JP2019142797A - Red rice bran for the treatment or prevention of urolithiasis - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、尿路結石症の治療または予防のための、赤米糠に関する。 The present invention relates to red rice bran for the treatment or prevention of urolithiasis.
尿路結石症を治療するための方法としては、これまでに大量の水分摂取による自然排石促進方法や体外衝撃波結石破砕術などが知られているが、痛みや血尿を伴うことがある。 As a method for treating urinary calculus, a method of promoting natural calculus by ingesting a large amount of water or extracorporeal shock wave lithotripsy is known, but it may be accompanied by pain or hematuria.
尿路結石症を予防するための方法としては、これまでに大量の水分摂取、食生活改善、クエン酸製剤の服用、サイアザイド系利尿薬の服用、およびカテキンまたはガロタンニンを有する食品の摂取などが知られている。大量の水分摂取や食生活改善は心理的負担が大きく、長期の継続が困難である。また、クエン酸製剤は尿をアルカリ化するが、過度なアルカリ化（ｐＨ７．５以上）はリン酸カルシウムや尿酸ナトリウムの析出を促進し、また尿路感染症に罹患するリスクが増大する懸念がある。また、サイアザイド系利尿薬は低カリウム血症などの電解質異常を引き起こす可能性があり、カテキンなどを多く含む食品（お茶など）は結石の構成成分であるシュウ酸も多く含まれていることが多い。 Methods to prevent urinary lithiasis are known to include large amounts of water intake, dietary improvement, taking citric acid preparations, taking thiazide diuretics, and taking foods with catechin or gallotannin. It has been. Large amounts of water intake and eating habits have a great psychological burden and are difficult to continue for a long time. Citric acid preparations alkalinize urine, but excessive alkalinity (pH 7.5 or more) promotes precipitation of calcium phosphate and sodium urate, and there is a concern that the risk of suffering from urinary tract infections increases. In addition, thiazide diuretics can cause electrolyte abnormalities such as hypokalemia, and foods that contain a lot of catechins (such as tea) often contain a lot of oxalic acid, a constituent of stones. .
これまでに、尿中のシュウ酸排泄量を調整することによる尿路結石を防止する方法として１−［２−（２，４−ジクロルフェノキシ）フェニル］−５−メチル−１，２，３−トリアゾール−４−カルボン酸を有効成分とする尿路結石防止剤（例えば、特許文献１参照）や、Ｌ型アルドン酸、その塩又はそのラクトン体を有効成分とする、尿路結石症予防治療薬（例えば、特許文献２参照）が開示されているが、より効果的で長期間の摂取が容易である尿路結石症の治療や予防（または再発予防）のための新たな手法が希求されている。 So far, 1- [2- (2,4-dichlorophenoxy) phenyl] -5-methyl-1,2,3 is a method for preventing urinary calculus by adjusting the amount of oxalate excreted in urine. -Urinary stone prevention agent (for example, refer to Patent Document 1) containing triazole-4-carboxylic acid as an active ingredient, L-type aldonic acid, a salt thereof, or a lactone body thereof as an active ingredient Drugs (see, for example, Patent Document 2) have been disclosed, but there is a need for new methods for treatment and prevention (or prevention of recurrence) of urolithiasis that are more effective and easy to take for a long time. ing.
また、これまでに、米糠フィチンが腸管内でのカルシウム吸収抑制物質であることは知られているが（例えば、非特許文献１参照）、赤米糠が尿路結石症の治療または予防に用いられることについては何ら知見がない。 In addition, it has been known that rice bran phytin is a substance that suppresses calcium absorption in the intestinal tract (see, for example, Non-Patent Document 1), but red rice bran is used for the treatment or prevention of urolithiasis. There is no knowledge about this.
長期間継続して摂取することが容易である尿路結石症の治療または予防のための赤米糠を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide red rice bran for the treatment or prevention of urolithiasis that can be easily taken for a long time.
本発明者らは、対象に赤米糠を摂取させることにより、尿路結石症を治療または予防できることを見出した。 The present inventors have found that urinary calculus can be treated or prevented by ingesting red rice bran into a subject.
すなわち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
（１）尿路結石症の治療または予防のための、赤米糠。
（２）尿路結石症の予防のための、（１）に記載の赤米糠。
（３）結石核形成阻害および／または尿細管上皮結石核形成防止のための、（１）または（２）に記載の赤米糠。
（４）尿細管上皮結石核形成防止のための、（１）〜（３）のいずれかに記載の赤米糠。
（５）赤米糠が赤米糠水抽出物である、（１）〜（４）のいずれかに記載の赤米糠。
（６）赤米糠を有効成分として含む、尿路結石症の治療または予防のための食品組成物。
（７）尿路結石症の予防のための、（６）に記載の食品組成物。
（８）結石核形成阻害または尿細管上皮結石核形成防止のための、（６）または（７）に記載の食品組成物。
（９）尿細管上皮結石核形成防止のための、（６）〜（８）のいずれかに記載の食品組成物。
（１０）赤米糠が赤米糠水抽出物である、（６）〜（９）のいずれかに記載の食品組成物。
That is, according to the present invention, the following inventions are provided.
(1) Red rice bran for the treatment or prevention of urolithiasis.
(2) The red rice bran as described in (1) for prevention of urinary calculus.
(3) The red rice bran according to (1) or (2) for inhibiting calculus nucleation and / or preventing tubule epithelial calculus nucleation.
(4) The red rice bran according to any one of (1) to (3) for prevention of tubule epithelial stone nucleation.
(5) The red rice bran according to any one of (1) to (4), wherein the red rice bran is a red rice bran extract.
(6) A food composition for treating or preventing urolithiasis comprising red rice bran as an active ingredient.
(7) The food composition according to (6), for prevention of urolithiasis.
(8) The food composition according to (6) or (7), for inhibiting calculus nucleation or preventing tubule epithelial nucleation.
(9) The food composition according to any one of (6) to (8), which is used to prevent tubule epithelial stone nucleation.
(10) The food composition according to any one of (6) to (9), wherein the red rice bran is a red rice bran extract.
本発明によれば、尿路結石症の治療または予防のための赤米糠が提供される。 According to the present invention, a red rice bran for treating or preventing urinary calculus is provided.
本発明によれば、尿路結石症の治療または予防のための赤米糠が提供される。 According to the present invention, a red rice bran for treating or preventing urinary calculus is provided.
本発明において、赤米とは、玄米の外層部の種皮層に赤色系の色素が蓄積した米またはそれを有するイネのことであり、色素の種類としては、タンニン系の赤色系色素をもつものである（日本作物学会紀事 73(2):137-147(2004）参照)。赤米糠とは、赤米を搗精することによって除かれる、果皮、種皮、胚芽などの部分を指す。赤米糠は、精米機等を使用して搗精することで得ることができ、通常玄米の１０％程度が糠となる。本発明の赤米糠は、尿路結石症の治療または予防のために用いることができる赤米糠であればどのような赤米糠でもよいが、赤米の「夕やけもち」、「紅染めもち」、または「ベニロマン」の糠であることが好ましい。 In the present invention, red rice is rice having a red pigment accumulated in the seed coat layer of the outer layer of brown rice or rice having the same, and the type of pigment has a tannin red pigment. (See Journal of the Crop Science Society of Japan 73 (2): 137-147 (2004)). Red rice bran refers to parts such as the pericarp, seed coat, and germ that are removed by scouring red rice. Red rice koji can be obtained by kneading using a rice mill or the like, and usually about 10% of brown rice becomes koji. The red rice bran of the present invention may be any red rice bran as long as it can be used for the treatment or prevention of urolithiasis, but the red rice “evening rice cake”, “red dyed rice cake”, Or it is preferable that it is a spear of "Beniroman".
尿の通り道である、腎臓、尿管、膀胱、尿道をまとめて尿路と呼ぶが、尿路結石症とは、この尿路に石ができて詰まり、様々な症状を引き起こす疾患である。典型的な尿路結石症の症状は疝痛と血尿であるが、結石があっても尿路の閉塞がないあるいは弱い場合、痛みや血尿を伴わないこともある。尿路結石の結石成分の約９０％がカルシウム結石であり、代表的な結石はシュウ酸カルシウム結石とされている。シュウ酸カルシウム結石の形成機序は、食生活の乱れや代謝異常などにより尿の成分バランスが崩れ、カルシウムとシュウ酸が尿中で過飽和状態となり、溶けきれずに結晶化することに起因する。結晶は主に腎実質のネフロンの下流にあたる尿細管に生じ、結晶が尿細管上皮細胞表面に付着し結石核となり、結石核を中心に結晶が凝集、成長することで最終的に結石が形成される。本発明の赤米糠は、好ましくは結石核形成阻害および／または尿細管上皮結石核形成防止することにより、より好ましくは尿細管上皮結石核形成防止することにより、尿路結石症の治療または予防（好ましくは、予防）することができる。ここで、予防とは、尿路結石症の疾患の病態またはその生物学的徴候の見込みまたは重篤度を実質的に減少させる、またはそのような病態またはその生物学的徴候の発症を遅延させること等をいい、再発の予防を含む。 The urinary tract, kidney, ureter, bladder, and urethra are collectively referred to as the urinary tract, and urinary calculus is a disease that causes clogging of the urinary tract and causes various symptoms. Typical symptoms of urolithiasis are colic and hematuria, but if there is a stone and there is no or weak urinary tract obstruction, it may not be accompanied by pain or hematuria. About 90% of the stone components of urinary calculi are calcium stones, and a typical stone is a calcium oxalate stone. The formation mechanism of calcium oxalate stones is due to the fact that the urinary component balance is lost due to disorder of eating habits and metabolic abnormalities, and calcium and oxalic acid become supersaturated in urine and crystallize without being dissolved. Crystals mainly occur in the tubules downstream of nephron in the renal parenchyma, and the crystals adhere to the surface of the tubular epithelial cells to become calculus nuclei. The crystals aggregate and grow around the calculus nuclei, eventually forming a calculus. The The red rice bran of the present invention preferably treats or prevents urolithiasis by inhibiting stone nucleation and / or preventing tubular epithelial stone nucleation, more preferably preventing tubular epithelial stone nucleation ( Preferably, it can be prevented. As used herein, prevention substantially reduces the likelihood or severity of a disease state or biological sign of a urolithiasis disease or delays the onset of such disease state or biological sign. Including prevention of recurrence.
本発明の好ましい態様によれば、尿路結石症の予防のための赤米糠が提供され、本発明のより好ましい態様によれば、結石核形成阻害および／または尿細管上皮結石核形成防止のための赤米糠が提供され、本発明のさらに好ましい態様によれば、尿細管上皮結石核形成防止のための赤米糠が提供される。ここで、シュウ酸カルシウム結石の形成機序は、尿細管腔で形成された結石核が腎尿細管上皮細胞表面に付着することから始まるが、好ましくは、赤米糠により結石の核形成の阻害および／または結石核の尿細管上皮への付着が防止されることにより、尿路結石症の治療または予防を行うことができる。 According to a preferred embodiment of the present invention, a red rice bran for preventing urolithiasis is provided, and according to a more preferred embodiment of the present invention, for inhibiting calculus nucleation and / or preventing tubular epithelial calculus nucleation. In accordance with a further preferred embodiment of the present invention, a red rice bran for preventing tubule epithelial stone nucleation is provided. Here, the formation mechanism of calcium oxalate stones starts from the adhesion of stone nuclei formed in the tubular lumen to the surface of renal tubular epithelial cells. Preferably, red rice bran inhibits nucleation of stones. By preventing adhesion of calculus nuclei to tubular epithelium, urolithiasis can be treated or prevented.
本発明の赤米糠は、そのまま用いても良いが、赤米糠水抽出物を用いることがより好ましい。赤米糠水抽出物は、例えば、赤米糠を１０倍容の水に浸し、よく攪拌した後、冷暗所で一晩放置して抽出することができる。赤米糠水抽出物を用いることにより、結石形成割合をより低下させることができる。ここで、結石形成割合は例えば下記の実施例の記載に基づいて求めることができる。 The red rice bran of the present invention may be used as it is, but it is more preferable to use a red rice bran extract. The red rice bran extract can be extracted, for example, by immersing the red rice bran in 10 volumes of water, stirring well, and then allowing it to stand overnight in a cool and dark place. By using the red rice brine extract, the calculus formation ratio can be further reduced. Here, the calculus formation ratio can be obtained, for example, based on the description of the following examples.
本発明の別の態様によれば、赤米糠を有効成分として含む、尿路結石症の治療または予防のための食品組成物が提供される。食品組成物としては、特に限定されるものではないが、例えば、サプリメント、飲料、または菓子などが挙げられる。 According to another aspect of the present invention, a food composition for treating or preventing urolithiasis comprising red rice bran as an active ingredient is provided. Although it does not specifically limit as a food composition, For example, a supplement, a drink, a confectionery, etc. are mentioned.
本発明の別の好ましい態様によれば、赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）を有効成分として含む、尿路結石症の予防のための食品組成物が挙げられる。 According to another preferred embodiment of the present invention, a food composition for preventing urinary lithiasis comprising red rice bran (preferably red rice bran extract) as an active ingredient can be mentioned.
本発明の別のより好ましい態様によれば、赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）を有効成分として含む、結石核形成阻害および／または尿細管上皮結石核形成防止のための食品組成物が挙げられる。 According to another more preferable aspect of the present invention, a food composition for inhibiting calculus nucleation and / or preventing tubule epithelial stone nucleation, comprising red rice bran (preferably red rice bran extract) as an active ingredient. Is mentioned.
本発明の別のより好ましい態様によれば、赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）を有効成分として含む、尿細管上皮結石核形成防止のための食品組成物が挙げられる。 According to another more preferable aspect of the present invention, there is a food composition for preventing tubular epithelial stone nucleation, comprising red rice bran (preferably red rice bran extract) as an active ingredient.
本発明の別のより好ましい態様によれば、赤米糠水抽出物を有効成分として含む、尿細管上皮結石核形成防止のための食品組成物が挙げられる。 According to another more preferable aspect of the present invention, a food composition for preventing tubule epithelial stone nucleation formation comprising red rice brine extract as an active ingredient can be mentioned.
本発明の別の態様によれば、赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）を有効成分として含む、尿路結石症の治療または予防のための（好ましくは、結石核形成阻害および／または尿細管上皮結石核形成防止のための）医薬品（医薬組成物）が提供される。医薬品（医薬組成物）とは、製剤化のために許容されうる添加剤を併用して、常法に従って、経口製剤または非経口製剤として調製したものである。医薬品が経口製剤の場合には、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤などの固形製剤、溶液、懸濁液、乳濁液などの液状製剤の形態をとることができる。なお、患者への摂取（投与）の簡易性の点からは、医薬品では、経口製剤であることが好ましい。ここで、製剤化のために許容されうる添加剤には、例えば、賦形剤、安定剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味料、着色料、香料、緩衝剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤などが挙げられる。 According to another aspect of the present invention, for the treatment or prevention of urolithiasis (preferably, inhibition of stone nucleation and / or, comprising red rice bran (preferably red rice bran extract) as an active ingredient) Provided is a pharmaceutical product (pharmaceutical composition) for preventing tubular epithelial stone nucleation. A pharmaceutical product (pharmaceutical composition) is prepared as an oral formulation or a parenteral formulation according to a conventional method using additives that are acceptable for formulation. When the pharmaceutical is an oral preparation, it can be in the form of a solid preparation such as a tablet, powder, fine granule, granule, capsule, pill, or sustained release preparation, or a liquid preparation such as a solution, suspension, or emulsion. Can take. In terms of simplicity of ingestion (administration) to a patient, an oral preparation is preferable for a pharmaceutical product. Here, additives that are acceptable for formulation include, for example, excipients, stabilizers, preservatives, wetting agents, emulsifiers, lubricants, sweeteners, coloring agents, fragrances, buffers, antioxidants. Agents, pH adjusters and the like.
本発明の別の態様によれば、赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）を、対象（好ましくは、必要とする対象）に摂取させることを含んでなる、尿路結石症の治療または予防方法が提供される。本発明の好ましい態様によれば、赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）を、対象に摂取させることを含んでなる、尿路結石症の治療または予防方法（ヒトに対する医療行為を除く）が提供される。ここで、「ヒトに対する医療行為」とは、医師等の処方を必要として、ヒトに対して医薬品を摂取させる（投与する）行為などを意味する。対象には、ヒト以外の動物（馬、牛などの家畜、犬、猫などの愛玩動物、動物園などで飼育されている鑑賞動物など）も包含される。 According to another aspect of the present invention, a treatment for urinary calculus comprising ingesting a red rice bran (preferably red rice bran extract) into a subject (preferably a subject in need) or Prophylactic methods are provided. According to a preferred embodiment of the present invention, a method for treating or preventing urolithiasis (excluding medical practice for humans) comprising ingesting a red rice bran (preferably red rice bran extract) into a subject. Is provided. Here, the “medical action for humans” means an action that requires a doctor or the like to ingest (administer) a medicine to a human. The subjects also include animals other than humans (domestic animals such as horses and cows, pets such as dogs and cats, appreciation animals kept in zoos, etc.).
本発明の好ましい態様によれば、赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）を、対象に摂取させることを含んでなる、尿路結石症の予防方法が提供される。 According to a preferred aspect of the present invention, there is provided a method for preventing urinary calculus, which comprises ingesting a red rice bran (preferably, a red rice bran extract).
本発明のより好ましい態様によれば、赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）を、対象に摂取させることを含んでなる、結石核形成阻害方法または尿細管上皮結石核形成防止方法が提供される。 According to a more preferred aspect of the present invention, there is provided a method for inhibiting calculus nucleation or a method for preventing tubule epithelial stone nucleation, which comprises ingesting red rice bran (preferably red rice bran extract) into a subject. Is done.
本発明のより好ましい態様によれば、赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）を、対象に摂取させることを含んでなる、尿細管上皮結石核形成防止方法が提供される。 According to a more preferred aspect of the present invention, there is provided a method for preventing tubule epithelial stone nucleation, which comprises ingesting a red rice bran (preferably, a red rice bran extract).
本発明の別の態様によれば、尿路結石症の治療または予防のための（好ましくは、結石核形成阻害および／または尿細管上皮結石核形成防止のための）食品組成物または医薬組成物の製造のための赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）の使用が提供される。 According to another aspect of the present invention, a food composition or a pharmaceutical composition for the treatment or prevention of urolithiasis (preferably for inhibition of stone nucleation and / or prevention of tubule epithelial stone nucleation) Use of red rice bran (preferably red rice bran extract) for the production of
本発明の別の態様によれば、尿路結石症の治療または予防のための（好ましくは、結石核形成阻害および／または尿細管上皮結石核形成防止のための）、赤米糠（好ましくは、赤米糠水抽出物）の使用が提供される。 According to another aspect of the present invention, red rice bran (preferably, for the treatment or prevention of urolithiasis (preferably for inhibition of calculus nucleation and / or prevention of tubular epithelial calculus nucleation), Use of red rice brine extract) is provided.
以下の例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。以下の試験例１〜４に用いた動物はいずれも血中のカルシウム濃度が高くない試験動物である。 The present invention will be specifically described based on the following examples, but the present invention is not limited to these examples. The animals used in the following Test Examples 1 to 4 are test animals whose calcium concentration in blood is not high.
試験例１：抗酸化作用を有する食品の尿路結石症予防効果に関する検討
（１）試験動物（Wistar-ST、雄性、１０週齢）を下記表１に記載の群に割り当てた。本実施例において、標準飼料はＡＩＮ−９３Ｍの飼料を表す。標準飼料（ＡＩＮ−９３Ｍ）の組成は下記表２に記載の通りであり、赤米糠は「夕やけもち」（赤米）の糠を用いた。
※グリコール酸が「＋」と記載されている群は、尿路結石誘発物質であるグリコール酸100mg/dayを混餌した。コントロール群は標準飼料のみで飼育し、ネガティブコントロール群、ボイセンベリー群、赤米（夕やけもち）糠群、カカオ群、およびブルーベリー群は標準飼料に尿路結石誘発物質であるグリコール酸100mg/dayを混餌し飼育した。
※「ボイセンベリー果汁を１５．８％で標準飼料に混餌」とは、標準飼料２０ｇに３．１６ｇのボイセンベリー果汁が含まれていることを意味し、赤米糠、カカオ、およびブルーベリー果汁についても同様のことを意味する。
Test Example 1: Examination of urinary calculus prophylaxis effect of food having antioxidant action (1) Test animals (Wistar-ST, male, 10 weeks old) were assigned to the groups described in Table 1 below. In this example, the standard feed represents AIN-93M feed. The composition of the standard feed (AIN-93M) is as shown in Table 2 below, and the red rice bran used was “Yuyakemochi” (red rice).
* “Boysenberry juice mixed with standard feed at 15.8%” means that 3.16g of Boysenberry juice is contained in 20g of standard feed, and red rice bran, cacao, and blueberry juice are also included. It means the same thing.
標準飼料（ＡＩＮ−９３Ｍ）の組成は以下の通りである。ＡＩＮ−９３Ｍは、米国国立栄養研究所(American Institute of Nutrition)から１９９３年に発表されたマウス・ラット用の栄養研究のための標準精製飼料を表す。
（２）試験スケジュール
(2) Test schedule
（３）シュウ酸カルシウム結石の形成割合の測定
腎臓中のシュウ酸カルシウム結石の形成割合を測定するために、解剖後、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で腎臓を固定して作成した組織切片へPizzolato染色を行った。結石形成部分を偏光顕微鏡により同定し、画像解析ソフト（ImageJ）でシュウ酸カルシウム結石の沈着面積および組織切片中の腎臓の断面積を定量化し、シュウ酸カルシウム結石の形成割合を算出した。すなわち、組織切片中の腎臓の断面積に対する、結石が形成した面積（Pizzolato染色で染色された面積）の割合を算出した（シュウ酸カルシウムの沈着面積／組織切片中の腎臓の断面積×１００（％））（例えば、「泌尿紀要 ５７：５５−５８、２０１１年」参照）。このシュウ酸カルシウム結石の形成割合の結果を図１に表す。また、赤米糠群では試験を行った５個体中の２個体のみで結石の形成が見られたが、残りの３個体では結石の形成が見られなかった。一方で、ネガティブコントロール群、ボイセンベリー群、カカオ群、およびブルーベリー群では試験を行った全ての個体で結石の形成が見られた。
(3) Measurement of the formation rate of calcium oxalate stones To measure the formation rate of calcium oxalate stones in the kidney, Pizzolato was applied to a tissue section prepared by fixing the kidney with 4% paraformaldehyde (PFA) after dissection. Staining was performed. The formation part of the calculus was identified with a polarizing microscope, and the deposition area of the calcium oxalate stone and the cross-sectional area of the kidney in the tissue section were quantified with image analysis software (ImageJ), and the formation ratio of the calcium oxalate stone was calculated. That is, the ratio of the area where stones were formed (area stained with Pizzolato staining) to the cross-sectional area of the kidney in the tissue section was calculated (calcium oxalate deposition area / cross-sectional area of the kidney in the tissue section × 100). %)) (See, for example, “Urology Bulletin 57: 55-58, 2011”). The result of the formation ratio of this calcium oxalate stone is shown in FIG. In the red rice bran group, only 2 out of 5 individuals tested showed formation of stones, but the remaining 3 individuals did not show formation of stones. On the other hand, in the negative control group, the boysenberry group, the cacao group, and the blueberry group, stone formation was observed in all the individuals tested.
上記の結果から、ポリフェノールを含む食品であれば尿路結石形成割合を低下できる訳ではなかった。すなわち、ポリフェノールを含む食品であるボイセンベリー、カカオおよび、ブルーベリーでは尿路結石形成割合はネガティブコントロールに比べ同程度か低下しなかったが、赤米糠を用いることによって尿路結石形成割合を顕著に低下できることが分かった。 From the above results, it was not possible to reduce the urinary calculus formation rate with foods containing polyphenols. That is, Boysenberry, cacao, and blueberry, which are polyphenol-containing foods, did not decrease the urinary calculus formation rate to the same extent as the negative control, but the use of red rice bran significantly reduced the urinary calculus formation rate. I understood that I could do it.
試験例２：異なる米糠の尿路結石症予防効果に関する検討
（１）試験動物（Wistar-ST、雄性、１０週齢）を下記表３に記載の群に割り当てた。
※グリコール酸が「＋」と記載されている群は、尿路結石誘発物質であるグリコール酸100mg/dayを混餌した。コントロール群は標準飼料のみで飼育し、ネガティブコントロール群、赤米（夕やけもち）糠群、黒米（朝紫）糠群、および白米（コシヒカリ）糠群は標準飼料に尿路結石誘発物質であるグリコール酸100mg/dayを混餌し飼育した。
※「赤米糠を１０％で標準飼料に混餌」とは、標準飼料２０ｇに２ｇの赤米糠が含まれていることを意味し、黒米糠および白米糠についても同様のことを意味する。
Test Example 2: Study on preventive effect of different rice bran on urolithiasis (1) Test animals (Wistar-ST, male, 10 weeks old) were assigned to the groups described in Table 3 below.
* “10% red rice bran mixed with standard feed” means that 2 g of red rice bran is contained in 20 g of standard feed, and the same is true for black rice bran and white rice bran.
（２）試験スケジュール
(2) Test schedule
（３）シュウ酸カルシウム結石の形成割合の測定
腎臓中のシュウ酸カルシウム結石の形成割合を測定するために、解剖後、４％ＰＦＡで腎臓を固定して作成した組織切片へPizzolato染色を行った。結石形成部分を偏光顕微鏡により同定し、画像解析ソフト（ImageJ）でシュウ酸カルシウム結石の沈着面積および組織切片中の腎臓の断面積を定量化し、シュウ酸カルシウム結石の形成割合を算出した。すなわち、組織切片中の腎臓の断面積に対する、結石が形成した面積（Pizzolato染色で染色された面積）の割合を算出した（シュウ酸カルシウムの沈着面積／組織切片中の腎臓の断面積×１００（％））（例えば、「泌尿紀要 ５７：５５−５８、２０１１年」参照）。このシュウ酸カルシウム結石の形成割合の結果を図２に表す。また、赤米糠群および白米糠群では試験を行った５個体中の３個体のみで結石の形成が見られたが、残りの２個体では結石の形成が見られなかった。一方で、黒米糠群では試験を行った全ての個体で結石の形成が見られた。
(3) Measurement of the formation rate of calcium oxalate stones To measure the formation rate of calcium oxalate stones in the kidney, Pizzolato staining was performed on tissue sections prepared by fixing the kidney with 4% PFA after dissection. . The formation part of the calculus was identified with a polarizing microscope, and the deposition area of the calcium oxalate stone and the cross-sectional area of the kidney in the tissue section were quantified with image analysis software (ImageJ), and the formation ratio of the calcium oxalate stone was calculated. That is, the ratio of the area where stones were formed (area stained with Pizzolato staining) to the cross-sectional area of the kidney in the tissue section was calculated (calcium oxalate deposition area / cross-sectional area of the kidney in the tissue section × 100). %)) (See, for example, “Urology Bulletin 57: 55-58, 2011”). The result of the formation ratio of this calcium oxalate stone is shown in FIG. In the red rice bran group and the white rice bran group, only 3 of the 5 individuals tested showed formation of stones, but the remaining 2 individuals did not show formation of stones. On the other hand, in the black rice bran group, stone formation was observed in all the individuals tested.
上記の結果から、米糠であれば尿路結石形成割合を低下できる訳ではなかった。すなわち、黒米糠および白米糠では尿路結石形成割合はほとんど低下しなかったが、赤米糠を用いることによって尿路結石形成割合を顕著に低下できることが分かった。 From the above results, rice bran could not reduce the urinary calculus formation rate. That is, it was found that the urinary calculus formation rate hardly decreased in black rice bran and white rice bran, but the urinary calculus formation rate could be remarkably reduced by using red rice bran.
試験例３：赤米糠抽出物の尿路結石症予防効果に関する検討
（１）試験動物（Wistar-ST、雄性、１０週齢）を下記表４に記載の群に割り当てた。
※グリコール酸が「＋」と記載されている群は、尿路結石誘発物質であるグリコール酸100mg/dayを混餌した。コントロール群は標準飼料のみで飼育し、ネガティブコントロール群、赤米糠水抽出物群、赤米糠メタノール抽出物群、赤米糠酢酸エチル抽出物群、および赤米糠ヘキサン抽出物群は標準飼料に尿路結石誘発物質であるグリコール酸100mg/dayを混餌し飼育した。
※「抽出物を１％で標準飼料に混餌」とは、赤米（夕やけもち）糠を１０倍容の水、メタノール、酢酸エチル、またはヘキサンに浸し、よく攪拌した後、冷暗所で一晩放置した上清を抽出物とし、その抽出物を標準飼料２０ｇに０．２ｇ含まれるように加えることを意味する。
Test Example 3: Study on preventive effect of red rice bran extract on urolithiasis (1) Test animals (Wistar-ST, male, 10 weeks old) were assigned to the groups described in Table 4 below.
* The group in which glycolic acid is described as “+” was fed with 100 mg / day of glycolic acid, which is a urinary calculus inducer. The control group is bred only with the standard feed, the negative control group, the red rice bran extract group, the red rice bran methanol extract group, the red rice bran ethyl acetate extract group, and the red rice bran hexane extract group are urinary stones on the standard feed The inducer was fed with 100 mg / day of glycolic acid and reared.
* “Extracted 1% extract into standard feed” means soaking red rice (evening rice cake) in 10 volumes of water, methanol, ethyl acetate, or hexane, stirring well, and then standing overnight in a cool dark place It means that the obtained supernatant is used as an extract, and the extract is added so that 0.2 g is contained in 20 g of the standard feed.
（２）試験スケジュール
(2) Test schedule
（３）シュウ酸カルシウム結石の形成割合の測定
腎臓中のシュウ酸カルシウム結石の形成割合を測定するために、解剖後、４％ＰＦＡで腎臓を固定して作成した組織切片へPizzolato染色を行った。結石形成部分を偏光顕微鏡により同定し、画像解析ソフト（ImageJ）でシュウ酸カルシウム結石の沈着面積および組織切片中の腎臓の断面積を定量化し、シュウ酸カルシウム結石の形成割合を算出した。すなわち、組織切片中の腎臓の断面積に対する、結石が形成した面積（Pizzolato染色で染色された面積）の割合を算出した（シュウ酸カルシウムの沈着面積／組織切片中の腎臓の断面積×１００（％））（例えば、「泌尿紀要 ５７：５５−５８、２０１１年」参照）。このシュウ酸カルシウム結石の形成割合の結果を図３に表す。また、赤米糠水抽出物群では、試験を行った５個体中の３個体のみで結石の形成が見られたが、残りの２個体では結石の形成が見られなかった。一方で、赤米糠メタノール抽出物群、赤米糠酢酸エチル抽出物群、および赤米糠ヘキサン抽出物群では試験を行った全ての個体で結石の形成が見られた。
(3) Measurement of the formation rate of calcium oxalate stones To measure the formation rate of calcium oxalate stones in the kidney, Pizzolato staining was performed on tissue sections prepared by fixing the kidney with 4% PFA after dissection. . The formation part of the calculus was identified with a polarizing microscope, and the deposition area of the calcium oxalate stone and the cross-sectional area of the kidney in the tissue section were quantified with image analysis software (ImageJ), and the formation ratio of the calcium oxalate stone was calculated. That is, the ratio of the area where stones were formed (area stained with Pizzolato staining) to the cross-sectional area of the kidney in the tissue section was calculated (calcium oxalate deposition area / cross-sectional area of the kidney in the tissue section × 100). %)) (See, for example, “Urology Bulletin 57: 55-58, 2011”). The result of the formation ratio of this calcium oxalate stone is shown in FIG. Moreover, in the red rice brackish extract group, formation of stones was observed in only 3 of the 5 individuals tested, but formation of stones was not observed in the remaining 2 individuals. On the other hand, in the red rice bran methanol extract group, the red rice bran ethyl acetate extract group, and the red rice bran hexane extract group, formation of stones was observed in all the individuals tested.
上記の結果から、赤米糠の各種抽出物のうち、赤米糠水抽出物のみが結石形成割合を低下できることが分かった。すなわち、赤米糠水抽出物中に尿路結石症の治療または予防できる成分が含まれることが分かった。 From the above results, it was found that among the various extracts of red rice bran, only the red rice bran extract can reduce the stone formation rate. That is, it was found that the red rice brine extract contains a component that can treat or prevent urolithiasis.
試験例４：「夕やけもち」とは異なる赤米糠の尿路結石症予防効果に関する検討
（１）試験動物（Wistar-ST、雄性、１０週齢）を下記表５に記載の群に割り当てた。
※グリコール酸が「＋」と記載されている群は、尿路結石誘発物質であるグリコール酸100mg/dayを混餌した。コントロール群は標準飼料のみで飼育し、ネガティブコントロール群、赤米（紅染めもち）糠群、および赤米（ベニロマン）糠群は標準飼料に尿路結石誘発物質であるグリコール酸100mg/dayを混餌し飼育した。
※「赤米糠を１０％で標準飼料に混餌」とは、標準飼料２０ｇに２ｇの赤米糠が含まれていることを意味する。
Test Example 4: Examination of preventive effect of urinary calculus of red rice bran different from “Yuyakemochi” (1) Test animals (Wistar-ST, male, 10 weeks old) were assigned to the groups described in Table 5 below.
* “10% red rice bran mixed with standard feed” means that 20 g of standard feed contains 2 g of red rice bran.
（２）試験スケジュール
(2) Test schedule
（３）シュウ酸カルシウム結石の形成割合の測定
腎臓中のシュウ酸カルシウム結石の形成割合を測定するために、解剖後、４％ＰＦＡで腎臓を固定して作成した組織切片へPizzolato染色を行った。結石形成部分を偏光顕微鏡により同定し、画像解析ソフト（ImageJ）でシュウ酸カルシウム結石の沈着面積および組織切片中の腎臓の断面積を定量化し、シュウ酸カルシウム結石の形成割合を算出した。すなわち、組織切片中の腎臓の断面積に対する、結石が形成した面積（Pizzolato染色で染色された面積）の割合を算出した（シュウ酸カルシウムの沈着面積／組織切片中の腎臓の断面積×１００（％））（例えば、「泌尿紀要 ５７：５５−５８、２０１１年」参照）。このシュウ酸カルシウム結石の形成割合の結果を図４に表す。
(3) Measurement of the formation rate of calcium oxalate stones To measure the formation rate of calcium oxalate stones in the kidney, Pizzolato staining was performed on tissue sections prepared by fixing the kidney with 4% PFA after dissection. . The formation part of the calculus was identified with a polarizing microscope, and the deposition area of the calcium oxalate stone and the cross-sectional area of the kidney in the tissue section were quantified with image analysis software (ImageJ), and the formation ratio of the calcium oxalate stone was calculated. That is, the ratio of the area where stones were formed (area stained with Pizzolato staining) to the cross-sectional area of the kidney in the tissue section was calculated (calcium oxalate deposition area / cross-sectional area of the kidney in the tissue section × 100). %)) (See, for example, “Urology Bulletin 57: 55-58, 2011”). The result of the formation ratio of this calcium oxalate stone is shown in FIG.
（４）尿ｐＨの測定
表５に記載の試験群の全てについて試験食摂餌前（上記（２）試験スケジュールの０日目）および試験食摂餌後（１４日目）の尿を回収し、ｐＨを測定した。このｐＨの測定はｐＨメーター（ＨＯＲＩＢＡ社製）を用いて測定した。
(4) Measurement of urine pH For all of the test groups described in Table 5, urine was collected before feeding the test meal (day 0 of the above (2) test schedule) and after feeding the test meal (day 14). The pH was measured. This pH was measured using a pH meter (manufactured by HORIBA).
上記（３）の結果から、赤米（夕やけもち）糠のみならず、赤米（紅染めもち）糠および赤米（ベニロマン）糠においても尿路結石形成割合を顕著に低下できることが分かった。すなわち、赤米の糠であれば、その品種によらず、尿路結石形成割合を顕著に低下できることが分かった。
また、ポジティブコントロール群として、クエン酸ナトリウムを混餌（クエン酸ナトリウムを2.5％で標準飼料に混餌、ｎ数が「５」）し、上記の４群と同様に飼育した結果、赤米（紅染めもち）糠群および赤米（ベニロマン）糠群におけるシュウ酸カルシウム結石の形成割合はポジティブコントロール群と同程度であることが分かった。
一方で、上記（４）の結果から、赤米（紅染めもち）糠群および赤米（ベニロマン）糠群では、試験食摂餌前および後のいずれも尿ｐＨが７付近で変化しないことが分かった。それに対し、ポジティブコントロール群では、試験食摂餌後の尿ｐＨが９程度まで上昇した。このことから、赤米糠は尿ｐＨへの影響が見られず、尿ｐＨの過度なアルカリ化によるリン酸カルシウムや尿酸ナトリウムの析出促進などの副作用なしにシュウ酸カルシウム結石の形成割合を顕著に低下できることが分かった。
From the results of (3) above, it was found that the urinary calculus formation rate can be significantly reduced not only in red rice (evening and rice cake) but also in red rice (red dyed rice cake) and red rice (beniloman). In other words, it was found that the urinary calculus formation rate can be remarkably reduced if the rice is red rice.
In addition, as a positive control group, sodium citrate was mixed (sodium citrate 2.5% mixed with standard feed, n number was “5”), and reared in the same manner as the above four groups. As a result, red rice (red dyed) It was found that the formation ratio of calcium oxalate stones in the glutinous glutinous group and red rice (beniloman) culm group was similar to that in the positive control group.
On the other hand, from the result of (4) above, in the red rice (red dyed rice cake) and red rice (beniloman) rice bran groups, the urine pH may not change around 7 before and after the test food intake. I understood. On the other hand, in the positive control group, the urine pH after feeding the test meal increased to about 9. From this, red rice bran has no effect on urine pH, and can significantly reduce the formation rate of calcium oxalate stones without side effects such as accelerated precipitation of calcium phosphate and sodium urate due to excessive alkalinization of urine pH. I understood.
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