JP2016007170A - Cell culture vessel - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、細胞培養容器又は細胞の培養方法に関するものである。 The present invention relates to a cell culture container or a cell culture method.
生体外で細胞を培養する方法として、安価には、ガラス製ないしポリスチレン製のシャーレを用い、この底部に培養液と共に細胞を静置し、蓋をして、３７℃、５％ＣＯ２環境下のインキュベーター内で行う方法が挙げられる。
インキュベーター内は、クリーンな環境ではなく、雑菌や異物等が存在する。そのため、たとえ蓋をして密閉したとしても、僅かな雑菌等の混入は避けられない。僅かな雑菌等の混入は、細胞培養において、一般には実害ではないが、僅かな雑菌等の混入もない方が好ましいことは言うまでもない。
As a method of culturing cells in vitro, inexpensively, a glass or polystyrene petri dish is used, and the cells are allowed to stand together with the culture solution at the bottom, and the lid is covered, at 37 ° C. in a 5% CO 2 environment. The method of performing in an incubator is mentioned.
The incubator is not a clean environment, and there are bacteria and foreign substances. Therefore, even if it is sealed with a lid, it is unavoidable that a few contaminants are mixed. It is needless to say that a slight contamination with bacteria or the like is generally not a real harm in cell culture, but it is preferable that there is no contamination with a slight contamination.
雑菌等の混入を完全に排除するために、培養容器を密封にすることが考えられる。しかしながら、容器を密封にすると、細胞の生育に必要な酸素や二酸化炭素の供給に支障をきたし、細胞が死滅するおそれがある。時折、クリーンベンチなどに、細胞培養中の容器を運び、開放してやることも考えられる。しかしながら、再度、しっかり密封するなどの操作も加わり、煩雑である。従って、通常、容器を密封して培養することは困難である。 In order to completely eliminate contamination such as bacteria, it is conceivable to seal the culture vessel. However, if the container is hermetically sealed, there is a risk that the supply of oxygen and carbon dioxide necessary for cell growth will be hindered and the cells may die. Occasionally, it may be possible to bring a cell culture container to a clean bench and open it. However, the operation of sealing again is added, which is complicated. Therefore, it is usually difficult to culture with the container sealed.
また、細胞培養中、２、３日に１回程度の割合で、容器中の培養液の交換を行わなければならない。かかる培養液の交換は、雑菌等の混入を防ぐため、一般には培養容器をクリーンベンチなど無菌な環境へ運び、ピペット等で古い培養液を吸い取り、新しい培養液を入れることにより行われる。これら一連の操作は、煩雑なものがあり、必ずしも容易なものではない。 In addition, the culture medium in the container must be exchanged at a rate of about once every two or three days during cell culture. In order to prevent contamination of germs and the like, such exchange of the culture solution is generally performed by transporting the culture vessel to a sterile environment such as a clean bench, sucking out the old culture solution with a pipette or the like, and adding a new culture solution. These series of operations are complicated and not always easy.
公知技術として、容器の底部を、連続多孔質構造を有する撥水性膜とした細胞培養容器が知られている（特許文献１参照）。かかる容器では、底部をこのような撥水性膜とすることにより、容器底部の通気性を改善している。具体的な連続多孔質構造として、ノードとフィブリンとからなる構造が挙げられ、そのような撥水性膜として、延伸されたポリテトラフルオロエチレンからなる膜が挙げられている。当該細胞培養容器は、基本的には通常のシャーレと同様な構造を有する、蓋をする密閉タイプの容器である。 As a known technique, a cell culture container is known in which the bottom of the container is a water-repellent film having a continuous porous structure (see Patent Document 1). In such a container, the air permeability of the bottom of the container is improved by using such a water-repellent film at the bottom. A specific continuous porous structure includes a structure composed of nodes and fibrin, and such a water-repellent film includes a film composed of stretched polytetrafluoroethylene. The cell culture container is basically a sealed container with a lid having a structure similar to that of an ordinary petri dish.
本発明の目的は、新規有用な細胞培養容器を提供することにあり、特に雑菌や異物等の混入を防ぐことができる細胞培養容器を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a novel and useful cell culture container, and in particular, to provide a cell culture container that can prevent contamination with foreign bacteria and foreign substances.
本発明者は、鋭意検討を重ねた結果、容器の底部を通気性ポリエチレンフィルムで形成することにより、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成した。 As a result of intensive studies, the present inventor has found that the above problem can be solved by forming the bottom of the container with a breathable polyethylene film, and has completed the present invention.
本発明としては、例えば、下記を挙げることができる。 Examples of the present invention include the following.
［１］容器の底部が通気性ポリエチレンフィルムで形成されていることを特徴とする、細胞培養容器。 [1] A cell culture container, wherein the bottom of the container is formed of a breathable polyethylene film.
［２］容器の上部がポリエステルフィルムで封止されている、上記［１］に記載の細胞培養容器。 [2] The cell culture container according to [1], wherein the upper part of the container is sealed with a polyester film.
［３］容器底部の通気性ポリエチレンフィルムの平均孔径が、１〜３０μｍの範囲内である、上記［１］又は［２］に記載の細胞培養容器。
［４］容器底部の通気性ポリエチレンフィルムの酸素透過係数が、１００〜５０００ｃｍ３／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍの範囲内であり、該二酸化炭素透過係数が、１０００〜２００００ｃｍ３／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍの範囲内である、上記［１］〜［３］のいずれか一に記載の細胞培養容器。
[3] The cell culture container according to [1] or [2] above, wherein an average pore diameter of the breathable polyethylene film at the bottom of the container is in the range of 1 to 30 μm.
[4] The oxygen permeability coefficient of the breathable polyethylene film at the bottom of the container is in the range of 100 to 5000 cm 3 / m 2 · 24 hr · atm, and the carbon dioxide permeability coefficient is 1000 to 20000 cm 3 / m 2 · 24 hr · The cell culture container according to any one of the above [1] to [3], which is in the range of atm.
［５］容器底部の通気性ポリエチレンフィルムの厚みが、２５μｍ〜１０００μｍの範囲内である、上記［１］〜［４］のいずれか一に記載の細胞培養容器。 [5] The cell culture container according to any one of [1] to [4], wherein the thickness of the breathable polyethylene film at the bottom of the container is in the range of 25 μm to 1000 μm.
［６］容器の側壁に、培養液交換用の又は細胞注入用の注入口と排出口とを有する、上記［１］〜［５］のいずれか一に記載の細胞培養容器。
［７］さらに台座部を有する、上記［１］〜［６］のいずれか一に記載の細胞培養容器。
[6] The cell culture container according to any one of the above [1] to [5], which has an inlet and an outlet for exchanging a culture solution or for cell injection on a side wall of the container.
[7] The cell culture container according to any one of [1] to [6], further including a pedestal.
［８］容器の底部が通気性ポリエチレンフィルムで形成されている密封容器を用いることを特徴とする、細胞の培養方法。 [8] A method for culturing cells, characterized by using a sealed container in which the bottom of the container is formed of a breathable polyethylene film.
［９］上記［１］〜［７］のいずれか一に記載の細胞培養容器を用いることを特徴とする、細胞の培養方法。 [9] A method for culturing cells, comprising using the cell culture vessel according to any one of [1] to [7] above.
［１０］培養液の交換を、容器の側壁に有する注入口と排出口から行うことを特徴とする、上記［８］又は［９］に記載の細胞の培養方法。 [10] The method for culturing cells according to [8] or [9] above, wherein the culture solution is exchanged from an inlet and an outlet provided on a side wall of the container.
本発明に係る細胞培養容器によれば、雑菌や異物等の混入を防ぎながら、より簡便な方法で細胞の培養を行うことができる。 According to the cell culture container according to the present invention, it is possible to culture cells by a simpler method while preventing contamination of foreign bacteria and foreign matters.
Ｉ．本発明に係る細胞培養容器について
本発明に係る細胞培養容器（以下、「本発明容器」という）は、容器の底部が通気性ポリエチレンフィルムで形成されていることを特徴とする。以下、図を参照して本発明容器を詳述する。
I. Regarding the cell culture container according to the present invention The cell culture container according to the present invention (hereinafter referred to as “the container of the present invention”) is characterized in that the bottom of the container is formed of a breathable polyethylene film. Hereinafter, the container of the present invention will be described in detail with reference to the drawings.
Ｉ−１．本発明容器の底部に係る通気性ポリエチレンフィルムについて
まず、本発明容器の底部に係る通気性ポリエチレンフィルムについて説明する。ここで、本発明容器の底部は、図面では符号１に相当する。
I-1. About the breathable polyethylene film concerning the bottom part of this invention container First, the breathable polyethylene film concerning the bottom part of this invention container is demonstrated. Here, the bottom of the container of the present invention corresponds to reference numeral 1 in the drawing.
該通気性ポリエチレンフィルムは、通気性を有し、液体を通さないものであればよく、そのような市販の通気性ポリエチレンフィルムをそのまま使用することができるが、培養する細胞の種類等により、必要に応じて、プラズマ処理等の表面処理を行ってもよい。 The breathable polyethylene film only needs to be breathable and liquid-impervious, and such a commercially available breathable polyethylene film can be used as it is, but depending on the type of cells to be cultured, etc. Depending on the case, surface treatment such as plasma treatment may be performed.
該通気性ポリエチレンフィルムは多孔性であるが、その平均孔径は、通常、１μｍ〜３０μｍの範囲内であり、好ましくは５μｍ〜２０μｍの範囲内である。該通気性ポリエチレンフィルムの平均孔径が１μｍ未満であると、容器内の培養液に十分な酸素等が供給されないおそれがあり、該通気性ポリエチレンフィルムの平均孔径が３０μｍより大きいと、容器中の培養液が漏れるおそれがある。 The breathable polyethylene film is porous, but the average pore diameter is usually in the range of 1 μm to 30 μm, preferably in the range of 5 μm to 20 μm. If the average pore size of the breathable polyethylene film is less than 1 μm, there is a risk that sufficient oxygen or the like may not be supplied to the culture solution in the container. If the average pore size of the breathable polyethylene film is greater than 30 μm, the culture in the container Liquid may leak.
該通気性ポリエチレンフィルムの酸素透過係数としては、約１００〜５０００ｃｍ３／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍが挙げられ、好ましくは約１１００〜３０００ｃｍ３／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ、さらに好ましくは約１２５０〜２７５０ｃｍ３／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍであり、二酸化炭素透過係数としては、約１０００〜２００００ｃｍ３／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍが挙げられ、好ましくは約３０００〜１１５００ｃｍ３／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍであり、さらに好ましくは約５０００〜９０００ｃｍ３／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍである。 Examples of the oxygen permeability coefficient of the breathable polyethylene film include about 100 to 5000 cm 3 / m 2 · 24 hr · atm, preferably about 1100 to 3000 cm 3 / m 2 · 24 hr · atm, and more preferably about 1250 to 2750 cm. 3 / m 2 · 24 hr · atm, and the carbon dioxide permeability coefficient is about 1000 to 20000 cm 3 / m 2 · 24 hr · atm, preferably about 3000 to 11500 cm 3 / m 2 · 24 hr · atm. More preferably, it is about 5000 to 9000 cm 3 / m 2 · 24 hr · atm.
該通気性ポリエチレンフィルムの厚みとしては、２５μｍ〜１０００μｍの範囲内が適当であり、５０μｍ〜２００μｍの範囲内が好ましく、７０μｍ〜１５０μｍの範囲内がより好ましい。 The thickness of the breathable polyethylene film is suitably in the range of 25 μm to 1000 μm, preferably in the range of 50 μm to 200 μm, and more preferably in the range of 70 μm to 150 μm.
該通気性ポリエチレンフィルムの色は、培養目的、培養する細胞の種類等により適宜選択することができるが、顕微鏡等での観察がしやすいことから、無色透明であることが好ましい。 The color of the breathable polyethylene film can be appropriately selected depending on the purpose of culture, the type of cells to be cultured, etc., but is preferably colorless and transparent because it is easy to observe with a microscope or the like.
Ｉ−２．本発明容器の側壁について
本発明容器の側壁は、図面では符号２に相当する。
I-2. About the side wall of this invention container The side wall of this invention container is equivalent to the code |
本発明容器の側壁の材質は、培養液上に細胞等を培養するのに不活性であれば特に限定されず、例えば、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネートを挙げることができる。中でも、軽量で、かつ、ガンマ線滅菌等を施しても変色しないことから、ポリスチレンが好ましい。 The material of the side wall of the container of the present invention is not particularly limited as long as it is inactive for culturing cells or the like on the culture solution, and examples thereof include glass, polystyrene, polypropylene, and polycarbonate. Among these, polystyrene is preferable because it is lightweight and does not change color even when subjected to gamma ray sterilization.
本発明容器の側壁の色も特に限定されないが、容器内部の観察に適していることから、無色透明であることが好ましい。 Although the color of the side wall of the container of the present invention is not particularly limited, it is preferably colorless and transparent because it is suitable for observation inside the container.
本発明容器の側壁の形状は、特に限定されず、例えば、円柱状、角柱状等の柱体を挙げることができる。中でも、容器を持ち運ぶ際、培養液表面が波打つことを軽減できることから、四角柱状が好ましい。 The shape of the side wall of the container of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include columnar bodies such as a columnar shape and a prismatic shape. Among these, a square column shape is preferable because the surface of the culture solution can be reduced when the container is carried.
本発明容器の側壁の厚みは、側壁の材質や、容器の使用条件等により当業者が適宜選択すればよく、通常、２ｍｍ〜１０ｍｍの範囲内であり、５ｍｍ程度が好ましい。 The thickness of the side wall of the container of the present invention may be appropriately selected by those skilled in the art depending on the material of the side wall, the use conditions of the container, etc., and is usually in the range of 2 mm to 10 mm, preferably about 5 mm.
本発明容器の側壁の高さは、特に限定されず、培養液の量等により適宜調整すればよいが、３ｍｍ〜２０ｍｍ程度が適当であり、好ましくは５ｍｍ〜１０ｍｍ程度である。本発明容器は、底部が通気性ポリエチレンフィルムで形成されており、容器底部を介して酸素等が供給されることから、容器中に空気層を設ける必要はなく、本発明容器の側壁の高さと培養液の高さが同じであってもよい。 The height of the side wall of the container of the present invention is not particularly limited, and may be appropriately adjusted depending on the amount of the culture solution or the like, but about 3 mm to 20 mm is suitable, and preferably about 5 mm to 10 mm. The container of the present invention is formed of a breathable polyethylene film at the bottom, and oxygen and the like are supplied through the container bottom, so there is no need to provide an air layer in the container. The height of the culture solution may be the same.
本発明容器は、例えば、底部となる通気性ポリエチレンフィルムの縁周に粘着層等を設け、側壁の開口部に貼着し、閉塞することにより作製することができる。
本発明容器は、使用後に底部の通気性ポリエチレンフィルムを剥がし、側壁を十分に洗浄、乾燥した後、新しい通気性ポリエチレンフィルムを貼着して、再構築することもできる。
The container of the present invention can be produced, for example, by providing an adhesive layer or the like around the periphery of a breathable polyethylene film serving as the bottom, sticking it to the opening of the side wall, and closing it.
The container of the present invention can be reconstructed by peeling off the breathable polyethylene film at the bottom after use, thoroughly washing and drying the side walls, and then attaching a new breathable polyethylene film.
本発明容器の側壁には、後述する、培養液交換用の又は細胞注入用の注入口と排出口とを有していてもよい。 The side wall of the container of the present invention may have an inlet and an outlet for exchanging a culture solution or for injecting cells, which will be described later.
Ｉ−３．本発明容器の上部について
本発明容器の上部は、図面では符号３に相当する。本発明容器の上部は、開放されていても閉じられていてもよい。好ましくは、外部からの雑菌等の混入を完全に防止するため、閉じられている（封止されている）密封型が好ましい。本発明容器は、底部が通気性ポリエチレンフィルムで形成されていることから、容器上部が閉じられ、容器が密封されても、容器底部の通気性ポリエチレンフィルムを介して酸素等が培養液に供給され、培養細胞に酸素等を与えることができる。本発明容器の上部が開放されている場合、通常のシャーレと同様に蓋をして細胞を培養することかできる。
I-3. About the upper part of this invention container The upper part of this invention container is equivalent to the code |
上部が閉じられた密封型の形態としては、外部からの雑菌等の混入を防ぐことができれば特に限定されず、例えばシャーレ型や桝型の容器を逆さにしたような、側面と上面が一体となった形態や、上部に適当なフィルム等を貼着し、封止した形態を挙げることができる。中でも、上部から封止又は開封が可能なことからフィルム等を貼着することが好ましい。 The form of the sealed type with the upper part closed is not particularly limited as long as contamination from outside can be prevented. For example, the side surface and the upper surface are integrated, such as a petri dish type or a bowl-shaped container upside down. The form which became and the form which stuck the suitable film etc. on the upper part, and was sealed can be mentioned. Among them, it is preferable to stick a film or the like because it can be sealed or opened from above.
上部を封止するフィルム等としては、外部からの雑菌等の混入を防ぐことができ、かつ、培養液上での細胞の培養に不活性であれば特に限定されないが、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルムやポリエチレンナフタレート（ＰＥＮ）フィルム等のポリエステルフィルム、ポリエチレンフィルム、ポリスチレン、ポリカーボネート、ガラスを挙げることができる。中でも、シート状で強度があり、形状等の種類が豊富であることから、ポリエステルフィルムが好ましく、その中でもポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルムが特に好ましい。 The film or the like for sealing the upper part is not particularly limited as long as it can prevent contamination by external bacteria and the like and is inactive for culturing cells on the culture solution. For example, polyethylene terephthalate (PET) ) Polyester films such as films and polyethylene naphthalate (PEN) films, polyethylene films, polystyrene, polycarbonate, and glass. Among them, a polyester film is preferable because it is sheet-like and strong, and there are many types such as shapes, and among them, a polyethylene terephthalate (PET) film is particularly preferable.
本発明容器の上部の色は、特に限定されないが、顕微鏡等で観察が可能なことから、無色透明であることが好ましい。 The color of the upper part of the container of the present invention is not particularly limited, but is preferably colorless and transparent because it can be observed with a microscope or the like.
培養液又は細胞の注入・排出は、側壁に後述する注入口や排出口を有する本発明容器であれば、該注入口、排出口から行うことができ、また、クリーンベンチ内等、雑菌等が少ない環境で容器上部から注入・排出した後、フィルム等を貼着することにより行うこともできる。 The injection or discharge of the culture solution or cells can be performed from the injection port and the discharge port of the present invention having an injection port and a discharge port described later on the side wall. It can also be performed by sticking a film or the like after injecting and discharging from the upper part of the container in a small environment.
Ｉ−４．培養液交換用の又は細胞注入用の注入口と排出口について
本発明容器は、側壁に培養液交換用の又は細胞注入用の注入口と排出口を有することができる。注入口と排出口の実施形態の一例として、例えば、図面に示される符号４のような形態を挙げることができる。側壁に培養液交換用の又は細胞注入用の注入口と排出口を有することにより、容器の上部を開封することなく、培養液又は細胞の注入や培養液の交換を行うことができる。
なお、注入口と排出口とは、常に区別されるものではない。必要に応じて適宜定めることができる。例えば、容器側壁の対向する２面に各２口あり、同じ形状等である場合、どれを注入口とし、どれを排出口としてもよい。一般には、いずれかの面にある２口を注入口とし、その対面にある２口を排出口とするのが好ましい。
I-4. About the inlet and outlet for culture medium exchange or cell injection The container of the present invention can have an inlet and outlet for culture medium exchange or cell injection on the side wall. As an example of the embodiment of the injection port and the discharge port, for example, a form such as
Note that the inlet and the outlet are not always distinguished. It can be appropriately determined as necessary. For example, in the case where there are two ports on the two opposing surfaces of the container side wall and the same shape or the like, any of them may be used as an injection port and any as a discharge port. In general, it is preferable to use two ports on either side as injection ports and two ports on the opposite side as discharge ports.
注入口と排出口の数は、注入口と排出口をそれぞれ１個以上有していれば特に限定されず、容器の大きさや形状、用いる培養液の量等により適宜選択すればよい。それぞれ２個ないし３個有するのが好ましい。 The number of inlets and outlets is not particularly limited as long as it has one or more inlets and outlets, and may be appropriately selected depending on the size and shape of the container, the amount of culture medium to be used, and the like. It is preferable to have 2 to 3 each.
注入口及び排出口の側壁における場所は、培養液又は細胞の注入及び培養液の排出ができれば特に限定されないが、注入口及び排出口が全て培養液に浸る位置にあり、できる限り底部に近い位置にあるのが好ましい。また、注入口及び排出口の向きは、容器の形状等によって適宜調整すればよい。図面で示すような四角柱状の容器の場合は、一直線の方向に調製するのが一般的であるが、培養液がムラなく交換できる方向に調製するのが好ましい。 The place on the side wall of the inlet and outlet is not particularly limited as long as the culture medium or cells can be injected and the culture liquid can be discharged, but the inlet and outlet are all immersed in the culture liquid, and are located as close to the bottom as possible. It is preferable that it exists in. Further, the orientation of the inlet and outlet may be adjusted as appropriate depending on the shape of the container. In the case of a square columnar container as shown in the drawings, the container is generally prepared in a straight line direction, but it is preferably prepared in a direction in which the culture solution can be exchanged without unevenness.
注入口及び排出口の口径としては、培養液又は細胞の注入及び培養液の排出ができる大きさであれば特に限定されないが、例えば、口の形状が円形の場合、直径１ｍｍ〜８ｍｍを挙げることができる。好ましくは直径２ｍｍ〜５ｍｍの範囲内である。 The diameter of the inlet and the outlet is not particularly limited as long as it is a size capable of injecting the culture solution or cells and discharging the culture solution. For example, when the shape of the mouth is circular, the diameter may be 1 mm to 8 mm. Can do. The diameter is preferably in the range of 2 mm to 5 mm.
注入口又は排出口からの雑菌等の混入を防ぐため、注入口及び排出口には、開閉可能なジョイントを有することが好ましい。 In order to prevent contamination of germs and the like from the inlet or outlet, it is preferable that the inlet and outlet have a joint that can be opened and closed.
Ｉ−５．本発明容器の台座部について
本発明容器は、容器底部に空気層を設けるため、台座部を有していてもよい。台座部は、図面では符号５に相当する。また、図５〜８に記載する、台座部を有する一例は、図１〜４に記載する本発明容器の一例に台座部を設けたものである。
I-5. About the base part of this invention container Since this invention container provides an air layer in a container bottom part, it may have a base part. The pedestal corresponds to 5 in the drawing. Moreover, an example which has a base part described in FIGS. 5-8 provides a base part in an example of this invention container described in FIGS. 1-4.
台座部を有することにより、通気性のない面の上に本発明容器を置いた場合であっても、容器底部の通気性ポリエチレンフィルムから酸素等を取り入れることが可能になる。これにより、本発明容器を重ねて使用することができる。 By having the pedestal, even when the container of the present invention is placed on a non-breathable surface, oxygen or the like can be taken from the breathable polyethylene film at the bottom of the container. Thereby, this invention container can be used in piles.
台座部は、本発明容器の底部に固定されていてもよく、必要に応じて着脱可能になっていてもよい。 The pedestal portion may be fixed to the bottom of the container of the present invention, and may be detachable as necessary.
台座部の材質は、特に限定されず、例えばポリスチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート等の樹脂、ガラスを挙げることができる。 The material of the base portion is not particularly limited, and examples thereof include resins such as polystyrene, polypropylene, and polycarbonate, and glass.
台座部は、空気層に酸素等を取り込むための空気穴を有していることが好ましい。空気穴は、図面では空気穴６に相当する。空気穴の形状や数は、容器の大きさ等により、適宜選択することができる。
The pedestal part preferably has an air hole for taking oxygen or the like into the air layer. The air hole corresponds to the
台座部は、本発明容器内に培養液を充填した際、本発明容器底部の通気性ポリエチレンフィルムが弛むことを防ぐなどの目的で、必要に応じて、支柱部を有していてもよい。支柱部は、図面では符号７に相当する。支柱部の形状は特に限定されないが、台座部をつけた状態のまま顕微鏡での観察ができることから、図５及び図６に示される符号８のように、本発明容器の中央部に、顕微鏡観察用の窓（空気穴にもなる）が設けられていることが好ましい。
The pedestal part may have a support part as necessary for the purpose of preventing the breathable polyethylene film at the bottom of the container of the present invention from sagging when the culture solution is filled in the container of the present invention. The column portion corresponds to reference numeral 7 in the drawing. Although the shape of the support column is not particularly limited, since it can be observed with a microscope with the pedestal attached, the microscope is observed at the center of the container of the present invention as indicated by
本発明容器で培養できる細胞は特に制限されず、ガラス製ないしポリスチレン製のシャーレを用いて培養できる種類の細胞であればいずれでもよい。固定細胞でも浮遊細胞でもよいが、固定細胞の培養に本発明容器は特に適している。本発明容器で培養しうる具体的な細胞としては、例えば、骨芽細胞、象牙芽細胞、歯根膜細胞、軟骨細胞、線維芽細胞、心筋細胞、肝細胞、膵臓由来細胞、ＥＳ細胞、ｉＰＳ細胞を挙げることができる。 The cells that can be cultured in the container of the present invention are not particularly limited, and may be any type of cells that can be cultured using a glass or polystyrene petri dish. Although the cells may be fixed cells or floating cells, the container of the present invention is particularly suitable for culturing fixed cells. Specific cells that can be cultured in the container of the present invention include, for example, osteoblasts, odontoblasts, periodontal ligament cells, chondrocytes, fibroblasts, cardiomyocytes, hepatocytes, pancreatic cells, ES cells, iPS cells. Can be mentioned.
ＩＩ．本発明に係る細胞培養方法について
次に、本発明に係る細胞培養方法（以下、「本発明培養方法」という）について詳述する。
本発明培養方法として、例えば、容器の底部が通気性ポリエチレンフィルムで形成されている密封容器を用いることを特徴とする、細胞の培養方法を挙げることができる。
II. Next, the cell culture method according to the present invention (hereinafter referred to as “the culture method of the present invention”) will be described in detail.
Examples of the culture method of the present invention include a cell culture method characterized by using a sealed container in which the bottom of the container is formed of a breathable polyethylene film.
容器の底部が通気性ポリエチレンフィルムで形成されている密封容器としては、例えば、上部が閉じられている密封型の本発明容器を挙げることができる。 As a sealed container in which the bottom part of the container is formed of a breathable polyethylene film, for example, a sealed type container of the present invention in which the upper part is closed can be given.
培養液としては、培養したい細胞の種類や量等により適宜選択すればよく、例えば、炭素源、ビタミン、無機塩類などの栄養素を含む溶液が好ましい。 The culture solution may be appropriately selected depending on the type and amount of cells to be cultured. For example, a solution containing nutrients such as a carbon source, vitamins, and inorganic salts is preferable.
本発明培養方法に供しうる細胞は特に制限されず、ガラス製ないしポリスチレン製のシャーレを用いて培養できる種類の細胞であればいずれでもよい。固定細胞でも浮遊細胞でもよいが、本発明培養方法は固定細胞の培養に特に適している。具体的な細胞としては、前記のものを挙げることができる。 The cells that can be used in the culture method of the present invention are not particularly limited, and any cells can be used as long as they can be cultured using a glass or polystyrene petri dish. Although the cells may be fixed cells or floating cells, the culture method of the present invention is particularly suitable for culturing fixed cells. Specific examples of the cells include those described above.
ＩＩ−１．培養液と細胞を注入する方法について
容器の底部が通気性ポリエチレンフィルムで形成されている密封容器に培養液と細胞を注入するには、例えば、次のような方法で行うことができる。
１）クリーンベンチなどの無菌空間で容器上部から培養液及び細胞をピペット等で流し込み、その後フィルム等で上部を貼着し、容器を密封することにより培養液と細胞を注入する方法
２）密封容器の側壁に設けた注入口からシリンジや送液ポンプ等により培養液と細胞を注入する方法
中でも、簡便でより雑菌等の混入を防ぐことができる、上記２のような、注入口からシリンジや送液ポンプ等により培養液と細胞を注入する方法が好ましい。そうすることにより、クリーンベンチなどの無菌空間で培養液と細胞の注入を行う必要は必ずしもない。
II-1. About the method of inject | pouring a culture solution and a cell In order to inject | pour a culture solution and a cell into the sealed container in which the bottom part of the container was formed with the air permeable polyethylene film, it can carry out by the following methods, for example.
1) A method of injecting the culture solution and cells by pouring the culture solution and cells from the upper part of the container in aseptic space such as a clean bench with a pipette, etc., and then sticking the upper part with a film etc. and sealing the container 2) Sealed container Among the methods of injecting the culture solution and cells from the injection port provided on the side wall of the tube by means of a syringe or a liquid supply pump, etc. A method of injecting the culture medium and cells with a liquid pump or the like is preferable. By doing so, it is not always necessary to inject the culture solution and cells in a sterile space such as a clean bench.
注入口から培養液と細胞を注入する場合、例えば、培養液及び細胞を入れたシリンジを注入口のジョイントに差し込んだ後、ジョイントを開き、培養液と細胞を注入し、注入後は、ジョイントを閉じ、シリンジを抜き取ればよい。これを手動で行っても、送液ポンプなどを用いて機械的に自動で行ってもよい。 When injecting the culture solution and cells from the inlet, for example, after inserting the syringe containing the culture solution and cells into the joint of the injection port, open the joint and inject the culture solution and cells. Close and remove the syringe. This may be performed manually or mechanically automatically using a liquid feed pump or the like.
培養液の量は特に限定されないが、容器の底部が通気性ポリエチレンフィルムで形成されていることから、容器内に空気層を設けることは必須でない。細胞の量や濃度は、細胞の種類等により適宜調整すればよい。 The amount of the culture solution is not particularly limited, but it is not essential to provide an air layer in the container because the bottom of the container is formed of a breathable polyethylene film. The amount and concentration of cells may be appropriately adjusted depending on the type of cells.
ＩＩ−２．培養液の交換方法について
培養液の交換は、例えば、次のような方法で行うことができる。
１）クリーンベンチなどの無菌空間で容器上部を開放し、古い培養液をピペット等で吸い取り、替わって新しい培養液をピペット等で流し込み、その後フィルム等で上部を貼着し、容器を密封することにより培養液を交換する方法
２）密封容器の側壁に設けた注入口から新しい培養液を注入し、排出口から古い培養液を排出する方法
中でも、簡便でより雑菌等の混入を防ぐことができる、上記２のような、注入口と排出口とから培養液の交換を行う方法が好ましい。そうすることにより、クリーンベンチなどの無菌空間で培養液の交換を行う必要は必ずしもない。
II-2. About the exchange method of a culture solution The exchange of a culture solution can be performed by the following methods, for example.
1) Open the upper part of the container in an aseptic space such as a clean bench, suck up the old culture solution with a pipette, etc., and pour the new culture solution with a pipette instead, and then stick the upper part with a film etc. and seal the container. 2) Method of exchanging culture medium by 2) Method of injecting new culture medium from the inlet provided on the side wall of the sealed container and discharging old culture medium from the outlet. The method of exchanging the culture solution from the inlet and the outlet as described in 2 above is preferable. By doing so, it is not always necessary to exchange the culture solution in a sterile space such as a clean bench.
培養液の交換を注入口と排出口とから行う場合、注入口に培養液の入ったシリンジを、排出口に空のシリンジを差し込み、次いで、注入口及び排出口のジョイントを開き、培養液の入ったシリンジを押し込むと同時に、空のシリンジを引けばよい。これにより、容器内に新しい培養液が封入され、古い培養液は空のシリンジ中に回収される。最後に、注入口及び排出口のジョイントを閉じ、シリンジを抜けばよい。これを手動で行っても、送液ポンプなどを用いて機械的に自動で行ってもよい。 When exchanging the culture solution from the inlet and the outlet, insert the syringe containing the culture solution into the inlet and the empty syringe into the outlet, then open the inlet and outlet joints, The empty syringe can be pulled at the same time as the inserted syringe is pushed in. Thereby, a new culture solution is enclosed in a container and an old culture solution is collect | recovered in an empty syringe. Finally, the inlet and outlet joints can be closed and the syringe removed. This may be performed manually or mechanically automatically using a liquid feed pump or the like.
自動で培養液を交換する場合、送液ポンプ等の培養液を供給する能力を有する装置を注入口に接続し、排出口を廃液タンク等に接続することにより行うことができる。このとき、一定の速度で培養液を供給する能力を有する装置を接続し、連続して培養液の注入と排出を行えば、より人体の環境に近い状態で細胞の培養を行うことができる。 When the culture medium is automatically exchanged, it can be performed by connecting a device having a capability of supplying a culture medium such as a feeding pump to the inlet and connecting the outlet to a waste tank or the like. At this time, if a device capable of supplying a culture solution at a constant rate is connected and the culture solution is continuously injected and discharged, cells can be cultured in a state closer to the human environment.
本発明容器は、容器の底部が通気性ポリエチレンフィルムで形成されており、容器底部を介して培養液や細胞に酸素や二酸化炭素を取り入れることができる。そのため、雑菌等の混入を防ぐのに最適な密封状態で細胞を培養することができることから、本発明容器は細胞の培養を行うのに有用である。また、容器側壁に培養液交換用の又は細胞注入用の注入口と排出口とを設ければ、簡便な方法で培養液と細胞の注入、また培養液の交換を行うことができ、そのような本発明容器は細胞の培養を行うのにより有用である。 In the container of the present invention, the bottom of the container is formed of a breathable polyethylene film, and oxygen and carbon dioxide can be taken into the culture solution and cells through the container bottom. Therefore, the container of the present invention is useful for culturing cells because cells can be cultured in an optimally sealed state to prevent contamination with bacteria and the like. Moreover, if an inlet and outlet for exchanging the culture medium or for injecting cells are provided on the side wall of the container, the culture medium and cells can be injected and the culture medium can be exchanged by a simple method. The container of the present invention is more useful for culturing cells.
１・・・底部
２・・・側壁
３・・・上部
４・・・注入口又は排出口
５・・・台座部
６・・・空気穴
７・・・支柱部
８・・・顕微鏡観察用の窓
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017170335A1 (en) * | 2016-03-31 | 2017-10-05 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | Cell culture vessel, support jig for cell culture vessel and cell culture method |
| JP2017184716A (en) * | 2016-03-31 | 2017-10-12 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | Cell culture containers, supporting jigs for cell culture containers, and cell culture methods |
| EP3842526A4 (en) * | 2018-08-20 | 2022-05-25 | I Peace, Inc. | Method for cultivating or inducing cells |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1128083A (en) * | 1997-07-11 | 1999-02-02 | Menicon Co Ltd | Container for culturing cell |
| JP2003079360A (en) * | 2001-07-02 | 2003-03-18 | Yamanashi Tlo:Kk | Culture vessel for cell and method for culturing cell |
| JP2006262876A (en) * | 2005-03-25 | 2006-10-05 | Nipro Corp | Culture bag, method for storing culture medium and method for culturing cell |
-
2014
- 2014-06-25 JP JP2014130257A patent/JP2016007170A/en active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1128083A (en) * | 1997-07-11 | 1999-02-02 | Menicon Co Ltd | Container for culturing cell |
| JP2003079360A (en) * | 2001-07-02 | 2003-03-18 | Yamanashi Tlo:Kk | Culture vessel for cell and method for culturing cell |
| JP2006262876A (en) * | 2005-03-25 | 2006-10-05 | Nipro Corp | Culture bag, method for storing culture medium and method for culturing cell |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017170335A1 (en) * | 2016-03-31 | 2017-10-05 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | Cell culture vessel, support jig for cell culture vessel and cell culture method |
| JP2017184716A (en) * | 2016-03-31 | 2017-10-12 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | Cell culture containers, supporting jigs for cell culture containers, and cell culture methods |
| KR20180098407A (en) * | 2016-03-31 | 2018-09-03 | 도요세이칸 그룹 홀딩스 가부시키가이샤 | Cell culture container, support jig for cell culture container and cell culture method |
| CN108699500A (en) * | 2016-03-31 | 2018-10-23 | 东洋制罐集团控股株式会社 | The support fixture and cell culture processes of cell culture container, cell culture container |
| KR20200140948A (en) * | 2016-03-31 | 2020-12-16 | 도요세이칸 그룹 홀딩스 가부시키가이샤 | Cell culture vessel, support jig for cell culture vessel and cell culture method |
| KR102222874B1 (en) | 2016-03-31 | 2021-03-03 | 도요세이칸 그룹 홀딩스 가부시키가이샤 | Cell culture vessel, support jig for cell culture vessel, and cell culture method |
| JP2021118749A (en) * | 2016-03-31 | 2021-08-12 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | Cell culture containers, supporting jigs for cell culture containers, and cell culture methods |
| KR102328979B1 (en) | 2016-03-31 | 2021-11-18 | 도요세이칸 그룹 홀딩스 가부시키가이샤 | Cell culture vessel, support jig for cell culture vessel and cell culture method |
| CN108699500B (en) * | 2016-03-31 | 2022-08-16 | 东洋制罐集团控股株式会社 | Cell culture container, support jig for cell culture container, and cell culture method |
| US11414637B2 (en) | 2016-03-31 | 2022-08-16 | Toyo Seikan Group Holdings, Ltd. | Cell culture vessel, support jig for cell culture vessel and cell culture method |
| EP3842526A4 (en) * | 2018-08-20 | 2022-05-25 | I Peace, Inc. | Method for cultivating or inducing cells |
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