
画像から、腫瘍におけるＣＰＲ０１．１の優先的かつ選択的な蓄積が示される。健常臓器は、ＣＰＲ０１．１の任意の取込みについて実質的に陰性である（図９）。肝臓において記録されたシグナルは、近赤外色素で標識したＩｇＧの予想される肝排出経路と一致する。
実施例９ − ＣＰＲ０１．１抗体を用いた異種移植片腫瘍切片の免疫蛍光染色
テネイシン−ＣのＤドメイン及びネズミ血管マーカーＣＤ３１ヴォンヴィレブランド因子の二重染色を、ヒト異種移植片黒色腫Ａ３７５、ヒト異種移植片膠芽腫Ｕ８７及びネズミ異種移植片奇形癌Ｆ９に由来する切片に対して行った。新鮮凍結腫瘍サンプルに由来する１０μｍ切片を室温で解凍し、氷冷アセトンで固定し、ＰＢＳ中で再水和し、３％ＢＳＡでブロッキングした。切片を初めにアフィニティー精製ＳＩＰフォーマット抗体フラグメント（最終濃度５ｍｇ／ｍｌ）、続いて抗ヒトＩｇＥ抗体（DAKO、最終濃度２．５μｇ／ｍｌ）及びラット抗マウスＣＤ３１内皮マーカー抗体（BD Pharmigen、最終濃度３０ｎｇ／ｍＬ）とともにインキュベートした。結合ＳＩＰは、ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ ４８８（Molecular Probes）で検出し、ＣＤ３１内皮マーカーは、ロバ抗ラットＩｇＧ Ａｌｅｘａ ５９４（Molecular probes）を用いて検出した。ＤＡＰＩを核染色に用いた。抗鶏卵リゾチーム抗体ＳｃＦｖ（ＫＳＦ）を、アイソタイプ陰性対照として染色に使用し、抗フィブロネクチンＥＤＡドメイン抗体ＳＩＰ（Ｆ８）（国際公開第２００８／１２０１０１号）を、これらの組織におけるＥＤＡドメインの存在が以前に確認されていることから、陽性対照として使用した。
結果：
ＳＩＰフォーマットの抗体抗テネイシン−Ｃ Ｄドメイン（ＣＰＲ０１．１）は、ネズミ及びヒトの両方の腫瘍細胞株に由来する異種移植片腫瘍を染色することが可能であった（図１０）。
配列表
ヒトリゾチームに特異的な抗体ＣＴ０１のアミノ酸配列
配列番号１（ＣＴ０１−ＶＨ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＰＡＰＲＡＲＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２（ＣＴ０１−ＶＬ）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＰＴＰＡＰＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
配列番号３（ＣＴ０１−ＶＨ ＣＤＲ１）
ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ
配列番号４（ＣＴ０１−ＶＨ ＣＤＲ２）
ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号５（ＣＴ０１−ＶＨ ＣＤＲ３）
ＰＡＰＲＡＲＦＤＹ
配列番号６（ＣＴ０１−ＶＬ ＣＤＲ１）
ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ
配列番号７（ＣＴ０１−ＶＬ ＣＤＲ２）
ＧＫＮＮＲＰＳ
配列番号８（ＣＴ０１−ＶＬ ＣＤＲ３）
ＮＳＳＰＴＰＡＰＧＶＶ
ヒト好中球エラスターゼに特異的な抗体ＦＦ０１のアミノ酸配列
配列番号９（ＦＦ０１−ＶＨ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＫＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＴＷＮＮＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１０（ＦＦ０１−ＶＬ）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＰＤＧＧＲＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
配列番号８５（ＦＦ０１−ＶＬドメインの代替アミノ酸配列）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＰＤＧＧＲＧＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１１（ＦＦ０１−ＶＨ ＣＤＲ１）
ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ
配列番号１２（ＦＦ０１−ＶＨ ＣＤＲ２）
ＡＩＫＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号８６（ＦＦ０１−ＶＨ ＣＤＲ２の代替アミノ酸配列）
ＡＩＫＧＳＧＧＳＴＹ
配列番号１３（ＦＦ０１−ＶＨ ＣＤＲ３）
ＶＴＷＮＮＹＦＤＹ
配列番号１４（ＦＦ０１−ＶＬ ＣＤＲ１）
ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ
配列番号１５（ＦＦ０１−ＶＬ ＣＤＲ２）
ＧＫＮＮＲＰＳ
配列番号１６（ＦＦ０１−ＶＬ ＣＤＲ３）
ＮＳＳＰＤＧＧＲＧＶＶ
ヒトＴＩＭＰ−１に特異的な抗体２ＰＣ１０のアミノ酸配列
配列番号１７（２ＰＣ１０−ＶＨ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＡＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＡＰＭＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１８（２ＰＣ１０−ＶＬ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＨＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＧＬＴＰＡＭＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１９（２ＰＣ１０−ＶＨ ＣＤＲ１）
ＧＦＴＦＳＳＡＡＭＳ
配列番号２０（２ＰＣ１０−ＶＨ ＣＤＲ２）
ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号２１（２ＰＣ１０−ＶＨ ＣＤＲ３）
ＡＰＭＦＤＹ
配列番号２２（２ＰＣ１０−ＶＬ ＣＤＲ１）
ＲＡＳＱＳＶＳＴＨＬＬＡ
配列番号２３（２ＰＣ１０−ＶＬ ＣＤＲ２）
ＧＡＳＳＲＡＴ
配列番号２４（２ＰＣ１０−ＶＬ ＣＤＲ３）
ＱＱＷＧＬＴＰＡＭ
ヒトテネイシン−ＣのＤドメインに特異的な抗体ＣＰＲ０１のアミノ酸配列
配列番号２５（ＣＰＲ０１−ＶＨ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＫＡＲＧＧＬＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＧＡＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２６（ＣＰＲ０１−ＶＬ）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＰＬＮＲＬＡＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
配列番号８７（ＣＰＲ０１−ＶＬドメインの代替アミノ酸配列）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＰＬＮＲＬＡＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号２７（ＣＰＲ０１−ＶＨ ＣＤＲ１）
ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ
配列番号２８（ＣＰＲ０１−ＶＨ ＣＤＲ２）
ＡＩＫＡＲＧＧＬＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号２９（ＣＰＲ０１−ＶＨ ＣＤＲ３）
ＧＧＡＰＦＤＹ
配列番号３０（ＣＰＲ０１−ＶＬ ＣＤＲ１）
ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ
配列番号３１（ＣＰＲ０１−ＶＬ ＣＤＲ２）
ＧＫＮＮＲＰＳ
配列番号３２（ＣＰＲ０１−ＶＬ ＣＤＲ３）
ＮＳＳＰＬＮＲＬＡＶＶ
ヒトフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォームに特異的な抗体ＳＷ０１のアミノ酸配列
配列番号３３（ＳＷ０１−ＶＨ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＲＹＩＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４（ＳＷ０１−ＶＬ）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＰＫＡＰＲＰＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
配列番号３５（ＳＷ０１−ＶＨ ＣＤＲ１）
ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ
配列番号３６（ＳＷ０１−ＶＨ ＣＤＲ２）
ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号３７（ＳＷ０１−ＶＨ ＣＤＲ３）
ＮＲＹＩＦＤＹ
配列番号３８（ＳＷ０１−ＶＬ ＣＤＲ１）
ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ
配列番号３９（ＳＷ０１−ＶＬ ＣＤＲ２）
ＧＫＮＮＲＰＳ
配列番号４０（ＳＷ０１−ＶＬ ＣＤＲ３）
ＮＳＳＰＫＡＰＲＰＶＶ
ヒトＭＭＰ３に特異的な抗体ＣＨ０１のアミノ酸配列
配列番号４１（ＣＨ０１−ＶＨ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＧＱＧＧＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＩＳＳＦＨＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４２（ＣＨ０１−ＶＬ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＨＨＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＰＲＧＡＰＴＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号４３（ＣＨ０１−ＶＨ ＣＤＲ１）
ＧＦＴＦＳＰＹＡＭＳ
配列番号４４（ＣＨ０１−ＶＨ ＣＤＲ２）
ＡＩＴＧＱＧＧＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号４５（ＣＨ０１−ＶＨ ＣＤＲ３）
ＩＳＳＦＨＦＤＹ
配列番号４６（ＣＨ０１−ＶＬ ＣＤＲ１）
ＲＡＳＱＳＶＳＳＨＨＬＡ
配列番号４７（ＣＨ０１−ＶＬ ＣＤＲ２）
ＤＡＳＳＲＡＴ
配列番号４８（ＣＨ０１−ＶＬ ＣＤＲ３）
ＱＱＰＲＧＡＰＴＴ
ヒトフィブロネクチンのＥＤ−Ｂドメインに特異的な抗体Ｌ１９のアミノ酸配列
配列番号４９（Ｌ１９−ＶＨ）
Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｔｒｐ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
配列番号５０（Ｌ１９−ＶＬ）
Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ
Ｌ１９ ＣＤＲ１ ＶＨ−Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｓｅｒ（配列番号５１）
Ｌ１９ ＣＤＲ２ ＶＨ−Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ（配列番号５２）
Ｌ１９ ＣＤＲ３ ＶＨ−Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｔｙｒ（配列番号５３）
Ｌ１９ ＣＤＲ１ ＶＬ−Ａｒｇ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｌａ（配列番号５４）
Ｌ１９ ＣＤＲ２ ＶＬ−Ｔｙｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｌａ Ｔｈｒ（配列番号５５）
Ｌ１９ ＣＤＲ３ ＶＬ−Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｔｈｒ（配列番号５６）
ヒトテネイシン−ＣのＡ１ドメインに特異的な抗体Ｆ１６のアミノ酸配列
配列番号５７（Ｆ１６−ＶＨ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＨＮＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＲ
配列番号５８（Ｆ１６−ＶＬ）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＶＹＴＭＰＰＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
配列番号８８（Ｆ１６−ＶＬドメインの代替アミノ酸配列）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＶＹＴＭＰＰＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
Ｆ１６ ＣＤＲ１ ＶＨ−ＲＹＧＭＳ（配列番号５９）
Ｆ１６ ＣＤＲ２ ＶＨ−ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６０）
Ｆ１６ ＣＤＲ３ ＶＨ−ＡＨＮＡＦＤＹ（配列番号６１）
Ｆ１６ ＣＤＲ１ ＶＬ−ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ（配列番号６２）
Ｆ１６ ＣＤＲ２ ＶＬ−ＧＫＮＮＲＰＳ（配列番号６３）
Ｆ１６ ＣＤＲ３ ＶＬ−ＮＳＳＶＹＴＭＰＰＶＶ（配列番号６４）
ヒトテネイシン−ＣのＣドメインに特異的な抗体Ｇ１１のアミノ酸配列
配列番号６５（Ｇ１１−ＶＨ）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＳＲＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＮＥＥＧＧＱＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＨＰＰＨＲＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＲ
配列番号６６（Ｇ１１−ＶＬ）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＬＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲ
ＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＨＧＰＲＲＰＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ｓｃＦｖ ＶＨ−ＶＬドメインリンカー配列（配列番号６７）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ
ダイアボディＶＨ−ＶＬドメインリンカー配列（配列番号６８）
ＧＧＳＧＧ
抗体ＣＴ０１の代替ＶＨドメイン配列（配列番号６９）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＰＡＰＲＡＲＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
抗体ＦＦ０１の代替ＶＨドメイン配列（配列番号７０）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＫＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＴＷＮＮＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
抗体２ＰＣ１０の代替ＶＨドメイン配列（配列番号７１）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＡＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＡＰＭＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
抗体ＣＰＲ０１の代替ＶＨドメイン配列（配列番号７２）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＫＡＲＧＧＬＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＧＡＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
抗体ＳＷ０１の代替ＶＬドメイン配列（配列番号７３）
ＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＰＫＡＰＲＰＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
ヒト好中球エラスターゼに特異的な抗体ＦＦ０２のアミノ酸配列
配列番号７４（ＦＦ０２−ＶＨ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＫＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＮＷＮＬＥＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号７５（ＦＦ０２−ＶＬ）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＧＬＩＷＰＲＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
配列番号７６（ＦＦ０２−ＶＨ ＣＤＲ１）
ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ
配列番号７７（ＦＦ０２−ＶＨ ＣＤＲ２）
ＡＩＫＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号７８（ＦＦ０２−ＶＨ ＣＤＲ３）
ＷＮＷＮＬＥＦＤＹ
配列番号７９（ＦＦ０２−ＶＬ ＣＤＲ１）
ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ
配列番号８０（ＦＦ０２−ＶＬ ＣＤＲ２）
ＧＫＮＮＲＰＳ
配列番号８１（ＦＦ０２−ＶＬ ＣＤＲ３）
ＮＳＳＧＬＩＷＰＲＶＶ
配列番号８２（ＳＩＰフォーマットのＦＦ０２）
ＦＦ０２のＶＨドメイン及びＶＬドメインを連結するリンカーには下線を引いている。ＶＬドメインとヒトＩｇＥのＣＨ４ドメインとを連結する配列は太字及び下線で示す。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＫＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＮＷＮＬＥＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＧＬＩＷＰＲＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＳＧＧＳＧＧＰＲＡＡＰＥＶＹＡＦＡＴＰＥＷＰＧＳＲＤＫＲＴＬＡＣＬＩＱＮＦＭＰＥＤＩＳＶＱＷＬＨＮＥＶＱＬＰＤＡＲＨＳＴＴＱＰＲＫＴＫＧＳＧＦＦＶＦＳＲＬＥＶＴＲＡＥＷＥＱＫＤＥＦＩＣＲＡＶＨＥＡＡＳＰＳＱＴＶＱＲＡＶＳＶＮＰＥＳＳＲＲＧＧＣ
配列番号８３（ＶＬドメインとヒトＩｇＥのＣＨ４ドメインとを連結するリンカー配列）
ＳＧＧＳＧ
配列番号８４（ヒトＩｇＥのＣＨ４ドメインのアミノ酸配列）
ＧＰＲＡＡＰＥＶＹＡＦＡＴＰＥＷＰＧＳＲＤＫＲＴＬＡＣＬＩＱＮＦＭＰＥＤＩＳＶＱＷＬＨＮＥＶＱＬＰＤＡＲＨＳＴＴＱＰＲＫＴＫＧＳＧＦＦＶＦＳＲＬＥＶＴＲＡＥＷＥＱＫＤＥＦＩＣＲＡＶＨＥＡＡＳＰＳＱＴＶＱＲＡＶＳＶＮＰＥＳＳＲＲＧＧＣ
ヒトテネイシン−ＣのＤドメインに特異的な抗体ＣＰＲ０１．１のアミノ酸配列
配列番号８９（ＣＰＲ０１．１−ＶＨ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＫＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＧＡＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号９０（ＣＰＲ０１．１−ＶＬ）
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＬＲＧＴＬＰＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
配列番号２７（ＣＰＲ０１．１−ＶＨ ＣＤＲ１）
ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ
配列番号９１（ＣＰＲ０１．１−ＶＨ ＣＤＲ２）
ＡＩＫＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号２９（ＣＰＲ０１．１−ＶＨ ＣＤＲ３）
ＧＧＡＰＦＤＹ
配列番号３０（ＣＰＲ０１．１−ＶＬ ＣＤＲ１）
ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ
配列番号３１（ＣＰＲ０１．１−ＶＬ ＣＤＲ２）
ＧＫＮＮＲＰＳ
配列番号９２（ＣＰＲ０１．１−ＶＬ ＣＤＲ３）
ＮＳＳＬＲＧＴＬＰＶＶ
配列番号９３（ＣＰＲ０１．１、完全ＳｃＦｖ配列）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＫＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＧＡＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＳＬＲＧＴＬＰＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ

Claims (60)

  1. テネイシン−ＣのドメインＤに結合する抗体分子であって、該抗体分子が、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインと、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインとを含み、
    ＨＣＤＲ３が、配列番号２９のアミノ酸配列又は２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号２９のアミノ酸配列を有する、抗体分子。
  2. ＬＣＤＲ３が、配列番号９２のアミノ酸配列又は２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号９２のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体分子。
  3. ＨＣＤＲ１が、配列番号２７のアミノ酸配列又は２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号２７のアミノ酸配列を有し、
    ＨＣＤＲ２が、配列番号９１のアミノ酸配列又は２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号９１のアミノ酸配列を有し、
    ＬＣＤＲ１が、配列番号３０のアミノ酸配列又は２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号３０のアミノ酸配列を有し、及び／又は、
    ＬＣＤＲ２が、配列番号３１のアミノ酸配列又は２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号３１のアミノ酸配列を有する、請求項１又は２に記載の抗体分子。
  4. 前記ＶＨドメインが配列番号８９のアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなり、及び／又は前記ＶＬドメインが配列番号９０のアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなる、請求項３に記載の抗体分子。
  5. リゾチームに結合する抗体分子であって、該抗体分子が、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインと、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインとを含み、
    ＨＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号５のアミノ酸配列を有する、抗体分子。
  6. ＬＣＤＲ３が、配列番号８のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を有する、請求項５に記載の抗体分子。
  7. ＨＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号３のアミノ酸配列を有し、
    ＨＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号４のアミノ酸配列を有し、
    ＬＣＤＲ１が、配列番号６のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号６のアミノ酸配列を有し、及び／又は、
    ＬＣＤＲ２が、配列番号７のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を有する、請求項５又は６に記載の抗体分子。
  8. 前記ＶＨドメインが配列番号１のアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなり、及び／又は前記ＶＬドメインが配列番号２のアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなる、請求項７に記載の抗体分子。
  9. 好中球エラスターゼに結合する抗体分子であって、該抗体分子が、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインと、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインとを含み、
    ＨＣＤＲ３が、配列番号７８のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号７８のアミノ酸配列を有する、抗体分子。
  10. ＬＣＤＲ３が、配列番号８１のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号８１のアミノ酸配列を有する、請求項９に記載の抗体分子。
  11. ＨＣＤＲ１が、配列番号７６のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号７６のアミノ酸配列を有し、
    ＨＣＤＲ２が、配列番号７７のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号７７のアミノ酸配列を有し、
    ＬＣＤＲ１が、配列番号７９のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号７９のアミノ酸配列を有し、及び／又は、
    ＬＣＤＲ２が、配列番号８０のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号８０のアミノ酸配列を有する、請求項９又は１０に記載の抗体分子。
  12. 前記ＶＨドメインが配列番号７４のアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなり、及び／又は前記ＶＬドメインが配列番号７５のアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなる、請求項１１に記載の抗体分子。
  13. 好中球エラスターゼに結合する抗体分子であって、該抗体分子が、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインと、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインとを含み、
    ＨＣＤＲ３が、配列番号１３のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１３のアミノ酸配列を有する、抗体分子。
  14. ＬＣＤＲ３が、配列番号１６のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１６のアミノ酸配列を有する、請求項１３に記載の抗体分子。
  15. ＨＣＤＲ１が、配列番号１１のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を有し、
    ＨＣＤＲ２が、配列番号１２のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１２のアミノ酸配列を有し、
    ＬＣＤＲ１が、配列番号１４のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１４のアミノ酸配列を有し、及び／又は、
    ＬＣＤＲ２が、配列番号１５のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１５のアミノ酸配列を有する、請求項１３又は１４に記載の抗体分子。
  16. 前記ＶＨドメインが配列番号９のアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなり、及び／又は前記ＶＬドメインが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなる、請求項１５に記載の抗体分子。
  17. 組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１（ＴＩＭＰ−１）に結合する抗体分子であって、該抗体分子が、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインと、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインとを含み、
    ＨＣＤＲ３が、配列番号２１のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を有する、抗体分子。
  18. ＬＣＤＲ３が、配列番号２４のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号２４のアミノ酸配列を有する、請求項１７に記載の抗体分子。
  19. ＨＣＤＲ１が、配列番号１９のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１９のアミノ酸配列を有し、
    ＨＣＤＲ２が、配列番号２０のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号２０のアミノ酸配列を有し、
    ＬＣＤＲ１が、配列番号２２のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号２２のアミノ酸配列を有し、及び／又は、
    ＬＣＤＲ２が、配列番号２３のアミノ酸配列又は３個以下のアミノ酸置換を有する配列番号２３のアミノ酸配列を有する、請求項１７又は１８に記載の抗体分子。
  20. 前記ＶＨドメインが配列番号１７のアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなり、及び／又は前記ＶＬドメインが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなる、請求項１９に記載の抗体分子。
  21. 前記抗体分子が一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である若しくはそれを含むか、小免疫タンパク質（ＳＩＰ）であるか、ダイアボディであるか、又はＩｇＧ分子である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体分子。
  22. 請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体分子と、免疫抑制剤又は抗炎症剤とを含むコンジュゲート。
  23. 前記抗炎症剤がサイトカインである、請求項２２に記載のコンジュゲート。
  24. 前記コンジュゲートが、抗体分子と免疫抑制剤、抗炎症剤又はサイトカインとを含む融合タンパク質である、請求項２２又は２３に記載のコンジュゲート。
  25. 請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体分子と、検出可能な標識とを含むコンジュゲート。
  26. 療法によりヒト又は動物の身体を治療する方法に使用される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体分子又はコンジュゲート。
  27. 患者における炎症性障害を治療する方法に使用される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体分子又はコンジュゲート。
  28. 患者における炎症性障害を治療する方法であって、該患者に請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体分子又はコンジュゲートを含む薬剤を治療有効量、投与することを含む、方法。
  29. 患者における自己免疫疾患を治療する方法に使用される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体分子又はコンジュゲート。
  30. 患者における自己免疫疾患を治療する方法であって、該患者に請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体分子又はコンジュゲートを含む薬剤を治療有効量、投与することを含む、方法。
  31. 患者における炎症性障害の部位に分子を送達する方法に使用される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体分子。
  32. 患者における炎症性障害の部位に分子を送達する方法であって、該患者に請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体分子を投与することを含み、該抗体分子が前記分子にコンジュゲートしている、方法。
  33. 前記分子が免疫抑制剤又は抗炎症剤である、請求項３１に記載の使用のための抗体分子又は請求項３２に記載の方法。
  34. 前記抗炎症剤がサイトカインである、請求項３３に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  35. 患者における自己免疫疾患の部位に分子を送達する方法に使用される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体分子。
  36. 患者における自己免疫疾患の部位に分子を送達する方法であって、該患者に請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体分子を投与することを含み、該抗体分子が前記分子にコンジュゲートしている、方法。
  37. 前記分子が免疫抑制剤又は抗炎症剤である、請求項３５に記載の使用のための抗体分子又は請求項３６に記載の方法。
  38. 前記抗炎症剤がサイトカインである、請求項３７に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  39. 患者における炎症性障害又は自己免疫疾患を画像化、検出又は診断する方法に使用される、請求項１〜２１又は２５のいずれか一項に記載の抗体分子又はコンジュゲート。
  40. 患者における炎症性障害又は自己免疫疾患を画像化、検出又は診断する方法であって、該患者に請求項１〜２１又は２５のいずれか一項に記載の抗体分子又はコンジュゲートを投与することを含む、方法。
  41. 前記炎症性障害又は自己免疫疾患が炎症性腸疾患である、請求項２７〜４０のいずれか一項に記載の使用のための抗体分子若しくはコンジュゲート又は方法。
  42. 炎症性腸疾患を治療する方法に使用される、フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのエキストラドメイン−Ｂ（ＥＤ−Ｂ）、テネイシン−Ｃ又はマトリックスメタロプロテアーゼ３（ＭＭＰ−３）に結合する抗体分子であって、該抗体分子が免疫抑制剤又は抗炎症剤にコンジュゲートしている、抗体分子。
  43. 患者における炎症性腸疾患を治療する方法であって、フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのエキストラドメイン−Ｂ（ＥＤ−Ｂ）、テネイシン−Ｃ又はマトリックスメタロプロテアーゼ３（ＭＭＰ−３）に結合する抗体分子を含む薬剤を治療有効量、投与することを含み、該抗体分子が免疫抑制剤又は抗炎症剤にコンジュゲートしている、方法。
  44. 患者における炎症性腸疾患の部位への分子の送達に使用される、フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのエキストラドメイン−Ｂ（ＥＤ−Ｂ）、テネイシン−Ｃ又はマトリックスメタロプロテアーゼ３（ＭＭＰ−３）に結合する抗体分子。
  45. 患者における炎症性腸疾患の部位へと分子を送達する方法であって、該患者にフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのエキストラドメイン−Ｂ（ＥＤ−Ｂ）、テネイシン−Ｃ又はマトリックスメタロプロテアーゼ３（ＭＭＰ−３）に結合する抗体分子を投与することを含み、該抗体分子が前記分子にコンジュゲートしている、方法。
  46. 前記分子が免疫抑制剤又は抗炎症剤である、請求項４４に記載の使用のための抗体分子又は請求項４５に記載の方法。
  47. 前記抗炎症剤がサイトカインである、請求項４６に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  48. 患者における炎症性腸疾患を画像化、検出又は診断する方法に使用される、フィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのエキストラドメイン−Ｂ（ＥＤ−Ｂ）、テネイシン−Ｃ又はマトリックスメタロプロテアーゼ３（ＭＭＰ−３）に結合する抗体分子。
  49. 患者における炎症性腸疾患を画像化、検出又は診断する方法であって、該患者にフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォーム、フィブロネクチンのエキストラドメイン−Ｂ（ＥＤ−Ｂ）、テネイシン−Ｃ又はマトリックスメタロプロテアーゼ３（ＭＭＰ−３）に結合する抗体分子を投与することを含む、方法。
  50. 前記抗体分子が検出可能な標識にコンジュゲートしている、請求項４８に記載の使用のための抗体分子又は請求項４９に記載の方法。
  51. 前記抗体分子がテネイシン−ＣのドメインＤ又はドメインＡ１に結合する、請求項４６〜５０のいずれか一項に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  52. 前記抗体分子がフィブロネクチンのＩＩＩＣＳアイソフォームに結合し、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインと、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインとを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３が配列番号３５、３６及び３７にそれぞれ規定されるアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が配列番号３８、３９及び４０にそれぞれ規定されるアミノ酸配列を有する、請求項４６〜５０のいずれか一項に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  53. 前記抗体分子のＶＨドメインが配列番号３３に規定されるアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなり、及び／又は前記抗体分子のＶＬドメインが配列番号３４に規定されるアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなる、請求項５２に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  54. 前記抗体分子がＭＭＰ−３に結合し、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインと、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインとを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３が配列番号４３、４４及び４５にそれぞれ規定されるアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が配列番号４６、４７及び４８にそれぞれ規定されるアミノ酸配列を有する、請求項４６〜５０のいずれか一項に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  55. 前記抗体分子のＶＨドメインが配列番号４１に規定されるアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなり、及び／又は前記抗体分子のＶＬドメインが配列番号４２に規定されるアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなる、請求項５４に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  56. 前記抗体分子がフィブロネクチンのＥＤ−Ｂドメインに結合し、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインと、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインとを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３が配列番号５１、５２及び５３にそれぞれ規定されるアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が配列番号５４、５５及び５６にそれぞれ規定されるアミノ酸配列を有する、請求項４６〜５０のいずれか一項に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  57. 前記抗体分子のＶＨドメインが配列番号４９に規定されるアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなり、及び／又は前記抗体分子のＶＬドメインが配列番号５０に規定されるアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなる、請求項５６に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  58. 前記抗体分子がテネイシンＣのＡ１ドメインに結合し、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインと、フレームワーク並びに一連の相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインとを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３が配列番号５９、６０及び６１にそれぞれ規定されるアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が配列番号６２、６３及び６４にそれぞれ規定されるアミノ酸配列を有する、請求項４２〜５０のいずれか一項に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  59. 前記抗体分子のＶＨドメインが配列番号５７に規定されるアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなり、及び／又は前記抗体分子のＶＬドメインが配列番号５８に規定されるアミノ酸配列を含むか若しくはそれからなる、請求項５８に記載の使用のための抗体分子又は方法。
  60. 前記抗体分子が一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である若しくはそれを含むか、小免疫タンパク質（ＳＩＰ）であるか、ダイアボディであるか、又はＩｇＧ分子である、請求項４２〜５９のいずれか一項に記載の使用のための抗体分子又は方法。
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