JP2017029131A - Method for determining whether or not test sample contains plant pathogenic oomycetes - Google Patents

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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for selectively determining whether or not a test sample contains plant pathogenic oomycetes out of two types of oomycetes that are plant pathogenic oomycetes and plant non-pathogenic oomycetes.SOLUTION: A method for determining whether or not a test sample contains plant pathogenic oomycetes comprises the following processes: (a) a process of arranging the test sample on a front face of cellulose film, in which the cellulose film has a thickness of 0.5 micrometers or more and 3.7 micrometers or less; (b) a process of leaving the test sample to stand for 4 hours or more and 8 hours or less after process (a); (c) a process of observing a rear face of the film after process (b); and (d) a process of, in the case where oomycetes is found out on a rear face of the film in process (c), determining that the test sample contains the plant pathogenic oomycetes.SELECTED DRAWING: Figure 8

Description

本発明は、試験試料が植物病原性卵菌を含有するかどうかを判定する方法に関する。   The present invention relates to a method for determining whether a test sample contains a phytopathogenic oomycete.

特許文献１は、糸状菌計量方法を開示している。図１２は、特許文献１に開示された糸状菌計量方法のために用いられる微多孔膜支持体の断面図を示す。特許文献１に開示された糸状菌計量方法は、被験材料中の糸状菌数を計量するのに短時間の培養で糸状菌を計量し、また、正確な糸状菌を計量することができる糸状菌計量方法を提供することを目的としている。この糸状菌計量方法は、液体培養で培養した糸状菌１３、または微多孔膜支持体４の微多孔膜１上で培養した糸状菌１３の複数に伸びた偽菌糸を撮像した後、形状と面積および発光輝度を画像解析手段１０で認識し解析させることにより、糸状菌１３を短時間の培養で計量できるという作用を有する。微多孔膜１は、押さえリング２およびベース３の間に挟まれている。   Patent Document 1 discloses a method for measuring filamentous fungi. FIG. 12 shows a cross-sectional view of a microporous membrane support used for the method for measuring filamentous fungi disclosed in Patent Document 1. The method for measuring the number of filamentous fungi disclosed in Patent Document 1 is a method for measuring the number of filamentous fungi in a test material, measuring the number of filamentous fungi in a short period of time, and measuring the number of filamentous fungi. The purpose is to provide a weighing method. In this method for measuring the number of filamentous fungi, the shape and area of the filamentous fungus 13 cultivated in liquid culture or the plurality of the filamentous fungi 13 cultured on the microporous membrane 1 of the microporous membrane support 4 are imaged. In addition, the image analysis means 10 recognizes and analyzes the light emission luminance, so that the filamentous fungus 13 can be measured in a short time culture. The microporous membrane 1 is sandwiched between the pressing ring 2 and the base 3.

特開２００５−２８７３３７号公報JP 2005-287337 A

本発明の目的は、植物病原性卵菌および植物非病原性卵菌の２種類の卵菌の中から、試験試料が植物病原性卵菌を含有するかどうかを選択的に判定する方法を提供することである。   An object of the present invention is to provide a method for selectively determining whether or not a test sample contains a phytopathogenic oomycete out of two types of oomycetes, a phytopathogenic oomycete and a nonpathogenic oomycete. It is to be.

本発明は、試験試料が植物病原性卵菌を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する：
（ａ） セルロースフィルムの表側の面に、前記試験試料を配置する工程、
ここで、前記セルロースフィルムは、０．５マイクロメートル以上、３．７マイクロメートル以下の厚みを有しており、
（ｂ） 工程（ａ）の後、前記試験試料を４時間以上８時間以下の間、静置する工程、
（ｃ） 工程（ｂ）の後、前記フィルムの裏面を観察する工程、および
（ｄ） 工程（ｃ）において前記フィルムの裏面に卵菌が見いだされた場合には、前記試験試料は前記植物病原性卵菌を含有すると判定する工程。 The present invention is a method for determining whether a test sample contains a phytopathogenic oomycete comprising the following steps:
(A) a step of arranging the test sample on the front surface of the cellulose film;
Here, the cellulose film has a thickness of 0.5 micrometers or more and 3.7 micrometers or less,
(B) after the step (a), the test sample is allowed to stand for 4 hours to 8 hours;
(C) after step (b), observing the back side of the film; and (d) when oomycete is found on the back side of the film in step (c), the test sample is the phytopathogenic agent. The process of determining that it contains sexual oomycete.

本発明は、植物病原性卵菌および植物非病原性卵菌の２種類の卵菌の中から、試験試料が植物病原性卵菌を含有するかどうかを選択的に判定する方法を提供する。   The present invention provides a method for selectively determining whether or not a test sample contains a phytopathogenic oomycete out of two types of oomycetes, a phytopathogenic oomycete and a plant nonpathogenic oomycete.

図１は、第１容器１００の断面図を示す。FIG. 1 shows a cross-sectional view of the first container 100. 図２は、基板１７０の裏面に支持されたセルロースフィルム１０４の断面図を示す。FIG. 2 shows a cross-sectional view of the cellulose film 104 supported on the back surface of the substrate 170. 図３は、試験試料が供給された第１容器１００の断面図を示す。FIG. 3 shows a cross-sectional view of the first container 100 supplied with the test sample. 図４は、植物病原性卵菌が表面に配置されたセルロースフィルム１０４の断面図を示す。FIG. 4 shows a cross-sectional view of the cellulose film 104 having phytopathogenic oomycetes on the surface. 図５は、植物病原性卵菌がセルロースフィルム１０４を貫通した様子を示す断面図である。FIG. 5 is a cross-sectional view showing a state in which the phytopathogenic oomycete penetrates the cellulose film 104. 図６は、卵菌の培養を加速させる方法の一例の断面図を示す。FIG. 6 shows a cross-sectional view of an example of a method for accelerating culture of oomycete. 図７は、図６に続き、卵菌の培養を加速させる方法の一例の断面図を示す。FIG. 7 is a cross-sectional view of an example of a method for accelerating the culture of oomycete following FIG. 図８は、セルロースフィルム１０４の裏面から卵菌を観察する様子を示す断面図である。FIG. 8 is a cross-sectional view showing a state in which oomycete are observed from the back surface of the cellulose film 104. 図９は、セルロースフィルム１０４の裏面から卵菌を観察する様子を示す断面図である。FIG. 9 is a cross-sectional view showing a state in which oomycete are observed from the back surface of the cellulose film 104. 図１０は、実施例１Ａにおけるセルロースフィルム１０４の裏面の顕微鏡写真である。FIG. 10 is a photomicrograph of the back surface of the cellulose film 104 in Example 1A. 図１１は、比較例２Ａにおけるセルロースフィルム１０４の裏面の顕微鏡写真である。FIG. 11 is a photomicrograph of the back surface of the cellulose film 104 in Comparative Example 2A. 図１２は、特許文献１に開示された糸状菌計量方法のために用いられる微多孔膜支持体の断面図を示す。FIG. 12 shows a cross-sectional view of a microporous membrane support used for the method for measuring filamentous fungi disclosed in Patent Document 1.

まず、卵菌が説明される。卵菌は、植物病原性卵菌および植物非病原性卵菌の２種類の卵菌に大別される。植物病原性卵菌の例は、Pythium helicoides、Pythium myriotylum、Phytophythra nicotianae、またはPythium aphanidermatumである。これらの植物病原性卵菌は、赤焼病および根腐れ病を引き起こす。これらの植物病原性卵菌は、まず、植物の根に感染する。次いで、これらの植物病原性卵菌は根を腐らせる。最終的には、これらの植物病原性卵菌は、植物を枯らす。植物非病原性卵菌の例は、Pythium catenulatum、Pythium torulosum、またはPythium inflatumである。   First, oomycete is described. The oomycete is roughly divided into two types of oomycete, phytopathogenic oomycete and plant non-pathogenic oomycete. Examples of phytopathogenic oomycetes are Pythium helicoides, Pythium myriotylum, Phytophythra nicotianae, or Pythium aphanidermatum. These phytopathogenic oomycetes cause red rot and root rot. These phytopathogenic oomycetes first infect plant roots. These phytopathogenic oomycetes then rot the roots. Ultimately, these phytopathogenic oomycetes kill the plant. Examples of plant non-pathogenic oomycetes are Pythium catenulatum, Pythium torulosum, or Pythium inflatum.

用語「植物病原性」とは、植物に対して病原性を有していることを意味する。用語「植物非病原性」とは、植物に対して病原性を有していないことを意味する。卵菌が病原性を有しているとしても、植物に対して病原性を有していないのであれば、その卵菌は「植物非病原性」である。言い換えれば、卵菌が植物に対して悪影響を与えないのであれば、その卵菌は「植物非病原性」である。用語「植物非病原性」に含まれる接頭語「非」は、「植物」を修飾しない。接頭語「非」は「病原性」を修飾する。   The term “phytopathogenicity” means having pathogenicity to plants. The term “plant non-pathogenic” means not pathogenic to plants. Even if an oomycete is pathogenic, it is “plant non-pathogenic” if it is not pathogenic to the plant. In other words, an oomycete is “plant non-pathogenic” if it does not adversely affect the plant. The prefix “non” included in the term “plant non-pathogenic” does not modify “plant”. The prefix “non” modifies “pathogenicity”.

以下、本発明の実施形態が図面を参照しながら詳細に説明される。   Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the drawings.

（工程（ａ））
工程（ａ）では、０．５マイクロメートル以上３．７マイクロメートル以下の厚みを有するセルロースフィルムの表側の面に試験試料が配置される。セルロースフィルムの厚みの重要性は、後述される。 (Process (a))
In the step (a), a test sample is placed on the surface on the front side of a cellulose film having a thickness of 0.5 micrometers or more and 3.7 micrometers or less. The importance of the thickness of the cellulose film will be described later.

具体的には、図１に示されるように、容器１００が用意される。容器１００は、上端にフランジ１０２を具備していることが望ましい。容器１００の底面は、セルロースフィルム１０４から形成されている。セルロースフィルム１０４は、基板（図１では図示せず）に支持されていることが望ましい。このことについては、後述される。   Specifically, as shown in FIG. 1, a container 100 is prepared. The container 100 preferably has a flange 102 at the upper end. The bottom surface of the container 100 is formed from a cellulose film 104. The cellulose film 104 is preferably supported by a substrate (not shown in FIG. 1). This will be described later.

図３に示されるように、この容器１００の内部に、試験試料２００が供給される。このようにして、セルロースフィルム１０４の表面１０４ａ上に試験試料２００が配置される。試験試料２００が植物病原性卵菌２０２を含有している場合、図４に示されるように、セルロースフィルム１０４の表面１０４ａ上に植物病原性卵菌２０２が配置される。   As shown in FIG. 3, a test sample 200 is supplied into the container 100. In this way, the test sample 200 is disposed on the surface 104a of the cellulose film 104. When the test sample 200 contains the phytopathogenic oomycete 202, the phytopathogenic oomycete 202 is disposed on the surface 104a of the cellulose film 104 as shown in FIG.

試験試料２００は、固体、液体、または気体である。試験試料２００は、固体または液体であることが望ましい。固体の試験試料２００の例は、土壌または破砕された植物である。他の例は、バーミキュライト、ロックウール、またはウレタンのような農業資材である。液体の試験試料２００の例は、農業用水、水耕栽培のために用いられた溶液、植物を洗浄するために使用した後の液体、植物から抽出された液体、農業資材を洗浄するために使用した後の液体、または作業者の衣類あるいは靴を洗浄するために使用した後の液体である。   The test sample 200 is a solid, liquid, or gas. The test sample 200 is preferably solid or liquid. Examples of solid test sample 200 are soil or crushed plants. Other examples are agricultural materials such as vermiculite, rock wool, or urethane. Examples of liquid test samples 200 include agricultural water, solutions used for hydroponics, liquids used to wash plants, liquids extracted from plants, used to wash agricultural materials Liquid after use or after use to wash an operator's clothing or shoes.

（工程（ｂ））
工程（ｂ）では、工程（ａ）の後、試験試料２００が所定の培養時間、静置される。培養時間は、４時間以上かつ８時間以下である。以下、セルロースフィルム１０４の厚みおよび培養時間の重要性が以下、説明される。 (Process (b))
In step (b), after step (a), test sample 200 is allowed to stand for a predetermined incubation time. The culture time is 4 hours or more and 8 hours or less. Hereinafter, the importance of the thickness of the cellulose film 104 and the culture time will be described below.

工程（ｂ）においては、試験試料２００に含有される様々な卵菌が成長する。後述される実験例においても実証されているように、以下の（Ｉ）および（ＩＩ）の条件の両者が充足される場合、植物病原性卵菌２０２は、図５に示されるように、セルロースフィルム１０４を貫通するように成長する。その結果、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに植物病原性卵菌２０２が現れる。
条件（Ｉ） セルロースフィルム１０４が、０．５マイクロメートル以上、３．７マイクロメートル以下の厚みを有すること。
条件（ＩＩ） 培養時間が４時間以上８時間以下であること In step (b), various oomycetes contained in the test sample 200 grow. As demonstrated in the experimental examples described later, when both of the following conditions (I) and (II) are satisfied, the phytopathogenic oomycete 202 is cellulose as shown in FIG. It grows so as to penetrate the film 104. As a result, the phytopathogenic oomycete 202 appears on the back surface 104b of the cellulose film 104.
Condition (I) The cellulose film 104 has a thickness of 0.5 micrometers or more and 3.7 micrometers or less.
Condition (II) Culture time is 4 hours or more and 8 hours or less

上記（Ｉ）および（ＩＩ）の条件の両者が充足される場合、植物非病原性卵菌は、セルロースフィルム１０４をほとんど貫通しない。そのため、植物非病原性卵菌は、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂにほとんど現れない。このようにして、植物病原性卵菌２０２が選択的に裏面１０４ｂに現れる。言い換えれば、植物病原性卵菌２０２が選択的に容器１００の外側に現れる。   When both of the above conditions (I) and (II) are satisfied, the plant non-pathogenic oomycete hardly penetrates the cellulose film 104. Therefore, the plant non-pathogenic oomycete hardly appears on the back surface 104 b of the cellulose film 104. In this way, the phytopathogenic oomycete 202 selectively appears on the back surface 104b. In other words, the phytopathogenic oomycete 202 selectively appears outside the container 100.

セルロースフィルム１０４が、３．７マイクロメートルを超える厚みを有する場合、植物非病原性卵菌だけでなく植物病原性卵菌も、セルロースフィルム１０４を４〜８時間の培養時間内に貫通しない。従って、セルロースフィルム１０４が３．７マイクロメートルを超える厚みを有する場合、選択性が失われる。セルロースフィルム１０４が、０．５マイクロメートル未満の厚みを有する場合、４〜８時間の培養時間内に、植物非病原性卵菌だけでなく植物病原性卵菌も、セルロースフィルム１０４を貫通する。従って、セルロースフィルム１０４が０．５マイクロメートル未満の厚みを有する場合、選択性が失われる。   When the cellulose film 104 has a thickness exceeding 3.7 micrometers, not only the plant non-pathogenic oomycete but also the phytopathogenic oomycete does not penetrate the cellulose film 104 within a culture time of 4 to 8 hours. Therefore, if the cellulose film 104 has a thickness greater than 3.7 micrometers, selectivity is lost. When the cellulose film 104 has a thickness of less than 0.5 micrometers, not only the plant non-pathogenic oomycete but also the phytopathogenic oomycete penetrates the cellulose film 104 within a culture time of 4 to 8 hours. Thus, selectivity is lost when the cellulose film 104 has a thickness of less than 0.5 micrometers.

培養時間が４時間未満である場合、十分な数の植物病原性卵菌２０２がセルロースフィルム１０４を貫通しない。培養時間が１２時間を超えると、植物病原性卵菌だけでなく植物非病原性卵菌も、セルロースフィルム１０４を貫通する。本発明においては、培養時間は４時間以上８時間以下である。   When the culture time is less than 4 hours, a sufficient number of phytopathogenic oomycetes 202 do not penetrate the cellulose film 104. When the culture time exceeds 12 hours, not only phytopathogenic oomycete but also plant non-pathogenic oomycete penetrates cellulose film 104. In the present invention, the culture time is 4 hours or more and 8 hours or less.

図２に示されるように、セルロースフィルム１０４は、表側の面１０４ａおよび裏側の面１０４ｂの少なくともいずれか一方に、貫通孔１７２を具備する基板１７０を具備し得る。図２では、セルロースフィルム１０４は、表側の面に基板１７０を具備する。言い換えれば、図２では、基板１７０は、裏側の面１７０ｂにセルロースフィルム１０４を具備している。貫通孔１７２の直径は５マイクロメートルを超えることが望ましい。より望ましくは、貫通孔１７２の直径は８マイクロメートル以上であることが望ましい。貫通孔１７２の直径が５マイクロメートル以下の場合には、貫通孔１７２の内部に植物非病原性卵菌がほとんど到達せず、その結果、植物非病原性卵菌がセルロースフィルム１０４の表面に接することができない。このことについての詳細は、２０１５年０６月０２日に出願された特願２０１５−１１１８８５号および特願２０１５−１１１８８６号を参照せよ。   As shown in FIG. 2, the cellulose film 104 may include a substrate 170 including a through hole 172 on at least one of the front surface 104 a and the back surface 104 b. In FIG. 2, the cellulose film 104 includes a substrate 170 on the front surface. In other words, in FIG. 2, the substrate 170 includes the cellulose film 104 on the back surface 170b. It is desirable that the diameter of the through hole 172 exceeds 5 micrometers. More desirably, the diameter of the through hole 172 is 8 micrometers or more. When the diameter of the through-hole 172 is 5 micrometers or less, the plant non-pathogenic oomycete hardly reaches the inside of the through-hole 172, and as a result, the plant non-pathogenic oomycete contacts the surface of the cellulose film 104. I can't. For details on this, see Japanese Patent Application Nos. 2015-1111885 and 2015-111886 filed on Jun. 02, 2015.

言うまでもないが、セルロースフィルム１０４がピンと張られる限り、基板１７０は不要である。言い換えれば、セルロースフィルム１０４をピンと張ることが困難である場合に、セルロースフィルム１０４をサポートするための基板１７０が用いられる。   Needless to say, the substrate 170 is unnecessary as long as the cellulose film 104 is stretched. In other words, when it is difficult to tension the cellulose film 104, the substrate 170 for supporting the cellulose film 104 is used.

参照符号１７０ａは、基板１７０の表側の面を表している。図２に示されるように、基板１７０は複数の貫通孔１７２を有することが望ましい。基板１７０の厚みは限定されないが、一例として１マイクロメートル以上５００マイクロメートル以下である。セルロースフィルム１０４は非常に薄い。しかし、このような基板１７０上にセルロースフィルム１０４が配置されると、セルロースフィルム１０４の取り扱いが容易となる。   Reference numeral 170 a represents a front surface of the substrate 170. As shown in FIG. 2, the substrate 170 preferably has a plurality of through holes 172. Although the thickness of the board | substrate 170 is not limited, As an example, they are 1 micrometer or more and 500 micrometers or less. The cellulose film 104 is very thin. However, when the cellulose film 104 is disposed on such a substrate 170, the cellulose film 104 can be easily handled.

卵菌の培養を加速させるために、試験試料２００に培地が供給され得る。具体的には、試験試料２００を含有する容器１００の内部に培地が供給され得る。培地は液体であることが望ましい。培地は、工程（ｂ）において供給され得る。これに代えて、培地は工程（ｂ）よりも前に供給され得る。言い換えれば、培地は工程（ａ）において供給され得る。培地は工程（ａ）の前に容器１００の内部に供給されても良い。   In order to accelerate the culture of oomycete, a medium can be supplied to the test sample 200. Specifically, the medium can be supplied into the container 100 containing the test sample 200. The medium is desirably a liquid. The medium can be supplied in step (b). Alternatively, the medium can be supplied prior to step (b). In other words, the culture medium can be supplied in step (a). The culture medium may be supplied to the inside of the container 100 before the step (a).

図６は、卵菌の培養を加速させる他の方法を示す。図６に示されるように、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂを液体の培地３０２に接触させることが望ましい。まず、液体の培地３０２を内部に有する第２容器３００が用意される。以下、第２容器３００から区別するため、容器１００は「第１容器１００」と呼ばれる。フランジ１０２の下面が第２容器３００の上端に接触するように、第１容器１００が第２容器３００に重ね合わされる。言い換えれば、第１容器１００が第２容器３００の上端によって支持される。このようにして、液体の培地３０２がセルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂおよび第２容器３００の底面の間に挟まれる。   FIG. 6 shows another method for accelerating occult culture. As shown in FIG. 6, it is desirable to bring the back surface 104 b of the cellulose film 104 into contact with the liquid medium 302. First, a second container 300 having a liquid medium 302 therein is prepared. Hereinafter, in order to distinguish from the second container 300, the container 100 is referred to as a “first container 100”. The first container 100 is overlaid on the second container 300 such that the lower surface of the flange 102 contacts the upper end of the second container 300. In other words, the first container 100 is supported by the upper end of the second container 300. In this way, the liquid culture medium 302 is sandwiched between the back surface 104 b of the cellulose film 104 and the bottom surface of the second container 300.

あるいは、第１容器１００が第２容器３００に重ね合わされた後に、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂおよび第２容器３００の底面の間に液体の培地３０２が供給されても良い。   Alternatively, after the first container 100 is overlaid on the second container 300, the liquid culture medium 302 may be supplied between the back surface 104 b of the cellulose film 104 and the bottom surface of the second container 300.

液体の培地３０２に代えて、粘性を有する固体の培地も用いられ得る。図６に示されるように、固体の培地３０４および液体の培地３０２の両者が用いられ得る。この場合、液体の培地３０２が固体の培地３０４およびセルロースフィルム１０４の間に挟まれる。図５に示されるように、裏面１０４ｂに現れた植物病原性卵菌の培養が、液体培地３０２および固体培地３０４の少なくとも一方により加速される。   Instead of the liquid medium 302, a solid medium having viscosity may be used. As shown in FIG. 6, both solid medium 304 and liquid medium 302 can be used. In this case, the liquid medium 302 is sandwiched between the solid medium 304 and the cellulose film 104. As shown in FIG. 5, the cultivation of phytopathogenic oomycetes appearing on the back surface 104 b is accelerated by at least one of the liquid medium 302 and the solid medium 304.

（工程（ｃ））
工程（ｃ）では、工程（ｂ）の後、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂが観察される。光学顕微鏡を用いて裏面１０４ｂが観察されることが望ましい。 (Process (c))
In the step (c), the back surface 104b of the cellulose film 104 is observed after the step (b). It is desirable that the back surface 104b is observed using an optical microscope.

工程（ｂ）において説明されたように、植物病原性卵菌２０２は、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに現れる。一方、植物非病原性卵菌は、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに現れない。このように、本発明では、植物病原性卵菌２０２は、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに選択的に現れる。   As described in the step (b), the phytopathogenic oomycete 202 appears on the back surface 104 b of the cellulose film 104. On the other hand, the plant non-pathogenic oomycete does not appear on the back surface 104 b of the cellulose film 104. Thus, in the present invention, the phytopathogenic oomycete 202 selectively appears on the back surface 104 b of the cellulose film 104.

言い換えれば、植物病原性卵菌２０２は、セルロースフィルム１０４を貫通する。一方、植物非病原性卵菌は、セルロースフィルム１０４を貫通しない。そのため、植物非病原性卵菌は、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに現れない。このようにして、植物病原性卵菌２０２が選択的に裏面１０４ｂに現れる。言い換えれば、植物病原性卵菌２０２が選択的に第１容器１００の外側に現れる。   In other words, the phytopathogenic oomycete 202 penetrates the cellulose film 104. On the other hand, the plant non-pathogenic oomycete does not penetrate the cellulose film 104. Therefore, the plant non-pathogenic oomycete does not appear on the back surface 104b of the cellulose film 104. In this way, the phytopathogenic oomycete 202 selectively appears on the back surface 104b. In other words, the phytopathogenic oomycete 202 selectively appears outside the first container 100.

工程（ｃ）では、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに植物病原性卵菌２０２が現れているかどうかが観察される。   In the step (c), it is observed whether or not the phytopathogenic oomycete 202 appears on the back surface 104b of the cellulose film 104.

具体的には、以下のようにして、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに植物病原性卵菌２０２が現れているかどうかが観察される。   Specifically, whether the phytopathogenic oomycete 202 appears on the back surface 104b of the cellulose film 104 is observed as follows.

図８に示されるように、セルロースフィルム１０４の表面１０４ａ上に配置された光源５００からの光をセルロースフィルム１０４に照射しながら、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂの下に配置された顕微鏡６００を用いて、植物病原性卵菌２０２が光学的に観察される。   As shown in FIG. 8, using a microscope 600 disposed under the back surface 104b of the cellulose film 104 while irradiating the cellulose film 104 with light from the light source 500 disposed on the surface 104a of the cellulose film 104. The phytopathogenic oomycete 202 is observed optically.

第２容器３００から液体の培地３０２および固体の培地３０４が除去される。次いで、第２容器３００の内部に、卵菌蛍光液４０２が添加される。次いで、図７に示されるように、第１容器１００は、卵菌蛍光液４０２を内部に有する第２容器３００に重ね合わされる。あるいは、第１容器１００が第２容器３００に重ね合わされた後に、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂおよび第２容器３００の底面の間に卵菌蛍光液４０２が供給されても良い。   The liquid medium 302 and the solid medium 304 are removed from the second container 300. Next, the oomycete fluorescent solution 402 is added into the second container 300. Next, as shown in FIG. 7, the first container 100 is superimposed on the second container 300 having the oomycete fluorescent solution 402 therein. Alternatively, after the first container 100 is overlaid on the second container 300, the oomycete fluorescent solution 402 may be supplied between the back surface 104 b of the cellulose film 104 and the bottom surface of the second container 300.

セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに現れた植物病原性卵菌２０２の一部分は、卵菌染色液４０２により染色される。第二容器３００と第一容器１００はセルロースフィルム１０４によって隔てられているので、卵菌蛍光液４０２は第１容器１００の内部には広がらない。従って、第１容器１００に含有されている植物非病原性卵菌は、卵菌蛍光液４０２により染色されない。   A part of the phytopathogenic oomycete 202 appearing on the back surface 104 b of the cellulose film 104 is stained with the oomycete staining solution 402. Since the second container 300 and the first container 100 are separated by the cellulose film 104, the oomycete fluorescent solution 402 does not spread inside the first container 100. Therefore, the plant non-pathogenic oomycete contained in the first container 100 is not stained with the oomycete fluorescent solution 402.

図９に示されるように、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂの下に配置された落射蛍光顕微鏡６００を用いて、卵菌蛍光剤により染色されている植物病原性卵菌２０２が観察される。言うまでもないが、植物病原性卵菌２０２は卵菌蛍光剤を用いずに観察され得る。   As shown in FIG. 9, the phytopathogenic oomycete 202 stained with the oomycete fluorescent agent is observed using an epifluorescence microscope 600 disposed under the back surface 104 b of the cellulose film 104. Needless to say, the phytopathogenic oomycete 202 can be observed without using an oomycete fluorescent agent.

（工程（ｄ））
工程（ｄ）では、工程（ｃ）においてセルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに卵菌が見いだされた場合には、試験試料は植物病原性卵菌を含有すると判定される。言うまでもないが、工程（ｃ）においてセルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに卵菌が見いだされなかった場合には、試験試料は植物病原性卵菌を含有しないと判定される。 (Process (d))
In step (d), if oomycete is found on the back surface 104b of the cellulose film 104 in step (c), it is determined that the test sample contains phytopathogenic oomycete. Needless to say, if no oomycete is found on the back surface 104b of the cellulose film 104 in step (c), it is determined that the test sample does not contain phytopathogenic oomycete.

（実施例）
以下の実施例を参照しながら、本発明がさらにより詳細に説明される。 (Example)
The present invention will be described in further detail with reference to the following examples.

（実験例１）
（Pythium aphanidermatumの培養）
植物病原菌の一種であるPythium aphanidermatumが、乾燥芝草とともにコーンミール寒天培地に接種された。次いで、培地は摂氏２５度の温度下で２４時間静置された。Pythium aphanidermatumは岐阜大学流域圏科学研究センターに所属する景山教授より与えられた。乾燥芝草は、高温高圧滅菌法で滅菌された高麗芝を摂氏６０度でおよそ２４時間かけて乾燥することにより得られた。 (Experimental example 1)
(Pythium aphanidermatum culture)
A phytopathogenic fungus, Pythium aphanidermatum, was inoculated on corn meal agar with dried turfgrass. The medium was then allowed to stand for 24 hours at a temperature of 25 degrees Celsius. Pythium aphanidermatum was given by Professor Kageyama, who belongs to the Research Center for Watershed Science in Gifu University. The dried turfgrass was obtained by drying Korean turf sterilized by the high-temperature and high-pressure sterilization method at 60 degrees Celsius for approximately 24 hours.

次いで、偽菌糸が付着した乾燥芝草を培地からつまみ出した。つまみ出された乾燥芝草は、ペトリ皿に含まれる純水の上面上に浮かべた。純水の容積は２０ミリリットルであった。   Next, the dried turfgrass with pseudomycelium attached was picked from the medium. The dried turf that had been picked up floated on the upper surface of pure water contained in a Petri dish. The volume of pure water was 20 ml.

１８時間後、ペトリ皿に含まれる水が光学顕微鏡で観察された。その結果、ペトリ皿に含まれる水にPythium aphanidermatumの遊走子が放出されていることが確認された。このようにして、Pythium aphanidermatumを含有する水溶液が得られた。以下、この水溶液は、「植物病原菌水溶液」と呼ばれる。   After 18 hours, water contained in the Petri dish was observed with an optical microscope. As a result, it was confirmed that Pythium aphanidermatum zoospores were released in the water contained in the Petri dish. In this manner, an aqueous solution containing Pythium aphanidermatum was obtained. Hereinafter, this aqueous solution is referred to as “phytopathogenic aqueous solution”.

（培地の用意）
第２容器３００に、６５０マイクロリットルのポテトデキストロース培地が液体の培地３０２として添加された。このようにして、液体の培地３０２を含む第２容器３００が用意された。 (Preparation of medium)
To the second container 300, 650 microliters of potato dextrose medium was added as a liquid medium 302. In this way, the second container 300 containing the liquid culture medium 302 was prepared.

（実験例１）
実験例１は、実施例１Ａ〜実施例１Ｃ、参考例１Ｄ、比較例１Ｅ、実施例１Ｆ〜実施例１Ｇ、参考例１Ｈ〜参考例１Ｉ、比較例１Ｊ〜比較例１Ｋからなる。 (Experimental example 1)
Experimental Example 1 consists of Example 1A to Example 1C, Reference Example 1D, Comparative Example 1E, Example 1F to Example 1G, Reference Example 1H to Reference Example 1I, and Comparative Example 1J to Comparative Example 1K.

（実施例１Ａ）
図１に示される第１容器１００が以下のように用意された。 Example 1A
The first container 100 shown in FIG. 1 was prepared as follows.

まず、セルロース（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社より入手、商品名：Ａｖｉｃｅｌ ＰＨ−１０１）がイオン液体に溶解され、２％の濃度を有するセルロース溶液が調製された。イオン液体は、１−Ｂｕｔｙｌ−３−ｍｅｔｈｙｌ ｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社より入手）であった。   First, cellulose (obtained from SIGMA-ALDRICH, trade name: Avicel PH-101) was dissolved in an ionic liquid to prepare a cellulose solution having a concentration of 2%. The ionic liquid was 1-Butyl-3-methyl imidazolium chloride (obtained from SIGMA-ALDRICH).

セルロース溶液は、摂氏６０度に加温された。次に、セルロース溶液が、底面にポリエチレンテレフタラートフィルムを有する容器（ミリポア社より入手、商品名：Millicell PIEP 12R 48）の裏面にスピンコート法により３０秒間、２０００ｒｐｍの回転速度で塗布された。ポリエチレンテレフタラートフィルムは、基板１７０として機能した。ポリエチレンテレフタラートフィルムは、８マイクロメートルの直径を有する複数の貫通孔１７２をランダムに有していた。このようにして、ポリエチレンテレフタラートフィルムの裏側の面に、２．０マイクロメートルの厚みを有するセルロースフィルム１０４が形成された。   The cellulose solution was warmed to 60 degrees Celsius. Next, the cellulose solution was applied to the back surface of a container having a polyethylene terephthalate film on the bottom surface (available from Millipore, trade name: Millicell PIEP 12R 48) by spin coating for 30 seconds at a rotational speed of 2000 rpm. The polyethylene terephthalate film functioned as the substrate 170. The polyethylene terephthalate film randomly had a plurality of through holes 172 having a diameter of 8 micrometers. In this way, a cellulose film 104 having a thickness of 2.0 micrometers was formed on the back side surface of the polyethylene terephthalate film.

容器は、エタノール中で１２時間、室温で静置された。このようにして、１−Ｂｕｔｙｌ−３−ｍｅｔｈｙｌ ｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅは、エタノールに置換された。言い換えれば、１−Ｂｕｔｙｌ−３−ｍｅｔｈｙｌ ｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅがセルロースフィルム１０４から除去された。   The container was left in ethanol for 12 hours at room temperature. Thus, 1-Butyl-3-methyl imidazolium chloride was replaced with ethanol. In other words, 1-Butyl-3-methyl imidazolium chloride was removed from the cellulose film 104.

最後に、容器は真空デシケーター内で乾燥された。このようにして、図１に示される第１容器１００が得られた。図１においては、基板１７０として機能するポリエチレンテレフタラートフィルムが図示されていないことに留意せよ。   Finally, the container was dried in a vacuum desiccator. Thus, the 1st container 100 shown by FIG. 1 was obtained. Note that in FIG. 1, a polyethylene terephthalate film that functions as substrate 170 is not shown.

次に、図６に示されるように、第１容器１００が第２容器３００に重ねられた。セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂは、液体の培地３０２に接していた。続いて、第１容器１００の内部に、２００マイクロリットルの体積を有する水が添加された。さらに、２００個のPythium aphanidermatumの遊走子を含む植物病原菌水溶液が第１容器１００の内部に添加された。   Next, as shown in FIG. 6, the first container 100 was overlaid on the second container 300. The back surface 104 b of the cellulose film 104 was in contact with the liquid medium 302. Subsequently, water having a volume of 200 microliters was added to the inside of the first container 100. Furthermore, a phytopathogenic aqueous solution containing 200 Pythium aphanidermatum zoospores was added to the inside of the first container 100.

第１容器１００は、摂氏２５度の温度で６時間静置された。言い換えれば、実施例１Ａでは、培養時間は６時間であった。   The first container 100 was allowed to stand for 6 hours at a temperature of 25 degrees Celsius. In other words, in Example 1A, the culture time was 6 hours.

６００マイクロリットルの体積を有する菌体結合性蛍光剤（商品名：Calcofluor White (BD261195)会社名：ベクトン・ディッキンソン アンド カンパニー）が、第２容器３００の内部に添加された。菌体結合性蛍光剤の終濃度は０．００５％であった。   A cell-binding fluorescent agent having a volume of 600 microliters (trade name: Calcofluor White (BD261195) company name: Becton Dickinson and Company) was added to the inside of the second container 300. The final concentration of the cell-binding fluorescent agent was 0.005%.

セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂは、菌体結合性蛍光剤に接していた。第１容器１００は、摂氏２５度で１０分間静置された。第１容器１００と第２容器３００はセルロースフィルム１０４によって隔離されているので、菌体結合性蛍光剤は第１容器１００の内部には広がらなかった。   The back surface 104b of the cellulose film 104 was in contact with the cell-binding fluorescent agent. The first container 100 was left at 25 degrees Celsius for 10 minutes. Since the first container 100 and the second container 300 are separated by the cellulose film 104, the cell-binding fluorescent agent did not spread inside the first container 100.

その後、第１容器１００が第２容器３００から分離された。第２容器３００の内部に含まれる菌体結合性蛍光剤が除去された。次いで、第２容器３００の内部に、緩衝液が添加された。以下の表１は、この緩衝液に含有される成分および濃度を示す。   Thereafter, the first container 100 was separated from the second container 300. The cell-binding fluorescent agent contained in the second container 300 was removed. Next, a buffer solution was added to the inside of the second container 300. Table 1 below shows the components and concentrations contained in this buffer.

Figure 2017029131
Figure 2017029131

図９に示されるように、蛍光顕微鏡６００（モレキュラーデバイスジャパン株式会社より入手、商品名：ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ ＭＩＣＲＯ）を用いて、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂが観察された。表２は、蛍光顕微鏡６００に用いられたフィルタおよびレンズを示す。   As shown in FIG. 9, the back surface 104 b of the cellulose film 104 was observed using a fluorescence microscope 600 (obtained from Molecular Device Japan, trade name: ImageXpress MICRO). Table 2 shows the filters and lenses used in the fluorescence microscope 600.

Figure 2017029131
Figure 2017029131

図１０は、実施例１Ａにおけるセルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂの顕微鏡写真である。図１０に見られるように、Pythium aphanidermatumの偽菌糸が裏面１０４ｂに現れている。これは、Pythium aphanidermatumの偽菌糸がセルロースフィルム１０４を貫通したことを意味する。   FIG. 10 is a photomicrograph of the back surface 104b of the cellulose film 104 in Example 1A. As seen in FIG. 10, pseudohyphae of Pythium aphanidermatum appear on the back surface 104b. This means that the pseudohyphae of Pythium aphanidermatum penetrated the cellulose film 104.

裏面１０４ｂに現れたPythium aphanidermatumの偽菌糸の数が目視により数えられた。実施例１Ａは２回〜３回繰り返された。その結果、裏面１０４ｂに現れたPythium aphanidermatumの偽菌糸の数の平均値は５４．０個であった。   The number of pseudohyphae of Pythium aphanidermatum that appeared on the back surface 104b was counted visually. Example 1A was repeated 2 to 3 times. As a result, the average value of the number of pseudohyphae of Pythium aphanidermatum that appeared on the back surface 104b was 54.0.

（実施例１Ｂ）
実施例１Ｂでは、セルロース溶液が３％の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム１０４が、３．７マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Example 1B)
In Example 1B, an experiment similar to Example 1A was performed, except that the cellulose solution had a concentration of 3% and the cellulose film 104 had a thickness of 3.7 micrometers. It was broken.

（実施例１Ｃ）
実施例１Ｃでは、セルロース溶液が１％の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム１０４が、０．５マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Example 1C)
In Example 1C, an experiment similar to Example 1A was performed, except that the cellulose solution had a concentration of 1% and the cellulose film 104 had a thickness of 0.5 micrometers. It was broken.

（参考例１Ｄ）
参考例１Ｄでは、セルロース溶液が０．５％の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム１０４が、０．２マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Reference Example 1D)
In Reference Example 1D, an experiment similar to Example 1A, except that the cellulose solution had a concentration of 0.5% and the cellulose film 104 had a thickness of 0.2 micrometers. Was done.

（比較例１Ｅ）
比較例１Ｅでは、セルロース溶液が５％の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム１０４が、１２．４マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 1E)
In Comparative Example 1E, an experiment similar to that of Example 1A was performed, except that the cellulose solution had a concentration of 5% and the cellulose film 104 had a thickness of 12.4 micrometers. It was broken.

（実施例１Ｆ）
実施例１Ｆでは、培養時間が４時間であったこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Example 1F)
In Example 1F, an experiment similar to Example 1A was performed, except that the culture time was 4 hours.

（実施例１Ｇ）
実施例１Ｇでは、培養時間が８時間であったこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Example 1G)
In Example 1G, an experiment similar to Example 1A was performed, except that the culture time was 8 hours.

（参考例１Ｈ）
参考例１Ｈでは、培養時間が１０時間であったこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Reference Example 1H)
In Reference Example 1H, an experiment similar to Example 1A was performed, except that the culture time was 10 hours.

（参考例１Ｉ）
参考例１Ｉでは、培養時間が１２時間であったこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Reference Example 1I)
In Reference Example 1I, an experiment similar to Example 1A was performed, except that the culture time was 12 hours.

（比較例１Ｊ）
比較例１Ｉでは、培養時間が２時間であったこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 1J)
In Comparative Example 1I, an experiment similar to Example 1A was performed, except that the culture time was 2 hours.

（比較例１Ｋ）
比較例１Ｉでは、培養時間が２４時間であったこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 1K)
In Comparative Example 1I, an experiment similar to Example 1A was performed, except that the culture time was 24 hours.

（実験例２）
実験例２では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium catenulatumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumとは異なり、Pythium catenulatumは、植物非病原菌の１種である。Pythium catenulatumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例２は、比較例２Ａ〜比較例２Ｋからなる。 (Experimental example 2)
In Experimental Example 2, a plant non-pathogenic fungus aqueous solution containing Pythium catenulatum zoospores was used instead of the phytopathogenic aqueous solution containing Pythium aphanidermatum zoospores. Unlike Pythium aphanidermatum, Pythium catenulatum is a kind of plant non-pathogenic fungus. An aqueous solution of non-pathogenic fungi containing Pythium catenulatum zoospores was prepared in the same manner as an aqueous solution of phytopathogenic fungi containing Pythium aphanidermatum zoospores. Experimental example 2 consists of comparative example 2A to comparative example 2K.

（比較例２Ａ）
比較例２Ａでは、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium catenulatumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液が用いられたことを除き、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2A)
In Comparative Example 2A, an experiment similar to Example 1A was performed, except that an aqueous solution of non-pathogenic fungi containing Pythium catenulatum zoospores was used instead of an aqueous solution of phytopathogenic fungi containing Pythium aphanidermatum zoospores. It was.

図１１は、比較例２Ａにおけるセルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂの顕微鏡写真である。図１１に見られるように、Pythium catenulatumの偽菌糸はほとんど裏面１０４ｂに現れなかった。これは、Pythium catenulatumの偽菌糸がセルロースフィルム１０４を貫通しなかったことを意味する。   FIG. 11 is a photomicrograph of the back surface 104b of the cellulose film 104 in Comparative Example 2A. As seen in FIG. 11, Pythium catenulatum pseudohyphae hardly appeared on the back surface 104b. This means that the pseudohyphae of Pythium catenulatum did not penetrate the cellulose film 104.

（比較例２Ｂ）
比較例２Ｂでは、セルロース溶液が３％の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム１０４が、３．７マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、比較例２Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2B)
In Comparative Example 2B, an experiment similar to Comparative Example 2A was performed, except that the cellulose solution had a concentration of 3% and the cellulose film 104 had a thickness of 3.7 micrometers. It was broken.

（比較例２Ｃ）
比較例２Ｃでは、セルロース溶液が１％の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム１０４が、０．５マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、比較例２Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2C)
In Comparative Example 2C, an experiment similar to Comparative Example 2A was performed, except that the cellulose solution had a concentration of 1% and the cellulose film 104 had a thickness of 0.5 micrometers. It was broken.

（比較例２Ｄ）
比較例２Ｄでは、セルロース溶液が０．５％の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム１０４が、０．２マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、比較例２Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2D)
In Comparative Example 2D, an experiment similar to Comparative Example 2A, except that the cellulose solution had a concentration of 0.5% and that the cellulose film 104 had a thickness of 0.2 micrometers. Was done.

（比較例２Ｅ）
比較例２Ｅでは、セルロース溶液が５％の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム１０４が、１２．４マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、比較例２Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2E)
In Comparative Example 2E, an experiment similar to Comparative Example 2A was performed, except that the cellulose solution had a concentration of 5% and the cellulose film 104 had a thickness of 12.4 micrometers. It was broken.

（比較例２Ｆ）
比較例２Ｆでは、培養時間が４時間であったこと以外は、比較例２Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2F)
In Comparative Example 2F, an experiment similar to Comparative Example 2A was performed, except that the culture time was 4 hours.

（比較例２Ｇ）
比較例２Ｇでは、培養時間が８時間であったこと以外は、比較例２Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2G)
In Comparative Example 2G, an experiment similar to Comparative Example 2A was performed, except that the culture time was 8 hours.

（比較例２Ｈ）
比較例２Ｈでは、培養時間が１０時間であったこと以外は、比較例２Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2H)
In Comparative Example 2H, an experiment similar to Comparative Example 2A was performed, except that the culture time was 10 hours.

（比較例２Ｉ）
比較例２Ｉでは、培養時間が１２時間であったこと以外は、比較例２Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2I)
In Comparative Example 2I, an experiment similar to Comparative Example 2A was performed, except that the culture time was 12 hours.

（比較例２Ｊ）
比較例２Ｊでは、培養時間が２時間であったこと以外は、比較例２Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2J)
In Comparative Example 2J, an experiment similar to Comparative Example 2A was performed, except that the culture time was 2 hours.

（比較例２Ｋ）
比較例２Ｋでは、培養時間が２４時間であったこと以外は、比較例２Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 2K)
In Comparative Example 2K, an experiment similar to Comparative Example 2A was performed, except that the culture time was 24 hours.

（実験例３）
実験例３では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium helicoidesの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumと同様、Pythium helicoidesもまた、植物病原菌の１種である。Pythium helicoidesの遊走子を含有する植物病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例３は、実施例３Ａ、実施例３Ｆ、実施例３Ｇ、参考例３Ｈ、参考例３Ｉ、比較例３Ｊ、および比較例３Ｋからなる。 (Experimental example 3)
In Experimental Example 3, a phytopathogenic aqueous solution containing Pythium helicoides zoospores was used instead of the phytopathogenic aqueous solution containing Pythium aphanidermatum zoospores. Like Pythium aphanidermatum, Pythium helicoides is also a phytopathogenic fungus. The phytopathogenic aqueous solution containing Pythium helicoides zoospores was prepared in the same manner as the phytopathogenic aqueous solution containing Pythium aphanidermatum zoospores. Experimental Example 3 consists of Example 3A, Example 3F, Example 3G, Reference Example 3H, Reference Example 3I, Comparative Example 3J, and Comparative Example 3K.

（実施例３Ａ）
実施例３Ａでは、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium helicoidesの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられたことを除き、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Example 3A)
In Example 3A, an experiment similar to Example 1A was performed, except that a phytopathogenic aqueous solution containing Pythium helicoides zoospores was used instead of the phytopathogenic aqueous solution containing Pythium aphanidermatum zoospores. .

（実施例３Ｆ）
実施例３Ｆでは、培養時間が４時間であったこと以外は、実施例３Ａと同様の実験が行われた。 (Example 3F)
In Example 3F, an experiment similar to Example 3A was performed, except that the culture time was 4 hours.

（実施例３Ｇ）
実施例３Ｇでは、培養時間が８時間であったこと以外は、実施例３Ａと同様の実験が行われた。 (Example 3G)
In Example 3G, an experiment similar to Example 3A was performed, except that the culture time was 8 hours.

（参考例３Ｈ）
参考例３Ｈでは、培養時間が１０時間であったこと以外は、実施例３Ａと同様の実験が行われた。 (Reference Example 3H)
In Reference Example 3H, an experiment similar to Example 3A was performed, except that the culture time was 10 hours.

（参考例３Ｉ）
参考例３Ｉでは、培養時間が１２時間であったこと以外は、実施例３Ａと同様の実験が行われた。 (Reference Example 3I)
In Reference Example 3I, an experiment similar to Example 3A was performed, except that the culture time was 12 hours.

（比較例３Ｊ）
比較例３Ｊでは、培養時間が２時間であったこと以外は、実施例３Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 3J)
In Comparative Example 3J, an experiment similar to Example 3A was performed, except that the culture time was 2 hours.

（比較例３Ｋ）
比較例３Ｋでは、培養時間が２４時間であったこと以外は、実施例３Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 3K)
In Comparative Example 3K, an experiment similar to Example 3A was performed, except that the culture time was 24 hours.

（実験例４）
実験例４では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium myriotylumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumと同様、Pythium myriotylumもまた、植物病原菌の１種である。Pythium myriotylumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例４は、実施例４Ａ、実施例４Ｆ、実施例４Ｇ、参考例４Ｈ、参考例４Ｉ、比較例４Ｊ、および比較例４Ｋからなる。 (Experimental example 4)
In Experimental Example 4, a phytopathogenic aqueous solution containing Pythium myriotylum zoospores was used instead of the phytopathogenic aqueous solution containing Pythium aphanidermatum zoospores. Like Pythium aphanidermatum, Pythium myriotylum is also a phytopathogenic fungus. A phytopathogenic aqueous solution containing Pythium myriotylum zoospores was prepared in the same manner as the phytopathogenic aqueous solution containing Pythium aphanidermatum zoospores. Experimental Example 4 consists of Example 4A, Example 4F, Example 4G, Reference Example 4H, Reference Example 4I, Comparative Example 4J, and Comparative Example 4K.

（実施例４Ａ）
実施例４Ａでは、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium myriotylumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられたことを除き、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Example 4A)
In Example 4A, an experiment similar to Example 1A was performed, except that a phytopathogenic aqueous solution containing Pythium myriotylum zoospores was used instead of the phytopathogenic aqueous solution containing Pythium aphanidermatum zoospores. .

（実施例４Ｆ）
実施例４Ｆでは、培養時間が４時間であったこと以外は、実施例４Ａと同様の実験が行われた。 (Example 4F)
In Example 4F, an experiment similar to Example 4A was performed, except that the culture time was 4 hours.

（実施例４Ｇ）
実施例４Ｇでは、培養時間が８時間であったこと以外は、実施例４Ａと同様の実験が行われた。 (Example 4G)
In Example 4G, an experiment similar to Example 4A was performed, except that the culture time was 8 hours.

（参考例４Ｈ）
参考例４Ｈでは、培養時間が１０時間であったこと以外は、実施例４Ａと同様の実験が行われた。 (Reference Example 4H)
In Reference Example 4H, an experiment similar to Example 4A was performed, except that the culture time was 10 hours.

（参考例４Ｉ）
参考例４Ｉでは、培養時間が１２時間であったこと以外は、実施例４Ａと同様の実験が行われた。 (Reference Example 4I)
In Reference Example 4I, an experiment similar to Example 4A was performed, except that the culture time was 12 hours.

（比較例４Ｊ）
比較例４Ｊでは、培養時間が２時間であったこと以外は、実施例４Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 4J)
In Comparative Example 4J, an experiment similar to Example 4A was performed, except that the culture time was 2 hours.

（比較例４Ｋ）
比較例４Ｋでは、培養時間が２４時間であったこと以外は、実施例４Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 4K)
In Comparative Example 4K, an experiment similar to Example 4A was performed, except that the culture time was 24 hours.

（実験例５）
実験例５では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Phytophythra nicotianaeの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumと同様、Phytophythra nicotianaeもまた、植物病原菌の１種である。Phytophythra nicotianaeの遊走子を含有する植物病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例５は、実施例５Ａ、実施例５Ｆ、実施例５Ｇ、参考例５Ｈ、参考例５Ｉ、比較例５Ｊ、および比較例５Ｋからなる。 (Experimental example 5)
In Experimental Example 5, a phytopathogenic aqueous solution containing Phytophythra nicotianae zoospores was used instead of the phytopathogenic aqueous solution containing Pythium aphanidermatum zoospores. Like Pythium aphanidermatum, Phytophythra nicotianae is also a phytopathogenic fungus. A phytopathogenic aqueous solution containing Phytophythra nicotianae zoospores was prepared in the same manner as the phytopathogenic aqueous solution containing Pythium aphanidermatum zoospores. Experimental Example 5 consists of Example 5A, Example 5F, Example 5G, Reference Example 5H, Reference Example 5I, Comparative Example 5J, and Comparative Example 5K.

（実施例５Ａ）
実施例５Ａでは、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium nicotianaeの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられたことを除き、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Example 5A)
In Example 5A, an experiment similar to Example 1A was performed, except that a phytopathogenic aqueous solution containing Pythium nicotianae zoospores was used instead of the phytopathogenic aqueous solution containing Pythium aphanidermatum zoospores. .

（実施例５Ｆ）
実施例５Ｆでは、培養時間が４時間であったこと以外は、実施例５Ａと同様の実験が行われた。 (Example 5F)
In Example 5F, an experiment similar to Example 5A was performed, except that the culture time was 4 hours.

（実施例５Ｇ）
実施例５Ｇでは、培養時間が８時間であったこと以外は、実施例５Ａと同様の実験が行われた。 (Example 5G)
In Example 5G, an experiment similar to Example 5A was performed, except that the culture time was 8 hours.

（参考例５Ｈ）
参考例５Ｈでは、培養時間が１０時間であったこと以外は、実施例５Ａと同様の実験が行われた。 (Reference Example 5H)
In Reference Example 5H, an experiment similar to Example 5A was performed, except that the culture time was 10 hours.

（参考例５Ｉ）
参考例５Ｉでは、培養時間が１２時間であったこと以外は、実施例５Ａと同様の実験が行われた。 (Reference Example 5I)
In Reference Example 5I, an experiment similar to Example 5A was performed, except that the culture time was 12 hours.

（比較例５Ｊ）
比較例５Ｊでは、培養時間が２時間であったこと以外は、実施例５Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 5J)
In Comparative Example 5J, an experiment similar to Example 5A was performed, except that the culture time was 2 hours.

（比較例５Ｋ）
比較例５Ｋでは、培養時間が２４時間であったこと以外は、実施例５Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 5K)
In Comparative Example 5K, an experiment similar to Example 5A was performed, except that the culture time was 24 hours.

（実験例６）
実験例６では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium torulosumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumとは異なり、Pythium torulosumは、植物非病原菌の１種である。Pythium torulosumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例６は、比較例６Ａ、および比較例６Ｆ〜比較例６Ｋからなる。 (Experimental example 6)
In Experimental Example 6, an aqueous solution of non-pathogenic fungi containing Pythium torulosum zoospores was used instead of an aqueous solution of phytopathogenic fungi containing Pythium aphanidermatum zoospores. Unlike Pythium aphanidermatum, Pythium torulosum is a kind of plant non-pathogenic fungus. An aqueous solution of non-pathogenic fungi containing zoospores of Pythium torulosum was prepared in the same manner as an aqueous solution of phytopathogenic fungi containing zoospores of Pythium aphanidermatum. Experimental Example 6 includes Comparative Example 6A and Comparative Examples 6F to 6K.

（比較例６Ａ）
比較例６Ａでは、水溶液が、Pythium aphanidermatumではなくPythium torulosumを含有していたこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 6A)
In Comparative Example 6A, an experiment similar to Example 1A was performed, except that the aqueous solution contained not Pythium aphanidermatum but Pythium torulosum.

（比較例６Ｆ）
比較例６Ｆでは、培養時間が４時間であったこと以外は、比較例６Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 6F)
In Comparative Example 6F, an experiment similar to Comparative Example 6A was performed, except that the culture time was 4 hours.

（比較例６Ｇ）
比較例６Ｇでは、培養時間が８時間であったこと以外は、比較例６Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 6G)
In Comparative Example 6G, an experiment similar to Comparative Example 6A was performed, except that the culture time was 8 hours.

（比較例６Ｈ）
比較例６Ｈでは、培養時間が１０時間であったこと以外は、比較例６Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 6H)
In Comparative Example 6H, an experiment similar to Comparative Example 6A was performed, except that the culture time was 10 hours.

（比較例６Ｉ）
比較例６Ｉでは、培養時間が１２時間であったこと以外は、比較例６Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 6I)
In Comparative Example 6I, an experiment similar to Comparative Example 6A was performed, except that the culture time was 12 hours.

（比較例６Ｊ）
比較例６Ｊでは、培養時間が２時間であったこと以外は、比較例６Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 6J)
In Comparative Example 6J, an experiment similar to Comparative Example 6A was performed, except that the culture time was 2 hours.

（比較例６Ｋ）
比較例６Ｋでは、培養時間が２４時間であったこと以外は、比較例６Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 6K)
In Comparative Example 6K, an experiment similar to Comparative Example 6A was performed, except that the culture time was 24 hours.

（実験例７）
実験例７では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium inflatumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumとは異なり、Pythium inflatumは、植物非病原菌の１種である。Pythium inflatumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例７は、比較例７Ａ、および比較例７Ｆ〜比較例７Ｋからなる。 (Experimental example 7)
In Experimental Example 7, an aqueous solution of non-pathogenic fungi containing Pythium inflatum zoospores was used instead of the aqueous solution of phytopathogenic fungi containing Pythium aphanidermatum zoospores. Unlike Pythium aphanidermatum, Pythium inflatum is a kind of plant non-pathogenic fungus. An aqueous solution of non-pathogenic fungi containing zoospores of Pythium inflatum was prepared in the same manner as an aqueous solution of phytopathogenic fungi containing zoospores of Pythium aphanidermatum. Experimental Example 7 includes Comparative Example 7A and Comparative Examples 7F to 7K.

（比較例７Ａ）
比較例７Ａでは、水溶液が、Pythium aphanidermatumではなくPythium inflatumを含有していたこと以外は、実施例１Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 7A)
In Comparative Example 7A, an experiment similar to Example 1A was performed, except that the aqueous solution contained not Pythium aphanidermatum but Pythium inflatum.

（比較例７Ｆ）
比較例８Ｆでは、培養時間が４時間であったこと以外は、比較例７Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 7F)
In Comparative Example 8F, an experiment similar to Comparative Example 7A was performed, except that the culture time was 4 hours.

（比較例７Ｇ）
比較例７Ｇでは、培養時間が８時間であったこと以外は、比較例７Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 7G)
In Comparative Example 7G, an experiment similar to Comparative Example 7A was performed, except that the culture time was 8 hours.

（比較例７Ｈ）
比較例７Ｈでは、培養時間が１０時間であったこと以外は、比較例７Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 7H)
In Comparative Example 7H, an experiment similar to Comparative Example 7A was performed, except that the culture time was 10 hours.

（比較例７Ｉ）
比較例７Ｉでは、培養時間が１２時間であったこと以外は、比較例７Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 7I)
In Comparative Example 7I, an experiment similar to Comparative Example 7A was performed, except that the culture time was 12 hours.

（比較例７Ｊ）
比較例７Ｊでは、培養時間が２時間であったこと以外は、比較例７Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 7J)
In Comparative Example 7J, an experiment similar to Comparative Example 7A was performed, except that the culture time was 2 hours.

（比較例７Ｋ）
比較例７Ｋでは、培養時間が２４時間であったこと以外は、比較例７Ａと同様の実験が行われた。 (Comparative Example 7K)
In Comparative Example 7K, an experiment similar to Comparative Example 7A was performed, except that the culture time was 24 hours.

以下の表３〜表５は、上記の実験例において、セルロースフィルム１０４を貫通した偽菌糸の数を示す。   Tables 3 to 5 below show the number of pseudomycelia that penetrate the cellulose film 104 in the above experimental example.

Figure 2017029131
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Figure 2017029131
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用語「計数不能」とは、偽菌糸が枝分かれしてセルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂ上で広がったため、セルロースフィルム１０４への偽菌糸の貫通点を観察することができなかったことを意味する。   The term “uncountable” means that the pseudomycelia penetrated through the cellulose film 104 because the pseudomycelia were branched and spread on the back surface 104b of the cellulose film 104.

表３〜表５から明らかなように、セルロースフィルム１０４が０．５マイクロメートル以上３．７マイクロメートル以下の厚みを有する場合、セルロースフィルム１０４の裏面に植物病原性卵菌が現れる。一方、この厚みの範囲内では、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに植物非病原性卵菌はほとんど現れない。従って、セルロースフィルム１０４が０．５マイクロメートル以上３．７マイクロメートル以下の厚みを有する場合、植物病原性卵菌２０２が選択的に裏面１０４ｂに現れる。言い換えれば、植物病原性卵菌２０２が選択的に容器１００の外側に現れる。   As is apparent from Tables 3 to 5, when the cellulose film 104 has a thickness of 0.5 to 3.7 micrometers, phytopathogenic oomycetes appear on the back surface of the cellulose film 104. On the other hand, within this thickness range, the plant non-pathogenic oomycete hardly appears on the back surface 104b of the cellulose film 104. Therefore, when the cellulose film 104 has a thickness of 0.5 micrometers or more and 3.7 micrometers or less, the phytopathogenic oomycete 202 selectively appears on the back surface 104b. In other words, the phytopathogenic oomycete 202 selectively appears outside the container 100.

培養時間が４時間以上８時間以下である場合、セルロースフィルム１０４の裏面に植物病原性卵菌が現れる。一方、この培養時間の範囲内では、セルロースフィルム１０４の裏面１０４ｂに植物非病原性卵菌はほとんど現れない。従って、培養時間が４時間以上８時間以下である場合、植物病原性卵菌２０２が選択的に裏面１０４ｂに現れる。言い換えれば、植物病原性卵菌２０２が選択的に容器１００の外側に現れる。   When the culture time is 4 hours or more and 8 hours or less, phytopathogenic oomycetes appear on the back surface of the cellulose film 104. On the other hand, plant non-pathogenic oomycete hardly appears on the back surface 104b of the cellulose film 104 within the range of the culture time. Therefore, when the culture time is 4 hours or more and 8 hours or less, the phytopathogenic oomycete 202 selectively appears on the back surface 104b. In other words, the phytopathogenic oomycete 202 selectively appears outside the container 100.

従って、植物病原性卵菌が選択的に裏面１０４ｂに現れる現象のためには、以下の条件（Ｉ）および（ＩＩ）の両者が充足されることが必要とされる。
条件（Ｉ） セルロースフィルム１０４が、０．５マイクロメートル以上、３．７マイクロメートル以下の厚みを有すること。
条件（ＩＩ） 培養時間が４時間以上８時間以下であること Therefore, in order for the phytopathogenic oomycete to selectively appear on the back surface 104b, both of the following conditions (I) and (II) are required to be satisfied.
Condition (I) The cellulose film 104 has a thickness of 0.5 micrometers or more and 3.7 micrometers or less.
Condition (II) Culture time is 4 hours or more and 8 hours or less

本発明は、農業用水または土壌のような試験試料が植物病原性卵菌を含有するかどうかを簡単に判定するために用いられ得る。   The present invention can be used to easily determine whether a test sample such as agricultural water or soil contains phytopathogenic oomycetes.

１００ 第１容器
１０２ フランジ
１０４ セルロースフィルム
１０４ａ 表側の面
１０４ｂ 裏側の面
１７０ 基板
１７０ａ 表側の面
１７０ｂ 裏側の面
２００ 試験試料
２０２ 植物病原性卵菌
２０２ａ 植物病原性卵菌の一部分
３００ 第２容器
３０２ 液体の培地
３０４ 固体の培地
４０２ 卵菌染色液
５００ 光源
６００ 顕微鏡
100 First container 102 Flange 104 Cellulose film 104a Front side surface 104b Back side surface 170 Substrate 170a Front side surface 170b Back side surface 200 Test sample 202 Phytopathogenic oomycete 202a Part of phytopathogenic oomycete 300 Second container 302 Liquid Medium 304 Solid medium 402 Ovum stain 500 Light source 600 Microscope

Claims (15)

試験試料が植物病原性卵菌を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する：
（ａ） セルロースフィルムの表側の面に、前記試験試料を配置する工程、
ここで、前記セルロースフィルムは、０．５マイクロメートル以上、３．７マイクロメートル以下の厚みを有しており、
（ｂ） 工程（ａ）の後、前記試験試料を４時間以上８時間以下の間、静置する工程、
（ｃ） 工程（ｂ）の後、前記フィルムの裏面を観察する工程、および
（ｄ） 工程（ｃ）において前記フィルムの裏面に卵菌が見いだされた場合には、前記試験試料は前記植物病原性卵菌を含有すると判定する工程。 A method for determining whether a test sample contains a phytopathogenic oomycete comprising the following steps:
(A) a step of arranging the test sample on the front surface of the cellulose film;
Here, the cellulose film has a thickness of 0.5 micrometers or more and 3.7 micrometers or less,
(B) after the step (a), the test sample is allowed to stand for 4 hours to 8 hours;
(C) after step (b), observing the back side of the film; and (d) when oomycete is found on the back side of the film in step (c), the test sample is the phytopathogenic agent. The process of determining that it contains sexual oomycete. 前記植物病原性卵菌は、植物病原性フハイカビである。   The phytopathogenic oomycete is phytopathogenic fungi. 請求項１に記載の方法であって、
前記植物病原性卵菌は、Pythium helicoides、Pythium myriotylum、Phytophythra nicotianae、Pythium aphanidermatumからなる群から選択される少なくとも１つである。 The method of claim 1, comprising:
The phytopathogenic oomycete is at least one selected from the group consisting of Pythium helicoides, Pythium myriotylum, Phytophythra nicotianae, and Pythium aphanidermatum. 請求項１に記載の方法であって、
前記工程（ｂ）および前記工程（ｃ）の間に、前記セルロースフィルムの裏面を卵菌染色液に接触させる工程をさらに具備する。 The method of claim 1, comprising:
Between the said process (b) and the said process (c), the process of making the back surface of the said cellulose film contact an oomyceum dyeing | staining liquid is further comprised. 請求項１に記載の方法であって、
前記工程（ｂ）の前に、前記試験試料に培地を供給する工程をさらに具備する。 The method of claim 1, comprising:
Before the step (b), the method further comprises a step of supplying a culture medium to the test sample. 請求項５に記載の方法であって、
前記培地が液体培地である。 6. A method according to claim 5, wherein
The medium is a liquid medium. 請求項５に記載の方法であって、
前記工程（ｂ）において、前記セルロースフィルムの裏面を培地に接触させながら、前記試験試料が静置される。 6. A method according to claim 5, wherein
In the step (b), the test sample is allowed to stand while bringing the back surface of the cellulose film into contact with the culture medium. 請求項５に記載の方法であって、
前記培地が固体培地である。 6. A method according to claim 5, wherein
The medium is a solid medium. 請求項１に記載の方法であって、
前記セルロースフィルムは、前記セルロースフィルムの表側の面および裏側の面の少なくともいずれか一方に設けられた基板によって支持されており、かつ
前記基板は、５マイクロメートルを超える直径を有する貫通孔を具備している。 The method of claim 1, comprising:
The cellulose film is supported by a substrate provided on at least one of the surface on the front side and the surface on the back side of the cellulose film, and the substrate includes a through hole having a diameter of more than 5 micrometers. ing. 請求項９に記載の方法であって、
前記貫通孔が、８マイクロメートル以上の直径を有している。 The method of claim 9, comprising:
The through hole has a diameter of 8 micrometers or more. 請求項１に記載の方法であって、
前記試験試料が固体である。 The method of claim 1, comprising:
The test sample is a solid. 請求項１１に記載の方法であって、
前記固体が、土壌および破砕された植物からなる群から選択される少なくとも１つである。 The method of claim 11, comprising:
The solid is at least one selected from the group consisting of soil and crushed plants. 請求項１に記載の方法であって、
前記試験試料が液体である。 The method of claim 1, comprising:
The test sample is a liquid. 請求項１３に記載の方法であって、
前記液体が、農業用水、水耕栽培のために用いられた液体、植物を洗浄するために使用した後の液体、植物から抽出された液体、農業資材を洗浄するために使用した後の液体、および衣類または靴を洗浄するために使用した後の液体からなる群から選択される少なくとも１つである。 14. A method according to claim 13, comprising:
The liquid is agricultural water, a liquid used for hydroponics, a liquid after used to wash plants, a liquid extracted from plants, a liquid after used to wash agricultural materials, And at least one selected from the group consisting of a liquid after use to wash clothes or shoes. 請求項１に記載の方法であって、
前記植物病原性卵菌は、植物病原性疫病菌である。
The method of claim 1, comprising:
The phytopathogenic oomycete is a phytopathogenic plague.
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