JP2016520200A - Rapid test strip with variable object line and diagnostic kit using the same - Google Patents
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Abstract
本発明は、可変対照線を具備した免疫クロマトグラフィー用ストリップ、前記免疫クロマトグラフィー用ストリップを具備した診断キット、及びこれを用いて検体中の標的物質を定性又は定量分析する方法に関するものである。本発明のラピッドテスト用ストリップは可変対照線を具備するため、フック効果による標的物質の定量測定における問題を克服でき、肉眼による定性分析だけでなく、信頼性の高い定量分析まで迅速かつ便利に行うことができる。さらに、検査線と可変対照線の補完効果によって標的物質のダイナミックレンジの改善効果がある。The present invention relates to an immunochromatographic strip having a variable control line, a diagnostic kit having the immunochromatographic strip, and a method for qualitatively or quantitatively analyzing a target substance in a specimen using the same. Since the rapid test strip of the present invention has a variable control line, it can overcome the problem of quantitative measurement of the target substance due to the hook effect, and can perform not only qualitative analysis by the naked eye but also reliable quantitative analysis quickly and conveniently. be able to. Furthermore, there is an effect of improving the dynamic range of the target substance by the complementary effect of the inspection line and the variable control line.
Description
本発明は、可変対照線を具備したラピッドテスト用ストリップ、前記ラピッドテスト用ストリップを含む診断キット、及びこれを用いて検体中の標的物質を定性的又は定量的に分析する方法に関するものである。 The present invention relates to a rapid test strip having a variable control line, a diagnostic kit including the rapid test strip, and a method for qualitatively or quantitatively analyzing a target substance in a specimen using the same.
ラピッドテスト法として知られている免疫クロマトグラフィー分析法は、抗原-抗体反応によって微量の標的物質(analyte)を短期間で定性的又は定量的に分析する方法であり、様々な疾患の診断又は検査だけでなく、医学分野、農業、畜産業、食品、軍用、環境などの様々な分野において適用されている。一般的に、免疫クロマトグラフィー分析法は、標的物質と反応し変化を示す反応物質を含む分析ストリップ、又はプラスチックケース及びそのケースに装着された分析ストリップを含む分析装置により行われている。図1は、免疫クロマトグラフィー法で使用されている通常の分析ストリップの断面図である。図1に示されるように、通常の分析ストリップは、液状検体を受容するための検体パッド、肉眼又はセンサーによって検出できるシグナルを発生する表示(例えば、金粒子)を、抗原又は抗体などのリガンドに結合させることにより製造された接合体を含む接合体パッド、検体中の標的物質及び/又は前記接合体に特異的に結合するバインダー(binder、抗体又は抗原)を固定した検査線と、検体の展開を確認するための対照線が形成された検出パッド、及び前記液状検体を最終的に受容するための吸収パッドから構成されている。前述のように、これらの機能性パッドは相互に部分的に順序どおりに重畳されて連結されており、固体支持体上に連続的に配列される。プラスチックケース内部に装着された前記分析ストリップが使用される場合、ケースの上部には検体パッドに導入するための検体投入口が形成され、検出パッドのバインダーが固定された位置には検査結果を確認するための結果確認窓が形成される。分析ストリップを用いた免疫クロマトグラフィー法において、液状検体が検体パッドに注入されると、前記液状検体が毛細管現象によって接合体パッド及び検出パッドに流れ、最終的に吸収パッドに吸収される。例えば、標的抗原と結合可能な一方の抗体をメンブレンパッド上にライン型(検査線)に固定し、他方の抗体は一つの金粒子のような標識物質と結合させた後、前記検体を展開させる。展開される検体は接合体パッドを経ながら、その一部は、抗原-金粒子抗体の複合体を形成し、前記抗原-金粒子抗体は、固定された検査線に捕獲され、「検査線に固定された抗体-抗原-金粒子抗体」が形成される。この際、前記検査線は金粒子によって赤色を呈する。このように、前記接合体パッドに含有される接合体に含まれていた接合体も液状検体と共に移動する。検体中に標的物質が存在する場合、前記接合体は標的物質を介して検出パッド上に固定されたバインダーと結合し(通常「サンドイッチ反応」と言う)、又は前記接合体或いは標的物質がバインダーに競争的に結合する(通常「競争反応」と言う)。このような概念を基に、前記分析ストリップは検体中の標的物質の存在を肉眼又はセンサーを用いて感知することができる。 The immunochromatographic analysis method known as the rapid test method is a method for qualitatively or quantitatively analyzing a small amount of a target substance (analyte) in a short period of time by an antigen-antibody reaction. As well as being applied in various fields such as medical field, agriculture, livestock industry, food, military, environment and so on. In general, the immunochromatographic analysis method is performed by an analysis apparatus including an analysis strip containing a reactive substance that reacts with a target substance and shows a change, or a plastic case and an analysis strip attached to the plastic case. FIG. 1 is a cross-sectional view of a conventional analysis strip used in immunochromatography. As shown in FIG. 1, a typical analytical strip provides an indication (eg, gold particles) to a ligand such as an antigen or antibody that generates a signal that can be detected by a specimen pad, the naked eye or a sensor for receiving a liquid specimen. A conjugate pad including a conjugate produced by binding, a target substance in the specimen and / or a test line in which a binder (binder, antibody or antigen) that specifically binds to the conjugate is fixed, and development of the specimen Is formed of a detection pad on which a control line for confirming the above is formed, and an absorption pad for finally receiving the liquid specimen. As described above, these functional pads are partially overlapped and connected to each other in order, and are continuously arranged on the solid support. When the analysis strip mounted inside the plastic case is used, a sample inlet for introduction into the sample pad is formed at the top of the case, and the test result is confirmed at the position where the binder of the detection pad is fixed As a result, a confirmation window is formed. In the immunochromatography method using an analysis strip, when a liquid sample is injected into the sample pad, the liquid sample flows into the conjugate pad and the detection pad by capillary action, and is finally absorbed by the absorption pad. For example, one antibody that can bind to the target antigen is fixed to a line type (test line) on the membrane pad, and the other antibody is bound to a labeling substance such as one gold particle, and then the specimen is developed. . The specimen to be developed passes through the conjugate pad, and a part thereof forms an antigen-gold particle antibody complex. The antigen-gold particle antibody is captured by a fixed inspection line, An “immobilized antibody-antigen-gold particle antibody” is formed. At this time, the inspection line is red due to the gold particles. Thus, the joined body contained in the joined body contained in the joined body pad also moves together with the liquid specimen. When the target substance is present in the specimen, the conjugate binds to the binder immobilized on the detection pad via the target substance (usually referred to as “sandwich reaction”), or the conjugate or the target substance is bound to the binder. Combining competitively (usually called “competitive reaction”). Based on such a concept, the analysis strip can detect the presence of the target substance in the specimen using the naked eye or a sensor.
前述のラピッドテスト法、主に、前記ラピッドキットを用いた免疫クロマトグラフィー法は、一般的に長いメンブレンにそれぞれ特定物質を複数の水平ライン型に固定した後、縦に切って製造するストリップの形態である。従って、工程が単純で大量生産が可能であるという利点がある。さらに、ELISAなどと比較して、追加の洗浄工程や二次反応を必要とせず、反応時間も10分と短い。従って、前記免疫クロマトグラフィー分析法は、便宜性の観点から優れている。しかし、検出限界(detection limit)が比較的に低く、肉眼に基づいた検出であるため、正確な定量分析が困難であるという欠点がある。これらの理由から、従来の免疫クロマトグラフィー分析法は、通常、定性分析に用いられており、定量分析に用いるには多くの制限がある。 The rapid test method described above, mainly the immunochromatography method using the rapid kit, is generally in the form of a strip that is manufactured by fixing a specific substance to a plurality of horizontal lines on a long membrane and then cutting vertically. It is. Therefore, there is an advantage that the process is simple and mass production is possible. Furthermore, compared with ELISA etc., an additional washing | cleaning process and a secondary reaction are not required, and reaction time is as short as 10 minutes. Therefore, the immunochromatographic analysis method is excellent from the viewpoint of convenience. However, since the detection limit is relatively low and detection is based on the naked eye, there is a drawback that accurate quantitative analysis is difficult. For these reasons, conventional immunochromatographic analysis methods are usually used for qualitative analysis and have many limitations for use in quantitative analysis.
本発明者らは、定性分析だけでなく、定量分析においても免疫クロマトグラフィー用ストリップの信頼性を改善するために鋭意努力し、その結果、標的物質と同様の物質又はその類似体を含む可変対照線を追加した後に検査線と可変対照線の間のシグナル強度を比較することで、定量分析が可能であることを確認した。従って、本発明は、定性分析だけでなく、肉眼による信頼性の高い定量分析が可能な可変対照線を具備するラピッドテスト用ストリップを提供する。 The inventors have made intensive efforts to improve the reliability of immunochromatographic strips not only in qualitative analysis but also in quantitative analysis, so that a variable control comprising a substance similar to the target substance or an analogue thereof. After adding the line, it was confirmed that quantitative analysis was possible by comparing the signal intensity between the inspection line and the variable control line. Accordingly, the present invention provides a rapid test strip having a variable control line that allows not only qualitative analysis but also reliable quantitative analysis with the naked eye.
一態様として、本発明は、接合体パッド(conjugate pad)及び検出パッド(detection pad)を具備したラピッドテスト用ストリップを提供し、前記接合体パッドは標的物質(analyte)と反応する第1所定量の第1リガンド及び第1リガンドと結合するシグナル検出標識物質を具備し、第1リガンド及び標識物質(label)は、検体の展開前又はその展開時に相互に連結され接合体を形成し、前記接合体は検体展開時に検出パッドに展開(migration)することができ、
前記検出パッドには、検査線及び可変対照線が相互に隔離されて具備されており、
前記検査線には、検体中の標的物質と反応する第2リガンドが固定されており、及び前記可変対照線は、第1リガンドと反応する同様の標的物質又はその類似体の第2所定量の第3リガンドが固定されているため、検体中の標的物質と結合していないベア接合体(bare conjugate)と反応可能な、ラピッドテスト用ストリップを提供する。
In one aspect, the present invention provides a rapid test strip including a conjugate pad and a detection pad, wherein the conjugate pad reacts with a target substance (analyte). The first ligand and a signal detection label substance that binds to the first ligand, and the first ligand and the label substance are linked to each other before or during the development of the specimen to form a conjugate. The body can migrate to the detection pad during specimen deployment,
The detection pad includes a test line and a variable control line that are separated from each other.
A second ligand that reacts with the target substance in the specimen is fixed to the inspection line, and the variable control line includes a second predetermined amount of the same target substance that reacts with the first ligand or an analog thereof. Since the third ligand is immobilized, a rapid test strip capable of reacting with a bare conjugate not bound to a target substance in a specimen is provided.
好ましい実施態様として、前記ラピッドテスト用ストリプは、最初の第1所定量の第1リガンドが検体中の標的物質と反応することによって、前記標的物質が第1リガンドと標識物質を具備する接合体と複合体を形成し、形成された複合体の量が検体中の標的物質の濃度が増加するにつれて増加するのに対して、ベア接合体の量は減少することを特徴とする。 As a preferred embodiment, the rapid test strip is prepared by reacting a first first predetermined amount of a first ligand with a target substance in a sample, whereby the target substance includes a conjugate having the first ligand and a labeling substance. A complex is formed, and the amount of the complex formed increases as the concentration of the target substance in the specimen increases, whereas the amount of bare conjugate decreases.
さらに好ましい実施態様として、前記ラピッドテスト用ストリップは、前記第1リガンド、標識物質、標的物質を具備する複合体が第2リガンドと反応し検査線で捕獲され、前記検体中の標的物質と結合せずに、第1リガンドと標識物質を具備したベア接合体は、第3リガンドと反応して可変対照線で捕獲され、検査線及び可変対照線の標識物質からのシグナルを測定することにより、検体中の標的物質の有無又はその量、或いはそれらをいずれも決定することを特徴とする。 In a further preferred embodiment, the rapid test strip is formed by the complex comprising the first ligand, the labeling substance, and the target substance reacting with the second ligand and captured by an inspection line, and binding to the target substance in the specimen. In addition, the bare conjugate having the first ligand and the labeling substance reacts with the third ligand and is captured by the variable control line. By measuring the signal from the test substance and the labeling substance on the variable control line, It is characterized in that the presence or absence of the target substance in it, the amount thereof, or both of them are determined.
他の好ましい実施態様として、前記ラピッドテスト用ストリップは、可変対照線のシグナル強度が検体中の標的物質の濃度が増加するにつれて 増加することを特徴とする。
他の好ましい実施態様として、前記ラピッドテスト用ストリップは、可変対照線からのシグナル強度が検体中の標的物質の濃度がM値に達するまでは一定のレベルに維持されるが、前記濃度がM値を超えると、シグナル強度が徐々に低下し、最終的に0に収斂されることを特徴とする。ここで、前記M値は、第2所定量で固定された全ての第3リガンドが前記ベア接合体と反応し飽和する場合における検体中の標的物質の最大濃度である。
In another preferred embodiment, the rapid test strip is characterized in that the signal intensity of the variable control line increases as the concentration of the target substance in the sample increases.
In another preferred embodiment, the rapid test strip maintains the signal intensity from the variable control line at a constant level until the concentration of the target substance in the sample reaches the M value, but the concentration is M value. The signal intensity is gradually lowered and finally converged to 0. Here, the M value is the maximum concentration of the target substance in the specimen when all the third ligands fixed in the second predetermined amount react with the bare conjugate and become saturated.
他の好ましい実施態様として、前記ラピッドテスト用ストリップは、前記検出パッドが、検体展開を確認するための不変対照線をさらに具備しており、前記不変対照線にはレポーター分子が固定されていることを特徴とする。 In another preferred embodiment, in the strip for rapid test, the detection pad further includes an invariant control line for confirming specimen development, and a reporter molecule is fixed to the invariant control line. It is characterized by.
さらに好ましい実施態様として、前記ラピッドテスト用ストリップは、標的物質を含んだ検体が分析のために導入される検体パッド、
一末端が前記検体パッドと連結される接合体パッド、
一末端が前記接合体パッドの他の末端と連結される検出パッド、
一末端が前記検出パッドの他の末端と連結され、前記検体パッドから検体を展開するための駆動力を提供する吸収パッド、及び前記ラピッドテスト用ストリップの下部に位置する固体支持体から構成されることを特徴とする。
In a further preferred embodiment, the rapid test strip comprises a specimen pad into which a specimen containing a target substance is introduced for analysis,
A conjugate pad, one end of which is connected to the specimen pad;
A detection pad having one end connected to the other end of the conjugate pad;
One end is connected to the other end of the detection pad, and is composed of an absorption pad that provides a driving force for deploying a specimen from the specimen pad, and a solid support located under the rapid test strip. It is characterized by that.
さらに他の好ましい実施態様として、前記ラピッドテスト用ストリップは、支持体がニトロセルロース、ナイロン、PVDF、ガラス及びプラスチックからなる群より選択される材料から形成されることを特徴とする。 In still another preferred embodiment, the rapid test strip is characterized in that the support is formed from a material selected from the group consisting of nitrocellulose, nylon, PVDF, glass and plastic.
さらに他の好ましい実施態様として、前記ラピッドテスト用ストリップは、第1リガンド、第2リガンド及び第3リガンドが、タンパク質、抗原、抗体、DNA、RNA、PNA、又はアプタマー(aptamer)であることを特徴とする。 In still another preferred embodiment, the rapid test strip is characterized in that the first ligand, the second ligand, and the third ligand are proteins, antigens, antibodies, DNA, RNA, PNA, or aptamers. And
さらに他の好ましい実施態様として、前記ラピッドテスト用ストリップは、前記標識物質が、コロイド性金、ラテックス粒子、着色ポリスチレン微小粒子、酵素、蛍光性色素、伝導性高分子、発光物質又は磁性粒子であることを特徴とする。 In still another preferred embodiment, in the rapid test strip, the labeling substance is colloidal gold, latex particles, colored polystyrene microparticles, enzymes, fluorescent dyes, conductive polymers, luminescent substances, or magnetic particles. It is characterized by that.
さらに他の好ましい実施態様として、前記ラピッドテスト用ストリップはクロマトグラフィー用ストリップである。
他の一態様として、本発明は、ケース内に装着された本発明のラピッドテスト用ストリップキットを含み、下部のケースにはガイド及びストリップ支持体が具備されており、上部のケースには検体投入口が形成され、及び検査線及び可変対照線が相応する位置に結果確認窓が具備されている診断キットを提供する。
In yet another preferred embodiment, the rapid test strip is a chromatographic strip.
As another aspect, the present invention includes the rapid test strip kit of the present invention mounted in a case, the lower case is provided with a guide and a strip support, and the upper case is loaded with a sample. A diagnostic kit is provided in which a mouth is formed and a result confirmation window is provided at a position corresponding to the inspection line and the variable control line.
好ましい実施態様として、前記診断キットは、様々な濃度の標的物質が含まれた検体に対する検査線と可変対照線の標準色票を含む標準シグナルデータを提供することを特徴とする。 In a preferred embodiment, the diagnostic kit provides standard signal data including a standard color chart for a test line and a variable control line for specimens containing various concentrations of target substances.
他の好ましい実施態様として、前記診断キットは、肉眼により検査線と可変対照線からのシグナルの有無及び強度を測定することによって定量的又は半定量的分析を行うことができることを特徴とする。 In another preferred embodiment, the diagnostic kit is characterized in that quantitative or semi-quantitative analysis can be performed by measuring the presence and intensity of signals from the inspection line and the variable control line with the naked eye.
さらに他の態様として、本発明は、前述のように、前記検体を前記接合体パッド又はそれ以前に位置したパッドに導入して展開させる段階(第1段階)、
検査線と可変対照線の標識物質からのシグナルの有無及び強度を確認する段階(第2段階)、及び
検査線と可変対照線のシグナル強度と標準シグナルデータを比較して標的物質の量を決定し、
ここで、前記標準シグナルデータは、様々な既知濃度の標的物質を含む各検体を第1段階及び第2段階を行うことにより取得する段階(第3段階)から構成される、ラピッドテスト用ストリップを用いて検体中の標的物質の定性的又は定量的分析の方法を提供する。
As yet another aspect, the present invention, as described above, introduces the specimen into the bonded pad or a pad positioned before (1st stage), and deploys the specimen.
The stage of confirming the presence and intensity of the signal from the labeled substance on the inspection line and the variable control line (second stage), and the amount of the target substance is determined by comparing the signal intensity of the inspection line and the variable control line with the standard signal data And
Here, the standard signal data is a rapid test strip composed of a stage (third stage) of acquiring each specimen containing target substances of various known concentrations by performing the first stage and the second stage. Use to provide a method for qualitative or quantitative analysis of a target substance in a specimen.
さらに他の態様として、前記方法は、前記第2段階の検査線と可変対照線の標識物質からのシグナルの有無及び強度を濃度計(densitometer)により確認することを特徴とする。 In still another embodiment, the method is characterized in that the presence and intensity of signals from the labeling substances in the second-stage inspection line and variable control line are confirmed by a densitometer.
さらに他の態様として、本発明は、前記検体を固体支持体に吸収されたリガンドと反応させる段階を含む、検体中の一つ以上の標的物質の定性的又は定量的分析法を提供し、一つの標的物質に対して二つの異なる反応メカニズムが適用されることを特徴とする。 In yet another aspect, the present invention provides a qualitative or quantitative analysis method for one or more target substances in a sample, comprising the step of reacting the sample with a ligand absorbed on a solid support. It is characterized in that two different reaction mechanisms are applied to one target substance.
好ましい実施態様として、前記方法は、二つの異なる反応メカニズムがサンドイッチ反応及び競争的反応であることを特徴とする。 In a preferred embodiment, the method is characterized in that the two different reaction mechanisms are a sandwich reaction and a competitive reaction.
本発明のラピッドテスト(rapid test)用ストリップは、可変対照線を具備するため、フック(hook)効果による標的物質の定量分析における問題を克服することができ、肉眼による検体中の定性分析だけでなく、信頼性の高い定量分析も迅速に行うことができる。さらに、検査線と可変対照線の補完効果により標的物質のダイナミックレンジの改善効果がある。 Since the rapid test strip of the present invention has a variable control line, it can overcome the problem in quantitative analysis of the target substance due to the hook effect, and only by qualitative analysis in the specimen by the naked eye. In addition, reliable quantitative analysis can be performed quickly. Furthermore, there is an effect of improving the dynamic range of the target substance due to the complementary effect of the inspection line and the variable control line.
[発明を実施するための最良の形態]
前記目的を達成するための一態様として、本発明は、接合体パッド及び検出パッドを具備したラピッドテスト用ストリップを提供し、前記接合体パッドは標的物質と反応する第1所定量の第1リガンド及び第1リガンドと結合するシグナル検出標識物質を具備し、第1リガンド及び標識物質は、検体の展開前又は展開時に相互に連結され接合体を形成し、検体の展開時に接合体は検出パッドに展開することができ、前記検出パッドには、検査線及び可変対照線が相互に隔離されて具備されており、前記検査線には、検体中の標的物質と反応する第2リガンドが固定されており、及び前記可変対照線には、第1リガンドと反応する同様の標的物質又はその類似体の第2所定量の第3リガンドが固定されており、検体中の標的物質と結合していないベア接合体(Bare conjugate)と反応可能な、ラピッドテスト用ストリップを提供する。
[Best Mode for Carrying Out the Invention]
As an aspect for achieving the above object, the present invention provides a rapid test strip including a conjugate pad and a detection pad, and the conjugate pad reacts with a target substance in a first predetermined amount of a first ligand. And a signal detection labeling substance that binds to the first ligand. The first ligand and the labeling substance are connected to each other before or during the development of the specimen to form a conjugate. The detection pad includes a test line and a variable control line separated from each other, and a second ligand that reacts with a target substance in the specimen is fixed to the test line. And a second predetermined amount of a third ligand of a similar target substance that reacts with the first ligand or an analogue thereof is immobilized on the variable control line, and is not bound to the target substance in the sample. Bear conjugate (Bare conjugate) and capable of reacting to provide rapid test strip.
本発明は、検査線及び検体の展開を確認するための対照線だけが形成された検出パッドを具備した従来の分析ストリップにおいて、標的物質と同様の物質又は類似体が固定された可変対照線を追加することで、定性的分析だけでなく、信頼性の高い定量的分析も行うことができることを特徴とする。 The present invention provides a variable control line in which a substance or analog similar to a target substance is fixed in a conventional analysis strip having a detection pad on which only a test line and a control line for confirming the development of a specimen are formed. By adding, not only qualitative analysis but also quantitative analysis with high reliability can be performed.
さらに本発明は、特殊な分析器具を使用する必要がなく、肉眼により信頼性の高い半定量的分析を行うことができることを特徴とする。
好ましい実施態様において、本発明は、前記ラピッドテスト用ストリップが免疫クロマトグラフィー用ストリップであることを特徴とする。
Furthermore, the present invention is characterized in that it is not necessary to use a special analysis instrument, and a highly reliable semi-quantitative analysis can be performed with the naked eye.
In a preferred embodiment, the present invention is characterized in that the rapid test strip is an immunochromatographic strip.
本発明における用語「免疫クロマトグラフィー」とは、抗原-抗体反応に基づく免疫反応の原理と、検体及び試薬が移動相によって媒質に沿って展開する(migration)クロマトグラフィーの原理を結合させた分析方法である。つまり、多孔性膜に目的の抗体又は抗原を予め分注して固定し、その後、膜の一末端から前記固定した抗体又は抗原に向かって血液を展開させ、血液中の抗原又は抗体との反応を観察する。免疫反応は一般的な抗原-抗体の反応を意味する。しかし、本研究では抗原-抗体反応だけでなく、相互特異的に結合する受容体とリガンドの反応も広く含むが、これに制限されるものではない。さらに、免疫反応は酵素と基質間の反応など、相互特異的な認識により起こる反応も全て含む。 The term “immunochromatography” in the present invention refers to an analysis method that combines the principle of an immune reaction based on an antigen-antibody reaction and the principle of chromatography in which a specimen and a reagent migrate along a medium by a mobile phase. It is. In other words, the target antibody or antigen is pre-dispensed and fixed to the porous membrane, and then blood is developed from one end of the membrane toward the fixed antibody or antigen to react with the antigen or antibody in the blood. Observe. An immune response means a general antigen-antibody reaction. However, this research includes not only antigen-antibody reactions but also reactions of receptors and ligands that bind to each other specifically, but is not limited thereto. Furthermore, the immune reaction includes all reactions caused by mutual specific recognition such as a reaction between an enzyme and a substrate.
免疫クロマトグラフィー分析は、毛細管現象によって媒質(media)を通じて移動相と共に標的物質を含む検体が移動しながら行われる。従って、このような免疫クロマトグラフィーの展開のための媒質として、ストリップを製造して用いることができる。従って、このような免疫クロマトグラフィー分析として具体的な構成要素及びそれぞれの機能は後述する。 The immunochromatographic analysis is performed while a specimen containing a target substance moves along with a mobile phase through a medium by capillary action. Therefore, a strip can be manufactured and used as a medium for the development of such immunochromatography. Therefore, specific components and functions of such immunochromatographic analysis will be described later.
前記抗原-抗体反応を肉眼又はセンサーによって容易に確認できるようにするために、標識物質を用いることができる。標識物質が標的物質に結合できるように、標的物質に特異的に結合できるリガンドを標識物質に連結することができる。 A labeling substance can be used so that the antigen-antibody reaction can be easily confirmed by the naked eye or by a sensor. A ligand capable of specifically binding to the target substance can be linked to the label substance so that the label substance can bind to the target substance.
本発明における用語「接合体(conjugate)」とは、前記標識物質と前記リガンドが相互連結して形成された結合体を意味するものであって、前記接合体は、シグナル検出のための標識物質と結合し、検体中の標的物質と反応する第1リガンドを含む。前記第1リガンドを後述する他のリガンドと区別するために、前記第1リガンドは、前記標識物質と結合し接合体を形成するリガンドを意味することにする。 The term “conjugate” in the present invention means a conjugate formed by interconnecting the labeling substance and the ligand, and the conjugate is a labeling substance for signal detection. And a first ligand that reacts with the target substance in the specimen. In order to distinguish the first ligand from other ligands described later, the first ligand means a ligand that binds to the labeling substance to form a conjugate.
本発明における前記第1リガンドは、標的物質と反応することのできる物質であって、標的物質と特異的に結合する物質を意味する。
前記標識物質と第1リガンドは、物理的又は化学的に連結させることができる。すなわち、標識物質と第1リガンドが手動吸着(passive adsorption)を介すか、又は反応性グループを持つように標識物質を改質させることによって第1リガンドとの共有結合を介して連結させることができるが、これに限定されるものではない。前記標識物質と第1リガンドとの連結は、当業者に公知の方法により行うことができる。
The first ligand in the present invention means a substance that can react with a target substance and specifically binds to the target substance.
The labeling substance and the first ligand can be linked physically or chemically. That is, the labeling substance and the first ligand can be linked via a covalent bond with the first ligand by manual adsorption (passive adsorption) or by modifying the labeling substance to have a reactive group. However, the present invention is not limited to this. The labeling substance and the first ligand can be linked by a method known to those skilled in the art.
しかし、前記標識物質と第1リガンドは、ラピッドテスト用ストリップにおいて検体を展開させる前から接合体の形で接合体パッドに存在することができ、又は相互に連結されずに、個別に接合体パッドに存在した後、検体展開中にこれらが相互連結され接合体を形成する。いずれの場合においても、これらは接合体パッドに固定されていないため、検体展開時に前記標識物質と第1リガンドは、接合体の状態で検体パッドに移動することができる。 However, the labeling substance and the first ligand may be present in the conjugate pad in the form of a conjugate before the specimen is developed on the rapid test strip, or may be individually connected to the conjugate pad without being connected to each other. Then they are interconnected to form a conjugate during specimen development. In any case, since these are not fixed to the conjugate pad, the labeling substance and the first ligand can move to the specimen pad in a conjugate state when the specimen is developed.
本発明における用語「標識物質」とは、肉眼又はセンサーによって感知することのできるシグナルを発生させる物質を意味する。前記標識物質は、コロイド性金(金粒子)、ラテックス粒子、着色ポリスチレン微小粒子、酵素、蛍光性色素、伝導性高分子、発光物質又は磁性粒子などであるが、これに限定されるものではない。さらに、前記シグナルは標識物質の内在的特性によって自律的に発生する発光であってもよく、外部の刺激によって発生する蛍光であってもよい。 The term “labeling substance” in the present invention means a substance that generates a signal that can be sensed by the naked eye or a sensor. Examples of the labeling substance include colloidal gold (gold particles), latex particles, colored polystyrene microparticles, enzymes, fluorescent dyes, conductive polymers, luminescent substances, and magnetic particles, but are not limited thereto. . Further, the signal may be luminescence that is autonomously generated depending on the intrinsic characteristics of the labeling substance, or fluorescence that is generated by an external stimulus.
本発明における用語「リガンド」とは、相互特異的に結合する物質を意味する。例えば、抗原に対して特異的に結合する抗体、特定の受容体に特異的に結合するリガンドなど相互にリガンドとして作用する物質を意味する。前記リガンドの非制限的な例としては、タンパク質、抗原、抗体、DNA、RNA、PNA又はアプタマーであってもよい。さらに、本明細書のリガンドは、前述の特徴を示すものであれば限定されることなく如何なる物質であってもよい。本明細書全体において使用されるリガンドの意味は、特定の受容体に特異的に結合するリガンドを限定しない限り、前記で定義されたように相互特異的に結合する物質を意味する。 The term “ligand” in the present invention means a substance that specifically binds to each other. For example, it means substances that act as ligands such as an antibody that specifically binds to an antigen and a ligand that specifically binds to a specific receptor. Non-limiting examples of the ligand may be a protein, antigen, antibody, DNA, RNA, PNA or aptamer. Furthermore, the ligand of the present specification may be any substance without limitation as long as it exhibits the above-mentioned characteristics. As used throughout this specification, the meaning of a ligand means a substance that binds to each other as defined above unless the ligand that specifically binds to a particular receptor is limited.
本発明の好ましい一実施態様において、前記標識物質と第1リガンドは予め相互連結され、接合体の形態で接合体パッドに存在することができる。この場合、前記標識物質と第1リガンドを個別に既知濃度の溶液により製造した後混合し、一定時間反応させ、接合体溶液を製造する。この接合体溶液を接合体パッドに分注し、接合体が具備された接合体パッドを製造する。この際、各溶液の濃度及び混合比率は、標識物質とリガンドの結合比を考慮して決定することができる。前記標識物質とリガンドの結合は、一つの標識物質に一つのリガンドが結合してもよく、一つの標識物質に複数個のリガンドが結合してもよく、又は複数個の標識物質が一つのリガンドに結合してもよい。具体的な結合比は重要ではないが、好ましい一態様として、一定の比率を維持してもよい。前記結合比は、標識物質とリガンドの種類によって変更することができ、これらの相対的な大きさ及び結合部位の量などを考慮して決定することができる。例えば、標識物質として数ミクロンサイズのラテックスビーズを使用する場合、また、リガンドとして抗体を使用する場合、複数個の抗体が一つのラテックスビーズに結合することができる。好ましくは、それぞれのラテックス表面に均等な量の抗体を結合させるために、抗体がラテックス表面で飽和され結合できるように抗体及びラテックス溶液の濃度及び混合比率を調節することができるが、これに限定されるものではない。 In a preferred embodiment of the present invention, the labeling substance and the first ligand may be pre-interlinked and present on the conjugate pad in the form of a conjugate. In this case, the labeling substance and the first ligand are individually produced with a solution having a known concentration, and then mixed and reacted for a predetermined time to produce a conjugate solution. This joined body solution is dispensed into the joined body pad to produce a joined body pad provided with the joined body. At this time, the concentration and mixing ratio of each solution can be determined in consideration of the binding ratio of the labeling substance and the ligand. In the binding of the labeling substance and the ligand, one ligand may be bound to one labeling substance, a plurality of ligands may be bound to one labeling substance, or a plurality of labeling substances may be one ligand. May be combined. Although a specific binding ratio is not important, as a preferable embodiment, a constant ratio may be maintained. The binding ratio can be changed depending on the types of the labeling substance and the ligand, and can be determined in consideration of the relative size and the amount of the binding site. For example, when several micron-sized latex beads are used as the labeling substance and when an antibody is used as the ligand, a plurality of antibodies can be bound to one latex bead. Preferably, in order to bind an equal amount of antibody to each latex surface, the concentration and mixing ratio of the antibody and latex solution can be adjusted so that the antibody is saturated and bound on the latex surface, but is not limited thereto. Is not to be done.
前述のように、既知濃度の標識物質と第1リガンドを混合し反応させることで既知濃度の接合体溶液を取得することができる。前記接合体溶液は、一定濃度の接合体分子が溶液中に均等に分散している分散液の形態である。 As described above, a conjugate solution having a known concentration can be obtained by mixing and reacting a labeling substance having a known concentration and the first ligand. The conjugate solution is in the form of a dispersion in which a certain concentration of conjugate molecules are evenly dispersed in the solution.
前記ラピッドテスト用ストリップは、可変対照線を具備する免疫クロマトグラフィー用ストリップであって、標的物質と反応する第1所定量の第1リガンド及び第1リガンドに結合するシグナル検出標識物質を含む接合体パッド、及び検査線と可変対照線が隔離されて具備された検出パッドを含むことができる。 The rapid test strip is an immunochromatographic strip having a variable control line, and includes a first predetermined amount of a first ligand that reacts with a target substance and a signal detection label substance that binds to the first ligand. A detection pad may be included that includes a pad and a test line and a variable control line separated from each other.
検体中の標的物質を定性分析だけでなく、定量的に分析するために、第3リガンドを検出パッドに固定し、「可変対照線(variable control line)」を形成した。本発明のラピッドテスト用ストリップの可変対照線には、検出パッドで流れる移動相(mobile phase)内のベア接合体(bare conjugate)と反応できるように、標的物質と同様の物質であるか、或いは第1リガンドと反応する標的物質の類似体を第3リガンドとして固定させることができる。検体中の標的物質と結合しないベア接合体は第1リガンドを含むので、前記第1リガンドは、標的物質と同様の物質又はその類似体、すなわち、第3リガンドと特異的に結合する。 In order to quantitatively analyze the target substance in the specimen in addition to qualitative analysis, the third ligand was fixed to the detection pad to form a “variable control line”. The variable control line of the rapid test strip of the present invention may be the same substance as the target substance so that it can react with the bare conjugate in the mobile phase flowing in the detection pad, or An analog of the target substance that reacts with the first ligand can be immobilized as the third ligand. Since the bare conjugate that does not bind to the target substance in the specimen contains the first ligand, the first ligand specifically binds to the same substance as the target substance or an analog thereof, that is, the third ligand.
さらに、前記第3リガンドの所定量を可変対照線に固定することができる。すなわち、前記第2所定量は、前記第3リガンドが可変対照線に固定された特定量を意味する。前記第2所定量の第3リガンドを固定することで、可変対照線のシグナル強度及び検体中の検出可能な標的物質の濃度範囲を調節でき、さらに信頼性の高い定量分析を可能にすることができる。 Furthermore, a predetermined amount of the third ligand can be fixed to the variable control line. That is, the second predetermined amount means a specific amount in which the third ligand is fixed to the variable control line. By immobilizing the second predetermined amount of the third ligand, it is possible to adjust the signal intensity of the variable control line and the concentration range of the detectable target substance in the sample, and to enable more reliable quantitative analysis. it can.
本発明における前記第3リガンドは、後述の他のリガンドから第3リガンドを区別するために、検出パッドに固定され可変対照線を形成するリガンドを意味する。
さらに、検体中の標的物質を検出するために、これと特異的に結合し選択的に捕獲することのできる第2リガンドを検出パッドに固定し、「検査線(test line)」を形成した。本発明のラピッドテスト用ストリップの検査線には、検出パッドで流れる移動相内の標的物質-接合体複合体、すなわち、標的物質と反応できるように、検体中の標的物質と反応する第2リガンドが固定されている。前記第2リガンドは、前記第1リガンドと同様の物質又はその類似体であるか、或いは標的物質と特異的に結合する第3の物質であってもよい。検体中の標的物質が移動相と共に展開される間に接合体パッド内の接合体と結合し複合体を形成する。このような複合体は標的物質を含み、前述のように第1リガンドは、標的物質と特異的に結合するため、前記第1リガンドと同様の物質或いはその類似体、又は標的物質と特異的に結合する第2リガンドは、標的物質との結合により前記複合体を検査線に捕獲させることができる。
The third ligand in the present invention means a ligand that is fixed to a detection pad and forms a variable control line in order to distinguish the third ligand from other ligands described later.
Furthermore, in order to detect the target substance in the specimen, a second ligand that can specifically bind to and selectively capture the target substance was immobilized on the detection pad, and a “test line” was formed. The inspection line of the rapid test strip of the present invention includes a target substance-conjugate complex in the mobile phase flowing in the detection pad, that is, a second ligand that reacts with the target substance in the sample so that it can react with the target substance. Is fixed. The second ligand may be the same substance as the first ligand or an analog thereof, or may be a third substance that specifically binds to the target substance. While the target substance in the specimen is developed together with the mobile phase, it binds to the conjugate in the conjugate pad to form a complex. Since such a complex includes a target substance, and the first ligand specifically binds to the target substance as described above, the substance similar to the first ligand or an analog thereof, or the target substance specifically. The second ligand to be bound can cause the complex to be captured on the inspection line by binding to the target substance.
本発明において、前記第2リガンドと後述する他のリガンドを区別するために、前記第2リガンドは、検出パッドに固定され検査線を形成するリガンドを意味する。
前述のように、免疫クロマトグラフィーは、媒質に沿って標的物質を含む移動相の展開に基づくクロマトグラフィーの原理を利用する。従って、本発明によるラピッドテスト用ストリップを用いた免疫分析には、標的物質を含む検体をストリップに沿って展開させるための移動相を必要とする。よって、本発明の免疫分析用キットは、緩衝液をさらに含むことができる。前記緩衝液は、ラピッドテスト用ストリップに沿って検体を移動させる移動相として機能し、また、接合体を溶解するための溶媒として機能することができる。必要に応じて、検体を希釈するための希釈液としての機能を果たす。例えば、全血分析をする場合、赤血球などの血球細胞を溶解させるための成分をさらに含むことができる。前記緩衝液とては、10mM〜1M濃度のリン酸塩緩衝液(PBS)、非イオン性或いは双イオン性界面活性剤、又はこれらの混合物など通常の緩衝液を制限なく使用することができ、抗原-抗体反応の目的とする反応の種類によって適宜選択することができる。
In the present invention, in order to distinguish the second ligand from other ligands described later, the second ligand means a ligand that is fixed to a detection pad and forms a test line.
As described above, immunochromatography utilizes the principle of chromatography based on the development of a mobile phase containing a target substance along a medium. Therefore, the immunoassay using the rapid test strip according to the present invention requires a mobile phase for developing a specimen containing a target substance along the strip. Therefore, the kit for immunoassay of the present invention can further contain a buffer solution. The buffer solution can function as a mobile phase for moving the specimen along the rapid test strip, and can also function as a solvent for dissolving the conjugate. If necessary, it functions as a diluent for diluting the specimen. For example, when whole blood analysis is performed, a component for lysing blood cells such as erythrocytes can be further included. As the buffer, a normal buffer such as a phosphate buffer (PBS) having a concentration of 10 mM to 1 M, a nonionic or zwitterionic surfactant, or a mixture thereof can be used without limitation. The antigen-antibody reaction can be selected as appropriate depending on the type of reaction intended.
前記接合体パッドは、前述の標的物質と反応する第1所定量の第1リガンド及び第1リガンドに結合するシグナル検出標識物質を具備するパッドであって、前記第1リガンドと前記標識物質は、検体展開する以前から接合体の形態で連結されて接合体パッドに存在するか、又は相互に連結されることなく個別に接合体パッドに存在した後、検体が展開されるとともに、これらが相互に結合し接合体を形成することができる。 The conjugate pad is a pad comprising a first predetermined amount of a first ligand that reacts with the target substance and a signal detection label substance that binds to the first ligand, wherein the first ligand and the label substance are: Before the specimen is deployed, it is connected in the form of a joined body and exists in the joined body pad, or after being separately present in the joined body pad without being connected to each other, the specimen is developed and these are mutually connected. Bonded to form a joined body.
本発明において、前記第1所定量の第1リガンドのみが接合体パッド内に存在し得る。すなわち、前記第1所定量とは、接合体パッド内に存在する第1リガンドの特定量を意味する。接合体パッド内の第1リガンドが第1所定量で存在するため、検体中の標的物質の濃度が増加するにつれて、第1リガンドと標的物質が結合することによって形成される複合体の数が増加するのに対して、標的物質と結合しないベア接合体の数は減少し、反比例する。 In the present invention, only the first predetermined amount of the first ligand may be present in the conjugate pad. That is, the first predetermined amount means a specific amount of the first ligand present in the conjugate pad. Since the first ligand in the conjugate pad is present in the first predetermined amount, the number of complexes formed by the binding of the first ligand and the target substance increases as the concentration of the target substance in the specimen increases. In contrast, the number of bare conjugates that do not bind to the target substance decreases and is inversely proportional.
好ましくは、前記接合体パッドは第1リガンドと標識物質が事前に相互に連結された接合体の形態で存在する。この際、前述のように、前記既知濃度の接合体溶液をパッドに適用して製造することができる。 Preferably, the conjugate pad is present in the form of a conjugate in which the first ligand and the labeling substance are previously connected to each other. At this time, as described above, the conjugate solution having the known concentration can be applied to the pad.
さらに、前記接合体パッドは、内部対照群(internal control)として利用できるように、第4リガンドが標識物質と結合することによって形成された第2接合体をさらに含むことができる。前記第4リガンドとは、レポーター分子と特異的又は非特異的に反応することのできるリガンドを意味する。前記第2接合体は不変対照線のレポーター分子によって捕獲され、検体の展開を確認することができる。前記不変対照線及びレポーター分子に関するより具体的な説明は後述する。 Further, the conjugate pad may further include a second conjugate formed by binding a fourth ligand to a labeling substance so that the conjugate pad can be used as an internal control. The fourth ligand means a ligand that can react specifically or non-specifically with a reporter molecule. The second conjugate is captured by an invariant control line reporter molecule, confirming the development of the analyte. More specific explanation regarding the invariant control line and the reporter molecule will be described later.
前記検出パッドは、移動相と検体が展開されるための媒質であって、移動相と検体が検出パッドを構成する多孔性メンブレンの毛細管現象により移動することができる。さらに、前記検出パッドには、前記検査線と前記可変対照線が相互に隔離されて具備されており、検体の展開を確認するための不変対照線がさらに具備されている。前記検出パッドの一末端が前記接合体パッドに連結されてもよく、他の末端は検体の移動のための駆動力を提供する吸収パッドと連結されてもよい。前記接合体パッド及び前記吸収パッドは、検出パッド上に部分的に重畳されて位置することができる。前記検出パッドは、多孔性メンブレンから構成されてもよく、前記多孔性メンブレンとしては、ニトロセルロースメンブレン、ガラス繊維メンブレン、ポリエーテルスルホン(polyethersulfone、PES)メンブレン、セルロースメンブレン、ナイロンメンブレン又はこれらの組み合せであってもよいが、これに限定されるものではない。好ましくは、前記検出パッドは5〜15μmの気孔径を有するニトロセルロースメンブレンであってもよい。 The detection pad is a medium for developing the mobile phase and the specimen, and the mobile phase and the specimen can move by the capillary phenomenon of the porous membrane constituting the detection pad. Further, the detection pad is provided with the test line and the variable control line separated from each other, and further provided with an invariant control line for confirming the development of the specimen. One end of the detection pad may be connected to the conjugate pad, and the other end may be connected to an absorption pad that provides a driving force for analyte movement. The bonding body pad and the absorption pad may be positioned to partially overlap the detection pad. The detection pad may be composed of a porous membrane, and the porous membrane may be a nitrocellulose membrane, a glass fiber membrane, a polyethersulfone (PES) membrane, a cellulose membrane, a nylon membrane, or a combination thereof. Although there may be, it is not limited to this. Preferably, the detection pad may be a nitrocellulose membrane having a pore size of 5 to 15 μm.
本発明のラピッドテスト用ストリップを用いた定性的及び定量的分析の原理についてより具体的に説明する。
従来の分析ストリップにおいて、メンブレンパッド上に前記検査線が形成され、展開される標的物質-接合体複合体が検査線で捕獲されシグナルを発生する(サンドイッチ反応)。この際、シグナル強度は、標的物質の濃度が増加するにつれて増加する。しかし、前記標的物質の濃度が特定濃度を超えると、フック効果によりシグナル強度が低下する。このような現象は、従来の分析ストリップを用いた標的物質の定量分析をする上で大きな障害であった。
The principle of qualitative and quantitative analysis using the rapid test strip of the present invention will be described more specifically.
In the conventional analysis strip, the test line is formed on the membrane pad, and the developed target substance-conjugate complex is captured by the test line to generate a signal (sandwich reaction). At this time, the signal intensity increases as the concentration of the target substance increases. However, when the concentration of the target substance exceeds a specific concentration, the signal intensity decreases due to the hook effect. Such a phenomenon is a great obstacle to quantitative analysis of target substances using a conventional analysis strip.
しかし、本発明のラピッドテスト用ストリップは、サンドイッチ反応だけでなく、接合体パッドにおいて第1所定量の第1リガンドが検体中の数量限定の標的物質に競争的に反応する特異的競争反応を一つのストリップに適用することを特徴とする。従って、従来の免疫クロマトグラフィー分析法に比べて、より迅速かつ便利な定量分析の実行を可能にする。 However, the rapid test strip of the present invention not only performs a sandwich reaction but also a specific competitive reaction in which the first predetermined amount of the first ligand competitively reacts with a limited number of target substances in the specimen in the conjugate pad. It is applied to two strips. Therefore, it is possible to perform quantitative analysis more quickly and conveniently than conventional immunochromatographic analysis methods.
特に、液晶検体が本発明のラピッドテスト用ストリップの検体パッドに導入されると、移動相と検体の展開が始まる。接合体パッドにおいて、第1所定量の第1リガンドが検体中に数量限定の標的物質と競争的に反応する。第1所定量の第1リガンドの一部は、検体中の標的物質と反応し、前記第1リガンド及び標識物質を含む接合体に標的物質が結合した複合体を形成し、逆に標的物質と反応しなかった残りの第1リガンドはベア接合体として移動相と共に展開される。ここで、第1リガンドが第1所定量で維持されるため、検体中の標的物質の濃度が増加するにつれて前記形成された複合体の数が増加するのに対して、前記ベア接合体の量は減少する。 In particular, when the liquid crystal sample is introduced into the sample pad of the rapid test strip of the present invention, the development of the mobile phase and the sample starts. In the conjugate pad, a first predetermined amount of the first ligand reacts competitively with a limited number of target substances in the specimen. A part of the first predetermined amount of the first ligand reacts with the target substance in the specimen to form a complex in which the target substance is bound to the conjugate containing the first ligand and the labeling substance, and conversely with the target substance. The remaining unreacted first ligand is developed with the mobile phase as a bare conjugate. Here, since the first ligand is maintained at the first predetermined amount, the number of the formed complexes increases as the concentration of the target substance in the specimen increases, whereas the amount of the bare conjugate Decrease.
前記第1リガンド、標識物質及び標的物質を含む複合体は、展開中には第2リガンドと反応して検査線で捕獲されるのに対して、第1リガンドと標識物質を具備したベア接合体は、展開中には前記検体中の標的物質と結合せずに、第3リガンドと反応して可変対照線で捕獲される。前記複合体及びベア接合体は、第2リガンドが検査線に固定されており、第3リガンドが可変対照線に固定されているため、それぞれ検査線と可変検査線で捕獲される。 The complex containing the first ligand, the labeling substance and the target substance reacts with the second ligand during the development and is captured by the inspection line, whereas the bare conjugate comprising the first ligand and the labeling substance Is not bound to the target substance in the specimen during development, but is captured by the variable control line in response to the third ligand. Since the second ligand is fixed to the inspection line and the third ligand is fixed to the variable control line, the complex and the bare conjugate are captured by the inspection line and the variable inspection line, respectively.
前記複合体とベア接合体はいずれも標識物質を含むことから、前記複合体とベア接合体が捕獲された検査線及び可変対照線上の標識物質からのシグナルを測定することで、検体中の標的物質の有無、量又は両方を測定することができる。 Since both the complex and the bare conjugate contain a labeling substance, the target in the sample can be measured by measuring the signal from the labeling substance on the inspection line and the variable control line where the complex and the bare conjugate are captured. The presence, amount, or both of the substance can be measured.
前述のように、検体中の標的物質の濃度が増加するにつれて前記複合体の数が増加し、逆に、検体中の標的物質の濃度が増加するにつれて前記ベア接合体の数は減少する。従って、ベア接合体が捕獲されている可変対照線からのシグナル強度は、検体中の標的物質の濃度が増加するにつれて低下する。 As described above, the number of the complex increases as the concentration of the target substance in the specimen increases, and conversely, the number of the bare conjugate decreases as the concentration of the target substance in the specimen increases. Accordingly, the signal intensity from the variable control line in which the bare conjugate is captured decreases as the concentration of the target substance in the sample increases.
より具体的には、前記可変対照線からのシグナル強度は、検体中の標的物質の濃度がM値に達するまでは一定に維持されるが、前記シグナル強度は前記濃度がM値を超えると徐々に低下する。最終的にシグナル強度が0に収斂される。ここで、前記M値は、前記第2所定量で固定された全ての第3リガンドが前記ベア接合体に反応し飽和する場合における検体中の標的物質の最大濃度である。本発明の一実施例において、前記検体中の標的物質の濃度が0〜90ng/mLの範囲に達するまでは可変対照線からのシグナル強度が最も強いレベルで維持されるため、全ての第3リガンドが前記ベア接合体と反応していることが確認できる。従って、本実施例におけるM値は約90ng/mLであることが確認できる(実施例2)。しかし、前記M値は、第2所定量、第3リガンド及び標的物質の種類に応じて異なるため、分析目的に応じて当業者が適宜選択することができる。 More specifically, the signal intensity from the variable control line is kept constant until the concentration of the target substance in the sample reaches the M value, but the signal intensity gradually increases when the concentration exceeds the M value. To drop. Eventually the signal intensity converges to zero. Here, the M value is the maximum concentration of the target substance in the specimen when all the third ligands fixed in the second predetermined amount react with the bare conjugate and become saturated. In one embodiment of the present invention, the signal intensity from the variable control line is maintained at the strongest level until the concentration of the target substance in the sample reaches the range of 0 to 90 ng / mL. It can be confirmed that is reacting with the bare joined body. Therefore, it can confirm that M value in a present Example is about 90 ng / mL (Example 2). However, since the M value varies depending on the second predetermined amount, the third ligand, and the type of the target substance, those skilled in the art can appropriately select the M value depending on the purpose of analysis.
前述のように、検体の濃度が増加するにつれて検査線からのシグナル強度が増加する。しかし、前記検体の濃度が特定レベルを超えると、フック効果によりシグナル強度が低下する。本発明の標的物質の濃度増加による検査線及び可変対照線のシグナル強度パターンを図3に示す。 As described above, the signal intensity from the inspection line increases as the concentration of the specimen increases. However, when the concentration of the sample exceeds a specific level, the signal intensity decreases due to the hook effect. FIG. 3 shows signal intensity patterns of the inspection line and the variable control line according to the increase in the concentration of the target substance of the present invention.
結果的に、前記検査線及び前記可変対照線上の標識物質からのシグナルを測定することにより標的物質の定性的及び定量的分析を行うことが可能である。より具体的に、前記検査線と可変対照線からのシグナルは、既知濃度の標的物質に対して予め完成しておいた標準シグナルデータと比較し、標的物質の濃度を分析することができる。前記濃度はシグナルの強度を肉眼で確認し、半定量的に分析することができ、また、濃度計(densitometer)のようなリーダー(reader)を使用してより厳密に定量的に分析することができる。 As a result, it is possible to perform qualitative and quantitative analysis of the target substance by measuring the signal from the labeling substance on the inspection line and the variable control line. More specifically, the signal from the inspection line and the variable control line can be compared with standard signal data previously completed for a known concentration of the target substance, and the concentration of the target substance can be analyzed. The concentration can be analyzed semi-quantitatively by checking the intensity of the signal with the naked eye, and can be analyzed more strictly quantitatively using a reader such as a densitometer. it can.
本発明における前記検出パッドには、検体の展開を確認することのできる不変対照線がさらに具備されており、レポーター分子は不変対照線に固定されてもよい。
本発明における用語「不変対照線(constant control line)」とは、検体又は検体中の標的物質の濃度に関係なく、一定のシグナルを発生する部分を意味する。前記不変対照線は、前記検査線及び前記可変対照線の形成と類似した方法を用いて形成することができる。しかし、前記可変対照線は、標的とする物質(analyte)とは結合せず、検体と共に移動相によって検出パッドに沿って移動する第2接合体の第4リガンドと特異的又は非特異的に結合し捕獲され得るリガンドを固定することで形成することができる。又は、前記不変対照線は、検体と共に移動相によって検出パッドに沿って移動する標識物質、又は標識物質が結合した別途の物質と特異的又は非特異的に結合して捕獲され得るリガンドを固定させて形成することができる。結果的に、検体中の標的物質の濃度及び存在の有無とは関係なく、一定のシグナルを発生させることのできる物質をリガンドとして固定させ、不変対照線を形成する。前記不変対照線で使用され得るリガンドは「リポーター分子」という用語を使用して表現しており、例えば、前記レポーター分子の例としては、抗ウサギIgG、抗トリIgY、ストレプトアビジン(Streptavidin)、ウシ血清アルブミンなどを含むことができる。
The detection pad according to the present invention may further include an invariant control line for confirming the development of the specimen, and the reporter molecule may be fixed to the invariant control line.
The term “constant control line” in the present invention means a portion that generates a constant signal regardless of the concentration of a sample or a target substance in the sample. The invariant control line can be formed using a method similar to the formation of the inspection line and the variable control line. However, the variable control line does not bind to the target substance (analyte) but binds specifically or non-specifically to the fourth ligand of the second conjugate that moves along the detection pad by the mobile phase together with the analyte. And can be formed by immobilizing a ligand that can be captured. Alternatively, the invariant control line immobilizes a ligand that can be captured by binding specifically or non-specifically to a labeling substance that moves along the detection pad by the mobile phase together with the specimen, or to another substance to which the labeling substance is bound. Can be formed. As a result, a substance capable of generating a constant signal is immobilized as a ligand regardless of the concentration and presence of the target substance in the specimen, and an invariant control line is formed. The ligand that can be used in the invariant control line is expressed using the term “reporter molecule”, for example, examples of the reporter molecule include anti-rabbit IgG, anti-tri-IgY, streptavidin, bovine Serum albumin can be included.
固定されるレポーター分子の濃度を変えることで、不変対照線を二つ以上形成することができる。前記不変対照線に固定されたレポーター分子の濃度が増加するほど、不変対照線が強いシグナルを一定に発生することができる。 Two or more invariant control lines can be formed by changing the concentration of the immobilized reporter molecule. As the concentration of the reporter molecule immobilized on the invariant control line increases, the invariant control line can generate a stronger signal.
前記不変対照線に特定濃度のレポーター分子を固定させる場合、そこから発生されるシグナル強度は一定レベルを維持するため、レポーター分子のシグナル強度に対応する検査線又は可変対照線におけるシグナル強度が決定される。複数の不変対照線は、レポーター分子の濃度を変えることで形成されることから、異なるシグナル強度を有する複数の不変対照線が形成される。これらのシグナル強度は定量分析のために検査線又は可変対照線と比較される。すなわち、前記不変対照線は内部標準シグナルデータとして活用することができる。 When a specific concentration of the reporter molecule is immobilized on the invariant control line, the signal intensity generated therefrom is maintained at a constant level, so that the signal intensity in the inspection line or variable control line corresponding to the signal intensity of the reporter molecule is determined. The Since multiple invariant control lines are formed by changing the concentration of the reporter molecule, multiple invariant control lines with different signal intensities are formed. These signal intensities are compared to a test line or a variable control line for quantitative analysis. That is, the invariant control line can be used as internal standard signal data.
例えば、二つの不変対照線が形成され、シグナル強度1と3を発生すると仮定した場合、既知濃度の標的物質に基づいて、検査線がシグナル強度1の場合、標的物質の濃度が10ng/mLであり、検査線がシグナル強度3の場合、標的物質の濃度が30ng/mLであるということを予めて決めることができる。未知濃度の標的物質の結果、検査線がシグナル強度2を示す場合、シグナル強度が、不変対照線のシグナル強度に比べて二つの不変対照線間の中間値に相当するシグナル強度であることを容易に確認することができる。 For example, assuming that two invariant control lines are formed and generate signal intensities 1 and 3, based on a known concentration of the target substance, if the test line has a signal intensity of 1, the concentration of the target substance is 10 ng / mL. If the inspection line has a signal intensity of 3, it can be determined in advance that the concentration of the target substance is 30 ng / mL. If the test line shows a signal intensity of 2 as a result of an unknown concentration of the target substance, it is easy for the signal intensity to correspond to an intermediate value between the two invariant control lines compared to the signal intensity of the invariant control line Can be confirmed.
前記検査線、前記可変対照線及び前記不変対照線の大きさ及び位置は、使用される抗原-抗体反応によって適宜選択することができるが、これに限定されるものではない。前記不変対照線のシグナルの有無から成功的な検体の展開を確認することができ、検査線と可変対照線のシグナル強度を予め決定された標準シグナルデータと比較することで標的物質の定量分析を行うことができる。前記標準シグナルデータについては後述する。 The size and position of the inspection line, the variable control line, and the invariant control line can be appropriately selected according to the antigen-antibody reaction used, but are not limited thereto. Successful specimen development can be confirmed from the presence or absence of the signal of the invariant control line, and the target substance can be quantitatively analyzed by comparing the signal intensity of the test line and variable control line with predetermined standard signal data. It can be carried out. The standard signal data will be described later.
本発明において、検査線及び可変対照線のシグナル強度による定量分析の場合、検体中の標的物質のダイナミックレンジ(dynamic range)は1ng/mL〜1mg/mLであってもよい。本発明の一実施例において、検体中の標的物質を分析した結果、検体中の標的物質のダイナミックレンジが5〜100,000ng/mLと広いことを確認した(実施例2)。すなわち、従来の分析ストリップは、検体中の標的物質の濃度が特定の濃度を超えると、フック効果により、検査線のシグナル強度が低下する現象を示すことは前述した通りである。しかし、本発明のラピッドテスト用ストリップは、検体中の標的物質の濃度が増加するにつれて徐々に低下する可変対照線をさらに含んでおり、前記可変対照線はフック効果による影響を受けないため、検査線のみ有する従来のストリップの限界を示すダイナミックレンジを、検査線と可変対照線の組み合わせによりフック効果が発生する範囲まで広げたことを特徴とする。しかし、前記ダイナミックレンジは、標的物質の種類、検出パッド上に固定されるリガンドの量及びシグナル検出装置などによって異なってもよく、本発明のダイナミックレンジが前記範囲で限定されるものではない。 In the present invention, in the case of quantitative analysis based on the signal intensity of the test line and the variable control line, the dynamic range of the target substance in the sample may be 1 ng / mL to 1 mg / mL. In one example of the present invention, as a result of analyzing the target substance in the specimen, it was confirmed that the dynamic range of the target substance in the specimen was as wide as 5 to 100,000 ng / mL (Example 2). That is, as described above, the conventional analysis strip exhibits a phenomenon in which the signal intensity of the inspection line decreases due to the hook effect when the concentration of the target substance in the sample exceeds a specific concentration. However, the rapid test strip of the present invention further includes a variable control line that gradually decreases as the concentration of the target substance in the specimen increases, and the variable control line is not affected by the hook effect. The dynamic range which shows the limit of the conventional strip which has only a line is extended to the range which a hook effect generate | occur | produces by the combination of a test | inspection line and a variable control line. However, the dynamic range may vary depending on the type of target substance, the amount of ligand immobilized on the detection pad, a signal detection device, and the like, and the dynamic range of the present invention is not limited to the above range.
本発明におけるラピッドテスト用ストリップについてより具体的に説明する。本発明の前記ラピッドテスト用ストリップは、目的の標的物質を含む検体が導入された検体パッド、一末端が前記検体パッドと連結される前記接合体パッド、一末端が前記接合体パッドの他の末端と連結される前記検出パッド、一末端が前記検出パッドの他の末端と連結され、前記検体パッドから検体移送のための駆動力を提供する吸収パッド、及び前記ラピッドテスト用ストリップの下部に位置する固体支持体を含んでもよい。本発明のラピッドテスト用ストリップにおける構成図を図2に示す。 The rapid test strip according to the present invention will be described more specifically. The rapid test strip of the present invention includes a sample pad into which a sample containing a target substance of interest is introduced, one end of the conjugate pad connected to the sample pad, and one end of the other end of the conjugate pad. The detection pad is connected to the other end of the detection pad, and is connected to the other end of the detection pad to provide a driving force for transferring the sample from the sample pad. A solid support may be included. A block diagram of the rapid test strip of the present invention is shown in FIG.
前記固体支持体はニトロセルロース、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン(PolyVinylidene DiFluoride、PVDF)、ガラス及びプラスチックからなる群より選択される材料により形成されてもよい。前記固体支持体上にストリップを付着し、ストリップの耐久性を高めることで、取り扱い及び保管を容易にすることができる。 The solid support may be formed of a material selected from the group consisting of nitrocellulose, nylon, polyvinylidene fluoride (PVDF), glass and plastic. By attaching the strip onto the solid support and increasing the durability of the strip, handling and storage can be facilitated.
さらに、追加的な外部ケース装着を容易にすることができる。前記固体支持体として使用されるプラスチックの材質はポリプロピレンフィルム、ポリエステルフィルム、ポリカーボネートフィルム、アクリルフィルムなどであってもよいが、これに限定されるものではない。 Furthermore, an additional external case can be easily attached. The plastic material used as the solid support may be a polypropylene film, a polyester film, a polycarbonate film, an acrylic film, or the like, but is not limited thereto.
本発明の他の一態様として、ケース内に装着された本発明のラピッドテスト用ストリップキットを含み、下部のケースにはガイド及びストリップ支持体が含まれ、上部のケースには検体投入口が形成され、及び検査線及び可変対照線に相応する位置に結果確認窓が具備されるものである診断キットを提供する。 Another aspect of the present invention includes the rapid test strip kit of the present invention mounted in a case, the lower case includes a guide and a strip support, and the upper case forms a specimen inlet. And a diagnostic kit in which a result confirmation window is provided at a position corresponding to the inspection line and the variable control line.
本発明の前記ラピッドテスト用ストリップがケース内にさらに装着されてもよい。下部のケース内部にはラピッドテスト用ストリップを適切な位置に配置させるための複数のガイド及び/又はストリップ支持体を含むことができる。選択的に、下部のケースのガイド及びストリップ支持体の位置に対応する位置の上部のケースに前記ガイドとストリップ支持体をさらに含むことができる。すなわち、前記ガイド及び/又はストリップ支持体は必要に応じて下部のケースに形成されるか、或いは上部のケースと下部のケースの両方に形成されてもよい。さらに、上部のケースには検体投入口及び検査線、可変対照線及び不変対照線に対応する位置に標識物質からのシグナルを検出するための結果確認窓を含むることができる。前記検体投入口は、検出パッドの一末端に、すなわち、検査線に対する吸収パッドの反対側の末端であると共に、検体がメンブレンに沿って展開できるように検査線と十分に離隔された地点にホール又はスリットなどの形で形成される。前記結果確認窓は、検出パッド上に検査線及び可変対照線が位置した位置、及び/又は必要に応じて、不変対照線がさらに形成される場合、不変対照線を含み、肉眼又はセンサーにより十分に確認することのできる大きさで形成される。前記検査線、可変対照線及び不変対照線を確認できるものであれば、その大きさ及び形に限定されることなく形成される。 The rapid test strip of the present invention may be further mounted in a case. A plurality of guides and / or strip supports may be included within the lower case to place the rapid test strip in place. Optionally, the guide and strip support may be further included in the upper case at a position corresponding to the position of the guide and strip support in the lower case. That is, the guide and / or the strip support may be formed in the lower case as needed, or may be formed in both the upper case and the lower case. Further, the upper case can include a result confirmation window for detecting a signal from the labeling substance at a position corresponding to the specimen inlet, the inspection line, the variable control line, and the invariant control line. The sample inlet is at one end of the detection pad, that is, the end opposite to the absorption pad with respect to the test line, and at a point sufficiently separated from the test line so that the sample can be developed along the membrane. Alternatively, it is formed in the form of a slit or the like. The result confirmation window includes the invariant control line when the inspection line and the variable control line are located on the detection pad, and / or an invariant control line, if necessary. It is formed in a size that can be confirmed. As long as the inspection line, the variable control line, and the invariant control line can be confirmed, the inspection line, the variable control line, and the invariable control line are not limited to the size and shape.
前記上部のケース及び下部のケースは一般的なプラスチック素材を用いて製造することができ、例えば、ポリカーボネート、アクリロニトリルブタジエンスチレン(acrylonitrile butadiene styrene、ABS)などであってもよいが、これに限定されるものではない。前記上部のケース及び下部のケースは別に製作することができ、結合溝及び結合突起など通常の手段で結合する。或いは、一体型(integrated form)として製造されてもよい。 The upper case and the lower case may be manufactured using a general plastic material, and may be, for example, polycarbonate, acrylonitrile butadiene styrene (ABS), but is not limited thereto. It is not a thing. The upper case and the lower case can be manufactured separately, and are connected by a usual means such as a connecting groove and a connecting protrusion. Alternatively, it may be manufactured as an integrated form.
さらに、前記診断キットは、様々な濃度の標的物質が含まれた検体に対して検査線と可変対照線の標準色票を含む標準シグナルデータと共にさらに提供されてもよい。
本発明に使用される、前記標準シグナルデータとは、様々な既知濃度の標的物質が含まれた検体に対して、本発明のラピッドテスト用ストリップを用いて、検査線と可変対照線におけるシグナル強度を要約したデータを意味する。これらの標準シグナルデータは異なる方法で要約することができ、代表的に各標的物質の濃度に対応する検査線と可変対照線の色で要約することができる。同様に、pHを測定するためのリトマス試験紙により検討することができ、それぞれのpHに対応する試験紙の色を整理した標準色票を共に提供する。特に、前記標準色票を含む標準シグナルデータを使用する場合、肉眼のみでも標的物質のシグナル強度と標準シグナルデータを容易に比較することができるため、簡単かつ迅速に半定量的分析が可能である。これと関連して、前記診断キットは、前記検査線と前記可変対照線の標識物質からのシグナルの有無及び強度を肉眼で確認することで、定性的又は半定量的な分析を行うために使用することができる。言い換えると、前記キットに検体を適用した後、検査線と可変対照線からのシグナルの有無と強度を、提供された標準色票を含む標準シグナルデータと肉眼により比較することで、検体中の標的物質の有無及びその濃度を分析することができる。
Furthermore, the diagnostic kit may be further provided with standard signal data including standard color charts of test lines and variable control lines for specimens containing various concentrations of target substances.
The standard signal data used in the present invention refers to signal intensities in the test line and the variable control line using the rapid test strip of the present invention for specimens containing various known concentrations of target substances. Is a summary of data. These standard signal data can be summarized in different ways, typically with the color of the test and variable control lines corresponding to the concentration of each target substance. Similarly, a litmus paper for measuring pH can be studied, and a standard color chart in which the colors of the paper corresponding to each pH are arranged is provided together. In particular, when standard signal data including the standard color chart is used, the signal intensity of the target substance and the standard signal data can be easily compared even with the naked eye, so simple and quick semi-quantitative analysis is possible. . In this connection, the diagnostic kit is used to perform a qualitative or semi-quantitative analysis by visually confirming the presence and intensity of signals from the labeling substances on the inspection line and the variable control line. can do. In other words, after applying the sample to the kit, the presence / absence and intensity of the signal from the inspection line and the variable control line are compared with the standard signal data including the provided standard color chart with the naked eye. The presence and concentration of the substance can be analyzed.
さらに他の態様として、本発明は前記ラピッドテスト用ストリップを用いて検体中の標的物質を定性又は定量分析する方法として検体を前記接合体パッド又はそれ以前に位置したパッドに導入して展開させる第1段階、検査線と可変対照線の標識物質からのシグナルの有無及び強度を確認する第2段階、及び検査線と可変対照線のシグナル強度と標準シグナルデータを比較して標的物質の量を決定する第3段階を含み、前記標準シグナルデータは、様々な既知濃度の標的物質が含まれた各検体について第1段階及び第2段階を行うことにより取得する分析方法を提供する。 As yet another aspect, the present invention is a method for qualitatively or quantitatively analyzing a target substance in a specimen using the rapid test strip, wherein the specimen is introduced into the conjugate pad or a pad positioned before it and developed. 1st stage, 2nd stage to check the presence and intensity of the signal from the test substance and variable control line labeling substance The standard signal data provides an analysis method that is obtained by performing the first stage and the second stage for each specimen containing various known concentrations of the target substance.
さらに他の態様として、本発明は、固体支持体に吸収された検体とリガンドの反応を含む検体中の一つ以上の標的物質の定性又は定量分析法を提供し、一つの標的物質に対して二つの異なる反応メカニズムが適用されることを特徴とする。前記本発明の方法に適した二つの異なる反応メカニズムはサンドイッチ反応及び競争的反応であってもよい。 As yet another aspect, the present invention provides a qualitative or quantitative analysis method for one or more target substances in a sample including a reaction between a sample and a ligand absorbed on a solid support. Two different reaction mechanisms are applied. Two different reaction mechanisms suitable for the method of the present invention may be a sandwich reaction and a competitive reaction.
本発明のラピッドテスト用ストリップを用いて検体中の標的物質を定性及び/又は定量分析する方法に関する詳細な原理は、前述のとおりである。また、標準シグナルデータも前述のとおりである。 The detailed principle regarding the method for qualitative and / or quantitative analysis of the target substance in the specimen using the rapid test strip of the present invention is as described above. The standard signal data is also as described above.
具体的な分析方法は下記の順に行うことができる。まず、目的の標的物質を含む液状検体を前記接合体パッド又はそれ以前に位置したパッドに導入することができる。すなわち、前記液状検体は、検体を接合体パッドに導入することによってストリップに導入することができるが、好ましくは接合体パッド以前、例えば、検体パッドに投入して導入することができる。さらに、前記検体にPBSのような緩衝液を加え均等に混合した後、これを同様の方法でストリップに導入することができる。 A specific analysis method can be performed in the following order. First, a liquid specimen containing a target substance of interest can be introduced into the joined body pad or a pad positioned before that. That is, the liquid specimen can be introduced into the strip by introducing the specimen into the conjugate pad, but can preferably be introduced into the specimen pad before, for example, the specimen pad. Furthermore, after adding a buffer solution such as PBS to the specimen and mixing it evenly, it can be introduced into the strip in the same manner.
前記検体がラピッドテスト用ストリップにローディング(導入)されると、前記検体の展開(migration)が始まり、その後、不変対照線によって検体の成功的な展開を確認することができる。検体の成功的な展開が確認されると、検査線と可変対照線からの標識物質のシグナルの有無及び強度が確認される。検査線から観察されたシグナルは検体中に標的物質が含まれていることを示す(定性分析)。さらに、検査線及び可変対照線のシグナル強度と、標準シグナルデータを比較することで、検体中の標的物質の濃度を決定することができる(定量分析)。 Once the sample is loaded (introduced) onto the rapid test strip, migration of the sample begins, after which the successful development of the sample can be confirmed by an invariant control line. When the successful development of the specimen is confirmed, the presence and intensity of the labeling substance signal from the inspection line and the variable control line are confirmed. The signal observed from the inspection line indicates that the target substance is contained in the specimen (qualitative analysis). Furthermore, the concentration of the target substance in the specimen can be determined by comparing the signal intensity of the test line and the variable control line with the standard signal data (quantitative analysis).
本発明の具体的な一実施態様では、可変対照線をさらに含むラピッドテスト用ストリップを用いたヒト免疫グロブリンG(humanIgG;標的物質)の分析を行った。その結果、検体中の標的物質の濃度が5〜100,00ng/mLの範囲でフック効果が発生したにも関わらず、肉眼により信頼性の高い定量分析が可能であることを確認した(表1及び図5)。 In one specific embodiment of the present invention, human immunoglobulin G (target IgG) was analyzed using a rapid test strip further including a variable control line. As a result, it was confirmed that reliable quantitative analysis was possible with the naked eye despite the occurrence of the hook effect when the concentration of the target substance in the sample was in the range of 5 to 100,000 ng / mL (Table 1). And FIG. 5).
本発明の免疫分析のための検体は、哺乳類、好ましくはヒトから分離した全血、血球、血清、血漿、骨髄液、汗、尿、涙、唾液、皮膚、粘膜、毛髪など全ての生体試料を含んでもよい。好ましくは、前記検体は血液である。前記血液は、血球を除去した血清又は血漿であってもよい。全血を用いる場合、血球を溶解するための成分を緩衝液に添加してもよい。これは、例示的なものであって、本発明の免疫分析のための検体は特に限定されるものではない。 Specimens for immunoassay of the present invention include all biological samples such as whole blood, blood cells, serum, plasma, bone marrow fluid, sweat, urine, tears, saliva, skin, mucous membrane, and hair isolated from mammals, preferably humans. May be included. Preferably, the specimen is blood. The blood may be serum or plasma from which blood cells have been removed. When whole blood is used, a component for dissolving blood cells may be added to the buffer. This is exemplary, and the specimen for the immunoassay of the present invention is not particularly limited.
本発明の免疫分析方法は、マラリア抗原(Ag)、エイズ(HIV)、C型肝炎、B型肝炎、梅毒、胃潰瘍原因菌、腫瘍マーカー(AFP、PSA、CEA)、結核、SARS、デング熱、ハンセン病など主に全血を検体として使用する疾病の診断に有効である。 The immunoassay method of the present invention includes malaria antigen (Ag), AIDS (HIV), hepatitis C, hepatitis B, syphilis, gastric ulcer causing bacteria, tumor markers (AFP, PSA, CEA), tuberculosis, SARS, dengue fever, leprosy. It is effective for the diagnosis of diseases mainly using whole blood as a specimen.
[発明を実施するための形態]
以下、実施例を通じて本発明をより詳細に説明する。これら実施例は本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施例に限定されるものではない。
[Mode for Carrying Out the Invention]
Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are for explaining the present invention more specifically, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
実施例1: ラピッドテスト用ストリップの製造
A.検査線、可変対照線及び不変対照線が形成された検出パッドの作製
3つの分析線をニトロセルロース膜に設けた。ラミネーター(laminator)を用いてニトロセルロース膜をプラスチックカードに積層(lamination)した。その後、検査線の第2リガンドとしてはヤギ抗-ヒト免疫免疫グロブリン(anti-human IgG from goat、Arista、USA)を、可変対照線の第3リガンドとしてはヒト免疫グロブリン(human IgG)を、不変対照線のレポーター分子としてはウシ血清アルブミン(BSA)を用い、これをそれぞれ自動分注機を利用して分注した後、25〜30℃で2日間(48時間)乾燥させた。
Example 1: Production of Rapid Test Strips Preparation of a detection pad on which a test line, a variable control line and an invariant control line were formed. Three analytical lines were provided on the nitrocellulose membrane. A nitrocellulose membrane was laminated to a plastic card using a laminator. Subsequently, goat anti-human IgG from goat (Arista, USA) is used as the second ligand of the test line, and human immunoglobulin (human IgG) is used as the third ligand of the variable control line. Bovine serum albumin (BSA) was used as a control line reporter molecule, which was dispensed using an automatic dispenser and dried at 25-30 ° C. for 2 days (48 hours).
B.接合体パッドの製作
0.5%ポリビニルアルコール(polyvinylalcohol、PVA)が含まれたトリス緩衝液(10mM、pH8.5)でパッドを十分に濡らし、乾燥機で完全に乾燥し接合体パッドを前処理した。
B. Manufacture of bonded pad Wet the pad thoroughly with Tris buffer solution (10 mM, pH 8.5) containing 0.5% polyvinyl alcohol (PVA) and completely dry it with a dryer to pre-treat the bonded pad. did.
直径が約40mmのコロイド性金粒子(colloidal gold particle)とヤギ抗-ヒト免疫グロブリン(anti-human IgG from goat)が結合した第1接合体溶液を準備し、さらに、直径が約40mmのコロイド性金粒子ストレプトアビジン(streptavidin)が結合した第2接合体溶液を準備した。前記第1接合体溶液及び第2接合体溶液を前処理パッドに適用し完全に乾燥させた。引き続き、前記パッドを適切な大きさに切断し準備した。 Prepare a first conjugate solution in which colloidal gold particles with a diameter of about 40 mm and goat anti-human IgG from goat are combined, and colloidal with a diameter of about 40 mm. A second conjugate solution to which gold particles streptavidin was bound was prepared. The first conjugate solution and the second conjugate solution were applied to a pretreatment pad and completely dried. Subsequently, the pad was prepared by cutting to an appropriate size.
C.検体パッドの製作
1%TritonX−100、0.5%NaN3、0.1%BSAが含まれた0.08Mのホウ酸塩緩衝液に検体パッドを十分に濡らし乾燥機で完全に乾燥させた。引き続き、前記パッドを適切な大きさに切断した。
C. Preparation of specimen pad The specimen pad was sufficiently wetted with 0.08M borate buffer containing 1% Triton X-100, 0.5% NaN3, and 0.1% BSA and completely dried with a dryer. Subsequently, the pad was cut to an appropriate size.
D.吸収パッドの製作
吸収パッドは乾燥機で水分を完全に乾燥させ、如何なる処理もせずにそのまま使用した。引き続き、前記パッドを適切な大きさに切断した。
D. Production of absorbent pad The absorbent pad was completely dried with a dryer and used as it was without any treatment. Subsequently, the pad was cut to an appropriate size.
E.ラピッドテスト用ストリップの製作
前記の手順によって準備された検出パッド、接合体パッド、検体パッド及び吸収パッドを図4に示す構造台に組み立てる。
E. Fabrication of Rapid Test Strip The detection pad, bonded pad, specimen pad, and absorption pad prepared by the above-described procedure are assembled on the structural table shown in FIG.
すなわち、シールが付着した検体パッドを接合体パッドの一末端と重畳するように付着し、検出パッドの他の一末端を前記接合体パッドの他の一末端と重畳するように付着し、検出パッドの他の一末端は上段表示用シールを付着した吸収パッドの一末端と相互重畳するようにして付着した。この集合体を切断機を利用して約2±1.0mmのサイズに切断し、最終的に図4のようなストリップを製造した。 That is, the specimen pad to which the seal is attached is attached so as to overlap with one end of the conjugate pad, and the other end of the detection pad is attached so as to overlap with the other end of the conjugate pad. The other end was attached so as to overlap with one end of the absorbent pad to which the upper display seal was attached. This assembly was cut into a size of about 2 ± 1.0 mm using a cutting machine, and finally a strip as shown in FIG. 4 was manufactured.
図4において、それぞれの符号の説明が意味するところは以下のとおりである。
1:検体パッド;16±4×4±2mm
2:抗-ヒト免疫グロブリンと金粒子の接合体パッド;6±1.0×4±2mm
3:ニトロセルロース検出パッド;25±5×4±2mm
4:プラスチック固体支持体
5:吸収パッド;18±4×4±2mm
6:抗-ヒト免疫グロブリンが固定された検査線
7:ヒト免疫グロブリンが固定された可変対照線
8:ウシ血清アルブミンが固定された不変対照線
実施例2: ラピッドテスト用ストリップを利用した免疫分析
95ウェルプレートに、標的物質であるヒト免疫グロブリン(human IgG)とリン酸塩緩衝液(PBS)を含む検体溶液を100μLずつ分注した。前記検体溶液は、0ng/mL、5.6ng/mL、11.2ng/mL、22.5ng/mL、45ng/mL、90ng/mL、187ng/mL、375ng/mL、750ng/mL、1.5μg/mL、3.12μg/mL、6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、又は100μg/mLの濃度のヒト免疫グロブリンを用いて準備した。
In FIG. 4, the meanings of the respective symbols are as follows.
1: Specimen pad; 16 ± 4 × 4 ± 2mm
2: Conjugate pad of anti-human immunoglobulin and gold particles; 6 ± 1.0 × 4 ± 2 mm
3: Nitrocellulose detection pad; 25 ± 5 × 4 ± 2 mm
4: Plastic solid support 5: Absorption pad; 18 ± 4 × 4 ± 2 mm
6: Inspection line with immobilized anti-human immunoglobulin 7: Variable control line with immobilized human immunoglobulin 8: Invariant control line with immobilized bovine serum albumin Example 2: Immunoassay using rapid test strips A sample solution containing human immunoglobulin (human IgG) as a target substance and phosphate buffer solution (PBS) was dispensed into a 95-well plate in an amount of 100 μL. The sample solution was 0 ng / mL, 5.6 ng / mL, 11.2 ng / mL, 22.5 ng / mL, 45 ng / mL, 90 ng / mL, 187 ng / mL, 375 ng / mL, 750 ng / mL, 1.5 μg / ML, 3.12 μg / mL, 6.25 μg / mL, 12.5 μg / mL, 25 μg / mL, 50 μg / mL, or 100 μg / mL of human immunoglobulin.
前記実施例1によって作製されたラピッドテスト用ストリップを、前記検体溶液が入っている96ウェルプレートに入れて10分間展開させた。
図5は、標的物質としてのヒト免疫グロブリンの濃度によるクロマトグラフィー用ストリップの展開結果を示した画像である。
The rapid test strip prepared in Example 1 was placed in a 96-well plate containing the sample solution and developed for 10 minutes.
FIG. 5 is an image showing the development result of the chromatographic strip according to the concentration of human immunoglobulin as a target substance.
さらに、検査線、可変対照線及び不変対照線からのシグナル強度を肉眼で確認し、下記表1に示した。これと関連して、それぞれのシグナル強度は色彩強度で判断し、最も高い色彩強度を任意で5とし、最も低い色彩強度を0にした。 Further, the signal intensities from the inspection line, variable control line, and invariant control line were confirmed with the naked eye and are shown in Table 1 below. In this connection, each signal intensity was judged by the color intensity, the highest color intensity was arbitrarily set to 5, and the lowest color intensity was set to 0.
表1に示すように、検体中の標的物質(IgG)の濃度が増加するにつれて検査線のシグナル強度が徐々に増加し、約375ng/mL〜750ng/mLで最も強く観察された。その後、シグナル強度は徐々に低下し、これは、前述のフック効果によるものである。従って、検査線のシグナル強度だけを用いて前記標的物質を定量的に分析することはできない。 As shown in Table 1, the signal intensity of the inspection line gradually increased as the concentration of the target substance (IgG) in the specimen increased, and was observed most strongly at about 375 ng / mL to 750 ng / mL. Thereafter, the signal intensity gradually decreases due to the hook effect described above. Therefore, the target substance cannot be quantitatively analyzed using only the signal intensity of the inspection line.
例えば、検査線のシグナル強度が2の場合、検体中の標的物質(IgG)の濃度が40ng/ml及び約10μg/mlの付近で観察された。検査線が同様のシグナル強度を示したとしても、標的物質の濃度は異なることがある。 For example, when the signal intensity of the inspection line is 2, the concentration of the target substance (IgG) in the sample was observed in the vicinity of 40 ng / ml and about 10 μg / ml. Even if the inspection line shows similar signal intensity, the concentration of the target substance may be different.
しかし、可変対照線のシグナル強度は、検体中の標的物質(IgG)の濃度が増加するにつれて徐々に低下する。詳細には、0〜90ng/mLまでの標的物質の濃度でシグナル強度が最も高いレベルの5にほとんど維持されることが確認された。このように標的物質の濃度が低い場合は、前記検査線でフック効果が発生しないため、検査線のシグナル強度によって標的物質の濃度を決定することができる。標的物質の濃度が増加する場合、検査線はフック効果の発生によりシグナル強度が不規則となる。しかし、可変対照線はシグナル強度が持続的に低下するので、可変対照線によって前記標的物質の濃度を分析することができる。 However, the signal intensity of the variable control line gradually decreases as the concentration of the target substance (IgG) in the specimen increases. Specifically, it was confirmed that the signal intensity was almost maintained at the highest level of 5 at a target substance concentration of 0 to 90 ng / mL. In this way, when the concentration of the target substance is low, the hook effect does not occur in the inspection line, so the concentration of the target substance can be determined by the signal intensity of the inspection line. When the concentration of the target substance increases, the signal intensity of the inspection line becomes irregular due to the occurrence of the hook effect. However, since the signal intensity of the variable control line continuously decreases, the concentration of the target substance can be analyzed by the variable control line.
例えば、検査線のシグナル強度が2の場合、前述のように、前記標的物質が約40ng/mLと10μg/mLの2つの濃度を有する。しかし、前記可変対照線は2つの濃度に対してシグナル強度が5又は2で現れるため、検査線のみを用いた従来の方法と違って、前記濃度を定量的に測定することができることを示す。 For example, when the signal intensity of the inspection line is 2, as described above, the target substance has two concentrations of about 40 ng / mL and 10 μg / mL. However, since the signal intensity of the variable control line appears at 5 or 2 with respect to two concentrations, the concentration can be measured quantitatively, unlike the conventional method using only the inspection line.
さらに、前記ラピッドテスト用ストリップは、標的物質が5ng/mL〜100,000ng/mLまでの広いダイナミックレンジを有することを確認した。 Furthermore, the rapid test strip confirmed that the target substance had a wide dynamic range from 5 ng / mL to 100,000 ng / mL.
本発明のラピッドテスト用ストリップは、可変対照線を有するため、フック効果により検体の定量分析の際に発生する問題を克服できると共に、検体中の肉眼による定性分析だけでなく、信頼性の高い定量分析を迅速に行うことができる。さらに、標的物質のダイナミックレンジを検査線と可変対照線の補完的効果により改善できる効果がある。 Since the rapid test strip of the present invention has a variable control line, it can overcome the problems that occur during the quantitative analysis of the specimen due to the hook effect, and can perform not only a qualitative analysis by the naked eye in the specimen but also a reliable quantitative. Analysis can be performed quickly. Furthermore, the dynamic range of the target substance can be improved by the complementary effect of the inspection line and the variable control line.
Claims (18)
前記検出パッドには、相互に隔離された検査線及び可変対照線が具備されており、
前記検査線は、検体中の標的物質と反応する第2リガンドが固定されており、及び
前記可変対照線は、標的物質と同様であるか、又は第1リガンドと反応するその類似体である第3リガンドが第2所定量で固定されているため、検体中の標的物質と結合していないベア(bare)接合体と反応可能な、ラピッドテスト用ストリップ。 In the rapid test strip including the conjugate pad and the detection pad, the conjugate pad includes a first predetermined amount of the first ligand that reacts with the target substance and a signal detection label substance that binds to the first ligand, 1 Ligand and labeling substance are linked to each other before or during specimen development to form a conjugate, and the specimen can be moved to the detection pad during specimen development,
The detection pad includes a test line and a variable control line that are isolated from each other,
The test line has a second ligand that reacts with the target substance in the specimen fixed, and the variable control line is the same as the target substance or an analogue thereof that reacts with the first ligand. A rapid test strip capable of reacting with a bare conjugate not bound to a target substance in a specimen because three ligands are immobilized in a second predetermined amount.
前記検体中の標的物質と結合せずに、第1リガンド及び標識物質を具備したベア接合体が第3リガンドと反応して可変対照線で捕獲され、
前記検査線及び前記可変対照線の標識物質からのシグナルを測定することにより、検体中の標的物質の有無又はその量、或いはそれらをいずれも決定し得る、請求項2に記載のラピッドテスト用ストリップ。 The complex comprising the first ligand, the labeling substance and the target substance reacts with the second ligand and is captured by the inspection line;
Without binding to the target substance in the specimen, the bare conjugate comprising the first ligand and the labeling substance reacts with the third ligand and is captured by the variable control line,
The rapid test strip according to claim 2, wherein the presence or absence of the target substance in the sample or the amount thereof can be determined by measuring signals from the labeling substances on the inspection line and the variable control line. .
前記M値が、前記第2所定量で固定された全ての第3リガンドがベア接合体に反応し飽和する場合における検体中の標的物質の最大濃度である、請求項4に記載のラピッドテスト用ストリップ。 The signal intensity from the variable control line is kept constant until the concentration of the target substance in the sample reaches the M value, but when the concentration exceeds the M value, the intensity gradually decreases and finally Converged to 0,
5. The rapid test for rapid test according to claim 4, wherein the M value is a maximum concentration of a target substance in a specimen in a case where all the third ligands fixed in the second predetermined amount react with a bare conjugate and become saturated. strip.
前記不変対照線にはレポーター分子が固定されている、請求項1に記載のラピッドテスト用ストリップ。 The detection pad further comprises an invariant control line for confirming the development of the specimen,
The rapid test strip according to claim 1, wherein a reporter molecule is fixed to the invariant control line.
標的物質が含まれた検体が分析のために導入される検体パッド、
一末端が前記検体パッドと連結される接合体パッド、
一末端が前記接合体パッドの他の末端と連結される検出パッド、
一末端が前記検出パッドの他の末端と連結され、前記検体パッドから検体を展開するための駆動力を提供する吸収パッド、及び
前記ラピッドテスト用ストリップの下部に位置する固体支持体を含む、請求項1に記載のラピッドテスト用ストリップ。 The rapid test strip is
A sample pad into which a sample containing the target substance is introduced for analysis;
A conjugate pad, one end of which is connected to the specimen pad;
A detection pad having one end connected to the other end of the conjugate pad;
An absorbent pad connected at one end to the other end of the detection pad and providing a driving force for deploying a specimen from the specimen pad; and a solid support located under the rapid test strip. Item 12. The rapid test strip according to item 1.
前記キットには、下部のケースにはガイド及びストリップ支持部が具備されており、
上部のケースには検体投入口、及び
検査線及び可変対照線に相応する位置に結果確認窓が具備されている、診断キット。 A kit in which the rapid test strip according to any one of claims 1 to 11 is further mounted in a case,
The kit includes a guide and a strip support in the lower case,
A diagnostic kit, in which the upper case is equipped with a sample entry port and a result confirmation window at a position corresponding to the inspection line and variable control line.
前記検体を前記接合体パッド又はそれ以前に位置するパッドに導入し、検体を展開させる段階(第1段階)、
検査線と可変対照線の標識物質からのシグナルの有無及び強度を確認する段階(第2段階)、及び
検査線と可変対照線のシグナル強度と標準シグナルデータを比較し標的物質の量を測定する段階(第3段階)を含み、
前記標準シグナルデータは、様々な既知濃度の標的物質が含まれた各検体について、前記第1段階及び第2段階を行うことにより取得される、方法。 A method for qualitatively or quantitatively analyzing a target substance in a specimen using the rapid test strip according to any one of claims 1 to 11,
Introducing the specimen into the conjugate pad or a pad located before the joint pad and developing the specimen (first stage);
Check the presence / absence and intensity of signal from the labeled substance on the inspection line and variable control line (second stage), and compare the signal intensity of the inspection line and variable control line with the standard signal data to measure the amount of target substance Including stage (third stage),
The standard signal data is obtained by performing the first step and the second step for each specimen containing various known concentrations of target substances.
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018128366A (en) * | 2017-02-09 | 2018-08-16 | 積水メディカル株式会社 | Immunochromatography |
CN110596380A (en) * | 2019-09-20 | 2019-12-20 | 成都艾科斯伦医疗科技有限公司 | Method for eliminating HOOK effect and immunochromatography detection card thereof |
KR20210122978A (en) * | 2020-04-02 | 2021-10-13 | 아주대학교산학협력단 | Lateral flow assay strip and method for quantitative analysis using thereof |
JP2022126690A (en) * | 2015-10-05 | 2022-08-30 | ユニバーシティ オブ ピッツバーグ-オブ ザ コモンウェルス システム オブ ハイヤー エデュケーション | Development and parameter assessment for vertically aligned platinum wire aptasensor arrays for impedimetric detection of cardiac biomarkers |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN205720253U (en) * | 2015-08-21 | 2016-11-23 | 蓝十字生物药业(北京)有限公司 | A kind of classification rapid semi-quantitative test ovulation colloid gold test paper and kit |
KR20180104080A (en) | 2016-01-22 | 2018-09-19 | 아피메딕스, 인코포레이티드 | Devices for the detection of vitamin D metabolites |
CN105785038A (en) * | 2016-03-31 | 2016-07-20 | 广州市微米生物科技有限公司 | Double detection line SAA (Serum amyloid A protein) immunofluorescence chromatography quantitative detection reagent and preparation method thereof |
CN105891485A (en) * | 2016-05-11 | 2016-08-24 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | Immunochromatographic assay test paper strip for quantitatively detecting carcino-embryonic antigen (CEA) and preparation method thereof |
WO2017197914A1 (en) * | 2016-05-17 | 2017-11-23 | 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | Antigen-aptamer-based competitive assay test strip, applications thereof, and test strip utilizing aptamer in testing for aflatoxin b1 or m1 |
CN106226516B (en) * | 2016-07-01 | 2018-06-29 | 安邦(厦门)生物科技有限公司 | A kind of hyperbola calibrates quantitative immunochromatographic detection method |
CN106018399A (en) * | 2016-08-15 | 2016-10-12 | 陈诗秋 | Method for rapidly detecting a plurality of additives in food |
KR101994411B1 (en) | 2017-02-01 | 2019-06-28 | 주식회사 제트바이오텍 | Highly sensitive in vitro diagnostic kit and diagnostic analysis method using the same |
CN107918015A (en) * | 2017-07-14 | 2018-04-17 | 王镕 | Immune chromatographic semiquantitative test paper bar, kit and detection method |
KR101995564B1 (en) | 2017-08-14 | 2019-07-03 | 주식회사 제타 | Apparatus for applying liquid material |
WO2019050321A1 (en) * | 2017-09-07 | 2019-03-14 | (주)프로테옴텍 | Chromatographic strip comprising multiple test lines, diagnostic kit comprising same, and qualitative, semi-quantitative or quantitative analysis method comprising multiple competitive reaction measurement steps |
US20210164974A1 (en) | 2017-09-07 | 2021-06-03 | Proteometech Inc. | Chromatographic strip comprising multiple test lines, diagnostic kit comprising same, and qualitative, semi-quantitative or quantitative analysis method comprising multiple competitive reaction measurement steps |
KR102046556B1 (en) * | 2017-11-20 | 2019-11-19 | 주식회사 제트바이오텍 | A wide range of in-vitro diagnostic kit capable of quantitating target substance in high concentration specimen |
KR102133752B1 (en) * | 2018-04-06 | 2020-07-16 | 바디텍메드(주) | Lateral flow assay strip |
CN110275018A (en) * | 2019-07-25 | 2019-09-24 | 万华普曼生物工程有限公司 | The joint-detection device of transferrins, hemoglobin and Heliobacter pylori antigen |
JP2022546531A (en) * | 2019-08-29 | 2022-11-04 | アロノウィッツ、ミレーヤ、シー. | Quantitative analyte detection in lateral flow immunochemistry |
KR102346178B1 (en) * | 2019-12-16 | 2022-01-03 | (주)프로테옴텍 | Strips, kits for immunochromatography and competitive immunochromatographic assays using the same |
CN114846331A (en) | 2019-12-18 | 2022-08-02 | 快速病原体筛选有限公司 | Selective leukocyte lysis for immunoassay systems |
KR102467073B1 (en) * | 2021-02-17 | 2022-11-14 | 동의대학교 산학협력단 | Kit for detecting of antibodies in blood to Coronavirus |
KR102281805B1 (en) * | 2021-04-22 | 2021-07-26 | 주식회사 제트바이오텍 | Dry analytical in-vitro diagnostic kit for fluorescent quantitative analysis using fluorescent dye and the manufacturing method thereof |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003161733A (en) * | 2001-09-14 | 2003-06-06 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | Specific binding analysis method and specific binding analysis device |
JP2004085425A (en) * | 2002-08-28 | 2004-03-18 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | Detection reagent and detection method of material |
JP2008539424A (en) * | 2005-04-29 | 2008-11-13 | キンバリー クラーク ワールドワイド インコーポレイテッド | Assay device having detection function in hook effect region |
WO2011016326A1 (en) * | 2009-08-07 | 2011-02-10 | アークレイ株式会社 | Method for detecting prozone phenomenon, analysis method, device for detecting prozone phenomenon and analyzer |
JP2013053869A (en) * | 2011-09-01 | 2013-03-21 | Furukawa Electric Co Ltd:The | Immunochromatographic test kit, detection method using the same, and marker reagent to be used for the same |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100403871B1 (en) * | 2000-08-12 | 2003-11-01 | 휴마시스 주식회사 | Diagnostic Device For Distinguishing Between Normal And Ectopic Pregnancy And Process For Preparing The Same |
CA2471462C (en) * | 2001-12-24 | 2011-01-25 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Internal calibration system for flow-through assays |
KR100574559B1 (en) * | 2004-04-14 | 2006-04-27 | (주)에니젠 | Kit for detecting canine parvovirus antibody using immunochromatography and manufacturing method thereof |
DE102004023402A1 (en) * | 2004-05-12 | 2005-12-08 | Roche Diagnostics Gmbh | Method for increasing the dynamic measuring range of, in particular immunological test elements based on specific binding reactions |
US7943294B2 (en) * | 2004-07-30 | 2011-05-17 | Hologic, Inc. | Methods for detecting oncofetal fibronectin |
CN1892223B (en) * | 2005-04-11 | 2012-08-22 | 兰州大学 | Colloidal gold semi-quantitative quick immunity diagnosis test-paper stripe |
US20060240569A1 (en) * | 2005-04-20 | 2006-10-26 | Becton, Dickinson And Company | Semi-quantitative immunochromatographic device |
CN101509922A (en) * | 2009-03-24 | 2009-08-19 | 南通市伊士生物技术有限责任公司 | Vitro diagnosis detecting test paper and method for making same |
CN101825640A (en) * | 2010-03-25 | 2010-09-08 | 沈鹤柏 | Qualitative and quantitative detection dual-purpose HCG test paper for colloidal gold immunochromatography assay |
KR101323371B1 (en) * | 2011-05-03 | 2013-10-29 | 김수동 | Apparatus and manufacturing method of a diagnostic kit with the sample of urine to diagnose the prostate cancer |
CN102890157A (en) * | 2011-07-20 | 2013-01-23 | 天津中新科炬生物制药有限公司 | Test strip and method for fast quantitative detection of human chorionic gonadotropin (HCG) |
CN202383145U (en) * | 2011-12-05 | 2012-08-15 | 上海凯创生物技术有限公司 | Quantitative detection kit for colloidal gold of human chorionic gonadotropin |
KR101280054B1 (en) | 2012-05-31 | 2013-06-28 | 에스디 바이오센서 주식회사 | A freeze-drying conjugate-construct for point-of-care testing (poct) immunochromatography, a kit for immunoassay using the same, and a method for analysis using the kit |
-
2014
- 2014-06-03 WO PCT/KR2014/004961 patent/WO2014196803A1/en active Application Filing
- 2014-06-03 CN CN201480020367.8A patent/CN105229468A/en active Pending
- 2014-06-03 EP EP14806987.5A patent/EP3004879A4/en not_active Withdrawn
- 2014-06-03 JP JP2016515284A patent/JP2016520200A/en active Pending
- 2014-06-05 KR KR1020140068572A patent/KR101540608B1/en active IP Right Grant
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003161733A (en) * | 2001-09-14 | 2003-06-06 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | Specific binding analysis method and specific binding analysis device |
JP2004085425A (en) * | 2002-08-28 | 2004-03-18 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | Detection reagent and detection method of material |
JP2008539424A (en) * | 2005-04-29 | 2008-11-13 | キンバリー クラーク ワールドワイド インコーポレイテッド | Assay device having detection function in hook effect region |
WO2011016326A1 (en) * | 2009-08-07 | 2011-02-10 | アークレイ株式会社 | Method for detecting prozone phenomenon, analysis method, device for detecting prozone phenomenon and analyzer |
JP2013053869A (en) * | 2011-09-01 | 2013-03-21 | Furukawa Electric Co Ltd:The | Immunochromatographic test kit, detection method using the same, and marker reagent to be used for the same |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022126690A (en) * | 2015-10-05 | 2022-08-30 | ユニバーシティ オブ ピッツバーグ-オブ ザ コモンウェルス システム オブ ハイヤー エデュケーション | Development and parameter assessment for vertically aligned platinum wire aptasensor arrays for impedimetric detection of cardiac biomarkers |
JP7417664B2 (en) | 2015-10-05 | 2024-01-18 | ユニバーシティ オブ ピッツバーグ-オブ ザ コモンウェルス システム オブ ハイヤー エデュケーション | Fabrication and parameter evaluation of a vertically oriented platinum wire aptasensor array for impedance-based detection of cardiac biomarkers |
JP2018128366A (en) * | 2017-02-09 | 2018-08-16 | 積水メディカル株式会社 | Immunochromatography |
CN110596380A (en) * | 2019-09-20 | 2019-12-20 | 成都艾科斯伦医疗科技有限公司 | Method for eliminating HOOK effect and immunochromatography detection card thereof |
KR20210122978A (en) * | 2020-04-02 | 2021-10-13 | 아주대학교산학협력단 | Lateral flow assay strip and method for quantitative analysis using thereof |
KR102363041B1 (en) | 2020-04-02 | 2022-02-14 | 아주대학교산학협력단 | Lateral flow assay strip and method for quantitative analysis using thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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EP3004879A1 (en) | 2016-04-13 |
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