JP2018028448A - オートタキシン測定による甲状腺疾患の検出方法及び検出試薬 - Google Patents

Abstract

【課題】 オートタキシン濃度を測定することにより、甲状腺疾患を検出する方法を提供する。【解決手段】 ヒト検体中のオートタキシン（例えば、（ｉ）オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δおよびε、（ｉｉ）オートタキシンアイソフォームα、βおよびγ、又は（ｉｉｉ）オートタキシンアイソフォームδおよびε）を測定することを特徴とする、甲状腺疾患（好ましくは甲状腺機能亢進症、更に好ましくはバセドウ病）の検出方法。【選択図】 図１

Description

本発明はヒト検体中のオートタキシン濃度を測定することによる甲状腺疾患の検出方法および検出試薬に関する。

甲状腺機能亢進症の診断、管理は、甲状腺ホルモン、甲状腺ホルモンによりネガティブフィードバックを受ける甲状腺刺激ホルモンが使われているが、甲状腺ホルモンは個々の患者により至適甲状腺ホルモン値が異なり、わずかに基準範囲を超えていたとしても問題がないことがあり、また逆に基準範囲内に収まっていたとしても甲状腺ホルモンが該当患者にとって至適であるかどうかについては判断しにくいこともある。そのため、甲状腺ホルモンによりネガティブフィードバックを受ける甲状腺刺激ホルモンも同時に測定することが多いが、甲状腺刺激ホルモンは、甲状腺ホルモンの作用から２週間ほどのタイムラグがあり、甲状腺機能をリアルタイムに反映しないという問題がある。そのため、甲状腺機能の補助的検査項目として、甲状腺ホルモンの状態を反映するアルカリホスファターゼや総コレステロールが利用されることがあるが、これらの検査項目は生活習慣など他の要因により大きく変動するため、甲状腺ホルモンの補助的検査項目としては限界がある。

また、臨床現場では、甲状腺ホルモンは、脂質異常症、低脂血症、動悸、ふるえなどありふれた健診結果異常、患者からの訴えにより検査する項目であり、健常人でも基準範囲から逸脱する例は多い。従って、バセドウ病に代表される甲状腺機能亢進症と基準範囲を逸脱している健常者とを診断可能な検査法が切望されている。

ヒトオートタキシンは、１９９２年Ｍ．Ｌ．ＳｔｒａｃｋｅらによってＡ２０５８ヒト黒色腫細胞培養培地から細胞運動性を惹起する物質として単離された分子量約１２５ＫＤａの糖蛋白質である（非特許文献１）。オートタキシンはそのリゾホスホリパーゼＤ活性によりリゾホスファチジルコリンを基質としリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）を産生する酵素であることが知られている。

血清中のオートタキシン濃度が変動する疾患の報告は複数あるが、代表的な報告として産生亢進による悪性リンパ腫（非特許文献２）、妊娠（非特許文献３）、代謝不良による慢性肝疾患（非特許文献４）が知られている。また、一部の膵臓癌患者での濃度上昇（特許文献１）、ステロイド経口服用による濃度低下（非特許文献５）も報告されている。

オートタキシンは人において現在までに主要な５種類のアイソフォーム（α、β、γ、δ、ε）が報告されている（非特許文献６、７）。また３種類のオートタキシン測定系が報告されている。具体的にはオートタキシン総量（オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ、及びε）を測定する試薬（特許文献１）、オートタキシンアイソフォームα、βおよびγを測定する試薬（特許文献２）、オートタキシンアイソフォームδおよびεを測定する試薬（特許文献３）である。

特許第５３０７５４３号公報 特許第５８６４９１８号公報 特開２０１４−１２５４８１号公報

Ｊ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９９２；２６７：２５２４−２５２９． Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ． ２００８；１４３：６０−７０ Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ ２０１１；４１２：１９４４−１９５０ Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ ２０１１；４１２：１２０１−１２０６ Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ ２０１３；４１５：７４−８０ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３、７７７６、２００８ Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１５１、８９−９７、２０１２

これまでにオートタキシンの血液中の濃度が様々な疾病により変動することが報告されているが、甲状腺疾患との関連性に関しては報告がなかった。本発明の目的はオートタキシン濃度を測定することにより、甲状腺疾患を検出する方法を提供することにある。

本発明者らは、様々な内分泌疾患患者の血液中のオートタキシン濃度を測定し、鋭意検討を重ねた結果、甲状腺疾患において血液中のオートタキシン濃度が変動することを見いだし、本発明に到達した。即ち本発明は下記の発明を包含する：
（１）ヒト検体中のオートタキシンを測定することを特徴とする、甲状腺疾患の検出方法。
（２）オートタキシンがオートタキシンアイソフォームα、β、γ、δおよびεである、（１）に記載の検出方法。
（３）オートタキシンがオートタキシンアイソフォームα、βおよびγである、（１）に記載の検出方法。
（４）オートタキシンがオートタキシンアイソフォームδおよびεである、（１）に記載の検出方法。
（５）甲状腺疾患が甲状腺機能亢進症である、（１）〜（４）いずれかに記載の検出方法。
（６）甲状腺機能亢進症がバセドウ病である、（５）に記載の検出方法。
（７）検体が血液成分である、（１）〜（６）いずれかに記載の検出方法。
（８）オートタキシンを、オートタキシンを認識する抗体を用いた免疫化学的方法により測定する、（１）〜（７）いずれかに記載の検出方法。
（９）オートタキシンを認識する抗体を含有することを特徴とする、甲状腺疾患検出試薬。

本発明によれば、ヒト検体中のオートタキシンを測定することにより甲状腺疾患を検出することが可能である。特許文献１〜３に記載の免疫学的定量試薬を用い測定を実施すれば、検体中に含まれる内在性の測定妨害因子や競合酵素の影響を受けることなく、かつ短時間でヒトオートタキシンを定量可能であり、小規模医療施設においても簡便、低コストで診断可能な甲状腺疾患検出試薬を提供することが可能である。

図左から全例、男性、女性の健常者とバセドウ病でのオートタキシン（ｔＡＴＸ）測定値の分布を示す。箱ひげ図の表示は典型的表記であり、具体的には中央の箱は２５−７５パーセンタイルと中央値を示しており、上限下限の各棒線は７５および２５パーセンタイル値の１．５倍以上のデータを除く最大値、最小値を示している。 図左から全例、男性、女性の健常者とバセドウ病でのオートタキシン（ｃＡＴＸ）測定値の分布を箱ひげ図で示す。箱ひげ図の表示は図１と同様である。 図左から全例、男性、女性の健常者とバセドウ病でのオートタキシン（ｎＡＴＸ）測定値の分布を箱ひげ図で示す。箱ひげ図の表示は図１と同様である。

本発明において用いられる検体には特に限定はないが、血液成分等をあげることができ、その中でも全血、血球、血漿などが好ましく、血清、血漿が更に好ましい。

測定対象のオートタキシンにも特に限定はないが、オートタキシン総量（オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δおよびεの合計量）、オートタキシンアイソフォームα、βおよびγの合計量、又はオートタキシンアイソフォームδおよびεの合計量などが例示される。

検出される甲状腺疾患としては、例えば甲状腺機能亢進症があげられ、その中でもバセドウ病があげられる。

本発明においてオートタキシンを測定する方法には特に限定はないが、例えばオートタキシンを認識する抗体を用いた免疫化学的方法があげられる。より具体的には、オートタキシンを認識する抗体を含有する甲状腺疾患検出試薬を用いて行うことができる。このとき、例えば測定対象のオートタキシンを認識する固相化抗体と、それとは異なる部位で測定対象のオートタキシンを認識する標識化抗体とを含む甲状腺疾患検出試薬を用いて、サンドイッチ法により行うことができる。例えば、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δおよびεの総量を測定するには特許文献１の実施例１６に記載の試薬を、またオートタキシンアイソフォームα、βおよびγの合計量を測定するには特許文献２実施例８に記載の試薬を、さらにオートタキシンアイソフォームδおよびεの合計量を測定するには特許文献３実施例８に記載の試薬を、それぞれあげることができる。

以下に実施例を示すが、本発明は実施例に記載された例に限られるものではない。以下の実験を行うに当たっては、各施設の研究倫理委員会での承認のもと実施した。オートタキシン濃度測定は、自動免疫測定装置ＡＩＡシリーズ（東ソー社製）を用い実施した。

実施例１：患者背景とオートタキシン濃度の測定
対象者の例数ならびに年齢を表１に示す。対象者の血清を用い、特許文献１実施例１６、特許文献２実施例８、及び特許文献３実施例８に記載の試薬を用いてオートタキシン濃度を測定した。なおオートタキシン総量（アイソフォームα、β、γ、δ、及びεの合計量）をｔＡＴＸ（ｔｏｔａｌ Ａｕｔｏｔａｘｉｎ）、オートタキシンアイソフォームα、β、及びγの合計量をｃＡＴＸ（ｃｌａｓｓｉｃａｌ Ａｕｔｏｔａｘｉｎ）、オートタキシンアイソフォームδ、及びεの合計量をｎＡＴＸ（ｎｏｖｅｌ Ａｕｔｏｔａｘｉｎ）と略す。各群のｔＡＴＸ、ｃＡＴＸ、ｎＡＴＸの測定濃度一覧を表２に示す。

実施例２：健常者とバセドウ病のオートタキシン濃度比較
実施例１で測定した健常者２３７例（男性１６８名、女性６９名）とバセドウ病患者２６例（男性７例、女性１９例）のオートタキシン測定値を比較した。ｔＡＴＸ、ｃＡＴＸ、ｎＡＴＸそれぞれの比較結果は図１、図２、図３に示す通りであり、健常者群とバセドウ病群の間において、表３に示す通り男性、女性、全例いずれにおいても有意差が確認された。

実施例３：バセドウ病診断能の検証
実施例１の測定値を用いてＲＯＣ解析を行った。ＲＯＣ解析から得られた診断効率を示す数値を表４に示す。特にｔＡＴＸにおいては曲線下面積が男性、女性、全例いずれにおいても０．９３１以上を示しかつ感度、特異度共に良好な結果を示した。

実施例４：各種パラメーターとの相関性の検証
実施例１のバセドウ病患者のオートタキシン測定値ならびに甲状腺疾患に関連する各種パラメーターとの相関性を検証した。表５に示す。一部、欠損値があるため使用した測定例数を表中に示している。その結果、ＦＴ４ならびに中性脂肪に対して弱い相関性が認められた。

Claims (9)

1. ヒト検体中のオートタキシンを測定することを特徴とする、甲状腺疾患の検出方法。
2. オートタキシンが、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δおよびεである、請求項１に記載の検出方法。
3. オートタキシンが、オートタキシンアイソフォームα、βおよびγである、請求項１に記載の検出方法。
4. オートタキシンが、オートタキシンアイソフォームδおよびεである、請求項１に記載の検出方法。
5. 甲状腺疾患が甲状腺機能亢進症である、請求項１〜４いずれかに記載の検出方法。
6. 甲状腺機能亢進症がバセドウ病である、請求項５に記載の検出方法。
7. 検体が血液成分である、請求項１〜６いずれかに記載の検出方法。
8. オートタキシンを、オートタキシンを認識する抗体を用いた免疫化学的方法により測定する、請求項１〜７いずれかに記載の検出方法。
9. オートタキシンを認識する抗体を含有することを特徴とする、甲状腺疾患検出試薬。

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