JP2017212982A - イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ｉｄｈ１）遺伝子発現のｒｎａ干渉媒介抑制 - Google Patents

イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ｉｄｈ１）遺伝子発現のｒｎａ干渉媒介抑制 Download PDF

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Abstract

【課題】ＩＤＨ１及び突然変異ＩＤＨ１遺伝子発現及び／又は活性のモジュレーションに応答する形質、疾患及び状態の研究、診断及び治療の為の、及び／又はＩＤＨ１又は突然変異ＩＤＨ１遺伝子発現経路をモジュレーションする化合物、組成物及び方法の提供。【解決手段】ＩＤＨ１又は突然変異ＩＤＨ１の発現を抑制する単離された二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子であって、（ａ）ｓｉＮＡがセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、（ｂ）各鎖が、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、（ｃ）少なくとも１つの鎖が、特定の配列から選択される少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む、単離された二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。好ましくは、少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾ヌクレオチドであり、また好ましくは少なくとも１つのヌクレオチドが汎用塩基を含む二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。【選択図】図１２

Description

関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１１年６月６日付け出願の米国仮出願第６１／４９３，５７０号（これ
を参照により本明細書に組み入れることとする）の利益を請求するものである。
配列表
３７ ＣＦＲ § １．５２（ｅ）（５）に基づいてＥＦＳを介して提出された配列表
を参照により本明細書に組み入れることとする。ＥＦＳを介して提出された配列表テキス
トファイルは、２３４，９００バイトのサイズの２０１２年５月７日付けで作成されたフ
ァイル「ＳＩＲＯＮＣ００００４−ＰＣＴ−ＳＥＱＬＩＳＴ−０７ＭＡＹ２０１２」を含
有する。
サイトゾルイソクエン酸デヒドロゲナーゼはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ１（ＩＤＨ
１）としても公知であり、ＣＯ２およびα−ケトグルタラート（αＫＧ）を産生するイソ
クエン酸の酸化的カルボキシル化を触媒する酵素である。ＩＤＨ１における体細胞突然変
異は、結腸直腸癌、神経膠腫（例えば、等級ＩＩ〜ＩＩＩ神経膠星状細胞、乏突起神経膠
腫および神経膠芽細胞腫）、急性骨髄球様白血病（ＡＭＬ）、前立腺、Ｂ急性リンパ芽球
性白血病およびより低頻度の種々の他の悪性疾患を有する患者において特定されている（
Ｓｊｏｂｌｏｍら，２００６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４：２６８−２７４；Ｐａｒｓｏｎ
ｓら，２００８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２１：１８０７−１８１２；Ｂｌｅｅｋｅｒら，２
００９，Ｈｕｍ．Ｍｕｔａｔ．３０：７−１１；Ｙａｎら，２００９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ
．Ｍｅｄ．３６０：７６５−７７３；Ｙａｎら，２００９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．
３６０：７６５−７７３；Ｍａｒｄｉｓら，２００９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６
１：１０５８−１０６６）。重要なことに、神経膠腫およびＡＭＬは、最悪の予後を示す
最も悪性の腫瘍型のうちの２つである。
これらの悪性疾患において見出されるＩＤＨ１突然変異は、イソシトラートへの結合に
関与するアルギニン三つ組触媒基の部分を（Ａｒｇ１００およびＡｒｇ１０９と共に）形
成するアミノ酸であるＡｒｇ１３２に影響を及ぼすヘテロ接合突然変異である。該突然変
異の位置ゆえに、該突然変異タンパク質は酵素活性を欠くと最初は仮定されたが、該突然
変異形態は、触媒的に不活性ではなく、αＫＧから２−ヒドロキシグルタラート（２ＨＧ
）に還元する新規酵素活性を有することが後に見出された（Ｄａｎｇら，２００９ Ｎａ
ｔｕｒｅ ４６２：７３９−７４４）。ＩＤＨ１のアミノ酸位置１３２位のアルギニンは
、ヒスチジン（Ｒ１３２Ｈ）、システイン（Ｒ１３２Ｃ）、グリシン（Ｒ１３２Ｇ）、セ
リン（Ｒ１３２Ｓ）、ロイシン（Ｒ１３２Ｌ）およびバリン（Ｒ１３２Ｖ）に突然変異し
ていることが判明している（Ｙｅｎら，２０１０，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２９：６４０９−
６４１７）。
ＷＯ２０１０／１０５２４３（Ｄａｎｇら）として公開されているＰＣＴ国際特許出願
は、２ＨＧの新活性を示す突然変異ＩＤＨ１タンパク質をコードするｍＲＮＡを標的化す
る、核酸に基づくインヒビター（例えば、ｓｉＲＮＡ）を投与することによる、突然変異
イソクエン酸デヒドロゲナーゼの存在により特徴づけられる細胞増殖関連障害を有する患
者の治療方法を記載している。特異的なセンスおよびアンチセンス配列を有するｓｉＲＮ
Ａが該出願に記載されているが、該開示は、ＩＤＨ１遺伝子発現のダウンレギュレーショ
ンおよび／またはＩＤＨタンパク質レベルの低下もしくはいずれの機能アッセイにおける
そのようなダウンレギュレーションの結果をも示していない。
ＩＤＨ１およびその突然変異形態を抑制する分子が依然として必要とされている。遺伝
子発現、特にＩＤＨ１および突然変異ＩＤＨ１の遺伝子発現の、ＲＮＡ干渉（以下「ＲＮ
Ａｉ」）による改変は、この要求を満たすための１つのアプローチである。ＲＮＡｉは短
い一本鎖ＲＮＡ（「ｓｓＲＮＡ」）または二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）分子により誘
発される。「短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）」または「短干渉性ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ
」または「ＲＮＡｉインヒビター」と称される短いｄｓＲＮＡ分子はは、ｓｉＮＡに対す
る配列相同性を共有するメッセンジャーＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）の発現をサイレンシング
する。これは、ＲＮＡ誘発性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と一般に称される、ｓｉ
ＮＡを含有するエンドヌクレアーゼ複合体により引き起こされるｍＲＮＡの切断により生
じうる。標的ＲＮＡの切断は、典型的に、ｓｉＮＡ二本鎖のガイド配列に相補的な領域の
中央部で生じる（Ｅｌｂａｓｈｉｒら，２００１，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１５：１８８
）。また、ＲＮＡ干渉は、おそらく、翻訳を抑制する又はクロマチン構造を調節すること
により標的遺伝子配列の転写を妨げる細胞メカニズムによる小型ＲＮＡ（例えば、マイク
ロＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ）媒介性遺伝子サイレンシングをも含みうる（例えば、Ａｌｌ
ｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅら，
２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：１８３３−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２
，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：２２１５−２２１８；およびＨａｌｌら，２００２，Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ，２９７：２２３２−２２３７を参照されたい）。ＲＮＡｉの分野における相当
な進歩にもかかわらず、ＩＤＨ１および突然変異ＩＤＨ１遺伝子発現を抑制しうる並びに
突然変異ＩＤＨ１発現に関連した疾患（例えば、癌）を治療しうる物質が尚も必要とされ
ている。
発明の概括
本発明は、新規短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を使用して、ＩＤＨ１またはその誘導体
および／もしくは突然変異体の遺伝子発現のモジュレーションに応答する疾患を治療する
という課題の解決手段を提供する。本発明の一部として記載されている新規ｓｉＮＡ分子
は、野生型ＩＤＨ１遺伝子発現をモジュレーションするために、ならびに／またはＩＤＨ
１の１以上の誘導体および／もしくは突然変異形態の遺伝子発現をモジュレーションする
ために使用されうる。例えば、該新規ｓｉＮＡ分子は、あるタイプの癌（例えば、中枢神
経系およびＡＭＬの癌）において発現されるＩＤＨ１タンパク質の突然変異形態、例えば
ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ、ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ、ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｇ、ＩＤＨ１−Ｒ１
３２Ｓ、ＩＤＨ１−Ｒ１３２ＬおよびＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｖの遺伝子発現をモジュレーシ
ョンするために使用されうる。野生型ＩＤＨ１およびＩＤＨ１の突然変異形態は、併せて
、本明細書においては「ＩＤＨ１関連」タンパク質および遺伝子と称される。
本発明は、小型核酸分子を使用するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）により、ＩＤＨ１関連遺伝
子、特に、細胞増殖関連障害（例えば、中枢神経系およびＡＭＬの癌）に関連したＩＤＨ
１関連遺伝子の発現をモジュレーションするのに、およびそのような障害に関連した状態
を治療するのに有用な化合物、組成物および方法を提供する。
特に、本発明は、小型核酸分子、すなわち、短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子、例えば短
干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮ
Ａ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）および環状ＲＮＡ分子（これらに限定されるもの
ではない）、ならびにＩＤＨ１関連遺伝子および／またはＩＤＨ１関連遺伝子発現および
／もしくは活性の経路に関与する他の遺伝子発現をモジュレーションするために用いられ
る方法に関する。
１つの態様においては、本発明は、細胞または哺乳動物におけるＩＤＨ１関連遺伝子の
発現を抑制する二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該二本鎖ｓｉＮ
Ａはセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む。該アンチセンス鎖は、ＩＤＨ１関連遺伝子の
発現に関連したＲＮＡの少なくとも一部に相補的な配列を含む。該センス鎖は、該アンチ
センス鎖に相補的な配列を含む。種々の実施形態においては、ｓｉＮＡ分子の鎖の少なく
とも１つは、配列番号１〜５０６の配列の群から選択される少なくとも１５ヌクレオチド
配列を含む。
ある実施形態においては、表１ａに記載されている標的配列に相補的な配列を有する少
なくとも１５ヌクレオチドをアンチセンス鎖が含む、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分
子を提供する。１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の
連続的ヌクレオチドである。該ｓｉＮＡのセンス鎖は、該アンチセンス鎖に相補的な領域
を含む。特定の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡのアンチセンス鎖は、表１ｂ（配
列番号４４０〜５０６）から選択されるアンチセンス配列の少なくとも１５ヌクレオチド
を含む。他の実施形態においては、該センス鎖は、表１ｂ（配列番号１〜６７）に記載さ
れているセンス鎖配列の少なくとも１５ヌクレオチドを含む。他の実施形態においては、
本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は、表１ｂ（配列番号１〜６７）から選択されるセンス鎖の
少なくとも１５ヌクレオチドと、表１ｂ（配列番号４４０〜５０６）から選択されるアン
チセンス鎖の少なくとも１５ヌクレオチドとを含む。前記実施形態のそれぞれにおいては
、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
本発明のこの態様の或る実施形態においては、アンチセンスおよび／またはセンス鎖が
、表１ｃに記載されている配列番号６８〜４３９から選択される少なくとも１つのヌクレ
オチド配列を含む、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供する。他の実施形態にお
いては、該アンチセンス鎖は、本発明の標的配列に相補的な配列を有する、表１ｃに記載
されている修飾配列を含む。他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、表１ｃ
に記載されている配列番号６８〜４３９から選択される少なくとも２つの配列を含み、こ
こで、前記の少なくとも２つの配列の１つは前記の少なくとも２つの配列のもう１つに相
補的であり、前記の少なくとも２つの配列の１つは、ＩＤＨ１関連遺伝子の発現において
生じるｍＲＮＡの配列に相補的である。
ある実施形態においては、本発明は、ＩＤＨ１関連遺伝子の発現をモジュレーションす
る二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該ｓｉＮＡ分子はセンス鎖お
よびアンチセンス鎖を含み、各鎖は、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、該ア
ンチセンス鎖は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）のいずれかに相
補的な配列を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、「
少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は、
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４９８）；または
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）のいずれかに
対する同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、
「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。したがって、該
ｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は、配列番号４４６、４５０、４５１、４５２、４７７、
４７８、４７９、４８０、４９８または５０２のいずれかの少なくとも１５ヌクレオチド
配列を含む。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）のいずれかに対
する同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、「
少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。したがって、該ｓ
ｉＮＡ分子のセンス鎖は、配列番号７、１１、１２、１３、３８、３９、４０、４１、５
９または６３のいずれかの少なくとも１５ヌクレオチドの配列を含む。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）および
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−（配列番号４９８）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）および
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）のいずれかを
含む。もう１つの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、配列番号７および４４６の両
方、または配列番号１１および４５０の両方、または配列番号１２および４５１の両方、
または配列番号１３および４５２の両方、または配列番号３８および４７７の両方、また
は配列番号３９および４７８の両方、配列番号４０および４７９の両方、または配列番号
４１および４８０の両方、または配列番号５９および４９８の両方、または配列番号６３
および５０２の両方の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む
本発明の幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡのヌクレオチドの全ては修飾
されていない。他の実施形態においては、ｓｉＮＡ分子の一方または両方の鎖において、
独立して、該ヌクレオチド位置の１以上（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、
１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２
４、２５、２６、２７、２８、２９または３０個）が修飾されている。修飾には、核酸糖
修飾、塩基修飾、バックボーン（ヌクレオチド間結合）修飾、非ヌクレオチド修飾および
／またはそれらのいずれかの組合せが含まれる。ある場合には、プリンおよびピリミジン
ヌクレオチドが異なって修飾されている。例えば、プリンおよびピリミジンヌクレオチド
は、２’−糖位置において、異なって修飾されうる（すなわち、少なくとも１つのプリン
は、２’−糖位置において、同じ又は異なる鎖において、少なくとも１つのピリミジンと
は異なる修飾を有する）。ある場合においては、プリンは一方または両方の鎖において修
飾されていないが、ピリミジンは一方または両方の鎖において修飾されている。ある他の
場合においては、ピリミジンは一方または両方の鎖において修飾されていないが、プリン
は一方または両方の鎖において修飾されている。幾つかの場合には、少なくとも１つの修
飾ヌクレオチドは２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシヌクレ
オチドまたは２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである。幾つかの場合には、一方または両
方の鎖におけるピリミジンヌクレオチドの少なくとも５以上は全２’−デオキシ−２’−
フルオロまたは全２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。幾つかの場合には、
一方または両方の鎖におけるプリンヌクレオチドの少なくとも５以上は全２’−デオキシ
−２’−フルオロまたは全２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。該ｓｉＮＡ
分子が本明細書に記載の１以上の修飾を含む或る場合においては、ガイド（アンチセンス
）鎖の５’末端の１、２および３位のヌクレオチドは修飾されていない。
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は該鎖の一方または両方において１、
２、３または４ヌクレオチドの３’突出を有する。他の実施形態においては、該ｓｉＮＡ
分子は突出を欠く（すなわち、平滑末端を有する）。好ましくは、該ｓｉＮＡ分子はセン
スおよびアンチセンス鎖の両方に２ヌクレオチドの３’突出を有する。該突出は修飾され
ている又は修飾されていないことが可能である。該突出における修飾ヌクレオチドの例に
は、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、
ロック化（ｌｏｃｋｅｄ）核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチドまたは２’−デオキシヌクレオチ
ドが含まれるが、これらに限定されるものではない。該アンチセンス鎖における突出ヌク
レオチドは、ＩＤＨ１関連標的配列におけるヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを含み
うる。同様に、該センス鎖における突出は、ＩＤＨ１関連標的配列内に存在するヌクレオ
チドを含みうる。ある場合には、本発明のｓｉＮＡ分子は、２’−Ｏ−アルキル（例えば
、２’−Ｏ−メチル）ヌクレオチドであるアンチセンス鎖上の２つの３’突出ヌクレオチ
ド、および２’−デオキシヌクレオチドであるセンス鎖上の２つの３’突出ヌクレオチド
を有する。他の場合には、本発明のｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両
方において２’−Ｏ−アルキル（例えば、２’−Ｏ−メチル）ヌクレオチドである２つの
３’突出ヌクレオチドを有する。ある実施形態においては、２’−Ｏ−アルキルヌクレオ
チドは２’−Ｏ−メチルウリジンヌクレオチドである。ある場合には、該３’突出はまた
、該突出のヌクレオチド間に１以上のホスホロチオアート結合を含む。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子はキャップ（本明細書においては
「末端キャップ」とも称される）を有する。該キャップは５’末端に存在し（５’−キャ
ップ）、または３’末端に存在し（３’−キャップ）、または両末端（例えば、該ｓｉＮ
Ａのセンス鎖の５’および３’末端）に存在する。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は該アンチセンス鎖の５’末端に
おいてリン酸化されている。該リン酸基はホスファート、ジホスファートまたはトリホス
ファートでありうる。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号９１、
１０７、１１１、１１５、１９９、２１３、２２７、２３１、３０３または４１１のいず
れかに対する配列同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。他の実施形態にお
いては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖、配列番号９０、１０６、１１０、１１４、１
９８、２１２、２２６、２３０、３０２または４１０のいずれかに対する配列同一性を有
する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。もう１つの実施形態においては、「少なくとも
１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、配列番号９０および９１、配
列番号１０６および１０７、配列番号１１０および１１１、配列番号１１４および１１５
、配列番号１９８および１９９、配列番号２１２および２１３、配列番号２２６および２
２７、配列番号２３０および２３１、配列番号３０２および３０３、または配列番号４１
０および４１１のいずれかを含む。
本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は対称または非対称でありうる。これらの二本鎖ｓｉＮＡ
の各鎖は、独立して、ヌクレオチド長において３〜３０ヌクレオチドの範囲でありうる。
一般に、本発明のｓｉＮＡ分子の各鎖は約１５〜３０（すなわち、約１５、１６、１７、
１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０
）ヌクレオチド長である。
二本鎖である又は二重らせん構造を有する本発明のｓｉＮＡ分子は、独立して、約３〜
約３０（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、
１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２
９または３０）塩基対を含む。一般に、本発明のｓｉＮＡの二重らせん構造は１５〜３０
塩基対、より一般には１８〜２５塩基対、更に一般には１９〜２４塩基対、最も一般には
１９〜２１塩基対長である。
ある実施形態においては、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該
分子はセンス鎖およびアンチセンス鎖を有し、式（Ａ）：
Figure 2017212982
（式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖はアンチセンス鎖であ
り、該アンチセンス鎖は配列番号４４６、配列番号４５０、配列番号４５１、配列番号４
５２、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４
９８または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、該センス鎖は、該
アンチセンス鎖に対する相補性を有する配列を含む；
各Ｎは、独立して、修飾されていない若しくは化学修飾されているヌクレオチドであ
る、または非ヌクレオチドである；
各Ｂは、存在する又は存在しない末端キャップである；
（Ｎ）は突出ヌクレオチドを表し、それらのそれぞれは、独立して、修飾されていな
い又は化学修飾されている；
Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数である；
Ｘ３は１５〜３０の整数である；
Ｘ４は１２〜２７の整数である；
［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は修飾ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドであり、
ここで、［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は、以下のものからなる群から選択される：
（ａ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は
２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシ−２’
−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は
２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレ
オチドである；
（ｃ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−
２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである；
（ｄ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−
２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；お
よび
（ｅ）［Ｎ１］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ２］はリボヌクレオチドであり、［
Ｎ３］はリボヌクレオチドである）を含む。
１つの実施形態においては、本発明は、
（ａ）ＮＸ４位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオ
キシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシ
ヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｂ）ＮＸ４位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ
−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌク
レオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｃ）ＮＸ３位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオ
キシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシ
ヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ
−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌク
レオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである、式（Ａ）の二本鎖
短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子に関する。
本発明は更に、所望により医薬上許容される担体または希釈剤と組合された、本明細書
に記載されている二本鎖核酸分子を含む組成物を提供する。
該組成物の投与は公知方法により行われることが可能であり、該核酸はインビトロまた
はインビボで所望の標的細胞内に導入される。
細胞、組織および生物内への本発明の核酸分子の導入に一般に用いられる技術は種々の
担体系、試薬およびベクターの使用を含む。本発明における使用に適したそのような担体
系の非限定的な例には、コンジュゲート、核酸−脂質粒子、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、リ
ポソーム、リポプレックス（ｌｉｐｏｐｌｅｘ）、ミセル、ウイロソーム、核酸複合体お
よびそれらの混合物が含まれる。
本発明の組成物はエアゾール、分散液、溶液（例えば、注射可能溶液）、クリーム、軟
膏、錠剤、散剤（粉末）、懸濁液などの形態でありうる。これらの組成物は、いずれかの
適当な経路で、例えば、経口的、舌下、頬側、非経口的、鼻腔内または局所的に投与され
うる。幾つかの実施形態においては、該組成物はエアゾール化され、吸入により運搬され
る。
本発明の分子および組成物は広範な治療用途わたる有用性を有する。したがって、本発
明のもう１つの態様は、対象の治療における本発明の分子および組成物の使用に関する。
したがって、本発明は、ＩＤＨ１関連遺伝子またはタンパク質の作用により又は作用の喪
失により引き起こされる状態に罹患している対象、例えばヒトの治療方法を提供し、該方
法は、本発明の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子の有効量を該対象に投与することを
含む。ある実施形態においては、該状態は癌（例えば、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、ＡＭ
Ｌ）である。
本発明のこれらの及び他の態様は、以下の詳細な説明および添付図面を参照することに
より明らかとなろう。更に、本明細書に記載されているいずれの方法または組成物も、本
明細書に記載されているいずれかの他の方法または組成物に関して実施されうること、お
よび種々の実施形態が組合されうることが想定される。
また、本発明の種々の態様を説明し及びより詳細に記載するために、本明細書の全体に
わたって特許、特許出願および他の文書が引用されている。本明細書に引用されているこ
れらの参考文献のそれぞれの全体を、図面を含め、参照により本明細書に組み入れること
とする。
発明の詳細な説明
Ａ．用語および定義
本出願においては以下の用語および定義が適用される。
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いる単数形表現は、文脈に明らかに矛
盾しない限り、複数対象物を含む。したがって、例えば、「細胞」に対する言及は２以上
の細胞などの組合せを含む。
特に示されていない限り、いずれの濃度範囲、百分率範囲、比範囲または整数範囲も、
挙げられている範囲内の任意の整数および適当な場合にはその分数（例えば、整数の１０
分の１および１００分の１）の値を含むと理解されるべきである。
数字に関して本明細書中で用いる「約」または「およそ」は、特に示されていない限り
、またはそうでないことが文脈から明らかでない限り（そのような数字が、可能な値の１
００％を超える場合は除かれる）、一般に、該数字のいずれかの方向（より大きい又はよ
り小さい）の５％の範囲内に含まれる数字を含むと理解される。特に示されていない限り
、またはそうでないことが文脈から明らかでない限り、範囲が示されている場合には、該
範囲内にエンドポイントが含まれる。
本明細書中で用いる「非塩基」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているとお
りのその意味を示す。この語は、一般に、ヌクレオチド塩基を欠く又は糖部分の１’位に
核酸塩基の代わりに水素原子（Ｈ）もしくは他の非核酸塩基化学基を有する糖部分に関す
るものである。例えば、Ａｄａｍｉｃら，米国特許第５，９９８，２０３号を参照された
い。１つの実施形態においては、本発明の非塩基部分はリボース、デオキシリボースまた
はジデオキシリボース糖である。
本明細書中で用いる「非環状ヌクレオチド」なる語は、当技術分野で一般に受け入れら
れているその意味を示す。この語は、一般に、非環状リボース糖を有するいずれかのヌク
レオチドを意味し、この場合、例えば、該リボース炭素／炭素または炭素／酸素結合のい
ずれかが、独立して又は一緒になって、該ヌクレオチドに存在しない。
本明細書中で用いる「アルキル」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそ
の意味を示す。この語は、一般に、直鎖状、分枝鎖状、アルケニル、アルキニル基および
環式基を含むが芳香族基を含まない飽和または不飽和炭化水素を意味する。それでも、前
記アルキルは非芳香族複素環基をも意味する。好ましくは、アルキル基は１〜１２個の炭
素を有する。より好ましくは、それは１〜７個の炭素、より好ましくは１〜４個の炭素の
低級アルキルである。アルキル基は置換されている又は置換されていないことが可能であ
る。置換されている場合、置換基は、好ましくは、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、Ｃ
１−Ｃ４アルコキシ、＝Ｏ、＝Ｓ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＨ２またはＮＲ１Ｒ２であり、ここ
で、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルである。
本明細書中で用いる「アンチセンス領域」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられ
ているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、標的核酸配列
に対する相補性を有するｓｉＮＡ分子のヌクレオチド配列を意味する。また、ｓｉＮＡ分
子のアンチセンス領域は、所望により、ｓｉＮＡ分子のセンス領域に対する相補性を有す
る核酸配列を含みうる。１つの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域
はアンチセンス鎖またはガイド鎖と称される。
「非対称ヘアピン」なる語は、アンチセンス領域、ヌクレオチドまたは非ヌクレオチド
を含みうるループ部分、および該アンチセンス領域より少数のヌクレオチドを含むセンス
領域（該センス領域は、該アンチセンス領域と塩基対形成しループと二重らせんを形成す
るのに十分な相補性を有する）を含む直鎖状ｓｉＮＡ分子を意味する。例えば、本発明の
非対称ヘアピンｓｉＮＡ分子は、細胞またはインビトロ系においてＲＮＡｉをもたらすの
に十分な長さ（例えば、約１５〜約３０、または約１５、１６、１７、１８、１９、２０
、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヌクレオチド）を
有するアンチセンス領域、および約４〜約１２（例えば、約４、５、６、７、８、９、１
０、１１または１２）ヌクレオチドを含むループ領域、および該アンチセンス領域に相補
的な約３〜約２５（例えば、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、
１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５）ヌク
レオチドを有するセンス領域を含みうる。該非対称ヘアピンｓｉＮＡ分子は、化学修飾さ
れていることが可能な５’末端ホスファート基をも含みうる。該非対称ヘアピンｓｉＮＡ
分子のループ部分は、本明細書に記載されているとおりのヌクレオチド、非ヌクレオチド
、リンカー分子またはコンジュゲート分子を含みうる。
本明細書中で用いる「生分解性」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそ
の意味を示す。この語は、一般に、生物学的系における分解、例えば、酵素的分解または
化学的分解に関するものである。
本明細書中で用いる「生分解性リンカー」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられ
ているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、１つの分子を
もう１つの分子に連結するために設計された、生物学的系における分解に感受性であるリ
ンカー分子を意味する。該リンカーは核酸または非核酸系リンカーでありうる。例えば、
生分解性リンカーは、リガンドまたは生物学的に活性な分子を本発明のｓｉＮＡに結合さ
せるために使用されうる。あるいは、生分解性リンカーは、本発明のｓｉＮＡ分子のセン
ス鎖とアンチセンス鎖とを結合させるために使用されうる。生分解性リンカーは、その安
定性が特定の目的（例えば、特定の組織または細胞型への運搬）のために調節されうるよ
うに設計される。核酸系生分解性リンカーの安定性は、種々の化学的手段、例えば、リボ
ヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドおよび化学修飾ヌクレオチド、例えば２’−Ｏ
−メチル、２’−フルオロ、２’−アミノ、２’−Ｏ−アミノ、２’−Ｃ−アリル、２’
−Ｏ−アリルおよび他の２’−修飾および塩基修飾ヌクレオチドの組合せを用いることに
より調節されうる。該生分解性核酸リンカー分子は二量体、三量体、四量体またはそれよ
り長い核酸分子、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３
、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチド
であることが可能であり、あるいはリン系結合、例えばホスホルアミダートまたはホスホ
ジエステル結合を有する単一ヌクレオチドを含みうる。該生分解性核酸リンカー分子は核
酸バックボーン、核酸糖または核酸塩基修飾をも含みうる。
本明細書中で用いる「生物学的に活性な分子」なる語は、当技術分野で一般に受け入れ
られているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、系におい
て生物学的応答を惹起もしくは修飾しうる、ならびに／または他の生物学的に活性な分子
の薬物動態および／もしくは薬力学をモジュレーションしうる化合物または分子を意味す
る。生物学的に活性な分子の例には、ｓｉＮＡ分子の単独体、または治療的に活性な分子
、例えば抗体、コレステロール、ホルモン、抗ウイルス物質、ペプチド、タンパク質、化
学療法剤、小分子、ビタミン、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチ
ド、酵素核酸、アンチセンス核酸、三重らせん形成性オリゴヌクレオチド、ポリアミン、
ポリアミド、ポリエチレングリコール、他のポリエーテル、２−５Ａキメラ、ｓｉＮＡ、
ｄｓＲＮＡ、アロザイム、アプタマー、デコイおよびそれらの類似体（これらに限定され
るものではない）を含む他の分子とｓｉＮＡ分子との組合せが含まれる。
本明細書中で用いる「生物学的系」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられている
その意味を示す。この語は、一般に、ヒトまたは動物（これらに限定されるものではない
）を含む生物学的起源からの精製または未精製形態の物質を意味し、ここで、該系は、Ｒ
ＮＡｉ活性に要求される成分を含む。したがって、この語は、例えば、細胞、組織、対象
もしくは生物またはそれらの抽出物を含む。この語は生物学的起源からの再構成物質をも
含む。
本明細書中で用いる「平滑末端」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそ
の意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、突出ヌクレオチドを有
さない二本鎖ｓｉＮＡ分子の末端を意味する。例えば、平滑末端を有する二本鎖ｓｉＮＡ
分子の２本の鎖は、末端の突出ヌクレオチドを伴わずに、マッチした塩基対により、互い
に整列する。本発明のｓｉＮＡ二重らせん分子は該二重らせんの一方または両方の末端に
平滑末端（例えば、アンチセンス鎖の５’末端に位置する末端、センス鎖の５’末端また
は二重らせんの両末端）を含みうる。
本明細書中で用いる「キャップ」（本明細書においては「末端キャップ」とも称される
）なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な
核酸分子に関しては、この語は、本発明の１以上の核酸分子の１以上の末端に組込まれう
る化学修飾ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドでありうる部分を意味する。これらの末端
修飾は該核酸分子をエキソヌクレアーゼ消化から保護し、細胞内の運搬および／または局
在化を補助しうる。該キャップは本発明の任意の核酸分子の５’末端（５’−キャップ）
または３’末端（３’−キャップ）に存在することが可能であり、あるいは両末端に存在
することが可能である。キャップは本発明の核酸分子のセンス鎖の５’末端、３’末端な
らびに／または５’および３’末端に存在しうる。また、キャップは、所望により、本発
明の核酸分子のアンチセンス鎖の３’末端に存在しうる。非限定的な例においては、５’
−キャップは、ＬＮＡ、グリセリル、逆方向デオキシ非塩基残基（部分）、４’５’−メ
チレンヌクレオチド、１−（ベータ−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チ
オヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド
、Ｌ−ヌクレオチド、アルファ−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、ホスホロジチオ
アート結合、トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環状３’，４’−ｓｅｃｏヌク
レオチド、非環状３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環状３，５−ジヒドロキ
シペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆方向ヌクレオチド部分、３’−３’−逆方向非
塩基部分、３’−２’−逆方向ヌクレオチド部分、３’−２’−逆方向非塩基部分、１，
４−ブタンジオールホスファート、３’−ホスホルアミダート、ヘキシルホスファート、
アミノヘキシルホスファート、３’−ホスファート、３’−ホスホロチオアート、ホスホ
ロジチオアート、または架橋もしくは非架橋メチルホスホナート部分を含むが、これらに
限定されるものではない。３’−キャップの非限定的な例は、ＬＮＡ、グリセリル、逆方
向デオキシ非塩基残基（部分）、４’５’−メチレンヌクレオチド、１−（ベータ−Ｄ−
エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、
５’−アミノ−アルキルホスファート、１，３−ジアミノ−２−プロピルホスファート、
３−アミノプロピルホスファート、６−アミノヘキシルホスファート、１，２−アミノド
デシルホスファート、ヒドロキシプロピルホスファート、１，５−アンヒドロヘキシトー
ルヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、アルファ−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、
ホスホロジチオアート、トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環状３’，４’−ｓ
ｅｃｏヌクレオチド、３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、３，５−ジヒドロキシ
ペンチルヌクレオチド、５’−５’−逆方向ヌクレオチド部分、５’−５’−逆方向非塩
基部分、５’−ホスホルアミダート、５’−ホスホロチオアート、１，４−ブタンジオー
ルホスファート、５’−アミノ、架橋および／または非架橋５’−ホスホルアミダート、
ホスホロチオアートおよび／またはホスホロジチオアート、架橋または非架橋メチルホス
ホナート、ならびに５’−メルカプト部分（より詳細には、参照により本明細書に組み入
れるＢｅａｕｃａｇｅおよびＩｙｅｒ，１９９３，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４９，１９
２５を参照されたい）を含むが、これらに限定されるものではない。図５は種々のキャッ
プの非限定的な例の幾つかを示す。
本明細書中で用いる「細胞」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意
味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語はその通常の生物学的な意味で
用いられ、全多細胞生物を意味せず、例えば、特に、ヒトを意味しない。細胞は生物、例
えば鳥類、植物および哺乳動物、例えばヒト、ウシ、ヒツジ、霊長類、サル、ブタ、イヌ
およびネコに存在しうる。細胞は原核細胞（例えば、細菌細胞）または真核細胞（例えば
、哺乳類または植物細胞）でありうる。細胞は体細胞または生殖系列由来、全能性または
多能性、分裂性または非分裂性でありうる。また、細胞は配偶子もしくは胚、幹細胞また
は完全分化細胞から誘導されることが可能であり、あるいはそれらを含みうる。
本明細書中で用いる「化学修飾」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそ
の意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、天然ｓｉＲＮＡまたは
ＲＮＡ全般のヌクレオチドとは異なるヌクレオチドの化学構造の任意の修飾を意味する。
「化学修飾」なる語は、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の、糖、塩基ま
たはヌクレオチド間結合における天然ｓｉＲＮＡまたはＲＮＡの付加、置換または修飾を
含む。ある実施形態においては、「化学修飾」なる語は、ある生物学的系における天然に
存在するＲＮＡの或る形態に関するもの、例えば２’−Ｏ−メチル修飾またはイノシン修
飾でありうる。
本明細書中で用いる「相補性」または「相補的」なる語は、当技術分野で一般に受け入
れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、一般に
、伝統的なワトソン−クリックまたは本明細書に記載されている他の非伝統的な結合型に
よる１つの核酸配列ともう１つの核酸配列との間の水素結合の形成または存在に関するも
のである。本発明の核酸分子の場合、核酸分子に関するその相補的配列に対する結合自由
エネルギーは、該核酸の関連機能（例えば、ＲＮＡｉ活性）の進行を可能にするのに十分
なものである。核酸分子に関する結合自由エネルギーは当技術分野でよく知られている（
例えば、Ｔｕｒｎｅｒら，１９８７，ＣＳＨＳｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．ＬＩＩ
ｐｐ．１２３−１３３；Ｆｒｉｅｒら，１９８６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ８３：９３７３−９３７７；Ｔｕｒｎｅｒら，１９８７，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ
．Ｓｏｃ．１０９：３７８３−３７８５を参照されたい）。完全な相補性は、核酸配列の
連続残基の全てがもう１つの核酸配列内の同じ数の連続残基と水素結合することを意味す
る。部分的相補性は核酸分子内に種々のミスマッチまたは塩基対不形成ヌクレオチド（例
えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上のミスマッチ、非ヌ
クレオチドリンカーまたは塩基対不形成ヌクレオチド）を含むことがあり、これらは、該
核酸分子のアンチセンス鎖もしくはアンチセンス領域とセンス鎖もしくはセンス領域との
間または該核酸分子のアンチセンス鎖もしくはアンチセンス領域と対応標的核酸分子との
間で生じるバルジ、ループまたは突出を形成しうる。そのような部分的相補性は、関与す
るヌクレオチドの総数に基づいて塩基対不形成ヌクレオチドの数により決定される相補性
比率（％相補性）、すなわち、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％などにより表
されうる。そのような部分的相補性は、該核酸分子（例えば、ｓｉＮＡ）がその機能（例
えば、配列特異的ＲＮＡｉを引き起こす能力）を維持する限りにおいて許容される。
本明細書中で用いる「組成物」または「製剤」なる語は、当技術分野で一般に受け入れ
られているそれらの意味を示す。これらの語は、一般に、例えば医薬上許容される担体ま
たは希釈剤中の、細胞または対象（例えば、ヒトを含む）内への投与（例えば、全身また
は局所投与）に適した形態の組成物または製剤を意味する。適当な形態は、１つには、使
用または進入経路（例えば、経口、経皮、吸入または注射）に左右される。そのような形
態は、該組成物または製剤が標的細胞（すなわち、負荷電核酸が運搬に望ましい細胞）に
到達するのを妨げるものであるべきではない。例えば、血流内に注射される組成物は可溶
性であるべきである。他の要因は当技術分野で公知であり、毒性、該組成物または製剤が
その効果を発揮するのを妨げる形態のような考慮事項を含む。本明細書中で用いる医薬製
剤には、ヒトおよび獣医用の製剤が含まれる。本発明の核酸分子との製剤化に適した物質
の非限定的な例には、脂質ナノ粒子（例えば、Ｓｅｍｐｌｅら，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌ，Ｆｅｂ；２８（２）：１７２−６．を参照されたい）、Ｐ−糖タンパ
ク質インヒビター（例えば、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｐ８５）、生分解性重合
体、例えば、徐放運搬用のポリ（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）ミクロスフェア（Ｅｍ
ｅｒｉｃｈ，ＤＦら，１９９９，Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，８，４７−５８）、
および充填ナノ粒子、例えば、ポリブチルシアノアクリラートから構成されるものが含ま
れる。本発明の核酸分子の運搬手段の他の非限定的な例には、Ｂｏａｄｏら，１９９８，
Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ，８７，１３０８−１３１５；Ｔｙｌｅｒら，１９９９，ＦＥＢ
Ｓ Ｌｅｔｔ．，４２１，２８０−２８４；Ｐａｒｄｒｉｄｇｅら，１９９５，ＰＮＡＳ
ＵＳＡ．，９２，５５９２−５５９６；Ｂｏａｄｏ，１９９５，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄ
ｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．，１５，７３−１０７；Ａｌｄｒｉａｎ−Ｈｅｒｒａｄａら，
１９９８，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２６，４９１０−４９１６；および
Ｔｙｌｅｒら，１９９９，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．，９６，７０５３−７０５８に記載されて
いる物質が含まれる。「医薬上許容される組成物」または「医薬上許容される製剤」は、
本発明の核酸分子の、それらの所望の活性に最も適した身体位置への有効な分布を可能に
する組成物または製剤を意味しうる。
「細胞毒性／静細胞物質」なる語は、細胞の機能を直接的に阻害することにより細胞死
を引き起こす若しくは細胞増殖を抑制する又は細胞有糸分裂を抑制もしくは阻害する化合
物、例えばアルキル化物質、腫瘍壊死因子、インターカレーター、低酸素活性化性化合物
、微小管インヒビター／微小管安定化物質、有糸分裂キネシンのインヒビター、ヒストン
デアセチラーゼのインヒビター、有糸分裂進行に関与するキナーゼのインヒビター、代謝
拮抗物質；生体応答調節物質；ホルモン／抗ホルモン治療用物質、造血成長因子、モノク
ローナル抗体標的化治療用物質、トポイソメラーゼインヒビター、プロテアソームインヒ
ビターおよびユビキチンリガーゼインヒビターを意味する。
本明細書中で用いる「遺伝子」または「標的遺伝子」なる語は、当技術分野で一般に受
け入れられているそれらの意味を示す。これらの語は、一般に、ポリペプチドの産生に必
要な部分長または全長のコード配列を含む核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）配列を意
味する。標的遺伝子は該核酸配列のＵＴＲまたは非コード領域をも含みうる。遺伝子また
は標的遺伝子は、機能性ＲＮＡ（ｆＲＮＡ）または非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）、例え
ば小一過性ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、小核ＲＮＡ（ｓｎＲ
ＮＡ）、短干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、核小体ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、リボソームＲＮ
Ａ（ｒＲＮＡ）、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）およびそれらの前駆体ＲＮＡをコードしうる。
そのような非コードＲＮＡは、機能性または調節性細胞過程に関与するｆＲＮＡまたはｎ
ｃＲＮＡの活性をモジュレーションする際にｓｉＮＡ媒介性ＲＮＡ干渉のための標的核酸
分子として働きうる。したがって、疾患につながる異常ｆＲＮＡまたはｎｃＲＮＡ活性は
本発明のｓｉＮＡ分子によりモジュレーションされうる。ｆＲＮＡおよびｎｃＲＮＡを標
的化するｓｉＮＡ分子は、遺伝的刷込み、転写、翻訳または核酸プロセシング（例えば、
トランスアミノ化、メチル化など）のような細胞過程に介入することにより対象、生物ま
たは細胞の遺伝子型または表現型を操作または改変するためにも使用されうる。標的遺伝
子は、細胞由来の遺伝子、内因性遺伝子、トランスジーンまたは外因性遺伝子、例えば、
感染後に細胞内に存在する病原体、例えばウイルスの遺伝子でありうる。標的遺伝子を含
有する細胞は任意の生物、例えば植物、動物、原虫、ウイルス、細菌または真菌から誘導
され、またはそれらに含有されうる。植物の非限定的な例には、単子葉植物、双子葉植物
または裸子植物が含まれる。動物の非限定的な例には、脊椎動物または無脊椎動物が含ま
れる。真菌の非限定的な例には、カビまたは酵母が含まれる。総説としては、例えば、Ｓ
ｎｙｄｅｒおよびＧｅｒｓｔｅｉｎ，２００３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３００，２５８−２６
０を参照されたい。
本明細書中で用いる「相同配列」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそ
れらの意味を示す。これらの語は、一般に、遺伝子、遺伝子転写産物および／または非コ
ードポリヌクレオチドのような１以上のポリヌクレオチド配列により共有されているヌク
レオチド配列を意味する。例えば、相同配列は、関連しているが異なるタンパク質、例え
ば異なる遺伝子ファミリーメンバー、異なるタンパク質エピトープ、異なるタンパク質ア
イソフォームまたは完全分岐遺伝子をコードする２以上の遺伝子により共有されているヌ
クレオチド配列でありうる。相同配列は、２以上の非コードポリヌクレオチド、例えば非
コードＤＮＡまたはＲＮＡ、調節配列、イントロン、および転写制御または調節の部位に
より共有されているヌクレオチド配列でありうる。相同配列は、２以上のポリヌクレオチ
ド配列により共有されている配列領域をも含みうる。相同性は、完全同一（１００％）で
あることを必要とせず、部分相同配列も本発明の範囲に含まれる（例えば、少なくとも９
５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８
５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％など）。相同性（％）は、２つの配列間
のマッチヌクレオチドの数を、比較されている全長により割り算し、１００を掛けた数で
ある。
「ＩＤＨ１」なる語は、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ１（サイトゾルイソクエン酸デ
ヒドロゲナーゼとしても公知）を意味する。表５は、野生型ヒトＩＤＨ１タンパク質をコ
ードするヌクレオチド配列を開示しているＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号
を一覧している。「ＩＤＨ１関連」なる語は、ＩＤＨ１遺伝子またはタンパク質、例えば
、野生型ＩＤＨ１遺伝子およびコード化タンパク質の両方、ならびにそれらの誘導体、例
えば、野生型ＩＤＨ１遺伝子およびコード化タンパク質および／またはペプチドの突然変
異形態および／またはスプライス変異体を含む。例えば、ヒトＩＤＨ１の種々の突然変異
形態、すなわち、１３２位のアルギニンがヒスチジンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１
−Ｒ１３２Ｈ）、システインに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ）、グリシ
ンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｇ）、セリンに突然変異しているもの（
ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｓ）、ロイシンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｌ）お
よびバリンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｖ）が特定されている。これら
の突然変異形態、およびそれらをコードするポリヌクレオチドはそれぞれ、「ＩＤＨ１関
連」なる語に含まれる。
「ＲＮＡｉ活性の改善」なる語は、インビトロおよび／またはインビボで測定されたＲ
ＮＡｉ活性の増加を意味し、この場合、ＲＮＡｉ活性は、ＲＮＡｉをもたらすｓｉＮＡの
能力および本発明のｓｉＮＡの安定性の両方を反映するものである。本発明においては、
これらの活性の産生は、複数のリボヌクレオチドを含有する全ＲＮＡ ｓｉＮＡまたはｓ
ｉＮＡと比較してインビトロおよび／またはインビボで上昇しうる。幾つかの場合には、
ｓｉＮＡ分子の活性または安定性は低下（すなわち、１０倍未満）しうるが、ｓｉＮＡ分
子の全活性はインビトロおよび／またはインビボで増強しうる。
「含む」（およびそのいずれかの形態、例えば「含み」および「含まれる」）、「含ん
でなる」（およびそのいずれかの形態、例えば「有する」または「有し」）または「含有
する」（およびそのいずれかの形態、例えば「含有し」または「含有している」）なる語
は包括性であり、非限定性（オープン・エンド）であり、列挙されていない追加的な要素
または方法工程を除外しない。
「抑制」、「ダウンレギュレーション」または「減少（低下）」なる語は、当技術分野
で一般に受け入れられているそれらの意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては
、この語は、一般に、遺伝子の発現における、または１以上のタンパク質もしくはタンパ
ク質サブユニットをコードするＲＮＡ分子または等価ＲＮＡ分子のレベルにおける、ある
いは１以上のタンパク質またはタンパク質サブユニットの活性における、本発明の核酸分
子（例えば、ｓｉＮＡ）の非存在下で観察されるものより低いレベルへの低下を意味する
。ダウンレギュレーションは、翻訳後サイレンシング、例えばＲＮＡｉ媒介性切断、また
はＤＮＡメチル化パターンもしくはＤＮＡクロマチン構造の改変にも関連づけられうる。
本明細書中で用いる「間欠的」または「間欠的に」なる語は、当技術分野で一般に受け
入れられているそれらの意味を示す。これらの語は、一般に、規則的または不規則的な間
隔での周期的停止および開始を意味する。
「ヌクレオシド間結合」または「ヌクレオシド間リンカー」または「ヌクレオチド間結
合」または「ヌクレオチド間リンカー」なる語は本明細書中で互換的に用いられ、当技術
分野で公知のとおり、２つのヌクレオシド単位間のいずれかのリンカーまたは結合、例え
ばホスファート、ホスファートの類似体、ホスホナート、グアニジウム、ヒドロキシルア
ミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、カルバマート、アルキルおよび置換アルキル
結合（これらに限定されるものではない）を意味する。ヌクレオシド間結合は核酸分子の
バックボーンを構成する。
本明細書中で用いる「哺乳類」または「哺乳動物」なる語は、当技術分野で一般に受け
入れられているそれらの意味を示す。これらの語は、一般に、任意の温血脊椎動物種、例
えばヒト、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ハムスター、モルモット、ウサギ、家畜などを
意味する。
「加圧式定量噴霧式吸入器」または「ＭＤＩ」なる語は、容器、該容器を覆う固定キャ
ップ、および該容器内に配置された製剤定量弁を含む単位を意味する。ＭＤＩ系は適当な
チャネリング装置を含む。適当なチャネリング装置は、例えば、弁アクチュエータ、およ
び充填キャニスターから該定量弁を介して患者の鼻または口（例えば、マウスピースアク
チュエータ）へと医薬が運搬されうる円筒形および円錐状導管を含む。
本明細書中で用いる「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲＮＡ」なる語は、当技術分野で
一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、ｍＲＮＡ切断、翻訳抑制
／阻害またはヘテロクロマチンサイレンシングのいずれかにより標的メッセンジャーＲＮ
Ａの発現を調節する小さな二本鎖ＲＮＡを意味する（例えば、Ａｍｂｒｏｓ，２００４，
Ｎａｔｕｒｅ，４３１，３５０−３５５；Ｂａｒｔｅｌ，２００４，Ｃｅｌｌ，１１６，
２８１−２９７；Ｃｕｌｌｅｎ，２００４，Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，１０２，
３−９；Ｈｅら，２００４，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，５，５２２−５３１；Ｙｉ
ｎｇら，２００４，Ｇｅｎｅ，３４２，２５−２８；およびＳｅｔｈｕｐａｔｈｙら，２
００６，ＲＮＡ，１２：１９２−１９７を参照されたい）。
本明細書中で用いる「モジュレート（モジュレーション）」なる語は、当技術分野で一
般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語
は、遺伝子の発現または１以上のＲＮＡ分子（コード化または非コード化）のレベルまた
は１以上のＲＮＡ分子もしくはタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの活性がアッ
プレギュレーションまたはダウンレギュレーションされて、発現、レベルまたは活性が、
モジュレーションを引き起こす分子の非存在下で観察されるものより高くなる又は低くな
る場合を意味する。例えば、幾つかの実施形態における「モジュレート（モジュレーショ
ン）」なる語は、例えば遺伝子発現の、抑制を意味することがあり、他の実施形態におい
ては、例えば遺伝子発現の、増強またはアップレギュレーションを意味することがある。
本明細書中で用いる「修飾（された）ヌクレオチド」なる語は、当技術分野で一般に受
け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、当技術分野で一般に公知の未修飾
（または天然）ヌクレオチドの塩基、糖および／またはホスファートの化学構造における
修飾を含有するヌクレオチドを意味する。修飾ヌクレオチドの非限定的な例は本明細書お
よび米国特許出願第１２／０６４，０１４号（ＵＳ ２００９０１７６７２５として公開
されている）に記載されている。
「塩基対不形成」なる語は、二本鎖ｓｉＮＡ分子のセンス鎖またはセンス領域とアンチ
センス鎖またはアンチセンス領域との間で塩基対形成していないヌクレオチドに関するも
のである。塩基対不形成ヌクレオチドは、例えば、ミスマッチ、突出および一本鎖ループ
を含みうるが、これらに限定されるものではない。
「非ヌクレオチド」なる語は、１以上のヌクレオチド単位の代わりにポリヌクレオチド
鎖内に取り込まれうる任意の基または化合物、例えば非塩基部分またはアルキル鎖（これ
らに限定されるものではない）を意味する。該基または化合物は、それが、一般に認識さ
れているヌクレオチド塩基、例えばアデノシン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはチ
ミンを含有しておらず、１’位に核酸塩基を欠く点において、「非塩基」である。
「ヌクレオチド」なる語は、当技術分野で一般に認識されているとおりに用いられる。
ヌクレオチドは、一般に、核酸塩基、糖およびヌクレオシド間結合、例えばホスファート
を含む。該塩基は、当技術分野でよく知られているとおり、天然塩基（標準）、修飾塩基
または塩基類似体でありうる。そのような塩基は、一般に、ヌクレオチド糖部分の１’位
に位置する。また、該ヌクレオチドは、該糖、ヌクレオシド間結合および／または塩基部
分において修飾されていない又は修飾されていることが可能である（互換的に、ヌクレオ
チド類似体、修飾ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、非標準ヌクレオチドなどとも称さ
れる；例えば、米国特許出願第１２／０６４，０１４号（ＵＳ ２００９０１７６７２５
として公開）を参照されたい）。
本明細書中で用いる「突出」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意
味を示す。典型的な二本鎖核酸分子に関しては、この語は、一般に、二本鎖核酸分子の２
本の鎖間で塩基対形成していないヌクレオチド配列の末端部分を意味する（例えば、図４
を参照されたい）。突出は、存在する場合、典型的には、ｓｉＮＡ二重らせんの一方また
は両方の鎖の３’末端に位置する。
本明細書中で用いる「非経口」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその
意味を示す。この語は、一般に、消化管を経由する以外の方法で分子、薬物、物質または
化合物を投与する方法または技術を意味し、表皮、皮下、血管内（例えば、静脈内）、筋
肉内または鞘内注射または注入技術などを含む。
「経路標的」なる語は、遺伝子発現または活性の経路に関与する任意の標的を意味する
。例えば、いずれかの与えられた標的は、生物学的経路における上流、下流または変更遺
伝子を含みうる関連経路標的を有しうる。これらの経路標的遺伝子は、本明細書に記載の
疾患、状態および形質の治療において相加または相乗効果をもたらしうる。
「ホスホロチオアート」なる語は、酸素原子の代わりに１以上の硫黄原子を含むヌクレ
オチド間ホスファート結合を意味する。したがって、ホスホロチオアートなる語はホスホ
ロチオアートおよびホスホロジチオアートヌクレオチド間結合の両方を意味する。
「１位」なる語は、鎖、例えばアンチセンス鎖の末端の第１ヌクレオチドの位置を意味
する。本明細書において言及されている全ての位置は、鎖の末端から数えたヌクレオチド
の位置であり、例えば、アンチセンス鎖の５’末端からの１〜３位は、アンチセンス鎖の
５’末端から数えた１、２および３位の３ヌクレオチドを意味する。
本明細書中で用いる「リボヌクレオチド」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられ
ているその意味を示す。この語は、一般に、β−Ｄ−リボフラノース部分の２’位にヒド
ロキシル基を有するヌクレオチドを意味する。
本明細書中で用いる「ＲＮＡ」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその
意味を示す。一般に、ＲＮＡなる語は、少なくとも１つのリボフラノシド部分を含む分子
を意味する。この語は、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、単離ＲＮＡ、例えば部分精製ＲＮ
Ａ、実質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え製造ＲＮＡ、ならびに１以上のヌクレオ
チドの付加、欠失、置換および／または改変の点で天然ＲＮＡとは異なる改変ＲＮＡを含
みうる。そのような改変は、例えば、ｓｉＮＡの末端または内部への、例えばＲＮＡの１
以上のヌクレオチドにおける、非ヌクレオチド物質の付加を含みうる。本発明のＲＮＡ分
子におけるヌクレオチドは、非標準ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチ
ドまたは化学合成ヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドをも含みうる。これらの改
変ＲＮＡは、天然に存在するＲＮＡの類似体と称されうる。
「ＲＮＡ干渉」なる語または「ＲＮＡｉ」なる語は、当技術分野で一般に公知のとおり
、短干渉性核酸分子により引き起こされる、細胞における遺伝子発現を抑制またはダウン
レギュレーションする生物学的過程を意味する。例えば、以下のものを参照されたい：Ｚ
ａｍｏｒｅおよびＨａｌｅｙ，２００５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０９，１５１９−１５２４
；ＶａｕｇｈｎおよびＭａｒｔｉｅｎｓｓｅｎ，２００５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０９，１
５２５−１５２６；Ｚａｍｏｒｅら，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５−３３；Ｂａｓ
ｓ，２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４２８−４２９；Ｅｌｂａｓｈｉｒら，２００１
，Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４９４−４９８；ならびにＫｒｅｕｔｚｅｒら，国際ＰＣＴ公
開番号ＷＯ ００／４４８９５；Ｚｅｒｎｉｃｋａ−Ｇｏｅｔｚら，国際ＰＣＴ公開番号
ＷＯ ０１／３６６４６；Ｆｉｒｅ，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９９／３２６１９；Ｐｌ
ａｅｔｉｎｃｋら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ００／０１８４６；ＭｅｌｌｏおよびＦｉ
ｒｅ，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ０１／２９０５８；Ｄｅｓｃｈａｍｐｓ−Ｄｅｐａｉｌ
ｌｅｔｔｅ，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９９／０７４０９；ならびにＬｉら，国際ＰＣＴ
公開番号ＷＯ ００／４４９１４；Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９
７，１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８３３
−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２１５−２２１
８；ならびにＨａｌｌら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２３２−２２３７；Ｈ
ｕｔｖａｇｎｅｒおよびＺａｍｏｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２０５６−
６０；ＭｃＭａｎｕｓら，２００２，ＲＮＡ，８，８４２−８５０；Ｒｅｉｎｈａｒｔら
，２００２，Ｇｅｎｅ ＆ Ｄｅｖ．，１６，１６１６−１６２６；ならびにＲｅｉｎｈ
ａｒｔ ＆ Ｂａｒｔｅｌ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８３１。また、ＲＮ
Ａｉなる語は、例えば翻訳後遺伝子サイレンシング、翻訳抑制、転写抑制またはエピジェ
ネティクス（後成学）のような配列特異的ＲＮＡ干渉を示すために用いられる他の語と同
意義であると意図される。例えば、本発明のｓｉＮＡ分子は、転写後レベルまたは転写前
レベルのいずれかにおいて遺伝子を後成学的にサイレンシングするために使用されうる。
非限定的な例においては、本発明のｓｉＮＡ分子による遺伝子発現のエピジェネティック
（後成的）モジュレーションは、遺伝子発現を改変するためのクロマチン構造またはメチ
ル化パターンのｓｉＮＡ媒介性修飾により生じうる（例えば、Ｖｅｒｄｅｌら，２００４
，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６７２−６７６；Ｐａｌ−Ｂｈａｄｒａら，２００４，Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ，３０３，６６９−６７２；Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，
２９７，１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８
３３−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２１５−２
２１８；およびＨａｌｌら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２３２−２２３７を
参照されたい）。もう１つの非限定的な例においては、本発明のｓｉＮＡ分子による遺伝
子発現のモジュレーションは、当技術分野で公知のとおり、ＲＩＳＣまたは翻訳抑制によ
るＲＮＡ（コードまたは非コードＲＮＡ）のｓｉＮＡ媒介性切断により生じることがあり
、あるいはモジュレーションは転写抑制により生じうる（例えば、Ｊａｎｏｗｓｋｉら，
２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１，２１６−２２２を参
照されたい）。
「ＲＮＡｉインヒビター」なる語は、細胞または生物におけるＲＮＡ干渉機能または活
性をダウンレギュレーション、低減または抑制しうる任意の分子を意味する。ＲＮＡｉイ
ンヒビターは、タンパク質成分、例えばＲＩＳＣ、または核酸成分、例えばｍｉＲＮＡも
しくはｓｉＲＮＡを含むＲＮＡｉ経路のいずれかの成分の機能と相互作用し又は干渉する
ことにより、ＲＮＡｉをダウンレギュレーション、低減または抑制（例えば、標的ポリヌ
クレオチドのＲＮＡｉ媒介性切断、翻訳抑制または転写サイレンシング）しうる。ＲＮＡ
ｉインヒビターは、ＲＩＳＣ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡまたは細胞または生物におけるＲ
ＮＡｉ経路のいずれかの他の成分の機能と相互作用し又は干渉しうるｓｉＮＡ分子、アン
チセンス分子、アプタマーまたは小分子でありうる。ＲＮＡｉ（例えば、標的ポリヌクレ
オチドのＲＮＡｉ媒介性切断、翻訳抑制または転写サイレンシング）により、本発明のＲ
ＮＡｉインヒビターは、標的遺伝子の発現をモジュレーション（例えば、アップレギュレ
ーションまたはダウンレギュレーション）するために使用されうる。
本明細書中で用いる「センス領域」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられている
その意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、ｓｉＮＡ分子のアン
チセンス領域に対する相補性を有するｓｉＮＡ分子のヌクレオチド配列を意味する。また
、ｓｉＮＡ分子のセンス領域は、標的核酸配列に対する相同性または配列同一性を有する
核酸配列を含みうる。１つの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子のセンス領域はセンス
鎖またはパッセンジャー鎖とも称される。
「短干渉性核酸」、「ｓｉＮＡ」、「短干渉性ＲＮＡ」、「ｓｉＲＮＡ」、「短干渉性
核酸分子」、「短干渉性オリゴヌクレオチド分子」または「化学修飾短干渉性核酸分子」
なる語は、配列特異的にＲＮＡ干渉（「ＲＮＡｉ」）または遺伝子サイレンシングを引き
起こすことにより遺伝子発現またはウイルス複製を抑制またはダウンレギュレーションし
うる任意の核酸分子を意味する。これらの語は、個々の核酸分子、複数のそのような核酸
分子またはそのような核酸分子のプールの双方を意味しうる。該ｓｉＮＡは、自己相補的
なセンスおよびアンチセンス鎖を含む二本鎖核酸分子であることが可能であり、ここで、
該アンチセンス鎖は、標的核酸分子またはその一部におけるヌクレオチド配列に相補的で
あるヌクレオチド配列を含み、該センス鎖は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌ
レオチド配列を含む。該ｓｉＮＡは、二重らせん、非対称二重らせん、ヘアピンまたは非
対称ヘアピン二次構造（自己相補的なセンスおよびアンチセンス領域を有するもの）を有
するポリヌクレオチドであることが可能であり、ここで、該アンチセンス領域は、別の標
的核酸分子またはその一部におけるヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列を
含み、該センス領域は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を含む
。該ｓｉＮＡは、自己相補的なセンスおよびアンチセンス領域を含む２以上のループ構造
およびステムを有する環状一本鎖ポリヌクレオチドであることが可能であり、ここで、該
アンチセンス領域は、標的核酸分子またはその一部におけるヌクレオチド配列に相補的で
あるヌクレオチド配列を含み、該センス領域は、標的核酸配列またはその一部に対応する
ヌクレオチド配列を含み、該環状ポリヌクレオチドは、ＲＮＡｉを引き起こしうる活性ｓ
ｉＮＡ分子を産生するようにインビボまたはインビトロのいずれかでプロセシング（加工
）されうる。該ｓｉＮＡは、標的核酸分子またはその一部におけるヌクレオチド配列に相
補的なヌクレオチド配列を有する一本鎖ポリヌクレオチドを含むことが可能であり（例え
ば、この場合、そのようなｓｉＮＡ分子は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌク
レオチド配列のｓｉＮＡ分子内の存在を要しない）、ここで、該一本鎖ポリヌクレオチド
は更に、末端ホスファート基、例えば５’−ホスファート（例えば、Ｍａｒｔｉｎｅｚら
，２００２，Ｃｅｌｌ，１１０，５６３−５７４およびＳｃｈｗａｒｚら，２００２，Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ，１０，５３７−５６８を参照されたい）または５’，３’
−ジホスファートを含みうる。
本明細書中で用いる「対象」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意
味を示す。この語は、一般に、本発明の核酸分子が投与されうる生物を意味する。対象は
、ヒトまたはヒト細胞を含む哺乳類または哺乳類細胞でありうる。この語はまた、外植細
胞のドナーもしくはレシピエントである生物または該細胞自体を意味する。
本明細書中で用いる「全身投与」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそ
の意味を示す。この語は、一般に、血流中の薬物のインビボ全身吸収または蓄積およびそ
れに続く全身への分布を意味する。
「ＩＤＨ１」または「ＩＤＨ１関連」なる語と共に用いられた場合の「標的」なる語は
、任意のＩＤＨ１関連標的タンパク質、ペプチドもしくはポリペプチド、またはコード化
ポリヌクレオチド／核酸配列（例えば、標的ＤＮＡまたは標的ＲＮＡ）（限定的なもので
はないが、表２および表５に一覧されているものを含む）を意味する。したがって、ＩＤ
Ｈ１関連標的は、野生型ＩＤＨ１タンパク質およびそのコード遺伝子の両方、ならびにそ
れらの誘導体、例えば、野生型ＩＤＨ１遺伝子およびコード化タンパク質および／または
ペプチドの突然変異形態および／またはスプライス変異体でありうる。例えば、ヒトＩＤ
Ｈ１の種々の突然変異形態、すなわち、１３２位のアルギニンがヒスチジンに突然変異し
ているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ）、システインに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−
Ｒ１３２Ｃ）、グリシンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｇ）、セリンに突
然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｓ）、ロイシンに突然変異しているもの（ＩＤ
Ｈ１−Ｒ１３２Ｌ）およびバリンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｖ）が特
定されている。
本明細書中で用いる「標的部位」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそ
の意味を示す。この語は、一般に、例えば、標的配列に相補的な配列をアンチセンス領域
内に含有するｓｉＮＡ構築物によりもたらされる切断のために「標的化」される標的核酸
分子（例えば、ＲＮＡ）内の配列を意味する。
本明細書中で用いる「治療的有効量」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられてい
るその意味を示す。この語は、一般に、研究者、獣医、医師または他の臨床家により求め
られている細胞、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を惹起する化合
物または組成物の量を意味する。例えば、疾患または障害に関連した測定可能なパラメー
タにおける少なくとも２５％の減少が認められる場合に、与えられた臨床的治療が有効だ
とみなされるならば、その疾患または障害の治療のための薬物の治療的有効量は、そのパ
ラメータにおいて少なくとも２５％の減少を引き起こすのに必要な量である。
本明細書中で用いる「汎用塩基」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそ
の意味を示す。汎用塩基なる語は、一般に、天然ＤＮＡ／ＲＮＡ塩基のそれぞれと塩基対
を形成するヌクレオチド塩基類似体であって、それらの間で相違をほとんど又は全く伴わ
ないものを意味する。汎用塩基の非限定的な例には、当技術分野で公知のとおり（例えば
、Ｌｏａｋｅｓ，２００１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２９，２
４３７−２４４７を参照されたい）、Ｃ−フェニル、Ｃ−ナフチルおよび他の芳香族誘導
体、イノシン、アゾールカルボキサミドおよびニトロアゾール誘導体、例えば３−ニトロ
ピロール、４−ニトロインドール、５−ニトロインドールおよび６−ニトロインドールが
含まれる。
本明細書中で用いる「アップレギュレーション」なる語は、当技術分野で一般に受け入
れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、遺伝子
の発現、または１以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットをコードするＲＮＡ
分子もしくは等価ＲＮＡ分子のレベル、または１以上のＲＮＡ、タンパク質もしくはタン
パク質サブユニットの活性の、本発明の核酸分子（例えば、ｓｉＮＡ）の非存在下で観察
されるものを超えるレベルまでの増加を意味する。ある場合には、ｓｉＮＡ分子での遺伝
子発現のアップレギュレーションまたは促進は、不活性または弱化分子の存在下で観察さ
れるレベルを超えるものである。他の場合には、ｓｉＮＡ分子での遺伝子発現のアップレ
ギュレーションまたは促進は、例えば、スクランブル配列またはミスマッチを有するｓｉ
ＮＡ分子の存在下で観察されるレベルを超えるものである。更に他の場合には、本発明の
核酸分子での遺伝子発現のアップレギュレーションまたは促進は、該核酸分子の存在下の
ほうが、その非存在下より大きい。幾つかの場合には、遺伝子発現のアップレギュレーシ
ョンまたは促進は、ＲＮＡ媒介性遺伝子サイレンシング、例えば、アップレギュレーショ
ンされるべき対象遺伝子の発現をダウンレギュレーションし、抑制し又はサイレンシング
するコードまたは非コードＲＮＡ標的のＲＮＡｉ媒介性切断またはサイレンシングの抑制
に関連づけられる。遺伝子発現のダウンレギュレーションは、例えば、コードＲＮＡまた
はそのコード化タンパク質により、例えば負のフィードバックまたは拮抗作用により誘導
されうる。遺伝子発現のダウンレギュレーションは、例えば、関心のある遺伝子に対する
調節制御を有する非コードＲＮＡにより、例えば、翻訳抑制、クロマチン構造、メチル化
、ＲＩＳＣ媒介性ＲＮＡ切断または翻訳抑制により該遺伝子の発現をサイレンシングする
ことにより誘導されうる。したがって、関心のある遺伝子をダウンレギュレーション、抑
制またはサイレンシングする標的の抑制またはダウンレギュレーションは、治療用の対象
遺伝子の発現をアップレギュレーションするために用いられうる。
本明細書中で用いる「ベクター」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそ
の意味を示す。ベクターなる語は、一般に、１以上の核酸分子を運搬するために用いられ
るいずれかの核酸および／またはウイルスに基づく発現系または技術を意味する。
Ｂ．本発明のｓｉＮＡ分子
本発明は、疾患および／または生理的状態、例えば、ＩＤＨ１関連遺伝子またはタンパ
ク質の発現に関連した細胞増殖関連障害、例えば、中枢神経系の癌（神経膠腫）およびＡ
ＭＬ（これらに限定されるものではない）を治療するために使用されうるＩＤＨ１関連ポ
リヌクレオチド配列を標的化するｓｉＮＡを含む組成物および方法を提供する。本発明の
特定の態様および実施形態においては、本発明の核酸分子は、表１ａおよび表１ｂに示さ
れている配列の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む。該ｓｉＮＡは幾つかの形態で提
供されうる。例えば、本発明のｓｉＮＡは１以上のｓｉＮＡ化合物として単離されること
が可能であり、あるいはそれは核酸プラスミド内の転写カセットの形態をとることが可能
である。該ｓｉＮＡは化学合成されることも可能である。該ｓｉＮＡは、例えば表１ｃお
よび表６に示されているような修飾および／または修飾パターンを含みうる。したがって
、種々の実施形態においては、本発明の核酸の鎖または領域の少なくとも１つは、配列番
号１〜５０６からなる配列の群から選択される少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む。
該ｓｉＮＡは単独で投与されることが可能であり、あるいは他のｓｉＮＡ分子またはＩＤ
Ｈ１関連疾患もしくは状態を治療する通常の物質と共投与されることが可能である。
本発明のｓｉＮＡ分子は、ＲＮＡ転写産物との相互作用により或いは個々の遺伝子配列
との相互作用により、特にＩＤＨ１関連遺伝子の遺伝子サイレンシングを引き起こすため
に使用されうる。そのような相互作用は、例えば、ＲＮＡｉにより、または標的のクロマ
チン構造もしくはメチル化パターンをモジュレーションし標的のヌクレオチド配列で標的
遺伝子の転写を妨げることによりサイレンシングを引き起こす細胞過程により、転写レベ
ルまたは転写後レベルで遺伝子サイレンシングのモジュレーションを引き起こす。よく詳
細には、該標的はＩＤＨ１関連ＲＮＡ、ＤＮＡまたはｍＲＮＡのいずれかである。
１つの態様においては、本発明は、細胞または哺乳動物におけるＩＤＨ１関連遺伝子の
発現を抑制するための短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供する。該ｓｉＮＡは一本鎖ま
たは二本鎖でありうる。二本鎖の場合、該ｓｉＮＡはセンスおよびアンチセンス鎖を含む
。アンチセンス鎖は、ＩＤＨ１関連遺伝子の発現において形成されるｍＲＮＡの少なくと
も一部に相補的である。センス鎖はアンチセンス鎖に相補的な領域を含む。特定の実施形
態においては、アンチセンス鎖は、表１ｂ（配列番号４４０〜５０６）から選択されるア
ンチセンス配列の少なくとも１５ヌクレオチドを含む。一般に、二本鎖ｓｉＮＡは、表１
ｂ（配列番号１〜６７）から選択されるセンス鎖の少なくとも１５ヌクレオチドと、表１
ｂ（配列番号４４０〜５０６）から選択されるアンチセンス鎖の少なくとも１５ヌクレオ
チドとを含む。もう１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５
個の連続的ヌクレオチドである。
本発明のｓｉＮＡのヌクレオチドの１以上は、所望により、修飾されていてもよい。化
学修飾ｓｉＮＡの他の実施形態においては、本発明の幾つかのｓｉＮＡは、表１ｃに記載
されている配列番号６８〜４３９から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含
む。他の実施形態においては、該ｓｉＮＡは、表１ｃに記載されている配列番号６８〜４
３９から選択される少なくとも２つの配列を含み、ここで、前記の少なくとも２つの配列
の１つは、前記の少なくとも２つの配列のもう１つに相補的であり、前記の少なくとも２
つの配列の１つは、ＩＤＨ１関連遺伝子の発現において生じるｍＲＮＡの配列に相補的で
ある。本発明の或る修飾ｓｉＮＡの例を表１ｃに示す。
本発明の二本鎖ＲＮＡ分子は、相補的であり対称または非対称でありうる２つの異なる
別々の鎖、すなわち、２つの一本鎖ＲＮＡ分子を含むことが可能であり、あるいは、２つ
の相補的部分（例えば、センス領域およびアンチセンス領域）が塩基対形成し、１以上の
一本鎖「ヘアピン」領域（すなわち、ループ）により共有結合されていて例えば一本鎖短
ヘアピンポリヌクレオチドまたは環状一本鎖ポリヌクレオチドが生じている１つの一本鎖
分子を含むことが可能である。
該リンカーはポリヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーでありうる。幾
つかの実施形態においては、該リンカーは非ヌクレオチドリンカーである。幾つかの実施
形態においては、本発明のヘアピンまたは環状ｓｉＮＡ分子は１以上のループモチーフを
含有し、ここで、該ｓｉＮＡ分子のループ部分の少なくとも１つは生分解性である。例え
ば、インビボでの該ｓｉＮＡ分子のループ部分の分解が、１、２、３または４ヌクレオチ
ドを含む３’末端ヌクレオチド突出のような３’末端突出を有する二本鎖ｓｉＮＡ分子を
与えうるように、本発明の一本鎖ヘアピンｓｉＮＡ分子は設計される。あるいは、インビ
ボでのｓｉＮＡ分子のループ部分の分解が、約２ヌクレオチドを含む３’末端ヌクレオチ
ド突出のような３’末端突出を有する二本鎖ｓｉＮＡ分子を与えうるように、本発明の環
状ｓｉＮＡ分子は設計される。
本発明の対称ｓｉＮＡ分子においては、それぞれの鎖、センス（パッセンジャー）鎖お
よびアンチセンス（ガイド）鎖は、独立して、約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、
１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９また
は３０）ヌクレオチド長である。一般に、本発明の対称ｓｉＮＡ分子の各鎖は約１９〜２
４（例えば、約１９、２０、２１、２２、２３または２４）ヌクレオチド長である。
非対称ｓｉＮＡ分子においては、該分子のアンチセンス領域または鎖は約１５〜約３０
（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２
６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチド長であり、ここで、センス領域は約３〜
約２５（例えば、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５）ヌクレオチド長
である。一般に、本発明の非対称ｓｉＮＡ分子の各鎖は約１９〜２４（例えば、約１９、
２０、２１、２２、２３または２４）ヌクレオチド長である。
更に他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は一本鎖ヘアピンｓｉＮＡ分子を
含み、ここで、該ｓｉＮＡ分子は約２５〜約７０（例えば、約２５、２６、２７、２８、
２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、４０、４５、５０、５５、６０、６
５または７０）ヌクレオチド長である。
更に他の実施形態においては、本発明はｓｉＮＡ分子は一本鎖環状ｓｉＮＡ分子を含み
、ここで、該ｓｉＮＡ分子は約３８〜約７０（例えば、約３８、４０、４５、５０、５５
、６０、６５または７０）ヌクレオチド長である。
更に他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は一本鎖非環状ｓｉＮＡ分子を含
み、ここで、該ｓｉＮＡ分子は、独立して、約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１
７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または
３０）ヌクレオチド長である。
種々の対称実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ二重らせんは、独立して、約１５〜
約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２
５、２６、２７、２８、２９または３０）塩基対を含む。一般に、該ｓｉＮＡの二重らせ
ん構造は１５〜３０、より一般には１８〜２５、更に一般には１９〜２４、最も一般には
１９〜２１塩基対を含有する。
本発明の二重らせんｓｉＮＡ分子が非対称である更に他の実施形態においては、該ｓｉ
ＮＡ分子は約３〜２５（例えば、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１
３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５）
塩基対を含む。一般に、該ｓｉＮＡの二重らせん構造は１５〜２５、より一般には１８〜
２５、更に一般には１９〜２４、最も一般には１９〜２１塩基対を含有する。
本発明のｓｉＮＡ分子がヘアピンまたは環状構造である更に他の実施形態においては、
該ｓｉＮＡ分子は約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２
１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）塩基対を含む。
本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖およびアンチセンス鎖またはセンス領域およびアンチ
センス領域は相補的でありうる。また、該アンチセンス鎖またはアンチセンス領域は、例
えば表５においてＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号により表されている配列
または表２に開示されている配列（これらに限定されるものではない）のようなＩＤＨ１
関連標的ＲＮＡのヌクレオチド配列またはその一部に相補的でありうる。該ｓｉＮＡのセ
ンス鎖またはセンス領域はＩＤＨ１関連遺伝子またはその一部のヌクレオチド配列を含み
うる。ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス領域またはセンス鎖は、
例えば表５においてＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号により表されている配
列または表２に開示されている配列（これらに限定されるものではない）のようなＩＤＨ
１関連標的ポリヌクレオチド配列に相補的である、該ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域ま
たはアンチセンス鎖の部分に相補的である。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は該ｓｉＮＡ分子のセンス鎖また
はセンス領域とアンチセンス鎖またはアンチセンス領域との間に完全な相補性を有する。
他の又は同じ実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は対応ＩＤＨ
１関連標的核酸分子に完全に相補的である。
更に他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子のセンス鎖ま
たはセンス領域とアンチセンス鎖またはアンチセンス領域との間、あるいは該ｓｉＮＡ分
子のアンチセンス鎖またはアンチセンス領域と対応ＩＤＨ１関連標的核酸分子との間に部
分的な相補性（すなわち、１００％未満の相補性）を有する。したがって、幾つかの実施
形態においては、本発明の二本鎖核酸分子は、他方の鎖のヌクレオチドに相補的である約
１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２
４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチドを一方の鎖内に有する。他
の実施形態においては、該分子は、該二本鎖核酸分子のアンチセンス領域のヌクレオチド
に相補的である約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１
、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチドをセンス
領域内に有する。ある実施形態においては、本発明の二本鎖核酸分子は、対応ＩＤＨ１関
連標的核酸分子のヌクレオチド配列に相補的である約１５〜約３０（例えば、約１５、１
６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９
または３０）ヌクレオチドをアンチセンス鎖内に有する。
他の実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子がその活性、例えばＲＮ
Ａｉを引き起こす活性を維持する限り、１以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチ
および／または付加を含有しうる。非限定的な例においては、該欠失、置換、ミスマッチ
および／または付加はループまたはバルジ、あるいはゆらぎ又は他の代替的（非ワトソン
−クリック）塩基対を形成しうる。したがって、幾つかの実施形態においては、例えば、
本発明の二本鎖核酸分子は、他方の鎖または領域に対するミスマッチまたは塩基対不形成
を有する１以上（例えば、１、２、３、４、５または６）のヌクレオチドを一方の鎖また
は領域内に有する。他の実施形態においては、本発明の二本鎖核酸分子は、他方の鎖また
は領域に対するミスマッチまたは塩基対不形成を有する１以上（例えば、１、２、３、４
、５または６）のヌクレオチドを各鎖または領域内に有する。好ましい実施形態において
は、本発明のｓｉＮＡは３個以下のミスマッチを含有する。該ｓｉＮＡのアンチセンス鎖
が標的配列に対するミスマッチを含有する場合、ミスマッチの領域は相補性の領域の中心
部に位置しないことが好ましい。
他の実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子がその活性、例えばＲＮ
Ａｉを引き起こす活性を維持する限り、１以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチ
および／または付加を配列に有する配列番号１〜６７および配列番号４４０〜５０６（表
１ｂに示されている）から選択される少なくとも１つの配列を含有しうる。非限定的な例
においては、該欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加はループまたはバルジ、ある
いはゆらぎ又は他の代替的（非ワトソン−クリック）塩基対を形成しうる。
本発明はまた、第１鎖および第２鎖が互いに相補的であり、少なくとも１つの鎖が、配
列番号１〜６７および配列番号４４０〜５０６（表１ｂに示されている）から選択される
ポリヌクレオチド配列に高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズ可能であり、
該ヌクレオチドのいずれかが修飾されていない又は化学修飾されている、二本鎖核酸（ｓ
ｉＮＡ）分子を含む。ハイブリダイゼーション技術は当業者によく知られている（例えば
、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８
９）を参照されたい）。好ましいストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５
０％ ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５ｍＭ クエン酸三ナトリ
ウム）、５０ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト液、１０％ 硫酸
デキストランおよび２０μｇ／ｍｌ 変性せん断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中、４２℃で
の一晩のインキュベーション、ならびにそれに続く、約６５℃での０．１×ＳＳＣ中のフ
ィルターの洗浄を含む。１つの特定の実施形態においては、第１鎖は、他方の鎖のヌクレ
オチドに相補的である約１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１ヌクレオチドを
有し、少なくとも１つの鎖は、配列番号１〜６７および配列番号４４０〜５０６（表１ｂ
に示されている）から選択されるポリヌクレオチド配列にハイブリダイズ可能である。よ
り好ましい実施形態においては、第１鎖は、他方の鎖のヌクレオチドに相補的である約１
５、１６、１７、１８、１９、２０または２１ヌクレオチドを有し、少なくとも１つの鎖
は、配列番号７、配列番号４４６、配列番号１１、配列番号４５０、配列番号１２、配列
番号４５１、配列番号１３、配列番号４５２、配列番号３８、配列番号４７７、配列番号
３９、配列番号４７８、配列番号４０、配列番号４７９、配列番号４１、配列番号４８０
、配列番号５９、配列番号４９８、配列番号６３または配列番号５０２に高いストリンジ
ェンシーの条件下でハイブリダイズ可能であり、該ヌクレオチドのいずれかは修飾されて
おらず又は化学修飾されている。
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は約１〜約４（例えば、約１、２、３
または４）ヌクレオチドの突出を含む。該突出におけるヌクレオチドは同じ又は異なるヌ
クレオチドでありうる。幾つかの実施形態においては、該突出は該二本鎖核酸分子の一方
または両方の鎖の３’末端に存在する。例えば、本発明の二本鎖核酸分子は、該二本鎖核
酸分子のアンチセンス鎖／領域の３’末端、センス鎖／領域の３’末端、またはアンチセ
ンス鎖／領域およびセンス鎖／領域の両方にヌクレオチドまたは非ヌクレオチド突出を含
みうる。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子の突出部分を含むヌクレオチドは
、ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列に基づく配列を含み、ここで、本発明のｓｉＮ
Ａ分子のアンチセンス鎖／領域の突出部分を含むヌクレオチドは該ＩＤＨ１関連標的ポリ
ヌクレオチド配列内のヌクレオチドに相補的であり、および／または本発明のｓｉＮＡ分
子のセンス鎖／領域の突出部分を含むヌクレオチドは該ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチ
ド配列内のヌクレオチドを含みうる。したがって、幾つかの実施形態においては、該突出
は、該ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列の部分に相補的である２ヌクレオチドの突
出を含む。しかし、他の実施形態においては、該突出は、該ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレ
オチド配列の部分に相補的でない２ヌクレオチドの突出を含む。ある実施形態においては
、該突出は、ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列の部分に相補的でない３’−ＵＵ突
出を含む。他の実施形態においては、該突出はアンチセンス鎖の３’末端におけるＵＵ突
出およびセンス鎖の３’末端におけるＴＴ突出を含む。他の実施形態においては、該突出
は、本明細書における実施例、表および図に記載されているヌクレオチドを含む。
３’末端ヌクレオチド突出を有する本明細書に記載されているｓｉＮＡ分子の実施形態
のいずれかにおいては、該突出は、所望により、１以上の核酸糖、塩基またはバックボー
ン位置において化学修飾されている。本発明の二本鎖核酸（ｓｉＮＡ）分子の突出部分に
おける修飾ヌクレオチドの代表的で非限定的な例には、２’−Ｏ−アルキル（例えば、２
’−Ｏ−メチル）、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−デオキシ
−２’−フルオロアラビノ（ＦＡＮＡ）、４’−チオ、２’−Ｏ−トリフルオロメチル、
２’−Ｏ−エチル−トリフルオロメトキシ、２’−Ｏ−ジフルオロメトキシ−エトキシ、
汎用塩基、非環状または５’−Ｃ−メチルヌクレオチドが含まれる。より好ましい実施形
態においては、該突出ヌクレオチドは、それぞれ独立して、２’−Ｏ−アルキルヌクレオ
チド、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、２’−デオキシ−２−フルオロヌクレオチドまた
は２’−デオキシリボヌクレオチドである。幾つかの場合には、該突出ヌクレオチドは１
以上のホスホロチオアート結合により連結されている。
更に他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、平滑末端を有する（すなわち
、ヌクレオチド突出を伴わない）二重らせん核酸分子を含み、ここで、両末端が平滑であ
り、あるいは該末端の１つが平滑である。幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮ
Ａ分子は１つの平滑末端を含み、例えば、この場合、アンチセンス鎖の５’末端およびセ
ンス鎖の３’末端はいずれの突出ヌクレオチドをも有さず、あるいはアンチセンス鎖の３
’末端およびセンス鎖の５’末端はいずれの突出ヌクレオチドをも有さない。他の実施形
態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は２つの平滑末端を含み、例えば、この場合、アン
チセンス鎖の３’末端およびセンス鎖の５’末端ならびにアンチセンス鎖の５’末端およ
びセンス鎖の３’末端はいずれの突出ヌクレオチドをも有さない。
本発明のｓｉＮＡ分子の実施形態または態様のいずれかにおいては、センス鎖および／
またはアンチセンス鎖は更に、該センス鎖および／またはアンチセンス鎖の３’末端、５
’末端または３’および５’末端の両方にキャップ（例えば、本明細書に記載されている
もの、または当技術分野で公知のもの）を有する。ヘアピンｓｉＮＡ分子の場合、該キャ
ップは該ポリヌクレオチドの末端ヌクレオチドの一方または両方に存在しうる。幾つかの
実施形態においては、該キャップは二本鎖ｓｉＮＡ分子のセンス鎖の一方または両方の末
端に存在する。他の実施形態においては、該キャップはアンチセンス（ガイド）鎖の３’
末端に存在する。好ましい実施形態においては、キャップはセンス鎖の３’末端およびセ
ンス鎖の５’末端に存在する。
そのような末端キャップの代表的で非限定的な例には、逆方向非塩基ヌクレオチド、逆
方向デオキシ非塩基ヌクレオチド、逆方向ヌクレオチド部分、図５に示されている基、グ
リセリル修飾、アルキルもしくはシクロアルキル基、複素環、または当技術分野で一般に
公知のいずれかの他のキャップが含まれる。
本発明のｓｉＮＡ分子の実施形態のいずれかは５’ホスファート末端を有しうる。幾つ
かの実施形態においては、該ｓｉＮＡは末端ホスファートを欠く。
本発明のいずれかのｓｉＮＡ分子または構築物は１以上の化学修飾を含みうる。修飾は
、例えば安定性、活性、毒性、免疫応答（例えば、インターフェロン応答、炎症性もしく
は炎症促進性サイトカイン応答またはＴｏｌｌ様受容体応答の刺激の阻害）および／また
はバイオアベイラビリティのようなインビトロまたはインビボ特性を改善するために用い
られうる。
出願人は、対応未修飾ｓｉＮＡ分子と比較して改善されたＲＮＡｉ活性および／または
安定性を有する化学修飾ｓｉＮＡ分子を本明細書に記載している。本明細書に開示されて
いる種々の化学修飾ｓｉＮＡモチーフは、未修飾または最低限度に修飾された活性ｓｉＲ
ＮＡに実質的に類似したＲＮＡｉ活性を維持する能力を付与し（例えば、Ｅｌｂａｓｈｉ
ｒ，２００１，ＥＭＢＯ Ｊ．，２０：６８７７−６８８８を参照されたい）、同時に、
治療用途における使用に適切なヌクレアーゼ抵抗性および薬物動態特性を付与する。
種々の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、センスおよび／またはアンチセ
ンス鎖に存在するいずれかの（例えば、１以上または全ての）ヌクレオチドが修飾ヌクレ
オチドである（例えば、１つのヌクレオチドが修飾されている、または幾つかのヌクレオ
チド（すなわち、複数または２以上）が修飾されている、または全てのヌクレオチドが修
飾ヌクレオチドである）、修飾を含む。幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ
分子は化学修飾で部分的に修飾されている（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８
、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２
２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５
、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、
４９、５０、５５または５９ヌクレオチドが修飾されている）。幾つかの実施形態におい
ては、本発明のｓｉＮＡ分子は、修飾ヌクレオチドである少なくとも約８、１０、１２、
１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４
０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８または６０ヌクレオチドを
含む。他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は化学修飾で完全に修飾（１００
％修飾）されている。すなわち、該ｓｉＮＡ分子はいずれのリボヌクレオチドをも含有し
ない。幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖におけるヌクレオ
チドの１以上が修飾されている。同じ又は他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分
子のアンチセンス鎖におけるヌクレオチドの１以上が修飾されている。
単一ｓｉＮＡ分子内の化学修飾は同じ又は異なりうる。幾つかの実施形態においては、
少なくとも１つの鎖は少なくとも１つの化学修飾を有する。他の実施形態においては、各
鎖は、同じ又は異なりうる少なくとも１つの化学修飾、例えば糖、塩基またはバックボー
ン（すなわち、ヌクレオチド間結合）修飾を有する。他の実施形態においては、本発明の
ｓｉＮＡ分子は少なくとも２、３、４、５またはそれ以上の異なる化学修飾を含有する。
本発明における使用に適した化学修飾の非限定的な例は米国特許出願第１０／４４４，
８５３号、第１０／９８１，９６６号および第１２／０６４，０１４号（ＵＳ ２００４
０１９２６２６、ＵＳ ２００５０２６６４２２およびＵＳ ２００９０１７６７２５と
して公開されている）ならびにそれらにおいて引用されている参考文献に開示されており
、糖、塩基およびホスファート修飾、非ヌクレオチド修飾、ならびに／またはそれらのい
ずれかの組合せを含む。これらの米国特許出願（第１０／４４４，８５３号、第１０／９
８１，９６６号および第１２／０６４，０１４号）を、本発明のｓｉＮＡとの使用に適し
た化学修飾を記載する目的のために、参照により本明細書に組み入れることとする。
本発明の或る特定の実施形態においては、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、当技
術分野で一般に認識されているとおり、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、
２’−デオキシヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキル（例えば、２’−Ｏ−メチル）ヌクレ
オチドまたはロック化（ｌｏｃｋｅｄ）核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチドが含まれる。
本発明の更に他の実施形態においては、少なくとも１つのヌクレオチドはリボ様ノーザ
ン（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ）またはＡ形態ヘリックス立体配置を有する（例えば、Ｓａｅｎｇ
ｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，
Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ ｅｄ．，１９８４を参照されたい）。ノーザン立体配
置を有するヌクレオチドの非限定的な例には、ロック化核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチド（例
えば、２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン−（Ｄ−リボフラノシル）ヌクレオチド）、２’−
メトキシエトキシ（ＭＯＥ）ヌクレオチド、２’−メチル−チオ−エチルヌクレオチド、
２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−クロロヌクレオ
チド、２’−アジドヌクレオチド、２’−Ｏ−トリフルオロメチルヌクレオチド、２’−
Ｏ−エチル−トリフルオロメトキシヌクレオチド、２’−Ｏ−ジフルオロメトキシ−エト
キシヌクレオチド、４’−チオヌクレオチドおよび２’−Ｏ−メチルヌクレオチドが含ま
れる。
種々の実施形態においては、該二本鎖ｓｉＮＡ分子に存在するピリミジンヌクレオチド
の大部分（例えば、５０％を超える）は糖修飾を含む。同じおよび／または他の実施形態
の幾つかにおいては、該二本鎖ｓｉＮＡ分子に存在するプリンヌクレオチドの大部分（例
えば、５０％を超える）は糖修飾を含む。
幾つかの実施形態においては、該アンチセンス鎖におけるピリミジンヌクレオチドは２
’−Ｏ−メチルまたは２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、
該アンチセンス鎖におけるプリンヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルヌクレオチドまたは２
’−デオキシヌクレオチドである。他の実施形態においては、該センス鎖におけるピリミ
ジンヌクレオチドは２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、該
センス鎖に存在するプリンヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルまたは２’−デオキシプリン
ヌクレオチドである。
本発明の或る実施形態においては、該センス鎖上の相補的領域におけるピリミジンヌク
レオチドの全ては２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。ある
実施形態においては、該アンチセンス鎖の相補的領域におけるピリミジンヌクレオチドの
全ては２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。ある実施形態に
おいては、該センス鎖上の相補的領域におけるプリンヌクレオチドの全ては２’−デオキ
シプリンヌクレオチドである。ある実施形態においては、該アンチセンス鎖上の相補的領
域におけるプリンの全ては２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。ある実施形態に
おいては、該センス鎖上の相補的領域におけるピリミジンヌクレオチドの全ては２’−デ
オキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖の相補的領域
におけるピリミジンヌクレオチドの全ては２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌ
クレオチドであり、該センス鎖上の相補的領域におけるプリンヌクレオチドの全ては２’
−デオキシプリンヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖上の相補的領域におけるプリン
の全ては２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。
幾つかの実施形態においては、一方または両方の鎖におけるピリミジンヌクレオチドの
少なくとも５以上は２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。幾
つかの実施形態においては、一方または両方の鎖におけるピリミジンヌクレオチドの少な
くとも５以上は２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。幾つかの実施形態にお
いては、一方または両方の鎖におけるプリンヌクレオチドの少なくとも５以上は２’−デ
オキシ−２’−フルオロプリンヌクレオチドである。幾つかの実施形態においては、一方
または両方の鎖におけるプリンヌクレオチドの少なくとも５以上は２’−Ｏ−メチルプリ
ンヌクレオチドである。
ある実施形態においては、該プリンおよびピリミジンは２’−糖位置において異なって
修飾される（すなわち、少なくとも１つのプリンは、同じ又は異なる鎖において、２’−
糖位置において、少なくとも１つのピリミジンとは異なる修飾を有する）。例えば、幾つ
かの実施形態においては、一方または両方の鎖におけるピリミジンヌクレオチドの少なく
とも５以上は２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、一方また
は両方の鎖における少なくとも５以上のプリンヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルプリンヌ
クレオチドである。他の場合には、一方または両方の鎖におけるピリミジンヌクレオチド
の少なくとも５以上は２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドであり、一方または両方
の鎖における少なくとも５以上のプリンヌクレオチドは２’−デオキシ−２’−フルオロ
プリンヌクレオチドである。
種々の修飾および修飾パターンを有するそのようｓｉＮＡ分子のセンスおよびアンチセ
ンス鎖の他の非限定的な例を図２および３に示す。
前記修飾またはそれらの組合せ（引用参考文献におけるものを含む）はいずれも、本発
明のｓｉＮＡ分子のいずれかに適用されうる。
本発明の修飾ｓｉＮＡ分子は該ｓｉＮＡ分子内の種々の位置に修飾を含みうる。幾つか
の実施形態においては、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は該ｓｉＮＡ二重らせん内の内部塩
基対形成位置に修飾ヌクレオチドを含む。他の実施形態においては、本発明の二本鎖ｓｉ
ＮＡ分子は該ｓｉＮＡ分子の塩基対不形成または突出領域に修飾ヌクレオチドを含む。更
に他の実施形態においては、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は該ｓｉＮＡ分子の末端位置に
修飾ヌクレオチドを含む。例えば、そのような末端領域には、該ｓｉＮＡ分子の領域のセ
ンスおよび／アンチセンス鎖の３’位および／または５’位が含まれる。また、本発明の
修飾ｓｉＮＡ分子のいずれかは、該ｓｉＮＡ二重らせんの一方または両方のオリゴヌクレ
オチド鎖において、例えば、センス鎖、アンチセンス鎖または両方の鎖において、修飾を
有しうる。更に、本発明のｓｉＮＡ分子の化学修飾に関しては、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ
分子の各鎖は、各鎖が、異なる化学修飾パターンを含むように、１以上の化学修飾を有し
うる。
前記修飾またはそれらの組合せ（引用参考文献におけるものを含む）はいずれも、本発
明の実施形態のいずれかに適用されうる。
ある実施形態においては、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子の各鎖は、異なる化学修飾パタ
ーン、例えば、本明細書に記載されている（表６を参照されたい）いずれかの安定化化学
（「Ｓｔａｂ」）修飾化学法またはそれらのいずれかの組合せ、すなわち、一定のＳｔａ
ｂ化学センスおよびアンチセンス鎖の種々の組合せを含む。更に、種々の修飾パターンを
もたらしうる修飾法の非限定的な例を表６に示す。「Ｓｔａｂ」として表６に記載されて
いる安定化化学法は、センス／アンチセンス化学法のいずれかの組合せ、例えば、Ｓｔａ
ｂ ７／８、Ｓｔａｂ ７／１１、Ｓｔａｂ ８／８、Ｓｔａｂ １８／８、Ｓｔａｂ
１８／１１、Ｓｔａｂ １２／１３、Ｓｔａｂ ７／１３、Ｓｔａｂ １８／１３、Ｓｔ
ａｂ ７／１９、Ｓｔａｂ ８／１９、Ｓｔａｂ １８／１９、Ｓｔａｂ ７／２０、Ｓ
ｔａｂ ８／２０、Ｓｔａｂ １８／２０、Ｓｔａｂ ７／３２、Ｓｔａｂ ８／３２も
しくはＳｔａｂ １８／３２または安定化化学法のいずれかの他の組合せで組合されうる
。
本発明のｓｉＮＡのいずれかにおいては、該ｓｉＮＡ分子のガイド鎖またはガイド領域
（アンチセンス鎖またはアンチセンス領域としても公知である）の５’末端における１以
上（例えば、１、２、３、４または５）のヌクレオチドはリボヌクレオチドである。
ある実施形態においては、本発明は、ＩＤＨ１またはその誘導体もしくは突然変異体の
発現をモジュレーションする二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該
ｓｉＮＡ分子は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、各鎖は、独立して、１５〜３０
ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）のいずれかに相
補的な配列を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、「
少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は、
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４９８）；または
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）のいずれかに
対する同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、
「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。したがって、該
ｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は配列番号４４６、４５０、４５１、４５２、４７７、４
７８、４７９、４８０、４９８または５０２のいずれかの少なくとも１５ヌクレオチド配
列を含む。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）のいずれかに対
する同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、「
少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。したがって、該ｓ
ｉＮＡ分子のセンス鎖は配列番号７、１１、１２、１３、３８、３９、４０、４１、５９
または６３のいずれかの少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）および
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−（配列番号４９８）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）および
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）のいずれかを
含む。もう１つの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、配列番号７および４４６の両
方、または配列番号１１および４５０の両方、または配列番号１２および４５１の両方、
または配列番号１３および４５２の両方、または配列番号３８および４７７の両方、また
は配列番号３９および４７８の両方、または配列番号４０および４７９の両方、または配
列番号４１および４８０の両方、または配列番号５９および４９８の両方、または配列番
号６３および５０２の両方の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む
幾つかの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子がその活性、例えば
ＲＮＡｉを引き起こす活性を維持する限り、配列番号７、配列番号４４６、配列番号１１
、配列番号４５０、配列番号１２、配列番号４５１、配列番号１３、配列番号４５２、配
列番号３８、配列番号４７７、配列番号３９、配列番号４７８、配列番号４０、配列番号
４７９、配列番号４１、配列番号４８０、配列番号５９、配列番号４９８、配列番号６３
または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列内に１以上のヌクレオチドの欠
失、置換、ミスマッチおよび／または付加を含有しうる。非限定的な例においては、該欠
失、置換、ミスマッチおよび／または付加はループまたはバルジ、あるいはゆらぎ又は他
の代替的（非ワトソン−クリック）塩基対を形成しうる。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は、配列番号９
１、１０７、１１１、１１５、１９９、２１３、２２７、２３１、３０３または４１１の
いずれかに対する配列同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。他の実施形態
においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖は、配列番号９０、１０６、１１０、１１
４、１９８、２１２、２２６、２３０、３０２または４１０のいずれかに対する配列同一
性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。もう１つの実施形態においては、「少な
くとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は配列番号９０および９１、配列
番号１０６および１０７、配列番号１１０および１１１、配列番号１１４および１１５、
配列番号１９８および１９９、配列番号２１２および２１３、配列番号２２６および２２
７、配列番号２３０および２３１、配列番号３０２および３０３、または配列番号４１０
および４１１のいずれかを含む。
ある実施形態においては、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該
分子はセンス鎖およびアンチセンス鎖を有し、式（Ａ）：
Figure 2017212982
（式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖はアンチセンス鎖であ
り、該アンチセンス鎖は配列番号４４６、配列番号４５０、配列番号４５１、配列番号４
５２、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４
９８または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、該センス鎖は、該
アンチセンス鎖に対する相補性を有する配列を含む；
各Ｎは、独立して、修飾されていない若しくは化学修飾されているヌクレオチドであ
る、または非ヌクレオチドである；
各Ｂは、存在する又は存在しない末端キャップである；
（Ｎ）は突出ヌクレオチドを表し、それらのそれぞれは、独立して、修飾されていな
い又は化学修飾されている；
Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数である；
Ｘ３は１５〜３０の整数である；
Ｘ４は１２〜２７の整数である；
［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は修飾ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドであり、
ここで、［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は、以下のものからなる群から選択される：
（ａ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は
２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシ−２’
−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は
２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレ
オチドである；
（ｃ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−
２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである；
（ｄ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−
２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；お
よび
（ｅ）［Ｎ１］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ２］はリボヌクレオチドであり、［
Ｎ３］はリボヌクレオチドである）を含む。
幾つかの実施形態においては、式ＡのｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子がその活性、例
えばＲＮＡｉを引き起こす活性を維持する限り、配列番号４４６、配列番号４５０、配列
番号４５１、配列番号４５２、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列
番号４８０、配列番号４９８または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列に
対する１以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加を含有しうる
。非限定的な例においては、該欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加はループまた
はバルジ、あるいはゆらぎ又は他の代替的（非ワトソン−クリック）塩基対を形成しうる
。
１つの実施形態においては、本発明は、
（ａ）ＮＸ４位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオ
キシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシ
ヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｂ）ＮＸ４位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ
−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌク
レオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｃ）ＮＸ３位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオ
キシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシ
ヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ
−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌク
レオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである、式（Ａ）の二本鎖
短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子に関する。
ある実施形態においては、本発明は、
（ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオ
チドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチド
が２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオ
チドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチド
が２’−デオキシヌクレオチドである、式（Ａ）の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子
に関する。
ある実施形態においては、本発明は、
（ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオ
チドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチド
がリボヌクレオチドである；
（ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオ
チドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチド
がリボヌクレオチドである、式（Ａ）の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子に関する。
ある実施形態においては、本発明は、
（ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオ
チドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチド
が２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオ
チドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチド
が２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである、式（Ａ）の二本鎖短干渉性核酸
（ｓｉＮＡ）分子に関する。
ある実施形態においては、本発明は、１以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合
を更に含む、式（Ａ）の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子に関する。
幾つかの実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は該核酸分子のアンチセンス
鎖またはアンチセンス領域の５’末端に末端ホスファート基を含む。
種々の実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、各Ｘ１およびＸ２＝１また
は２；Ｘ３＝１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４；およびＸ４＝１５、１６
、１７、１８、１９、２０または２１を含む。
ある実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子はＸ１＝２およびＸ２＝２を含む
。
１つの特定の実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は各Ｘ１およびＸ２＝２
；Ｘ３＝１９；およびＸ４＝１６を含む。
ある実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は該センス鎖またはセンス領域の
３’および５’末端にキャップ（Ｂ）を含む。
ある実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子はアンチセンス鎖またはアンチセ
ンス領域の３’末端にキャップ（Ｂ）を含む
種々の実施形態においては、式ＡのｓｉＮＡ分子はセンス鎖またはセンス領域の３’お
よび５’末端のキャップ（Ｂ）ならびにアンチセンス鎖またはアンチセンス領域の３’末
端のキャップ（Ｂ）を含む。
更に他の実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は該二本鎖核酸分子のセンス
（上側）鎖の５’末端のみにキャップ（Ｂ）を有する。
幾つかの実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は更に、ヌクレオチド間に１
以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む。ある実施形態においては、式Ａを
有するｓｉＮＡ分子は、該核酸分子のセンス鎖、アンチセンス鎖またはセンス鎖とアンチ
センス鎖との両方の３’末端の第１末端（Ｎ）と隣接ヌクレオチドとの間に１以上のホス
ホロチオアートヌクレオチド間結合を含む。例えば、二本鎖核酸分子は、ホスホロチオア
ートヌクレオチド間結合（ＮｓＮ；ここで、「ｓ」はホスホロチオアートを示す）を伴う
突出ヌクレオチド位置を有するＸ１および／またはＸ２＝２を含みうる。
幾つかの実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子のヌクレオチドの１以上は汎
用塩基を有する。
ある実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖の５’から１
４位に、その１４位のヌクレオチドがプリンである場合、リボヌクレオチドを有する。他
の実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖の５’位から１４
位に、その１４位のヌクレオチドがピリミジンヌクレオチドである場合、リボヌクレオチ
ド、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドまたは２’−Ｏ−メチルヌクレオチド
を有する。特に好ましい実施形態においては、アンチセンス鎖の５’末端から１４位は、
そのヌクレオチドがプリンまたはピリミジンであるかどうかにかかわらず、２’−デオキ
シ−２’−フルオロヌクレオチドである。
幾つかの実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、ＩＤＨ１関連標的ポリヌ
クレオチド配列におけるヌクレオチドに相補的であるアンチセンス鎖（下側の鎖）におけ
る（Ｎ）ヌクレオチドを含み、それはまた、アンチセンス（下側）鎖のＮおよび［Ｎ］ヌ
クレオチドに対する相補性を有する。
本発明のｓｉＮＡに適用可能であるものとして前記で考察されている前記修飾またはそ
れらの組合せ（引用参考文献におけるものを含む）は、式Ａを有するｓｉＮＡ分子の実施
形態のいずれかにも適用されうる。
Ｃ．ｓｉＮＡ分子の作製／合成
本発明のｓｉＮＡは、当業者に公知の幾つかの技術を用いて得られうる。例えば、該ｓ
ｉＮＡは化学合成されることが可能であり、あるいはプラスミドによりコードされうる（
例えば、ヘアピンループを有する二重らせんに自動的に折り畳まれる配列として転写され
うる）。ｓｉＮＡは、より長いｄｓＲＮＡ（例えば、約２５ヌクレオチド長より長いｄｓ
ＲＮＡ）の、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＲＮアーゼＩＩまたはＤｉｃｅｒによる切断によっ
ても製造されうる。これらの酵素は生物学的に活性なｓｉＮＡへとｄｓＲＮＡをプロセシ
ングする（Ｙａｎｇら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９９：９９４２−９９４７（２００２）；Ｃ
ａｌｅｇａｒｉら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９９：１４２３６（２００２）；Ｂｙｒｏｎら，
Ａｍｂｉｏｎ Ｔｅｃｈ Ｎｏｔｅｓ １０（１）：４−６（２００９）；Ｋａｗａｓｋ
ｉら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３１：９８１−９８７（２００３）；Ｋ
ｎｉｇｈｔおよびＢａｓｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９３：２２６９−２２７１（２００１）
；ならびにＲｏｂｅｒｓｔｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２４３：８２（１９６９）
）。
１．化学合成
好ましくは、本発明のｓｉＮＡは化学合成される。オリゴヌクレオチド（例えば、ある
修飾オリゴヌクレオチド、またはリボヌクレオチドを欠くオリゴヌクレオチドの一部）は
、当技術分野で公知の方法を用いて合成される（例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら，１９９
２，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２１１，３−１９；Ｔｈｏｍｐｓｏ
ｎら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９９／５４４５９；Ｗｉｎｃｏｔｔら，１９９５，Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３，２６７７−２６８４；Ｗｉｎｃｏｔｔら，１９
９７，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，７４，５９；Ｂｒｅｎｎａｎら，１９９８，
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．，６１，３３−４５；およびＢｒｅｎｎａｎ，米
国特許第６，００１，３１１号に記載されているとおり）。オリゴヌクレオチドの合成は
、一般的な核酸保護およびカップリング基、例えば、５’末端におけるジメトキシトリチ
ルおよび３’末端におけるホスホラミダイトを利用する。
修飾を伴わないｓｉＮＡ分子は、Ｕｓｍａｎら，１９８７，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ，１０９，７８４５およびＳｃａｒｉｎｇｅら，１９９０，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．，１８，５４３３に記載されている方法を用いて合成される。これらの合成
は、本発明の或るｓｉＮＡ分子に使用されうる５’末端におけるジメトキシトリチルおよ
び３’末端におけるホスホラミダイトのような一般的な核酸保護およびカップリング基を
利用する。
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、米国特許第６，９９５，２５９号
、第６，６８６，４６３号、第６，６７３，９１８号、第６，６４９，７５１号、第６，
９８９，４４２号および第７，２０５，３９９号に記載の方法により合成され、脱保護さ
れ、分析される。
非限定的な合成例においては、小規模合成は、２’−Ｏ−メチル化ヌクレオチドに関す
る２．５分間のカップリング工程および２’−デオキシヌクレオチドまたは２’−デオキ
シ−２’−フルオロヌクレオチドに関する４５秒間のカップリング工程を伴う０．２μｍ
ｏｌの規模の方法を用いて、３９４ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．
合成装置において行われる。表７は、該合成サイクルにおいて使用される試薬の量および
接触時間を示す。
あるいは、本発明のｓｉＮＡ分子は別々に合成され、合成後に、例えば連結により（例
えば、Ｍｏｏｒｅら，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６，９９２３；Ｄｒａｐｅｒら，
国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９３／２３５６９；Ｓｈａｂａｒｏｖａら，１９９１，Ｎｕｃ
ｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９，４２４７；Ｂｅｌｌｏｎら，１９９７
，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１６，９５１；およびＢｅｌ
ｌｏｎら，１９９７，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．８，２０４）、または合成
および／もしくは脱保護後のハイブリダイゼーションにより合体されうる。
Ｓｃａｒｉｎｇｅら，米国特許第５，８８９，１３６号、第６，００８，４００号およ
び第６，１１１，０８６号の教示を用いることによっても、本発明の種々のｓｉＮＡ分子
が合成されうる。
２．ベクター発現
あるいは、標的ＩＤＨ１関連分子をコードする遺伝子と相互作用し、それをダウンレギ
ュレーションする本発明のｓｉＮＡ分子は、ＤＮＡまたはＲＮＡベクター内に挿入された
転写単位（例えば、Ｃｏｕｔｕｒｅら，１９９６，ＴＩＧ．，１２，５１０を参照された
い）から発現され、運搬されうる。該組換えベクターはＤＮＡプラスミドまたはウイルス
ベクターでありうる。ｓｉＮＡを発現するウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス、レ
トロウイルス、アデノウイルスまたはアルファウイルス（これらに限定されるものではな
い）に基づいて構築されうる。
幾つかの実施形態においては、本発明の核酸分子を発現させるために、ｐｏｌ ＩＩＩ
に基づく構築物が使用される。ｓｉＮＡ分子の配列の転写は、真核生物ＲＮＡポリメラー
ゼＩ（ｐｏｌ Ｉ）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ｐｏｌ ＩＩ）またはＲＮＡポリメラー
ゼＩＩＩ（ｐｏｌ ＩＩＩ）のためのプロモーターから駆動されうる（例えば、Ｔｈｏｍ
ｐｓｏｎ，米国特許第５，９０２，８８０号および第６，１４６，８８６号を参照された
い）（また、ＩｚａｎｔおよびＷｅｉｎｔｒａｕｂ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９
，３４５；ＭｃＧａｒｒｙおよびＬｉｎｄｑｕｉｓｔ，１９８６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ ８３，３９９；Ｓｃａｎｌｏｎら，１９９１，Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８，１０５９１−５；Ｋａｓｈａｎｉ−Ｓａｂ
ｅｔら，１９９２，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，２，３−１５；Ｄｒｏｐｕ
ｌｉｃら，１９９２，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６６，１４３２−４１；Ｗｅｅｒａｓｉｎｇｈ
ｅら，１９９１，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６５，５５３１−４；Ｏｊｗａｎｇら，１９９２，
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９，１０８０２−６；Ｃｈｅｎら，
１９９２，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２０，４５８１−９；Ｓａｒｖｅｒ
ら，１９９０ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４７，１２２２−１２２５；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，１
９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２３，２２５９；Ｇｏｏｄら，１９９
７，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，４，４５も参照されたい）。ｐｏｌ ＩＩまたはｐｏｌ
ＩＩＩプロモーターからの転写産物は細胞内で高レベルで発現され、与えられた細胞型
における与えられたｐｏｌ ＩＩプロモーターのレベルは、近傍に存在する遺伝子調節配
列（エンハンサー、サイレンサーなど）の性質に左右される。原核生物ＲＮＡポリメラー
ゼ酵素が適当な細胞内で発現されるならば、原核生物ＲＮＡポリメラーゼプロモーターも
使用される（Ｅｌｒｏｙ−ＳｔｅｉｎおよびＭｏｓｓ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７，６７４３−７；ＧａｏおよびＨｕａｎｇ １９９３，
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２１，２８６７−７２；Ｌｉｅｂｅｒら，１９
９３，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，２１７，４７−６６；Ｚｈｏｕら，１９９０，
Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１０，４５２９−３７を参照されたい）。幾人かの研究
者は、そのようなプロモーターから発現される核酸分子が哺乳類細胞において機能しうる
ことを示している（例えば、Ｋａｓｈａｎｉ−Ｓａｂｅｔら，１９９２，前掲；Ｏｊｗａ
ｎｇら，１９９２，前掲；Ｃｈｅｎら，１９９２，前掲；Ｙｕら，１９９３，Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０，６３４０−４；Ｌ’Ｈｕｉｌｌｉｅｒら，
１９９２，ＥＭＢＯ Ｊ．，１１，４４１１−８；Ｌｉｓｚｉｅｗｉｃｚら，１９９３，
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，９０，８０００−４；Ｔｈｏｍｐ
ｓｏｎら，１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２３，２２５９；および
Ｓｕｌｌｅｎｇｅｒ ＆ Ｃｅｃｈ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６２，１５６６）。
より詳しくは、Ｕ６小核（ｓｎＲＮＡ）、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）およびアデノウイルス
ＶＡ ＲＮＡをコードする遺伝子に由来するもののような転写単位は、細胞において高濃
度の所望のＲＮＡ分子（例えば、ｓｉＮＡ）を得るのに有用である（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら
，１９９５，前掲；ＣｏｕｔｕｒｅおよびＳｔｉｎｃｈｃｏｍｂ，１９９６，前掲；Ｎｏ
ｏｎｂｅｒｇら，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，２２，２８３０；Ｎ
ｏｏｎｂｅｒｇら，米国特許第５，６２４，８０３号；Ｇｏｏｄら，１９９７，Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ．，４，４５；ならびにＢｅｉｇｅｌｍａｎら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９
６／１８７３６）。前記のｓｉＮＡ転写単位は、プラスミドＤＮＡベクター、ウイルスＤ
ＮＡベクター（例えば、アデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスベクター）またはウイ
ルスＲＮＡベクター（例えば、レトロウイルスまたはアルファウイルスベクター）（これ
らに限定されるものではない）を含む、哺乳類細胞内への導入のための種々のベクター内
に組込まれうる（総説としては、Ｃｏｕｔｕｒｅら，１９９６，ＴＩＧ，１２，５１０を
参照されたい）。
本発明のｓｉＮＡ分子を発現させるために使用されるベクターは、ｓｉＮＡ二重らせん
の一方もしくは両方の鎖、またはｓｉＮＡ二重らせんへと自己ハイブリダイズする単一自
己相補性鎖をコードしうる。本発明のｓｉＮＡ分子をコードする核酸配列は、該ｓｉＮＡ
分子の発現を可能にする様態で機能的に連結されうる（例えば、Ｐａｕｌら，２００２，
Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９，５０５；Ｍｉｙａｇｉｓｈｉおよび
Ｔａｉｒａ，２００２，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９，４９７；な
らびにＬｅｅら，２００２，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９，５００
を参照されたい）。
Ｄ．担体／運搬系
本発明のｓｉＮＡは直接的に加えられ、あるいはカチオン性脂質と複合体化され、リポ
ソーム内に封入され、あるいはｓｉＮＡ分子を発現する組換えプラスミドまたはウイルス
ベクターとして複合体化され、あるいは標的細胞または組織に運搬されうる。核酸分子の
運搬のための方法は、例えば、Ａｋｈｔａｒら，１９９２，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂ
ｉｏ．，２，１３９；Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｓｅ
ｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ａｋｈｔａｒ編
，１９９５；Ｍａｕｒｅｒら，１９９９，Ｍｏｌ．Ｍｅｍｂｒ．Ｂｉｏｌ．，１６，１２
９−１４０；ＨｏｆｌａｎｄおよびＨｕａｎｇ，１９９９，Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ，１３７，１６５−１９２；ならびにＬｅｅら，２０００，ＡＣＳ Ｓｙｍ
ｐ．Ｓｅｒ．，７５２，１８４−１９２に記載されている。Ｂｅｉｇｅｌｍａｎら，米国
特許第６，３９５，７１３号およびＳｕｌｌｉｖａｎら，ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ
９４／０２５９５は更に、核酸分子の運搬のための一般的方法を記載している。これらの
方法は実質的に全ての核酸分子の運搬に利用されうる。核酸分子は、リボソーム内への封
入、イオントホレシスまたは他の小胞、例えば生分解性重合体、ヒドロゲル、シクロデキ
ストリン（例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚら，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅ
ｍ．，１０，１０６８−１０７４；Ｗａｎｇら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ０３／４７５
１８およびＷＯ ０３／４６１８５を参照されたい）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）
（ＰＬＧＡ）およびＰＬＣＡミクロスフェア（例えば、米国特許第６，４４７，７９６号
および米国特許出願公開第ＵＳ ２００２１３０４３０号を参照されたい）、生分解性ナ
ノカプセルおよび生物接着性ミクロスフェア内への封入またはタンパク質性ベクター（Ｏ
’ＨａｒｅおよびＮｏｒｍａｎｄ，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ００／５３７２２）（これ
らに限定されるものではない）を含む、当業者に公知の種々の方法により細胞に投与され
うる。
１つの態様においては、本発明は、本明細書に記載されているｓｉＮＡ分子を含有する
担体系を提供する。幾つかの実施形態においては、該担体系は、脂質に基づく担体系、カ
チオン性脂質、またはリポソーム核酸複合体、リポソーム、ミセル、ウイロソーム、脂質
ナノ粒子またはそれらの混合物である。他の実施形態においては、該担体系は、重合体に
基づく担体系、例えばカチオン性重合体−核酸複合体である。追加的な実施形態において
は、該担体系は、シクロデキストリンに基づく担体系、例えば、シクロデキストリン重合
体−核酸複合体である。他の実施形態においては、該担体系は、タンパク質に基づく担体
系、例えばカチオン性ペプチド−核酸複合体である。もう１つの実施形態においては、該
担体系は脂質ナノ粒子（「ＬＮＰ」）製剤である。
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、例えば米国特許出願第１１／３５
３，６３０号、第１１／５８６，１０２号、第６１／１８９，２９５号、第６１／２０４
，８７８号、第６１／２３５，４７６号、第６１／２４９，８０７号および第６１／２９
８，０２２号に記載されているとおり、脂質ナノ粒子組成物で製剤化される。ある実施形
態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、４０／４８／２／１０の比のカチオン性脂質／
コレステロール／ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ、４０／４８／２／１０の比のカチオン
性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ／ＤＳＰＣ、または６０／３８／２の比のカチ
オン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧを含む脂質ナノ粒子組成物で製剤化される
。ある実施形態においては、該カチオン性脂質はオクチルＣＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎＤＭ
Ａ、Ｌ−２７８、ＤＬｉｎＫＣ２ＤＭＡまたはＭＣ３（表９を参照されたい）である。
種々の実施形態においては、表８に記載されている脂質ナノ粒子製剤は本発明における
任意のｓｉＮＡ分子またはｓｉＮＡ分子の組合せに適用される。
ある他の実施形態においては、本発明は、ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ ２０１０／０
２１８６５、ＷＯ ２０１０／０８０７２４、ＷＯ ２０１０／０４２８７７、ＷＯ ２
０１０／１０５２０９およびＷＯ ２０１１／０２２４６０ならびに米国特許出願第６１
／２４９，８０７号、第６１／２９８，０２２号、第６１／３２２，０５４号、第６１／
３４７，６４０号、第６１／３５１，３７３号、第６１／３８２，０６７号、第６１／３
８４，４８６号および第６１／３８８，２０１号に記載されているカチオン性脂質製剤の
いずれかで製剤化された本発明のｓｉＮＡ分子を含む組成物に関する。
他の実施形態においては、本発明は本発明のｓｉＮＡ分子のコンジュゲートおよび／ま
たは複合体に関する。そのようなコンジュゲートおよび／または複合体は、生物学的系（
例えば、細胞）内へのｓｉＮＡ分子の運搬を促進させるために使用されうる。本発明によ
り提供されるコンジュゲートおよび複合体は、治療用化合物を細胞膜越えに移入し、薬物
動態を改変し、および／または本発明の核酸分子の局在化をモジュレーションすることに
より、治療活性を付与しうる。そのようなコンジュゲートの非限定的な例は、米国特許公
開番号ＵＳ ２００８／０１５２６６１およびＵＳ ２００４／０１６２２６０（例えば
、ＣＤＭ−ＬＢＡ、ＣＤＭ−Ｐｉｐ−ＬＢＡ、ＣＤＭ−ＰＥＧ、ＣＤＭ−ＮＡＧなど）な
らびに米国特許出願第１０／２０１，３９４号ならびに米国特許第７，８３３，９９２号
、第６，５２８，６３１号、第６，３３５，４３４号、第６，２３５，８８６号、第６，
１５３，７３７号、第５，２１４，１３６号および第５，１３８，０４５号に記載されて
いる。
種々の実施形態においては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は本発明のｓｉＮＡ化
合物に共有結合されうる。該結合ＰＥＧは任意の分子量のもの、好ましくは、約１００〜
約５０，０００ダルトン（Ｄａ）のものでありうる。
更に他の実施形態においては、本発明は、例えば国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９６／１０
３９１；Ａｎｓｅｌｌら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９６／１０３９０；Ｈｏｌｌａｎｄ
ら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９６／１０３９２に開示されているような、本発明のｓｉ
ＮＡ分子およびポリ（エチレングリコール）脂質（ＰＥＧ修飾または長循環性リポソーム
またはステルスリポソーム）を含有する表面修飾リポソームを含む組成物または製剤に関
する。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子はまた、ポリエチレンイミンおよ
びその誘導体、例えばポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−Ｎ−アセチルガラ
クトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ＧＡＬ）またはポリエチレンイミン−ポリエチレングリコ
ール−トリ−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−トリＧＡＬ）誘導体で製剤
化または複合体化されうる。１つの実施形態においては、本発明の核酸分子は、米国特許
出願公開第２００３／０７７８２９号に記載されているとおりに製剤化される。
他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、膜破壊剤、例えば米国特許出願公
開第２００１／０００７６６６号に記載されているものと複合体化される。更に他の実施
形態においては、該膜破壊剤および該ｓｉＮＡ分子はまた、カチオン性脂質またはヘルパ
ー脂質分子、例えば米国特許第６，２３５，３１０号に記載されている脂質と複合体化さ
れる。
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、米国特許出願公開第２００３／０
７７８２９号、第２００５／０２８７５５１号、第２００５／０１６４２２０号、第２０
０５／０１９１６２７号、第２００５／０１１８５９４号、第２００５／０１５３９１９
号、第２００５／００８５４８６号および第２００３／０１５８１３３号ならびに国際Ｐ
ＣＴ公開番号ＷＯ ００／０３６８３およびＷＯ ０２／０８７５４１に記載されている
運搬系と複合体化される。
幾つかの実施形態においては、本発明のリポソーム製剤は、米国特許第６，８５８，２
２４号、第６，５３４，４８４号、第６，２８７，５９１号、６，８３５，３９５号、第
６，５８６，４１０号、第６，８５８，２２５号、第６，８１５，４３２号、第６，５８
６，００１号、第６，１２０，７９８号、第６，９７７，２２３号、第６，９９８，１１
５号、第５，９８１，５０１号、第５，９７６，５６７号、第５，７０５，３８５号なら
びに米国特許出願公開番号２００６／００１９９１２、２００６／００１９２５８、２０
０６／０００８９０９、２００５／０２５５１５３、２００５／００７９２１２、２００
５／０００８６８９、２００３／００７７８２９、２００５／００６４５９５、２００５
／０１７５６８２、２００５／０１１８２５３、２００４／００７１６５４、２００５／
０２４４５０４、２００５／０２６５９６１および２００３／００７７８２９に記載され
ている化合物および組成物で製剤化または複合体化された本発明のｓｉＮＡ分子（例えば
、ｓｉＮＡ）を含む。
あるいは、本発明のｓｉＮＡを発現する前記の組換えプラスミドおよびウイルスベクタ
ーが、本発明の分子を運搬するために使用されうる。ｓｉＮＡ分子を発現するベクターの
運搬は全身性であることが可能であり、例えば静脈内または筋肉内投与、対象者から外植
された標的細胞への投与およびそれに続く、該対象者への再導入、あるいは所望の標的細
胞内への導入を可能にするいずれかの他の手段によるものでありうる（総説としては、Ｃ
ｏｕｔｕｒｅら，１９９６，ＴＩＧ．，１２，５１０を参照されたい）。そのような組換
えプラスミドは直接的に投与されることが可能であり、あるいは例えばＭｉｒｕｓ Ｔｒ
ａｎｓｉｔ ＬＴ１親油性試薬；リポフェクチン；リポフェクタミン；セルフェクチン；
ポリカチオン（例えば、ポリリシン）またはリポソーム 脂質に基づく担体系、カチオン
性脂質またはリポソーム核酸複合体、ミセル、ウイロソーム、脂質ナノ粒子を含む適当な
運搬試薬と共に投与されうる。
Ｅ．キット
本発明はまた、キット形態の核酸を提供する。該キットは容器を含みうる。該キットは
、典型的には、本発明の核酸を、その投与のための説明と共に含有する。ある場合には、
該核酸に標的化部分が結合していることが可能である。標的化部分（例えば、抗体、タン
パク質）を結合させる方法は当業者に公知である。ある場合には、該核酸は化学修飾され
ている。他の実施形態においては、該キットは本発明のｓｉＮＡ分子の２以上を含有する
。該キットは、医薬上許容される担体または希釈剤と共に本発明のｓｉＮＡ分子を含みう
る。該キットは更に、賦形剤を含みうる。
Ｆ．治療用途／医薬組成物
ＩＤＨ１の研究における現在の一連の知見は、ＩＤＨ１活性をアッセイするための方法
の必要性、ならびに研究、診断および治療用の、野生型および／または突然変異ＩＤＨ１
の発現を調節する化合物の必要性を示している。後記のとおり、本発明の核酸分子は、Ｉ
ＤＨ１および／または突然変異ＩＤＨ１レベルに関連した１以上の病態を診断するための
アッセイにおいて使用されうる。また、該核酸分子および医薬組成物は、ＩＤＨ１関連Ｒ
ＮＡレベルに関連した１以上の病態を治療するために使用されうる。
１．ＩＤＨ１および／または突然変異ＩＤＨ１に関連した病態
ＩＤＨ１関連遺伝子および／またはタンパク質の発現に関連づけられうる個々の病態に
は、細胞増殖関連障害、例えば、中枢神経系の癌（例えば、神経膠腫（例えば、神経膠芽
細胞腫、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、テント上）および原始神経外胚葉性腫瘍（例えば
、髄芽腫））、および骨髄系細胞の増殖により特徴づけられる造血障害（例えば、ＡＭＬ
、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性新生物（ＭＰＮ））が含まれる。
本発明のｓｉＮＡ分子は標的ＩＤＨ１関連ｍＲＮＡを分解する（そしてそれにより、Ｉ
ＤＨ１関連遺伝子またはタンパク質の発現に関連した疾患を抑制する）と理解される。疾
患の抑制は、対象における疾患の進行を直接的に測定することにより評価されうる。それ
は、該疾患に関連した状態の変化または逆転を観察することによっても推論されうる。ま
た、本発明のｓｉＮＡ分子は予防手段として使用されうる。したがって、本発明の核酸分
子および医薬組成物の使用は、ＩＤＨ１関連遺伝子発現の調節に関連したこれらの疾患お
よび他の疾患の改善、治療、予防および／または治癒のために用いられうる。
２．医薬組成物
本発明のｓｉＮＡ分子は、種々の治療、予防、獣医、診断、標的妥当性評価、ゲノム発
見、遺伝的操作および薬物ゲノム（ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃ）の用途に有用な試
薬および方法を提供する。
ａ．製剤
本発明は、記載されているｓｉＮＡ分子の医薬組成物、すなわち、医薬上許容される担
体または希釈剤中の組成物を提供する。これらの製剤または組成物は、当技術分野で一般
に公知の医薬上許容される担体または希釈剤を含みうる。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号７、配列番号４４６、配列番号１１、
配列番号４５０、配列番号１２、配列番号４５１、配列番号１３、配列番号４５２、配列
番号３８、配列番号４７７、配列番号３９、配列番号４７８、配列番号４０、配列番号４
７９、配列番号４１、配列番号４８０、配列番号５９、配列番号４９８、配列番号６３ま
たは配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチドを含むｓｉＮＡ分子を含む医薬組成物
に関する。もう１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の
連続的ヌクレオチドである。更にもう１つの実施形態においては、本発明は、式（Ａ）を
含むｓｉＮＡ分子を含む医薬組成物に関する。
本発明のｓｉＮＡ分子は、好ましくは、当技術分野で公知の技術に従い、対象に投与す
る前に医薬組成物として製剤化される。本発明の医薬組成物は、少なくとも無菌であり発
熱物質を含有しないことにより特徴づけされる。本発明の医薬組成物の製造方法は、例え
ばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１７ ｅ
ｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９
８５）に記載されている当技術分野の技量の範囲内である。
幾つかの実施形態においては、本発明の医薬組成物（例えば、ｓｉＮＡおよび／または
そのＬＮＰ製剤）は更に、通常の医薬賦形剤および／または添加剤を含む。適当な医薬賦
形剤には、保存剤、香味剤、安定剤、抗酸化剤、浸透圧調節剤、緩衝剤（バッファー）お
よびｐＨ調節剤が含まれる。適当な添加剤には、生理的に生体適合性であるバッファー（
例えば、塩酸トリメチルアミン）、キレート剤（例えば、ＤＴＰＡまたはＤＴＰＡ−ビス
アミド）、またはカルシウムキレート錯体（例えば、カルシウムＤＴＰＡ、ＣａＮａＤＴ
ＰＡ−ビスアミド）の添加、または所望により、カルシウムもしくはナトリウム塩（例え
ば、塩化カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシウムまたは乳酸カル
シウム）の添加が含まれる。また、抗酸化剤および懸濁化剤が使用されうる。
局所投与用の種々のタイプの製剤の非限定的な例には、軟膏剤、ローション剤、クリー
ム剤、ゲル剤、フォーム（泡剤）、経皮パッチによる運搬用の製剤、散剤、噴霧剤、エア
ゾール剤、カプセル剤またはカートリッジ（吸入器またはインサフレーターにおける使用
のためのもの）または滴剤（例えば、点眼剤または点鼻剤）、噴霧療法のための水剤（溶
液）／懸濁剤、坐剤、ペッサリー、貯留型浣腸剤、および咀嚼可能もしくは吸い込み可能
な錠剤もしくはペレット剤（例えば、アフタ性潰瘍の治療のためのもの）、またはリポソ
ームもしくはマイクロカプセル製剤が含まれる。
軟膏剤、クリーム剤およびゲル剤は、例えば、適当な増粘剤および／またはゲル化剤お
よび／または溶媒の添加により、水性または油性基剤で製剤化されうる。そのような基剤
の非限定的な例には、例えば、水および／または油、例えば流動パラフィン、または植物
油、例えばラッカセイ油もしくはヒマシ油、または溶媒、例えばポリエチレングリコール
が含まれうる。該基剤の性質に応じて、種々の増粘剤およびゲル化剤が使用されうる。そ
のような物質の非限定的な例には、白色軟パラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セト
ステアリルアルコール、ポリエチレングリコール、羊毛脂、ミツロウ、カルボキシポリメ
チレンおよびセルロース誘導体および／またはグリセリルモノステアラートおよび／また
はノニオン乳化剤が含まれる。
１つの実施形態においては、ローション剤が水性または油性基剤で製剤化されることが
可能であり、一般に、１以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁化剤または増粘剤をも含有
するであろう。
１つの実施形態においては、いずれかの適当な散剤基剤、例えばタルク、ラクトースま
たはデンプンの補助により、外部適用のための散剤が形成されうる。滴剤は、１以上の分
散剤、可溶化剤、懸濁化剤または保存剤をも含む水性または非水性基剤で製剤化されうる
。
経口使用を意図した組成物は医薬組成物の製造のための当技術分野で公知の任意の方法
により製造されることが可能であり、そのような組成物は、医薬上優美かつ美味な製剤を
得るために、１以上のそのような甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤を含有しうる。錠
剤は、錠剤の製造に適した無毒性の医薬上許容される賦形剤と混合された有効成分を含有
する。これらの賦形剤は、例えば不活性な希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウ
ム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；顆粒化および崩壊剤、例え
ばコーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアカシア
；ならびに滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであり
うる。該錠剤はコーティングされていないものであることが可能であり、あるいはそれは
公知技術によりコーティングされうる。幾つかの場合には、そのようなコーティングは、
胃腸管における崩壊および吸収を遅延させて長期にわたる持続的作用をもたらすための公
知技術により調製されうる。例えば、時間遅延性物質、例えばグリセリルモノステアラー
トまたはグリセリルジステアラートが使用されうる。
経口用製剤は、硬ゼラチンカプセル剤（この場合、有効成分は不活性固体希釈剤、例え
ば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合さている）または軟ゼラチン
カプセル剤（この場合、有効成分は水または油媒体、例えばラッカセイ油、液体パラフィ
ンまたはオリーブ油と混合されている）としても提供されうる。
水性懸濁剤は、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤と混合された活性物質を含有する。そ
のような賦形剤は、懸濁化剤、例えばカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、
ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン
、トラガカントガムおよびアカシアガムであり、分散または湿潤剤は、天然に存在するホ
スファチド、例えばレシチン、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合産物、例えばポリオ
キシエチレンステアラート、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合産
物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、または脂肪酸およびヘキシトールに由
来する部分エステルとエチレンオキシドとの縮合産物、例えばポリオキシエチレンソルビ
トールモノオレアート、または脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分エステル
とエチレンオキシドとの縮合産物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレアートであり
うる。該水性懸濁剤は、１以上の保存剤、例えばエチルまたはｎ−プロピル、ｐ−ヒドロ
キシベンゾアート、１以上の着色剤、１以上の香味剤、および１以上の甘味剤、例えばス
クロースまたはサッカリンをも含有しうる。
油性懸濁剤は、有効成分を、植物油、例えばラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油または
ヤシ油、あるいは鉱油、例えば流動パラフィンに懸濁させることにより製剤化されうる。
該油性懸濁剤は、増粘剤、例えばミツロウ、固型パラフィンまたはセチルアルコールを含
有しうる。美味な経口製剤を得るために、甘味剤（例えば、前記のもの）および香味剤が
添加されうる。これらの組成物は、例えばアスコルビン酸のような抗酸化剤の添加により
保存されうる。
また、本発明の医薬組成物は水中油エマルションの形態でありうる。油相は植物油、例
えばオリーブ油またはラッカセイ油、あるいは鉱油、例えば流動パラフィンまたはこれら
の混合物でありうる。適当な乳化剤は、天然に存在するガム、例えばアカシアガムまたは
トラガカントガム、天然に存在するホスファチド、例えばダイズ、レシチン、および脂肪
酸とヘキシトール無水物とに由来するエステルまたは部分エステル、例えばソルビタンモ
ノオレアート、およびエチレンオキシドとの該部分エステルの縮合産物、例えばポリオキ
シエチレンソルビタンモノオレアートでありうる。該エマルションは甘味剤および香味剤
をも含有しうる。
シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコー
ル、ソルビトールまたはスクロースを使用して製剤化されうる。そのような製剤は粘滑剤
、保存剤ならびに香味および着色剤をも含有しうる。該医薬組成物は無菌の注射可能な水
性または油性懸濁剤の形態でありうる。この懸濁剤は、前記で挙げられている適当な分散
または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の技術により製剤化されうる。該無菌注射剤
はまた、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の、例えば１，３−ブタンジ
オール中の溶液としての、無菌の注射可能な溶液または懸濁液でありうる。使用されうる
許容されるビヒクルおよび溶媒としては、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶
液が挙げられる。また、無菌の不揮発性油が溶媒または懸濁媒体として簡便に使用される
。この目的には、合成モノ−またはジグリセリドを含む、刺激の少ないいずれかの不揮発
性油が使用されうる。また、注射剤の製造においては、脂肪酸、例えばオレイン酸が有用
である。
本発明の核酸分子はまた、例えば該薬物の直腸投与のための坐剤の形態で投与されうる
。これらの組成物は、常温では固体であるが直腸温度では液体であり従って直腸内で溶解
して該薬物を放出する適当な非刺激性賦形剤と該薬物とを混合することにより製造されう
る。そのような物質には、カカオ脂およびポリエチレングリコールが含まれる。
本発明の核酸は無菌媒体中で非経口的に投与されうる。該分子は、用いられるビヒクル
および濃度に応じて、該ビヒクルに懸濁または溶解されうる。有利には、局所麻酔薬、保
存剤および緩衝剤のような佐剤がビヒクルに溶解されうる。
他の実施形態においては、肺運搬における使用のための、本発明で提供されるｓｉＮＡ
およびＬＮＰ組成物および製剤は更に、１以上の界面活性剤を含む。本発明の組成物の取
り込みを増強するための適当な界面活性剤（サーファクタント）または界面活性剤成分に
は、サーファクタントタンパク質Ａ、サーファクタントタンパク質Ｂ、サーファクタント
タンパク質Ｃ、サーファクタントタンパク質Ｄおよびサーファクタントタンパク質Ｅ、ジ
飽和ホスファチジルコリン（ジパルミトイル以外）、ジパルミトイルホスファチジルコリ
ン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール
、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン；ホスファチジン酸、ユビキ
ノン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルコリン、パルミトイル
−リゾホスファチジルコリン、デヒドロエピアンドロステロン、ドリコール、スルファチ
ジン酸、グリセロール−３−ホスファート、ジヒドロキシアセトンホスファート、グリセ
ロール、グリセロール−３−ホスホコリン、ジヒドロキシアセトン、パルミタート、シチ
ジンジホスファート（ＣＤＰ）ジアシルグリセロール、ＣＤＰコリン、コリン、コリンホ
スファートの合成および天然ならびに完全およびトランケート化形態；ならびに、とりわ
け、オメガ−３脂肪酸、ポリエン酸、ポリエノン酸、レシチン、パルミチン酸、エチレン
またはプロピレンオキシドの非イオン性ブロック共重合体、ポリオキシプロピレン、単量
体および重合体ポリオキシエチレン、デキストランおよび／またはアルカノイル側鎖を有
する単量体および重合体ポリ（ビニルアミン）、Ｂｒｉｊ ３５、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１
００および合成界面活性剤ＡＬＥＣ、Ｅｘｏｓｕｒｆ、ＳｕｒｖａｎおよびＡｔｏｖａｑ
ｕｏｎｅ、界面活性剤の成分のための天然担体ビヒクルである天然および人工層状体が含
まれる。これらの界面活性剤は製剤中で単一界面活性剤または多成分界面活性剤の一部と
して、あるいは本発明における医薬組成物の核酸成分の５’および／または３’末端への
共有結合付加体として使用されうる。
ｂ．組合せ
本発明のｓｉＮＡおよび医薬製剤は単独で対象に投与されることが可能であり、あるい
は１以上の他の治療用物質、例えば抗癌物質と組合せて使用されうる。したがって、ここ
で開示されている化合物と他の抗癌または化学療法物質との組合せは本発明の範囲内であ
る。そのような物質の例は、Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔ
ｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｖ．Ｔ．ＤｅｖｉｔａおよびＳ．Ｈｅｌｌｍａｎ（編
），６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１年２月１５日），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌ
ｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓに見出されうる。当業者は、関
わっている癌および薬物の個々の特性に基づいて、どの物質の組合せが有用であるかを認
識しうるであろう。本発明のｓｉＮＡは、癌において使用されるいずれかの治療用物質と
組合された場合にも有用である。本化合物は、放射線療法と共に投与される場合に特に有
用である。
したがって、もう１つの実施形態においては、本発明は、１以上の抗癌または化学療法
物質と、本発明のｓｉＮＡ分子、例えば、配列番号７、配列番号４４６、配列番号１１、
配列番号４５０、配列番号１２、配列番号４５１、配列番号１３、配列番号４５２、配列
番号３８、配列番号４７７、配列番号３９、配列番号４７８、配列番号４０、配列番号４
７９、配列番号４１、配列番号４８０、配列番号５９、配列番号４９８、配列番号６３も
しくは配列番号５０２または式（Ａ）の少なくとも１５ヌクレオチドを含むｓｉＮＡ分子
（これらに限定されるものではない）との組合せを提供する。もう１つの実施形態におい
ては、該組合せのｓｉＮＡ成分の「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌク
レオチドである。
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、以下のものを含む公知抗癌物質と
組合された場合に有用である：エストロゲン受容体モジュレーター、アンドロゲン受容体
モジュレーター、レチノイド受容体モジュレーター、細胞毒性物質、抗増殖物質、プレニ
ル−タンパク質トランスフェラーゼインヒビター、血管新生インヒビター、細胞増殖およ
び生存シグナリングのインヒビター、アポトーシス誘導物質、ならびに細胞周期チェック
ポイントを阻害する物質。
本発明の分子と組合せて使用されうるエストロゲン受容体モジュレーターの例には、タ
モキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ヨー
ドキシフェン（ｉｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフ
ェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、フルベストラント（ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）、４−［
７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−
ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル
−２，２−ジメチルプロパノアート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−
ジニトロフェニル−ヒドラゾンおよびＳＨ６４６が含まれるが、これらに限定されるもの
ではない。
本発明の分子と組合せて使用されうるアンドロゲン受容体モジュレーターの例には、フ
ィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）および他の５α−レダクターゼインヒビター、
ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミ
ド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、リアロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ）および酢酸アビ
ラテロン（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
本発明の分子と組合せて使用されうるそのようなレチノイド受容体モジュレーターの例
には、ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）、トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、
１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン
、ＩＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチナミドおよ
びＮ−４−カルボキシフェニルレチナミドが含まれるが、これらに限定されるものではな
い。
本発明の分子と組合せて使用されうる細胞毒性物質の例には、以下のものが含まれるが
、それらに限定されるものではない：セルテネフ（ｓｅｒｔｅｎｅｆ）、カケクチン（ｃ
ａｃｈｅｃｔｉｎ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、タソネルミン（ｔａｓ
ｏｎｅｒｍｉｎ）、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏ
ｐｌａｔｉｎ）、アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒ
ｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ジブロモズルシトール（ｄｉｂｒｏｍｏｄｕｌｃｉｔｏｌ）
、ラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ホテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）
、ネダプラチン（ｎｅｄａｐｌａｔｉｎ）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ
）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、ヘプタプラチン（ｈｅｐｔａｐｌａｔ
ｉｎ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、トシル酸イムプロスルファン
（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）、トロホスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ニムス
チン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、塩化ジブロスピジウム（ｄｉｂｒｏｓｐｉｄｉｕｍ）、プ
ミテパ（ｐｕｍｉｔｅｐａ）、ロバプラチン（ｌｏｂａｐｌａｔｉｎ）、サトラプラチン
（ｓａｔｒａｐｌａｔｉｎ）、プロフィロマイシン（ｐｒｏｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、シス
プラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、イロフルベン（ｉｒｏｆｕｌｖｅｎ）、デキシホスフ
ァミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、シス−アミンジクロロ（２−メチル−ピリジン
）白金、ベンジルグアニン、グルホスファミド（ｇｌｕｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ＧＰＸ１
００、（トランス，トランス，トランス）−ビス−ミュー−（ヘキサン−１，６−ジアミ
ン）−ミュー−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テ
トラクロリド、ジアリジジニルスペルミン（ｄｉａｒｉｚｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ
）、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７
−ジメチルキサンチン、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕ
ｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ビサントレン（ｂｉｓａ
ｎｔｒｅｎｅ）、ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ピラルビシン（ｐｉｒ
ａｒｕｂｉｃｉｎ）、ピナフィド（ｐｉｎａｆｉｄｅ）、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉ
ｃｉｎ）、アムルビシン（ａｍｒｕｂｉｃｉｎ）、アンチネオプラストン（ａｎｔｉｎｅ
ｏｐｌａｓｔｏｎ）、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒド
ロキシカルミノマイシン、アンナマイシン（ａｎｎａｍｙｃｉｎ）、ガラルビシン（ｇａ
ｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、エリナフィド（ｅｌｉｎａｆｉｄｅ）、ＭＥＮ１０７５５および
４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビ
シン（ＷＯ ００／５００３２を参照されたい）。
本発明の分子と組合せて使用されうる低酸素活性化性化合物の一例としては、チラパザ
ミン（ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）が挙げられる。
本発明の分子と組合せて使用されうるプロテアソームインヒビターの例には、ラクタシ
スチン（ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ）およびボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）が含ま
れるが、これらに限定されるものではない。
本発明の分子と組合せて使用されうる微小管インヒビター／微小管安定化物質の例には
、パクリタクセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、硫酸ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、
３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン（ｎｏｒ
ｖｉｎｃａｌｅｕｋｏｂｌａｓｔｉｎｅ）、ドセタキソール（ｄｏｃｅｔａｘｏｌ）、リ
ゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）、ミボブリン（
ｍｉｖｏｂｕｌｉｎ）イセチオナート、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、セマ
ドチン（ｃｅｍａｄｏｔｉｎ）、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニ
ン（ｖｉｎｆｌｕｎｉｎｅ）、クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）、２，３
，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼン
スルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン（ａｎｈｙｄｒｏｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）
、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル
−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、ＴＤＸ２５８、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ
ｓ）（例えば、米国特許第６，２８４，７８１号および第６，２８８，２３７号を参照さ
れたい）およびＢＭＳ１８８７９７が含まれるが、これらに限定されるものではない。
本発明の分子と組合せて使用されうるトポイソメラーゼインヒビターの幾つかの例には
、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：トポテカン（ｔｏｐｏｔ
ｅｃａｎ）、ヒカプタミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅ
ｃａｎ）、ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）、６−エトキシプロピオニル−３’，４’
−Ｏ−エキソ−ベンジリデン−シャールトルーシン（ｃｈａｒｔｒｅｕｓｉｎ）、９−メ
トキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−
（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−
９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：ｂ，
７］−インドリジノール［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン，ル
ルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］
−（２０Ｓ）カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ
１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）
、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、ソブゾキサン（ｓｏｂｕｚｏｘａｎｅ）、２’
−ジメチルアミノ−２’−デオキシ−エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、ＧＬ３３１、
Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピ
リド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン（ａｓｕｌａｃｒ
ｉｎｅ）、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ
）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシ
フェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナ
フト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）
−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］−フェナントリジニウム、６
，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソグイノリン−５，１０−ジ
オン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロ
キシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン
、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ
−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチ
ル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ
］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オンおよびジメスナ
（ｄｉｍｅｓｎａ）。
本発明の分子と組合せて使用されうる、有糸分裂キネシン、特にヒト有糸分裂キネシン
ＫＳＰのインヒビターの例には、ＰＣＴ公開ＷＯ０１／３０７６８、ＷＯ０１／９８２７
８、ＷＯ０３／０５０，０６４、ＷＯ０３／０５０，１２２、ＷＯ０３／０４９，５２７
、ＷＯ０３／０４９，６７９、ＷＯ０３／０４９，６７８、ＷＯ０４／０３９７７４、Ｗ
Ｏ０３／０７９９７３、ＷＯ０３／０９９２１１、ＷＯ０３／１０５８５５、ＷＯ０３／
１０６４１７、ＷＯ０４／０３７１７１、ＷＯ０４／０５８１４８、ＷＯ０４／０５８７
００、ＷＯ０４／１２６６９９、ＷＯ０５／０１８６３８、ＷＯ０５／０１９２０６、Ｗ
Ｏ０５／０１９２０５、ＷＯ０５／０１８５４７およびＷＯ０５／０１７１９０、ならび
に米国特許出願公開番号ＵＳ２００５／０１７６７７６に記載されているインヒビターが
含まれるが、これらに限定されるものではない。１つの実施形態においては、有糸分裂キ
ネシンのインヒビターには、ＫＳＰのインヒビター、ＭＫＬＰ１のインヒビター、ＣＥＮ
Ｐ−Ｅのインヒビター、ＭＣＡＫのインヒビター、Ｋｉｆｌ４のインヒビター、Ｍｐｈｏ
ｓｐｈ１のインヒビターおよびＲａｂ６−ＫＩＦＬのインヒビターが含まれるが、これら
に限定されるものではない。
本発明の化合物と組合せて使用されうるヒストンデアセチラーゼインヒビターの例には
、ＴＳＡ、オキサムフラチン（ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ）、ＰＸＤ１０１、ＭＧ９８、バル
プロ酸およびスクリプタイド（ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）が含まれるが、これらに限定される
ものではない。他のヒストンデアセチラーゼインヒビターに対する更なる言及はＭｉｌｌ
ｅｒ，Ｔ．Ａ．ら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６（２４）：５０９７−５１１６（２００
３）に見出されうる。
本発明の分子と組合せて使用されうる、有糸分裂の進行に関与するキナーゼのインヒビ
ターには、オーロラキナーゼのインヒビター、Ｐｏｌｏ様キナーゼ（ＰＬＫ）のインヒビ
ター（特にＰＬＫ−１のインヒビター）、ｂｕｂ−１のインヒビターおよびｂｕｂ−Ｒ１
のインヒビターが含まれるが、これらに限定されるものではない。
本発明の分子と組合せて使用されうる抗増殖性物質には、以下のものが含まれるが、そ
れらに限定されるものではない：アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、
例えばＧ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１およびＩＮＸ３００
１、ならびに抗代謝拮抗物質、例えばエノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、カルモ
フル（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、テガフル（ｔｅｇａｆｕｒ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏ
ｓｔａｔｉｎ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、トリメトレキセー
ト（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、カペシタ
ビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ガロシタビン（ｇａｌｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、シタ
ラビンオクホスファート（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ ｏｃｆｏｓｆａｔｅ）、ホステアビン
（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）ナトリウム水和物、ラルチトレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅ
ｄ）、パルチトレキシド（ｐａｌｔｉｔｒｅｘｉｄ）、エミテフル（ｅｍｉｔｅｆｕｒ）
、チアゾフリン（ｔｉａｚｏｆｕｒｉｎ）、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ノラ
トレキセド（ｎｏｌａｔｒｅｘｅｄ）、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ネル
ザラビン（ｎｅｌｚａｒａｂｉｎｅ）、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２
’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロ−ベン
ゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオ
キシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−
Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン（ａｐｌｉｄ
ｉｎｅ）、エクテイナスシジン（ｅｃｔｅｉｎａｓｃｉｄｉｎ）、トロキサシタビン（ｔ
ｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラ
ヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチ
ル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン（ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉ
ｎ）、５−フルオロウラシル、アラノシン（ａｌａｎｏｓｉｎｅ）、１１−アセチル−８
−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１
−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−テトラデカ−２，４，６−トリエン−９
−イル酢酸エステル、スワインソニン（ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ）、ロメトレキソール（
ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ）、デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）、メチオニナー
ゼ（ｍｅｔｈｉｏｎｉｎａｓｅ）、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル
−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンおよび３−アミノピリジン−２−カルボキサ
ルデヒドチオセミカルバゾン。
本発明の分子と組合せて使用されうるモノクローナル抗体標的化治療用物質の例には、
癌細胞特異的または標的細胞特異的モノクローナル抗体に細胞毒性物質または放射性同位
体が結合している治療用物質、例えばＢｅｘｘａｒが含まれる。
本発明の分子と組合せて使用されうるプレニル−タンパク質トランスフェラーゼインヒ
ビターの例には、以下の刊行物および特許において見出されうるものが含まれるが、それ
らに限定されるものではない：ＷＯ９６／３０３４３、ＷＯ９７／１８８１３、ＷＯ９７
／２１７０１、ＷＯ９７／２３４７８、ＷＯ９７／３８６６５、ＷＯ９８／２８９８０、
ＷＯ９８／２９１１９、ＷＯ９５／３２９８７、ＷＯ９４／１９３５７、ＷＯ９５／０８
５４２、ＷＯ９５／１１９１７、ＷＯ９５／１２６１２、ＷＯ９５／１２５７２、ＷＯ９
５／１０５１４、ＷＯ９５／１０５１５、ＷＯ９５／１０５１６、ＷＯ９５／２４６１２
、ＷＯ９５／３４５３５、ＷＯ９５／２５０８６、ＷＯ９６／０５５２９、ＷＯ９６／０
６１３８、ＷＯ９６／０６１９３、ＷＯ９６／１６４４３、ＷＯ９６／２１７０１、ＷＯ
９６／２１４５６、ＷＯ９６／２２２７８、ＷＯ９６／２４６１１、ＷＯ９６／２４６１
２、ＷＯ９６／０５１６８、ＷＯ９６／０５１６９、ＷＯ９６／００７３６、ＷＯ９６／
１７８６１、ＷＯ９６／３３１５９、ＷＯ９６／３４８５０、ＷＯ９６／３４８５１、Ｗ
Ｏ９６／３００１７、ＷＯ９６／３００１８、ＷＯ９６／３０３６２、ＷＯ９６／３０３
６３、ＷＯ９６／３１１１１、ＷＯ９６／３１４７７、ＷＯ９６／３１４７８、ＷＯ９６
／３１５０１、ＷＯ９７／００２５２、ＷＯ９７／０３０４７、ＷＯ９７／０３０５０、
ＷＯ９７／０４７８５、ＷＯ９７／０２９２０、ＷＯ９７／１７０７０、ＷＯ９７／２６
２４６、ＷＯ９７／３００５３、ＷＯ９７／４４３５０およびＷＯ９８／０２４３６；米
国特許第５，４２０，２４５号、第５，５２３，４３０号、第５，５３２，３５９号、第
５，５１０，５１０号、第５，５８９，４８５号、第５，６０２，０９８号、第５，６６
１，１５２号、第５，５７１，７９２号；ならびに欧州特許出願公開番号０ ６１８ ２
２１、０ ６７５ １１２、０ ６０４ １８１、０ ６９６ ５９３。血管新生に対す
るプレニル−タンパク質トランスフェラーゼインヒビターの役割の一例に関しては、Ｅｕ
ｒｏｐｅａｎ Ｊ．ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．９，ｐｐ．１３９４−１
４０１（１９９９）を参照されたい。
本発明の分子と組合せて使用されうる血管新生インヒビターの例には、以下のものが含
まれるが、それらに限定されるものではない：チロシンキナーゼインヒビター、例えば、
チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ１）およびＦｌｋ−１／ＫＤＲ（ＶＥＧ
ＦＲ２）のインヒビター、上皮由来、繊維芽細胞由来または血小板由来増殖因子のインヒ
ビター、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）インヒビター、インテグリンブロッ
カー、インターフェロンα、インターロイキン−１２、ペントサンポリスルファート、シ
クロオキシゲナーゼインヒビター、例えば非ステロイド抗炎症物質（ＮＳＡＩＤ）、例え
ばアスピリンおよびイブプロフェン、ならびに選択的シクロオキシゲナーゼ２インヒビタ
ー、例えばセレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）およびロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘ
ｉｂ）（ＰＮＡＳ，Ｖｏｌ．８９，ｐ．７３８４（１９９２）；ＪＮＣＩ，Ｖｏｌ．６９
，ｐ．４７５（１９８２）；Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ，Ｖｏｌ．１０８，ｐ．５７
３（１９９０）；Ａｎａｔ．Ｒｅｃ，Ｖｏｌ．２３８，ｐ．６８（１９９４）；ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．３７２，ｐ．８３（１９９５）；Ｃｌｉｎ，Ｏｒｔｈｏｐ．
Ｖｏｌ．３１３，ｐ．７６（１９９５）；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，Ｖｏｌ
．１６，ｐ．１０７（１９９６）；Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ．７５，
ｐ．１０５（１９９７）；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７，ｐ．１６２５（１９
９７）；Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．９３，ｐ．７０５（１９９８）；Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍ
ｅｄ．，Ｖｏｌ．２，ｐ．７１５（１９９８）；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２
７４，ｐ．９１１６（１９９９））、ステロイド抗炎症物質（例えば、コルチコステロイ
ド、ミネラルコルチコステロイド、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、プ
レドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、
メチルプレド（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄ）、ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）
）、カルボキシアミドトリアゾール、コムブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉ
ｎ）Ａ−４、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、６−Ｏ−クロロアセチル−カルボ
ニル）−フマギロール（ｆｕｍａｇｉｌｌｏｌ）、サリドマイド（ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄ
ｅ）、アンジオスタチン（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、トロポニン−１、アンジオテンシ
ンＩＩアンタゴニスト（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１０５
：１４１−１４５（１９８５）を参照されたい）、およびＶＥＧＦに対する抗体（Ｎａｔ
ｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１７，ｐｐ．９６３−９６８（Ｏｃｔｏ
ｂｅｒ １９９９）；Ｋｉｍら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２，８４１−８４４（１９９３）；
ＷＯ００／４４７７７；およびＷＯ００／６１１８６）、エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔ
ａｔｉｎ）、ウクライン（ｕｋｒａｉｎ）、ランピルナーゼ（ｒａｎｐｉｒｎａｓｅ）、
ＩＭ８６２、５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキ
シラニル］−１−オキサスピロ［２，５］オクタ−６−イル（クロロアセチル）カルバマ
ート、アセチルジナナリン（ａｃｅｔｙｌｄｉｎａｎａｌｉｎｅ）、５−アミノ−１−［
［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）−フェニル］メチル］−１Ｈ−１，
２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド、ＣＭ１０１、スクアラミン（ｓｑｕａｌａ
ｍｉｎｅ）、コムブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）、ＲＰＩ４６１０、
ＮＸ３１８３８、硫酸化マンノペントースホスファート、７，７−（カルボニル−ビス［
イミノ−Ｎ−メチル−４，２−ピロロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール
］−カルボニルイミノ］−ビス−（１，３−ナフタレンジスルホナート）、および３−［
（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６
）。
血管新生をモジュレーションまたは抑制する他の治療用物質も本発明の分子と組合せて
使用されることが可能であり、凝固および線維素溶解系をモジュレーションまたは抑制す
る物質を包含する（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍｅｄ．３８：６７９−６９２（２００
０）における総説を参照されたい）。本発明の化合物と組合せて使用されうる、凝固およ
び線維素溶解経路をモジュレーションまたは抑制するそのような物質の例には、ヘパリン
（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８０：１０−２３（１９９８）を参照されたい）、低
分子量ヘパリンおよびカルボキシペプチダーゼＵインヒビター（活性トロンビン活性化性
線維素溶解インヒビター（ＴＡＦＩａ）のインヒビターとしても公知である）が含まれる
が、これらに限定されるものではない。ＴＡＦＩａインヒビターはＰＣＴ公開ＷＯ０３／
０１３，５２６および米国特許出願（Ｕ．Ｓ．Ｓｅｒ．）第６０／３４９，９２５号（２
００２年１月１８日付け出願）に記載されている。
本発明の分子と組合せて使用されうる、細胞周期チェックポイントを妨げる物質は、限
定的なものではないがＡＴＲ、ＡＴＭ、Ｃｈｋ１およびＣｈｋ２キナーゼのインヒビター
ならびにｃｄｋおよびｃｄｃキナーゼインヒビターを包含し、特に、７−ヒドロキシスタ
ウロスポリン、フラボピリドール（ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）、ＣＹＣ２０２（Ｃｙｃ
ｌａｃｅｌ）およびＢＭＳ−３８７０３２により例示される。
本発明の分子と組合せて使用されうる、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を妨げる物
質には、ｃ−Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３およびＭＡＰＫ１のインヒビターが含
まれるが、これらに限定されるものではない。他の物質には、Ｂｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎお
よびＨｕｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：３５５−３６５，２００１に記載されている
ＲＴＫのインヒビターが含まれる。
本発明の分子と組合せてと使用されうる、細胞周期および生存シグナリング経路のイン
ヒビターには、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：ＥＧＦＲの
インヒビター（例えば、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）およびエルロチニブ（ｅｒ
ｌｏｔｉｎｉｂ））、ＥＲＢ−２のインヒビター（例えば、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔ
ｕｚｕｍａｂ））、ＩＧＦＲのインヒビター、サイトカイン受容体のインヒビター、ＭＡ
ＰＫ１のインヒビター、ＰＩ３Ｋのインヒビター（例えば、ＬＹ２９４００２）、セリン
／トレオニンキナーゼのインヒビター（限定的なものではないが、例えばＷＯ０２／０８
３０６４、ＷＯ０２／０８３１３９、ＷＯ０２／０８３１４０、ＵＳ２００４−０１１６
４３２、ＷＯ０２／０８３１３８、ＵＳ２００４−０１０２３６０、ＷＯ０３／０８６４
０４、ＷＯ０３／０８６２７９、ＷＯ０３／０８６３９４、ＷＯ０３／０８４４７３、Ｗ
Ｏ０３／０８６４０３、ＷＯ２００４／０４１１６２、ＷＯ２００４／０９６１３１、Ｗ
Ｏ２００４／０９６１２９、ＷＯ２００４／０９６１３５、ＷＯ２００４／０９６１３０
、ＷＯ２００５／１００３５６、ＷＯ２００５／１００３４４に記載されているもののよ
うなＡｋｔのインヒビターを含む、）、Ｒａｆキナーゼのインヒビター（例えば、ＢＡＹ
−４３−９００６）、ＭＥＫのインヒビター（例えば、ＣＩ−１０４０およびＰＤ−０９
８０５９）およびｍＴＯＲのインヒビター（例えば、Ｗｙｅｔｈ ＣＣＩ−７７９）。そ
のような物質には、小分子インヒビター化合物および抗体アンタゴニストが含まれる。
本発明の分子と組合せて使用されうるアポトーシス誘導物質には、ＴＮＦ受容体ファミ
リーメンバー（ＴＲＡＩＬ受容体を含む）のアクチベーターが含まれるが、これらに限定
されるものではない。
本発明の分子と組合せて使用されうる、選択的ＣＯＸ−２インヒビターであるＮＳＡＩ
Ｄには、米国特許第５，４７４，９９５号、米国特許第５，８６１，４１９号、米国特許
第６，００１，８４３号、米国特許第６，０２０，３４３号、米国特許第５，４０９，９
４４号、米国特許第５，４３６，２６５号、米国特許第５，５３６，７５２号、米国特許
第５，５５０，１４２号、米国特許第５，６０４，２６０号、Ｕ．Ｓ．５，６９８，５８
４号、米国特許第５，７１０，１４０号、ＷＯ９４／１５９３２、米国特許第５，３４４
，９９１号、米国特許第５，１３４，１４２号、米国特許第５，３８０，７３８号、米国
特許第５，３９３，７９０号、米国特許第５，４６６，８２３号、米国特許第５，６３３
，２７２および米国特許第５，９３２，５９８号（それらの全てを参照により本明細書に
組み入れることとする）に開示されているＮＳＡＩＤが含まれるが、これらに限定される
ものではない。
本発明の分子と組合せた場合に特に有用であるＣＯＸ−２のインヒビターには、３−フ
ェニル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−フラノンおよび５
−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）−フェニル−２−（２−メチル−５−ピリジニ
ル）ピリジンまたはそれらの医薬上許容される塩が含まれる。
ＣＯＸ−２の特異的インヒビターとして記載されており、したがって本発明において有
用である分子には、パレコキシブ（ｐａｒｅｃｏｘｉｂ）、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標
）およびＢＥＸＴＲＡ（登録商標）またはそれらの医薬上許容される塩が含まれるが、こ
れらに限定されるものではない。
本発明の分子と組合せて使用されうるチロシンキナーゼインヒビターには、以下のもの
が含まれるが、それらに限定されるものではない：Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）
−５−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、３−［（２，４−ジメチルピロー
ル−５−イル）メチリデニル）インドリン−２−オン、１７−（アリルアミノ）−１７−
デメトキシゲルダナマイシン（ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、４−（
３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリ
ニル）プロポキシル］キナゾリン、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−
メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、ＢＩＢＸ１３８２，２，３，９，１０，１
１，１２−ヘキサヒドロ−１０−（ヒドロキシメチル）−１０−ヒドロキシ−９−メチル
−９，１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２，３−ｆｇ：３’，２’，１’−ｋｌ
］ピロロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン−１−オン、ＳＨ２６８、ゲニステ
イン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）（ＳＴＩ５７１）、ＣＥ
Ｐ２５６３、４−（３−クロロフェニルアミノ）−５，６−ジメチル−７Ｈ−ピロロ［２
，３−ｄ］ピリミジンメタンスルホナート、４−（３−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル
）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、４−（４’−ヒドロキシフェニル）アミノ−
６，７−ジメトキシキナゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴＩ５７１Ａ、Ｎ−４−クロロフェニ
ル−４−（４−ピリジルメチル）−１−フタラジンアミンおよびＥＭＤ１２１９７４。
伝統的な抗癌化合物以外のもの、例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビター、
ＰＰＡＲ−γ（すなわち、ＰＰＡＲ−ガンマ）アゴニストおよびＰＰＡＲ−δ（すなわち
、ＰＰＡＲ−デルタ）アゴニストとの組合せも本組成物および方法に含まれる。
本発明の分子と組合せて使用されうるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの例に
は、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：ロバスタチン（ｌｏｖ
ａｓｔａｔｉｎ）（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）；米国特許第４，２３１，９３８号、第
４，２９４，９２６号および第４，３１９，０３９号を参照されたい）、シンバスタチン
（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ）（ＺＯＣＯＲ（登録商標）；米国特許第４，４４４，７８４
号、第４，８２０，８５０号および第４，９１６，２３９号）、プラバスタチン（ｐｒａ
ｖａｓｔａｔｉｎ）（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）；米国特許第４，３４６，２２７
号、第４，５３７，８５９号、第４，４１０，６２９号、第５，０３０，４４７号および
第５，１８０，５８９号を参照されたい）、フルバスタチン（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ）
（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）；米国特許第５，３５４，７７２号、第４，９１１，１６５
号、第４，９２９，４３７号、第５，１８９，１６４号、第５，１１８，８５３号、第５
，２９０，９４６号および第５，３５６，８９６号）およびアトルバスタチン（ａｔｏｒ
ｖａｓｔａｔｉｎ）（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）；米国特許第５，２７３，９９５号、
第４，６８１，８９３号、第５，４８９，６９１号および第５，３４２，９５２号を参照
されたい）。本発明において使用されうるこれらの及び追加的なＨＭＧ−ＣｏＡレダクタ
ーゼインヒビターの構造式はＭ．Ｙａｌｐａｎｉ，“Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｌｏｗｅ
ｒｉｎｇ Ｄｒｕｇｓ”，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ｐｐ．８５−８
９（１９９６年２月５日）の８７ページならびに米国特許第４，７８２，０８４号および
第４，８８５，３１４号に記載されている。
ＰＰＡＲ−γ（すなわち、ＰＰＡＲ−ガンマ）アゴニストおよびＰＰＡＲ−δ（すなわ
ち、ＰＰＡＲ−デルタ）アゴニストは或る悪性疾患の治療に有用である。ＰＰＡＲ−γお
よびＰＰＡＲ−δは核ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γおよびδである。内皮細
胞上のＰＰＡＲ−γの発現および血管新生におけるその関与が文献において報告されてい
る（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３１：９０９−９１３（１９９８
）；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：９１１６−９１２１（１９９９）；Ｉｎｖｅｓｔ
．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．４１：２３０９−２３１７（２０００）を参
照されたい）。より最近になって、ＰＰＡＲ−γアゴニストはインビトロにおけるＶＥＧ
Ｆに対する血管新生応答を抑制することが示されており、トログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉ
ｔａｚｏｎｅ）およびマレイン酸ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）の両方
がマウスにおける網膜血管新生の発生を抑制する（Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．１１
９：７０９−７１７（２００１））。本発明の化合物と組合せて使用されうるＰＰＡＲ−
γアゴニストおよびＰＰＡＲ−γ／αアゴニストの例には、以下のものが含まれるが、そ
れらに限定されるものではない：チアゾリジンジオン（例えば、ＤＲＦ２７２５、ＣＳ−
０１１、トログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌ
ｉｔａｚｏｎｅ）およびピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ））、フェノフィブ
レート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）、ジェムフィブロジル（ｇｅｍｆｉｂｒｏｚｉｌ）、
クロフィブレート（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）、ＧＷ２５７０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ−
Ｈ０３９２４２、ＪＴＴ−５０１、ＭＣＣ−５５５、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、
ＮＮ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１５８、ＮＮ６２２、ＧＩ２６２
５７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２−［（５，７−ジプロピル−３−
トリフルオロメチル−１，２−ベンゾイソオキサゾール−６−イル）オキシ］−２−メチ
ルプロピオン酸（ＵＳＳＮ ０９／７８２，８５６に開示されている）および２（Ｒ）−
７−（３−（２−クロロ−４−（４−フルオロフェノキシ）フェノキシ）プロポキシ）−
２−エチルクロマン−２−カルボン酸（ＷＯ２００２／０２６７２９に開示されている）
。
本発明のもう１つの実施形態は、癌の治療のための遺伝子治療と組合されたここに開示
されている分子の使用である。癌の治療のための遺伝的方法の概説については、Ｈａｌｌ
ら（Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ ６１：７８５−７８９（１９９７））およびＫｕｆ
ｅら（Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，５ｔｈ Ｅｄ，ｐｐ ８７６−８８９，ＢＣ
Ｄｅｃｋｅｒ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，２０００）を参照されたい。遺伝子治療は、いずれか
の腫瘍抑制遺伝子を運搬するために用いられうる。そのような遺伝子の例には、組換えウ
イルス媒介性遺伝子導入により運搬されうるｐ５３（例えば、米国特許第６，０６９，１
３４号を参照されたい）、ｕＰＡ／ｕＰＡＲアンタゴニスト（“Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−
Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａ ｕＰＡ／ｕＰＡＲ Ａｎｔａｇｏｎｉ
ｓｔ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｔｕｍ
ｏｒ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｅ”Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｕｇｕｓｔ５（８）：１１０５−１３（１９９８））およびインタ
ーフェロンガンマ（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：２１７−２２２（２０００））が含ま
れるが、これらに限定されるものではない。
また、本発明の分子は、固有の多剤耐性（ＭＤＲ）、特に、輸送体タンパク質の高レベ
ルの発現に関連したＭＤＲのインヒビターと組合せて投与されうる。そのようなＭＤＲイ
ンヒビターには、ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）のインヒビター、例えばＬＹ３３５９７
９、ＸＲ９５７６、ＯＣ１４４−０９３、Ｒ１０１９２２、ＶＸ８５３およびＰＳＣ８３
３（バルスポダル（ｖａｌｓｐｏｄａｒ））が含まれる。
本発明の分子は、本発明の分子の単独での使用または放射線療法との併用から生じうる
、急性、遅延性、後期および予期性嘔吐を含む悪心または嘔吐を治療するための制吐物質
と共に使用されうる。嘔吐の予防または治療のために、本発明の分子は、他の制吐物質、
特に以下のものと共に使用されうる：ニューロキニン−１受容体アンタゴニスト、５ＨＴ
３受容体アンタゴニスト、例えばオンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ）、グラニ
セトロン（ｇｒａｎｉｓｅｔｒｏｎ）、トロピセトロン（ｔｒｏｐｉｓｅｔｒｏｎ）およ
びザチセトロン（ｚａｔｉｓｅｔｒｏｎ）、ＧＡＢＡＢ受容体アゴニスト、例えばバクロ
フェン（ｂａｃｌｏｆｅｎ）、コルチコステロイド、例えばデカドロン（Ｄｅｃａｄｒｏ
ｎ）（デキサメタゾン）、ケナログ（Ｋｅｎａｌｏｇ）、アリストコルト（Ａｒｉｓｔｏ
ｃｏｒｔ）、ナサリド（Ｎａｓａｌｉｄｅ）、プレフェリド（Ｐｒｅｆｅｒｉｄ）、ベネ
コルテン（Ｂｅｎｅｃｏｒｔｅｎ）など、例えば米国特許第２，７８９，１１８号、第２
，９９０，４０１号、第３，０４８，５８１号、第３，１２６，３７５号、第３，９２９
，７６８号、第３，９９６，３５９号、第３，９２８，３２６号および第３，７４９，７
１２号に開示されているもの、抗ドーパミン物質、例えばフェノチアジン（ｐｈｅｎｏｔ
ｈｉａｚｉｎｅ）（例えば、プロクロペラジン（ｐｒｏｃｈｌｏｒｐｅｒａｚｉｎｅ）、
フルフェナジン（ｆｌｕｐｈｅｎａｚｉｎｅ）、チオリダジン（ｔｈｉｏｒｉｄａｚｉｎ
ｅ）およびメソリダジン（ｍｅｓｏｒｉｄａｚｉｎｅ））、メトクロプラミド（ｍｅｔｏ
ｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）またはドロナビノール（ｄｒｏｎａｂｉｎｏｌ）。１つの実施形
態においては、ニューロキニン−１受容体アンタゴニスト、５ＨＴ３受容体アンタゴニス
トおよびコルチコステロイドから選択される制吐物質が、本化合物の投与に際して生じう
る嘔吐の治療または予防のための佐剤として投与される。
本発明の分子と共に使用されるニューロキニン−１受容体アンタゴニストは、例えば、
以下のものに十分に記載されている：米国特許第５，１６２，３３９号、第５，２３２，
９２９号、第５，２４２，９３０号、第５，３７３，００３号、第５，３８７，５９５号
、第５，４５９，２７０号、第５，４９４，９２６号、第５，４９６，８３３号、第５，
６３７，６９９号、第５，７１９，１４７号；欧州特許公開番号ＥＰ ０ ３６０ ３９
０、０ ３９４ ９８９、０ ４２８ ４３４、０ ４２９ ３６６、０ ４３０ ７７
１、０ ４３６ ３３４、０ ４４３ １３２、０ ４８２ ５３９、０ ４９８ ０６
９、０ ４９９ ３１３、０ ５１２ ９０１、０ ５１２ ９０２、０ ５１４ ２７
３、０ ５１４ ２７４、０ ５１４ ２７５、０ ５１４ ２７６、０ ５１５ ６８
１、０ ５１７ ５８９、０ ５２０ ５５５、０ ５２２ ８０８、０ ５２８ ４９
５、０ ５３２ ４５６、０ ５３３ ２８０、０ ５３６ ８１７、０ ５４５ ４７
８、０ ５５８ １５６、０ ５７７ ３９４、０ ５８５ ９１３，０ ５９０ １５
２、０ ５９９ ５３８、０ ６１０ ７９３、０ ６３４ ４０２、０ ６８６ ６２
９、０ ６９３ ４８９、０ ６９４ ５３５、０ ６９９ ６５５、０ ６９９ ６７
４、０ ７０７ ００６、０ ７０８ １０１、０ ７０９ ３７５、０ ７０９ ３７
６、０ ７１４ ８９１、０ ７２３ ９５９、０ ７３３ ６３２および０ ７７６
８９３；ＰＣＴ国際特許公開番号ＷＯ９０／０５５２５、９０／０５７２９、９１／０９
８４４、９１／１８８９９、９２／０１６８８、９２／０６０７９、９２／１２１５１、
９２／１５５８５、９２／１７４４９、９２／２０６６１、９２／２０６７６、９２／２
１６７７、９２／２２５６９、９３／００３３０、９３／００３３１、９３／０１１５９
、９３／０１１６５、９３／０１１６９、９３／０１１７０、９３／０６０９９、９３／
０９１１６、９３／１００７３、９３／１４０８４、９３／１４１１３、９３／１８０２
３、９３／１９０６４、９３／２１１５５、９３／２１１８１、９３／２３３８０、９３
／２４４６５、９４／００４４０、９４／０１４０２、９４／０２４６１、９４／０２５
９５、９４／０３４２９、９４／０３４４５、９４／０４４９４、９４／０４４９６、９
４／０５６２５、９４／０７８４３、９４／０８９９７、９４／１０１６５、９４／１０
１６７、９４／１０１６８、９４／１０１７０、９４／１１３６８、９４／１３６３９、
９４／１３６６３、９４／１４７６７、９４／１５９０３、９４／１９３２０、９４／１
９３２３、９４／２０５００、９４／２６７３５、９４／２６７４０、９４／２９３０９
、９５／０２５９５、９５／０４０４０、９５／０４０４２、９５／０６６４５、９５／
０７８８６、９５／０７９０８、９５／０８５４９、９５／１１８８０、９５／１４０１
７、９５／１５３１１、９５／１６６７９、９５／１７３８２、９５／１８１２４、９５
／１８１２９、９５／１９３４４、９５／２０５７５、９５／２１８１９、９５／２２５
２５、９５／２３７９８、９５／２６３３８、９５／２８４１８、９５／３０６７４、９
５／３０６８７、９５／３３７４４、９６／０５１８１、９６／０５１９３、９６／０５
２０３、９６／０６０９４、９６／０７６４９、９６／１０５６２、９６／１６９３９、
９６／１８６４３、９６／２０１９７、９６／２１６６１、９６／２９３０４、９６／２
９３１７、９６／２９３２６、９６／２９３２８、９６／３１２１４、９６／３２３８５
、９６／３７４８９、９７／０１５５３、９７／０１５５４、９７／０３０６６、９７／
０８１４４、９７／１４６７１、９７／１７３６２、９７／１８２０６、９７／１９０８
４、９７／１９９４２および９７／２１７０２；ならびに英国特許公開番号２ ２６６
５２９、２ ２６８ ９３１ 、２ ２６９ １７０、２ ２６９ ５９０、２ ２７１
７７４、２ ２９２ １４４、２ ２９３ １６８、２ ２９３ １６９および２ ３
０２ ６８９。そのような化合物の製造は前記特許および刊行物（それらを参照により本
明細書に組み入れることとする）に十分に記載されている。
１つの実施形態においては、本発明の分子と共に使用されるニューロキニン−１受容体
アンタゴニストは、２−（Ｒ）−（１−（Ｒ）−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）
−フェニル）エトキシ）−３−（Ｓ）−（４−フルオロフェニル）−４−（３−（５−オ
キソ−１Ｈ，４Ｈ−１，２，４−トリアゾロ）メチル）モルホリン、またはその医薬上許
容される塩（これは米国特許第５，７１９，１４７号に記載されている）から選択される
。
本発明の分子はまた、貧血の治療において有用な物質と共に投与されうる。そのような
貧血治療用物質としては、例えば、連続的赤血球形成受容体アクチベーター（例えば、エ
ポエチンアルファ）が挙げられる。
本発明の分子はまた、好中球減少症の治療において有用な物質と共に投与されうる。そ
のような好中球減少症治療用物質としては、例えば、好中球の産生および機能を調節する
造血成長因子、例えばヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）が挙げられる。Ｇ−Ｃ
ＳＦの例には、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）およびＰＥＧ−フィルグラス
チムが含まれる。
本発明の分子はまた、免疫増強薬、例えばレバミゾール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、イ
ソプリノシン（ｉｓｏｐｒｉｎｏｓｉｎｅ）およびザダキシン（Ｚａｄａｘｉｎ）と共に
投与されうる。
本発明の分子はまた、他のｓｉＮＡ療法と組合された癌の治療または予防に有用であり
うる。
本発明の分子はまた、γ−セクレターゼインヒビターおよび／またはＮＯＴＣＨシグナ
リングのインヒビターと組合せて投与されうる。そのようなインヒビターには、ＷＯ０１
／９００８４、ＷＯ０２／３０９１２、ＷＯ０１／７０６７７、ＷＯ０３／０１３５０６
、ＷＯ０２／３６５５５、ＷＯ０３／０９３２５２、ＷＯ０３／０９３２６４、ＷＯ０３
／０９３２５１、ＷＯ０３／０９３２５３、ＷＯ２００４／０３９８００、ＷＯ２００４
／０３９３７０、ＷＯ２００５／０３０７３１、ＷＯ２００５／０１４５５３、ＵＳＳＮ
１０／９５７，２５１、ＷＯ２００４／０８９９１１、ＷＯ０２／０８１４３５、ＷＯ
０２／０８１４３３、ＷＯ０３／０１８５４３、ＷＯ２００４／０３１１３７、ＷＯ２０
０４／０３１１３９、ＷＯ２００４／０３１１３８、ＷＯ２００４／１０１５３８、ＷＯ
２００４／１０１５３９およびＷＯ０２／４７６７１に記載されている化合物（ＬＹ−４
５０１３９を含む）が含まれる。
本発明の分子はまた、ＰＡＲＰインヒビターと組合された癌の治療または予防に有用で
ありうる。
本発明の分子はまた、以下の治療用物質と組合された癌の治療に有用でありうる：アバ
レリックス（ａｂａｒｅｌｉｘ）（Ｐｌｅｎａｘｉｓ ｄｅｐｏｔ（登録商標））；アル
デスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；アルデスロ
イキン（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；アレムツズマ
ブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂｂ）（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））；アリトレチノイン（
ａｌｉｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）（Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標））；アロプリノール（ａｌ
ｌｏｐｕｒｉｎｏｌ）（Ｚｙｌｏｐｒｉｍ（登録商標））；アルトレタミン（ａｌｔｒｅ
ｔａｍｉｎｅ）（Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；アミホスチン（ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ
）（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））；アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）（Ａｒ
ｉｍｉｄｅｘ（登録商標））；三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標））；アスパラ
ギナーゼ（ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）（Ｅｌｓｐａｒ（登録商標））；アザシチジン（
ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）（Ｖｉｄａｚａ（登録商標））；塩酸ベンダムスチン（ｂｅｎ
ｄａｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ベバクジマブ（ｂｅｖａｃｕｚ
ｉｍａｂ）（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））；ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）カ
プセル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）ゲ
ル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）（Ｂｌ
ｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）（Ｖｅｌｃａｄ
ｅ（登録商標））；ブレフェルジン（ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ）Ａ；静脈内ブスルファン（ｂ
ｕｓｕｌｆａｎ）（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））；経口ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆ
ａｎ）（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）（Ｍ
ｅｔｈｏｓａｒｂ（登録商標））；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）（Ｘｅｌ
ｏｄａ（登録商標））；カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）（Ｐａｒａｐｌａｔ
ｉｎ（登録商標））；カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（ＢＣＮＵ（登録商標），
ＢｉＣＮＵ（登録商標））；カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｇｌｉａｄｅｌ（
登録商標））；ポリフェプロサン（Ｐｏｌｉｆｅｐｒｏｓａｎ）２０インプラントと併用
されるカルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｇｌｉａｄｅｌ Ｗａｆｅｒ（登録商標
））；セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標））；セツキ
シマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））；クロラムブシル（ｃｈ
ｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シスプラチン（ｃｉｓｐｌ
ａｔｉｎ）（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））；クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）
（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標）、２−ＣｄＡ（登録商標））；クロファラビン（ｃｌ
ｏｆａｒａｂｉｎｅ）（Ｃｌｏｌａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏ
ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））
；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ Ｉｎｊ
ｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ
）（Ｃｙｔｏｘａｎ Ｔａｂｌｅｔ（登録商標））；シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ
）（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））；シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）リポソー
ム（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））；ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）（ＤＴＩ
Ｃ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アクチ
ノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）Ｄ（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；ダルテパ
リン（ｄａｌｔｅｐａｒｉｎ）ナトリウム注射用（Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標））；ダル
ベポエチンアルファ（Ｄａｒｂｅｐｏｅｔｉｎ ａｌｆａ）（Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標
））；ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））；ダウノルビ
シン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）リポソーム（ＤａｎｕｏＸｏｍｅ（登録商標））；ダ
ウノルビシン，ダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（
登録商標））；ダウノルビシン，ダウノマイシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））
；デガレリックス（ｄｅｇａｒｅｌｉｘ）（Ｆｉｒｍａｇｏｎ（登録商標））；デニロイ
キン・ジフチトックス（Ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ ｄｉｆｔｉｔｏｘ）（Ｏｎｔａｋ（登録
商標））；デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）（Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標
））；塩酸デクスラゾキサン（Ｔｏｔｅｃｔ（登録商標））；ジデムニン（ｄｉｄｅｍｎ
ｉｎ）Ｂ；１７−ＤＭＡＧ；ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（
登録商標））；ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ Ｐ
ＦＳ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標），Ｒｕｂｅｘ
（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ ＰＦＳ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
（登録商標））；ドキソルビシンリポソーム（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））；プロピオン酸
ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ（
登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（Ｍａｓｔｅｒｏｎｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏ
ｎ（登録商標））；エクリズマブ注射用（ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）
（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））；エリオットＢ（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ Ｂ）溶液（Ｅｌ
ｌｉｏｔｔ’ｓ Ｂ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（登録商標））；エルトロンボパッグ（ｅｌｔｒ
ｏｍｂｏｐａｇ）（Ｐｒｏｍａｃｔａ（登録商標））；エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃ
ｉｎ）（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））；エポエチン（Ｅｐｏｅｔｉｎ）アルファ（ｅｐ
ｏｇｅｎ（登録商標））；エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｒｃｅｖａ（登録
商標））；エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））
；エチニルエストラジオール；リン酸エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）（Ｅｔｏｐｏｐ
ｈｏｓ（登録商標））；エトポシド，ＶＰ−１６（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））；エベ
ロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）錠剤（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））；エキセメス
タン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））；フェルモキシトール
（ｆｅｒｕｍｏｘｙｔｏｌ）（Ｆｅｒａｈｅｍｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；
フィルグラスチム（Ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標））；フロク
スウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）（動脈内）（ＦＵＤＲ（登録商標））；フルダラ
ビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））；フルオロウラシル（
ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ），５−ＦＵ（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標））；フルベストラ
ント（ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））；ゲフィニチブ（ｇ
ｅｆｉｔｉｎｉｂ）（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））；ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａ
ｍｙｃｉｎ）；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））
；ゲムツズマブ・オゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）（Ｍ
ｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））；酢酸ゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）（Ｚｏｌａｄｅ
ｘ Ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））；酢酸ヒストレリ
ン（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ）（Ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；ヒド
ロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））；イブリツモマブ・チウキセタン（Ｉｂｒｉｔ
ｕｍｏｍａｂ Ｔｉｕｘｅｔａｎ）（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；イダルビシン（ｉ
ｄａｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））；イホスファミド（ｉｆｏｓｆ
ａｍｉｄｅ）（ＩＦＥＸ（登録商標））；メシル酸イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）（Ｇ
ｌｅｅｖｅｃ（登録商標））；インターフェロンアルファ２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ Ａ（登
録商標））；インターフェロンアルファ２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（登録商標））；イオベ
ングアン（ｉｏｂｅｎｇｕａｎｅ）Ｉ １２３注射用（ＡｄｒｅＶｉｅｗ（登録商標））
；イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））；イキサ
ベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ）（Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標））；イアパチニブ（
Ｉａｐａｔｉｎｉｂ）錠剤（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））；レナリドミド（ｌｅｎａｌｉ
ｄｏｍｉｄｅ）（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））；レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ
）（Ｆｅｍａｒａ（登録商標））；ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）（Ｗｅｌｌｃ
ｏｖｏｒｉｎ（登録商標），Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標））；酢酸ロイプロイド（
Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）（Ｅｌｉｇａｒｄ（登録商標））；レバミソール（ｌｅｖａｍｉ
ｓｏｌｅ）（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ（登録商標））；ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ），
ＣＣＮＵ（ＣｅｅＢＵ（登録商標））；メクロレタミン（ｍｅｃｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ
），ナイトロジェンマスタード（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））；酢酸メゲストロー
ル（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ）（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標））；メルファラン（ｍｅｌｐｈａ
ｌａｎ），Ｌ−ＰＡＭ（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；メルカプトプリン，６−ＭＰ（
Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））；メスナ（ｍｅｓｎａ）（Ｍｅｓｎｅｘ（登録商標
））；メスナ（Ｍｅｓｎｅｘ ｔａｂｓ（登録商標））；メトトレキセート（ｍｅｔｈｏ
ｔｒｅｘａｔｅ）（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ（登録商標））；メトクスサレン（ｍｅｔ
ｈｏｘｓａｌｅｎ）（Ｕｖａｄｅｘ（登録商標））；８−メトキシソラレン；マイトマイ
シン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）Ｃ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ミトタン（ｍｉｔ
ｏｔａｎｅ）（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ（登録商標））；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒ
ｏｎｅ）（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；ミトラマイシン（ｍｉｔｒａｍｙｃｉ
ｎ）；フェンプロピオン酸ナンドロロン（ｎａｎｄｒｏｌｏｎｅ）（Ｄｕｒａｂｏｌｉｎ
−５０（登録商標））；ネララビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）（Ａｒｒａｎｏｎ（登録商
標））；ニロチニブ（ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））；ノフェツ
モマブ（Ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）（Ｖｅｒｌｕｍａ（登録商標））；オファツムマブ（
ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））；オプレルベキン（Ｏｐｒｅｌ
ｖｅｋｉｎ）（Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標））；オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔ
ｉｎ）（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；パクリタクセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）（
Ｐａｘｅｎｅ（登録商標））；パクリタクセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））；パクリタク
セルタンパク質結合粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））；パリフェルミン（ｐａｌｉ
ｆｅｒｍｉｎ）（Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（登録商標））；パミドロナート（ｐａｍｉｄｒｏ
ｎａｔｅ）（Ａｒｅｄｉａ（登録商標））；パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）（
Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））；パゾパニブ（ｐａｚｏｐａｎｉｂ）錠剤（Ｖｏｔｒｉ
ｅｎｔｔｍ（登録商標））；ペガデマーゼ（ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ）（Ａｄａｇｅｎ（Ｐ
ｅｇａｄｅｍａｓｅ Ｂｏｖｉｎｅ）（登録商標））；ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐ
ａｒｇａｓｅ）（Ｏｎｃａｓｐａｒ（登録商標））；ペグフィルグラスチム（Ｐｅｇｆｉ
ｌｇｒａｓｔｉｍ）（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒ
ｅｘｅｄ）二ナトリウム（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））；ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓ
ｔａｔｉｎ）（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標））；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）（
Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））；プレリキサホル（ｐｌｅｒｉｘａｆｏｒ）（Ｍｏｚｏｂ
ｉｌ（登録商標））；プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ），ミトラマイシン（ｍｉ
ｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ（登録商標））；ポルフィメル（ｐｏｒｆｉ
ｍｅｒ）ナトリウム（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ（登録商標））；プララトレキサート（ｐｒａ
ｌ
ａｔｒｅｘａｔｅ）注射用（Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））；プロカルバジン（ｐｒｏｃ
ａｒｂａｚｉｎｅ）（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；キナクリン（ｑｕｉｎａｃｒｉ
ｎｅ）（Ａｔａｂｒｉｎｅ（登録商標））；ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）；ラス
ブリカーゼ（Ｒａｓｂｕｒｉｃａｓｅ）（Ｅｌｉｔｅｋ（登録商標））；塩酸ラロキシフ
ェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）（Ｅｖｉｓｔａ（登録商標））；リツキシマブ（Ｒｉｔｕ
ｘｉｍａｂ）（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））；ロミデプシン（ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）
（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））；ロミプロスチム（ｒｏｍｉｐｌｏｓｔｉｍ）（Ｎｐｌ
ａｔｅ（登録商標））；サルグラモスチム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｌｅｕｋｉｎ
ｅ（登録商標））；サルグラモスチム（Ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｐｒｏｋｉｎｅ（
登録商標））；ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））；
ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；マレ
イン酸スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））；タルク（Ｓｃ
ｌｅｒｏｓｏｌ（登録商標））；タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）（Ｎｏｌｖａｄ
ｅｘ（登録商標））；テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）（Ｔｅｍｏｄａｒ（登
録商標））；テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標
））；テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ），ＶＭ−２６（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））；
テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）（Ｔｅｓｌａｃ（登録商標））；チオグア
ニン，６−ＴＧ（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ（登録商標））；チオプリン；チオテパ（Ｔｈ
ｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（
登録商標））；トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）
）；トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；トシツモ
マブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；トランス−レチノイン酸
；トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））；ト
レチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ），ＡＴＲＡ（Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標））；トリ
エチレンメラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）；ウラシルマスタード（
Ｕｒａｃｉｌ Ｍｕｓｔａｒｄ）（Ｕｒａｃｉｌ Ｍｕｓｔａｒｄ Ｃａｐｓｕｌｅｓ（
登録商標））；バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｖａｌｓｔａｒ（登録商標））
；ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））；ビンクリ
スチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））；ビノレルビン（ｖ
ｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））；ボリノスタット（ｖｏｒ
ｉｎｏｓｔａｔ）（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））；ウォルトマンニン（ｗｏｒｔｍａｎ
ｎｉｎ）；およびゾレドロナート（ｚｏｌｅｄｒｏｎａｔｅ）（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標
））。
前記の組合せは医薬製剤の形態での使用のために簡便に提供されることが可能であり、
したがって、前記の組合せと医薬上許容される希釈剤または担体とを含む医薬組成物は本
発明のもう１つの態様である。
そのような組合せの個々の成分は、別々の又は組合された医薬製剤中で、連続的または
同時に投与されうる。
したがって、記載されている分子は、例えば他のＭＡＰＫ１インヒビターのような当技
術分野で公知のとおりの、対象または生物における本明細書に記載されている疾患、障害
、状態および形質を予防または治療するための１以上の公知の化合物、治療または処置と
組合せて使用されうるであろう。
３．治療用途
ＩＤＨ１関連遺伝子発現およびタンパク質活性に関する研究における現在の一連の知見
は、治療用途のためのそれらの発現および／または活性を調節しうる方法の必要性を示し
ている。
したがって、本発明の１つの態様は、ＩＤＨ１関連発現の作用により又は作用の喪失に
より引き起こされる状態に罹患したヒト（これに限定されるものではない）を含む対象の
治療方法を含み、該方法は、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子の有効量を該対象に投与するこ
とを含む。この態様の１つの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、配列番号７、配列
番号４４６、配列番号１１、配列番号４５０、配列番号１２、配列番号４５１、配列番号
１３、配列番号４５２、配列番号３８、配列番号４７７、配列番号３９、配列番号４７８
、配列番号４０、配列番号４７９、配列番号４１、配列番号４８０、配列番号５９、配列
番号４９８、配列番号６３もしくは配列番号５０２または式（Ａ）の少なくとも１５ヌク
レオチドを含む。もう１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１
５個の連続的ヌクレオチドである。
この態様のもう１つの実施形態においては、該状態は癌である又は癌により引き起こさ
れる。したがって、ある実施形態においては、本発明の分子および組成物は、癌細胞およ
び癌の転移の予防またはモジュレーションを含む癌の治療方法において有用である。本発
明のこの態様により治療可能な癌には、以下のものが含まれうる：膀胱癌、膀胱移行上皮
癌、尿路上皮癌、脳癌、神経膠腫、星状細胞腫、乳癌、乳癌腫、子宮頸癌、結腸直腸癌、
直腸癌、結腸直腸癌腫、結腸癌、遺伝非ポリープ症結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、食
道扁平上皮癌、眼黒色腫、ブドウ膜黒色腫、眼内黒色腫、原発性眼内リンパ腫、腎細胞癌
、明細胞腎細胞癌、乳頭腎細胞癌、白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性脊髄性
白血病（ＡＭＬ）、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、
肝癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、胆管癌、肺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（
ＮＳＣＬＣ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、前駆Ｔリンパ芽
球性リンパ腫/白血病、多発性骨髄腫、卵巣癌、膵癌、膵管腺癌、前立腺癌、前立腺腺癌
、横紋筋肉腫、胎児性横紋筋肉腫、皮膚癌、黒色腫、悪性黒色腫、皮膚黒色腫、粘膜黒色
腫、小腸癌、胃癌、胃癌腫、精巣癌、精巣精上皮腫、精巣非精上皮腫、甲状腺癌、乳頭状
甲状腺癌および乳頭状腺癌。
本発明のｓｉＮＡ分子はエクスビボ用途における試薬としても使用される。例えば、ｓ
ｉＮＡ試薬は、治療効果を得るために対象内に移植される組織または細胞内に導入される
。該細胞および／または組織は、外植片を後に受ける生物または対象に由来することが可
能であり、あるいは移植前の別の生物または対象に由来することが可能である。細胞また
は組織が、インビボで移植された場合に、所望の表現型を得る又は機能を果たしうるよう
に、該ｓｉＮＡ分子は、該細胞または組織における１以上の遺伝子の発現をモジュレーシ
ョンするために使用されうる。１つの実施形態においては、患者からの或るＩＤＨ１関連
標的細胞を外植する。これらの摘出細胞を、該細胞内の特定のヌクレオチド配列を標的化
するＩＤＨ１関連ｓｉＮＡと、これらの細胞による該ｓｉＮＡの取り込みに適した条件下
で接触させる（例えば、カチオン性脂質、リポソームなどのような運搬試薬を使用する、
または細胞内へのｓｉＮＡの運搬を促進するエレクトロポレーションのような技術を用い
る）。ついで該細胞を同じ患者または他の患者に再導入する。
Ｇ．投与
組成物または製剤は種々の方法で投与されうる。ある実施形態においては、該ｓｉＮＡ
分子の投与は、単独療法としての単独の、または本明細書に記載されている若しくは当技
術分野で公知の追加的な療法と組合された局所投与または全身投与である。
本発明は、肺運搬のような、肺細胞および組織のような関連組織または細胞への局所投
与により、対象または生物を本発明のｓｉＮＡ分子と接触させることに関する。局所投与
は、例えば、吸入、噴霧療法、カテーテル法、移植、直接注射、皮膚／経皮適用、パッチ
、ステント化、点耳／点眼、または関連組織への門脈投与、または当技術分野で一般に公
知であるいずれかの他の局所投与技術、方法もしくは処置を含みうる。
更に他の実施形態においては、本発明は、対象または生物における癌組織または細胞の
ような関連組織または細胞への全身投与により（例えば、ｓｉＮＡの静脈内または皮下投
与により）、対象または生物を本発明のｓｉＮＡ分子と接触させることに関する。全身投
与は、例えば、当技術分野で一般に公知である肺投与（吸入、噴霧療法など）、静脈内投
与、皮下投与、筋肉内投与、カテーテル法、鼻咽頭投与、経皮投与または経口／胃腸投与
を含みうる。
１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、当
技術分野で一般に公知のとおり、肝臓に投与される（Ｗｅｎら，２００４，Ｗｏｒｌｄ
Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，１０，２４４−９；Ｍｕｒａｏら，２００２，Ｐｈａ
ｒｍ Ｒｅｓ．，１９，１８０８−１４；Ｌｉｕら，２００３，ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，
１０，１８０−７；Ｈｏｎｇら，２００３，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，５４
，５１−８；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，２００４，Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ．，１４９，１６１
１−７；およびＭａｔｓｕｎｏら，２００３，ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，１０，１５５９−
６６）。
１つの実施形態においては、本発明は、単球およびリンパ球を含む造血細胞へ本発明の
ｓｉＮＡ分子を運搬するための方法の使用に関する。これらの方法はＨａｒｔｍａｎｎら
，１９９８，Ｊ．Ｐｈａｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２８５（２），９２０−９２
８；Ｋｒｏｎｅｎｗｅｔｔら，１９９８，Ｂｌｏｏｄ，９１（３），８５２−８６２；Ｆ
ｉｌｉｏｎおよびＰｈｉｌｌｉｐｓ，１９９７，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃ
ｔａ．，１３２９（２），３４５−３５６；ＭａおよびＷｅｉ，１９９６，Ｌｅｕｋ．Ｒ
ｅｓ．，２０（１１／１２），９２５−９３０；ならびにＢｏｎｇａｒｔｚら，１９９４
，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２（２２），４６８１−８に詳細
に記載されている。
１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、当
技術分野で一般に公知のとおり、皮膚または小胞に直接的または局所的（例えば、局部的
）に投与される（例えば、Ｂｒａｎｄ，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅ
ｒ．，３，２４４−８；Ｒｅｇｎｉｅｒら，１９９８，Ｊ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔ，５
，２７５−８９；Ｋａｎｉｋｋａｎｎａｎ，２００２，ＢｉｏＤｒｕｇｓ，１６，３３９
−４７；Ｗｒａｉｇｈｔら，２００１，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，９０，８９−
１０４；ならびにＰｒｅａｔおよびＤｕｊａｒｄｉｎ，２００１，ＳＴＰ Ｐｈａｒｍａ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１１，５７−６８を参照されたい）。１つの実施形態においては、本
発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、所望により追加的な物質（例えば、
イソプロピルミリスタートおよびカルボマー９８０）を含む、アルコール（例えば、エタ
ノールまたはイソプロパノール）、水を含むヒドロアルコール性ゲル製剤を使用して直接
的または局所的に投与される。他の実施形態においては、該ｓｉＮＡは、鼻腔に局所投与
されるように製剤化される。局所製剤は罹患領域への１日当たり１以上の適用により投与
されることが可能であり、皮膚領域を覆う密封包帯が有利に使用されうる。連続的または
持続的運搬は接着性貯留系により達成されうる。
１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、例えば特定の器官または区画（
例えば、眼、眼の背部、心臓、肝臓、腎臓、膀胱、前立腺、腫瘍、ＣＮＳなど）へ、イオ
ントホレシスにより投与される。イオントホレシス運搬の非限定的な例は、例えば、ＷＯ
０３／０４３６８９およびＷＯ０３／０３０９８９（それらの全体を参照により本明細書
に組み入れることとする）に記載されている。
１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、本
明細書に記載されているとおり及び当技術分野で一般に公知のとおり、肺に投与される。
もう１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、
米国特許公開第２００６／００６２７５８号、第２００６／００１４２８９号および第２
００４／００７７５４０号に記載されているとおり、肺組織および細胞に投与される。
本発明の投与方法の非限定的な例には、経口、頬側、舌下、非経口（すなわち、関節内
、静脈内、腹腔内、皮下または筋肉内）、局所直腸投与または他の局所投与が含まれる。
１つの実施形態においては、本発明の組成物は通気および吸入により投与されうる。
幾つかの実施形態においては、該医薬組成物はボーラス注射により静脈内または腹腔内
に投与される（例えば、米国特許第５，２８６，６３４号を参照されたい）。脂質核酸粒
子は、疾患部位に直接注射により、または疾患部位から遠位の部位に注射により投与され
うる（例えば、Ｃｕｌｖｅｒ，ＨＵＭＡＮ ＧＥＮＥ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ｍａｒｙ Ａｎ
ｎ Ｌｉｅｂｅｒｔ，Ｉｎｃ．，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．ｐｐ．７０
−７１（１９９４）を参照されたい）。
治療用途の場合、本発明のｓｉＮＡ分子または医薬組成物の医薬上有効な用量が対象に
投与される。医薬上有効な用量は、疾患発生を予防、抑制する又は病態を治療する（症状
を或る程度、好ましくは、症状の全てを改善する）のに必要な用量である。当業者は、対
象のサイズおよび体重、疾患の進行または侵入の程度、対象の年齢、健康状態および性別
、投与経路ならびに投与が局所性であるか全身性であるかというような要因を考慮するこ
とにより、与えられた対象に投与されるべき本発明のｓｉＮＡの治療的に有効な用量を容
易に決定することが可能である。一般に、有効成分０．１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ
体重／日の量が、負荷電重合体の効力に応じて投与される。最適な投与スケジュールは患
者の体内の薬物蓄積の測定から算出されうる。本発明のｓｉＮＡ分子は単一用量または複
数用量で投与されうる。
本発明のｓｉＮＡ分子は、月１回、週１回、１日１回（ＱＤ）投与されることが可能で
あり、あるいは毎月、毎週または毎日の複数の用量（限定的なものではないが、例えば、
毎日２回（ＢＩＤ）、毎日３回（ＴＩＤ）、２週間に１回）に分割されることが可能であ
る。したがって、投与は単一または分割用量で達成されうる。当業者は、測定された滞留
時間および体液または組織内の薬物濃度に基づいて、投与のための反復率を容易に推定す
ることが可能である。
また、該投与は連続的（すなわち、毎日）または間欠的でありうる。例えば、本発明の
化合物の間欠的投与は１週間当たり１〜６日間の投与でありることが可能であり、あるい
はそれは周期的な投与（例えば、連続した２〜８週間の毎日の投与、ついで１週間までの
、投与無しの中止期間）を意味することが可能であり、あるいはそれは隔日の投与を意味
しうる。
本発明の組成物は、単独で又は他の適当な成分と組合されて、吸入（例えば、鼻腔内ま
たは気管内）により投与されるエアゾール製剤（すなわち、それは「噴霧化」されうる）
に製造されうる（Ｂｒｉｇｈａｍら，Ａｍ．Ｊ．Ｓｃｉ．，２９８：２７８（１９８９）
を参照されたい）。エアゾール製剤は、許容されうる加圧プロペラント、例えばジクロロ
ジフルオロメタン、プロパン、窒素などの中に配置されうる。
１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤は、肺運搬により投
与され、例えば、関連肺組織内への核酸分子の急速な局所取り込みをもたらす、吸入装置
またはネブライザーにより投与されるエアゾールまたは噴霧乾燥製剤の吸入により投与さ
れる。微粒化核酸組成物の呼吸可能な乾燥粒子を含有する固体粒状組成物は、乾燥または
凍結乾燥核酸組成物を粉砕し、ついで該微粒化組成物を例えば４００メッシュスクリーン
に通過させて大きな凝集物を破壊または分離除去することにより製造されうる。本発明の
ｓｉＮＡ組成物を含む固体粒状組成物は、所望により、エアゾールの形成を促進するよう
に働く分散剤、および他の治療用化合物を含有しうる。適当な分散剤はラクトースであり
、これは、いずれかの適当な比（例えば、１対１の重量比）で、核酸化合物と混合されう
る。
本発明のｓｉＮＡ分子または組成物を含む噴霧組成物は、例えば、適当な液化プロペラ
ントを使用して加圧式定量噴霧式吸入器のような加圧パックから運搬されるエアゾール剤
として、あるいは水性の溶液または懸濁液として製剤化されうる。１つの実施形態におい
ては、吸入に適した本発明のエアゾール組成物は懸濁液または溶液であることが可能であ
り、一般に、本発明のｓｉＮＡ分子と、適当なプロペラント、例えばフルオロカーボンも
しくは水素含有クロロフルオロカーボンまたはそれらの混合物、特にヒドロフルオロアル
カン、特に１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，１，２，３，３，３−ヘプ
タフルオロ−ｎ−プロパンまたはその混合物とを含有する。該エアゾール組成物は、所望
により、当技術分野でよく知られている追加的な製剤化賦形剤、例えば界面活性剤を含有
しうる。非限定的な例には、オレイン酸、レシチンまたはオリゴ乳酸または誘導体、例え
ばＷＯ９４／２１２２９およびＷＯ９８／３４５９６に記載されているもの、および共存
溶媒、例えばエタノールが含まれる。１つの実施形態においては、本発明の医薬エアゾー
ル製剤は、所望により界面活性剤および／または共存溶媒と組合されていてもよい、本発
明の化合物とフルオロカーボンもしくは水素含有クロロフルオロカーボンまたはそれらの
混合物をプロペラントとして含む。
本発明のエアゾール製剤は適当な緩衝剤の添加により緩衝化されうる。
エアゾール製剤は、所望により使用されうる追加的な添加剤、例えば保存剤（該製剤が
無菌に製造されていない場合）を含みうる。非限定的な例には、メチルヒドロキシベンゾ
アート、抗酸化剤、香味剤、揮発性油、緩衝剤および乳化剤ならびに他の製剤界面活性剤
が含まれる。１つの実施形態においては、分解を軽減し、より安全な本発明の生体適合性
非液体粒子懸濁組成物（例えば、ｓｉＮＡおよび／またはそのＬＮＰ製剤）を得るために
、フルオロカーボンまたはペルフルオロカーボン担体が使用される。もう１つの実施形態
においては、ネブライザーを含む装置は、静菌性であることにより適合装置における微生
物増殖の可能性を低減するフルオロ化合物を含む本発明の組成物（例えば、ｓｉＮＡおよ
び／またはそのＬＮＰ製剤）を運搬する。
吸入器またはインサフレーターにおいて使用される、例えばゼラチンの本発明の組成物
を含むカプセルおよびカートリッジは、本発明の化合物と適当な散剤基剤、例えばラクト
ースまたはデンプンとの吸入用粉末混合物を含有するように製剤化されうる。１つの実施
形態においては、各カプセルまたはカートリッジは本発明のｓｉＮＡ分子と１以上の賦形
剤とを含有する。もう１つの実施形態においては、本発明の化合物は、例えばラクトース
のような賦形剤を伴わないで提供されうる。
本発明のエアゾール組成物は、呼吸可能なサイズの粒子、例えば、吸入に際して鼻、口
および喉頭を通過するのに並びに気管支および肺胞を通過するのに十分に小さいサイズの
粒子を含む製剤として、呼吸系内に投与されうる。一般に、呼吸可能な粒子は約０．５〜
１０ミクロンの範囲のサイズである。１つの実施形態においては、該粒子範囲は１〜５ミ
クロンでありうる。もう１つの実施形態においては、該粒子範囲は２〜３ミクロンであり
うる。該エアゾール剤中に含まれる呼吸可能でないサイズの粒子は喉において析出し嚥下
される傾向にあり、したがって、該エアゾール剤中の呼吸可能でない粒子の量は最小化さ
れる。鼻腔内投与の場合、鼻腔内の保持を保証するためには、１０〜５００μｍの範囲の
粒子サイズが好ましい。
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ組成物は、加圧エアゾール製剤、加圧
ポンプもしくは噴霧化により鼻に投与される水性製剤により、例えば鼻炎の治療のために
、鼻に局所的に投与される。適当な製剤は、この目的のための希釈剤または担体として水
を含有する。ある実施形態においては、肺または鼻への本発明の組成物の投与のための水
性製剤には、通常の賦形剤、例えば緩衝剤、等張性改変剤などが配合されうる。
本発明のｓｉＮＡ分子は、前記のとおり、粒子および／またはエアゾール剤として製剤
化され、運搬され、当業者に公知の種々のエアゾール化装置から投薬されうる。
本発明のｓｉＮＡ分子または製剤を含む液体または非液体粒子のエアゾール剤は、いず
れかの適当な手段により、例えばネブライザー（例えば、米国特許第４，５０１，７２９
号を参照されたい）、例えば超音波またはエアジェットネブライザーを含む装置を使用し
て製造されうる。
本発明のｓｉＮＡ分子または製剤と界面活性剤とを含む固体粒子エアゾール剤は、いず
れかの固体粒子エアゾール製造装置を使用して製造されうる。本発明のｓｉＮＡ分子と共
に使用される１つのタイプの固体粒子エアゾール製造装置はインサフレーターである。第
２のタイプの例示的エアゾール製造装置は加圧式定量噴霧式吸入器（「ＭＤＩ」）を含む
。本明細書に教示されているｓｉＮＡ分子または製剤を含有するＭＤＩは当技術分野の方
法により製造されうる（例えば、前記ＢｙｒｏｎおよびＷＯ９６／３２０９９を参照され
たい）。
該ｓｉＮＡ分子は、ＷＯ０５／０４４３５４に記載され例示されているもののような流
体ディスペンサーからの運搬のための流体製剤としても製剤化されうる。
本発明の或る実施形態においては、ネブライザー装置は、意識のある自発呼吸患者に対
する、または全年齢の調節呼吸患者に対する適用において使用される。該ネブライザー装
置は肺への標的化局所的および全身的薬物運搬に使用されうる。１つの実施形態において
は、本発明のｓｉＮＡ分子または製剤を局所的に肺または肺組織に運搬するために、ネブ
ライザーを含む装置が使用される。もう１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分
子または製剤を全身的に運搬するために、ネブライザーを含む装置が使用される。
Ｈ．本発明のｓｉＮＡ分子の他の適用／用途
本発明のｓｉＮＡ分子は診断用途、研究用途および／または医薬の製造にも使用されう
る。
１つの態様においては、本発明は、対象における疾患、形質または状態の診断に適した
条件下で本発明の組成物を対象に投与することを含む、対象における疾患、形質または状
態を診断するための方法に関する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、医薬の製造における使用のための、本発明
の二本鎖核酸の使用を含む。１つの実施形態においては、該医薬は、ＩＤＨ１関連遺伝子
またはタンパク質の作用または作用の喪失により引き起こされる状態の治療における使用
のためのものである。１つの実施形態においては、該医薬は、中枢神経系の癌およびＡＭ
Ｌ（これらに限定されるものではない）を含む細胞増殖関連障害の治療用の使用のための
ものである。
図１は、ＲＮＡｉに関与する標的ＲＮＡ分解の非限定的な提示メカニズムの表示を示す。外来性一本鎖ＲＮＡ、例えばウイルス、トランスポゾンまたは他の外因性ＲＮＡからＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲＰ）により産生された二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）はＤＩＣＥＲ酵素を活性化し、そしてこれはｓｉＮＡ二本鎖を産生する。あるいは、合成ｓｉＮＡまたは発現されたｓｉＮＡが適当な手段により直接的に細胞内に導入されうる。活性ｓｉＮＡ複合体は標的ＲＮＡを認識して、ＲＩＳＣエンドヌクレアーゼ複合体による標的ＲＮＡの分解またはＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲＰ）による追加的なＲＮＡの合成を引き起こし、これはＤＩＣＥＲを活性化し、追加的なｓｉＮＡ分子を産生し、それによりＲＮＡｉ応答を増幅しうる。 図２は、代表的ｓｉＮＡ二本鎖の一般化構造を用いて、本発明の化学修飾ｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。この図に示されている具体的な修飾は、単独で、または本発明のいずれかのｓｉＮＡ分子に関してここに記載されている他の修飾および特徴に加えて該図の他の修飾と組合せて用いられうる。この図において、Ｎはいずれかのヌクレオチド、または所望により、本明細書に記載されている非ヌクレオチドを表す。Ｂ−ＮＸ３−（Ｎ）Ｘ２−Ｂ−３’を有する上側の鎖はｓｉＮＡのセンス（またはパッセンジャー）鎖であり、Ｂ（Ｎ）Ｘ１−ＮＸ４−［Ｎ３］−［Ｎ２］−［Ｎ１］−５’を有する下側の鎖はｓｉＮＡのアンチセンス（またはガイド）鎖である。センス鎖の内部のヌクレオチド（または場合によっては非ヌクレオチド）はＮＸ３と称され、アンチセンス鎖の内部のヌクレオチド（または場合によっては非ヌクレオチド）はＮＸ４と称される。該内部のヌクレオチド（または場合によっては非ヌクレオチド）は一般に２つの鎖の間で塩基対形成しているが、幾つかの実施形態においては、塩基対形成を欠く（例えば、ミスマッチまたはギャップを有する）こともある。突出領域のヌクレオチド（または場合によっては非ヌクレオチド）は括弧（Ｎ）により示されている。アンチセンス鎖の５’末端部分のヌクレオチドは［Ｎ］（［Ｎ１］、［Ｎ２］、［Ｎ３］）として示されている。末端ギャップは同じ鎖の５’および／または３’末端に存在してもよく、更に、アンチセンス鎖の３’末端に存在してもよい。一般に、各鎖は、独立して、約１５〜約３０ヌクレオチド長の範囲でありうるが、いずれかの突出ヌクレオチドの存在によって変動しうる。ある実施形態においては、Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数であり、Ｘ３は１５〜３０の整数であり、Ｘ４は１２〜２７の整数である。ｓｉＮＡ構築物のセンスおよびアンチセンス鎖のヌクレオチドに関して、種々の修飾が示される。［Ｎ３］、［Ｎ２］および［Ｎ１］ヌクレオチドは２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロまたは２’−メトキシ修飾で化学修飾され、リボースヌクレオチドを含みうる。（Ｎ）突出ヌクレオチドの位置は、本明細書に記載されているとおりに化学修飾されることが可能であり（例えば、２’−Ｏ−メチル、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−デオキシ、ＬＮＡ、汎用塩基など）、対応標的核酸配列から誘導されること又は誘導されないことが可能である。この図に示されている構築物は、本明細書に記載されているホスホロチオアート結合をも含みうる。例えば、ホスホロチオアート結合はいずれかのＮおよび／または（Ｎ）位置の間に存在しうる。そのようなホスホロチオアートの組込みは、プリン「Ｒ」およびピリミジン「Ｙ」位置の間で、または一般にピリミジン結合の安定化のために用いられうる。更に、この図には示されていないが、この図に示されている構築物は、所望により、センス鎖の５’末端から９番目の位置に、またはガイド鎖の５’末端から１１個のヌクレオチド位置を数えることによりガイド鎖の５’末端に基づく１１番目の位置にリボヌクレオチドを含みうる。同様に、該アンチセンス鎖は、５’末端から１４番目の位置にリボヌクレオチドまたは２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドを含むことが可能であり、あるいは、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド（例えば、２’−Ｏ−メチルプリン）がこの位置に存在しないように、選択または設計されうる。更に、この図に示されていないが、アンチセンス鎖の５’末端位置は、本明細書に記載されているとおり、末端ホスファート基を含みうる。 図３は、図２に示されている代表的ｓｉＮＡ二本鎖に適用される修飾の或る組合せの非限定的な例を示す。代表的構造の下に示されている表は、（Ｎ）Ｘ１、（Ｎ）Ｘ２、ＮＸ３、ＮＸ４および［Ｎ３］−［Ｎ２］−［Ｎ１］ヌクレオチド（および場合によっては非ヌクレオチド）の位置の特定の組合せを示す。例えば、５個以上（例えば、５、６、７、８、９または１０個以上）のＮＸ３および５個以上（５、６、７、８、９または１０個以上）のＮＸ４ピリミジン「Ｙ」およびプリン「Ｒ」ヌクレオチドの組合せが特定されており、それらのそれぞれは、独立して、随意的ホスホロチオアート置換に加えて、該図に示されている特定の（Ｎ）Ｘ１および／または（Ｎ）Ｘ２の置換を有しうる。５’末端アンチセンス鎖［Ｎ３］−［Ｎ２］−［Ｎ１］ヌクレオチドは２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロまたは２’−メトキシ修飾で修飾され、あるいは、示されているとおりのリボヌクレオチドである。 図４Ａ〜Ｃは本発明の種々のｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。図２および３に示されている代表的構造の基準は、図４Ａ〜Ｃに示されている構造のいずれにも適用されうる。 図４Ａに示されている例示物（構築物１、２および３）は１９個の代表的塩基対を有するが、本発明の種々の実施形態は、本明細書に記載されている任意の数の塩基対を含む。直線で挟まれた領域は、例えば、約１、２、３または４ヌクレオチド長、好ましくは約２ヌクレオチドを含むヌクレオチド突出を表す。構築物１および２は、独立して、ＲＮＡｉ活性のために使用されうる。構築物２はポリヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカー（これは、所望により、生分解性リンカーとして設計されうる）を含みうる。１つの実施形態においては、構築物２に示されているループ構造は、インビボおよび／またはインビトロで構築物１の形成をもたらす生分解性リンカーを含みうる。もう１つの実施形態においては、構築物３は、同じ原理で構築物２を得るために使用されることが可能であり、この場合、インビボおよび／またはインビトロで活性ｓｉＮＡ構築物２を得るためにリンカーが使用され、所望により、インビボおよび／またはインビトロで活性ｓｉＮＡ構築物１を得るために別の生分解性リンカーが使用されうる。そのようなものとして、インビボまたはインビトロおよび／またはインビトロでの使用のためのｓｉＮＡ構築物の設計に基づいて、ｓｉＮＡ構築物の安定性および／または活性がモジュレーションされうる。 図４Ａ〜Ｃは本発明の種々のｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。図２および３に示されている代表的構造の基準は、図４Ａ〜Ｃに示されている構造のいずれにも適用されうる。 図４Ｂに示されている例は、部分的相補性により生じる突出、バルジ、ループおよびステムループを含みうる例えばマイクロＲＮＡまたはｓｉＲＮＡのような本発明の二本鎖核酸分子の種々の変異体を表す。バルジ、ループおよびステムループは、本発明の二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖における約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上のヌクレオチドのミスマッチまたはバルジのようないずれかの度合の部分的相補性により生じうる。 図４Ａ〜Ｃは本発明の種々のｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。図２および３に示されている代表的構造の基準は、図４Ａ〜Ｃに示されている構造のいずれにも適用されうる。 図４Ｃにおける例は、ジヌクレオチド３’突出を有する２つの２１ヌクレオチド配列の１９塩基対の二重らせんを含む本発明のモデル二本鎖核酸分子を表す。最上部の鎖（１）はセンス鎖（パッセンジャー鎖）を表し、中央の鎖（２）はアンチセンス（ガイド鎖）を表し、下側の鎖（３）は標的ポリヌクレオチド配列を表す。ジヌクレオチド突出（ＮＮ）は、標的ポリヌクレオチドに由来する配列を含みうる。例えば、ガイド鎖内の３’−（ＮＮ）配列は標的ポリヌクレオチドの５’−［ＮＮ］配列に相補的でありうる。また、パッセンジャー鎖の５’−（ＮＮ）配列は、標的ポリヌクレオチド配列の５’−［ＮＮ］配列と同じ配列を含みうる。他の実施形態においては、例えば、ガイド鎖内の３’−（ＮＮ）配列が標的ポリヌクレオチドの５’−［ＮＮ］配列に相補的でなく、パッセンジャー鎖の５’−（ＮＮ）配列が、標的ポリヌクレオチド配列の５’−［ＮＮ］配列と異なる配列を含みうる場合、突出（ＮＮ）は標的ポリヌクレオチド配列に由来しない。追加的な実施形態においては、いずれかの（ＮＮ）ヌクレオチドが、例えば２’−Ｏ−メチル、２’−デオキシ−２−フルオロおよび／または本明細書における他の修飾として化学修飾されている。更に、該パッセンジャー鎖は該パッセンジャー鎖のリボヌクレオチド位置Ｎ（斜字）を含みうる。示されている代表的な１９塩基対の２１マー二重らせんの場合、位置Ｎ（斜字）はパッセンジャー鎖の５’末端から９ヌクレオチドでありうる。しかし、異なる長さの二重らせんにおいては、位置Ｎ（斜字）は、ガイド鎖の５’末端から１１のヌクレオチド位置を数え、パッセンジャー鎖における対応塩基対形成ヌクレオチドを選ぶことにより、ガイド鎖の５’末端に基づいて決定される。Ａｇｏ２による切断は、矢印により示されているとおり、１０位と１１位との間で生じる。追加的実施形態においては、ガイド鎖の５’末端から１０および１１のヌクレオチド位置を数え、パッセンジャー鎖における対応塩基対形成ヌクレオチドを選ぶことにより、ガイド鎖の５’末端に基づいて１０位および１１位の２つのリボヌクレオチドが存在する。アンチセンス鎖ヌクレオチドＮはリボヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドであることも可能であり、ガイド鎖の５’末端から１４位に位置する。該修飾は例えば２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾でありうるが、好ましくは、２’−Ｏ−アルキル修飾ではない。該アンチセンス鎖のＮ３、Ｎ２およびＮ１位は修飾ヌクレオチドを含む。 図５は、例えば、（１）［３−３’］−逆方向デオキシリボース、（２）デオキシリボヌクレオチド、（３）［５’−３’］−３’−デオキシリボヌクレオチド、（４）［５’−３’］−リボヌクレオチド、（５）［５’−３’］−３’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、（６）３’−グリセリル、（７）［３’−５’］−３’−デオキシリボヌクレオチド、（８）［３’−３’］−デオキシリボヌクレオチド、（９）［５’−２’］−デオキシリボヌクレオチド、および（１０）［５’−３’］−ジデオキシリボヌクレオチド（Ｘ＝Ｏの場合）を含む、本発明のｓｉＮＡ配列の５’および／または３’末端を安定化するために用いられうる種々の安定化化学法（１〜１０）の非限定的な例を示す。この図に示されている修飾および未修飾バックボーン化学法に加えて、これらの化学法は、本明細書に記載されている種々の糖および塩基ヌクレオチド修飾と組合されうる。 図６は、直鎖状および二重らせん構築物ならびにそれらの非対称（不斉）誘導体を含む、本発明のリン酸化ｓｉＮＡ分子の非限定的な例を示す。 図７は本発明の化学修飾末端ホスファート基の非限定的な例を示す。 図８は、本発明のコレステロール結合ｓｉＮＡ分子を合成するために使用されうるコレステロール結合ホスホラミダイトの非限定的な例を示す。ｓｉＮＡ分子のセンス鎖の５’末端に連結されたコレステロール部分を有する一例が示されている。 図９は、核酸鎖に連結された５’および３’逆方向非塩基キャップの実施形態を示す。 図１０はＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＭヒト神経膠腫細胞における優先的なＩＤＨ１ Ｒ１３２Ｈ特異的ＲＮＡｉノックダウンを示す。２０ｎＭ ｓｉＮＡでのトランスフェクションの７２時間後にサンプルを調製した。トランスフェクトされた個々のｓｉＮＡはｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号（例えば、Ｒ−００８３６４６００−０００Ｒ；表１ｃを参照されたい）により特定されている。 図１１Ａおよび１１Ｂは、ＩＤＨ１ Ｒ１３２のＲＮＡｉノックダウンによる、２−ヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）産生および細胞培養培地内への分泌の減少を示す（各柱状グラフはｎ＝４）。図ＡおよびＢは各実験の開始時の細胞プレーティング密度においてのみ異なる。ｓｉＮＡでのトランスフェクションの９６時間後にサンプルを調製した。トランスフェクトされた個々のｓｉＮＡはｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号（例えば、Ｒ−００８３６４６００−０００Ｒ；表１ｃを参照されたい）により特定されている。 図１１Ａおよび１１Ｂは、ＩＤＨ１ Ｒ１３２のＲＮＡｉノックダウンによる、２−ヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）産生および細胞培養培地内への分泌の減少を示す（各柱状グラフはｎ＝４）。図ＡおよびＢは各実験の開始時の細胞プレーティング密度においてのみ異なる。ｓｉＮＡでのトランスフェクションの９６時間後にサンプルを調製した。トランスフェクトされた個々のｓｉＮＡはｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号（例えば、Ｒ−００８３６４６００−０００Ｒ；表１ｃを参照されたい）により特定されている。 図１２はＩＤＨ１ ｓｉＮＡノックダウンとヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）分泌の減少との間の相関性を示す。 実施例 つぎに、以下の非限定的な実施例を用いて本発明を例示する。当業者は、実質的に同じ結果が得られるように変更または修飾されうる種々の非臨界的パラメーターを容易に認識するであろう。
実施例１：ＩＤＨ１ ｓｉＮＡの設計および合成
ＩＤＨ１ ｓｉＮＡの合成 − 一連のｓｉＮＡ分子を設計し、合成し、ＩＤＨ１遺伝
子発現に対する有効性に関して評価した。ＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０
３６４６３（ＷＯ２０１０／１３８７５５として公開されている）（これを、ｓｉＮＡを
設計し選択する目的のために、参照により本明細書に組み入れることとする）に記載され
ている方法により、あるＩＤＨ１配列を設計し、選択した。著作権のあるアルゴリズムを
使用して、他の配列を設計し、選択した。ヒトＩＤＨ１突然変異体を標的化するｓｉＮＡ
配列を、それぞれの突然変異体部位を含むように選択した。野生型ヒトＩＤＨ１遺伝子内
の標的配列を、主に、著作権のあるアルゴリズムにより決定された高い有効性のスコアを
与えるものから選択した。選択されたＩＤＨ１関連ｓｉＮＡの標的配列を表１ａ（標的配
列）に記載する。表１ａにおける標的配列に対応するｓｉＮＡ配列のセンスおよびアンチ
センス鎖を表１ｂに記載する。表１ａにおける標的配列の一部に対応する種々の化学修飾
ｓｉＮＡを表１ｃに記載する。
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982

標的配列の各オリゴヌクレオチドに関しては、該ｓｉＮＡの、２つの個々の相補的鎖を
、固相合成を用いて、別々に合成し、ついで逆相固相抽出（ＳＰＥ）により別々に精製し
た。該相補鎖を、二本鎖（二重らせん）を形成させるためにアニールさせ、所望の濃度お
よび選択されたバッファー中で運搬した。
簡潔に説明すると、当技術分野で一般に公知の方法を用いて（例えば、ＵＳ ２００９
０１７６７２５として公開された米国特許出願第１２／０６４，０１４号を参照されたい
）、自動固相合成装置においてホスホラミダイト化学を用いて、一本鎖オリゴヌクレオチ
ドを合成した。合成カラムに第１ヌクレオシド残基（天然または化学修飾体）で誘導体化
された固体支持体を充填した。５’−ヒドロキシルを遊離させる、酸不安定性５’−Ｏ−
ジメトキシトリチル基の脱トリチル化により、合成を開始させた。適当に保護されたホス
ホラミダイトおよび適当な活性化因子（アセトニトリル中）を該合成カラムに同時に運搬
して、該５’−ヒドロキシルへの該アミダイトのカップリングを生じさせた。ついで該カ
ラムを溶媒、例えばアセトニトリルで洗浄した。酸化溶液、例えばヨウ素溶液を該カラム
を通して送り出して、亜リン酸トリエステル結合Ｐ（ＩＩＩ）をそのホスホトリエステル
Ｐ（Ｖ）類似体へと酸化させた。２，６−ルチジンおよびＮ−メチルイミダゾールの存在
下、例えば無水酢酸のような試薬を使用して、未反応の５’−ヒドロキシル基をキャップ
化した。次のホスホラミダイトの取り込みのために、脱トリチル化工程により、伸長サイ
クルを再開させた。所望の配列が合成されるまで、このプロセスを繰返した。該合成は最
終的な５’末端保護基（トリチルまたは５’−Ｏ−ジメトキシトリチル）で終結した。
該合成の完了直後に、該固相および付随オリゴヌクレオチドをアルゴン圧または真空下
で乾燥させた。水性塩基を加え、該混合物を加熱して、スクシニル結合の切断、シアノエ
チルホスファート保護基の除去および環外アミン保護の脱保護を生じさせた。
リボヌクレオチドを含有しない一本鎖上で、以下のプロセスを行った。該固体支持体を
該水性塩基で処理した後、該混合物を濾過して、該脱保護粗製合成物から該固体支持体を
分離した。ついで該固体支持体を水で洗浄し、これを濾液と合わせた。得られた塩基性溶
液は５’末端位置上の５’−Ｏ−ジメトキシトリチル基の保持（トリチル−オン）を可能
にする。
リボヌクレオチドを含有する一本鎖の場合には、以下のプロセスを行った。該固体支持
体を水性塩基で処理した後、該混合物を濾過して、該脱保護粗製合成物から該固体支持体
を分離した。ついで該固体支持体をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で洗浄し、これを
濾液と合わせた。フッ化物試薬、例えばトリエチルアミントリヒドロフルオリドを該混合
物に加え、該溶液を加熱した。該反応を適当なバッファーでクエンチして、最終的な５’
末端位置に５’−Ｏ−ジメトキシトリチル基を含有する粗製一本鎖の溶液を得た。
クロマトグラフィー精製、例えばＳＰＥ ＲＰＣ精製を用いて、各粗製一本鎖のトリチ
ル−オン溶液を精製した。該トリチル基の疎水性は、非トリチル化トランケート化不完全
配列より強力な、所望の完全長オリゴの保持を可能にする。該不完全配列を適当な溶媒、
例えば低比率のアセトニトリルで、該樹脂から選択的に洗浄した。ついで、保持されたオ
リゴヌクレオチドをトリフルオロ酢酸でカラム上で脱トリチル化して、該酸不安定性トリ
チル基を除去した。残留酸を該カラムから洗浄し、塩交換を行い、該物質の最終的な脱塩
を開始させた。該完全長オリゴを水性−有機溶媒で精製形態で回収した。ついで該最終産
物を純度（ＨＰＬＣ）、同一性（Ｍａｌｄｉ−ＴＯＦ ＭＳ）および収率（ＵＶ Ａ２６
０）に関して分析した。該オリゴを凍結乾燥または真空凝縮により乾燥させた。
該産物の分析に基づいて、アニールさせるために、該乾燥オリゴを適当なバッファーに
溶解させ、ついで該センスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチド鎖の等モル量（理論吸
光係数を用いて計算した）を混合した。ついで該溶液を所望の最終濃度およびクロマトグ
ラフィー法による二重らせんの純度に関して分析した。該分析が過剰のいずれかの鎖を示
した場合には、二重らせん化が完了するまで、追加的な非過剰な鎖を滴下した。該標的産
物の純度が得られたことを分析が示した場合には、該物質をそのまま使用した。
表１ｃは、このプロトコールを用いて合成された、またはこのプロトコールもしくは当
技術分野で公知の他の方法を用いて合成されうる種々の化学修飾ｓｉＮＡを示す。表１ｃ
における各「ｓｉＮＡ二重らせんＩＤ」番号は、センスおよびアンチセンス鎖を有する単
一のｓｉＮＡ二重らせんを表し、ここで、該センスおよびアンチセンス鎖は、示されてい
るヌクレオチドおよびそれらのヌクレオチドの化学修飾形態から構成される。例えば、ｓ
ｉＮＡ二重らせんＩＤ番号Ｒ−００８３６４８０７−０００Ｗは、配列５’−ＡＵＵＧＧ
ＡＵＣＵＡＣＡＵＡＧＣＵＡＵ−３’（配列番号１）（この二重らせんＩＤ番号に関して
は表１ｃの第４列に示されている）を有するヒトＩＤＨ１の標的部位３４２に対する二本
鎖ｓｉＮＡ二重らせんである。二重らせんＲ−００８３６４８０７−０００Ｗに関しては
、２つのエントリーが存在し（該表の第２行および第３行を参照されたい）、表１ｃにお
いて挙げられているｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号のそれぞれに関しても同様である。これ
らのエントリーは該表の「修飾配列」の列（第５列）において異なる。この表に挙げられ
ている二重らせんのそれぞれに関して、該二重らせんの第１エントリーの「修飾配列」の
列において示されている配列はセンス鎖（例えば、二重らせんＲ−００８３６４８０７−
０００Ｗに関しては配列番号６８）を表し、該二重らせんの第２エントリーの「修飾配列
」の列において示されている配列はアンチセンス鎖（例えば、二重らせんＲ−００８３６
４８０７−０００Ｗに関しては配列番号６９）を表す。アンチセンス配列は、示されてい
る標的配列（センス配列）に相補的であるものとして容易に特定される。
Figure 2017212982
Figure 2017212982

Figure 2017212982

Figure 2017212982

Figure 2017212982

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ここで、
Ａ、Ｃ、ＧおよびＵ＝リボースＡ、Ｃ、ＧまたはＵ。
ａ、ｇ、ｃおよびｕ＝２’−デオキシ−２’−フルオロＡ、Ｇ、ＣまたはＵ。
Ａ、Ｕ、ＣおよびＧ＝２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｕ、ＣまたはＧ。
斜字体のＡ、Ｕ、ＣおよびＧ＝デオキシＡ、Ｕ、ＣまたはＧ。
Ｂ＝逆方向非塩基。
斜字体のＴ＝チミジン。
ｓ＝ホスホロチオアート結合。
工業的製造のための更なる合成工程 − アニーリング工程後に標的産物純度が得られ
たことを分析が示したら、濃縮および脱塩のために、該物質を接線流動濾過（ＴＦＦ）系
に移す。それは、該アニーリング工程前にこれを行うのとは対照的なものである。
限外濾過：適当な分子量カットオフ膜を含有するＴＦＦ系を使用して、該アリール化産
物溶液を濃縮する。濃縮後、濾液の伝導度が水のものとなるまで、該産物溶液を、Ｍｉｌ
ｌｉ−Ｑ水を使用するダイアフィルトレーションにより脱塩する。
凍結乾燥：該濃縮溶液をボトルに移し、急速冷凍し、凍結乾燥装置に接続する。ついで
該産物を粉末へと凍結乾燥する。該ボトルを該凍結乾燥装置から取り出し、そのまま使用
する。
実施例２：ＩＤＨ１遺伝子発現に対して活性なｓｉＮＡを特定するための初期スクリー
ニング
ルシフェラーゼレポータープラスミドの設計 − ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２ベク
ター（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃａｔ＃Ｃ８０２１）の修飾形態を使用して、野生型Ｒ１３２Ｈ
およびＲ１３２Ｃ突然変異ＩＤＨ１対立遺伝子に特異的なレポーター構築物を作製した。
該単点突然変異部位の周囲の２００塩基対の領域をＸｈｏＩおよびＮｏｔＩ制限部位間に
クローニングして、レニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼおよびＩＤＨ１インサート
（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）間の転写融合産物を得た。各融合転写産物において、該レニラ（
Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼオープンリーディングフレームはＩＤＨ１インサートの
上流に位置する。該融合転写産物のＩＤＨ１関連インサートを標的化するｓｉＮＡはレニ
ラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ発現のノックダウンを引き起こしうる。レニラ（Ｒ
ｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ発現のレベルは、レニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラー
ゼ活性の量を直接的に測定することにより決定されうる。該プラスミドは、ＩＤＨ１ ｓ
ｉＮＡにより影響されないホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現し、該プラスミドは、細胞
内にトランスフェクトされたプラスミドの量のばらつきを考慮するためにデータを正規化
するために使用されうる。
３つのレポーターのＩＤＨ１インサート配列は以下のとおりである。
野生型ＩＤＨ１−
ＣＧＧＴＣＴＴＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＴＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＡＡＴＡＴＣＣＣＣＣＧ
ＧＣＴＴＧＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＣＴＡＴＣＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＧＴ
ＣＡＴＧＣＴＴＡＴＧＧＧＧＡＴＣＡＡＴＡＣＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＡＴＴＴＴＧＴＴＧ
ＴＴＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＡＧＡＴＡＡＣＣＴＡＣＡＣＡＣＣＡＡＧ
ＴＧＡＣＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＡＴＡＣＣＴＧＧＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＴ
（配列番号５０７）；
ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ突然変異体−
ＣＧＧＴＣＴＴＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＴＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＡＡＴＡＴＣＣＣＣＣＧ
ＧＣＴＴＧＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＣＴＡＴＣＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＡＴ
ＣＡＴＧＣＴＴＡＴＧＧＧＧＡＴＣＡＡＴＡＣＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＡＴＴＴＴＧＴＴＧ
ＴＴＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＡＧＡＴＡＡＣＣＴＡＣＡＣＡＣＣＡＡＧ
ＴＧＡＣＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＡＴＡＣＣＴＧＧＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＴ
（配列番号５０８）；
およびＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ突然変異体−
ＣＧＧＴＣＴＴＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＴＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＡＡＴＡＴＣＣＣＣＣＧ
ＧＣＴＴＧＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＣＴＡＴＣＡＴＣＡＴＡＧＧＴＴＧＴ
ＣＡＴＧＣＴＴＡＴＧＧＧＧＡＴＣＡＡＴＡＣＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＡＴＴＴＴＧＴＴＧ
ＴＴＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＡＧＡＴＡＡＣＣＴＡＣＡＣＡＣＣＡＡＧ
ＴＧＡＣＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＡＴＡＣＣＴＧＧＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＴ
（配列番号５０９）。
野生型ＩＤＨ１−Ｒ１３２ＨおよびＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃの完全長ＤＮＡおよびタンパ
ク質配列を表２に記載する。
Figure 2017212982
細胞培養調製 − ヒトヘパトーマ細胞系ＨｅｐＧ２を変法イーグル培地内で増殖させ
た。マウスヘパトーマ細胞系Ｈｅｐａ１−６をダルベッコ変法イーグル培地内で増殖させ
た。全ての培地を１０％ ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬ ストレプトマイシン、１０
０Ｕ／ｍＬ ペニシリンおよび１％ 炭酸水素ナトリウムで補足した。
トランスフェクションおよびスクリーニング − 細胞を９６ウェル組織培養プレート
内で１０，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、３７℃で一晩インキュベート
した。翌日、レポータープラスミドおよびｓｉＮＡをリポフェクタミン（Ｌｉｐｏｆｅｃ
ｔａｍｉｎｅ（商標））２００試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でコトランスフェクトした
。初期スクリーニングでは、ｓｉＮＡおよびプラスミドの最終濃度は、それぞれ、１０ｎ
Ｍおよび６００ｎｇ／ｍｌであった。
１２点の用量反応曲線実験のために、一連のｓｉＮＡを４０ｎＭから４倍希釈し、一方
、プラスミド濃度は６００ｎｇ／ｍｌのままに一定に維持した。全てのトランスフェクシ
ョンは、複数の生物学的重複実験として設計した。トランスフェクションの１日後、該培
地を新鮮な培地と交換し、該細胞を３７℃で更に１日間インキュベートした。トランスフ
ェクションの２日後、該レポータープラスミドからのレニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェ
ラーゼおよびホタルルシフェラーゼ活性を、Ｄｕａｌ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼア
ッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃａｔ ＃ Ｅ２９４０）を該製造業者の説明に従い使用し
て測定した。
データ分析 − 異なるウェルにおける異なるトランスフェクション効率に関して正規
化するために、各ウェルのレニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ活性を、同じ細胞か
らのホタルルシフェラーゼ活性で割り算した。野生型および突然変異ＩＤＨ１ ｓｉＮＡ
により得られた正規化ルシフェラーゼ活性を更に、非標的化対照ｓｉＮＡにより得られた
該正規化ルシフェラーゼ活性により割り算して、レポーター発現のノックダウン率（％Ｋ
Ｄ）を求めた。Ｌｏｇ２（変化倍率）（「ｌｏｇ２ＦＣ」）を以下の式に従い計算した：
ｌｏｇ２ＦＣ＝ｌｏｇ２［１００／（１００−％ＫＤ）］。
効力５０およびＩＣ５０の全計算は、Ｒ．２．９．２ソフトウェアを使用して行った。
単一リガンド結合に関するＳ字形用量反応（一定勾配）式を用いて、該データを分析した
。効力５０は、５０％標的ｍＲＮＡノックダウンを与える計算されたｓｉＮＡトランスフ
ェクション濃度である。低い最大ノックダウン（ｌｏｇ２（変化倍率）＜１）を有するｓ
ｉＮＡの場合、効力５０は計算できない。
結果 − 既に記載されているとおりに、ＩＤＨ１関連ｓｉＮＡを設計し、合成した。
レニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼおよびＩＤＨ１関連インサート（野生型、Ｒ１
３２Ｈ突然変異体またはＲ１３２Ｃ突然変異体のいずれか）間の転写融合産物を与える修
飾ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２ベクターに基づくレポータープラスミドでトランスフェ
クトされたＨｅｐａ１−６細胞において、種々のｓｉＮＡをスクリーニングした。該マウ
ス細胞における種々の修飾ＩＤＨ１関連ｓｉＮＡでの処理の際のＩＤＨ１関連ｍＲＮＡ発
現レベル（野生型、Ｒ１３２Ｈ突然変異体またはＲ１３２Ｃ突然変異体のいずれか）にお
けるＬｏｇ２ＦＣを表３ａ、表３ｂ、表３ｃおよび表３ｄに示す。各実験において、ｎ＝
２〜４である。表３ｃに示されているスクリーニングデータは、主に、Ｓｔａｂ ０４／
０５化学（表６を参照されたい）を有する化学修飾ｓｉＮＡからのデータを含むが、３’
突出以外は未修飾であるｓｉＮＡからの幾つかのデータをも含む。表３ｄに示されている
スクリーニングデータは、３’突出を除いた未修飾ｓｉＮＡからのデータのみを含む。各
スクリーニングは、該ルシフェラーゼアッセイ法を用いて、４８時間の時点で行った。
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982
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表３ａ〜ｄからの選択された高順位ｓｉＮＡを更に、用量反応曲線を用いて、ヒトＨｅ
ｐＧ２およびマウスＨｅｐａ１−６細胞における有効性および効力に関して分析した。こ
れらのｓｉＮＡに関する結果を表４ａ、表４ｂ、表４ｃおよび表４ｄに示す。効力５０（
表４ａ〜ｄにおける「Ｐ５０」）を４８時間の曝露時間の後で決定した。
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982
実施例３：インビトロＩＤＨ１タンパク質ノックダウン
インビトロ細胞培養系 − ヒト神経膠腫細胞系ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＷを、Ｅｕｒｏｐｅ
ａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ（ＵＫ）
）により推奨されているとおりに増殖させた。ｐＬＥＮＴＩ６．２ Ｃ末端Ｖ５レンチウ
イルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＷ細胞を、ヒトＩ
ＤＨ１−Ｒ１３２Ｈを発現するように操作した。レンチウイルス感染後、ＧＬＵＴＡＭＡ
Ｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１％ 炭酸水素ナトリウム、ピルビン酸ナトリウム、５マ
イクログラム／ｍｌのブラスチシジン（ｂｌａｓｔｉｃｉｄｉｎ）および１０％ ウシ胎
児血清で補足されたＤＭＥＭ−Ｆ１２内で、ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＷ ＩＤＨ１ Ｒ１３２Ｈ
細胞を増殖させた。該２−ＨＧ測定のために、ダルベッコ改変イーグル培地ＧＬＵＴＡＭ
ＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｄ−グルコース、ピルビン酸ナトリウムおよび１０％
ウシ胎児血清内で肉腫細胞系を増殖させた。
ＩＤＨ１タンパク質ノックダウンを評価するための実験 − ｓｉＲＮＡタンパク質ノ
ックダウン実験のために、細胞を６ウェル組織培養プレート内にプレーティングし、３７
℃で一晩インキュベートした。翌日、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡ
Ｘ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ｓｉＮＡまたはｓｉＧＬＯトランスフェク
ション対照（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）を２０ｎＭの最終濃度でトランスフェクトした。翌朝
、細胞培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、細胞をＰＢＳで１回洗浄し
、ｍ−ＰＥＲ細胞溶解バッファー（Ｐｉｅｒｃｅ）で細胞溶解させ、ウエスタンブロット
を行った。特に示されていない限り１：１０００の希釈度の以下の抗体を使用して、タン
パク質発現を評価した：Ｖ５タグ付きＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、
１：４００の希釈度の内因性抗ヒトＩＤＨ１（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ）
、抗ヒトＧＡＰＤＨ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およ
び抗ヒトチューブリン（Ｔｕｂｕｌｉｎ）（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｉｅｓ）。
２−ヒドロキシグルタラートの評価のための質量分析 − 突然変異ＩＤＨ１のｓｉＮ
Ａノックダウンの際の２−ヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）を測定するために、細胞
を６ウェル組織培養プレート内にプレーティングし、３７℃で一晩インキュベートした。
翌日、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
）を使用して、ｓｉＮＡを２０ｎＭの最終濃度でトランスフェクトした。全てのトランス
フェクションを複数の生物学的重複実験として設計した。翌朝、細胞培地を交換した。Ｍ
ＯＧ−Ｇ−ＵＶＷ ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈに関してはトランスフェクションの７２時間後
、およびＨＴ−１０８０細胞に関してはトランスフェクションの９６時間後、培地上清を
集め、９６ウェルプレートに移し、アセトニトリルで希釈した。プレートを室温で３２０
０ＲＰＭで１０分間遠心して、沈殿タンパク質を清澄化し、２−ＨＧをＡＰＩ−４００質
量分析計における質量分析により分析した。
結果 −
１）ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＭヒト神経膠腫細胞における優先的ＩＦＨ１−Ｒ１３２Ｈ特異的
ＲＮＡｉノックダウン − 図１０におけるウエスタンブロットデータは、ヒトＩＤＨ１
に基づく幾つかのｓｉＮＡ配列が、ヒト神経膠腫ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＷ細胞系におけるＩＤ
Ｈ１発現を抑制しうることを示している。Ｃ末端Ｖ５タグを野生型または突然変異ＩＤＨ
タンパク質内に導入し、Ｖ５特異的抗体でのブロッティングにより発現を測定した。図１
０は、野生型ＩＤＨ１発現を完全状態に維持しながら突然変異ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈの発
現を有効に阻止する、ｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号Ｒ−００８３６４６００−０００Ｒの
活性を示す。ｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号Ｒ−００８３６４７１４−０００Ｃはまた、突
然変異体特異的ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ ＲＮＡｉ活性を有するが、それは、ＳｓｉＮＡ
Ｒ−００８３６４６００−０００Ｒより低い度合のものである。これとは対照的に、ｓｉ
ＮＡ配列Ｒ−００８３６４７９８−０００ＢおよびＲ−００８３６４８３６−０００Ｐは
野生型または突然変異ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ対立遺伝子の発現を無差別に妨げた。
２）ＲＮＡｉによるＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃの抑制は培地内の２−ＨＧを減少させる −
図１１Ａおよび１１Ｂは、ヒトＩＤＨ１に基づく幾つかのｓｉＮＡ配列が代謝産物２−
ヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）の産生および細胞培養培地内への分泌を妨げうるこ
とを示している。図１１Ａおよび図１１Ｂは各実験の開始時の細胞プレーティング密度の
みにおいて異なる。示されているとおり、Ｒ１３２Ｃ特異的配列Ｒ−００８３７２８１１
−０００Ｌ、Ｒ−００８３７２８８６−０００Ｂ、Ｒ−００８３７２８５５−０００Ｒま
たは無差別ＩＤＨ１ ｓｉＮＡ Ｒ−００８３６４７９８−０００Ｂ（前記）はそれぞれ
、トランスフェクションの９６時間後に、培地内の分泌２−ＨＧのレベルを減少させうる
。模擬トランスフェクト化細胞または非標的化対照ｓｉＮＡ配列は高レベルの２−ＨＧを
維持した。
３）ＩＤＨ１ ｓｉＲＮＡノックダウンは２−ＨＧの減少と相関する − 図１２は、
ＩＤＨ１のｓｉＮＡノックダウンが、選択された２−ヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ
）の減少と相関することを証明している。９６時間のインキュベーション時間の後、ｓｉ
ＮＡ二重らせんＩＤ番号Ｒ−００８３６４８３６−０００ＢまたはＲ−００８３６４７９
８−０００Ｂのいずれかでトランスフェクトされた細胞においては、ＩＤＨ１タンパク質
および２−ＨＧが有意に減少した。定量的には、Ｒ−００８３６４８３６−０００Ｂおよ
びＲ−００８３６４７９８−０００Ｂは共に、このアッセイにおいて類似レベルのノック
ダウン活性を有するため、８５％のＩＤＨ１タンパク質の減少は２−ＨＧの７８％の減少
を引き起こした。対照サンプルは、模擬トランスフェクション（ＲＮＡｉＭａｘ）、非標
的化対照または蛍光トランスフェクション対照ｓｉＧＬＯからなり、これらはいずれもＩ
ＤＨ１タンパク質発現または２−ＨＧ産生を有意には損なわなかった。
実施例４：ｓｉＮＡのインビトロ血清安定性の決定
ｓｉＮＡをＨ２Ｏで５０μＭ〜１００μＭ ストック溶液として再構成させ、予め３７
℃に加温されたヒト血清に２０μｇ／ｍＬの最終濃度まで加える。ついで該混合物を３７
℃で０、１および２時間インキュベートする。各時点の終了時に、等容量のフェノメネク
ス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）細胞溶解−ローディングバッファーと混合することにより該
反応を停止させる。オリゴヌクレオチドをフェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）固相
抽出により９６ウェル形態において精製し、Ｌａｂｃｏｎｃｏ Ｔｒｉａｄ Ｌｙｏ−０
０４１７で乾燥状態まで凍結乾燥させる。凍結乾燥サンプルを、ＲＮアーゼ非含有Ｈ２Ｏ
で調製された１５０μＬの１ｍＭ ＥＤＴＡ中で再構成させる。ついで、ＴｈｅｒｍｏＦ
ｉｓｈｅｒ Ｏｒｂｉｔｒａｐでの液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）分
析のために、該サンプル溶液を１ｍＭ ＥＤＴＡで５倍希釈する。該ｓｉＮＡの血清代謝
産物を測定分子量に基づいて決定した。
実施例５：サイトカイン誘導の試験
脂質ナノ粒子（４０／４８／２／１０の比のＤＬｉｎＤＭＡ／コレステロール／Ｓ−Ｐ
ＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ）中にローディングされた本発明の種々のｓｉＮＡの免疫刺
激効果を評価するために、単一の３ｍｐｋ容量のＬＮＰ製剤化ｓｉＮＡを尾静脈注射によ
り３Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに投与する。投与後の３および２４時間の時点で、血清または
血漿サンプルを集める。これらのサンプルにおけるサイトカインおよびケモカインレベル
を、Ａｕｓｈｏｎ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓのＳｅａｒｃｈｌｉｇｈｔ ＩＲ Ｃｙｔｏ
ｋｉｎｅ Ａｒｒａｙを該製造業者の説明に従い使用して測定する。測定されるサイトカ
インおよびケモカインはＩＬ−１ａ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＫＣ、ＩＬ−１０、ＩＦＮ
γ、ＴＮＦ、ＧＭＣＳＦ、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１／ＪＥおよびＲＡＮＴＥＳである。
実施例６：非ヒト霊長類における薬力学的研究
脂質ナノ粒子（例えば、４０／４８／２／１０の比のＤＬｉｎＤＭＡ／コレステロール
／Ｓ−ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ）内にローディングされたｓｉＮＡの単一の２．５
ｍｐｋ用量を静脈内注入によりリサース・マカク（Ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）サル
に投与する。標的ｍＲＮＡノックダウンをモニターするために、１６Ｔゲージ・メングヒ
ニ（Ｍｅｎｇｈｉｎｉ）針を使用して、動物１匹当たり約２０ｍｇの組織に関して、投与
前および後の種々の時点で肝臓生検を行う。該治療に関連した潜在的毒性をモニターする
ために、投与前および後の種々の時点で全血および血清／血漿も集める。全ての方法は、
ＵＳＤ Ａ Ａｎｉｍａｌ Ｗｅｌｆａｒｅ Ａｃｔ（９ ＣＦＲ，Ｐａｒｔｓ１、２お
よび３）に概説されている規制およびＧｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ
ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ（ＩＬＡＲ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，１
９９６，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ）において特定されている条件
に従う。標的遺伝子発現におけるＬｏｇ２（変化倍率）は投与後の種々の時点で決定され
る。該サルの投与前標的遺伝子発現レベルは、最初の投与の７日前に測定する。
実施例７：ｓｉＮＡ脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤
ＤＬｉｎＤＭＡ製剤に関する一般的ＬＮＰ法の説明 − 脂質ナノ粒子を衝撃ジェット
法により製造する。アルコールに溶解した脂質を、クエン酸バッファーに溶解したｓｉＮ
Ａと混合することにより、該粒子を形成させる。脂質とｓｉＮＡとの混合比は約４５〜５
５％ 脂質および３５〜４５％ ｓｉＮＡが目標（標的）とされる。該脂質溶液はカチオ
ン性脂質、ヘルパー脂質（コレステロール）、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ、Ｐ
ＥＧ−ＤＭＧ）脂質およびＤＳＰＣ（アルコール（例えば、エタノール）中で５〜１５ｍ
ｇ／ｍＬの濃度、目標は９〜１２ｍｇ／ｍＬ）を含有する。該脂質の比は、カチオン脂質
に関しは２５〜９８（目標は３５〜６５）のモルパーセント範囲を有し、該ヘルパー脂質
は０〜７５（目標は３０〜５０）のモルパーセント範囲を有し、ＰＥＧ脂質は１〜１５（
目標は１〜６）のモルパーセント範囲を有し、ＤＳＰＣは０〜１５（目標は０〜１２）の
モルパーセント範囲を有する。該ｓｉＮＡ溶液は、３．５〜５の範囲のｐＨを有するクエ
ン酸ナトリウム緩衝塩溶液中で０．３〜１．０ｍｇ／ｍＬ（目標は０．３〜０．９ｍｇ／
ｍＬ）の濃度範囲で１以上のｓｉＮＡ配列を含有する。それらの２つの液体を１５〜４０
℃（目標は３０〜４０℃）の範囲の温度に加熱し、ついで衝撃ジェットミキサーにおいて
混合して、瞬時にＬＮＰを形成させる。管ＩＤは０．２５〜１．０ｍｍの範囲、および１
０〜６００ｍＬ／分の合計流量を有する。流量と管ＩＤとの組合せは３０〜２００ｎｍの
ＬＮＰの粒径を制御する効果を示す。ついで該溶液を、より高いｐＨを有する緩衝溶液と
、１：１〜１：３ ｖｏｌ：ｖｏｌ（目標は１：２ ｖｏｌ：ｖｏｌ）の範囲の混合比で
混合する。この緩衝溶液は１５〜４０℃（目標は３０〜４０℃）の範囲の温度である。該
混合ＬＮＰをアニオン交換濾過工程前に３０分〜２時間維持する。インキュベート中の温
度は１５〜４０℃（目標は３０〜４０℃）の範囲である。インキュベート後、該溶液を、
アニオン交換分離工程を構成する０．８μｍフィルターで濾過する。このプロセスは、１
ｍｍ ＩＤ〜５ｍｍ ＩＤの範囲の管ＩＤ、および１０〜２０００ｍＬ／分の流量を用い
る。該ＬＮＰを濃縮し、限外濾過法によりダイアフィルトレーションする。この場合、該
アルコールを除去し、該クエン酸バッファーを最終バッファー溶液、例えばリン酸緩衝食
塩水と交換する。該限外濾過法は接線流動濾過形態（ＴＦＦ）を用いる。この方法は３０
〜５００ＫＤの膜名目分子量カットオフ範囲を用いる。該膜形態は中空糸または平坦なシ
ートカセットである。適切な分子量カットオフを用いる該ＴＦＦ法は保持物質中に該ＬＮ
Ｐを保持し、濾液または浸透物は該アルコール、クエン酸バッファーおよび最終的なバッ
ファー廃棄物を含有する。該ＴＦＦ法は、初期濃度から１〜３ｍｇ／ｍＬのｓｉＮＡ濃度
を伴う多工程法である。濃縮後、該ＬＮＰ溶液を１０〜２０容量にわたって最終バッファ
ーに対するダイアフィルトレーションに付して、該アルコールを除去し、バッファー交換
を行う。ついで該物質を更に１〜３倍濃縮する。該ＬＮＰ法の最終工程は、該濃縮ＬＮＰ
を滅菌濾過し、該産物をバイアルに入れるためのものである。
分析方法：
１）ｓｉＮＡ濃度 − ｓｉＮＡ二重らせん濃度は、２９９６ ＰＤＡ検出器と共にＷ
ａｔｅｒｓ ２６９５ Ａｌｌｉａｎｃｅ系（Ｗａｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍ
ｉｌｆｏｒｄ ＭＡ）を使用する強アニオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＳＡＸ−
ＨＰＬＣ）により決定される。該ＬＮＰ（ＲＮＡｉ運搬ビヒクル（ＲＤＶ）とも称される
）を、全ｓｉＮＡを遊離させるために０．５％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で処理し、２５
４ｎｍでのＵＶ検出を伴うＤｉｏｎｅｘ ＢｉｏＬＣ ＤＮＡＰａｃ ＰＡ ２００（４
×２５０ｍｍ）カラムを使用するＳＡＸ分離により分析する。移動相は、０〜１５分の直
線勾配および１ｍｌ／分の流量を伴う、Ａ：２５ｍＭ ＮａＣｌＯ４、１０ｍＭ Ｔｒｉ
ｓ、２０％ ＥｔＯＨ（ｐＨ７．０）およびＢ：２５０ｍＭ ＮａＣ１Ｏ４、１０ｍＭ
Ｔｒｉｓ、２０％ ＥｔＯＨ（ｐＨ７．０）から構成される。ｓｉＮＡ量を、ｓｉＮＡ標
準曲線を比較することにより決定する。
２）封入率 − ＲＤＶの封入率をモニターするためのＲＮＡ定量のために、蛍光試薬
ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄを使用する。遊離ｓｉＮＡおよび全ｓｉＮＡ量を決定するために、Ｔ
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００の存在下または非存在下でＲＤＶを使用する。該アッセイは、Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）のＳｐｅｃｔｒａＭａ
ｘ Ｍ５ｅマイクロプレート分光光度計を使用して行う。サンプルを４８５ｎｍで励起さ
せ、蛍光発光を５３０ｎｍで測定する。ｓｉＮＡ標準曲線を比較することにより、ｓｉＮ
Ａの量を決定する：封入率＝（１−遊離ｓｉＮＡ／全ｓｉＮＡ）×１００％。
３）粒径および多分散性 − １μｇのｓｉＮＡを含有するＲＤＶを１×ＰＢＳで３ｍ
ｌの最終容量に希釈する。ＺｅｔａＰＡＬＳ装置（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ Ｉｎｓｔｒｕ
ｍｅｎｔｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｈｏｌｔｓｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用する動的光
散乱法により、該サンプルの粒径および多分散性を測定する。９０℃の散乱角で、２５℃
で、Ｈｅ−Ｎｅレーザーを使用して、散乱強度を測定する。
４）ゼータ（ζ）電位分析 − １μｇのｓｉＮＡを含有するＲＤＶを１ｍＭ Ｔｒｉ
ｓバッファー（ｐＨ７．４）で２ｍｌの最終容量に希釈する。光源としてのＨｅ−Ｎｅレ
ーザーおよび電極と共にＺｅｔａＰＡＬＳ装置（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ Ｉｎｓｔｒｕｍ
ｅｎｔｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｈｏｌｔｓｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して、サンプ
ルの電気泳動移動度を決定する。ζ電位の計算において、スモルチョウスキー（Ｓｍｏｌ
ｕｃｈｏｗｓｋｉ）限界を推定する。
５）脂質分析 − コロナ帯電エアゾール検出器（ＣＡＤ）（ＥＳＡ Ｂｉｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｈｅｌｍｓｆｏｒｄ，ＭＡ）と共にＷａｔｅｒｓ ２６９５ Ａ
ｌｌｉａｎｃｅ系（Ｗａｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ ＭＡ）を使
用する逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により、個々の脂質濃度を決
定する。Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ−Ｃ１８（５０×４．６ｍｍ，粒径１．８
μｍ）カラムを６０℃でＣＡＤと共に使用して、ＲＤＶにおける個々の脂質を分析する。
移動相は、Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．１ ＴＦＡおよびＢ：ＩＰＡ中の０．１％ ＴＦＡから構
成される。勾配は、時間０からの６０％移動相Ａおよび４０％移動相Ｂから１．００分に
おける４０％移動相Ａおよび６０％移動相Ｂへ；時間１．００から５．００分までの４０
％移動相Ａおよび６０％移動相Ｂ；５．００分からの４０％移動相Ａおよび６０％移動相
Ｂから１０．００分における２５％移動相Ａおよび７５％移動相Ｂへ；１０．００分から
の２５％移動相Ａおよび７５％移動相Ｂから１５．００分における５％移動相Ａおよび９
５％移動相Ｂへ；ならびに１５．００からの５％移動相Ａおよび９５％移動相Ｂから２０
．００分における６０％移動相Ａおよび４０％移動相Ｂへ、１ｍｌ／分の流量で変化する
。二次曲線の当てはめでＲＤＶにおける全ての脂質成分に関する標準曲線と比較すること
により、個々の脂質濃度を決定する。各脂質のモル比率を、その分子量に基づいて計算す
る。
表８における種々の製剤のための一般的ＬＮＰ製造 − ｓｉＮＡおよび／または担体
分子を２５ｍＭ クエン酸バッファー（ｐＨ４．０）に０．９ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解す
ることにより、表８におけるｓｉＮＡナノ粒子溶液を製造する。カチオン性脂質（例えば
、ＣＬｉｎＤＭＡまたはＤＯＢＭＡ；表８における製剤に関する構造および比を参照され
たい）、ＤＳＰＣ、コレステロールおよびＰＥＧ−ＤＭＧの混合物（表８に比が示されて
いる）を約１５ｍｇ／ｍＬの濃度で無水エタノールに溶解することにより脂質溶液を製造
する。窒素とホスファートとの比は約３：１である。
等容量のｓｉＮＡ／担体および脂質溶液を、２個のＦＰＬＣポンプを使用して、同じ流
量で、混合Ｔコネクタへ運搬する。所望の粒径に調節するために、背圧弁を使用する。生
じた乳状混合物を無菌ガラスボトル内に集める。ついでこの混合物を等容量のクエン酸バ
ッファーでゆっくり希釈し、イオン交換膜で濾過して、該混合物中の遊離ｓｉＮＡ／担体
を除去する。クエン酸バッファー（ｐＨ４．０）に対する限外濾過を用いてエタノールを
除去し（ＡＬＣＯスクリーンからの試験スティック）、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対する限
外濾過を用いてバッファーを交換する。最終ＬＮＰを、所望の容量に濃縮することにより
得、０．２μｍフィルターで濾過滅菌する。得られたＬＮＰを粒径、ζ電位、アルコール
含量、全脂質含量、封入核酸および全核酸濃度の点で特徴づける。
ＬＮＰ製造方法 − 非限定的な例において、以下のとおりにバルクにおいてＬＮＰ−
０８６ ｓｉＮＡ／担体製剤を製造する。該方法は、（１）脂質溶液を調製すること、（
２）ｓｉＮＡ／担体溶液を調製すること、（３）混合／粒子形成、（４）インキュベーシ
ョン、（５）希釈、ならびに（６）限外濾過および濃縮からなる。
１）脂質溶液の調製 − 三頚２Ｌ丸底フラスコ、冷却器、測定用シリンダー、および
２個の１０Ｌ円錐ガラス容器を発熱物質除去処理に付す。該脂質を室温に加温する。該三
頚丸底フラスコ内にピペットで５０．４４ｇのＣＬｉｎＤＭＡ、および４３．３２ｇのＤ
ＳＰＣ、５．３２ｇのコレステロール、６．９６ｇのＰＥＧ−ＤＭＧ、および２．６４ｇ
のリノレイルアルコールを移す。該混合物に１Ｌのエタノールを加える。該丸底フラスコ
を、Ｊ−ＣＨＥＭプロセスコントローラに接続された加熱マントル内に配置する。上部に
冷却器を取り付けて、該脂質懸濁液をアルゴン下で撹拌棒で撹拌する。熱電対プローブを
、密閉アダプターが取り付けられた該丸底フラスコの一方の頚から該懸濁液内に入れる。
該懸濁液を、それが透明になるまで、３０℃で加熱する。該溶液を室温に冷却し、円錐ガ
ラス容器に移し、キャップで密閉する。
２）ｓｉＮＡ／担体溶液の調製 − 無菌容器（例えば、Ｃｏｒｎｉｎｇ貯蔵ボトル）
内に、３．６ｇに水補正係数（約１．２）を掛け算した重量の第１ ｓｉＮＡ粉末（「ｓ
ｉＮＡ−１」）を秤量して入れる。該ｓｉＮＡを発熱物質除去済み５Ｌガラス容器に移す
。該秤量容器をクエン酸バッファー（２５ｍＭ，ｐＨ４．０および１００ｍＭ ＮａＣｌ
）で３回洗浄し、該洗浄液を５Ｌ容器内に入れ、クエン酸バッファーで４Ｌに適宜調節す
る。以下の方法を用いて、該ｓｉＮＡ溶液の濃度をＵＶ分光計で決定する。２０μＬを該
溶液から取り出し、１０００μＬに５０倍希釈し、クエン酸バッファーでのブランキング
の後、Ａ２６０ｎｍにおけるＵＶ読取値を記録する。これを繰返す。それらの２つのサン
プルの読取値が合致する場合には、平均を取り、該ｓｉＮＡの吸光係数に基づいて濃度を
計算する。該最終濃度が０．９０±０．０１ｍｇ／ｍＬの範囲から外れている場合には、
更にｓｉＮＡ／担体粉末を加え、または更にクエン酸バッファーを加えることにより、該
濃度を調節する。第２ ｓｉＮＡ（「ｓｉＮＡ−２」）に関して、このプロセスを繰返す
。発熱物質除去済み１０Ｌガラス容器内に、４Ｌのそれぞれ０．９ｍｇ／ｍＬのｓｉＮＡ
溶液を移す。
あるいは、該ｓｉＮＡ／担体溶液が、２以上のｓｉＮＡ二重らせんおよび／または担体
の混合物ではなく、単一のｓｉＮＡ二重らせんおよび／または担体を含む場合には、該ｓ
ｉＮＡ／担体を２５ｍＭ クエン酸バッファー（ｐＨ４．０，１００ｍＭのＮａＣｌ）に
溶解して、０．９ｍｇ／ｍＬの最終濃度を得る。
ついで該脂質／エタノール溶液を、Ｍａｓｔｅｒ Ｆｌｅｘ Ｐｒｉｓｔａｌｔｉｃ
Ｐｕｍｐ Ｍｏｄｅｌ ７５２０−４０を使用して、Ｐａｌｌ Ａｃｒｏｐａｋ ２０
０．８／０．２μｍ滅菌フィルターＰＮ １２２０３に通過させて、発熱物質除去済みガ
ラス容器内に滅菌濾過して、該封入プロセス用の無菌出発物質を得る。該濾過プロセスは
、２０ｃｍ２の膜面積を用いて、８０ｍＬの規模で行う。流量は２８０ｍＬ／分である。
このプロセスは、管直径および濾過面積を増加させることにより、規模改変されうる。
３）粒子形成−混合工程 − ＡＫＴＡ Ｐ９００ポンプのスイッチを入れ、１０００
ｍＬの１Ｎ ＮａＯＨを１Ｌガラス容器内に配置し、１０００ｍＬの７０％ エタノール
を１Ｌガラス容器内に配置し、圧力蓋が付いた該ポンプを各容器に接続することにより、
衛生処理を行う。２０００ｍＬガラス容器を該ポンプ出口の下に配置し、アルゴンが１０
ｐｓｉで該系を流れるようにし、流量を４０分の時間設定で４０ｍＬ／分に設定する。該
衛生処理が完了したら、該ガスのスイッチを切り、使用の準備が整うまで該ポンプを該溶
液中で保存する。使用前に、２００ｍＬのエタノールおよび２００ｍＬの無菌クエン酸バ
ッファーを使用することにより、該ポンプ流動を確認する。
該ＡＫＴＡポンプに、該無菌脂質／エタノール溶液、該無菌ｓｉＮＡ／担体またはｓｉ
ＮＡ／担体混合物／クエン酸バッファー溶液、および蓋付きの発熱物質除去済み受容容器
（２×バッチサイズ）を接続する。該ガスのスイッチを入れ、混合中、圧力を５〜１０ｐ
ｓｉに維持する。
４）インキュベーション − 該溶液を、２２±２時間のインキュベーション時間にわ
たって、混合した後に維持する。該インキュベーションは室温（２０〜２５℃）で行い、
処理中の溶液を光から防護する。
５）希釈 − 等しい長さの管およびＴｅｅ接続および３６０ｍＬ／分の流量で設定さ
れた複ヘッド蠕動ポンプ，Ｍａｓｔｅｒ Ｆｌｅｘ Ｐｅｒｉｓｔａｌｔｉｃ Ｐｕｍｐ
，Ｍｏｄｅｌ ７５２０−４０を使用して、該脂質ｓｉＮＡ溶液を等容量のクエン酸バッ
ファーで希釈する。
６）限外濾過および濃縮 − 該限外濾過プロセスは、時間の決まったプロセスであり
、流量は注意深くモニターされる必要がある。これは２工程プロセスであり、第１工程は
、該希釈物を３２Ｌから３６００ｍＬに及び約２ｍｇ／ｍＬの濃度にする濃縮工程である
。
該第１工程においては、限外濾過膜ＧＥ ＰＮ ＵＦＰ−１００−Ｃ−３５Ａを備えた
フレックススタンド（Ｆｌｅｘｓｔａｎｄ）をクアトロフロー（ｑｕａｔｒｏｆｌｏｗ）
ポンプに取り付ける。２００ｍＬのＷＦＩを貯留容器に加え、ついで３Ｌの０．５Ｎ 水
酸化ナトリウム（これはついで、濃縮水を通過して流れて廃棄される）を加える。このプ
ロセスを３回繰返す。ついで３ＬのＷＦＩを該系に２回流し、ついで３Ｌのクエン酸バッ
ファーを流す。ついで該ポンプを排液に付す。
該希釈ＬＮＰ溶液を貯蔵容器内に４Ｌの目印まで入れる。該ポンプのスイッチを入れ、
透過流量が３００ｍＬ／分となり、液体レベルが貯蔵容器内で４Ｌで一定となるように該
ポンプの速度を調節する。全ての該希釈ＬＮＰ溶液が該貯蔵容器に移ったら、該ポンプを
停止させる。該ポンプ速度を、必要に応じて調節することにより、該希釈ＬＮＰ溶液を２
４０分で３６００ｍＬに濃縮する。
第２工程は、エタノールクエン酸バッファーをリン酸緩衝食塩水と交換するダイアフィ
ルトレーション工程である。該ダイアフィルトレーション工程は３時間を要し、この場合
も、流量を注意深くモニターする必要がある。この工程中、該エタノール濃度をヘッドス
ペースＧＣによりモニターする。３時間後（２０ダイアフィルトレーション容量）、該溶
液を約６ｍｇ／ｋｇまたは１．２Ｌの容量まで濃縮するために第２濃縮を行う。この物質
を発熱物質除去済みガラス容器内に集める。該系を高流量で４００ｍＬのＰＢＳで洗浄し
、透過ラインを閉じる。この物質を集め、第１収集物に加える。この時点での予想濃度は
４．５ｍｇ／ｍＬである。該濃度および容量を決定する。
該蠕動ポンプの供給管を、７２ＬのＰＢＳ（０．０５μｍ濾過物）を含有する容器内に
配置し、流量を、まず、貯蔵容器において３６００ｍＬの一定容量を維持するように調節
し、ついで４００ｍＬ／分まで増加させる。該ＬＮＰ溶液をＰＢＳ（２０容量）での１８
０分間のダイアフィルトレーションに付す。
該ＬＮＰ溶液を１．２Ｌの目印まで濃縮し、発熱物質除去済み２Ｌメスシリンダー内に
集める。４００ｍＬのＰＢＳを該貯蔵容器に加え、該ポンプを２分間にわたって再循環さ
せる。この洗浄液を集め、該メスシリンダー内に集められたＬＮＰ溶液に加える。
得られたＬＮＰを粒径、ζ電位、アルコール含量、全脂質含量、封入核酸および全核酸
濃度に関して特徴づけする。
本発明は、記載されている目的を遂行し、記載されている目標および利点ならびにそれ
らにおいて固有のものを達成するために十分に適合化される、と当業者は容易に認識する
であろう。好ましい実施形態の現在の代表例として本明細書に記載されている方法および
組成物は典型例であり、本発明の範囲を限定するものではない。本発明の精神に包含され
特許請求の範囲により定められるそれらにおける変更および他の用途が当業者において見
出されるであろう。
表５：ＩＤＨ１関連ＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号
ＮＭ ０５８９６ − 配列番号５１６；
ホモサピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＩＤＨ１；
ＧＩ：２８１７８８２４。
Figure 2017212982
Figure 2017212982

ＣＡＰ＝任意の末端キャップ；例えば、図５を参照されたい。
全てのＳｔａｂ化学は、本発明の二重らせんのために互いに組合せて（例えば、センス
およびアンチセンス鎖化学の組合せとして）用いられることが可能であり、あるいは、例
えば本発明の一本鎖核酸分子の単離において用いられることが可能である。全てのＳｔａ
ｂ化学は、２’−Ｏ−アルキル、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−デオキシ、Ｌ
ＮＡもしくは他の修飾ヌクレオチドを有する３’突出ヌクレオチドまたは非ヌクレオチド
を含みうる。全てのＳｔａｂ化学は、典型的には、約１９〜２１ヌクレオチドを含むが、
本明細書に記載されているとおりに変動しうる。全てのＳｔａｂ化学はまた、アンチセン
スまたはガイド鎖の５’末端から決定された場合の二本鎖核酸二重らせんの１１番目の塩
基対位置に、センスまたはパッセンジャー鎖における単一リボヌクレオチドを含みうる（
図４Ｃを参照されたい）。全てのＳｔａｂはまた、前記Ｓｔａｂの代わりに、アンチセン
ス鎖の５’末端からの１４位に２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾を、それがその位置
においてプリンであるかピリミジンであるかには無関係に、有しうる（図４Ｃを参照され
たい）。前記のアンチセンス鎖の全てのＳｔａｂ化学は、該アンチセンス鎖の５’末端か
らの１、２および／または３位に、２’−デオキシウリジンの代わりに、チミジンを有し
うる（図４Ｃを参照されたい）。Ｓ＝センス鎖。ＡＳ＝アンチセンス鎖。＊Ｓｔａｂ２３
は、３’−ＣＡＰに隣接した単一リボヌクレオチドを有する。＊Ｓｔａｂ２４およびＳｔ
ａｂ２８は５’末端に単一リボヌクレオチドを有する。＊Ｓｔａｂ２５、Ｓｔａｂ２６、
Ｓｔａｂ２７、Ｓｔａｂ３５、Ｓｔａｂ３５Ｇ＊、Ｓｔａｂ３５Ｎ＊、Ｓｔａｂ３５ｒｅ
ｖ＊、Ｓｔａｂ３６、Ｓｔａｂ５０＊、Ｓｔａｂ５３＊、Ｓｔａｂ５３Ｎ＊およびＳｔａ
ｂ５４は５’末端に３個のリボヌクレオチドを有する。＊Ｓｔａｂ２９、Ｓｔａｂ３０、
Ｓｔａｂ３１、Ｓｔａｂ３３およびＳｔａｂ３４の、５’末端からの最初の３個のヌクレ
オチド位置のいずれかのプリンは、リボヌクレオチドである。ｐ＝ホスホロチオアート結
合。†Ｓｔａｂ３５は、３’突出に２’−Ｏ−メチルＵを、そして５’末端に３個のリボ
ヌクレオチドを有する。†Ｓｔａｂ３６は、標的配列に相補的である２’−Ｏ−メチル突
出（天然に存在する突出）、および５’末端の３個のリボヌクレオチドを有する。‡−Ｓ
ｔａｂ０４Ｈ、Ｓｔａｂ０６Ｃ、Ｓｔａｂｌ０７Ｈ、Ｓｔａｂ０７ｍＵ、Ｓｔａｂ０９Ｈ
、Ｓｔａｂ１６Ｃ、Ｓｔａｂ１６Ｈ、Ｓｔａｂ１８Ｃ、Ｓｔａｂ１８Ｈ、Ｓｔａｂ５２Ｈ
、Ｓｔａｂ０５Ｃ、Ｓｔａｂ０５Ｎ、Ｓｔａｂ１０Ｃ、Ｓｔａｂ１０Ｎ、Ｓｔａｂ３５Ｇ
＊、Ｓｔａｂ３５Ｎ＊、Ｓｔａｂ３５Ｎ＊、Ｓｔａｂ３５ｒｅｖ＊、Ｓｔａｂ５０＊、Ｓ
ｔａｂ５３＊、Ｓｔａｂ５３Ｎ＊、Ｓｔａｂ５４は２個の２’−Ｏ−メチルＵ３’突出を
有する。Ｓｔａｂ３５Ｇ＊、Ｓｔａｂ３５Ｎ＊、Ｓｔａｂ３５ｒｅｖ＊、Ｓｔａｂ５０＊
、Ｓｔａｂ５３＊およびＳｔａｂ５３Ｎ＊は、５’末端から決定された場合のガイド鎖の
１４位の２’−Ｏ−メチル修飾を許容しない。
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982
Figure 2017212982

Figure 2017212982

Figure 2017212982

Figure 2017212982

Claims (40)

  1. ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の発現を抑制する単離された二本鎖短干渉性核酸（ｓ
    ｉＮＡ）分子であって、
    （ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
    （ｂ）各鎖が、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、
    （ｃ）少なくとも１つの鎖が、配列番号１〜５０６からなる群から選択される少なくと
    も１５ヌクレオチド配列を含む、単離された二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。
  2. ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の発現を抑制する二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分
    子であって、
    （ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
    （ｂ）各鎖が、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、
    （ｃ）該アンチセンス鎖が、
    ５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
    ５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
    ５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
    ５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
    ５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
    ５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
    ５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
    ５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
    ５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
    ５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）
    のいずれかに相補的な配列を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む、二本鎖短干渉性
    核酸（ｓｉＮＡ）分子。
  3. ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の発現を抑制する二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分
    子であって、
    （ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
    （ｂ）各鎖が、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、
    （ｃ）該アンチセンス鎖が、
    ５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
    ５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
    ５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
    ５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
    ５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
    ５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
    ５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
    ５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
    ５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４９８）；または
    ５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）
    の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、ここで、該ヌクレオチドの１以上は化学修飾
    されていてもよい、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。
  4. 該センス鎖が、
    ５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
    ５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
    ５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
    ５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
    ５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
    ５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
    ５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
    ５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
    ５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
    ５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）
    の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、ここで、該ヌクレオチドの１以上は化学修飾
    されていてもよい、請求項３記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  5. 該ｓｉＮＡが、
    ５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）および
    ５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
    ５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）および
    ５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
    ５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）および
    ５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
    ５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）および
    ５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
    ５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）および
    ５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
    ５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）および
    ５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
    ５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）および
    ５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
    ５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）および
    ５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
    ５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）および
    ５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−（配列番号４９８）；または
    ５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）および
    ５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）
    のいずれかを含む、請求項４記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  6. 少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾ヌクレオチドである、前記請求項のいずれか
    １項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  7. 少なくとも１つの非ヌクレオチドを含む、前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉ
    ＮＡ分子。
  8. 少なくとも１つのヌクレオチドが汎用塩基を含む、前記請求項のいずれか１項記載の二
    本鎖ｓｉＮＡ分子。
  9. 少なくとも１つのホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む、前記請求項のいずれ
    か１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  10. 少なくとも１つの鎖の３’末端、５’末端、または３’および５’末端の両方にキャッ
    プを含む、前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  11. 一方または両方の鎖上に１以上の３’突出ヌクレオチドを含む、前記請求項のいずれか
    １項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  12. 該アンチセンス鎖の５’末端がリン酸化されている、前記請求項のいずれか１項記載の
    二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  13. 少なくとも１つの鎖上の３’突出ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである
    、請求項１１記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  14. 該２’−Ｏ−メチルヌクレオチドがホスホロチオアートヌクレオチド間結合で連結され
    ている、請求項１３記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  15. 少なくとも１つの化学修飾ヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチ
    ドである、請求項６記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  16. 少なくとも１つの化学修飾ヌクレオチドが２’−デオキシヌクレオチドである、請求項
    ６記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  17. 少なくとも１つの化学修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである、請
    求項６記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  18. 一方または両方の鎖における５以上のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’
    −フルオロピリミジンヌクレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項記載の二本鎖ｓ
    ｉＮＡ分子。
  19. 一方または両方の鎖における５以上のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルピリ
    ミジンヌクレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  20. 一方または両方の鎖における５以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フ
    ルオロプリンヌクレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分
    子。
  21. 一方または両方の鎖における５以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルプリンヌ
    クレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  22. 一方または両方の鎖における５以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルプリンヌ
    クレオチドである、請求項１８記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  23. 一方または両方の鎖における５以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フ
    ルオロヌクレオチドである、請求項１９記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  24. センス鎖およびアンチセンス鎖を有する式（Ａ）：
    Figure 2017212982
    （式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖はアンチセンス鎖であ
    り、該アンチセンス鎖は配列番号４４６、配列番号４５０、配列番号４５１、配列番号４
    ５２、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４
    ９８または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、該センス鎖は、該
    アンチセンス鎖に対する相補性を有する配列を含む；
    各Ｎは、独立して、修飾されていない若しくは化学修飾されているヌクレオチドである
    、または非ヌクレオチドである；
    各Ｂは、存在する又は存在しない末端キャップである；
    （Ｎ）は突出ヌクレオチドを表し、それらのそれぞれは、独立して、修飾されていない
    又は化学修飾されている；
    Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数である；
    Ｘ３は１５〜３０の整数である；
    Ｘ４は１２〜２７の整数である；
    ［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は修飾ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドであり、こ
    こで、［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は、以下のものからなる群から選択される：
    （ａ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２
    ’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシ−２’−
    フルオロヌクレオチドである；
    （ｂ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２
    ’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオ
    チドである；
    （ｃ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２
    ’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである；
    （ｄ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２
    ’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；およ
    び
    （ｅ）［Ｎ１］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ２］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ
    ３］はリボヌクレオチドである）を含む二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。
  25. （ａ）ＮＸ４位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキ
    シ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌ
    クレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
    （ｂ）ＮＸ４位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−
    ２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレ
    オチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
    （ｃ）ＮＸ３位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキ
    シ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌ
    クレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；および
    （ｄ）ＮＸ３位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−
    ２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレ
    オチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである、請求項２４記載の二
    本鎖ｓｉＮＡ分子。
  26. Ｘ１が２であり、Ｘ２が２である、請求項２４または請求項２５記載の二本鎖ｓｉＮＡ
    分子。
  27. １以上のヌクレオチドが汎用塩基を有する、請求項２４〜２６のいずれか１項記載の二
    本鎖ｓｉＮＡ分子。
  28. 該アンチセンス鎖の５’末端からの１４位のヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルヌクレオ
    チドではない、請求項２４〜２７のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  29. 該アンチセンス鎖の５’末端からの１４位のヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フ
    ルオロヌクレオチドである、請求項２４〜２８のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子
    。
  30. １以上の突出ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである、請求項２４〜２９
    のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  31. 少なくとも１つのホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む、請求項２４〜３０の
    いずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  32. 各Ｘ１およびＸ２＝１または２；Ｘ３＝１８、１９、２０、２１、２２、２３または２
    ４；およびＸ４＝１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１である、請求項２４記
    載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  33. 各Ｘ１およびＸ２＝２；Ｘ３＝１９；およびＸ４＝１６である、請求項２４記載の二本
    鎖ｓｉＮＡ分子。
  34. （ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチ
    ドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
    （ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが
    ２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
    （ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチ
    ドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；および
    （ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが
    ２’−デオキシヌクレオチドである、請求項２５記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  35. （ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチ
    ドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
    （ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが
    リボヌクレオチドである；
    （ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチ
    ドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；および
    （ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが
    リボヌクレオチドである、請求項２５記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  36. （ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチ
    ドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
    （ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが
    ２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
    （ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチ
    ドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；および
    （ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが
    ２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである、請求項２５記載の二本鎖ｓｉＮＡ
    分子。
  37. １以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む、請求項３４、３５または３６
    のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
  38. 医薬上許容される担体または希釈剤中に前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮ
    Ａ分子を含む組成物。
  39. ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の作用により又は作用の喪失により引き起こされる状
    態に罹患したヒト対象の治療方法を含み、該方法が、
    （ａ）請求項１〜３７のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子、
    （ｂ）請求項３８記載の組成物
    の有効量を該対象に投与することを含む、治療方法。
  40. 該状態が癌である、請求項３９記載の方法。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9474779B2 (en) 2012-01-19 2016-10-25 Agios Pharmaceuticals, Inc. Therapeutically active compositions and their methods of use
US20150031627A1 (en) 2013-07-25 2015-01-29 Agios Pharmaceuticals, Inc Therapeutically active compounds and their methods of use
US9968595B2 (en) 2014-03-14 2018-05-15 Agios Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions of therapeutically active compounds
JP2018507227A (ja) 2015-03-03 2018-03-15 キュアポート インコーポレイテッド 二薬搭載リポソーム医薬製剤
EP3265059A4 (en) 2015-03-03 2018-08-29 Cureport Inc. Combination liposomal pharmaceutical formulations
DK3362065T3 (da) 2015-10-15 2024-06-17 Servier Lab Kombinationsbehandling omfattende ivosidenib, cytarabin og daunorubicin eller idarubicin til behandling af akut myeloid leukæmi
BR122024000250A2 (pt) * 2015-10-15 2024-02-27 Les Laboratoires Servier Uso de um inibidor de desidrogenase isocitrato 1 (idh1) mutante e um agente desmetilante de dna
PL3607069T3 (pl) * 2017-04-05 2023-03-06 Silence Therapeutics Gmbh Produkty i kompozycje
US10980788B2 (en) 2018-06-08 2021-04-20 Agios Pharmaceuticals, Inc. Therapy for treating malignancies

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010105243A1 (en) * 2009-03-13 2010-09-16 Agios Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for cell-proliferation-related disorders
WO2010111490A2 (en) * 2009-03-27 2010-09-30 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF THE THYMIC STROMAL LYMPHOPOIETIN (TSLP) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040067234A1 (en) * 2002-07-11 2004-04-08 Paz Einat Isocitrate dehydrogenase and uses thereof
US8090542B2 (en) 2002-11-14 2012-01-03 Dharmacon Inc. Functional and hyperfunctional siRNA
CN101052717A (zh) * 2004-05-11 2007-10-10 α基因株式会社 诱发rna干扰的多核苷酸以及使用该多核苷酸的基因表达抑制方法
US20090176725A1 (en) 2005-08-17 2009-07-09 Sirna Therapeutics Inc. Chemically modified short interfering nucleic acid molecules that mediate rna interference
PL2326735T3 (pl) * 2008-09-03 2017-04-28 The Johns Hopkins University Zmiany genetyczne w dehydrogenazie izocytrynianowej i innych genach w glejaku złośliwym
EP3561077B1 (en) * 2009-10-21 2022-12-21 Les Laboratoires Servier Methods for cell-proliferation-related disorders

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010105243A1 (en) * 2009-03-13 2010-09-16 Agios Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for cell-proliferation-related disorders
WO2010111490A2 (en) * 2009-03-27 2010-09-30 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF THE THYMIC STROMAL LYMPHOPOIETIN (TSLP) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)

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