JP2018111665A - Quinoline derivative exhibiting human estrogen receptor activating action - Google Patents
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Abstract
Description
この発明はヒト型エストロゲン受容体活性化作用を呈するキノリン誘導体に関するものである。 The present invention relates to a quinoline derivative exhibiting a human-type estrogen receptor activating action.
エストロゲン受容体はエストロゲンの働きを伝える受容体であり、種々の細胞に存在している。核内受容体の他に、細胞膜にも一部発現している。核内のエストロゲン受容体はアルファ型とベータ型が存在し、いずれの型もＤＮＡ結合部位を有し、ＤＮＡに直接反応する。アルファ型は子宮や乳腺などの生殖器に存在している。一方、ベータ型は骨細胞や神経細胞など幅広く分布している。 The estrogen receptor is a receptor that transmits the function of estrogen and exists in various cells. In addition to the nuclear receptor, it is also partially expressed on the cell membrane. There are alpha and beta forms of estrogen receptors in the nucleus, both of which have a DNA binding site and react directly with DNA. Alpha forms are present in genital organs such as the uterus and mammary gland. On the other hand, the beta type is widely distributed such as bone cells and nerve cells.
エストロゲン受容体はエストロゲンの働きを伝達し、生殖器や皮膚などの全身の組織にエストロゲンの働きを伝え、エストロゲンの働きを生じさせる。エストロゲンの作用としては皮膚細胞の再生、卵巣の維持、神経細胞の活性化、血流の増加、脂肪細胞の脂肪分解、インスリン受容体の活性化、血糖の低下、コレステロールの代謝分解などである。 The estrogen receptor transmits the function of estrogen, transmits the function of estrogen to tissues of the whole body such as the genital organs and the skin, and causes the function of estrogen. The effects of estrogen include skin cell regeneration, ovarian maintenance, nerve cell activation, increased blood flow, adipocyte lipolysis, insulin receptor activation, blood glucose reduction, and cholesterol metabolism degradation.
エストロゲンの分泌には年齢的な衰えがあり、４０歳前後を過ぎると更年期症状としてエストロゲン低下による症状が発現する。同時に、エストロゲン受容体も反応性を低下させ、エストロゲンの働きを十分発揮できなくなる。更年期障害の発症はエストロゲンの低下のみではなく、エストロゲン受容体の働きが低下することも原因のひとつである。 Estrogen secretion has an age decline, and after about 40 years of age, symptoms of reduced estrogen appear as climacteric symptoms. At the same time, the estrogen receptor also decreases the reactivity, and the function of estrogen cannot be fully exerted. The onset of menopause is not only due to a decrease in estrogen, but also due to a decrease in the function of estrogen receptors.
エストロゲン受容体活性化に関する発明の例は少ない。たとえば、イソフラボノイド二量体に関する発明があり、ここではイソフラボノイド環系の二量体化によって取得され、新規二量体化合物の合成方法、同化合物を含有する組成物についての発明があるものの、エストロゲン受容体を活性化する化合物の特定には至っていない（例えば、特許文献１参照。）。 There are few examples of inventions relating to estrogen receptor activation. For example, there is an invention related to an isoflavonoid dimer, which is obtained by dimerization of an isoflavonoid ring system, and there is an invention about a method for synthesizing a novel dimer compound and a composition containing the compound, A compound that activates the estrogen receptor has not been identified (for example, see Patent Document 1).
既存の物質によるエストロゲン受容体活性化作用は軽度であり、産業上への利用が限定されるという課題があり、また、化学合成された物質では安全性に問題があり、利用が限られている。 The estrogen receptor activation action by existing substances is mild, and there is a problem that the industrial use is limited, and there is a problem in safety with chemically synthesized substances, and the use is limited .
そこで、副作用が弱く優れたエストロゲン受容体活性化作用を呈する天然物が望まれている。 Therefore, a natural product that has an excellent estrogen receptor activation action with weak side effects is desired.
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明は下記の式（１）で示されるエストロゲン受容体活性化作用を呈するキノリン誘導体に関するものである。 In order to achieve the above object, the invention described in claim 1 relates to a quinoline derivative exhibiting an estrogen receptor activating action represented by the following formula (1).
この発明は、以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。 Since this invention is comprised as mentioned above, there exist the following effects.
請求項１に記載のキノリン誘導体はエストロゲン受容体活性化作用に優れている。 The quinoline derivative according to claim 1 is excellent in an estrogen receptor activating action.
以下、この発明を具体化した実施形態について詳細に説明する。 Hereinafter, embodiments embodying the present invention will be described in detail.
エストロゲン受容体活性化作用を呈するキノリン誘導体とは、下記の式（１）で示される構造からなるものである。 The quinoline derivative exhibiting an estrogen receptor activating action has a structure represented by the following formula (1).
前記の式（１）のようにエストロゲン受容体活性化作用を呈するキノリン誘導体はキノリンの１分子、ｐ―クマル酸の１分子及びバリン（Ｌ型―バリン）の１分子から構成される。これらの分子及びその結合はすべて自然界に存在する天然型であり、各分子間はエステル結合を介して結合している。Ｃ３０Ｈ３１Ｏ６Ｎ２の化学式であり、炭素原子３０個、水素原子３１個、酸素原子６個及び窒素原子２個から形成される。 The quinoline derivative exhibiting an estrogen receptor activating action as shown in the above formula (1) is composed of one molecule of quinoline, one molecule of p-coumaric acid and one molecule of valine (L-type-valine). These molecules and their bonds are all naturally occurring in nature, and each molecule is linked via an ester bond. The chemical formula of C30H31O6N2 is formed from 30 carbon atoms, 31 hydrogen atoms, 6 oxygen atoms and 2 nitrogen atoms.
このキノリン誘導体はキノリン、ｐ―クマル酸及びバリンを原料として化学的なエステル合成の工程により得ることができる。たとえば、キノリン、ｐ―クマル酸及びフェニルアラニンは市販されている化成品や精製品を利用できる。官能基を保護しながら有機合成法により合成することができる。 This quinoline derivative can be obtained by a chemical ester synthesis process using quinoline, p-coumaric acid and valine as raw materials. For example, commercially available chemical products and purified products can be used for quinoline, p-coumaric acid and phenylalanine. It can be synthesized by an organic synthesis method while protecting the functional group.
一方、その化学的な合成では原料の損失が多く、製造コストが高くなるため、産業への利用は限定される。ここで化学合成された純度の高いキノリン誘導体は定量及び定性分析のために用いられる。 On the other hand, in the chemical synthesis, the loss of raw materials is large, and the production cost is high, so that the use in industry is limited. Here, the high-purity quinoline derivative chemically synthesized is used for quantitative and qualitative analysis.
このキノリン誘導体の構造を解析することは目的とする有効成分の特定ができる点から好ましい。また、製品や製剤に利用して販売する際の有効成分の含有量の指標として利用できることから好ましい。 It is preferable to analyze the structure of the quinoline derivative from the viewpoint that the intended active ingredient can be specified. Further, it is preferable because it can be used as an index of the content of an active ingredient when it is used and sold in products and preparations.
このキノリン誘導体の構造解析の一例として化学合成された高純度（純度９６％以上）の標準物質を用いて重水素化ジメチルスルホキシド中の６００ＭＨｚのＨ−ＮＭＲ（１Ｈ−ＮＭＲ）により解析した場合、ピークは１．８４、１．８８、１．９０、２．６９、３．３３、４．００、５．０６、６．２０、６．６５、６．６６、６．７４、６．７７、６．８０、６．９１、６．９５、７．９６、８．０２及び８．０５ｐｐｍに認められる。 As an example of structural analysis of this quinoline derivative, when a chemically synthesized standard substance of high purity (purity 96% or more) is used for analysis by 600 MHz H-NMR (1H-NMR) in deuterated dimethyl sulfoxide, the peak Are 1.84, 1.88, 1.90, 2.69, 3.33, 4.00, 5.06, 6.20, 6.65, 6.66, 6.74, 6.77, 6 .80, 6.91, 6.95, 7.96, 8.02 and 8.05 ppm.
また、Ｃ−ＮＭＲ（１３Ｃ−ＮＭＲ）の解析ではピークは２２．４、２２．６、２３．５、３６．０、４２．３、４９．７、５６．５、７１．３、８６．２、１１４．２、１１６．４、１１７．４、１１７．９、１１９．０、１１９．４、１２３．０、１２４．３、１２６．４、１３１．７、１３４．７、１３６．５、１４１．５、１４２．８、１４６．０、１４６．３、１４６．９、１４７．０、１７３．９、１７４．２及び１７４．３ｐｐｍに認められる。 In the analysis of C-NMR (13C-NMR), the peaks are 22.4, 22.6, 23.5, 36.0, 42.3, 49.7, 56.5, 71.3, 86.2. , 114.2, 116.4, 117.4, 117.9, 119.0, 119.4, 123.0, 124.3, 126.4, 131.7, 134.7, 136.5, 141 .5, 142.8, 146.0, 146.3, 146.9, 147.0, 173.9, 174.2 and 174.3 ppm.
さらに、このキノリン誘導体は高速液体クロマトグラフィーや質量分析装置で解析され、その構造が同定される。この構成成分であるキノリンは天然に存在している化合物であり、植物や微生物にも認められ、安全性も確認されている。 Furthermore, the quinoline derivative is analyzed by high performance liquid chromatography or a mass spectrometer, and its structure is identified. The constituent component quinoline is a naturally occurring compound that is recognized by plants and microorganisms and has been confirmed to be safe.
特に桑の葉やハスの種子、ハスやマグワの葉には元来キノリンが含有されており、ハスの種子を発酵することにより目的とするキノリン誘導体を製造することが可能である。目的とするキノリン誘導体を製造するための原料としてこれらの野菜、藻類、果実や穀類を用いることは好ましい。 In particular, mulberry leaves and lotus seeds, and lotus and mugwa leaves originally contain quinoline, and the desired quinoline derivative can be produced by fermenting lotus seeds. It is preferable to use these vegetables, algae, fruits and cereals as raw materials for producing the target quinoline derivative.
もともと、このキノリンはデメチルコクラウリンであり、このキノリン自体にも働きがあり、エストロゲン受容体活性化作用の他、皮膚細胞の保護作用、抗炎症作用、抗腫瘍作用、脂肪燃焼作用、神経保護作用などである。しかし、キノリン自体は吸収、体内動態や薬力学的に十分ではなく、産業上への利用には乏しかった。そこで、より吸収が良く、効果の強い物質が望まれていた。 Originally, this quinoline is demethylcoclaurine, and this quinoline itself also works, in addition to estrogen receptor activation, skin cell protection, anti-inflammatory, anti-tumor, fat burning, neuroprotection Such as action. However, quinoline itself is not sufficient for absorption, pharmacokinetics and pharmacodynamics, and it has been poorly used in industry. Therefore, a substance with better absorption and stronger effect has been desired.
このキノリン誘導体は吸収と作用の両面で優れた構造上の特徴がある点から好ましい。すなわち、このキノリン誘導体は内部に疎水性領域を有し、一方、外側には水酸基とアミノ基を有して水溶性に優れた特徴があり、水溶性にも脂溶性にもなりうる両親媒性の性質である。このため、水溶液に溶解し、かつ、細胞膜のような脂溶性部分も通過しやすい。この両親媒性の性質のため、エストロゲン受容体として細胞に浸透しやすく、核内に浸透し、ＤＮＡに結合してエストロゲン作用を発揮する。 This quinoline derivative is preferred because it has excellent structural features in both absorption and action. In other words, this quinoline derivative has a hydrophobic region inside, while it has a hydroxyl group and an amino group on the outside and has excellent water solubility, and it can be water-soluble or fat-soluble. Is the nature of For this reason, it melt | dissolves in aqueous solution and a lipid-soluble part like a cell membrane also passes easily. Because of this amphiphilic nature, it easily penetrates into cells as an estrogen receptor, penetrates into the nucleus, and binds to DNA to exert estrogen action.
このキノリン誘導体は両親媒性を示すことから、腸管の粘膜層を通過しやすく、体内への吸収が高まることは好ましい。さらに、皮膚の角質層に対しても角質細胞同士のバリア組織に浸透し、浸潤しやすく、表皮層、つまり、顆粒層、有棘層と基底層にある皮膚幹細胞に到達しやすい。また、両親媒性を示すことから水溶液及びオイルとして利用範囲が広がることは好ましい。 Since this quinoline derivative exhibits amphipathic properties, it is preferable that the quinoline derivative easily passes through the mucosal layer of the intestinal tract and is absorbed into the body. Furthermore, the stratum corneum of the skin also easily penetrates and infiltrates the barrier tissue between the stratum corneum cells and easily reaches the skin stem cells in the epidermis layer, that is, the granule layer, the spinous layer and the basal layer. Moreover, since it exhibits amphiphilic properties, it is preferable that the range of use as an aqueous solution and oil is expanded.
さらに、ｐ―クマル酸のベンゼン環も疎水性に寄与し、また、バリンのアミノ基はｐＨの緩衝作用を呈し、食用として摂取した場合、胃酸に対する抵抗性を呈する。すなわち、このｐＨ緩衝作用により胃酸を緩和することにより、胃酸によるこの誘導体の分解を防御することは好ましい。 Furthermore, the benzene ring of p-coumaric acid also contributes to hydrophobicity, and the amino group of valine exhibits a pH buffering action and exhibits resistance to gastric acid when ingested for food. That is, it is preferable to prevent the degradation of this derivative by gastric acid by relaxing the gastric acid by this pH buffering action.
このキノリン誘導体の２つの水酸基はフリー体であり、ポリフェノールの水酸基として抗酸化作用を呈する。この抗酸化作用により酸化ストレスに対する防御作用が発揮されることは好ましい。たとえば、皮膚に塗布した場合、紫外線による皮膚の酸化を防止する働きがあり、皮膚を防御することは好ましい。また、この誘導体は粉末化した後、水溶性溶媒と反応させることにより水素ガスを発生することは好ましい。 The two hydroxyl groups of this quinoline derivative are free forms and exhibit an antioxidant action as hydroxyl groups of polyphenols. It is preferable that a protective action against oxidative stress is exhibited by this antioxidant action. For example, when applied to the skin, it functions to prevent the skin from being oxidized by ultraviolet rays, and it is preferable to protect the skin. Moreover, it is preferable to generate hydrogen gas by reacting this derivative with a water-soluble solvent after pulverizing.
このキノリン誘導体自体はエストロゲン受容体のリガンドとしての働きはなく、核内エストロゲン受容体の活性中心の近傍に働き、エストロゲン受容体活性化作用を呈する。また、発生した水素ガスは受容体の働きを助け、安定化作用があることは好ましい。 This quinoline derivative itself does not function as a ligand for the estrogen receptor, but works near the active center of the nuclear estrogen receptor and exhibits an estrogen receptor activation effect. Further, it is preferable that the generated hydrogen gas assists the function of the acceptor and has a stabilizing action.
さらに、このキノリン誘導体によるエストロゲン受容体活性化作用としてはエストロゲンとエストロゲン受容体のｋｍ値とＶｍａｘ値を変化させる。つまり、ｋｍ値を低下させてエストロゲンとエストロゲン受容体の結合性を高める。また、最大結合数であるＶｍａｘを増加させて結合最大値を増加させる。このｋｍとＶａｍｘの変化はエストロゲンに拮抗型反応であり、リガンドであるエストロゲンの減少によってキノリン誘導体によるエストロゲン受容体活性化作用は低下する。つまり、エストロゲンが存在しない状態で活性化は生じない。この拮抗型反応であることは可逆的な反応であり、エストロゲン受容体の状態を強く変化させるものではないことから安全性が高い。 Furthermore, as an estrogen receptor activation action by this quinoline derivative, km value and Vmax value of estrogen and estrogen receptor are changed. In other words, the km value is lowered to increase the binding property between the estrogen and the estrogen receptor. Further, the maximum number of bonds Vmax is increased to increase the maximum bond value. This change in km and Vamx is an antagonistic reaction to estrogen, and the estrogen receptor activation action by the quinoline derivative is lowered by the decrease of estrogen which is a ligand. That is, activation does not occur in the absence of estrogen. This antagonistic reaction is a reversible reaction and is highly safe because it does not strongly change the state of the estrogen receptor.
このキノリン誘導体の構成成分であるバリンやｐ―クマル酸は天然物であり、自然界に豊富に存在しており、その安全性は確認されている。また、キノリンも自然界にアミノ酸の成分として存在しており、その安全性は高い。 Valine and p-coumaric acid, which are constituents of this quinoline derivative, are natural products and are abundant in nature, and their safety has been confirmed. Quinoline also exists in nature as an amino acid component, and its safety is high.
このキノリン誘導体によるエストロゲン受容体活性化作用の結果として皮膚細胞の細胞増殖作用、骨芽細胞の増殖作用、脂肪細胞の脂肪分解作用、コレステロールの代謝増加作用及び神経細胞の活性化作用が確認される。 As a result of activation of estrogen receptor by this quinoline derivative, cell proliferation of skin cells, proliferation of osteoblasts, lipolysis of adipocytes, increase of cholesterol metabolism and activation of neurons are confirmed. .
エストロゲン受容体は各臓器に存在しており、その反応性は臓器に特異的であり、年齢、性別の他に遺伝子多型による差異も認められる。 The estrogen receptor is present in each organ, and its reactivity is specific to the organ. Differences due to genetic polymorphism are observed in addition to age and sex.
このキノリン誘導体によるエストロゲン受容体活性化作用は２つの異なるメカニズムにより発現するため、遺伝子多型や病的な状態などを含めたすべての状態とすべての組織に対して働くことが可能である。 The estrogen receptor activation action by this quinoline derivative is expressed by two different mechanisms, and can therefore act on all states and all tissues including genetic polymorphisms and pathological states.
特に、皮膚基底層の幹細胞及び神経細胞の幹細胞のエストロゲン受容体に対してはこのキノリン誘導体の反応性が高いことは好ましい。したがって、このキノリン誘導体は皮膚や神経の増殖効果や皮膚疾患や神経疾患の治療効果及び予防効果に優れている。 In particular, it is preferable that the reactivity of this quinoline derivative is high with respect to the estrogen receptor of the stem cell of a skin basal layer and the stem cell of a nerve cell. Therefore, this quinoline derivative is excellent in the effect of proliferating skin and nerves and the therapeutic and preventive effects of skin diseases and nerve diseases.
キノリン誘導体は植物活性化剤として利用される。このキノリン誘導体は両親媒性を呈することから動物の細胞膜及び植物や酵母の細胞壁を通過し、細胞内に吸収されやすい。このうち、植物に対するエストロゲンとしては植物ホルモン類似作用がある。 Quinoline derivatives are used as plant activators. Since this quinoline derivative exhibits amphipathic properties, it easily passes through cell membranes of animals and cell walls of plants and yeasts and is easily absorbed into cells. Among these, as an estrogen for plants, there is a plant hormone-like action.
このキノリン誘導体はオーキシン、サイトカイニン、アブシシン酸、ジベレリンなどの反応性を高めて植物の生育を促進させることは好ましい。 This quinoline derivative preferably promotes plant growth by enhancing the reactivity of auxin, cytokinin, abscisic acid, gibberellin and the like.
このキノリン誘導体は植物活性化剤や植物生育剤として発芽、成長、開花、結実、収穫などの植物の全体的な成長を促進することから農業分野の発展と食糧の増産に寄与できる点は好ましい。特に、蘭やマツバランなどの貴重な花や盆栽などの生育に利用できることは好ましい。 This quinoline derivative is preferably used as a plant activator or plant growth agent because it promotes the overall growth of plants such as germination, growth, flowering, fruiting, harvesting, etc., so that it can contribute to the development of the agricultural field and increased food production. In particular, it is preferable that it can be used for growing valuable flowers such as orchids and pine baluns and bonsai.
さらに、キノリン誘導体は微生物活性化剤としても利用される。また、このキノリン誘導体は有用な微生物の成長を促進できる点では発酵工程の短縮化と合理化に利用できる。酒造、みそ、しょうゆ、納豆などの製造などの増産と製造期間の短縮に活用できる点は好ましい。 Furthermore, quinoline derivatives are also used as microbial activators. Moreover, this quinoline derivative can be used for shortening and rationalizing the fermentation process in that it can promote the growth of useful microorganisms. It is preferable that it can be used to increase production such as brewing, miso, soy sauce and natto and shorten the production period.
このキノリン誘導体は皮膚の角質細胞膜も通過しやすく、角質層のバリア機能を維持することは皮膚の健康や美容の点から好ましい。 This quinoline derivative easily passes through the keratinocyte membrane of the skin, and maintaining the barrier function of the stratum corneum is preferable from the viewpoint of skin health and beauty.
また、このキノリン誘導体は両親媒性でｐＨ緩衝作用を呈することから、水溶性の化粧水とクリームのいずれにも配合できる点は好ましい。 In addition, since this quinoline derivative is amphiphilic and exhibits a pH buffering action, it is preferable that it can be incorporated into either water-soluble lotion or cream.
このキノリン誘導体は生殖器細胞の増殖を介してコラーゲンやエラスチン産生を促進することにより皮膚細胞機能を促進することは好ましい。さらに、ＥＧＦ（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）との併用により相乗的な効果が得られることは好ましい。 This quinoline derivative preferably promotes skin cell function by promoting collagen and elastin production through proliferation of genital cells. Furthermore, it is preferable that a synergistic effect is obtained by the combined use with EGF (Epiperal Growth Factor).
神経細胞においても神経細胞のエストロゲン受容体活性化作用を呈して神経細胞の増殖を活性化する。認知症、アルツハイマー症などの疾患、活性酸素やアミロイドβたんぱく質による神経細胞の障害や現象に対し、このキノリン誘導体はエストロゲン受容体活性化作用を介して神経細胞の働きを回復させる。この作用は神経疾患の予防、防御と回復の目的で好ましい。 Neurons also activate neuron proliferation by exhibiting neuronal estrogen receptor activation. In response to diseases such as dementia and Alzheimer's disease, and damage and phenomena of nerve cells caused by active oxygen and amyloid β protein, this quinoline derivative restores the function of nerve cells through the estrogen receptor activation action. This action is preferable for the purpose of prevention, protection and recovery of neurological diseases.
また、この誘導体は神経終末からの神経伝達物質の放出を促進して神経伝達を高めることは神経機能の回復の点から好ましい。さらに、ＮＧＦとの併用により相乗的な効果が得られることは好ましい。 In addition, it is preferable from the viewpoint of recovery of nerve function that this derivative enhances neurotransmission by promoting the release of neurotransmitters from nerve endings. Furthermore, it is preferable that a synergistic effect is obtained by the combined use with NGF.
運動神経細胞の神経末端からのアセチルコリンの放出を高めることにより筋肉の収縮を高めて神経と筋肉の活動性を増すことは筋肉の増強や寝たきり老人の予防と治療の点から好ましい。 Increasing muscle contraction by increasing the release of acetylcholine from nerve endings of motor nerve cells is preferable from the viewpoint of muscle strengthening and prevention and treatment of bedridden elderly people.
このキノリン誘導体は心筋梗塞においては冠状動脈の梗塞や虚血状態でも心筋細胞のエストロゲン受容体を活性化して心筋細胞を増殖させ、障害部位の再生を促進することは好ましい。 In the case of myocardial infarction, it is preferable that this quinoline derivative activates the estrogen receptor of cardiomyocytes to proliferate cardiomyocytes and promotes regeneration of the damaged site even in the infarction or ischemic state of coronary arteries.
また、このキノリン誘導体はアスリートや筋肉を増強したい場合、筋肉細胞のエストロゲン受容体活性化作用を呈して骨格筋細胞を増殖させることにより筋肉組織を増強させることは好ましい。特に、肉離れや筋肉切断のような筋肉細胞の消失に対して筋肉細胞を再生させることは好ましい。 Moreover, when this quinoline derivative wants to strengthen an athlete or muscle, it is preferable to enhance muscle tissue by exhibiting an estrogen receptor activating action of muscle cells to proliferate skeletal muscle cells. In particular, it is preferable to regenerate muscle cells against loss of muscle cells such as meat separation and muscle cutting.
このキノリン誘導体は生体内では腎臓や肝臓のエステラーゼにより分解され、尿中に排泄される。分解されて構成成分である安全性の高いキノリン、ｐ−クマル酸及びバリンに分解される。したがって、このキノリン誘導体は体内に蓄積されず、分解も生体内酵素で行われ、さらに、分解物も天然物であることから安全性が高い。 This quinoline derivative is degraded in vivo by kidney and liver esterases and excreted in urine. It is decomposed into highly safe quinoline, p-coumaric acid and valine as constituent components. Therefore, the quinoline derivative is not accumulated in the body, is decomposed by an in vivo enzyme, and further, the decomposed product is a natural product, which is highly safe.
このキノリン誘導体の製造方法の例としては、桑の葉、ハスの種子、ハスの葉、ハスの花、藻類、ユスラウメの果実、グレープフルーツや温州みかんなどのかんきつ類、蕎麦の実などを原料として発酵法により目的とするキノリン誘導体を製造することは、原材料が天然物であることから安全性の点から好ましい。 Examples of the method for producing this quinoline derivative include fermentation methods using mulberry leaves, lotus seeds, lotus leaves, lotus flowers, algae, juvenile fruits, citrus fruits such as grapefruit and Unshu mandarin, and buckwheat berries. From the viewpoint of safety, it is preferable to produce the target quinoline derivative by the above method since the raw material is a natural product.
このキノリン誘導体を精製により上記の植物などから抽出することは可能である。ただし、精製には大量の原料を必要としコストが高く、また、有機溶媒などを利用することから食品産業などへの利用は制限される。 It is possible to extract this quinoline derivative from the above plants by purification. However, refining requires a large amount of raw materials and is expensive, and the use in the food industry is restricted because organic solvents are used.
さらに、発酵法による製造はタンパク質を分解、食物繊維を除外できる点から製造効率が良く、このキノリン誘導体の産生に適していることから好ましい。得られたキノリン誘導体を医薬品素材として利用する場合、目的とするキノリン誘導体を精製することは、目的とするキノリン誘導体の純度が高まり、不純物を除去できる点から好ましい。 Furthermore, the production by fermentation method is preferable because the production efficiency is good from the viewpoint that protein can be decomposed and dietary fiber can be excluded, and it is suitable for production of this quinoline derivative. When the obtained quinoline derivative is used as a pharmaceutical material, it is preferable to purify the target quinoline derivative because the purity of the target quinoline derivative increases and impurities can be removed.
医薬品としては注射剤または経口剤または塗布剤などの非経口剤として利用され、医薬部外品としては錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、石鹸、塗布剤、ゲル剤、歯磨き粉等に配合されて利用される。 Used as pharmaceuticals as parenterals such as injections, oral preparations or coatings, and quasi-drugs used in tablets, capsules, drinks, soaps, coatings, gels, toothpastes, etc. The
経口剤としては錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、ドリンク剤等が挙げられる。前記の錠剤及びカプセル剤に混和される場合には、結合剤、賦形剤、膨化剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤等とともに用いることができる。前記の錠剤はシェラックまたは砂糖などで被覆することもできる。 Examples of oral preparations include tablets, capsules, powders, syrups, and drinks. When mixed with the above-mentioned tablets and capsules, it can be used together with a binder, excipient, swelling agent, lubricant, sweetener, flavoring agent and the like. The tablets can be coated with shellac or sugar.
また、前記のカプセル剤の場合には、上記の材料にさらに油脂等の液体担体を含有させることができる。前記のシロップ剤及びドリンク剤の場合には、甘味剤、防腐剤、色素香味剤等を添加することができる。 Moreover, in the case of the said capsule, liquid carriers, such as fats and oils, can be further contained in said material. In the case of the above syrup and drink, sweeteners, preservatives, pigment flavoring agents and the like can be added.
非経口剤としては、軟膏剤、クリーム剤、水剤等の外用剤の他に、注射剤が挙げられる。外用剤の基材としては、ワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴールド等が用いられ、通常の方法によって軟膏剤やクリーム剤等とすることができる。 Examples of parenteral preparations include injections in addition to external preparations such as ointments, creams, and liquids. Vaseline, paraffin, fats and oils, lanolin, macro gold, etc. are used as a base material for external preparations, and can be made into ointments, creams, and the like by ordinary methods.
注射剤には、液剤があり、その他、凍結乾燥剤がある。これは使用時、注射用蒸留水や生理食塩液等に無菌的に溶解して用いられる。 Injections include liquids, and other lyophilization agents. This is used aseptically dissolved in distilled water for injection or physiological saline at the time of use.
また、食品製剤として皮膚の再生、神経の再生、筋肉の再生などの組織の再生を目的とした食品に利用できる。保健機能食品として栄養機能食品や特定保健用食品に利用することは好ましい。 Further, it can be used as a food preparation for foods intended for tissue regeneration such as skin regeneration, nerve regeneration, muscle regeneration and the like. It is preferable to use it as a health functional food for a nutritional functional food or a food for specified health use.
得られた食品製剤をイヌやネコなどのペットや家畜動物に利用する場合、皮膚障害や神経障害の回復、老化の抑制と運動能力の向上を目的とした飼料やペット用サプリメントとして利用される。 When the obtained food preparation is used for pets and livestock animals such as dogs and cats, it is used as a feed or a supplement for pets for the purpose of recovering skin disorders and neurological disorders, suppressing aging and improving exercise ability.
化粧料として常法に従って界面活性化剤、溶剤、増粘剤、賦形剤等とともに用いることができる。例えば、クリーム、毛髪用ジェル、洗顔剤、美容液、化粧水等の形態とすることができる。両親媒性を示すことから水溶液及びオイルとして利用範囲が広がることは好ましい。 As a cosmetic, it can be used together with a surfactant, a solvent, a thickener, an excipient and the like according to a conventional method. For example, it can be in the form of cream, gel for hair, facial cleanser, cosmetic liquid, lotion and the like. Since it exhibits amphiphilic properties, it is preferable that the range of use as an aqueous solution and oil is expanded.
化粧料の形態は任意であり、溶液状、クリーム状、ペースト状、ゲル状、ジェル状、固形状または粉末状として用いることができる。 The form of the cosmetic is arbitrary, and can be used as a solution, cream, paste, gel, gel, solid or powder.
ここで製造された化粧料はエストロゲン作用を増強して障害された皮膚の修復やコラーゲンやエラスチンなどの増加及び肌の健康維持の目的で利用される。 The cosmetics produced here are used for the purpose of enhancing damaged estrogen action, repairing damaged skin, increasing collagen and elastin, and maintaining skin health.
また、このキノリン誘導体は老化により減少した骨芽細胞や歯肉細胞の増殖と機能の維持を目的とした歯磨き剤、洗口液や歯磨きペーストなどに利用できる。 In addition, this quinoline derivative can be used for a dentifrice, a mouthwash, a toothpaste, etc. for the purpose of maintaining the proliferation and function of osteoblasts and gingival cells that have decreased due to aging.
このキノリン誘導体の製造方法としては、たとえば、ハスの種子を発酵させ、プロテアーゼ処理し、濾過した液を滅菌して製造することは好ましい。 As a method for producing this quinoline derivative, for example, it is preferable to ferment lotus seeds, treat with protease, and sterilize the filtered solution.
ハス（学名Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ）は日本の各地で栽培されており、このハスの種子は花が咲いた後に実として採取される。有機栽培されたものは農薬による汚染の危険性が少ないことから好ましい。また、ハスの種子は化粧品や食品の原料として使用されている実績があることは安全性の点から好ましい。 The lotus (scientific name Nelumbo nucifera) is cultivated in various parts of Japan, and the seed of this lotus is collected as a fruit after the flower blooms. Organically cultivated ones are preferred because there is little risk of contamination with pesticides. In addition, it is preferable from the viewpoint of safety that lotus seeds have a track record of being used as a raw material for cosmetics and foods.
ハスの種子は愛知県海部郡立田村などで栽培され、漢方を扱う商社、たとえば、日本橋の古樹軒などで購入することは可能である。また、プロテアーゼは食品加工用のものが利用できる。たとえば、アマノエンザイム製のプロテアーゼＮは食品加工用として実績が豊富で安全性も高いことから好ましい。 Lotus seeds are cultivated in Tachimura, Abe Prefecture, and can be purchased at a trading company that deals with Kampo, for example, an old tree in Nihonbashi. Proteases for food processing can be used. For example, Amanoenzyme Protease N is preferable because it has a proven track record for food processing and has high safety.
ハスの種子は清浄なタンクに入れられて精製水により分散される。これを３７〜４３℃に加温した後、プロテアーゼＮを添加して撹拌しながら３時間から６時間タンパク質を分解する。 Lotus seeds are placed in a clean tank and dispersed with purified water. After heating this to 37-43 degreeC, protease N is added and protein is decomposed for 3 to 6 hours, stirring.
精製水１０Ｌに対してハスの種子の重量は３００ｇ〜１ｋｇ、プロテアーゼＮの添加重量は１０〜３０ｇが好ましい。 The weight of the lotus seed is preferably 300 g to 1 kg and the added weight of protease N is preferably 10 to 30 g with respect to 10 L of purified water.
この反応後、ろ紙による濾過によりろ液を採取することは分解されていないハスの種子の残渣を除去できる点から好ましい。さらに、このろ液を９５℃以上の温度で煮沸することはプロテアーゼの失活の目的と滅菌の目的から好ましい。 After this reaction, it is preferable to collect the filtrate by filtration with filter paper from the viewpoint that the residue of the seeds of the lotus which has not been decomposed can be removed. Furthermore, boiling this filtrate at a temperature of 95 ° C. or higher is preferable for the purpose of inactivating protease and the purpose of sterilization.
さらに、ハスの種子を発酵することにより目的とするキノリン誘導体を得ることは好ましい。たとえば、大豆とともに納豆菌により発酵する発酵方法は技術的な知識と経験が豊富なことから好ましい。 Furthermore, it is preferable to obtain a target quinoline derivative by fermenting lotus seeds. For example, a fermentation method in which fermented with natto bacteria together with soybeans is preferable because of a wealth of technical knowledge and experience.
発酵原料となる大豆は、日本産、中国産、アメリカ産、ロシア産などいずれの産地の大豆でも利用できるが、トレーサビリティーが確実であり、生産者が明確である日本産が好ましい。 The soybean used as a fermentation raw material can be any soybean from Japan, China, the United States, Russia, etc., but it is preferable that the soybean is traceable and has a clear producer.
このうち、有機栽培や無農薬で栽培された大豆は有害な農薬や金属を含有しないことから、さらに好ましい。 Of these, soybeans cultivated organically or without agricultural chemicals are more preferred because they do not contain harmful agricultural chemicals or metals.
大豆は使用に際して、株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０、中山技術研究所製ＤＭ−６などにより乾燥され、粉砕される。これにより発酵の工程が効率的に進行されやすい。 When using soybeans, Nara Machinery Co., Ltd. free mill, super free mill, sample mill, goblin, super clean mill, micros, small vacuum dryer manufactured by Toyo Riko as vacuum dryer, small size manufactured by Matsui Co., Ltd. It is dried and pulverized by a vacuum heat transfer dryer DPTH-40, clean dry VD-7, VD-20 manufactured by AKM Kyushu Technos Co., Ltd., DM-6 manufactured by Nakayama Technical Research Institute, and the like. Thereby, the process of fermentation tends to advance efficiently.
用いる納豆菌は学名バチルス サブチリスであり、納豆の製造に利用される有用な微生物である。納豆素本舗の粉末の納豆菌は品質が良好で発酵に適していることから好ましい。
まず、ハスの種子は粉砕機やミキサーなどにより粉砕にされる。粉砕されることにより、加工がしやすくなる。大豆は粉砕機により粉砕され、清浄な水を添加して懸濁される。ハスの種子１００ｇに対して大豆は６０〜２００ｇ添加され、清浄な容器の中で精製水などの水と３リットル〜１０リットルとともに攪拌される。
The Bacillus natto used is the scientific name Bacillus subtilis, which is a useful microorganism used in the production of natto. Natto bacteria, a powder of Natto Motopo, is preferable because of its good quality and suitable for fermentation.
First, lotus seeds are pulverized by a pulverizer or a mixer. By being pulverized, it becomes easy to process. The soybeans are pulverized by a pulverizer and suspended by adding clean water. 60 to 200 g of soybeans are added to 100 g of lotus seeds, and stirred with water such as purified water and 3 to 10 liters in a clean container.
ハスの種子と大豆は煮沸滅菌され、発酵タンクに添加される。滅菌することにより雑菌の混入が防御され、納豆菌による発酵が進行する。 Lotus seeds and soybeans are boiled and sterilized and added to the fermentation tank. By sterilization, contamination with various bacteria is prevented, and fermentation with Bacillus natto proceeds.
発酵は静置法または撹拌法のいずれでも良いが、発酵を短時間で実施できる点から撹拌法が好ましい。発酵は４０〜４４℃で２０時間から８０時間行われることが好ましい。温度が低く、時間が短い場合には発酵が進まず、温度が高く、時間が長い場合には目的とするキノリン誘導体が分解されてしまうおそれがある。 Fermentation may be either a stationary method or a stirring method, but a stirring method is preferred because fermentation can be performed in a short time. Fermentation is preferably performed at 40 to 44 ° C. for 20 to 80 hours. When the temperature is low and the time is short, fermentation does not proceed, and when the temperature is high and the time is long, the target quinoline derivative may be decomposed.
純度を高くするために精製することは好ましい。例えば、分離用担体または樹脂により分離され、分取されることにより目的とするキノリン誘導体が得られる。分離用担体または樹脂としては、表面が後述のようにコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。０．１〜３００μｍの粒度を有するものが好ましく、粒度が細かい程、精度の高い分離が行なわれるが、分離時間が長い欠点がある。 It is preferable to purify to increase the purity. For example, the target quinoline derivative is obtained by separation with a separation carrier or resin and fractionation. As the separation carrier or resin, porous polysaccharides, silicon oxide compounds, polyacrylamide, polystyrene, polypropylene, styrene-vinylbenzene copolymers, etc., whose surfaces are coated as described later, are used. Those having a particle size of 0.1 to 300 μm are preferred. The finer the particle size, the higher the accuracy of the separation, but the longer the separation time.
例えば、逆相担体または樹脂として表面が疎水性化合物でコーティングされたものは、疎水性の高い物質の分離に利用される。陽イオン物質でコーティングされたものは陰イオン性に荷電した物質の分離に適している。また、陰イオン物質でコーティングされたものは陽イオン性に荷電した物質の分離に適している。特異的な抗体をコーティングした場合には、特異的な物質のみを分離するアフィニティ担体または樹脂として利用される。 For example, a reverse phase carrier or resin whose surface is coated with a hydrophobic compound is used for separation of a highly hydrophobic substance. Those coated with a cationic substance are suitable for the separation of anionically charged substances. Also, those coated with an anionic substance are suitable for separating a cationically charged substance. When a specific antibody is coated, it is used as an affinity carrier or resin for separating only a specific substance.
アフィニティ担体または樹脂は、抗原抗体反応を利用して抗原の特異的な調製に利用される。分配性担体または樹脂は、シリカゲル（メルク社製）等のように、物質と分離用溶媒の間の分配係数に差異がある場合、それらの物質の単離に利用される。なお、純度の高い精製物を得るために精製操作を繰り返して実施することは好ましい。 The affinity carrier or resin is used for specific preparation of an antigen using an antigen-antibody reaction. A partitionable carrier or resin is used for isolation of a substance such as silica gel (manufactured by Merck) if there is a difference in partition coefficient between the substance and the solvent for separation. In order to obtain a purified product with high purity, it is preferable to repeat the purification operation.
これらのうち、製造コストを低減することができる点から、吸着性担体または樹脂、分配性担体または樹脂、分子篩用担体または樹脂及びイオン交換担体または樹脂が好ましい。さらに、分離用溶媒に対して分配係数の差異が大きい点から、逆相担体または樹脂及び分配性担体または樹脂はより好ましい。 Among these, an adsorbent carrier or resin, a dispersible carrier or resin, a molecular sieve carrier or resin, and an ion exchange carrier or resin are preferable from the viewpoint of reducing production costs. Furthermore, the reverse phase carrier or resin and the dispersible carrier or resin are more preferable because the difference in the distribution coefficient with respect to the separation solvent is large.
分離用溶媒として有機溶媒を用いる場合には、有機溶媒に耐性を有する担体または樹脂が用いられる。また、医薬品製造または食品製造に利用される担体または樹脂は好ましい。 When an organic solvent is used as the separation solvent, a carrier or resin having resistance to the organic solvent is used. Moreover, the carrier or resin used for pharmaceutical manufacture or food manufacture is preferable.
これらの点から吸着性担体としてダイヤイオンＨＰ２０（三菱化学（株）社製）及びＸＡＤ−２またはＸＡＤ−４（ロームアンドハース社製）、分子篩用担体としてセファデックスＬＨ−２０（アマシャムファルマシア社製）、分配用担体としてシリカゲル、イオン交換担体としてＩＲＡ−４１０（ロームアンドハース社製）、逆相担体としてＤＭ１０２０Ｔ（富士シリシア社製）がより好ましい。 From these points, Diaion HP20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) and XAD-2 or XAD-4 (Rohm and Haas) are used as the adsorptive carrier, and Sephadex LH-20 (Amersham Pharmacia) is used as the carrier for the molecular sieve. ), Silica gel as the carrier for distribution, IRA-410 (Rohm and Haas) as the ion exchange carrier, and DM1020T (Fuji Silysia) as the reverse phase carrier are more preferable.
これらのうち、三菱化学製のダイヤイオンＨＰ２０、セファデックスＬＨ−２０及びＤＭ１０２０Ｔはさらに好ましい。 Of these, Diaion HP20, Sephadex LH-20 and DM1020T manufactured by Mitsubishi Chemical are more preferable.
得られた抽出物は、分離前に分離用担体または樹脂を膨潤化させるための溶媒に溶解される。その量は、分離効率の点から抽出物の重量に対して２〜４０倍量が好ましく、４〜２０倍量がより好ましい。分離の温度としては物質の安定性の点から１０〜３０℃が好ましく、１２〜２５℃がより好ましい。 The obtained extract is dissolved in a solvent for swelling the carrier for separation or the resin before separation. The amount thereof is preferably 2 to 40 times the weight of the extract from the viewpoint of separation efficiency, and more preferably 4 to 20 times the amount. The separation temperature is preferably 10 to 30 ° C., more preferably 12 to 25 ° C. from the viewpoint of the stability of the substance.
分離用溶媒には、水、または、水を含有する低級アルコール、親水性溶媒、親油性溶媒が用いられる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールが用いられるが、食用として利用されているエタノールが好ましい。 As the separation solvent, water or a lower alcohol containing water, a hydrophilic solvent, or a lipophilic solvent is used. As the lower alcohol, methanol, ethanol, propanol and butanol are used, and ethanol used for food is preferable.
セファデックスＬＨ−２０を用いる場合、分離用溶媒には低級アルコールが好ましい。シリカゲルを用いる場合、分離用溶媒にはクロロホルム、メタノール、酢酸またはそれらの混合液が好ましい。 When Sephadex LH-20 is used, a lower alcohol is preferable as the separation solvent. When silica gel is used, the separation solvent is preferably chloroform, methanol, acetic acid or a mixture thereof.
ダイヤイオンＨＰ２０及びＤＭ１０２０Ｔを用いる場合、分離用溶媒はメタノール、エタノール等の低級アルコールまたは低級アルコールと水の混合液が好ましい。 When Diaion HP20 and DM1020T are used, the separation solvent is preferably a lower alcohol such as methanol or ethanol or a mixed solution of lower alcohol and water.
キノリン誘導体を含む画分を採取して乾燥または真空乾燥により溶媒を除去し、目的とするキノリン誘導体を粉末または濃縮液として得ることは溶媒による影響を除外できることから好ましい。両親媒性を示すことから水溶液及びオイルとして利用範囲が広がることは好ましい。 It is preferable that the fraction containing the quinoline derivative is collected and the solvent is removed by drying or vacuum drying to obtain the target quinoline derivative as a powder or a concentrated liquid because the influence of the solvent can be excluded. Since it exhibits amphiphilic properties, it is preferable that the range of use as an aqueous solution and oil is expanded.
一方、最終的な抽出を食用油や化粧料に用いる油脂で実施することも可能である。例えば、大豆油、米ぬか油、グレープシード油、オリーブ油、ホホバ油で抽出することが可能である。つまり、オイル状にすることにより、利用範囲が広がる。 On the other hand, it is also possible to carry out final extraction with fats and oils used for edible oils and cosmetics. For example, extraction with soybean oil, rice bran oil, grape seed oil, olive oil or jojoba oil is possible. In other words, the use range is expanded by making it oily.
また、このキノリン誘導体をスプレードライまたは凍結乾燥法により粉末化することは防腐と保存期間を長くする目的から好ましい。 In addition, it is preferable to powder this quinoline derivative by spray drying or freeze drying for the purpose of preserving and extending the storage period.
このように製造されたキノリン誘導体はＨＰＬＣやＮＭＲにより構造解析を行うことは高い品質のキノリン誘導体を提供できる点から好ましい。 The quinoline derivative thus produced is preferably subjected to structural analysis by HPLC or NMR from the viewpoint of providing a high quality quinoline derivative.
以下、前記実施形態を実施例及び試験例を用いて具体的に説明する。なお、これらは一例であり、素材、原料や検体の違いに応じて常識の範囲内で条件を変更させることが可能である。 Hereinafter, the embodiment will be specifically described with reference to examples and test examples. These are merely examples, and conditions can be changed within the range of common sense according to differences in materials, raw materials, and specimens.
まず、発酵法による製造の実施例について記載する。すなわち、日本橋古樹軒（東京）で購入したハスの種子（実）１ｋｇを購入した。これを水洗後、粉砕機（株式会社奈良機械製作所製のスーパー自由ミル）に精製水とともに懸濁して懸濁物０．８８ｋｇを得た。 First, the Example of manufacture by a fermentation method is described. That is, 1 kg of lotus seed (fruit) purchased at Nihonbashi Koukiken (Tokyo) was purchased. This was washed with water and then suspended with purified water in a pulverizer (Super Free Mill manufactured by Nara Machinery Co., Ltd.) to obtain 0.88 kg of a suspension.
ハスの種子は農薬の分析を事前に行い、在留農薬のないことを確認した。なお、使用まで凍結保管した。 The lotus seeds were analyzed for pesticides in advance, and it was confirmed that there were no pesticides. It was stored frozen until use.
さらに、北海道産の大豆１ｋｇを三輪物産より購入して用いた。これを洗浄後、粉砕機により粉砕し、粉砕物約９２０ｇを得た。 Furthermore, 1 kg of Hokkaido soybean was purchased from Miwa Bussan and used. This was washed and then pulverized by a pulverizer to obtain about 920 g of a pulverized product.
ハスの種子の懸濁物５００ｇと大豆粉末５００ｇを清浄なステンレス製の寸胴に移し、５リットルの精製水を添加して攪拌機により懸濁した。 A lotus seed suspension (500 g) and soybean powder (500 g) were transferred to a clean stainless steel cylinder, 5 liters of purified water was added, and the mixture was suspended with a stirrer.
これを９５〜９９℃で１時間煮沸して滅菌した。冷却後、これらを１００ｋｇ容量の横河電機社製の撹拌式発酵タンク（ＦＰ２１１）に移し、滅菌した精製水１８リットルを添加した。 This was sterilized by boiling at 95-99 ° C. for 1 hour. After cooling, these were transferred to a stirring type fermentation tank (FP211) manufactured by Yokogawa Electric Corporation with a capacity of 100 kg, and 18 liters of sterilized purified water was added.
これに納豆菌本舗である有限会社高橋祐蔵研究所製造の粉末納豆菌３ｇを購入した。この納豆菌を滅菌水１００ｇに懸濁し、これに粉末大豆粉を添加し、３７℃で１時間加温して前培養した。 To this, 3 g of powdered Bacillus natto manufactured by Takahashi Yuzo Laboratory Co., Ltd., the natto bacillus main office, was purchased. This Bacillus natto was suspended in 100 g of sterilized water, powdered soybean powder was added thereto, and the mixture was heated at 37 ° C. for 1 hour and precultured.
この納豆菌液を前記の撹拌式発酵タンクに添加して４０〜４３℃の温度で４２時間発酵させた。発酵の状態は大豆の粉末の分解性及び溶解したタンパク質の定量（ビューレット法）によりモニタリングした。 This natto fungus solution was added to the agitated fermentation tank and fermented at a temperature of 40 to 43 ° C. for 42 hours. The state of fermentation was monitored by degradability of soybean powder and quantification of dissolved protein (Burelet method).
発酵後、得られた発酵液の上清を濾過布により粗濾過してろ液を得た。 After fermentation, the supernatant of the obtained fermentation broth was roughly filtered through a filter cloth to obtain a filtrate.
このろ液を凍結乾燥機（タイテック社製のフリーズトラップＶＡ−１４０Ｓ）により凍結乾燥させて目的とする粉末１３６ｇを得た。これを検体１とした。この粉末０．１ｇに精製水１０ｍＬを添加したところ、水素ガスが１．６ｐｐｍの濃度で検出された。 This filtrate was freeze-dried with a freeze dryer (freeze trap VA-140S manufactured by Taitec Co., Ltd.) to obtain 136 g of the desired powder. This was designated as Sample 1. When 10 mL of purified water was added to 0.1 g of this powder, hydrogen gas was detected at a concentration of 1.6 ppm.
得られた検体１を精製工程に供した。つまり、この粉末８０ｇを精製水３２０ｍＬに懸濁して８％エタノールで膨潤させたダイヤイオンＨＰ２０（三菱化学製）５００ｇに供した。８％エタノール１２００ｍＬで洗浄後、５０％エタノールの１リットルでさらに、洗浄した。 The obtained specimen 1 was subjected to a purification process. That is, 80 g of this powder was suspended in 320 mL of purified water and subjected to 500 g of Diaion HP20 (Mitsubishi Chemical) swollen with 8% ethanol. After washing with 1200 mL of 8% ethanol, it was further washed with 1 liter of 50% ethanol.
これに、８０％エタノール８００ｍＬを添加し、目的とするキノリン誘導体の分画を採取した。この精製工程を３回繰り返して純度を高めた。なお、この精製工程の実施温度は１８〜２２℃であった。この３回の精製工程で得られた最終分画を減圧乾燥器（日本バイオコン社製）により乾燥し、粉末１２ｇを得た。この粉末を検体２とした。この検体２の粉末０．１ｇに精製水１０ｍＬを添加したところ、ガスクロマトグラフィー（島津製作所製）による分析の結果、１．６ｐｐｍの水素ガスの発生が検出された。 To this, 800 mL of 80% ethanol was added, and the fraction of the desired quinoline derivative was collected. This purification process was repeated three times to increase the purity. In addition, the implementation temperature of this refinement | purification process was 18-22 degreeC. The final fraction obtained in these three purification steps was dried with a vacuum dryer (manufactured by Nippon Biocon) to obtain 12 g of powder. This powder was designated as Sample 2. When 10 mL of purified water was added to 0.1 g of the powder of the specimen 2, as a result of analysis by gas chromatography (manufactured by Shimadzu Corporation), generation of 1.6 ppm hydrogen gas was detected.
以下に、キノリン誘導体の構造解析に関する試験方法及び結果について説明する。
（試験例１）
Below, the test method and result regarding the structural analysis of a quinoline derivative are demonstrated.
(Test Example 1)
上記のように得られた検体２をエタノールに溶解し、質量分析器付き高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ、島津製作所）で分析した。 The specimen 2 obtained as described above was dissolved in ethanol and analyzed by high performance liquid chromatography with a mass spectrometer (HPLC, Shimadzu Corporation).
さらに、これを核磁気共鳴装置（６００ＭＨｚ、Ｈ−ＮＭＲ及びＣ−ＮＭＲ、ブルカー製）で解析した結果、検体１と検体２から目的とするキノリン誘導体を同定した。 Furthermore, as a result of analyzing this with a nuclear magnetic resonance apparatus (600 MHz, H-NMR and C-NMR, manufactured by Bruker), the target quinoline derivative was identified from Sample 1 and Sample 2.
すなわち、検体２の重水素化ジメチルスルホキシド中のＨ−ＮＭＲ測定の結果、ピークの位置は１．８４、１．８８、１．９０、２．６９、３．３３、４．００、５．０６、６．２０、６．６５、６．６６、６．７４、６．７７、６．８０、６．９１、６．９５、７．９６、８．０２及び８．０５ｐｐｍに認められた。 That is, as a result of H-NMR measurement in deuterated dimethyl sulfoxide of specimen 2, the peak positions were 1.84, 1.88, 1.90, 2.69, 3.33, 4.00, 5.06. 6.20, 6.65, 6.66, 6.74, 6.77, 6.80, 6.91, 6.95, 7.96, 8.02, and 8.05 ppm.
また、検体２のＣ−ＮＭＲ測定の結果、２２．４、２２．６、２３．５、３６．０、４２．３、４９．７、５６．５、７１．３、８６．２、１１４．２、１１６．４、１１７．４、１１７．９、１１９．０、１１９．４、１２３．０、１２４．３、１２６．４、１３１．７、１３４．７、１３６．５、１４１．５、１４２．８、１４６．０、１４６．３、１４６．９、１４７．０、１７３．９、１７４．２及び１７４．３ｐｐｍにピークが認められた。 Moreover, as a result of the C-NMR measurement of Sample 2, 22.4, 22.6, 23.5, 36.0, 42.3, 49.7, 56.5, 71.3, 86.2, 114. 2, 116.4, 117.4, 117.9, 119.0, 119.4, 123.0, 124.3, 126.4, 131.7, 134.7, 136.5, 141.5, Peaks were observed at 142.8, 146.0, 146.3, 146.9, 147.0, 173.9, 174.2, and 174.3 ppm.
以下に、Ｃ−ＮＭＲの解析結果のチャートを示した。（横軸単位はｐｐｍ、縦軸単位はピーク強度を示す。）
The chart of the analysis result of C-NMR is shown below. (The horizontal axis represents ppm, and the vertical axis represents peak intensity.)
上記の解析結果から化学的に合成した標準品と同一構造を呈することが判明した。すなわち、検体２からキノリン１分子、バリン１分子とｐ―クマル酸の１分子が結合した目的とするキノリン誘導体であると確認できた。また、検体２のＨＰＬＣの分析ではピークは１本となり、純度は９９．１％であった。なお、検体１の純度は７７．１％であった。 From the above analysis results, it was found that it had the same structure as the chemically synthesized standard product. That is, it was confirmed from the specimen 2 that the target quinoline derivative was formed by binding one molecule of quinoline, one molecule of valine and one molecule of p-coumaric acid. In HPLC analysis of Sample 2, the peak was 1 and the purity was 99.1%. The purity of Sample 1 was 77.1%.
以下にヒト皮膚表皮細胞を用いたエストロゲン受容体活性化試験について述べる。なお、この試験方法は生化学的に有効成分の効果を検証できる再現性のある手法である。
（試験例２）
The estrogen receptor activation test using human skin epidermis cells is described below. This test method is a reproducible method that can biochemically verify the effect of the active ingredient.
(Test Example 2)
クラボウより購入したヒト由来表皮細胞（表皮由来、エピダーセル）を用いた。培養液として５％牛胎児血清含有ＭＥＭ培地（Ｓｉｇｍａ製）を用いて培養した１０００個の細胞を３５ｍｍ培養シャーレ（ＦＡＬＣＯＮ製）に播種し、５％炭酸ガス下、３７℃で培養した。ここに紫外線照射装置（クオークテクノロジー製）により２８０ｎｍの紫外線を１時間照射した。ここに、前記の検体１、検体２及び陽性対照としてＥＧＦ（フナコシ製、表皮成長因子）をいずれも１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度で添加した。同時に、ＥＧＦ（フナコシ製、商品コードＮＯ２０）との併用による働きを調べた。これを４８時間培養して試験した。 Human-derived epidermal cells purchased from Kurabo Industries (epidermis, epidercel) were used. 1000 cells cultured using 5% fetal calf serum-containing MEM medium (manufactured by Sigma) as a culture solution were seeded in a 35 mm culture dish (manufactured by FALCON), and cultured at 37 ° C. under 5% carbon dioxide gas. This was irradiated with ultraviolet rays of 280 nm for 1 hour by an ultraviolet irradiation device (manufactured by Quark Technology). Here, EGF (manufactured by Funakoshi, epidermal growth factor) as a positive control was added at a final concentration of 10 mg / ml. At the same time, the effect of combined use with EGF (Funakoshi, product code NO20) was examined. This was cultured for 48 hours and tested.
培養液を採取後、表皮細胞の生存率をトリパンブルー法により計数した。その後、表皮細胞の懸濁液を調製した。この細胞懸濁液を用いてエストロゲン受容体の活性化状態を測定した。エストロゲン受容体と検体との結合親和性は核内受容体レポーターアッセイキット（ＩＮＤＩＧＯ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．製）により解析した。このシテスムは細胞培養を介したエストロゲン受容体アッセイシステムであり、使用実績も豊富である。 After collecting the culture solution, the survival rate of epidermal cells was counted by trypan blue method. Thereafter, a suspension of epidermal cells was prepared. The activation state of the estrogen receptor was measured using this cell suspension. The binding affinity between the estrogen receptor and the specimen was analyzed using a nuclear receptor reporter assay kit (INDIGO Biosciences, Inc.). This system is an estrogen receptor assay system through cell culture and has a good track record of use.
さらに、細胞懸濁液からｍＲＮＡを核酸抽出キット（フナコシ製）により抽出した。常法に従い、タカラバイオ製のプライマーを使用しＲＴ−ＰＣＲ法（タカラバイオ株式会社、ｍｉｃｒｏＲＮＡ Ｒｅａｄｙ−ｔｏ−Ｕｓｅ ＰＣＲ Ｐａｎｅｌ）によりエストロゲン受容体のｍＲＮＡ量を定量した。 Furthermore, mRNA was extracted from the cell suspension using a nucleic acid extraction kit (manufactured by Funakoshi). According to a conventional method, the mRNA amount of the estrogen receptor was quantified by RT-PCR (Takara Bio Inc., microRNA Ready-to-Use PCR Panel) using primers made by Takara Bio.
なお、シャーレは５枚を用いてその平均値を算出した。溶媒を添加した溶媒対照群と比較した。 In addition, the petri dish calculated the average value using five sheets. It compared with the solvent control group which added the solvent.
その結果、検体１の１０ｍｇ／ｍｌの添加によりヒト由来表皮細胞数は溶媒対照群に比して平均値として１７７％に増加した。また、検体２では２０６％に増加した。一方、ＥＧＦ添加では１３６％となった。この結果、検体１及び検体２の方がＥＧＦよりも優れたヒト由来表皮細胞増殖作用を呈した。さらに、検体２とＥＧＦとの併用により溶媒対照群に比して７７３％に増加し、ＥＧＦとの相乗的な効果が認められた。 As a result, by adding 10 mg / ml of Specimen 1, the number of human-derived epidermal cells increased to 177% as an average value compared to the solvent control group. In Sample 2, it increased to 206%. On the other hand, it became 136% when EGF was added. As a result, Specimen 1 and Specimen 2 exhibited a human-derived epidermal cell proliferation action superior to EGF. Furthermore, the combined use of specimen 2 and EGF increased to 773% compared to the solvent control group, and a synergistic effect with EGF was observed.
核内受容体レポーターアッセイキットによるエストロゲン受容体との結合親和性の測定の結果、溶媒対照群に比して検体１添加ではＶｍａｘの値は平均値として１８０％に増加した。また、検体２では３１１％に増加した。一方、ＥＧＦ添加では１１０％となった。Ｖｍａｘはエストロゲンとエストロゲン受容体の最大結合能力を示すことから、検体１及び検体２の方がＥＧＦよりも優れたエストロゲン受容体との結合性を示した。これはエストロゲン受容体との反応性を高めたということであり、エストロゲン受容体の活性化である。さらに、検体２とＥＧＦとの併用により７０９％となり、ＥＧＦとの併用による相乗効果が認められた。 As a result of measuring the binding affinity with the estrogen receptor using the nuclear receptor reporter assay kit, the Vmax value increased to 180% as an average value when Sample 1 was added compared to the solvent control group. In Sample 2, it increased to 311%. On the other hand, it became 110% when EGF was added. Since Vmax indicates the maximum binding ability of estrogen and estrogen receptor, Sample 1 and Sample 2 showed better binding to estrogen receptor than EGF. This means that the reactivity with the estrogen receptor is increased, and activation of the estrogen receptor. Furthermore, the combined use of specimen 2 and EGF resulted in 709%, and a synergistic effect was observed when combined with EGF.
一方、エストロゲン受容体のエストロゲンとの結合濃度を示すｋｍ値（つまり、５０％濃度）は溶媒対照群に比して検体１添加のｋｍ値は平均値として７７％に減少した。また、検体２では６５％に減少した。一方、ＥＧＦ添加では９８％となった。Ｋｍ値はエストロゲンとエストロゲン受容体の結合の親和性を示すことから、検体１及び検体２の方がＥＧＦよりも低い濃度で優れたエストロゲン受容体との親和性を示した。これはエストロゲン受容体との反応性を高めたということであり、ｋｍが低下したことから、この反応はエストロゲン受容体の活性化である。さらに、検体２とＥＧＦとの併用により５２％となり、ＥＧＦとの併用による相乗効果が認められた。 On the other hand, the km value indicating the binding concentration of the estrogen receptor to estrogen (that is, 50% concentration) decreased to 77% as an average value when the sample 1 was added, compared to the solvent control group. In Sample 2, it decreased to 65%. On the other hand, it became 98% when EGF was added. Since the Km value indicates the affinity for binding of estrogen and estrogen receptor, Sample 1 and Sample 2 showed better affinity for estrogen receptor at a lower concentration than EGF. This means that the reactivity with the estrogen receptor was increased, and because the km was lowered, this reaction is activation of the estrogen receptor. Further, the combined use of specimen 2 and EGF resulted in 52%, and a synergistic effect was observed when combined with EGF.
さらに、検体１及び検体２による結合性はエストロゲンを高い濃度で処理することにより検体によるエストロゲン活性化作用は軽減された。この軽減により活性化作用が拮抗型活性化であることを示している。 Furthermore, the estrogen activation action by the specimen was reduced by treating estrogen at a high concentration in the binding by specimen 1 and specimen 2. This reduction indicates that the activation action is antagonistic activation.
上記の細胞中のエストロゲン受容体のｍＲＮＡ発現量（コピー数）は溶媒対照群では１９コピー、検体１処理群では５８コピー、検体２処理群では３８８コピ−、ＥＧＦ処理群では３９コピーであった。さらに、検体２とＥＧＦとの併用により８２０コピーとなった。この併用による結果は検体２とＥＧＦが相乗的に作用したことを示している。 The amount of estrogen receptor mRNA expression (copy number) in the above cells was 19 copies in the solvent control group, 58 copies in the sample 1 treatment group, 388 copies in the sample 2 treatment group, and 39 copies in the EGF treatment group. . Furthermore, the combined use of specimen 2 and EGF resulted in 820 copies. The result of this combined use indicates that Sample 2 and EGF acted synergistically.
この結果から、エストロゲン受容体のｍＲＮＡ発現量は検体１及び検体２で著しく、ＥＧＦより優っていた。これは検体１及び検体２によるエストロゲン受容体のｍＲＮＡ誘導作用を示していた。また、検体２とＥＧＦとの併用による相乗効果が認められた。 From this result, the mRNA expression level of the estrogen receptor was remarkably higher in the specimen 1 and the specimen 2, and superior to that of EGF. This indicated that the estrogen receptor mRNA-inducing action by Sample 1 and Sample 2. In addition, a synergistic effect by the combined use of Sample 2 and EGF was observed.
一方、安全性試験の一環として人工皮膚であるＥｐｉＳｋｉｎ（ＳｋｉｎＥｔｈｉｃ社製）を用いた皮膚刺激性試験を行った。この結果、検体１及び検体２の添加により正常細胞に刺激性は認められず、検体１及び検体２の安全性が確認された。なお、この人工皮膚を用いる安全性試験法は細胞を用いる皮膚刺激性試験評価法であり、動物を使用しない動物実験の代替法として確立され、信頼性が高い方法である。 On the other hand, a skin irritation test using EpiSkin (manufactured by SkinEthic), which is artificial skin, was performed as part of the safety test. As a result, the stimulation of normal cells was not observed by the addition of Sample 1 and Sample 2, and the safety of Sample 1 and Sample 2 was confirmed. Note that this safety test method using artificial skin is a skin irritation test evaluation method using cells, and is established as an alternative method of animal experiments without using animals and is a highly reliable method.
以下にヒト神経細胞の障害モデルを用いた障害に対する効果試験について述べる。なお、この試験方法は生化学的及び分子生物学的に有効成分の働きを検証できる再現性のある常法であり、試験成績も豊富であり、信頼性も高い方法である。
（試験例３）
In the following, an effect test for damage using a human nerve cell damage model is described. This test method is a reproducible conventional method capable of verifying the action of an active ingredient biochemically and molecularly, has abundant test results, and is highly reliable.
(Test Example 3)
コスモバイオから購入したヒト神経細胞（Ｈｕｍａｎ Ｎｅｕｒｏｎｓ（ＨＮ）、１５２０タイプ）を用いた。培養液として専用の培養液（神経細胞増殖培地）を用いて培養した１０００個の細胞を３５ｍｍ培養シャーレに播種し、５％炭酸ガス下、３７℃で培養した。これに１％の神経毒であるアクリルアミド水溶液を添加して神経細胞を刺激した。 Human neurons (Human Neurons (HN), 1520 type) purchased from Cosmo Bio were used. 1000 cells cultured using a dedicated culture solution (neural cell growth medium) as a culture solution were seeded in a 35 mm culture dish and cultured at 37 ° C. in 5% carbon dioxide gas. Nerve cells were stimulated by adding an aqueous acrylamide solution of 1% neurotoxin.
ここに、前記の実施例１で得られた検体１及び検体２、陽性対照としてＮＧＦ（フナコシ(株)、ヒトタイプ）をいずれも１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度で添加した。これを４８時間培養した。さらに、ＮＧＦ（フナコシ製、β型、商品コード４５０−０１）と検体２を併用して実験した。 Sample 1 and sample 2 obtained in Example 1 above, and NGF (Funakoshi Co., Ltd., human type) as a positive control were all added at a final concentration of 10 mg / ml. This was cultured for 48 hours. Furthermore, an experiment was performed using NGF (manufactured by Funakoshi, β-type, product code 450-01) and specimen 2 in combination.
培養終了後、神経細胞数を顕微鏡的に計数した。さらに、上記と同様の方法により、エストロゲン受容体の働き（核内受容体レポーターアッセイキット）及びｍＲＮＡの発現量をＲＴ−ＰＣＲ法（タカラバイオ株式会社、ｍｉｃｒｏＲＮＡ Ｒｅａｄｙ−ｔｏ−Ｕｓｅ ＰＣＲ Ｐａｎｅｌ）により測定した。 After completion of the culture, the number of nerve cells was counted microscopically. Further, the function of estrogen receptor (nuclear receptor reporter assay kit) and the expression level of mRNA are measured by RT-PCR method (Takara Bio Inc., microRNA Ready-to-Use PCR Panel) by the same method as above. did.
その結果、検体１の１０ｍｇ／ｍｌの添加により神経細胞数は溶媒対照群に比して平均値として１３２％に増加した。また、検体２では１９９％に増加した。一方、ＮＧＦでは１１２％となった。この結果、検体１及び検体２の方がＮＧＦよりも優れた細胞活性化作用を呈した。また、ＮＧＦと検体２の併用により細胞数は４４２％となり、検体２とＮＧＦとは相乗的な増殖を示した。 As a result, the addition of 10 mg / ml of Specimen 1 increased the number of neurons to 132% as an average value compared to the solvent control group. In Sample 2, it increased to 199%. On the other hand, NGF was 112%. As a result, Sample 1 and Sample 2 exhibited a cell activation action superior to NGF. Further, the combined use of NGF and Specimen 2 resulted in a cell number of 442%, and Specimen 2 and NGF showed synergistic proliferation.
核内受容体レポーターアッセイキットによるエストロゲン受容体との結合親和性の測定の結果、溶媒対照群に比して検体１添加ではＶｍａｘの値は平均値として１６６％に増加した。また、検体２では２８８％に増加した。一方、ＮＧＦ添加では１０７％となった。Ｖｍａｘはエストロゲンとエストロゲン受容体の最大結合能力を示すことから、検体１及び検体２の方がＮＧＦよりも優れたエストロゲン受容体との結合性を示した。これはエストロゲン受容体との反応性を高めたということであり、エストロゲン受容体の活性化である。さらに、検体２とＮＧＦとの併用により５６６％となり、ＮＧＦとの併用による相乗効果が認められた。 As a result of measuring the binding affinity to the estrogen receptor using the nuclear receptor reporter assay kit, the Vmax value increased to 166% as an average value when Sample 1 was added, compared to the solvent control group. In Sample 2, it increased to 288%. On the other hand, it became 107% when NGF was added. Since Vmax indicates the maximum binding ability of estrogen and estrogen receptor, Sample 1 and Sample 2 showed better binding to estrogen receptor than NGF. This means that the reactivity with the estrogen receptor is increased, and activation of the estrogen receptor. Further, 566% was obtained by the combined use of Sample 2 and NGF, and a synergistic effect by the combined use with NGF was observed.
一方、エストロゲン受容体のエストロゲンとの結合濃度を示すｋｍ値は溶媒対照群に比して検体１添加ではｋｍ値は平均値として８０％に減少した。また、検体２では６９％に減少した。一方、ＮＧＦ添加では９９％となった。Ｋｍ値はエストロゲンとエストロゲン受容体の結合の親和性を示すことから、検体１及び検体２の方がＮＧＦよりも低い濃度で優れたエストロゲン受容体との親和性を示した。これはエストロゲン受容体との反応性を高めたということであり、エストロゲン受容体の活性化である。さらに、検体２とＮＧＦとの併用により５９％となり、ＮＧＦとの併用による相乗効果が認められた。 On the other hand, the km value indicating the binding concentration of the estrogen receptor to estrogen was reduced to 80% as an average value when the sample 1 was added, compared to the solvent control group. In Sample 2, it decreased to 69%. On the other hand, it became 99% when NGF was added. Since the Km value indicates the affinity for binding of estrogen and estrogen receptor, Sample 1 and Sample 2 showed better affinity for estrogen receptor at a lower concentration than NGF. This means that the reactivity with the estrogen receptor is increased, and activation of the estrogen receptor. Further, 59% was obtained by the combined use of Sample 2 and NGF, and a synergistic effect was obtained by the combined use with NGF.
さらに、検体１及び検体２による結合性はエストロゲンを高い濃度で処理することにより検体によるエストロゲン活性化作用は軽減された。この軽減により活性化作用が拮抗型活性化であることを示している。 Furthermore, the estrogen activation action by the specimen was reduced by treating estrogen at a high concentration in the binding by specimen 1 and specimen 2. This reduction indicates that the activation action is antagonistic activation.
上記の細胞中のエストロゲン受容体のｍＲＮＡ発現量（コピー数）は溶媒対照群では１７コピー、検体１処理群では４８コピー、検体２処理群では１２２コピ−、ＮＧＦ処理群では２９コピーであった。また、検体２とＮＧＦとの併用により５５２コピーとなり、ＮＧＦとの相乗的な効果が認められた。 The estrogen receptor mRNA expression level (copy number) in the cells was 17 copies in the solvent control group, 48 copies in the sample 1 treatment group, 122 copies in the sample 2 treatment group, and 29 copies in the NGF treatment group. . Further, the combined use of specimen 2 and NGF resulted in 552 copies, and a synergistic effect with NGF was observed.
エストロゲン受容体のｍＲＮＡ発現量は検体１及び検体２で著しく、ＮＧＦより優っていた。これは検体１及び検体２によるエストロゲン受容体のｍＲＮＡ誘導作用を示していた。また、ＮＧＦとの併用による相乗的な効果が認められた。 The estrogen receptor mRNA expression level was remarkably higher in Sample 1 and Sample 2, which was superior to NGF. This indicated that the estrogen receptor mRNA-inducing action by Sample 1 and Sample 2. Moreover, a synergistic effect by the combined use with NGF was recognized.
本発明で得られるキノリン誘導体はエストロゲン受容体活性化作用を呈し、皮膚細胞や神経細胞などの各種細胞機能を活性化させる。これにより国民のＱＯＬを改善し、健康な労働人口を増加させ、かつ、医療費を削減できる。 The quinoline derivative obtained in the present invention exhibits an estrogen receptor activating action and activates various cell functions such as skin cells and nerve cells. This can improve the people's QOL, increase the healthy workforce, and reduce medical costs.
本発明で得られるキノリン誘導体は皮膚細胞を増加させ、化粧料としてシワやタルミなどの皮膚トラブルに悩む方の皮膚の改善に貢献し、化粧品業界の発展に寄与する。 The quinoline derivative obtained in the present invention increases skin cells, contributes to the improvement of the skin suffering from skin problems such as wrinkles and tarmi as a cosmetic, and contributes to the development of the cosmetic industry.
本発明で得られるキノリン誘導体は神経細胞を増加させ、認知症やアルツハイマー症の治療のために利用でき、また、骨芽細胞を増殖させ、国民の健康維持に貢献する。 The quinoline derivative obtained in the present invention increases nerve cells and can be used for the treatment of dementia and Alzheimer's disease, and also proliferates osteoblasts and contributes to maintaining the health of the people.
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