JP2017533431A - 細気管支炎後の喘息の診断のためのマーカーおよびその用途 - Google Patents

細気管支炎後の喘息の診断のためのマーカーおよびその用途 Download PDF

Info

Publication number
JP2017533431A
JP2017533431A JP2017522176A JP2017522176A JP2017533431A JP 2017533431 A JP2017533431 A JP 2017533431A JP 2017522176 A JP2017522176 A JP 2017522176A JP 2017522176 A JP2017522176 A JP 2017522176A JP 2017533431 A JP2017533431 A JP 2017533431A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
edn
bronchiolitis
wheezing
months
level
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2017522176A
Other languages
English (en)
Other versions
JP6420475B2 (ja
Inventor
チャン−ケウン キム
チャン−ケウン キム
Original Assignee
インジェ ユニバーシティ インダストリー アカデミック コーポレーション ファウンデーション
インジェ ユニバーシティ インダストリー アカデミック コーポレーション ファウンデーション
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by インジェ ユニバーシティ インダストリー アカデミック コーポレーション ファウンデーション, インジェ ユニバーシティ インダストリー アカデミック コーポレーション ファウンデーション filed Critical インジェ ユニバーシティ インダストリー アカデミック コーポレーション ファウンデーション
Publication of JP2017533431A publication Critical patent/JP2017533431A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6420475B2 publication Critical patent/JP6420475B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/112—Disease subtyping, staging or classification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/12—Pulmonary diseases
    • G01N2800/122—Chronic or obstructive airway disorders, e.g. asthma COPD

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本発明は、細気管支炎後の再発性喘鳴または喘息の診断に関し、好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）レベルと細気管支炎後の再発性喘鳴または喘息との相関関係を分析することにより、細気管支炎後に再発性喘鳴または喘息の診断のためのＥＤＮマーカーの用途に関する。

Description

本発明は、細気管支炎後の喘息の診断のためのマーカーであって、好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）の用途に関する。
細気管支炎は、呼吸器の中で最も小さい枝である細気管支に発生する感染性疾患で、最近では細気管支炎と呼ばれている。呼吸器は鼻から始まり、上部気管支を経て、徐々にさらに小さな気管支に木の枝のように分枝されて肺胞まで達している。肺胞のすぐ上部の最も小さな気管支分枝を細気管支といい、細気管支は直接肺胞に空気を伝達する役割をし、肺胞はこれを受けて血液に酸素の供給をする。
気管支に発生する細気管支炎は、主にウイルス感染が原因で発生し、ウイルスは気管支の炎症反応を起こし、気管支粘膜が腫れて分泌物が多くなり、これにより、狭い細気管支の閉塞現象が発生して肺胞への酸素供給に障害を誘発し、結局は全身的な低酸素症の状態になる。
細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｉｔｉｓ）は、下気道感染によって末梢気道の炎症性閉塞として発生する疾患で、主に２歳以前の乳児に発生する。細気管支炎の主な症状は咳や喘鳴であり、ウイルス感染が原因とされるが、呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ、ＲＳＶ）が最も一般的な原因であり、その他パラインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、麻疹ウイルス、マイコプラズマも原因になりうる。
特に呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ、ＲＳＶ）は、児童において下部気道疾患を引き起こす最も一般的な原因ウイルスで、全世界的に毎年１０月頃から翌年４月頃の間に、少なくとも１２週間以上続けて流行を起こす。ＲＳＶによる感染は、非常に頻繁に発生して５０％程度の児童が生後１歳以内に感染して３歳に至ればほぼすべての児童が経験することが報告されたことがある。
また、ＲＳＶ感染による症状は、児童の年齢によって多様であり、児童では通常、軽い上気道感染症の症状を示すが、２歳以下の乳児では重度の下部気道疾患を起こす場合が多く、乳児で発生する急性細気管支炎と肺炎の５０−９０％がＲＳＶによって発生する。
ＲＳＶによる急性細気管支炎は、乳児で最も重要な呼吸不全の原因の一つであり、死亡率は０．５〜１．５％程度と低いものの、未熟児、神経筋肉系疾患、慢性呼吸器疾患、先天性心疾患などを持っていたり、免疫機能が低下した状態にある高危険群患者においては、はるかに高い死亡率を示す。自然な感染によって得られた免疫力は不十分であり、実際にＲＳＶ感染を患った後に１〜２年以内に再感染が起こる場合が多い。
一方、乳幼児期においてＲＳＶ感染後の再発性喘鳴の発生と関連があるということは、いくつかの疫学研究で証明された。アレルギー疾患の遺伝的素因と先天性気管支過敏性が細気管支炎後の喘鳴と喘息発生に関与することが知られており、ＲＳＶ感染自体がアレルギー炎症反応とアレルゲン感作の頻度を高め、喘息を起こすという研究結果もある。特にいくつかの研究では、最初の１年以内に重症のＲＳＶ細気管支炎を患う児童で、それ以後、再発性喘鳴およびアレルゲン感作が起こる可能性が高いとした。
乳児で最初に現れる症状は、主に鼻づまり、鼻水などである。以後１−３日にかけて感染が下部気道に進行しながら咳が始まるが、急性喉頭炎、気管支炎、細気管支炎、肺炎、またはこれらの複合された様々な症状が現れることになる。その後、症状が激しくなり、１０日程度持続した後、徐々に回復する。発熱はひどくない場合がほとんどであり、最高体温が３８℃程度であり、熱がないこともあるが、ＲＳＶに感染した非常に小さな幼児では、生命を脅かす無呼吸症を発症しうる。
ＲＳＶによる細気管支炎は、気管支過敏性を誘発し、多くの乳児期の反復的な喘鳴あるいは喘息などに発展する。これらの反復的な喘鳴の原因として最初の感染時の重症度、アトピー所見、環境要素などが関与することがあるが、まだその原因が確実にわかっていない。
特に、乳幼児の呼吸器感染を治療・予防するために、ＲＳＶによる細気管支炎後２−３年間、反復的な喘鳴を起こす場合を予測することができれば、それ以後の喘鳴の診断と治療にかなり役立つだろう。
これにより、本発明者らは、細気管支炎にかかった乳児を対象に、喘息、喘鳴、呼吸困難、咳などの症状の程度を好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）の発現の程度との相関関係を調査することにより、特定の時点でＥＤＮのレベルを測定する場合、細気管支炎の後、再発されうる喘鳴の発作か否かを高精度に予測することができることを確認することにより、本発明を完成した。
本発明の目的は、細気管支炎以後の喘息または喘鳴の診断に必要な情報を提供するために、細気管支炎３ヶ月〜５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルを測定する方法を提供することである。
本発明の他の目的は、細気管支炎３ヶ月〜５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）の濃度を測定する製剤を含む、細気管支炎以後の再発性喘息または喘鳴（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｗｈｅｅｚｉｎｇ）診断用キットを提供することである。
本発明は、前記課題を解決するために、
本発明は、細気管支炎以後の喘息または喘鳴の診断に必要な情報を提供するために、細気管支炎３ヶ月〜５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルを測定する方法を提供する。
本発明の一実施例において、前記ＥＤＮのレベルは血清または喀痰中のＥＤＮの濃度でありうる。
本発明の一実施例において、前記細気管支炎は、呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ、ＲＳＶ）、メタニューモウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、麻疹ウイルス、およびマイコプラズマからなる群から選択される有害菌の感染により誘発されうる。
本発明の一実施例において、前記細気管支炎が呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ、ＲＳＶ）による感染により誘発された場合、ＲＳＶ細気管支炎４ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが４５ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は６５％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８０％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７０％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７２％の値を有しうる。
本発明の一実施例において、前記細気管支炎がメタニューモウイルスによって誘発された場合、細気管支炎３ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが５０ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は７０％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８２％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７５％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７０％の値を有しうる。
本発明の一実施例において、前記細気管支炎がマイコプラズマによって誘発された場合、細気管支炎５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが６０ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は６３％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は７７％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７８％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は６８％の値を有しうる。
本発明の一実施例において、前記方法は、生後１ヶ月〜２４ヶ月の乳幼児の血清中ＥＤＮレベルを測定するものでありうる。
本発明の一実施例において、ＲＳＶ細気管支炎の自然なプロセスでＥＤＮレベルが１００ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後２回以上再発性喘息または喘鳴が現れる確率が７５％であり、メタニューモウイルスによる細気管支炎の自然なプロセスでＥＤＮレベルが８０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後３回以上再発性喘息または喘鳴が現れる確率が８０％であり、マイコプラズマの自然なプロセスでＥＤＮレベルが１３０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後３回以上再発性喘息または喘鳴が現れる確率が８３％でありうる。
本発明の一実施例において、喀痰試料を使用する場合、前記細気管支炎がマイコプラズマによって誘発された場合、細気管支炎４ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが７０ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は７３％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８７％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７８％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７０％の値を有しうる。
本発明の一実施例において、喀痰試料を使用して分析する場合には、７歳〜１０歳の児童期の喀痰中ＥＤＮレベルを測定することができる。
また、本発明は、細気管支炎３ヶ月〜５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）の濃度を測定する製剤を含む、細気管支炎以後の再発性喘息または喘鳴（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｗｈｅｅｚｉｎｇ）診断用キットを提供する。
本発明の一実施例において、前記製剤は、ＥＤＮに特異的に結合することができるプライマー、プローブまたは抗体でありうる。
本発明は、好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）レベルと細気管支炎後の再発性喘息または喘鳴の有意味な相関関係を分析することにより、ＥＤＮを細気管支炎を患った乳幼児および児童における喘息または喘鳴の再発に対する予後予測および検証用マーカーとして用いることができ、細気管支炎の原因細菌の種類によるＥＤＮレベルを客観化させることで、より効果的かつ正確な診断を介して再発性喘息または喘鳴を治療し、持続的に管理することができる予防薬および治療薬の開発などに有用に適用することができる。
本発明で使用される用語の定義は、以下の通りである。
「診断」は、病理状態の存在または特徴を確認することを意味する。本発明の目的上、診断は、細気管支炎以後の喘鳴および喘息の再発および進行するか否かを確認することである。
「診断用マーカー、診断するためのマーカーまたは診断マーカー（ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｍａｒｋｅｒ）」とは、本発明による疾患の発症対象細胞を正常細胞と区分して診断することができる物質で、正常細胞に比べて疾患細胞で増加様相を見せるポリペプチドまたは核酸（例えば、ｍＲＮＡなど）、脂質、糖脂質、糖タンパク質、糖（単糖類、二糖類、多糖類など）のような有機生体分子などを含む。
「予後（Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ）」とは、病気の経過と結果の予測を意味するもので、本発明では、細気管支炎以後の喘鳴、喘息の再発（Ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）および進行（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）を予測することを含む。これにより、喘息または喘鳴（ｗｈｅｅｚｉｎｇ）の再発および進行を正確に予測することができる指標が非常に重要であり、組織の分化度と病期のような臨床的指標を補完しながら治療の反応を予測することができる因子が必要であるが、本発明では、好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）が、このような指標の機能をするので、再発性喘鳴の予後因子として利用できることを究明した。
「対象」または「患者」は、ヒト、牛、犬、モルモット、ウサギ、ニワトリ、昆虫などを含み、治療を要する任意の単一個体を意味する。また、任意の病気の臨床所見を見せない臨床研究試験に参与した任意の対象または疫学研究に参与した対象または対照群として使用された対象が対象に含まれる。
「組織または細胞サンプル」は、対象または患者の組織から得た類似の細胞の集合体を意味する。組織または細胞サンプルの供給源は、新鮮な凍結されたおよび／または保存された臓器または組織サンプルまたは生検または吸引物からの固形組織；血液または任意の血液構成分；喀痰；尿；対象の妊娠または発生の任意の時点の細胞でありうる。
「標識」または「ラベル」は、直接または間接的に試薬の検出を容易にする化合物または組成物を意味する。標識は、それ自体が検出されうるか（例えば、放射性同位元素標識または蛍光標識）、酵素標識の場合に、検出可能な基質化合物または組成物の化学的変形を触媒することができる。
「有効量」は、有益なまたは望ましい臨床的または生化学的結果に影響を与える適切な量である。有効量は、一回またはそれ以上投与することができる。本発明の目的のために、阻害剤化合物の有効量は、疾患状態の進行を一時的に緩和、改善、安定化、回復、速度を低下または遅延させるのに適切な量である。もし、受恵動物が組成物の投与に耐えることができ、または、組成物のその動物への投与が適切な場合であれば、組成物は「薬学的にまたは生理学的に許容可能であること」を示す。投与された量が生理学的に重要な場合には、前記製剤は、「治療学的に有効量」で投与されたと言うことができる。前記製剤の存在が受益患者の生理学的に検出可能な変化をもたらした場合は、前記製剤は、生理学的に意味がある。
「治療」は、有益な、または望ましい臨床的結果を得るためのアクセスを意味する。本発明の目的のために、有益な、または望ましい臨床的結果は、非限定的に、症状の緩和、疾患の範囲の減少、疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患の進行の遅延または速度の減少、疾患の状態の改善または一時的緩和および軽減（部分的または全体的に）、検出可能かまたは検出されないかを含む。また、「治療」は、治療を受けなかったときに予想される生存率と比較して生存率を伸ばすことを意味しうる。治療は、治療学的治療および予防的または予防措置方法のすべてを指す。前記治療は、予防される障害だけでなく、既に発生した障害において要する治療を含む。疾患を「緩和（Ｐａｌｌｉａｔｉｎｇ）」することは、治療をしない場合と比べて、疾患の状態の範囲および／または望ましくない臨床的兆候が減少したり、および／または進行の時間的推移（ｔｉｍｅ ｃｏｕｒｓｅ）が遅くなるまたは長くなることを意味する。
「約」というのは参照量、レベル、値、数、頻度、パーセント、寸法、サイズ、量、重量または長さに対して約３０、２５、２０、２５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％程度に変化する量、レベル、値、数、頻度、パーセント、寸法、サイズ、量、重量または長さを意味する。
本明細書を通じて、文脈で特に必要としなければ、「含む」および「含んでいる」という言葉は、提示されたステップまたは要素、またはステップまたは要素の群を含むが、任意の他のステップまたは要素、またはステップまたは要素の群が排除されないことを内包するものと理解すべきである。
以下、本発明について具体的に説明する。
本発明で診断しようとすることは、喘息や喘鳴（ｗｈｅｅｚｉｎｇ）の再発、特に病原性ウイルスによる細気管支炎後に再発される喘息または喘鳴に関することである。
３歳以前の乳幼児で喘鳴の再発はよく見られる問題であり、乳児期にはアレルギー疾患による喘鳴の頻度は少ない反面、ウイルスによる呼吸器感染が喘息と喘鳴の重要な原因となる。呼吸器感染を誘発しうる病原性因子として呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ、ＲＳＶ）、メタニューモウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、麻疹ウイルス、マイコプラズマなどがある。
特に、本発明では、細気管支炎を誘発する特定のウイルスに対する細気管支炎発生後、喘息または喘鳴が再発されうるか否かと疾患の重症度を予測することができるマーカーおよび方法を提供するという点に特徴があり、また、好酸球脱顆粒化（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ）が再発性喘鳴と相関関係があることを最初に究明し、好酸球脱顆粒化の産物であるＥＤＮ（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ）を再発喘息または喘鳴の予後診断に活用できることを発見した。
具体的には、本発明の一実施例では、細気管支炎の誘発原因菌のうち、ＲＳＶ（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、マイコプラズマ、およびメタニューモウイルスに感染して細気管支炎を患った後、喘息または喘鳴が再発した患者の生物学的試料を収集した後、試料に含有された好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルを分析して、細気管支炎の発生後に再発する喘息または喘鳴との関連を分析した。
診断マーカーの用途および診断キット
したがって、本発明は、一観点から、好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）の細気管支炎後の再発性喘息または喘鳴（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｗｈｅｅｚｉｎｇ）の予後診断マーカーとしての用途に関するものである。
特に、細気管支炎以後のＥＤＮレベルの確認を介して再発性喘息または喘鳴の予後を診断することが非常に重要である。このとき、前記予後は再発（Ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）および進行（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）のステップをすべて含む。
喘鳴（ｗｈｅｅｚｉｎｇ）は、気道が狭くなって、息を吐くときゼイゼイまたはガラガラいう呼吸音が現れることで、呼吸困難を起こす炎症性気道閉鎖性疾患である喘息でもよく現れるところ、本発明における喘鳴は、このような咳、呼吸困難などの症状だけでなく、このような症状を含む疾患を含む概念として使用されている。
喘息は、肺の中にある気管支が非常に敏感になった状態で、時折気管支が狭くなって息切れしてガラガラする息音が聞こえながらひどく咳をする症状を現わす疾患である。
一方、有意性のある診断マーカーの選択と適用は、診断結果の信頼度を決定付ける。有意性のある診断マーカーとは、診断して得られた結果が正確で妥当性（ｖａｌｉｄｉｔｙ）が高く、繰り返しの測定時にも一貫性のある結果を示すように、信頼度（ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ）の高いマーカーを意味する。本発明の再発性喘息または喘鳴の予後診断マーカーは、喘鳴または喘息の再発とともに直接的または間接的な要因で発現が変化する繰り返しの実験にも同じ結果を示し、発現レベルの差が対照群と比較するときに非常に大きく、誤った結果を下す確率がほとんどない信頼度の高いマーカーである。
したがって、本発明の有意性のある診断マーカーＥＤＮのレベルを測定して得られた結果をもとに診断された結果は、妥当に信頼することができる。
特に、本発明のＥＤＮのレベルは、好ましくは、細気管支炎後３ヶ月〜５ヶ月目のＥＤＮレベルを測定することができる。
さらに、本発明では、細気管支炎を誘発する有害原因ウイルス、細菌、微生物などに対して、各誘発原因菌に対するＥＤＮレベルを定量的に測定および分析することにより、特定の原因菌による細気管支炎以後の喘息または喘鳴の再発可能性を予測することができる。
前記「ＥＤＮレベルの測定」とは、血清または喀痰を含む生物学的試料などから好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）の濃度を測定することをいい、生物学的試料としては、ＥＤＮの濃度を測定することができるものとして尿、血液、唾液、喀痰などを使用することができるが、好ましくは、血清または喀痰を使用する。前記ＥＤＮの濃度は、公知の方法を利用して、当業者が適切に測定することができるが、好ましくは、ＥＤＮに特異的なプライマー、プローブまたは抗体を使用して測定することができる。
本発明で、前記ＥＤＮは、配列番号１のアミノ酸配列からなるものでありえ、ＥＤＮタンパク質は、配列番号２の塩基配列で暗号化されている。
本発明では、細気管支炎３ヶ月〜５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルを測定した結果を利用して、細気管支炎以後の喘息または喘鳴に対する再発および疾患の状態を診断することができる特徴がある。
また、前記方法は、細気管支炎の患者から分離された生物学的試料から好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）レベルを測定するステップ；および前記ＥＤＮレベルを正常対照群試料の該当ＥＤＮレベルと比較するステップを含むことができる。
このとき、ＥＤＮのレベル測定は、細気管支炎３ヶ月〜５ヶ月目に測定することが望ましい。
また、ＥＤＮのレベルを測定する前に、患者の細気管支炎の原因菌が呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ、ＲＳＶ）、メタニューモウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、麻疹ウイルスまたはマイコプラズマによるものか確認するステップをあらかじめ経るのが良い。
本発明の一実施例によれば、細気管支炎が呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ、ＲＳＶ）による感染で誘発された場合、ＲＳＶ細気管支炎４ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが４５ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は６５％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８０％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７０％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７２％の値を有するという事実を確認し、さらにＲＳＶ細気管支炎の自然なプロセスでＥＤＮレベルが１００ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後２回以上再発性喘息または喘鳴が現れる確率が７５％であることを確認することができた。
また、細気管支炎がメタニューモウイルスによって誘発された場合、細気管支炎３ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが５０ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、 ＰＰＶ）は７０％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８２％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７５％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７０％の値を有することを確認することができ、さらにメタニューモウイルスによる細気管支炎の自然なプロセスでＥＤＮレベルが８０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後３回以上再発性喘息または喘鳴が現れる確率が８０％であることを確認することができた。
また、細気管支炎がマイコプラズマによって誘発された場合、細気管支炎５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが６０ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ ）は６３％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は７７％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７８％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は６８％の値を有することがわかり、さらにマイコプラズマの自然なプロセスでＥＤＮレベルが１３０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後３回以上再発性喘息または喘鳴が現れる確率が８３％であることを確認することができた。
したがってこのように測定され、分析されたＥＤＮのそれぞれの定量的数値は、細気管支炎誘発の特定の原因菌により喘息または喘鳴の再発可能性および重症度を予測および診断するための客観的な情報として使用することができる。
前記記述された数値範囲は、血清を試料として分析した結果であるのに対し、喀痰を試料とする場合にも、定量的な結果を基にした客観的診断の範囲を提供することができる。
つまり、本発明の一実施例によれば、喀痰試料を使用する場合、前記細気管支炎がマイコプラズマによって誘発された場合、細気管支炎４ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが７０ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は７３％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８７％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７８％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７０％の値を有することがわかり、さらにマイコプラズマの自然なプロセスでＥＤＮレベルが１３０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後３回以上再発性喘息または喘鳴が現れる確率が８３％であることを確認することができた。
本発明で提供される診断方法において、前記患者は、生後１ヶ月〜２４ヶ月の乳幼児の血清中ＥＤＮレベルを測定することができ、喀痰を試料とする場合には、７歳〜１０歳の児童期の喀痰中ＥＤＮレベルを測定することができる。
さらに、本発明は、細気管支炎３ヶ月〜５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）の濃度を測定する製剤を含む、細気管支炎以後の再発性喘息または喘鳴（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｗｈｅｅｚｉｎｇ）診断用組成物を提供することができ、前記組成物を含む診断用キットを提供することができる。
前記キットは、細気管支炎３ヶ月〜５ヶ月目のＥＤＮ濃度を分析して、細気管支炎以後の再発性喘息または喘鳴の予後を判断するのに使用することができる。このため、前記キットは、ＥＤＮ濃度を測定することができるように設計される。本発明のキットは、選択的に、ＥＤＮ濃度の分析に必要な試薬、因子、組成物などを含むことができる。
具体的には、本発明のキットが、もしＰＣＲ増幅のプロセスに適用される場合、本発明のキットは、選択的に、ＰＣＲ増幅に必要な試薬、例えば、緩衝液、ＤＮＡポリメラーゼ［例えば、Ｔｈｅｒｍｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ（Ｔａｑ）、Ｔｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（Ｔｔｈ）、Ｔｈｅｒｍｕｓ ｆｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔｈｅｒｍｉｓ ｆｌａｖｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｃｏｃｃｕｓ ｌｉｔｅｒａｌｉｓまたはＰｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ（Ｐｆｕ）から得た熱安定性ＤＮＡポリメラーゼ］、ＤＮＡポリメラーゼ補因子およびｄＮＴＰｓを含むことができる。
また、本発明のキットが免疫酵素療法を利用する場合、本発明のキットは、ＥＤＮに特異的な抗体およびその容易な検出のための蛍光マーカーとともに抗体反応のための試薬などを含むことができる。
本発明のキットは、前記した試薬の成分を含む多数の別途のパッケージングまたはコンパートメントで製作することができる。好ましくは、前記診断キットは、分析方法に適した一種類またはそれ以上の他の構成成分組成物、溶液または装置をさらに含んで構成されうる。一具体例として、本発明のキットは、サンプルを入れる区画されたキャリア手段、ＥＤＮ濃度を検出する手段が含まれた容器を含む１つ以上の容器を含むことができる。
このように、本発明では、細気管支炎患者から好酸球の顆粒化現象が起こることを利用して、その産物であるＥＤＮの濃度を測定することにより、特に好ましくは、細気管支炎３ヶ月〜５目のＥＤＮ濃度を測定することにより、再発性喘鳴または喘息の予後を判断することができることを確認し、これを活用して、再発性喘鳴または喘息の診断および治療剤を開発または研究できることを示唆する。
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。これらの実施例は、ひたすら本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例により制限されるものと解釈されないことは、当業界で通常の知識を有する者にとって自明である。Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ（２０１０）の文献を参照して実験を行った。
実験方法
１〜２４ヶ月の乳幼児のうちＲＳＶ（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、マイコプラズマ、およびメタニューモウイルスに対して最初の発作を起こした１００人の各患者を対象とするが、任意的、二重盲検法（ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ）、プラセボ（偽薬）−調整、並行群（ｐａｒａｌｌｅ ｇｒｏｕｐ）に分け、１〜２４ヶ月の乳幼児からは分析のための試料として血清を使用した。
また、分析試料として喀痰を使用する場合には、７〜１０歳の児童のうち、ＲＳＶ（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、マイコプラズマ、およびメタニューモウイルスに対して最初の発作を起こした１００人の各患者を対象に、前記の乳幼児と同じ群にグルーピングして分析を行った。
喘息の症状または抗喘息治療の病歴を持つ細気管支炎の患者は除き、細気管支炎以前に喘鳴があった子供たちも除いた。３６週の妊娠前に生まれ、慢性疾患を患っている場合も除いた。ワクチン接種をきちんとした１〜２４ヶ月の５０人の正常な子供を対照群として登録した。彼らはアレルギー疾患、喘息または空気を介してのどのような感染もなかった。
一方、細気管支炎の重症度の評価は、以前に公知された症状スコアリングシステムを基礎にして行われた（Ｐａｒｋｉｎ ｅｔ ａｌ. １９９６）：呼吸率（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｒａｔｅ）、喘鳴（ｗｈｅｅｚｉｎｇ）、退縮（ｒｅｔｒａｃｔｉｏｎ）、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）および吸気対呼気の比率（ｉｎｓｐｉｒａｔｏｒｙ−ｔｏ−ｅｘｐｉｒａｔｏｒｙ ｒａｔｉｏ）の項目を０、１、２の範囲に分けて、最終的なスコアは、最大値１０に要約した。そして、ウイルス感染を間接免疫蛍光法によって非咽頭吸引でウイルス性抗原によって確認した。すべての乳幼児は、入院中にβ2−アゴニストを用いた通常の治療を受けたが、副腎皮質ステロイドの処方は受けなかった。
１２週間、以下のようなグループを対象に、一日に一度、夜に４ｍｇを投与した。Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．からプラセボ（偽薬）として不活性、経口類似グラニュールを提供された。ブラインディング（ｂｌｉｎｄｉｎｇ）のアクティブおよびプラセボグラニュールを薬剤科からコンピュータ生成された任意的割り当てスケジュールにより提供された。すべての実験および患者を全体の実験期間中にブラインド状態に維持した。β2−アゴニスト以外処方された追加の喘息の治療は行われなかった。
病歴、物理的検討および日常的な血液テストが全体の患者に対して行われ、症状スコアを記録した。フォロー（追跡）−アップデータを１２ヶ月間、１ヶ月ごとに収集し（つまり、０、１、２、３、４・・・・１２月）、喘鳴または喘息に対する２週間ごとの電話または医師の訪問を通じて喘息の薬物治療に対する調査を行った。
このとき、実験群および対照群の患者の親の同意および病院の倫理委員会の承認を受けた。
［分析対象グループ］
（１）ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ ｏｒａｌ ｇｒａｎｕｌｅｓ［ＲＳＶ−Ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ（ＲＳＶ−ＭＯＮＴ）グループ］処理群およびマッチングプラセボ［ＲＳＶ−Ｐｌａｃｅｂｏｓ（ＲＳＶ−ＰＬＣ）グループ］処理群
（２）メタニューモウイルス治療剤処理群［メタニューモウイルス−Ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ ｏｒａｌ ｇｒａｎｕｌｅｓ）グループ］およびマッチング、プラセボ処理群
（３）マイコプラズマ治療剤［マイコプラズマ−クラリスロマイシングループ］処理群およびマッチングプラセボ処理群
血清および喀痰の収集と分析
まず、各実験群および対照群から血清を収集し、血清中のＥＤＮレベルをプロトコル（ＭＢＬ、Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ）の説明書に基づいてＥＬＩＳＡによって測定し、結果をｎｇ／ｍｌで表示した。このようなＥＬＩＳＡ＜０．６２ｎｇ／ｍｌの最小検出の限界、＞３００ｎｇ／ｍｌの最大検出限界、およびＥＣＰと交差反応なしに、ヒトＥＤＮを検出した。すべての分析は２回ずつ実行し、平均値で統計学的分析に用いられた。
また、喀痰の収集は、すべての実験群および対照群を対象にＤｅＶｉｌｂｉｓｓ ＵｌｔｒａＮｅｂ ９９ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｎｅｂｕｌｉｚｅｒを利用して製造した３％の高張液食塩水の煙霧を吸引させて喀痰を誘導し、このとき、唾液や後鼻濡の汚染を防止するために生理食塩水で口をすすぎ、鼻をかんだ後、３％の高張液食塩水の煙霧を吸入させた後、消毒された容器に２分ごとに喀痰排出を試みるようにして喀痰を収集し、喀痰中ＥＤＮの測定は、ＥＤＮに対する抗体を使用した免疫測定法を用いて測定した。
統計学的分析
すべてのデータは、処理コードによりグルーピングされて、細気管支炎後、好酸球脱顆粒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ）が喘鳴と関連しているか否かを１次結果として決定づけた。喘鳴（ｗｈｅｅｚｉｎｇ）または喘息の再発のマーカーとして、各測定の瞬間のＥＤＮレベルを調査した。
３グループの差異を表すデータのスクリーニングは、Ｋｒｕｓｋａｌｌ−Ｗａｌｌｉｓ ｔｅｓｔを用いて行い、有意味な差異点が確認されたとき、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ ｔｅｓｔを用いて、個別のグループを比較して、好酸球脱顆粒化のマーカーおよび他のパラメータの測定に使用した。Ｓｐｅａｒｍａｎ相関係数を計算して値間の相関関係を評価した。Ｐ−ｖａｌｕｅが０．０５以下のとき、統計学的に有意味なものとみなした。
実施例１：ＥＤＮと再発性喘息／喘鳴との相関関係を確認
実験に使用された患者情報は、以下の通りである。特に乳幼児の生後１〜２４ヶ月に該当する発病原因菌による細気管支炎の発病乳幼児を以下のようにグルーピングして、これら患者および正常対照群から前記記述されたように、血清および喀痰を収集して相関関係を分析した。
＜１＞（ＲＳＶ−ＭＯＮＴ、ＲＳＶ−ＰＬＣ、対照群それぞれ）：
−ｎ：７１，７９，２８
−年齢の範囲（血清試料の分析対象）１−２３ヶ月、１−２３ヶ月、１−２３ヶ月
−年齢の範囲（喀痰試料の分析対象）：７〜１０歳、７〜１０歳、７〜１０歳
−性別Ｍ：Ｆ：５４：２５、４６：２５、１２：１６
−アトピー性遺伝（ａｔｏｐｉｃ ｈｅｒｅｄｉｔｙ）％：１８．５、１６．２、０．０
−血中好酸球ｍｍ３、平均（範囲）：１９０（１１−８０９）、１６８（３９−９００）、９１（４９−３３４）
−症状スコア、１−１０、平均（範囲）：６．１（４−９）、５．９（４−９）、ｎ／ａ
＜２＞（メタニューモウイルス−治療剤処理群、メタニューモウイルス−プラセボ群、対照群それぞれ）：
−ｎ：７０，８０，２７
−年齢の範囲：１−２３ヶ月、１−２３ヶ月、１−２３ヶ月
−年齢の範囲（喀痰試料の分析対象）：７〜１０歳、７〜１０歳、７〜１０歳
−性別Ｍ：Ｆ：５５：２７、４４：２６、１１：１８
−アトピー性遺伝（ａｔｏｐｉｃ ｈｅｒｅｄｉｔｙ）％：１８．０、１５．２、０．０
−血中好酸球ｍｍ３、平均（範囲）：１９０（１１−８０９）、１６８（３９−９００）、９１（４９−３３４）
−症状スコア、１−１０、平均（範囲）：６．１（４−９）、５．９（４−９）、ｎ／ａ
＜３＞（マイコプラズマ（Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）−治療剤処理群、マイコプラズマ−プラセボ群、対照群それぞれ）：
−ｎ：６８，７８，２７
−年齢の範囲：１−２２ヶ月、１−２４ヶ月、１−２１ヶ月
−年齢の範囲（喀痰試料の分析対象）：７〜１０歳、７〜１０歳、７〜１０歳
−性別Ｍ：Ｆ：５３：２４、４０：２６、１３：１４
−アトピー性遺伝（ａｔｏｐｉｃ ｈｅｒｅｄｉｔｙ）％：１８．０、１５．２、０．０
−血中好酸球ｍｍ３、平均（範囲）：１９０（１１−８０９）、１６８（３９−９００）、９１（４９−３３４）
−症状スコア、１−１０、平均（範囲）：６．１（４−９）、５．９（４−９）、ｎ／ａ
ここで、前記治療剤処理群は疾病群であり、プラセボ処理群は安定期群であり、対照群は疾病にかかっていない健康な正常群をいう。
また、具体的に、ベースライン、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月から１２ヶ月まで毎月、血清ＥＤＮレベルおよび喘息と喘鳴との間の相関関係を調査した。
＜結果１−１＞
血清ＥＤＮ分析を介してＲＳＶ−ＰＬＣグループ（ｒ＝０．７０、Ｐ＜０．０００１）およびＲＳＶ−ＭＯＮＴグループ（ｒ＝０．５２、Ｐ＜０．００１）においては、１２ヶ月、喘鳴の発作の全体回数と４ヶ月（治療の最後）における血清ＥＤＮレベルが有意的に相関関係があり、一方、１２ヶ月目の全体喘鳴発作の数と４ヶ月未満の２ヶ月、３ヶ月および４ヶ月を超えた５〜１２ヶ月目のＥＤＮレベルの間には、有意味な相関関係が現れなかった。
また、上昇されたＥＤＮなレベルのカットオフ（ｃｕｔ−ｏｆｆ）として４５ｎｇ／ｍｌの（ｍｅｄｉａｎ＋２ＳＤ）を用いて、１２ヶ月の間に累積される再発喘鳴に対する４ヶ月目のＥＤＮレベルの陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は６５％であり、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８０％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７０％そして特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７２％であった。
また、ＲＳＶ−ＰＬＣグループ（ＲＳＶ細気管支炎の自然なプロセス）では、ＥＤＮが１００ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後２回以上再発性喘鳴が現れる確率は７５％であることが示された。つまり、ＥＤＮが１００ｎｇ／ｍｌ以上の場合、２回以上喘鳴が発生した確率が７５％であることが分かった。
興味深いことに、ＲＳＶ−ＰＬＣグループ（すなわち、ＲＳＶ細気管支炎の自然なプロセス）での最初の全体好酸球は、１２ヶ月目（ｓｐｅａｒｍａｎ ｒ＝０．４０４４、Ｐ＝０．００５９）喘鳴の発作の累積的な数と関連があったのに対し、ＲＳＶ−ＭＯＮＴグループ（ｓｐｅａｒｍａｎ ｒ＝０．４−０．０５４７０、Ｐ＝０．６５５３）で、このような２値の間には、相関関係がなかった。
その結果、血清ＥＤＮ分析を介してＲＳＶ−ＰＬＣグループ（ｒ＝０．７０、Ｐ＜０．０００１）およびＲＳＶ−ＭＯＮＴグループ（ｒ＝０．５２、Ｐ＜０．００１）では１２ヶ月、喘鳴の発作の全体回数と４ヶ月（治療の最後）での血清ＥＤＮレベルは有意的に相関関係があり、一方、１２ヵ月目、全体喘鳴の発作の数と４ヶ月未満の２ヶ月、３ヶ月および４ヶ月を超えた５〜１２ヶ月目のＥＤＮレベルの間には、有意味な相関関係が現れなかった。
また、上昇されたＥＤＮレベルのカットオフ（ｃｕｔ−ｏｆｆ）として４５ｎｇ／ｍｌの（ｍｅｄｉａｎ＋２ＳＤ）を用いて、１２ヶ月の間に累積される再発喘鳴に対する４ヶ月目のＥＤＮレベルの陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ ）は６５％であり、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８０％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７０％そして特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７２％であった。
また、ＲＳＶ−ＰＬＣグループ（ＲＳＶ細気管支炎の自然なプロセス）では、ＥＤＮが１００ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後２回以上再発性喘鳴が現れる確率は７５％であることが示された。即ち、ＥＤＮが１００ｎｇ／ｍｌ以上の場合、２回以上喘鳴が発生した確率が７５％であることが分かった。
興味深いことに、ＲＳＶ−ＰＬＣグループ（すなわち、ＲＳＶ細気管支炎の自然なプロセス）での最初の全体好酸球は、１２ヶ月目（ｓｐｅａｒｍａｎ ｒ＝０．４０４４、Ｐ＝０．００５９）喘鳴の発作の累積的な数と関連があったのに対し、ＲＳＶ−ＭＯＮＴグループ（ｓｐｅａｒｍａｎ ｒ＝０．４−０．０５４７０、Ｐ＝０．６５５３）で、このような２値の間には相関関係がなかった。
＜結果１−２＞
血清ＥＤＮ分析を介してメタニューモウイルス治療剤処理群（ｒ＝０．５０、Ｐ＜０．０００１、メタニューモウイルスプラセボ処理群（ｒ＝０．６８、Ｐ＜０．０００１）では１２ヶ月、喘息および喘鳴の発作の全体回数と３ヶ月（治療の最後）での血清ＥＤＮレベルが有意的に相関関係があり、一方、１２ヶ月目の全体喘鳴の発作の数と３ヶ月未満の２ヶ月、１ヶ月および３ヶ月を超えた４〜１２ヶ月目のＥＤＮレベルの間には、有意味な相関関係が現れなかった。
また、上昇されたＥＤＮレベルのカットオフ（ｃｕｔ−ｏｆｆ）として５０ｎｇ／ｍｌの（ｍｅｄｉａｎ＋２ＳＤ）を用いて、１２ヶ月の間に累積される再発喘鳴に対する３ヶ月目のＥＤＮレベルの陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は７０％であり、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８２％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７５％そして特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７０％であった。
また、メタニューモウイルスによる細気管支炎の自然なプロセスでＥＤＮが８０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後３回以上再発性喘息および喘鳴が現れる確率は８０％であることが示された。つまり、ＥＤＮが８０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、３回以上喘息および喘鳴が発生した確率が８０％であることが分かった。
＜結果１−３＞
血清ＥＤＮ分析を介してマイコプラズマ治療剤処理群（ｒ＝０．５０、Ｐ＜０．０００１）、マイコプラズマプラセボ処理群（ｒ＝０．６８、Ｐ＜０．０００１）では１２ヶ月、喘息および喘鳴の発作の全体回数と５ヶ月（治療の最後）での血清ＥＤＮレベルは有意的に相関関係があり、一方、１２ヶ月目の全体喘鳴の発作の数と５ヶ月未満の１〜４ヶ月および５ヶ月を超えた６〜１２ヶ月目のＥＤＮレベルの間には、有意味な相関関係が現れなかった。
また、上昇されたＥＤＮレベルのカットオフ（ｃｕｔ−ｏｆｆ）として６０ｎｇ／ｍｌの（ｍｅｄｉａｎ＋２ＳＤ）を用いて、１２ヶ月の間に累積される再発喘鳴に対する５ヶ月目のＥＤＮレベルの陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ ）は６３％であり、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は７７％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７８％そして特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は６８％であった。
また、マイコプラズマによる細気管支炎の自然なプロセスでＥＤＮが１３０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後３回以上再発性喘息および喘鳴が現れる確率は８３％であることが示された。つまり、ＥＤＮが１３０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、３回以上喘息および喘鳴が発生した確率が８３％であることが分かった。
＜結果１−４＞
前記の結果＜１−３＞の内容が実験群と対照群の血清を対象に分析した結果であれば、本内容は、喀痰試料を対象に分析した結果を示したものであって、マイコプラズマによる感染で細気管支炎が誘発された児童を対象に分析を行った。
上述のように、７歳〜１０歳の児童を対象に分析した結果、上昇されたＥＤＮレベルのカットオフ（ｃｕｔ−ｏｆｆ）として７０ｎｇ／ｍｌ（ｍｅｄｉａｎ＋２ＳＤ）を用いて、１２ヶ月の間に累積される再発喘鳴に対する４ヶ月目のＥＤＮレベルの陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は７３％であり、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８７％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７８％そして特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７０％であった。
マイコプラズマによる細気管支炎の自然なプロセスでＥＤＮが８０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後３回以上再発性喘息および喘鳴が現れる確率は８８％であることが示された。つまり、ＥＤＮが８０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、３回以上喘息および喘鳴が発生した確率が８８％であることが分かった。
特に定義されない限り、本願で使用されるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者が通常理解するのと同じ意味を持つ。本願に記述されたものと類似または等価の任意の方法および材料が本発明をテストするための実行において使用されうる。

Claims (13)

  1. 細気管支炎以後の喘息または喘鳴の診断に必要な情報を提供するために、細気管支炎３ヶ月〜５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルを測定する方法。
  2. 前記ＥＤＮのレベルは、血清または喀痰中のＥＤＮの濃度であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  3. 前記細気管支炎は、呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ、ＲＳＶ）、メタニューモウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、麻疹ウイルス、およびマイコプラズマからなる群から選択される有害菌の感染により誘発されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  4. 前記細気管支炎が呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ、ＲＳＶ）による感染により誘発された場合、ＲＳＶ細気管支炎４ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが４５ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は６５％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８０％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７０％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７２％の値を有することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  5. 前記細気管支炎がメタニューモウイルスによって誘発された場合、細気管支炎３ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが５０ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ ）は７０％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８２％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７５％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７０％の値を有することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  6. 前記細気管支炎がマイコプラズマによって誘発された場合、細気管支炎５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが６０ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は６３％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は７７％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７８％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は６８％の値を有することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  7. 前記方法は、生後１ヶ月〜２４ヶ月の乳幼児の血清中ＥＤＮレベルを測定することを特徴とする、請求項４〜６に記載の方法。
  8. ＲＳＶ細気管支炎の自然なプロセスでＥＤＮレベルが１００ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後２回以上再発性喘息または喘鳴が現れる確率が７５％であり、
    メタニューモウイルスによる細気管支炎の自然なプロセスでＥＤＮレベルが８０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後３回以上再発性喘息または喘鳴が現れる確率が８０％であり、
    マイコプラズマの自然なプロセスでＥＤＮレベルが１３０ｎｇ／ｍｌ以上の場合、その後３回以上再発性喘息または喘鳴が現れる確率が８３％であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  9. 喀痰試料を使用する場合、前記細気管支炎がマイコプラズマによって誘発された場合、細気管支炎４ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）のレベルが７０ｎｇ／ｍｌ以上のとき、再発性喘鳴の陽性予測値（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＰＰＶ）は７３％、陰性予測値（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ、ＮＰＶ）は８７％、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は７８％および特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は７０％の値を有することを特徴とする、請求項２に記載の方法。
  10. 喀痰試料を使用して分析する場合には、７歳〜１０歳の児童期の喀痰中ＥＤＮレベルを測定することを特徴とする、請求項２に記載の方法。
  11. 細気管支炎３ヶ月〜５ヶ月目の好酸球由来神経毒（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ、ＥＤＮ）の濃度を測定する製剤を含む、細気管支炎以後の再発性喘息または喘鳴（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｗｈｅｅｚｉｎｇ）診断用キット。
  12. 前記ＥＤＮの濃度は、血清または喀痰中ＥＤＮの濃度であることを特徴とする、請求項１１に記載のキット。
  13. 前記製剤は、ＥＤＮに特異的に結合することができるプライマー、プローブまたは抗体であることを特徴とする、請求項１１に記載のキット。
JP2017522176A 2014-10-28 2015-10-27 細気管支炎後の喘息の診断のためのマーカーおよびその用途 Active JP6420475B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2014-0147771 2014-10-28
KR1020140147771A KR101611743B1 (ko) 2014-10-28 2014-10-28 모세기관지염 후 천식 진단을 위한 마커 및 이의 용도
PCT/KR2015/011391 WO2016068584A1 (ko) 2014-10-28 2015-10-27 모세기관지염 후 천식 진단을 위한 마커 및 이의 용도

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2017533431A true JP2017533431A (ja) 2017-11-09
JP6420475B2 JP6420475B2 (ja) 2018-11-07

Family

ID=55800845

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017522176A Active JP6420475B2 (ja) 2014-10-28 2015-10-27 細気管支炎後の喘息の診断のためのマーカーおよびその用途

Country Status (4)

Country Link
JP (1) JP6420475B2 (ja)
KR (1) KR101611743B1 (ja)
CN (1) CN107109476A (ja)
WO (1) WO2016068584A1 (ja)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180093179A (ko) 2017-02-10 2018-08-21 인제대학교 산학협력단 천식 또는 알레르기 질환 신속 진단용 키트
KR102033280B1 (ko) 2019-02-14 2019-10-16 인제대학교 산학협력단 재발성 천명의 치료 반응성을 예측하는 방법
CN110361545A (zh) * 2019-08-28 2019-10-22 重庆三峡医药高等专科学校 一种检测嗜酸性粒细胞源性神经毒素的胶体金试纸条
KR102064136B1 (ko) * 2019-10-23 2020-01-08 인제대학교 산학협력단 호산구-유래 신경독을 이용한 호흡기 감염증에서 천명을 판별하는 방법

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003000286A1 (fr) * 2001-06-22 2003-01-03 Daiichi Suntory Pharma Co., Ltd. Remedes pour maladies eosinophiliques
WO2008144850A1 (en) * 2007-05-30 2008-12-04 Advanced Diagnostic Systems Ltd Assay for determining risk of development of allergic disorders

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1718972A4 (en) 2004-02-17 2009-05-27 Binax Inc METHOD AND KITS FOR PROOFING MULTIPLE DISEASES

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003000286A1 (fr) * 2001-06-22 2003-01-03 Daiichi Suntory Pharma Co., Ltd. Remedes pour maladies eosinophiliques
WO2008144850A1 (en) * 2007-05-30 2008-12-04 Advanced Diagnostic Systems Ltd Assay for determining risk of development of allergic disorders

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHANG-KEUN KIM: "Eosinophil-Derived Neurotoxin: A Novel Biomarker for Diagnosis and Monitoring of Asthma", KOREAN JOURNAL OF PEDIATRICS, vol. 56, no. 1, JPN6018004413, 2013, pages 8 - 12, XP055534504, DOI: doi:10.3345/kjp.2013.56.1.8 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2016068584A1 (ko) 2016-05-06
JP6420475B2 (ja) 2018-11-07
KR101611743B1 (ko) 2016-04-11
CN107109476A (zh) 2017-08-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Jin et al. Diagnostic value and dynamic variance of serum antibody in coronavirus disease 2019
Kim et al. A randomized intervention of montelukast for post-bronchiolitis: effect on eosinophil degranulation
Seror et al. Association of anti–Porphyromonas gingivalis antibody titers with nonsmoking status in early rheumatoid arthritis: results from the prospective French cohort of patients with early rheumatoid arthritis
CN103097552B (zh) 用于诊断短暂性缺血发作的生物标志物
JP6420475B2 (ja) 細気管支炎後の喘息の診断のためのマーカーおよびその用途
JP6755240B2 (ja) 新規分子バイオマーカーを使用して慢性閉塞性肺疾患（ｃｏｐｄ）を診断する方法
KR20140108718A (ko) 가와사키 질환용 바이오마커
JP2017519523A (ja) 新規分子バイオマーカーを使用して慢性閉塞性肺疾患（ｃｏｐｄ）を診断する方法
de Oliveira Santos et al. Impact of SARS-CoV-2 on saliva: TNF-⍺, IL-6, IL-10, lactoferrin, lysozyme, IgG, IgA, and IgM
WO2021250028A1 (en) Methods for detecting and treating covid patients requiring intensive care
Weinberger et al. Long-lasting cough in an adult German population: incidence, symptoms, and related pathogens
WO2023143327A1 (zh) 缺氧诱导因子1α作为标志物在抑郁症复发诊断中的应用
CN111094981A (zh) Pct和pro-adm作为监测抗生素治疗的标记物
Fong et al. Issues in community-acquired pneumonia
JP2023521156A (ja) 重症急性呼吸器症候群（ｓａｒｓ）における疾患進行を予後診断するためのプロアドレノメデュリン
Wood et al. Persistent airway obstruction after virus infection is not associated with airway inflammation
Gotoh et al. Noninvasive biological evaluation of response to pranlukast treatment in pediatric patients with Japanese cedar pollinosis.
JP4489431B2 (ja) 喘息の診断に用いる方法および組成物
Mihara et al. Bordetella pertussis is a common pathogen in infants hospitalized for acute lower respiratory tract infection during the winter season
CN111440859A (zh) 一种人呼吸道合胞病毒感染的生物标志物及应用
AU2008209319A1 (en) Method of diagnosis
Arslan et al. Clinical comparison of omicron and delta variants in older COVID-19 patients and the effect of vaccination status
KR102064136B1 (ko) 호산구-유래 신경독을 이용한 호흡기 감염증에서 천명을 판별하는 방법
Pedachenko et al. Molecular Characteristics of Blood Serum After Covid-19 Vaccination in a Remote Period
Das et al. Persistence of SARS-CoV-2 in COVID-19 patients during the second wave of the pandemic in India

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20170425

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20180126

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20180213

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20180514

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20180918

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20181011

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6420475

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250