JP2019095197A - Lid of tube for life science, tube set for life science, and selection method of cell - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ライフサイエンス用チューブの蓋、ライフサイエンス用チューブセットおよび細胞の選別方法に係り、特に、細胞の画像解析に適したライフサイエンス用チューブの蓋、ライフサイエンス用チューブセットおよびライフサイエンス用チューブの蓋を用いた細胞の選別方法に関する。 The present invention relates to a lid for a life science tube, a tube set for life science, and a method for sorting cells, in particular, a lid for a life science tube suitable for image analysis of cells, a tube set for life science and a tube for life science The present invention relates to a method of sorting cells using a lid.
複数の細胞から目的細胞を取得する方法として、フローサイトメトリーにより、目的細胞を分取することが行われている。フローサイトメトリーは、微細な細胞を流体中に分散させ、その流体を細かく流して、個々の細胞を光学的に分析し、この分析結果に基づいて取得する細胞の判定、および、分取を行うものである。 As a method of obtaining target cells from a plurality of cells, sorting of target cells by flow cytometry is performed. Flow cytometry disperses fine cells in a fluid, finely flows the fluid, optically analyzes individual cells, and determines the cells to be obtained based on the analysis results, and performs sorting. It is a thing.
また、複数の細胞をまとめてウエルスライド上に滴下し、微小なウエルに細胞を落とし、撮影、画像の解析を行い、目的細胞を特定する。その後、特定した目的細胞をキャピラリーで吸引し、PCR(polymerase chain reaction)プレートもしくはチューブに移す操作が行われている。 In addition, a plurality of cells are collectively dropped onto a well slide, dropped into small wells, photographed, and an image analyzed to identify a target cell. Thereafter, operations for aspirating the specified target cells with a capillary and transferring them to a PCR (polymerase chain reaction) plate or tube are performed.
遺伝子解析装置に用いられる容器として、例えば、下記の特許文献1には、PCR用途に使用されるチューブに、取り外し可能な蓋を有する反応容器が記載されている。
As a container used for a gene analysis device, for example,
特許文献1で用いられる反応容器の蓋は、内部に収容する反応液が蒸発して消失することを防止するために密閉するために用いられることが記載されているのみである。したがって、特許文献1に記載されている反応容器についても、他の装置、方法を用いて目的細胞を判定した後、反応容器に分取する必要があり、操作フローが煩雑、時間がかかる、また、操作に使用される装置、器具が高額であるという問題があった。
The lid of the reaction vessel used in
また、フローサイトメトリーにおいては、分取した細胞の中で、目的以外の細胞が混入するケースがあり、目的の細胞である割合は、数割程度である。そのため、フローサイトメトリーで分取した細胞の全てに対して、解析、または解析のための前処理を行うことは非効率であった。また、PCRプレートもしくはPCRチューブの底面は、平坦ではないため、フォーカスが合わせられず、PCRプレート上もしくはPCRチューブ内での細胞の観察はできていなかった。 In addition, in flow cytometry, there are cases in which cells other than the target are mixed among the sorted cells, and the ratio of the target cells is about several percent. Therefore, it was inefficient to perform analysis or pretreatment for analysis on all cells sorted by flow cytometry. In addition, since the bottom of the PCR plate or PCR tube was not flat, it was not focused, and the cells could not be observed on the PCR plate or in the PCR tube.
本発明は、このような事情に鑑みてなされたものであり、蓋を用いて画像解析を行うことで、その後の解析、または、解析の前処理を、効率良く行うことができるライフサイエンス用チューブの蓋、ライフサイエンス用チューブセットおよび細胞の選別方法を提供することを目的とする。 The present invention has been made in view of such circumstances, and by conducting image analysis using a lid, a tube for life sciences that can be efficiently subjected to subsequent analysis or pretreatment of analysis. Lid, tube set for life science, and method of sorting cells.
本発明は、上記目的を達成するために、ライフサイエンス用チューブの蓋であって、ライフサイエンス用チューブ側に凹部を有し、凹部の底面が平坦で、かつ、円形または四角形以上の多角形であり、側面が底面から開口部に向かって広がる方向の傾斜面からなるライフサイエンス用チューブの蓋を提供する。 In order to achieve the above object, the present invention is a lid for a tube for life sciences, which has a recess on the side of the tube for life sciences, and the bottom surface of the recess is flat and is a polygon of circle or square or more. Provided is a lid for a life science tube, the side surface comprising an inclined surface in a direction extending from the bottom to the opening.
本発明のライフサイエンス用チューブの蓋によれば、ライフサイエンス用チューブの蓋のライフサイエンス用チューブが装着される面側に凹部を有し、この凹部の底面を平坦とすることで、凹部内の検体の画像を撮像することができる。蓋の凹部の底面を平坦とすることで、凹部内の検体に焦点を合わせることができ、良好な画像を撮像することができる。 According to the lid of the tube for life sciences of the present invention, the concave portion is provided on the side of the lid of the tube for life sciences on which the tube for life science is attached, and the bottom of the recess is made flat. An image of the sample can be taken. By making the bottom of the recess of the lid flat, it is possible to focus on the sample in the recess and to capture a good image.
また、凹部の側面を底面から開口部に向かって広がる方向の傾斜面とすることで、開口部を広くすることができ、検体を凹部内に入り易くすることができる。また、底面に向かって狭くすることで、底面のサイズを小さくすることができ、検体に対する底面のサイズを所定の範囲とすることができる。したがって、検体の画像解析において、1視野による撮影で、底面全体を撮像することができ、効率良く撮像、検体の画像解析を行うことができる。 In addition, by making the side surface of the recess the inclined surface in the direction that spreads from the bottom toward the opening, the aperture can be made wider, and the sample can be easily entered into the recess. Further, by narrowing the bottom toward the bottom, the size of the bottom can be reduced, and the size of the bottom with respect to the sample can be set to a predetermined range. Therefore, in the image analysis of the specimen, the entire bottom surface can be imaged by imaging with one field of view, and imaging and analysis of the specimen can be efficiently performed.
また、側面を開口部に向かって広がる方向の傾斜面とすることで、培養液中の気泡を抜き易くすることができ、気泡により光が屈折することを防止することができ、良好な画像を撮像することができる。 In addition, by making the side surface an inclined surface in the direction of spreading toward the opening, bubbles in the culture solution can be easily extracted, and light can be prevented from being refracted by the bubbles, and a good image can be obtained. It can be imaged.
なお、本明細書において、「ライフサイエンス用」とは、細胞や生体分子を取り扱うことをいい、より具体的には、細胞の培養、検出、分離、精製、分析および評価や、生体分子を含む化合物の合成、検出、分離、精製、分析および評価などに用いられるものをいい、「ライフサイエンス用チューブ」とは、ライフサイエンスの用途に用いられる容器のことをいう。 In the present specification, "for life science" refers to handling cells and biomolecules, and more specifically, includes culturing, detection, separation, purification, analysis and evaluation of cells, and biomolecules. It refers to those used for compound synthesis, detection, separation, purification, analysis and evaluation, etc. “Life science tube” refers to a container used for life science applications.
また、「ライフサイエンス用チューブ側」とは、ライフサイエンス用チューブが装着される面側であり、ライフサイエンス用チューブとともに使用した場合、ライフサイエンス用チューブの蓋とチューブとの間で空間を形成する面側のことをいう。 The “Life Science Tube Side” is the side on which the Life Science Tube is mounted, and when used with the Life Science Tube, forms a space between the lid of the Life Science Tube and the Tube. It says the face side.
本発明の別の態様においては、側面は、底面に対して異なる角度を有する二段以上の傾斜面を有することが好ましい。 In another aspect of the present invention, the side surface preferably has two or more steps of inclined surfaces having different angles with respect to the bottom surface.
この態様によれば、蓋の凹部の側面を、底面に対して異なる角度を有する二段以上の傾斜面とすることで、凹部の側面の設計の自由度を増すことができる。例えば、凹部の開口部側の角度を大きくすることで、検体を凹部内により入り易くすることができる。また、側面の底面側の角度を小さくすることで、底面を狭くすることができ、撮像する際の倍率を高くしても、1枚の画像で底面を撮像することができる。側面の底面側の角度を大きくすることで、凹部内に導入された検体が側面でとどまることを防止し、底面まで落とすことができる。 According to this aspect, the design flexibility of the side surface of the recess can be increased by forming the side surface of the recess of the lid with two or more inclined surfaces having different angles with respect to the bottom surface. For example, by increasing the angle on the opening side of the recess, the sample can be more easily introduced into the recess. In addition, by reducing the angle on the bottom surface side of the side surface, the bottom surface can be narrowed, and the bottom surface can be imaged with one image even if the magnification at the time of imaging is increased. By increasing the angle on the bottom surface side of the side surface, it is possible to prevent the specimen introduced into the recess from staying on the side surface and to drop it to the bottom surface.
本発明の別の態様においては、底面の大きさは、外接する円に近似した時の直径が0.05mmφ以上1mmφ以下であることが好ましい。 In another aspect of the present invention, the size of the bottom surface is preferably 0.05 mmφ or more and 1 mmφ or less when approximated to a circumscribed circle.
底面の大きさを、上記範囲とすることで、通常の画像の撮像に用いられる倍率(5倍以上63倍以下)の対物レンズを用いて撮像することで、底面全体を1枚の画像で撮像することができる。したがって、効率良く、撮像、検体の画像解析を行うことができる。 By setting the size of the bottom surface in the above range, the entire bottom surface is imaged with a single image by imaging using an objective lens with a magnification (5 or more and 63 or less) used for imaging of a normal image. can do. Therefore, imaging and image analysis of the sample can be efficiently performed.
本発明の別の態様においては、350nm以上800nm以下の波長の光に対する透過率が60%以上であることが好ましい。 In another aspect of the present invention, the transmittance for light with a wavelength of 350 nm or more and 800 nm or less is preferably 60% or more.
この態様によれば、ライフサイエンス用チューブの蓋に用いられる材料の上記波長の光に対する透過率を60%以上とすることで、良好な画像を撮像することができる。 According to this aspect, by setting the transmittance of the material used for the lid of the tube for life science to the light of the above-mentioned wavelength to 60% or more, a good image can be taken.
本発明の別の態様においては、アクリル樹脂、ポリプロピレン、または、ポリスチレンにより形成されていることが好ましい。 In another aspect of the present invention, it is preferably made of acrylic resin, polypropylene or polystyrene.
この態様は、ライフサイエンス用チューブの蓋に用いられる材料を限定したものであり、アクリル樹脂、ポリプロピレン、または、ポリスチレンを用いることで、蓋の透明性を得ることができ、良好な画像を撮像することができる。また、ポリプロピレン、または、ポリスチレンを用いることで、耐熱性を確保することができるので、次の工程が温度をかける処理、例えば、PCR処理などの場合であっても、蓋をそのまま用いて処理を行うことができる。 In this embodiment, the material used for the lid of the tube for life sciences is limited, and by using acrylic resin, polypropylene or polystyrene, the transparency of the lid can be obtained, and a good image is imaged. be able to. In addition, since heat resistance can be secured by using polypropylene or polystyrene, the process is performed using the lid as it is, even in the case of the process of applying temperature, for example, the PCR process and the like in the next step. It can be carried out.
本発明の別の態様においては、凹部の表面に細胞低付着処理が施されていることが好ましい。 In another aspect of the present invention, it is preferable that the surface of the recess is subjected to a low cell adhesion treatment.
この態様によれば、凹部の表面に細胞付着処理を施すことで、蓋からライフサイエンス用チューブに細胞を移す際に、細胞が蓋の凹部に付着することを防止することができる。したがって、蓋からライフサイエンス用チューブへ検体の移動を確実に行うことができる。 According to this aspect, by performing the cell adhesion treatment on the surface of the recess, it is possible to prevent the cell from adhering to the recess of the lid when transferring the cells from the lid to the life science tube. Therefore, the sample can be reliably moved from the lid to the life science tube.
本発明は、上記目的を達成するために、上記記載のライフサイエンス用チューブの蓋と、ライフサイエンス用チューブと、を備えるライフサイエンス用チューブセットを提供する。 In order to achieve the above-mentioned object, the present invention provides a tube set for life sciences provided with the above-mentioned lid for life sciences tubes and a tube for life sciences.
本発明のライフサイエンス用チューブセットによれば、上記記載のライフサイエンス用チューブの蓋を用いて画像解析を行った検体を、セットで用いられるライフサイエンス用チューブに移動し、その後の処理を行うことができる。したがって、蓋を有する1つのライフサイエンス用チューブセットで、検体の画像解析とその後の処理を行うことができ、効率よく操作を行うことができる。 According to the tube set for life sciences of the present invention, a sample subjected to image analysis using the lid for the life sciences tube described above is transferred to the life sciences tube used in the set, and the subsequent treatment is performed. Can. Therefore, the image analysis of the sample and the subsequent processing can be performed with one life science tube set having a lid, and the operation can be performed efficiently.
本発明の別の態様においては、ライフサイエンス用チューブが、PCR用チューブ、または、タンパク質低吸着チューブであることが好ましい。 In another aspect of the present invention, the life science tube is preferably a PCR tube or a protein low adsorption tube.
この態様は、ライフサイエンス用チューブの具体例を記載したものであり、ライフサイエンス用チューブとしてPCR用チューブ、タンパク質低吸着チューブを用いることができる。 This embodiment describes a specific example of a life science tube, and a PCR tube and a low-adsorption protein tube can be used as the life science tube.
本発明は、上記目的を達成するために、細胞をライフサイエンス用チューブの蓋に分取する工程と、分取された細胞を撮像し、細胞画像を取得する工程と、細胞画像に基づいて、目的細胞を選別する工程と、を有する細胞の選別方法を提供する。 In order to achieve the above object, the present invention is based on the steps of separating cells into a lid of a tube for life sciences, imaging the separated cells and acquiring a cell image, and based on a cell image, And sorting the cells of interest.
本発明の細胞の選別方法によれば、ライフサイエンス用チューブの蓋を用いて、細胞画像により目的細胞の選別を行うことで、高い精度で目的細胞を選別することができ、かつ、ライフサイエンス用チューブへの目的細胞の移動を容易に行うことができる。 According to the cell sorting method of the present invention, the target cells can be sorted with high accuracy by sorting the target cells by cell images using the lid of the tube for life sciences, and for life sciences The target cells can be easily transferred to the tube.
本発明の別の態様においては、目的細胞を選別する工程後のライフサイエンス用チューブの蓋に、ライフサイエンス用チューブを取り付ける工程と、目的細胞をライフサイエンス用チューブに移動させる工程と、ライフサイエンス用チューブ内の目的細胞を処理する工程と、を有することが好ましい。 In another aspect of the present invention, a step of attaching a tube for life science to a lid of a tube for life sciences after a step of selecting a target cell, a step of transferring the cell of interest to a tube for life science, Processing the target cells in the tube.
この態様によれば、ライフサイエンス用チューブの蓋を用いて細胞の画像解析を行い、目的細胞をライフサイエンス用チューブに移動させ、目的細胞の処理をライフサイエンス用チューブ内で行うことで、蓋を備える1つのライフサイエンス用チューブで、画像解析、および、その後の処理を行うことができる。 According to this aspect, image analysis of cells is performed using the lid of the tube for life science, the target cell is moved to the tube for life science, and the treatment of the target cell is performed in the tube for life science. Image analysis and subsequent processing can be performed with one life science tube provided.
本発明の別の態様においては、目的細胞を処理する工程が、PCR処理であることが好ましい。 In another aspect of the present invention, the step of treating the target cell is preferably a PCR treatment.
この態様は、目的細胞を処理する工程を限定したものであり、PCR処理を行うことができる。 In this embodiment, the step of treating the target cell is limited, and PCR treatment can be performed.
本発明の別の態様においては、ライフサイエンス用チューブの蓋は、ライフサイエンス用チューブ側に凹部を有し、凹部の底面が円形または四角形以上の多角形であり、側面が底面から開口部に向かって広がる方向の傾斜面からなることが好ましい。 In another aspect of the present invention, the lid of the tube for life sciences has a recess on the side of the tube for life sciences, the bottom surface of the recess is a circle or a polygon of square or more, and the side faces from the bottom toward the opening It is preferable that it consists of an inclined surface in the direction of spreading.
この態様よれば、ライフサイエンス用チューブの蓋のライフサイエンス用チューブが装着される面側に凹部を有し、この凹部の底面を平坦とすることで、凹部内の細胞の画像を撮像することができる。蓋の凹部の底面を平坦とすることで、凹部内の細胞に焦点を合わせることができ、良好な画像を撮像することができる。 According to this aspect, the lid for the life science tube has a recess on the side to which the life science tube of the lid is attached, and the bottom surface of the recess is made flat to capture an image of cells in the recess. it can. By flattening the bottom of the recess of the lid, cells in the recess can be focused and a good image can be imaged.
また、凹部の側面を底面から開口部に向かって広がる方向の傾斜面とすることで、開口部を広くすることができ、細胞を凹部内に入り易くすることができる。また、底面に向かって狭くすることで、底面のサイズを小さくすることができ、細胞に対する底面のサイズを所定の範囲とすることができる。したがって、検体の画像解析において、底面全体を1枚の画像で撮像することができ、効率良く撮像、検体の画像解析を行うことができる。 In addition, by setting the side surface of the recess to be an inclined surface in a direction that spreads from the bottom toward the opening, the opening can be made wider, and cells can easily enter the recess. In addition, by narrowing toward the bottom, the size of the bottom can be reduced, and the size of the bottom with respect to cells can be set to a predetermined range. Therefore, in the image analysis of the sample, the entire bottom surface can be imaged with a single image, and imaging and analysis of the sample can be efficiently performed.
また、側面を開口部に向かって広がる方向の傾斜面とすることで、培養液中の気泡を抜き易くすることができ、気泡により光が屈折することを防止することができ、良好な画像を撮像することができる。 In addition, by making the side surface an inclined surface in the direction of spreading toward the opening, bubbles in the culture solution can be easily extracted, and light can be prevented from being refracted by the bubbles, and a good image can be obtained. It can be imaged.
本発明の別の態様においては、底面の大きさが、外接する円に近似した時の直径が0.05mmφ以上1mmφ以下であることが好ましい。 In another aspect of the present invention, the size of the bottom surface is preferably 0.05 mmφ or more and 1 mmφ or less when approximated to a circumscribed circle.
底面の大きさを、上記範囲とすることで、1視野による撮影で、底面全体を撮像することができる。したがって、効率良く、撮像、画像の解析を行うことができる。 By setting the size of the bottom surface in the above range, it is possible to image the entire bottom surface in shooting with one field of view. Therefore, imaging and image analysis can be performed efficiently.
本発明の別の態様においては、細胞画像を取得する工程における、撮影の対物レンズの倍率が5倍以上63倍以下であり、底面の大きさは、画像撮影領域において、外接する円に近似した時の直径が、画像撮影領域の直交する二辺のうちの短辺の長さより短く、短辺の長さの1/2以上であることが好ましい。 In another aspect of the present invention, in the step of acquiring a cell image, the magnification of the objective lens for photographing is 5 times or more and 63 times or less, and the size of the bottom is approximated to a circumscribed circle in the image photographing area It is preferable that the diameter at the time is shorter than the length of the short side of the two orthogonal sides of the image capturing area and is 1/2 or more of the length of the short side.
この態様によれば、撮影の対物レンズの倍率が5倍以上63倍以下における画像撮影領域において、底面の大きさ(外接する円に近似した時の直径)を、画像撮影領域の直交する二辺のうち短辺の長さより短く、短辺の長さの1/2以上とすることで、画像撮像領域内で、底面全体、および、細胞の観察に最適なサイズとすることができる。 According to this aspect, in the image capturing area where the magnification of the objective lens for capturing is 5 times or more and 63 times or less, the size of the bottom (diameter when approximated to a circumscribed circle) By setting the length shorter than the length of the short side and 1/2 or more of the length of the short side, it is possible to obtain an optimum size for observing the entire bottom surface and cells in the image pickup area.
本発明のライフサイエンス用チューブの蓋によれば、観察対象となる検体(細胞)を、凹部に導入し、画像解析を行うことができる。そして、ライフサイエンス用チューブとセットで用いることで、蓋を有する1つのライフサイエンス用チューブセットで、検体の画像解析とその後の処理を行うことができ、効率よく操作を行うことができる。また、細胞
の選別方法によれば、ライフサイエンス用チューブの蓋で画像解析により目的細胞の選別を行うことで、高い精度で目的細胞を選別することができ、かつ、ライフサイエンス用チューブへの目的細胞の移動を容易に行うことができる。
According to the lid of the tube for life sciences of the present invention, it is possible to introduce an analyte (cell) to be observed into the recess and perform image analysis. And, by using it in combination with the tube for life science, image analysis of the sample and subsequent processing can be performed with one life science tube set having a lid, and efficient operation can be performed. In addition, according to the cell sorting method, the target cells can be sorted with high accuracy by sorting out the target cells by image analysis with the lid of the life sciences tube, and the purpose of the life sciences tube Cell migration can be easily performed.
以下、添付図面に従って本発明に係るライフサイエンス用チューブの蓋、ライフサイエンス用チューブセットおよび細胞の選別方法について説明する。なお、本明細書において「〜」とは、その前後に記載される数値を下限値および上限値として含む意味で使用される。また、以下では、細胞を例として説明するが、本発明のライフサイエンス用チューブの蓋、ライフサイエンス用チューブセットの用途は細胞に限定されず、生体分子を含む化合物などに用いることもできる。 Hereinafter, a lid for a life science tube, a tube set for life science, and a cell sorting method according to the present invention will be described with reference to the attached drawings. In addition, in this specification, "-" is used in the meaning which includes the numerical value described before and after that as a lower limit and an upper limit. In the following, cells will be described as an example, but the lid of the tube for life science of the present invention and the tube set for life science are not limited to cells, and can be used for compounds containing biomolecules.
まず、本実施形態のライフサイエンス用チューブの蓋(以下、単に「蓋」ともいう)を適用し、画像を撮像する撮像装置を備える解析装置について説明する。 First, an analysis apparatus provided with an imaging device for capturing an image by applying a lid (hereinafter, also simply referred to as a “lid”) of the tube for life sciences of the present embodiment will be described.
図1は、分取する工程で、ライフサイエンス用チューブの蓋に分取された目的細胞の撮像や、細胞からの光学情報を取得する装置の構成を示す概略構成図である。好ましい態様として、抗原抗体反応などによって分取した細胞に標識した蛍光色素からの蛍光発光の情報の取得や、可視光により細胞の光透過画像取得が可能な解析装置である。 FIG. 1 is a schematic configuration view showing a configuration of an apparatus for imaging target cells sorted by a lid of a tube for life sciences and acquiring optical information from the cells in the step of sorting. As a preferred embodiment, it is an analysis apparatus capable of acquiring information of fluorescence emission from a fluorescent dye labeled to cells fractionated by an antigen-antibody reaction or the like, and acquiring a light transmission image of the cell by visible light.
図1に示す解析装置10は、対象となる細胞の発する蛍光を測定するための光を照射する蛍光用励起光源装置12、細胞の透過光を測定するための光(可視光)を照射する明視野用光源装置14、撮像の対象となる細胞16を収納するライフサイエンス用チューブの蓋32およびプレート18からなるトレー19、および、レンズ20、励起フィルタ22、ダイクロイックミラー24および蛍光フィルタ26を保持したフィルタ群(フィルタキューブ)28、ならびに、細胞16からの蛍光および透過光を撮像する撮像装置30を備える。
The
蛍光用励起光源装置12は、高圧水銀ランプ、高圧キセノンランプ、LED(light emitting diode)、または、LASER(light amplification by stimulated emission of radiation)などを用いることができる。これらの光源を用いることにより、細胞16に照射する照射光の波長領域を狭くすることで、精度の高い分析を確実に行うことが可能となる。また、蛍光用励起光源装置12としては、タングステンランプ、ハロゲンランプ、白色LEDなどを用いることができる。これらの光源を用いる場合でも、励起フィルタ22で、目的の波長のみ透過させることで、細胞16に目的の波長の光を照射させることができる。なお、明視野用光源装置14としても、蛍光用励起光源装置12と同様の光源を用いることができる。
The fluorescence excitation
トレー19は、プレート18と、分取された細胞16を収納する蓋32とからなる。蓋32は、ライフサイエンス用チューブ(以下、単に「チューブ」ともいう)が装着される側に凹部を有し、この凹部内に分取された細胞を収納する。なお、本明細書においては、ライフサイエンス用チューブの蓋32のライフサイエンス用チューブが装着される側をライフサイエンス用チューブの蓋の表面といい、反対側を裏面とする。プレート18は、蓋32を保持するサンプル台であり、細胞16は蓋32の裏面側から撮像されるため、蓋32の凹部の底面に対応するプレート18の位置に貫通孔を有する。または、光を透過させることができる透明な材料で形成されている。
The
図2は、トレーの別の態様を示す図である。図2に示すトレー319は、プレート318と蓋332が一体となって構成されている点が、図1に記載されているトレー19と異なっている。解析装置10に使用されるトレーとしては、図2に示すように、プレート318と蓋332が一体となったトレーを用いることができる。プレート318と蓋332を一体に形成することで、射出成型で一度に作製することができ、精度良く蓋332を配列させることができる。また、トレーを低コストで作製することができる。
FIG. 2 shows another aspect of the tray. The
図1に戻り、レンズ20は、蛍光用励起光源装置12から出力された光により細胞16が発した蛍光、および、明視野用光源装置14から出力された光が細胞16を透過した透過光を拡大する。レンズ20は、一般的に光学用途に用いられるレンズを用いることができる。
Returning to FIG. 1, the
フィルタ群28は、励起フィルタ22、ダイクロイックミラー24、蛍光フィルタ26を備える。このようなフィルタ群28の具体例としては、フィルタキューブを用いることが好ましく、例えば、Zeiss Filter Set49 (DAPI)を用いることができる。蛍光用励起光源装置12から照射された光は、励起フィルタ22により、目的の波長領域の光のみを透過する。励起フィルタ22を透過した光は、ダイクロイックミラー24で、トレー19の方向に反射する。蛍光用励起光源装置12から出射した励起光により生じた、細胞16からの蛍光発光は、レンズ20、ダイクロイックミラー24、蛍光フィルタ26を経て撮像装置30で撮像される。励起光により発光する蛍光は、蛍光の波長領域が励起光の波長領域より長波長側に存在するので、ダイクロイックミラー24を使用することにより、蛍光発光のみを透過させることが可能となる。更に、励起光は透過させずに、蛍光のみを透過させる蛍光フィルタ26を用いることで、撮像装置30で細胞16からの蛍光発光のみの情報で撮像することが可能となる。したがって、蛍光フィルタ26により、蛍光のみを透過させることで、撮像装置30で撮像される画像が励起光に影響されることなく、画像を取得することができ、蛍光発光情報により検査の精度を向上させることができる。
The
蛍光用励起光源装置12から照射された光による蛍光撮影は、細胞の検査目的に応じて1つの細胞に対する複数の情報を取得するため、通常は複数の種類の色素により免疫染色される。この場合、免疫染色された細胞のそれぞれの色素からの蛍光に対して、それぞれの色素の蛍光波長に適した透過特性または反射特性を有するフィルタ群を用いて撮影することにより、異なる波長の光学的情報を得ることができる。なお、明視野用光源装置14により細胞16の透過光を撮像する場合は、フィルタ群28を取り外した状態で撮像する。これにより、透過光を撮像装置30で撮像することができる。
Fluorescence imaging with light emitted from the fluorescence excitation
撮像装置30としては、トレー19上の蓋32内の細胞16の蛍光または透過光を撮像することができれば特に限定されず、例えば、CCD(charge-coupled device)カメラを用いることができる。
The
≪ライフサイエンス用チューブの蓋≫
図3は、本実施形態で用いられるライフサイエンス用チューブの蓋32の形状を示す断面図である。図1に示す解析装置10においては、蓋32の底面側から励起光を照射し、蓋32を透過した、励起光により発光した細胞からの蛍光などの細胞からの情報を含む光を受光するため、蓋32の材料としては、これらの光に対して透明であること、自家蛍光しないこと、散乱しないことなどの条件を有することが好ましい。また、細胞16を撮像するため、蓋32の凹部34の底面34aは、平坦な形状である。凹部34の底面34aを平坦とすることで、焦点を細胞16に合わせることが可能となり、底面34aに存在する細胞16の画像解析を精度良く行うことができる。
«Leg for life science tubes»
FIG. 3 is a cross-sectional view showing the shape of the
また、底面34aの形状は、円形または四角形以上の多角形である。また、底面34aの大きさは、底面34aに外接する円に近似した時、円の直径Lが0.05mmφ以上1mmφ以下とすることが好ましく、より好ましくは0.1mmφ以上0.5mmφ以下であり、さらに好ましくは、0.2mmφ以上0.4mmφ以下である。なお、図3においては、底面34aを円形として記載する。底面34aの形状、大きさを上記の形状、サイズとすることで、5倍以上63倍以下の倍率の対物レンズを用いることにより、好ましい細胞画像の大きさで、かつ1視野による撮影(ワンショット撮影)で、底面34a全体を撮像することができる。細胞の検査目的に応じて1つの細胞に対する複数の情報を取得するために、通常は複数種類の色素を用いて免疫染色を行う。従って、細胞16の撮像は、それぞれの色素からの蛍光情報と、明視野撮影を行って、必要に応じ撮影後に各画像を重ね合わせて、細胞の解析を行うことができる。
Further, the shape of the
図4は、顕微鏡により撮像される画像撮像領域40と凹部34の底面34aのサイズとの関係を示した図である。底面34aのサイズは、底面34aの直径Lが、画像撮影領域40の直交する二辺、長辺e、短辺dのうち、短辺dの長さより短く、かつ、短辺dの長さの1/2以上とすることが好ましい。底面の直径Lの長さをd>L>d/2とすることで、細胞が収納される蓋の平坦な底面34aを、画像撮影領域40内において、好ましい細胞画像の大きさで、かつ1視野による細胞の撮影が可能となる。画像撮影領域40のサイズは、顕微鏡の対物レンズの倍率と撮影カメラにより決定される。通常用いられるカメラを用いることで、例えば、20倍の対物レンズであれば、底面の直径Lを0.4mmφとすることで、画像撮影領域40内に1枚で底面34aを撮像することができる。また、40倍の対物レンズであれば底面の直径Lを0.2mmφ、63倍の対物レンズであれば直径Lを0.1mmφ、10倍の対物レンズであれば直径Lを1mmφとすることで、1枚の画像で底面34aを撮像することができる。細胞を観察するためには、倍率は高倍率が好ましいが、倍率が高くなると蓋32の裏面側の凹凸などにより、画像解析の精度に影響が出始めることから、対物レンズの倍率は20倍程度が好ましい。
FIG. 4 is a diagram showing the relationship between the
凹部34の側面34bは、底面34aから開口部に向かって広がる方向に斜めに形成されており、テーパー形状を有する。側面34bを斜めに形成することにより、培養液中の気泡を容易に抜くことができ、気泡により光が屈折することを防止することができる。また、広い開口部を確保できるために、細胞16を凹部34内に収納することが容易になり、更に、底面の面積を小さくすることが可能となる。
The
また、蓋32の底面34aの厚みtは0.2mm以上1mm以下とすることが好ましい。図1に示すように、細胞16の撮像は、蓋32の裏面側(底面側)から撮像することになるため、底面34aの厚みが1mm以下であれば、レンズ20を細胞16に接近させることができ、高倍率での細胞の撮影が可能となり、好ましい。また、0.2mm以上であると、狭い範囲に焦点深度を設定することが可能となり、蓋32の裏面側にわずかでもキズなどがある場合でも、キズの焦点がずれるために撮像される画像にキズの像が映し出されることがなくなり、細胞の画像のみを撮像することが可能となり、好ましい。底面34aの厚みtは、0.3mm以上0.5mm以下がより好ましく、0.4mmがさらに好ましい。
The thickness t of the
蓋32の材質としては、画像を撮像する際に、光を透過しやすい材質とすることが好ましく、具体的には、アクリル樹脂、ポリプロピレン、または、ポリスチレンから選択される材料を用いることができる。これらの材料により製造された蓋32は、350nm以上800nm以下の波長の光に対する透過率が60%以上であることが好ましく、70%以上であることがより好ましく、80%以上であることがさらに好ましい。光の透過性の観点においては、アクリル樹脂、または、ポリプロピレンを用いることが好ましい。また、目的細胞を選別した後の処理がPCR処理である場合、耐熱性を有することが好ましく、ポリプロピレン、または、ポリスチレンを用いることで、PCR処理において材料が劣化することを防止することができる。なお、本発明において、「透過率」とは、透過光を入射光で割った値(透過率=透過光/入射光)であり、例えば100の光束を入射させたときに透過した光束が60であれば透過率は60%と算出される。
The material of the
また、凹部34の表面(底面34aおよび側面34b)は、細胞低付着処理が施されていることが好ましい。細胞低付着処理は、細胞、すなわち、タンパク質が凹部34内の底面34aおよび側面34bに付着しないようにする処理であり、タンパク質の吸着を防止する性質を有する材料を表面にコートすることにより行われる。凹部34内へのタンパク質吸着の原因は、蓋32の材料である樹脂表面の疎水性基とタンパク質中の疎水性基が結合する疎水性相互作用が主な原因とされているため、親水性基を有する材料をコーティングすることによって細胞低付着処理を施した表面とすることができる。
Moreover, it is preferable that the cell low attachment process is given to the surface (bottom 34a and
細胞低付着処理に用いられる材料として、ホスホコリン基を含む高分子(例えば、リピジュア(登録商標)(別名:MPC(2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine)ポリマー)(日油株式会社製))、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、PVA(polyvinyl alcohol)ヒドロゲル、BSA(Bovine serum albumin)などを用いることができる。コーティング方法としては、上記材料を溶媒に分散させた分散液に、ディップ浸漬後、乾燥することで、コーティングを行うことができる。溶媒としては、例えば、リピジュアの場合、エタノールを用いることができ、エタノールに0.5wt%の割合でリピジュアを混合、分散し、分散液とする。 As a material to be used for low cell adhesion treatment, a polymer containing a phosphocholine group (for example, Lipidur (registered trademark) (alias: MPC (2-methacryloyl ethylphosphorylcholine) polymer) (manufactured by NOF Corporation), polyvinyl pyrrolidone, polyethylene glycol, PVA (polyvinyl alcohol) hydrogel, BSA (Bovine serum albumin) etc. can be used. As a coating method, it is possible to perform coating by dipping after immersion in a dispersion in which the above-described material is dispersed in a solvent, and then drying. As a solvent, for example, in the case of lipidumer, ethanol can be used, and the lipidumeur is mixed and dispersed in ethanol in a proportion of 0.5 wt% to prepare a dispersion.
凹部34の表面に細胞低付着処理を施すことで、凹部34内に細胞をフローサイトメトリーなどにより分取する際に、底面34aに到達する前に側面34bへ付着することを防止することができる。また、画像解析後、細胞をチューブへ移動させる際に、底面34aに付着することなく、容易にチューブに移動させることができる。
By subjecting the surface of the
細胞低付着処理としては、付着したタンパク質を分解させる酵素を安定化させることにより行うこともできる。 The low cell adhesion treatment can also be carried out by stabilizing an enzyme that degrades the attached protein.
図5は、別の一実施形態のライフサイエンス用チューブの蓋132の形状を示す断面図である。図5に示す蓋132の凹部134の側面は、底面134aに対して角度θBを有する側面134b、および、底面134aに対して角度θCを有する側面134cとからなる。図5に示すように、側面を、多段で屈曲させ、底面134aに対して異なる角度θB、θCを有する二段の傾斜面である側面134b、134cにより形成することができる。二段の傾斜面で側面を形成することで、凹部134内の側面の設計の自由度を増すことができる。凹部134の開口部側の角度θCを大きくすることで、細胞を凹部134内により入り易くすることができる。また、底面134a側の角度θBを小さくすることで、底面134aを狭くすることができ、画像を撮像する際に、高い倍率で撮像しても1枚の画像で底面134aを撮像することができる。角度θB、θCの関係は、特に限定されない。図5においては、角度θCが、角度θBより大きい図で記載されているが、角度θBを角度θCより大きくしてもよい。角度θBを大きくすることで、側面134bで細胞がとどまり、底面134aに細胞が到達しないことを防止することができる。なお、図5においては、側面を二段の傾斜面としているが、段数は特に限定されず、三段以上の傾斜面とすることもできる。
FIG. 5 is a cross-sectional view showing the shape of the
図6は、さらに別の一実施形態のライフサイエンス用チューブの蓋232の形状を示す断面図である。図6に示す蓋232は、凹部内にスペーサー236を備える点が、他の実施形態と異なっている。スペーサー236の凹部234の形状を、上記の蓋32、132の凹部34、134の形状とし、蓋232の内部に嵌め込むことで、上記の実施形態と同様の効果を得ることができる。
FIG. 6 is a cross-sectional view showing the shape of a
<ライフサイエンス用チューブセット>
上述のライフサイエンス用チューブの蓋は、ライフサイエンス用チューブと合わせてライフサイエンス用チューブセットとして使用される。ライフサイエンス用チューブとしては、細胞の培養、検出、分離、精製、分析および評価や、生体分子を含む化合物の合成、検出、分離、精製、分析および評価などの用途に使用されるチューブを用いることができる。具体的には、タンパク質、ペプチド解析などにおいて、容器への試料付着を軽減するタンパク質低吸着チューブを用いることができる。また、PCR処理を行うPCR用チューブを用いることができる。本実施形態のライフサイエンス用チューブの蓋とセットで用いることで、1つのライフサイエンス用チューブセットで、画像解析とその後の処理、解析などを行うことができる。
<Tube Set for Life Science>
The lid of the above-mentioned life science tube is used as a life science tube set together with the life science tube. As tubes for life sciences, use tubes for applications such as cell culture, detection, separation, purification, analysis and evaluation, and synthesis, detection, separation, purification, analysis and evaluation of compounds containing biomolecules Can. Specifically, a protein low adsorption tube that reduces sample adhesion to the container can be used in protein and peptide analysis and the like. Alternatively, a PCR tube for performing PCR may be used. When used in combination with the lid of the tube for life science of the present embodiment, image analysis and subsequent processing, analysis, and the like can be performed with a single tube set for life science.
<細胞の選別方法>
次に、上記のライフサイエンス用チューブの蓋、および、ライフサイエンス用チューブセットを用いた細胞の選別方法について説明する。
<Method of sorting cells>
Next, a method of sorting cells using the above-described lid for life science tubes and the tube set for life sciences will be described.
図7から図9は、細胞の選別方向の工程を示す工程図である。また、図10は、ライフサイエンス用チューブを取り付ける工程を説明する図であり、図11は、目的細胞をライフサイエンス用チューブに移動させる工程を説明する図である。本実施形態の細胞の選別方法によれば、細胞をライフサイエンス用チューブの蓋に分取する工程と、分取された細胞を撮像し、細胞画像を取得する工程と、細胞画像に基づいて、目的細胞を選別する工程と、を有する。また、目的細胞を選別する工程の後、ライフサイエンス用チューブの蓋に、ライフサイエンス用チューブを取り付ける工程と、目的細胞をライフサイエンス用チューブに移動させる工程と、ライフサイエンス用チューブ内の目的細胞を処理する工程と、を行う。以下、各工程について説明する。 7 to 9 are process diagrams showing the process of cell sorting direction. Further, FIG. 10 is a view for explaining a process of attaching a life science tube, and FIG. 11 is a view for explaining a process of moving a target cell to the life science tube. According to the cell sorting method of the present embodiment, based on the step of sorting the cells into the lid of the tube for life sciences, the step of imaging the sorted cells to obtain a cell image, and the cell image, And selecting the target cells. In addition, after the step of selecting the target cells, a step of attaching the life science tube to the lid of the life science tube, a step of moving the target cell to the life science tube, and a target cell in the life science tube And the processing step. Each step will be described below.
≪分取する工程≫
まず、図7に示すように、蓋32の凹部34内に培養液38を滴下する。次に、図8に示すように、培養液38を有する凹部34内に、細胞16を分取する。複数の細胞から目的細胞を分取する工程としては、例えば、フローサイトメトリーにより行うことができる。フローサイトメトリーは、測定対象の細胞などの測定対象物質を含むサンプル液を、フローセルにおいてシース液の層流の中心側に流し、光学検出部においてレーザ光を測定対象物質に照射して、それによって生じる散乱光と蛍光を測定することにより、測定対象物質の大きさや構造などを測定するものである。光学検出部における測定のパラメータとしては、前方散乱光、側方散乱光および蛍光があるが、前方散乱光では測定対象物の大きさが、また側方散乱光および蛍光により、測定対象物質の構造などを測定することができる。
<< process to fractionate >>
First, as shown in FIG. 7, the
そして光学検出部における測定のパラメータを用いて、ソーティング系により、トレー上の蓋に目的細胞を分取する。フローサイトメトリーにおいては、サンプル/シース液は、上から下に流れていくように設計されており、層流のままフローセルの先端にあるノズルから飛び出し落下する。フローセルの外へ出たサンプル/シース液が、途中から液滴(ドロップ)になるように、トランスデューサ(振動子)を用いてフローセル全体またはフローセル内部に上下振動を与える。光学検出部における測定のパラメータを用いた分取条件に基づいて、分取する細胞かどうかを判別し、液滴になる直前に、サンプル/シース液全体に、+または−の荷電をする。その後、液滴は2枚の偏向板の間を落下し、+に荷電した液滴は−極板側に、−に荷電した液滴は+極板側に引かれ、細胞捕集部にあるトレー上の各蓋に細胞を分取することができる。 Then, using the measurement parameters in the optical detection unit, the sorting system separates target cells on the lid on the tray. In flow cytometry, the sample / sheath solution is designed to flow from top to bottom, and as it flows in a laminar flow, it pops up and falls from a nozzle at the tip of the flow cell. A transducer (vibrator) is used to apply vertical vibration to the entire flow cell or the inside of the flow cell so that the sample / sheath liquid that has flowed out of the flow cell becomes droplets from the middle. Based on the separation conditions using the measurement parameters in the optical detection unit, it is determined whether it is a cell to be separated or not, and the entire sample / sheath liquid is charged with + or-just before it becomes a droplet. After that, the droplets fall between the two deflection plates, the positively charged droplets are drawn to the -plate side, and the negatively charged droplets are pulled to the + plate side, on the tray in the cell collection section. The cells can be sorted into each lid.
なお、フローサイトメトリーの方法としては、一例として上記の方法を記載したが、上記の方法に限定されず、一般的に行われている方法で行うことができる。また、分取する工程としては、フローサイトメトリーに限定されず、他の方法でも行うことができる。 In addition, although the said method was described as an example as a method of flow cytometry, it is not limited to said method, It can carry out by the method currently generally performed. Moreover, as a process to fractionate, it is not limited to flow cytometry, It can carry out also with another method.
≪細胞画像を取得する工程≫
次に、蓋32に分取された細胞を撮像し、細胞画像を取得する。図9は、細胞画像を取得する工程を示す図である。細胞画像を撮像する装置としては、図1に示す装置を用いることができる。
<< Step of acquiring cell image >>
Next, the cells sorted by the
本実施形態で用いられるライフサイエンス用チューブの蓋32は、上述したように、凹部34の底面34aが平坦で、かつ、円形または四角形以上の多角形であり、側面34bが底面34aから開口部に向かって広がる方向に斜めに形成されている。したがって、底面34aに存在する細胞16の画像の撮像に適しており、本実施形態のライフサイエンス用チューブの蓋32を用いて、効率良く、良好な細胞画像を取得することができる。
As described above, the
≪目的細胞を選別する工程≫
次に、細胞画像を取得する工程で得られた細胞画像に基づいて、目的細胞の確認、および、選別を行う。細胞画像による目的細胞の確認は、例えば、核の有無、核の大きさ、核の形状(細胞質の面積に対する核領域の面積の割合、核の円形度合い)、細胞の形状(連続しているかギザギザしているか)、蛍光の輝度のピーク値、平均値、輝度分布(細胞膜均一に蛍光しているか、局所的に強く蛍光しているか)、特定の波長の透過光に対する吸収度合い(ヘモグロビンか、白血球かの判別)、ヘモグロビンの酸素親和性の違いに起因する分光特性(還元ヘモグロビン[Hb]と酸化ヘモグロビン[HbO2]の波長に対する吸収係数)など、を用いて行うことができる。
<< Step of selecting target cells >>
Next, based on the cell image obtained in the step of acquiring a cell image, confirmation and sorting of the target cell are performed. Confirmation of the target cell by cell imaging includes, for example, presence or absence of nucleus, size of nucleus, shape of nucleus (ratio of area of nucleus area to area of cytoplasm, degree of circularity of nucleus), shape of cell (continuous or jagged) Peak value, average value, brightness distribution (whether the cell membrane is uniformly fluorescent or locally strongly fluorescent), absorption degree to transmitted light of a specific wavelength (hemoglobin or white blood cell) Discrimination), spectral characteristics attributable to differences in oxygen affinity of hemoglobin (the absorption coefficients of reduced hemoglobin [Hb] and oxygenated hemoglobin [HbO 2 ] with respect to the wavelength), and the like.
≪ライフサイエンス用チューブを取り付ける工程≫
次に、目的細胞を選別する工程後のライフサイエンス用チューブの蓋32に、ライフサイエンス用チューブ50を取り付ける。図10は、ライフサイエンス用チューブを取り付ける工程を説明する図である。チューブ50は、目的細胞を選別する工程において、目的細胞と選別された細胞16が分取された蓋32にのみチューブ50を取り付けてもよいし、すべての蓋32にチューブ50を取り付けてもよい。ライフサイエンス用チューブを取り付ける工程は、専用の装置を用いて行うことが可能である。
«Process for attaching a tube for life sciences»
Next, the
目的細胞と選別された細胞16が分取された蓋32にのみチューブ50を取り付けた場合、チューブ50を取り付けた目的細胞のみ、次の工程を行う。したがって、チューブ50と、そのチューブ50内の細胞16の情報を紐付けしておくことが好ましい。細胞16の情報を、蓋32あるいはチューブ50と紐付けする方法としては、トレー19上に配列された蓋32の配列情報を、蓋32に文字で刻印しておく方法が挙げられる。配列情報の記載例としては、「C4」であるならば、プレートのC行4列目、「D4」であるならばD行の4列目を意味する。また、トレー19の配列情報ではなく、細胞の情報をQRコード(登録商標)で印字してもよい。また、蓋32にトレーの配列情報を記憶したRFID(radio frequency identifier)タグを設けることで、細胞の情報を明確にしておくこともできる。
When the
≪細胞をライフサイエンス用チューブに移動させる工程≫
チューブ50を蓋32に取り付けた後、蓋32内の細胞16を、チューブ50に移動する。図11は、目的細胞をライフサイエンス用チューブに移動させる工程を説明する図である。蓋32からチューブ50への細胞16移動は、例えば、蓋32にチューブ50を取り付けた後、反転させ、遠心分離を行うことで、チューブ50内に、細胞16を培養液38とともに移動させることができる。細胞をライフサイエンス用チューブに移動させる工程は、専用の装置を用いて行うことが可能である。
<< Process of moving cells to tubes for life sciences >>
After attaching the
≪目的細胞を処理する工程≫
目的細胞をチューブ50に移動させた後、目的細胞の処理を行う。目的細胞を処理する工程としては、例えば、PCR処理を挙げることができる。PCR処理は、DNA(deoxyribonucleic acid)分子の特定の領域を増幅させる方法であり、例えば、次の方法により行うことができる。ただし、PCR処理は以下の方法に限定されない。また、目的細胞を処理する工程もPCR処理に限定されず、他の処理を行うこともできる。
<< Process of processing target cells >>
After moving the target cells to the
[PCR処理]
(工程1)
反応液を94℃程度に加熱し、30秒から1分間温度を保ち、2本鎖DNAを1本鎖に分離する。
[PCR processing]
(Step 1)
The reaction solution is heated to about 94 ° C., maintained at temperature for 30 seconds to 1 minute, and the double stranded DNA is separated into single strands.
(工程2)
反応液を60℃程度にまで急速冷却し、その一本鎖DNAとプライマーを所定の温度に加熱(アニーリング)し、一本鎖DNAとプライマーを加熱させる。
(Step 2)
The reaction solution is rapidly cooled to about 60 ° C., the single stranded DNA and the primer are heated (annealed) to a predetermined temperature, and the single stranded DNA and the primer are heated.
(工程3)
プライマーにDNAポリメラーゼを反応させ、一本鎖DNAとプライマーの分離が起きず、DNAポリメラーゼ活性に適した温度(60〜72℃程度)まで、加熱する。DNAが合成されるのに必要な時間(増幅する長さによるが通常1〜2分)、この状態を継続する。
(Step 3)
The DNA polymerase is reacted with the primer, and separation of the single-stranded DNA and the primer does not occur, and heating is performed to a temperature (about 60 to 72 ° C.) suitable for DNA polymerase activity. This condition is continued for the time required for DNA synthesis (usually 1 to 2 minutes depending on the length of amplification).
(工程4)
工程1から工程3を1サイクルとし、工程1から工程3までの手順を繰り返すことにより、特定のDNA断片を増幅することができる。一般的に、PCR処理をn回のサイクル行うと、1つの2本鎖DNAから目的部分を2n倍に増幅することができる。長いDNA鎖が最後まで残ってしまうが、通常20サイクル程度行うことで、必要とする特定のDNA断片に比べ、DNAの量を無視できる程、少なくすることができる。
(Step 4)
A specific DNA fragment can be amplified by repeating
このように、本実施形態の細胞の選別方法によれば、蓋を用いて、細胞画像の撮像、目的細胞の判定を行った後、チューブに細胞を移動し、目的細胞の処理を行うことができる。したがって、蓋を有する1つのライフサイエンス用チューブセットで、画像解析から、細胞の処理まで行うことができる。また、画像解析を行う蓋から、処理を行うチューブまでの細胞の移動を、キャピラリーを用いるなどの難しい操作を必要とせず、容易に行うことができる。 As described above, according to the cell sorting method of the present embodiment, after the imaging of the cell image and the determination of the target cell are performed using the lid, the cell is moved to the tube and the target cell is processed. it can. Therefore, it is possible to carry out from image analysis to processing of cells with one life science tube set having a lid. In addition, movement of cells from the lid for image analysis to the tube for processing can be easily performed without requiring a difficult operation such as using a capillary.
10 解析装置
12 蛍光用励起光源装置
14 明視野用光源装置
16 細胞
18、318 プレート
19、319 トレー
20 レンズ
22 励起フィルタ
24 ダイクロイックミラー
26 蛍光フィルタ
28 フィルタ群(フィルタキューブ)
30 撮像装置
32.132、232、332 ライフサイエンス用チューブの蓋(蓋)
34、134、234 凹部
34a、134a 底面
34b、134b、134c 側面
38 培養液
40 画像撮影領域
50 ライフサイエンス用チューブ(チューブ)
236 スペーサー
DESCRIPTION OF
30
34, 134, 234
236 Spacer
Claims (14)
前記ライフサイエンス用チューブ側に凹部を有し、
前記凹部の底面が平坦で、かつ、円形または四角形以上の多角形であり、側面が底面から開口部に向かって広がる方向の傾斜面からなるライフサイエンス用チューブの蓋。 A lid for life science tubes,
The life science tube side has a recess,
A lid for a tube for life sciences, wherein a bottom surface of the recess is flat and is a circle or a polygon having a square or more, and a side surface is an inclined surface extending in a direction from the bottom toward the opening.
分取された前記細胞を撮像し、細胞画像を取得する工程と、
前記細胞画像に基づいて、目的細胞を選別する工程と、を有する細胞の選別方法。 Separating the cells into a lid of a life science tube;
Imaging the sorted cells to obtain a cell image;
Sorting the target cells based on the cell image.
前記目的細胞を前記ライフサイエンス用チューブに移動させる工程と、
前記ライフサイエンス用チューブ内の前記目的細胞を処理する工程と、を有する請求項9に記載の細胞の選別方法。 Attaching the life science tube to a lid of the life science tube after the step of selecting the target cells;
Transferring the target cell to the life science tube;
And D. processing the target cells in the life science tube.
前記底面の大きさは、画像撮影領域において、外接する円形に近似した時の直径が、前記画像撮影領域の直交する二辺のうちの短辺の長さより短く、短辺の長さの1/2以上である請求項13に記載の細胞の選別方法。 In the step of obtaining the cell image, the magnification of the objective lens for imaging is 5 times or more and 63 times or less,
The size of the bottom surface is such that the diameter when approximated to a circumscribed circle in the image capturing area is shorter than the length of the short side of the two orthogonal sides of the image capturing area, and 1/1 of the length of the short side. The cell sorting method according to claim 13, which is two or more.
Priority Applications (2)
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