JP2016064985A - Composition for treatment or diagnosis of heart failure with preserved ejection fraction and use thereof - Google Patents

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泰史 坂田
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To identify a factor involved in the pathology of heart failure with preserved ejection fraction, and provide a new therapeutic target of heart failure with preserved ejection fraction.SOLUTION: The IL-16 function inhibitory factor is used to treat heart failure with preserved ejection fraction.SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、拡張性心不全を治療または診断するための組成物およびその利用に関する。   The present invention relates to compositions and uses thereof for treating or diagnosing diastolic heart failure.

心不全患者は、日本に２００万人以上存在すると推定される。心不全は、日本を含む先進国の主要な死因であり、また、患者の生活の質を低下させている。心不全は、左心室が拡大してその動きが低下する（左室駆出率が低下する）収縮性心不全と、左心室が拡大せず左室駆出率も保持されている拡張性心不全とに分類される。心不全患者における両者の比率は約３：２であり、いずれも予後不良である。   It is estimated that there are over 2 million heart failure patients in Japan. Heart failure is a leading cause of death in developed countries, including Japan, and it reduces the quality of life for patients. Heart failure consists of systolic heart failure in which the left ventricle expands and its movement decreases (lower left ventricular ejection fraction decreases), and dilated heart failure in which the left ventricle does not expand and the left ventricular ejection fraction is maintained being classified. The ratio of both in heart failure patients is about 3: 2, and both have a poor prognosis.

収縮性心不全では、予後改善効果のある治療法が複数知られている。日米欧の循環器学会がそれぞれ作成している治療ガイドラインに、いくつかの標準的な治療法が記載され、生命予後は過去二十年間において改善傾向にある。近年、収縮性心不全の発症や進展における免疫系の関与が注目されている。収縮性心不全では、いくつかの炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６等）の関与が報告されており、実際にこれらのサイトカインの血中濃度が高値であるほど予後不良であることが明らかになっている。   For systolic heart failure, multiple treatments that have a prognostic improvement effect are known. Several standard treatments are described in the treatment guidelines prepared by the Japanese, American and European Cardiovascular Society, and the prognosis has been improving over the past two decades. In recent years, attention has been focused on the involvement of the immune system in the onset and progression of systolic heart failure. In systolic heart failure, the involvement of several inflammatory cytokines (for example, TNF-α, IL-1β, IL-6, etc.) has been reported, and the prognosis increases as the blood concentration of these cytokines actually increases. It turns out to be bad.

しかし、拡張性心不全では、有効な治療法が全く確立しておらず、生命予後は過去二十年間において改善していない。特に、収縮性心不全の増悪への関与が報告されている上記炎症性サイトカインは、拡張性心不全に対する効果を示さない。もちろん、収縮性心不全に効果がない炎症性サイトカインの中で拡張性心不全に有効であることが示された例は存在しない。   However, for dilated heart failure, no effective treatment has been established and life prognosis has not improved over the past two decades. In particular, the inflammatory cytokine, which has been reported to be involved in exacerbation of systolic heart failure, does not show an effect on dilated heart failure. Of course, there are no examples of inflammatory cytokines that have no effect on systolic heart failure and have been shown to be effective for dilated heart failure.

ＷＯ２０１２／０１１５７２ Ａ１（２０１２年１月２６日国際公開）WO2012 / 011572 A1 (January 26, 2012 international publication) ＷＯ２００８／０５２１６５ Ａ１（２００８年５月２日国際公開）WO2008 / 052165 A1 (International publication on May 2, 2008) ＵＳ２００８／０３１１１２８ Ａ１（２００８年１２月１８日公開）US2008 / 0311128 A1 (released December 18, 2008)

Keates AC et al., Gastroenterology 2000; 119: pp.972-982Keates AC et al., Gastroenterology 2000; 119: pp.972-982 Skundric DS et al., J Neuroinflammation 2006; 3: pp.13Skundric DS et al., J Neuroinflammation 2006; 3: pp.13 Hessel EM et al., J Immunol. 1998; 160: pp.2998-3005Hessel EM et al., J Immunol. 1998; 160: pp.2998-3005 Meagher C et al., Diabetes 2010; 59: pp.2862-2871Meagher C et al., Diabetes 2010; 59: pp.2862-2871 Kimura N. et al., J Heart Lung Transplant 2011; 30: pp.1409-17Kimura N. et al., J Heart Lung Transplant 2011; 30: pp.1409-17 William G. Glass et al., Cytokine 2009; 46: pp.17-23William G. Glass et al., Cytokine 2009; 46: pp.17-23

拡張性心不全は、高齢者、女性に多いため、心不全全体に占める患者の割合は先進国にて年々増加しており、この病態に対する治療方法の確立は急務である。本発明者らは、カルニチンまたはその誘導体が拡張性心不全の予防および治療に有効であることを見出している（特許文献１）。しかし、拡張性心不全の治療方法を確立するために、特許文献１に記載の技術以外にも新たな知見が求められている。   Since diastolic heart failure is more common in older adults and women, the proportion of patients in total heart failure is increasing year by year in developed countries, and the establishment of a treatment for this condition is urgent. The present inventors have found that carnitine or a derivative thereof is effective for the prevention and treatment of dilated heart failure (Patent Document 1). However, in order to establish a method for treating dilated heart failure, new knowledge is required in addition to the technique described in Patent Document 1.

本発明の目的は、拡張性心不全の病態に関与する因子を同定し、新たな拡張性心不全の治療ターゲットを提供することである。   An object of the present invention is to identify factors involved in the pathology of dilated heart failure and provide a new therapeutic target for dilated heart failure.

本発明者らは、独自の観点に基づいて、インターロイキン−１６（Interleukin-16；ＩＬ−１６）が拡張性心不全の病態に関与すること、そしてＩＬ−１６が拡張性心不全の原因である左室線維化による左室スティフネス増大へ作用すること、ＩＬ−１６中和抗体の投与によってマウスモデルにおける左室線維化が抑制されることを見出し、本発明を完成するに至った。   Based on a unique point of view, the present inventors have found that interleukin-16 (IL-16) is involved in the pathogenesis of dilated heart failure, and that IL-16 is the cause of dilated heart failure. It has been found that it acts on the increase in left ventricular stiffness due to ventricular fibrosis and that the administration of IL-16 neutralizing antibody suppresses left ventricular fibrosis in a mouse model.

すなわち、本発明は、拡張性心不全を治療するための医薬組成物を提供し、本組成物はＩＬ−１６機能阻害因子を含むことを特徴としている。   That is, the present invention provides a pharmaceutical composition for treating diastolic heart failure, wherein the composition contains an IL-16 function inhibitor.

ＩＬ−１６は、ヒト末梢血単核細胞によって生成されるＴ細胞誘引物質として最初に報告され、いくつかの炎症性疾患、アレルギー性疾患または感染性疾患の主要なメディエータであることが示されている（非特許文献１〜３）。また、ＩＬ−１６を中和することによって糖尿病モデルマウスをＩ型糖尿病から保護すること（非特許文献４）、心移植モデルマウスにおいてＩＬ−１６を欠損させることによって移植片拒絶が抑制されること（非特許文献５）が報告されている。これらの報告は、拡張性心不全の治療におけるＩＬ−１６の有効性を何ら示唆しない。   IL-16 was first reported as a T cell attractant produced by human peripheral blood mononuclear cells and has been shown to be a major mediator of several inflammatory, allergic or infectious diseases (Non-patent documents 1 to 3). In addition, neutralization of IL-16 protects diabetes model mice from type I diabetes (Non-patent Document 4), and transplantation rejection is suppressed by deletion of IL-16 in heart transplantation model mice. (Non-Patent Document 5) has been reported. These reports do not suggest any efficacy of IL-16 in the treatment of diastolic heart failure.

さらに、特許文献２および３には、抗ＩＬ−１６抗体を用いて病的な肺やブレオマイシン関連肺線維症を処置することが開示されている。しかし、特許文献２および３の発明者らは、さらに研究を進めることによって、ＩＬ−１６ノックアウトマウスにおいて、ＩＬ−１６によるブレオマイシン誘発性肺線維症の抑制効果がないことを確認し、その結果、ＩＬ−１６は、原発性肺線維症のバイオマーカーの候補であるが、ブレオマイシン誘発性の肺線維症の発症に無関係であると結論付けている（非特許文献６）。これらの報告もまた、拡張性心不全の治療におけるＩＬ−１６の有効性を何ら示唆しない。   Furthermore, Patent Documents 2 and 3 disclose treatment of pathological lungs and bleomycin-related pulmonary fibrosis using anti-IL-16 antibodies. However, the inventors of Patent Documents 2 and 3 further confirmed that the IL-16 knockout mouse has no inhibitory effect on bleomycin-induced pulmonary fibrosis in IL-16 knockout mice. IL-16 is a candidate biomarker for primary pulmonary fibrosis, but concludes that it is unrelated to the development of bleomycin-induced pulmonary fibrosis (Non-Patent Document 6). These reports also do not suggest any efficacy of IL-16 in the treatment of diastolic heart failure.

本発明において、上記ＩＬ−１６機能阻害因子は、ＩＬ−１６活性抑制因子、ＩＬ−１６発現阻害因子およびＩＬ−１６レセプターアンタゴニストからなる群より選択されることが好ましい。   In the present invention, the IL-16 function inhibitor is preferably selected from the group consisting of an IL-16 activity inhibitor, an IL-16 expression inhibitor and an IL-16 receptor antagonist.

本発明はまた、拡張性心不全を治療するためのキットを提供し、本キットはＩＬ−１６機能阻害因子を含むことを特徴としている。   The present invention also provides a kit for treating diastolic heart failure, the kit comprising an IL-16 function inhibitor.

本発明はさらに、拡張性心不全の発症または発症可能性を診断する方法を提供する。本方法は、被験体から取得したサンプル中のＩＬ−１６タンパク質またはＩＬ−１６ ｍＲＮＡの量を測定する工程を包含することを特徴としており、測定値を基準値と比較する工程をさらに包含することが好ましい。   The present invention further provides a method for diagnosing the onset or likelihood of developing dilated heart failure. The method comprises measuring the amount of IL-16 protein or IL-16 mRNA in a sample obtained from a subject, and further comprising comparing the measured value with a reference value. Is preferred.

本発明は、上記方法に用いるためのマーカー組成物を提供し、本組成物は、ＩＬ−１６結合因子を含んでいることを特徴としている。本発明において、ＩＬ−１６結合因子は、ＩＬ−１６タンパク質に特異的に結合する抗体もしくはポリヌクレオチド、およびＩＬ−１６遺伝子に特異的に結合するポリヌクレオチドからなる群より選択されることが好ましく、標識化されていることがより好ましい。   The present invention provides a marker composition for use in the above method, wherein the composition contains an IL-16 binding factor. In the present invention, the IL-16 binding factor is preferably selected from the group consisting of an antibody or polynucleotide that specifically binds to IL-16 protein, and a polynucleotide that specifically binds to IL-16 gene, More preferably, it is labeled.

本発明はまた、上記方法に用いるためのマーカーキットを提供し、本キットは、ＩＬ−１６結合因子を備えていることを特徴としている。   The present invention also provides a marker kit for use in the above method, which is characterized by comprising an IL-16 binding factor.

本発明を用いれば、拡張性心不全を治療することができ、これにより、拡張性心不全を誘発する原疾患の症状を緩和させる可能性がある。   With the present invention, dilated heart failure can be treated, thereby potentially alleviating the symptoms of the underlying disease that induces dilated heart failure.

Ａは、コントロールおよび拡張性心不全患者における血清ＩＬ−１６レベルを示す。Ｂは、血清ＩＬ−１６レベルと、拡張早期左室流入血流速度／僧帽弁輪部移動速度比（Ｅ／ｅ’）との相関を示す。Ｃは、血清ＩＬ−１６レベルと、左心房容積インデックス（ＬＡＶＩ）との相関を示す。Ｄは、血清ＩＬ−１６レベルと、拡張期左室壁ストレイン（ＤＷＳ）との相関を示す。A shows serum IL-16 levels in control and dilated heart failure patients. B shows the correlation between serum IL-16 level and the ratio of diastolic early left ventricular inflow blood flow velocity / mitral valve annulus velocity (E / e '). C shows the correlation between serum IL-16 levels and left atrial volume index (LAVI). D shows the correlation between serum IL-16 levels and diastolic left ventricular wall strain (DWS). Ａは、コントロールラットおよび拡張性心不全のモデルラットにおける血清ＩＬ−１６レベルを示す。Ｂは、血清ＩＬ−１６レベルと、左心室拡張末期圧との相関を示す。Ｃは、血清ＩＬ−１６レベルと、肺重量と体重との比（肺重量／体重）との相関を示す。Ｄは、血清ＩＬ−１６レベルと、心筋スティフネス定数との相関を示す。Ｅは、コントロールおよび拡張性心不全ラットの左心室におけるＩＬ−１６のｍＲＮＡレベルを示す。Ｆは、培養心筋細胞のＩＬ−１６ ｍＲＮＡレベルに対するリポ多糖（ＬＰＳ）の効果を示す（ｎ＝５／各群）。A shows serum IL-16 levels in control rats and model rats with dilated heart failure. B shows the correlation between serum IL-16 levels and left ventricular end diastolic pressure. C shows the correlation between serum IL-16 levels and the ratio of lung weight to body weight (lung weight / body weight). D shows the correlation between serum IL-16 level and myocardial stiffness constant. E shows IL-16 mRNA levels in the left ventricle of control and dilated heart failure rats. F shows the effect of lipopolysaccharide (LPS) on IL-16 mRNA levels in cultured cardiomyocytes (n = 5 / each group). Ａは、非トランスジェニックマウス（Ｎｏｎ−ＴＧ）およびトランスジェニックマウス（ＴＧ）における、心臓でのＩＬ−１６タンパク質の発現を示す。Ｂは、ヘマトキシリンおよびエオジンで染色した、Ｎｏｎ−ＴＧマウスおよびＴＧマウスからの心臓の４房室を示す（バーは１ｍｍ）。Ｃは、Ｎｏｎ−ＴＧマウスおよびＴＧマウスの、シリウスレッド染色の心切片の顕微鏡写真の代表例、および線維化領域（ＡＯＦ）の割合を示す（バーは１００μｍ）。Ｄは、Ｎｏｎ−ＴＧマウスおよびＴＧマウスの、ヤング率ＥＨを示す。Ｅは、Ｎｏｎ−ＴＧマウスおよびＴＧマウスの、左心室におけるＣｏｌｌａｇｅｎ ＩのｍＲＮＡレベルを示す。Ｆは、Ｎｏｎ−ＴＧマウスおよびＴＧマウスの、左心室におけるＴＧＦ−β１のｍＲＮＡレベルを示す。Ｇは、Ｎｏｎ−ＴＧマウスおよびＴＧマウスの、左心室におけるＣＴＧＦのｍＲＮＡレベルを示す。Ｈは、ＴＧマウスの左心室におけるＩＬ−１６のｍＲＮＡレベルとＡＯＦとの相関を示す。Ｉは、ＴＧマウスの左心室におけるＩＬ−１６のｍＲＮＡレベルとヤング率ＥＨとの相関を示す。A shows the expression of IL-16 protein in the heart in non-transgenic mice (Non-TG) and transgenic mice (TG). B shows 4 atrioventricular chambers of heart from Non-TG and TG mice stained with hematoxylin and eosin (bar is 1 mm). C shows a representative example of micrographs of Sirius red-stained heart sections of Non-TG mice and TG mice, and the ratio of fibrosis region (AOF) (bar is 100 μm). D shows Young's modulus EH of Non-TG mice and TG mice. E shows Collagen I mRNA levels in the left ventricle of Non-TG and TG mice. F shows TGF-β1 mRNA levels in the left ventricle of Non-TG and TG mice. G shows CTGF mRNA levels in the left ventricle of Non-TG and TG mice. H shows the correlation between IL-16 mRNA level and AOF in the left ventricle of TG mice. I shows the correlation between IL-16 mRNA level and Young's modulus EH in the left ventricle of TG mice. Ａは、Ｎｏｎ−ＴＧマウスおよびＴＧマウスのＣＤ６８について、左心室の免疫組織化学染色の顕微鏡写真の代表例を示す（バーは１００μｍ）。Ｂは、Ｎｏｎ−ＴＧマウスおよびＴＧマウスの左心室におけるＣＤ６８のｍＲＮＡレベルを示す。Ｃは、マウスリコンビナントＩＬ−１６（ｍＩＬ−１６）で処理したマクロファージによるＴＧＦ−β１の産生を示す。マウス腹腔マクロファージ（２×１０６細胞／ウエル）を、示された濃度のｍＩＬ−１６で２４時間処理した。マクロファージ培養物の上清を回収し、ＴＧＦ−β１を測定した。各群についてｎ＝５。＊０ｎｇ／ｍＬ群と比較してＰ＜０．０５。A shows a representative example of micrographs of immunohistochemical staining of the left ventricle for CD68 of Non-TG mice and TG mice (bar is 100 μm). B shows CD68 mRNA levels in the left ventricle of Non-TG and TG mice. C shows the production of TGF-β1 by macrophages treated with mouse recombinant IL-16 (mIL-16). Mouse peritoneal macrophages (2 × 10 6 cells / well) were treated with the indicated concentrations of mIL-16 for 24 hours. The supernatant of the macrophage culture was collected and TGF-β1 was measured. N = 5 for each group. * P <0.05 compared to 0 ng / mL group. Ａは、コントロールマウスと、Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ（Ａｎｇ ＩＩ）を１４日間投与したマウスの左心室におけるＩＬ−１６のｍＲＮＡレベルを示す。Ｂは、シリウスレッド染色した心切片の顕微鏡写真の代表例、ならびに、コントロールマウス、および、Ａｎｇ ＩＩを２８日間投与し、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）または抗ＩＬ−１６中和抗体（Ｎ−Ａｂ）を腹腔内投与したマウスの、線維化領域（ＡＯＦ）の割合を示す（バーは１００μｍ）。＊コントロール群と比較してＰ＜０．０５。†ＰＢＳ処理したＡｎｇ ＩＩ投与マウスと比較してＰ＜０．０５。A shows the mRNA level of IL-16 in the left ventricle of a control mouse and a mouse administered with Angiotensin II (Ang II) for 14 days. B is a representative example of a micrograph of a heart slice stained with Sirius red, and control mice and Ang II were administered for 28 days, and phosphate buffered saline (PBS) or anti-IL-16 neutralizing antibody ( The ratio of the fibrosis region (AOF) of the mouse to which N-Ab) was intraperitoneally administered is shown (bar is 100 μm). * P <0.05 compared to control group. † P <0.05 compared to PBS treated Ang II treated mice.

以下、本発明の実施の形態について、詳細に説明する。ただし、本発明はこれに限定されるものではなく、記述した範囲内で種々の変形を加えた態様で実施できるものである。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。なお、本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「Ａ〜Ｂ」は、「Ａ以上、Ｂ以下」を意味する。   Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to this, and can be implemented in a mode in which various modifications are made within the described range. Moreover, all the academic literatures and patent literatures described in this specification are incorporated herein by reference. Unless otherwise specified in this specification, “A to B” indicating a numerical range means “A or more and B or less”.

〔１：ＩＬ−１６機能阻害因子〕
本明細書中で使用される場合、「ＩＬ−１６機能阻害因子」は、心臓にて発現されているＩＬ−１６タンパク質の機能を阻害する物質であることが好ましいが、内因性のＩＬ−１６タンパク質の機能を阻害する物質であれば特に限定されない。また、「ＩＬ−１６機能阻害因子」は、精製された化合物の形態であっても、その薬学的に受容可能な塩の形態であってもよい。 [1: IL-16 function inhibitor]
As used herein, an “IL-16 function inhibitor” is preferably a substance that inhibits the function of IL-16 protein expressed in the heart, but endogenous IL-16. The substance is not particularly limited as long as it is a substance that inhibits the function of the protein. The “IL-16 function inhibitor” may be in the form of a purified compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

「ＩＬ−１６機能」は、非特許文献１〜４に開示されているようなＴ細胞誘引物質としての機能、炎症性疾患、アレルギー性疾患または感染性疾患におけるメディエータとしての機能が含まれてもよいが、本明細書中で使用される場合、拡張性心不全を誘発する機能が意図される。すなわち、本明細書中で使用される場合、「ＩＬ−１６機能阻害」は、ＩＬ−１６を標的として拡張性心不全を抑制することが意図される。用語「阻害」は、目的の活性が、コントロールと比較して、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、さらに好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、なおさらに好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％低減されている状態が意図される。   “IL-16 function” includes functions as a T cell attractant as disclosed in Non-Patent Documents 1 to 4, functions as mediators in inflammatory diseases, allergic diseases or infectious diseases. Although, as used herein, a function that induces diastolic heart failure is contemplated. That is, as used herein, “IL-16 function inhibition” is intended to suppress dilated heart failure by targeting IL-16. The term “inhibition” means that the activity of interest is at least 50%, preferably at least 60%, more preferably at least 70%, more preferably at least 80%, even more preferably at least 90%, even more so compared to a control. Preferably at least 95%, most preferably 100% reduced.

本発明に利用されるＩＬ−１６機能阻害因子は、ＩＬ−１６活性抑制因子、ＩＬ−１６発現阻害因子およびＩＬ−１６レセプターアンタゴニストからなる群より選択され得る。   The IL-16 function inhibitor used in the present invention can be selected from the group consisting of an IL-16 activity inhibitor, an IL-16 expression inhibitor and an IL-16 receptor antagonist.

本発明に好適に利用されるＩＬ−１６活性抑制因子としては、ＩＬ−１６タンパク質に結合してその機能を阻害するものであれば特に限定されず、例えば、ＩＬ−１６に対する中和抗体、アプタマー、デコイ核酸等が挙げられ、従来公知のものであってもよい。   The IL-16 activity inhibitor suitably used in the present invention is not particularly limited as long as it binds to IL-16 protein and inhibits its function. For example, neutralizing antibody against IL-16, aptamer And a decoy nucleic acid etc., and a conventionally well-known thing may be used.

本発明に好適に利用されるＩＬ−１６発現阻害因子としては、ＩＬ−１６遺伝子に特異的に結合してＩＬ−１６タンパク質の発現を抑制するものであれば特に限定されず、ＩＬ−１６遺伝子の発現を抑制するものが好ましく、例えば、ＩＬ−１６遺伝子アンチセンス核酸、リボザイム、ｓｉＲＮＡ等が挙げられ、従来公知のものであってもよい。   The IL-16 expression inhibitor suitably used in the present invention is not particularly limited as long as it specifically binds to the IL-16 gene and suppresses the expression of IL-16 protein. The IL-16 gene Those that suppress the expression of are preferred, such as IL-16 gene antisense nucleic acid, ribozyme, siRNA, etc., and may be conventionally known ones.

ＩＬ−１６レセプターアンタゴニストもまた、本発明に好適に利用される。また、ＣＤ４がＩＬ−１６のレセプターとして機能していることがすでに知られているので、ＣＤ４の機能を阻害するものや、ＣＤ４遺伝子の発現を抑制するものもまた、本発明に利用されるＩＬ−１６レセプターアンタゴニストであり得る。   An IL-16 receptor antagonist is also preferably used in the present invention. Since it is already known that CD4 functions as a receptor for IL-16, those that inhibit the function of CD4 and those that suppress the expression of the CD4 gene are also used in the present invention. It can be a -16 receptor antagonist.

本明細書中で使用される場合、用語「抗体」は、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭおよびこれらのＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｃフラグメント）を意味し、例としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体、抗イディオタイプ抗体およびヒト化抗体が挙げられるがこれらに限定されない。「抗体」は、種々の公知の方法に従えば作製することができる。そして、作製された抗体から所望の中和活性を有しているものが中和抗体として選択されればよい。 As used herein, the term “antibody” refers to immunoglobulins (IgA, IgD, IgE, IgG, IgM and their Fab fragments, F (ab ′) 2 fragments, Fc fragments), eg Examples include, but are not limited to, polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, single chain antibodies, anti-idiotype antibodies, and humanized antibodies. “Antibodies” can be prepared according to various known methods. And what has desired neutralization activity from the produced antibody should just be selected as a neutralizing antibody.

本発明に利用可能なＩＬ−１６に対する中和抗体は、少なくとも、ＩＬ−１６を認識しかつその活性を阻害する抗体フラグメント（例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント）を含んでいればよく、個々の免疫グロブリンの種類（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭ）、キメラ抗体作製方法、ペプチド抗原作製方法等に存するのでない。すなわち、ＩＬ−１６を認識しかつその活性を阻害する抗体フラグメントと、異なる抗体分子のＦｃフラグメントとからなる免疫グロブリンもまた、本発明に利用可能である。 The neutralizing antibody against IL-16 that can be used in the present invention only needs to contain at least antibody fragments that recognize IL-16 and inhibit its activity (for example, Fab and F (ab ′) 2 fragments). It does not exist in the type of individual immunoglobulin (IgA, IgD, IgE, IgG or IgM), a method for producing a chimeric antibody, a method for producing a peptide antigen, and the like. That is, an immunoglobulin comprising an antibody fragment that recognizes IL-16 and inhibits its activity and an Fc fragment of a different antibody molecule can also be used in the present invention.

本明細書中で使用される場合、用語「ポリヌクレオチド」は「核酸」または「核酸分子」と交換可能に使用され、ヌクレオチドの重合体が意図される。本明細書中で使用される場合、用語「塩基配列」は、「核酸配列」、「遺伝子配列」または「ヌクレオチド配列」と交換可能に使用され、結合標的の遺伝子配列の相補配列であってもよい。また、用語「遺伝子」および「（ポリ）ヌクレオチド」はＤＮＡであってもＲＮＡであってもよく、一本鎖であっても二本鎖であってもよい。   As used herein, the term “polynucleotide” is used interchangeably with “nucleic acid” or “nucleic acid molecule” and is intended to be a polymer of nucleotides. As used herein, the term “base sequence” is used interchangeably with “nucleic acid sequence”, “gene sequence” or “nucleotide sequence” and may be a complementary sequence of a binding target gene sequence. Good. The terms “gene” and “(poly) nucleotide” may be DNA or RNA, and may be single-stranded or double-stranded.

本発明に利用可能なポリヌクレオチドは、より長いポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ−１６タンパク質をコードするｃＤＮＡ全長からなるポリヌクレオチド）の切断フラグメントとして生成されても、化学合成されても、あるいはＰＣＲ増幅によって取得されてもよい。ＩＬ−１６遺伝子の塩基配列は、ＩＬ−１６タンパク質のアミノ酸配列とともにすでに知られているので、当業者は，本発明に利用可能なポリヌクレオチドを容易に作製することができる。   Polynucleotides that can be used in the present invention can be generated as cleaved fragments of longer polynucleotides (eg, polynucleotides consisting of the full-length cDNA encoding IL-16 protein), chemically synthesized, or by PCR amplification. May be acquired. Since the base sequence of IL-16 gene is already known together with the amino acid sequence of IL-16 protein, those skilled in the art can easily prepare a polynucleotide that can be used in the present invention.

アプタマーは、ｓｓＤＮＡまたはｓｓＲＮＡからなり、対応するタンパク質に対して非常に高い親和性および特異性を有する。これまでに、医学関連の標的タンパク質に対するいくつかのアプタマーが同定されている。本発明に利用されるポリヌクレオチドがアプタマーである場合、ポリヌクレオチドは、１０〜１００塩基長からなるポリヌクレオチドであることが好ましく、より好ましくは１５〜７０塩基長、さらに好ましくは２０〜５０塩基長からなるポリヌクレオチドである。   Aptamers consist of ssDNA or ssRNA and have very high affinity and specificity for the corresponding protein. To date, several aptamers for medically relevant target proteins have been identified. When the polynucleotide used in the present invention is an aptamer, the polynucleotide is preferably a polynucleotide having a length of 10 to 100 bases, more preferably 15 to 70 bases, and further preferably 20 to 50 bases. A polynucleotide comprising:

二重鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）によって開始されるＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡによって相同なＲＮＡの分解が引き起こされる、配列特異的な転写後遺伝子サイレンシングプロセスである。ｓｉＲＮＡは、遺伝子特異的な発現抑制を行うためには十分な長さを有していることが必要とされるが、哺乳動物細胞中での悪影響を回避するために十分に短いことが必要とされる。よって、本発明に利用されるポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡである場合、ポリヌクレオチドは、１５〜５０塩基長からなるヌクレオチドの塩基対であることが好ましく、より好ましくは１５〜４０塩基長、さらに好ましくは１８〜３０塩基長からなるヌクレオチドの塩基対である。   RNAi initiated by double-stranded RNA (dsRNA) is a sequence-specific post-transcriptional gene silencing process in which siRNA causes degradation of homologous RNA. siRNAs are required to have a sufficient length to suppress gene-specific expression, but they must be sufficiently short to avoid adverse effects in mammalian cells. Is done. Therefore, when the polynucleotide used in the present invention is siRNA, the polynucleotide is preferably a nucleotide base pair consisting of 15 to 50 bases in length, more preferably 15 to 40 bases in length, and still more preferably 18 A nucleotide base pair consisting of ˜30 bases in length.

〔２：ＩＬ−１６機能阻害因子を含む医薬組成物〕
本発明は、拡張性心不全を治療するための医薬組成物を提供し、本組成物はＩＬ−１６機能阻害因子を含むことを特徴としている。本明細書中にて使用される場合、「組成物」は各種成分が一物質中に含有されている形態であることが意図される。 [2: Pharmaceutical composition containing IL-16 function inhibitor]
The present invention provides a pharmaceutical composition for treating diastolic heart failure, the composition comprising an IL-16 function inhibitor. As used herein, “composition” is intended to be in the form of various components contained within a single substance.

本実施形態に係る医薬組成物は、製薬分野における公知の方法により製造することができる。本実施形態に係る医薬組成物におけるＩＬ−１６機能阻害因子の含有量は、投与形態、投与方法などを考慮し、当該医薬組成物を用いて後述の投与量範囲でＩＬ−１６機能阻害因子を投与できるような量であれば特に限定されない。   The pharmaceutical composition according to the present embodiment can be produced by a known method in the pharmaceutical field. The content of the IL-16 function inhibitor in the pharmaceutical composition according to the present embodiment is determined in consideration of the administration form, the administration method, etc., and the IL-16 function inhibitor is used in the dosage range described below using the pharmaceutical composition. The amount is not particularly limited as long as it can be administered.

本実施形態に係る医薬組成物は、製剤形態に応じた適当な投与経路で投与することができる。投与方法も特に限定はなく、内用、外用および注射によることができる。注射剤は、例えば静脈内、筋肉内、皮下、皮内、胸腔内、腹腔内等に投与することができる。   The pharmaceutical composition according to this embodiment can be administered by an appropriate administration route according to the preparation form. There is no particular limitation on the administration method, and it can be used for internal use, external use and injection. The injection can be administered, for example, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally, intrathoracic, intraperitoneally, or the like.

本実施形態に係る医薬組成物の投与量は、その製剤形態、投与方法、使用目的および当該医薬の投与対象である患者の年齢、体重、症状によって適宜設定されればよく一定であることを要しない。投与は、所望の投与量範囲内において、一日内において単回で、または数回に分けて行ってもよい。また、本実施形態に係る医薬組成物はそのまま経口投与するほか、任意の飲食品に添加して日常的に摂取させることもできる。   The dosage of the pharmaceutical composition according to this embodiment may be set as appropriate depending on the formulation form, administration method, purpose of use, and age, weight, and symptoms of the patient to whom the pharmaceutical is administered, and should be constant. do not do. Administration may be performed within a desired dosage range, in a single day or in several divided portions within a day. Moreover, the pharmaceutical composition according to the present embodiment can be orally administered as it is, or can be added to any food or drink and taken daily.

本発明に係る医薬組成物中に使用される医薬用担体は、医薬組成物の投与形態および剤型に応じて選択することができる。経口剤の場合、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、無機塩等が医薬用担体として利用される。非経口剤の場合、当該分野において公知の方法に従って、本発明の有効成分（すなわちＩＬ−１６機能阻害因子）を希釈剤としての注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液等に溶解し、所望によって殺菌剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤等を加えることにより調製することができ、また、患部に塗布可能な形態にて調製されてもよい。   The pharmaceutical carrier used in the pharmaceutical composition according to the present invention can be selected according to the dosage form and dosage form of the pharmaceutical composition. In the case of oral preparations, for example, starch, lactose, sucrose, mannitol, inorganic salts and the like are used as a pharmaceutical carrier. In the case of a parenteral agent, the active ingredient of the present invention (ie, IL-16 function inhibitor) is dissolved in distilled water for injection, physiological saline, aqueous glucose solution, etc. as a diluent according to a method known in the art. Can be prepared by adding a bactericidal agent, stabilizer, isotonic agent, soothing agent, etc., or may be prepared in a form that can be applied to the affected area.

本発明に係る医薬組成物を使用すれば、拡張性心不全を治療することができる。これにより、拡張性心不全を誘発する原疾患の症状を緩和させる可能性がある。拡張性心不全を誘発する原疾患としては、高血圧性心疾患、虚血性心疾患、弁膜疾患、心筋症、心筋蓄積疾患等が挙げられる。   If the pharmaceutical composition according to the present invention is used, dilated heart failure can be treated. This may alleviate the symptoms of the underlying disease that induces dilated heart failure. Examples of primary diseases that induce dilated heart failure include hypertensive heart disease, ischemic heart disease, valvular disease, cardiomyopathy, myocardial accumulation disease, and the like.

〔３．さらなる利用〕
本発明はまた、ＩＬ−１６機能阻害因子、またはＩＬ−１６機能阻害因子を含む医薬組成物を備えたキットを提供する。 [3. Further use)
The present invention also provides a kit comprising an IL-16 function inhibitor or a pharmaceutical composition comprising an IL-16 function inhibitor.

本明細書中にて使用される場合、「キット」は、組成物中に含有されるべき各種成分が容器（例えば、ボトル、プレート、チューブ、ディッシュなど）に含まれておりかつ容器の全てが全体として１つに梱包されている形態が意図される。本明細書中にてキットの局面において使用される場合、「備えた（備えている）」は、組成物中に含有されるべき成分が、キットを構成する個々の容器のいずれかの中に内包されている状態が意図される。また、キットは、複数の異なる組成物を１つに梱包した包装であってもよく、異なる２つ以上の成分を同一の容器に混合して備えてもよい。また、キットは、本発明を実行するために用いられるべき器具を備えていてもよい。キットは、上記成分を使用する手順（拡張性心不全を治療するための手順）を記載した指示書を備えていることが好ましい。「指示書」は、紙またはその他の媒体に書かれていても印刷されていてもよく、あるいは磁気テープ、コンピューター読み取り可能ディスクまたはテープ、ＣＤ−ＲＯＭなどのような電子媒体に付されてもよい。キットは、上述した組成物を構成するために用いられてもよく、組成物とさらなる成分とを別々に備えていてもよい。   As used herein, a “kit” includes a variety of components to be contained in a composition (eg, bottles, plates, tubes, dishes, etc.) and all of the containers are A form that is packaged as a whole is contemplated. As used herein in the context of a kit, “comprising” means that the component to be contained in the composition is in any of the individual containers that make up the kit. An encapsulated state is intended. Further, the kit may be a package in which a plurality of different compositions are packed together, or two or more different components may be mixed in the same container. The kit may also include an instrument to be used to carry out the present invention. The kit preferably comprises instructions describing the procedure using the above components (procedure for treating dilated heart failure). The “instructions” may be written or printed on paper or other media, or may be affixed to electronic media such as magnetic tape, computer readable disk or tape, CD-ROM, etc. . The kit may be used to constitute the composition described above, and may comprise the composition and additional components separately.

なお、本キットは、ＩＬ−１６機能阻害因子を含む医薬組成物を調製するためのキットとして用いられてもよい。その場合、キットは、上記成分を使用する手順として拡張性心不全を治療するための組成物を調製するための手順を記載した指示書を備えていることが好ましい。   In addition, this kit may be used as a kit for preparing a pharmaceutical composition containing an IL-16 function inhibitor. In that case, the kit preferably comprises instructions describing the procedure for preparing a composition for treating dilated heart failure as a procedure using the above components.

後述する実施例に示すように、ＩＬ−１６は拡張性心不全患者の血清中で高値である。このことは、ＩＬ−１６濃度を測定すれば、拡張性心不全の発症または発症可能性の予測が可能であることを示している。（また、ＩＬ−１６濃度の上昇は、ｍＲＮＡ発現量を伴っていた。このことは、ｍＲＮＡ発現量に基づいて、拡張性心不全の発症または発症可能性の予測が可能であることを示している。）
すなわち、本発明は、拡張性心不全の発症または発症可能性を診断する方法を提供する。本発明に係る方法は、拡張性心不全の発症または発症可能性の診断を補助する方法でもあり得、具体的には、拡張性心不全の発症または発症可能性を診断するためのデータを取得する方法でもあり得る。本発明に係る方法は、被験体から取得したサンプル（被験体サンプル）中のＩＬ−１６タンパク質および／またはＩＬ−１６ ｍＲＮＡの量を測定する工程を包含すればよく、測定値を基準値と比較する工程をさらに包含することが好ましい。基準値は、予め取得された値が用いられても、本発明の方法の一部として、上記工程と同様の手順によって取得されてもよい。基準値は、正常患者から取得したサンプル中のＩＬ−１６タンパク質またはＩＬ−１６ ｍＲＮＡの量であることが好ましく、収縮性心不全患者から取得したサンプル中のＩＬ−１６タンパク質および／またはＩＬ−１６ ｍＲＮＡの量であることがより好ましい。 As shown in the examples described below, IL-16 is elevated in the serum of patients with dilated heart failure. This indicates that the onset or likelihood of onset of dilated heart failure can be predicted by measuring IL-16 concentration. (In addition, the increase in IL-16 concentration was accompanied by the amount of mRNA expression. This indicates that it is possible to predict the onset or likelihood of onset of diastolic heart failure based on the amount of mRNA expression. .)
That is, the present invention provides a method for diagnosing the onset or likelihood of developing dilated heart failure. The method according to the present invention may be a method for assisting in the diagnosis of the onset or possibility of onset of dilated heart failure, specifically, a method of acquiring data for diagnosing the onset or possibility of onset of dilated heart failure But it can be. The method according to the present invention may include a step of measuring the amount of IL-16 protein and / or IL-16 mRNA in a sample (subject sample) obtained from a subject, and the measured value is compared with a reference value. Preferably, the method further includes the step of: As the reference value, a value acquired in advance may be used, or may be acquired by a procedure similar to the above step as part of the method of the present invention. The reference value is preferably the amount of IL-16 protein or IL-16 mRNA in a sample obtained from a normal patient, and the IL-16 protein and / or IL-16 mRNA in a sample obtained from a patient with systolic heart failure More preferably, the amount of

用語「サンプル」は当該分野において標本、調製物と同義で用いられ、本明細書中で使用される場合、「生物学的サンプル」またはその等価物が意図される。「生物学的サンプル」は、供給源としての生物材料（例えば、個体、体液、細胞株、組織培養物もしくは組織切片）から得られる、任意の調製物が意図される。   The term “sample” is used interchangeably with specimens, preparations in the art, and as used herein, a “biological sample” or equivalent thereof is intended. A “biological sample” is intended to be any preparation obtained from biological material as a source (eg, an individual, body fluid, cell line, tissue culture or tissue section).

好ましい生物学的サンプルは、被験体サンプルである。被験体サンプルしては、例えば、体液（例えば末梢血）、種々の組織の生検などが挙げられ、哺乳動物から組織生検および体液を得るための方法は当該分野で周知である。また、得られたサンプル中の細胞を培養して増殖させたものが用いられてもよい。なお、本明細書中で使用される場合、「被験体サンプル」は「生体から分離された試料」と交換可能に使用され、医師によって、または医師の監督下での専門の知識を有する者によって、生体から分離された試料（サンプル）が意図される。   A preferred biological sample is a subject sample. Examples of subject samples include body fluids (eg, peripheral blood), biopsies of various tissues, and methods for obtaining tissue biopsies and body fluids from mammals are well known in the art. Moreover, what cultured and proliferated the cell in the obtained sample may be used. In addition, as used herein, “subject sample” is used interchangeably with “sample separated from a living body” and is used by a doctor or a person who has specialized knowledge under the supervision of a doctor. A sample (sample) separated from a living body is intended.

また、本明細書中で使用される場合、用語「サンプル」としては、上記生物学的サンプル以外に、上記生物学的サンプルから抽出したタンパク質サンプル、ゲノムＤＮＡサンプルおよび／または総ＲＮＡサンプルも挙げられる。   In addition, as used herein, the term “sample” includes protein samples, genomic DNA samples and / or total RNA samples extracted from the biological samples in addition to the biological samples. .

ＩＬ−１６タンパク質またはＩＬ−１６ ｍＲＮＡの量の測定には、ＩＬ−１６結合因子が用いられればよい。本明細書中で使用される場合、「ＩＬ−１６結合因子」は、ＩＬ−１６タンパク質またはＩＬ−１６遺伝子に特異的に結合する物質であれば特に限定されず、ＩＬ−１６機能を阻害する活性を有していなくてもよい。種々のサイトカインの測定と同様に、本発明に好適に利用されるＩＬ−１６結合因子としては、ＩＬ−１６タンパク質に特異的に結合する抗体またはポリヌクレオチドや、ＩＬ−１６遺伝子に特異的に結合するポリヌクレオチドが好ましく、これらはいずれも標識化されていることが好ましい。また、測定手順は、種々のサイトカインと同様に従来公知の手法が用いられればよい。   For the measurement of the amount of IL-16 protein or IL-16 mRNA, an IL-16 binding factor may be used. As used herein, “IL-16 binding factor” is not particularly limited as long as it is a substance that specifically binds to IL-16 protein or IL-16 gene, and inhibits IL-16 function. It may not have activity. Similar to the measurement of various cytokines, IL-16 binding factors suitably used in the present invention include antibodies or polynucleotides that specifically bind to IL-16 protein, and specific binding to IL-16 gene. The polynucleotides are preferably labeled, and all of these are preferably labeled. Moreover, the measurement procedure should just use a conventionally well-known method similarly to various cytokine.

本発明に係る方法を実行するための組成物およびキットもまた、本発明の範囲内に含まれる。この場合、拡張性心不全の発症または発症可能性を診断するための組成物は、ＩＬ−１６結合因子を含んでいることを特徴としており、拡張性心不全の発症または発症可能性を診断するためのキットは、ＩＬ−１６結合因子を備えていることを特徴とし、好ましくは拡張性心不全の発症または発症可能性を診断するための手順を記載した指示書を備えている。なお、上記ＩＬ−１６結合因子は、標的であるＩＬ−１６タンパク質またはＩＬ−１６遺伝子に特異的に結合すればよく、ＩＬ−１６タンパク質に特異的に結合する抗体またはポリヌクレオチドや、ＩＬ−１６遺伝子に特異的に結合するポリヌクレオチドが好ましく、ＩＬ−１６機能を阻害する活性を有していなくてもよい。   Compositions and kits for carrying out the methods according to the present invention are also included within the scope of the present invention. In this case, the composition for diagnosing the onset or onset of diastolic heart failure is characterized by containing an IL-16 binding factor, and is used for diagnosing the onset or onset of diastolic heart failure. The kit is characterized by comprising an IL-16 binding factor, and preferably comprises instructions describing the procedure for diagnosing the onset or likelihood of developing dilated heart failure. The IL-16 binding factor only needs to specifically bind to the target IL-16 protein or IL-16 gene. An antibody or polynucleotide that specifically binds to the IL-16 protein, IL-16, A polynucleotide that specifically binds to a gene is preferred and may not have activity to inhibit IL-16 function.

本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能である。すなわち、請求項に示した範囲で適宜変更した技術的手段を組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。   The present invention is not limited to the above-described embodiments, and various modifications can be made within the scope shown in the claims. That is, embodiments obtained by combining technical means appropriately modified within the scope of the claims are also included in the technical scope of the present invention.

〔実施例〕
本発明は、以下の実施例によってさらに詳細に説明されるが、これらに限定されるべきではない。 〔Example〕
The invention is illustrated in more detail by the following examples, but should not be limited thereto.

〔Ｉ．手順〕
臨床的研究は、大阪大学病院倫理委員会によって承認され、the Declaration of Helsinkiに従って行われた。実験的研究は、大阪大学医学部の施設倫理委員会によって承認され、the United States National Institutes of Healthによって刊行されたthe Guide for the Care and Use of Laboratory Animalsに従った。 [I. procedure〕
Clinical studies were approved by the Osaka University Hospital Ethics Committee and conducted according to the Declaration of Helsinki. The experimental study was approved by the Institutional Review Board of Osaka University School of Medicine and followed the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals published by the United States National Institutes of Health.

血液サンプルおよび心エコー図を、大阪大学病院にて心疾患のための入院歴を有する患者から得た。心疾患を、the Framingham Heart Study projectに使用された基準に従って臨床的に診断した。左心室ＥＦが４０％よりも高い患者および４０％以下の患者をそれぞれ左室駆出率が保持されている心不全（拡張性心不全；ＨＦｐＥＦ）および左室駆出率が低下している心不全（収縮性心不全；ＨＦｒＥＦ）と規定した。健康なボランティアをコントロール群とした。   Blood samples and echocardiograms were obtained from patients with hospitalization history for heart disease at Osaka University Hospital. Heart disease was clinically diagnosed according to the criteria used in the Framingham Heart Study project. Patients with left ventricular EF higher than 40% and patients with 40% or lower left heart failure in which left ventricular ejection fraction is maintained (diastolic heart failure; HFpEF) and heart failure in which left ventricular ejection fraction is reduced (contraction) HFrEF). Healthy volunteers were included in the control group.

ヒト被験体における経胸壁心エコー撮影を、標準的な技術に従って実施した。左心室質量インデックスおよび相対的壁厚（ＲＷＴ）を算出し、拡張早期左室流入血流速度（Ｅ）をドプラ脈波によって測定し、僧帽弁輪部移動速度比（ｅ’）を、標準的な方法を用いる組織ドプラスペクトル画像撮影によって測定した。左心房容インデックス（ＬＡＶＩ）、拡張期左室壁ストレイン（ＤＷＳ）および左心室の受動的スティフネスを算出した。これらの手順については、Takeda Y et al., J Card Fail. 2009; 15: 68-77, Lang RM et al., J Am Soc Echocardiogr. 2005; 18: 1440-1463, Lester SJ et al., Am J Cardiol. 1999; 84: 829-832、およびOhtani T et al., Eur Heart J. 2012; 33: 1742-1749 を参照のこと。   Transthoracic echocardiography in human subjects was performed according to standard techniques. Left ventricular mass index and relative wall thickness (RWT) were calculated, dilated early left ventricular inflow blood velocity (E) was measured by Doppler pulse wave, and mitral annulus moving velocity ratio (e ′) was standard Measured by tissue Doppler spectral imaging using a typical method. Left atrial volume index (LAVI), diastolic left ventricular wall strain (DWS) and left ventricular passive stiffness were calculated. For these procedures, Takeda Y et al., J Card Fail. 2009; 15: 68-77, Lang RM et al., J Am Soc Echocardiogr. 2005; 18: 1440-1463, Lester SJ et al., Am J Cardiol. 1999; 84: 829-832 and Ohtani T et al., Eur Heart J. 2012; 33: 1742-1749.

ヒト血清サンプルを、Bio-Plex human cytokine 23-plex and 27-plex panel assay (Bio-Rad)を用いて分析した。   Human serum samples were analyzed using the Bio-Plex human cytokine 23-plex and 27-plex panel assay (Bio-Rad).

高血圧ＨＦｐＥＦモデルとして雄のＤａｈｌ食塩感受性ラット（ＳＬＣ Ｊａｐａｎ）に、高塩（８％ＮａＣｌ）の食餌（Oriental Yeast Co.）を６週齢から与え、２１週齢あたりで分析した。０．３％ＮａＣｌの餌を給餌した雄のＤａｈｌ食塩感受性ラットを、週齢を合わせたコントロールとした。   As a hypertensive HFpEF model, male Dahl salt-sensitive rats (SLC Japan) were fed a high salt (8% NaCl) diet (Oriental Yeast Co.) from 6 weeks of age and analyzed around 21 weeks of age. Male Dahl salt-sensitive rats fed with 0.3% NaCl diet served as age-matched controls.

麻酔後に、経胸壁心エコー撮影を行い、Ｍモードの心エコー図を記録した。１．５Ｆで、高フィデラリティの血圧計を搭載したカテーテル（SPR-407, Millar Instruments）を、左心室へ導入して、左室拡張末期圧（ＬＶＥＤＰ）、時定数および左室心筋スティフネス定数（ＭＳＣ）を測定した。これらの手順については、Kamimura D et al., Eur Heart J. 2012; 33: 1408-1416を参照のこと。   After anesthesia, transthoracic echocardiography was performed and an M-mode echocardiogram was recorded. A 1.5F, high fidelity sphygmomanometer catheter (SPR-407, Millar Instruments) was introduced into the left ventricle, left ventricular end-diastolic pressure (LVEDP), time constant and left ventricular myocardial stiffness constant (MSC) ) Was measured. For these procedures, see Kamimura D et al., Eur Heart J. 2012; 33: 1408-1416.

マウスＩＬ−１６ ｍＲＮＡを単離し、α−ミオシン重鎖（α−ＭＨＣ）プロモータを含むプラスミドにクローニングした。この構築物を、ＢＤＦ１（Ｃ５７ＢＬ／６×ＤＢＡ／２）マウス接合子の前核へマイクロインジェクトした。ＩＬ−１６トランスジェニック（ＴＧ）マウスを、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＳＬＣ Ｊａｐａｎ）と交配させ、雄のＦ２マウスを本研究に使用した。ＴＧマウスの同腹子を、非トランスジェニック（非ＴＧ）マウスとして用いた。全てのマウスを２０〜２２週齢にて分析した。   Mouse IL-16 mRNA was isolated and cloned into a plasmid containing the α-myosin heavy chain (α-MHC) promoter. This construct was microinjected into the pronucleus of BDF1 (C57BL / 6 × DBA / 2) mouse zygotes. IL-16 transgenic (TG) mice were bred with C57BL / 6 mice (SLC Japan) and male F2 mice were used for this study. Litters of TG mice were used as non-transgenic (non-TG) mice. All mice were analyzed at 20-22 weeks of age.

Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ（Ａｎｇ ＩＩ）の投与（１．２ｍｇ／ｋｇ／日；A-9525, Sigma-Aldrich, Inc.）のために、ＡＬＺＥＴ浸透ミニポンプ（DURECT Corp.）を、８〜１０週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＳＬＣ Ｊａｐａｎ）の皮下に埋め込んだ。ＩＬ−１６の効果をブロックするために、Ａｎｇ−ＩＩ処理したマウスの群に、抗ＩＬ−１６モノクローナル中和抗体クローン１４．１（BD Biosciences）を注入した。これらの手順については、Meagher C et al., Diabetes 2010; 59: 2862-2871およびKimura N et al., J Heart Lung Transplant. 2011; 30: 1409-1417を参照のこと。   For administration of Angiotensin II (Ang II) (1.2 mg / kg / day; A-9525, Sigma-Aldrich, Inc.), an ALZET osmotic minipump (DURECT Corp.) was used for 8-10 week old male C57BL. / 6 mice (SLC Japan) were implanted subcutaneously. To block the effects of IL-16, groups of Ang-II treated mice were injected with anti-IL-16 monoclonal neutralizing antibody clone 14.1 (BD Biosciences). For these procedures, see Meagher C et al., Diabetes 2010; 59: 2862-2871 and Kimura N et al., J Heart Lung Transplant. 2011; 30: 1409-1417.

経胸壁心エコー撮影を、意識のあるマウスにて行った。心エコー撮影の後に、マウスを適切に麻酔し、心臓および肺を迅速に取り出し、次いで、心臓を直ちに潅流し、心筋スティフネス、免疫組織化学、ｍＲＮＡレベルおよびタンパク質レベルの測定、ならびにシリウスレッド染色のために、左心室サンプルを得た。   Transthoracic echocardiography was performed with conscious mice. After echocardiography, the mice are properly anesthetized and the heart and lungs are quickly removed, then the heart is immediately perfused for measurement of myocardial stiffness, immunohistochemistry, mRNA and protein levels, and Sirius red staining A left ventricular sample was obtained.

除膜したマウス左心室筋肉を調製し、バルーン型センシングシステムを用いて心筋スティフネスを評価した。これらの手順については、Terui T et al., J Gen Physiol. 2010; 136: 469-482およびIshii R et al., Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 2011: 904-907を参照のこと。   Membrane mouse left ventricular muscle was prepared and myocardial stiffness was evaluated using a balloon-type sensing system. For these procedures, see Terui T et al., J Gen Physiol. 2010; 136: 469-482 and Ishii R et al., Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 2011: 904-907.

タンパク質をマウス左心室から抽出した。ＧＡＰＤＨタンパク質レベルおよびＩＬ−１６タンパク質レベルを、ＧＡＰＤＨに対するウサギポリクローナル抗体（１：１００００希釈、Santa Cruz Biotechnology, Inc.）およびＩＬ−１６に対するラットモノクローナル抗体（１:２００希釈、clone 228109, R&D Systems）を用いて評価した。クリオスタットによる、マウスの左心室の横断切片を、ラット抗マウスＣＤ６８モノクローナル抗体（１：２００希釈、clone FA-11, Serotec）で染色した。これらの手順については、Ohtani T et al., J Hypertens. 2009; 27: 1074-1083 およびYoshida J et al., Hypertension 2004; 43: 686-691を参照のこと。   Protein was extracted from the mouse left ventricle. GAPDH protein levels and IL-16 protein levels were determined using a rabbit polyclonal antibody against GAPDH (1: 10000 dilution, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) and a rat monoclonal antibody against IL-16 (1: 200 dilution, clone 228109, R & D Systems). Evaluated. Cross sections of mouse left ventricle with cryostat were stained with rat anti-mouse CD68 monoclonal antibody (1: 200 dilution, clone FA-11, Serotec). For these procedures, see Ohtani T et al., J Hypertens. 2009; 27: 1074-1083 and Yoshida J et al., Hypertension 2004; 43: 686-691.

National Institutes of Health ImageJ Version 1.45ソフトウエアを使用し、シリウスレッド染色した切片上で心筋線維化の量を調べた。手順については、Shimoyama M et al., Circulation. 1999; 100: 2449-2454 およびDoser TA et al., Circulation. 2009; 119: 1941-1949を参照のこと。   The amount of myocardial fibrosis was examined on Sirius red stained sections using National Institutes of Health ImageJ Version 1.45 software. For procedures, see Shimoyama M et al., Circulation. 1999; 100: 2449-2454 and Doser TA et al., Circulation. 2009; 119: 1941-1949.

新生仔ラットの心室筋細胞を探知した。ＩＬ−６ ｍＲＮＡレベルを評価するために、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１１１（１００ｎｇ／ｍＬ、Ｗａｋｏ）からのリポ多糖（ＬＰＳ）を用いて、心筋細胞を４８時間にわたって刺激した。腹腔マクロファージを、６〜８週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（ＳＬＣ Ｊａｐａｎ）より得て、マウスリコンビナントＩＬ−１６（Shenandoah Biotechnology Inc.）を含む無血清培地中で２４時間インキュベートした。細胞培養物から上清を回収した。   Neonatal rat ventricular myocytes were detected. To assess IL-6 mRNA levels, Cardiomyocytes were stimulated for 48 hours with lipopolysaccharide (LPS) from E. coli O111 (100 ng / mL, Wako). Peritoneal macrophages were obtained from 6-8 week old male C57BL / 6 mice (SLC Japan) and incubated for 24 hours in serum free medium containing mouse recombinant IL-16 (Shenandoah Biotechnology Inc.). The supernatant was collected from the cell culture.

ヒト血清およびラット血清におけるＩＬ−１６の濃度を、市販の酵素免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キット（ヒトＩＬ−１６特異的（R&D Systems）およびラットＩＬ−１６特異的（Cusabio））によって測定した。マクロファージ培養培地中のＴＧＦ−β１の濃度を、マウスＴＧＦ−β１に対する市販のＥＬＩＳＡキット（R&D Systems）を用いて測定した。   The concentration of IL-16 in human serum and rat serum was measured by a commercially available enzyme immunosorbent assay (ELISA) kit (human IL-16 specific (R & D Systems) and rat IL-16 specific (Cusabio)). The concentration of TGF-β1 in the macrophage culture medium was measured using a commercially available ELISA kit (R & D Systems) for mouse TGF-β1.

総ＲＮＡを、左心室または培養心筋細胞より単離し、これらのｍＲＮＡレベルを、ABI PRISM 7900 HT Sequence Detection System and Software (Applied Biosystems)を用いるリアルタイムＰＣＲによって定量化した。全てのデータを、ＧＡＰＤＨ発現に対して正規化した。   Total RNA was isolated from left ventricle or cultured cardiomyocytes and these mRNA levels were quantified by real-time PCR using ABI PRISM 7900 HT Sequence Detection System and Software (Applied Biosystems). All data was normalized to GAPDH expression.

データを平均±ＳＥＭとして示した。データを、統計ソフトウエア（StatView version 5.0, SAS Institute Inc.）を用いて分析した。連続および不連続の変数における二群間での差異を、それぞれ独立スチューデントｔ検定およびフィッシャー正確確率検定を用いて分析した。２つよりも多い群の間での差異を、一因子ＡＮＯＶＡおよびTukey-Kramerの多重比較検定によって調べた。ピアソンの積率相関係数を用いて相関を調べた。Ｐ値＜０．０５を、統計学的な有意差とみなした。   Data are presented as mean ± SEM. Data was analyzed using statistical software (StatView version 5.0, SAS Institute Inc.). Differences between the two groups in continuous and discontinuous variables were analyzed using independent student t-test and Fisher exact test, respectively. Differences between more than two groups were examined by one-factor ANOVA and Tukey-Kramer's multiple comparison test. The correlation was investigated using Pearson's product moment correlation coefficient. P values <0.05 were considered statistically significant.

〔ＩＩ．結果〕
〔１．心不全患者における検討〕
拡張性心不全に関与する免疫液性因子の候補をスクリーニングした。心不全患者（収縮不全１０名、拡張性心不全１１名）および健常人（９名）の血清サンプルにおいて、ＢｉｏＰｌｅｘ法を用いて液性因子５０項目を網羅的に測定し、その結果から、ＩＬ−１６が拡張性心不全と健常人との差が最も顕著であることを見出した。 [II. result〕
[1. Study in patients with heart failure)
The candidates for immune humoral factors involved in diastolic heart failure were screened. In serum samples of heart failure patients (10 systolic failure, 11 dilated heart failure) and healthy subjects (9), 50 humoral factors were comprehensively measured using the BioPlex method. From the results, IL-16 However, we found that the difference between dilated heart failure and healthy people is most prominent.

さらに症例数を増やし、ＥＬＩＳＡ法にて確認したところ、拡張性心不全患者の血清では、ＩＬ−１６濃度の明らかな増加が認められた（図１Ａ）。   When the number of cases was further increased and confirmed by ELISA, a clear increase in IL-16 concentration was observed in the serum of patients with dilated heart failure (FIG. 1A).

血清ＩＬ−１６濃度と左室拡張機能を反映する指標との関連を調べたところ、ＩＬ−１６濃度が高いほどＥ／ｅ’およびＬＡＶＩが高値であり、ＤＷＳが低値であるという有意な相関関係があることがわかった（図１Ｂ〜Ｄ）。このことは、血清ＩＬ−１６値が拡張機能異常を反映していることを示している。   When the relationship between the serum IL-16 concentration and the index reflecting the left ventricular diastolic function was examined, a significant correlation was found that the higher the IL-16 concentration, the higher the E / e ′ and LAVI and the lower the DWS. It was found that there was a relationship (FIGS. 1B-D). This indicates that serum IL-16 levels reflect diastolic dysfunction.

〔２．拡張性心不全動物モデルを用いた検討〕
本発明者らは、ダール食塩感受性ラットを用いた拡張性心不全モデルを確立しており（J. Hypertens. (2000) 18: 111-20）、このモデルラットを用いて拡張性心不全の病態解析をこれまで行っている。この拡張性心不全モデルラットを用いて拡張性心不全におけるＩＬ−１６の関与を検討した。 [2. (Study using animal model of dilated heart failure)
The present inventors have established a dilated heart failure model using Dahl salt-sensitive rats (J. Hypertens. (2000) 18: 111-20), and used this model rat to analyze the pathophysiology of dilated heart failure. I have done so far. The involvement of IL-16 in dilated heart failure was examined using this dilated heart failure model rat.

まず、心不全期（２０週齢）におけるダールラット拡張性心不全モデルの血清ＩＬ−１６濃度をＥＬＩＳＡにて測定した。その結果、ヒトの場合と同様に、拡張性心不全群（ＨＦｐＥＦ）にて血清ＩＬ−１６濃度が高値であることがわかった（図２Ａ）。さらに、心不全の指標としての左室拡張末期圧および肺重量が血清ＩＬ−１６濃度と相関していることも確認され（図２Ｂ〜Ｃ）。左室の硬さを反映する左室スティフネスの指標であるＭＳＣもまた、血清ＩＬ−１６濃度との有意な相関を示していることも確認された（図２Ｄ）。これらの結果は、血清ＩＬ−１６濃度が高いほど左室スティフネスが増大し、心不全を呈しやすいことが示し、ＩＬ−１６が拡張性心不全の診断マーカーとして有効であることを示している。   First, the serum IL-16 concentration of a Dahl rat dilated heart failure model in the heart failure stage (20 weeks of age) was measured by ELISA. As a result, as in the case of humans, it was found that the serum IL-16 concentration was high in the dilated heart failure group (HFpEF) (FIG. 2A). Furthermore, it was also confirmed that left ventricular end diastolic pressure and lung weight as indicators of heart failure correlate with serum IL-16 concentration (FIGS. 2B-C). It was also confirmed that MSC, which is an index of left ventricular stiffness reflecting left ventricular stiffness, also showed a significant correlation with serum IL-16 concentration (FIG. 2D). These results indicate that the higher the serum IL-16 concentration, the greater the left ventricular stiffness and the more likely to exhibit heart failure, indicating that IL-16 is effective as a diagnostic marker for dilated heart failure.

また、拡張性心不全モデルラットの心臓中においてＩＬ−１６ ｍＲＮＡの増加が観察されること（図２Ｅ）、培養心筋細胞においてもＩＬ−１６ ｍＲＮＡの発現が認められ、その発現量がＬＰＳ刺激で増大すること（図２Ｆ）もわかった。これらのことから、心臓中の心筋細胞がＩＬ−１６の産生源の一つであることが示唆された。   In addition, an increase in IL-16 mRNA is observed in the heart of dilated heart failure model rats (FIG. 2E), and the expression of IL-16 mRNA is also observed in cultured cardiomyocytes, and the expression level is increased by LPS stimulation. It was also found to do (FIG. 2F). These facts suggested that cardiomyocytes in the heart are one of the production sources of IL-16.

ＬＰＳは、ＮＦ−κＢ活性を亢進させることが知られている。心不全において産生が亢進する活性酸素・炎症性サイトカインもまた、ＬＰＳと同様にＮＦ−κＢ活性を亢進させる。このことから、拡張性心不全の心臓では活性酸素・炎症性サイトカイン産生の亢進等を介して心筋細胞がＩＬ−１６を産生している可能性が示唆される。   LPS is known to enhance NF-κB activity. Reactive oxygen / inflammatory cytokines whose production is increased in heart failure also enhances NF-κB activity in the same manner as LPS. This suggests the possibility that myocardial cells produce IL-16 in the heart of dilated heart failure through increased production of active oxygen and inflammatory cytokines.

〔３．心臓におけるＩＬ−１６過剰発現モデルを用いた検討〕
心臓におけるＩＬ−１６発現量の増加の効果を直接的に検討するため、心臓においてＩＬ−１６が過剰に発現しているマウスを作製した。このマウスの心臓中では、活性型のＩＬ−１６タンパク質の発現が亢進しており（図３Ａ）、心房の拡大が確認された（図３Ｂ）。このマウスの心臓組織中では線維化が亢進しており（図３Ｃ）、ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ ｍＲＮＡの増加、線維化に関与する遺伝子（ＴＧＦ−β、ＣＴＧＦなど）の発現増加も確認された。また、左室スティフネス計測指標は、ＩＬ−１６過剰発現マウスにて増加していた。心臓線維化の程度および左室スティフネス増大の程度は、心臓でのＩＬ−１６発現量に比例していた（図３ＨおよびＩ）。 [3. Examination using IL-16 overexpression model in heart]
In order to directly examine the effect of increasing the expression level of IL-16 in the heart, mice in which IL-16 is overexpressed in the heart were prepared. In the heart of this mouse, the expression of active IL-16 protein was increased (FIG. 3A), and atrial enlargement was confirmed (FIG. 3B). Fibrosis was enhanced in the heart tissue of this mouse (FIG. 3C), and increased collagen I mRNA and increased expression of genes involved in fibrosis (TGF-β, CTGF, etc.) were also confirmed. Further, the left ventricular stiffness measurement index was increased in mice overexpressing IL-16. The degree of cardiac fibrosis and the increase in left ventricular stiffness were proportional to IL-16 expression in the heart (FIGS. 3H and I).

さらに、ＩＬ−１６過剰発現マウスの心臓中ではマクロファージの増加が認められた（図４ＡおよびＢ）。マクロファージは炎症、線維化の役割を担っているため、マウス腹腔マクロファージを用いて、マクロファージに対するＩＬ−１６の直接的な作用を検討した。その結果、ＩＬ−１６は濃度依存性にマクロファージからの強い線維化促進因子であるＴＧＦ−β１の分泌を亢進させることがわかった（図４Ｃ）。   Furthermore, an increase in macrophages was observed in the heart of IL-16 overexpressing mice (FIGS. 4A and B). Since macrophages play a role in inflammation and fibrosis, the direct action of IL-16 on macrophages was examined using mouse peritoneal macrophages. As a result, it was found that IL-16 enhances secretion of TGF-β1, which is a strong fibrosis promoting factor from macrophages, in a concentration-dependent manner (FIG. 4C).

〔４．ＩＬ−１６中和抗体の効果の検討〕
Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩを持続的に投与（１．２ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを２週間投与）したマウスの心臓において、ＩＬ−１６遺伝子発現の亢進が確認され、４週間投与でこのマウスの心臓における線維化が確認された（図５ＡおよびＢ）。このマウスに対してＩＬ−１６中和抗体を腹腔内に投与したところ、心臓における線維化が抑制された。 [4. Examination of the effect of IL-16 neutralizing antibody]
Increased IL-16 gene expression was confirmed in the heart of a mouse to which Angiotensin II was continuously administered (1.2 mg / kg / day was administered for 2 weeks), and fibrosis in the heart of this mouse was confirmed after 4 weeks of administration. (FIGS. 5A and B). When IL-16 neutralizing antibody was administered intraperitoneally to these mice, fibrosis in the heart was suppressed.

〔ＩＩＩ．考察〕
拡張性心不全患者において血清ＩＬ−１６は高値であり、この濃度増加は拡張性心不全の主要因である左室拡張機能障害の指標の悪化を反映していた。拡張性心不全ラットモデルにおける高値の血清ＩＬ−１６は、左室拡張機能の中で心不全の顕在化に強く関与しているとされる左室スティフネスの増加と関連していることが確認された。 [III. (Consideration)
Serum IL-16 was elevated in patients with diastolic heart failure, and this increased concentration reflected a deterioration in the index of left ventricular diastolic dysfunction, which is a major cause of diastolic heart failure. It was confirmed that elevated serum IL-16 in a rat model of dilated heart failure is associated with an increase in left ventricular stiffness, which is considered to be strongly involved in the manifestation of heart failure among left ventricular diastolic functions.

心臓におけるＩＬ−１６の発現量を増加させると、左室線維化増加およびこれに起因すると考えられる左室スティフネスの増加が確認され、心臓中でのＩＬ−１６の増加が拡張性心不全発症の病態に関与していることが示された。さらに、ＩＬ−１６中和抗体を投与することにより、マウスモデルにおける左室線維化が抑制され、ＩＬ−１６抑制の効果が実証された。   Increasing the expression level of IL-16 in the heart confirmed an increase in left ventricular fibrosis and an increase in left ventricular stiffness that may be attributed to this, and an increase in IL-16 in the heart indicates the pathogenesis of dilated heart failure. Was shown to be involved. Furthermore, administration of IL-16 neutralizing antibody suppressed left ventricular fibrosis in a mouse model, demonstrating the effect of IL-16 suppression.

このように、ＩＬ−１６が拡張性心不全の病態に関与すること、そしてＩＬ−１６が拡張性心不全の原因である左室線維化による左室スティフネス増大へ作用することが示された。ＩＬ−１６のこのような機能は、従来知られていたＩＬ−１６の機能と関連するものでなく、予測し得たものでない。また、このような機能を有するサイトカインはこれまで知られていない。拡張性心不全に対する治療ターゲットの一つの候補としてＩＬ−１６が非常に有望であると考えられる。   Thus, it was shown that IL-16 is involved in the pathology of dilated heart failure, and that IL-16 acts on the increase in left ventricular stiffness due to left ventricular fibrosis that causes dilated heart failure. Such a function of IL-16 is not related to the previously known function of IL-16 and is not predictable. Moreover, the cytokine which has such a function is not known until now. IL-16 is considered very promising as one candidate therapeutic target for diastolic heart failure.

本発明によって、拡張性心不全を治療および診断することができるので、医薬分野における開発に寄与することができる。   According to the present invention, diastolic heart failure can be treated and diagnosed, which can contribute to development in the pharmaceutical field.

Claims (9)

ＩＬ−１６機能阻害因子を含む、拡張性心不全を治療するための組成物。   A composition for treating diastolic heart failure, comprising an IL-16 function inhibitor. 前記ＩＬ−１６機能阻害因子が、ＩＬ−１６タンパク質に対する中和抗体、アプタマーおよびデコイ核酸からなる群より選択されるＩＬ−１６活性抑制因子である、請求項１に記載の組成物。   The composition according to claim 1, wherein the IL-16 function inhibitor is an IL-16 activity inhibitor selected from the group consisting of neutralizing antibodies to IL-16 protein, aptamers, and decoy nucleic acids. 前記ＩＬ−１６機能阻害因子が、ＩＬ−１６遺伝子に対するアンチセンス核酸、リボザイムおよびｓｉＲＮＡからなる群より選択されるＩＬ−１６発現阻害因子である、請求項１に記載の組成物。   The composition according to claim 1, wherein the IL-16 function inhibitor is an IL-16 expression inhibitor selected from the group consisting of antisense nucleic acids, ribozymes and siRNAs against the IL-16 gene. ＩＬ−１６機能阻害因子を備えている、拡張性心不全を治療するためのキット。   A kit for treating dilated heart failure, comprising an IL-16 function inhibitor. 被験体から取得したサンプル中のＩＬ−１６タンパク質またはＩＬ−１６ ｍＲＮＡの量を測定する工程を包含する、拡張性心不全の発症または発症可能性を診断するためのデータを取得する方法。   A method for obtaining data for diagnosing the onset or likelihood of development of diastolic heart failure, comprising measuring the amount of IL-16 protein or IL-16 mRNA in a sample obtained from a subject. 前記工程によって得られた測定値を基準値と比較する工程をさらに包含する、請求項５に記載の方法。   The method according to claim 5, further comprising the step of comparing the measured value obtained by said step with a reference value. ＩＬ−１６結合因子を含んでいる、拡張性心不全の発症または発症可能性を診断するための組成物。   A composition for diagnosing the onset or potential onset of dilated heart failure, comprising an IL-16 binding factor. 前記ＩＬ−１６結合因子が、ＩＬ−１６タンパク質に特異的に結合する抗体もしくはポリヌクレオチド、およびＩＬ−１６遺伝子に特異的に結合するポリヌクレオチドからなる群より選択される、請求項７に記載の組成物。   The IL-16 binding factor is selected from the group consisting of an antibody or polynucleotide that specifically binds to an IL-16 protein, and a polynucleotide that specifically binds to an IL-16 gene. Composition. ＩＬ−１６結合因子を備えている、拡張性心不全の発症または発症可能性を診断するためのキット。   A kit for diagnosing the onset or potential onset of diastolic heart failure, comprising an IL-16 binding factor.
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