JP2019201598A - Novel bacillus bacterial strain - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、Bacillus subtilis（バチルス ズブチリス）に属する新規な菌株に関する。 The present invention relates to a novel strain belonging to Bacillus subtilis.
バチルス属微生物については、種々の菌株が分離・開発され、用途展開が図られている。例えば、特許文献１には、バチルス フィルムス（Bacillus firmus）に属する菌株を水質浄化剤、抗菌防黴剤等の用途に用いる技術が開示されている。
As for Bacillus microorganisms, various strains have been isolated and developed, and their use has been developed. For example,
本発明は、新規なバチルス菌株の提供を課題とするものであり、とりわけ当該菌株が直接抗菌活性及び間接抗菌活性、更には消臭能を備えたものの提供を課題とする。 An object of the present invention is to provide a novel Bacillus strain, and in particular, to provide a strain having direct antibacterial activity and indirect antibacterial activity, as well as deodorizing ability.
本発明は以下のとおりである。
［１］受託番号：NITE P−02700で寄託されているBacillus subtilisに属する新規微生物BS-T2株。
［２］直接抗菌活性及び間接抗菌活性を備えた上記［１］記載のBS-T2株。
［３］更に、消臭能を備えた上記［２］記載のBS-T2株。
［４］上記［１］〜［３］のいずれか１項記載のBS-T2株の生菌及び芽胞のいずれか一方又は双方を含有した粉状又は粒状の固形物。
［５］上記［４］記載の固形物を含有した、抗菌防黴用、消臭用、ぬめり抑制用、堆肥化促進用、生ごみ処理用、土壌改良用、植物病害防除用、水質浄化用又は汚泥処理用の組成物。
［６］上記［５］記載の組成物を、抗菌防黴用途、消臭用途、ぬめり抑制用途、堆肥化促進用途、生ごみ処理用途、土壌改良用途、植物病害防除用途、水質浄化用途又は汚泥処理用途に使用する方法。
The present invention is as follows.
[1] Accession number: A novel microorganism BS-T2 strain belonging to Bacillus subtilis deposited under NITE P-02700.
[2] The BS-T2 strain described in [1] above, which has direct antibacterial activity and indirect antibacterial activity.
[3] The BS-T2 strain according to the above [2], further having a deodorizing ability.
[4] A powdery or granular solid containing one or both of the viable bacteria and spores of the BS-T2 strain described in any one of [1] to [3] above.
[5] For antibacterial fungiproofing, deodorizing, slimming control, composting promotion, garbage treatment, soil improvement, plant disease control, water purification, containing the solid material according to [4] above Or a composition for sludge treatment.
[6] The composition according to the above [5] is applied to antibacterial / antifungal applications, deodorization applications, slime suppression applications, composting promotion applications, garbage treatment applications, soil improvement applications, plant disease control applications, water purification applications or sludges. Method used for processing applications.
以下、好ましい実施形態に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明は以下の実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能である。 Hereinafter, the present invention will be described in detail based on preferred embodiments. However, the present invention is not limited to the following embodiments, and various modifications can be made within the scope shown in the claims.
本発明の新規なバチルス菌株は、遺伝子解析等によりBacillus subtilisに属すると判断されたものであり、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター(NPMD)に受託番号：NITE P−02700として2018年4月20日付けで寄託が受託されたBS-T2株である。 The novel Bacillus strain of the present invention has been determined to belong to Bacillus subtilis by genetic analysis or the like, and is accepted by the National Institute of Technology and Evaluation (NPMD) as accession number: NITE P-02700 as 2018 BS-T2 strain deposited on April 20, 2013.
BS-T2株の有する好適な特性として、直接抗菌活性及び間接抗菌活性が挙げられる。 Suitable characteristics of the BS-T2 strain include direct antibacterial activity and indirect antibacterial activity.
直接抗菌活性は、接触抗菌活性とも称されるものであり、BS-T2株が直接的に接触する汚染菌に対して抗菌活性を示すことをいう。BS-T2株による直接抗菌活性が作用する汚染菌は、居住空間汚染菌であれば、例えば、クロカビ、アカカビ、カワキコウジカビ、コウジカビ、黒色酵母様菌、アオカビ、クモノスカビ、ケタマカビ等が挙げられ、植物病原菌であれば、例えば、ラージパッチ病等の病原菌として知られるリゾクトニア菌、灰色カビ病の病原菌として知られるボトリシス菌等が挙げられる。上記居住空間汚染菌のうち、特にBS-T2株による直接抗菌活性の作用が顕著に認められるのは、クロカビ、アカカビ、カワキコウジカビ、コウジカビ、ケタマカビである。 Direct antibacterial activity is also referred to as contact antibacterial activity, and means that BS-T2 strain exhibits antibacterial activity against contaminating bacteria that are in direct contact. Contaminants that act directly on the antibacterial activity of the BS-T2 strain include, for example, black mold, red mold, blue mold, black mold, black yeast-like fungus, blue mold, black monopod, stag beetle, etc. Examples of pathogenic bacteria include Rhizoctonia bacteria known as pathogens such as large patch disease, Botrysis bacteria known as pathogens of gray mold disease, and the like. Among the above-mentioned living space pollutants, particularly those with a direct antibacterial activity due to the BS-T2 strain are found to be black mold, red mold, red mold, red mold, and red mold.
直接抗菌活性には、そのメカニズムは定かではないが、BS-T2株が産生・放出する各種の抗菌物質、例えば、酵素、抗生物質、抗菌性ペプチド、プロテアーゼ等が作用しているものと推測される。 The mechanism of direct antibacterial activity is not clear, but it is speculated that various antibacterial substances produced and released by the BS-T2 strain, such as enzymes, antibiotics, antibacterial peptides, and proteases, are acting. The
直接抗菌活性を評価するための好適な一方法は、同一シャーレ内においてBS-T2株と汚染菌を対峙培養し、BS-T2株非接種の無処理区における汚染菌の広がりと比較する方法である。無処理区と比較して汚染菌の広がりが抑制されていれば、直接抗菌活性を有すると評価することができる。 One suitable method for directly evaluating antibacterial activity is a method in which the BS-T2 strain and the contaminating bacteria are cultured in the same petri dish and compared with the spread of the contaminating bacteria in the untreated area where the BS-T2 strain is not inoculated. is there. If the spread of contaminating bacteria is suppressed as compared with the untreated section, it can be evaluated as having direct antibacterial activity.
間接抗菌活性は、遠隔抗菌活性、空間抗菌活性、非接触抗菌活性とも称されるものであり、BS-T2株が、空間を介して、即ち、汚染菌と直接接触しない状況下で、汚染菌に対して抗菌活性を示すことをいう。BS-T2株による間接抗菌活性が作用する汚染菌は、居住空間汚染菌であれば、例えば、クロカビ、アカカビ、カワキコウジカビ、コウジカビ、黒色酵母様菌、アオカビ、クモノスカビ、ケタマカビ等が挙げられる。 Indirect antibacterial activity is also referred to as remote antibacterial activity, spatial antibacterial activity, and non-contact antibacterial activity. It shows antibacterial activity against. If the infectious antibacterial activity by the BS-T2 strain is a residential space-contaminating bacteria, for example, black mold, red mold, kawaji koji mold, koji mold, black yeast-like fungus, blue mold, black mold fungus, stag beetle and the like.
間接抗菌活性には、そのメカニズムは定かではないが、BS-T2株が産生・放出する揮発性の抗菌物質が作用しているものと推測される。 The mechanism of indirect antibacterial activity is not clear, but it is speculated that volatile antibacterial substances produced and released by the BS-T2 strain act on it.
間接抗菌活性を評価するための好適な一方法は、次のとおりである。まず、同じ形状のシャーレを２枚用意し、一方のシャーレにはBS-T2株を接種し、一定程度の範囲となるまで培養する。この時点で他方のシャーレに汚染菌を接種する。なお、上記各シャーレは、接種する菌に適した培地が付されたものである。次に、BS-T2株を培養したシャーレ上に、汚染菌を接種したシャーレを天地反転させてずれのないように接合し（BS-T2株の上方に空間を介して汚染菌を対峙させる）、両シャーレ間に隙間ができないように封止する。この状態で、一定期間経過後に、無処理区と比較して汚染菌の広がりが抑制されていれば、間接抗菌活性を有すると評価することができる。 One suitable method for evaluating indirect antibacterial activity is as follows. First, two petri dishes having the same shape are prepared, and one petri dish is inoculated with the BS-T2 strain and cultured until it reaches a certain range. At this point, the other petri dish is inoculated with the contaminating bacteria. In addition, each said petri dish is attached | subjected with the culture medium suitable for the microbe to inoculate. Next, on the petri dish in which the BS-T2 strain has been cultured, the petri dish inoculated with the contaminating bacteria is turned upside down and joined so as not to slip (the contaminating bacteria are confronted via a space above the BS-T2 strain). , And seal so that there is no gap between both petri dishes. In this state, it can be evaluated that it has indirect antibacterial activity if the spread of contaminating bacteria is suppressed as compared with the untreated section after a certain period of time.
BS-T2株の有する更に好適な特性として、消臭能が挙げられる。消臭能は、BS-T2株によって悪臭物質の濃度が低減することをいう。BS-T2株による消臭能が作用する悪臭物質として、例えば、アンモニア、トリメチルアミン、酢酸、イソ吉草酸、ホルムアルデヒド、硫化水素等が挙げられる。 A more suitable characteristic of the BS-T2 strain is deodorization ability. Deodorizing ability means that the concentration of malodorous substances is reduced by the BS-T2 strain. Examples of malodorous substances that can be deodorized by the BS-T2 strain include ammonia, trimethylamine, acetic acid, isovaleric acid, formaldehyde, and hydrogen sulfide.
消臭能には、そのメカニズムは定かではないが、BS-T2株が産生・放出する揮発性物質が作用しているものと推測される。 The mechanism of deodorant ability is not clear, but it is presumed that volatile substances produced and released by the BS-T2 strain act on it.
消臭能を評価するための好適な一方法は、密閉容器内にBS-T2株と所定量の悪臭物質を封入し、BS-T2株非設置の無処理区と悪臭濃度を比較する方法である。無処理区と比較して悪臭濃度が低下していれば、消臭能を有すると評価することができる。 One suitable method for evaluating the deodorizing ability is to enclose the BS-T2 strain and a predetermined amount of malodorous substance in a sealed container, and compare the malodor concentration with the untreated area where BS-T2 strain is not installed. is there. If the malodor concentration is lower than that in the untreated section, it can be evaluated that it has a deodorizing ability.
BS-T2株の実用上の好適な形態は、BS-T2株の生菌及び芽胞のいずれか一方又は双方を含有した粉状又は粒状の固形物（以下「BS-T2固形物」という）である。BS-T2固形物として、(i)BS-T2株の生菌及び／又は芽胞だけで構成された粉体、(ii)(i)を造粒した粒状体、(iii)BS-T2株の生菌及び／又は芽胞を粉状又は粒状の担体に担持させたもの、を例示することができる。 A practically preferable form of the BS-T2 strain is a powdery or granular solid (hereinafter referred to as “BS-T2 solid”) containing either or both of live bacteria and spores of the BS-T2 strain. is there. As a BS-T2 solid matter, (i) a powder composed only of living bacteria and / or spores of the BS-T2 strain, (ii) a granulated granule of (i), (iii) a BS-T2 strain Examples are those in which live bacteria and / or spores are supported on a powdery or granular carrier.
上記(i)は、BS-T2株以外の成分を含有しないものである。具体例として、BS-T2株の生菌だけで構成された凍結乾燥粉体、BS-T2株の芽胞だけで構成された凍結乾燥粉体、BS-T2株の生菌及び芽胞だけで構成された凍結乾燥粉体、BS-T2株の芽胞だけで構成された乾燥粉体等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。芽胞状態であることの利点は、特に乾燥、熱、圧力、薬品等に対する耐性に優れているため、高い保存安定性を得ることができることである。 The above (i) contains no components other than the BS-T2 strain. Specific examples include freeze-dried powder composed of only BS-T2 strains, freeze-dried powder composed of only BS-T2 strain spores, and only BS-T2 strain viable bacteria and spores. Examples thereof include, but are not limited to, freeze-dried powders and dry powders composed only of BS-T2 strain spores. The advantage of being in the spore state is that it is excellent in resistance to drying, heat, pressure, chemicals, etc., and thus high storage stability can be obtained.
上記(ii)は、上記(i)の粉体を所定の造粒剤を用いて造粒したものである。造粒剤は、造粒に資するものであれば特に限定されないが、形態としては粉体が好ましい。例えば、無機粉体、多糖類、高分子等が挙げられる。無機粉体の例として、ベントナイト、カオリン、石膏等が挙げられる。多糖類の例として、デンプン、セルロース等が挙げられる。高分子の例として、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール等が挙げられる。 The above (ii) is obtained by granulating the above powder (i) using a predetermined granulating agent. The granulating agent is not particularly limited as long as it contributes to granulation, but the form is preferably powder. For example, inorganic powders, polysaccharides, polymers and the like can be mentioned. Examples of the inorganic powder include bentonite, kaolin, gypsum and the like. Examples of polysaccharides include starch and cellulose. Examples of the polymer include polyvinyl alcohol and polyethylene glycol.
上記(iii)に用いる担体は、BS-T2株の生菌及び／又は芽胞を担持できるものであることが好ましい。好例は、多孔質状のものである。担体の構成材料として、例えば、炭化物、鉱物、金属又は金属塩、ケイ素、高分子等が挙げられ、これらの粉体又は粒状体が好ましい。具体例として、竹炭、木炭、籾殻くん炭、活性炭、ゼオライト、パーライト、ベントナイト、セラミクス、アルミナ、石膏、シリカゲル、多孔質ガラス、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリエチレングリコール等が挙げられる。担体に保持される菌数については特に限定されることなく、使用目的及び担体の担持力に応じて適宜設定すればよいが、例えば、担体1g当たり104CFU以上であることが好ましく、より好ましくは105CFU以上であり、更に好ましくは106CFU以上である。 The carrier used in the above (iii) is preferably a carrier capable of supporting live bacteria and / or spores of the BS-T2 strain. A good example is a porous material. Examples of the constituent material of the carrier include carbides, minerals, metals or metal salts, silicon, and polymers, and these powders or granules are preferred. Specific examples include bamboo charcoal, charcoal, rice husk kun charcoal, activated carbon, zeolite, perlite, bentonite, ceramics, alumina, gypsum, silica gel, porous glass, polyvinyl alcohol, polyurethane, polyethylene glycol, and the like. The number of bacteria retained on the carrier is not particularly limited, and may be set as appropriate according to the purpose of use and the carrier carrying capacity. For example, it is preferably 10 4 CFU or more per gram of carrier, more preferably Is 10 5 CFU or more, more preferably 10 6 CFU or more.
BS-T2固形物は、その有する特性を活かして、抗菌防黴用、消臭用、ぬめり抑制用、堆肥化促進用、生ごみ処理用、土壌改良用、植物病害防除用、水質浄化用又は汚泥処理用の組成物として使用することができる。当該組成物は、BS-T2固形物そのものであってもよいし、組成物の使用目的に応じてBS-T2固形物の他に第三の成分・化合物を含有して構成された粉体、粒子、その他固体形状のものであってもよい。 BS-T2 solids, taking advantage of its characteristics, for antibacterial fungi, deodorant, slime control, composting promotion, garbage treatment, soil improvement, plant disease control, water purification or It can be used as a composition for sludge treatment. The composition may be a BS-T2 solid itself, or a powder comprising a third component / compound in addition to the BS-T2 solid according to the intended use of the composition, Particles or other solid forms may be used.
上記組成物は、その有する特性を活かして、抗菌防黴用途、消臭用途、ぬめり抑制用途、堆肥化促進用途、生ごみ処理用途、土壌改良用途、植物病害防除用途、水質浄化用途又は汚泥処理用途に使用することができる。 Utilizing the characteristics of the above composition, antibacterial and antifungal applications, deodorization applications, slime suppression applications, composting promotion applications, garbage treatment applications, soil improvement applications, plant disease control applications, water purification applications or sludge treatments Can be used for applications.
以下に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに制限されるものではない。 EXAMPLES The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited thereto.
（BS-T2固形物）
所定濃度のBS-T2株の培養液をゼオライトに担持させ、これを乾燥したものをBS-T2固形物とした。BS-T2固形物における菌数の桁数は、109CFU/gであった。
(BS-T2 solid)
A culture solution of a predetermined concentration of BS-T2 strain was supported on zeolite and dried to obtain a BS-T2 solid. The number of bacteria in the BS-T2 solid was 10 9 CFU / g.
（汚染菌の種類）
以下の試験例１（直接抗菌活性）と試験例２（間接抗菌活性）に用いた居住空間汚染菌を表１に示した。これら汚染菌は、居住空間などで問題となっているものである。ここで、アカカビは細菌に分類されるものであり、表１中のアカカビ以外の居住空間汚染菌は不完全菌類、接合菌、子嚢菌等の糸状菌に分類されるものである。また、試験例１（直接抗菌活性）に用いた植物病原菌を表２に示した。
(Types of contaminating bacteria)
Table 1 shows the living space pollutants used in Test Example 1 (direct antibacterial activity) and Test Example 2 (indirect antibacterial activity). These contaminants are a problem in living spaces. Here, red mold is classified as bacteria, and living space pollutants other than red mold in Table 1 are classified as filamentous fungi such as imperfect fungi, zygomycetes, and ascomycetes. Table 2 shows the plant pathogens used in Test Example 1 (direct antibacterial activity).
（前培養）
表１の居住空間汚染菌の前培養用の培地として、アカカビはNBRC325液体培地、カワキコウジカビはNBRC3寒天培地、ケタマカビはNBRC8培地、それ以外の菌はPDA培地を用いた。
アカカビは、上記培地30mLを入れた50mL容三角フラスコ内で対数増殖期まで静置培養し、培養液200μLを滅菌生理食塩水1.8mLに懸濁させたものを菌原液とした。
表１中のアカカビ以外の居住空間汚染菌は、試験例１用には、上記各培地20mLを入れた直径90mmシャーレで胞子形成期まで静置培養したものを培地ごと5mm角で切り出し、これをイノキュラム（inoculum；接種材料）とした。
表１中のアカカビ以外の居住空間汚染菌は、試験例２用には、上記各培地20mLを入れた直径90mmシャーレで胞子形成期まで静置培養した後、0.01%SDS添加滅菌生理食塩水3mLを加え、ここから回収した胞子懸濁液2mLを滅菌生理食塩水によって100倍希釈したものを糸状菌原液とした。
表２中の植物病原菌は、PDA培地20mLを入れた直径90mmシャーレで胞子形成期まで静置培養したものを培地ごと5mm角で切り出し、これをイノキュラムとした。
(Pre-culture)
As a culture medium for preculture of living space-contaminating bacteria in Table 1, NBRC325 liquid medium for red mold, NBRC3 agar medium for Aspergillus oryzae, NBRC8 medium for rot fungus, and PDA medium for other bacteria.
Red mold was statically cultured in a 50 mL Erlenmeyer flask containing 30 mL of the above medium until the logarithmic growth phase, and 200 μL of the culture solution was suspended in 1.8 mL of sterile physiological saline as a bacterial stock solution.
Residual space-contaminating bacteria other than red mold in Table 1 were cut out in a 5 mm square for each of the culture medium, which was statically cultured until the spore formation stage in a 90 mm diameter petri dish containing 20 mL of each medium. Inoculum (inoculum) was used.
Residual space-contaminating bacteria other than red mold in Table 1 are used for Test Example 2 after static culture in a 90 mm diameter petri dish containing 20 mL of each medium described above until the spore formation stage, and then 3 mL of sterile physiological saline containing 0.01% SDS And 2 mL of the spore suspension collected from this was diluted 100-fold with sterile physiological saline to obtain a filamentous fungus stock solution.
The plant pathogens in Table 2 were placed in a 90 mm diameter petri dish containing 20 mL of PDA medium and statically cultured until the spore formation stage, and the whole medium was cut out into 5 mm squares and used as inoculum.
〔試験例１：直接抗菌活性〕
標準寒天培地を設置した直径90mmシャーレにおいて、シャーレを平面視したときに、シャーレの中心Oを通る仮想線（仮想線1）でシャーレを上半分と下半分を分け、シャーレの中心を通り仮想線1に直角な仮想線を仮想線2とし、シャーレ下半分の円弧と仮想線2との交点をPとする。
各汚染菌について、シャーレ下半分側に汚染菌を配置した。具体的には、菌原液（アカカビ）は仮想線1よりも下半分側の部分において菌原液100μLを画線接種により配置し、イノキュラム（アカカビ以外の菌）は中心OとPを結ぶ線分の中点付近に設置した。
・BS-T2区：BS-T2固形物0.5gをシャーレ上半分側、具体的には、仮想線1よりも上側の各所に配置した。
・無処理区：上記においてシャーレ上半分側には何も配置しなかった。
菌原液（アカカビ）を接種したシャーレは30℃で3日間培養し、また、イノキュラム（アカカビ以外の菌）を設置したシャーレは30℃で7日間培養した。各培養期間終了後に、無処理区のシャーレと比較したBS-T2区における汚染菌のコロニーの生育程度を観察し評価した。
[Test Example 1: Direct antibacterial activity]
In a petri dish with a standard agar medium with a diameter of 90 mm, when the petri dish is viewed in plan, the upper half and the lower half are separated by a virtual line (virtual line 1) passing through the center O of the petri dish, and the virtual line passes through the center of the petri dish. An imaginary line perpendicular to 1 is defined as an
For each contaminating bacterium, the contaminating bacterium was placed on the lower half of the petri dish. Specifically, the fungal stock solution (red mold) is placed on the lower half of the
-BS-T2 section: 0.5g of BS-T2 solid material was placed on the upper half of the petri dish, specifically on the upper side of the
-Untreated section: In the above, nothing was placed on the upper half of the petri dish.
Petri dishes inoculated with the fungal stock solution (red mold) were cultured at 30 ° C. for 3 days, and petri dishes with inoculum (non-red mold) were cultured at 30 ° C. for 7 days. At the end of each culture period, the growth of colonies of contaminating bacteria in the BS-T2 section compared with the petri dish in the untreated section was observed and evaluated.
図１(a)〜(c)に、培養期間終了後の写真を示した。
(a)のクロカビ（菌株：NBRC 6348）において、無処理区ではクロカビが全面的に蔓延したのに対し、BS-T2区ではシャーレ上半分側のBS-T2固形物の配置箇所とその周辺ではクロカビの生育が抑制された。なお、BS-T2固形物を誤ってシャーレ下半分側にも配置したが、その配置箇所でもクロカビの生育が抑制された。
(b)のカワキコウジカビ（菌株：NBRC 8157）と(c)のコウジカビ（菌株：NBRC 105649）においても、BS-T2区ではシャーレ上半分側のBS-T2固形物の配置箇所とその周辺ではそれぞれのカビの生育が抑制された。
1A to 1C show photographs after the end of the culture period.
In (a) black mold (strain: NBRC 6348), black mold spreads completely in the untreated area, whereas in the BS-T2 area, the location of the BS-T2 solids on the upper half of the petri dish and the surrounding area The growth of black mold was suppressed. Although the BS-T2 solid was mistakenly arranged on the lower half side of the petri dish, the growth of black mold was also suppressed at the arrangement location.
In (b) kawaji koji mold (strain: NBRC 8157) and (c) koji mold (strain: NBRC 105649), in the BS-T2 district, the location of the BS-T2 solid on the upper half of the petri dish and the surrounding area are Growth of mold was suppressed.
図２は、培養期間終了後のリゾクトニア菌におけるBS-T2区の写真である。シャーレ上半分側のBS-T2固形物の配置箇所とその周辺ではクロカビの生育が抑制された。 FIG. 2 is a photograph of BS-T2 section in Rhizoctonia after the end of the culture period. The growth of black mold was suppressed at and around the location of the BS-T2 solid on the upper half of the petri dish.
表３に、培養期間終了後の無処理区と比較したBS-T2区における汚染菌のコロニーの生育程度の5段階評価を示した。 Table 3 shows a five-step evaluation of the degree of colony growth of contaminating bacteria in the BS-T2 group compared to the untreated group after the end of the culture period.
表３の結果より、BS-T2株は、居住空間汚染菌及び植物病原菌に対して強い直接抗菌活性を発揮したことが分かる。このメカニズムは定かではないが、BS-T2株が標準寒天培地中に分泌した何らかの物質、例えば、酵素、抗生物質、抗菌性ペプチド、プロテアーゼ等が居住空間汚染菌及び植物病原菌に対して作用することによって生育抑制効果が得られたと推察された。この結果は、居住空間汚染菌について言えば、BS-T2株を居住空間汚染菌に直接接触させたときに、居住空間汚染菌の生育を抑制させることにより、居住空間汚染菌に起因する素材の劣化や染み・汚れ等を抑制することが可能となることを示唆するものである。 From the results in Table 3, it can be seen that the BS-T2 strain exerted a strong direct antibacterial activity against residential space pollutants and plant pathogens. Although this mechanism is not clear, any substance secreted into the standard agar medium by the BS-T2 strain, such as enzymes, antibiotics, antibacterial peptides, proteases, etc., must act against residential space pollutants and plant pathogens. It was speculated that the growth inhibitory effect was obtained. This result shows that when the BS-T2 strain is brought into direct contact with the living space polluting bacteria, the growth of the living space polluting bacteria is suppressed, so that This suggests that it is possible to suppress deterioration, stains, dirt, and the like.
〔試験例２：間接抗菌活性〕
直径90mmシャーレに設置した標準寒天培地上にBS-T2固形物を敷き詰め、30℃で24時間培養した（これをBS-T2株シャーレと称する）。この24時間培養終了後に、居住空間汚染菌を直径90mmシャーレに接種し（これを汚染菌シャーレと称する）、BS-T2株シャーレの上に汚染菌シャーレを天地反転させてずれのないように載置し、シャーレ同士の接合部はテープで封止した。これにより、BS-T2株と居住空間汚染菌を密閉条件下で空間を介して対峙させた。なお、アカカビの汚染菌シャーレは、シャーレに設置した前培養用と同じ種類の培地に菌原液を100μL塗沫接種して作製した。アカカビ以外の居住空間汚染菌の汚染菌シャーレは、シャーレに設置した前培養用と同じ種類の培地に糸状菌原液を100μL塗沫接種して作製した。無処理区は、上記において下側シャーレにBS-T2株を配置しなかったものである。
上記封止後、アカカビ接種の系は30℃で3日間培養し、アカカビ以外の居住空間汚染菌接種の系は30℃で7日間培養した。各培養期間終了後に、無処理区と比較したBS-T2区における汚染菌のコロニーの生育程度を観察し評価した。
[Test Example 2: Indirect antibacterial activity]
BS-T2 solid material was spread on a standard agar medium placed in a petri dish with a diameter of 90 mm, and cultured at 30 ° C. for 24 hours (this is called BS-T2 strain petri dish). After this 24-hour culture, inoculate a petri dish with a living space of 90 mm in diameter (this is called a contaminated petri dish) and place it on top of the BS-T2 petri dish so that the contaminated fungus is inverted so that there is no deviation. The joint between petri dishes was sealed with tape. As a result, the BS-T2 strain and the living space-contaminating bacteria were confronted through the space under sealed conditions. The red mold fungus petri dish was prepared by inoculating 100 μL of the bacterial stock solution on the same type of medium used for pre-culture installed in the petri dish. Contaminant petri dishes of living space-contaminating bacteria other than red mold were prepared by inoculating 100 μL of the filamentous fungal stock solution on the same type of medium used for preculture installed in the petri dish. The untreated section is one in which the BS-T2 strain was not placed in the lower petri dish in the above.
After the sealing, the red mold inoculation system was cultured at 30 ° C. for 3 days, and the non-red mold mold inoculation system was cultured at 30 ° C. for 7 days. At the end of each culture period, the degree of growth of colonies of contaminating bacteria in the BS-T2 group compared with the untreated group was observed and evaluated.
図３(a)〜(c)に、培養期間終了後の写真を示した。写真中のシャーレは、いずれも汚染菌を接種した上側シャーレである。
(a)のアカカビ（菌株：NBRC 15688）において、無処理区ではアカカビが全面的に蔓延したのに対し、BS-T2区ではアカカビが確認できないほどに生育が顕著に抑制された。(b)のクロカビ（菌株：NBRC 6348）と(c)のクロカビ（菌株：NBRC 30313）においても、BS-T2区ではそれぞれクロカビが確認できないほどに生育が顕著に抑制された。
FIGS. 3A to 3C show photographs after the end of the culture period. Each petri dish in the photograph is an upper petri dish inoculated with contaminating bacteria.
In red mold (strain: NBRC 15688) of (a), red mold was completely spread in the untreated group, whereas growth was significantly suppressed in the BS-T2 group to such an extent that no red mold was observed. In (b) black mold (strain: NBRC 6348) and (c) black mold (strain: NBRC 30313), the growth was remarkably suppressed to the extent that no black mold was observed in BS-T2.
表４に、培養期間終了後の無処理区と比較したBS-T2区における汚染菌のコロニーの生育程度の5段階評価を示した。 Table 4 shows a five-step evaluation of the degree of growth of colonies of contaminating bacteria in the BS-T2 group compared with the untreated group after the end of the culture period.
表４の結果より、BS-T2株は、居住空間汚染菌に対して強い間接抗菌活性を発揮したことが分かる。このメカニズムは定かではないが、BS-T2株が産生し放出する揮発性の抗菌物質が空間を介して居住空間汚染菌に対して作用することによって生育抑制効果が得られたと推察された。この結果は、BS-T2株を用いることにより、対象とする居住空間汚染菌に直接接触せずとも、空間を介した間接的な居住空間汚染菌の生育抑制により、居住空間汚染菌に起因する素材の劣化や染み・汚れ等を抑制することが可能となることを示唆するものである。 From the results in Table 4, it can be seen that the BS-T2 strain exerted strong indirect antibacterial activity against residential space pollutants. Although this mechanism is not clear, it was speculated that the growth-suppressing effect was obtained by the action of volatile antibacterial substances produced and released by the BS-T2 strain against living space pollutants through the space. This result can be attributed to the living space pollutant by using the BS-T2 strain, because it does not directly contact the target living space pollutant, but indirectly suppresses the growth of the living space pollutant through the space. This suggests that it is possible to suppress deterioration, stains, dirt, etc. of the material.
〔試験例３：消臭能〕
(1)試薬及び器具
・におい袋(35cm×50cm)（アラム株式会社）
・試験対象ガス
アンモニア：アンモニア水(28%、特級)（小宗化学薬品株式会社）から発生させたガス
トリメチルアミン：トリメチルアミン水溶液(28%)（東京化成工業株式会社）から発生させたガス
酢酸：酢酸(特級)（小宗化学薬品株式会社）から発生させたガス
イソ吉草酸：イソ吉草酸(特級)（東京化成工業株式会社）から発生させたガス
ホルムアルデヒド：ホルムアルデヒド(36%、特級)（関東化学株式会社）から発生させたガス
硫化水素：硫化鉄(II)（硫化水素発生用）（小宗化学薬品株式会社）に希硫酸を加えて発生させたガス
・ガス検知管：上記各ガスを対象としたガス検知管（株式会社ガステック）を用いた。
(2)操作
検体を前処理した後、試験を実施した。詳細は以下のとおりである。
・検体：BS-T2固形物10gをナイロンメッシュ袋に収容したものを用いた。
・前処理：容量9.3Lのポリプロピレン製のシール容器内の両端部に合計1Lのイオン交換水を入れた200mLビーカーを複数個配置し、中央部に検体を立てて放置できるようにしたスライドガラス立てを配置し、このスライドガラス立てを用いて検体を立てた状態とした。シール容器を密閉状態とし、約16時間加湿させた。
・試験：加湿した検体をにおい袋に入れ、ヒートシールを施した後、空気9Lを封入し、設定したガス濃度（表５「初期ガス濃度」参照）となるように試験対象ガスを添加した。これを室温で静置し、所定の経過時間ごと（表５「測定時間」参照）に袋内のガス濃度をガス検知管を用いて測定した（BS-T2区）。一方、検体を入れずに同様にしてガス濃度を測定したものを無処理区とした。
[Test Example 3: Deodorizing ability]
(1) Reagents, instruments and odor bags (35cm x 50cm) (Aram Co., Ltd.)
-Gas to be tested Ammonia: Gas generated from aqueous ammonia (28%, special grade) (Oso Chemical Co., Ltd.) Trimethylamine: Gas generated from trimethylamine aqueous solution (28%) (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) Acetic acid: Acetic acid Gas generated from (special grade) (Koso Chemical Co., Ltd.) Isovaleric acid: Gas generated from isovaleric acid (special grade) (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) Formaldehyde: Formaldehyde (36%, special grade) (Kanto Chemical) Gas generated from Co., Ltd. Hydrogen sulphide: Iron sulfide (II) (for hydrogen sulphide generation) (Oso Chemical Co., Ltd.) Gas and gas detector tubes generated by adding dilute sulfuric acid: For each of the above gases The gas detector tube (Gastech Co., Ltd.) was used.
(2) Operation After the sample was pretreated, the test was performed. Details are as follows.
-Specimen: A BS-T2 solid 10g contained in a nylon mesh bag was used.
・ Pretreatment: A slide glass stand in which a plurality of 200mL beakers with a total of 1L of ion-exchanged water are placed on both ends of a 9.3L polypropylene sealed container, and the specimen can be left standing in the center. The specimen was set up using this slide glass stand. The sealed container was sealed and humidified for about 16 hours.
Test: A humidified specimen was placed in an odor bag, heat-sealed, 9 L of air was enclosed, and a test target gas was added so as to have a set gas concentration (see Table 5 “Initial Gas Concentration”). This was allowed to stand at room temperature, and the gas concentration in the bag was measured using a gas detection tube at every predetermined elapsed time (see Table 5 “Measurement time”) (BS-T2). On the other hand, a sample in which the gas concentration was measured in the same manner without a sample was designated as an untreated section.
結果を図４に示した。各グラフにおいて、縦軸はガス濃度、横軸は時間である。
BS-T2区は、いずれの試験対象ガスにおいても無処理区よりもガス濃度が低下したことより、BS-T2株の有する消臭能によって悪臭である試験対象ガスの濃度を低減させたと評価できるものであった。特に、短時間で顕著な効果が現れた試験対象ガスは、アンモニア、トリメチルアミン、酢酸、イソ吉草酸、ホルムアルデヒドであった。BS-T2株による消臭能のメカニズムは定かではないが、BS-T2株が産生・放出する揮発性物質が作用しているものと推測された。
The results are shown in FIG. In each graph, the vertical axis represents gas concentration and the horizontal axis represents time.
BS-T2 can be evaluated as having reduced the concentration of test gases that are offensive odor due to the deodorizing ability of the BS-T2 stock, because the gas concentration in any of the test gases was lower than that in the untreated zone. It was a thing. In particular, the test target gases that showed a remarkable effect in a short time were ammonia, trimethylamine, acetic acid, isovaleric acid, and formaldehyde. Although the mechanism of deodorizing ability by the BS-T2 strain is not clear, it was speculated that the volatile substances produced and released by the BS-T2 strain are acting.
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