JP2015112041A - Pancreatic fistula model animal - Google Patents
Pancreatic fistula model animal Download PDFInfo
- Publication number
- JP2015112041A JP2015112041A JP2013255010A JP2013255010A JP2015112041A JP 2015112041 A JP2015112041 A JP 2015112041A JP 2013255010 A JP2013255010 A JP 2013255010A JP 2013255010 A JP2013255010 A JP 2013255010A JP 2015112041 A JP2015112041 A JP 2015112041A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- model animal
- pancreatic
- pancreatic fistula
- ascites
- pancreas
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
本発明は、膵液瘻モデル動物に関する。 The present invention relates to a pancreatic fistula model animal.
膵液瘻は、膵臓手術（膵頭十二指腸切除術、膵体尾部切除術）、下部胆管癌手術（膵頭十二指腸切除術）、胃癌手術（幽門側胃切除、胃全摘術のリンパ節廓清時）などの手術の合併症であり、仮性動脈瘤や腹腔内膿瘍の原因となり得る。膵液瘻を予防することは、外科手術の一つの命題である。これまで、様々な膵液瘻予防方法が検討されてきたが、全て実臨床においてヒトに投与されてきた。イヌやブタを用いた膵液瘻モデル作製を試みた例は３０年以上前の文献に散見されるものの、ラットなどの小動物の実験は皆無に等しい。しかも、ヒトへの投与の安全性優先のため、他用途の薬剤の流用で膵液瘻を防止しようと試みられており、いまだ膵液瘻予防に有用な薬剤はなく、膵液瘻に特化した薬剤はない。 For pancreatic fistula, pancreatic surgery (pancreatoduodenectomy, pancreatic body tail resection), lower bile duct cancer surgery (pancreatoduodenectomy), gastric cancer surgery (pyloric gastrectomy, lymph node dissection for total gastrectomy), etc. And can cause pseudoaneurysms and intraabdominal abscesses. Preventing pancreatic fistula is a proposition of surgery. So far, various methods for preventing pancreatic fistula have been studied, but all have been administered to humans in clinical practice. Examples of attempts to create pancreatic fistula models using dogs and pigs are found in literature more than 30 years ago, but there are no experiments with small animals such as rats. Moreover, in order to give priority to the safety of administration to humans, attempts have been made to prevent pancreatic fistula by diverting other drugs, and there are still no drugs useful for preventing pancreatic fistula. Absent.
膵液瘻の治療は良いモデルがなかったことから、これまでは別目的で開発された薬の適応拡大としての臨床的な試験がいくつか行われており、例えばホルモン製剤のサンドスタチンの投与や、創傷治癒ゲルなどのポリマーの適用が知られている。 Due to the lack of a good model for the treatment of pancreatic fistula, there have been several clinical trials to expand the indication of drugs developed for other purposes, such as the administration of the hormone product sandstatin and wounds. Applications of polymers such as healing gels are known.
本発明の目的は、膵液瘻の治療に帰する動物モデルを創出し、膵液瘻の生理学的意義を解明し、膵液瘻の治療薬の簡便なスクリーニング方法を提供することにある。 An object of the present invention is to create an animal model attributed to the treatment of pancreatic fistula, to elucidate the physiological significance of pancreatic fistula, and to provide a simple screening method for a therapeutic agent for pancreatic fistula.
本発明者らは、膵液瘻のモデル実験動物として取り扱いやすい大きさのげっ歯類に注目し、当該動物の膵臓の生理学的特性を考慮して注意深く検討した結果、適切な処置を施すことにより、ヒトの膵液瘻の病態に近似した疾患モデル動物を作出することに成功し、本発明を完成させるに至った。即ち、本願発明は、以下に示す通りである。 As a result of careful examination considering the physiological characteristics of the pancreas of the animal, the present inventors focused on rodents that are easy to handle as a model experimental animal for pancreatic fistula. The present inventors have succeeded in creating a disease model animal that approximates the pathology of human pancreatic fistula, and have completed the present invention. That is, the present invention is as follows.
〔１〕 げっ歯類の膵液瘻モデル動物であって、膵尾部の切除、脾臓および大網の合併切除、膵臓と胃の切離、かつ、横行結腸間膜と膵臓の部分剥離を施行してなるモデル動物。
〔２〕 施行後１〜３日の腹水または血清中のアミラーゼ活性またはリパーゼ活性が施行前に比べて有意に上昇している〔１〕に記載のモデル動物。
〔３〕 施行後７〜１０日以内に膵液瘻が寛解する〔１〕または〔２〕に記載のモデル動物。
〔４〕 げっ歯類がラット、マウス、ハムスターまたはモルモットである〔１〕〜〔３〕のいずれか１項に記載のモデル動物。
〔５〕 げっ歯類を麻酔下に開腹し、膵尾部を切除し、脾臓および大網を合併切除し、膵臓と胃を切り離し、さらに、横行結腸間膜と膵臓を部分剥離する工程を含む、げっ歯類の膵液瘻モデル動物の作出方法。
〔６〕 げっ歯類がラット、マウス、ハムスターまたはモルモットである〔５〕に記載の作出方法。
〔７〕 〔１〕〜〔４〕のいずれか１項に記載のモデル動物に被験物質を投与する工程、
被験物質を投与したモデル動物における腹水または血中のアミラーゼ活性を、非投与モデル動物または対照動物における腹水または血中のアミラーゼ活性と比較する工程、ならびに
比較工程により得られた結果に基づいて、膵液瘻の治療薬候補を選択する工程、
を含有する膵液瘻の治療薬のスクリーニング方法。
〔８〕 〔１〕〜〔４〕のいずれか１項に記載のモデル動物に被験物質を投与する工程、
被験物質を投与したモデル動物における膵液瘻に及ぼす影響を、非投与モデル動物における状態と比較する工程、および
比較工程により得られた結果に基づいて、膵液瘻の治療薬候補を選択する工程、
を含有する膵液瘻の治療薬のスクリーニング方法。
〔９〕 げっ歯類の膵液瘻モデル動物であって、当該動物は膵尾部、脾臓および大網の欠損、膵臓と胃との切離、および横行結腸間膜と膵臓との部分剥離を呈しており、かつ、正常の同種動物と比べて腹水または血清中のアミラーゼ活性またはリパーゼ活性が有意に上昇しているモデル動物。
〔１０〕 腹水中のアミラーゼ活性が、正常の同種動物と比べて約２〜２００倍上昇している〔９〕に記載のモデル動物。
〔１１〕 腹水中のリパーゼ活性が、正常の同種動物と比べて約２〜５０倍上昇している〔９〕または〔１０〕に記載のモデル動物。
〔１２〕 げっ歯類がラット、マウス、ハムスターまたはモルモットである〔９〕〜〔１１〕のいずれか１項に記載のモデル動物。
[1] A rodent pancreatic fistula model animal with pancreatic tail resection, splenic and omental resection, pancreatic and gastric resection, and transverse mesocolon and pancreatic partial detachment Model animal.
[2] The model animal according to [1], wherein amylase activity or lipase activity in ascites or serum from 1 to 3 days after the operation is significantly increased compared to before the operation.
[3] The model animal according to [1] or [2], wherein the pancreatic fistula remits within 7 to 10 days after the execution.
[4] The model animal according to any one of [1] to [3], wherein the rodent is a rat, mouse, hamster or guinea pig.
[5] The method includes the steps of laparotomy under anesthesia, excising the pancreatic tail, severing and excising the spleen and omentum, separating the pancreas and stomach, and further exfoliating the transverse mesocolon and pancreas. A method for producing rodent pancreatic fistula model animals.
[6] The production method according to [5], wherein the rodent is a rat, mouse, hamster or guinea pig.
[7] A step of administering a test substance to the model animal according to any one of [1] to [4],
Ascites fluid or blood amylase activity in a model animal to which a test substance is administered is compared with ascites fluid or blood amylase activity in a non-administered model animal or a control animal, and on the basis of the results obtained by the comparison step, pancreatic juice Selecting an acupuncture drug candidate,
For screening a therapeutic agent for pancreatic fistula containing ceramide.
[8] A step of administering a test substance to the model animal according to any one of [1] to [4],
A step of comparing an effect on pancreatic fistula in a model animal to which a test substance is administered with a state in a non-administered model animal, and a step of selecting a therapeutic drug candidate for pancreatic fistula based on the result obtained by the comparison step,
For screening a therapeutic agent for pancreatic fistula containing ceramide.
[9] A rodent pancreatic fistula model animal, which exhibits pancreatic tail, spleen and omental defects, dissection of the pancreas and stomach, and partial detachment of the transverse mesocolon and pancreas A model animal in which amylase activity or lipase activity in ascites or serum is significantly increased as compared with normal homologous animals.
[10] The model animal according to [9], wherein the amylase activity in ascites is increased by about 2 to 200 times compared to normal homologous animals.
[11] The model animal according to [9] or [10], wherein the lipase activity in ascites is about 2 to 50 times higher than that of normal homologous animals.
[12] The model animal according to any one of [9] to [11], wherein the rodent is a rat, mouse, hamster or guinea pig.
本発明の膵液瘻モデル動物によると、ヒトの膵液瘻の病態に即した症状を呈するので、ヒト膵液瘻の治療薬または治療方法の探索に有効に供することができる。また、本発明の膵液瘻モデル動物は、げっ歯類の小動物であるので、取り扱いが容易で、飼育コストも低く、スクリーニングに供する薬剤の量も節約することができる。さらに、本発明の膵液瘻モデル動物は、施行後７〜１０日以内に膵液瘻が寛解するので、観察期間を短期に設定することができる。 According to the pancreatic fistula model animal of the present invention, since it exhibits symptoms in accordance with the pathological condition of human pancreatic fistula, it can be effectively used for searching for therapeutic agents or treatment methods for human pancreatic fistula. In addition, since the pancreatic fistula model animal of the present invention is a small rodent animal, it is easy to handle, has a low breeding cost, and can save the amount of drug used for screening. Furthermore, in the pancreatic fistula model animal of the present invention, since the pancreatic fistula is ameliorated within 7 to 10 days after the operation, the observation period can be set to a short period.
本発明は、げっ歯類の膵液瘻モデル動物を提供する。本発明のモデル動物は、膵臓の少なくとも一部、好ましくは膵尾部を切除することにより得られるものである。 The present invention provides a rodent pancreatic fistula model animal. The model animal of the present invention is obtained by excising at least a part of the pancreas, preferably the pancreatic tail.
本発明においてげっ歯類とは、実験動物として利用可能なげっ歯類であれば特に限定されるものではなく、ラット、マウス、ハムスター、モルモット等があげられるが、取り扱いの容易さおよび評価対象の薬物の使用量を減らすことができるという観点から、体重の軽いげっ歯類が好ましい。ラットを例にすると、体重２００〜５００ｇが例示される。 In the present invention, the rodent is not particularly limited as long as it is a rodent that can be used as an experimental animal, and examples thereof include rats, mice, hamsters, guinea pigs, and the like. From the viewpoint of reducing the amount of drug used, rodents with a light weight are preferred. Taking a rat as an example, a weight of 200 to 500 g is exemplified.
膵液瘻とは、膵臓手術（膵頭十二指腸切除術、膵体尾部切除術）、下部胆管癌手術（膵頭十二指腸切除術）、胃癌手術（幽門側胃切除、胃全摘術のリンパ節廓清時）などの手術の合併症であり、術後３日目に測定された腹腔内ドレーンの排液中アミラーゼ濃度が血清中濃度の３倍以上の値を示した場合を術後膵液瘻という。
膵液瘻は、入院期間の延長または再手術の原因となったり、仮性動脈瘤や腹腔内膿瘍の原因にもなりうる。
Pancreatic fistula refers to pancreatic surgery (pancreatoduodenectomy, pancreatic body tail resection), lower bile duct cancer surgery (pancreatoduodenectomy), gastric cancer surgery (pyloric gastrectomy, lymph node dissection for total gastrectomy), etc. When the amylase concentration in the drainage of the intraperitoneal drain measured on the third day after the operation shows a value more than 3 times the serum concentration, it is called postoperative pancreatic fistula.
Pancreatic fistula can cause prolonged hospital stay or reoperation, and can cause pseudoaneurysms and intraabdominal abscesses.
（膵液瘻モデル動物）
本発明の膵液瘻モデル動物における「膵液瘻」は、膵臓の少なくとも一部の切除、および腹水もしくは血清のアミラーゼ値またはリパーゼ値の上昇を伴う病態をいう。膵臓の少なくとも一部の切除は、致死率が低く寛解に達しやすいという観点から、膵尾部の切除が好ましい。
(Pancreatic fistula model animal)
The “pancreatic fistula” in the pancreatic fistula model animal of the present invention refers to a pathological condition involving excision of at least a part of the pancreas and an increase in ascites or serum amylase value or lipase value. The excision of at least a part of the pancreas is preferably an excision of the pancreatic tail from the viewpoint of low mortality and easy remission.
本発明のモデル動物は、膵尾部の欠損に加えて、脾臓および大網の欠損、膵臓と胃との切離、および横行結腸間膜と膵臓との部分剥離を呈していることが好ましく、かつ、正常の同種動物と比べて腹水中のアミラーゼ活性またはリパーゼ活性が有意に上昇している動物である。 The model animal of the present invention preferably exhibits a spleen and omental defect, a dissection of the pancreas and the stomach, and a partial detachment between the transverse mesocolon and the pancreas in addition to the defect of the pancreatic tail, and An animal having significantly increased amylase activity or lipase activity in ascites compared to normal homologous animals.
膵尾部を欠損しているげっ歯類が本発明のモデル動物として使用できるか否かは、後述するアミラーゼ活性（腹水中または血清中）またはリパーゼ活性（腹水中または血清中）に基づいて選択することができる。 Whether a rodent lacking the pancreatic tail can be used as a model animal of the present invention is selected based on amylase activity (ascites or serum) or lipase activity (ascites or serum) described below. be able to.
本発明のモデル動物は、腹水中のアミラーゼ活性が、正常の同種動物と比べて約２〜２００倍上昇していることが好ましい。 In the model animal of the present invention, it is preferable that the amylase activity in ascites is increased by about 2 to 200 times compared to normal homologous animals.
本発明のモデル動物は、腹水中のリパーゼ活性が、正常の同種動物と比べて約２〜５０倍上昇していることが好ましい。 In the model animal of the present invention, it is preferable that the lipase activity in ascites is about 2 to 50 times higher than that of normal homologous animals.
膵尾部を欠損し、さらには脾臓および大網の欠損、膵臓と胃との切離、および横行結腸間膜と膵臓との部分剥離を呈しているげっ歯類が膵液瘻モデル動物として供されるか否かは、施行後１日目に、血清もしくは腹水中のアミラーゼ活性またはリパーゼ活性を測定し、施行前の活性に比べて有意に上昇していることを確認することにより、決定することができる。また、比較対象として、同種のラットの正常値を別途調べて基準値として設定しておくこと望ましい。 A rodent with deficient pancreatic tail, spleen and omental defect, dissection of the pancreas and stomach, and partial detachment of the transverse mesocolon and pancreas is provided as a pancreatic fistula model animal It can be determined by measuring the amylase activity or lipase activity in serum or ascites on the first day after the procedure, and confirming that it is significantly increased compared to the activity before the procedure. it can. Further, as a comparison target, it is desirable to separately examine normal values of the same kind of rats and set them as reference values.
血清もしくは腹水中のアミラーゼ（α−アミラーゼ）活性は、2-クロロ-4-ニトロフェニル-4-ガラクトピラノシルマルトシド（Gal-G2-CNP）を基質とし、検体中のアミラーゼにより加水分解し、遊離した2-クロロ-4-ニトロフェニル（CNP）の増加速度を分光光学的に測定することにより、アミラーゼ活性（単位Ｕ／Ｌ）として求める。
上記アミラーゼ活性の測定には、市販のシカリキッド−Ｎ ＡＭＹ（関東化学株式会社）を好適に使用することができる。
The amylase (α-amylase) activity in serum or ascites is hydrolyzed by amylase in the sample using 2-chloro-4-nitrophenyl-4-galactopyranosyl maltoside (Gal-G2-CNP) as a substrate. The increase rate of free 2-chloro-4-nitrophenyl (CNP) is measured spectrophotometrically to obtain amylase activity (unit: U / L).
For the measurement of the amylase activity, commercially available Shikari Liquid-NAMY (Kanto Chemical Co., Inc.) can be suitably used.
血清もしくは腹水中のリパーゼ活性は、１,２-o-ジラウリル-rac-グリセロ-３-グルタル酸-(６-メチル-レゾルフィン)エステルを基質とし、検体中のリパーゼによる酵素反応により１,２-o-ジラウリル-rac-グリセロールとグルタル酸-(６-メチル-レゾルフィン)エステルに分解し、生成したグルタル酸-(６-メチル-レゾルフィン)エステルをアルカリ条件下で自発的に加水分解し、グルタル酸および赤色色素を生じさせて当該色素の吸光度を測定することにより、リパーゼ活性（単位Ｕ／Ｌ）として求める。
上記リパーゼ活性の測定には、市販のリキテック（登録商標）リパーゼカラーII（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社）を好適に使用することができる。
The lipase activity in serum or ascites is 1,2-o-dilauryl-rac-glycero-3-glutaric acid- (6-methyl-resorufin) ester as a substrate, and 1,2- by enzyme reaction with lipase in the sample. Decomposes into o-dilauryl-rac-glycerol and glutaric acid- (6-methyl-resorufin) ester, and spontaneously hydrolyzes the resulting glutaric acid- (6-methyl-resorufin) ester under alkaline conditions. Then, a red pigment is produced, and the absorbance of the pigment is measured to obtain the lipase activity (unit: U / L).
For the measurement of the lipase activity, commercially available Liquitec (registered trademark) Lipase Color II (Roche Diagnostics Inc.) can be suitably used.
本発明のモデル動物は、施行後１〜３日の、血清もしくは腹水中のアミラーゼ活性またはリパーゼ活性が施行前に比べて有意に上昇していることが望ましい。したがって、本発明のモデル動物を用いて、施行後１〜３日以内に膵液瘻のスクリーニングを完了することができる。 In the model animal of the present invention, it is desirable that the amylase activity or lipase activity in serum or ascites is significantly increased from 1 to 3 days after the operation compared to before the operation. Therefore, screening of pancreatic fistula can be completed within 1 to 3 days after the execution using the model animal of the present invention.
本発明のモデル動物は、施行後１〜３日の腹水中のアミラーゼ活性が基準範囲以上、例えば、５００Ｕ／Ｌ以上であることが望ましい。アミラーゼ活性が高値を示すことにより、スクリーニング方法に供した場合に、スクリーニング対象の被験物質または手法の効果の判定が容易になる。 In the model animal of the present invention, it is desirable that the amylase activity in ascites from 1 to 3 days after the operation is not less than the reference range, for example, 500 U / L or more. When the amylase activity shows a high value, when subjected to a screening method, it becomes easy to determine the effect of the test substance or technique to be screened.
本発明のモデル動物は、施行後１〜３日の腹水中のリパーゼ活性が基準範囲以上、例えば、５０Ｕ／Ｌ以上であることが望ましい。リパーゼ活性が高値を示すことにより、スクリーニング方法に供した場合に、スクリーニング対象の被験物質または手法の効果の判定が容易になる。 As for the model animal of this invention, it is desirable that the lipase activity in the ascites for 1 to 3 days after the implementation is not less than the reference range, for example, not less than 50 U / L. When the lipase activity shows a high value, when subjected to a screening method, it becomes easy to determine the effect of the test substance or technique to be screened.
本発明のモデル動物は、施行後７〜１０日以内に膵液瘻が寛解することが望ましい。本発明のモデル動物を用いたスクリーニング系においては、奏功を示す薬剤または手法による寛解の時期が７日以前、好ましくは３日以前に早まる可能性が高く、その場合に、当該薬剤または手法が膵液瘻に対して奏功したと判断することができる。 In the model animal of the present invention, it is desirable that the pancreatic fistula is in remission within 7 to 10 days after the execution. In the screening system using the model animal of the present invention, it is highly likely that the time of remission by a drug or technique showing a response will be accelerated before 7 days, preferably before 3 days. It can be judged that he has succeeded against the spear.
（膵液瘻モデル動物の作出方法）
本発明のげっ歯類の膵液瘻モデル動物の作出方法は、げっ歯類を麻酔下に開腹し、膵尾部を切除し、脾臓および大網を合併切除し、膵臓と胃を切り離し、さらに、横行結腸間膜と膵臓を部分剥離する工程を含むことを特徴とする。
(Method for producing pancreatic fistula model animal)
The method for producing a rodent pancreatic fistula model animal of the present invention is to open a rodent under anesthesia, excise the pancreatic tail, jointly excise the spleen and omentum, separate the pancreas and stomach, and further traverse The method includes the step of partially exfoliating the mesocolon and the pancreas.
本発明のモデル動物の作出方法を、ラットを例にして説明する。ラット以外のげっ歯類については、ラットの手技を参照して、体重や週齢に応じて同様に実施することができる。
まず、通常の条件下で飼育したラット（体重約200〜500ｇ）に全身麻酔を施す。麻酔の条件は、例えば、塩酸ケタミン（90mg/kg）で鎮静し、塩酸キシラジン（10mg/kg）で鎮痛を行う。
The method for producing a model animal of the present invention will be described using a rat as an example. For rodents other than rats, the procedure can be similarly performed according to body weight and age by referring to rat procedures.
First, general anesthesia is given to rats (weight approximately 200 to 500 g) reared under normal conditions. The condition of anesthesia is, for example, sedation with ketamine hydrochloride (90 mg / kg) and analgesia with xylazine hydrochloride (10 mg / kg).
1）ラットを上腹部正中切開で開腹し、胃を拳上し、電気メスを用いて、大網を胃付着部より脾臓へ向け切除し、胃と脾間膜を切り離す。また、大網を十二指腸手前まで十分電気メスで切り離す。 1) Open the rat through a midline incision in the upper abdomen, raise the stomach, use an electric scalpel to resect the omentum from the stomach adhering part to the spleen, and separate the stomach from the spleen. In addition, the omentum is sufficiently cut with an electric knife until just before the duodenum.
2）次に、横行結腸を尾側へ牽引し、電気メスを用いて、膵と横行結腸の生理的癒着を剥離する。このとき、上腸間膜静脈が十分露出するまで剥離することが望ましい。 2) Next, the transverse colon is pulled to the caudal side, and an electrosurgical knife is used to remove the physiological adhesion between the pancreas and the transverse colon. At this time, it is desirable to peel until the superior mesenteric vein is sufficiently exposed.
3）上記1）および2）の工程が終了した後、脾動静脈を剥離し、脾門部より約1.5cmの部位で電気メスを用いて焼灼して止血する。その後、脾門部より膵を3等分するライン（脾門部より約1.5cm）で膵実質をクーパーで鋭的に切り離す。この段階で、脾臓とともに膵尾側1/3および大網を一塊として摘出することができる。 3) After the above steps 1) and 2) are completed, the splenic artery and vein are detached, and cauterized with an electric scalpel at about 1.5 cm from the splenic hilum to stop the hemostasis. Then, the pancreatic parenchyma is sharply cut with a cooper along a line that divides the pancreas into three equal parts from the splenic hierarch (about 1.5 cm from the hilar spleen). At this stage, the pancreas caudal side 1/3 and omentum can be removed together with the spleen.
4）膵実質の切離後、臓器を腹腔内へ還納し、腹壁を2層で閉創し、手技を終了させる。手術後のラットは、通常の条件下で飼育することができる。 4) After excision of the pancreatic parenchyma, return the organ into the abdominal cavity, close the abdominal wall in two layers, and complete the procedure. Rats after surgery can be bred under normal conditions.
（スクリーニング方法Ｉ）
本発明のモデル動物を用いて、膵液瘻の治療薬をスクリーニングすることができ、本発明は、かかるスクリーニング方法を提供する。ここで「治療」とは、膵液瘻の治療のみならず、改善および予防をも含む概念である。
(Screening method I)
The model animal of the present invention can be used to screen a therapeutic agent for pancreatic fistula, and the present invention provides such a screening method. Here, “treatment” is a concept including not only treatment of pancreatic fistula but also improvement and prevention.
（１）本発明のモデル動物に被験物質を投与する工程
被験物質としては、いかなる公知物質および新規物質であってもよく、例えば、核酸、糖質、脂質、蛋白質、ペプチド、有機低分子化合物、有機高分子化合物（ポリマーなど）、コンビナトリアルケミストリー技術を用いて作製された化合物ライブラリー、固相合成やファージディスプレイ法により作製されたランダムペプチドライブラリー、あるいは微生物、動植物、海洋生物等由来の天然成分などがあげられる。
(1) The step of administering a test substance to the model animal of the present invention The test substance may be any known substance and novel substance, such as nucleic acids, carbohydrates, lipids, proteins, peptides, organic low molecular weight compounds, Organic polymer compounds (polymers, etc.), compound libraries prepared using combinatorial chemistry technology, random peptide libraries prepared by solid phase synthesis or phage display methods, or natural components derived from microorganisms, animals and plants, marine organisms, etc. Etc.
被験物質の投与時期は、膵液瘻モデル作出前、膵液瘻モデル作出中または膵液瘻モデル作出後のいずれでもよく、スクリーニング目的に応じて適宜設定することができる。膵液瘻モデル作出前の場合、１〜７日前、好ましくは１〜３日前が例示される。膵液瘻モデル作出後の場合、１〜３日後、好ましくは１日後である。 The administration time of the test substance may be any of before the pancreatic fistula model creation, during the pancreatic fistula model creation, or after the pancreatic fistula model creation, and can be appropriately set according to the screening purpose. In the case of pancreatic fistula model creation, examples are 1 to 7 days ago, preferably 1 to 3 days ago. When the pancreatic fistula model is created, it is 1 to 3 days later, preferably 1 day later.
被験物質の投与回数については、特に制限はない。また、被験物質の投与経路については全身投与でも局所投与でもよく、被験物質の種類およびスクリーニング目的に応じて適宜設定することができる。局所投与の場合、膵液瘻モデル作出中に静脈内への注射、腹腔内への留置、膵臓への注入、膵臓への直接貼布等；膵液瘻モデル作出後に腹腔内への注入、尾静脈への注射等が好ましく例示される。 There are no particular restrictions on the number of administrations of the test substance. Further, the administration route of the test substance may be systemic administration or local administration, and can be appropriately set according to the kind of the test substance and the screening purpose. In the case of local administration, intravenous injection, placement in the abdominal cavity, injection into the pancreas, direct application to the pancreas, etc. during the creation of the pancreatic fistula model; And the like are preferably exemplified.
（２）被験物質を投与したモデル動物における腹水または血清中のアミラーゼ活性を、非投与モデル動物または対照動物における腹水または血清中のアミラーゼ活性と比較する工程
被験物質を投与した当日から所定の日を経過するまでに経時的に、モデル動物から血液または腹水を常法により採取し、採取した試料を必要により常法に従って前処理し、アミラーゼ活性の測定に供する。アミラーゼ活性の測定方法は、（膵液瘻モデル動物）の項に記載した通りである。
別途、被験物質非投与の同種モデル動物（陽性対照）および／または対照動物（同種の正常動物、陰性対照）における血液または腹水を常法により採取し、採取した試料を必要により常法に従って前処理し、アミラーゼ活性の測定に供する。また、陽性対照の試料は、被験物質投与前の同一のモデル動物から採取した血液または腹水であってもよい。
被験物質を投与したモデル動物におけるアミラーゼ活性を陽性対照と比較し、有意にアミラーゼ活性が低下しているか、あるいは、陰性対照と比較し、アミラーゼ活性が陰性対照と同等のレベルであるかを判定する。
(2) A step of comparing the amylase activity in the ascites or serum in the model animal administered with the test substance with the amylase activity in the ascites fluid or serum in the non-administered model animal or control animal. Until the passage of time, blood or ascites is collected from a model animal by a conventional method over time, and the collected sample is pretreated according to a conventional method if necessary, and used for measurement of amylase activity. The method for measuring amylase activity is as described in (Pancreatic fistula model animal).
Separately, blood or ascites in a homogenous model animal (positive control) and / or control animal (same normal animal, negative control) not administered with the test substance is collected by a conventional method, and the collected sample is pretreated if necessary according to a conventional method And used for measurement of amylase activity. Further, the positive control sample may be blood or ascites collected from the same model animal before administration of the test substance.
Compare the amylase activity in the model animal to which the test substance is administered with the positive control, and determine whether the amylase activity is significantly reduced or compared with the negative control to determine whether the amylase activity is at the same level as the negative control. .
（３）比較工程により得られた結果に基づいて、膵液瘻の治療薬候補を選択する工程
比較工程（２）により、被験物質投与群が陽性対照と比較して有意にアミラーゼ活性が低下している場合、あるいは、被験物質投与群が陰性対照と比較してアミラーゼ活性が陰性対照と同等のレベルとなった場合に、当該被験物質を膵液瘻の候補物資として選択することができる。
(3) A step of selecting a therapeutic drug candidate for pancreatic fistula based on the result obtained in the comparison step In the comparison step (2), the test substance-administered group significantly decreased amylase activity compared to the positive control. Or when the test substance administration group has a level of amylase activity equivalent to that of the negative control compared to the negative control, the test substance can be selected as a candidate for pancreatic fistula.
また、アミラーゼ活性の高低のみならず、膵液瘻モデルの全身状態の観察、例えば、体重低下の抑制も同時に観察することが望ましい。 It is also desirable to observe not only the level of amylase activity but also the general state of the pancreatic fistula model, for example, the suppression of weight loss.
（スクリーニング方法II）
本発明のスクリーニング方法は、上記工程（１）後に、以下の工程（２’）および工程（３’）を含むこともできる。
(Screening Method II)
The screening method of the present invention can also include the following step (2 ′) and step (3 ′) after the step (1).
（２’）被験物質を投与したモデル動物における膵液瘻に及ぼす影響を、非投与モデル動物における状態と比較する工程
本工程において、被験物質投与後所定の期間経過後（１〜７日後）のモデル動物を開腹し、膵液瘻の病理的変化を観察し、非投与モデル動物における膵液瘻と比較する。
(2 ′) A step of comparing the effect on pancreatic fistula in a model animal administered with a test substance with a state in a non-administered model animal In this step, a model after a predetermined period of time (1 to 7 days later) after administration of the test substance The animal is laparotomized and the pathological changes in pancreatic fistula are observed and compared with pancreatic fistula in the non-administered model animal.
（３’）比較工程（２’）により得られた結果に基づいて、膵液瘻の治療薬候補を選択する工程
比較工程（２’）の結果、被験物質を投与したモデル動物の膵液瘻が対照の非投与モデル動物と比較して、有意に改善または奏功している場合、当該被験物質を膵液瘻の候補物資として選択することができる。
(3 ′) Step of selecting a therapeutic drug candidate for pancreatic fistula based on the result obtained in the comparison step (2 ′) As a result of the comparison step (2 ′), the pancreatic fistula of the model animal to which the test substance is administered is a control. When compared with the non-administered model animal, the test substance can be selected as a candidate for pancreatic fistula.
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。
以下の実験は、実験計画書を作成し、大学内の承認を得て行う。
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention in detail, this invention is not limited at all by these Examples.
The following experiments will be conducted with an experimental plan and approval from the university.
（実施例１）
膵液瘻モデルラットの作出
ラット（Wister rat、8-11週齢、雄性、テクサム田川より入手）（体重200-500ｇ、n=30）を、餌、水の自由摂餌下、温度２２℃、湿度５０％、照明を１２時間毎に点灯および消灯する条件下で飼育し、実験に供した。ラットにケタラール（90mg/kg）およびキシラジン（10mg/kg）を筋注で投与し、麻酔下で以下の手技を行った。
1）ラットを上腹部正中切開で開腹し、胃を拳上し、電気メスを用いて、大網を胃付着部より脾臓へ向け切除し、胃と脾間膜を切り離した。また、大網を十二指腸手前まで十分電気メスで切り離した。
2）次に、横行結腸を尾側へ牽引し、電気メスを用いて、膵と横行結腸の生理的癒着を剥離した。このとき、上腸間膜静脈が十分露出するまで剥離した。
3）上記1）および2）の工程が終了した後、脾動静脈を剥離し、脾門部より約1.5cmの部位で電気メスを用いて焼灼して止血した。その後、脾門部より約1.5cm（膵を3等分するライン）で膵実質をクーパーで鋭的に切り離した。脾臓とともに膵尾側1/3および大網を一塊として摘出した。
4）膵実質の切離後、臓器を腹腔内へ還納し、腹壁を2層で閉創し、手技を終了させた。膵液瘻作出の概念図および開腹時の一態様を図１に示す。
手技終了後、ラットを手技前の同様の条件下で飼育した。
Example 1
Creation of pancreatic fistula model rat Rat (Wister rat, 8-11 weeks old, male, obtained from Texam Tagawa) (weight 200-500g, n = 30) under free intake of food and water, temperature 22 ℃, humidity The animals were reared under the condition that 50% of the lights were turned on and off every 12 hours and used for the experiment. Rats were administered ketalal (90 mg / kg) and xylazine (10 mg / kg) by intramuscular injection, and the following procedures were performed under anesthesia.
1) The rat was laparotomized through a midline incision in the upper abdomen, the stomach was fisted up, and the omentum was excised from the stomach attachment part to the spleen using an electric scalpel to separate the stomach and spleen. In addition, the omentum was sufficiently cut with an electric knife until just before the duodenum.
2) Next, the transverse colon was pulled to the caudal side, and the physiological adhesion between the pancreas and the transverse colon was removed using an electric knife. At this time, peeling was performed until the superior mesenteric vein was sufficiently exposed.
3) After the above steps 1) and 2) were completed, the splenic artery and vein were peeled off and cauterized with an electric scalpel at about 1.5 cm from the splenic hilum to stop hemostasis. Thereafter, the pancreatic parenchyma was sharply cut with a cooper at about 1.5 cm (a line dividing the pancreas into three equal parts) from the splenic hilum. The pancreas caudal 1/3 and omentum were removed as a lump together with the spleen.
4) After excision of the pancreatic parenchyma, the organs were returned to the abdominal cavity, the abdominal wall was closed in two layers, and the procedure was completed. FIG. 1 shows a conceptual diagram of pancreatic fistula production and an embodiment at the time of laparotomy.
After the procedure was completed, the rats were raised under the same conditions as before the procedure.
（実施例２）
アミラーゼ活性およびリパーゼ活性の測定
正常ラットおよび実施例１で作出した膵液瘻モデルラットの体重を経時的に測定した。腹水は、正常ラットおよび膵液瘻モデルラットを麻酔下で開腹し、全量を採取し、容量を測定するとともに、腹水中のアミラーゼ活性およびリパーゼ活性の測定に供した。ラットの血清試料は、心臓穿刺にて採血し、血清中のアミラーゼ活性およびリパーゼ活性の測定に供した。
アミラーゼ活性の測定（酵素法）
シカリキッド−Ｎ ＡＭＹ（関東化学株式会社製）を用いて添付文書の記載に従い、腹水および血清試料中のアミラーゼ活性を分光学的に測定し、α−アミラーゼ活性（Ｕ／Ｌ）を求めた。
リパーゼ活性の測定（酵素法）
リキテック（登録商標）リパーゼカラーII（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社）を用いて添付文書の記載に従い、腹水および血清試料中のリパーゼ活性を分光学的に測定し、リパーゼ活性（Ｕ／Ｌ）を求めた。
(Example 2)
Measurement of amylase activity and lipase activity The body weights of normal rats and pancreatic fistula model rats produced in Example 1 were measured over time. Ascites, normal rats and pancreatic fistula model rats were laparotomized under anesthesia, and the total amount was collected, the volume was measured, and the amylase activity and lipase activity in ascites were measured. Rat serum samples were collected by cardiac puncture and subjected to measurement of serum amylase activity and lipase activity.
Measurement of amylase activity (enzymatic method)
The amylase activity in ascites and serum samples was measured spectroscopically using Shikari Liquid-N AMY (manufactured by Kanto Chemical Co., Inc.) and the α-amylase activity (U / L) was determined.
Measurement of lipase activity (enzymatic method)
Using Lipitec (registered trademark) Lipase Color II (Roche Diagnostics Co., Ltd.), lipase activity in ascites and serum samples was measured spectrophotometrically as described in the package insert, and lipase activity (U / L) Asked.
正常ラットの体重、腹水量、腹水中または血清中アミラーゼ濃度、腹水中または血清中リパーゼ濃度の測定結果を表１に示す。本実施例に供したラットの体重、腹水量、腹水中または血清中アミラーゼ濃度、腹水中または血清中リパーゼ濃度の測定結果を表２に示す。
得られた膵液瘻モデルラットは、死亡例がほとんどなかった。腹水中または血清中のアミラーゼ活性およびリパーゼ活性の推移から、術後１日に最も膵液瘻を強く惹起することが明らかとなった。膵液瘻は、術後３日に著明に減少し、７日で完全に吸収された。
Table 1 shows the measurement results of body weight, ascites volume, ascites or serum amylase concentration, ascites or serum lipase concentration of normal rats. Table 2 shows the measurement results of the body weight, ascites volume, ascites or serum amylase concentration, ascites or serum lipase concentration of the rats subjected to this Example.
The resulting pancreatic fistula model rat had few deaths. From the transition of amylase activity and lipase activity in ascites or serum, it was revealed that pancreatic fistula was most strongly induced on the first day after the operation. Pancreatic fistula decreased markedly on the third day after the operation and was completely absorbed on the seventh day.
（比較例１〜３）
膵液瘻モデルラット樹立のための比較実験
比較のため、
1）膵頭部（膵管）結紮（図２、比較例１）
2）膵全摘、脾、大網合併切除（図３、比較例２）および
3）大網切除、膵部分切除（図４、比較例３）を施したラットを作出した。
1）および2）のラットは術後１日目に死亡した。
3）のラットでは生存していたものの、採取できる腹水量が少なくアミラーゼ活性を比較することはできなかった。
よって、上記手術方法では膵液瘻モデルラットの作出には至らなかった。
(Comparative Examples 1-3)
Comparative experiment for establishing pancreatic fistula model rat
1) Pancreatic head (pancreatic duct) ligation (Fig. 2, Comparative Example 1)
2) Total pancreatectomy, spleen, omentectomy (Figure 3, Comparative Example 2) and
3) Rats with omentectomy and partial excision of pancreas (FIG. 4, Comparative Example 3) were created.
Rats 1) and 2) died 1 day after surgery.
Although the rats in 3) survived, the amount of ascites collected was small and amylase activity could not be compared.
Therefore, pancreatic fistula model rats could not be produced by the above surgical method.
（試験例１）
膵液瘻モデルラットに対するグレリンの作用の検討
胃底腺から分泌される胃・膵臓ホルモンのグレリンは、胃酸分泌の促進、胃運動の促進、食事摂取量の増加などの作用があるといわれており、グレリン投与により胃全摘後症例の食事摂取量および食欲が増加し、体重減少が抑制されたと報告されている（Sato N et al. Japanese Journal of Physiology 2003, Zhang W et al. Journal of Physiology 2001, Nawrot- Porabka K et al. Regulatory peptide 2007）。
また、グレリンの経静脈持続投与は、全身麻酔下のラットにおいて膵液分泌を抑制するが、経十二指腸投与および脳室投与においては膵液分泌を促進するといわれており、周術期の膵液分泌に与える影響は不明である（Adachi S etal. Gastroenterology 2010, Masuda Y et al. Biochemical and Biophysical Research Communication 2000）。
本試験例において、膵液瘻モデルラットを用いて、膵液瘻に対するグレリンの影響を検討した。試験期間中は、食餌制限をしなかった。グレリン群（ｎ＝１５）には、膵液瘻モデルラット作出中に閉創前に経下大静脈にヒトグレリン注射液（３μｇ/ｋｇ）を投与した。コントロール群（ｎ＝１５）には、ヒトグレリン注射液の代わりに同量の生理食塩水を投与した。
観察項目
血清アミラーゼ濃度、腹水アミラーゼ濃度、腹水アミラーゼ量、腹水量および体重
観察時期
術後１日（ｎ＝５×２群）、術後３日（ｎ＝５×２群）、術後７日（ｎ＝５×２群）にラットを犠牲死させ、腹水および血液を採取し、観察項目の各データを測定した。結果を図５〜８に示す。
(Test Example 1)
Examination of the action of ghrelin on pancreatic fistula model rats Ghrelin, a gastric and pancreatic hormone secreted from the fundus gland, is said to have effects such as promoting gastric acid secretion, promoting gastric motility, and increasing food intake. Ghrelin administration has been reported to increase food intake and appetite in patients after total gastrectomy and to suppress weight loss (Sato N et al. Japanese Journal of Physiology 2003, Zhang W et al. Journal of Physiology 2001, Nawrot- Porabka K et al. Regulatory peptide 2007).
In addition, continuous intravenous administration of ghrelin suppresses pancreatic secretion in rats under general anesthesia, but is said to promote pancreatic secretion in transduodenal and ventricular administration, and has an effect on perioperative pancreatic secretion Is unknown (Adachi S etal. Gastroenterology 2010, Masuda Y et al. Biochemical and Biophysical Research Communication 2000).
In this test example, the effect of ghrelin on pancreatic fistula was examined using pancreatic fistula model rats. There was no dietary restriction during the study period. In the ghrelin group (n = 15), human ghrelin injection (3 μg / kg) was administered into the inferior vena cava before closing during the production of pancreatic fistula model rats. A control group (n = 15) received the same amount of physiological saline instead of human ghrelin injection.
Observation items Serum amylase concentration, ascites amylase concentration, ascites amylase level, ascites volume and body weight
Observation period Rats were sacrificed 1 day after surgery (n = 5 × 2 group), 3 days after surgery (n = 5 × 2 group), 7 days after surgery (n = 5 × 2 group), and ascites and blood Was collected, and each data of the observation item was measured. The results are shown in FIGS.
腹水アミラーゼ濃度は、day3でグレリン群が有意に高く（図５）、膵液分泌を亢進する可能性があるが、腹水アミラーゼ量に有意差はなかった（図８）。
血清アミラーゼ濃度は、day7でコントロール群が有意に高かった（図６）。グレリン投与により、遷延する血清アミラーゼ高値が是正された可能性がある。
腹水量は、day1でグレリン群が有意に多く、day7でコントロール群が有意に多かった（図７）。グレリンは術後早期に膵液分泌を亢進する可能性があるが、腹水アミラーゼ量に有意差はなかった（図８）。
グレリンの3μｇ/ｋｇ（臨床投与量）単回投与では、腹水や血清のアミラーゼ濃度に有意差はみられたものの、アミラーゼ量を考慮すると有意差はなく、膵液瘻に与える影響は少ないと考えられる。
以上の結果、膵切除症例へのグレリン投与は、膵液瘻に与える影響は少なく、安全に施行できると考えられる。今後、グレリン大量投与や複数回投与による影響を検証していく必要がある。
The ascites amylase concentration was significantly higher in the ghrelin group on day 3 (FIG. 5), which may enhance pancreatic juice secretion, but there was no significant difference in the amount of ascites amylase (FIG. 8).
Serum amylase concentration was significantly higher in the control group on day 7 (FIG. 6). Prolonged serum amylase may have been corrected by ghrelin administration.
Ascites volume was significantly higher in the ghrelin group on day 1 and significantly higher in the control group on day 7 (FIG. 7). Ghrelin may enhance pancreatic secretion early in the operation, but there was no significant difference in the amount of ascites amylase (FIG. 8).
A single dose of 3 μg / kg (clinical dose) of ghrelin showed significant differences in amylase concentrations in ascites and serum, but there was no significant difference when considering the amount of amylase. .
As a result of the above, administration of ghrelin to patients with pancreatic resection has little effect on pancreatic fistula and can be safely performed. In the future, it will be necessary to examine the effects of ghrelin large doses and multiple doses.
本発明によれば、ヒト膵液瘻の病態を反映したげっ歯類の膵液瘻モデル動物が提供される。本発明のモデル動物を用いて、膵液瘻の治療薬または治療方法を簡便にスクリーニングすることができる。 According to the present invention, a rodent pancreatic fistula model animal reflecting the pathology of human pancreatic fistula is provided. By using the model animal of the present invention, a therapeutic agent or treatment method for pancreatic fistula can be easily screened.
Claims (12)
被験物質を投与したモデル動物における腹水または血中のアミラーゼ活性を、非投与モデル動物または対照動物における腹水または血中のアミラーゼ活性と比較する工程、ならびに
比較工程により得られた結果に基づいて、膵液瘻の治療薬候補を選択する工程、
を含有する膵液瘻の治療薬のスクリーニング方法。 Administering a test substance to the model animal according to any one of claims 1 to 4,
Ascites fluid or blood amylase activity in a model animal to which a test substance is administered is compared with ascites fluid or blood amylase activity in a non-administered model animal or a control animal, and on the basis of the results obtained by the comparison step, pancreatic juice Selecting an acupuncture drug candidate,
For screening a therapeutic agent for pancreatic fistula containing ceramide.
被験物質を投与したモデル動物における膵液瘻に及ぼす影響を、非投与モデル動物における状態と比較する工程、および
比較工程により得られた結果に基づいて、膵液瘻の治療薬候補を選択する工程、
を含有する膵液瘻の治療薬のスクリーニング方法。 Administering a test substance to the model animal according to any one of claims 1 to 4,
A step of comparing an effect on pancreatic fistula in a model animal to which a test substance is administered with a state in a non-administered model animal, and a step of selecting a therapeutic drug candidate for pancreatic fistula based on the result obtained by the comparison step,
For screening a therapeutic agent for pancreatic fistula containing ceramide.
The model animal according to any one of claims 9 to 11, wherein the rodent is a rat, mouse, hamster or guinea pig.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013255010A JP2015112041A (en) | 2013-12-10 | 2013-12-10 | Pancreatic fistula model animal |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013255010A JP2015112041A (en) | 2013-12-10 | 2013-12-10 | Pancreatic fistula model animal |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2015112041A true JP2015112041A (en) | 2015-06-22 |
Family
ID=53526443
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2013255010A Pending JP2015112041A (en) | 2013-12-10 | 2013-12-10 | Pancreatic fistula model animal |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2015112041A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021157619A1 (en) * | 2020-02-05 | 2021-08-12 | 日油株式会社 | Agent for treating or preventing pancreatic fistula |
-
2013
- 2013-12-10 JP JP2013255010A patent/JP2015112041A/en active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021157619A1 (en) * | 2020-02-05 | 2021-08-12 | 日油株式会社 | Agent for treating or preventing pancreatic fistula |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Laje et al. | Pancreatic head resection and Roux-en-Y pancreaticojejunostomy for the treatment of the focal form of congenital hyperinsulinism | |
| Jahandideh et al. | Beneficial effects of simulated gastro-intestinal digests of fried egg and its fractions on blood pressure, plasma lipids and oxidative stress in spontaneously hypertensive rats | |
| Smith-Edwards et al. | Sympathetic input to multiple cell types in mouse and human colon produces region-specific responses | |
| Sui et al. | Ferret lung transplant: an orthotopic model of obliterative bronchiolitis | |
| Lau et al. | The 14-3-3τ phosphoserine-binding protein is required for cardiomyocyte survival | |
| Ozkececı et al. | A rare cause of acute abdomen: an isolated falciform ligament necrosis | |
| CN112980879B (en) | Construction method and application of retinal vascular disease model | |
| US20080095860A1 (en) | Extracellular matrix to treat malignancy | |
| JP2015112041A (en) | Pancreatic fistula model animal | |
| JP2011225495A (en) | Vascular endothelial cell protecting agent, and pharmaceutical composition, food and feed containing the same | |
| CN110511266A (en) | A kind of micromolecule polypeptide and application thereof | |
| Zhang et al. | Reproducible porcine model for kidney allotransplantation of low weight miniature pig | |
| WO2020010958A1 (en) | Application of metrnl protein or gene in blocked blood vessel disease | |
| Popa et al. | Abdominal wall reconstruction after flap surgery and the effect on the immune system | |
| RU2362215C2 (en) | Way of modelling of autoimmune stomach ulcer at rats | |
| CN115444924B (en) | Pearl oyster protein peptide composition and preparation and application thereof | |
| RU2407062C2 (en) | Method of modeling myocardial infarction in rats | |
| RU2718274C1 (en) | Method for creating an experimental model of colonic hypoganglis disease | |
| WO1986000622A1 (en) | Hexapeptide | |
| Queen et al. | Splenectomy in bile fistula dogs: Bile pigment overproduction, anemia and intoxication | |
| Brun et al. | Laparoscopic diagnosis and treatment of gossypiboma postconventional ovariohysterectomy in a bitch | |
| US20220047687A1 (en) | Chemical scalpel | |
| SAPARBAEVA et al. | BULLETIN OF SCIENCE AND PRACTICE | |
| Kokorina et al. | A Model of Short Bowel Syndrome in Rodents in a Long-Term Experiment | |
| JP2024506048A (en) | Pharmaceutical composition for treating or preventing lower gastrointestinal tract diseases such as inflammatory bowel disease, comprising specific self-assembling peptide RADA16 |