JP2015532827A - 鉄を含有する栄養補助剤 - Google Patents
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Abstract
Description
糸状菌の農業又は食品加工の副産物に存在する鉄を蓄積するために、農業の副産物又は食品加工の副産物中で糸状菌を培養する工程と、
少なくとも約100mg/kgの鉄を有する真菌バイオマスを含有する栄養補助剤を得るために、糸状菌を採収する工程と、
を含む方法が提供される。
[044] 農業及び食品加工から生成される副産物が多くあるが、そのすべてが自然の状態で鉄が豊富なわけではない。表2は、鉄が豊富な真菌生成物の生成に使用することができる北米の鉄豊富な農業副産物の一部を列挙している。小麦ふすま及び外皮、籾殻、モロコシの外皮、及びジャガイモの皮などの他の副産物にも可能性がある。
[047] 農業の副産物又は食品加工の副産物を使用する好ましい方法の一般的工程を図1に示す。
[048] 使用した米コウジ菌の株は、醤油及び味噌の製造に商業的に承認され、採用されているものと同じ株であり、Chinese Center of Industrial Culture Collection (CICC)からの米コウジ菌2355及び40151、American Type Culture Collection (ATCC)からの米コウジ菌22787、及びCICCからのクエン酸生成用黒色コウジ菌変種2206及び10557、及びATCCからのフィターゼ生成用黒色コウジ菌66876などであった。
[049] 米コウジ菌及び黒色コウジ菌の株を、粉砕した全トウモロコシ、小麦ふすま、ダイズ皮、ビート廃糖蜜、サトウキビ及び果汁の加工の副産物、並びにデンプン、糖及びタンパク質で構成された任意の他の食品の加工の副産物で構成された培地中で培養し、維持した。このような原料は、アミラーゼ、グルコアミラーゼ、フィターゼ及びプロテアーゼなどの酵素で前処理することができる。真菌培地に無機鉄塩を添加し、このような無機鉄塩は、培地1リットル当たり300〜2000mgの鉄元素の濃度の硫酸第一鉄、フマル酸第一鉄、クエン酸第一鉄、グルコン酸第一鉄、クエン酸第二鉄アンモニウム、クエン酸第一鉄及びエチレンジアミン四酢酸(EDTA)鉄などであった。
[051] 任意の適切な発酵槽又は装置で、大規模発酵を実行することができる。鉄強化バイオマスの生成には、好気条件で48〜72時間、発酵を行うことが好ましい。発酵期間に殺菌又は濾過した空気を0.5〜1.0vvmで発酵槽に給送し、成長及び収率を向上させることができる。培養物は、発酵中に攪拌するかかき混ぜることが好ましい。商業用の微生物培養では、発酵槽の空気、攪拌及び設計の組み合わせが十分理解されている。
[052] 発酵は、48〜72時間、又は28〜30℃の温度で細胞の自己分解が開始するまで実行することができる。インキュベーションの時間及び温度は、使用する真菌のタイプ及び株によって変化することが認識される。
[054] 糸状菌などの真菌は、バイオアベイラビリティが相対的に低く、細胞毒性が強力な鉄をさらに取り込む能力を有する。ヒトの食物に可溶性無機鉄塩を直接補充すると、細胞毒性反応をもたらすことがあることに留意されたい。したがって、真菌を使用して無機鉄塩を取り込み、有機形態に変換すると、鉄塩の直接の摂取の副作用を軽減することができる。
[056] 発酵後、遠心分離器、ベルトプレスなどの脱水機により、鉄を含有する真菌バイオマスを採収することができる。水及び/又は0.01Mの塩酸などの緩酸での洗浄により、無機鉄の残留物を除去することができる。次に、通風乾燥機、流動床乾燥機などを使用して、鉄強化真菌生成物を60〜80℃で乾燥することができる。生成物の最終的な水分は約10%未満であることが好ましい。
[057] 例えば、化合物は経口投与用に製剤化することができる。特定の製剤タイプの非限定的な例には、錠剤、カプセル、カプレット、粉末、顆粒、アンプル、バイアル、すぐ使用できる溶液又は懸濁液、飲料、及び凍結乾燥物が含まれる。錠剤又はカプセルなどの固体製剤は、任意の数の適切で許容可能な賦形剤又は担体を含有することができる。
[058] 栄養補助剤は、少なくとも約100mg/kgの鉄を有する真菌バイオマスを含む。栄養補助剤は通常、約100〜40000mg/kgの鉄を含有する。補助剤は、少なくとも約100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000、18000、19000、20000、21000、22000、23000、24000、25000、26000、27000、28000、29000、30000、31000、32000、33000、34000、35000、36000、37000、38000、39000、又は40000mg/kgの鉄を有することができる。
実施例1
[064] 主要な副産物である濃縮トウモロコシ蒸留可溶物質(シロップ)は、エタノールを生成するトウモロコシの乾燥粉砕から産生される。発酵方法では、トウモロコシ澱粉をエタノールに変換するが、鉄などのトウモロコシからの非デンプン栄養素の主要部分を蒸留廃液として残す。次に、蒸留廃液を濃縮してシロップにし、主に動物の飼料用に使用する。
[070] 補助剤として鉄強化酵母生成物を産生するために様々な酵母を使用できることが報告されてきたが、鉄強化生成物の生成に米コウジ菌種(Aspergillus oryzae var.)は使用されてこなかった。
[074] 鉄補助剤は高い鉄含有量を有することが好ましいが、このような鉄をヒトが吸収できることがさらに重要である。鉄強化真菌生成物(Ao鉄)は、トウモロコシ、小麦ふすま及びダイズ皮を使用し、図2に示した方法で生成した。最終生成物の鉄含有率は、未処理成分及び発酵の最適化の様々な組み合わせにより2〜4%の範囲であった。Ao鉄を粉砕して粉末にし、Glahn(Glahn, R.P.他、1998、Caco-2 cell ferritin formation predicts nonradiolabeled food iron availability in an In Vitro digestion/Caco-2 cell culture model)によって詳述されたインビトロ消化作用/Caco−2細胞培養モデル(細胞試験)に適用した。培養細胞であるCaco−2細胞は、ATCCから17継代の細胞を得て、25〜33継代で実験に使用した。細胞は、コラーゲン処理した6ウェルプレートに1.9×105の密度で接種した。細胞は、ウシ胎児血清10%イーグル培地で増殖させ、5%CO2の環境中で37℃に維持した。培地は2日毎に交換した。鉄強化真菌のインビトロ消化は、これもGlahnに詳述された工程に従った。細胞試験では、消化した鉄生成物でインキュベートした細胞中のフェリチン(鉄含有タンパク質)形成を測定し、したがってヒトの鉄利用能の予測量として使用されてきた。細胞試験の基本的工程は、試料の酵素消化(ペプシン及びパンクレアチン胆汁)、(ヒトの大腸からの)Caco−2細胞層での培養、及び細胞中のフェリチン(鉄含有タンパク質)形成の測定である。酵素消化の前に、Ao鉄を酸性化水(pH=2)及びEDTAで洗浄し、細胞構造の外側に無機塩の残留物がある場合はすべて除去した。
[077] 食品等級の鉄補助剤を生成するために、米コウジ菌ATCC22787を選択し、コーンフラワー、ダイズ皮及び小麦ふすまで作成した培地中で培養した。コーンフラワー及び小麦ふすまをアミラーゼ、グルコアミラーゼ、フィターゼの酵素で処理した。培地中の全フラワーとふすまの初期混合率は10〜25%の範囲であった。アミラーゼを、オートクレーブ又はジェットクッキングを介して6程度の中性のpHで105〜107℃の温度にて添加し、次に2時間、95℃に保持した。次の工程は、糖化のためにグルコアミラーゼを適用することである。最後に、フィターゼは、酵素製造業者の仕様によって要求される温度及びpHで、コーンと小麦ふすまの混合物を処理するために、必要となることも、ならないこともある。ダイズ皮を使用する場合は、プロテアーゼを酵素製造業者が要求するpHにて水中でダイズ皮に適用することが好ましい方法である。酸性範囲の最適pHを有するプロテアーゼが好ましい。酵素処理の後、これらの成分の混合物を形成し、真菌の予備培養及び生成物培地の両方に使用することができる。14Lの攪拌タンク発酵槽では、図1に示すように、pH4〜6及び28℃で48〜72時間発酵を実行した。2層のナイロン布で作成したフィルタを使用し、ラボラトリにて真菌バイオマスを採収し、生成物を炉内で60℃にて一晩乾燥させた。最終的な鉄強化生成物真菌の組成を表8に示す。
[079] セレン及び亜鉛などの他の無機ミネラルを使用してセレン又は亜鉛強化酵母を生成することが報告されてきたが、糸状菌の使用は報告されていない。両方の強化形態は、無機物の同等物より良好な機能特性を提供する。同様の方法(図2)を使用して、亜セレン酸ナトリウム又は硫酸亜鉛で強化した米コウジ菌を増殖させた。真菌バイオマスのミネラル含有量と比較できるように、いずれの無機塩の用量も、塩の濃度ではなく元素の濃度として計算した。真菌生成物中の選択したミネラルの含有量の増加を表10に列挙するが、これは米コウジ菌を使用して有機セレン又は亜鉛強化生成物を生成できることを実証する。しかしながら、セレンの用量が15mg/Lまで増加するにつれ、真菌収率は大幅に低下した。しかしながら、亜鉛は真菌収率を増加させ、添加した亜鉛元素の67%超が有機亜鉛に変換された。
Claims (23)
- 少なくとも100mg/kgの鉄を有する真菌バイオマスを含む、栄養補助剤。
- 前記真菌バイオマスが、米コウジ菌又は黒色コウジ菌から選択された糸状菌から得られる、請求項1に記載の栄養補助剤。
- 200〜40000mg/kgの鉄を有する、請求項1又は2に記載の栄養補助剤。
- 200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000、18000、19000、20000、21000、22000、23000、24000、25000、26000、27000、28000、29000、30000、31000、32000、33000、34000、35000、36000、37000、38000、39000、又は40000mg/kgの鉄を有する、請求項3に記載の栄養補助剤。
- 硫酸第一鉄、フマル酸第一鉄、クエン酸第一鉄、グルコン酸第一鉄、クエン酸第二鉄アンモニウム、クエン酸第一鉄、又はEDTA鉄を含有する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の栄養補助剤。
- さらに希釈剤又は補成分を含有する、請求項1〜5のいずれか1項に記載の栄養補助剤。
- 前記補成分が、セレン及び亜鉛から選択される、請求項6に記載の栄養補助剤。
- 10〜400mg/kgのセレン、及び20〜20000mg/kgの亜鉛を含有する、請求項7に記載の栄養補助剤。
- 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390又は400mg/kgのセレンを含有する、請求項8に記載の栄養補助剤。
- 20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000、18000、19000又は20000mg/kgの亜鉛を含有する、請求項8に記載の栄養補助剤。
- 粉末、溶液、飲料、カプセル、錠剤、又はカプレットとして配合される、請求項1〜10のいずれか1項に記載の栄養補助剤。
- 鉄を含有する栄養補助剤を形成するプロセスであって、
農業又は食品加工の副産物中に存在する糸状菌中に鉄を蓄積するために、前記農業副産物又は食品加工の副産物中で糸状菌を培養することと、
少なくとも100mg/kgの鉄を有する真菌バイオマスを含有する栄養補助剤を形成するために、前記糸状菌を採収することと、
を含む、プロセス。 - 前記糸状菌が、米コウジ菌又は黒色コウジ菌から選択される、請求項12に記載のプロセス。
- 前記農業副産物が、濃縮トウモロコシ可溶性物質(シロップ)、トウモロコシ、小麦及びダイズプロセスの副産物である、請求項12又は13に記載のプロセス。
- 前記農業副産物がシロップである、請求項14に記載のプロセス。
- 前記食品加工の副産物が、コーンスティープリカー、コーン蒸留廃液、ダイズホエー、サトウキビ及びビート糖蜜、ダイズ皮及び小麦ふすま又は小麦外皮から選択される、請求項12又は13に記載のプロセス。
- 前記栄養補助剤の鉄含有量をさらに増加させるために、前記糸状菌の増殖中に追加の無機鉄塩及び他の高鉄化合物を添加する、請求項12〜16のいずれか1項に記載のプロセス。
- 前記栄養補助剤が、200〜40000mg/kgの鉄を含有する、請求項12〜16のいずれか1項に記載のプロセス。
- 前記栄養補助剤が、希釈剤又は補成分をさらに含有する、請求項12〜19のいずれか1項に記載のプロセス。
- 前記補成分が、セレン及び亜鉛から選択される、請求項19に記載のプロセス。
- 前記栄養補助剤が、10〜400mg/kgのセレン、及び20〜20000mg/kgの亜鉛を含有する、請求項20に記載のプロセス。
- 請求項12〜21のいずれか1項に記載のプロセスによって生成される鉄を含有する、栄養補助剤。
- 粉末、溶液、濃縮物、飲料、カプセル、錠剤、又はカプレットとして配合される、請求項22に記載の栄養補助剤。
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