JP2017176047A - Methods of manufacturing containers - Google Patents

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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide production methods of producing a container in which a functional membrane is arranged also in the corner of the bottom surface of the container.SOLUTION: The present invention provides a production method of producing a container 10 for containing cells using a female mold 46 in which a crevice 48 specifying the outer shape of the container is formed; and a male mold 41 which has a core 43 arranged in the crevice and which forms a cavity cy for molding a container between the male mold and the female mold. The production method comprises filling the cavity with a molding material in a state where a base material 13 having on the surface of one side a functional membrane 20 having a function to the cells is contained in the cavity. The base material is contained within the cavity such that a part of the functional membrane covers a tip surface 44 of the core while at least a portion of the edge 21 of the functional membrane is estranged from the tip surface and positioned in the cavity.SELECTED DRAWING: Figure 2

Description

本発明は、細胞を収容するための容器の製造方法、とりわけ細胞に対する機能を持つ機能膜を有した容器の製造方法に関する。   The present invention relates to a method for producing a container for containing cells, and more particularly to a method for producing a container having a functional membrane having a function for cells.

例えば、実用新案文献1に示すように、細胞を収容する容器が利用に供されている。このような容器では、収容対象となる細胞に対して何らかの機能を有した機能膜が、その底面に設けられることがある。実用新案文献1では、容器の底面に親水性を付与するための親水性膜が設けられている。   For example, as shown in Utility Model Document 1, containers that contain cells are used. In such a container, a functional film having some function for cells to be accommodated may be provided on the bottom surface. In Utility Model Document 1, a hydrophilic film for imparting hydrophilicity is provided on the bottom surface of the container.

実用新案文献1では、機能膜を容器底面の全域に安定して形成することを目的として、予め作製した機能膜を用いて、インモールド成形により、容器を製造することを提案している。実用新案文献1で開示された製造方法では、容器の底面を規定するコアの先端面を機能膜で覆った状態にて、溶融樹脂がキャビティ内に供給される。   Utility Model Document 1 proposes that a container is manufactured by in-mold molding using a functional film prepared in advance for the purpose of stably forming the functional film over the entire bottom surface of the container. In the manufacturing method disclosed in Utility Model Document 1, the molten resin is supplied into the cavity in a state where the front end surface of the core that defines the bottom surface of the container is covered with a functional film.

実開平5−88299号公報Japanese Utility Model Publication No. 5-88299

インモールド成形を用いることで、機能膜を概ね容器底面に配置することができる。しかしながら、容器に収容される細胞は、微細であり、機能膜の容器底面への位置決めを高精度に実施する必要がある。すなわち、実用新案文献1で開示された容器では、機能膜が十分な精度で配置されないこと、典型的には、機能膜が容器底面の隅部まで十分に延び広がらないことが予想される。この場合、容器の製造精度に起因して、容器底面の隅部上に位置する細胞に対し、所望の処理を十分に行うことができないことになる。とりわけ、極めて高価な細胞シート等の処理が容器内で実施され得ることを考慮すると、容器底面の隅部まで機能膜を確実に敷き詰めることは、重大な問題と言える。   By using in-mold molding, the functional film can be generally disposed on the bottom surface of the container. However, the cells accommodated in the container are fine, and it is necessary to position the functional film on the bottom surface of the container with high accuracy. In other words, in the container disclosed in Utility Model Document 1, it is expected that the functional film is not arranged with sufficient accuracy, and typically, the functional film does not sufficiently extend to the corner of the bottom surface of the container. In this case, due to the manufacturing accuracy of the container, the desired treatment cannot be sufficiently performed on the cells located on the corners of the bottom surface of the container. In particular, considering that processing of extremely expensive cell sheets or the like can be performed in the container, it can be said that it is a serious problem to spread the functional film to the corners of the bottom surface of the container.

本発明は、このような点を考慮してなされたものであり、機能膜が容器底面の隅部で有効に機能し得るように配置されている容器を製造する方法を提供することを目的とする。   The present invention has been made in consideration of such points, and an object of the present invention is to provide a method of manufacturing a container in which a functional film is arranged so that it can function effectively at the corners of the bottom surface of the container. To do.

本発明による容器の製造方法は、
細胞を収容するための容器を、前記容器の外形状を規定する凹部が形成された雌型と、前記凹部内に配置されるコアを有し前記雌型との間に前記容器を成形するためのキャビティを形成する雄型と、を用いて製造する容器の製造方法であって、
前記細胞に対する機能を持つ機能膜を片側の面に有した基材を前記キャビティ内に収容した状態で、前記キャビティ内に成形材料を充填する工程を備え、
前記基材は、前記機能膜の一部分が前記コアの先端面を覆うとともに、前記機能膜の縁部の少なくとも一部分が前記先端面から離間して前記キャビティ内に位置するように、前記キャビティ内に収容される。
The method for producing a container according to the present invention comprises:
In order to mold a container for containing cells between a female mold in which a recess defining an outer shape of the container is formed and a female mold having a core disposed in the recess. A male mold that forms a cavity of
A step of filling the cavity with a molding material in a state where a base material having a functional membrane having a function for cells on one side is accommodated in the cavity;
The base material is formed in the cavity such that a part of the functional film covers the tip surface of the core and at least a part of an edge of the functional film is located in the cavity apart from the tip surface. Be contained.

本発明による容器の製造方法において、前記基材は、前記機能膜が前記コアの前記先端面の全域を覆うとともに、前記機能膜の縁部が、その全周において、前記先端面から離間して前記キャビティ内に位置するように、前記キャビティ内に収容されてもよい。   In the method for manufacturing a container according to the present invention, the base material is configured such that the functional film covers the entire area of the tip surface of the core, and the edge of the functional film is separated from the tip surface on the entire circumference. You may accommodate in the said cavity so that it may be located in the said cavity.

本発明による容器の製造方法が、前記機能膜を予備成形型のキャビティ内に収容した状態で前記予備成形型の前記キャビティ内に成形材料を充填して、前記基材を成形する工程を、さらに備えるようにしてもよい。   The method for producing a container according to the present invention further includes a step of filling the cavity of the preform with a molding material in a state where the functional film is accommodated in the cavity of the preform, and molding the base material. You may make it prepare.

本発明によれば、機能膜が容器底面の隅部においても有効に機能することができる容器を製造することができる。   According to the present invention, it is possible to manufacture a container in which the functional membrane can function effectively even at the corners of the bottom surface of the container.

図1は、本発明の一実施の形態を説明するための図であって、容器を示す斜視図である。FIG. 1 is a perspective view showing a container for explaining an embodiment of the present invention. 図2は、図1の容器の縦断面図である。FIG. 2 is a longitudinal sectional view of the container of FIG. 図2Aは、図2に対応する図であって、容器の一変形例を示す縦断面図である。FIG. 2A is a longitudinal sectional view corresponding to FIG. 2 and showing a modified example of the container. 図3は、図1の容器の底部を示す平面図である。FIG. 3 is a plan view showing the bottom of the container of FIG. 図4は、図1の容器の製造方法を説明するための図である。FIG. 4 is a view for explaining a method of manufacturing the container of FIG. 図5は、図1の容器の製造方法を説明するための図である。FIG. 5 is a view for explaining a method of manufacturing the container of FIG. 図6は、図1の容器の製造方法を説明するための図である。FIG. 6 is a view for explaining a method of manufacturing the container of FIG. 図7は、図1の容器の製造方法を説明するための図である。FIG. 7 is a view for explaining a method of manufacturing the container of FIG. 図8は、図1に対応する図であって、容器の他の変形例を示す斜視図である。8 is a perspective view corresponding to FIG. 1 and showing another modified example of the container. 図9は、図1に対応する図であって、容器のさらに他の変形例を示す斜視図である。FIG. 9 is a perspective view corresponding to FIG. 1 and showing still another modified example of the container. 図10は、図2に対応する図であって、図9の容器の縦断面図である。FIG. 10 is a view corresponding to FIG. 2 and a longitudinal sectional view of the container of FIG. 図11は、図6に対応する図であって、図9の容器の製造方法を説明するための図である。FIG. 11 is a view corresponding to FIG. 6 and illustrating the method for manufacturing the container of FIG. 図12は、図10に対応する図であって、図9の容器の製造方法の他の例を説明するための図である。FIG. 12 is a view corresponding to FIG. 10 for explaining another example of the method for manufacturing the container of FIG.

以下、図面を参照して本発明の一実施の形態について説明する。なお、本件明細書に添付する図面においては、図示と理解のしやすさの便宜上、適宜縮尺および縦横の寸法比等を、実物のそれらから変更し誇張してある。   Hereinafter, an embodiment of the present invention will be described with reference to the drawings. In the drawings attached to the present specification, for the sake of illustration and ease of understanding, the scale, the vertical / horizontal dimension ratio, and the like are appropriately changed and exaggerated from those of the actual product.

図1〜図12は、本発明の一実施の形態およびその変形例を説明するための図である。このうち、図1及び図2は、それぞれ、容器を示す斜視図または縦断面図であり、図3は、容器の底部を切り出して示す平面図である。   1-12 is a figure for demonstrating one Embodiment and its modification of this invention. Among these, FIG.1 and FIG.2 is a perspective view or longitudinal cross-sectional view which respectively shows a container, FIG. 3 is a top view which cuts out and shows the bottom part of a container.

図1及び図2に示すように、容器10は、底部11及び側壁部12を有している。容器10は、底部11によって形成される底面10aと、側壁部12によって形成される内壁面10b及び外壁面10cと、を有している。容器10は、底面10a及び内壁面10bによって画成された収容スペースSを有している。容器10は、その収容スペースSに細胞を収容することを意図されている。そして、容器10の底面10aの少なくとも一部分は、収容した細胞に対して所定の機能を発揮し得る機能膜20によって形成されている。とりわけ以下に説明する容器の製造方法では、機能膜20を、内壁面10bとの境界を画成する底面10aの隅部まで確実に形成するための工夫がなされている。すなわち、以下に説明する製造方法で製造された容器10によれば、機能膜20の機能に起因した作用を、細胞に対して有効に及ぼすことができる。   As shown in FIGS. 1 and 2, the container 10 has a bottom portion 11 and a side wall portion 12. The container 10 has a bottom surface 10 a formed by the bottom portion 11, and an inner wall surface 10 b and an outer wall surface 10 c formed by the side wall portion 12. The container 10 has a storage space S defined by a bottom surface 10a and an inner wall surface 10b. The container 10 is intended to store cells in the storage space S thereof. At least a part of the bottom surface 10a of the container 10 is formed by a functional film 20 that can exhibit a predetermined function with respect to the contained cells. In particular, in the container manufacturing method described below, a contrivance is made to reliably form the functional film 20 up to the corner of the bottom surface 10a that defines the boundary with the inner wall surface 10b. That is, according to the container 10 manufactured with the manufacturing method demonstrated below, the effect | action resulting from the function of the functional film 20 can be exerted effectively with respect to a cell.

まず、容器10の構成について説明する。上述のように、容器10は、底部11及び側壁部12を有する。なお、底部11及び側壁部12は、部位に応じた区分けであり、後述する製造方法の説明からも明らかとなるように、製造工程に基づく区分け、境界又は境界に必ずしも一致するわけではない。例えば、順に実施される製造工程の間に形成される界面isが、図2Aに示すように、底部11内に位置するようにしてもよい。   First, the configuration of the container 10 will be described. As described above, the container 10 has the bottom part 11 and the side wall part 12. In addition, the bottom part 11 and the side wall part 12 are division according to a site | part and do not necessarily correspond to the division based on a manufacturing process, a boundary, or a boundary so that it may become clear also from description of the manufacturing method mentioned later. For example, the interface is formed during the manufacturing steps that are sequentially performed may be located in the bottom 11 as shown in FIG. 2A.

図2に示すように、底部11は、板状に形成された、互いに対向する第1面11a及び第2面11bを有している。第1面11aは、容器10が使用される状態において上方を向く面であり、平坦面となっている。第2面11bは、容器10が使用される状態において下方を向く面である。第1面11aは、その一部分において、容器10の底面10aを形成する。また、底部11の第1面11aには、側壁部12が設けられている。図2に示すように、側壁部12は、底部11の第1面11aから立ち上がっている。図1に示された例において、側壁部12は、第1面11a上において、周状に形成されている。側壁部12は、側壁部12が形成する周を基準とした内側となる面として、内壁面10bを形成している。また、側壁部12は、側壁部12が形成する周を基準とした外側となる面として、外壁面10cを形成している。   As shown in FIG. 2, the bottom part 11 has the 1st surface 11a and the 2nd surface 11b which were formed in plate shape and mutually opposed. The first surface 11a is a surface facing upward when the container 10 is used, and is a flat surface. The second surface 11b is a surface facing downward when the container 10 is used. The first surface 11a forms a bottom surface 10a of the container 10 in a part thereof. A side wall 12 is provided on the first surface 11 a of the bottom 11. As shown in FIG. 2, the side wall portion 12 rises from the first surface 11 a of the bottom portion 11. In the example shown in FIG. 1, the side wall portion 12 is formed in a circumferential shape on the first surface 11a. The side wall portion 12 forms an inner wall surface 10b as an inner surface with reference to the circumference formed by the side wall portion 12. Moreover, the side wall part 12 forms the outer wall surface 10c as a surface which becomes the outer side on the basis of the circumference which the side wall part 12 forms.

ここで図3は、側壁部12を省いて、底部11を第1面11aの側から示す平面図である。図3における点線は、第1面11aのうちの内壁面10bと接続する位置を示している。図3に示すように、第1面11aは、側壁部12で覆われた周辺領域caと、周辺領域caに囲まれた底面領域baと、を含んでいる。図示された例において、底面領域baは、側壁部12によって取り囲まれた領域であって、容器10の底面10aを形成する。また、図示された例において、周辺領域caは、第1面11aの周縁部となっている。   Here, FIG. 3 is a plan view showing the bottom portion 11 from the first surface 11a side with the side wall portion 12 omitted. A dotted line in FIG. 3 indicates a position connected to the inner wall surface 10b of the first surface 11a. As shown in FIG. 3, the first surface 11 a includes a peripheral region ca covered with the side wall portion 12 and a bottom surface region ba surrounded by the peripheral region ca. In the illustrated example, the bottom surface region ba is a region surrounded by the side wall portion 12 and forms the bottom surface 10 a of the container 10. In the illustrated example, the peripheral area ca is the peripheral edge of the first surface 11a.

図2に戻って、底部11は、機能膜20を第1面11aに有している。すなわち、機能膜20が、第1面11aの少なくとも一部分を形成する。さらに、この機能膜20は、図2及び図3に示すように、周辺領域caと底面領域baとに跨がって設けられている。したがって、機能膜20が周辺領域caと底面領域baとに跨がって延びている部分において、機能膜20は、内壁面10bとの境界となる底面10aの隅部まで確実に延び広がる。図示された例において、機能膜20は、底面領域baの全域において、第1面11aを形成している。また、機能膜20の縁部21は、その全周にわたって、周辺領域ca内に位置している。すなわち、機能膜20の縁部21は、周辺領域caの内側縁と外側縁との間に位置している。さらに言い換えると、機能膜20の縁部21は、第1面11aのうちの内壁面10bに接続した位置と外壁面10cに接続した位置との間に位置している。したがって、図示された例において、容器10の底面10aは、底部11の機能膜20によって形成され、しかも、底面10aの全隅部に延び広がっている。   Returning to FIG. 2, the bottom 11 has the functional film 20 on the first surface 11 a. That is, the functional film 20 forms at least a part of the first surface 11a. Further, as shown in FIGS. 2 and 3, the functional film 20 is provided across the peripheral area ca and the bottom area ba. Therefore, in the part where the functional film 20 extends over the peripheral region ca and the bottom surface region ba, the functional film 20 extends and spreads reliably to the corner of the bottom surface 10a that becomes the boundary with the inner wall surface 10b. In the illustrated example, the functional film 20 forms the first surface 11a in the entire bottom region ba. Further, the edge portion 21 of the functional film 20 is located in the peripheral region ca over the entire circumference. That is, the edge 21 of the functional film 20 is located between the inner edge and the outer edge of the peripheral region ca. In other words, the edge 21 of the functional film 20 is located between the position connected to the inner wall surface 10b and the position connected to the outer wall surface 10c of the first surface 11a. Therefore, in the illustrated example, the bottom surface 10a of the container 10 is formed by the functional film 20 of the bottom portion 11, and further extends and extends to all corners of the bottom surface 10a.

以上のような構成からなる容器10において、底部11の機能膜20以外の部分と、側壁部12は、例えば、樹脂材料から形成される。使用され得る樹脂材料として、ポリスチレン樹脂、ポリエステル樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリプロピレン樹脂、ABS樹脂、ナイロン、アクリル樹脂、フッ素樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、メチルペンテン樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、塩化ビニル樹脂等の樹脂材料、表面親水化処理を施した上記の少なくとも1種を含む樹脂材料を例示することができる。なお、容器10に収容された細胞の観察を可能とするため、底部11及び側壁部12は、透明であることが好ましい。また、底部11及び側壁部12は、一体的に形成されて、その間に界面が観察されないようにしてもよいし、別体として形成されて接合され、その間に界面が観察されるようにしてもよい。   In the container 10 configured as described above, the portion other than the functional film 20 of the bottom portion 11 and the side wall portion 12 are formed of, for example, a resin material. As resin materials that can be used, polystyrene resin, polyester resin, polyethylene resin, polyethylene terephthalate resin, polypropylene resin, ABS resin, nylon, acrylic resin, fluororesin, polycarbonate resin, polyurethane resin, methylpentene resin, phenol resin, melamine resin, Examples thereof include resin materials such as epoxy resins and vinyl chloride resins, and resin materials containing at least one of the above-described surface hydrophilized treatments. In addition, in order to enable observation of the cells accommodated in the container 10, the bottom part 11 and the side wall part 12 are preferably transparent. Further, the bottom portion 11 and the side wall portion 12 may be formed integrally so that the interface is not observed between them, or may be formed as a separate body and joined, and the interface may be observed between them. Good.

次に、機能膜20について説明する。機能膜20は、上述したように、容器10に収容された細胞等の収容物に対し所定の機能の発現を期待された膜である。機能膜20に期待される機能は、特に限定されないが、一例として、所定の刺激によって細胞接着性から細胞非接着性へと変化することが可能な表面を有する刺激応答性ポリマーや、1つ以上のエチレングリコール単位(CH−CH−O)からなるエチレングリコール鎖等の親水性化合物を用いた機能性有機化合物膜として、機能膜20を形成することができる。機能膜20の膜厚は、例えば、0.5nm以上300nm以下の範囲内とするとよく、なかでも1nm以上100nm以下の範囲内であることが好ましい。 Next, the functional film 20 will be described. As described above, the functional membrane 20 is a membrane that is expected to exhibit a predetermined function with respect to the contained matter such as cells contained in the container 10. The function expected of the functional film 20 is not particularly limited, but as an example, a stimulus-responsive polymer having a surface that can be changed from cell-adhesive to non-cell-adhesive by a predetermined stimulus, one or more The functional film 20 can be formed as a functional organic compound film using a hydrophilic compound such as an ethylene glycol chain composed of an ethylene glycol unit (CH 2 —CH 2 —O). The film thickness of the functional film 20 is, for example, preferably in the range of 0.5 nm to 300 nm, and more preferably in the range of 1 nm to 100 nm.

以下、「刺激応答性ポリマー膜」及び「親水性化合物膜」の好適な実施形態について説明する。   Hereinafter, preferred embodiments of the “stimulus responsive polymer film” and the “hydrophilic compound film” will be described.

<刺激応答性ポリマー膜>
刺激応答性ポリマー膜とは、所定の刺激によって表面の細胞に対する接着度合いが変化するポリマーを含む膜である。すなわち、刺激応答性ポリマー膜として、刺激の有無に応じて細胞との接着性を変化させる膜を例示することができる。このような刺激応答性ポリマー膜は、底面10a上において細胞を培養することで細胞シートを作製することを意図された容器10に適用され得る。この用途において、細胞シートは、容器10の底面10a上に接着した状態で作製され得る。作製された細胞シートは、非常に損傷を受けやすい。したがって、細胞シートを容器10から取り出す際、底面10aへの接着強度の大きさやばらつきに応じ、細胞シートに破れ等の損傷を生じさせる可能性がある。容器底面10aの細胞シートに対する接着性を変化させることが可能な刺激応答性ポリマー膜を用いた場合、細胞シートを安定して容器10内で作製することを可能にするとともに、破れ等の損傷を回避しながら細胞シートを容器10から取り出すことが可能となる。
<Stimulus-responsive polymer film>
The stimulus-responsive polymer film is a film containing a polymer whose degree of adhesion to cells on the surface is changed by a predetermined stimulus. That is, examples of the stimulation-responsive polymer film include a film that changes the adhesion with cells depending on the presence or absence of stimulation. Such a stimulus-responsive polymer film can be applied to the container 10 intended to produce a cell sheet by culturing cells on the bottom surface 10a. In this application, the cell sheet can be produced in a state of being adhered on the bottom surface 10 a of the container 10. The produced cell sheet is very susceptible to damage. Therefore, when the cell sheet is taken out from the container 10, there is a possibility that the cell sheet may be damaged such as tearing depending on the magnitude and variation of the adhesive strength to the bottom surface 10 a. When a stimulus-responsive polymer film capable of changing the adhesion of the container bottom surface 10a to the cell sheet is used, the cell sheet can be stably produced in the container 10, and damage such as tearing can be caused. The cell sheet can be taken out from the container 10 while avoiding it.

刺激応答性ポリマーとしては、温度応答性ポリマー、pH応答性ポリマー、イオン応答性ポリマー、光応答性ポリマー等を挙げることができる。なかでも温度応答性ポリマーが、刺激の付与が容易であることから好ましい。   Examples of the stimulus responsive polymer include a temperature responsive polymer, a pH responsive polymer, an ion responsive polymer, and a photoresponsive polymer. Among these, a temperature-responsive polymer is preferable because it is easy to give a stimulus.

温度応答性ポリマーとして、例えば、細胞を培養する際の温度では細胞接着性を示し、作製した細胞シートを剥離する際の温度では細胞非接着性を示すものを用いるとよい。例えば、温度応答性ポリマーは、臨界溶解温度未満の温度では周囲の水に対する親和性が向上し、ポリマーが水を取り込んで膨潤して表面に細胞を接着しにくくする性質、すなわち細胞非接着性を示し、臨界溶解温度以上の温度ではポリマーから水が脱離することでポリマーが収縮して表面に細胞を接着しやすくする性質、すなわち細胞接着性を示すものを用いるとよい。このような臨界溶解温度は、下限臨界溶解温度と呼ばれる。下限臨界溶解温度Tが0℃〜80℃、さらに好ましくは0℃〜50℃である温度応答性ポリマーを用いるとよい。Tが0℃〜80℃であると、細胞を安定的に培養できるからである。なお、臨界溶解温度以上の温度で細胞非接着性を示し且つ臨界溶解温度未満の温度で細胞接着性を示す温度応答性ポリマーを用いて、機能膜20を形成することも可能である。   As the temperature-responsive polymer, for example, a polymer that exhibits cell adhesiveness at a temperature when cells are cultured and exhibits cell non-adhesiveness at a temperature when the produced cell sheet is peeled may be used. For example, a temperature-responsive polymer has an improved affinity for surrounding water at temperatures below the critical dissolution temperature, and the property that the polymer takes up water and swells to make it difficult for cells to adhere to the surface, that is, cell non-adhesiveness. It is preferable to use a material that exhibits a property of facilitating the adhesion of cells to the surface by desorption of water from the polymer at a temperature equal to or higher than the critical dissolution temperature, that is, cell adhesion. Such a critical solution temperature is called a lower critical solution temperature. A temperature-responsive polymer having a lower critical solution temperature T of 0 ° C. to 80 ° C., more preferably 0 ° C. to 50 ° C. may be used. This is because the cells can be stably cultured when T is 0 ° C to 80 ° C. It is also possible to form the functional film 20 using a temperature-responsive polymer that exhibits cell non-adhesion at a temperature equal to or higher than the critical lysis temperature and exhibits cell adhesion at a temperature lower than the critical lysis temperature.

好適な温度応答性ポリマーとしてはアクリル系ポリマー又はメタクリル系ポリマーが挙げられる。具体的に好適な温度応答性ポリマーとしては、例えばポリ−N−イソプロピルアクリルアミド(T=32℃)、ポリ−N−n−プロピルアクリルアミド(T=21℃)、ポリ−N−n−プロピルメタクリルアミド(T=32℃)、ポリ−N−エトキシエチルアクリルアミド(T=約35℃)、ポリ−N−テトラヒドロフルフリルアクリルアミド(T=約28℃)、ポリ−N−テトラヒドロフルフリルメタクリルアミド(T=約35℃)、及びポリ−N,N−ジエチルアクリルアミド(T=32℃)等が挙げられる。   Suitable temperature-responsive polymers include acrylic polymers or methacrylic polymers. Specific examples of suitable temperature-responsive polymers include poly-N-isopropylacrylamide (T = 32 ° C.), poly-Nn-propyl acrylamide (T = 21 ° C.), and poly-Nn-propyl methacrylamide. (T = 32 ° C.), poly-N-ethoxyethyl acrylamide (T = about 35 ° C.), poly-N-tetrahydrofurfuryl acrylamide (T = about 28 ° C.), poly-N-tetrahydrofurfuryl methacrylamide (T = About 35 ° C.), and poly-N, N-diethylacrylamide (T = 32 ° C.).

これらのポリマーを形成するためのモノマーとしては、放射線照射によって重合し得るモノマーを用いることができる。モノマーとしては例えば、(メタ)アクリルアミド化合物、N−(若しくはN,N−ジ)アルキル置換(メタ)アクリルアミド誘導体、環状基を有する(メタ)アクリルアミド誘導体、及びビニルエーテル誘導体等が挙げられ、これらの一種以上を使用してよい。モノマーが一種類単独で使用された場合、形成されるポリマーはホモポリマーとなり、モノマーが複数種一緒に使用された場合、ポリマーはヘテロポリマーとなるが、どちらの形態も可能である。   As a monomer for forming these polymers, a monomer that can be polymerized by irradiation with radiation can be used. Examples of the monomer include (meth) acrylamide compounds, N- (or N, N-di) alkyl-substituted (meth) acrylamide derivatives, (meth) acrylamide derivatives having a cyclic group, vinyl ether derivatives, and the like. The above may be used. When a single monomer is used alone, the polymer formed is a homopolymer, and when multiple monomers are used together, the polymer is a heteropolymer, but either form is possible.

また、増殖細胞の種類によってTを調節する必要がある場合や、被覆物質と細胞培養支持体との相互作用を高める必要が生じた場合や、細胞支持体の親水・疎水性のバランスを調整する必要がある場合等には、上記以外の他のモノマー類をさらに加えて共重合してよい。さらに上記ポリマーとその他のポリマーとのグラフト又はブロック共重合体、あるいは、上記ポリマーと他のポリマーとの混合物を用いてもよい。また、ポリマー本来の性質が損なわれない範囲で架橋することも可能である。   In addition, when it is necessary to adjust T depending on the type of proliferating cell, when it is necessary to enhance the interaction between the coating substance and the cell culture support, and the balance between the hydrophilicity and hydrophobicity of the cell support is adjusted. If necessary, other monomers other than those described above may be further added for copolymerization. Further, a graft or block copolymer of the above polymer and another polymer, or a mixture of the above polymer and another polymer may be used. Moreover, it is also possible to crosslink within a range where the original properties of the polymer are not impaired.

pH応答性ポリマー及びイオン応答性ポリマーは、容器10に収容される細胞に適したものを適宜選択することができる。   As the pH responsive polymer and the ion responsive polymer, those suitable for the cells accommodated in the container 10 can be appropriately selected.

刺激応答性ポリマー膜は、重合して目的の刺激応答性ポリマーを形成するモノマーと、該モノマーを溶解しうる有機溶媒と含む塗布用組成物を調製し、これを慣用の塗布方法に従って、支持材の表面に塗布して塗膜を形成し、次に、該塗膜に放射線照射等の適当な手段により塗膜中のモノマーを重合してポリマーを形成するとともに、支持材の表面とポリマーとの間にグラフト化反応を生じさせることにより形成することができる。   The stimulus-responsive polymer film is prepared by preparing a coating composition containing a monomer that is polymerized to form a target stimulus-responsive polymer and an organic solvent that can dissolve the monomer. The film is applied to the surface of the substrate to form a coating film, and then the monomer in the coating film is polymerized by an appropriate means such as radiation irradiation to form a polymer. It can be formed by causing a grafting reaction in between.

<親水性化合物層>
機能膜20の他の例として、一つ以上のエチレングリコール単位からなるエチレングリコール鎖(複数のエチレングリコール単位からなるエチレングリコール鎖は、「ポリエチレングリコール鎖」ということができる)等の親水性化合物の層が挙げられる。エチレングリコール鎖の末端は水酸基により封鎖された形態であってもよいし、エチレングリコール鎖の末端に生体関連物質等の他の物質が共有結合により連結された形態であってもよい。末端が水酸基により封鎖されたエチレングリコール鎖を含む層は、細胞が接着し難い親水性の表面を提供することができる。
<Hydrophilic compound layer>
Another example of the functional film 20 is a hydrophilic compound such as an ethylene glycol chain composed of one or more ethylene glycol units (an ethylene glycol chain composed of a plurality of ethylene glycol units can be referred to as a “polyethylene glycol chain”). Layer. The terminal of the ethylene glycol chain may be in a form blocked with a hydroxyl group, or the terminal of the ethylene glycol chain may be in a form in which another substance such as a biological substance is linked by a covalent bond. A layer containing an ethylene glycol chain whose end is blocked with a hydroxyl group can provide a hydrophilic surface to which cells are difficult to adhere.

エチレングリコール鎖の末端に共有結合されうる生体関連物質としては、抗原、抗体、DNA、RNA、ペプチド、ホルモン、酵素、サイトカイン、糖鎖、脂質、補酵素、酵素阻害剤、細胞、その他の機能を有するタンパク質が含まれる。さらに、このような生体関連物質と親和性を有する低分子化合物、及び高分子化合物も生体関連物質の範囲に含まれる。   Examples of biological substances that can be covalently bonded to the end of an ethylene glycol chain include antigens, antibodies, DNA, RNA, peptides, hormones, enzymes, cytokines, sugar chains, lipids, coenzymes, enzyme inhibitors, cells, and other functions. The protein which has is included. Furthermore, the low molecular weight compound which has affinity with such a biological substance, and a high molecular compound are also contained in the range of a biological substance.

エチレングリコール鎖等の親水性化合物の層を、支持材の表面に固定化するためには、予め、支持材の表面に、該表面に物理的に吸着可能であって、エチレングリコール鎖の末端の水酸基と反応して共有結合を形成可能な官能基を側鎖に含むポリシロキサンを含む下地層を設ける。ポリシロキサンの側鎖上の官能基としては、グリシジル基又はエポキシ基が好ましい。下地層は、支持材の表面に、所望の側鎖を有するシラノール化合物を適用し、該表面上で縮合重合してポリシロキサンに変換することにより形成することができる。   In order to immobilize a layer of a hydrophilic compound such as an ethylene glycol chain on the surface of the support material, it can be physically adsorbed on the surface of the support material in advance, and the end of the ethylene glycol chain can be immobilized. An underlayer containing polysiloxane containing a functional group capable of reacting with a hydroxyl group to form a covalent bond in the side chain is provided. The functional group on the side chain of the polysiloxane is preferably a glycidyl group or an epoxy group. The underlayer can be formed by applying a silanol compound having a desired side chain to the surface of the support material, and performing condensation polymerization on the surface to convert it into polysiloxane.

次いで、プライマー層の官能基と、エチレングリコール又はエチレングリコール単位が二以上繰り返されたポリエチレングリコールの水酸基とを反応させて共有結合を形成し、エチレングリコール鎖を固定化する。このとき、触媒量の濃硫酸を含むエチレングリコール又はポリエチレングリコールをプライマー層に接触させる。末端が水酸基により封鎖されたエチレングリコール鎖を含む層はこのようにして形成される。   Next, the functional group of the primer layer is reacted with a hydroxyl group of polyethylene glycol in which two or more ethylene glycol or ethylene glycol units are repeated to form a covalent bond, thereby immobilizing the ethylene glycol chain. At this time, ethylene glycol or polyethylene glycol containing a catalytic amount of concentrated sulfuric acid is brought into contact with the primer layer. A layer containing ethylene glycol chains whose ends are blocked with hydroxyl groups is formed in this way.

さらに、必要に応じて、エチレングリコール鎖の一端に、他の物質との共有結合を形成することが可能な、少なくとも1つの官能基を直接的又は間接的に連結させる。官能基の導入方法は特に限定されない。   Furthermore, if necessary, at least one functional group capable of forming a covalent bond with another substance is directly or indirectly linked to one end of the ethylene glycol chain. The method for introducing the functional group is not particularly limited.

次に、以上のような構成からなる容器10の製造方法の一例について説明する。以下に説明する製造方法は、支持層16上に機能膜20を成膜することで機能性基体15を作製する第1の工程と、機能性基体15を用いたインモールド成形により基材13を作製する第2の工程と、基材13を用いたインモールド成形により容器10を作製する第3の工程と、を有している。   Next, an example of a method for manufacturing the container 10 having the above configuration will be described. In the manufacturing method described below, the substrate 13 is formed by in-mold molding using the functional substrate 15 in the first step of forming the functional substrate 15 by forming the functional film 20 on the support layer 16. It has the 2nd process to produce, and the 3rd process to produce container 10 by in-mold molding using base material 13.

まず、図4に示された機能性基体15を作製する第1の工程について説明する。図示された機能性基体15は、機能膜20と、機能膜20を支持する支持層16と、を有している。支持層16は、機能膜20を作製する際の支持材として機能する。   First, the first step for producing the functional substrate 15 shown in FIG. 4 will be described. The illustrated functional substrate 15 includes a functional film 20 and a support layer 16 that supports the functional film 20. The support layer 16 functions as a support material when the functional film 20 is produced.

支持層16上への機能膜20の形成は、具体的には、次のようにして実施され得る。まず、硬化または乾燥することにより機能膜20をなすようになる組成物を、支持層16上に塗布する。塗布方法は特に限定されることなく、種々の方式、例えばバーコート、ロールコート、グラビアコートを使用することができる。次に、必要に応じて支持層16上の塗膜の固化処理を実施する。固化処理は、塗膜の組成に応じた方法が採用され、一例として、塗膜への電子線照射により実施される。その後、塗膜をスプレー洗浄することで、塗膜の厚さを調整する。なお、厚み調整を円滑に実施するため、スプレー洗浄の前に、支持層16とともに塗膜を水に浸漬させ、塗膜を膨潤させておいてもよい。最後に塗膜を乾燥させることによって、支持層16と、塗膜からなる機能膜20と、を有した機能性基体15を得ることができる。   Specifically, the formation of the functional film 20 on the support layer 16 can be performed as follows. First, a composition that forms the functional film 20 by being cured or dried is applied on the support layer 16. The application method is not particularly limited, and various methods such as bar coating, roll coating, and gravure coating can be used. Next, the solidification process of the coating film on the support layer 16 is implemented as needed. For the solidification treatment, a method according to the composition of the coating film is employed, and as an example, the coating process is performed by electron beam irradiation on the coating film. Then, the thickness of a coating film is adjusted by spray-cleaning a coating film. In order to smoothly adjust the thickness, the coating film may be immersed in water together with the support layer 16 and swollen before spray cleaning. Finally, by drying the coating film, the functional substrate 15 having the support layer 16 and the functional film 20 made of the coating film can be obtained.

なお、「基体」とは、所定の構造を有している限り、フィルムであってもよいし、板状体であってもよい。フィルム状の機能性基体15は、好ましくはロール状に巻き取り可能な可撓性を有するものである。可撓性の機能性基体15は、ロール・ツー・ロール法による大量生産が容易であるため好ましい。支持層16と機能膜20との間には必要に応じて1つ以上の他の層(例えば前述の下地層)が存在していてもよい。機能性基体15の平面視での形状は、容器10の底面10aの形状に応じた任意の形状とすることができる。例えば、三角形、四角形(長方形、正方形、平行四辺形、菱形等)、五角形、六角形、七角形、八角形等の多角形や、円形、楕円形等の形状とすることができる。   The “base” may be a film or a plate as long as it has a predetermined structure. The film-like functional substrate 15 is preferably flexible so that it can be wound into a roll. The flexible functional substrate 15 is preferable because mass production by a roll-to-roll method is easy. One or more other layers (for example, the above-described underlayer) may be present between the support layer 16 and the functional film 20 as necessary. The shape of the functional substrate 15 in plan view can be an arbitrary shape according to the shape of the bottom surface 10 a of the container 10. For example, it may be a polygon such as a triangle, a rectangle (rectangle, square, parallelogram, rhombus, etc.), a pentagon, a hexagon, a heptagon, an octagon, a circle, an ellipse, or the like.

支持層16は、最終的な機能性基体15に応じて適宜選択される。機能性基体15が板状であれば板状の支持材が支持層16として用いられ、機能性基体15がフィルム状であればフィルム状の支持材が支持層16として用いられる。   The support layer 16 is appropriately selected according to the final functional substrate 15. If the functional substrate 15 is plate-shaped, a plate-shaped support material is used as the support layer 16, and if the functional substrate 15 is film-shaped, a film-shaped support material is used as the support layer 16.

支持層16の材料は、一方の表面に機能膜20を形成することが可能な樹脂材料等から適宜選択することができるが、材料の種類は特に限定されない。典型的には、支持層16の材料として、ポリエチレンテレフタレート(PET)、ポリスチレン(PS)、ポリカーボネート(PC)、TAC(トリアセチルセルロース)、ポリイミド(PI)、ナイロン(Ny)、低密度ポリエチレン(LDPE)、中密度ポリエチレン(MDPE)、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリフェニレンサルファイド、ポリエーテルサルフォン、ポリエチレンナフタレート、ポリプロピレン、アクリル樹脂等を用いることができる。   The material of the support layer 16 can be appropriately selected from resin materials that can form the functional film 20 on one surface, but the type of the material is not particularly limited. Typically, as the material of the support layer 16, polyethylene terephthalate (PET), polystyrene (PS), polycarbonate (PC), TAC (triacetyl cellulose), polyimide (PI), nylon (Ny), low density polyethylene (LDPE) ), Medium density polyethylene (MDPE), polyvinyl chloride, polyvinylidene chloride, polyphenylene sulfide, polyether sulfone, polyethylene naphthalate, polypropylene, acrylic resin, and the like.

支持層16の、機能膜20が形成される側の表面は、易接着処理された表面であることができる。「易接着処理」とは、例えば、ポリエステル、アクリル酸エステル、ポリウレタン、ポリエチレンイミン、シランカップリング剤、ペルフルオロオクタンスルホン酸(PFOS)等の易接着剤による処理を指す。   The surface of the support layer 16 on the side on which the functional film 20 is formed can be a surface subjected to an easy adhesion treatment. “Easy adhesion treatment” refers to treatment with an easy adhesive such as polyester, acrylic ester, polyurethane, polyethyleneimine, silane coupling agent, perfluorooctane sulfonic acid (PFOS), and the like.

支持層16の厚さは適宜選択することができる。支持層16がフィルム材である場合、その厚さは、特に制限は無いが、例えば5〜500μm、より好ましくは20〜500μm、特に好ましくは50〜250μmとすることができる。   The thickness of the support layer 16 can be selected as appropriate. When the support layer 16 is a film material, the thickness is not particularly limited, but may be, for example, 5 to 500 μm, more preferably 20 to 500 μm, and particularly preferably 50 to 250 μm.

次に、機能性基体15を用いたインモールド成形により基材13を作製する第2の工程について説明する。   Next, the 2nd process which produces the base material 13 by the in-mold shaping | molding using the functional base | substrate 15 is demonstrated.

第2工程は、図5に示された予備成形型30を用いて実施される。予備成形型30は、第1型31および第2型36を有している。第1型31及び第2型36は、互いに接近して型締めした状態において、作製されるべき基材13の外形状に対応したキャビティcxを形成する。図示された例において、第1型31は、板状の外形状を有している。第1型31には、吸引手段に連通した吸着孔32が形成されている。一方、第2型36は、機能性基体15を収容し得る凹部38を有している。とりわけ図示された例において、凹部38は、第1型31の側に位置する第1凹部38aと、第1型31から離間する側に位置する第2凹部38bと、を含んでいる。第2凹部38bの開口形状は、第1凹部38aの開口形状よりも小さくなっている。すなわち、凹部38は、その内部に第2凹部38bの周縁を画成する段部38cを有し、段階的に先細りしている。第2型36には、成形材料源に通じた注入孔37が形成されている。注入孔37は、凹部38の第2凹部38bに通じている。   The second step is performed using the preforming die 30 shown in FIG. The preforming mold 30 has a first mold 31 and a second mold 36. The first mold 31 and the second mold 36 form a cavity cx corresponding to the outer shape of the base material 13 to be manufactured in a state where the molds are clamped close to each other. In the illustrated example, the first mold 31 has a plate-like outer shape. The first mold 31 is formed with a suction hole 32 communicating with the suction means. On the other hand, the second mold 36 has a recess 38 that can accommodate the functional substrate 15. In particular, in the illustrated example, the recess 38 includes a first recess 38 a located on the first mold 31 side and a second recess 38 b located on the side away from the first mold 31. The opening shape of the second recess 38b is smaller than the opening shape of the first recess 38a. That is, the recess 38 has a stepped portion 38c that defines the periphery of the second recess 38b therein, and is tapered stepwise. The second mold 36 is formed with an injection hole 37 leading to the molding material source. The injection hole 37 communicates with the second recess 38 b of the recess 38.

第2の工程は、予備成形工程として、インモールド成形により基材13を作製する。まず、図5に示すように、吸着孔32を塞ぐようにして、第1型31上に機能性基体15を配置する。このとき、機能性基体15の機能膜20が、吸着孔32に対面するようにする。吸着孔32を介した吸引により、機能性基体15が、第1型31に固定される。この状態で、第1型31と第2型36が、型締めされ、図5に示された状態に至る。   A 2nd process produces the base material 13 by in-mold shaping | molding as a preforming process. First, as shown in FIG. 5, the functional substrate 15 is disposed on the first mold 31 so as to block the suction holes 32. At this time, the functional film 20 of the functional substrate 15 is made to face the suction hole 32. The functional substrate 15 is fixed to the first mold 31 by suction through the suction holes 32. In this state, the first mold 31 and the second mold 36 are clamped to reach the state shown in FIG.

なお、図示された例において、機能膜20を含む機能性基体15の形状は、第2型36の凹部38の第1凹部38aの開口形状よりも小さくなっている。したがって、機能性基体15を第1型31に対して極めて高精度に位置決めすることなく、機能性基体15が、予備成形型30の型締め時に、第1型31と第2型36との間で潰されてしまうことを効果的に防止することができる。すなわち、第1型31に対する機能性基体15の位置決めを容易且つ迅速に実施することができる。   In the illustrated example, the shape of the functional base 15 including the functional film 20 is smaller than the opening shape of the first recess 38 a of the recess 38 of the second mold 36. Accordingly, the functional base 15 is positioned between the first mold 31 and the second mold 36 when the preform 30 is clamped without positioning the functional base 15 with respect to the first mold 31 with extremely high accuracy. Can be effectively prevented from being crushed. That is, positioning of the functional base 15 with respect to the first mold 31 can be performed easily and quickly.

その一方で、機能膜20を含む機能性基体15の形状は、第2型36の凹部38の第2凹部38bの開口形状よりも大きくなっている。図5に示された型締め状態において、機能性基体15の周縁部は、予備成形型30のキャビティcxを画成する凹部38の第1凹部38a内に位置している。そして、図5に示された型締め状態において、機能性基体15は、予備成形型30のキャビティcx内において、その周縁を第1型31と第2型36の段差部38cとの間で挟持されている。これにより、予備成形型30のキャビティcx内において、機能性基体15の保持が安定する。なお、凹部38の第1凹部38aの深さは、機能性基体15を損傷することなく収容し得る程度となっており、第2凹部38bの深さは、作製されるべき支持体14の厚みを考慮して決定される。   On the other hand, the shape of the functional substrate 15 including the functional film 20 is larger than the opening shape of the second recess 38 b of the recess 38 of the second mold 36. In the mold clamping state shown in FIG. 5, the peripheral edge portion of the functional base 15 is located in the first recess 38 a of the recess 38 that defines the cavity cx of the preform 30. In the mold clamping state shown in FIG. 5, the functional base 15 sandwiches the peripheral edge between the first mold 31 and the stepped portion 38 c of the second mold 36 in the cavity cx of the preforming mold 30. Has been. As a result, the functional substrate 15 is stably held in the cavity cx of the preforming die 30. The depth of the first recess 38a of the recess 38 is such that the functional base 15 can be accommodated without damage, and the depth of the second recess 38b is the thickness of the support 14 to be manufactured. Is determined in consideration of

次に、注入孔37を介して成形材料が、予備成形型30のキャビティcxに充填される。成形材料は、底部11の機能膜20以外の部分と側壁部12をなす材料として既に説明した材料とすることができる。成形材料をキャビティcx内に射出する際、機能性基体15は、機能膜20の全面が第1型31に接触した状態で、保持されている。また図示された例において、機能性基体15は、その周縁を第1型31及び第2型36によって挟持されている。したがって、高温高圧の成形材料、典型的には高温高圧の樹脂材料が予備成形型30のキャビティcx内に射出されたとしても、機能膜20の損傷や機能膜20に破れや皺が生じてしまうことを効果的に防止することができる。   Next, the molding material is filled into the cavity cx of the preforming die 30 through the injection hole 37. The molding material can be the material already described as the material that forms the side wall portion 12 and the portion other than the functional film 20 of the bottom portion 11. When the molding material is injected into the cavity cx, the functional substrate 15 is held in a state where the entire surface of the functional film 20 is in contact with the first mold 31. In the illustrated example, the periphery of the functional substrate 15 is sandwiched between the first mold 31 and the second mold 36. Therefore, even if a high-temperature and high-pressure molding material, typically a high-temperature and high-pressure resin material, is injected into the cavity cx of the preforming die 30, the functional film 20 is damaged or the functional film 20 is broken or wrinkled. This can be effectively prevented.

予備成形型30のキャビティcx内に射出された成形材料が、温度低下により固化することで、成形材料からなる支持体14が形成される。以上のようにして、支持体14と、支持体14上に支持された機能性基体15と、を有した基材13を得ることができる。   When the molding material injected into the cavity cx of the preforming mold 30 is solidified due to a decrease in temperature, the support 14 made of the molding material is formed. As described above, the substrate 13 having the support 14 and the functional substrate 15 supported on the support 14 can be obtained.

なお、支持体14と機能性基体15との密着性を改善するため、機能性基体15の支持層16のうちの支持体14と一体化される部分の表面が、ヒートシール性樹脂材料を含んでいてもよい。ヒートシール性樹脂材料は、高温の溶融樹脂との接触により溶融し、樹脂の固化とともに固化する。このため、機能性基体15と支持体14との接合をより強固にすることができる。   In order to improve the adhesion between the support 14 and the functional substrate 15, the surface of the portion of the support layer 16 of the functional substrate 15 that is integrated with the support 14 contains a heat-sealable resin material. You may go out. The heat-sealable resin material is melted by contact with a high-temperature molten resin and solidifies as the resin is solidified. For this reason, the bonding between the functional base 15 and the support 14 can be further strengthened.

また、以上のようにして作製した基材13は、その周縁部を、打ち抜き等によって除去されるようにしてもよい。例えば、基材13は、第1型31及び第2型36によって挟持された機能性基体15の周縁部を含む部分を除去される。このような除去によって、次に参照する図6に示すように、基材13の周縁部において、支持体14及び機能性基体15が面一となるようにしてもよい。   Moreover, you may make it the base material 13 produced as mentioned above remove the peripheral part by stamping. For example, the base material 13 is removed at a portion including the peripheral edge portion of the functional substrate 15 sandwiched between the first mold 31 and the second mold 36. By such removal, the support 14 and the functional base 15 may be flush with each other at the peripheral edge of the base material 13 as shown in FIG.

次に、基材13を用いたインモールド成形により容器10を作製する第3の工程について説明する。   Next, the 3rd process which produces the container 10 by the in-mold shaping | molding using the base material 13 is demonstrated.

第3工程は、図6に示された成形型40を用いて実施される。成形型40は、雄型41および雌型46を有している。雄型41及び雌型46は、互いに接近して型締めした状態において、キャビティcyを形成する。キャビティcyは、容器10の外形状に対応した内部空間を画成する。図示された例において、雌型46は、作製されるべき容器10の外形状に対応した凹部48を有している。一方、雄型41は、凹部48内に配置されるコア43を有している。凹部48とコア43で囲まれた領域が、容器10を成形するためのキャビティを形成する。雄型41には、吸引手段に連通した吸着孔42が形成されている。雌型46には、成形材料源に通じた注入孔47が形成されている。注入孔47は、凹部48に通じている。   The third step is performed using the mold 40 shown in FIG. The molding die 40 has a male die 41 and a female die 46. The male mold 41 and the female mold 46 form a cavity cy when they are close to each other and clamped. The cavity cy defines an internal space corresponding to the outer shape of the container 10. In the illustrated example, the female mold 46 has a recess 48 corresponding to the outer shape of the container 10 to be produced. On the other hand, the male mold 41 has a core 43 disposed in the recess 48. A region surrounded by the recess 48 and the core 43 forms a cavity for molding the container 10. The male mold 41 is formed with a suction hole 42 communicating with the suction means. The female mold 46 is formed with an injection hole 47 leading to the molding material source. The injection hole 47 communicates with the recess 48.

第3の工程は、インモールド成形により容器10を作製する。まず、図6に示すように、吸着孔42を塞ぐようにして、雄型41上に基材13を配置する。このとき、基材13に含まれる機能膜20の一部分がコア43の先端面44を覆うようにする。先端面44には、吸着孔42が開口している。したがって、吸着孔42を介した吸引により、基材13が、雄型41に固定される。このとき、図6及び図7に示すように、機能膜20の縁部21の少なくとも一部分が、コア43の先端面44の縁部44aを越えてキャビティcy内に延び広がっている。すなわち、機能膜20は、少なくとも一部分において、先端面44に被さることなく、キャビティcy内に露出している。とりわけ図示された例では、機能膜20のコア先端面44から離間した部分、言い換えると機能膜20のキャビティcy内に露出した部分は、先端面44の延長面上に位置している。換言すると、図示された例では、機能膜20のコア先端面44から離間した部分は、キャビティcy内において、露出した部分は、コア43の先端面44と同一面上に位置している。後述するように、機能膜20が、少なくとも一部において、コア43の先端面44から離間してキャビティcy内に延び入っていることが重要であり、その一方でこのような機能膜20の雄型41に対する位置決めは、実開平5−88299号公報に開示されている位置決め、すなわちコアの先端面と同一形状を有する機能膜を先端面と外形状を一致させるように位置決めすることと比較して、容易且つ迅速に実施することができる。   In the third step, the container 10 is produced by in-mold molding. First, as shown in FIG. 6, the base material 13 is arranged on the male mold 41 so as to close the suction hole 42. At this time, a part of the functional film 20 included in the base material 13 covers the tip surface 44 of the core 43. A suction hole 42 is opened in the distal end surface 44. Accordingly, the base material 13 is fixed to the male mold 41 by suction through the suction holes 42. At this time, as shown in FIGS. 6 and 7, at least a part of the edge 21 of the functional film 20 extends beyond the edge 44 a of the tip surface 44 of the core 43 and extends into the cavity cy. That is, the functional film 20 is exposed in the cavity cy at least partially without covering the tip surface 44. In particular, in the illustrated example, the part of the functional film 20 that is separated from the core front end surface 44, in other words, the part that is exposed in the cavity cy of the functional film 20 is located on the extended surface of the front end surface 44. In other words, in the illustrated example, the portion of the functional film 20 that is separated from the core tip surface 44 is located in the same plane as the tip surface 44 of the core 43 in the cavity cy. As will be described later, it is important for the functional film 20 to extend into the cavity cy at least partially away from the distal end surface 44 of the core 43, while the male film of such a functional film 20 is provided. The positioning with respect to the mold 41 is compared with the positioning disclosed in Japanese Utility Model Laid-Open No. 5-88299, that is, the functional film having the same shape as the tip surface of the core is positioned so that the tip surface matches the outer shape. Can be implemented easily and quickly.

なお、図7は、コア43の先端面44、機能膜20、基材13および凹部48の位置関係を示す平面図である。図示された例において、機能膜20は、コア43の先端面44よりも大きな面積を有している。そして、機能膜20は、コア43の先端面44の全域を覆っている。機能膜20の縁部21は、その全周において、先端面44の縁部44aを越えてキャビティcy内に延び入っている。このような位置決めは、実開平5−88299号公報に開示されている位置決めと比較して、容易且つ極めて迅速に実施することができる。   FIG. 7 is a plan view showing the positional relationship between the tip surface 44 of the core 43, the functional film 20, the base material 13, and the recess 48. FIG. In the illustrated example, the functional film 20 has a larger area than the front end surface 44 of the core 43. The functional film 20 covers the entire tip surface 44 of the core 43. The edge portion 21 of the functional film 20 extends into the cavity cy over the edge portion 44a of the distal end surface 44 on the entire circumference. Such positioning can be carried out easily and extremely quickly as compared with the positioning disclosed in Japanese Utility Model Laid-Open No. 5-88299.

また、図示された例において、機能膜20を含む基材13の形状は、雌型46の凹部48の開口形状よりも小さくなっている。言い換えると、図6及び図7に示された状態において、機能膜20は、成形型40のキャビティcy内において、雌型46から離間した状態で、保持されている。したがって、基材13を雄型41に対して極めて高精度に位置決めすることなく、基材13が、成形型40の型締め時に、雄型41と雌型46との間に挟まってしまうことを効果的に回避することができる。この点からも、雄型41に対する基材13の位置決めを容易且つ迅速に実施することができる。   Further, in the illustrated example, the shape of the base material 13 including the functional film 20 is smaller than the opening shape of the concave portion 48 of the female mold 46. In other words, in the state shown in FIGS. 6 and 7, the functional film 20 is held in the cavity cy of the mold 40 while being separated from the female mold 46. Therefore, the base material 13 is sandwiched between the male mold 41 and the female mold 46 when the mold 40 is clamped without positioning the base material 13 with respect to the male mold 41 with extremely high accuracy. It can be effectively avoided. Also from this point, the base material 13 can be easily and quickly positioned with respect to the male mold 41.

成形型40を型締めした後、注入孔47を介して成形材料が、成形型40のキャビティcyに充填される。成形材料は、底部11の機能膜20以外の部分と側壁部12をなす材料として既に説明した材料とすることができる。成形材料をキャビティcy内に射出する際、基材13は、コア43の先端面44に吸着保持されている。ただし、機能膜20の縁部21を含む基材13の周縁部分が、先端面44から離間してキャビティcy内に延出している。したがって、基材13の周縁部分は、高温高圧で流動する成形材料に曝される。しかしながら、基材13は、いわゆる射出成形品であって、十分な厚みを有することができる。このため、基材13は、高温高圧の成形材料に押圧されたとしても、キャビティcy内に延出した周縁部分への皺や折れ曲がり等の変形並びに亀裂等の損傷を効果的に回避することができる。これにともない、コア43の先端面44と基材13との間に、成形材料が流れ混んでしまうことを効果的に防止することができる。   After the mold 40 is clamped, the molding material is filled into the cavity cy of the mold 40 through the injection hole 47. The molding material can be the material already described as the material that forms the side wall portion 12 and the portion other than the functional film 20 of the bottom portion 11. When the molding material is injected into the cavity cy, the base material 13 is adsorbed and held on the front end surface 44 of the core 43. However, the peripheral edge portion of the base material 13 including the edge portion 21 of the functional film 20 is separated from the tip surface 44 and extends into the cavity cy. Therefore, the peripheral portion of the substrate 13 is exposed to a molding material that flows at high temperature and pressure. However, the base material 13 is a so-called injection molded product and can have a sufficient thickness. For this reason, even if the base material 13 is pressed by the high-temperature and high-pressure molding material, it can effectively avoid deformation such as wrinkles and bending and damage such as cracks to the peripheral portion extending into the cavity cy. it can. Accordingly, it is possible to effectively prevent the molding material from flowing and mixing between the front end surface 44 of the core 43 and the base material 13.

成形型40のキャビティcy内に射出された成形材料が、温度低下により固化することで、成形材料が基材13と一体化して容器10が得られる。製造された容器10は、底部11及び側壁部12を有している。なお、図6に示された第3の工程を経て製造された容器10では、第2の工程で射出されて基材13の支持体14をなす材料と、第3の工程で射出されて底部11の一部分および側壁部12をなす材料との関係により、図2Aに示した界面isが観察されるようになる。   The molding material injected into the cavity cy of the molding die 40 is solidified due to a decrease in temperature, whereby the molding material is integrated with the base material 13 to obtain the container 10. The manufactured container 10 has a bottom part 11 and a side wall part 12. In the container 10 manufactured through the third step shown in FIG. 6, the material injected in the second step to form the support 14 of the substrate 13 and the bottom portion injected in the third step. The interface is shown in FIG. 2A is observed due to the relationship between a part of 11 and the material forming the side wall 12.

成形型40を用いたインモールド成形において、コア43の先端面44から延出した基材13の変形を防止することで、コア43と基材13との間に成形材料が入り込むことを効果的に防止することができる。この結果、得られた容器10において、図1〜図3に示すように、容器底面10aの隅部まで機能膜20が露出するようになる。とりわけ図7に示された位置関係で成形が行われた場合、容器底面10aが、その全隅部にわたるまで、機能膜20によって形成されることになる。このとき、容器10の側壁部12は、少なくともその一部分において、機能膜20上に設けられることになる。   In in-mold molding using the molding die 40, it is effective to prevent the molding material from entering between the core 43 and the base material 13 by preventing the deformation of the base material 13 extending from the tip surface 44 of the core 43. Can be prevented. As a result, in the obtained container 10, as shown in FIGS. 1 to 3, the functional film 20 is exposed to the corner of the container bottom surface 10 a. In particular, when molding is performed in the positional relationship shown in FIG. 7, the container bottom surface 10 a is formed by the functional film 20 until it covers all corners. At this time, at least a part of the side wall 12 of the container 10 is provided on the functional film 20.

なお、成形型40を用いたインモールド成形時における基材13の変形を防止する観点から、基材13の厚みt(図6参照)は、0.1mm以上10mm以下であることが好ましく、0.5mm以上5mm以下であることがさらに好ましい。また、機能膜20を容器底面10aの隅部まで確実に延び広がらせる観点およびコア43に対する基材13の位置決めを十分に容易化する観点から、機能膜20のコア43からの延出長さl(図6参照)は、0.01mm以上10mm以下であることが好ましく、0.1mm以上3mm以下であることがさらに好ましい。   From the viewpoint of preventing deformation of the base material 13 during in-mold molding using the molding die 40, the thickness t (see FIG. 6) of the base material 13 is preferably 0.1 mm or more and 10 mm or less. More preferably, it is 5 mm or more and 5 mm or less. Further, from the viewpoint of surely extending the functional film 20 to the corner of the container bottom surface 10a and from the viewpoint of sufficiently facilitating the positioning of the base material 13 with respect to the core 43, the extension length l of the functional film 20 from the core 43 is provided. (See FIG. 6) is preferably 0.01 mm or more and 10 mm or less, and more preferably 0.1 mm or more and 3 mm or less.

また、図6に示された例では、成形型40を型締めした際に、雄型41のコア43が、基材13に機能膜20の側から接触するとともに、雌型46の凹部48の底が、基材13に機能膜20とは反対の側から接触している。したがって、作製された容器10では、底部11の第2面11bの一部分を、基材13が形成するようになる。さらに言い換えると、容器10の底部11の最小厚みが、基材13の厚みとなっている。この場合、成形型40を用いたインモールド成形において、基材13の変形や損傷を効果的に防止しながら、基材13をより安定してキャビティcy内に保持することができる。また、底部11が基材13のみで形成される部位は、光透過性に優れ、したがって、顕微鏡等を底部11から容器10内を観察することに好適である。しかしながら、この例に限られず、後に参照する図11に示された例のように、成形型40を型締めした際に、雄型41のコア43が、基材13に機能膜20の側から接触するとともに、雌型46の凹部48の底が、基材13から離間するようにしてもよい。   In the example shown in FIG. 6, when the mold 40 is clamped, the core 43 of the male mold 41 comes into contact with the base material 13 from the functional film 20 side, and the recess 48 of the female mold 46 is formed. The bottom is in contact with the base material 13 from the side opposite to the functional film 20. Therefore, in the manufactured container 10, the base material 13 comes to form a part of 2nd surface 11b of the bottom part 11. FIG. In other words, the minimum thickness of the bottom 11 of the container 10 is the thickness of the base material 13. In this case, in the in-mold molding using the mold 40, the base material 13 can be more stably held in the cavity cy while effectively preventing the base material 13 from being deformed or damaged. Moreover, the site | part in which the bottom part 11 is formed only with the base material 13 is excellent in light transmittance, Therefore It is suitable for observing the inside of the container 10 from the bottom part 11 with a microscope. However, the present invention is not limited to this example. When the molding die 40 is clamped as in the example shown in FIG. 11 to be referred to later, the core 43 of the male die 41 is formed on the base material 13 from the functional film 20 side. While contacting, the bottom of the recess 48 of the female mold 46 may be separated from the base material 13.

以上に説明してきた本実施の形態によれば、容器10は、細胞に対する機能を持つ機能膜20を一方の面11aに有する底部11と、底部11の一方の面11a上に設けられ底部11との間で細胞を収容する収容スペースSを形成する側壁部12と、を有している。底部11の一方の面11aは、側壁部12で覆われた周辺領域caと、周辺領域caに囲まれ容器10の底面10aを形成する底面領域baと、を含んでいる。そして、機能膜20は、周辺領域caと底面領域baとに跨がって設けられている。すなわち、機能膜20が周辺領域caと底面領域baとを跨がって延びている部分において、機能膜20は、内壁面10bとの境界となる底面10aの隅部まで確実に延び広がることなる。とりわけ機能膜20の縁部21が、その全周にわたって、周辺領域caに位置している場合、機能膜20は、底面10aの全周縁となる隅部まで延び広がることになる。これにより、機能膜20が期待された機能を細胞に対して有効に発揮することが可能となる。   According to the present embodiment described above, the container 10 includes a bottom portion 11 having a functional film 20 having a function for cells on one surface 11a, and a bottom portion 11 provided on one surface 11a of the bottom portion 11. And a side wall portion 12 that forms an accommodation space S for accommodating cells. One surface 11 a of the bottom portion 11 includes a peripheral region ca covered with the side wall portion 12 and a bottom surface region ba that is surrounded by the peripheral region ca and forms the bottom surface 10 a of the container 10. The functional film 20 is provided across the peripheral area ca and the bottom area ba. That is, in the part where the functional film 20 extends across the peripheral area ca and the bottom area ba, the functional film 20 extends and spreads assuredly to the corner of the bottom surface 10a that becomes the boundary with the inner wall surface 10b. . In particular, when the edge 21 of the functional film 20 is located in the peripheral region ca over the entire circumference, the functional film 20 extends to the corners that form the entire periphery of the bottom surface 10a. Thereby, the function expected by the functional film 20 can be effectively exerted on the cells.

一例として、機能膜20が、例えば温度応答性膜等の刺激応答性ポリマー膜である場合には、温度の変化に応じて底面10aをなす機能膜20がその状態を変化させ、容器10内の細胞に作用する。具体的には、温度応答性ポリマー膜の機能膜20が冷却されることにより、容器10の底面10a上で培養された細胞シートを底面10aから剥離させることができる。このとき、底面10aと内壁面10bとの境界となる底面隅部においても、細胞シートを容器10から円滑に剥離させることができる。したがって、繊細で高価な細胞シートを、破れ等の損傷を回避しながら、容器から採取することができる。このような細胞シートは、容器底面10aの形状に対応した所望の形状を有することから、予定された処置への適用が可能となる。   As an example, when the functional film 20 is a stimulus-responsive polymer film such as a temperature-responsive film, for example, the functional film 20 forming the bottom surface 10a changes its state according to a change in temperature, and the inside of the container 10 Acts on cells. Specifically, the cell sheet cultured on the bottom surface 10a of the container 10 can be separated from the bottom surface 10a by cooling the functional film 20 of the temperature-responsive polymer film. At this time, the cell sheet can be smoothly peeled from the container 10 also at the bottom corner that becomes the boundary between the bottom 10a and the inner wall 10b. Therefore, a delicate and expensive cell sheet can be collected from the container while avoiding damage such as tearing. Since such a cell sheet has a desired shape corresponding to the shape of the container bottom surface 10a, it can be applied to a planned treatment.

ところで、容器10で作製された細胞シートは、互いの縁部が重なり合うようにして、処置されるべき部位、例えば心臓の表面に複数枚配置されることがある。このような利用において、隣り合う二つの細胞シートの重なり合う面積を小さくすることで処置部位に使用される細胞シートの枚数を低減するには、細胞シートの輪郭が円形よりも四角形であることが好ましい。そして、四角形の細胞シートを作製するには、図1に示された例のように、容器10の底面10aが、四角形状またはその角部を面取りした形状とすればよい。その一方で、このような底面形状を有する容器10を用いた場合、特に角部において、細胞シートが剥離しにくくなり、破れの起点を形成する可能性が高くなる。したがって、上述してきた容器の構成及び容器の製造方法は、有用な細胞シートを作製するための底面が角形状またはその角部を面取りした形状となっている容器に対し、とりわけ好適であると言える。   By the way, a plurality of cell sheets produced in the container 10 may be arranged on a site to be treated, for example, on the surface of the heart, such that their edges overlap each other. In such a use, in order to reduce the number of cell sheets used in the treatment site by reducing the overlapping area of two adjacent cell sheets, the outline of the cell sheet is preferably square rather than circular. . Then, in order to produce a square cell sheet, the bottom surface 10a of the container 10 may have a square shape or a shape with chamfered corners as in the example shown in FIG. On the other hand, when the container 10 having such a bottom surface shape is used, the cell sheet is difficult to peel off particularly at the corners, and the possibility of forming a starting point of tearing is increased. Therefore, it can be said that the structure of the container and the method for manufacturing the container described above are particularly suitable for a container whose bottom surface for producing a useful cell sheet has a square shape or a shape with chamfered corners. .

また、本実施の形態によれば、容器10の製造に、容器10の外形状を規定する凹部48が形成された雌型46と、凹部48内に配置されるコア43を有し雌型46との間に容器10を成形するためのキャビティcyを形成する雄型41と、を用いる。製造方法は、細胞に対する機能を持つ機能膜20を片側の面に有した基材13をキャビティcy内に収容した状態で、キャビティcy内に成形材料を充填する工程を含んでいる。このインモールド成形において、基材13は、機能膜20の一部分がコア43の先端面44を覆うとともに、機能膜20の縁部21の少なくとも一部分が先端面44から離間してキャビティcy内に広がるように、キャビティcy内に収容される。このような製造方法によれば、製造された容器10の底部11において、機能膜20は、側壁部12に覆われた周辺領域caと底面10aをなす底面領域baとに跨がって形成される。とりわけ、機能膜20がコア43の先端面44の全域を覆うとともに、機能膜20の縁部21が、その全周において、先端面44から離間してキャビティcy内に広がるように、基材13がキャビティcy内に収容された場合、製造された容器10の底部11において、機能膜20が、容器10の底面10aをなす底面領域baの全域に位置するとともに、機能膜20の縁部21が、その全周にわたって、側壁部12に覆われる周辺領域caに位置するようになる。したがって、製造された容器10は、底面10aの隅部においても、機能膜20が期待された機能を有効に発揮するようになる。   Further, according to the present embodiment, in manufacturing the container 10, the female mold 46 having the female mold 46 in which the concave portion 48 defining the outer shape of the container 10 is formed and the core 43 disposed in the concave portion 48 is provided. And a male mold 41 for forming a cavity cy for molding the container 10 between the two. The manufacturing method includes a step of filling the cavity cy with a molding material in a state where the base material 13 having the functional film 20 having a function for cells on one side is accommodated in the cavity cy. In this in-mold molding, in the base material 13, a part of the functional film 20 covers the front end surface 44 of the core 43, and at least a part of the edge 21 of the functional film 20 is separated from the front end surface 44 and spreads into the cavity cy. Thus, it is accommodated in the cavity cy. According to such a manufacturing method, in the bottom part 11 of the manufactured container 10, the functional film 20 is formed across the peripheral area ca covered by the side wall part 12 and the bottom surface area ba forming the bottom surface 10 a. The In particular, the functional film 20 covers the entire region of the front end surface 44 of the core 43, and the base member 13 so that the edge 21 of the functional film 20 spreads in the cavity cy apart from the front end surface 44 on the entire circumference. Is accommodated in the cavity cy, the functional film 20 is located in the entire bottom region ba forming the bottom surface 10a of the container 10 at the bottom 11 of the manufactured container 10, and the edge 21 of the functional film 20 is provided. , It is located in the peripheral area ca covered by the side wall 12 over the entire circumference. Therefore, the manufactured container 10 effectively exhibits the function expected of the functional film 20 even at the corner of the bottom surface 10a.

また、この製造方法において、機能膜20の一部分がコア43の先端面44を覆うとともに機能膜20の縁部21の少なくとも一部分が先端面44の縁部44aを越えてキャビティcy内に広がるように、基材13をキャビティcy内に収容すれば良い。したがって、基材13の雄型41に対する位置決めは高精度を要するものではなく、簡易に実施され得る。これにより、底面隅部においても機能膜20が有効に機能する容器10を、簡易且つ安価に製造することも可能となる。   In this manufacturing method, a part of the functional film 20 covers the front end surface 44 of the core 43 and at least a part of the edge 21 of the functional film 20 extends beyond the edge 44a of the front end surface 44 into the cavity cy. The base material 13 may be accommodated in the cavity cy. Therefore, the positioning of the base material 13 with respect to the male mold 41 does not require high accuracy and can be easily performed. Thereby, the container 10 in which the functional film 20 functions effectively also at the bottom corners can be easily and inexpensively manufactured.

さらに、本実施の形態によれば、製造方法は、機能膜20を予備成形型30のキャビティcx内に収容し予備成形型30のキャビティcx内に成形材料を充填して、基材13を成形する工程を、さらに有している。すなわち、容器10は、二回のインモールド成形を経て、製造され得る。このような方法によれば、一回目となる予備成形により、或る程度の変形抵抗を有した基材13を簡易且つ短時間で製造することができる。言い換えると、或る程度の厚みを有した基材13を簡易且つ短時間で製造することができる。また、このようにして得られた基材13によれば、二回目の成形時に、機能膜20が容易に変形しにくくすることができる。この結果、容器底面10aの隅部まで機能膜20を安定して延び広がるようにすることができる。   Furthermore, according to the present embodiment, the manufacturing method accommodates the functional film 20 in the cavity cx of the preforming mold 30 and fills the molding material in the cavity cx of the preforming mold 30 to form the base material 13. The method further includes the step of: That is, the container 10 can be manufactured through two in-mold moldings. According to such a method, the base material 13 having a certain degree of deformation resistance can be manufactured easily and in a short time by the first preforming. In other words, the base material 13 having a certain thickness can be manufactured easily and in a short time. Moreover, according to the base material 13 obtained in this way, the functional film 20 can be easily prevented from being deformed easily during the second molding. As a result, the functional film 20 can be stably extended and spread to the corner of the container bottom surface 10a.

なお、上述した一実施の形態に対して様々な変更を加えることが可能である。以下、図面を適宜参照しながら、変形の一例について説明する。以下の説明および以下の説明で用いる図面では、上述した実施の形態と同様に構成され得る部分について、上述の一実施の形態における対応する部分に対して用いた符号と同一の符号を用いるとともに、重複する説明を省略する。   Various modifications can be made to the above-described embodiment. Hereinafter, an example of modification will be described with reference to the drawings as appropriate. In the following description and the drawings used in the following description, for parts that can be configured in the same manner as the above-described embodiment, the same reference numerals as those used for the corresponding parts in the above-described embodiment are used. A duplicate description is omitted.

上述した一実施の形態において、容器10の底面10aが、平面視において、四角形または四角形の角を面取りした形状となっている例を説明した。底面10aが四角形または四角形の角を面取りした形状となっている容器は、細胞を培養して細胞シートを作製するための容器として有益である一方で、従来の容器では、機能膜が容器底面の隅部まで広がっていないことに起因する不具合が顕著となり得た。このため、機能膜20が容器底面10aの隅部まで安定して延び広がるようになる上述の容器構造に関する工夫及び容器製造方法に関する工夫は、底面10aが四角形または四角形の角を面取りした形状となっている容器10に対して好適である。しかしながら、上述の容器構成及び製造方法は、底面が四角形または四角形の角部を面取りした形状の容器だけでなく、底面が四角形以外の多角形またはその角部を面取りした形状の容器や、図8に示された底面10aが円形状となっている容器10に対しても好適であり、これらの例においても、容器構成及び製造方法に起因した上述の作用効果と同様の作用効果を奏することができる。なお、図8に示された容器10は、その底面形状が上述した一実施の形態での容器と異なり、その他において上述した一実施の形態での容器と同一にすることができる。   In the above-described embodiment, the example has been described in which the bottom surface 10a of the container 10 has a shape in which a square or a square corner is chamfered in a plan view. A container having a bottom surface 10a having a square shape or a chamfered corner is useful as a container for culturing cells to produce a cell sheet, whereas in a conventional container, the functional membrane is formed on the bottom surface of the container. Problems due to not spreading to the corners could be noticeable. For this reason, the device relating to the container structure and the device manufacturing method described above in which the functional film 20 stably extends and spreads to the corners of the container bottom surface 10a has a shape in which the bottom surface 10a is chamfered with a square or a square corner. This is suitable for the container 10. However, the above-described container configuration and manufacturing method are not limited to a container having a bottom surface that is square or chamfered at a corner portion of the rectangle, but a container having a bottom surface that is a polygon other than a rectangle or a shape whose corners are chamfered. It is also suitable for the container 10 whose bottom surface 10a shown in FIG. 5 is circular, and in these examples, the same effects as the above-described effects resulting from the container configuration and the manufacturing method can be achieved. it can. The container 10 shown in FIG. 8 is different from the container in the embodiment described above in the shape of the bottom surface, and can be otherwise the same as the container in the embodiment described above.

上述した一実施の形態において、容器10が収容スペースSを一つだけ有する例を示したが、この例に限られない。例えば図9及び図10に示すように、複数の収容スペースSを有する容器10に対しても、上述の容器構成及び製造方法を適用することができる。図9及び図10に示された一例において、容器10は、合計10個の収容スペースSを有している。この容器10も、底部11および側壁部12を有している。底部11は、互いに対向する第1面11a及び第2面11bを有している。第1面11aは、側壁部12が設けられている周辺領域caと、収容スペースSの底面10aを形成する合計10個の底面領域baと、を有している。そして、機能膜20が、周辺領域caと底面領域baとに跨がって形成され、底部11の第1面11aの一部分をなしている。図示された例では、各底面領域baに対応して、合計10の機能膜20が設けられている。各機能膜20の縁部21が、その全周にわたって、対応する底面領域baを取り囲む周辺領域ca領域に位置していてもよい。図9及び図10に示された例においても、上述の作用効果と同様の作用効果を奏することができる。   In the above-described embodiment, an example in which the container 10 has only one storage space S has been described. However, the present invention is not limited to this example. For example, as shown in FIGS. 9 and 10, the container configuration and the manufacturing method described above can be applied to the container 10 having a plurality of storage spaces S. In the example shown in FIGS. 9 and 10, the container 10 has a total of ten storage spaces S. The container 10 also has a bottom part 11 and a side wall part 12. The bottom 11 has a first surface 11a and a second surface 11b that face each other. The first surface 11a has a peripheral region ca where the side wall portion 12 is provided, and a total of ten bottom surface regions ba that form the bottom surface 10a of the accommodation space S. The functional film 20 is formed across the peripheral area ca and the bottom area ba, and forms part of the first surface 11a of the bottom 11. In the illustrated example, a total of ten functional films 20 are provided corresponding to each bottom region ba. The edge 21 of each functional film 20 may be located in the peripheral area ca area surrounding the corresponding bottom area ba over the entire circumference. In the example shown in FIGS. 9 and 10, the same operational effects as the above-described operational effects can be obtained.

また、図9及び図10に示された容器10は、上述した製造方法と同一の方法により製造され得る。具体的には、図11に示された成形型40を用いたインモールド成形により、容器10を作製することができる。成形型40は、容器10の外形状を規定する凹部48が形成された雌型46と、凹部48内に配置されるコア43を有し雌型46との間に容器10を成形するためのキャビティcyを形成する雄型41と、を有している。この製造方法は、機能膜20を片側の面に有した基材13をキャビティcy内に収容した状態で、キャビティcy内に成形材料を充填する工程を有する。図11に示すように、基材13は、機能膜20の一部分がコア43の先端面44を覆うとともに、機能膜20の縁部21の少なくとも一部分が先端面44の縁部44aを越えてキャビティcy内に広がるようにして、キャビティcy内に収容される。図11に示された成形工程において、基材13は、機能膜20がコア43の先端面44の全域を覆うとともに、機能膜20の縁部21が、その全周において、先端面44から離間してキャビティcy内に広がるようにしてもよい。図11の製造方法で製造された容器10では、基材13の支持体14なす材料と、成形型40を用いた成形工程で射出されて底部11の一部分および側壁部12をなす材料との関係により、図10では省略されている界面が、底部11に観察されるようになる。また、基材13は、上述の予備成形型30を用いたインモールド成形によって作製してもよい。この予備成形は、機能膜20を含む機能性基体15を予備成形型30のキャビティcx内に収容した状態で、予備成形型30のキャビティcx内に成形材料を充填することにより実施される。図11に示された例においても、上述の作用効果と同様の作用効果を奏することができる。   Moreover, the container 10 shown by FIG.9 and FIG.10 may be manufactured by the same method as the manufacturing method mentioned above. Specifically, the container 10 can be manufactured by in-mold molding using the molding die 40 shown in FIG. The molding die 40 includes a female mold 46 in which a recess 48 that defines the outer shape of the container 10 is formed, and a core 43 that is disposed in the recess 48, for molding the container 10 between the female mold 46. And a male mold 41 that forms a cavity cy. This manufacturing method includes a step of filling the cavity cy with a molding material in a state where the base material 13 having the functional film 20 on one surface is accommodated in the cavity cy. As shown in FIG. 11, the base material 13 includes a cavity in which a part of the functional film 20 covers the tip surface 44 of the core 43 and at least a part of the edge 21 of the function film 20 exceeds the edge 44 a of the tip surface 44. It is accommodated in the cavity cy so as to spread in cy. In the molding step shown in FIG. 11, the base material 13 is such that the functional film 20 covers the entire region of the tip surface 44 of the core 43, and the edge portion 21 of the function film 20 is separated from the tip surface 44 on the entire circumference. And you may make it spread in the cavity cy. In the container 10 manufactured by the manufacturing method of FIG. 11, the relationship between the material forming the support 14 of the base material 13 and the material that is injected in the molding process using the molding die 40 and forms the part of the bottom portion 11 and the side wall portion 12. Thus, the interface omitted in FIG. 10 is observed at the bottom 11. Further, the base material 13 may be produced by in-mold molding using the above-described preforming mold 30. This preforming is performed by filling the cavity cx of the preforming mold 30 with a molding material in a state where the functional substrate 15 including the functional film 20 is accommodated in the cavity cx of the preforming mold 30. Also in the example shown in FIG. 11, the same operational effects as the above-described operational effects can be achieved.

なお、図9〜図11に示された製造方法とは異なり、機能膜20が、隣り合う二以上の底面領域baと当該二以上の底面領域baの間に位置する周辺領域caとを跨がるようにしてもよいし、或いは、図12に示すように、全ての底面領域baに延び広がる一つの機能膜20が設けられるようにしてもよい。図12に示された製造方法では、図6に示された製造方法と同様に、成形型40を型締めした際に、雄型41のコア43が、基材13に機能膜20の側から接触するとともに、雌型46の凹部48の底が、基材13に機能膜20とは反対の側から接触している。したがって、作製された容器10では、底部11の第2面11bの一部分を、基材13が形成するようになる。さらに言い換えると、容器10の底部11の最小厚みが、基材13の厚みとなる。   Unlike the manufacturing method shown in FIGS. 9 to 11, the functional film 20 straddles two or more adjacent bottom surface regions ba and a peripheral region ca positioned between the two or more bottom surface regions ba. Alternatively, as shown in FIG. 12, one functional film 20 that extends to all the bottom surface areas ba may be provided. In the manufacturing method shown in FIG. 12, as in the manufacturing method shown in FIG. 6, when the molding die 40 is clamped, the core 43 of the male die 41 is attached to the base material 13 from the functional film 20 side. In addition, the bottom of the recess 48 of the female mold 46 is in contact with the base material 13 from the side opposite to the functional film 20. Therefore, in the manufactured container 10, the base material 13 comes to form a part of 2nd surface 11b of the bottom part 11. FIG. In other words, the minimum thickness of the bottom 11 of the container 10 is the thickness of the base material 13.

上述した一実施の形態において、予備成形型30を用いたインモールド成形工程により基材13を作製する例を示した、この例に限られず、予備成形型30を用いた予備成形の工程を削除してもよい。機能膜20を支持する機能性基体15の支持層16が十分な強度を有することで、成形型40を用いたインモールド成形時に、機能性基体15のコア43に対面していない部分の変形を十分に抑制することができる。機能性基体15に十分な強度を付与し、成形型40を用いたインモールド成形時における機能性基体15の変形を防止する観点から、樹脂材料からなる支持層16の厚みta(図4参照)を、0.1mm以上10mm以下とすることが有効であり、0.5mm以上5mm以下とすることがさらに有効である。   In the above-described embodiment, the example in which the base material 13 is produced by the in-mold molding process using the preforming mold 30 is shown. The present invention is not limited to this example, and the preforming process using the preforming mold 30 is deleted. May be. Since the support layer 16 of the functional base 15 that supports the functional film 20 has sufficient strength, the portion of the functional base 15 that does not face the core 43 is deformed during in-mold molding using the molding die 40. It can be sufficiently suppressed. From the viewpoint of imparting sufficient strength to the functional base 15 and preventing deformation of the functional base 15 during in-mold molding using the molding die 40, the thickness ta of the support layer 16 made of a resin material (see FIG. 4) Is effective to be 0.1 mm or more and 10 mm or less, and more preferably 0.5 mm or more and 5 mm or less.

なお、以上において上述した一実施の形態に対するいくつかの変形例を説明してきたが、当然に、複数の変形例を適宜組み合わせて適用することも可能である。   In addition, although the some modification with respect to one Embodiment mentioned above was demonstrated above, naturally, it is also possible to apply combining several modifications suitably.

以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further in detail, this invention is not limited to this.

<<容器の製造>>
以下に説明するようにして、実施例1、実施例2、比較例1及び比較例2に係る容器を作製した。容器の形状は、図1に示した形状とした。すなわち、各容器の底面が四角形状、とりわけ正方形形状となっているようにした。
<< Manufacture of containers >>
As described below, containers according to Example 1, Example 2, Comparative Example 1, and Comparative Example 2 were produced. The shape of the container was the shape shown in FIG. That is, the bottom surface of each container was made into a quadrangular shape, especially a square shape.

まず、次に説明する試料1及び試料2に係る機能性基体を作製した。   First, functional substrates according to Sample 1 and Sample 2 described below were manufactured.

・試料1
N−イソプロピルアクリルアミドを最終濃度40重量%になるようにイソプロピルアルコールに溶解させて液状の組成物を作製した。厚さ50μmのポリスチレンフィルム(旭化成ケミカルズより入手)を支持層として用意した。支持層にコロナ処理を施して親水化した面に、ワイヤーバーを用いて上記組成物を塗布した。塗布量は、1.4g/mとした。その後、40℃の熱風で乾燥させた後、電子線を照射してN−イソプロピルアクリルアミドをグラフト重合させ、支持層の表面にポリ−N−イソプロピルアクリルアミドを固定化させ、支持層および機能膜を有した機能性基体を作製した。機能膜は、ポリ−N−イソプロピルアクリルアミドを含み、温度応答性ポリマー膜として機能するようにした。
・ Sample 1
A liquid composition was prepared by dissolving N-isopropylacrylamide in isopropyl alcohol to a final concentration of 40% by weight. A 50 μm thick polystyrene film (available from Asahi Kasei Chemicals) was prepared as a support layer. The said composition was apply | coated using the wire bar to the surface which gave the support layer the corona treatment and was made hydrophilic. The coating amount was 1.4 g / m 2 . Then, after drying with hot air at 40 ° C., irradiation with an electron beam causes graft polymerization of N-isopropylacrylamide, immobilizing poly-N-isopropylacrylamide on the surface of the support layer, and providing a support layer and a functional membrane. A functional substrate was prepared. The functional film contained poly-N-isopropylacrylamide so as to function as a temperature-responsive polymer film.

・試料2
厚さ50μmポリスチレンフィルム(旭化成ケミカルズより入手)からなる支持層を用意した。支持層にコロナ処理を施して親水化した面に、グラビアダイレクト法により、試料1と同様の組成物を塗布した。塗布量は、1.1g/cmとし、搬送速度は、5m/minとした。その後、40℃の乾燥フードを2m通過させて乾燥させた後、電子線を照射してN−イソプロピルアクリルアミドをグラフト重合させ、支持層の表面にポリ−N−イソプロピルアクリルアミドを固定化させ、支持層および機能膜を有した機能性基体を作製した。機能膜は、ポリ−N−イソプロピルアクリルアミドを含み、温度応答性ポリマー膜として機能するようにした。
・ Sample 2
A support layer comprising a 50 μm thick polystyrene film (available from Asahi Kasei Chemicals) was prepared. The same composition as Sample 1 was applied to the surface of the support layer that had been subjected to corona treatment to be hydrophilized by the gravure direct method. The coating amount was 1.1 g / cm 2 and the conveyance speed was 5 m / min. Then, after passing through a dry hood at 40 ° C. for 2 m and drying, electron beam irradiation is performed to graft polymerize N-isopropylacrylamide, and poly-N-isopropylacrylamide is immobilized on the surface of the support layer. And the functional base | substrate which has a functional film was produced. The functional film contained poly-N-isopropylacrylamide so as to function as a temperature-responsive polymer film.

<実施例1>
作製した試料1を適切な大きさのシート状に裁断した後、水中に4時間浸漬させ、乾燥させた。そして、ハンドプレス機を用いて、試料1を用いた機能性基体を所定の大きさに切り抜いた。
<Example 1>
The produced sample 1 was cut into a sheet having an appropriate size, and then immersed in water for 4 hours and dried. And the functional base | substrate using the sample 1 was cut out to the predetermined magnitude | size using the hand press machine.

次に、射出成形機(α−100C、ファナック)を用い、図5を参照して説明した上述のインモールド成形を行い、機能膜を片側の面に有する基材を作製した。成形材料として、ポリスチレンペレット(PSジャパン SGP10)を用いた。成形条件として、樹脂温度を220℃とし、金型温度を20℃とした。   Next, using the injection molding machine (α-100C, FANUC), the above-described in-mold molding described with reference to FIG. 5 was performed, and a base material having a functional film on one surface was produced. As a molding material, polystyrene pellets (PS Japan SGP10) were used. As molding conditions, the resin temperature was 220 ° C. and the mold temperature was 20 ° C.

その後、射出成形機(α−100C、ファナック)を用い、図6を参照して説明した上述のインモールド成形を行い、実施例1に係る容器を作製した。成形材料として、ポリスチレンペレット(PSジャパン SGP10)を用いた。成形条件として、樹脂温度を220℃とし、金型温度を20℃とした。この成形において、基材の機能膜の一部分がコアの先端面の全面を覆うとともに、機能膜の縁部が、その全周において、先端面から離間してキャビティ内に広がるように、基材を成形型のキャビティ内に収容した。得られた容器10において、機能膜の縁部が、その全周にわたって、周辺領域に位置するようにした。   Then, using the injection molding machine ((alpha) -100C, FANUC), the above-mentioned in-mold shaping | molding demonstrated with reference to FIG. 6 was performed, and the container which concerns on Example 1 was produced. As a molding material, polystyrene pellets (PS Japan SGP10) were used. As molding conditions, the resin temperature was 220 ° C. and the mold temperature was 20 ° C. In this molding, the base material is covered so that a part of the functional film of the base material covers the entire surface of the front end surface of the core, and the edge of the functional film spreads into the cavity away from the front end surface on the entire circumference. Housed in a cavity of the mold. In the obtained container 10, the edge part of the functional film was positioned in the peripheral region over the entire circumference.

<実施例2>
試料2からなる機能性基体を用いた点において、実施例1と異なり、その他を実施例1と同様にして、実施例2に係る容器を作製した。
<Example 2>
A container according to Example 2 was produced in the same manner as in Example 1 except that a functional substrate made of Sample 2 was used.

<比較例1>
作製した試料1を適切な大きさのシート状に裁断した後、水中に4時間浸漬させ、乾燥させた。そして、ハンドプレス機を用いて、試料1を用いた機能性基体を所定の大きさに切り抜いた。機能性基体の打ち抜き形状は、次の成形工程で用いる成形型のコアの先端面と同形状とした。
<Comparative Example 1>
The produced sample 1 was cut into a sheet having an appropriate size, and then immersed in water for 4 hours and dried. And the functional base | substrate using the sample 1 was cut out to the predetermined magnitude | size using the hand press machine. The punching shape of the functional substrate was the same shape as the tip surface of the core of the molding die used in the next molding step.

その後、射出成形機(α−100C、ファナック)を用い、インモールド成形を行い、比較例1に係る容器を作製した。成形型は、実施例1で使用した成形型と同様とした。機能膜が雄型のコア先端面と外輪郭を揃えるように、機能性基体を成形型に対して位置決めした。その後、成形型を型締めして、インモールド成形を行った。成形材料として、ポリスチレンペレット(PSジャパン SGP10)を用いた。成形条件として、樹脂温度を220℃とし、金型温度を20℃とした。   Then, in-mold molding was performed using an injection molding machine (α-100C, FANUC), and a container according to Comparative Example 1 was produced. The mold was the same as the mold used in Example 1. The functional substrate was positioned with respect to the mold so that the functional membrane was aligned with the outer contour of the male core tip. Thereafter, the mold was clamped to perform in-mold molding. As a molding material, polystyrene pellets (PS Japan SGP10) were used. As molding conditions, the resin temperature was 220 ° C. and the mold temperature was 20 ° C.

<比較例2>
試料2からなる機能性基体を用いた点において、比較例1と異なり、その他を比較例1と同様にして、比較例2に係る容器を作製した。
<Comparative example 2>
A container according to Comparative Example 2 was prepared in the same manner as Comparative Example 1 except that the functional substrate made of Sample 2 was used, and the other differences were the same as Comparative Example 1.

<<容器の使用>>
実施例1、実施例2、比較例1及び比較例2に係る容器を利用して、細胞シートを作製した。各容器をクリーンベンチ内で所定時間紫外線滅菌を実施し、ウシ大動脈血管内皮細胞を表面細胞密度が1×10cells/cmになるように調整し、各容器内に播種した。使用培地は10%FBS含有DMEM(シグマ製)であり、培養はCOインキュベーターで37℃、5%COの条件にて48時間行った。その後、各容器を20℃、5%CO2条件下のインキュベーターに入庫した。20分後、20℃のインキュベーターから出庫した。次に、機能膜の温度を調整して接着性から非接着性へと状態変化させた。
<< Use of container >>
Cell sheets were prepared using the containers according to Example 1, Example 2, Comparative Example 1 and Comparative Example 2. Each container was sterilized with ultraviolet rays for a predetermined time in a clean bench, and bovine aortic vascular endothelial cells were adjusted to have a surface cell density of 1 × 10 5 cells / cm 2 and seeded in each container. The medium used was DMEM containing 10% FBS (manufactured by Sigma), and the culture was performed in a CO 2 incubator at 37 ° C. and 5% CO 2 for 48 hours. Then, each container was stored in an incubator under 20 ° C. and 5% CO 2 conditions. After 20 minutes, the product was removed from the incubator at 20 ° C. Next, the temperature of the functional film was adjusted to change the state from adhesive to non-adhesive.

実施例1に係る容器および実施例2に係る容器では、機能膜を非接着性にするだけで、破れ等の損傷を生じさせることなく四角形の細胞シートを容器から取り出すことができた。   In the container according to Example 1 and the container according to Example 2, it was possible to take out the rectangular cell sheet from the container without causing damage such as tearing only by making the functional film non-adhesive.

比較例1に係る容器および比較例2に係る容器では、機能膜を非接着性にすると、四角形の細胞シートの多くの部分が容器の底面から剥離した。ただし、機能膜を非接着性に変更しても、容器底面の隅部において、細胞シートが容器から剥離しなかった。細胞シートを容器から引き剥がしたところ、細胞シートの角部が破れてしまった。   In the container according to Comparative Example 1 and the container according to Comparative Example 2, when the functional membrane was made non-adhesive, many portions of the square cell sheet were peeled from the bottom surface of the container. However, even when the functional membrane was changed to non-adhesive, the cell sheet did not peel from the container at the corner of the container bottom. When the cell sheet was peeled from the container, the corners of the cell sheet were torn.

S 収容スペース
ca 周辺領域
ba 底面領域
cx キャビティ
cy キャビティ
10 容器
10a 底面
10b 内壁面
10c 外壁面
11 底部
11a 第1面
11b 第2面
12 側壁部
13 基材
13a 縁部
14 支持体
15 機能性基体
16 支持層
20 機能膜
21 縁部
30 予備成形型
31 第1型
32 吸着孔
36 第2型
37 注入孔
38 凹部
40 成形型
41 雄型
42 吸着孔
43 コア
44 先端面
44a 縁部
46 雌型
47 注入孔
48 凹部
S receiving space ca peripheral region ba bottom region cx cavity cy cavity 10 container 10a bottom surface 10b inner wall surface 10c outer wall surface 11 bottom portion 11a first surface 11b second surface 12 side wall portion 13 base material 13a edge portion 14 support 15 functional substrate 16 Support layer 20 Functional film 21 Edge 30 Preliminary mold 31 First mold 32 Suction hole 36 Second mold 37 Injection hole 38 Recess 40 Mold 41 Male mold 42 Suction hole 43 Core 44 Tip surface 44a Edge 46 Female mold 47 Injection Hole 48 Recess

Claims (3)

細胞を収容するための容器を、前記容器の外形状を規定する凹部が形成された雌型と、前記凹部内に配置されるコアを有し前記雌型との間に前記容器を成形するためのキャビティを形成する雄型と、を用いて製造する容器の製造方法であって、
前記細胞に対する機能を持つ機能膜を片側の面に有した基材を前記キャビティ内に収容した状態で、前記キャビティ内に成形材料を充填する工程を備え、
前記基材は、前記機能膜の一部分が前記コアの先端面を覆うとともに、前記機能膜の縁部の少なくとも一部分が前記先端面から離間して前記キャビティ内に位置するように、前記キャビティ内に収容される、容器の製造方法。
In order to mold a container for containing cells between a female mold in which a recess defining an outer shape of the container is formed and a female mold having a core disposed in the recess. A male mold that forms a cavity of
A step of filling the cavity with a molding material in a state where a base material having a functional membrane having a function for cells on one side is accommodated in the cavity;
The base material is formed in the cavity such that a part of the functional film covers the tip surface of the core and at least a part of an edge of the functional film is located in the cavity apart from the tip surface. A method for manufacturing a container to be accommodated.
前記基材は、前記機能膜が前記コアの前記先端面の全域を覆うとともに、前記機能膜の縁部が、その全周において、前記先端面から離間して前記キャビティ内に位置するように、前記キャビティ内に収容される、請求項1に記載の容器の製造方法。   The base material is such that the functional film covers the entire area of the tip surface of the core, and the edge of the functional film is located in the cavity apart from the tip surface on the entire circumference thereof. The manufacturing method of the container of Claim 1 accommodated in the said cavity. 前記機能膜を予備成形型のキャビティ内に収容した状態で前記予備成形型の前記キャビティ内に成形材料を充填して、前記基材を成形する工程を、さらに備える、請求項1又は2に記載の容器の製造方法。   3. The method according to claim 1, further comprising a step of filling the molding material in the cavity of the preforming die in a state where the functional film is accommodated in the cavity of the preforming die, and molding the base material. Manufacturing method of the container.
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