JP2017528123A - ゲノム解析装置およびその使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
上記で要約したように、本発明の態様は、完結ゲノム解析装置を含む。装置は、完結ゲノム解析組織標本装置であるため、核酸成分、たとえば、細胞、組織、精製または処理済み試料等を含む初期生体試料からゲノム解析を行うために必要なすべての構成要素を含む。したがって、装置は、初期生体試料を装置内に導入することができ、装置において完全なゲノム解析プロトコルを行うことができ、ユーザが結果を取り出すことができ、試料導入の時点と結果が戻る時点との間にユーザによる装置との対話があるとしてもわずかであるように、構成される。装置は、後により詳細に検討するように、ゲノム解析を行うために必要なすべての液体処理構成要素および他の構成要素を含む。装置は、所与のゲノム解析プロトコルのすべてではなくても少なくともいくつかのステップが、装置への生体試料の導入、任意の必要な試薬の装填および情報の入力、ならびに生体試料からゲノム解析を行うように装置を作動させることを除き、人間の介入なしに行うことができるという点で自動化されている。装置において自動化することができるゲノム解析プロトコルのステップとしては、限定されないが、液体移送ステップ、試薬追加ステップ、熱循環ステップ、試料インタロゲーションステップ等が挙げられる。
上記で要約したように、本明細書に記載する装置は、熱チップモジュールを含む。熱チップモジュールの例を図8に示し(さらに詳細に後述する)、かつ図2および図5における要素(5)として、本発明の態様による装置に示す。装置は、単一の熱チップモジュールまたは2つの熱チップモジュールを含むことができる。熱チップモジュールは、1つまたは複数の自蔵位置(たとえば、ウェル)を含むプレートまたはチップ型構造であり、各自蔵位置は、CLCを収容するように構成されている(自蔵CLC位置とも呼ぶ)。各自蔵CLC位置は、頂部が解放して、その中に存在するCLCに対する液体アクセスを可能にする。熱チップモジュールの所与の自蔵CLC位置によって画定される容積は、変化する可能性があり、場合によっては、5μl〜20μl等、2μl〜1mlの範囲である。所与の自蔵CLC位置の断面形状もまた変化する可能性があり、対象となる断面形状としては、限定されないが、円筒状、円錐形、切頭円錐形、円形、矩形(正方形を含む)、三角形等が挙げられる。各自蔵CLC位置の寸法は変化する可能性があるが、場合によっては、自蔵CLC位置は、最長断面寸法(たとえば、直径)が2.5mm〜10mm等、1mm〜25mmの範囲であり、深さが3mm〜20mm等、1mm〜30mmの範囲の深さである。所与の熱チップモジュールに存在する自蔵CLC位置の数もまた変化する可能性があり、場合によっては、500〜5,000または1,400〜2,400等、200〜10,000の範囲である。いくつかの実施形態では、自蔵CLC位置の数は、たとえば、従来のマルチウェルプレートとの対応が望まれる実施形態では、96または384の倍数、たとえば2304である。いくつかの具体的な実施形態では、熱チップモジュールの自蔵CLC位置は、特定の間隔(またはピッチ)を有する複数の生体源から由来する試料、たとえば、鳥卵に対する試料採取ユニットから採取された試料(より詳細に後述する)を受け入れるために対応するような間隔があけられている複数のグループまたはクラスタで存在する。
CLC生成ステーションには、熱チップモジュール内の各自蔵CLC位置にキャリア流体を充填しかつ再充填し、流体を封入してCLCを生成する責務がある。図1、図2、図3および図4において要素Dとして、かつ図14および図15において要素24として、CLC生成ステーションの例を示す。CLC生成ステーションは、1つまたは複数の投与ポンプと、すべての自蔵CLC位置を宛先とすることを可能にするマニホールド(たとえば、2つ、3つまたはそれより多い)とを含むことができる。各流体の送達および高さは、CLC生成ステーションによって設定される。CLC生成ステーションはまた、自蔵CLC位置に対して洗浄プロセス(自蔵CLC位置を「リセットする」とも呼ぶ)を行うようにも構成することができる。自蔵CLC位置を清浄しリセットすることは、CLC生成/リセットステーションにより、たとえば、真空ベースシステムを用いて、自蔵CLC位置の流体含有物を除去し、たとえば1種または複数種の灰溶液を用いて、自蔵CLC位置を洗浄、リセットおよび生成機能を用いてキャリア流体および封入流体を自蔵CLC位置に堆積させることにより、行うことができる。真空動作および清浄動作は、装置のCLC堆積動作とは別個の場所で別個の堆積ヘッド(たとえば、図14および図15における要素(23)を参照)を用いて行うことができることに留意されたい。
試料受入位置
試料受入位置は、所望の生体源から所望の形態で生体試料を受け入れるように構成されている。いくつかの実施形態では、試料受入位置は、多重試料貯蔵システム、たとえばマルチウェルプレートに対応し、他の実施形態では、試料受入位置は、外部試料収集モジュール、たとえば後述するような鳥卵試料採取ユニット(ESU)から試料を受け取るように構成されている。図2、図4および図5において要素(I)として、試料受入位置の例を示す。
試薬受入位置は、所望の形態でアッセイ試薬およびマスタミックス試薬を受け入れるように構成されている。アッセイ試薬とは、特定のゲノムアッセイに対して特有の試薬(たとえば、配列特異的プライマ、アダプタ等)を意味する。マスタミックス試薬とは、複数の異なるアッセイで使用することができる試薬(たとえば、酵素、バッファ、ユニバーサルプライマ等)を意味する。いくつかの実施形態では、アッセイ試薬および/またはマスタミックス試薬は、バルク溶液として、たとえば試薬槽で提供され、他の実施形態では、それらは、業界標準プレート(たとえば、96ウェル、384ウェル等)で提供される。試薬受入位置は、一度に1種もしくは複数種のアッセイ試薬および/または1種もしくは複数種のマスタミックス試薬を受け入れるように構成することができる。
上記で要約したように、本明細書に記載する装置は、1つまたは複数のプレート位置(たとえば、試料プレート、アッセイプレートおよびマスタミックスプレート用)を含む。装置に存在するプレート位置の数は変化する可能性があるが、場合によっては、装置は、10〜80のプレート位置等、1〜100のプレート位置、たとえば、50のプレート位置を含む。プレート位置は、装置において任意の好都合な方法で配置することができ、装置が複数のプレート位置を含む場合によっては、複数のプレート位置は、たとえば、装置の入口ポートに対して類似する形態で、互いに隣接して配置される。プレート位置は、マルチウェルプレート等、たとえば96もしくは384マルチウェルプレート等の理化学用プレート、または類似する構造、たとえば、試験チューブホルダもしくはラック等を保持するように構成された、装置の領域またはエリアである。所与のプレート位置は、理化学用プレートを保持するように構成された単純な段または支持体であり得る。プレート位置の寸法は変化する可能性があるが、場合によっては、プレート位置は、理化学用プレートと安定して関連するように構成された平面の表面を有し、その平面の表面は、10mm〜200mm等、10mm〜400mmの範囲の領域を有することができる。平面の表面は、要求に応じて、任意の好都合な形状、たとえば、円形、矩形(正方形を含む)、三角形、楕円形等を有することができる。プレート位置とリサーチプレートとの間に安定した関連付けを可能にするために、プレート位置は、1つまたは複数の安定した関連付け要素、たとえば、クリップ、位置合せポスト等を含むことができる。
上記で要約したように、本明細書に記載する装置は、ロボット制御液体ハンドラを含む。ロボット制御液体ハンドラは、プレート位置および熱チップモジュール等、装置のさまざまな位置に液体を移送するように構成されたユニットである。一般的な意味で、ロボット液体ハンドラは、プレート位置および熱チップモジュールの自蔵CLC位置等、装置の2つの別個の位置の間である量の液体を移送することができる任意の液体処理ユニットであり得る。対象となるロボット液体ハンドラは、理化学用プレートのウェル等、装置の第1位置から定義された量の液体を取り除き、その量の液体を装置の第2位置、たとえば、熱チップモジュールの自蔵CLC位置に堆積させることができるものである。ハンドラが移送するように構成される液体の量は、変化する可能性があるが、場合によっては、100nl〜1ml等、100nl〜10mlの範囲である。
インタロゲーションステーションは、熱チップモジュールの各自蔵CLC位置にインタロゲートし、そこから測定値を取得するように構成されている。測定値を用いて、たとえば、アッセイ試薬およびマスタミックス試薬を用いて、所望の遺伝子アッセイプロトコルの完了後の自蔵CLC位置における試料の遺伝子特性を確定することができる。図1に、インタロゲーションステーションの例を要素(9)として示し、図2、図3および図4に、インタロゲーションステーションの具体的な実施形態を要素(E)(すなわち、後述する光学検出ステーション)として示す。
装置は、メインデッキ(図1、図2および図4の要素(1))を含むことができ、そこですべてのプロトコル処理ステップが実行される。メインデッキへのユーザアクセスは、インタロックされるユーザ作動フードを介することができる。トラブルシューティングおよび予防的な保守アクセスのために、キーアクセス可能なキャビネットにおいてメインデッキの下にサービスデッキが取り付けられる。
システムは、120V〜240Vの入力電圧、10アンペア〜35アンペアの入力電流、および50Hz〜60Hzの入力電力周波数と適合性がある。いくつかの用途では、システムは、6SCFMの消費量で6バール(87psi)の最低圧力で乾燥空気が供給されるべきである。一般に、アッセイ試薬およびマスタミックス試薬は、予め調製され、または他の方法で、ユーザによって取得され、後に試薬位置に装填されるバーコード付き試薬プレート(たとえば、「試薬384プレート」)に装填される。さらに、システム流体は、一般に、予め調製されるか、または他の方法でユーザによって取得されて流体モジュール内に装填される。
図1は、本開示の態様による装置の例を示す。この図に示す装置の特徴は、以下を含み、その各々については本明細書の別の場所に詳細に記載する。すなわち、メインデッキ(1)、システムエンクロージャ(3)、熱チップモジュール用の機械作動式蓋(6)、試料分注ヘッド(8)、インタロゲーションステーション(9)、アッセイ分注ヘッド(10)、AC電源キャビネット(A、電源ユニット(PSU)を収容し、機器に来るすべての電力と機器に分配されている電力とを管理するエンクロージャ)、空気圧キャビネット(B、機器におけるさまざまな用途に使用される弁および真空発生器のバンクを含む)、流体圧送キャビネット(C、流体モジュールが、システム流体を供給するリザーバボトルを収容することができる)、ならびにCLC生成およびリセットステーション(D)である。
概略的には、遺伝子型分類アッセイを行うシステムは、以下の機能を有する。
(1)自蔵CLC位置(たとえば、2304位置チップ)をキャリア流体および封入流体で事前充填することにより、単一チップ上に個々のCLCを生成し、
(2)生体試料を追加することにより一意の遺伝子型分類試薬(たとえば、2304)を生成し、
(3)自蔵CLC位置に試薬(または一連の試薬)(たとえば、プライマ、バッファ、酵素、検出可能に標識付けされた成分等)を追加し、対象となる遺伝子型分類アッセイを行うために必要に応じて熱チップモジュールの温度を調節し、
(4)CLC位置にインタロゲートして各試料に対する結果を取得し、それにより、試料の遺伝子型が求められる。
鳥卵の分子雌雄鑑別は、鳥類対象の雌雄を判定する魅力的な方法である。XY異形配偶子を有する哺乳類とは異なり、鳥は、雌にZW異形配偶子がある性染色体系を有する。より具体的には、染色体Wは、鳥類では雌特有の性染色体である。ZW異形配偶子を考慮すると、染色体W特有配列を採用して、鳥卵の雌雄を、そこから由来する試料を用いて判定することができる。広い分類学の有用性を有するポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に基づく手法が開発された。たとえば、雌雄識別方法は、雌特有のW染色体と雌雄両方に発生するZ染色体(雌、ZW、雄、ZZ)との間のイントロンサイズの差を検査することに基づいていた。たとえば、Griffithsら((1998),Mol.Evolution.7:1071−1075)は、ZおよびWの性染色体間ホモログ(gametolog)のホモログ部を増幅するために、プライマの単一セットとともにPCRを採用し、それにより、通常長さが異なるイントロンを組み込む。FridolfssonおよびEllegren(1999、J.Avian Biol.30:116−121)は、同様の手法を開発し、雌雄間のイントロンサイズの差と染色体特有のCHD1遺伝子の分析の組合せを利用した。特に、FridolfssonおよびEllegrenは、CHD1 Wand CHD1Z遺伝子の高度に保存されたプライマ隣接(flanking)イントロン9を適用し、それにより、CHD1WイントロンとCHD1Zイントロンとの一定のサイズ差を利用することにより、非平胸類の鳥の分子雌雄鑑別の汎用的であるとされる方法を開発した。したがって、雌の鳥は、1つの小さい断片(CHD1W)または2つの断面(CHD1WおよびCHD1Z)を示すことによって特徴付けられ、雄は、1つの大きい断片(CHD1Z)のみを示す。1つの特定のプライマの対により、FridolfssonおよびEllegrenは、鳥類系統学を通して11目からの50の鳥の種から47の雌雄を鑑別することができた。
(1)オイルで予め充填することにより、熱チップモジュールの自蔵CLC位置に個々のCLCを生成し(たとえば、図11に示すように、合計1428の位置に対して17の自蔵CLC位置の84のクラスタ)、
(2)雌雄判定アッセイを行うために鳥卵からの生体試料(たとえば、血液試料)および試薬(または一連の試薬)を加えることにより、CLC内に一意の分子反応をもたらし、
(3)自蔵CLC位置内で生体試料を熱的に溶解させ/処理して、遺伝子鳥類雌雄判定アッセイを行い、
(4)CLC位置にインタロゲートして、各試料に対する結果を取得し、それにより、鳥卵の雌雄が判定される。
(1)AC電源ユニット/キャビネット:電源ユニット(PSU)を収容するエンクロージャ。機器に来るすべての電力および機器に分散されている電力も管理する。
(2)DC通信ユニット/キャビネット:PSUからのDC電力すべてが終端するユニット。複数の端子ブロック、リレー、デジタル出力/入力およびミニ8を含む。
(3)制御ユニット/キャビネット:これは、機器におけるすべてのロボット移動を制御する複数のドライバ(たとえば、7つのドライバ)を含む。安全システムに関する接点のすべてが位置するのはここである。
(4)空気フィルタユニット:空気は、このユニットを通してフィルタリングされて機器の周囲で調整される。
(5)空気圧ステーション/キャビネット:これは、機器におけるさまざまな用途に対して使用される弁および真空発生器のバンクを含む。
(6)流体モジュール/流体圧送キャビネット:メインデッキの下にあり、流体モジュールが、システム流体、すなわち封入オイル、キャリアオイル、洗浄液を供給するリザーバボトルを収容することができる位置である。位置ホルダは、ユーザの設定を支援しかつ誤りを回避するように、色分けされるかまたは番号が付される。ボトルリザーバは、クイックコネクト接続を有する。ボトルは、最小限、1回のシステム実行を完了するために十分な容量を収容する。
本開示の態様は、装置を動作させるコンピュータコントローラをさらに含み、コントローラは、本明細書に記載するような装置の完全な自動化または部分的自動化のための1つまたは複数のコンピュータ要素をさらに含む。いくつかの実施形態では、コントローラは、コンピュータプログラムが格納されているコンピュータ可読記憶媒体を有するコンピュータを含み、コンピュータプログラムは、コンピュータにロードされると、たとえば上述したように、CLC仲介遺伝子アッセイを行うように装置を作動させる命令を含む。
1.完結ゲノム解析装置であって、
複数の自蔵合成液体セル(CLC)位置を備えた熱チップモジュールと、
熱チップモジュールの各自蔵CLC位置にアクセスするように構成されたCLC生成ステーションと、
試料受入位置と、
試薬受入位置と、
試料受入位置と試薬受入位置と熱チップモジュールとの間で液体を移送するように構成されたロボット制御液体ハンドラと、
熱チップモジュールの各自蔵CLC位置にインタロゲートするように構成されたインタロゲーションステーションと
を備える装置。
2.熱チップモジュールは、1400〜3000の自蔵CLC位置を含む付記1に記載の装置。
3.熱チップモジュール用の機械作動式蓋を備える付記1または2に記載の装置。
4.試薬受入位置は、アッセイプレートおよびマスタミックスプレートを受け入れるように構成されている付記1〜3のいずれか一つに記載の装置。
5.試薬受入位置は、複数のアッセイプレートを受け入れるように構成されている付記4に記載の装置。
6.アッセイプレートおよびマスタミックスプレートは、標準理化学用プレートである付記4または5に記載の装置。
7.ロボット制御液体ハンドラは、試料分注動作、アッセイ分注動作およびマスタミックス分注動作に対して構成された相互交換可能ヘッドを備える付記1〜6のいずれか一つに記載の装置。
8.CLC生成ステーションは、キャリア流体および封入流体を自蔵CLC位置に分注し、自蔵CLC位置を洗浄するように構成されている付記1〜7のいずれか一つに記載の装置。
9.システム流体および廃棄物の収集のための液体リザーバを有する流体モジュールを備える付記1〜8のいずれか一つに記載の装置。
10.バーコードスキャナに作動的に結合されている付記1〜9のいずれか一つに記載の装置。
11.インタロゲーションステーションは、光信号を検出するように構成されている付記1〜10のいずれか一つに記載の装置。
12.インタロゲーションステーションは、熱チップモジュールにおける各自蔵CLC位置に励起光を送出し、そこから放射光を収集するように構成されている付記11に記載の装置。
13.インタロゲーションステーションは、カメラベースの検出システムを備える付記12に記載の装置。
14.励起光はLED由来である付記12または13に記載の装置。
15.インタロゲーションステーションは、複数の波長の光を検出する付記12〜14のいずれか一つに記載の装置。
16.遺伝子型分類装置である付記1〜15のいずれか一つに記載の装置。
17.試料受入位置は、試料プレートを受け入れるように構成されている付記16に記載の装置。
18.試料プレートは標準理化学用プレートである付記17に記載の装置。
19.試料受入位置は、複数の試料プレートを受け入れるように構成されている付記17または18に記載の装置。
20.鳥類雌雄鑑別装置である付記1〜15のいずれか一つに記載の装置。
21.試料受入位置は、複数の鳥卵から生体試料を取得するように構成された卵試料採取ユニット(ESU)に作動的に接続されている付記20に記載の装置。
22.熱チップモジュールの自蔵CLC位置が、複数の鳥卵から生体試料を受け入れるように構成されたピッチで間隔があけられている複数のクラスタで配置されている付記21に記載の装置。
23.複数のクラスタの各々は、2〜40の自蔵CLC位置を有する付記22に記載の装置。
24.熱チップモジュールは、各々が17の自蔵CLC位置を有する84のクラスタを備える付記23に記載の装置。
25.熱チップモジュールは上蓋および下蓋を備え、上蓋および下蓋は、自蔵CLC位置に対応する孔を備え、上蓋が、孔が対応する自蔵CLC位置と整列するように熱チップモジュールに固定され、下蓋が、上蓋の孔を閉鎖するように上蓋の孔との整列からずれるように作動させることができる機構に取り付けられている付記20〜24のいずれか一つに記載の装置。
26.複数の生体試料をゲノム的に解析する方法であって、
付記1〜24のいずれか一つに記載の装置の試料位置に複数の生体試料を導入するステップと、
装置に対し、
(i)熱チップモジュールの対応する自蔵CLC位置における複数の生体試料に対してCLCゲノム解析反応試料を生成し、
(ii)熱チップモジュールに対して熱プログラムを実行することにより、CLCゲノム解析反応試料において反応を行い、
(iii)インタロゲーションステーションにより、熱チップモジュールの対応する自蔵CLC位置におけるCLCゲノム解析反応試料の各々からの信号を検出する
ことによって、遺伝子型分類アッセイを行うように動作させるステップと
を含み、
CLCゲノム解析反応試料の各々に対して検出される信号は、複数の生体試料の各々の遺伝子特性を示す方法。
27.CLCゲノム解析反応試料の各々は、総体積が300nlである付記26に記載の方法。
28.遺伝子型分類アッセイを行うための試薬を備えたアッセイプレートを装置に導入するステップをさらに含む付記26または27に記載の方法。
29.複数の異なるゲノム解析アッセイが行われる付記28に記載の方法。
30.行われる複数の異なるゲノム解析アッセイの各々に対して、異なるアッセイプレートが装置内に導入される付記29に記載の方法。
31.生成するステップは、
キャリア流体および封入流体を熱チップモジュールの各自蔵CLC位置内に分注するようにCLC生成ステーションを動作させることと、
ロボット制御液体ハンドラに対して、
複数の生体試料の各々を熱チップモジュールの対応する自蔵CLC位置内に分注し、
アッセイ試薬を熱チップモジュールの各自蔵CLC位置内に分注し、
マスタミックス試薬を熱チップモジュールの各自蔵CLC位置内に分注する
ように動作させることと
を含む付記26〜30のいずれか一つに記載の方法。
32.ゲノム解析アッセイは遺伝子型分類アッセイである付記26〜31のいずれか一つに記載の方法。
33.ゲノム解析アッセイは鳥類雌雄鑑別アッセイである付記26〜31のいずれか一つに記載の方法。
米国特許法第119条(e)により、本出願は、2014年8月4日に出願された米国仮特許出願第62/032,882号明細書、および2014年8月5日に出願された米国仮特許出願第62/033,279号明細書に対する優先権の利益を主張し、それらの出願の開示内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
Claims (15)
- 完結ゲノム解析装置であって、
複数の自蔵合成液体セル(CLC)位置を備えた熱チップモジュールと、
前記熱チップモジュールの各自蔵CLC位置にアクセスするように構成されたCLC生成ステーションと、
試料受入位置と、
試薬受入位置と、
前記試料受入位置と前記試薬受入位置と前記熱チップモジュールとの間で液体を移送するように構成されたロボット制御液体ハンドラと、
前記熱チップモジュールの各自蔵CLC位置にインタロゲートするように構成されたインタロゲーションステーションと
を備えることを特徴とする装置。 - 前記熱チップモジュールは、1400〜3000の自蔵CLC位置を含むことを特徴とする請求項1に記載の装置。
- 前記熱チップモジュール用の機械作動式蓋を備えることを特徴とする請求項1または2に記載の装置。
- 前記試薬受入位置は、アッセイプレートおよびマスタミックスプレートを受け入れるように構成されていることを特徴とする請求項1〜3のいずれか一項に記載の装置。
- 前記ロボット制御液体ハンドラは、試料分注動作、アッセイ分注動作およびマスタミックス分注動作に対して構成された相互交換可能ヘッドを備えることを特徴とする請求項1〜4のいずれか一項に記載の装置。
- 前記CLC生成ステーションは、キャリア流体および封入流体を前記自蔵CLC位置に分注し、前記自蔵CLC位置を洗浄するように構成されていることを特徴とする請求項1〜5のいずれか一項に記載の装置。
- システム流体および廃棄物の収集のための液体リザーバを有する流体モジュールを備えることを特徴とする請求項1〜6のいずれか一項に記載の装置。
- 前記インタロゲーションステーションは、光信号を検出するように構成されていることを特徴とする請求項1〜7のいずれか一項に記載の装置。
- 前記インタロゲーションステーションは、前記熱チップモジュールにおける各自蔵CLC位置に励起光を送出し、そこから放射光を収集するように構成されていることを特徴とする請求項8に記載の装置。
- 遺伝子型分類装置であることを特徴とする請求項1〜9のいずれか一項に記載の装置。
- 鳥類雌雄鑑別装置であることを特徴とする請求項1〜9のいずれか一項に記載の装置。
- 前記試料受入位置は、複数の鳥卵から生体試料を取得するように構成された卵試料採取ユニット(ESU)に作動的に接続されていることを特徴とする請求項11に記載の装置。
- 複数の生体試料をゲノム的に解析する方法であって、
請求項1〜12のいずれか一項に記載の装置の前記試料位置に複数の生体試料を導入するステップと、
前記装置に対し、
(i)前記熱チップモジュールの対応する自蔵CLC位置における前記複数の生体試料の各々に対してCLCゲノム解析反応試料を生成し、
(ii)前記熱チップモジュールに対して熱プログラムを実行することにより、前記CLCゲノム解析反応試料において反応を行い、
(iii)前記インタロゲーションステーションにより、前記熱チップモジュールの前記対応する自蔵CLC位置における前記CLCゲノム解析反応試料の各々からの信号を検出する
ことによって、遺伝子型分類アッセイを行うように動作させるステップと
を含み、
前記CLCゲノム解析反応試料の各々に対して検出される前記信号は、前記複数の生体試料の各々の遺伝子特性を示すことを特徴とする方法。 - 前記ゲノム解析アッセイが遺伝子型分類アッセイであることを特徴とする請求項13に記載の方法。
- 前記ゲノム解析アッセイが鳥類雌雄鑑別アッセイであることを特徴とする請求項13に記載の方法。
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