JP2019122296A - クズの根から分離した乳酸菌の取得方法、クズの根から分離した乳酸菌、この乳酸菌を用いたヨーグルトの製造方法及びヨーグルトスターター - Google Patents
クズの根から分離した乳酸菌の取得方法、クズの根から分離した乳酸菌、この乳酸菌を用いたヨーグルトの製造方法及びヨーグルトスターター Download PDFInfo
- Publication number
- JP2019122296A JP2019122296A JP2018004858A JP2018004858A JP2019122296A JP 2019122296 A JP2019122296 A JP 2019122296A JP 2018004858 A JP2018004858 A JP 2018004858A JP 2018004858 A JP2018004858 A JP 2018004858A JP 2019122296 A JP2019122296 A JP 2019122296A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lactic acid
- acid bacteria
- yogurt
- kudzu
- isolated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 226
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 114
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title claims abstract description 113
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 113
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 title claims abstract description 52
- 235000010575 Pueraria lobata Nutrition 0.000 title claims abstract description 31
- 239000007858 starting material Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 241000219781 Pueraria montana var. lobata Species 0.000 title abstract 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 18
- 241000194041 Lactococcus lactis subsp. lactis Species 0.000 claims abstract description 15
- 235000014969 Streptococcus diacetilactis Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 10
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000001967 plate count agar Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 244000046146 Pueraria lobata Species 0.000 claims description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 5
- 241000194035 Lactococcus lactis Species 0.000 claims description 4
- 240000000249 Morus alba Species 0.000 claims description 3
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 235000011511 Diospyros Nutrition 0.000 description 5
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 description 5
- NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N Nisin Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H](N)[C@H](C)CC)CSC[C@@H]1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(NCC(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CS[C@@H]2C)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C)C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N[C@H](CC=4NC=NC=4)C(=O)N[C@H](CS[C@@H]3C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=3NC=NC=3)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(O)=O)=O)CS[C@@H]2C)=O)=O)CS[C@@H]1C NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000004309 nisin Substances 0.000 description 5
- 235000010297 nisin Nutrition 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- -1 heat-treated Substances 0.000 description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 3
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 3
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 3
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 241000723267 Diospyros Species 0.000 description 2
- 244000236655 Diospyros kaki Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010053229 Lysyl endopeptidase Proteins 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N (R)-amygdalin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H](C#N)C=2C=CC=CC=2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 244000055850 Diospyros virginiana Species 0.000 description 1
- 206010013786 Dry skin Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010052140 Eye pruritus Diseases 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 206010019133 Hangover Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- AYRXSINWFIIFAE-UHFFFAOYSA-N O6-alpha-D-Galactopyranosyl-D-galactose Natural products OCC1OC(OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O)C(O)C(O)C1O AYRXSINWFIIFAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 1
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000037336 dry skin Effects 0.000 description 1
- 208000001780 epistaxis Diseases 0.000 description 1
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-CQUJWQHSSA-N gentiobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-CQUJWQHSSA-N 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000879 optical micrograph Methods 0.000 description 1
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 238000007788 roughening Methods 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 1
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Beans For Foods Or Fodder (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Dairy Products (AREA)
Abstract
Description
出願人である株式会社井上天極堂は1870年創業の葛の老舗として長く吉野葛の普及に努めてきたところであり、さらなる葛の利用、知名度の向上を目指して葛根から分離した乳酸菌を利用したヨーグルト及びヨーグルトスターターの開発に取り組むことにした。 また、奈良県は良質な葛粉の生産地としても知られており、かねてよりクズの幅広い利用、知名度の向上に取り組んでいた。
かかる問題意識を有する発明者は、新たな需要、市場を生み出すことができ、しかもより幅広い需要者にアピールできるものとして、クズの根から分離した乳酸菌をヨーグルトスターターとして使用することに思い至った。クズの根から分離した乳酸菌をヨーグルトスターターとして使用するという発想は見受けられなかったので、需要者に広くアピールできることに思い至った。
まず、クズの根を抗生物質を添加した乳酸菌用の液体培地にて25〜37℃で24〜48時間集積培養する。この得られた培養液をBCP加プレートカウントアガール培地に塗抹して培養し、コロニーの周辺が黄色く変色した株の一部を白金線で採取し、グラム染色及びカタラーゼ試験によって乳酸菌であることを確認した。なお、前記抗生物質としては、シクロヘキシミドを蒸留水100mlに対して10ppm加えたものを使用した。
PCRの鋳型の調製は、培養液を蒸留水で100倍希釈したものを用いた。
プライマーは、27F(5’−AGAGTTTGATCCFTGGCTCAG−3’)、1406R(5’−ACGGGCGGTGTGTAC−3’)を用いた。
PCR反応液はKOD+0.4μl、10×KOD buffer 2μl、dNTP Mixture(2.5μM each)2μl 、2.5mM塩化マグネシウム 0.8μl、プライマー 各0.6μl(20μM)、鋳型DNA 2μl を加え、滅菌水で20μlに調製した。
94℃、3分間でDNAを変性した後、94℃で15秒(変性)、45℃で30秒(アニーリング)、68℃で2分(伸長)を35サイクル実施し、68℃で7分、4℃で保持した。
アフィメトリックス・ジャパン株式会社製のExoSAP−ITで精製したPCR産物をシークエンス用試料とし、サーモフッシャーサイエンティフィック株式会社製のBigDye terminator Ver.3で標識してABI3130/3130xl Genetic Analyzerで塩基配列を解析した。
得られた配列は、Blast(Basic Local Alignment Search Tool)により相同性検索を行い、乳酸菌の同定を行った。
その結果、本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』株は、乳酸菌(Lactococcus lactis subsp. lactis)であると同定された。
API50CHLによって乳酸菌(Lactococcus lactis subsp. lactis)であると推定された本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』株が、既知の乳酸菌と異なることを調べるためにRep−PCR法による菌株識別を行った。
検体の培養液から菌体を遠心分離で集菌し、アクロモペプチダーゼ処理、水酸化ナトリウム溶液添加後、加熱処理を行い、染色体DNAを調製し、TE緩衝液30μlを加えて溶解した。これを鋳型としてPCRを行った。条件は、94℃で3 分、94℃で30秒、52℃で1分、68℃で2分を30サイクル実施したあと、68℃で5分、4℃で保持した。
PCR反応液は東洋紡株式会社のKOD+を0.5μl 、10×KOD bufferを2.5μl、dNTP Mixture(2. 5μM each) を2μl 、2.5mM塩化マグネシウムを2μl 、プライマーを各5μl(1μM)、に鋳型DNAを1μl加え、滅菌水で25μlに調製した。用いたプライマーはLcREP−A(5’−CTGACAAGTCTGTCAGTAAA−3’) 、LcREP−C(5’−CTGACAA4TCTGTCAGTAAC−3’) 、LcREP−T (5’−CTGACAAGTCTGTCAGTAAT− 3’) である。
1%アガロースゲル電気泳動で増幅したDNA断片の大きさを確認した。
図3に示すように、本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』は、既知の乳酸菌である正暦寺乳酸菌、NRIC1147(NBRC100933)乳酸菌とも繰り返し配列の大きさが異なるので、未知の乳酸菌であることが確認された。
なお、正暦寺乳酸菌とは、特許第3122660号に係る『酒母の製造方法』で使用された乳酸菌である。
まず、この本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』を10mlの乳酸菌用の液体培地に入れて、24〜48時間、27〜37℃で培養し、ヨーグルトスターターとする。
次に、牛乳又は豆乳に乳酸菌液(ヨーグルトスターター)、糖分、スキムミルクや各種果汁を添加してよくかき混ぜて27〜37℃で23〜24時間培養する。なお、ヨーグルトのレシピを表1及び表2に示す。
これらのヨーグルトの特徴としては以下のものがあげられる。
1)本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』をヨーグルトスターターとして使用したヨーグルトは、市販のものより酸味が弱いため食べやすい。
2)本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』をヨーグルトスターターとして使用したヨーグルトは、食感が滑らかである。
3)本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』をヨーグルトスターターとして使用したヨーグルトは、グルコース0.5〜3%といった低糖で製造可能である。
4)本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』をヨーグルトスターターとして使用したヨーグルトは、スキムミルク(脱脂粉乳)を入れることによりコクが増すことが確認された。
5)本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』をヨーグルトスターターとして使用したヨーグルトは、果糖の代わりに果汁を使用しても製造可能である。
L−アラビノース、D−リボース、D−キシロース、D−ガラクトース、D−グルコース、D−フクルトース、D−マンノース、D−マンニトール、N−アセチルグルコサミン、アミグダリン、アルブミン、エスクリンクエン酸鉄、サリシン、D−セロビオース、マルトース、乳糖、白糖、トレハロース、でんぷん、ゲンチオビオース
22名の被験者は、花粉症、鼻炎、肌荒れ、鼻血、アレルギー症、体脂肪過多、くしゃみという身体の諸症状を抱えている。なお、表3の該当人数の総計が29名となっているのは、複数の症状を持った被験者が存在するためである。
その結果、以下のような感想を得ることができた。
1)摂取後30分程で鼻のむずむず感がなくなった。
2)摂取後30分ほどで目のかゆみ、鼻水が出る等の症状が一時的に改善された。
3)便がきれいになった。
4)便通がよくなった。便が楽に出るようになった。
5)乾燥気味の肌がしっとりとしてきた。
6)背中に出ていたぶつぶつによる荒れが改善した。
なお、表3においてその他に分類されたのは、季節外れでヨーグルトの摂取時にその症状(花粉症や鼻炎)が生じていなかった被験者であり、それにより結果が確認できなかったためである。
また、グラム陽性細菌である黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)を使用菌株とした。この黄色ブドウ球菌は食中毒菌として知られている。
なお、この黄色ブドウ球菌の培養には、標準液体培地を使用した。
次に、105 〜106 CFU/mlに調整した黄色ブドウ球菌とSCDLP寒天培地(Soybean−Casein Digest Agar with Lecithin&Polysorbate)とを十分混釈し凝固させた後、室温で1時間掛けて表面の余分な水分を乾燥させた。
なお、接種した黄色ブドウ球菌の菌数は別に測定しておく。
使用菌体を浸み込ませたペーパーディスクをSCDLP寒天培地の中央に置き、25〜37℃で48時間培養しペーパーディスクの周りのハローの観察及び測定を行う。
なお、同時に試験菌株を滅菌水及び標準液体培地に変えたものを対照試験として実施した。
なお、ナイシンは、黄色ブドウ球菌等のグラム陽性細菌に対して幅広い抗菌スペクトルと強力な抗菌性を有し、熱や低pHでも高い安定性を有するという特性を持っている。
API50CHLによって乳酸菌(Lactococcus lactis subsp. lactis)であると推定された本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』株が、既知の乳酸菌と異なることを調べるためにRep−PCR法による菌株識別を行った。
検体の培養液から菌体を遠心分離で集菌し、アクロモペプチダーゼ処理、水酸化ナトリウム溶液添加後、加熱処理を行い、染色体DNAを調製し、TE緩衝液30μlを加えて溶解した。これを鋳型としてPCRを行った。条件は、94℃で3 分、94℃で30秒、52℃で1分、68℃で2分を30サイクル実施したあと、68℃で5分、4℃で保持した。
PCR反応液は東洋紡株式会社のKOD+を0.5μl 、10×KOD bufferを2.5μl、dNTP Mixture(2. 5μM each) を2μl 、2.5mM塩化マグネシウムを2μl 、プライマーを各5μl(1μM)、に鋳型DNAを1μl加え、滅菌水で25μlに調製した。用いたプライマーはLcREP−A(5’−CTGACAAGTCTGTCAGTAAA−3’) 、LcREP−C(5’−CTGACAAGTCTGTCAGTAAC−3’) 、LcREP−T (5’−CTGACAAGTCTGTCAGTAAT− 3’) である。
1%アガロースゲル電気泳動で増幅したDNA断片の大きさを確認した。
図3に示すように、本件乳酸菌『クズノネ乳酸菌』は、既知の乳酸菌である正暦寺乳酸菌、NRIC1147(NBRC100933)乳酸菌とも繰り返し配列の大きさが異なるので、未知の乳酸菌であることが確認された。
なお、正暦寺乳酸菌とは、特許第3122660号に係る『酒母の製造方法』で使用された乳酸菌である。
Claims (6)
- クズの根を、抗生物質を添加した乳酸菌用の液体培地にて25〜37℃で24〜48時間集積培養し、得られた培養液をBCP加プレートカウントアガール培地に塗抹して培養して乳酸菌(Lactococcus lactis subsp. lactis)(特許微生物寄託センター受託番号:NITE AP−02601)株を選択することを特徴とするクズの根から分離した乳酸菌の取得方法。
- 前記抗生物質は、シクロヘキシミドであることを特徴とする請求項1記載の乳酸菌(Lactococcus lactis subsp. lactis)(特許微生物寄託センター受託番号:NITE AP−02601)株を選択することを特徴とするクズの根から分離した乳酸菌の取得方法。
- クズの根を、抗生物質を添加した乳酸菌用の液体培地にて25〜37℃で24〜48時間集積培養し、得られた培養液をBCP加プレートカウントアガール培地に塗抹して培養することで採取した乳酸菌(Lactococcus lactis subsp. lactis)(特許微生物寄託センター受託番号:NITE AP−02601)株。
- 前記抗生物質は、シクロヘキシミドであることを特徴とする請求項3記載の乳酸菌(Lactococcus lactis subsp. lactis)(特許微生物寄託センター受託番号:)株。
- クズの根から分離した乳酸菌(Lactococcus lactis subsp. lactis)(特許微生物寄託センター受託番号:NITE AP−02601)をヨーグルトスターターとして使用することを特徴とするヨーグルトの製造方法。
- クズの根から分離した乳酸菌(Lactococcus lactis subsp. lactis)(特許微生物寄託センター受託番号:NITE AP−02601)であることを特徴とするヨーグルトスターター。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018004858A JP6959615B2 (ja) | 2018-01-16 | 2018-01-16 | クズの根から分離した乳酸菌の取得方法、クズの根から分離した乳酸菌、この乳酸菌を用いたヨーグルトの製造方法及びヨーグルトスターター |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018004858A JP6959615B2 (ja) | 2018-01-16 | 2018-01-16 | クズの根から分離した乳酸菌の取得方法、クズの根から分離した乳酸菌、この乳酸菌を用いたヨーグルトの製造方法及びヨーグルトスターター |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019122296A true JP2019122296A (ja) | 2019-07-25 |
JP6959615B2 JP6959615B2 (ja) | 2021-11-02 |
Family
ID=67396992
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018004858A Active JP6959615B2 (ja) | 2018-01-16 | 2018-01-16 | クズの根から分離した乳酸菌の取得方法、クズの根から分離した乳酸菌、この乳酸菌を用いたヨーグルトの製造方法及びヨーグルトスターター |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6959615B2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021248255A1 (es) | 2020-06-11 | 2021-12-16 | Universidad De La Frontera | Método de aislamiento de bacterias ácido lácticas (bals) a partir de muestras complejas |
JP7207804B1 (ja) | 2022-10-23 | 2023-01-18 | 規雄 酒井 | 乳酸菌株、乳酸菌の取得方法、ヨーグルトの製造方法、ヨーグルトのスターター、ヨーグルトおよび乳酸菌発酵豆乳食品 |
-
2018
- 2018-01-16 JP JP2018004858A patent/JP6959615B2/ja active Active
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021248255A1 (es) | 2020-06-11 | 2021-12-16 | Universidad De La Frontera | Método de aislamiento de bacterias ácido lácticas (bals) a partir de muestras complejas |
JP7207804B1 (ja) | 2022-10-23 | 2023-01-18 | 規雄 酒井 | 乳酸菌株、乳酸菌の取得方法、ヨーグルトの製造方法、ヨーグルトのスターター、ヨーグルトおよび乳酸菌発酵豆乳食品 |
JP2024061700A (ja) * | 2022-10-23 | 2024-05-08 | 規雄 酒井 | 乳酸菌株、乳酸菌の取得方法、ヨーグルトの製造方法、ヨーグルトのスターター、ヨーグルトおよび乳酸菌発酵豆乳食品 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6959615B2 (ja) | 2021-11-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Daranas et al. | Biological control of bacterial plant diseases with Lactobacillus plantarum strains selected for their broad‐spectrum activity | |
Endo et al. | Honeybees and beehives are rich sources for fructophilic lactic acid bacteria | |
Kamilova et al. | Enrichment for enhanced competitive plant root tip colonizers selects for a new class of biocontrol bacteria | |
Camu et al. | Dynamics and biodiversity of populations of lactic acid bacteria and acetic acid bacteria involved in spontaneous heap fermentation of cocoa beans in Ghana | |
Kostinek et al. | Diversity of predominant lactic acid bacteria associated with cocoa fermentation in Nigeria | |
Benmechernene et al. | Technological aptitude and applications of Leuconostoc mesenteroides bioactive strains isolated from Algerian raw camel milk | |
Batdorj et al. | Isolation, taxonomic identification and hydrogen peroxide production by Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis T31, isolated from Mongolian yoghurt: inhibitory activity on food‐borne pathogens | |
Tohno et al. | Identification and characterization of lactic acid bacteria isolated from mixed pasture of timothy and orchardgrass, and its badly preserved silage | |
Lozo et al. | Microbiota associated with pollen, bee bread, larvae and adults of solitary bee Osmia cornuta (Hymenoptera: Megachilidae) | |
Sanni et al. | Characterization and technological properties of lactic acid bacteria in the production of “Sorghurt,” a cereal-based product | |
Kumar et al. | Isolation of Lactobacillus plantarum from cow milk and screening for the presence of sugar alcohol producing gene | |
Liu et al. | Natural populations of lactic acid bacteria in douchi from Yunnan Province, China | |
e Silva et al. | Endophytic cultivable bacterial community obtained from the Paullinia cupana seed in Amazonas and Bahia regions and its antagonistic effects against Colletotrichum gloeosporioides | |
Kačániová et al. | Microbial communities in bees, pollen and honey from Slovakia | |
Oladipo et al. | Phenotypic and genomic characterization of Enterococcus species from some Nigerian fermented foods | |
JP6959615B2 (ja) | クズの根から分離した乳酸菌の取得方法、クズの根から分離した乳酸菌、この乳酸菌を用いたヨーグルトの製造方法及びヨーグルトスターター | |
Zabouri et al. | Antifungal activity of lactic acid bacteria against phytopathogenic Alternaria alternata species and their molecular characterization. | |
KR101834231B1 (ko) | 신선유지를 위한 항균 및 항진균 활성을 갖는 식물성 유산균 락토바실러스 플란타륨 dsr kf15 및 이의 용도 | |
Milani et al. | Isolation and identification of lactic acid bacteria in Kurdish cheese during ripening using 16S rRNA gene sequence analysis | |
Teneva-Angelova et al. | Non-traditional sources for isolation of lactic acid bacteria | |
Liu et al. | The bacterial community structure of yond bap, a traditional fermented goat milk product, from distinct Chinese regions | |
Haryani et al. | Characterization, molecular identification, and antimicrobial activity of lactic acid bacteria isolated from selected fermented foods and beverages in Malaysia | |
Fusco et al. | The Weissella and Periweissella genera: up-to-date taxonomy, ecology, safety, biotechnological, and probiotic potential | |
Ramos et al. | Genetic diversity and antimicrobial activity of lactic acid bacteria in the preparation of traditional fermented potato product ‘tunta’ | |
Mishra et al. | Bio Diversity of Lactobacillus cultures associated with the traditional ethnic fermented foods of West Garo Hills, Meghalaya, India |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181122 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200617 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210525 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210716 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20210716 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210921 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210930 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6959615 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |