JP2017137290A - 5α-REDUCTASE INHIBITOR AND COMPOSITION FOR TREATING/PREVENTING URINARY SYSTEM DISEASE, AND METHOD FOR PRODUCING THE SAME - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、西洋カボチャ種子のエタノール又はメタノール抽出物を有効成分とする５α−リダクターゼ阻害剤に関する。また、西洋カボチャ種子のエタノール又はメタノール抽出物を有効成分とする泌尿器系疾患治療・予防用組成物に関する。また、西洋カボチャ種子をエタノールまたはメタノール抽出することにより５α―リダクターゼ阻害剤または泌尿器系疾患治療・予防用組成物を製造する方法に関する。 The present invention relates to a 5α-reductase inhibitor containing as an active ingredient an ethanol or methanol extract of western pumpkin seeds. In addition, the present invention relates to a composition for treating and preventing urological diseases, which comprises an ethanol or methanol extract of western pumpkin seeds as an active ingredient. The present invention also relates to a method for producing a 5α-reductase inhibitor or a composition for treating or preventing a urinary system disease by extracting western pumpkin seeds with ethanol or methanol.
カボチャ種子油が前立腺肥大、頭髪の薄毛（ＡＧＡ）、頻尿等に有効であることは知られている。前立腺肥大、頭髪の薄毛（ＡＧＡ）、頻尿の進行にはテストステロンが生体内で還元されて生じるデハイドロテストステロン（ＤＨＴ）が関与しているといわれている。カボチャ種子油には、この還元作用を促進する５α−リダクターゼの活性を阻害する働きがある。 Pumpkin seed oil is known to be effective for prostate enlargement, hair thinning hair (AGA), frequent urination, and the like. It is said that dehydrotestosterone (DHT), which is produced by reducing testosterone in vivo, is involved in the progression of prostatic hypertrophy, hair thinning hair (AGA), and frequent urination. Pumpkin seed oil has a function of inhibiting the activity of 5α-reductase that promotes this reducing action.
ところで、カボチャには、西洋カボチャ(Cucurbita maxima)、東洋カボチャ(Cucurbita moschata)、及びペポカボチャ(Cucurbita pepo)の３種類がある。西洋カボチャは、日本で一般に、食用に、又は冷凍食品や調理食品に加工されているカボチャである。東洋カボチャは、日本カボチャとも言われ、粘質でねっとりした食感を有するが、現在ではほとんど栽培されていない。ペポカボチャは、もっぱら海外で栽培されているが、その用途は食用ではなく、種子の食用油（パンプキンシードオイル）としての用途である。
さらに、西洋カボチャと東洋カボチャは、殻（種皮）のある種子を持つが、ペポカボチャは、殻（種皮）のない種子を持つ点が大きな違いであり、これらは同じカボチャ属であっても、果肉部分も種子部分も生物学的構造には大きな違いがある。
By the way, there are three types of pumpkins: western pumpkin (Cucurbita maxima), oriental pumpkin (Cucurbita moschata), and pepo pumpkin (Cucurbita pepo). Western pumpkins are pumpkins that are generally processed edible or frozen or cooked in Japan. Oriental pumpkin is also called Japanese pumpkin and has a sticky and moist texture, but it is hardly cultivated at present. Pepo pumpkin is cultivated exclusively overseas, but its use is not edible but is used as an edible oil for seeds (pumpkin seed oil).
Furthermore, Western pumpkins and oriental pumpkins have seeds with shells (seed coats), but peppo pumpkins have a major difference in that they have seeds without shells (seed coats). The biological structure of both the part and the seed part is very different.
これまで前立腺肥大、頭髪の薄毛（ＡＧＡ）、頻尿等などに対する有効な作用について研究され発表されてきたのは、すべてペポカボチャの種子油に対してのものであった。事実、ドイツ連邦保健局、植物治療薬のコミッションＥによればペポカボチャ種子が女性の排尿障害用の薬剤として承認されている（非特許文献１）。このようにカボチャ属でもペポカボチャの種子油のみ研究が十分にされてきた背景としては、ペポカボチャは種皮が薄いため搾油が容易であり、種子油が大量に製造、販売されていることからその活性についても十分に研究することができた。
しかし、西洋カボチャおよび東洋カボチャは、種皮が殻のように固く、また、種子がワタに覆われているため、種子とワタを分離すること、および種子から種皮を取り除くことが非常に困難であり、長い間廃棄され利用されることはなかったのである。
本発明者らは、農産廃棄物、未利用バイオマスの有効利用の観点から、西洋カボチャおよび東洋カボチャの特性について探索をしたところ、西洋カボチャおよび東洋カボチャの種子油に５α−リダクターゼ阻害活性があることを世界で初めて突き止め、その後、西洋カボチャおよび東洋カボチャ種子油を大量生産する技術を開発し、それぞれについて特許を取得した（特許文献１、特許文献２）。
So far, all researches and publications on effective effects on prostatic hypertrophy, thin hair of hair (AGA), frequent urination, etc. have been directed to seed oil of pepo pumpkin. In fact, according to the German Federal Health Service and a plant treatment drug Commission E, peppo pumpkin seeds are approved as a drug for dysuria of women (Non-patent Document 1). As described above, the research on only the seed oil of Pepo Pumpkin has been sufficiently studied even in the pumpkin genus.Because Pepo Pumpkin has a thin seed coat, it is easy to squeeze oil, and the seed oil is produced and sold in large quantities. Was also able to fully study.
However, western pumpkins and oriental pumpkins are very difficult to separate seeds and cotton, and to remove seed coats from seeds, because the seed coat is hard like a shell and the seeds are covered with cotton. However, it was discarded and not used for a long time.
The present inventors searched for the characteristics of western pumpkin and oriental pumpkin from the viewpoint of effective utilization of agricultural waste and unused biomass. It was found that seed oil of western pumpkin and oriental pumpkin has 5α-reductase inhibitory activity. For the first time in the world, then developed technologies for mass production of western pumpkin and oriental pumpkin seed oil, and patented each of them (Patent Document 1, Patent Document 2).
このように、ペポカボチャ、西洋カボチャ、東洋カボチャの種子油に５αリダクターゼ阻害活性があることはわかったものの、それぞれの種子油の生理活性物質がどのような物質であるかは依然として不明のままである。
さらには、カボチャ種子の搾油したオイル分ではなく、種子のオイル分以外の抽出物についての報告は数えるほどしかない（特許文献３〜５）。ましてや西洋カボチャの種子の抽出物についての報告は皆無である。
Thus, although it was found that the seed oils of pepo pumpkin, western pumpkin, and oriental pumpkin have 5α reductase inhibitory activity, it is still unclear what kind of physiologically active substance each seed oil is. .
Furthermore, there are only a few reports on extracts other than the oil content of seeds, not the oil content of pumpkin seeds (Patent Documents 3 to 5). Furthermore, there are no reports on the extract of seeds of western pumpkin.
特許文献３には、クランベリーまたはその抽出物及びカボチャ種子又はその抽出物を含む泌尿器系疾患予防治療用組成物について開示されている。カボチャ種子としてペポカボチャとセイヨウカボチャが挙げられており、抽出物としてはエタノール、グリコール、グリセリン等の極性溶媒や超臨界条件下での二酸化炭素による抽出が好ましい例として挙げられている。実施例ではカボチャ種子を細切りし、エタノールで抽出したカボチャ種子エキスを配合した顆粒に尿失禁の改善効果や頻尿の改善効果があることが示されている。しかし、ここで用いたカボチャが西洋カボチャであるかペポカボチャであるかについては記載が無く、入手容易性を考慮すれば、ペポカボチャの可能性が高いと推測できる。また、本文献ではクランベリーとともに用いた場合の胃もたれ等に副作用が軽減するという効果に着目しており、尿失禁や頻尿改善効果が高いと考察されているものの、わずか５人のうち「良くなった」が１人、「やや良くなった」が２人、「変化なし」が２人であり、この差が有意な差であるかも不明である。
以上より、文献３には、西洋カボチャ種子のエタノール抽出物の頻尿等の改善効果については記載されていない。
Patent Document 3 discloses a composition for preventing and treating urological diseases, which includes cranberries or extracts thereof and pumpkin seeds or extracts thereof. Examples of pumpkin seeds include pepo-pumpkin and pumpkin pumpkin. Examples of preferable extracts include polar solvents such as ethanol, glycol, and glycerin, and extraction with carbon dioxide under supercritical conditions. In Examples, it is shown that granules containing a pumpkin seed extract obtained by chopping pumpkin seeds and extracted with ethanol have an effect of improving urinary incontinence and an effect of improving frequent urination. However, there is no description as to whether the pumpkin used here is a Western pumpkin or a peppo pumpkin, and it can be estimated that the possibility of a peppo pumpkin is high considering availability. In addition, this document focuses on the effect of reducing side effects on stomach sag when used together with cranberries, and although it is considered that the effect of improving urinary incontinence and frequent urination is high, There were 1 person who became “I became”, 2 people who became “slightly better”, and 2 people who did not change.
From the above, Document 3 does not describe the improvement effect such as frequent urination of ethanol extract of Western pumpkin seeds.
特許文献４には、排尿障害治療剤としてカボチャ種子の乾燥エキスとイソフラボンとを含有する組成物について開示されている。カボチャ種子の乾燥エキスとしては、西洋カボチャ種子の６０重量％エタノール抽出物の乾燥によって得られたエキスを用いられたと記載されてはいる。しかし、カボチャの学名「Cucurbita e pepo Linne」より西洋カボチャ（Cucurbita maxima）ではなく、ペポカボチャの間違いである。したがって、文献４にも西洋カボチャ種子のエタノール抽出物については記載も示唆もされていない。 Patent Document 4 discloses a composition containing a dried extract of pumpkin seeds and isoflavones as a dysuria treatment agent. It is described that an extract obtained by drying a 60% by weight ethanol extract of western pumpkin seeds was used as a dry extract of pumpkin seeds. However, the scientific name of the pumpkin is "Cucurbita e pepo Linne", not a Western pumpkin (Cucurbita maxima), but a mistake of a pepo pumpkin. Therefore, Document 4 neither describes nor suggests an ethanol extract of western pumpkin seeds.
特許文献５には、ペポカボチャ種子の水抽出物を有効成分とする泌尿器系疾患予防治療用組成物について開示されている。ここでは、搾油後のペポカボチャ種子を５００μｍ以下に粉砕した後水抽出したものが、ペポカボチャ種子の６０％エタノール抽出物に比べて有意に薬理活性が高いことが示され、特許化されている（特許第５６９０１０２号）。これらはやはりペポカボチャについての抽出物であり、西洋カボチャ種子については開示も示唆もされていない。 Patent Document 5 discloses a composition for preventing and treating urological diseases, which contains a water extract of pepo pumpkin seed as an active ingredient. Here, pebbled pumpkin seeds after oil extraction are pulverized to 500 μm or less and then water-extracted are shown to have significantly higher pharmacological activity compared to 60% ethanol extract of pepo pumpkin seeds (patented) No. 5690102). These are also extracts for pepo pumpkins, and no disclosure or suggestion is made for western pumpkin seeds.
以上のとおり、カボチャ種子自体の溶媒抽出物に関する報告はすべてペポカボチャについての報告であり、西洋カボチャ種子自体の溶媒抽出物に関する報告はない。これは、西洋カボチャ種子は、その硬い種皮を取り除くことが非常に困難であり、本発明者らによってその技術が開発されて間もないため、種子油以外の含有成分やその生理活性については未知の状況にあるためと考えられる。
本発明は、西洋カボチャ種子に含まれる成分の新たな可能性を追求することを課題として、これまで探索されていなかった西洋カボチャ種子の種子油以外の成分を溶媒抽出することを目的として、極性〜非極性まで様々な溶媒で抽出することにより西洋カボチャ種子溶媒抽出物を取得し、各溶媒の抽出物の生理活性について調べた。
As described above, all the reports regarding the solvent extract of the pumpkin seed itself are reports regarding the peppo pumpkin, and there is no report regarding the solvent extract of the western pumpkin seed itself. This is because it is very difficult to remove the hard seed coat of western pumpkin seeds, and since the technology has just been developed by the present inventors, the components other than seed oil and their physiological activities are unknown. This is probably because of the situation.
The object of the present invention is to pursue a new possibility of ingredients contained in western pumpkin seeds, and for the purpose of solvent extraction of ingredients other than seed oil of western pumpkin seeds that have not been explored so far. Extracted with various solvents up to non-polarity, the pumpkin seed solvent extract was obtained, and the physiological activity of the extract of each solvent was examined.
その結果、本発明者らは、西洋カボチャ種子の様々な溶媒抽出物のうち、エタノール又はメタノール抽出物に、他の溶媒では抽出され得なかった高い５α−リダクターゼ阻害活性を見出した。また、当該抽出物に泌尿器系疾患治療・予防効果があることも確認した。本発明は、これらの知見にもとづき完成されたもので以下の構成を有する。
（１）
西洋カボチャ種子のエタノール抽出物又はメタノール抽出物を有効成分とする５α―リダクターゼ阻害剤。
（２）
西洋カボチャ種子の子葉粉砕物のエタノール抽出物又はメタノール抽出物を有効成分とする５α―リダクターゼ阻害剤。
（３）
西洋カボチャ種子のエタノール抽出物又はメタノール抽出物を有効成分とする泌尿器系疾患治療・予防用組成物。
（４）
西洋カボチャ種子の子葉粉砕物のエタノール抽出物又はメタノール抽出物を有効成分とする泌尿器系疾患治療・予防用組成物。
（５）
５α―リダクターゼ阻害剤または泌尿器系疾患治療・予防用組成物を製造する方法であって、
西洋カボチャ種子をエタノール又はメタノールで抽出して西洋カボチャ種子のエタノール抽出物又はメタノール抽出物を得る工程を含む、前記方法。
（６）
西洋カボチャ種子をエタノール又はメタノールで抽出する工程が、
西洋カボチャ種子の種皮を除去して子葉を得る工程
子葉を粉砕して子葉粉砕物を得る工程
子葉粉砕物をエタノール又はメタノールで抽出する工程
を含む、前記（５）に記載の方法。
（７）
西洋カボチャ種子の搾油粕のエタノール抽出物又はメタノール抽出物を有効成分とする５α―リダクターゼ阻害剤。
（８）
西洋カボチャ種子の搾油粕のエタノール抽出物又はメタノール抽出物を有効成分とする泌尿器系疾患治療・予防用組成物。
（９）
５α―リダクターゼ阻害剤または泌尿器系疾患治療・予防用組成物を製造する方法であって、
西洋カボチャ種子の搾油粕をエタノール又はメタノールで抽出してエタノール抽出物又はメタノール抽出物を得る工程を含む、前記方法。
As a result, the present inventors found high 5α-reductase inhibitory activity that could not be extracted with ethanol or methanol extract among various solvent extracts of western pumpkin seeds with other solvents. It was also confirmed that the extract has a urinary disease treatment / prevention effect. The present invention has been completed based on these findings and has the following configuration.
(1)
A 5α-reductase inhibitor comprising an ethanol extract or methanol extract of western pumpkin seeds as an active ingredient.
(2)
A 5α-reductase inhibitor comprising, as an active ingredient, an ethanol extract or a methanol extract of a cotyledon of Western pumpkin seeds.
(3)
A composition for treatment / prevention of urological diseases comprising an ethanol extract or a methanol extract of Western pumpkin seeds as an active ingredient.
(4)
A composition for treating / preventing urological diseases, comprising as an active ingredient an ethanol extract or a methanol extract of a cotyledon of Western pumpkin seeds.
(5)
A method for producing a 5α-reductase inhibitor or a urological disease treatment / prevention composition comprising:
The method comprising the step of extracting western pumpkin seeds with ethanol or methanol to obtain an ethanol extract or methanol extract of western pumpkin seeds.
(6)
Extracting the pumpkin seeds with ethanol or methanol,
The process according to (5) above, comprising the step of removing the seed coat of the western pumpkin seed to obtain a cotyledon and the step of obtaining a cotyledon by pulverizing the cotyledon and extracting the cotyledon pulverized product with ethanol or methanol.
(7)
A 5α-reductase inhibitor comprising, as an active ingredient, an ethanol extract or a methanol extract of an oil cake of Western pumpkin seeds.
(8)
A composition for the treatment and prevention of urological diseases, comprising as an active ingredient an ethanol extract or a methanol extract of an oil cake of Western pumpkin seeds.
(9)
A method for producing a 5α-reductase inhibitor or a urological disease treatment / prevention composition comprising:
The said method including the process of extracting the oil-drinks of a western pumpkin seed with ethanol or methanol, and obtaining the ethanol extract or methanol extract.
本発明によれば、西洋カボチャ種子のエタノールまたはメタノール抽出物に高い５α−リダクターゼ阻害活性があることが判明したことから、搾油工程を経ずに５α−リダクターゼ阻害物質を製造することができる。また、搾油などによる種子油を含まないことからカプセル化などにより簡単に活性の高い濃縮物として利用することができる。また、本発明の抽出物には、泌尿器系疾患予防治療効果も認められることから、同様に治療用組成物を製造し、利用することが可能である。 According to the present invention, it has been found that the ethanol or methanol extract of western pumpkin seed has a high 5α-reductase inhibitory activity, and therefore, a 5α-reductase inhibitor can be produced without going through an oil extraction step. In addition, since it does not contain seed oil due to oil extraction, it can be easily used as a highly active concentrate by encapsulation or the like. In addition, since the extract of the present invention also has an effect of preventing and treating urological diseases, it is possible to produce and use a therapeutic composition in the same manner.
（カボチャの種類）
本発明に用いるカボチャは、西洋カボチャであり、学名をCucurbita maximaという。西洋カボチャは、その種子が硬い殻(種皮)で覆われているため、種子からのエタノール又はメタノールによる抽出効率を上げるためには、種皮をあらかじめ除去し、得られた子葉を粉砕するか、あるいは、種皮がついたまま粉砕するなどして子葉部分がエタノール又はメタノールと接触可能に露出するように前処理をすることが望ましい。また、種子の搾油後の粕も同様に利用することができる。したがって、本発明の西洋カボチャ種子のエタノール又はメタノール抽出物は、種子自体の抽出物、子葉部分の抽出物、種子又は子葉の搾油後の粕の抽出物のいずれも含むものとする。
以下、エタノールとメタノールを代表してエタノールについて説明するが、これをメタノールに置き換えて使用できることは言うまでもない。
(Type of pumpkin)
The pumpkin used in the present invention is a Western pumpkin, and its scientific name is Cucurbita maxima. Western pumpkin has its seeds covered with a hard shell (seed coat), so in order to increase the extraction efficiency from the seeds with ethanol or methanol, the seed coat is removed in advance and the resulting cotyledons are crushed, or It is desirable to perform pretreatment so that the cotyledon part is exposed so as to come into contact with ethanol or methanol by pulverizing the seed coat. Moreover, the cocoon after seed oil extraction can be used similarly. Therefore, the ethanol or methanol extract of the western pumpkin seed of the present invention includes any of the extract of the seed itself, the extract of the cotyledon part, and the extract of the cocoon after oil extraction of the seed or cotyledon.
Hereinafter, ethanol will be described on behalf of ethanol and methanol, but it goes without saying that this can be used in place of methanol.
（種皮の除去）
西洋カボチャ種子の硬い種皮の除去は、例えばお米の玄米を精米する方法を適用することができる。したがって、すでに公知の精米機を利用して種皮を除去することができる。除去の程度、例えば精米の程度でいえば、白米の程度、５分づきの程度、７分づきの程度などがあるが、目的に応じて、適宜調整することができる。
また、この他にも特開２０１４−１３３７８９号に記載の方法を利用することもできる。すなわち、カボチャ種子を水分値７０〜９０％に調整後、滑り止め用の溝のついた回転する２本のローラーの間を通過させることにより、種皮および胚乳を取り除く方法である。種皮を取り除くことにより子葉部分が得られる。
(Removal of seed coat)
The removal of the hard seed coat of the western pumpkin seeds can be performed by, for example, a method of milling brown rice. Therefore, the seed coat can be removed using a known rice mill. The degree of removal, for example, the degree of polished rice, is the degree of white rice, the degree of 5 minutes, the degree of 7 minutes, etc., but can be appropriately adjusted according to the purpose.
In addition, the method described in JP 2014-133789 A can also be used. That is, after adjusting the pumpkin seed to a moisture value of 70 to 90%, the seed coat and endosperm are removed by passing between two rotating rollers with grooves for preventing slipping. The cotyledon part is obtained by removing the seed coat.
（種子または子葉の粉砕）
エタノールの抽出対象としては、種皮を上記の方法により取り除いて得られた子葉を粗挽き又は粉砕した粗挽き物または粉砕物を利用することができる。あるいは、種子をそのまま種皮がついたまま粗挽き又は粉砕した、粗挽き物または粉砕物を利用することもできる。さらには、種子あるいは子葉を搾油して得られる搾油粕の粗挽き又は粉砕した粗挽き物または粉砕物を利用することができる。特にことわらない限りは、粗挽きと粉砕を合わせて粉砕等、粗挽き物と粉砕物を合わせて粉砕物等、あるいは単に粉砕物ということがある。
粉砕の程度は、粉砕物等にエタノールが浸透できる大きさであればよく、粒子径が小さければ、より浸透がされやすく、大きければ浸透が十分にされないことがある。種皮を除いた子葉の粉砕物等の平均粒子径は、例えば、０．１ｍｍ〜５ｍｍが挙げられる。
また、西洋カボチャは、種皮を上記のように精米の原理で取り除く場合は、種皮を取り除くのと同時に子葉の粉砕物を得ることもできる。すなわち、西洋カボチャ種子を精米機で処理すると、お米の部分が種皮、糠の部分が子葉の粉砕物に相当し、種皮と子葉粉砕物にきれいに分離することが可能である。
(Crushing seeds or cotyledons)
As an extraction target of ethanol, a coarsely ground product or a ground product obtained by roughly grinding or grinding a cotyledon obtained by removing the seed coat by the above method can be used. Alternatively, a coarsely ground product or a ground product obtained by roughly grinding or pulverizing seeds with seed coats as they are can also be used. Furthermore, the coarsely ground or pulverized coarsely ground or pulverized product of the oil slag obtained by squeezing seeds or cotyledons can be used. Unless otherwise specified, there are cases where coarse grinding and pulverization are combined, pulverization, etc., coarse pulverization and pulverization are combined, pulverization, etc., or simply pulverization.
The degree of pulverization only needs to be large enough to allow ethanol to penetrate into the pulverized product, etc. If the particle size is small, the osmosis is more likely to occur, and if larger, the penetration may not be sufficient. Examples of the average particle size of the cotyledon pulverized material excluding the seed coat include 0.1 mm to 5 mm.
In addition, when removing the seed coat from the rice milling principle as described above, the Western pumpkin can also obtain a cotyledon pulverized product simultaneously with removing the seed coat. That is, when processing the Western pumpkin seeds with a rice mill, the rice portion corresponds to the seed coat, and the rice bran portion corresponds to the cotyledon pulverized product, which can be separated into the seed coat and the cotyledon pulverized product.
（エタノール又はメタノールによる抽出処理）
本発明のエタノール等による抽出の対象となる種子は洗浄され、その後乾燥されているものが望ましい。乾燥後の水分率は５〜１５％が望ましい。
本発明のエタノール等による抽出は、５α−リダクターゼ阻害活性を高めることができるような抽出条件であればよく、主にエタノール等の添加量および浸漬時間によりコントロールすることができる。
(Extraction treatment with ethanol or methanol)
The seeds to be extracted with ethanol or the like of the present invention are preferably washed and then dried. The moisture content after drying is desirably 5 to 15%.
The extraction with ethanol or the like of the present invention may be any extraction condition that can enhance the 5α-reductase inhibitory activity, and can be controlled mainly by the addition amount of ethanol or the like and the immersion time.
エタノールの添加量および浸漬時間は、種子の子葉部分又は搾油粕に浸透できる量および時間であればよく、これらは、種皮の除去の有無、種子又は搾油粕の粉砕の有無によっても異なる。西洋カボチャは種子が硬い種皮で覆われているため、種皮を取り除いてからエタノールによる抽出処理、あるいは種皮を取り除いて粉砕してからエタノールによる抽出処理をすることが望ましい。また、種皮を取り除かない場合は、種皮ごとカボチャ種子を２以上に粉砕するなどして少なくともエタノールが子葉に浸透できるように子葉部分を露出させることが望ましい。 The amount of ethanol added and the soaking time may be any amount and time that can penetrate into the cotyledon part of the seed or the squeezed culm, and these differ depending on whether or not the seed coat is removed and whether the seed or the squeezed squeezed pulverized powder. Since the seeds of western pumpkin are covered with a hard seed coat, it is desirable to remove the seed coat and then extract with ethanol, or remove the seed coat and pulverize it before extracting with ethanol. When the seed coat is not removed, it is desirable to expose the cotyledon part so that at least ethanol can penetrate into the cotyledon by pulverizing the pumpkin seed with the seed coat into two or more.
エタノールの添加量は、種子重量の１００〜１，０００重量％程度であればよい。また、種皮を取り除いた子葉に対しては、子葉重量の５０〜５００重量％程度であればよい。西洋カボチャの粉砕子葉に対しては、１００％以上が好ましく、２００％以上がさらに好ましく、３００％以上がよりいっそう好ましく、５００％以上がもっとも好ましい。搾油粕に対しては、１００％以上が好ましく、２００％以上がさらに好ましく、３００％以上がよりいっそう好ましく、５００％以上がもっとも好ましい。 The amount of ethanol added may be about 100 to 1,000% by weight of the seed weight. Moreover, what is necessary is just about 50 to 500 weight% of the cotyledon weight with respect to the cotyledon from which the seed coat was removed. For crushed cotyledons of western pumpkin, 100% or more is preferable, 200% or more is more preferable, 300% or more is even more preferable, and 500% or more is most preferable. 100% or more is preferable, more than 200% is more preferable, 300% or more is still more preferable, and 500% or more is the most preferable with respect to the squeezed oil cake.
エタノールによる抽出時間（浸漬時間）は、種子の子葉部分又は搾油粕にエタノールが浸透できる時間が望ましく、1時間以上が望ましく、５時間以上がさらに望ましく、１０時間以上がよりいっそう望ましい。
エタノールに浸漬する方法は、種子、子葉、又は搾油粕の粉砕物にエタノールを添加し、撹拌してまんべんなくエタノールを種子、子葉、又は搾油粕の粉砕物に接触させることが望ましい。撹拌に超音波を使用するとより効率的に抽出でき、時間も短くてすむ。添加はふりかけまたは噴霧、漬け置き、エタノールの入った容器内の通過などにより行うことができる。さらに、種子、子葉、又は搾油粕の粉砕物をカラムに詰め、それの上部もしくは下部からアルコールを流すことにより連続的に抽出することができる。また、エタノールと種子等の接触後の浸漬(換言すれば、接触状態の保持、以下同じ)は、エタノールが蒸発しない程度の温度で密封した状態で浸漬されることが望ましい。
エタノールは、エタノール単独でも水とエタノールの混合物の状態でも使用することができ、混合物の場合、７０％以上のエタノールが望ましく、８０％以上がさらに望ましく、９０％以上がよりいっそう望ましく、９９％以上がもっとも望ましい。
The extraction time (immersion time) with ethanol is preferably a time during which ethanol can penetrate into the cotyledon part of the seed or the oil culm, preferably 1 hour or more, more preferably 5 hours or more, and even more preferably 10 hours or more.
In the method of immersing in ethanol, it is desirable to add ethanol to the pulverized product of seeds, cotyledons or oil culm, and to stir the ethanol evenly to contact the pulverized material of seeds, cotyledons or oil culm. When ultrasonic waves are used for stirring, extraction can be performed more efficiently and the time can be shortened. Addition can be performed by sprinkling or spraying, soaking, passing through a container containing ethanol, and the like. Furthermore, seeds, cotyledons, or pulverized oil cake can be packed in a column and extracted continuously by flowing alcohol from the upper part or the lower part thereof. Further, the immersion after contact between ethanol and seeds (in other words, maintaining the contact state, the same applies hereinafter) is desirably immersed in a sealed state at a temperature at which ethanol does not evaporate.
Ethanol can be used either alone or in the form of a mixture of water and ethanol. In the case of a mixture, 70% or more of ethanol is desirable, 80% or more is more desirable, 90% or more is even more desirable, and 99% or more. Is most desirable.
（脱アルコール）
西洋カボチャ種子粉砕物等をエタノールに浸漬した後、粉砕物等を濾過等により除去し、エタノール抽出物を得ることができる。ここでアルコール分が余計である場合や濃縮したい場合には、エタノールをロータリーエバポレーターなどを用いて減圧濃縮することにより、エタノール抽出物の濃縮物を得ることができる。使用目的によっては、アルコール分を完全に除くことが望ましい場合がある。エタノール抽出物とエタノール抽出物の濃縮物は、特に断りのない限り、本明細書においてエタノール抽出物として表す。
(Dealcoholization)
After pulverizing the western pumpkin seeds and the like in ethanol, the pulverized materials and the like can be removed by filtration or the like to obtain an ethanol extract. Here, when the alcohol content is excessive or when it is desired to concentrate, ethanol can be concentrated under reduced pressure using a rotary evaporator or the like to obtain an ethanol extract concentrate. Depending on the purpose of use, it may be desirable to completely remove alcohol. Unless otherwise indicated, the ethanol extract and the concentrate of the ethanol extract are expressed as the ethanol extract in the present specification.
（各種溶媒による抽出物）
本発明の西洋カボチャ種子エタノール抽出物は、高い５α−リダクターゼ阻害活性を有することを確認した。しかし、他の溶媒で同様に抽出した抽出物は全くあるいはほとんど同活性を有しなかった。すなわち、西洋カボチャ種子のヘキサン抽出物、ベンゼン抽出物、ジエチルエーテル抽出物、クロロホルム抽出物、塩化メチレン抽出物、テトラヒドロフラン抽出物、アセトニトリル抽出物、Ｎ，Ｎジメチルフォルムアミド抽出物、ジオキサン抽出物、アセトン抽出物、水抽出物には５α−リダクターゼ阻害活性は全くなかった（０〜５％）。また、酢酸エチル抽出物、ｎブタノール抽出物、イソプロピルアルコール抽出物にはわずかながら５α−リダクターゼ阻害活性が認められた（１０〜１５％）。これに対して、メタノール抽出物、エタノール抽出物には７８％、９２％という高い阻害活性が認められた。なお、これらの阻害活性は後述する試験例１により行われた５α−リダクターゼ阻害活性測定結果によるものである。メタノールとエタノールは水溶性の極性溶媒であるが、同じく水溶性の極性溶媒である水とは全く異なる結果となり、水抽出物には５α−リダクターゼ阻害活性は認められなかった。また、メタノール、エタノールと同じアルキルアルコールであるイソプロピルアルコールやｎブタノールの抽出物にも５α−リダクターゼ阻害活性は認められなかった。また、油脂類の抽出に使用される典型溶媒であるヘキサン抽出物にも５α−リダクターゼ阻害活性は認められなかった。
これらの結果より、本発明の５α−リダクターゼ阻害活性物質はエタノールまたはメタノールに溶出し、ヘキサンや水などには溶出しない物質であることがわかった。換言すれば西洋カボチャ種子のエタノール抽出物と、水抽出物又はヘキサン抽出物等とは異なる物質であると言える。
ここで、これまで西洋カボチャ種子を搾油した種子油に５α−リダクターゼ阻害活性があることが知られていた。しかし、５α−リダクターゼ阻害活性物質が搾油した油に溶解している成分であるなら、油脂類との相溶性の高いヘキサンにも溶解して抽出されるはずであるところ、ヘキサンに活性物質はほとんど溶出されなかった。したがって、これまで報告されてきた西洋カボチャ種子油中の活性成分とも異なる成分であると推定される。すなわち、西洋カボチャ種子油と、本発明の西洋カボチャ種子エタノール抽出物とは異なる成分であり、異なる物質である。
(Extracts with various solvents)
The western pumpkin seed ethanol extract of the present invention was confirmed to have high 5α-reductase inhibitory activity. However, extracts that were similarly extracted with other solvents had no or little activity. That is, hexane extract, benzene extract, diethyl ether extract, chloroform extract, methylene chloride extract, tetrahydrofuran extract, acetonitrile extract, N, N dimethylformamide extract, dioxane extract, acetone The extract and water extract had no 5α-reductase inhibitory activity (0 to 5%). In addition, 5α-reductase inhibitory activity was slightly observed in the ethyl acetate extract, n-butanol extract, and isopropyl alcohol extract (10 to 15%). On the other hand, high inhibitory activity of 78% and 92% was observed in the methanol extract and the ethanol extract. In addition, these inhibitory activity is based on the measurement result of 5 (alpha) -reductase inhibitory activity performed by Test Example 1 mentioned later. Methanol and ethanol are water-soluble polar solvents, but the results are completely different from water, which is also a water-soluble polar solvent, and no 5α-reductase inhibitory activity was observed in the water extract. In addition, 5α-reductase inhibitory activity was not observed in extracts of isopropyl alcohol and n-butanol, which are the same alkyl alcohols as methanol and ethanol. In addition, 5α-reductase inhibitory activity was not observed in the hexane extract, which is a typical solvent used for the extraction of fats and oils.
From these results, it was found that the 5α-reductase inhibitory active substance of the present invention is a substance that elutes in ethanol or methanol but does not elute in hexane, water, or the like. In other words, it can be said that the ethanol extract of western pumpkin seeds is different from the water extract or hexane extract.
Here, it has been known so far that seed oil obtained by squeezing western pumpkin seed has a 5α-reductase inhibitory activity. However, if the 5α-reductase inhibitory active substance is a component dissolved in the squeezed oil, it should be extracted by dissolving it in hexane which is highly compatible with fats and oils. It was not eluted. Therefore, it is estimated that it is a component different from the active component in the western pumpkin seed oil reported so far. That is, the western pumpkin seed oil and the western pumpkin seed ethanol extract of the present invention are different components and different substances.
（用途）
本発明により製造された西洋カボチャ種子エタノール抽出物は、従来の西洋カボチャ種子油と同様に使用することができるが、西洋カボチャ種子油に比べて５α−リダクターゼ阻害活性が顕著に高いことから、少ない量でも同等の活性が得られ、また同じ量を摂取すればさらに高い効果が得られる。したがって、本発明の製造方法により得られた５α−リダクターゼ阻害活性の高い西洋カボチャ種子エタノール抽出物は、これを添加して５α−リダクターゼ阻害機能を付与した飲食品として、あるいはこれを有効成分とする５αリダクターゼ阻害剤として、サプリメントや医薬品として利用できる。すなわち、本発明は西洋カボチャ種子のエタノール抽出物又はメタノール抽出物を有効成分とする５αリダクターゼ阻害用食品組成物でもある。
また、本発明の西洋カボチャ種子エタノール抽出物は、頻尿改善作用及び前立腺肥大症改善作用も実証されたことから、泌尿器系疾患予防・改善・治療用途のサプリメントや医薬としても利用できる。すなわち、本発明は、西洋カボチャ種子のエタノール抽出物又はメタノール抽出物を有効成分とする泌尿器系疾患予防・改善・治療用食品組成物でもある。
以下、本発明を実施例をもとに説明するがこれに限定されるものではない。
(Use)
The western pumpkin seed ethanol extract produced according to the present invention can be used in the same manner as conventional western pumpkin seed oil, but it has less 5α-reductase inhibitory activity compared to western pumpkin seed oil, so that it is less. The same amount of activity can be obtained in the same amount, and even higher effects can be obtained if the same amount is consumed. Therefore, the western pumpkin seed ethanol extract having a high 5α-reductase inhibitory activity obtained by the production method of the present invention is used as a food or drink to which this has been added to give a 5α-reductase inhibitory function, or as an active ingredient. As a 5α reductase inhibitor, it can be used as a supplement or a pharmaceutical product. That is, the present invention is also a 5α reductase-inhibiting food composition comprising an ethanol extract or methanol extract of western pumpkin seed as an active ingredient.
In addition, since the Western pumpkin seed ethanol extract of the present invention has also been demonstrated to improve pollakiuria and prostatic hypertrophy, it can also be used as a supplement or medicine for the prevention / amelioration / treatment of urological diseases. That is, the present invention is also a food composition for preventing / ameliorating / treating urological diseases, which comprises an ethanol extract or a methanol extract of western pumpkin seed as an active ingredient.
Hereinafter, the present invention will be described based on examples, but is not limited thereto.
〔５αリダクターゼ阻害活性の測定方法〕
１．試験方法
（１）試薬類の調製
（ｉ）補酵素
β−ＮＡＤＰＨを０．７７ｍｇ／ｍＬになるように１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．２）に溶解させた。
（ｉｉ）基質
テストステロン（東京化成工業株式会社）を、プロピレングリコール：Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー＝１：１で０．５ｍｇ／ｍＬとなるように溶解させた。内部標準であるｐ−ヒドロキシベンゾエイド（東京化成工業株式会社）は、０．１ｍｇ／ｍＬとなるようにメタノールに溶解させた。酢酸エチルは和光純薬から購入したものをそのまま使用した。
（ｉｉｉ）酵素溶液
雄性ラットから肝臓を摘出し、−８０℃で保存した。肝臓は重量測定した後、５倍量の１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．２）でホモジネートした。肝臓ホモジネート液は、９，０００×ｇで１０分間遠心分離し、得られた上清は、阻害活性試験日まで−８０℃で保存した。
（２）測定手順
５αリダクターゼ阻害活性試験は以下の方法に従って行った。
活性試験を行うための反応液の組成を下記表１にまとめた。反応液は、１５μＬのテストステロン溶液、１０μＬの被験物質溶液（ＤＭＳＯに溶解）、１００μＬの酵素溶液及び２５μＬのＮＡＤＰＨ溶液を混合し調製した。尚、ブランクには被験物質の代わりにＤＭＳＯを加え、酵素溶液の代わりに１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．２）をそれぞれ加えた。また、コントロールには被験物質の代わりにＤＭＳＯを加えた。被験物質は、カボチャ種子オイルやその処理物（抽出物）である。
酵素反応は、本反応液を３７℃，３０分間インキュベートすることで行った。反応は、酢酸エチル２５０μＬと内部標準溶液を２５μＬを加え混合させることで停止させた。反応液は、９，０００×ｇで１０分間遠心分離をし、得られた上清１００μＬを分取し、遠心エバポレーターで乾固させた。乾固物はメタノール１００μＬに溶解させ、ＨＰＬＣでテストステロンの定量を行った。
阻害活性は、ブランク、コントロール、サンプルそれぞれのテストステロンのピーク面積から以下の式で阻害率（％）として求めた。
[Method for Measuring 5α Reductase Inhibitory Activity]
1. Test Method (1) Preparation of Reagents (i) Coenzyme β-NADPH was dissolved in 10 mM Tris-HCl buffer (pH 7.2) so as to be 0.77 mg / mL.
(Ii) Substrate Testosterone (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) was dissolved in propylene glycol: Tris-HCl buffer = 1: 1 so as to be 0.5 mg / mL. P-Hydroxybenzoaide (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.), which is an internal standard, was dissolved in methanol so as to be 0.1 mg / mL. The ethyl acetate purchased from Wako Pure Chemicals was used as it was.
(Iii) Enzyme solution The liver was extracted from male rats and stored at -80 ° C. The liver was weighed and then homogenized with 5 volumes of 10 mM Tris-HCl buffer (pH 7.2). The liver homogenate solution was centrifuged at 9,000 × g for 10 minutes, and the resulting supernatant was stored at −80 ° C. until the inhibitory activity test day.
(2) Measurement procedure The 5α reductase inhibitory activity test was performed according to the following method.
The composition of the reaction solution for conducting the activity test is summarized in Table 1 below. The reaction solution was prepared by mixing 15 μL testosterone solution, 10 μL test substance solution (dissolved in DMSO), 100 μL enzyme solution and 25 μL NADPH solution. In the blank, DMSO was added instead of the test substance, and 10 mM Tris-HCl buffer (pH 7.2) was added instead of the enzyme solution. In addition, DMSO was added to the control instead of the test substance. The test substance is pumpkin seed oil or a processed product (extract) thereof.
The enzyme reaction was performed by incubating the reaction solution at 37 ° C. for 30 minutes. The reaction was stopped by adding 250 μL of ethyl acetate and 25 μL of the internal standard solution and mixing them. The reaction solution was centrifuged at 9,000 × g for 10 minutes, and 100 μL of the obtained supernatant was collected and dried with a centrifugal evaporator. The dried product was dissolved in 100 μL of methanol, and testosterone was quantified by HPLC.
Inhibitory activity was calculated | required as inhibition rate (%) with the following formula | equation from the peak area of each testosterone of a blank, control, and a sample.
〔試験例１〕西洋カボチャ種子の各種溶媒による抽出物の取得と５α−リダクターゼ阻害活性
西洋カボチャ種子を各種の溶媒で抽出し、得られた各抽出物の５α−リダクターゼ阻害活性を測定した。
１．試験方法
西洋カボチャの種子を水洗浄し、乾燥して、水分率を５％とし、その乾燥種子を乳鉢で粉砕した。粉砕種子１００ｇに対して、表２に示す抽出溶媒を５倍量添加し、５℃で１夜撹拌した。その後、抽出液を濾過し、減圧濃縮して油状の抽出物を得た。得られた抽出物１ｇにＤＭＳＯを添加して５ｍＬにメスアップして被験物質溶液とし、１０μＬ採取して実施例１の方法によりの５αリダクターゼ阻害活性を測定した。
[Test Example 1] Extraction of Western Pumpkin Seeds with Various Solvents and 5α-Reductase Inhibitory Activity Western pumpkin seeds were extracted with various solvents, and the 5α-reductase inhibitory activities of the obtained extracts were measured.
1. Test Method Western pumpkin seeds were washed with water and dried to a moisture content of 5%, and the dried seeds were pulverized in a mortar. Five times the amount of the extraction solvent shown in Table 2 was added to 100 g of pulverized seeds and stirred overnight at 5 ° C. Thereafter, the extract was filtered and concentrated under reduced pressure to obtain an oily extract. DMSO was added to 1 g of the obtained extract to make up to 5 mL to make a test substance solution, 10 μL was collected, and the 5α-reductase inhibitory activity according to the method of Example 1 was measured.
２．試験結果
結果を表２に示した。抽出に用いた溶媒の極性の低いもの（ヘキサン）から高いもの（水）の順に並べ、西洋カボチャ種子の各溶媒抽出物の５α−リダクターゼ阻害活性を阻害率（％）で示した。西洋カボチャ種子中の５α−リダクターゼ阻害活性物質はヘキサンなどの非極性溶媒には全く溶けず、極性溶媒の水にもほとんど溶けない。しかしながら、水に近い極性溶媒のエタノールおよびメタノールには驚くほど良く溶けて５α−リダクターゼ阻害活性物質が抽出されることがわかった。
2. Test results The results are shown in Table 2. The solvents used for extraction were arranged in the order of low polarity (hexane) to high polarity (water), and the 5α-reductase inhibitory activity of each solvent extract of Western pumpkin seeds was shown as an inhibition rate (%). The 5α-reductase inhibitory active substance in western pumpkin seeds is not soluble in nonpolar solvents such as hexane, and is hardly soluble in polar solvent water. However, it was found that the 5α-reductase inhibitory active substance was extracted with a surprisingly good solubility in ethanol and methanol, which are polar solvents close to water.
３．考察
このように非極性から極性の数多くの溶媒を用いて西洋カボチャの種子中にある５α−リダクターゼ阻害活性を示す生理活性成分の抽出を試みた結果、エタノール又はメタノールによって特異的に抽出されることが判明した。
西洋カボチャ種子をエタノール及びメタノールに浸漬して得られた各溶液を減圧濃縮し、エタノール及びメタノールを完全に除いたものは油状の物質であり、乾固することはなかった。したがって、西洋カボチャ種子中の５α−リダクターゼ阻害活性物質はエタノールおよびメタノールによって西洋カボチャ種子から溶出する油脂類と共に抽出された。
3. Discussion As a result of attempts to extract physiologically active components exhibiting 5α-reductase inhibitory activity in western pumpkin seeds using a large number of nonpolar to polar solvents, it is specifically extracted with ethanol or methanol. There was found.
Each solution obtained by immersing western pumpkin seeds in ethanol and methanol was concentrated under reduced pressure, and ethanol and methanol completely removed were oily substances and did not dry out. Therefore, the 5α-reductase inhibitory active substance in western pumpkin seeds was extracted together with fats and oils eluted from western pumpkin seeds with ethanol and methanol.
〔試験例２〕カボチャの種類の違いによる、カボチャ種子エタノール抽出物の５αリダクターゼ阻害活性の比較
１．試験方法
西洋カボチャのほかに、東洋カボチャおよびペポカボチャについて、抽出するための溶媒をエタノールに特定した以外は、試験例１と同様に試験を行い、各カボチャ種子のエタノール抽出物を得た。各カボチャ種子のエタノール抽出物１ｇをＤＭＳＯで５ｍＬにメスアップして被験物質溶液とし、１０μＬ採取して上述の５αリダクターゼ阻害活性測定方法により活性を測定した。
[Test Example 2] Comparison of 5α-reductase inhibitory activity of pumpkin seed ethanol extract depending on the type of pumpkin Test Method In addition to the western pumpkin, the oriental pumpkin and the pepo pumpkin were tested in the same manner as in Test Example 1 except that the solvent for extraction was specified as ethanol, and an ethanol extract of each pumpkin seed was obtained. 1 g of an ethanol extract of each pumpkin seed was made up to 5 mL with DMSO to obtain a test substance solution, 10 μL was collected, and the activity was measured by the above-described method for measuring 5α-reductase inhibitory activity.
２．試験結果
結果を表３に示した。西洋カボチャ種子のエタノール抽出物は、東洋カボチャ種子およびペポカボチャ種子のエタノール抽出物より高い５αリダクターゼ阻害活性を示した。特に、西洋カボチャ種子は、ペポカボチャ種子に比べて２倍以上に相当する高い活性を示した。
2. Test results The results are shown in Table 3. The western pumpkin seed ethanol extract showed higher 5α reductase inhibitory activity than the oriental pumpkin seed and pepo pumpkin seed ethanol extract. In particular, the western pumpkin seeds exhibited a high activity corresponding to more than twice as much as the peppo pumpkin seeds.
３．考察
上記のとおり、カボチャ種子エタノール抽出物の５αリダクターゼ阻害活性はカボチャの種類により非常に異なるものであった。
しかし、カボチャ種子を搾油した油の５αリダクターゼ阻害活性は、カボチャの種類により大きな違いは見られなかった（特願２０１５−１９２３９４号実施例１〜３）。
したがって、搾油により油中に取り出される種子中の５αリダクターゼ阻害活性物質とエタノールに溶出されてくる種子中の５αリダクターゼ阻害活性物質とは、カボチャの種類によって相違すると考えられた。即ち、西洋カボチャ種子からは他のカボチャ種子とは異なり、エタノールによって、より多くの５αリダクターゼ阻害活性物質が抽出されることがわかった。
なお、西洋カボチャ種子のエタノール抽出物について、急性毒性試験を行ったところ、毒性はみられなかった(試験結果示さず)。
3. Discussion As described above, the 5α-reductase inhibitory activity of the pumpkin seed ethanol extract was very different depending on the type of pumpkin.
However, the 5α reductase inhibitory activity of the oil obtained by squeezing pumpkin seeds was not significantly different depending on the type of pumpkin (Japanese Patent Application No. 2015-192394, Examples 1 to 3).
Therefore, it was considered that the 5α-reductase inhibitory active substance in seeds extracted into oil by oil extraction differs from the 5α-reductase inhibitory active substance in seeds eluted by ethanol depending on the type of pumpkin. That is, it was found that, unlike other pumpkin seeds, more 5α-reductase inhibitory active substances were extracted from the western pumpkin seeds by ethanol.
In addition, when an acute toxicity test was performed on an ethanol extract of western pumpkin seeds, no toxicity was observed (test result not shown).
〔試験例３〕西洋カボチャ種子のエタノール抽出物の頻尿改善作用の確認
１．試験方法
（１）西洋カボチャ種子のエタノール抽出物含有ソフトカプセルの調整
抽出溶媒をエタノールにした以外は、試験例１と同様にして、西洋カボチャ種子のエタノール抽出物（油状物）を得た。得られた抽出物（油状物）を０．４ｇ／カプセルとなるようにゼラチンソフトカプセルに封入し、エタノール抽出物含有ゼラチンソフトカプセルを製造した。当該製造は、三生医薬株式会社に委託して行った（以下、エタノールまたはメタノール抽出物含有ゼラチンソフトカプセルの製造において同じ）。
（２）被験者
４６歳から７２歳の男女４０名を対象に非盲検試験で行った。
（３）投与方法
ソフトカプセルを１日３個（０．４ｇ×３個＝１．２ｇ／日）、１２週間継続して被験者に投与した。
（４）評価方法
評価は、投与開始前、投与開始６週間後、投与開始１２週間後に、（Ａ）過活動膀胱症状質問票（Overactive Bladder Symptom Score、略してOABSS、表４）（＊）及び（Ｂ）国際前立腺症状スコア（International Prostate Symptom Score、略してI-PSS、表５）（＊＊）により行った。
＊過活動膀胱が疑われるときの問診で使われる質問票のこと
＊＊前立腺肥大症が疑われるときの問診で使われるWHO（世界保健機構）が1995年に定めた問診票のこと。
[Test Example 3] Confirmation of pollakiuria improving action of ethanol extract of pumpkin seeds 1. Test Method (1) Preparation of Soft Capsules Containing Ethanol Extract of Western Pumpkin Seeds Ethanol extract (oily material) of western pumpkin seeds was obtained in the same manner as in Test Example 1 except that the extraction solvent was ethanol. The obtained extract (oil) was encapsulated in gelatin soft capsules at a concentration of 0.4 g / capsule to produce ethanol extract-containing gelatin soft capsules. The production was consigned to Sansei Pharmaceutical Co., Ltd. (hereinafter the same in the production of gelatin soft capsules containing ethanol or methanol extract).
(2) Subjects The subjects were 40 men and women aged 46 to 72 years in an open-label study.
(3) Administration method Three soft capsules per day (0.4 g × 3 = 1.2 g / day) were continuously administered to the subjects for 12 weeks.
(4) Evaluation method Evaluation was made before the start of administration, 6 weeks after the start of administration, and 12 weeks after the start of administration. (A) Overactive Bladder Symptom Score (abbreviated OABSS, Table 4) (*) and (B) International Prostate Symptom Score (abbreviated as I-PSS, Table 5) (**).
* Questionnaire used in an interview when suspected overactive bladder is ** Questionnaire established by the World Health Organization (WHO) in 1995 used in an interview when prostatic hypertrophy is suspected.
２．試験結果
（Ａ）過活動膀胱症状質問票（OABSS）による評価結果を表６に示す。
西洋カボチャ種子エタノール抽出物の投与開始６週間以降すべての評価項目において投与開始前に比べて有意な改善効果がみられた。
（Ｂ）国際前立腺症状スコア（I-PSS）による評価結果を表７に示す。
西洋カボチャ種子エタノール抽出物の投与開始１２週間以降すべての評価項目において投与開始前に比べて有意な改善効果がみられた。
2. Test results (A) Table 6 shows the evaluation results of the overactive bladder symptom questionnaire (OABSS).
A significant improvement effect was observed in all the evaluation items after 6 weeks from the start of administration of the western pumpkin seed ethanol extract compared to before the start of administration.
(B) Table 7 shows the evaluation results based on the International Prostate Symptom Score (I-PSS).
A significant improvement effect was observed in all evaluation items after 12 weeks from the start of administration of the western pumpkin seed ethanol extract compared to before the start of administration.
３．考察
このように西洋カボチャ種子エタノール抽出物には、頻尿等の改善作用があることがわかった。また、その原因となる過活動膀胱および前立腺肥大症のいずれにも対しても改善作用があることがわかった。
3. Discussion As described above, it was found that the Western pumpkin seed ethanol extract has an improving action such as frequent urination. Moreover, it turned out that there exists an improvement effect with respect to both the overactive bladder and prostatic hypertrophy which cause it.
[製造例１]本発明の西洋カボチャ種子エタノール抽出物を含むゼラチンソフトカプセルの製造
水洗後乾燥した西洋カボチャの種子１０ｋｇをレェチェ製グラインドミックスＧＭ２００を用いて粉砕し、それに９５％エタノール５０ｋｇを加えて、５℃で１夜撹拌した。エタノール抽出液を濾過後、ロータリーエバポレーターＲ−２１５（ヤマト科学株式会社製）を用いて減圧濃縮し、エタノールを除き、油状物０．５ｋｇを得た。この油状物をエタノールに一定量溶解し、５αリダクターゼ阻害活性を測定したところ９０％の阻害率を示した。
このエタノール抽出操作を繰り返して得た油状物５ｋｇについてして、エタノール抽出物含有ゼラチンソフトカプセルを製造した。このエタノール抽出物含有ゼラチンソフトカプセルは頻尿の改善と予防に有効な健康食品として用いられる。
[Production Example 1] Production of gelatin soft capsule containing ethanol extract of Western pumpkin seeds of the present invention 10 kg of dried Western pumpkin seeds after washing with water was pulverized using Leche Grindmix GM200, and 50 kg of 95% ethanol was added thereto. Stir at 5 ° C. overnight. The ethanol extract was filtered and then concentrated under reduced pressure using a rotary evaporator R-215 (manufactured by Yamato Kagaku Co., Ltd.) to remove ethanol and obtain 0.5 kg of an oily substance. When a certain amount of this oily substance was dissolved in ethanol and the 5α-reductase inhibitory activity was measured, the inhibition rate was 90%.
Ethanol extract-containing gelatin soft capsules were produced from 5 kg of an oily substance obtained by repeating this ethanol extraction operation. This ethanol extract-containing gelatin soft capsule is used as a health food effective in improving and preventing frequent urination.
[製造例２]本発明の西洋カボチャ種子エタノール抽出物を含む焼酎の製造
水洗乾燥した西洋カボチャ種子２ｋｇを家庭用精米機（ＢＲ−ＥＢ１０（ＨＡ）、象印製）により表皮を除き、子葉の粉砕物を得た。得られた子葉粉砕物９００ｇを焙煎し、室温まで冷却後、これに焼酎１０ｋｇ（エタノール度数２０％）を加え、時々撹拌しながら３０日間室温下で放置した。
これにより得られたエタノール抽出液を脱脂綿を用いて濾過し、西洋カボチャ種子のエタノール抽出物を含む焼酎を製造した。この焼酎は緑色を呈し、味、香りともに優れていた。
この焼酎の５αリダクターゼ阻害活性を測定したところ２４％の阻害率を示した。
この焼酎は頻尿の改善と予防に有効な健康食品として用いることができる。
[Production Example 2] Manufacture of shochu containing the western pumpkin seed ethanol extract of the present invention 2 kg of washed and dried western pumpkin seeds were removed from the epidermis with a domestic rice mill (BR-EB10 (HA), manufactured by ZOJIRUSHI), and the cotyledons were crushed I got a thing. After 900 g of the obtained cotyledon pulverized product was roasted and cooled to room temperature, 10 kg of shochu (ethanol content 20%) was added thereto, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 30 days with occasional stirring.
The ethanol extract thus obtained was filtered using absorbent cotton to produce shochu containing an ethanol extract of western pumpkin seeds. This shochu was green and excellent in both taste and aroma.
When the 5α reductase inhibitory activity of this shochu was measured, an inhibition rate of 24% was shown.
This shochu can be used as a health food effective in improving and preventing frequent urination.
[製造例３]本発明の西洋カボチャ種子メタノール抽出物を含むゼラチンソフトカプセルの製造
西洋カボチャの種子を水洗乾燥したもの１０ｋｇをレェチェ製グラインドミックスＧＭ２００を用いて粉砕し、それに９８％メタノール５０ｋｇを加えて、５℃で１夜撹拌した。メタノール抽出液を濾過後、ロータリーエバポレーターＲ２１５（ヤマト科学株式会社製）を用いて減圧濃縮し、メタノールを除き、さらにその濃縮物に少量のエタノールを加えて溶解し、減圧濃縮することを繰り返して行い、メタノールを完全に除いて油状物を得た。
得られた油状物をエタノールに一定量溶解し、５αリダクターゼ阻害活性を測定したところ８７％の阻害率を示した。
このメタノール抽出操作を繰り返して得た油状物５ｋｇについて、ゼラチンソフトカプセルを製造した。このメタノール抽出物含有ゼラチンソフトカプセルは頻尿の改善と予防に有効な健康食品として用いることができる。
[Production Example 3] Production of gelatin soft capsule containing Western pumpkin seed methanol extract of the present invention 10 kg of Western pumpkin seeds washed and dried were pulverized using Leche Grindmix GM200, and added with 50 kg of 98% methanol. Stir at 5 ° C. overnight. After filtering the methanol extract, it is concentrated under reduced pressure using a rotary evaporator R215 (manufactured by Yamato Kagaku Co., Ltd.), methanol is removed, and a small amount of ethanol is added to the concentrate to dissolve and concentrated under reduced pressure. Then, methanol was completely removed to obtain an oily substance.
A certain amount of the obtained oily substance was dissolved in ethanol, and 5α-reductase inhibitory activity was measured. As a result, an inhibition rate of 87% was shown.
Gelatin soft capsules were produced from 5 kg of oil obtained by repeating this methanol extraction operation. This gelatin extract-containing gelatin soft capsule can be used as a health food effective in improving and preventing frequent urination.
[製造例４]本発明の西洋カボチャ種子エタノール抽出物を含むゼラチンソフトカプセルの製造
西洋カボチャの種子を水洗乾燥したものをＥＸ―１００型搾油機（ハンダー油機株式会社製）を用いて搾油した後に得られた搾油粕２０ｋｇをグラインドミックスＧＭ―２０（レェチェ社製）を用いて粉砕し、それに９０％エタノール１００ｋｇを加えて、ＵＳ−１８０型超音波洗浄器(株式会社エスエヌデイ製)のバット内に入れ、２時間振動撹拌した。エタノール抽出液を濾過し、ロータリーエバポレーターＲ―２１５（ヤマト科学株式会社製）を用いて減圧濃縮し、エタノールを除き、油状物１．２ｋｇを得た。この油状物をエタノールに一定量溶解し、５αリダクターゼ阻害活性を測定したところ９４％の阻害率を示した。
このエタノール抽出操作を繰り返して得られた油状物５ｋｇについて、ゼラチンソフトカプセルを製造した。このエタノール抽出物含有ゼラチンソフトカプセルは頻尿の改善と予防に有効な健康食品として用いられる。
[Production Example 4] Production of gelatin soft capsule containing western pumpkin seed ethanol extract of the present invention After washing and drying western pumpkin seeds using EX-100 oil press (manufactured by Hander Oil Co., Ltd.) Crush 20kg of the resulting oil mill with Grindmix GM-20 (manufactured by Leche Co.), add 100kg of 90% ethanol to it, and place it in the vat of US-180 type ultrasonic cleaner (manufactured by SND Corporation). The mixture was shaken for 2 hours. The ethanol extract was filtered and concentrated under reduced pressure using a rotary evaporator R-215 (manufactured by Yamato Kagaku Co., Ltd.) to remove ethanol and obtain 1.2 kg of oil. When a certain amount of this oily substance was dissolved in ethanol and the 5α-reductase inhibitory activity was measured, the inhibition rate was 94%.
Gelatin soft capsules were produced from 5 kg of an oily substance obtained by repeating this ethanol extraction operation. This ethanol extract-containing gelatin soft capsule is used as a health food effective in improving and preventing frequent urination.
本発明の西洋カボチャ種子のエタノールまたはメタノール抽出物を有効成分とする５α−リダクターゼ阻害剤および泌尿器系疾患予防治療用組成物によれば、食用としの安全性がすでに確立されている食品成分を原料としているものであるから、副作用の恐れが無く安心して服用することができる。
According to the 5α-reductase inhibitor and the composition for the prevention and treatment of urinary system diseases, which contain an ethanol or methanol extract of western pumpkin seeds of the present invention as an active ingredient, the food ingredients for which food safety has already been established are used as raw materials. Therefore, there is no risk of side effects and it can be taken with peace of mind.
Claims (9)
西洋カボチャ種子をエタノール又はメタノールで抽出して西洋カボチャ種子のエタノール抽出物又はメタノール抽出物を得る工程を含む、前記方法。 A method for producing a 5α-reductase inhibitor or a urological disease treatment / prevention composition comprising:
The method comprising the step of extracting western pumpkin seeds with ethanol or methanol to obtain an ethanol extract or methanol extract of western pumpkin seeds.
西洋カボチャ種子の種皮を除去して子葉を得る工程
子葉を粉砕して子葉粉砕物を得る工程
子葉粉砕物をエタノール又はメタノールで抽出する工程
を含む、請求項５に記載の方法。 Extracting the pumpkin seeds with ethanol or methanol,
The process of removing the seed coat of a western pumpkin seed and obtaining a cotyledon The process of pulverizing a cotyledon and obtaining a cotyledon pulverized material The process of extracting the cotyledon pulverized material with ethanol or methanol is included.
西洋カボチャ種子の搾油粕をエタノール又はメタノールで抽出してエタノール抽出物又はメタノール抽出物を得る工程を含む、前記方法。 A method for producing a 5α-reductase inhibitor or a urological disease treatment / prevention composition comprising:
The said method including the process of extracting the oil-drinks of a western pumpkin seed with ethanol or methanol, and obtaining the ethanol extract or methanol extract.
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Also Published As
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|---|---|
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