JP2019088246A

JP2019088246A - Steviol glycoside composition

Info

Publication number: JP2019088246A
Application number: JP2017220547A
Authority: JP
Inventors: 拓真小笠原; Takuma Ogasawara
Original assignee: Nippon Paper Industries Co Ltd; Jujo Paper Co Ltd
Current assignee: Nippon Paper Industries Co Ltd; Jujo Paper Co Ltd
Priority date: 2017-11-16
Filing date: 2017-11-16
Publication date: 2019-06-13

Abstract

To provide a steviol glycoside composition having sweetness of rebaudioside D, and having excellent water solubility even at normal temperature.SOLUTION: A steviol glycoside composition contains 50%(W/W) or more of α-glucosyl rebaudioside D, which is a glyco-adduct of rebaudioside D, obtained by α-glycosylation of rebaudioside D.SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、α−グルコシルステビオール配糖体組成物およびその製造方法に関する。 The present invention relates to an α-glucosyl steviol glycoside composition and a method for producing the same.

ステビア甘味料は、キク科の植物ステビア・レバウディアナ・ベルトニー（ＳｔｅｖｉａｒｅｂａｕｄｉａｎａＢＥＲＴＯＩ）（以下、「ステビア」と略称する。）の葉部から抽出精製した高甘味物質の混合品であり、高甘味を有する甘味料として知られている。ステビア高甘味成分は、主成分であるステビオサイドをはじめ、レバウディオサイドＡ、レバウディオサイドＣ、レバウディオサイドＤ、レバウディオサイドＥ、およびズルコサイドＡ（ＤｕｌｕｃｏｓｉｄｅＡ）の６種などが知られている。以下、本明細書において、レバウディオサイド（Ｒｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅ）は「Ｒｅｂ」と略記し、レバウディオサイドＡ、Ｃ、Ｄ、およびＥのそれぞれを「Ｒｅｂ−Ａ」、「Ｒｅｂ−Ｃ」、「Ｒｅｂ−Ｄ」、および「Ｒｅｂ−Ｅ」と表記する場合がある。 Stevia Sweetener is a mixture of highly sweet substances extracted and purified from the leaves of the Asteraceae plant Steviarebaudiana BERTOI (hereinafter referred to as "Stevia"), and has high sweetness It is known as a fee. Stevia's high-sweetness ingredients include stevioside, which is the main component, and six types of rebaudioside A, rebaudioside C, rebaudioside D, rebaudioside E, and dulcoside A (Dulucoside A). Are known. Hereinafter, in the present specification, rebaudioside (Rebaudioside) is abbreviated as “Reb”, and each of rebaudiosides A, C, D, and E is “Reb-A”, “Reb-C”, “rebaudioside”. It may be written as "Reb-D" and "Reb-E".

ステビア抽出品には、主成分であるステビオサイドの比率の高い通常抽出品、あるいはＲｅｂ−Ａの含有量を多くし、味質の改善をした調整品が知られている。 As the stevia extract, a regular extract having a high ratio of stevioside which is a main component, or a preparation having an increased content of Reb-A and improved taste is known.

一方でＲｅｂ−Ｄは、Ｒｅｂ−Ａよりも砂糖としての特徴と好ましい風味を示すことが知られており、そのようなＲｅｂ−Ｄを高濃度含む調整品も求められている。Ｒｅｂ−Ｄの精製法は、例えば特許文献１に報告されている。 On the other hand, Reb-D is known to exhibit characteristics and a preferable flavor as a sugar than Reb-A, and a preparation containing such a high concentration of Reb-D is also sought. The purification method of Reb-D is reported, for example, in Patent Document 1.

しかしながら、Ｒｅｂ−Ｄは、室温での水中溶解性が低い。例えば特許文献２ではＲｅｂ−Ｄは、完全に溶解させるために、２時間に亘り水の沸点近くまで加熱する必要があることを報告している。このようにＲｅｂ−Ｄは水中溶解性が低いため、飲料や食品に用いることが困難である。そこで、より水溶性の高いＲｅｂ−Ｄが求められている。その解決手段として、例えば、特許文献３では、加熱処理したり、水溶性有機酸若しくはその塩、可溶化向上剤、増粘剤、または抗凝集剤などを添加剤として用いたりすることが提案されている。 However, Reb-D has low solubility in water at room temperature. For example, Patent Document 2 reports that Reb-D needs to be heated to near the boiling point of water for 2 hours in order to completely dissolve it. Thus, Reb-D is difficult to use in beverages and foods because of its low solubility in water. Therefore, more water-soluble Reb-D is required. As a solution means, for example, in Patent Document 3, it is proposed to use a heat treatment or to use a water-soluble organic acid or a salt thereof, a solubilization enhancer, a thickener, an antiflocculant or the like as an additive It is done.

またステビア抽出物の味質を改質する手段として、ステビア抽出物をα−グルコシル化したステビア抽出物およびその調節品について報告がなされている（特許文献４および５）。 In addition, as a means for modifying the taste of the stevia extract, reports have been made on stevia extract obtained by α-glucosylation of stevia extract and a preparation thereof (Patent Documents 4 and 5).

米国特許第８４１４９４９号公報U.S. Patent No. 8414949 特開２０１７−５１２０３号公報JP, 2017-51203, A 特開２０１６−１６５２９８号公報JP, 2016-165298, A 特公平５−２２４９８号公報Japanese Examined Patent Publication 5-22498 特許３５０８１２７号公報Patent 3508127 gazette

特許文献３に記載の方法のように、水溶性有機酸又はその塩などの添加剤を用いると、Ｒｅｂ−Ｄ特有の甘味質が変質して損なわれてしまうおそれがある。そこで、本発明は、Ｒｅｂ−Ｄの甘味質を有しつつ、常温下でも水溶性に優れたステビオール配糖体組成物を提供することを課題とする。 When an additive such as a water-soluble organic acid or a salt thereof is used as in the method described in Patent Document 3, there is a possibility that the sweetness peculiar to Reb-D may be degraded and lost. Then, this invention makes it a subject to provide the steviol glycoside composition excellent in water solubility also at normal temperature, having a sweetness of Reb-D.

本発明者は、鋭意研究の結果、Ｒｅｂ−Ｄをα−グルコシル化して糖鎖を付加することにより、Ｒｅｂ−Ｄと同じ又はほぼ同等の甘味質を維持しつつ、常温下でも水溶性に優れたＲｅｂ−Ｄの改質体が得られることを見出し、以下に示す本発明を完成させるに至った。 As a result of earnest research, the inventor of the present invention has excellent water solubility even at room temperature while maintaining the same or almost the same sweetness as Reb-D by adding α-glucosylation of Reb-D and adding a sugar chain. It has been found that a modified Reb-D can be obtained, and the present invention shown below has been completed.

〔１〕α−グルコシルレバウディオサイドＤを５０％（Ｗ／Ｗ）以上含む、ステビオール配糖体組成物。
〔２〕α−グルコシルステビオール配糖体の含有量が５０％（Ｗ／Ｗ）以上であり、
α−グルコシルレバウディオサイドＤの含有量、または、レバウディオサイドＤおよびα−グルコシルレバウディオサイドＤの合計含有量が７０％（Ｗ／Ｗ）以上である、
ステビオール配糖体組成物。
〔３〕レバウディオサイドＤおよびα−グルコシルレバウディオサイドＤを含み、
レバウディオサイドＤに対するα−グルコシルレバウディオサイドＤの含量比が３．０以上である、
上記〔１〕または〔２〕に記載のステビオール配糖体組成物。
〔４〕α−グルコシル残基量が１５．０％（Ｗ／Ｗ）以上である、上記〔１〕〜〔３〕のいずれか一項に記載のステビオール配糖体組成物。
〔５〕当該組成物の１．００％（Ｗ／Ｖ）水溶液の、２０℃における波長６００ｎｍの可視光透過率が４０．００％以上である、上記〔１〕〜〔４〕のいずれか一項に記載のステビオール配糖体組成物。
〔６〕当該組成物が水溶液である、上記〔１〕〜〔５〕のいずれか一項に記載のステビオール配糖体組成物。
〔７〕当該組成物が粉体又は顆粒である、上記〔１〕〜〔５〕のいずれか一項に記載のステビオール配糖体組成物。
〔８〕甘味料である、上記〔１〕〜〔７〕のいずれか一項に記載のステビオール配糖体組成物。
〔９〕甘味料を含む飲料であって、当該甘味料の８０％（Ｗ／Ｗ）以上が上記〔１〕〜〔５〕のいずれか一項に記載のステビオール配糖体組成物である、飲料。
〔１０〕甘味料を含む食品であって、当該甘味料の８０％（Ｗ／Ｗ）以上が上記〔１〕〜〔５〕のいずれか一項に記載のステビオール配糖体組成物である、食品。
〔１１〕α−グルコシルレバウディオサイドＤを含むステビオール配糖体組成物の製造方法であって、
糖鎖供与体と、レバウディオサイドＤと、グルコシルトランスフェラーゼとを水溶液中で混合して酵素反応を行い、α−グルコシルレバウディオサイドＤを生成することと、
当該ステビオール配糖体組成物中のα−グルコシルレバウディオサイドＤの含有量が５０％（Ｗ／Ｗ）以上になるようにすることと、
を含む製造方法。
〔１２〕前記糖鎖供与体がデキストリンであり、前記グルコシルトランスフェラーゼがデキストリングルコシルトランスフェラーゼである、上記〔１１〕に記載の製造方法。 [1] A steviol glucoside composition containing 50% (W / W) or more of α-glucosyl rebaudioside D.
[2] The content of α-glucosyl steviol glycoside is 50% (W / W) or more,
The content of α-glucosyl rebaudioside D, or the total content of rebaudioside D and α-glucosyl rebaudioside D is 70% (W / W) or more.
Steviol glycoside composition.
[3] rebaudioside D and α-glucosyl rebaudioside D,
The content ratio of α-glucosyl rebaudioside D to rebaudioside D is 3.0 or more,
The steviol glycoside composition as described in said [1] or [2].
[4] The steviol glycoside composition according to any one of the above [1] to [3], wherein the amount of α-glucosyl residue is 15.0% (W / W) or more.
[5] Any one of the above [1] to [4], wherein the visible light transmittance of the 1.00% (W / V) aqueous solution of the composition at a wavelength 600 nm at 20 ° C. is 40.00% or more The steviol glycoside composition as described in a term.
[6] The steviol glycoside composition according to any one of the above [1] to [5], wherein the composition is an aqueous solution.
[7] The steviol glycoside composition according to any one of the above [1] to [5], wherein the composition is a powder or granules.
[8] The steviol glycoside composition according to any one of the above [1] to [7], which is a sweetener.
[9] A beverage comprising a sweetener, wherein 80% (W / W) or more of the sweetener is the steviol glycoside composition according to any one of the above [1] to [5], Beverage.
[10] A food comprising a sweetener, wherein 80% (W / W) or more of the sweetener is the steviol glycoside composition according to any one of the above [1] to [5], Food.
[11] A method for producing a steviol glycoside composition containing α-glucosyl rebaudioside D, which method comprises:
Performing an enzyme reaction by mixing a glycosyl donor, rebaudioside D, and glucosyltransferase in an aqueous solution to form α-glucosyl rebaudioside D;
Making the content of α-glucosyl rebaudioside D in the steviol glycoside composition to be 50% (W / W) or more;
Manufacturing method including:
[12] The production method of the above-mentioned [11], wherein the sugar chain donor is dextrin and the glucosyltransferase is dextrin glucosyltransferase.

本発明によれば、Ｒｅｂ−Ｄと同じ又はほぼ同等の甘味質を有し、常温下でも水溶性に優れたステビオール配糖体組成物を得ることができる。 According to the present invention, it is possible to obtain a steviol glucoside composition having the same or almost the same sweetness as Reb-D and having excellent water solubility even at normal temperature.

以下、本発明の実施形態について説明する。
なお、本発明の説明においては、特段の規定がない限り、数値範囲を示す「ＡＡ〜ＢＢ」という記載は、「ＡＡ以上ＢＢ以下」を意味する（「ＡＡ」および「ＢＢ」は任意の数値を示す）。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described.
In the description of the present invention, unless otherwise specified, the description “AA to BB” indicating a numerical range means “AA or more and BB or less” (“AA” and “BB” are arbitrary numerical values) Show).

＜１．ステビオール配糖体組成物＞
本発明のステビオール配糖体組成物は、α−グルコシルＲｅｂ−Ｄを主成分として含む組成物である。Ｒｅｂ−Ｄ（ＲｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅＤ）は、下記式（１）により表されるステビオール配糖体である。 <1. Steviol glycoside composition>
The steviol glycoside composition of the present invention is a composition containing α-glucosyl Reb-D as a main component. Reb-D (Rebaudioside D) is a steviol glycoside represented by the following formula (1).

式（１）中、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ次のとおり表される糖鎖である。下記Ｒ₁およびＲ₂に係る式中「Ｇｌｃ」はグルコース残基を表す。 In Formula (1), R ₁ and R ₂ are sugar chains respectively represented as follows. In the formula according to the following R ₁ and R ₂ , “Glc” represents a glucose residue.

本発明において、「α−グルコシルＲｅｂ−Ｄ」（α−グルコシルレバウディオサイドＤ）との用語は、α−グルコシル化されたＲｅｂ−Ｄを意味し、より具体的には、Ｒｅｂ−Ｄに対しα−グルコース分子が付加されたＲｅｂ−Ｄの誘導体を意味する。すなわち、α−グルコシルＲｅｂ−Ｄは、Ｒｅｂ−Ｄと対比して、α−グルコース残基の数が増加しているものであればよい。α−グルコース分子は、例えば、上記Ｒ₁およびＲ₂の一方又は双方に付加されうる。また、上記Ｒ₁およびＲ₂のそれぞれに付加されたα−グルコース残基の数は、１又は複数でありうる。上記Ｒ₁およびＲ₂の双方にα−グルコース残基が付加されている場合、双方の基が有するα−グルコース残基の数は、同じ数であっても異なる数であってもよい。付加されたα−グルコー残基の数は、好ましくは１〜２０残基程度、より好ましくは１〜１０残基程度であり、さらに好ましくは１〜５残基程度である。水溶性および甘味質に係る本発明の効果が失われない限り、α−グルコース残基の数が上記の好ましい範囲を上回るα-グルコース残基を有するα−グルコシルＲｅｂ−Ｄが、本発明のステビオール配糖体組成物中に含まれていてもよい。Ｒｅｂ−Ｄに対する付加部位は、α−グルコース残基が連続して結合している糖鎖となっていることが好ましいが、本発明の効果が失われない範囲において、または、付加部位の一部にα−グルコース残基の分子数を超えない範囲において、他の糖残基が含まれていてもよい。 In the present invention, the term “α-glucosyl Reb-D” (α-glucosyl rebaudioside D) means α-glucosylated Reb-D, more specifically to Reb-D On the other hand, it means a derivative of Reb-D to which an α-glucose molecule is added. That is, α-glucosyl Reb-D may be one in which the number of α-glucose residues is increased as compared to Reb-D. An α-glucose molecule can be added, for example, to one or both of R ₁ and R ₂ above. In addition, the number of α-glucose residues added to each of R ₁ and R ₂ may be one or more. When α-glucose residues are added to both of the above R ₁ and R ₂ , the number of α-glucose residues possessed by both groups may be the same or different. The number of added α-gluco-residues is preferably about 1 to 20 residues, more preferably about 1 to 10 residues, and still more preferably about 1 to 5 residues. As long as the effects of the present invention on water solubility and sweetness are not lost, α-glucosyl Reb-D having an α-glucose residue in which the number of α-glucose residues exceeds the above-mentioned preferable range is the steviol of the present invention. It may be contained in the glycoside composition. The addition site for Reb-D is preferably a sugar chain to which an α-glucose residue is continuously linked, but within the range that the effect of the present invention is not lost, or a part of the addition site The other sugar residue may be contained in the range which does not exceed the molecule number of (alpha)-glucose residue.

本発明のステビオール配糖体組成物は、α−グルコシルＲｅｂ−Ｄを少なくとも５０％（Ｗ／Ｗ）含む。当該組成物中のα−グルコシルＲｅｂ−Ｄの含有量は、好ましくは６０％（Ｗ／Ｗ）以上であり、より好ましくは７０％（Ｗ／Ｗ）以上であり、さらに好ましくは７５、８０、８５、または９０％（Ｗ／Ｗ）以上である。 The steviol glycoside composition of the present invention contains at least 50% (W / W) of α-glucosyl Reb-D. The content of α-glucosyl Reb-D in the composition is preferably 60% (W / W) or more, more preferably 70% (W / W) or more, and still more preferably 75, 80, 85 or 90% (W / W) or more.

Ｒｅｂ−Ｄを５０％（Ｗ／Ｗ）以上含む組成物では、Ｒｅｂ−Ｄの濃度が上がるほど水に対する溶解性が低くなり、常温下においては攪拌しても溶解せずに残渣が残ってしまう傾向が顕著となる。しかし、本発明のステビオール配糖体組成物は、Ｒｅｂ−Ｄを改質したα−グルコシルＲｅｂ−Ｄを主成分としており、Ｒｅｂ−Ｄの甘味質を有していながら、常温下においてＲｅｂ−Ｄよりも水に溶解しやすい。なお、本明細書において、「常温」とは１５〜２５℃の範囲を意味し、代表的な温度としては約２０℃を意味する。 In a composition containing 50% (W / W) or more of Reb-D, the higher the concentration of Reb-D, the lower the solubility in water, and the residue does not dissolve even when stirred at room temperature. The tendency is remarkable. However, the steviol glycoside composition of the present invention is based on α-glucosyl Reb-D modified with Reb-D, and has the sweetness of Reb-D, but at normal temperature, Reb-D. It dissolves more easily in water. In addition, in this specification, "normal temperature" means the range of 15-25 degreeC, and as a typical temperature, it means about 20 degreeC.

本発明のステビオール配糖体組成物は、一実施形態として、Ｒｅｂ−Ｄを主成分とするステビオール配糖体組成物を原料として製造することができる。この場合、未反応のＲｅｂ−Ｄが少ないほど組成物としての水溶性は向上する。本発明のステビオール配糖体組成物中のＲｅｂ−Ｄの含有量は、好ましくは１０％（Ｗ／Ｗ）以下であり、より好ましくは５％（Ｗ／Ｗ）以下であり、さらに好ましくは３．０、１．０、０．１、または０．０５％（Ｗ／Ｗ）以下である。 The steviol glycoside composition of this invention can manufacture the steviol glycoside composition which has Reb-D as a main component as a raw material as one Embodiment. In this case, the less the unreacted Reb-D, the better the water solubility of the composition. The content of Reb-D in the steviol glycoside composition of the present invention is preferably 10% (W / W) or less, more preferably 5% (W / W) or less, and further preferably 3 .0, 1.0, 0.1, or 0.05% (W / W) or less.

本発明のステビオール配糖体組成物は、他の一実施形態として、（Ａ）α−グルコシルステビオール配糖体の含有量が５０％（Ｗ／Ｗ）以上であり、且つ（Ｂ）α−グルコシルＲｅｂ−Ｄの含有量、または、Ｒｅｂ−Ｄおよびα−グルコシルＲｅｂ−Ｄの合計含有量が７０％（Ｗ／Ｗ）以上である、ステビオール配糖体組成物でありうる。上記のとおり、本発明のステビオール配糖体組成物は、Ｒｅｂ−Ｄおよびその他のステビオール配糖体を含むステビア抽出物やその調整品を原料として製造しうる。この場合、本発明のステビオール配糖体組成物は、α−グルコシルステビオール配糖体、Ｒｅｂ−Ｄおよびα−グルコシルＲｅｂ−Ｄの量が上記のような形態を採りうる。 The steviol glycoside composition of the present invention is characterized in that the content of (A) α-glucosylsteviol glycoside is 50% (W / W) or more, and (B) α-glucosyl, as another embodiment. The steviol glycoside composition may have a content of Reb-D, or a total content of Reb-D and α-glucosyl Reb-D of 70% (W / W) or more. As described above, the steviol glycoside composition of the present invention can be produced using, as a raw material, a stevia extract containing Reb-D and other steviol glycosides, or a preparation thereof. In this case, in the steviol glycoside composition of the present invention, the amounts of α-glucosyl steviol glycoside, Reb-D and α-glucosyl Reb-D can take the form as described above.

上記（Ａ）および（Ｂ）を満たす実施形態において、α−グルコシルステビオール配糖体の含有量は、好ましくは６０％（Ｗ／Ｗ）以上であり、より好ましくは７０％（Ｗ／Ｗ）以上であり、さらに好ましくは７５、８０、８３、８５または９０％（Ｗ／Ｗ）以上である。 In the embodiment satisfying the above (A) and (B), the content of α-glucosylsteviol glycoside is preferably 60% (W / W) or more, more preferably 70% (W / W) or more More preferably, it is 75, 80, 83, 85 or 90% (W / W) or more.

また、上記（Ａ）および（Ｂ）を満たす実施形態において、α−グルコシルレバウディオサイドＤの含有量、または、レバウディオサイドＤおよびα−グルコシルレバウディオサイドＤの合計含有量は、好ましくは７５％（Ｗ／Ｗ）以上であり、より好ましくは８０％（Ｗ／Ｗ）以上であり、さらに好ましくは８３、８５、または９０％（Ｗ／Ｗ）以上である。 Further, in an embodiment satisfying the above (A) and (B), the content of α-glucosyl rebaudioside D, or the total content of rebaudioside D and α-glucosyl rebaudioside D is Preferably it is 75% (W / W) or more, More preferably, it is 80% (W / W) or more, More preferably, it is 83, 85 or 90% (W / W) or more.

本発明のステビオール配糖体組成物がＲｅｂ−Ｄおよびα−グルコシルＲｅｂ−Ｄの双方を含む場合、Ｒｅｂ−Ｄに対するα−グルコシルＲｅｂ−Ｄの含量比（重量比）は、好ましくは３．０以上であり、より好ましくは３．３以上であり、さらに好ましくは３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、または４．０以上でありうる。Ｒｅｂ−Ｄが残存する場合であっても、Ｒｅｂ−Ｄとα−グルコシルＲｅｂ−Ｄの含量比を上記のようにすることによって、Ｒｅｂ−Ｄの甘味質をより良好に保持しつつ、常温下の水溶性が改善されたステビオール配糖体組成物を得ることができる。 When the steviol glycoside composition of the present invention contains both Reb-D and α-glucosyl Reb-D, the content ratio (weight ratio) of α-glucosyl Reb-D to Reb-D is preferably 3.0. Or more, more preferably 3.3 or more, and still more preferably 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, or 4.0 or more. Even when Reb-D remains, maintaining the sweetness of Reb-D better by setting the content ratio of Reb-D to α-glucosyl Reb-D as described above, at normal temperature It is possible to obtain a steviol glucoside composition having an improved water solubility of

本発明のステビオール配糖体組成物の他の一実施形態としては、α−グルコシル残基量が、好ましくは１５．０％（Ｗ／Ｗ）以上であり、より好ましくは２０．０％（Ｗ／Ｗ）以上であり、さらに好ましくは３０．０または３５．０％（Ｗ／Ｗ）以上であるステビオール配糖体組成物でありうる。α−グルコシルＲｅｂ−Ｄを主成分として含む本発明のステビオール配糖体組成物において、α−グルコシル残基量が上記のような値であると、α−グルコシルＲｅｂ−Ｄが十分に含まれており、Ｒｅｂ−Ｄの甘味質を有しつつ常温下での水溶性が良好である。他方、α−グルコシル残基量の上限は、Ｒｅｂ−Ｄの甘味質を保つ観点からすると、好ましくは６０％（Ｗ／Ｗ）以下であり、より好ましくは５０％（Ｗ／Ｗ）以下であり、さらに好ましくは４０％（Ｗ／Ｗ）以下でありうる。 In another embodiment of the steviol glycoside composition of the present invention, the amount of α-glucosyl residue is preferably 15.0% (W / W) or more, more preferably 20.0% (W The steviol glucoside composition may have a W / W or more, more preferably 30.0 or 35.0% (W / W) or more. In the steviol glycoside composition of the present invention containing α-glucosyl Reb-D as the main component, α-glucosyl Reb-D is sufficiently contained when the amount of α-glucosyl residue is as described above. It has good water solubility at room temperature while having the sweetness of Reb-D. On the other hand, the upper limit of the amount of α-glucosyl residue is preferably 60% (W / W) or less, more preferably 50% (W / W) or less, from the viewpoint of keeping the sweetness of Reb-D. And more preferably 40% (W / W) or less.

なお、α−グルコシル残基量は、食品添加物公定書第８版および２０１６年ＪＥＣＦＡ（ＪｏｉｎｔＥｘｐｅｒｔＣｏｍｍｉｔｔｅｅｏｎＦｏｏｄＡｄｄｉｔｉｖｅｓ）規格の「ＳｔｅｖｉｏｌＧｌｙｃｏｓｉｄｅｓＦｒｏｍＳｔｅｖｉａＲｅｂａｕｄｉａｎａＢｅｒｔｏｎｉ」などの記載に準じて測定することができる。α−グルコシル残基量については、下記実施例に記載の方法にて測定できる。 The amount of α-glucosyl residue should be measured according to the description of Food Additives Specification 8th edition and “Steviol Glycosides From Stevia Rebaudiana Bertoni” etc. of JECFA (Joint Expert Committee on Food Additives) standard in 2016. it can. About the amount of (alpha)-glucosyl residue, it can measure by the method as described in the following Example.

本発明のステビオール配糖体組成物の他の一実施形態としては、水に対する溶解度の観点から、当該組成物の１．００％（Ｗ／Ｖ）水溶液の、２０℃における波長６００ｎｍの可視光透過率が４０．００％以上であるステビオール配糖体組成物でありうる。このような可視光透過率を有する場合、本発明のステビオール配糖体組成物は２０℃の水溶液に対して少なくとも半溶解性を有する。可視光透過率は、より好ましくは、６０．００％以上であり、さらに好ましくは７０．００、８０．００、９０．００、または９５．００％以上である。可視透過率が９０．００％以上であれば、十分に溶解したといえる状態である。可視光透過率の高い値を有する組成物ほど、溶液状態での製品化、または飲料などへの添加物として好適である。なお、可視光透過率は、分光光度計を用いて測定可能であり、具体的には下記の実施例に示す方法により測定できる。 As another embodiment of the steviol glycoside composition of the present invention, from the viewpoint of solubility in water, visible light transmission at a wavelength of 600 nm at 20 ° C. of a 1.00% (W / V) aqueous solution of the composition The steviol glycoside composition may have a rate of 40.00% or more. When having such a visible light transmittance, the steviol glycoside composition of the present invention has at least semisolubility in an aqueous solution at 20 ° C. The visible light transmittance is more preferably 60.00% or more, still more preferably 70.00, 80.00, 90.00, or 95.00% or more. If the visible transmittance is 90.00% or more, it can be said that it has been sufficiently dissolved. The composition having a high visible light transmittance is more suitable as a product in solution or as an additive to beverages and the like. The visible light transmittance can be measured using a spectrophotometer, and specifically, can be measured by the method described in the following examples.

本発明のステビオール配糖体組成物の用途として好ましくは、甘味料が挙げられる。本発明のステビオール配糖体組成物は、Ｒｅｂ−Ｄと同じまたはほぼ同等の甘味質を有しているため、Ｒｅｂ−Ｄ特有の甘味質が求められるような場合に好適に用いることができる。Ｒｅｂ−Ｄは独特なすっきりとした切れの良い甘味質を有するが、水溶性が低いため、飲料および食品（以下、まとめて飲食品という場合がある。）への利用がしにくかった。しかし、本発明のステビオール配糖体組成物は、Ｒｅｂ−Ｄの甘味質を保持しつつ、常温下においても水溶性が向上しているため、Ｒｅｂ−Ｄを代替またはＲｅｂ−Ｄと併用する甘味料として、飲食品に対し広範囲に利用できる。 As a use of the steviol glycoside composition of this invention, Preferably a sweetener is mentioned. Since the steviol glycoside composition of the present invention has the same or almost the same sweetness as Reb-D, it can be suitably used when the sweetness peculiar to Reb-D is required. Although Reb-D has a unique clean and crispy sweetness, its low water solubility makes it difficult to use in beverages and foods (hereinafter sometimes collectively referred to as food and drink). However, the steviol glycoside composition of the present invention is improved in water solubility even at normal temperature while maintaining the sweetness of Reb-D, and therefore, sweetness using Reb-D as a substitute or in combination with Reb-D As a fee, it can be widely used for food and drink.

本発明のステビオール配糖体組成物には、他の任意成分が含まれていてもよい。例えば、本発明のステビオール配糖体組成物には、上記α−グルコシルＲｅｂ−Ｄの他に、ステビオサイド、ズルコサイドＡ、ズルコサイドＢ、Ｒｅｂ−Ａ、Ｒｅｂ−Ｂ、Ｒｅｂ−Ｃ、Ｒｅｂ−Ｅ、Ｒｅｂ−Ｇ、Ｒｅｂ−Ｉ、Ｒｅｂ−Ｈ、Ｒｅｂ−Ｌ、Ｒｅｂ−Ｋ、Ｒｅｂ−Ｊ、Ｒｅｂ−Ｍ、Ｒｅｂ−ＮまたはＲｅｂ−Ｏなどの他のステビオール配糖体成分が含まれていてもよい。また、本発明のステビオール配糖体組成物には、さらに他の糖質が含まれていてもよい。他の糖質としては、例えば、グルコース、フラクトース、ガラクトースなどの単糖類、マルトール、イソマルトース、ラクトース、パラチノースなどの二糖類、マルトトリオース、エルロース、ラフィノース、ラクトスクロース、ケストース等の三糖類、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、マルトトリイトール等の糖アルコールなどが挙げられる。さらに、本発明のステビオール配糖体組成物には、糖質以外の甘味料成分が含まれていてもよい。糖質以外の甘味料成分としては、例えば、Ｌ−アスパルテル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（アスパルテーム）、サッカリン、グリチルリチン、スクラロース、アセスルファムＫ、ネオテーム、アドバンテーム、ラカンカ、ソーマチンなどが挙げられる。本発明のステビオール配糖体組成物中におけるこれらの他の糖質および糖質以外の甘味料成分の含有量は５０％（Ｗ／Ｗ）未満であり、好ましくは３０％（Ｗ／Ｗ）以下であり、より好ましくは２０％（Ｗ／Ｗ）以下であり、さらに好ましくは１０、５、または３％（Ｗ／Ｗ）以下である。本発明のステビオール配糖体組成物には、さらに一般的に甘味料において用いられる、他の任意成分がさらに配合されていてもよい。 The steviol glycoside composition of the present invention may contain other optional components. For example, in the steviol glycoside composition of the present invention, in addition to the above α-glucosyl Reb-D, stevioside, dulcodiside A, dulcodiside B, Reb-A, Reb-B, Reb-C, Reb-E, Reb Other steviol glycoside components such as -G, Reb-I, Reb-H, Reb-L, Reb-K, Reb-J, Reb-M, Reb-N or Reb-O may be included . In addition, the steviol glycoside composition of the present invention may further contain other saccharides. Other saccharides include, for example, monosaccharides such as glucose, fructose, galactose, etc., disaccharides such as maltol, isomaltose, lactose, palatinose, trisaccharides such as maltotriose, erulose, raffinose, lactosucrose, kestose, sorbitol And sugar alcohols such as maltitol, lactitol and maltotriitol. Furthermore, the steviol glycoside composition of the present invention may contain a sweetener component other than sugar. Examples of sweetening ingredients other than sugars include L-asparter-L-phenylalanine methyl ester (aspartame), saccharin, glycyrrhizin, sucralose, acesulfame K, neotame, advantame, lacanka, thaumatin and the like. The content of these other carbohydrates and sweetener components other than carbohydrates in the steviol glycoside composition of the present invention is less than 50% (W / W), preferably 30% (W / W) or less More preferably, it is 20% (W / W) or less, and more preferably 10, 5 or 3% (W / W) or less. The steviol glycoside composition of the present invention may further contain other optional components which are more commonly used in sweeteners.

本発明のステビオール配糖体組成物は、水溶液であってもよいし、粉末または顆粒状の固形物であってもよい。水溶液の場合、Ｒｅｂ−Ｄに比べて、α−グルコシルＲｅｂ−Ｄは水に溶けやすく、再結晶化しにくいため、工業的に大量生産される飲食品に添加する甘味料として利用しやすい。また、粉末または顆粒状などの固形物の場合でも、Ｒｅｂ−Ｄに比べ、常温下でも水に溶解しやすいので、飲食品に添加する甘味料として用いることに適している。 The steviol glycoside composition of the present invention may be an aqueous solution, or may be a powder or granular solid. In the case of an aqueous solution, compared with Reb-D, α-glucosyl Reb-D is easily dissolved in water and is less likely to recrystallize, so it is easy to use as a sweetener added to industrially mass-produced food and drink. Moreover, even in the case of a solid substance such as powder or granular form, it is more easily dissolved in water at room temperature than Reb-D, so it is suitable for use as a sweetener added to food and drink.

本発明のステビオール配糖体組成物を飲食品に添加する場合、その配合量は、飲食品の種類などの諸条件に応じて適宜調整してよい。本発明のステビオール配糖体組成物を用いてＲｅｂ−Ｄのような特有の甘味質を付与するする観点からは、当該飲食品に配合される甘味料全体のうち、８０、８５、または９０％（Ｗ／Ｗ）以上を本発明のステビオール配糖体組成物とすることが好ましい実施形態でありうる。あるいは、当該飲食品に配合される甘味料全体のうちα−グルコシルＲｅｂ−Ｄの配合量が、５０、６０、７０、７５、８５、または９０％（Ｗ／Ｗ）以上であることが好ましい実施形態でありうる。 When the steviol glycoside composition of the present invention is added to food and drink, the compounding amount may be appropriately adjusted according to various conditions such as the type of food and drink. From the viewpoint of imparting a unique sweetness such as Reb-D using the steviol glycoside composition of the present invention, 80, 85 or 90% of the total sweetener blended in the food and drink It may be a preferred embodiment that (W / W) or more is the steviol glycoside composition of the present invention. Or it is preferable that the compounding quantity of (alpha)-glucosyl Reb-D is 50, 60, 70, 75, 85 or 90% (W / W) or more among the whole sweeteners mix | blended with the said food-drinks. It can be a form.

本発明のステビオール配糖体組成物を添加するのに好適な飲食品としては、例えば、果汁入り飲料、野菜飲料、栄養飲料などの酸性飲料、サイダー類、コーラ類、ガラナ、ジンジャーエールなどの炭酸飲料、コーヒー、紅茶、乳飲料、甘酒などの各種飲料、ゼリー、ムース、アイスクリーム、シャーベット、プリン、ヨーグルト等のデザート類、チョコレート、クッキー、ケーキ、チューインガム等の菓子類、ハードキャンディ、ソフトキャンディなどのキャンディ類、水産練り製品、漬物、ドレッシング、醤油、たれなどの塩性食品および調味料等が挙げられる。 Examples of food and drink suitable for adding the steviol glycoside composition of the present invention include fruit juice-containing beverages, vegetable beverages, acidic beverages such as nutritional beverages, ciders, colas, guaranas, ginger ales and the like Beverages, coffee, tea, milk drinks, various beverages such as sweet sake, jelly, mousse, ice cream, sorbet, pudding, desserts such as yogurt, chocolate, cookies, cakes, sweets such as chewing gum, hard candy, soft candy, etc. Candy, fish paste products, pickles, dressings, soy sauce, salt foods such as soy sauce, seasonings and the like.

＜２．ステビオール配糖体組成物の製造方法＞
本発明のステビオール配糖体組成物は、Ｒｅｂ−Ｄをα−グルコシル化して、所定の濃度以上のα−グルコシルＲｅｂ−Ｄを生成することによって得ることができる。一実施形態としては、例えば、（Ｉ）糖鎖供与体と、Ｒｅｂ−Ｄと、グルコシルトランスフェラーゼとを水溶液中で混合して酵素反応を行い、α−グルコシルＲｅｂ−Ｄを生成することと、（ＩＩ）当該ステビオール配糖体組成物中のα−グルコシルＲｅｂ−Ｄの含有量が５０％（Ｗ／Ｗ）以上になるようにすること、によって本発明のステビオール配糖体組成物を製造することができる。 <2. Method of producing steviol glycoside composition>
The steviol glycoside composition of the present invention can be obtained by α-glucosylation of Reb-D to produce α-glucosyl Reb-D at a predetermined concentration or more. In one embodiment, for example, (I) a sugar chain donor, Reb-D, and glucosyltransferase are mixed in an aqueous solution to perform an enzyme reaction to produce α-glucosyl Reb-D ( II) Producing the steviol glycoside composition of the present invention by setting the content of α-glucosyl Reb-D in the steviol glycoside composition to be 50% (W / W) or more Can.

糖供与体としては、例えばα−グリコシル糖化合物、好ましくはα−グルコシル糖化合物などを用いうる。α−グルコシル糖化合物としては、例えばデキストリンなどが挙げられ、好ましくはサイクロデキストリンが挙げられる。 As the sugar donor, for example, an α-glycosyl sugar compound, preferably an α-glucosyl sugar compound may be used. As an alpha-glucosyl sugar compound, dextrin etc. are mentioned, for example, Preferably a cyclodextrin is mentioned.

グルコシルトランスフェラーゼとしては、好ましくはα−グルコシルトランスフェラーゼが挙げられる。糖供与体がデキストリンまたはシクロデキストリンである場合、グルコシルトランスフェラーゼとして、好ましくはデキストリングルコシルトランスフェラーゼまたはシクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼをそれぞれ用いうる。またグルコシルトランスフェラーゼとしては、例えばα１，４結合の形成を触媒するものが好適な酵素として挙げられる。 The glucosyltransferase preferably includes α-glucosyltransferase. When the sugar donor is dextrin or cyclodextrin, preferably dextrin glucosyl transferase or cyclodextrin glucosyltransferase is used as the glucosyltransferase. Moreover, as the glucosyltransferase, for example, one that catalyzes the formation of α1,4 bond is mentioned as a suitable enzyme.

Ｒｅｂ−Ｄを含む原料としては、Ｒｅｂ−Ｄが含まれていれば一般的に入手可能なステビア抽出物を用いうるが、糖質としてＲｅｂ−Ｄを高濃度で含むものが好適である。Ｒｅｂ−Ｄを含む原料の例としては、Ｒｅｂ−Ｄを、好ましくは５０％（Ｗ／Ｗ）以上含み、より好ましくは６０％（Ｗ／Ｗ）以上含み、さらに好ましくは７０、７５、８０、８５、または９０％（Ｗ／Ｗ）以上含むものが挙げられる。高濃度のＲｅｂ−Ｄを含む原料を用いることにより、十分に酵素反応を行った後に溶媒を除去して固形物にすることにより、α−グルコシルＲｅｂ−Ｄを所定含有量以上含む本発明のステビオール配糖体組成物を容易に製造することができる。また、高濃度のＲｅｂ−Ｄを含む原料を用いることにより、吸着樹脂等を用いて精製する場合でも、精製前の段階でα−グルコシルＲｅｂ−Ｄが既にある程度高濃度の本発明のステビオール配糖体組成物とすることができるため、微量成分の精製に比べ、精製工程を簡素化し、大量生産が容易である。なお、Ｒｅｂ−Ｄを高濃度で含むステビオール配糖体組成物は、市販入手可能である。また、Ｒｅｂ−Ｄは、例えば米国特許第８４１４９４９号公報などに記載の方法で精製しうる。 As the raw material containing Reb-D, commonly available Stevia extract can be used as long as it contains Reb-D, but those containing Reb-D at a high concentration as a carbohydrate are preferable. As an example of the raw material containing Reb-D, it preferably contains 50% (W / W) or more, more preferably 60% (W / W) or more of Reb-D, and more preferably 70, 75, 80, Those containing 85 or 90% (W / W) or more can be mentioned. Steviol of the present invention containing α-glucosyl Reb-D in a predetermined content or more by using a raw material containing a high concentration of Reb-D to sufficiently carry out the enzyme reaction and then removing the solvent to obtain a solid. The glycoside composition can be easily produced. In addition, even when purification is performed using an adsorption resin or the like by using a raw material containing high concentration of Reb-D, the steviol glucoside according to the present invention in which α-glucosyl Reb-D already has a certain high concentration at the stage before purification. Since the composition can be a body composition, the purification process is simplified and mass production is easy as compared with the purification of trace components. In addition, the steviol glycoside composition which contains Reb-D in high concentration is commercially available. Also, Reb-D can be purified by the method described in, for example, US Pat. No. 8,414,949.

酵素反応は、糖鎖供与体と、Ｒｅｂ−Ｄを含む原料と、グルコシルトランスフェラーゼとを水溶液中で混合して行う。酵素反応の温度、ｐＨ条件、反応時間などの諸条件は、酵素反応における一般的な条件設定に従って適宜調整してよい。例えば、α−グルコシル化については、特公平５−２２４９８号公報、特公昭５７−１８７７９号公報、および特許第３５０８１２７号公報などの文献があり、これらを参照しうる。 The enzyme reaction is carried out by mixing a glycosyl donor, a raw material containing Reb-D, and glucosyltransferase in an aqueous solution. Various conditions such as temperature, pH conditions and reaction time of the enzyme reaction may be appropriately adjusted in accordance with general conditions set in the enzyme reaction. For example, with regard to α-glucosylation, there are documents such as Japanese Patent Publication No. 5-22498, Japanese Patent Publication No. 57-18779, and Japanese Patent No. 3508127, and these can be referred to.

ステビオール配糖体組成物中のα−グルコシルＲｅｂ−Ｄの含有量が５０％（Ｗ／Ｗ）以上になるようにする方法は特に限定されるものではなく、例えば、（１）上記のように高濃度のＲｅｂ−Ｄを含む原料を用い、α−グルコシルＲｅｂ−Ｄを十分に生成させることにより行ってももよいし、あるいは、（２）酵素反応液をさらに濃縮または精製することにより行ってもよい。 The method for making the content of α-glucosyl Reb-D in the steviol glycoside composition 50% (W / W) or more is not particularly limited, and, for example, (1) as described above It may be carried out by sufficiently producing α-glucosyl Reb-D using a raw material containing high concentration of Reb-D, or (2) carried out by further concentrating or purifying the enzyme reaction solution It is also good.

Ｒｅｂ−Ｄなどのステビオール配糖体へのα−グルコシル化については、Ｒｅｂ−Ｄへの糖付加の位置は限定されず、特に制御しなくてもよい。 With regard to α-glucosylation to steviol glycosides such as Reb-D, the position of glycosylation on Reb-D is not limited, and may not be particularly controlled.

付加する糖鎖の量または長さは、酵素反応の反応時間や温度などによって調整することができる。また、酵素反応により一旦付加した糖鎖を、アミラーゼなどの酵素を用いて切断し、糖鎖の量または長さを調整することもできる。アミラーゼとしては、例えば、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼなどを用いうる。 The amount or length of the added sugar chain can be adjusted by the reaction time or temperature of the enzyme reaction. Alternatively, the amount or length of the sugar chain can be adjusted by cleaving the sugar chain once added by the enzyme reaction using an enzyme such as amylase. As amylase, for example, α-amylase, β-amylase, glucoamylase and the like can be used.

α−グルコシル化反応を行った後、α−グルコシルＲｅｂ−Ｄを精製し、未反応糖供与体、未反応Ｒｅｂ−Ｄ、および失活させた酵素などの残渣を取り除いてもよい。 After the α-glucosylation reaction, α-glucosyl Reb-D may be purified to remove residues such as unreacted sugar donor, unreacted Reb-D, and inactivated enzyme.

以下に実施例を挙げて本発明について具体的に説明するが、本発明の技術的範囲が下記の実施例に限定されるものではない。 EXAMPLES Although an Example is given to the following and this invention is concretely demonstrated, the technical scope of this invention is not limited to a following example.

＜実施例１および２＞
以下のようにして、高濃度Ｒｅｂ−Ｄの糖転移品（実施例１）および糖鎖調節品（実施例２）を合成した。 Examples 1 and 2
A high-concentration Reb-D transglycosylation product (Example 1) and a sugar chain-regulated product (Example 2) were synthesized as follows.

（１）高純度Ｒｅｂ−Ｄを原料に用いた酵素反応
試薬として以下のものを使用した。
・Ｒｅｂ−Ｄ高含有品「ＲＥＢＡＵＤＩＯＳＩＤＥＤ９５％」（ＢｅｉｊｉｎｇＧｉｎｋｏＧｒｏｕｐ製、組成は表１参照）
・デキストリン「サンデック＃７０」（三和澱粉工業株式会社製）
・塩化カルシウム（市販品）
・脱イオン水
・サイクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼ（株式会社林原製）
・α−アミラーゼ「スピターゼＣＰ４０ＦＧ」（ナガセケムテックス株式会社製）
・β−アミラーゼ「β−アミラーゼＬ」（ナガセケムテックス株式会社製） (1) Enzyme reaction using high purity Reb-D as a raw material The following were used as reagents.
-High Reb-D content product "REBAUDIOSIDE D 95%" (Beijing Ginko Group, composition shown in Table 1)
-Dextrin "Sandeck # 70" (manufactured by Sanwa Starch Co., Ltd.)
· Calcium chloride (commercially available)
・ Deionized water ・ Cyclodextrin glucosyltransferase (made by Hayashibara Co., Ltd.)
・ Α-Amylase “Spitase CP40FG” (manufactured by Nagase ChemteX Co., Ltd.)
・ Β-amylase “β-amylase L” (manufactured by Nagase ChemteX Co., Ltd.)

（２）糖転移反応
デキストリン２５ｇを脱イオン水４００ｍｌに加熱溶解させ、冷却した。次いで、Ｒｅｂ−Ｄ高含有品１０ｇ、塩化カルシウム０．２ｇを加えた。ｐＨを５．３に調整、７０℃まで加熱した後、サイクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼ０．６ｍｌを添加し、７０℃で９時間反応させた。反応開始時に反応溶液は白濁していたが、３時間後には澄明となった。その後、９５℃で３０分間加熱し酵素を失活、反応を終了させ、ろ紙（Ｎｏ．５Ｃ）にてろ過を行い、溶液を約４００ｍｌ得た。この溶液を等分し、一方（反応液Ａ）は高純度Ｒｅｂ−Ｄの糖転移品を得るため吸着樹脂精製にかけた。もう一方は糖鎖調節品の合成に使用した。 (2) Sugar Transfer Reaction 25 g of dextrin was heated and dissolved in 400 ml of deionized water and cooled. Next, 10 g of a high Reb-D content and 0.2 g of calcium chloride were added. After adjusting the pH to 5.3 and heating to 70 ° C., 0.6 ml of cyclodextrin glucosyltransferase was added and allowed to react at 70 ° C. for 9 hours. The reaction solution was cloudy at the start of the reaction, but became clear after 3 hours. Thereafter, the enzyme was inactivated by heating at 95 ° C. for 30 minutes to terminate the reaction, followed by filtration with a filter paper (No. 5C) to obtain about 400 ml of a solution. This solution was divided equally, while (Reaction solution A) was subjected to adsorption resin purification to obtain a high purity Reb-D transglycosylation product. The other was used for the synthesis of glycosylated products.

（３）糖鎖調節反応
以下のように、糖転移反応で得た溶液のうち、約半分（約２００ｍｌ）を糖鎖調節反応の原料として使用して、糖鎖調節品を調製した。 (3) Sugar chain regulatory reaction As described below, about half (about 200 ml) of the solution obtained by the glycosyl transfer reaction was used as a raw material for the sugar chain regulatory reaction to prepare a sugar chain regulated product.

糖鎖調節品用に準備した原料のｐＨを６．３に調整後、α−アミラーゼを０．０３ｇ、β−アミラーゼ０．１ｇを加え、５５℃で４時間反応させた。その後、９５℃で３０分間加熱し酵素を失活、反応を終了させ、ろ紙（Ｎｏ．５Ｃ）にてろ過を行いろ液を回収（反応液Ｂ）、吸着樹脂精製にかけた。 After adjusting the pH of the raw material prepared for the sugar chain modified product to 6.3, 0.03 g of α-amylase and 0.1 g of β-amylase were added and reacted at 55 ° C. for 4 hours. Thereafter, the enzyme was inactivated by heating at 95 ° C. for 30 minutes to inactivate the reaction, and the reaction was terminated, followed by filtration with a filter paper (No. 5C) to recover a filtrate (reaction liquid B), and subjected to adsorption resin purification.

（４）吸着樹脂精製
反応液Ａと反応液Ｂの精製を以下の手順にて行った。
合成吸着樹脂ＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）を１３８ｍｌ充填したカラムに反応液を通じ甘味成分を吸着させた。反応液通液後、樹脂体積の１５倍量（２０７０ｍｌ）の脱イオン水にて洗浄した後、９０％（体積濃度）メタノールを７倍量（９６６ｍｌ）カラムに通液させ、吸着した甘味成分を溶出させた。得られた溶出液を減圧濃縮した後、７０℃で乾燥させた。 (4) Purification of Adsorption Resin Purification of reaction solution A and reaction solution B was carried out according to the following procedure.
The sweet component was adsorbed through the reaction liquid on a column packed with 138 ml of synthetic adsorption resin HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation). After passing through the reaction solution, the reaction solution is washed with 15 times the resin volume (2070 ml) of deionized water, and then 90% (volume concentration) methanol is passed through the 7 times volume (966 ml) column to adsorb the sweetened component Elute. The obtained eluate was concentrated under reduced pressure and then dried at 70 ° C.

以上の精製により、反応液Ａから６．５ｇの白色粉末（実施例１：糖転移品）を得た。反応液Ｂからは、５．５ｇの白色粉末（実施例２：糖鎖調節品）を得た。 By the above purification, 6.5 g of a white powder (Example 1: sugar-transferred product) was obtained from reaction liquid A. From the reaction solution B, 5.5 g of a white powder (Example 2: modified sugar chain product) was obtained.

＜糖付加の程度分析１：酵素処理ステビアの食品添加物公定書に準拠した分析＞
食品添加物公定書第８版に記載の「α−グルコシルトランスフェラーゼ処理ステビア」に準拠して実施例１および実施例２の分析を行った。 <Analysis of degree of sugar addition 1: Analysis of enzyme-treated Stevia according to the official document of Food Additives>
The analyzes of Example 1 and Example 2 were carried out in accordance with "α-glucosyltransferase-treated Stevia" described in Food Additives Standard 8th Edition.

但し、ステビオール配糖体の分析は、２０１６年ＪＥＣＦＡ規格の「ＳｔｅｖｉｏｌＧｌｙｃｏｓｉｄｅｓＦｒｏｍＳｔｅｖｉａＲｅｂａｕｄｉａｎａＢｅｒｔｏｎｉ」に記載の手法に則り行った。 However, the analysis of steviol glycosides was performed according to the method described in “Stevilic Glycosides From Stevia Rebaudiana Bertoni” of the 2016 JECFA standard.

実施例１および実施例２各々の粉末約１ｇを水約５０ｍｌに溶解させ、スチレン−ジビニルベンゼン系吸着用樹脂５０ｍｌを充てんした内径約２５ｍｍのガラス管に注ぎ、１分間に３ｍｌ以下の速さで流出させ、次いで水２５０ｍｌで洗浄した後、５０ｖｏｌ％エタノール２５０ｍｌを１分間に３ｍｌ以下の速さで流した。この溶出液を約１００ｍｌまで濃縮し酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）４０ｍｌを加え、更に水を加えて約１８０ｍｌとした。得られた液を５５℃で５分振とうした後、グルコアミラーゼとして「グルコチーム＃２００００」（ナガセケムテックス社製）を０．２ｇ加え、５５℃で６０分振とうした。更に９５℃で約３０分間加熱失活した後、室温まで冷却し、脱イオン水を加えて正確に２００ｍｌとし、検液とした。別に定量用ステビオシドを乾燥し、その約３０ｍｇを精密に量り、脱イオン水／アセトニトリル＝２／１（Ｖｏｌ／Ｖｏｌ）溶媒に溶かして正確に５０ｍｌとし、ステビオシド標準液とした。検液及びステビオシド標準液をＪＥＣＦＡ規格のステビオール配糖体の定量法を準用して、高速液体クロマトグラフィーにより定量を行った。 About 1 g of the powder of each of Example 1 and Example 2 is dissolved in about 50 ml of water and poured into a glass tube with an inner diameter of about 25 mm filled with 50 ml of styrene-divinylbenzene adsorption resin, at a speed of 3 ml or less per minute. After draining and then washing with 250 ml of water, 250 ml of 50 vol% ethanol was flushed at a speed of 3 ml or less per minute. The eluate was concentrated to about 100 ml, 40 ml of acetate buffer (pH 4.5) was added, and water was further added to make it about 180 ml. The obtained solution was shaken at 55 ° C. for 5 minutes, 0.2 g of “glucoteam # 20000” (manufactured by Nagase ChemteX Corp.) was added as glucoamylase, and shaken at 55 ° C. for 60 minutes. Further, after heating at 95 ° C. for about 30 minutes, the reaction solution was cooled to room temperature, and deionized water was added to make exactly 200 ml, which was used as a test solution. Separately, stevioside for quantification was dried, and about 30 mg of the solution was accurately weighed, and dissolved in deionized water / acetonitrile = 2/1 (Vol / Vol) solvent to make exactly 50 ml, which was used as a stevioside standard solution. The test solution and the stevioside standard solution were subjected to high-performance liquid chromatography using the method of determination of steviol glycosides according to JECFA standards.

［分析条件］
カラム：Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋＣＬＣ−ＯＤＳ（Ｍ）２５０ｍｍ（株式会社島津ジーエルシー社製）
溶離液：リン酸緩衝液（ｐＨ２．６）／アセトニトリル＝２０００／９４１（Ｖｏｌ／Ｖｏｌ）
カラム温度：４０℃
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２１０ｎｍ [Analysis conditions]
Column: Shim-pack CLC-ODS (M) 250 mm (made by Shimadzu GLC Co., Ltd.)
Eluent: phosphate buffer (pH 2.6) / acetonitrile = 2000/941 (Vol / Vol)
Column temperature: 40 ° C
Flow rate: 1 ml / min
Detection: UV 210 nm

次に、検液２０μｌを量り、Ｄ−グルコース定量用発色試液３ｍｌを正確に加えて振り混ぜた後、３７℃で正確に５分間放置した。室温まで冷却した後、波長５０５ｎｍにおける吸光度を測定した。対照液は、脱イオン水２０μｌを用いて検液と同様に操作して調製した。別に空試験を行い補正した。空試験液は、酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）４０ｍｌを正確に量り、水を加えて約１８０ｍｌとしたものを、５５℃で５分振とうした後、グルコアミラーゼ０．２ｇを加え、５５℃で６０分間放置し、更に９５℃で約３０分間加熱し、室温まで冷却し、水を加えて正確に２００ｍｌとした液を調製して用いた。空試験液を検液と同様に操作して、吸光度を測定した。別にブドウ糖を脱イオン水に溶解させ所定濃度の標準液を調製した。これらの標準液につき、検液と同様に操作して吸光度を測定し、検量線を作成した。この検量線と補正した検液の吸光度から検液中のＤ−グルコース濃度を求め、次式により検液中のα−グルコシル残基量（単位：Ｗ／Ｗ％）を求めた。 Next, 20 μl of the test solution was weighed, 3 ml of a color developing reagent for D-glucose determination was accurately added, shaken, and left at 37 ° C. for exactly 5 minutes. After cooling to room temperature, the absorbance at a wavelength of 505 nm was measured. A control solution was prepared in the same manner as the test solution using 20 μl of deionized water. A blank test was made separately and corrected. The blank test solution accurately measures 40 ml of acetate buffer (pH 4.5), and water is added to make about 180 ml, and after shaking for 5 minutes at 55 ° C, 0.2 g of glucoamylase is added, and 55 ° C. The solution was left to stand for 60 minutes, further heated at 95.degree. C. for about 30 minutes, cooled to room temperature, and water was added to make a solution exactly 200 ml and used. The blank test solution was operated in the same manner as the test solution to measure the absorbance. Separately, glucose was dissolved in deionized water to prepare a standard solution of a predetermined concentration. The absorbance of each of these standard solutions was measured in the same manner as in the test solution to prepare a calibration curve. The D-glucose concentration in the test solution was determined from the calibration curve and the absorbance of the corrected test solution, and the amount of α-glucosyl residue (unit: W / W%) in the test solution was determined by the following equation.

次いで、α−グルコシルステビオール配糖体及び未反応のステビオール配糖体の総量を次式により求め、総純度（単位：％（Ｗ／Ｗ））とした。 Next, the total amount of α-glucosyl steviol glycoside and unreacted steviol glycoside was determined by the following formula, and was defined as total purity (unit:% (W / W)).

次いで、α−グルコシルステビオール配糖体の定量を行った。実施例１および実施例２各々の粉末約２０ｍｇを精密に量り、脱イオン水／アセトニトリル＝２／１（Ｖｏｌ／Ｖｏｌ）溶媒に溶かして正確に１０ｍｌとし、検液とした。検液及びステビオシド標準液につきステビオール配糖体量を測定し、未反応のステビオール配糖体量を求めた。そして次式によりα−グルコシルステビオール配糖体の含量（単位：％（Ｗ／Ｗ））を求めた。 Subsequently, quantification of α-glucosylsteviol glycoside was performed. Approximately 20 mg of each of the powders of Example 1 and Example 2 was weighed accurately, and dissolved in deionized water / acetonitrile = 2/1 (Vol / Vol) solvent to make exactly 10 ml, and used as a test solution. The amount of steviol glycoside was measured for each of the test solution and the stevioside standard solution to determine the amount of unreacted steviol glycoside. And the content (unit:% (W / W)) of (alpha)-glucosyl steviol glycoside was calculated | required by following Formula.

糖付加の程度の測定結果を表２に示す。 The measurement results of the degree of glycosylation are shown in Table 2.

＜糖付加率の程度分析２：糖付加数分布の分析＞
実施例１および実施例２各々の粉末を約１ｍｇ／ｍｌとなるよう脱イオン水／メタノール＝１／１（Ｖｏｌ／Ｖｏｌ）溶媒に溶解させ、検液とした。検液を高速液体クロマトグラフィーにより分析した。 <Analysis of degree of addition of sugars 2: Analysis of distribution of addition number of sugars>
Each powder of Example 1 and Example 2 was dissolved in deionized water / methanol = 1/1 (Vol / Vol) solvent so as to be about 1 mg / ml, and used as a test solution. The test solution was analyzed by high performance liquid chromatography.

［分析条件］
カラム：ＲＳｐａｋＤＣ−６１３（株式会社昭和電工株式会社製）
溶離液：溶離液Ａアセトニトリル／水＝１／１（Ｖｏｌ／Ｖｏｌ）
溶離液Ｂアセトニトリル
直線グラジエント：０分Ａ：Ｂ＝３２：６８ → ６０分Ａ：Ｂ＝１００：０
カラム温度：４０℃
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２１０ｎｍ [Analysis conditions]
Column: RSpak DC-613 (manufactured by Showa Denko KK)
Eluent: Eluent A Acetonitrile / water = 1/1 (Vol / Vol)
Eluent B Acetonitrile Linear gradient: 0 minutes A: B = 32: 68 → 60 minutes A: B = 100: 0
Column temperature: 40 ° C
Flow rate: 1 ml / min
Detection: UV 210 nm

各保持時間のピークと成分の対応を下記表３の通りとし、ピーク面積に分子量補正をしつつ含量比を計算した。Ｒｅｂ−Ｄの含量を１とした。Ｒｅｂ−Ｄにグルコースが１分子、２分子または３分子付加したα−グルコシルＲｅｂ−Ｄの含量比は、それぞれ表３に示すとおりであった。なお、Ｒｅｂ−Ｄに対してグルコースが４分子以上付加したと予測されるピークも検出されたが、同定はしていない。 The correspondence of the peak of each retention time to the component was as shown in Table 3 below, and the content ratio was calculated while correcting the molecular weight to the peak area. The content of Reb-D was 1. The content ratio of α-glucosyl Reb-D in which one, two or three molecules of glucose were added to Reb-D was as shown in Table 3, respectively. In addition, although the peak estimated that 4 or more molecules of glucose were added with respect to Reb-D was also detected, it has not identified.

＜溶解度の定量化＞
原料の高純度Ｒｅｂ−Ｄ（比較例）、実施例１および実施例２の３つのサンプルの溶解度を比較した。 <Quantification of solubility>
The solubilities of the three samples of high purity Reb-D (comparative example) of the raw material, Example 1 and Example 2 were compared.

試験管に各サンプルを採取した後、常温の脱イオン水を添加し所定濃度の溶液を調製した。その後、マグネッチクスターラーにて１時間撹拌を行った。 After each sample was collected in a test tube, deionized water at normal temperature was added to prepare a solution of a predetermined concentration. Thereafter, stirring was performed for 1 hour with a magnet stirrer.

溶解度は分光光度計（Ｖ−６５０ＤＳ日本分光株式会社）により波長６００ｎｍの可視光透過率（％）を測定し、溶解度（透明性）の指標とした。コントロールとして脱イオン水の透過率を１００とし、透過率９０％以上を溶解（透明）、４０〜８９％を半溶解（半透明）、３９％以下を不溶（白濁）と定義した。表４〜６に、各サンプルの所定濃度における透過率の測定結果および溶解度の判定結果を示す。表中の可視光透過率の単位は％である。 Solubility measured the visible light transmittance (%) of wavelength 600nm with a spectrophotometer (V-650DS JASCO Corporation), and it was made into the parameter | index of solubility (transparency). As a control, the permeability of deionized water was defined as 100, the permeability of 90% or more was dissolved (transparent), 40 to 89% was semi-dissolved (semi-transparent), and 39% or less was insoluble (white turbidity). Tables 4 to 6 show the measurement results of the transmittance at predetermined concentrations of each sample and the determination results of the solubility. The unit of visible light transmittance in the table is%.

溶解上限は、高純度Ｒｅｂ−Ｄは０．０５〜０．１％（Ｗ／Ｖ）、実施例１は１０〜１５％（Ｗ／Ｖ）、実施例２は３〜５％（Ｗ／Ｖ）と推定された。 The upper limit of dissolution is 0.05 to 0.1% (W / V) for high purity Reb-D, 10 to 15% (W / V) for Example 1, and 3 to 5% (W / V) for Example 2 Was estimated.

＜溶解度目視＞
原料の高純度Ｒｅｂ−Ｄ（比較例）、実施例１および実施例２の３つのサンプルの溶解度を比較した。 <Solubility visual observation>
The solubilities of the three samples of high purity Reb-D (comparative example) of the raw material, Example 1 and Example 2 were compared.

各サンプルを、常温の脱イオン水に溶解させ、所定濃度の溶液を作成した。その後、マグネッチクスターラーにて１時間撹拌を行い目視にて溶解状態を確認した。目視による溶解状態の判定結果を表７〜９に示す。 Each sample was dissolved in deionized water at room temperature to form a solution of a predetermined concentration. Thereafter, the mixture was stirred for 1 hour with a magnet stirrer and the dissolution state was visually confirmed. Tables 7 to 9 show the determination results of the dissolution state by visual observation.

溶解上限は、高純度Ｒｅｂ−Ｄでは０．０５〜０．１％（Ｗ／Ｖ）、実施例１では１５〜２０％（Ｗ／Ｖ）、実施例２では５〜７％（Ｗ／Ｖ）と推定された。 The upper limit of dissolution is 0.05 to 0.1% (W / V) for high purity Reb-D, 15 to 20% (W / V) for Example 1, and 5 to 7% (W / V) for Example 2 Was estimated.

＜味質確認＞
原料である高純度Ｒｅｂ−Ｄ（比較例）と酵素反応により得られた実施例１および実施例２の３つのサンプルについて味質確認を行った。 <Taste quality check>
Taste quality confirmation was performed about high purity Reb-D (comparative example) which is a raw material, and three samples of Example 1 and Example 2 obtained by enzyme reaction.

実施例１および実施例２については吸着樹脂精製の操作後に残存するメタノールを除去するため、一旦脱イオン水に完全に溶解させた後、減圧乾燥、次いで７０℃で乾燥させ、メタノールが除去された粉末を味質確認に使用した。 For Example 1 and Example 2, in order to remove the methanol remaining after the operation of the adsorption resin purification, after being completely dissolved in deionized water, it was dried under reduced pressure and then dried at 70 ° C. to remove methanol. Powder was used for taste quality check.

蔗糖に対する相対甘味度を、高純度Ｒｅｂ−Ｄを２７０倍、実施例１を１２０倍、実施例２を１５０倍として、３つのサンプルを蔗糖の５％（Ｗ／Ｖ）相当の甘味度になるように飲料水に添加しパネラー５名で評価を行った。 The relative sweetness to sucrose is 270 times that of high purity Reb-D, 120 times that of Example 1 and 150 times that of Example 2, and the three samples have a sweetness equivalent to 5% (W / V) of sucrose. As such, it was added to drinking water and evaluated by five panelists.

その結果、３サンプルの甘味質について優位な差はなく、酵素反応により甘味質が変わることはなかった。 As a result, there was no significant difference in the sweetness quality of the three samples, and the sweetness quality did not change due to the enzyme reaction.

Claims

A steviol glucoside composition comprising 50% (W / W) or more of α-glucosyl rebaudioside D.

The content of α-glucosyl steviol glycoside is 50% (W / W) or more,
The content of α-glucosyl rebaudioside D, or the total content of rebaudioside D and α-glucosyl rebaudioside D is 70% (W / W) or more.
Steviol glycoside composition.

Containing rebaudioside D and α-glucosyl rebaudioside D,
The content ratio of α-glucosyl rebaudioside D to rebaudioside D is 3.0 or more,
The steviol glycoside composition of Claim 1 or 2.

The steviol glycoside composition as described in any one of Claims 1-3 whose amount of alpha- glucosyl residues is 15.0% (W / W) or more.

The steviol composition according to any one of claims 1 to 4, wherein the visible light transmittance of a 1.00% (W / V) aqueous solution of the composition at a wavelength of 600 nm at 20 ° C is 40.00% or more. Sugar composition.

The steviol glycoside composition according to any one of claims 1 to 5, wherein the composition is an aqueous solution.

The steviol glycoside composition according to any one of claims 1 to 5, wherein the composition is a powder or granules.

The steviol glycoside composition according to any one of claims 1 to 7, which is a sweetener.

A beverage comprising a sweetener, wherein 80% (W / W) or more of the sweetener is the steviol glycoside composition according to any one of claims 1 to 5.

A food comprising a sweetener, wherein 80% (W / W) or more of the sweetener is the steviol glycoside composition according to any one of claims 1 to 5.

A method for producing a steviol glycoside composition containing α-glucosyl rebaudioside D, which comprises:
Performing an enzyme reaction by mixing a glycosyl donor, rebaudioside D, and glucosyltransferase in an aqueous solution to form α-glucosyl rebaudioside D;
Making the content of α-glucosyl rebaudioside D in the steviol glycoside composition to be 50% (W / W) or more;
Manufacturing method including:

The method according to claim 11, wherein the sugar chain donor is dextrin and the glucosyltransferase is dextrin glucosyltransferase.