JP2017502664A - 骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患に対抗するための手段及び方法 - Google Patents
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Abstract
Description
- 配列番号1〜13及び209〜212からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、並びに/又は
- 配列番号14〜26及び213〜216からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、並びに/又は
- 配列番号27〜39及び217〜220からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、並びに/又は
- 配列番号40〜52及び221〜224からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、並びに/又は
- 配列番号53〜65及び225〜228からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、並びに/又は
- 配列番号66〜78及び229〜232からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、Table 1A(表1)及びTable 1B(表2)並びに図1に示す抗体AT12-023、AT12-025、AT13-024、AT12-019、AT13-022、AT13-023、AT13-031、AT12-020、AT13-033、AT13-034、AT13-035、AT13-036、AT13-037、AT14-013、AT14-014、AT14-015及びAT14-016の重鎖及び軽鎖CDR配列である。
- 配列番号1と少なくとも85%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号14と少なくとも85%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号27と少なくとも85%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号40と少なくとも85%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号53と少なくとも85%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号66と少なくとも85%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。好ましくは、前記配列同一性は、少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。本明細書に前述のとおり、記載のCDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、前記重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT12-023CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、抗体AT12-023由来CDR配列を含有する。
- 配列番号2と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号15と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号28と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号41と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号54と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号67と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT12-025CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT12-025CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号3と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号16と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号29と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号42と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号55と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号68と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT13-024CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT13-024CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号4と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号17と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号30と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号43と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号56と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号69と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT12-019のCDR配列である。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT12-019は、無傷AML細胞と効率的に結合可能であり、これは、AT12-019由来CDR配列を含有する結合化合物を、AML治療及び/又は診断に特に好適なものとする。かかる結合化合物は、たとえば、抗体-薬物コンジュゲート(ADC:antibody-drug conjugate)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT12-019CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT12-019CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号5と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号18と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号31と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号44と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号57と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号70と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT13-022のCDR配列である。興味深いことに、抗体AT13-022は、IgG3アイソタイプのものである。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT13-022は、無傷AML細胞と特異的に結合可能であり、これは、AT13-022由来CDR配列を含有する結合化合物を、AML治療及び/又は診断に特に好適なものとする。かかる結合化合物は、たとえば、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT13-022CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT13-022CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号6と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号19と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号32と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号45と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号58と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号71と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT13-023のCDR配列である。これらは抗体AT13-023のCDR配列である。興味深いことに、AT13-023は、潜在的な殺細胞特性で知られているVH配列のファミリーである、VH4-34ファミリーに属する(Bhatら、1997)。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT13-023は、無傷AML細胞と特異的に結合可能であり、これは、AT13-023由来CDR配列を含有する結合化合物を、AML治療及び/又は診断に特に好適なものとする。かかる結合化合物は、たとえば、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT13-023CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT13-023CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号7と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号20と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号33と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号46と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号59と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号72と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT13-031のCDR配列である。興味深いことに、AT13-031は、潜在的な殺細胞特性で知られているVH配列のファミリーである、VH4-34ファミリーに属する(Bhatら、1997)。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT13-031は、無傷AML細胞と特異的に結合可能である。更に、この抗体は、AML細胞株THP-1の細胞と効率的に結合し、それを殺すことが可能であるゆえ好ましい。したがって、AT13-031由来CDR配列を含有する結合化合物は、AML治療及び/又は診断に特に好適である。かかる結合化合物は、たとえば、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT13-031CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT13-031CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号8と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号21と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号34と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号47と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号60と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号73と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT12-020のCDR配列である。興味深いことに、抗体AT12-020は、IgG3アイソタイプのものである。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT12-020は、無傷AML細胞と特異的に結合可能であり、これは、AT12-020由来CDR配列を含有する結合化合物を、AML治療及び/又は診断に特に好適なものとする。かかる結合化合物は、たとえば、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT12-020CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT12-020CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号9と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号22と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号35と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号48と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号61と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号74と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT13-033のCDR配列である。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT13-033は、無傷AML細胞と特異的に結合可能である。更にこの抗体は、AML細胞株THP-1の細胞と効率的に結合し、それを殺すことが可能であるゆえ好ましい。したがって、AT13-033由来CDR配列を含有する結合化合物は、AML治療及び/又は診断に特に好適である。かかる結合化合物は、たとえば、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT13-033CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT13-033CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号10と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号23と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号36と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号49と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号62と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号75と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT13-034のCDR配列である。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT13-034は、無傷AML細胞と特異的に結合可能であり、これは、AT13-034由来CDR配列を含有する結合化合物を、AML治療及び/又は診断に特に好適なものとする。かかる結合化合物は、たとえば、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT13-034CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT13-034CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号11と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号24と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号37と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号50と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号63と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号76と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT13-035のCDR配列である。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT13-035は、無傷AML細胞と特異的に結合可能である。更にこの抗体は、AML細胞株THP-1の細胞と効率的に結合し、それを殺すことが可能であるゆえ好ましい。したがって、AT13-035由来CDR配列を含有する結合化合物は、AML治療及び/又は診断に特に好適である。かかる結合化合物は、たとえば、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT13-035CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT13-035CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号12と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号25と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号38と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号51と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号64と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号77と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT13-036のCDR配列である。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT13-036は、無傷AML細胞と特異的に結合可能である。更にこの抗体は、AML細胞株THP-1の細胞と効率的に結合し、それを殺すことが可能であるゆえ好ましい。したがって、AT13-036由来CDR配列を含有する結合化合物は、AML治療及び/又は診断に特に好適である。かかる結合化合物は、たとえば、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT13-036CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT13-036CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号13と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号26と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号39と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号52と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号65と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号78と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT13-037のCDR配列である。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT13-037は、無傷AML細胞と特異的に結合可能である。更に、この抗体は、実施例に示すとおり、AML細胞株THP-1の細胞と、患者由来原発AML芽細胞と同様に、効率的に結合し、それらを殺すことが可能であるゆえ好ましい。したがって、AT13-037由来CDR配列を含有する結合化合物は、AML治療及び/又は診断に特に好適である。かかる結合化合物は、たとえば、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT13-037CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT13-037CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号209と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号213と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号217と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号221と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号225と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号229と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT14-013のCDR配列である。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT14-013は、少なくとも3つの異なるFAB分類の原発AML芽細胞と特異的に結合可能であり、これは、AT14-013由来CDR配列を含有する結合化合物を、AML治療及び/又は診断に特に好適なものとする。かかる結合化合物は、たとえば、好ましくはアポトーシスとは独立に、且つ/又は、ADCC、CDC又は、マクロファージ若しくは樹状細胞による食作用とは独立に、AML細胞の増殖を減少させるために使用される。好ましくは、前記結合化合物は、AML細胞死を誘導するために使用される。いくつかの実施形態において、かかる結合化合物は、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT14-013CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT14-013CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号210と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号214と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号218と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号222と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号226と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号230と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT14-014のCDR配列である。興味深いことに、抗体AT14-014は、IgG3アイソタイプのものである。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT14-014は、無傷AML細胞と特異的に結合可能であり、これは、AT14-014由来CDR配列を含有する結合化合物を、AML治療及び/又は診断に特に好適なものとする。かかる結合化合物は、たとえば、好ましくはアポトーシスとは独立に、且つ/又は、ADCC、CDC又は、マクロファージ若しくは樹状細胞による食作用とは独立に、AML細胞の増殖を減少させるために使用される。好ましくは、前記結合化合物は、AML細胞死を誘導するために使用される。いくつかの実施形態において、かかる結合化合物は、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT14-014CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT14-014CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号211と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号215と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号219と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号223と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号227と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号231と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT14-015のCDR配列である。興味深いことに、抗体AT14-015は、IgG3アイソタイプのものである。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT14-015は、無傷AML細胞と特異的に結合可能であり、これは、AT14-015由来CDR配列を含有する結合化合物を、AML治療及び/又は診断に特に好適なものとする。かかる結合化合物は、たとえば、好ましくはアポトーシスとは独立に、且つ/又は、ADCC、CDC又は、マクロファージ若しくは樹状細胞による食作用とは独立に、AML細胞の増殖を減少させるために使用される。好ましくは、前記結合化合物は、AML細胞死を誘導するために使用される。いくつかの実施形態において、かかる結合化合物は、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT14-015CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT14-015CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号212と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号216と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号220と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号224と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号228と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号232と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列、
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物を更に提供する。これらは、抗体AT14-016のCDR配列である。興味深いことに、抗体AT14-016は、IgG3アイソタイプのものである。完全寛解にあるヒトAML患者に由来する抗体AT14-016は、無傷AML細胞と特異的に結合可能であり、これは、AT14-016由来CDR配列を含有する結合化合物を、AML治療及び/又は診断に特に好適なものとする。かかる結合化合物は、たとえば、好ましくはアポトーシスとは独立に、且つ/又は、ADCC、CDC又は、マクロファージ若しくは樹状細胞による食作用とは独立に、AML細胞の増殖を減少させるために使用される。好ましくは、前記結合化合物は、AML細胞死を誘導するために使用される。いくつかの実施形態において、かかる結合化合物は、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)として使用され、結果として毒性化合物がAML細胞へと向けられるか、又はそれは、CDC及び/又はADCCを誘導することにより使用される。代わりに、又は加えて、かかる結合化合物は、腫瘍関連骨髄細胞、たとえばマクロファージ又は樹状細胞による特異的食作用のためにAML細胞をマーキングするために使用でき、続いてこれら細胞は、AML特異的免疫反応を誘導できる。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも85%、より好ましくは少なくとも86%、より好ましくは少なくとも87%、より好ましくは少なくとも88%、より好ましくは少なくとも89%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは100%である。上述のとおり、記載のAT14-016CDR配列における少なくとも1つ、2つ又は3つのアミノ酸残基が、(必ずしも量においてではなく、種類において)同種の結合活性を保持しながら変化してもよい。したがって、上述の重鎖及び軽鎖CDR1、2及び3配列は、記載のAT14-016CDR配列と好ましくは3つ以下、好ましくは2つ以下、より好ましくは1つ以下のアミノ酸が異なる、CDR配列を含有する。
- 配列番号105〜117及び241〜244からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、並びに/又は
- 配列番号118〜130及び245〜248からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、並びに/又は
- 配列番号131〜143及び249〜252からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、並びに/又は
- 配列番号144〜156及び253〜256からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、並びに/又は
- 配列番号157〜169及び257〜260からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、並びに/又は
- 配列番号170〜182及び261〜264からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む。
- 配列番号105と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号118と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号131と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号144と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号157と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号170と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT12-023の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT12-023の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号106と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号119と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号132と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号145と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号158と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号171と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT12-025の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT12-025の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号107と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号120と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号133と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号146と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号159と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号172と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT13-024の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT13-024の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号108と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号121と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号134と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号147と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号160と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号173と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT12-019の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT12-019の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号109と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号122と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号135と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号148と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号161と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号174と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT13-022の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT13-022の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号110と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号123と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号136と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号149と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号162と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号175と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT13-023の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT13-023の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号111と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号124と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号137と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号150と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号163と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号176と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT13-031の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT13-031の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号112と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号125と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号138と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号151と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号164と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号177と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT12-020の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT12-020の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号113と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号126と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号139と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号152と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号165と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号178と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT13-033の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT13-033の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号114と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号127と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号140と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号153と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号166と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号179と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT13-034の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT13-034の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号115と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号128と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号141と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号154と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号167と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号180と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT13-035の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT13-035の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号116と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号129と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号142と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号155と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号168と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号181と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT13-036の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT13-036の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号117と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号130と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号143と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号156と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号169と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号182と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT13-037の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT13-037の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号241と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号245と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号249と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号253と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号257と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号261と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT14-013の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT14-013の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号242と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号246と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号250と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号254と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号258と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号262と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT14-014の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT14-014の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号243と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号247と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号251と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号255と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号259と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号263と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT14-015の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT14-015の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 配列番号244と少なくとも80%の配列同一性を有する核酸配列をコードする重鎖CDR1、及び
- 配列番号248と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR2、及び
- 配列番号252と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする重鎖CDR3、及び
- 配列番号256と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR1、及び
- 配列番号260と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR2、及び
- 配列番号264と少なくとも80%の配列同一性を有する配列をコードする軽鎖CDR3
を含む、核酸分子又は機能的等価物又は1つ又は複数のベクターが提供される。記載の配列番号は、抗体AT14-016の重鎖及び軽鎖CDR1〜3配列である。やはり、前記配列同一性は、好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%である。好ましくは、得られるCDR配列は、抗体AT14-016の元のCDR配列と3つ以下、好ましくは2つ以下、好ましくは1つのアミノ酸のみが異なる。
- 前記試料を本発明による抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物と接触させる工程、及び
- 存在する場合は、前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞と結合させる工程、及び
- 骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞が前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物に結合しているかどうかを決定し、それにより、骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞が前記試料中に存在するかどうかを決定する工程
を含む方法を更に提供する。
- 前記個体からの試料を、本発明による抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物と接触させる工程、及び
- 存在する場合は、前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞と結合させる工程、及び
- 骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞が前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物に結合しているかどうかを決定し、それにより、前記個体が骨髄増殖性疾患又はリンパ球増殖性疾患に罹患しているかどうかを決定する工程
を含む方法が提供される。好ましくは、前記個体はヒトである。いくつかの実施形態において、前記骨髄増殖性疾患はAMLである。他の実施形態において、前記リンパ球増殖性疾患は、リンパ腫、B-NHL又は多発性骨髄腫である。
- 前記個体からの試料を、snRNP200又はそのエピトープと接触させる工程、
- 存在する場合は、前記snRNP200又はエピトープを前記試料からのsnRNP200特異的抗体と結合させる工程、及び
- 前記snRNP200又はエピトープがsnRNP200特異的抗体に結合しているかどうかを決定する工程
を含み、
前記snRNP200又はエピトープの前記snRNP200特異的抗体に対する結合は、前記個体が骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患に罹患していることを示す。
- 前記個体からの骨髄増殖細胞含有試料又はリンパ球増殖細胞含有試料を、snRNP200に特異的な抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物と接触させる工程、
- 前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を、前記試料の骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞と結合させる工程、及び
- 前記snRNP200特異的抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物が、前記試料の骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞に結合しているかどうかを決定する工程
を含み、
前記snRNP200特異的抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物の、前記試料の骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞に対する結合は、前記患者が、骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患に罹患している患者の平均集団と比較して、本発明による抗体、機能的部分又は機能的等価物での治療による好ましい結果を得る可能性を向上させることを示す。前記治療は、好ましくは、抗体AT12-023、AT13-031又はAT13-037、又はそれらの機能的部分若しくは機能的等価物の使用を含む。なぜなら、少なくともこれらの抗体は、snRNP200と結合可能だからである。したがって、更に、前記抗体がAT12-023、AT13-031、AT13-037、又はその機能的部分若しくは機能的等価物である、本発明による抗体、又は本発明による使用のための抗体、又は本発明による使用若しくは方法が提供される。
す。したがって、更に、骨髄増殖性疾患又はリンパ球増殖性疾患に罹患している、前記疾患に対する免疫療法を受けた患者が、GvL反応を有するかどうかを決定するための方法であって、前記患者からの試料を、本発明による抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物と接触させる工程、及び存在する場合は、前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞と結合させる工程、及び骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞が前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物に結合しているかどうかを決定し、それにより、前記個体がGvL反応を有するかどうかを決定する工程を含み、骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞の非存在は、GvL反応の指標であり、骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞の存在は、GvL反応の欠如又は不十分(無効)なGvL反応の指標である、方法が提供される。いくつかの実施形態において、前記リンパ球増殖性疾患は、リンパ腫、B-NHL、又は多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態において、前記骨髄増殖性疾患はAMLである。したがって、更に、抗AML免疫療法を受けたAML患者がGvL反応を有するかどうかを決定するための方法であって、前記AML患者からの試料を、本発明による抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物と接触させる工程、及び存在する場合は、前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物をAML細胞と結合させる工程、及びAML細胞が前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物に結合しているかどうかを決定し、それにより、前記個体がGvL反応を有するかどうかを決定する工程を含み、AML細胞の非存在は、GvL反応の指標であり、AML反応の存在は、GvL反応の欠如又は不十分(無効)なGvL反応の指標である、方法が提供される。好ましくは、前記個体はヒトである。或いは、検出可能な部分、たとえば銅化合物で標識化された本発明による結合化合物が、抗AML免疫療法、たとえばSCT又はDLIを受けたAML患者に投与され、続いて、前記標識化抗体が前記患者のAML細胞に結合しているかどうかがインビボで、たとえばPETスキャンを使用して決定される。結合された結合化合物の非存在は、GvL反応の指標であり、結合された結合化合物の存在は、GvL反応の欠如又は不十分(無効)なGvL反応の指標である。
材料及び方法
患者及び健常ヒト材料
研究プロトコルは、大学医療センター医療倫理委員会(the Medical Ethical Committee of the Academic Medical Centre)により認可された。すべての参加者が、インフォームドコンセントに署名した。AMLについて同種幹細胞移植を受け、病歴に基づいて強力な移植片対白血病反応を生成したと前提できる、2人の患者(ドナー59について骨髄破壊的同胞移植及びドナー58について適合非血縁ドナー減弱強度幹細胞移植)を選択した。これら2人のSCTレシピエントは、注入後の高フェリチン血症について受けた多くの瀉血のうちの1回の産物である、500mlの末梢血をそれぞれ供与した。加えて、新たにAMLと診断されて本発明者らのクリニックに入院した患者が、抗体結合アッセイに使用されるAML芽細胞を含有する2〜5mlの骨髄又は血液を供与することに同意した。健常骨髄は、本発明者らの機関で心臓手術のために開胸術を受ける患者により供与された。B非ホジキンリンパ腫細胞を、新たにB非ホジキンリンパ腫と診断された患者の生検からの残余材料として得た。これらのB非ホジキンリンパ腫細胞は、下に記載する本発明者らによる抗体の結合について試験するために使用した。眼科学研究室(Department of Ophthalmology)(AMC、Amsterdam、オランダ)で新たに単離されたヒト臍静脈内皮細胞(HUVEC)の残余材料を、下に記載する結合アッセイのために直接使用した。純度のため、細胞を抗ヒトCD14+で共染色し、選択した。
フィコール分離及びCD22 MACSマイクロビーズ(Miltenyi Biotech社)により、末梢血からB細胞を得た。続いて、CD27-又はCD27+CD19+CD3-IgM-IgA-(それぞれ、ナイーブ又は記憶IgG細胞)及びCD19+CD3-CD27+IgG-IgA-(記憶IgM細胞)について、FACSAria(Becton Dickinson社)上でこれらの細胞をソートした。
B細胞(細胞2×105個/ml)を、組換えマウスIL-21(50ng/ml、インハウスで製造)を添加した、8%FBS(HyClone社)及びペニシリン/ストレプトマイシン(Roche社)を含有するIMDM(Gibco社)培養培地中で維持し、それらをCD40Lを安定的に発現するγ照射(50Gy)マウスL細胞線維芽細胞(CD40L-L細胞、細胞105個/ml)上で共培養した。培養物を、マイコプラズマの存在についてPCRにより常法で試験した(データは示さず)。
Kwakkenbosら、Nat Med 2010に記載のとおり、レトロウイルス形質導入を実施した。簡潔に述べると、ナイーブ及び記憶IgG及び記憶IgM B細胞を、36時間、mIL-21の存在下でCD40L-L細胞上で培養し、活性化させた。次に、以前記述されたとおり(Diehlら、J Immunol 2008)、GFPのためのマーカー遺伝子を含むBCL6及びBcl-xLレトロウイルスコンストラクトをB細胞に形質導入するために使用し、加えて、細胞及びウイルスを室温で60分間、360×g(1800RPM)で遠心した。形質導入効率は、69〜90%の範囲だった。
標的AML細胞株THP-1(ATCC社、細胞2×105個/mlから細胞1×106個/mlの密度)及びMono-Mac6[実験免疫学研究室のHamann博士(Dr. Hamann of the Experimental Immunology department)からの厚意によるもの、細胞2×105個/mlから細胞2×106個/mlの密度]を、10%FBS(HyClone社)及びペニシリン/ストレプトマイシン(Roche社)を含有するRPMI 1640(Gibco社)培養培地中に維持した。Mono-Mac6の培養培地を、非必須アミノ酸(Invitrogen社)、1mMピルビン酸ナトリウム(Invitrogen社)及び10μg/mlヒトインスリン(Sigma社)で富化した。AML細胞株Molm13を、細胞5×105個/mlから細胞1.5×106個/mlの密度で、20%FBS(HyClone社)及びペニシリン/ストレプトマイシン(Roche社)を含有するRPMI 1640(Gibco社)培養培地中に維持した。肝細胞株HepG2及びHuh7並びに結腸細胞株HT29(Tytgat Institute、AMC、Amsterdam、オランダからの厚意によるもの)を、8%FBS(HyClone社)及びペニシリン/ストレプトマイシン(Roche社)を含有するDMEM(Gibco社)培養培地中に維持した。急性T細胞白血病細胞株Jurkat(ATCC社)を、10%FBS(HyClone社)及びペニシリン/ストレプトマイシン(Roche社)を含有するRPMI 1640(Gibco社)培養培地中に、細胞1×105個/mlから細胞2×106個/mlの密度で維持した。皮膚原発線維芽細胞(University of Leiden、オランダの厚意によるもの)を、週に2回、10%FBS(HyClone社)及びペニシリン/ストレプトマイシン(Roche社)を含有するDMEM(Gibco社)培養培地中に培養した。細胞を、10回以下で継代させた。びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)細胞株OCI-Ly1及びOCI-Ly7(それぞれ、DSMZ社及びATCC社)を、8%FBS(HyClone社)及びペニシリン/ストレプトマイシン(Roche社)を含有するIMDM(Gibco社)培養培地中に維持した。培養物を、細胞0.5〜2×106個/mlで維持した。最後に、多発性骨髄腫(MM)細胞株U266及びNCI-H929を、THP-1細胞について記載のとおり維持及び培養した。
各患者の形質導入されたナイーブ及び記憶IgG並びにIgM B細胞を、1ウェル当たり細胞20又は40個[以下では微小培養物(microcultures)と呼ぶ]の濃度で播種し、IL-21及びCD40Lで拡張させた。次に、拡張B細胞微小培養物の上清を、白血病細胞株[THP-1、MonoMac6及びTable 4(表5)に示す細胞株]、肝細胞株及び結腸細胞株、並びに一部の上清についても、AML-M0、M1、M4及びM5に罹患した患者から単離された原発芽細胞と結合する抗体について、FACSにより、ヒト-IgG-PE(Southern Biotech社)又はヒトIgG H+L AF647(Life Technologies社)を二次抗体として使用してスクリーニングした。インハウスで生成された複数の抗体、たとえば抗CD30(活性化B及びTリンパ球上に発現)、抗CD33(単球、骨髄前駆細胞及び骨髄性白血病上に発現)、D25(RSVに対する、WO 2008/147196に記載)、AT10-002、AT10-004(インフルエンザに対する、WO 2013/081463に記載)、及び F1(MRSAに対する、WO 2011/008092に記載)を、負の対照の抗体として使用した。加えて、いくつかの市販の抗体、たとえばリツキシマブ(抗CD20)、パリビズマブ(抗RSV)、パニツムマブ(抗EGFR)及びHLA-DRを使用した。AML細胞株と結合するが、肝細胞株及び結腸細胞株と結合しない微小培養物を選択し、細胞1個/ウェルの濃度で播種し、それらの上清を、AML細胞株に対する特異性について再度試験した。AML細胞株と特異的に結合するが、肝細胞株及び結腸細胞株、健常PBMC並びに骨髄とは特異的に結合しない上清を伴うクローンを、シークエンシングのために選択した。クローンを、組換え抗体のために、下に記載するとおり、正常培養条件下で、FBS低IgG血清(Hyclone社)及びこれら培養物の上清から精製された抗体の存在下で拡張した。
組換え抗体を製造するため、RNeasy(登録商標)ミニキット(Qiagen社)で全RNAを単離し、cDNAを生成し、PCRを実施し、重鎖及び軽鎖可変領域をpCR2.1 TAクローニングベクター(Invitrogen社)内へとクローニングした。逆トランスクリプターゼ又はDNAポリメラーゼ誘発変異を排除するため、複数の独立したクローニング実験を実施した。組換えmAbを製造するため、各抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を、ヒトIgG1又はIgG3及びカッパ定常領域とインフレームで、pcDNA3.1(Invitrogen社)ベースベクター内にクローニングし、293T細胞に一過的にトランスフェクトさせた。クローンのIgサブタイプに応じてプロテインA又はGを有する培養上清から組換え抗体を精製した。
AML細胞に対するAML特異的抗体のインビトロ効果を測定するため、複数のアプローチを使用した。第1に、THP-1細胞(2x104)を平底96ウェルプレート(Costar社)中に播種した。AML又は対照抗体を、第1日に5〜10μg/mlの濃度で添加した。1ウェル当たりの細胞数を毎日計数した。AML特異的抗体によるTHP-1細胞及び原発白血病細胞の両方での細胞死の誘導を、細胞のアリコートをアネキシンV(BD Pharmingen社)及び7-アミノアクチノマイシンD(7-AAD、Beckman Coulter社)について共染色することにより平行して測定し、ダブルネガティブの細胞が生存細胞だった。加えて、特異的溶解アッセイを使用した。標的細胞(THP-1)を、細胞死の際に細胞質から放出される緑色蛍光色素であるカルセインAM(Becton Dickinson社)で標識化した。簡潔に述べると、2百万個のTHP-1細胞を、2mlの2μMカルセインAMと30分間、37℃でインキュベートした。AML又は対照抗体を4時間添加し、その後、蛍光プレートリーダーを使用して緑色蛍光を測定した。特異的溶解の割合を(実験値-低対照)/(高対照-低対照)×100として算出した。式中、低対照は、影響を受けていない細胞によるカルセインAMの自然放出を意味し、高対照は、すべての細胞が溶解するときに放出されるカルセインAMの最大量を意味する。カルセインAM放出アッセイに加えて、AML特異的抗体の殺細胞活性を測定するために、乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)放出アッセイを適用した。LDHは、傷害を受けた細胞により細胞質基質から放出される。AML-M0に罹患した患者から診断時に単離された白血病芽細胞を、10.000芽細胞当たり10μg/mlの最大濃度でAT13-024とインキュベートした。LDH放出を、製造者のプロトコルに従い反応混合物及び停止液(Roche Diagnostics社/Applied Science社)添加後にELISAリーダー上で測定した。パーセント細胞毒性を(実験値-低対照)/(高対照-低対照)×100として算出し、式中、低対照は、影響を受けていない細胞によるLDHの自然放出を意味し、高対照は、すべての細胞が溶解するときのLDHの最大量を意味する。AML特異的抗体により誘導された標的細胞死を定量するため、以前に記述されたFACSベースの白血病細胞溶解アッセイを使用した(Schmiedelら、2013)。簡潔に述べると、FACSキャリブレーションビーズ(Accudrop Fluorescent Beads、BD Biosciences社)を50/50比で細胞に添加し、その後、標準量のビーズをFACSで得た。等しいアッセイ体積がキャリブレーションビーズにより確認されたので、次に、死滅又は消滅細胞の量を以下のとおり算出できる。すなわち、100-[(各処置におけるDapiネガティブ細胞/対照におけるDapiネガティブ細胞)×100]。
染色細胞をFACSAria(BD社)、FACSCanto(BD社)、FACS LSRFortessa X-20(BD社)及びGuava(Millipore社)フローサイトメーター上で解析し、フローサイトメトリーデータをFlowJoソフトウェア(Tree Star社)で処理した。
THP-1細胞を、2つのチャンバーのカバーガラスシステム(LabTek社)に添加した。位相差画像顕微鏡(インハウスで製造)を使用して、1チャンバー当たり4つの目的のフィールドを選択した。2分毎にすべての目的のフィールドの写真を撮影するようソフトウェアを設定した。開始する直前に、THP-1結合性、非細胞毒性抗体AT13-023及びTHP-1結合性、細胞毒性抗体AT13-037をそれらのそれぞれウェルに10ug/mlの濃度で添加した。
THP-1細胞を溶解させ、非特異的結合性タンパク質を除去するため、無関係な抗体(インハウスで生成されたRSV抗体D25)及びビーズでプレクリアした。次に、プレクリアされた溶解物を、ビーズ標識化AML特異的抗体又は負の対照としてインフルエンザ特異的抗体AT10-002とインキュベートした(4℃で3時間)。抗体-インキュベートされた溶解物を5回洗浄し、結合されたタンパク質をTHP-1溶解物から溶出し、次にSDS-PAGEゲル上を走らせた。タンパク質をブロットし、ポンソーSで染色し、総タンパク質を明らかにした。ブロットをBSAでブロッキングし、ウエスタンブロット解析のためにマウス抗snRNP200(Millipore社、クローン3B6.1)又はウサギ抗HMGB1(Abcam社)とインキュベートした。メタノール(Sigma社)並びにtriton X-100(Sigma社)、EDTA(Gibco社)及びBSA(Roche社)を含有する透過処理バッファーでのTHP-1細胞の固定及び透過処理後にsnRNP200について細胞内染色を実施し、続いて、ウサギ抗ヒトsnRNP200抗体(Sigma社)と一晩、4℃でインキュベートした。
HEK 293T細胞に、snRNP200の完全長オープンリーディングフレームをN末端FLAGタグとともに含有する発現ベクターをトランスフェクトした。トランスフェクション後第2日に、細胞を回収し、プロテアーゼ阻害剤を含有する溶解バッファー中で溶解させた。この溶解物をクリアし、タンパク質濃度を測定した。次に、AML特異的抗体AT12-019、AT12-023、AT13-031及びAT13-037又は市販のsnRNP200特異的抗体(Bethyl labs社)を、ELISAプレート上にコーティングした。溶解物を3μg/mlの濃度で捕捉のために添加した。十分な洗浄の後、捕捉されたsnRNP200-flagを、モノクローナルマウス抗flagHRP抗体(Sigma-Aldrich社、クローンM2)で検出した。
AML特異的抗体の生成
本発明者らのプロジェクトにおいて、本発明者らの研究室で最近開発された独自の技術(WO 2007/067046、本明細書に参照により組み込まれる)を使用し、これは、天然白血病特異的B細胞及びこれら細胞により産生される抗体の選択を可能にする。肝臓及び皮膚の重症GvHDと並行して強力なGvL反応を発した2人のAML患者から白血病特異的B細胞株を生成するために、この技術を用いた。本発明者らのB細胞不死化技術により、白血病患者のB細胞反応を同定し、これら細胞株が産生する抗体の機能研究を可能にし、当技術分野において知られている他の方法と比較して、より多数の抗体の生成を可能にする、診断的及び治療的潜在性を有する白血病特異的B細胞株を創出することが可能となった。
このアプローチで、この1人の患者から、THP-1に結合する(図3)が、肝細胞株又は結腸細胞株、線維芽細胞、内皮細胞(ヒト臍静脈内皮細胞すなわちHUVEC)、健常PBMC又は骨髄に結合しない抗体[Table 2(表2)及び図4]を産生する、8つのB細胞株を生成した。これらは、抗体AT12-019、AT12-023、AT12-025、AT13-022、AT13-023、AT13-024、AT13-031及びAT12-020である。これらの抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を、Table 1(表1及び表2)及び図1に示す。
AML結合抗体の特異性を試験する間に、驚くべき観察がなされた。8つの抗体のうちの3つが、それらが結合していた白血病細胞の死を自然に誘導した。THP-1細胞は、AT12-023及びAT12-025により殺され、AMLと診断された患者から単離された原発AML芽細胞は、AT12-025及びAT12-024により殺された[Table 5(表6)及び図7〜図10]。
第1の患者からスクリーニングされたB細胞の約0.05から0.1%が、AML特異的であることが見出された。本発明者らの発見を確証するため、再発AMLに罹患し、同種SCT後に長期寛解を得た第2の患者を選択した(ドナー58、図11)。この患者もまた、皮膚及び肝臓のGvHDを発症し、これについて彼女は経口ステロイドで治療された。ステロイドを段階的に削減した後、SCTの約1年後に、PBMCを単離し、B細胞を不死化し、上述のとおりAML細胞株との結合についてB細胞株をスクリーニングした。この患者から、AML細胞株THP-1及びMonoMac6と結合する(図12)が、肝細胞株又は腸細胞株、線維芽細胞又は健常PBMCと結合しない、5つのB細胞クローンを生成した[Table 6(表7)]。これらのクローンは、抗体AT13-033、AT13-034、AT13-035、AT13-036及びAT13-037を産生する。興味深いことに、これらの抗体はすべて、IgG3アイソタイプのものである。これらの抗体の重鎖及び軽鎖可変領域の配列もまた、Table 1(表1及び表2)及び図1に示す。これらのデータは、本発明者らのプロジェクトの達成可能性を確証する。目的としているB細胞の低頻度にもかかわらず、それらを単離し、AMLに特異的な、強力な抗体産生B細胞株を生成することが可能だった。
これらの予備的データは非常に刺激的である。なぜなら、本発明者らの知る限り、AMLに対する強力で持続的なGvL反応を発した患者から、複数のヒト、非キメラ、白血病特異的Bリンパ球クローンを、初めて生成したからである。これらの抗体のいくつかが、インビトロで白血病芽細胞に対する殺細胞活性を自然に示すという観察は、非常に刺激的であり、非常に有望である。加えて、いくつかの抗体が生殖系列配列を有し、T細胞の補助なしに誘導できる抗体のタイプであるIgG3サブクラスのものであるという観察は、更なる注目に値する。なぜなら、これらの発見は、T細胞非依存的な形で生成された「天然」抗体が、SCT患者においてGvL反応に影響を及ぼすことを実証するからである。重要なことに、これらのデータは、この技術を使用して、白血病特異的B細胞クローンを選択できるというコンセプトの証拠を提示する。
第3の患者からのAML特異的抗体
本発明者らのアプローチを更に確証し、この抗AML反応が女性患者にのみ妥当するわけではないことを示すため、男性患者も選択した。この患者(図13)、ドナー101は、49歳で中程度のリスクのAML(細胞遺伝学的又は分子的異常なし、FAB分類AML-M5)と診断された。彼は、2つのコースの化学療法(シタラビン、イダルビシン、アムサクリン)及び1つのコースの地固め化学療法(ブーサルファン、シクロホスファミド)を受け、続いて、利用可能なHLA適合同胞幹細胞ドナーがいなかったため、自己HSCTを受けた。最初の診断の14カ月後に、彼の疾患は再発した。彼は、高用量シタラビン1サイクル後に完全寛解を得て、その後、彼は適合、非血縁ドナーの減弱強度同種HSCT(RIST-MUD)を受けた。6週後、彼は皮膚、肝臓及び腸の急性GvHD(ステージ1、グレードII)を発症し、これはコルチコステロイド療法によく反応した。B細胞を、SCT38カ月後にこの患者から得られた瀉血産物から単離した。
ドナー59、58及び101のAML特異的抗体のインビトロ活性
実施例1において、AMLサブタイプのスペクトル内のドナー59の抗体の結合の広さを決定した[Table 3(表4)]。同じ方法を使用して、これを、ドナー58の抗体についても決定した。結果をTable 9A(表10)に示す。ドナー58の5つの抗体すべて(AT13-033、AT13-034、AT13-035、AT13-036及びAT13-037)が、AML-M5細胞株THP-1と、AML-M5細胞株MonoMac6と同様に結合した。これらのAML特異的抗体は、FAB分類M0、M1又はM4の新たに診断された患者の新たに単離されたAML芽細胞とは有意に結合しなかった。AT13-034は、M0芽細胞に弱くしか結合できなかった。これは、これらの抗体が、(少なくとも)AML M5芽細胞に対する特異性を有することを示す。
AML抗体のインビトロ活性は迅速であり、非アポトーシス細胞死経路を伴う
上述の抗体のうちのいくつかが、それらの標的細胞の死を誘導した経路を調べるため、標的細胞死を微速度撮影顕微鏡法で視覚化した(図17a)。抗体AT13-037とのインキュベーション後数分以内に、細胞が膨張し始め、死滅することを観察した。これは、本発明による抗体が、古典的アポトーシス経路以外の経路を活性化させたことを示唆した。なぜなら、アポトーシス細胞は膨張するのではなく収縮するからである。これを更に調べるため、細胞死マーカーDiOC6及びヨウ化プロピジウム(PI)での二重染色を実施した。アポトーシスを進行させようとする細胞は、まず、膜透過性が増加する[ヨウ化プロピジウム(PI)染色により視覚化]前にミトコンドリア電荷を失う(DiOC6結合の消失により視覚化できる)一方で、ネクローシスを進行させる細胞は、それらの膜統合性を失う(PIポジティブ)が、すぐにはミトコンドリア膜電位を失わない。ジクロフェナクがTHP-1細胞のアポトーシスを誘導することが知られているので、ジクロフェナクを正の対照として使用した。ジクロフェナク処理されたアポトーシスTHP-1細胞は、DiOC6ネガティブとなった(ミトコンドリア膜電位を失った)が、膜統合性を維持した。AML特異的細胞毒性抗体AT12-023とのインキュベーションの際、ミトコンドリア膜電位は維持された(DiOC6ポジティブ)一方で、THP-1細胞の膜透過性は増加した(PIポジティブ)。したがって、AML抗体処理THP-1細胞は、PIポジティブになった一方で、ミトコンドリア膜電位を維持し(図17b、右パネル)、非アポトーシス死経路の活性化を示す。実際に、細胞毒性AML特異的抗体処理によるTHP-1細胞死は、細胞を汎カスパーゼ阻害剤Z-VAD-fmk又はQVD-OPhとインキュベートすることによっては阻害できない(図17c)。
非アポトーシス死経路には、ネクロプトーシス及びオンコーシスが含まれる。ネクロプトーシスは、アポトーシスと同様に、所定の分子経路の活性化、たとえば受容体共役タンパク質キナーゼ3(RIPK3)の活性化に依存する能動的細胞死経路である。AML抗体誘導細胞死が細胞内分子経路の活性化に依存するかどうかを調べるため、抗体誘導細胞毒性が温度に依存するかどうかを試験した。これらの実験条件下では、少なくとも抗体の細胞毒性活性AT13-033、AT13-035、AT13-036、AT13-037、AT12-023及びAT12-025が、37℃でのそれらの活性と比較して、4℃で等しく強力であることが見出され(図18)、これは、少なくともこれらの抗体が受動的プロセスにより細胞死を誘導したことを示唆する。注意すべきことに、抗体AT13-031の細胞毒性活性は、4℃と比較して37℃でより有意に強力だった。しかしながら、抗体AT13-031はアポトーシス阻害剤(たとえば汎カスパーゼ阻害剤Q-VD-OPh又はZ-VAD-fmk)の存在下でAML細胞死を誘導するので、抗体AT13-031もまた、アポトーシスとは独立にAML細胞の増殖を減少させることが可能であることは明らかである。
本発明者らによる抗体により認識される標的のうちの1つは、snRNP200である
次に、いくつかのAML特異的抗体により認識される標的を決定することに取り掛かった。このために、AT12-023及びAT13-031でのTHP-1細胞の細胞膜溶解物の免疫沈降を使用した。250kDで明確なタンパク質バンドが見出され、質量分析に送られて、これは標的抗原としてのsnRNP200を明らかにし、ウエスタンブロット解析により確証することができた(図20a)。いくつかのAML抗体の標的としてのsnRNP200を検証するために、ELISAを実施した。このELISAで、AT12-023及びAT13-031に加えて、AT13-037がsnRNP200を特異的に認識することが見出された(図20b)。他のAML特異的抗体、たとえばAT12-019は、snRNP200を標的抗原として認識しなかった。
Claims (51)
- 急性骨髄性白血病(AML)細胞の細胞表面成分と結合可能であり、抗体依存性細胞介在性細胞毒性(ADCC)、補体依存性細胞毒性(CDC)、アポトーシス、又はマクロファージ若しくは樹状細胞による食作用とは本質的に独立に、AML細胞の増殖を減少させることが可能である、単離、合成又は組換えヒト抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物。
- AML細胞に特異的な細胞表面成分と結合可能である、請求項1に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- 抗体依存性細胞介在性細胞毒性(ADCC)、補体依存性細胞毒性(CDC)、アポトーシス、又はマクロファージ若しくは樹状細胞による食作用とは本質的に独立に、原発AML芽細胞死を誘導可能である、請求項1又は2に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- インビトロで3日以内にAML細胞の増殖を減少させることが可能である、請求項1から3のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- 前記AML細胞が、M5、M0、M1、M2、M3及びM4からなる群から選択されるフレンチ-アメリカン-ブリティッシュ(FAB)分類に属する、請求項1から4のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- 前記AML細胞が、FAB分類M5又はM1又はM0又はM4、好ましくはM5に属する、請求項1から5のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- 少なくとも2つ、好ましくは少なくとも3つ、より好ましくは少なくとも4つのFAB分類の異なるAML細胞の細胞表面成分と結合可能である、請求項1から6のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- snRNP200と結合可能である、請求項1から7のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- 前記抗体が、IgGアイソタイプ、好ましくはIgG1又はIgG3のものである、請求項1から8のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- 配列番号27〜39からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する重鎖CDR3配列、並びに、配列番号66〜78からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する軽鎖CDR3配列を少なくとも含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物。
- - 配列番号1〜13からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR1配列、及び
- 配列番号14〜26からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR2配列、及び
- 配列番号27〜39からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖CDR3配列、及び
- 配列番号40〜52からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR1配列、及び
- 配列番号53〜65からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR2配列、及び
- 配列番号66〜78からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖CDR3配列
を含む、単離、合成又は組換え抗体、又はその機能的部分若しくは機能的等価物。 - 配列番号79〜91からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する可変重鎖配列を含む、請求項10又は11に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- 配列番号92〜104からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する可変軽鎖配列を含む、請求項10から12のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- 別の化合物とカップリングしている、請求項1から13のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- 前記他の化合物が、検出可能な標識、化学療法薬、毒性部分、免疫調節分子、別のAML特異的結合化合物、又は放射性化合物である、請求項14に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物。
- 請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物の少なくとも1つのCDR配列をコードする、少なくとも15ヌクレオチドの長さを有する単離、合成又は組換え核酸分子、又はその機能的等価物。
- 請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物の可変重鎖配列及び/又は可変軽鎖配列を少なくともコードする、請求項16に記載の核酸分子又は機能的等価物。
- 配列番号105〜182からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む、請求項16又は17に記載の核酸分子又は機能的等価物。
- 配列番号183〜195からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列、並びに/又は、配列番号196〜208からなる群から選択される配列と少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む、請求項16から18のいずれか一項に記載の核酸分子又は機能的等価物。
- 請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物をコードする、核酸分子又はその機能的等価物。
- cDNA、ペプチド核酸(PNA)、ロックド核酸(LNA)、又はDNA/RNAヘリックスを含む、請求項16から20のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 請求項16から21のいずれか一項に記載の核酸分子又は機能的等価物を含むベクター。
- 請求項16から21のいずれか一項に記載の核酸分子若しくは機能的等価物又は請求項22に記載のベクターを含む、単離又は組換え細胞、又は非ヒト動物。
- 請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物、又は請求項16から21のいずれか一項に記載の核酸分子又は機能的等価物、又は請求項22に記載のベクター、又は請求項23に記載の細胞を含む組成物。
- 薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物である、請求項24に記載の組成物。
- 少なくとも2つの請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体、機能的部分又は機能的等価物を含む、請求項25に記載の組成物。
- 医薬又は予防剤としての使用のための、請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物、又は請求項16から21のいずれか一項に記載の核酸分子又は機能的等価物、又は請求項22に記載のベクター、又は請求項23に記載の細胞。
- 骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患を少なくとも部分的に治療又は予防するための方法における使用のための、請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物、又は請求項16から21のいずれか一項に記載の核酸分子又は機能的等価物、又は請求項22に記載のベクター、又は請求項23に記載の細胞。
- 骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患の診断における使用のための、請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物、又は請求項16から21のいずれか一項に記載の核酸分子又は機能的等価物、又は請求項22に記載のベクター、又は請求項23に記載の細胞。
- 前記骨髄増殖性疾患が急性骨髄性白血病(AML)である、請求項28又は29に規定の使用のための、抗体若しくは機能的部分若しくは機能的等価物又は核酸分子若しくは機能的等価物又はベクター又は細胞。
- 前記リンパ球増殖性疾患が、リンパ腫、B非ホジキンリンパ腫又は多発性骨髄腫である、請求項28又は29に記載の使用のための抗体若しくは機能的部分若しくは機能的等価物又は核酸分子若しくは機能的等価物又はベクター又は細胞。
- 試料が骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞を含むかどうかを決定するための、請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体若しくは機能的部分若しくは機能的等価物、又は請求項16から21のいずれか一項に記載の核酸分子若しくは機能的等価物、又は請求項22に記載のベクター、又は請求項23に記載の細胞の使用。
- 請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を産生するための方法であって、細胞に、請求項16から22のいずれか一項に記載の核酸分子若しくは機能的等価物又はベクターを提供する工程、及び前記細胞に前記核酸分子若しくは機能的等価物又はベクターを翻訳させ、それにより請求項1から15のいずれか一項に記載の前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を産生する工程を含み、好ましくは、請求項1から15のいずれか一項に記載の前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を回収、精製及び/又は単離する工程を更に含む方法。
- 請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を使用して、骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞を検出するための方法。
- 骨髄細胞又はリンパ球細胞が骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞であるかどうかを決定するための方法であって、snRNP200が前記細胞の表面上に存在するかどうかを決定する工程を含み、前記細胞の表面上のsnRNP200の存在が、前記細胞が骨髄増殖性又はリンパ球増殖性であることを示す、方法。
- 骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞を同定するための方法であって、前記細胞の表面上のsnRNP200の存在を検出する工程を含む方法。
- 骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞が試料中に存在するかどうかを決定するための方法であって、
- 前記試料を請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物と接触させる工程、及び
- 前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を、存在する場合は、骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞と結合させる工程、及び
- 骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞が前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物に結合しているかどうかを決定し、それにより、骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞が前記試料中に存在するかどうかを決定する工程
を含む方法。 - 前記骨髄増殖細胞がAML細胞である、請求項32に記載の使用又は請求項33から37のいずれか一項に記載の方法。
- 前記リンパ球増殖細胞が、リンパ腫、B非ホジキンリンパ腫又は多発性骨髄腫細胞である、請求項32に記載の使用又は請求項33から37のいずれか一項に記載の方法。
- 骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患を少なくとも部分的に治療及び/又は予防するための方法であって、それを必要とする個体に、治療有効量の請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体若しくは機能的部分若しくは機能的等価物、又は請求項16から21のいずれか一項に記載の核酸分子若しくはその機能的等価物、又は請求項22に記載のベクター、又は請求項23に記載の細胞、又は請求項24から26のいずれか一項に記載の組成物を投与する工程を含む方法。
- 個体が骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患に罹患しているかどうかを決定するための方法であって、
- 前記個体からの試料を請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物と接触させる工程、及び
- 前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を、存在する場合は、骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞と結合させる工程、及び
- 骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞が前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物に結合しているかどうかを決定し、それにより、前記個体が骨髄増殖性疾患又はリンパ球増殖性疾患に罹患しているかどうかを決定する工程
を含む方法。 - 個体が骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患に罹患しているかどうかを決定するための方法であって、前記個体からの試料がsnRNP200に特異的な抗体を含むかどうかを決定する工程を含む方法。
- - 前記個体からの試料をsnRNP200又はそのエピトープと接触させる工程、
- 前記snRNP200又はエピトープを、存在する場合は、前記試料からのsnRNP200特異的抗体と結合させる工程、及び
- 前記snRNP200又はエピトープがsnRNP200特異的抗体に結合しているかどうかを決定する工程
を含み、
前記snRNP200又はエピトープのsnRNP200特異的抗体に対する結合は、前記個体が骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患に罹患していることを示す、
請求項42に記載の方法。 - 個体の骨髄細胞含有試料又はリンパ球細胞含有試料を分類するための方法であって、snRNP200が前記試料中の細胞の表面上に存在するかどうかを決定する工程を含む方法。
- 骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患に罹患している患者が、骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患に罹患している患者の平均集団と比較して、請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体、機能的部分又は機能的等価物での治療による好ましい結果を得る可能性を向上させるかどうかを決定するための方法であって、snRNP200が前記患者の骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞の表面上に存在するかどうかを決定する工程を含む方法。
- - 前記個体からの骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞含有試料を、snRNP200に特異的な抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物と接触させる工程、
- 前記抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物を、前記試料の骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞と結合させる工程、及び
- 前記snRNP200特異的抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物が、前記試料の骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞に結合しているかどうかを決定する工程
を含み、
前記snRNP200特異的抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物の、前記試料の骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞に対する結合は、前記患者が、骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患に罹患している患者の平均集団と比較して、請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体、機能的部分又は機能的等価物での治療による好ましい結果を得る可能性を向上させることを示す、請求項45に記載の方法。 - 前記骨髄増殖性疾患がAMLであり、前記骨髄増殖細胞がAML細胞である、請求項40から46のいずれか一項に記載の方法。
- 前記リンパ球増殖性疾患が、リンパ腫、B非ホジキンリンパ腫又は多発性骨髄腫であり、前記リンパ球増殖細胞が、リンパ腫、B非ホジキンリンパ腫又は多発性骨髄腫細胞である、請求項40から46のいずれか一項に記載の方法。
- 抗体が、AT12-023、AT13-031、AT13-037、AT13-024、AT12-025及びAT12-019、並びにそれらの機能的部分及び機能的等価物からなる群から選択される、請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項27から31のいずれか一項に記載の使用のための抗体、又は請求項32に記載の使用、又は請求項33から48のいずれか一項に記載の方法。
- 骨髄増殖性疾患又はリンパ球増殖性疾患に罹患している患者が、抗体AT12-023、AT13-031及び/又はAT13-037、又はその機能的部分若しくは機能的等価物での治療のための候補であるかどうかを決定するための方法であって、snRNP200が前記患者の骨髄増殖細胞又はリンパ球増殖細胞の表面上に存在するかどうかを決定する工程を含む方法。
- AML患者が移植片対白血病反応を有するかどうかを決定するための、請求項1から15のいずれか一項に記載の抗体又は機能的部分若しくは機能的等価物の使用。
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