JP2018188393A - 糸状緑藻の増殖抑制剤及び糸状緑藻の増殖抑制方法 - Google Patents
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Abstract
Description
カルシウム、マグネシウム、及びマンガンからなる群から選択される1種のミネラルと、を含む、糸状緑藻の増殖抑制剤。
本発明の増殖抑制剤は、ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液と、カルシウム、マグネシウム、及びマンガンからなる群から選択される1種のミネラルと、を少なくとも含む。
本発明において用いられるユキヤナギの葉は、未処理の葉であってもよく、処理されたものであってもよい。未処理の葉としては、落葉、又は、人工的に採取した葉をそのまま利用できる。処理された葉としては、上記未処理の葉に、所望の物理的処理又は化学的処理を施したものを利用できる。このような処理としては、乾燥処理、粉砕処理、酵素処理、発酵処理等が挙げられる。
本発明において用いられるミネラルは、カルシウム、マグネシウム、及びマンガンからなる群から選択される1種である。本発明者の検討の結果、これらのミネラルが、意外にもユキヤナギが有するアレロパシー活性を高めることが見出された。これらのミネラルのうち、カルシウム、及びマグネシウムが、ユキヤナギが有するアレロパシー活性を特に高められるという観点から好ましい。
本発明の増殖抑制剤には、上記成分(つまり、ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液、並びにミネラル)のほか、これらの成分の作用を損なわない範囲で、任意の添加物が含まれていてもよい。このような添加物としては、培地、ビタミン、酸化防止剤、キレート剤、pH緩衝剤等が挙げられる。これらの添加物の種類や量は、得ようとする効果に応じて適宜設定できる。
本発明の増殖抑制剤の製造方法は特に限定されず、上記成分を適宜混合、撹拌等することで得られる。また、本発明の増殖抑制剤の剤型も特に限定されない。
本発明の増殖抑制剤によれば、糸状緑藻の増殖を効果的に抑制できる。糸状緑藻としては特に限定されないが、Klebsormidium sp.、又は、Stigeoclonium sp.、Spirogyra sp.、Ulothrix sp.、Microspora sp.等が挙げられる。これらのうち、本発明によれば、Klebsormidium sp.、又は、Stigeoclonium sp.の増殖を特に効果的に抑制でき、Klebsormidium sp.の増殖を最も効果的に抑制できる。糸状緑藻の増殖が抑制されたかどうかは、目視、顕微鏡観察や、実施例の方法を用いて評価できる。
上記のとおり、ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液と、特定のミネラルとの併用により、糸状緑藻の増殖を抑制できる。そのため、本発明によれば、これらの成分を閉鎖性水域に供給することで糸状緑藻の増殖を効果的に抑制できる。
(1)閉鎖性水域内に、ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液、並びに、上記ミネラルを直接投入する。
(2)閉鎖性水域周辺にユキヤナギを植栽し、樹木からの落葉を利用し、閉鎖性水域中の水と、ユキヤナギの葉とを接触させる。かかる場合、閉鎖性水域中の水には落葉の前後、又は落葉中の任意のタイミングでミネラルを加える。
(3)閉鎖性水域の底部に、ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液、並びに、上記ミネラルを詰めた孔部を有する容器(繊維製バッグ等)を設置する。
(4)閉鎖性水域に設けられた装置(濾過装置、ポンプ等)の一部に、ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液、並びに、上記ミネラルを詰めた孔部を有する容器(繊維製バッグ等)を組み込み、閉鎖性水域内を循環する水と、これらの成分とを接触させる。
(5)ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液、並びに、上記ミネラルを入れた浮島を、閉鎖性水域の表面に浮遊させる。浮島は太陽電池等で稼働させて閉鎖性水域内を移動してもよい。
以下の方法で、ユキヤナギ葉抽出液を作製した。
(1)鉢で栽培しているユキヤナギの葉を摘み取り、−20℃、30℃、60℃、100℃の各温度で24時間、葉を乾燥させた。
(2)乾燥後、葉をすり鉢で粉砕した。
(3)葉の粉砕物を、加圧加熱殺菌処理済みの水道水に、室温(約20℃)で24時間、浸した。水道水の加圧加熱殺菌処理としては、高圧蒸気滅菌器(商品名「HA−300MIV」、株式会社平山製作所製)を用いて、121℃、15分間の処理を行った。
(4)水道水に浸した粉砕物を、卓上遠心器(商品名「H−103N」、株式会社コクサン製)を用いて、3000rpm、15分間遠心処理し、水と粉砕物とを分離させ、上澄み液を回収した。該上澄み液がユキヤナギ葉抽出液に相当する。
(5)得られた各上澄み液に、加圧加熱殺菌処理済みの水道水を加え、粉砕物(固形物)の濃度が50mg/mlになるように調整した。なお、−20℃で乾燥させた葉は十分に乾燥していなかったため、他の温度条件で乾燥させた葉の乾燥重量率を参考に換算を行い、適宜葉の添加量を増やし、粉砕物(固形物)の濃度が50mg/mlになるように調整した。
以下の方法で、上記で得られたユキヤナギ葉抽出液及びミネラルの存在下で藻類を培養し、藻類増殖抑制効果を評価した。
(1)培養試験には、糸状緑藻及び付着珪藻を用いた。糸状緑藻としては、Klebsormidium sp.(株番号NIES−329、国立環境研分譲株)、Stigeoclonium sp.(独自単離株)を用いた。付着珪藻としては、Achnanthidium minutissimum(株番号NIES−71、国立環境研分譲株)を用いた。
(2)各藻類を、加圧加熱殺菌処理済みの培地を30mL充填した平底フラスコに入れ、20℃、照度4500lux、12時間の明暗周期で、恒温器内で培養した。各藻類は、30日間毎に培地交換し、30日間にわたって継代培養し、各藻類の藻体塊を得た。糸状緑藻及び付着珪藻の培養用培地の組成を、それぞれ表1及び2に示す。これらの培地に含まれる「P IV ミネラル混合液」の組成を表3に示す。以下、糸状緑藻の培養用培地を「C培地」ともいい、付着珪藻の培養用培地を「Csi培地」ともいう。
(3)上記で得られた藻体塊を、藻類増殖抑制効果の評価に供した。具体的には、12穴マルチウェルプレート(商品名「353043MULTIWELL」、FALCON社製)に、培地(4mL)、ユキヤナギ葉抽出液(0、50、100、又は200mg/L)、及びミネラル(カルシウム、マグネシウム、マンガン、カリウム、鉄)を表4に示す濃度に調整して加え、さらに各藻類を入れ、14日間培養した。培養は、水温20℃,照度4500lux、12時間の明暗周期で、恒温器内で行った。藻類は、藻体塊を1mm程度の大きさに剃刀で切断して用いた。なお、表4中に示されたミネラル濃度は、各ミネラルのイオン濃度を示し、括弧内はミネラルとして用いた塩を示す。
(4)培養後、各ウェル中の藻体塊を、培養液から直径24mmGFC濾紙(Whatman濾紙)にトラップした。この濾紙を、N,N−ジメチルホルムアミド液(5mL)を充填したガラス容器に浸し、2時間以上暗所に放置してからクロロフィル抽出を行った。(5)抽出した各クロロフィル液を、3500rpm、5分間遠心処理し、上澄み液を回収した。該上澄み液について、マイクロプレートリーダー(商品名「infinite m200」、TECAN社製)を用いて、クロロフィルa濃度(μg/L)を吸光法で定量した。なお、この方法は、西条八束、「クロロフィルの測定法」(陸水学雑誌、Vol.36、pp.103−109(1975))を参考に実施した。
(6)上記で特定したクロロフィルa濃度(μg/L)に基づき、以下の計算式によって、ユキヤナギ葉抽出液による藻類増殖抑制効果を算出した。
藻類増殖抑制効果(%)=100−((実施例のクロロフィルa濃度÷対照のクロロフィルa濃度)×100)
なお、上記式中、「実施例のクロロフィルa濃度」とは、表4中の「実施例」又は「参考例」に示された培地で培養した藻体塊を用いて得たクロロフィル液中のクロロフィルa濃度を示す。「対照のクロロフィルa濃度」とは、表4中の「実施例」又は「参考例」に対応する「対照」に示された培地で培養した藻体塊を用いて得たクロロフィル液中のクロロフィルa濃度を示す。例えば、実施例1−1の藻類増殖抑制効果は、100−((実施例1−1のクロロフィルa濃度)÷(対照1のクロロフィルa濃度)×100)を算出することで特定した。
Claims (9)
- ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液と、
カルシウム、マグネシウム、及びマンガンからなる群から選択される1種のミネラルと、を含む、糸状緑藻の増殖抑制剤。 - 前記ミネラルは、カルシウム、又はマグネシウムである、請求項1に記載の増殖抑制剤。
- 前記ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液に対する前記ミネラルの質量比が0.5以上である、請求項2に記載の増殖抑制剤。
- 前記糸状緑藻は、Klebsormidium sp.又は、Stigeoclonium sp.である、請求項1から3のいずれかに記載の増殖抑制剤。
- ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液と、カルシウム、マグネシウム、及びマンガンからなる群から選択される1種のミネラルとを、閉鎖性水域に供給する、糸状緑藻の増殖抑制方法。
- 前記ミネラルは、カルシウム、又はマグネシウムである、請求項5に記載の増殖抑制方法。
- 前記閉鎖性水域に供給される、前記ユキヤナギの葉及び/又はその抽出液に対する前記ミネラルの質量比が0.5以上である、請求項6に記載の増殖抑制剤。
- 前記ミネラルは、前記閉鎖性水域における水量1m3に対して、イオン濃度換算で100g以上供給される、請求項5から7のいずれかに記載の増殖抑制方法。
- 前記糸状緑藻は、Klebsormidium sp.、又は、Stigeoclonium sp.である、請求項5から8のいずれかに記載の増殖抑制方法。
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